CN114028551A - 猪瘟活疫苗耐热保护剂及其制备方法与应用 - Google Patents
猪瘟活疫苗耐热保护剂及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114028551A CN114028551A CN202111430807.5A CN202111430807A CN114028551A CN 114028551 A CN114028551 A CN 114028551A CN 202111430807 A CN202111430807 A CN 202111430807A CN 114028551 A CN114028551 A CN 114028551A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- protective agent
- swine fever
- live vaccine
- heat
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 title claims abstract description 53
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 47
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 title claims abstract description 26
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 title claims abstract description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 10
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims abstract description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims abstract description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 34
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 31
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 12
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 15
- 244000144972 livestock Species 0.000 abstract description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 6
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 6
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 6
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 6
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 3
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 2
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 2
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000001726 Classical Swine Fever Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
- C12N2770/24334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明涉及兽用生物制品领域，特别公开了一种猪瘟活疫苗耐热保护剂及其制备方法与应用。该猪瘟活疫苗耐热保护剂，其特征为，由体积比为1:1的A液和B液混合制成；其中，A液由以下重量分数的物质组成：聚乙烯吡咯烷酮4‑6%、胰蛋白胨1‑2%、海藻糖1‑2%，余量为水；B液由以下重量分数的物质组成：L‑谷氨酸钠1‑2%、葡萄糖6‑8%、聚乙二醇1‑2%、甘氨酸0.1‑0.3%、赖氨酸0.1‑0.3%、精氨酸0.1‑0.3%，余量为水。本发明产品在2‑8℃保存24个月，病毒含量不发生改变，从而解决了猪瘟活疫苗不能在2‑8℃下长期保存和运输的问题。
Description
技术领域
本发明涉及兽用生物制品领域，特别涉及一种猪瘟活疫苗耐热保护剂及其制备方法与应用。
背景技术
冻干保护剂及其制备工艺是活疫苗生产中的一项关键技术，对疫苗的保存、运输和使用有很大影响。目前，在我国兽用疫苗中，活的冻干疫苗占相当大的比例，国内常用的保护剂主要为脱脂奶粉、蔗糖、明胶等，组方简单，对疫苗的保护功能差，需要在-15℃以下低温保存，在2-8℃条件下，保存期只有4-6个月。这给生产厂家及使用者造成很大不便，加上国内传统的生物制品保护剂的研制相对滞后，使成品疫苗的长期保存和运输受限，所以，耐热冻干保护剂的研究是非常急需的。在20世纪80年代，发达国家就已经开始进行耐热冻干保护剂的研究，我国在耐热冻干保护剂方面的研究起步较晚，加上中国市场巨大，国外生物制品涌入，市场竞争加剧。为了我国生物制品也的生存和发展，新型有效的耐热冻干保护剂的研究和应用显得尤为迫切。
耐热冻干保护剂与常规的冻干保护剂相比，其冻干疫苗具有耐高温、保存期长的特点，因而耐热保护剂的性能要比传统保护剂更为优良，使活疫苗可在有效期内保存在2-8℃条件下，即使在较高的室温下也可以保存几十天，因此使活疫苗的储存、运输和使用都更方便、经济。
目前常用的猪瘟活疫苗冻干保护剂组方简单，大多含有蔗糖、明胶、牛血清白蛋白、水解乳蛋白等成分，但临床上已发现注射冻干疫苗时由明胶和外源蛋白引起的过敏等副作用；此外，传统的保护剂耐热性能差，需要在冷冻条件下-15℃才能长期保存。因此研制一种配制方法简单、成本低、不含明胶，能够大规模生产、具有良好保护性能的猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂久显得尤为迫切。
发明内容
本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种生产成本低、制备简单、性能稳定的猪瘟活疫苗耐热保护剂及其制备方法与应用。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种猪瘟活疫苗耐热保护剂，其特征在于：由体积比为1:1的A液和B液混合制成；
其中，A液由以下重量分数的物质组成：聚乙烯吡咯烷酮（PVPK30）4-6%、胰蛋白胨1-2%、海藻糖1-2%，余量为水；
B液由以下重量分数的物质组成：L-谷氨酸钠1-2%、葡萄糖6-8%、聚乙二醇（PEG）1-2%、甘氨酸0.1-0.3%、赖氨酸0.1-0.3%、精氨酸0.1-0.3%，余量为水。
进一步优选的，所述A液和B液中的水为注射用水。
本发明的耐热保护剂不添加明胶及动物园蛋白，解决了猪瘟活疫苗不能再2-8℃下长期保存和运输的技术问题，配置方法简单，成本低，能够大规模生产，具有良好保护性能。
上述猪瘟活疫苗耐热保护剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）将聚乙烯吡咯烷酮、胰蛋白胨、海藻糖溶解在水中，灭菌得到A液；
（2）将L-谷氨酸钠、葡萄糖、聚乙二醇、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸溶解在水中，过滤除菌得到B液；
（3）将配置好的A液和B液按1:1的体积比混合在一起，即得产品。
进一步优选的，步骤（1）中，灭菌条件为116℃下，高压灭菌30min。
进一步优选的，步骤（2）中，过滤除菌采用0.22μm滤膜过滤。
上述猪瘟活疫苗耐热保护剂的应用，将耐热保护剂与猪瘟病毒液按照1:1的体积比混合，然后分装后冷冻干燥。
进一步优选的，所述冷冻干燥时间不少于25小时。
本发明最大的优点是解决了现有的耐热保护剂中明胶的添加及普遍存在的成分复杂和成本高等缺陷，具有耐热性能好、能有效保护猪瘟活疫苗，配方成分及配制方法简单，生产成本低，在任何生物制品厂都完全可以实现量产等优点。
本发明的保护剂保护的疫苗在2-8℃保存24个月，仍保持冻干后的外形，病毒含量超过国家收益生物制品规程的标准。冻干前后病毒损失率第，冻干产品耐老化程度高，产品在2-8℃保存24个月，病毒含量不发生改变，从而解决了猪瘟活疫苗不能在2-8℃下长期保存和运输的问题。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1：耐热冻干保护剂的制备
A液的配制：聚乙烯吡咯烷酮（PVPK30）6g、胰蛋白胨1g、海藻糖1g溶解在100ml注射水中，采用116℃，30分钟高压灭菌；
B液的配制：L-谷氨酸钠2g、葡萄糖7g、聚乙二醇（PEG）1g、甘氨酸0.1g、赖氨酸0.2g、精氨酸0.3g充分溶解在100ml注射水中，采用0.22μm滤膜过滤除菌；
将A液与B液按照1:1的体积比混合均匀，即得本发明耐热冻干保护剂。
实施例2：耐热冻干保护剂的制备
A液的配制：聚乙烯吡咯烷酮（PVPK30）5g、胰蛋白胨1.5g、海藻糖2g溶解在100ml注射水中，采用116℃，30分钟高压灭菌；
B液的配制：L-谷氨酸钠1.5g、葡萄糖6g、聚乙二醇（PEG）2g、甘氨酸0.2g、赖氨酸0.3g、精氨酸0.1g充分溶解在100ml注射水中，采用0.22μm滤膜过滤除菌；
将A液与B液按照1:1的体积比混合均匀，即得本发明耐热冻干保护剂。
实施例3：耐热冻干保护剂的制备
A液的配制：聚乙烯吡咯烷酮（PVPK30）4g、胰蛋白胨2g、海藻糖2g溶解在100ml注射水中，采用116℃，30分钟高压灭菌；
B液的配制：L-谷氨酸钠1g、葡萄糖8g、聚乙二醇（PEG）1.5g、甘氨酸0.3g、赖氨酸0.1g、精氨酸0.2g充分溶解在100ml注射水中，采用0.22μm滤膜过滤除菌；
将A液与B液按照1:1的体积比混合均匀，即得本发明耐热冻干保护剂。
试验例1：本发明耐热冻干保护剂对猪瘟活疫苗的保护效力试验
1.试验材料
1.1毒株
猪瘟病毒（C株），购自中国兽医药品监察所；
1.2试剂，购自国药集团、Gibco和Sigma公司。
2.试验疫苗的制备
试验疫苗分为A、B、C、D四个组别，其中各组试验疫苗的制备方法如下：
A、B、C组试验疫苗按照实施例1、2、3的三个配方的冻干保护剂分别与猪瘟病毒液混合，无菌分装于西林瓶中，每组分别试验01、02、03三个批次。-40℃预冻3小时后，启动真空泵，达最大真空后启动加热装置，一次升华温度设定为-10℃，用时在17小时以内，二次干燥温度设定为25℃，用时在5小时左右。
D组试验疫苗：用常规5%蔗糖脱脂乳配制的保护剂（蔗糖5g，脱脂奶粉10g，加注射水至100ml）与猪瘟病毒液混合后，无菌分装于西林瓶中，试验01、02、03三个批次。-40℃预冻3小时后，启动真空泵，达最大真空后启动加热装置，一次升华温度设定为-10℃，用时在17小时以内，二次干燥温度设定为25℃，用时在5小时左右。
3.试验组制品技术参数及检验方法
3.1产品的物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、特异性检验、安全检验、剩余水分测定和真空度测定按《中华人民共和国兽用生物制品规程》的方法及标准进行。
3.2病毒含量测定方法及标准：以兔体反应热（RID）作为衡量疫苗效价的标准。效价测定方法按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》猪瘟活疫苗效价检测方法进行。
猪瘟冻干疫苗的标准：
（1）冻干后每头份病毒含量≥7500RID；
（2）冻干后制品放于37℃保存10天进行病毒含量测定，病毒含量≥750RID；
（3）冻干后制品放于2~8℃保存24个月，每头份病毒含量≥750RID。
4.试验结果
表1 猪瘟活疫苗的物理性状、剩余水分、真空度测定结果
从表1可以看出，疫苗的物理性状、剩余水分和真空度均符合《中华人民共和国兽药典》附录的规定，且剩余水分比普通脱脂奶粉保护剂的疫苗略低。
表2 37℃保存10d后病毒含量测定结果（RID/头份）
从表2可以看出，A、B、C三组耐热冻干保护剂在37℃保存10天后病毒含量仍在合格标准以上，普通脱脂奶粉保护剂则低于标准，因此本发明耐热冻干保护剂的耐热性能优于脱脂奶粉保护剂。
表3 2-8℃保存不同时间病毒含量测定结果（RID/头份）
从表3可以看出，猪瘟耐热冻干保护剂疫苗在2-8℃保存24个月，病毒含量仍在合格标准以内，脱脂奶粉保护剂疫苗则18个月时毒价低于合格标准。
表4 耐热冻干保护剂的安全性试验
耐热冻干保护剂的安全性动物试验方法和研究的指标：
临床观察：在接种后的24h内，每隔2h观察一次仔猪有无不良反应；48h-72h，每隔8h观察一次仔猪有无不良反应；接种后3-14d内，每24h观察有无不良反应。如有非特异性死亡，免疫组与对照组均应不超过1头。
结果：采用耐热冻干保护剂的疫苗A、B、C组分别按照1头份、5头份以及10头份剂量免疫20日龄仔猪后；使用冻干保护剂按照10头份和50头份免疫20日龄仔猪后；所有猪只精神状况、采食、饮水、生长发育情况均正常，均未发现不良反应。因此本发明耐热冻干保护剂对猪只是安全的。
从以上试验结果可以看出，在2-8℃温度条件下，本发明耐热冻干保护剂对猪瘟活疫苗的保护效果，明显优于常规的5%蔗糖脱脂乳配制的保护剂。37℃放置10天后的病毒含量明显优于常规的5%蔗糖脱脂乳配制的保护剂。
试验结果说明，采用本发明耐热保护剂所配制的猪瘟活疫苗耐热性能良好，本发明耐热冻干保护剂对猪瘟活疫苗具有良好的保护效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改，等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围内。
Claims (7)
1.一种猪瘟活疫苗耐热保护剂，其特征为，由体积比为1:1的A液和B液混合制成；其中，A液由以下重量分数的物质组成：聚乙烯吡咯烷酮4-6%、胰蛋白胨1-2%、海藻糖1-2%，余量为水；B液由以下重量分数的物质组成：L-谷氨酸钠1-2%、葡萄糖6-8%、聚乙二醇1-2%、甘氨酸0.1-0.3%、赖氨酸0.1-0.3%、精氨酸0.1-0.3%，余量为水。
2.如权利要求1所述的猪瘟活疫苗耐热保护剂，其特征在于：所述A液和B液中的水为注射用水。
3.如权利要求1所述的猪瘟活疫苗耐热保护剂的制备方法，其特征为，包括如下步骤：（1）将聚乙烯吡咯烷酮、胰蛋白胨、海藻糖溶解在水中，灭菌得到A液；（2）将L-谷氨酸钠、葡萄糖、聚乙二醇、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸溶解在水中，过滤除菌得到B液；（3）将配置好的A液和B液按1:1的体积比混合在一起，即得产品。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，灭菌条件为116℃下，高压灭菌30min。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，过滤除菌采用0.22μm滤膜过滤。
6.如权利要求1所述的猪瘟活疫苗耐热保护剂的应用，其特征在于：将耐热保护剂与猪瘟病毒液按照1:1的体积比混合，然后分装后冷冻干燥。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述冷冻干燥时间不少于25小时。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111430807.5A CN114028551A (zh) | 2021-11-29 | 2021-11-29 | 猪瘟活疫苗耐热保护剂及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111430807.5A CN114028551A (zh) | 2021-11-29 | 2021-11-29 | 猪瘟活疫苗耐热保护剂及其制备方法与应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114028551A true CN114028551A (zh) | 2022-02-11 |
Family
ID=80146020
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111430807.5A Pending CN114028551A (zh) | 2021-11-29 | 2021-11-29 | 猪瘟活疫苗耐热保护剂及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114028551A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116421733A (zh) * | 2023-06-08 | 2023-07-14 | 金宇保灵生物药品有限公司 | 可用于猪多杀性巴氏杆菌病活疫苗的疫苗耐热保护剂 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102793927A (zh) * | 2012-08-29 | 2012-11-28 | 郑州后羿制药有限公司 | 一种猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂及其制备方法和应用 |
-
2021
- 2021-11-29 CN CN202111430807.5A patent/CN114028551A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102793927A (zh) * | 2012-08-29 | 2012-11-28 | 郑州后羿制药有限公司 | 一种猪瘟活疫苗耐热冻干保护剂及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 刘业兵等: "猪瘟淋脾毒(耐热保护剂)活疫苗的热稳定性研究", 《中国兽药杂志》 * |
| 国家药典委员会编: "《中华人民共和国药典 三部 注释》", 31 March 2016, 中国医药科技出版社 * |
| 李永洲等: "兽用疫苗耐热保护剂的种类及作用机理", 《现代畜牧兽医》 * |
| 罗满林: "《兽医生物制品学》", 28 February 2019, 中国农业大学出版社 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116421733A (zh) * | 2023-06-08 | 2023-07-14 | 金宇保灵生物药品有限公司 | 可用于猪多杀性巴氏杆菌病活疫苗的疫苗耐热保护剂 |
| CN116421733B (zh) * | 2023-06-08 | 2023-09-12 | 金宇保灵生物药品有限公司 | 可用于猪多杀性巴氏杆菌病活疫苗的疫苗耐热保护剂 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102166362B (zh) | 猪繁殖与呼吸综合征活疫苗耐热冻干保护剂及制备方法 | |
| ES2605109T3 (es) | Composición de vacuna y procedimiento de uso de la misma | |
| CN102657870B (zh) | 一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂 | |
| CN105267971B (zh) | 一种不含明胶和人血白蛋白的疫苗冻干保护剂 | |
| CN105999284A (zh) | 一种用于猪瘟活疫苗的耐热冻干保护剂、制备方法及其应用 | |
| CN108030925B (zh) | 一种冻干保护剂和冻干疫苗制品及其制备方法 | |
| US20030059435A1 (en) | Vaccine composition and method of using the same | |
| CN114028551A (zh) | 猪瘟活疫苗耐热保护剂及其制备方法与应用 | |
| CN103656660B (zh) | 一种动物活疫苗耐热冻干保护剂、其制备方法及应用 | |
| CN104548110A (zh) | 一种无明胶和人血白蛋白成分的腮苗冻保剂 | |
| CN114042167B (zh) | 鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗耐热保护剂及其制备方法和应用 | |
| CN103417980B (zh) | 一种鸭病毒性肝炎活疫苗冻干保护剂 | |
| CN100418580C (zh) | 鸡新城疫活疫苗耐热冻干保护剂、其制备方法及应用 | |
| CN102526751A (zh) | 一种猪瘟脾淋源活疫苗耐热冻干保护剂及制备方法 | |
| CN114931648A (zh) | 一种猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎二联活疫苗耐热保护剂及其制备方法和应用 | |
| CN108175854B (zh) | 一种乙脑疫苗的冻干制剂 | |
| CN103977414B (zh) | 一种冻干抗原活力稳定剂及其制备方法 | |
| CN1321694C (zh) | 冻干剂型艾滋病重组痘病毒安卡拉株载体疫苗及其制备方法 | |
| CN108938574A (zh) | 猪伪狂犬病活疫苗冻干耐热保护剂、其制备方法及用途 | |
| RU2294760C2 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а | |
| RU2332234C1 (ru) | Способ изготовления вирусвакцины против классической чумы свиней | |
| CN109432017B (zh) | 鸡痘耐热冻干保护剂及其应用 | |
| KR102544928B1 (ko) | 아미노산을 유효성분으로 함유하는 동물용 백신 또는 진단용 항원의 안정성 증진용 조성물 및 이의 용도 | |
| CN115998853B (zh) | 一种乙型脑炎减毒活疫苗及其保护剂 | |
| RU2182495C1 (ru) | Вирусвакцина против классической чумы свиней |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220211 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |