ES2591028T3

ES2591028T3 - Composiciones de inhibidores de quinasa y su uso para el tratamiento del cáncer y otras enfermedades relacionadas con quinasas

Info

Publication number: ES2591028T3
Application number: ES08829600.9T
Authority: ES
Inventors: Chiang Jia Li; Ji-Feng Liu; Youzhi Li; Wei Li; Harry Rogoff
Original assignee: Boston Biomedical Inc
Current assignee: Sumitomo Pharma Oncology Inc
Priority date: 2007-09-06
Filing date: 2008-09-05
Publication date: 2016-11-24
Anticipated expiration: 2028-09-05
Also published as: PL2197878T3; US20100285006A1; CY1118012T1; CN101848908B; JP2010538091A; EP2197878B1; EP2197878A2; JP2015129152A; EP3037419A1; JP5974124B2; SI2197878T1; WO2009033033A2; US20150197517A1; LT2197878T; CA2736177A1; US9725444B2; CN101848908A; DK2197878T3; JP2019070051A; US20180022743A1

Abstract

Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:**Fórmula** y un enantiómero, diastereómero, tautómero, o sal o solvato farmacéuticamente aceptable de éste.

Description

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DESCRIPCION

Composiciones de inhibidores de quinasa y su uso para el tratamiento del cancer y otras enfermedades relacionadas con quinasas

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

Esta solicitud reivindica el beneficio de prioridad bajo 35 U.S.C. §119(e) a las Solicitudes de Patente de los Estados Unidos Nos. de Serie 60/970.410 presentada el 6 de septiembre, 2007, 61/013.389 presentada el 13 de diciembre, 2007, y 61/074.295 presentada el 20 de junio, 2008.

Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a composicion y metodos de uso de nuevas indolin-2-onas sustituidas con tiazol como inhibidores de celulas madre del cancer asf como quinasa de la ruta de las celulas madre del cancer (quinasa de la ruta de las celulas madre del cancer - CSCPK) y otras quinasas relacionadas; a composiciones farmaceuticas que contienen dichos compuestos; y a metodos para usar dichos compuestos en el tratamiento de un trastorno relacionado con protema quinasa en un mairnfero; y a procesos para preparar dichos compuestos e intermedios de estos.

Antecedentes de la invencion

A pesar de decadas de esfuerzos en las terapias del cancer, el cancer permanece como una enorme carga de salud publica. La cirugfa y radioterapia son bastante exitosas en el tratamiento de tumores primarios. Sin embargo, una vez el cancer se ha diseminado a sitios distantes, frecuentemente se requiere quimioterapia para tratar la enfermedad. Los agentes citotoxicos han jugado un papel cntico en la terapia moderna del cancer. Sin embargo, habitualmente inducen toxicidad sustancial en los tejidos normales. El principio para el tratamiento del cancer ha cambiado. Los farmacos citotoxicos estan perdiendo su dominancia en el mundo de la quimioterapia y se estan desarrollando terapias dirigidas con el objetivo de tomar como diana mas espedficamente las celulas de cancer. Las terapias dirigidas al cancer son una clase relativamente nueva de agentes con selectividad para dianas implicadas en el crecimiento tumoral. Han demostrado una eficacia impresionante con mucha menos toxicidad que los agentes citotoxicos.

Las protemas quinasas son una familia de enzimas que regula una amplia variedad de procesos celulares, incluyendo crecimiento celular, proliferacion celular, diferenciacion celular y metabolismo. Las protemas quinasas comunican las senales de crecimiento celular a traves de modificacion qmmica secuencial de companeros de la ruta. Por lo tanto, la inhibicion farmacologica de cualquier quinasa en una cascada de transduccion de la senal dada bloqueana teoricamente la comunicacion a lo largo de la ruta completa. Ademas, se sabe que las protemas quinasas juegan un papel en los estados y trastornos patologicos, por ejemplo, la mutacion y/o sobreexpresion de quinasas se caracterizan frecuentemente en canceres, resultando en actividad hiperactivada que frecuentemente se correlaciona con crecimiento celular descontrolado. Por esta razon, las protemas quinasas representan dianas potenciales para la inhibicion terapeutica. [1]. Las celulas madre del cancer (CSC) es una subpoblacion de celulas en una variedad de tipos de tumor con un potencial tumorigenico que esta ausente en el resto de las celulas en estos tumores. Existe una evidencia creciente de que dichas celulas existen en casi todos los tipos de tumor. Las CSC dan lugar a las celulas diferenciadas que forman el grueso de la masa tumoral y caracterizan fenotfpicamente la enfermedad. Se ha demostrado que las celulas madre del cancer son fundamentalmente responsables de la carcinogenesis, metastasis del cancer, y reaparicion del cancer. En muchos tumores, las CSC y su progenie diferenciada parecen tener caractensticas biologicas notablemente diferentes. Las terapias convencionales que estan dirigidas a celulas de tumor maduras pueden dar lugar a la mejona clmica, pero es improbable que sean curativas a no ser que tambien esten dirigidas a las CSC. Las dianas relevantes unicas para las escasas celulas madre del cancer pueden perderse si la actividad clmica se juzga exclusivamente por criterios que reflejan los efecto del tratamiento en el grueso del cancer.

Hemos mostrado recientemente que los compuestos en esta invencion inhiben quinasas y matan a las celulas madre del cancer, demostrando que las quinasas son dianas importantes para matar o inhibir las celulas madre del cancer. Estas quinasas importantes para las CSC se refieren colectivamente como CSCPK de aqrn en adelante en la presente memoria. Nuestros resultados proporcionan un metodo para tomar como diana las celulas madre del cancer con inhibidores de CSCPK.

PDGFRa es una tirosina quinasa de receptor (RTK) que se activa despues de la union a su ligando, PDGF, que contribuye a la proliferacion celular, angiogenesis, y apoptosis. Pertenece a la familia de tirosina quinasas de receptor de clase III y estan relacionadas con la familia de proto-oncogenes del receptor CFS-1/c-fms y factor de crecimiento de celulas madre/c-kit. La ruta de PDGFRa es activa en el desarrollo fetal temprano y se reactiva en muchos canceres, tales como cancer hepatocelular (HCC), cancer de cabeza y cuello, tumores cerebrales, tumores gastrointestinales, cancer de piel, cancer de prostata, cancer de ovario, cancer de mama, sarcoma, y leucemia [215]. Ademas, recientemente se ha mostrado que la activacion de PDGFRa juega un papel clave en la metastasis en hueso del cancer de prostata [16, 17]. Ademas, se ha mostrado que la ruta PDGFRa-p70S6K es esencial para la angiogenesis in vivo [18]. Se ha mostrado que el tomar como diana espedficamente PDGFRa usando anticuerpo

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monoclonal da lugar a una reduccion significativa en la proliferacion de celulas de tumor y supervivencia a la vez que es un tratamiento relativamente no toxico [11]. Por lo tanto, PDGFRa representa una diana para el desarrollo de quimioterapia dirigida frente a un amplio espectro de canceres con menos toxicidad.

Ademas del cancer, se ha demostrado efectivamente que las reorganizaciones cromosomicas activan PDGFRa por fusion a FIP1L1, causando smdrome hipereosinofflico idiopatico [5]. Ademas, la activacion de PDGFRa por polimorfismos de promotor se ha ligado a defectos en el tubo neural incluyendo espina bffida, lo que se ha verificado por modelo de raton mutante [19]. La activacion de PDGFRa tambien se ha ligado con fibrosis [20-23]. Por esta razon, PDGFRa representa una diana potencial para la terapia anti-fibrotica.

Resumen

La presente invencion se refiere a compuestos como se revindica en las reivindicaciones 1, 2 y 3. En la presente memoria tambien se describe un compuesto de formula I,

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o un enantiomero, diastereomero, tautomero, o sal o solvato farmaceuticamente aceptable de este, en el que los sfmbolos tienen los significados siguientes y, en cada caso, se seleccionan independientemente:

R1 es hidrogeno. alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido, ORa, SRa, S(=O)2Re, S(=O)2ORe, C(=O)ORd, C(=O)Ra, o C(=O)NRbRc;

R2 es heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido;

R3 es hidrogeno. alquilo o alquilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido;

R4, R7, y R8 son cada uno independientemente, hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido, ORa, SRa, S(=O)Re, S(=O)2Re, P(=O)2Re, S(=O)2ORe, P(=O)2ORe, NRbRc, NRbS(=O)2Re, NRbP(=O)2Re, S(=O)2NRbRc, P(=O)2NRbRc, C(=O)ORe, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORe, NRdC(=O)NRbRc, NRdS(=O)2NRbRc, NRdP(=O)2NRbRc, NRbC(=O)Ra, o NRbP(=O)2NRe;

R5 es alquilo o alquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido;

R6 es hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo o alquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido, o ORa;

Ra es hidrogeno, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, o arilo o arilo sustituido;

Rb, Rc y Rd son independientemente hidrogeno, alquilo o alquilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, o arilo o arilo sustituido, o dichos Rb y Rc junto con el N al que estan unidos forman opcionalmente un heterociclo o heterociclo sustituido; y

Re es alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, o arilo o arilo sustituido.

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Het es un anillo aromatico de 5 o 6 miembros que contiene al menos un heteroatomo seleccionado de N, O y S;

Ri es hidrogeno. alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido, ORa, SRa, S(=O)2Re, S(=O)2ORe, C(=O)ORd, C(=O)Ra, o C(=O)NRbRc;

R3 y R10 son cada uno independientemente hidrogeno, alquilo o alquilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido;

R4, R7, y R8 son cada uno independientemente hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido, ORa, SRa, S(=O)Re, S(=O)2ORe, P(=O)2Re, S(=O)2ORe, P(=O)2ORe, NRbRc, NRbS(=O)2Re, NRbP(=O)2Re, S(=O)2NRbRc, P(=O)2NRbRc, C(=O)ORe, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORe, NRdC(=O)NRbRc, NRdS(=O)2NRbRc, NRdP(=O)2NRbRc, NRbC(=O)Ra, o NRbP(=O)2NRe;

R6 y R9 son cada uno independientemente hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo o alquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido, o ORa;

R14 y R15 son independientemente hidrogeno, alquilo o alquilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, o arilo o arilo sustituido, o dichos R14 y R15 junto con el N al que estan unidos forman opcionalmente un heterociclo o heterociclo sustituido;

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R4, R7, y R8 son cada uno independientemente, hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido, ORa, SRa, S(=O)Re, S(=O)2ORe, P(=O)2Re, S(=O)2ORe, P(=O)2ORe, NRbRc, NRbS(=O)2Re, NRbP(=O)2Re, S(=O)2NRbRc, P(=O)2NRbRc, C(=O)ORe, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORe, NRdC(=O)NRbRc, NRdS(=O)2NRbRc, NRdP(=O)2NRbRc, NRbC(=O)Ra, o NRbP(=O)2NRe;

R11 es hidrogeno o alquilo C1-4;

R12 y R13 son independientemente, hidrogeno, alquilo o alquilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, o arilo o arilo sustituido, o dichos R12 y R13 junto con el N al que estan unidos forman opcionalmente un heterociclo o heterociclo sustituido;

n es un numero entero seleccionado de 2, 3,4 5 y 6;

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R5 es alquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido;

R11 es hidrogeno o alquilo C1-4;

n es un numero entero seleccionado de 2, 3,4 5 y 6;

Tambien se describe una composicion farmaceutica que comprende un compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable de este como se ha descrito anteriormente en la presente memoria y un excipiente, vehfculo, o diluyente farmaceuticamente aceptable. En determinadas realizaciones, la composicion farmaceutica comprende ademas al menos una otra terapia anti-cancer. En algunos casos, la al menos una otra terapia anti-cancer incluye radioterapia (XRT), agentes citotoxicos, agentes dirigidos, o agentes adyuvantes. Los ejemplos no limitativos incluyen gemcitabina, erlotinib, taxol/taxotere, platino (carboplatino y cisplatino), 5-FU, adriamicina, sorafenib, imatinib, avastina, erbitux, o herceptina.

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Tambien se describe el uso de una cantidad terapeuticamente efectiva de una composicion farmaceutica como se ha descrito anteriormente en la presente memoria para tratar canceres en un mamnfero.

Tambien se describe el uso de una cantidad terapeuticamente efectiva de una composicion farmaceutica como se ha descrito anteriormente en la presente memoria, para inhibir CSCPK para tratar canceres en un mamnfero.

En la presente memoria se describe un metodo para inhibir/reducir/disminuir la supervivencia y/o proliferacion de las celulas madre del cancer en un marnffero mediante la inhibicion o disminucion de la actividad no deseada de CSCPK en el mamnfero.

Tambien se describe el uso de una cantidad terapeuticamente efectiva de una composicion farmaceutica como se ha descrito anteriormente en la presente memoria para inhibir/reducir/disminuir la supervivencia y/o proliferacion de las celulas madre del cancer en un mamffero.

Tambien se describe el uso de una cantidad terapeuticamente efectiva de una composicion farmaceutica como se ha descrito anteriormente en la presente memoria para tratar un trastorno relacionado con protema quinasa en un mamffero.

Tambien se describe un metodo ex vivo para modular la actividad catalftica de una protema quinasa, que comprende poner en contacto dicha protema quinasa con un compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable de este como se ha descrito anteriormente en la presente memoria.

Tambien se describe un proceso para preparar un compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable de este como se ha descrito anteriormente en la presente memoria e intermedios de este.

Descripcion breve de las figuras

La FIG. 1 muestra que el compuesto 10-2 bloquea la activacion de EGFR, c-Met y Her2 en un ensayo celular.

La FIG. 2 muestra que el compuesto 10-2 inhibe la activacion EGFR, c-Met y Her2, pero no causa una reduccion global en la actividad tirosina quinasa.

La FIG. 3 muestra los perfiles de quinoma del compuesto 10-2 y el TKI control.

La FIG. 4A muestra la identificacion de la poblacion lateral (SP) de Hoechst enriquecida con celulas madre del cancer.

La FIG. 4B muestra que el compuesto 10-2 es mas potente para la SP de Hoechst enriquecida con celulas madre del cancer.

La FIG. 4C muestra que el compuesto 10-2 mata a las celulas de la poblacion lateral de Hoechst por apoptosis.

La FIG. 5 muestra que el compuesto 10-2 inhibe la esferogenesis de CSC in vitro.

La FIG. 6 muestra que el compuesto 10-2 inhibe la esferogenesis de CSC in vivo.

La FIG. 7 muestra que el compuesto 10-2 presenta actividad antitumoral en un modelo de xenoinjerto PC3 de cancer

de prostata humano.

La FIG. 8 muestra que el compuesto 10-2 presenta actividad antitumoral en un modelo de xenoinjerto HepG2 de cancer de hngado humano.

La FIG. 9 muestra que el compuesto cancer de cabeza y cuello humano.

La FIG. 10 muestra que el compuesto cancer gastrico humano.

Descripcion detallada

A. Definiciones

Lo siguiente son definiciones de terminos usados en la presente especificacion. La definicion inicial proporcionada para un grupo o termino en la presente memoria se aplica a ese grupo o termino a lo largo de la presente especificacion individualmente o como parte de otro grupo, a no ser que se indique otra cosa.

Los terminos "alquilo" y "alk" se refieren a un radical alcano (hidrocarburo) de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 12 atomos de carbono, preferiblemente 1 a 6 atomos de carbono. Los grupos "alquilo" ejemplares incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutil pentilo, hexilo, isohexilo, heptilo, 4,4-dimetilpentilo, octilo, 2,2,4-trimetilpentilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, y semejantes. El termino "alquilo C1-C4" se refiere a un radical alcano (hidrocarburo) de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 4 atomos de carbono, tal como

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10-2 presenta actividad antitumoral en un modelo de xenoinjerto FaDu de 10-2 presenta actividad antitumoral en un modelo de xenoinjerto MKN45 de

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metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo e isobutilo. "Alquilo sustituido" se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de union disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen pero no estan limitados a uno o mas de los grupos siguientes: hidrogeno, halogeno (por ejemplo, un unico sustituyente halogeno o multiples sustituyentes halo que forman, en el ultimo caso, grupos tales como CF3 o un grupo alquilo que porta Ch), ciano, nitro, CF3, OCF3, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, arilo, ORa, SRa, S(=O)Re, S(O)2Re, P(=O)2Re, S(=O)2ORe, P(=O)2ORe, NRbRc, NRbS(=O)2Re, NRbP(=O)2Re, S(=O)2NRbRc, P(=O)2NRbRc, C(=O)ORd, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORe, NRdC(=O)NRbRc, NRdS(=O)2NRbRc, NRdP(=O)2NRbRc, NRbC(=O)Ra, o NRbP(=O)2Re, en el que Ra es hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo; Rb, Rc y Rd son independientemente hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclo, arilo, o dichos Rb y Rc junto con el N al que estan unidos forman opcionalmente un heterociclo o heterociclo sustituido; y Re es alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, heterociclo, o arilo. En los sustituyentes ejemplares mencionados anteriormente, los grupos tales como alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquenilo, heterociclo y arilo pueden estar ellos mismos sustituidos opcionalmente.

El termino "alquenilo" se refiere a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene de 2 a 12 atomos de carbono y al menos un doble enlace carbono-carbono. Dichos grupos ejemplares incluyen etenilo o alilo. "Alquenilo sustituido" se refiere a un grupo alquenilo sustituido con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de union disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no estan limitados a, alquilo o alquilo sustituido, asf como aquellos grupos recitados anteriormente como sustituyentes de alquilo ejemplares. Los sustituyentes ejemplares pueden estar ellos mismos sustituidos opcionalmente.

El termino "alquinilo" se refiere a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene de 2 a 12 atomos de carbono y al menos un triple enlace carbono-carbono. Dichos grupos ejemplares incluyen etinilo. "Alquinilo sustituido" se refiere a un grupo alquinilo sustituido con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de union disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no estan limitados a, alquilo o alquilo sustituido, asf como aquellos grupos recitados anteriormente como sustituyentes de alquilo ejemplares. Los sustituyentes ejemplares pueden estar ellos mismos sustituidos opcionalmente.

El termino "cicloalquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo cfclico completamente saturado que contiene de 1 a 4 anillos y 3 a 8 carbonos por anillo. Dichos grupos ejemplares incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, etc. "Cicloalquilo sustituido" se refiere a un grupo cicloalquilo sustituido con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de union disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no estan limitados a, nitro, ciano, alquilo o alquilo sustituido, asf como aquellos grupos recitados anteriormente como sustituyentes de alquilo ejemplares. Los sustituyentes ejemplares pueden estar ellos mismos sustituidos opcionalmente. Los sustituyentes ejemplares tambien incluyen sustituyentes dclicos unidos por espiro o fusionados, especialmente cicloalquilo unido por espiro, cicloalquenilo unido por espiro, heterociclo unido por espiro (excluyendo heteroarilo), cicloalquilo fusionado, cicloalquenilo fusionado, heterociclo fusionado, o arilo fusionado, en el que los sustituyentes cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo y arilo mencionados anteriormente pueden estar ellos mismos sustituidos opcionalmente.

El termino "cicloalquenilo" se refiere a un grupo hidrocarburo dclico parcialmente insaturado que contiene 1 a 4 anillos y 3 a 8 carbonos por anillo. Dichos grupos ejemplares incluyen ciclobutenilo, ciclopentenilo ciclohexenilo, etc. "Cicloalquenilo sustituido" se refiere a un grupo cicloalquenilo sustituido con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de union disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no estan limitados a, nitro, ciano, alquilo o alquilo sustituido, asf como aquellos grupos recitados anteriormente como sustituyentes de alquilo ejemplares. Los sustituyentes ejemplares pueden estar ellos mismos sustituidos opcionalmente. Los sustituyentes ejemplares tambien incluyen sustituyentes dclicos unidos por espiro o fusionados, especialmente cicloalquilo unido por espiro, cicloalquenilo unido por espiro, heterociclo unido por espiro (excluyendo heteroarilo), cicloalquilo fusionado, cicloalquenilo fusionado, heterociclo fusionado, o arilo fusionado, en el que los sustituyentes cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo y arilo mencionados anteriormente pueden estar ellos mismos sustituidos opcionalmente.

El termino "arilo" se refiere a grupos hidrocarburos aromaticos dclicos que tienen 1 a 5 anillos aromaticos, especialmente grupos monodclicos o bidclicos tales como fenilo, bifenilo o naftilo. Cuando contienen dos o mas anillos aromaticos (bidclico, etc.), los anillos aromaticos del grupo arilo pueden estar unidos en un unico punto (por ejemplo, bifenilo), o fusionados (por ejemplo, naftilo, fenantrenilo y semejantes). "Arilo sustituido" se refiere a un grupo arilo sustituido con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 3 sustituyentes, en cualquier punto de union. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no estan limitados a, nitro, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, ciano, alquilo o alquilo sustituido, asf como aquellos grupos recitados anteriormente como sustituyentes de alquilo ejemplares. Los sustituyentes ejemplares pueden estar ellos mismos sustituidos opcionalmente. Los sustituyentes ejemplares tambien incluyen grupos dclicos fusionados, especialmente cicloalquilo fusionado, cicloalquenilo fusionado, heterociclo fusionado, o arilo fusionado, en el que los sustituyentes cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo y arilo mencionados anteriormente pueden estar ellos mismos sustituidos opcionalmente.

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Los terminos "heterociclo" y "heterodclico" se refieren a grupos dclicos completamente saturados, o parcialmente o completamente insaturados, incluyendo aromaticos (es decir, "heteroarilo" (por ejemplo, sistemas de anillo monodclico de 4 a 7 miembros, bidclico de 7 a 11 miembros, o tric^clico de 8 a 16 miembros) que tienen al menos un heteroatomo en al menos un anillo que contiene atomos de carbono. Cada anillo del grupo heterodclico que contiene un heteroatomo puede tener 1, 2, 3, o 4 heteroatomos seleccionados de atomos de nitrogeno, atomos de oxfgeno y/o atomos de azufre, en el que los heteroatomos de nitrogeno y azufre pueden estar opcionalmente oxidados y los heteroatomos de nitrogeno pueden estar opcionalmente cuaternizados. (El termino "heteroarilio" se refiere a un grupo heteroarilo que porta un atomo de nitrogeno cuaternario y asf una carga positiva). El grupo heterodclico puede estar unido al resto de la molecula en cualquier heteroatomo o atomo de carbono del anillo o sistema de anillos. Los grupos heterodclicos monodclicos ejemplares incluyen azetidinilo, pirrolidinilo, pirrolilo, pirazolilo, oxetanilo, pirazolinilo, imidazolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolinilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, isotiazolidinilo, furilo, tetrahidrofurilo, tienilo, oxadiazolilo, piperidinilo, piperazinilo, 2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrolodinilo, 2-oxoazepinilo, azepinilo,

hexahidrodiazepinilo, 4-piperidonilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, triazinilo, triazolilo, tetrazolilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, tiamorfolinilo, tiamorfolinilo sulfoxido, tiamorfolinilo sulfona, 1,3-dioxolano y tetrahidro- 1,1 -dioxotienilo, y semejantes. Los grupos heterodclicos bidclicos ejemplares incluyen indolilo, isoindolilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzoxadiazolilo, benzotienilo, benzo[d][1,3]dioxolilo, 2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxinilo, quinuclidinilo, quinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo, benzopiranilo, indolizinilo, benzofurilo, benzofurazanilo, cromonilo, cumarinilo, benzopiranilo, cinolinilo, quinoxalinilo, indazolilo, pirrolopiridilo, furopiridinilo (tal como furo[2,3-c]piridinilo, furo[3,2-b]piridinilo] o furo[2,3-b]piridinilo), dihidroisoindolilo, dihidroquinazolinilo (tal como 3,4-dihidro-4-oxo-quinazolinilo), triazinilazepinilo, tetrahidroquinolinilo y semejantes. Los grupos heterodclicos tridclicos ejemplares incluyen carbazolilo, bencidolilo, fenantrolinilo, acridinilo, fenantridinilo, xantenilo y semejantes.

"Heterociclo sustituido" y "heterodclico sustituido" (tal como "heteroarilo sustituido") se refieren a grupos heterociclo o heterodclico sustituidos con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de union disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no estan limitados a, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, nitro, oxo (es decir, = O), ciano, alquilo o alquilo sustituido, asf como aquellos grupos recitados anteriormente como sustituyentes de alquilo ejemplares. Los sustituyentes ejemplares pueden estar ellos mismos sustituidos opcionalmente. Los sustituyentes ejemplares tambien incluyen sustituyentes dclicos unidos por espiro o fusionados en cualquier punto o puntos de union disponibles, especialmente cicloalquilo unido por espiro, cicloalquenilo unido por espiro, heterociclo unido por espiro (excluyendo heteroarilo), cicloalquilo fusionado, cicloalquenilo fusionado, heterociclo fusionado, o arilo fusionado, en el que los sustituyentes cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclo y arilo mencionados anteriormente pueden estar ellos mismos sustituidos opcionalmente.

Los terminos "halogeno" o "halo" se refieren a cloro, bromo, fluor o yodo.

El termino "carbodclico" se refiere a grupos aromaticos o no aromaticos monodclicos de 3 a 7 miembros y bidclicos de 7 a 11 miembros, en los que todos los atomos del anillo o anillos son atomos de carbono. "Carbodclico sustituido" se refiere a un grupo carbodclico sustituido con uno o mas sustituyentes, preferiblemente 1 a 4 sustituyentes, en cualquier punto de union disponible. Los sustituyentes ejemplares incluyen, pero no estan limitados a, nitro, ciano, ORa, en el que Ra es como se ha definido anteriormente en la presente memoria, asf como aquellos grupos recitados anteriormente como sustituyentes de cicloalquilo ejemplares. Los sustituyentes ejemplares pueden estar ellos mismos sustituidos opcionalmente.

El termino "calentamiento" incluye, pero no esta limitado a, calentamiento convencional (por ejemplo, calentamiento electrico, calentamiento por vapor, calentamiento por gas, etc.) asf como calentamiento por microondas.

El termino "excipiente, vetnculo, o diluyente farmaceuticamente aceptable" tal y como se usa en al presente memoria significa un material, composicion o veldculo farmaceuticamente aceptable, tal como un relleno lfquido o solido, diluyente, excipiente, disolvente o material de encapsulacion, implicado en portar o transporter el agente farmaceutico objeto desde un organo, o parte del cuerpo, a otro organo, o parte del cuerpo. Cada vehfculo debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los demas ingredientes de la formulacion y no perjudicial para el paciente. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como vehfculos farmaceuticamente aceptable incluyen: azucares, tal como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tal como almidon de mafz y almidon de patata; celulosa, y sus derivados, tal como carboximetil celulosa de sodio, etil celulosa y acetato de celulosa; goma de tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, tal como manteca de cacao y ceras de supositorio; aceites, tal como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodon, aceite de alazor, aceite de sesamo, aceite de oliva, aceite de mafz y aceite de soja; glicoles, tal como propilen glicol; polioles, tal como glicerina, sorbitol, manitol y polietilen glicol; esteres, tal como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tamponadores, tal como hidroxido de magnesio e hidroxido de aluminio; acido algmico; agua sin pirogenos; disolucion salina isotonica; disolucion de Ringer; alcohol etflico; disoluciones de tampon fosfato; y otras sustancias compatibles no toxicas empleadas en las formulaciones farmaceuticas. En las composiciones tambien pueden estar presentes agentes humectantes, emulsionantes y lubricantes, tales como lauril sulfato de sodio, estearato de magnesio, y copolfmero oxido de polietileno-oxido de polipropileno, asf como agentes colorantes, agentes de liberacion, agentes de recubrimiento, edulcorantes, agentes saponferos y perfumantes, conservantes y antioxidantes.

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A no ser que se indique otra cosa, se asume que cualquier heteroatomo con valencias no satisfechas tiene atomos de hidrogeno suficientes para satisfacer las valencias.

Los compuestos de la presente invencion pueden formar sales que tambien estan en el alcance de esta invencion. La referencia a un compuesto de la presente invencion en la presente memoria se entiende que incluye referencia a las sales de este, a no ser que se indique otra cosa. El termino "sal o sales", tal y como se emplea en la presente memoria, indica sales acidas y/o basicas formadas con acidos y bases inorganicos y/o organicos. Ademas, cuando un compuesto de la presente invencion contiene tanto un resto basico, tal como pero no limitado a una piridina o imidazol, como un resto acido tal como pero no limitado a un acido carboxflico, pueden formarse zwiteriones ("sales internas") y estan incluidas en el termino "sal o sales", tal y como se usa en la presente memoria. Se prefieren las sales farmaceuticamente aceptables (es decir, no toxicas, fisiologicamente aceptables), aunque tambien son utiles otras sales, por ejemplo, en las etapas de aislamiento o purificacion que pueden emplearse durante la preparacion. Las sales de los compuestos de la presente invencion pueden formarse, por ejemplo, haciendo reaccionar un compuesto I, II o III con una cantidad de acido o base, tal como una cantidad equivalente, en un medio tal como uno en el que la sal precipita o en un medio acuoso seguido de liofilizacion.

Los compuestos de la presente invencion que contienen un resto basico, tal como pero no limitado a, una amina o un anillo piridina o imidazol, pueden formar sales con una variedad de acidos organicos e inorganicos. Las sales de adicion de acido ejemplares incluyen acetatos (tal como aquellos formados con acido acetico o acido trihaloacetico, por ejemplo, acido trifluoroacetico), adipatos, alginatos, ascorbatos, aspartatos, benzoatos, bencenosulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, camforatos, camforsulfonatos, ciclopentanopropionatos, digluconatos, dodecilsulfatos, etanosulfonatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, hemisulfatos, heptanoatos, hexanoatos, hidrocloruros, hidrobromuros, hidroyoduros, hidroxietanosulfonatos (por ejemplo, 2- hidroxietanosulfonatos), lactatos, maleatos, metanosulfonatos, naftalenosulfonatos (por ejemplo, 2- naftalenosulfonatos), nicotinatos, nitratos, oxalatos, pectinatos, persulfatos, fenilpropionatos (por ejemplo, 3- fenilpropionatos), fosfatos, picratos, pivalatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos (tal como aquellos formados con acido sulfurico), sulfonatos, tartratos, tiocianatos, toluenosulfonatos tales como tosilatos, undecanoatos, y semejantes.

Los compuestos de la presente invencion que contienen un resto acido, tal como pero no limitado a un acido carboxflico, pueden formar sales con una variedad de bases organicas e inorganicas. Las sales basicas ejemplares incluyen sales de amonio, sales de metal alcalino tal como sales de sodio, litio y potasio, sales de metal alcalino terreo tal como sales de calcio y magnesio, sales con bases organicas (por ejemplo, aminas organicas) tal como benzatinas, diciclohexilaminas, hidrabaminas (formadas con N,N-bis(deshidroabietilo) etilendiamina), N-metil-D- glucaminas, N-metil-D-glicamidas, t-butil aminas, y sales como aminoacidos tales como arginina, lisina y semejantes. Los grupos basicos que contienen nitrogeno pueden estar cuaterizados con agentes tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo, y butilo), sulfatos de dialquilo (por ejemplo, sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo, y diamilo), haluros de cadena larga (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo) haluros de aralquilo (por ejemplo, bromuros de bencilo y fenetilo), y otros.

Los solvatos de los compuestos de la invencion tambien estan contemplados en la presente memoria. Los solvatos de los compuestos de la presente invencion incluyen, por ejemplo, hidratos.

Los compuestos de la presente invencion, y las sales de estos, pueden existir en su forma tautomerica (por ejemplo, como una amida o eter imino). Todas dichas formas tautomericas se contemplan en la presente memoria como parte de la presente invencion.

Todos los estereoisomeros de los compuestos de la presente invencion (por ejemplo, aquellos que pueden existir debido a carbonos asimetricos en varios sustituyentes), incluyendo las formas enantiomericas y formas diastereomericas, se contemplan en el alcance de esta invencion. Los estereoisomeros individuales de los compuestos de la invencion pueden, por ejemplo, estar desprovistos sustancialmente de otros isomeros (por ejemplo, como un isomero optico puro o sustancialmente puro que tiene una actividad especificada), o pueden estar mezclados, por ejemplo, como racematos o con todos los demas, u otros seleccionados, estereoisomeros. Los centros quirales de la presente invencion pueden tener la configuracion S o R como se define por las Recomendaciones IUPAC 1974. Las formas racemicas pueden resolverse por metodos ffsicos, tales como, por ejemplo, cristalizacion fraccionada, separacion o cristalizacion de derivados diastereomericos o separacion por cromatograffa en columna quiral. Los isomeros opticos individuales pueden obtenerse a partir de los racematos por cualquier metodo adecuado, incluyendo sin limitacion, metodos convencionales, tales como, por ejemplo, formacion de sal con un acido opticamente activo seguido de cristalizacion.

Los compuestos de la presente invencion, posteriormente a su preparacion, preferiblemente se afslan y purifican para obtener una composicion que contiene una cantidad en peso igual a o mayor de 95% (compuesto I "sustancialmente puro"), que entonces se usa o formula como se describe en la presente memoria. En determinadas realizaciones, los compuestos de la presente invencion son mas de 99% puros.

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Se contemplan todos los isomeros configuracionales de los compuestos de la presente invencion, bien mezclados o en forma pura o sustancialmente pura. La definicion de los compuestos de la presente invencion abarca tanto los isomeros de alqueno cis (Z) como trans (E), asf como los isomeros cis y trans de anillos de hidrocarburo dclicos o heterodclicos.

A lo largo de las especificaciones, los grupos y sustituyentes de estos pueden elegirse para proporcionar restos y compuestos estables.

B. Compuestos

En la presente memoria se describe un compuesto de formula I,

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R2 es heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido;

R3 es hidrogeno, alquilo o alquilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido;

R4, R7, y R8 son cada uno independientemente hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido, ORa, SRa, S(=O)Re, S(=O)2Re, P(=O)2Re, S(=O)2ORe, P(=O)2ORe, NRbRc, NRbS(=O)2Re, NRbP(=O)2Re, S(=O)2NRbRc, P(=O)2NRbRc, C(=O)ORe, C(=O)Ra, C(=O)NRbRc, OC(=O)Ra, OC(=O)NRbRc, NRbC(=O)ORe, NRdC(=O)NRbRc, NRdS(=O)2NRbRc, NRdP(=O)2NRbRc, NRbC(=O)Ra, o NRbP(=O)2NRe;

En determinadas realizaciones, R1 es hidrogeno. En determinadas otras realizaciones, R3 es hidrogeno. En otras realizaciones mas, R1 y R3 son cada uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, R6 es hidrogeno o alquilo C1-4 o alquilo C1-4 sustituido. En otras realizaciones mas, R6 es hidrogeno. En otras realizaciones mas, Ri, R3 y R6 son cada uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, R4, R7 y R8 son cada

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uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, Ri, R3, R4, R6, R7 y R8 son cada uno independientemente hidrogeno.

En determinadas realizaciones, R5 es alquilarilo o alquilheteroarMo, en el que dicho alquilo, arilo o heteroarilo puede estar sustituido opcionalmente. En determinadas otras realizaciones, R5 es arilo o arilo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es fenilo o fenilo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es heterociclo o heterociclo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es heteroarilo o heteroarilo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es piridina o piridina sustituida.

En determinadas realizaciones, R2 es arilo o arilo sustituido. En determinadas otras realizaciones, R2 es heteroarilo o heteroarilo sustituido. En otras realizaciones mas, R2 es un anillo aromatico de 5 o 6 miembros que contiene al menos un heteroatomo seleccionado de N, O y S.

En la presente memoria tambien se describe un compuesto de formula II,

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R14 y R15 son independientemente alquilo o alquilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, o arilo o arilo sustituido, o dichos R14 y R15 junto con el N al que estan unidos forman opcionalmente un heterociclo o heterociclo sustituido;

n es un numero entero seleccionado de 2, 3,4 5 y 6;

En determinadas realizaciones, R1 es hidrogeno. En determinadas otras realizaciones, R3 es hidrogeno. En otras 5 realizaciones mas, R1 y R3 son cada uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, R6 es hidrogeno o alquilo C1-4 o alquilo C1-4 sustituido. En otras realizaciones mas, R6 es hidrogeno. En otras realizaciones mas, Ri, R3 y R6 son cada uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, R4, R7 y R8 son cada uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, Ri, R3, R4, R6, R7 y R8 son cada uno independientemente hidrogeno.

10 En determinadas realizaciones, R5 es alquilarilo o alquilheteroarilo, en el que dicho alquilo, arilo o heteroarilo puede estar sustituido opcionalmente. En determinadas otras realizaciones, R5 es arilo o arilo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es fenilo o fenilo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es heterociclo o heterociclo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es heteroarilo o heteroarilo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es piridina o piridina sustituida.

15 En determinadas realizaciones, Rg y R10 son cada uno independientemente hidrogeno o alquilo C1-4 o alquilo C1-4 sustituido. En determinadas otras realizaciones, Rg y R10 son cada uno independientemente metilo.

En determinadas realizaciones, R14 y R15 son independientemente hidrogeno, alquilo o alquilo sustituido, o dichos R14 y R15 junto con el N al que estan unidos forman opcionalmente un heterociclo saturado sustituido o no sustituido de 3 miembros, 4 miembros, 5 miembros, 6 miembros, o 7 miembros. En determinadas otras realizaciones, R14 y R15

20 son independientemente hidrogeno, alquilo C1-4 o alquilo C1-4 sustituido, o dichos R14 y R15 junto con el N al que estan unidos forman un

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sustituido o no sustituido, en el que m es un numero entero seleccionado del grupo que consiste en 1, 2, 3, 4 y 5. En otras realizaciones mas, R14 y R15 junto con el N al que estan unidos forman un heterociclo saturado sustituido o no 25 sustituido de 6 miembros o 7 miembros, que contiene opcionalmente un heteroatomo adicional seleccionado de N, O y S. En otras realizaciones mas, R14 y R15 junto con el N al que estan unidos forman un heterociclo saturado sustituido o no sustituido de 6 miembros, que contiene opcionalmente un heteroatomo adicional seleccionado de N.

En la presente memoria tambien se describe un compuesto de formula III,

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30 o un enantiomero, diastereomero, tautomero, o sal o solvato farmaceuticamente aceptable de este, en el que los sfmbolos tienen los significados siguientes y, en cada caso, se seleccionan independientemente:

R1 es hidrogeno. alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo 35 o arilo sustituido, ORa, SRa, S(=O)2Re, S(=O)2ORe, C(=O)ORd, C(=O)Ra, o C(=O)NRbRc;

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R3 y R10 son cada uno independientemente alquilo o alquilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido;

R11 es hidrogeno o alquilo C1-4;

n es un numero entero seleccionado de 2, 3,4 5 y 6;

En determinadas realizaciones, R1 es hidrogeno. En determinadas otras realizaciones, R3 es hidrogeno. En otras realizaciones mas, R1 y R3 son cada uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, R6 es hidrogeno o alquilo C1-4 o alquilo C1-4 sustituido. En otras realizaciones mas, R6 es hidrogeno. En otras realizaciones mas, R1, R3 y R6 son cada uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, R4, R7 y R8 son cada uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, R1, R3, R4, R6, R7 y R8 son cada uno independientemente hidrogeno.

En determinadas realizaciones, R5 es alquilarilo o alquilheteroarilo, en el que dicho alquilo, arilo o heteroarilo puede estar sustituido opcionalmente. En determinadas otras realizaciones, R5 es arilo o arilo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es fenilo o fenilo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es heterociclo o heterociclo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es heteroarilo o heteroarilo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es piridina o piridina sustituida.

En determinadas realizaciones, R9 y R10 son cada uno independientemente hidrogeno o alquilo C1-4 o alquilo C1-4 sustituido. En determinadas otras realizaciones, R9 y R10 son cada uno independientemente metilo.

En determinadas realizaciones, R11 es hidrogeno. En determinadas otras realizaciones, n es 2 o 3.

En determinadas realizaciones, R12 y R13 son independientemente hidrogeno, alquilo o alquilo sustituido, o dichos R12 y R13 junto con el N al que estan unidos forman opcionalmente un heterociclo saturado sustituido o no sustituido de 3 miembros, 4 miembros, 5 miembros, 6 miembros, o 7 miembros. En determinadas otras realizaciones, R12 y R13 son independientemente hidrogeno, alquilo C1-4 o alquilo C1-4 sustituido, o dichos R12 y R13 junto con el N al que estan unidos forman un

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sustituido o no sustituido, en el que m es un numero entero seleccionado del grupo que consiste en 1, 2, 3, 4 y 5.

En otras realizaciones mas, R12 y R13 son cada uno independientemente etilo. En otras realizaciones mas, R12 y R13 junto con el N al que estan unidos forman un heterociclo saturado sustituido o no sustituido de 6 miembros o 7

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miembros, que contiene opcionalmente un heteroatomo adicional seleccionado de N, O y S. En otras realizaciones mas, R12 y R13 junto con el N al que estan unidos forman un heterociclo saturado sustituido o no sustituido de 6 miembros, que contiene opcionalmente un heteroatomo adicional seleccionado de N.

Tambien se describe un compuesto de formula IV,

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R6 y R9 son cada uno independientemente hidrogeno, halogeno, ciano, nitro, CF3, OCF3, alquilo o alquilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido o ORa;

En determinadas realizaciones, R1 es hidrogeno. En determinadas otras realizaciones, R3 es hidrogeno. En otras realizaciones mas, R1 y R3 son cada uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, R6 es hidrogeno o alquilo C1-4 o alquilo C1-4 sustituido. En otras realizaciones mas, R6 es hidrogeno. En otras realizaciones mas, R1, R3 y R6 son cada uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, R4, R7 y R8 son cada

uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, R1, R3, R4, R6, R7 y R8 son cada uno independientemente hidrogeno.

En determinadas realizaciones, R5 es alquilarilo o alquilheteroarMo, en el que dicho alquilo, arilo o heteroarilo puede estar sustituido opcionalmente. En determinadas otras realizaciones, R5 es arilo o arilo sustituido. En otras 5 realizaciones mas, R5 es fenilo o fenilo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es heterociclo o heterociclo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es heteroarilo o heteroarilo sustituido. En otras realizaciones mas, R5 es piridina o piridina sustituida.

En determinadas realizaciones, Rg y R10 son cada uno independientemente hidrogeno o alquilo C1-4 o alquilo C1-4 sustituido. En determinadas otras realizaciones, Rg y R10 son cada uno independientemente metilo.

10 En determinadas realizaciones, R14 y R15 son independientemente hidrogeno, alquilo o alquilo sustituido, o dichos R14 y R15 junto con el N al que estan unidos forman opcionalmente un heterociclo saturado sustituido o no sustituido de 3 miembros, 4 miembros, 5 miembros, 6 miembros, o 7 miembros. En determinadas otras realizaciones, R14 y R15 son independientemente hidrogeno, alquilo C1-4 o alquilo C1-4 sustituido, o dichos R14 y R15 junto con el N al que estan unidos forman un

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sustituido o no sustituido, en el que m es un numero entero seleccionado del grupo que consiste en 1, 2, 3, 4 y 5. En otras realizaciones mas, R14 y R15 junto con el N al que estan unidos forman un heterociclo saturado sustituido o no sustituido de 6 miembros o 7 miembros, que contiene opcionalmente un heteroatomo adicional seleccionado de N, O y S. En otras realizaciones mas, R14 y R15 junto con el N al que estan unidos forman un heterociclo saturado 20 sustituido o no sustituido de 6 miembros, que contiene opcionalmente un heteroatomo adicional seleccionado de N.

Tambien se describe un compuesto de formula V,

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25 R1 es hidrogeno. alquilo o alquilo sustituido, alquenilo o alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido,

cicloalquilo o cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo o cicloalquenilo sustituido, heterociclo o heterociclo sustituido, arilo o arilo sustituido, ORa, SRa, S(=O)2Re, S(=O)2ORe, C(=O)ORd, C(=O)Ra, o C(=O)NRbRc;

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R11 es hidrogeno o alquilo C1-4;

n es un numero entero seleccionado de 2, 3,4 5 y 6;

En determinadas realizaciones, R1 es hidrogeno. En determinadas otras realizaciones, R3 es hidrogeno. En otras realizaciones mas, R1 y R3 son cada uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, R6 es hidrogeno o alquilo C1-4 o alquilo C1-4 sustituido. En otras realizaciones mas, R6 es hidrogeno. En otras realizaciones mas, R1, R3 y R6 son cada uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, R4, R7 y R8 son cada uno independientemente hidrogeno. En otras realizaciones mas, R1, R3, R4, Ra, R7 y R8 son cada uno independientemente hidrogeno.

N v.

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En otras realizaciones mas, R12 y R13 son cada uno independientemente etilo. En otras realizaciones mas, R12 y R13 junto con el N al que estan unidos forman un heterociclo saturado sustituido o no sustituido de 6 miembros o 7 miembros, que contiene opcionalmente un heteroatomo adicional seleccionado de N, O y S. En otras realizaciones mas, R12 y R13 junto con el N al que estan unidos forman un heterociclo saturado sustituido o no sustituido de 6 miembros, que contiene opcionalmente un heteroatomo adicional seleccionado de N.

La invencion proporciona un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:

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y un enantiomero, diastereomero, tautomero, o sal o solvato farmaceuticamente aceptable de este.

C. Usos, formulaciOn y administraciOn

La presente invenciOn tambien proporciona, en parte, el uso de una cantidad terapeuticamente efectiva de una composiciOn farmaceutica que comprende un compuesto de la presente invenciOn para tratar, prevenir o mejorar un trastorno relacionado con protema quinasa en un mai^ero. El mairnfero puede necesitar el tratamiento o el tratamiento puede administrarse profilacticamente para la prevenciOn o para la mejora del trastorno relacionado con protema quinasa.

Un "trastorno relacionado con protema quinasa" es cualquier enfermedad o afecciOn perjudicial en la que una protema quinasa juega un papel. Los ejemplos incluyen un trastorno relacionado con serina-treonina quinasa, un trastorno relacionado con tirosina quinasa de receptor, un trastorno relacionado con tirosina quinasa no de receptor, un trastorno relacionado con EGFR, un trastorno relacionado con IGFR, un trastorno relacionado con PDGFR y un trastorno relacionado con flk. Los compuestos de la presente invenciOn pueden usarse para cualquiera de estos trastornos relacionados con protema quinasa.

En determinadas realizaciones, el trastorno relacionado con protema quinasa es un cancer tal como cancer de pulmOn, cancer de vejiga, cancer de cabeza y cuello, melanoma, cancer de ovario, cancer de prOstata, cancer de mama, cancer de pulmOn de celulas pequenas, glioma, cancer colorrectal, cancer de pulmOn de celulas no pequenas, cancer genitourinario, cancer pancreatico, cancer de tiroides, linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, cancer gastrointestinal, cancer gastrico, hepatoma, tumor estromal gastrointestinal, carcinoma de celulas escamosas, carcinoma de celulas renales, astrocitoma, sarcoma de Kaposi, leucemia mielOgena crOnica, leucemia mielOgena aguda, trastornos mieloproliferativos, y glioblastoma.

Segun una o mas realizaciones de la presente invenciOn, "celula madre del cancer" ("CSC") o "celulas madre del cancer" ("CSCs") se refiere a una poblaciOn minuscula de celulas de cancer que tienen capacidad de auto- renovaciOn y son tumorigenicas. Tambien se denominan "celulas iniciadoras del cancer", "celulas iniciadores del tumor", "celulas similares a celulas madre del cancer", "celulas del cancer similares a celulas madre", "celulas de cancer agresivas", y "celulas de cancer supermalignas", etc. Los metodos para aislar estas celulas incluyen pero no estan limitados a enriquecimiento por su capacidad de eflujo de Hoechst 33342, enriquecimiento de marcadores de superficie tales como CD133, CD44, y otros, y enriquecimiento por su propiedad tumorigenica.

El termino "CSCPK" o "CSCPKs" se refiere a protema o protemas quinasas que son esenciales para la supervivencia o auto-renovaciOn de las celulas madre del cancer.

En determinadas realizaciones la protema quinasa es CSCPK. Los compuestos de la presente invenciOn son particularmente utiles para el tratamiento, prevenciOn o mejora del cancer, tal como cancer de pulmOn, cancer de vejiga, cancer de cabeza y cuello, melanoma, cancer de ovario, cancer de prOstata, cancer de mama, cancer de pulmOn de celulas pequenas, glioma, cancer colorrectal, cancer de pulmOn de celulas no pequenas, cancer

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genitourinario, cancer pancreatico, cancer de tiroides, linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, cancer gastrointestinal, cancer gastrico, hepatoma, tumor estromal gastrointestinal, carcinoma de celulas escamosas, carcinoma de celulas renales, astrocitoma, sarcoma de Kaposi, leucemia mielogena cronica, leucemia mielogena aguda, trastornos mieloproliferativos, y glioblastoma, mediante la inhibicion de CSCPK.

En otras realizaciones mas, la protema quinasa incluye serina-treonina quinasas, tirosina quinasas de receptor y tirosina quinasas no de receptor.

En otras realizaciones mas, el trastorno relacionado con protema quinasa incluye diabetes, un trastorno autoinmune, un trastorno de hiperproliferacion, angiogenesis, un trastorno inflamatorio, un trastorno inmunologico, un trastorno cardiovascular, restenosis, fibrosis, psoriasis, enfermedad de von Heppel-Lindau, osteoartritis, neurodegeneracion, infeccion, y artritis reumatoide.

En la presente memoria se describe la inhibicion/reduccion/disminucion de la supervivencia y/o proliferacion de celulas madre del cancer, auto-renovacion en un mairnfero mediante la inhibicion o disminucion de actividad no deseada de CSCPK.

Tambien se describe la inhibicion del nicho de celulas madre del cancer, o senalizacion de celulas estromales tomando como diana las CSCPK.

En parte, el uso descrito en la presente memoria para tratar cancer es mediante la inhibicion/reduccion/disminucion de la supervivencia y/o proliferacion de celulas madre del cancer.

La presente invencion tambien proporciona, en parte, un metodo ex vivo para modular la actividad catalttica de una protema quinasa. El metodo comprende poner en contacto dicha protema quinasa con un compuesto de la presente invencion, o una sal farmaceuticamente aceptable de este. En determinadas realizaciones, la protema quinasa incluye una serina-treonina quinasa, una tirosina quinasa de receptor y una tirosina quinasa no de receptor.

La presente invencion tambien proporciona, en parte, una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de la presente invencion como se ha descrito anteriormente en la presente memoria, o un enantiomero, diastereomero, tautomero, o sal o solvato farmaceuticamente aceptable de este, y un excipiente, vehmulo, o diluyente farmaceuticamente aceptable.

Las formulaciones de la presente invencion incluyen aquellas adecuadas para administracion oral, nasal, topica (incluyendo bucal y sublingual), rectal, vaginal y/o parenteral. Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosificacion unitaria y pueden prepararse por cualesquiera metodos muy conocidos en la tecnica de farmacia. La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con un material vehicular para producir una forma de dosificacion unitaria variara dependiendo del mai^ero que se esta tratando y el modo particular de administracion. La cantidad de ingrediente activo, que puede combinarse con un material vehicular para producir una forma de dosificacion unitaria, sera generalmente aquella cantidad del compuesto que produce un efecto terapeutico. Generalmente, hasta 100%, esta cantidad variara, por ejemplo, de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 25% de ingrediente activo.

Las composiciones o formulaciones terapeuticas de la invencion adecuadas para administracion oral pueden estar en la forma de capsulas, sobres, pfldoras, comprimidos, comprimidos para chupar (usando bases con sabor, habitualmente sacarosa y goma arabiga o de tragacanto), polvos, granulos, o como una disolucion o una suspension en un lfquido acuoso o no acuoso, o como una emulsion lfquida de aceite en agua o agua en aceite, o como un elixir o jarabe, o como pastillas (usando una base inerte, tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arabiga) y/o como lavados bucales y semejantes, conteniendo cada una, una cantidad predeterminada de un compuesto de la presente invencion como un ingrediente activo. Un compuesto de la presente invencion tambien puede administrarse como un bolo, electuario o pasta.

En las formas de dosificacion solidas de la invencion para administracion oral (capsulas, comprimidos, pfldoras, grageas, polvos, granulos y semejantes), el alcohol o inhibidor segun la invencion se mezcla con uno o mas vehmulos farmaceuticamente aceptables, tal como citrato de sodio o fosfato de dicalcio, y/o cualquiera de los siguientes: rellenos o extensores, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol, y/o acido silfcico; aglutinantes, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinil pirrolidona, sacarosa y/o goma arabiga; humectantes, tales como glicerol; agentes disgregantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidon de patata o tapioca, acido algmico, determinados silicatos, carbonato de sodio y glicolato sodico de almidon; agentes retardantes de disolucion, tales como parafina; aceleradores de la absorcion, tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes humectantes, tales como, por ejemplo, alcohol cetilico, monoestearato de glicerol, y copolfmero oxido de polietileno-oxido de polipropileno; absorbentes, tales como caolm y arcilla de bentonita; lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilen glicoles solidos, lauril sulfato de sodio, y mezclas de estos; y agentes colorantes. En el caso de capsulas, comprimidos y pfldoras, las composiciones farmaceuticas tambien pueden comprender agentes tamponadores. Las composiciones solidas de un tipo similar tambien pueden emplearse como rellenos en capsulas de gelatina con relleno blando y duro usando excipientes tales como lactosa o azucares de la leche, asf como polietilen glicoles de alto peso molecular y semejantes.

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Las formas de dosificacion Kquidas para administracion oral de los compuestos de la invencion incluyen emulsiones, microemulsiones, disoluciones, suspensiones jarabes y elixires farmaceuticamente aceptables. Ademas del ingrediente activo, las formas de dosificacion lfquidas pueden contener diluyentes inertes usados comunmente en la tecnica, tales como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etflico, alcohol isopropflico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bendlico, benzoato de bencilo, propilen glicol, 1,3-butilen glicol, aceites (en particular, aceites de semilla de algodon, de cacahuete, mafz, germen, oliva, colza y sesamo), glicerol, alcohol tetrahidrofunlico, polietilen glicoles y esteres de acidos grasos de sorbitan, y mezclas de estos. Ademas, pueden usarse ciclodextrinas, por ejemplo, hidroxipropil-.beta.-ciclodextrina para solubilizar los compuestos.

Ademas de los diluyentes inertes, las composiciones orales tambien pueden incluir adyuvantes tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspension, agentes edulcorantes, saponferos, colorantes, perfumantes y conservantes. Las suspensiones, ademas de los alcoholes o inhibidores segun la invencion, pueden contener agentes de suspension como, por ejemplo, alcoholes isoesteanlicos etoxilados, polioxietilen sorbitol y esteres de sorbitan, celulosa microcristalina, metahidroxido de aluminio, bentonita, agar-agar y goma de tragacanto, y mezclas de estos.

Las formulaciones de las composiciones farmaceuticas de la invencion para administracion rectal o vaginal pueden presentarse como un supositorio, que puede prepararse mezclando uno o mas alcoholes o inhibidores segun la invencion, con uno o mas excipientes o vehfculos no irritantes adecuados que comprenden, por ejemplo, manteca de cacao, polietilen glicol, una cera de supositorio o un salicilato, y que es solido a temperatura ambiente, pero lfquido a temperatura corporal y, por lo tanto, se fundira en el recto o cavidad vaginal y liberara los agentes farmaceuticos activos de la invencion. Las formulaciones de la presente invencion que son adecuadas para administracion vaginal tambien incluyen pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en pulverizador que contienen dichos vehfculos como se sabe en la tecnica que son apropiados.

Las formas de dosificacion para la administracion topica o transdermica de un alcohol u otro inhibidor segun la invencion incluyen polvos, pulverizaciones, pomadas, pastas, cremas, lociones, geles, disoluciones, parches e inhalantes. El compuesto activo puede mezclarse en condiciones esteriles con un vehfculo farmaceuticamente aceptable, y con cualesquiera conservantes, tampones, o propelentes que puedan requerirse.

Las pomadas, pastas, cremas y geles pueden contener, ademas de un alcohol u otro inhibidor segun la invencion, excipientes, tales como grasas animales y vegetales, aceites, ceras, parafinas, almidon, goma de tragacanto, derivados de celulosa, polietilen glicoles, siliconas, bentonitas, acido silfcico, talco y oxido de cinc, o mezclas de estos.

Los polvos y pulverizaciones pueden contener, ademas de un compuesto de esta invencion, excipientes tales como lactosa, talco, acido silfcico, hidroxido de aluminio, silicatos de calcio y polvo de poliamida, o mezclas de estas sustancias. Las pulverizaciones pueden contener ademas propelentes habituales, tales como

clorofluorohidrocarburos e hidrocarburos no sustituidos volatiles, tales como butano y propano.

Las formulaciones oftalmicas, pomadas oculares, polvos, disoluciones y semejantes, tambien se contemplan como que estan en el alcance de esta invencion.

Las composiciones farmaceuticas de esta invencion adecuadas para administracion parenteral comprenden uno o mas alcoholes o inhibidores segun la invencion en combinacion con una o mas disoluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas isotonicas esteriles farmaceuticamente aceptables, o polvos esteriles que pueden reconstituirse en disoluciones o dispersiones inyectables esteriles justo antes del uso, que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostaticos, solutos que hacen que la formulacion sea isotonica con la sangre del receptor pretendido o agentes de suspension o espesantes.

En algunos casos, con el fin de prolongar el efecto del alcohol o inhibidor segun la invencion, es deseable ralentizar la absorcion del alcohol o inhibidor de la inyeccion subcutanea o intramuscular. Esto puede conseguirse por el uso de una suspension lfquida de material cristalino o amorfo que tienen una baja solubilidad en agua. La velocidad de absorcion del farmaco depende entonces de su velocidad de disolucion, lo que, a su vez, puede depender del tamano de los cristales y la forma cristalina. Alternativamente, la absorcion retardada de una composicion administrada parenteralmente se consigue disolviendo o suspendiendo el alcohol o inhibidor en un vehfculo aceitoso. Una estrategia para inyecciones de liberacion lenta incluye el uso de copolfmeros oxido de polietileno- oxido de polipropileno en los que el vehfculo es fluido a temperatura ambiente y solidifica a temperatura corporal.

Los compuestos farmaceuticos de esta invencion pueden administrarse solos, o simultaneamente, posteriormente o secuencialmente con uno o mas agentes activos, otros agentes farmaceuticos, o con otro agente anti-cancer o citotoxico como se ha descrito anteriormente en la presente memoria, asf como en combinacion con un excipiente, vehfculo, o diluyente farmaceuticamente aceptable como se ha descrito anteriormente.

La cantidad de agente farmacologico en la forma de dosificacion unitaria oral, con una unica dosificacion o dosificacion multiple, es una cantidad que es efectiva para tratar un trastorno neurologico. Como reconocera un experto en la tecnica, la dosis precisa para emplearse dependera de una variedad de factores, ejemplos de los

cuales incluyen la afeccion en sf misma, la gravedad de la afeccion que se esta tratando, la composicion particular usada, as^ como varios factores ffsicos relacionados con el individuo que se esta tratando. Pueden emplearse opcionalmente ensayos in vitro o in vivo para ayudar a identificar los intervalos de dosificacion optimos.

Los compuestos de la invencion se administraran normalmente en un regimen de dosificacion diaria (para un 5 paciente adulto) de, por ejemplo, una dosis oral de entre 1 mg y 2.000 mg, preferiblemente entre 30 mg y 1.000 mg, por ejemplo, entre 10 y 250 mg o una dosis intravenosa, subcutanea, o intramuscular de entre 0,1 mg y 100 mg, preferiblemente entre 0,1 mg y 50 mg, por ejemplo, entre 1 y 25 mg de los compuestos de la invencion o una sal fisiologicamente aceptable de estos calculada como la base libre, administrandose el compuestos 1 a 4 veces al dfa. Adecuadamente, los compuestos se administraran durante un periodo de terapia continua, por ejemplo, durante una 10 semana o mas.

D. Smtesis qmmica

Los compuestos de la presente invencion pueden prepararse usando los metodos descritos mas adelante, junto con metodos sinteticos conocidos para un experto en la tecnica de la smtesis organica, o variaciones de estos. Las reacciones se realizan en disolventes apropiados para los reactivos y materiales empleados y son adecuados para 15 las transformaciones que se estan efectuando. Los materiales de partida para los ejemplos contenidos en la presente memoria estan bien disponibles comercialmente o se preparan facilmente por metodos estandar a partir de materiales conocidos. Los varios sustituyentes en los compuestos de las formulas como se muestra en los Esquemas 1 y 2 son como se han definido anteriormente en la presente memoria.

Como se muestra en el Esquema 1, un compuesto de formula VII puede hacerse reaccionar con un compuesto de 20 formula VIII en condiciones efectivas (por ejemplo, calentamiento) para proporcionar un compuesto sustituido con tiazol de formula VI. El compuesto de formula Vi puede hacerse reaccionar adicionalmente con un compuesto de formula IX en presencia de una base (por ejemplo, piperidina) para proporcionar un compuesto de formula VI.

Esquema 1

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25 Un compuesto de formula II puede prepararse segun el Esquema 2. El compuesto de formula VI puede hacerse reaccionar con un compuesto de formula X en presencia de una base (por ejemplo, piperidina) para proporcionar un compuesto de formula XI. El compuesto de formula XI puede hacerse reaccionar adicionalmente con una amina de formula XII, en presencia de un agente acoplador de peptidos y una base, para proporcionar el compuesto de formula II.

Esquema 2

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Los ejemplos siguientes ilustran adicionalmente, sin limitacion, la preparacion para los compuestos de la presente invencion.

5 Ejemplos Ejemplo 1

Preparacion del compuesto 7-1

Esquema A

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10 A una suspension de 5-cloroacetiloxindol 1 (42 mg, 0,2 mmoles) en EtOH/THF (2 mL/1 mL) se anadio tioacetamida 2-1 (15 mg, 0,2 mmoles). La mezcla se calento a 80 C durante 16 h antes de enfriarla. La disolucion se concentro en vacfo para obtener un solido naranja 3. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) 6 10,50 (br. S, 1H), 7,72 - 7,80 (m, 2H), 7,33 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,86 (d, 1H, J = 8,63 Hz), 3,42 -4,54 (m, 2H); MS m/z 231,10 (M+H).

A una disolucion de 3 (53 mg, 0,2 mmoles) en EtOH/THF (2 mL/1 mL) (o usar la mezcla de reaccion anterior en 15 disolucion de EtOH/THF (2 mL/1 mL)) se anadio acido 5-formil-2,4-dimetil-1H-pirrol-3-carboxflico 4 (33,4mg, 0,2 mmoles) y piperidina (21,8 jL). La mezcla se calento a 80 C durante 2 horas. Despues de enfriarla hasta temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se filtro y se lavo con EtOH (1 mL) para obtener el solido rojizo 5.

1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) 6 13,80 (s, 1H), 12,10 (br.s, 1H), 11,08 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,78 - 7,81 (m, 2H), 6,94 (d, 1H, J = 8,11Hz), 2,74 (s, 3H), 2,56 (s, 3H), 2,52 (s, 3H); MS m/z 380,21 (M+H).

A una disolucion de 5 (20 mg, 0,052 mmoles) en DMF (1,5 mL) se anadio HATU (24 mg, 0,063 mmoles), diisopropiletilamina (30 pL, 0,168 mmoles), y 1-metilpiperazina 6-1 (10 pL, 0,090 mmoles). La mezcla se agito a 5 temperatura ambiente durante 16 horas, despues se concentro en vado. Al residuo se anadio CH2Cl2 (2 mL) y se extrajo con H2O (3 x 1,5 mL). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se concentro en vado. El residuo se purifico por cromatograffa en columna (CH2Cl2/MeOH/Et3N) para obtener un solido amarillo 7-1. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) 6 11,00 (s, 1H), 8,30 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,65 - 7,78 (m, 2H), 6,94 (d, 1H, J = 8,18Hz), 3,02 - 3,20 (m, 4H), 2,74 (s, 3H), 2,5 - 2,58 (m, 4H), 2,5 (s, 6H), 2,3 (s, 3H); MS m/z 462,20 (M+H).

10 Ejemplo 2

Preparacion del compuesto 10-1

Esquema B

imagen22

A una suspension de 5-cloroacetiloxindol 1 (820 mg, 4 mmoles) en EtOH/THF (20 mL/20 mL) se anadio 15 tiobenzamida 2-2 (550 mg, 4 mmoles). La mezcla se calento a 80 C durante 16 h antes de enfriarla. La disolucion se concentro en vado para obtener un solido naranja 8. MS m/z 293,20 (M+H).

A este solido 8 se anadio EtOH/THF (20 mL/20 mL) (o usar la mezcla de reaccion anterior), acido 5-formil-2,4- dimetil-1H-pirrol-3-carboxflico 4 (668mg, 4 mmoles) y piperidina (400 pL). La mezcla se calento a 80 C durante 5 horas. Despues de enfriarla hasta temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se filtro y se lavo con EtOH (1 mL) 20 para obtener el solido naranja 9. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) 6 13,80 (s, 1H), 12,40 (s, 1H), 11,10 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,07 - 8,12 (m, 3H), 7,94 (d, 1H, J = 8,00Hz), 7,86 (s, 1H), 7,55 - 7,6 (m, 3H), 7,01 (d, 1H, J = 8,10Hz), 2,59 (s, 3H), 2,57 (s, 3H); MS m/z 442,20 (M+H).

A una disolucion de 9 (34 mg, 0,077 mmoles) en DMF (1,5 mL) se anadio HATU (35 mg, 0,092 mmoles), diisopropiletilamina (30 jL, 0,168 mmoles), y 1-metilpiperazina 6-1 (15 jL, 0,13 mmoles). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 16 horas, despues se concentro en vado. Al residuo se anadio CH2CI2 (2 mL) y se extrajo con H2O (3 x 1,5 mL). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se concentro en vado. El residuo se purifico 5 por cromatograffa en columna (CH2Cl2/MeOH/Et3N) para obtener un solido amarillo 10-1. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) 6 13,6 (s, 1H), 11,10 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,07 - 8,10 (m, 3H), 7,91 (d, 1H, J = 8,00Hz), 7,80 (s, 1H), 7,68 -7,76 (m, 2H), 7,52 -7,58 (m, 1H), 7,01 (d, 1H, J = 8,10Hz), 3,02 -3,15 (m, 4H), 2,52 -2,58 (m, 4H), 2,5 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,33 (s, 3H); MS m/z 524,20 (M+H).

Ejemplo 3

10 Preparacion del compuesto 10-2

Esquema C

imagen23

A una disolucion de 9 (1,55 g, 3,5 mmoles) en DMF (130 mL) se anadio HATU (1,6 g, 4,2 mmoles), diisopropiletilamina (1,6 mL, 9,2 mmoles), y N,N-dietil-1,2-etanodiamina 6-2 (0,6 mL, 4,2 mmoles). La mezcla se 15 agito a temperatura ambiente durante 16 horas, despues se concentro en vado. Al residuo se anadio CH2CI2 (800 mL) y se extrajo con H2O (200 mL), NaHCO3 saturado (200 mL), H2O (2 x 200 mL), y salmuera (200 mL). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se concentro en vado. Al residuo se anadio una pequena cantidad de MeOH y se filtro para obtener un solido amarillo 10-2. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) 6 13,70 (s, 1H), 11,10 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,07 - 8,10 (m, 3H), 7,92 (d, 1H, J = 8,10Hz), 7,81 (s, 1H), 7,3 - 7,6 (m, 3H), 7,00 (d, 1H, J = 8,10Hz), 3,2 -3,3 20 (m, 2H), 2,5 - 2,6 (m, 6H), 2,51 (s, 3H), 2,48 (s, 3H), 1,00 (t, 6H, J = 6,90 Hz); MS m/z 540,20 (M+H).

Ejemplo 4

Preparacion del compuesto 13-1

Esquema D

imagen24

5 A una suspension de 5-cloroacetiloxindol 1 (42 mg, 0,2 mmoles) en EtOH/THF (1 mL/1 mL) se anadio tionicotinamida 2-3 (27,8 mg, 0,2 mmoles). La mezcla se calento a 80 C durante 16 h antes de enfriarla. La disolucion se concentro en vado para obtener un solido naranja 11. MS m/z 294,20 (M+H).

A este solido 11 se anadio EtOH/THF (1 mL/1 mL), acido 5-formil-2,4-dimetiMH-pirrol-3-carboxflico (33,4 mg, 0,2 mmoles) y piperidina (21,8 jL). La mezcla se calento a 80 C durante 2 horas. Despues de enfriarla hasta 10 temperatura ambiente, la mezcla de reaccion se concentro y se filtro para obtener el solido naranja 12. MS m/z 443,20 (M+H).

A una disolucion del solido 12 (44 mg, 0,10 mmoles) en DMF (1,5 mL) se anadio HATU (35 mg, 0,12 mmoles), diisopropiletilamina (50 jL, 0,33 mmoles), y 1-metilpiperazina 6-1 (30 jL, 0,26 mmoles). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 16 horas, despues se concentro en vado. Al residuo se anadio CH2CI2 (2 mL) y se 15 extrajo con H2O (1,5 mL). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se concentro en vado. El residuo se purifico por cromatograffa en columna (CH2Cl2/MeOH/Et3N) para obtener un solido amarillo 13-1. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 13,55 (s, 1H), 11,00 (s, 1H), 9,20 (d, 1H, J = 1,60 Hz), 8,64 (dd, 1H, J = 4,70, 1,60 Hz), 8,35 - 8,37 (m, 2H), 8,10 (s, 1H), 7,84 (dd, 1H, J = 8,00, 1,60 Hz), 7,71 (s, 1H), 7,52 (ddd, J = 8,00, 4,70, 0,70 Hz, 1H), 6,92 (d, 1H, J = 8,00 Hz), 3,07 - 3,2 (m, 4H), 2,26 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,24 - 2,3 (m, 4H), 2,13 (s, 3H); MS m/z 525,20 (M+H).

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Ejemplo 5

Preparacion del compuesto 13-2

Esquema E

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A una disolucion del solido 12 (44 mg, 0,10 mmoles) en DMF (1,5 mL) se anadio HATU (35 mg, 0,12 mmoles), diisopropiletilamina (50 jL, 0,33 mmoles), y N,N-dietil-1,2-etanodiamina 6-2 (23 jL, 0,2 mmoles). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 16 horas, despues se concentro en vado. Al residuo se anadio CH2O2 (2 mL) y se extrajo con H2O (1,5 mL). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se concentro en vado. El residuo se purifico por cromatograffa en columna (CH2Cl2/MeOH/Et3N) para obtener un solido amarillo 13-2. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 6 13,60 (s, 1H), 11,00 (s, 1H), 9,18 (d, 1H, J = 1,60Hz), 8,64 (dd, 1H, J = 4,80, 1,60 Hz), 8,33 - 8,37 (m, 2H), 8,09 (s, 1H), 7,83 (dd, 1H, J = 8,00, 1,60 Hz), 7,71 (s, 1H), 7,50 (dd, J = 8,00, 4,80 Hz, 1H), 7,36 - 7,39 (m, 1H), 6,91 (d, 1H, J = 8,00Hz), 3,20 (q, J = 7,10 Hz, 4H), 2,4 - 2,6 (m, 4H), 0,90 (t, J = 7,10 Hz, 6H); MS m/z 525,20 (M+H). MS m/z 541,20 (M+H).

El compuesto 13-2 puede prepararse a partir del compuesto 12 y N,N-dietil-1,2-etanodiamina 6-2 usando un metodo analogo al usado para la preparacion del compuesto 13-1.

Ejemplo 6

Formulacion de los compuestos de la invencion

Los compuestos en esta invencion pueden formularse en los vedculos orales aceptables como mezcla en disolucion o como mezcla en suspension. Por ejemplo, la formulacion de disolucion 10 mg/ml se preparo como sigue. Se disolvieron 100 mg de Compuesto 10-2 [como se muestra en el Ejemplo 3] en 1,25 ml de dMa (dimetilacetamida) agitando vigorosamente y sonicando. A la disolucion resultante se anadieron 8,75 ml de la mezcla de disolventes que consiste en PEG400 y vitamina E acuosa TPGS al 20% (60:40) y 75 jl de 2,4 N HCl. La mezcla resultante se calento y sonico en un bano de agua a 450C hasta que la disolucion se volvio transparente. La formulacion de suspension de 10 mg/ml se preparo como sigue. Se suspendieron 100 mg del compuesto 10-2 en 10 ml de acido dtrico al 0,7% y se volvio una suspension uniforme agitando vigorosamente y sonicando.

Ejemplo 7

Ensayos biologicos

Los compuestos de la presente invencion pueden ensayarse segun el protocolo descrito.

Cultivo Celular: las celulas HeLa, Dld1, SW480, MDA-MB-231, A549, HT29, A431, PC3 FaDu, HepG2, y H1299 (ATCC, Manassas, VA) se mantuvieron en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) (Invitrogen, Carlsbad, CA) suplementado con 10% suero bovino fetal (FBS) (Gemini Bio-Products, West Sacramento, CA) y 5% penicilina/estreptomicina/anfotericina B (Invitrogen).

Determinacion de la viabilidad celular: para el ensayo de formacion de colonias, las celulas se sembraron en placas de 6 pocillos a 2.000 celulas por pocillo. Veinticuatro horas despues de la siembra, las celulas se trataron con el compuesto. Se dejo que las colonias se desarrollaran durante 7-10 dfas, momento en el que se tineron con tincion de Giemsa modificada (Sigma). Las colonias tenidas se contaron para determinar la CI50.

Analisis por transferencia Western: las celulas cultivadas se recogieron y se lisaron en tampon de extraccion de celulas completas (50 mM Tris-HCl pH 7,5, 150 mM NaCl, 1,0% NP-40, 1 mM EDTA, 0,1 mM ortovanadato de sodio, 1X mezcla de inhibidores de proteasas (Roche)) por incubacion durante 30 minutos en hielo. Las protemas solubles se separaron por centrifugacion a 13.000 x g en una microcentnfuga, y los sobrenadantes se almacenaron a -700C.

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Las protemas se separaron por analisis por electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio y se transfirieron a una membrana de difluoruro de polivinilideno (Biorad, Hercules, CA) por electrotransferencia.

Poblacion Lateral de Hoechst: se retiraron celulas SW480 de la placa de cultivo con tripsina y acido etilendiaminotetraacetico ("EDTA"), se sedimentaron mediante centrifugacion, se lavaron con disolucion salina tamponada con fosfato (PBS), y se resuspendieron a 37°C en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) que contema 2% FBS y 1 mM acido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanosulfonico (HEPES). Las celulas se marcaron con Hoechst 33342 (Invitrogen) a una concentracion de 5 |ig/mL. Las celulas marcadas se incubaron durante 120 minutos a 37°C, bien solas o con 50 |iM verapamilo (Sigma-Aldrich, St. Louis). Despues de la tincion, las celulas se suspendieron en disolucion salina equilibrada de Hank (HBSS; Invitrogen) que contema 2% FBS y 1 mM HEPES, se pasaron a traves de un filtro de malla de 40 |im, y se mantuvieron a 4°C hasta el analisis por citometna de flujo. El tinte de Hoechst se excito a 350 nm y su fluorescencia se midio a dos longitudes de onda usando un filtro optico 450 DF10 (filtro de paso de banda de 450/20 nm) y 675LP (filtro de borde paso largo de 675 nm). La ventana de analisis de la dispersion lateral y frontal no fue rigurosa, y solo se excluyeron los restos celulares (Goodell et al., 1996 J Exp Med 183, 1797-806).

Aislamiento de CSC con marcadores de la superficie: la separacion de las celulas tumorales basandose principalmente en la expresion diferencial del o de los marcadores de la superficie, tales como CD44 o CD133, ha sido la responsable de la descripcion de la mayona de las CSC altamente tumorigenicas hasta la fecha. Las celulas CD44alto se aislaron mediante FACS segun los metodos descritos en Ponti et al., con una ligera modificacion [24]. Brevemente, despues de la tripsinizacion y la recuperacion de las celulas durante 30 minutos a 37°C en medio de crecimiento, las celulas se sedimentaron a 400 x g y se resuspendieron en PBS con 2% FBS y 1 mM EDTA a 1 x 106 celulas/mL. Las celulas se incubaron en hielo con una dilucion 1:100 de CD44-FITC (BD Biosciences, San Diego, CA) durante 15 minutos. Alternativamente, se utilizo CD24-PE (BD Biosciences, San Diego, CA) (1:100) para la seleccion negativa. Despues de lavar tres veces, las celulas se resuspendieron a 2 x 106/mL y se pasaron a traves de una malla de 40 |iM antes de la separacion.

Inmunofluorescencia: las celulas tratadas con el compuesto indicado durante un tiempo indicado se fijaron bien en 4% formaldefndo o metanol frio para la deteccion de la Anexina-V. Los cubreobjetos se secaron al aire y se rehidrataron en PBS a temperatura ambiente durante 10 min. Despues, las muestras se incubaron en tampon de bloqueo (PBS, 5% FBS) durante aproximadamente 10 min a temperatura ambiente en una camara humeda. Las celulas se incubaron toda la noche a 4°C con anticuerpos primarios. Despues de lavar, las celulas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente con una dilucion 1:500 de anticuerpo anti-conejo conjugado con FITC. Se capturaron imagenes con un microscopio Nikon TE200 equipado con epifluorescencia y una camara CCD de mosaico SPOT. El policlonal Anexina-V-FlTC se obtuvo de Roche, Penzberg, Alemania.

Ensayo de esferas: un metodo fiable para medir la capacidad auto-renovadora de una poblacion celular es la capacidad de ser cultivadas como esferas en ausencia de suero o adherencia. Se cultivaron celulas madre del cancer de poblacion lateral de Hoechst o CD44alto FaDu en placas con una adherencia ultra baja en medio de celulas madre del cancer (DMEM/F12, suplemento Neurobasal B27, 20 ng/mL EGF, 10 ng/mL FGF, 4 |ig/mL insulina, y 0,4% BSA) para permitir la formacion de esferas. Tfpicamente, la formacion de esferas se evaluo mediante microscopfa despues de 10-14 dfas en cultivo y se puntuaron las esferas con >50 celulas.

Modelo de xenoinjerto murino: se subcultivaron internamente celulas PC3 de xenoinjerto de cancer de prostata humano y se inocularon en ratones macho desnudos atfmicos s.c. a un nivel de 8,0 x 106 celulas/raton. En la estadificacion, los tumores tuvieron un volumen de aproximadamente 350 mm . Las dimensiones de los tumores se determinaron usando un calibrador digital y los volumenes de los tumores se calcularon como [longitud x (anchura)2/2]. De manera similar, se inocularon celulas HepG2 de xenoinjerto de cancer de fngado humano en ratones hembra desnudos a un nivel de 8,0 x 106 celulas/raton y el tratamiento empezo cuando los tumores tuvieron un volumen de aproximadamente 700 mm3. Se inocularon celulas FaDu de xenoinjerto de cancer de cabeza y cuello humano en ratones hembra desnudos a un nivel de 6,0 x 106 celulas/raton y el tratamiento empezo cuando los tumores tuvieron un volumen de aproximadamente 150 mm3.

Articulos de ensayo: el compuesto 10-2 [como se muestra en el Ejemplo 3] como una sal hidrocloruro se formulo a 10 mg/ml en DMA/PEG400/H2O (10%:50%:40%) para administracion intraperitoneal y se formulo a 10 mg/ml en DMA/PEG400/Vitamina E al 20% (12,5%/52,5%/35%) para administracion por via oral.

Administracion del artfculo de ensayo: la dosificacion se hizo como se indica.

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Tabla 1: resumen de los grupos de estudio y regfmenes de tratamiento

Grupo: ID del grupo Regimen de tratamiento

N: Articulo de ensayo Vehfculo Dosis (mg/kg)

1: Control de vefnculo 5-8 ninguno DMA/PEG400/H2O (o vit. E) 0

2: 10-2 5-8 10-2 DMA/PEG400/H2O (o vit. E) Segun se indica

Evaluaciones in vivo: tambien se realizaron examenes diarios del estado de salud de cada animal. Se comprobaron los pesos corporales cada tres dfas. Se suministro alimento y agua a diario segun los procedimientos de mantenimiento de animales de la instalacion. El tratamiento que produjo >20% de letalidad y/o >20% de perdida de peso corporal neto se considero toxico. Los resultados se expresan como volumen tumoral medio (mm3) + EE. Los valores de P < 0,05 se consideran estadfsticamente relevantes.

Mantenimiento de los Animales: se aclimataron ratones desnudos atfmicos machos o hembras de 4-5 semanas (Charles River Laboratories, Wilmington, MA) a las instalaciones de mantenimiento de animales durante al menos 1 semana antes del inicio del estudio. Todos los procedimientos experimentales utilizados fueron consistentes con las directrices indicadas por la American Physiology Society y la Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, y tambien fueron aprobadas por el Institutional Animal Care and Use Committee de Boston Biomedical Inc. Los animales se alojaron en grupos de cuatro en jaulas con lecho de virutas de madera en una habitacion con temperatura controlada (20°C-22,2°C), luz controlada (ciclo de luz-oscuridad de 12 horas), y humedad controlada (45-55%). Los animales pudieron acceder al alimento y al agua sin restricciones durante el experimento.

Ejemplo 8

Identificacion de los compuestos que inhiben quinasas

La capacidad del compuesto 10-2 [como se muestra en el Ejemplo 3] se evaluo para su capacidad de inhibir determinadas quinasas oncogenicas. Las celulas se trataron con el compuesto 10-2 durante 6 horas antes de la adicion de EGF al medio de crecimiento durante 15 minutos. Se realizo un analisis de transferencia Western para determinar los niveles de las formas fosforiladas de las tirosina quinasas del receptor EGFR, c-Met y Her2. Se encontro que la incubacion de celulas con los compuestos de la presente invencion bloqueo la activacion de EGFR, c-Met y Her2 (vease la Figura 1).

El compuesto 10-2 [como se muestra en el Ejemplo 3] se ensayo para determinar si causa una inhibicion global de la actividad tirosina quinasa. El compuesto 10-2 se trato en celulas durante 6 horas para examinar su efecto en los niveles de protemas con tirosina fosforilada. Se observo una ligera disminucion en la fosforilacion en tirosina total en celulas tratadas con mas de 1 pM 10-2. Sin embargo, no se observo una disminucion en los niveles de fosfo-tirosina en celulas tratadas con menos de 1 pM 10-2 (vease la Figura 2). Estos datos sugieren que el Compuesto 10-2 inhibe espedficamente la activacion de EGFR, cMet, Her2, y posiblemente quinasas adicionales, pero no causa una reduccion global en la actividad tirosina quinasa.

Se realizo un experimento de perfil de quinasas para determinar la CI50 del compuesto 10-2 para un panel de aproximadamente 200 quinasas. Se encontro que el compuesto 10-2 [como se muestra en el Ejemplo 3] inhibe selectivamente PDGFRa con una CI50 que vana de 4-30 nM, que es aproximadamente 1.000 veces selectivo sobre PDGFR beta. El perfil de quinoma del compuesto 10-2 se compara con el del compuesto de referencia que sirvio aqrn como un inhibidor de tirosina quinasa (TKI) control. Como puede observarse en la Figura 3, el compuesto 10-2 tiene un perfil de quinoma mucho mas limpio, lo que sugiere que el compuesto 10-2 tendra un perfil de toxicidad mejorado respecto al compuesto de referencia.

Ejemplo 9

Induccion de muerte celular in vitro

Los compuestos 5 [como se muestra en el Ejemplo 1], 3 [como se muestra en el Ejemplo 1], 7-1 [como se muestra en el Ejemplo 1], 10-2 [como se muestra en el Ejemplo 3], 10-1 [como se muestra en el Ejemplo 2], y 13-1 [como se muestra en el Ejemplo 4] se ensayaron para su capacidad de inhibir el crecimiento celular y estimular la muerte celular usando el ensayo de formacion de colonias (CFA). Las celulas se trataron durante bien 6 o veinticuatro horas con los compuestos indicados, y despues se dejaron crecer durante 7-10 dfas adicionales. Las celulas se tineron y las colonias se contaron para determinar los valores de CI-50. Solo para propositos de ilustracion, los resultados biologicos de los compuestos 5, 3, 7-1, 10-2, 10-1, y 13-1 se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2

Compuestos: HT29 (CI50) MDA-MB-231 (CI50) FaDu (CI50)

5: 10-25 jM 6-10 jM

(Referencia) 3: 50-300 jM 50-300 jM

7-1: 6-10 jM 6-10 jM

10-2: 100-250 nM 100-250 nM

10-1: 1,5-3 jM 0,8-1,5 jM

13-1: 400-800 nM 100-250 nM

13-2: 300-400 nM

De manera similar, el compuesto 10-2 [como se muestra en el Ejemplo 3], se ensayo frente a un amplio rango de lmeas celulares de cancer. Los resultados muestran que el Compuesto 10-2 tiene actividades potentes frente a 5 estas celulas (Tabla 3).

Tabla 3

Compuesto 10-2 (jM)

Lmea celular Tipo de tejido 6 hrs 24 hrs

Did1: Cancer de colon 0,507 0,497

SW480: 0,419 0,400

HT29: 0,193 0,238

H1299: Cancer de pulmon 1,048 0,450

A549: 0,509 0,502

A431: Cancer de piel 0,537 0,424

HepG2: Cancer de hngado 0,907 0,386

ACHN: Cancer de rinon 0,53 0,40

FaDu: Cancer de cabeza y cuello 0,62 0,50

Ejemplo 10

Identificacion de compuesto 10-2 que tiene como diana celulas madre del cancer

10 Las celulas SW480 se tineron con Hoechst. La poblacion lateral (mostrada en la Figura 4A, area cerrada del panel superior izquierdo) se selecciono para enriquecer las celulas madre del cancer. Se trato en primer lugar un conjunto control de celulas SW480 con verapamilo, un inhibidor de los transportadores ABC, antes de tenir con Hoechst. Como se muestra en el panel inferior derecho de la Figura 4A, el tratamiento con verapamilo resulta en la perdida de la poblacion lateral. La SP represento el 1,3% de la poblacion parental, y despues de ser cultivadas durante siete 15 dfas las celulas SP seleccionadas disminuyeron de 98.5% a 10,1% (Figura 4A, panel superior derecho). Estos datos demuestran una caractenstica definida de CSC, la capacidad de dividirse asimetricamente y de auto-renovarse.

Se accedio a la CI50 del compuesto 10-2 frente a la poblacion lateral de Hoechst en ensayos de formacion de colonias y se comparo con la CI50 frente a la poblacion no lateral. Como se muestra en la Fig. 4B, la poblacion lateral es 2 veces mas sensible que la poblacion no lateral al compuesto 10-2. Ademas, la poblacion lateral es mas 20 resistente que la poblacion no lateral a doxorrubicina. Estos datos sugieren que el compuesto 10-2 mata a las celulas madre del cancer

Las celulas de la poblacion lateral de Hoechst se trataron con el compuesto 10-2 y se accedio al modo de la muerte celular mediante tincion para Anexina V (un marcador temprano para la apoptosis). Como se muestra en la Fig. 4C,

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las celulas moribundas son positivas para Anexina V, lo que demuestra que el compuesto 10-2 es apoptotico para las celulas madre del cancer.

Una de las caractensticas distintivas de las celulas madre del cancer es su capacidad de auto-renovacion. Un metodo fiable para medir la capacidad de auto-renovacion de poblaciones celulares es la capacidad de ser cultivadas como esferas en ausencia de suero o adherencia. Para determinar el efecto del compuesto 10-2 en la auto-renovacion de las CSC, las CSC se aislaron de celulas de cancer de cabeza y cuello humanas FaDu por FACS usando el marcador de superficie de CSC, CD44. Las celulas se cultivaron en ausencia de adherencia y suero durante 5 dfas para formar esferas primarias. Las esferas primarias se disociaron en Accumax en celulas individuales, y se cultivaron como anteriormente durante 72 horas antes de la adicion del compuesto 10-2 o el inhibidor de tirosina quinasa (TKI) control. Despues de cinco dfas de tratamiento, se capturaron imagenes de esferas representativas antes y despues de la adicion de azul de tripan para identificar las celulas muertas (Figura 5A). El crecimiento de las esferas se puntuo contando el numero de esferas que posefan >50 celulas. El % de esferogenesis se calculo ajustando la esferogenesis de las celulas tratadas con DMSO como 100% (Figura 5B). Los resultados mostraron que el compuesto 10-2, pero no el TKI control, inhibe la auto-renovacion de las CSC.

Ademas, tambien ensayamos si el compuesto 10-2 puede tomar como diana celulas madre del cancer in vivo. Se obtuvieron ratones hembra nu/nu atfmicos de seis semanas de edad de Charles River Labs (Wilmington, MA). Se inyectaron a los ratones subcutaneamente en el flanco 6 x 106 celulas de cancer FaDu en 0,2 mL de DMEM sin suero. Despues de que los xenoinjertos alcanzasen un tamano de ~200 mm3, se administro a los animales que portaban los tumores del xenoinjerto FaDu diariamente bien vehnculo, carboplatino (30 mg/kg), o el compuesto 10-2 (100 mg/kg) por po durante cuatro dfas antes del sacrificio. Despues, los tumores se recogieron para las celulas FaDu. Se obtuvieron suspensiones de celulas individuales despues del sacrificio de los animales y la retirada esteril de los tumores. Brevemente, los tumores se cortaron con escalpelos esteriles en trozos de 0,1 mm3 antes de ser digeridos en 1 mg/mL colagenasa/HBSS durante 15-30 minutos con agitacion constante. Despues de paso a traves de un filtro de malla de 40 |im, se retiraron los RBC, las celulas muertas y los restos celulares extendiendo la suspension celular en capa sobre 1 mL de Histopaque y recogiendo la capa de interfase despues de una centrifugacion a 1.440 x g durante 30 minutos. Despues, se contaron las celulas vivas y se usaron para medir su capacidad para formar esferas. Las celulas se distribuyeron en placas de 96 pocillos de adherencia ultra baja a una densidad de 100 celulas por pocillo en medio de celulas madre del cancer (DMEM/F12, suplemento Neurobasal B27, 20 ng/mL EGF, 10 ng/mL FGF, 4 |ig/mL insulina y 0,4% BSA). Se anadio medio fresco cada tres dfas y se determino la formacion de esferas despues de 10-14 dfas en cultivo. Se puntuaron las esferas con >50 celulas. Cuando finalizo el experimento, se anadio azul de tripan para identificar las celulas muertas. Como se muestra en la Figura 6, las quimioterapias estandar de carboplatino no tomaron como diana las celulas madre del cancer, segun se evidencio por una esferogenesis inalterada. Por el contrario, incluso con solo un tratamiento de cuatro dfas, el compuesto 10-2 disminuyo significativamente las celulas madre del cancer, segun se evidencio por la esferogenesis disminuida.

Como el compuesto 10-2 es un inhibidor de quinasa, la capacidad del compuesto 10-2 para inducir apoptosis e inhibir la auto-renovacion en celulas madre del cancer sugiere que las quinasas inhibidas por el compuesto 10-2 son importantes para las CSC (CSCPK).

Ejemplo 11

Eficacia anti-tumoral in vivo

La actividad anti-tumoral del compuesto 10-2 [como se muestra en el Ejemplo 3] se ensayo en un modelo de xenoinjerto en raton. Se proporciono a ratones macho inmunosuprimidos con tumores de cancer de prostata humanos PC3 subcutaneos establecidos el compuesto 10-2 (80 mg/kg), o control de vehnculo intraperitoneal (ip.). Los ratones recibieron un total de tres tratamientos (como se indica con flechas en la Figura 7), y se analizo el volumen tumoral medio (MTV). Los tumores de control de vehnculo crecieron de manera comparable a los de estudios previos realizados con el modelo PC3. Como se muestra en la Figura 7, el tratamiento con el compuesto 10-2 causo una supresion significativa del crecimiento tumoral con una inhibicion del crecimiento tumoral (TGI) de 62,5% (p = 0,02 <0,05).

De manera similar, se ensayo la actividad anti-tumoral del compuesto 10-2 [como se muestra en el Ejemplo 3] en un modelo de xenoinjerto de HepG2 de cancer de hngado humano (Figura 8), modelo de xenoinjerto de FaDu de cancer de cabeza y cuello humano (Figura 9), y modelo de xenoinjerto de MKN45 de cancer gastrico humano (Figura 10). El compuesto 10-2 se administro oralmente diariamente a 100 mg/kg en estos tres modelos durante un periodo de tiempo como se indica en las figuras. Nuestros datos muestran que el compuesto 10-2 tambien inhibe de forma potente el crecimiento tumoral en estos dos modelos de xenoinjerto.

Referencias

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Claims

REIVINDICACIONES

5

1. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:

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y un enantiomero, diastereomero, tautomero, o sal o solvato farmaceuticamente aceptable de este.
2. Un compuesto segun la reivindicacion 1, en el que el compuesto es

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o un enantiomero, diastereomero, tautomero, o sal o solvato farmaceuticamente aceptable de este.
3. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:

5

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y un enantiomero, diastereomero, tautomero, o sal o solvato farmaceuticamente aceptable de este.
4. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 o 3 y un excipiente, vehnculo, o diluyente farmaceuticamente aceptable.

10 5. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 4, en la que el excipiente, vehnculo, o diluyente

farmaceuticamente aceptable es una mezcla de disolucion o una mezcla de suspension que comprende, en peso, aproximadamente 12,5% de dimetilacetamida, aproximadamente 52,5% de PEG400, y aproximadamente 35% de vitamina E al 20%.
6. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 4, que comprende ademas al menos un otro agente de terapia 15 anti-cancer.
7. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 6, en la que dicho agente de terapia anti-cancer es al menos un agente seleccionado del grupo que consiste en agentes de radioterapia (XRT), agentes citotoxicos, agentes dirigidos, y agentes adyuvantes.
8. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 6 o 7, en la que dicho agente de terapia anticancer se 20 selecciona del grupo que consiste en gemcitabina, erlotinib, paclitaxel, docetaxel, carboplatino, cisplatino, 5-

fluorouracilo, doxorrubicina, sorafenib, imatinib, bevacizumab, cetuximab, y trastuzumab.