RU1824443C - Способ профилактики болезни Гамборо - Google Patents

Abstract

Использование: ветеринари , вирусологи  Способ профилактики болезни Гамборо включает использование вакцины, изготовленной на основе штамма вируса ГКВ Nfe 2200 и содержащей обезжиренное молоко в равном соотношении. Введение вакцины цыпл там осуществл ют путем выпаивани  вместе с водой в дозе 10 - ТЦДво/мл б табл

Description

Изобретение относитс  к ветеринарии, в частности к вакцинам против болезни Гамборо и к способам их применени .

Целью изобретени   вл етс  получение высокоиммуногенной, эффективной, безвредной вакцины, а также обеспечение высокого уровн  иммунитета в услови х массового заражени  птиц и уменьшени  трудоемкости процесса вакцинации.

Дл  достижени  цели в качестве вакци- онного штамма используют штамм ВНИ- ВИП. представл ющий собой авирулентный генетически однородный ьи- русный материал, легко культивируемый в культуре клеток куриных фибробластов с высокой биологической активностью (титр вируса105 5-10б1°ТЦД50/мл ).ДЛЯ

профилактики болезни Гамборо птицу иммунизируют путем дачи вакцины с водой в дозе105-104 °ТЦД50/мл.

На первом этапе работы берут 1-2 ампулы лиофилизированного штамма ВНИВИП, добавл ют в них по 2 мл стерильного физиологического раствора. Полученную суспензию используют дл  заражени  1,5-литровых матрацов с 24-часовым монослоем культуры куриных фиб- роблзстов из расчета 0,01 ТЦДю/нл вируса на клетку. В контроле оставл ют матрацы с незар женной культурой клеток. Затем матрацы помещают в термостат при температуре +37,5-38°С в течение 36-48 часов Матрацы с зараженным монослоем трехкратно замораживают и размораживают по мере поступлени  цитопатического действи  вируса в виде дегенерации и округлени  клеток и по влени  в клетках мелкой зернистости без нарушени  целостности моносло .

Вируссодержащую культуральную жидкость сливают в одну емкость дл  контрол  на стерильность по общеприн той методике в соответствии с ГОСТом 28085.-89 и биологическую активность путем титрации на культуре куриных фибробластов. Дл  титровани  берут 7 стерильных пробирок и разливают стерильный физиологический раствор по 9 см3. Из исходного разведени  вируса (1:10) берут 1 мл, внос т в первую пробирку, тщательно перемешивают и 1 мл полученного раствора перенос т в следующую пробирку . Путем последовательного

Ё

00

ю

Jb

Јь

со

разведени  заполн ютс  все пробирки. Дл  каждого разведени  используют отдельную пипетку.

Вирус каждого разведени  в объеме 0,2 мл внос т о 4 пробирки с культурой куриных фибробластов, устанавливают в штативах под углом 5°-7° в неподвижном состо нии при температуре 37,5 - 38°С на 1 час дл  контакта вируса с культурой клеток.

Затем в каждую пробирку внос т под- держивающую среду по 1 мл и инкубируют при температуре 37.5 - 38°С в течение 7 суток.

Четыре пробирки с незараженной куль

турой клеток оставл ют дл  контрол .

Цитоанатомический эффект вируса учитывают под микроскопом в течение 7 суток и высчитывают тканевую цитопатическую

дозуВируссодержащую культуральную жид-

кость с титром не ниже 105t5-106 ° ТЦД50/мл используют дл  лиофилизации с обезжиренным молоком.

Лиофилизировэнна  вакцина хранитс  при температуре +4° -8°С в течение от 1 года до 1,5 лет.

Пример 1. Эффективность вакцины при введении цыпл там различных доз.

Опыты проводились на 14-дневных СПФ-цыпл тах с использованием вакцины активностью не ниже 101 ТЦДэд/мл. Предварительно были приготовлены дес тикратные разведени  вируса и каждом его разведением были иммунизированы по 10 СПФ-цыпл т. Вакцину выпаивали с водой. В контроле использовали 10 невакциониро- ванных СПФ-цыпл т. Иммуногенна  активность вируса в разных разведени х оценивали по результатам контрольного заражени  цыпл т в опытных и контрольных группах через 14 суток после введени  вакцины . Опыт проводили трижды (табл.1).

Из данных таблицы следует, что 100% иммунитет создаетс  при выпаивании вакцины СПФ-цыпл там в дозе 103 ТЦДвд/мл. Однако учитыва , что при вакцинации цыпл т с пассивным иммунитетом требуетс  наличие некоторого запаса вируса, в качестве иммунизирующей дозы определили не менее - 1033 ТЦДсо/мл.

П р и м е р 2. Эффективность вакцины от способа ее введени .

Было сформировано три подопытных группы по 15 голоо в каждой и одна контрольна  группа. Опыт проведен на 14-днев- ных СПФ-цыпл тах и дл  иммунизации цыпл т использовалась одинакова  доза вакцины (1035 ТЦД50/мл). В первой группе цыпл там оакцину вводили с водой, GO второй - интраназ льно. в третьей - внутримы

0

5

0

5

0 5 0

5 0

5

шечно. Контрольное заражение цыпл т в опытных и контрольной группах проводили через 14 суток после вакцинации путем ин- траназального введени  вирулентного вируса болезни Гамборо (табл.2).

Из данных, представленных в табл. 2. следует, что при введении вакцины в одинаковой дозе СПФ-цыпл т наиболее высокий процент сохранности обеспечиваетс  при выпойке вакцины с водой.

П р и м е р 3. Эффективности вакцины от уровн  материнского иммунитета цыпл т .

Опыты проведены на цыпл тах разного возраста, доставленных из неблагополучного птицехоз йства по болезни Гамборо. Предварительно в каждой возрастной группе цыпл т определили уровень материнских антител. Дл  этого у п ти цыпл т в каждой группе стерильно брали кровь, готовили общую пробу сыворотки и исследовали в реакции нейтрализации в культуре клеток куриных фибропластов. Цыпл т всех групп вакцинировали против болезни Гамборо в дозе 1033 ТЦДбо/мл путем выпойки и по 15 невакцинированных голов использовали в качестве контрол .

Через 14 суток после вакцинации цыпл та во всех группах были заражены вирулентным штаммом вируса болезни Гамборо (табл.3).

П р и м е р 4. Сравнительна  оценка эффективности разных вакцин от дозы ее введени .

В опытах использованы вакцины производства Франции из штамма Люкерт. производства ГДР и опытные образцы вакцины из штамма ВНИВИП.

При проверке активности вируса в указанных вакцинах, титр биологической ак- тивности во всех случа х составил не ниже 10 6ТЦД5о/мл.

Изучение эффективности указанных вакцин проводили на СПФ-цыпл тах 14- дневного возраста. Дл  этого было сформировано 13 групп цыпл т по 15 голов в каждой. Цыпл т с 1 по 4 группы вакциниро- с вали вакциной производства ГДР в дозе 10 2, . и 10 3ТЦЦ5о/мл, соответственно.

Вакцину производства Франции испытывали в аналогичных дозах на цыпл тах 5. 6, 7 и 8 групп.

Вакциной из штамма ВНИВИП выпао

ивали цыпл т в 9 по 12 группах в дозах 10 , , Ю. 10 5ТЦД50/мл соответственно.

Цыпл та в 13 группе не вакцинировались , их использовали в качестве контрол , Оценку эффективности вакцин проводили по результатам контрольного заражени 

цыпл т осех групп через 14 суток после их вакцинации (табл.4).

Результаты контрольного заражени  показывают, что. при вакцинации цыпл т вирулентным штаммом в дозе от 10 до 10 ТЦД50/МЛ. независимо от происхождени  штамма, обеспечиваетс  100-процентна  защита птиц. Наиболее высокую иммуно- генную активность при введении вируса даже в минимальных дозах, оказывала вакцина, изготовленна  из штамма ВНИ- ВИГГ.

П р и м е р 5. Эффективность вакцин против болезни Гамборо от способа их введени .

Дл  сравнени  испытывали три метода введени  вакцин: выпойку, иитраназальный и внутримышечный. Доза введени  препарата дл  всех групп была одинакова . Было сформировано 9 подопытных и одна конт- рольна  группа (табл.5).

Эффективность применени  оакцин производства ГДР и ВНИВИП при различных методах введени  оказалась одинаковой , но значительно выше по сравнению с французской вакциной при их интраназаль- ном и внутримышечном введении.

П р и м е р 6. Эффективность озкцин при иммунизации цыпл т разного возраста.

Иммунизацию проводили с использова- нием трех вакцин на цыпл тах 7-, 14-, 21-, 28-дневного возраста. Вакцину в одинаковых дозах давали с водой. Через 14 суток после вакцинации цыпл т в подопытных и контрольных группах заражали вирулент- ным вирусом болезни Гамборо. Результаты этих исследований представлены о табл.6.

Из данных, представленных в таблице, следует, что, по своим иммуногенным свойствам при введении цыпл там с материн- скими антителами, вакцина, изготовленна  из штамма ВНИВИП, не уступает препарату , выпускаемому в ГДР. и значительно превосходит вакцину Фракции.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о возможности изготовлени  вакцины из штамма ВНИВИП дл  предупреждени  заболевани  у цыпл т, вызываемого вирусом болезни Гамборо.

Производственные испытани  плкцины из штамма ВНИВИП пропедоиы по разрешению Главного управлени  гчмеринэрни Гасагропрома РСФСР (№ 44 109/64 от 22.01.9Qr) в неблагополучном по болезни Гамборо птицехоз йстве Р занской области . Птицу вакцинировали согласно разработанному наставлению по применению. Было привито и ревакцинировано более 5 млн. птиц.

Результаты испытаний показали, что жива  вакцина против болезни Гамборо из штамма ВНИВИП способствует повышению сохранности поголовь  бройлеров на 0,1%, увеличению живой массы одного бройлера на 0,4 г и уменьшению затрат кормов на 0,07 кг на 1 ц привеса. Экономический эффект с учетом затрат на применение вакцины составил 26331 руб.

Основыва сь на результатах лабораторных и производственных опытов по изучению нммуногенных свойств живой вакцины лропш болезни Гамборо. а также се безвредности , можно заключить, что предлагаема  вакцина при ее выпойке безвредна и обладает высокой иммуиогенностыо. Вакцина из штамма ВНИВИП может быть использована в качестве средства специфической профилактики болезни Гамборо птиц в неблагополучных птицехоз йст- вах.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ профилактики болезни Гамборо , включающий введение в организм цыпл т вакцины, состо щей из штамма вируса болезни Гамборо и обезжиренного молока, отличающийс  тем, чго, с целью повышени  уровн  иммунитета и уменьшени  трудоемкости вакцинации, в качестве штамма вируса используют штамм ГКВ № 2200 при следующем соотношении компонентов , мас.%:

   Штамм ГКВ № 2200 с

   титром 1055- 10ад ТЦПзо/мл50

   Обезжиренное молоко50

   а впедение осуществл ют путем выпаивани  вместе с водой в дозе 103 °-10 0ТЦД so/мл.

   Таблица 1

   Эффективность вакцины из штамма ВНИВИГГ в зависимости от дозы введени 

   Эффективность вакцины от способа ее введени 

   Таблица 2

   Таблица 3 Эффективность вакцины от уровн  материнского иммунитета

   Эффектионость вакцин против болезни Гамборо от способа введени 

   Таблица 4

   Таблица 5

   Оценка эффективности вакцин против болезни Гамборо при иммунизации цыпл т разного возраста

   Продолжение табл.5

   Таблица 6