ES2537190T3 - Piridazinonas, procedimiento de preparación y procedimientos de utilización de las mismas - Google Patents

Abstract

Compuesto seleccionado de la fórmula I:**Fórmula** y sus estereoisómeros, tautómeros o sales farmacéuticamente aceptables, en la que: R1 se selecciona de entre:**Fórmula** en las que la línea ondulada indica el sitio de unión; R4 se selecciona de entre OH, CN, NRbRc, cicloalquilo C3-C6 sustituido opcionalmente con alquilo C1-C6 o haloalquilo C1-C4 y alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con OH u O-alquilo C1-C4; R2 es H, CH3 o CF3; el anillo B se selecciona de entre fenilo, heteroarilo de 5-6 miembros que presenta por lo menos un átomo anular de nitrógeno y heterociclilo de 8 a 11 miembros que presenta por lo menos un átomo anular de nitrógeno; R3 se selecciona independientemente de entre H, -Ra, -ORb, -SRb, -NRbRc, halo, ciano, nitro, -CORb, -CO2Rb, -CONRbRc, -OCORb, -OCO2Ra, -OCONRbRc, -NRcCORb, -NRcCO2Ra, -NRcCONRbRc, -CO2Rb, -CONRbRc, -NRcCORb, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRbRc y -NRcSO2Ra; o dos grupos R3 adyacentes se toman opcionalmente conjuntamente para formar un anillo de 5-6 miembros que presenta 0 a 2 heteroátomos seleccionados de entre O, S o N, en el que dicho anillo de 5-6 miembros se fusiona al anillo B; Ra es un grupo C1-C6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo, en el que cada miembro de Ra se sustituye opcionalmente con uno a tres grupos R11; Rb es H, un grupo C1-C6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo, en el que cada miembro de Rb excepto H se sustituye opcionalmente con uno a tres grupos R11; Rc es H o alquilo C1-C4 sustituido opcionalmente con uno a tres grupos R11; o Rb y Rc, y el nitrógeno al que se encuentran unidos, forman un grupo heterocicloalquilo sustituido opcionalmente; cada R11 se selecciona independientemente de entre un grupo C1-C4 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, aril-alquilo C1-C4, heteroaril-alquilo C1-C4, cicloalquil-alquilo C1-C4, heterocicloalquil-alquilo C1-C4, haloalquilo C1-C4, -O-alquilo C1-C4, -O-heterocicloalquilo, -O-alquil C1-C4-fenilo, -alquilo C1-C4-OH, -O-haloalquilo C1-C4, -OH, -NH2, -alquilo C1-C4-NH2, -NH(alquilo C1-C4), -N(alquilo C1-C4)(alquilo C1-C4), -N(alquilo C1-C4)(alquil C1-C4-fenilo), -NH(alquil C1-C4-fenilo), ciano, nitro, oxo, -CO2H, -C(O)O-alquilo C1-C4, -CON(alquilo C1-C4)(alquilo C1-C4), -CONH(alquilo C1-C4), -CONH2, -NHC(O)(alquilo C1-C4), -NHC(O)(fenilo), -N(alquilo C1-C4)C(O)(alquilo C1- C4), -N(alquilo C1-C4)C(O)(fenilo), -C(O)alquilo C1-C4, -C(O)fenilo C1-C4, -C(O)haloalquilo C1-C4, -OC(O)alquilo C1- C4, -SO2(alquilo C1-C4), -SO2(fenilo), -SO2(haloalquilo C1-C4), -SO2NH2, -SO2NH(alquilo C1-C4), -SO2NH(fenilo), -NHSO2(alquilo C1-C4), -NHSO2(fenilo) y -NHSO2(haloalquilo C1-C4); R6 es H, CH3, F, Cl, CN, OCH3, OH o metilo sustituido con OH, OCH3 o uno o más grupos halo; R7 es H, CH3, F, Cl, CN u OCH3; R8 es H, CH3, CF3, F, Cl, CN u OCH3; cada R9 es independientemente alquilo C1-C3; y cada R10 es independientemente H o CH3.

Description

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Sumario de la invención

La invención se refiere de manera general a compuestos de fórmula I con actividad moduladora de la tirosina cinasa de Bruton (Btk).

Los compuestos de fórmula I presentan la estructura:

imagen2

10 incluyendo sus estereoisómeros, tautómeros o sales farmacéuticamente aceptables. Los diversos sustituyentes se definen a continuación en la presente memoria.

Un aspecto de la invención es una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I y un portador, deslizante, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede

15 comprender además un segundo agente terapéutico.

Otro aspecto de la invención es un procedimiento para preparar una composición farmacéutica, que comprende combinar un compuesto de fórmula I con un portador farmacéuticamente aceptable.

20 La invención incluye la utilización de compuestos de fórmula I en el tratamiento de una enfermedad o trastorno seleccionado de entre trastornos inmunológicos, cáncer, enfermedades cardiovasculares, infección vírica, inflamación, trastornos del metabolismo/función endocrina y trastornos neurológicos, y mediados por la tirosina cinasa de Bruton.

25 La invención incluye un kit para el tratamiento de una condición mediada por la tirosina cinasa de Bruton, que comprende: a) una primera composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I, y b) instrucciones de utilización.

La invención incluye un compuesto de fórmula I para la utilización a modo de medicamento y para la utilización en el

30 tratamiento de una enfermedad o trastorno seleccionado de entre trastornos inmunológicos, cáncer, enfermedades cardiovasculares, infecciones víricas, inflamación, trastornos del metabolismo/función endocrina y trastornos neurológicos, y mediados por la tirosina cinasa de Bruton.

La invención incluye la utilización de un compuesto de fórmula I en la preparación de un medicamento destinado al

35 tratamiento de trastornos inmunológicos, cáncer, enfermedades cardiovasculares, infecciones víricas, inflamación, trastornos del metabolismo/función endocrina y trastornos neurológicos, y en la que el medicamento media en la tirosina cinasa de Bruton.

La invención incluye métodos de preparación de un compuesto de fórmula I. 40

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 muestra una ruta sintética ejemplificativa para preparar compuestos de fórmula I 8 que implica una reacción de Buchwald para acoplar una pirolona bicíclica 4 con un metil-o hidroximetil-benceno 5, rindiendo el 45 intermediario 6, seguido de reacciones de Suzuki sucesivas para preparar un boronato 7 y acoplarlo con una bromopiridona o bromo-pirazinona 2, o mediante una única reacción de Suzuki para acoplar 6 con un piridona-boronato o pirazinona-boronato 3. La bromo-piridona o bromo-pirazinona 2 puede prepararse mediante una reacción de Buchwald de una dibromo-piridona o dibromo-pirazinona con una amina heterocíclica o un compuesto de anilina. Los piridona-boronatos o pirazinona-boronatos 3 pueden prepararse mediante una reacción de Suzuki de 2 con un

50 diboronato.

La figura 2 muestra una ruta sintética ejemplificativa para preparar compuestos de fórmula I 8, que implica ensamblar la pirolona bicíclica en un derivado bromoanilina, proporcionando un bromuro que puede utilizarse en las funciones indicadas en la figura 1.

imagen3

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Compuestos piridazinona

La presente invención proporciona compuestos piridazinona de fórmula I y formulaciones farmacéuticas de los mismos, los cuales resultan potencialmente útiles en el tratamiento de enfermedades, condiciones y/o trastornos moduladores por la cinasa Btk.

Los compuestos de fórmula I presentan la estructura:

imagen10

10

incluyendo estereoisómeros, tautómeros o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que:

15

R1 se selecciona de entre:

imagen11

en donde la línea ondulada indica el sitio de unión,

20 R4 se selecciona de entre OH, CN, NRbRc, cicloalquilo C3-C6 sustituido opcionalmente con alquilo C1-C6 o haloalquilo C1-C4, y alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con OH o O-alquilo C1-C4,

R2 es H, CH3o CF3,

25 el anillo B se selecciona de entre fenilo, heteroarilo de 5 o 6 elementos que presenta por lo menos un átomo anular de nitrógeno, y heterociclilo de 8 a 11 elementos que presenta por lo menos un átomo anular de nitrógeno,

R3 se selecciona independientemente de entre H, -Ra, -ORb, -SRb, -NRbRc, halo, ciano, nitro, -CORb, -CO2Rb, -CONRbRc, -OCORb, -OCO2Ra, -OCONRbRc, -NRcCORb, -NRcCO2Ra, -NRcCONRbRc, -CO2Rb, -CONRbRc, -NRcCORb,

30 -SORa, -SO2Ra, -SO2NRbRc y -NRcSO2Ra, o dos grupos R3 contiguos opcionalmente forman conjuntamente un anillo de 5 o 6 elementos que presenta 0 a 2 heteroátomos seleccionados de entre O, S y N, en el que dicho anillo de 5 o 6 elementos se fusiona con el anillo B,

Ra es alquilo C1-C6, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo, en el que cada elemento de Ra se sustituye 35 opcionalmente con uno a tres grupos R11 ,

Rb es H, alquilo C1-C6, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo, en el que cada elemento de Rb excepto H se sustituye opcionalmente con uno a tres grupos R11 ,

40 Rc es H o alquilo C1-C4 sustituido opcionalmente con uno o tres grupos R11, o Rb y Rc, y el nitrógeno al que se unen, forman un grupo heterocicloalquilo sustituido opcionalmente,

cada R11 se selecciona independientemente de entre alquilo C1-C4, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, aril-alquilo C1-C4, heteroaril-alquilo C1-C4, cicloalquil-alquilo C1-C4, heterocicloalquil-alquilo C1-C4, haloalquilo C1-C4, 45 O-alquilo C1-C4, -O-heterocicloalquilo, -O-alquil C1-C4-fenilo, -alquil C1-C4-OH, -O-haloalquilo C1-C4, halo, -OH, -NH2, -alquil C1-C4-NH2, -NH(alquilo C1-C4), -N(alquil C1-C4)(alquilo C1-C4), -N(alquil C1-C4)(alquil C1-C4-fenilo), -NH(alquil C1-C4-fenilo), ciano, nitro, oxo, -CO2H, -C(O)O-alquilo C1-C4, -CON(alquilo C1-C4)(alquilo C1-C4), -CONH(alquilo C1-C4), -CONH2, -NHC(O)(alquilo C1-C4), -NHC(O)(fenilo), -N(alquil C1-C4)C(O)(alquilo C1-C4), -N(alquil C1C4)C(O)(fenilo), -C(O)alquilo C1-C4, -C(O)alquil C1-C4-fenilo, -C(O)haloalquilo C1-C4, -OC(O)alquilo C1-C4, 50 SO2(alquilo C1-C4), -SO2(fenilo), -SO2(haloalquilo C1-C4), -SO2NH2, -SO2NH(alquilo C1-C4), -SO2NH(fenilo),

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NHSO2(alquilo C1-C4), -NHSO2(fenilo) y -NHSO2(haloalquilo C1-C4),

R6 es H, CH3, F, Cl, CN, OCH3, OH o metilo sustituido con OH, OCH3 o uno o más grupos halo,

5 R7 es H, CH3, F, Cl, CN o OCH3, R8 es H, CH3, CF3, F, Cl, CN o OCH3, cada R9 es, independientemente, alquilo C1-C3, y cada R10 es, independientemente, H o CH3.

10 Entre las formas de realización ejemplificativas de compuestos de fórmula I se incluyen compuestos en los que R2 es H o CH3.

Entre las formas de realización ejemplificativas de compuestos de fórmula I se incluyen compuestos en los que R3 es: 15

imagen12

en donde la línea ondulada indica el sitio de unión.

20 Entre las formas de realización ejemplificativas de compuestos de fórmula I se incluyen compuestos en los que R3 se selecciona de entre ciclopropilo, azetidinilo, azetidinilmetilo, piperidinilo, oxopiperidinilo, piperazinilo y oxopiperazinilo, sustituidos opcionalmente con F, CH3 o COCH3.

25 Entre las formas de realización ejemplificativas de compuestos de fórmula I se incluyen compuestos en los que R4 es H, t-butilo, N-pirrolidinilo, N-piperidinilo, N-azepanilo, 2-hidroxi-2-metilpropilo, prop-1-en-2-ilo, -N(CH3)Et, i-propilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 3-metilbután-2-ilo, -N(CH3)(i-Pr) o -NH(ciclopropilo).

Entre las formas de realización ejemplificativas de compuestos de fórmula I se incluyen compuestos en los que R6 es 30 H, CH3, F o CH2OH.

Entre las formas de realización ejemplificativas de compuestos de fórmula I se incluyen compuestos en los que R7 es H o F.

35 Entre las formas de realización ejemplificativas de compuestos de fórmula I se incluyen compuestos en los que B es pirazolo[1,5-a]pirazín-2-ilo, pirazol-3-ilo, pirimidín-4-ilo o piridín-2-ilo.

Entre las formas de realización ejemplificativas de compuestos de fórmula I se incluyen compuestos en los que:

imagen13

se selecciona de entre las estructuras:

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imagen15

en las que la línea ondulada indica el sitio de unión.

Entre las formas de realización ejemplificativas de compuestos de fórmula I se incluyen compuestos que presentan la estructura de fórmula Ib:

imagen16

Entre las formas de realización ejemplificativas de compuestos de fórmula I se incluyen compuestos que presentan la estructura de fórmula Ic:

5

10

15

20

25

30

35

40

45

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Entre las formas de realización ejemplificativas de compuestos de fórmula I se incluyen los de las Tablas 1 y 2.

Los compuestos de fórmula I de la invención pueden contener centros asimétricos o quirales y por lo tanto pueden existir en diferentes formas estereoisoméricas. Se pretende que todas las formas estereoisoméricas de los compuestos de la invención, incluyendo, aunque sin limitación, diastereómeros, enantiómeros y atropisómeros, así como mezclas de los mismos tales como mezclas racémicas, formen parte de la presente invención.

Además, la presente invención comprende todos los diastereómeros, incluyendo los isómeros cis-trans (geométricos) y conformacionales. Por ejemplo, en el caso de que un compuesto de fórmula I incorpore un doble enlace o un anillo fusionado, las formas cis-y trans-, así como las mezclas de las mismas, se encuentran comprendidas dentro del alcance de la invención.

En las estructuras mostradas en la presente memoria, en el caso de que no se especifique la estereoquímica de cualquier átomo quiral particular, se encuentran contemplados e incluidos todos los estereoisómeros como compuestos de la invención. En el caso de que se especifique la estereoquímica con una cuña negra o línea discontinua, representando una configuración particular, ese estereoisómero se considera especificado y definido de esta manera.

Los compuestos de la presente invención pueden existir en formas tanto no solvatada como solvatada, con solventes farmacéuticamente aceptables tales como agua, etanol y similares, y se pretende que la invención comprenda tanto las formas solvatadas como las no solvatadas.

Los compuestos del a presente invención también pueden existir en diferentes formas tautoméricas y la totalidad de dichas formas se encuentra comprendida dentro del alcance de la invención. El término "tautómero" o "forma tautomérica" se refiere a isómeros estructurales de diferentes energías que son interconvertibles con una barrera energética baja. Por ejemplo, los tautómeros de protones (también conocidos como tautómeros prototrópicos) incluyen las interconversiones mediante migración de un protón, tales como las isomerizaciones ceto-enol e iminaenamina. Entre los tautómeros de valencia se incluyen las interconversiones mediante reorganización de algunos de los electrones de enlace.

Evaluación biológica

Las eficacias relativas de los compuestos de fórmula I como inhibidores de una actividad enzimática (u otra actividad biológica) pueden establecerse mediante la determinación de las concentraciones a las que cada compuesto inhibe la actividad en un grado predefinido, comparando seguidamente los resultados. Típicamente, la determinación preferente es la concentración que inhibe 50% de la actividad en un ensayo bioquímico, es decir, la concentración inhibidora al 50%, o "IC50". La determinación de los valores de IC50 puede llevarse a cabo utilizando técnicas convencionales conocidas de la técnica. En general, puede determinarse una IC50 mediante la medición de la actividad de un enzima dado en presencia de un intervalo de concentraciones del inhibidor a estudio. Los valores obtenidos experimentalmente de actividad enzimática seguidamente se representan en un gráfico frente a las concentraciones de inhibidor utilizadas. La concentración del inhibidor que muestra una actividad enzimática del 50% (en comparación con la actividad en ausencia de ningún inhibidor) se considera que es el valor de IC50. Análogamente, pueden definirse otras concentraciones inhibidoras mediante determinados apropiadas de la actividad. Por ejemplo, en algunos contextos puede resultar deseable establecer una concentración inhibidora al 90%, es decir, IC90, etc.

Los compuestos de fórmula I se sometieron a ensayo mediante un ensayo bioquímico estándar de cinasa Btk (Ejemplo 901).

Un procedimiento general para un ensayo celular estándar de cinasa Btk que puede utilizarse para someter a ensayo compuestos de fórmula I es un ensayo de Btk de células Ramos (Ejemplos 902).

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Puede utilizarse un ensayo celular estándar de proliferación de células B para someter a ensayo compuestos de fórmula I con células B que han sido purificadas a partir de bazos de ratones Balb/c (Ejemplo 903).

Puede utilizarse un ensayo estándar de proliferación de células T para someter a ensayo compuestos de fórmula I 5 con células T purificadas a partir de bazos de ratones Balb/c (Ejemplo 904).

Puede llevarse a cabo un ensayo de inhibición de CD86 con compuestos de fórmula I para la inhibición de la actividad de las células B utilizando esplenocitos de ratón totales purificados a partir de bazos de ratones Balb/c de 8 a 16 semanas de edad (Ejemplo 905).

10 Puede llevarse a cabo un ensayo de supervivencia celular de células B-ALL con compuestos de fórmula I con el fin de medir el número de células B-ALL viables en cultivo (Ejemplo 906).

Puede llevarse a cabo un ensayo de sangre completa de CD69 con compuestos de fórmula I con el fin de determinar

15 la capacidad de los compuestos de inhibir la producción de CD69 por parte de los linfocitos B en sangre completa humana activada mediante entrecruzamiento de IgM superficial con F(ab')2 de cabra anti-IgM humana (Ejemplo 907).

Se prepararon compuestos de fórmula I ejemplificativos de las Tablas 1 y 2, se caracterizaron y se sometieron a

20 ensayo para inhibición de la Btk siguiendo los métodos de la presente invención y presentaban las estructuras y nombres correspondientes siguientes (ChemDraw Ultra, versión 9.0.1 y ChemBioDraw, versión 11.0, CambridgeSoft Corp., Cambridge, MA). En el caso de que se encuentre asociado más de un nombre con un compuesto de fórmula I

o intermediario, la estructura química definirá el compuesto.

25 Tabla I

Nº

Estructura Nombre M+H m/z IC50 de Btk (µmoles)

101

imagen18 6-(3-{2-terc-butil-6-oxo4H,5H,6H-tieno[2,3c]pirrol-5-il}-2metilfenil)4-({5-metil4H,5H,6H,7Hpirazolo[1,5-a]pirazín-2il}amino)-2,3dihidropiridazín-3-ona 530,2 =.==4

108

imagen19 (3-(3-(2-terc-butil-6oxo-4H-tieno[2,3c]pirrol-5(6H)-il)-2metilfenil)-5-(5-metil4,5,6,7tetrahidropirazolo[1,5a]pirazín-2-ilamino)-6oxopiridazín-1(6H)il)metilfosfato sódico 684,2

109

imagen20 2-terc-butil-5-(3-(5-(1metil-1H-pirazol-3ilamino)-6-oxo-1,6dihidro-piridazín-3-il)-2metilfenil)-4Hpirrolo[3,4-d]tiazol6(5H)-ona 476,2

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2-terc-butil-5-(3-(5-(1,5

dimetil-1H-pirazol-3

ilamino)-6-oxo-1,6

110

dihidro-piridazín-3-il)-2 490,1

metilfenil)-4H

pirrolo[3,4-d]tiazol

6(5H)-ona

2-terc-butil-5-(3-(5-(5-

ciclopropil-1H-pirazol-3

ilamino)-6-oxo-1,6

111

dihidro-piridazín-3-il)-2 501,7

metilfenil)-4H

pirrolo[3,4-d]tiazol

6(5H)-ona

Los ejemplos en la Tabla 2 se prepararon utilizando procedimientos similares a los utilizados para los Ejemplos 101 y 108 a 126.

Tabla 2

Nº

Estructura Nombre M+H m/z IC50 de Btk (µmoles)

112

imagen21 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-metilfenil)-4-[(1,5dimetil-1H-pirazol-3il)amino]-2,3dihidropiridazín-3ona 488,58 0,003

113

imagen22 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-metilfenil)-4-[(5ciclopropil-1Hpirazol-3-il)amino]2,3-dihidropiridazín3-ona 500,57 0,004

114

imagen23 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}4-fluroofenil)-4-[(1,5dimetil-1H-pirrol-3il)amino]-2,3dihidropiridazín-3ona 491,3 0,009

115

imagen24 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-metilfenil)-4-[(5metil-1,2-oxazol-3il)amino]-2,3dihidropiridazín-3ona 476,1 0.018

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6-(6-{2-terc-butil-6

oxo-4H,5H,6H

tieno[2,3-c]pirrol-5-il)

116

5-fluoropiridín-2-il)-4[(5-ciclopropil-1H 0,035

pirazol-3-il)amino]

2,3-dihidropiridazín

3-ona

6-(6-{2-terc-butil-6

oxo-4H,5H,6H

tieno[2,3-c]pirrol-5-il}

117

5-fluoropiridín-2-il)-4[(1,5-dimetil-1H 0,045

pirazol-3-il)amino]

2,3-dihidropiridazín

3-ona

118

imagen25 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-metilfenil)-4{4H,5H,6H,7Hpirido[4,3d][1,3]tiazol-2ilamino}-2,3dihidropiridazín-3ona 0,065

6-(3-{2-terc-butil-6

oxo-4H,5H,6H

tieno[2,3-c]pirrol-5-il}

4-({5-[(3,3

119

difluoroazetidín-1 580,17 0,005

il)metil]-1-metil-1H

pirazol-3-il}amino)

2,3-dihidropiridazín

3-ona

6-(3-{2-terc-butil-6

oxo-4H,5H,6H

tieno[2,3-c]pirrol-5-il}

2-(hidroximetil)fenil)

120

2-metil-4-({5-metil4H,5H,6H,7H 560,2 0,055

pirazolo[1,5

a]pirazín-2-il}amino)

2,3-dihidropiridazín

3-ona

6-(3-{2-terc-butil-6

oxo-4H,5H,6H

tieno[2,3-c]pirrol-5-il}

2-(hidroximetil)fenil)

121

4-({5-metil4H,5H,6H,7H 546,3 0/048

pirazolo[1,5

a]pirazín-2-il}amino)

2,3-dihidropiridazín

3-ona

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6-(3-{2-terc-butil-6

oxo-4H,5H,6H

tieno[2,3-c]pirrol-5-il}

5-fluoro-2-metilfenil)

122

4-({5-metil4H,5H,6H,7H 548

pirazolo[1,5

a]pirazín-2-il}amino)

2,3-dihidropiridazín

3-ona

123

imagen26 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-metilfenil)-4-({5-[2(dimetilamino)etil}4H,5H,6H,7Hpirazolo[1,5a]pirazín-2-il}amino)2,3-dihidropiridazín3-ona 587,3

6-(3-{2-terc-butil-6

oxo-4H,5H,6H

tieno[2,3-c]pirrol-5-il}

5-fluoro-2-metilfenil)

124

2-meti-4-({5-metil4H,5H,6H,7H 562

pirazolo[1,5

a]pirazín-2-il}amino)

2,3-dihidropiridazín

3-ona

125

imagen27 2-{[6-(3-{2-terc-butil-6-oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-metilfenil)-2-metil3-oxo-2,3dihidropiridazín-4il]amino}-4H,6H,7Hpirazolo[3,2c][1,4]tiazín-5,5diona 579,22

6-(3-{2-terc-butil-6

oxo-4H,5H,6H

tieno[2,3-c]pirrol-5-il}

2-(hidroximetil)-4

metilfenil)-2-metil-4

126

({5-metil 574,3

4H,5H,6H,7H

pirazolo[1,5

a]pirazín-2-il}amino)

2,3-dihidropiridazín

3-ona

127

imagen28 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-(hidroximetil)fenil)-4-[(5-ciclopropil-1Hpirazol-3-il)amino]-2metil-2,3dihidropiridazín-3ona 531,3

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128

imagen29 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-(2-hidroxietil)fenil)4-({5-acetil4H,5H,6H,7Hpirazolo[1,5a]pirazín-2-il}amino)2-metil-2,3dihidropiridazín-3ona 602,3

6-(3-{2-terc-butil-6

oxo-4H,5H,6H

tieno[2,3-c]pirrol-5-il}

4-fluoro-2

(hidroximetil)fenil)-2

129

metil-4-({5-metil 578,1

4H,5H,6H,7H

pirazolo[1,5

a]pirazín-2-il}amino)

2,3-dihidropiridazín

3-ona

130

imagen30 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-(hidroximetil)-4metilfenil)-4-[(1,5dimetil-1H-pirazol-3il)amino]-2-metil-2,3dihidropiridazín-3ona 533,3

131

imagen31 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-(hidroximetil)fenil)-4-[(1,5-dimetil-1Hpirazol-3-il)amino]-2metil-2,3dihidropiridazín-3ona 519,2

132

imagen32 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-(hidroximetil)fenil)4-({5-acetil4H,5H,6H,7Hpirazolo[1,5a]pirazín-2-il}amino)2-metil-2,3dihidropiridazín-3ona 588,2

133

imagen33 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-(hidroximetil)fenil)4-({5-ciclopropil4H,5H,6H,7Hpirazolo[1,5a]pirazín-2-il}amino)2-metil-2,3dihidropiridazín-3ona 586,1

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134

imagen34 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-(hidroximetil)fenil)2-metil-4{4H,6H,7H,8Hpirazolo[3,2c][1,4]oxazepín-2ilamino}-2,3dihidropiridazín-3ona 561,2

6-(3-{2-terc-butil-6

oxo-4H,5H,6H

tieno[2,3-c]pirrol-5-il}

2-(hidroximetil)fenil)

135

2-metil-4-{[5-(1 599,2

metilpiperidín-4

il)piridín-2-il]amino}

2,3-dihidropiridazín

3-ona

136

imagen35 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-(hidroximetil)fenil)2-metil-4-(pirimidín-4ilamino)-2,3dihidropiridazín-3ona 503

6-(3-{2-terc-butil-6

oxo-4H,5H,6H

tieno[2,3-c]pirrol-5-il}

2-(hidroximetil)fenil)

137

2-metil-4-{[5-(propán-2-il)-4H,5H,6H,7H 588,3

pirazolo[1,5

a]pirazín-2-il]amino}

2,3-dihidropiridazín

3-ona

138

imagen36 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-(hidroximetil)fenil)4-{[5-(4acetilpiperazín-1il)piridín-2-il]amino}2-metil-2,3dihidropiridazín-3ona 628,3

139

imagen37 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-(hidroximetil)fenil)2-metil-4-(piridín-2ilamino)-2,3dihidropiridazín-3ona 502,5

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140

imagen38 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}4-fluoro-2(hidroximetil)fenil)-4[(1-etil-1H-pirazol-3il)amino]-2-metil-2,3dihidropiridazín-3ona 537,2

6-(3-{2-terc-butil-6

oxo-4H,5H,6H

tieno[2,3-c]pirrol-5-il}

141

2-(hidroximetil)fenil)4-[(1-etil-1H-pirazol 519,2

3-il)amino]-2-metil

2,3-dihidropiridazín

3-ona

142

imagen39 6-(3-{2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}4-fluoro-2(hidroximetil)fenil)-4[(5-ciclopropil-1Hpirazol-3-il)amino]-2metil-2,3dihidropiridazín-3ona 549,2

143

imagen40 6-(3-[2-terc-butil-6oxo-4H,5H,6Htieno[2,3-c]pirrol-5-il}2-(hidroximetil)fenil)4-{[5-(1,4-dimetil-3oxopiperazín-2il)piridín-2-il]amino}2-metil-2,3dihidropiridazín-3ona 628,2

6-(3-{2-terc-butil-6

oxo-4H,5H,6H

tieno[2,3-c]pirrol-5-il}

2-(hidroximetil)fenil)

144

2-metil-4-{[5-(2 599,2

oxopiperidín-1

il)piridín-2-il]amino}

2,3-dihidropiridazín

3-ona

Administración de compuestos de fórmula I

Los compuestos de la invención pueden administrarse mediante cualquier vía adecuada a la afección que debe

5 tratarse. Entre las vías adecuadas se incluyen las vías oral, parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intradérmica, intratecal y epidural), transdérmica, rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal, intraperitoneal, intrapulmonar e intranasal. Para el tratamiento inmunosupresor local, los compuestos pueden administrarse mediante administración intralesional, incluyendo la perfusión o puesta en contacto de otra manera del injerto con el inhibidor antes del trasplante. Se apreciará que la vía preferida puede

10 variar según, por ejemplo, la afección del receptor. En el caso de que el compuesto se administre por vía oral, puede formularse en forma de píldora, cápsula, comprimido, etc., con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. En el caso de que el compuesto se administre por vía parenteral, puede formularse con un vehículo parenteral farmacéuticamente aceptable y en una forma inyectable de dosis unitaria, tal como se detalla a continuación.

15 Una dosis para tratar pacientes humanos puede encontrarse comprendida en el intervalo de entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 1.000 mg de compuesto de fórmula I. Una dosis típica puede ser de entre aproximadamente 100 mg y aproximadamente 300 mg del compuesto. Una dosis puede administrarse una vez al día

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Procedimiento general A: acoplamiento de Suzuki

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La reacción de acoplamiento de tipo Suzuki resulta útil para formar enlaces carbono-carbono para unir los anillos de los compuestos de fórmula I e intermediarios tales como A-3 (Suzuki, Pure Appl. Chem. 63:419-422, 1991; Miyaura y Suzuki, Chem. Reviews 95(7):2457-2483, 1979; Suzuki, J. Organometal. Chem. 576:147-168, 1999). El acoplamiento de Suzuki es una reacción de acoplamiento cruzado mediada por paladio de un haluro de arilo, tal como B-2 o B-5, con un ácido borónico tal como A-1 o A-2. Por ejemplo, B-2 puede combinarse con aproximadamente 1,5 equivalentes de 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) y disolverse en aproximadamente 3 equivalentes de carbonato sódico en forma de una solución 1 molar en agua y un volumen igual de acetonitrilo. Se añade la cantidad catalítica, o una cantidad superior, de un reactivo de paladio de valencia baja, tal como dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II). En algunos casos se utiliza acetato de potasio en lugar de carbonato sódico para ajustar el pH de la capa acuosa. A continuación, la reacción se calienta a aproximadamente 140ºC-150ºC bajo presión en un reactor de microondas, tal como el Biotage Optimizer (Biotage, Inc.) durante 10 a 30 minutos. Se extrae el contenido con acetato de etilo u otro solvente orgánico. Tras la evaporación de la capa orgánica, puede purificarse el éster de boro A-1 en sílice o mediante HPLC de fase inversa. Los sustituyentes Y1, Y2, R5 y R6 son los definidos, o formas o precursores protegidos de los mismos. De manera similar, el intermediario de bromo B-5 puede boronilarse, proporcionando A-2. Los sustituyentes Y1, Y2, R1, R2, R3, R4, Z1, Z2, Z3, Z4 y X son los definidos, o formas o precursores protegidos de los mismos.

El acoplamiento de Suzuki de B-2 y A-2, o de A-1 y B-5, proporciona compuesto de fórmula I o intermediario A-3. El éster (o ácido) borónico (1,5 eq.) A-1 o A-2 y un catalizador de paladio, tal como cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio

(II) (0,05 eq.) se añade a una mezcla de intermediario halo (1 eq.) B-2 o B-5 en acetonitrilo y solución acuosa 1 M de carbonato sódico (volumen igual al de acetonitrilo). Se calienta la mezcla de reacción a aproximadamente 150ºC en un microondas durante aproximadamente 15 min. La CL/EM indica cuándo se ha completado la reacción. Se añade agua a la mezcla y el producto precipitado se filtra y se purifica mediante HPLC, rindiendo el producto A-3. Los sustituyentes R1', R2' y R4' pueden ser R1, R2 y R4 tal como se han definido, o formas o precursores protegidos de los mismos.

Puede utilizarse una diversidad de catalizadores de paladio durante la etapa de acoplamiento de Suzuki. Pueden utilizarse diversos catalizadores de baja valencia, Pd(II) y Pd(0), en la reacción de acoplamiento de Suzuki, incluyendo PdCl2(PPh3)2, Pd(t-Bu)3, PdCl2dppfCH2Cl2, Pd(PPh3)4, Pd(OAc)/PPh3, Cl2Pd[(Pet3)]2, Pd(DIPHOS)2, Cl2Pd(Bipy), [PdCl(Ph2PCH2PPh2)]2, Cl2Pd[P(o-tol)3]2, Pd2(dba)3/P(o-tol)3, Pd2(dba)/P(furilo)3, Cl2Pd[P(furilo)3]2, Cl2Pd(PMePh2)2, Cl2Pd[P(4-F-Ph)3]2, Cl2Pd[P(C6F6)3]2, Cl2Pd[P(2-COOH-Ph)(Ph)2]2, Cl2Pd[P(4-COOH-Ph)(Ph)2]2, y catalizadores encapsulados Pd EnCatTM 30, Pd EnCatTM TPP30 y Pd(II)EnCatTM BINAPP30 (documento nº US 2004/0254066).

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Procedimiento general B: reacción de Buchwald

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5 La reacción de Buchwald resulta útil para aminar los intermediarios 6-bromo B-1 (Wolf y Buchwald, Org. Synth. Coll. 10:423, 2004; Paul et al., Jour. Amer. Chem. Soc. 116:5969-5970, 1994). A una solución de intermediario halo B-1 en DMF se añadió la amina apropiada R5-NH2 (200% molar), Cs2CO3 (50% molar), Pd2(dba)3 (5% molar) y Xantfos (10% molar). La reacción se calentó a aproximadamente 110ºC bajo presión en un reactor de microondas Biotage Optimizer durante aproximadamente 30 min. La solución resultante se concentró al vacío, proporcionando B-2. Otros

10 catalizadores de paladio y ligandos de fosfina pueden resultar útiles.

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También pueden prepararse intermediarios N-aril-amida B-5 bajo condiciones de Buchwald con intermediarios de 15 amida cíclica B-3 y bromuros de arilo B-4.

La figura 1 muestra una ruta sintética ejemplar para preparar compuestos de fórmula I 8 que implica una reacción de Buchwald para acoplar una pirolona bicíclica 4 con un metil-o hidroximetil-benceno 5, rindiendo el intermediario 6, seguido de reacciones de Suzuki sucesivas para preparar un boronato 7 y acoplarlo con una bromo-piridona o

20 pirazinona 2, o una única reacción de Suzuki para acoplar 6 con un piridona-o pirazinona-boronato 3. La bromopiridona o -pirazinona 2 puede prepararse mediante una reacción de Buchwald de una dibromo-piridiona o pirazinona con una amina heterocíclica o una anilina. Los piridona-o pirazinona-boronatos 3 pueden prepararse mediante una reacción de Suzuki de 2 con un diboronato.

25 La figura 2 muestra una ruta sintética ejemplificativa para preparar compuestos de fórmula I 8 que implica ensamblar la pirolona bicíclica en un derivado bromoanilina, proporcionando un bromuro que puede utilizarse en las funciones indicadas en la figura 1.

La figura 3 muestra una ruta sintética ejemplar para preparar compuestos de fórmula I 8 que implica ensamblar la 30 pirolona bicíclica en el derivado amino del resto de la molécula 12.

Ejemplos

Ejemplo 101

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Ejemplo 101a: 3-metiltiofén-2-carboxilato de metilo 101a

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40 Se calentó cloruro de 3-metiltiofén-2-carbonilo (1) (10 ml, 18 mmoles) en 30 ml de metanol hasta la ebullición bajo reflujo durante 18 horas y después se concentró al vacío. El residuo se dividió entre éter dietílico y agua. La capa orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró, proporcionando 101a (12,12 g, 100%) en forma de un aceite transparente, que se utilizó sin purificación adicional.

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Ejemplo 101b: 5-terc-butil-3-metiltiofén-2-carboxilato de metilo 101b

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5 Se suspendió AlCl3 (15,60 g, 117 mM) en CH2Cl2 (18 ml) y la mezcla se enfrió a -78ºC. Se añadió gota a gota durante 5 min. una solución de 12,28 g (78 mM) de 101a en CH2Cl2 (9 ml). La mezcla se agitó durante 5 min. A continuación, se añadió durante 45 min. una solución de 8,9 ml (82 mM) de 2-cloro-2-metilpropano en CH2Cl2 (9 ml) y la mezcla resultante se agitó a -78ºC durante 1 h. La mezcla de reacción se calentó gradualmente hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 24 h. Seguidamente la mezcla de reacción se vertió sobre hielo y se extrajo

10 con CH2Cl2. La capa orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró hasta formar un aceite, que se purificó en sílice eluyendo con un gradiente de CH2Cl2 en hexano (0% a 10%), proporcionando 9,94 g (60%) de 101b.

Ejemplo 101c: 3-(bromometil)-5-terc-butiltiofén-2-carboxilato de metilo 101c

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Una mezcla de 3,15 g (14,8 mM) de 101b, 3,17 g (17,8 mM) de N-bromosuccinimida y 0,122 g (0,742 mmoles) de 2,2'-azobis-isobutironitrilo en 40 ml de tetracloruro de carbono se calentó a 85ºC durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró al vacío y el residuo resultante se

20 purificó en sílice: columna ISCO de 40 g, 0% a 20% de CH2Cl2 en hexano. Se aislaron 3,0 g (70%) de 101c.

Ejemplo 101d: 3-((3-bromo-2-metilfenilamino)metil)-5-terc-butiltiofén-2-carboxilato de metilo 101d

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25 Un matraz de fondo redondo de un cuello de 250 ml dotado de un agitador magnético se purgó con nitrógeno y se cargó con 101c (1,09 g, 4,68 mmoles), 3-bromo-2-metil-anilina (2,61 g, 14,0 mmoles) y acetonitrilo (25 ml). Se añadió carbonato de cesio (1,67 g, 5,15 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. A continuación, se concentró la mezcla de reacción bajo presión reducida. La purificación del residuo resultante

30 mediante cromatografía de columna proporcionó un rendimiento de 70% (1,30 g) de 101d en forma de un aceite amarillo. RMN-1H (300 MHz, CDCl3) δ 6,92 (m, 2H), 6,85 (s, 1H), 6,57 (dd, 1H, J=4,8, 2,1 Hz), 4,60 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 1,37 (s, 9H); EM (IEP+) m/z 396,2 (M+H).

Ejemplo 101e: ácido 3-((3-bromo-2-metilfenilamino)metil)-5-terc-butiltiofén-2-carboxílico 101e

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Un matraz de fondo redondo de un cuello de 50 ml dotado de un agitador magnético se cargó con 101d (1,30 g, 3,28 mmoles), THF (5,0 ml), metanol (5,0 ml) y agua (5,0 ml). Se añadió hidróxido de litio (1,38 g, 32,8 mmoles) y la 5

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mezcla se introdujo en un baño de aceite a 40ºC. Tras 16 h, la mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se eliminaron los volátiles bajo presión reducida. La solución acuosa resultante se acidificó con ácido clorhídrico 2 N hasta pH 4. El sólido resultante se separó mediante filtración y se secó en un horno de vacío a 40ºC, proporcionando un rendimiento cuantitativo (1,25 g) de 101e en forma de un sólido blanco. p.f.: 150ºC a 152ºC; RMN-1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 6,85 (t, 1H, J=7,8 Hz), 6,75-6,67 (m, 3H), 4,35 (s, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,26 (s, 9H); EM (APCI-) m/z 380,2 (M-H).

Ejemplo 101f: 5-(3-bromo-2-metilfenil)-2-terc-butil-4H-tieno[3,2-c]pirrol-6(5H)-ona 101f

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Un matraz de fondo redondo de un cuello de 250 ml con un agitador magnético se purgó con nitrógeno y se cargó con 101e (1,12 g, 2,93 mmoles) y cloruro de metileno anhidro (50 ml). Se añadió cloruro de tionilo (1,25 g, 10,5 mmoles) y la reacción se agitó a temperatura ambiente. Tras 16 h, la reacción se concentró bajo presión reducida. La purificación del residuo resultante mediante cromatografía de columna proporcionó un rendimiento de 65% (757 mg) de 101f en forma de un sólido blanco. p.f.: 185ºC a 186ºC; RMN-1H (300 MHz, CDCl3) δ 7,56 (dd, 1H), J=6,6 1,2 Hz), 7,20 (dd, 1H, J=6,3, 1,5 Hz), 7,11 (t, 1H, 7,8 Hz), 6,87 (s, 1H), 4,56 (s, 2H), 2,33 (s, 3H), 1,45 (s, 9H); EM (IEP+) m/z 364,2 (M+H).

Ejemplo 101g: 2-terc-butil-5-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolán-2-il)fenil)-4H-tieno[3,2-c]pirrol6(5H)-ona 101g

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Un matraz de fondo redondo de un cuello de 100 ml dotado de un agitador magnético se cargó con (7) (757 mg, 2,08 mmoles), bis(pinacolato)diboro (554 mg, 2,18 mmoles, bis(dibencilidén-acetona)paladio (191 mg, 0,21 mmoles), diciclohexil(2',4',6'-triisopropilbifenil-2-il)fosfina (X-Phos) (198 mg, 0,42 mmoles), acetato de potasio (306 mg, 3,12 mmoles) y dioxano anhidro (10 ml). A continuación, se selló el matraz y la mezcla se desgasificó mediante evacuación del matraz y rellenado con nitrógeno tres veces. Seguidamente la reacción se introdujo en un baño de aceite a 80ºC. Tras 16 h, la reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida hasta generar un residuo. A continuación, el residuo resultante se diluyó con acetato de etilo (300 ml) y se lavó con agua (120 ml). Seguidamente se separó la capa orgánica y se secó sobre sulfato sódico. El agente de secado se eliminó mediante filtración al vacío; el filtrado se concentró bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía de columna, proporcionando (8) con un rendimiento de 63% (541 mg) en forma de una espuma amarilla: p.f.: 102ºC a 104ºC; RMN-1H (300 MHz, CDCl3) δ 7,79 (dd, 1H, J=5,4, 1,8 Hz), 7,29 (m, 1H), 7,23 (m, 1H), 6,86 (s, 1H), 4,53 (s, 2H), 2,45 (s, 3H), 1,41 (s, 9H), 1,27 (s, 12H); EM (IQPA+) m/z 411,2 (M).

Ejemplo 101h: (3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol 101 h

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Un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 3 l dotado de un agitador mecánico, embudo de adición y entrada de nitrógeno se purgó con nitrógeno y se cargó con ácido 3-nitropirazol-5-carboxílico (28,0 g, 178 mmoles) y THF (420 ml) y se enfrió a -5ºC utilizando un baño de hielo/acetona. Se añadió una solución de complejo de borano-THF (1,0 M, 535 ml, 535 mmoles) a una tasa que mantuvo la temperatura de reacción interna a menos de 5ºC. Tras completar la adición, se retiró el baño de enfriamiento y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 18 h. Después de este tiempo. se enfrió la reacción a -5ºC utilizando un baño de hielo/acetona, agua (70 ml) y se añadió ácido clorhídrico 4 N (70 ml) y la reacción se agitó bajo reflujo durante 1 h con el fin de destruir el complejo de borano con

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pirazol. Se enfrió la reacción hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida hasta un volumen de aproximadamente 30 ml. Se añadió acetato de etilo (175 ml) y la mezcla se agitó durante 15 min. Se separó la capa acuosa y se extrajo con acetato de etilo (4x200 ml). Las capas orgánicas agrupadas se lavaron con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (2x50 ml), solución hipersalina (50 ml) y se secaron sobre sulfato sódico; se eliminó el agente de secado mediante filtración y el filtrado se concentró bajo presión reducida, proporcionando (3nitro-1H-pirazol-5-il)metanol (101h) con un rendimiento de 94% (24,0 g) en forma de un sólido amarillo pálido: RMN1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,90 (br s, 1H), 6,87 (s, 1H), 5,58 (t, 1H, J=5,4 Hz), 4,53 (d, 2H, J=5,1 Hz); EM (IEP+) m/z 144,0 (M+H).

Ejemplo 101i: (1-(2-bromoetil)-3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol 101i

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Un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 1 l dotado de un agitador mecánico y termorregulador se purgó con nitrógeno y se cargó con (3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol 101h (25,0 g, 175 mmoles), DMF (250 ml) y carbonato de cesio (70,0 g, 215 mmoles) y se calentó a 104ºC durante 5 min. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió a 0ºC utilizando un baño de hielo/acetona y se añadió en partes dibromoetano (329 g, 1,75 moles) (sin exoterma). La reacción se agitó a 0ºC durante 1 h y después a temperatura ambiente durante 4 h. Después de este tiempo, se añade lentamente una solución de KH2PO4 (40 g) en agua (400 ml). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 30 min. Se añadió acetato de etilo (450 ml) y se separó la capa acuosa y extrajo con acetato de etilo (2x100 ml). Se lavaron las capas orgánicas agrupadas con agua (200 ml) y solución hipersalina (200 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se eliminó el agente de secado mediante filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida, proporcionando un rendimiento de 86% (37,5 g) de (1-(2-bromoetil)-3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol en bruto (101i) en forma de un aceite naranja: RMN-1H (300 MHz, CDCl3) δ 6,85 (s, 1H), 4,82 (d, 2H, J=5,4 Hz), 4,66 (t, 2H, J=6,3 Hz), 3,83 (t, 2H, J=6,3 Hz); EM (IEP+) m/z 249,9 (M+H). Este material se utilizó en la etapa siguiente directamente.

Ejemplo 101j: 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazol 101j

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Un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 500 ml dotado de un agitador magnético, entrada de nitrógeno y condensador de reflujo se purgó con nitrógeno y se cargó con (1-(2-bromoetil)-3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol 101j (37,0 g, 148 mmoles) y cloroformo (160 ml). La reacción se enfrió a -5ºC utilizando un baño de hielo/acetona y se añadió en partes tribromuro de fósforo (40,0 g, 148 mmoles). Se retiró el baño de enfriamiento y al reacción se agitó bajo reflujo durante 2 h. Después de este tiempo. se enfrió la reacción a -5ºC y se añadió solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (250 ml) hasta alcanzar un pH de 8,5. Se extrajo la mezcla con acetato de etilo (3x150 ml) y las capas orgánicas agrupadas se lavaron con carbonato sódico acuoso saturado (2x50 ml) y solución hipersalina (75 ml) y se secaron sobre sulfato sódico y se eliminó el agente de secado mediante filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo amarillo que se disolvió bajo calentamiento suave en cloruro de metileno (60 ml). Se añadieron hexanos (aproximadamente 20 ml) y se enturbió la solución. Se calentó la mezcla hasta formarse un precipitado sólido, se añadió cloruro de metileno (9 ml) y la solución se clarificó. Se dejó que la solución se enfriase hasta la temperatura ambiente y tras 4 h se recogieron los cristales resultantes mediante filtración al vacío. La torta de filtración se lavó con una mezcla helada 1:2 de cloruro de metileno:hexanos (2x20 ml), proporcionando 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazol (101j) (19,7 g). Los filtrados agrupados se evaporaron y el procedimiento se llevó a cabo nuevamente, proporcionando 9,70 adicionales de 1-(2-bromoetil)-5(bromometil)-3-nitro-1H-pirazol. Se agruparon los sólidos y se secaron bajo alto vacío durante 18 h, proporcionando un rendimiento de 57% (26,0 g) de 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazol en forma de cristales blancos; p.f.: 95ºC a 97ºC; RMN-1H (300 MHz, CDCl3) δ 6,93 (s, 1H), 4,63 (t, 2H, J=6,0 Hz), 4,54 (s, 2H), 3,86 (t, 2H, J=6,0 Hz).

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Ejemplo 101k: 5-metil-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 101k

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5 Un matraz de fondo redondo de un único cuello de 1 l dotado de un agitador magnético y entrada de nitrógeno se cargó con THF (350 ml), 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazol 101j (10,0 g, 32,2 mmoles), solución de metilamina 2 M en THF (113 ml, 225 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 72 h. Después de este tiempo, se concentró la reacción a sequedad bajo presión reducida y el sólido resultante se agitó con una mezcla de acetato de etilo (75 ml) y carbonato potásico acuoso al 10% (75 ml). Se separó la capa acuosa y se extrajo con

10 acetato de etilo (2x75 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con carbonato potásico acuoso al 10% (75 ml), seguido de solución hipersalina (50 ml) y se secaron sobre sulfato sódico. Se eliminó el agente de secado mediante filtración y el filtrado se concentró bajo presión reducida, proporcionando 5-metil-2-nitro-4,5,6,7tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 101k con un rendimiento de 97% (5,70 g) en forma de un sólido amarillo. RMN-1H (300 MHz, CDCl3) δ 6,62 (s, 1H), 4,28 (t, 2H, J=5,4 Hz), 3,67 (s, 2H), 2,95 (t, 2H, J=5,4 Hz), 2,52 (s, 3H); EM (IEP+)

15 m/z 183,0 (M+H).

Ejemplo 101l: 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazín-2-amina 101l

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20 Una botella reactora de Parr de 500 ml se purgó con nitrógeno y se cargó con paladio al 10% sobre carbono (al 50% húmeda, 800 mg de peso seco) y una solución de 5-metil-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 101k (4,00 g, 2,20 mmoles) en etanol (160 ml). Se acopló la botella a un hidrogenador de Parr, se evacuó y se cargó con gas hidrógeno hasta una presión de 45 psi y se agitó durante 2 h. Después de este tiempo, se evacuó el hidrógeno y se

25 cargó nitrógeno en la botella. Se añadió Celite 521 (1,0 g) y la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite

521. Se lavó la torta de filtración con etanol (2x75 ml) y los filtrados agrupados se concentraron a sequedad bajo presión reducida, proporcionando un rendimiento de 99% de 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazín-2-amina (101l) (3,31 g) en forma de un sólido naranja. RMN-1H (300 MHz, CDCl3) δ 5,34 (s, 1H), 3,98 (t, 2H, J=5,4 Hz), 3,52 (s, 3H), 2,84 (t, 2H, J=5,7 Hz), 2,45 (s, 3H); EM (IEP+) m/z 153,1 (M+H).

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Ejemplo 101m: 6-cloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazín-2-ilamino)piridazín-3(2H)-ona 101m

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35 Un matraz de fondo redondo de un único cuello de 50 ml dotado de un agitador magnético, condensador de reflujo y entrada de nitrógeno se cargó con 1,4-dioxano (5,0 ml), 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazín-2-amina 101l (152 mg, 1,00 mmol), 4-bromo-6-cloropiridazín-3(2H)-ona (209 mg, 1,00 mmol) y una solución 1 M de THF de LiHMDS (5,0 ml, 5,00 mmoles). Tras burbujear nitrógeno a través de la solución resultante durante 30 min., se añadió Xantfos (49 mg, 0,05 mmoles) y tris(dibencilidén-acetona)dipaladio (0) (59 mg, 0,085 mmoles) y la mezcla de

40 reacción se calentó bajo reflujo durante 3 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se añadió agua (10 ml). Se ajustó el pH a 6,5 con ácido clorhídrico 2 N. El precipitado resultante se recogió mediante filtración de vacío, se lavó con agua (2x25 ml), se adsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante cromatografía flash, proporcionando un rendimiento de 74% (210 mg) de 6-cloro-4-(5-metil-4,5,6,7tetrahidropirazolo[1,5-α]pirazín-2-ilamino)piridazín-3(2H)-ona 101m en forma de un sólido marrón pálido. RMN-1H

45 (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,94 (s, 1H), 9,55 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 5,96 (s, 1H), 4,04 (t, 1H, J=5,7 Hz), 3,53 (s, 2H), 2,82 (t, 2H, J=5,7 Hz), 2,36 (s, 3H); EM (IEP+) m/z 281,1 (M+H).

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Ejemplo 101: 6-(3-{2-terc-butil-6-oxo-4H,5H,6H-tieno[2,3-c]pirrol-5-il}-2-metilfenil)-4-({5-metil-4H,5H,6H,7Hpirazolo[1,5-a]pirazín-2-il}amino)-2,3-dihidropiridazín-3-ona 101

En un matraz de presión seco se introdujeron 0,968 mmoles de 101m, 1,065 mmoles de 101g y 56 mg (5% molar) de tetracis(trifenilfosfina)paladio (0). Se evacuó el matraz bajo vacío y después se rellenó con nitrógeno. Se repitió este procedimiento dos veces más y después se añadieron 8 ml de dioxano anhidro y 2,4 ml (2,5 equivalentes) de solución acuosa 1 M de carbonato sódico y la mezcla se calentó a 100ºC durante 18 h. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, después se diluyó con acetato de etilo, se lavó con solución acuosa saturada de NaCl cuatro veces, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se purificó mediante cromatografía en una columna Biotage 25M KP NH, proporcionando 101. RMN-1H (400 MHz, DMSO) δ 12,96 (s, 1H), 9,19 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,54-7,32 (m, 3H), 7,15 (s, 1H), 5,97 (s, 1H), 4,78 (s, 2H), 3,97 (t, J=5,3, 2H), 3,52 (s, 2H), 2,80 (t, J=5,4, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,11 (d, J=12,1, 3H), 1,42 (s, 9H). EM-IEP m/z=530,2 (M+1).

Ejemplo 108

Ejemplo 108a: 2-terc-butil-5-(3-(1-(hidroximetil)-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazín-2-ilamino)-6oxo-1,6-dihidropiridazín-3-il)-2-metilfenil)-4H-tieno[2,3-c]pirrol-6(5H)-ona 108a

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Un matraz de fondo redondo de un único cuello de 250 ml dotado de un agitador magnético y entrada de nitrógeno se cargó con 101 (2,50 g, 4,72 mmoles), metanol (30 ml) y una solución al 37% de formaldehído en metanol (30 ml, 100 mmoles). Se acopló un condensador de reflujo al matraz y la mezcla de reacción se calentó a 60ºC durante 3 h bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de este tiempo, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se filtró por un embudo Buchner. Se lavó la torta de filtración con metanol (3x5 ml) y se secó bajo vacío a 40ºC durante 12 h, proporcionando 108a con un rendimiento de 93% (2,45 g) en forma de un sólido blanco. p.f.: 185ºC a 187ºC. RMN-1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 9,33 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,47 (m, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 6,77 (t, J=7,8 Hz, 1H), 5,99 (s, 1H), 5,43 (d, J=7,5 Hz, 2H), 4,78 (s, 2H), 3,97 (t, J=5,0 Hz, 2H), 3,51 (s, 2H), 2,79 (t, J=5,0 Hz, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 1,41 (s, 9H); EM (IEP+) m/z 530,2 (M+H).

Ejemplo 108b: bis(2-cianoetil)fosfato de (3-(3-(2-terc-butil-6-oxo-4H-tieno[2,3-c]pirrol-5(6H)-il)-2-metilfenil)-5(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazín-2-ilamino)-6-oxopiridazín-1(6H)-il)metilo 108b

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Un matraz de fondo redondo de un único cuello de 100 ml dotado de un agitador magnético y entrada de nitrógeno se cargó con 108a (2,45 g, 4,38 mmoles), tetrazol (1,22 g, 17,5 mmoles) y cloruro de metileno (20 ml). Se añadió una solución de 5c (2,37 g, 8,76 mmoles) en cloruro de metileno (2 ml) a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se agitó durante 12 h bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de este tiempo, s enfrió la mezcla a 0ºC. Se añadió gota a gota una solución 5,5 M de hidroperóxido de terc-butilo en decano (4,8 ml, 26,4 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se diluyó con cloruro de metileno (200 ml). La fase orgánica se lavó con solución saturada de tiosulfato sódico (20 ml) y solución saturada de bicarbonato sódico (20 ml). Se separó la capa orgánica y se secó sobre sulfato sódico. Se eliminó el agente de secado mediante

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filtración al vacío y el filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash, proporcionando un rendimiento de 36% (1,20 g) de 108b en forma de un sólido blanco. p.f.: 208ºC a 210ºC; RMN-1H (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,55 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,49 (t, J=5,0 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 5,9 (d, J=2,5 Hz, 2H), 5,97 (s, 1H), 4,78 (s, 2H), 4,22 (q, J=6,0 Hz, 4H), 3,97 (t, J=5,5 Hz, 2H), 3,52 (s, 2H), 2,92 (t, J=6,0 Hz, 4H), 2,79 (t, J=5,5 Hz, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 1,41 (s, 9H); EM (IEP+) m/z 746,3 (M+H).

Ejemplo 108: (3-(3-(2-terc-butil-6-oxo-4H-tieno[2,3-c]pirrol-5(6H)-il)-2-metilfenil)-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazín-2-ilamino)-6-oxopiridazín-1(6H)-il)metilfosfato sódico 108

Un matraz de fondo redondo de un único cuello de 25 ml dotado de un agitador magnético se cargó con 108b (400 mg, 0,356 mmoles), acetonitrilo (5 ml), trietilamina (2,5 ml) y N,O-bis(trimetilsilil)trifluoroacetamida (2,5 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla se concentró a sequedad bajo presión reducida. Se añadió solución saturada de bicarbonato sódico (5 ml) al residuo y el precipitado blanco resultante se recogió mediante filtración. Se trituró la torta de filtración con metanol (5 ml), proporcionando 108 con un rendimiento de 35% (130 mg) en forma de un sólido amarillo pálido. p.f.: 240ºC a 242ºC; RMN-1H (500 MHz, CD3OD) δ 7,71 8s, 1H), 7,40 (m, 3H), 7,07 (s, 1H), 5,90 (s, 1H), 5,84 (d, J=7,0 Hz, 2H), 4,72 (d, J=10,0 Hz, 2H), 4,06 (t, J=5,5 Hz, 2H), 3,62 (s, 2H), 2,92 (t, J=5,5 Hz, 2H), 2,46 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,45 (s, 9H); EM (IEP+) m/z 684,2 (M+H).

Ejemplo 109

Ejemplo 109a: 3-metiltiofén-2-carboxilato de metilo 109a

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Un matraz de fondo redondo de un único cuello de 100 ml se cargó con cloruro de 4-metiltiazol-5-carbonilo (13,1 g, 10,0 mmoles) en metanol (30 ml). La mezcla se sometió a reflujo durante la noche. Se enfrió la mezcla hasta la temperatura ambiente y se concentró. El residuo se dividió entre éter dietílico (50 ml) y agua (50 ml). Se lavó la capa orgánica con solución hipersalina y se secó sobre sulfato sódico. El agente de secado se eliminó mediante filtración. Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionado 3-metiltiofén-2-carboxilato de metilo (101a) (12,8 g, 95%) en forma de un aceite incoloro, que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación adicional.

Ejemplo 109b: 5-terc-butil-3-metiltiofén-2-carbxilato de metilo 109b

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Una solución de 3-metiltiofén-2-carboxilato de metilo 109a (33 g, 0,211 moles) en CH2Cl2 seco (30 ml) se añadió gota a gota a una mezcla de cloruro de aluminio (40 g, 0,297 mmoles) y CH2Cl2 seco (200 ml) a -78ºC, bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 10 min. a -78ºC y se añadió gota a gota a-78ºC una solución de cloruro de terc-butilo (23 ml, 0,211 moles) en CH2Cl2 seco (30 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a -78ºC, se dejó que se calentase gradualmente hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 16 h a temperatura ambiente. Se vertió sobre hielo y se extrajo con CH2Cl2 (2x200 ml). Se secó la capa orgánica sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó el solvente bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante destilación fraccionada, rindiendo 5terc-butil-3-metiltiofén-2-carbxilato de metilo 109b (19 g, 43%) en forma de un líquido amarillo pálido.

Ejemplo 109c: 3-(bromometil)-5-terc-butiltiofén-2-carboxilato de metilo 109c

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Se añadió N-bromosuccinimida (18,5 g, 0,103 moles) a una solución de 5-terc-butil-3-metiltiofén-2-carboxilato de metilo (109b) (20 g, 0,09 moles) y AIBN (0,774 g, 0,0047 moles) en CCl4 (200 ml). La mezcla se sometió a reflujo durante 2 h, se enfrió hasta la temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró bajo vacío y el residuo obtenido se purificó mediante cromatografía de columna flash (sílice, 95:5 hexanos/diclorometano), proporcionando E11755517

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3-(bromometil)-5-terc-butiltiofén-2-carboxilato de metilo (109c) (11 g, 40%) en forma de un líquido amarillo pálido.

Ejemplo 109d: 2-terc-butil-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxa-borolán-2-il)fenilamino)metil)tiazol-5carboxilato de metilo 109d

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Se suspendió 2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolán-2-il)anilina (466,2 mg, 2,0 mmoles) y carbonato de cesio (782,0 mg, 2,4 mmoles) en acetonitrilo anhidro (20 ml) y la mezcla se enfrió a 0ºC. A continuación, se añadió

10 3-(bromometil)-5-terc-butiltiofén-2-carboxilato de metilo (109c) (584,4 mg, 2,0 mmoles). La mezcla resultante se dejó que se calentase gradualmente hasta la temperatura ambiente y después se agitó a 40ºC durante la noche. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite® y se concentró el filtrado. El residuo se purificó en sílice eluyendo con un gradiente de 0% a 10% de acetato de etilo en heptano, proporcionando 2-terc-butil-4-((2-metil-3-(4,4,5,5tetrametil-1,3,2-dioxaborolán-2-il)fenilamino)metil)tiazol-5-carboxilato de metilo (109d) (501,6 mg, 56%).

15 Ejemplo 109e: ácido 2-terc-butil-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolán-2-il)fenilamino)metil)tiazol5-carboxílico 109e

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20 Una mezcla de 2-terc-butil-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolán-2-il)fenilamino)metil)tiazol-5-carboxilato de metilo 109d (1,80 g, 4,05 mmoles) e hidróxido de litio (970,0 mg, 40,50 mmoles) en alcohol isopropílico (15 ml) y agua (15 ml, 830 mmoles) se agitó a 40ºC durante la noche. La mezcla de reacción se concentró a ~50% del volumen original, se acidificó a pH~2 con ácido clorhídrico conc. y se extrajo con 9:1 acetato de isopropilo/alcohol

25 isopropílico. Se secó el extracto con sulfato de magnesio anhidro. El agente de secado se eliminó mediante filtración. Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando ácido 2-terc-butil-4-((2-metiil-3-(4,4,5,5tetrametil-1,3,2-dioxaborolán-2-il)fenilamino)metil)tiazol-5-carboxílico 109e (1,74 g, 92%), que se utilizó sin purificación adicional.

30 Ejemplo 109f: 2-terc-butil-5-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolán-2-il)fenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)ona 109f

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35 A una mezcla de ácido 2-terc-butil-4-((2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolán-2-il)fenilamino)metil)tiazol-5carboxílico 109e (430,37 mg, 0,0010000 moles) en cloruro de metileno (10 ml) se le añadió N,N-diisopropiletilamina

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(870,91 µl, 5,0 mmoles) y hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronio (1,1407 g, 0,0030000 moles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se extrajo con agua. Se separó la capa orgánica y se secó con sulfato de magnesio anhidro. Se eliminó el agente de secado mediante filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó en sílice eluyendo con un gradiente de 0% a 20% de acetato de etilo en heptano, proporcionando 2-terc-butil-5-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil1,3,2-dioxaborolán-2-il)fenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 109f (163 mg, 40%).

Ejemplo 109g: 6-cloro-4-(1-metil-1H-pirazol-3-ilamino)piridazín-3(2H)-ona

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A una mezcla de 4-bromo-6-cloropiridazín-3(2H)-ona (838 mg, 4,0 mmoles), 1-metil-1H-pirazol-3-amina (427 mg, 4,4 mmoles), tris(dibencilidén-acetona)dipaladio (0) (91,6 mg, 0,1 mmoles) y 2-di-terc-butilfosfino-2',4',6'triisopropilbifenilo, 97% (170 mg, 0,4 mmoles) en 1,4-dioxano (12 ml) se le añadió terc-butóxido sódico (845,7 mg, 8,8 mmoles). La mezcla se purgó con nitrógeno y se selló en un tubo de presión. La mezcla de reacción se calentó a 100ºC durante la noche. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente y se filtró a través de Celite®. Se concentró el filtrado. El residuo se purificó en sílice, eluyendo con un gradiente de 0% a 3,5% de metanol en cloruro de metileno con hidróxido amónico al 1%, proporcionando 6-cloro-4-(1-metil-1H-pirazol-3-ilamino)piridazín-3(2H)-ona (109g) (230 mg, 25%).

Ejemplo 109: 2-terc-butil-5-(2-metil-3-(5-(1-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazín-3-il)fenil)-4Hpirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 109

Un tubo de presión de 5 ml se cargó con 6-cloro-4-(1-metil-1H-pirazol-3-ilamino)piridazín-3(2H)-ona 109g (20,0 mg, 0,089 mmoles), 2-terc-butil-5-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolán-2-il)fenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)ona 109f (43,9 mg, 0,11 mmoles), 1,27 M de fosfato de potasio en agua (0,15 ml, 0,20 mmoles), tris(dibencilidénacetona)dipaladio (0) (4,1 mg, 0,0044 mmoles), S-Phos (4,4 mg, 0,011 mmoles) y 1,4-dioxano (1,4 ml). La mezcla se purgó con nitrógeno, se selló y se calentó a 110ºC durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se filtró a través de Celite®. La torta de filtración se lavó con cloruro de metileno/metanol (~9:1). Se concentró el filtrado. El residuo se purificó en sílice, eluyendo con un gradiente de 0% a 3,5% de metanol en cloruro de metileno. El material obtenido se purificó adicionalmente mediante HPLC de fase inversa: columna C18, eluyendo con un gradiente de 0% a 80% de acetonitrilo en agua durante 20 min. con ácido trifluoroacético al 0,05%, proporcionando 2-terc-butil-5-(2-metil-3-(5-(1-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazín-3-il)fenil)4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona (109) (13 mg, 31%). M+1 476,2. RMN-1H (400 MHz, DMSO) δ 12,92 (s, 1H), 9,17 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,48 d, J=2,2, 1H), 7,44 (dd, J=5,3, 3,9, 1H), 7,32 (dd, J=6,5, 2,7, 2H), 6,08 (d, J=2,3, 1H), 4,91 (s, 2H), 3,67 (s, 3H), 2,07 (s, 3H).

Ejemplo 110

Ejemplo 110a: 4-bromo-6-cloro-2-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)piridazín-3(2H)-ona 110a

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Un matraz de fondo redondo de un único cuello de 500 ml dotado de un agitador magnético se purgó con nitrógeno y se cargó con DMF anhidro (150 ml) y 4-bromo-6-cloro-piridazín-3(2H)-ona (10,0 g, 47,8 mmoles). La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC y se añadió hidruro sódico. Se agitó al reacción a 0ºC durante 20 min. Después de este tiempo, se añadió cloruro de 2-(trimetilsilil)etoximetilo (11,9 g, 71,6 mmoles) y se retiró el baño de enfriamiento y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. A continuación, se inactivó la reacción con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (30 ml). Se extrajo la mezcla con acetato de etilo (2x300 ml). Los extractos se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía flash, proporcionando 110a con un rendimiento de 56% (9,00 g) en forma de un aceite amarillo. RMN-1H (300 MHz, CDCl3) δ 8,02 (s, 1H), 5,42 (s, 2H), 3,79 (t, 2H, J=5,4 Hz), 0,96 (t, 2H, J=5,4 Hz), 0,01 (s, 9H).

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18-05-2015

Ejemplo 110b: 6-cloro-4-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-2-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)piridazín-3(2H)-ona 110b

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A una mezcla de 4-bromo-6-cloro-2-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)piridazín-3(2H)-ona 110a (1,19 g, 3,50 mmoles), 1,5dimetil-1H-pirazol-3-amina (409 mg, 3,68 mmoles) en 1,4-dioxano (20 ml) en un matraz de fondo redondo de un único cuello de 100 ml se le añadió carbonato de cesio (3,42 g, 10,5 mmoles). Se purgó la mezcla con nitrógeno durante 30 min. A continuación, se añadió tris(dibencilidén-acetona)dipaladio (0) (321 mg, 0,350 mmoles) y 4,5bis(difenil-fosfino)-9,9-dimetilxanteno (344 mg, 0,596 mmoles). El matraz se conectó a un condensador purgado con nitrógeno y la mezcla se sometió a reflujo bajo nitrógeno durante 18 h. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente y se filtró. Se suspendió la torta de filtración en acetato de etilo (30 ml) y agua (10 ml) y se filtró a través de Celite®. Se separaron las capas. Las capas orgánicas agrupadas se secaron con sulfato de magnesio anhidro. Se eliminó el agente de secado mediante filtración. Se concentró el filtrado bajo presión reducida. El residuo se purificó en sílice, eluyendo con un gradiente de 0% a 50% de acetato de etilo en heptano, proporcionando 6-cloro-4-(1,5dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-2-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)piridazín-3(2H)-ona 110b en forma de un sólido amarillo (928 mg, 72%).

Ejemplo 110c: 2-terc-butil-5-(3-(5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-oxo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1,6dihidropiridazín-3-il)-2-metilfenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 110c

imagen75

Siguiendo el Ejemplo 109, se hicieron reaccionar 247,2 mg (0,6 mmoles) de 2-terc-butil-5-(2-metil-3-(4,4,5,5tetrametil-1,3,2-dioxaborolán-2-il)fenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 109f, 185 mg (0,5 mmoles) de 6-cloro-4-(1,5dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-2-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)piridazín-3(2H)-ona 110b, 45,8 mg (0,05 mmoles) de tris(dibencilidén-acetona)dipaladio (0), 49,3 mg (0,12 mmoles) de 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (0,596 mmoles), 0,67 ml (0,85 mmoles) de 1,27 M de fosfato de potasio en agua y 10 ml de 1,4-dioxano, proporcionando 186 mg (60%) de 2-terc-butil-5-(3-(5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-oxo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1,6dihidropiridazín-3-il)-2-metilfenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 110c.

Ejemplo 110: 2-terc-butil-5-(3-(5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazín-3-il)-2-metilfenil)4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 110

Se burbujeó gas de cloruro de hidrógeno en 2-terc-butil-5-(3-(5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-oxo-1-((2(trimetilsilil)etoxi)metil)-1,6-dihidropiridazín-3-il)-2-metilfenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 110c (186 mg, 0,30 mmoles) y anisol (0,163 ml, 1,50 mmoles) en metanol (20 ml) a 0ºC durante 5 min. La mezcla resultante se dejó que se calentase hasta la temperatura ambiente y se continuó la agitación durante 16 h. Se concentró la mezcla de reacción. El residuo se purificó mediante HPLC de fase inversa: columna C-18, eluyendo con 20% a 60% de acetonitrilo en agua con hidróxido amónico al 1% durante 14 min., proporcionando 2-terc-butil-5-(3-(5-(1,5-dimetil1H-pirazol-3-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazín-3-il)-2-metilfenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 110 (40 mg, 30%). M+1 490,1. RMN-1H (400 MHz, DMSO) δ 12,95 (s, 1H), 9,09 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,50 (dd, J=5,6, 3,6, 1H), 7,417,32 (m, 2H), 5,97 (s, 1H), 4,97 (s, 2H), 3,62 (s, 3H), 2,17 (d, J=19,6, 6H), 1,47 (s, 9H).

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Ejemplo 111

Ejemplo 111a: 6-cloro-4-(5-ciclopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-2-((2-(trimetil-silil)etoxi)metil)piridazín-3(2H)-ona 111a

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A una mezcla de 110a (2,38 g, 7,00 mmoles), 5-ciclopropil-1H-pirazol-3-amina (905 mg, 7,35 mmoles) en 1,4dioxano (40 ml) en un matraz de fondo redondo de un único cuello de 100 ml se le añadió carbonato de cesio (6,84 g, 21,0 mmoles). La mezcla se purgó con nitrógeno durante 30 min. A continuación, se añadió tris(dibencilidénacetona)dipaladio (0) (641 mg, 0,700 mmoles) y 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (688 mg, 1,19 mmoles). Se conectó el matraz con un condensador purgado con nitrógeno y la mezcla se sometió a reflujo durante 6 h bajo nitrógeno. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente y se filtró. La torta de filtración se suspendió en acetato de etilo (30 ml) y agua (10 ml) y se filtró a través de Celite®. Se separaron las capas. Las capas orgánicas agrupadas se secaron con sulfato de magnesio anhidro. El agente de secado se eliminó mediante filtración. Se concentró el filtrado bajo presión reducida. El residuo se purificó en sílice, eluyendo con un gradiente de 0% a 50% de acetato de etilo en heptano, proporcionando 6-cloro-4-(5-ciclopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-2-((2(trimetilsilil)etoxi)metil)piridazín-3(2H)-ona (111a) (1,58 g, 59%).

Ejemplo 111b: 2-terc-butil-5-(3-(5-(5-ciclopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-oxo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1,6dihidropiridazín-3-il)-2-metilfenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 111b

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Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 109, se hicieron reaccionar 148,4 mg (0,36 mmoles) de 2-terc-butil-5-(2metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolán-2-il)fenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 109f, 114,6 mg (0,3 mmoles) de 6-cloro-4-(5-ciclopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-2-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)piridazín-3(2H)-ona 111a, 27,5 mg (0,03 mmoles) de tris(dibencilidén-acetona)dipaladio (0), 29,6 mg (0,072 mmoles) de 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9dimetilxanteno (0,596 mmoles), 0,71 ml (0,9 mmoles) de 1,27 M de fosfato de potasio en agua y 10 ml de 1,4dioxano, proporcionando 129 mg (68%) de 2-terc-butil-5-(3-(5-(5-ciclopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-oxo-1-((2(trimetilsilil)etoxi)metil)-1,6-dihidropiridazín-3-il)-2-metilfenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 111b.

Ejemplo 111: 2-terc-butil-5-(3-(5-(5-ciclopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidropiridazín-3-il)-2metilfenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 111

A una mezcla de 2-terc-butil-5-(3-(5-(5-ciclopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-oxo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1,6dihidropiridazín-3-il)2-metilfenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 111b en diclorometano (5 ml) y ácido trifluoroacético (5 ml) se le añadió anisol (0,11 ml, 1,0 mmol) y ácido trifluorometanosulfónico (0,054 ml, 0,61 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Se concentró la mezcla. El residuo se purificó mediante HPLC de fase inversa: columna C-18, eluyendo con 20% a 60% de acetonitrilo en agua con hidróxido amónico al 1%, proporcionando 2-terc-butil-5-(3-(5-(5-ciclopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-oxo-1,6dihidropiridazín-3-il)-2-metilfenil)-4H-pirrolo[3,4-d]tiazol-6(5H)-ona 111 (50 mg, 50%). M+1 502,2. RMN-1H (400 MHz, DMSO) δ 12,94 (s, 1H), 12,02 (s, 1H), 9,06 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,50 (dd, J=5,8, 3,5, 1H), 7,38 (dd, J=8,0, 5,6, 2H), 5,87 (d, J=2,0, 1H), 4,96 (s, 2H), 2,13 (s, 3H), 1,84 (td, J=8,4, 4,2, 1H), 1,47 (s, 9H), 0,98-0,82 (m, 2H), 0,71-0,59 (m, 2H).

Ejemplo 901: ensayo bioquímico de la Btk

Un procedimiento generalizado para un ensayo bioquímico estándar de la cinasa Btk que puede utilizarse para someter a ensayo los compuestos de fórmula 1 es el siguiente. Se preparó una mezcla madre sin enzima Btk que contenía tampón de cinasa Cell Signaling 1X (Tris-HCl 25 mM, pH 7,5, beta-glicerofosfato 5 mM, ditiotreitol 2 mM, Na3VO4 0,1 mM, MgCl2 10 mM), sustrato péptido 2 biotinilado PTK Promega 0,5 µM y BSA al 0,01%. Se preparó una mezcla madre de enzima Btk que contenía tampón de cinasa Cell Signaling 1X, sustrato péptido 2 biotinilado PTK 0,5 µM, BSA al 0,01% y 100 ng/pocillo (0,06 mU/pocillo) de enzima Btk. Se preparó enzima Btk de la manera

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Claims (14)

1. REIVINDICACIONES

   1. Compuesto seleccionado de la fórmula I:

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   5

   y sus estereoisómeros, tautómeros o sales farmacéuticamente aceptables, en la que: R1 se selecciona de entre:

   10

   imagen2

   en las que la línea ondulada indica el sitio de unión;

   15 R4 se selecciona de entre OH, CN, NRbRc, cicloalquilo C3-C6 sustituido opcionalmente con alquilo C1-C6 o haloalquilo C1-C4 y alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con OH u O-alquilo C1-C4;

   R2 es H, CH3o CF3;

   20 el anillo B se selecciona de entre fenilo, heteroarilo de 5-6 miembros que presenta por lo menos un átomo anular de nitrógeno y heterociclilo de 8 a 11 miembros que presenta por lo menos un átomo anular de nitrógeno;

   R3 se selecciona independientemente de entre H, -Ra, -ORb, -SRb, -NRbRc, halo, ciano, nitro, -CORb, -CO2Rb, -CONRbRc, -OCORb, -OCO2Ra, -OCONRbRc, -NRcCORb, -NRcCO2Ra, -NRcCONRbRc, -CO2Rb, -CONRbRc,

   25 -NRcCORb, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRbRc y -NRcSO2Ra; o dos grupos R3 adyacentes se toman opcionalmente conjuntamente para formar un anillo de 5-6 miembros que presenta 0 a 2 heteroátomos seleccionados de entre O, S o N, en el que dicho anillo de 5-6 miembros se fusiona al anillo B;

   Ra es un grupo C1-C6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo, en el que cada miembro de Ra se 30 sustituye opcionalmente con uno a tres grupos R11;

   Rb es H, un grupo C1-C6 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo, en el que cada miembro de Rb excepto H se sustituye opcionalmente con uno a tres grupos R11;

   35 Rc es H o alquilo C1-C4 sustituido opcionalmente con uno a tres grupos R11; o Rb y Rc, y el nitrógeno al que se encuentran unidos, forman un grupo heterocicloalquilo sustituido opcionalmente;

   cada R11 se selecciona independientemente de entre un grupo C1-C4 alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, aril-alquilo C1-C4, heteroaril-alquilo C1-C4, cicloalquil-alquilo C1-C4, heterocicloalquil-alquilo C1-C4, 40 haloalquilo C1-C4, -O-alquilo C1-C4, -O-heterocicloalquilo, -O-alquil C1-C4-fenilo, -alquilo C1-C4-OH, -O-haloalquilo C1-C4, -OH, -NH2, -alquilo C1-C4-NH2, -NH(alquilo C1-C4), -N(alquilo C1-C4)(alquilo C1-C4), -N(alquilo C1-C4)(alquil C1-C4-fenilo), -NH(alquil C1-C4-fenilo), ciano, nitro, oxo, -CO2H, -C(O)O-alquilo C1-C4, -CON(alquilo C1-C4)(alquilo C1-C4), -CONH(alquilo C1-C4), -CONH2, -NHC(O)(alquilo C1-C4), -NHC(O)(fenilo), -N(alquilo C1-C4)C(O)(alquilo C1-C4), -N(alquilo C1-C4)C(O)(fenilo), -C(O)alquilo C1-C4, -C(O)fenilo C1-C4, -C(O)haloalquilo C1-C4, -OC(O)alquilo C1

   45 C4, -SO2(alquilo C1-C4), -SO2(fenilo), -SO2(haloalquilo C1-C4), -SO2NH2, -SO2NH(alquilo C1-C4), -SO2NH(fenilo), -NHSO2(alquilo C1-C4), -NHSO2(fenilo) y -NHSO2(haloalquilo C1-C4);

   R6 es H, CH3, F, Cl, CN, OCH3, OH o metilo sustituido con OH, OCH3 o uno o más grupos halo; R7 es H, CH3, F, Cl, CN u OCH3; 50 R8 es H, CH3, CF3, F, Cl, CN u OCH3;

   44

   cada R9 es independientemente alquilo C1-C3; y cada R10 es independientemente H o CH3.

2. 2.

   Compuesto según la reivindicación 1, en el que R2 es H o CH3.

3. 3.

   Compuesto según la reivindicación 1, en el que R3 es:

   imagen3

   10 en el que la línea ondulada indica el sitio de unión.
4. 4. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R3 se selecciona de entre ciclopropilo, azetidinilo, azetidinilmetilo,

   piperidinilo, oxopiperidinilo, piperazinilo y oxopiperazinilo, sustituidos opcionalmente con F, CH3 o COCH3. 15
5. 5. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R4 es H, t-butilo, N-pirrolidinilo, N-piperidinilo, N-azepanilo, 2hidroxi-2-metilpropilo, prop-1-en-2-ilo, -N(CH3)Et, i-propilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 3-metilbután-2-ilo, -N(CH3)(i-Pr) o -NH(ciclopropilo).

   20 6. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R6 es H, CH3, F o CH2OH.
6. 7. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R7 es H o F.
7. 8. Compuesto según la reivindicación 1, en el que B es pirazolo[1,5-a]pirazín-2-ilo, pirazol-3-ilo, pirimidín-4-ilo o 25 piridín-2-ilo.
8. 9. Compuesto según la reivindicación 1, en el que:

   imagen4

   30 se selecciona de entre las estructuras:

   imagen5

   45

   imagen6

   en las que la línea ondulada indica el sitio de unión.
9. 10. Compuesto según la reivindicación 1, que presenta la estructura de la fórmula Ib:

   imagen7

   10 11. Compuesto según la reivindicación 1, que presenta la estructura de la fórmula Ic:

   imagen8
10. 12. Compuesto según la reivindicación 1, seleccionado de la tabla 1. 15

11. 13.

    Compuesto según la reivindicación 1, seleccionado de la tabla 2.

12. 14.

    Composición farmacéutica constituida por un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 y un

    vehículo, deslizante, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptables. 20

13. 15.

    Composición farmacéutica según la reivindicación 14, que comprende además un segundo agente terapéutico.

14. 16.

    Procedimiento para preparar una composición farmacéutica que comprende combinar un compuesto según

    cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 con un vehículo farmacéuticamente aceptable. 25

    46

    imagen9