ES2534313T3 - Anticuerpos anti-CXCR4 para el tratamiento del VIH - Google Patents
Anticuerpos anti-CXCR4 para el tratamiento del VIH Download PDFInfo
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Abstract
Anticuerpo anti-CXCR4 aislado, o uno de sus fragmentos funcionales, siendo dicho fragmento funcional seleccionado de entre los fragmentos Fv, Fab, (Fab')2, Fab', scFv, scFv-Fc y diacuerpos, caracterizado por que comprende: - una cadena ligera que comprende CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 que comprenden respectivamente la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 1, 2 y 3; y una cadena pesada que comprende CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3 que comprenden respectivamente la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 4, 5 y 6; o - una cadena ligera que comprende CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 que comprenden respectivamente la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 1, 2 y 30; y una cadena pesada que comprende CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3 que comprenden respectivamente la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 31, 32 y 33.
Description
E10721376
31-03-2015
Tabla 2 (en la que Mu = murino)
- Anticuerpo
- numeración de CDR Cadena pesada Cadena ligera SEC ID nº
- 515H7
- IMGT CDR-L1 1
- CDR-L2
- 2
- CDR-L3
- 3
- CDR-L1
- 4
- CDR-L2
- 5
- CDR-L3
- 6
- Kabat
- CDR-L1 9
- CDR-L2
- 10
- CDR-L3
- 3
- CDR-L1
- 11
- CDR-L2
- 12
- CDR-L3
- 13
- Dominio variable Mu
- 7
- Dominio variable Mu
- 8
- 301aE5
- IMGT CDR-L1 1
- CDR-L2
- 2
- CDR-L3
- 30
- CDR-L1
- 31
- CDR-L2
- 32
- CDR-L3
- 33
- Kabat
- CDR-L1 9
- CDR-L2
- 36
- CDR-L3
- 37
- CDR-L1
- 38
- CDR-L2
- 39
- CDR-L3
- 40
- Dominio variable Mu
- 34
- Dominio variable Mu
- 35
Un aspecto adicional importante particular de los anticuerpos objeto de la presente invención consiste en que no 5 muestran unas funciones efectoras, tales como la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y/o citotoxicidad dependiente de complemento (CDC).
Más particularmente, como un ejemplo, los anticuerpos de la invención, o uno de sus fragmentos funcionales de los mismos, no presentan afinidad por el FcγR (I, II o III) o por la C1q, o para ambos. 10 Estructuralmente, esto significa para el experto en la materia que los anticuerpos de la invención, o uno de sus fragmentos funcionales de los mismos, están desprovistos de la porción Fc o su porción Fc no presenta una glicosilación correcta que permita conferir unas funciones efectoras.
15 Una consecuencia de esto consiste en que los anticuerpos de la invención son seleccionados preferentemente de entre isotipos IgG4 o IgG2, más preferentemente IgG4.
De manera similar, los fragmentos preferidos son fragmentos desprovistos de ADCC tales como fragmentos o diacuerpos de Fv, scFv (sc para la cadena sencilla), Fab, F(ab’)2, Fab’, scFv-Fc, o cualquier fragmento cuya vida 20 media podría ser aumentada mediante modificación química, tal como la adición de poli(alquilén) glicol tal como poli(etilén) glicol (“PEGilación”) (fragmentos pegilados denominados Fv-PEG, scFv-PEG, Fab-PEG, F(ab’)2-PEG o Fab’-PEG) (“PEG” para poli(etilén) glicol, o mediante la incorporación en un liposoma.
Más particularmente, un fragmento funcional preferido de la invención derivado del anticuerpo 515H7 es scFv, al que 25 se hace referencia en adelante en la presente memoria como fragmento 515H7 scFv-Ck, comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 54.
La secuencia de nucleótidos que corresponde a dicho scFv comprende la secuencia SC ID nº 55.
30 Otro aspecto específico de la presente invención se refiere a anticuerpos híbridos, o sus compuestos derivados o fragmentos funcionales, caracterizados por que dichos anticuerpos comprenden asimismo unas regiones constantes de cadena ligera y cadena pesada derivadas de un anticuerpo de una especie heteróloga con el ratón, particularmente el ser humano.
35 Todavía otro aspecto específico de la presente invención se refiere a anticuerpos humanizados, o sus compuestos
12
E10721376
31-03-2015
Tabla 5 (en la que Mu. = murino)
- Anticuerpo
- Numeración de CDR Cadena pesada Cadena ligera SEC ID nº
- 515H7
- iMGT CDR-L1 14
- CDR-L2
- 15
- CDR-L3
- 16
- CDR-H1
- 17
- CDR-H2
- 18
- CDR-H3
- 19
- KABAT
- CDR-L1 22
- CDR-L2
- 23
- CDR-L3
- 16
- CDR-H1
- 24
- CDR-H2
- 25
- CDR-H3
- 26
- Dominio variable Mu.
- 20
- Dominio variable Mu.
- 21
- 301aE5
- IMGT CDR-L1 41
- CDR-L2
- 15
- CDR-L3
- 42
- CDR-H1
- 43
- CDR-H2
- 44
- CDR-H3
- 45
- CDR-L1
- 48
- KABAT
- CDR-L2 49
- CDR-L3
- 50
- CDR-H1
- 51
- CDR-H2
- 52
- CDR-H3
- 53
- Dominio variable Mu.
- 46
- Dominio variable Mu.
- 47
Las expresiones "ácido nucleico", "secuencia nucleica", "secuencia de ácido nucleico", "polinucleótido", 5 "oligonucleótido", "secuencia polinucleotídica" y "secuencia nucleotídica", utilizada indistintamente en la presente descripción, significa una secuencia precisa de nucleótidos, modificados o no, que define un fragmento o una región de un ácido nucleico, que contiene nucleótidos artificiales o no, y que es un ADN bicatenario, un ADN monocatenario
o los productos de transcripción de dichos ADN.
10 También debe incluirse en la presente memoria que la presente invención no se refiere a secuencias nucleotídicas en su medio cromosómico natural, es decir, en un estado natural. Las secuencias de la presente invención se han aislado y/o purificado, es decir, se tomaron muestras directa o indirectamente, por ejemplo, mediante una copia, habiéndose modificado su medio por lo menos parcialmente. Los ácidos nucleicos aislados obtenidos por genética recombinante, por medio, por ejemplo, de células hospedadoras, u obtenidos por síntesis química también deben
15 mencionarse en la presente memoria.
"Secuencias nucleicas que presentan un porcentaje de identidad de por lo menos 80%, preferentemente 85%, 90%, 95% y 98%, después de la alineación óptima con una secuencia preferida" significa secuencias nucleicas que presentan, con respecto a la secuencia nucleico de referencia, determinadas modificaciones tales como, en
20 particular, una supresión, un truncamiento, una extensión, una fusión híbrida y/o una sustitución, en particular puntual. Preferentemente, estos son secuencias que codifican las mismas secuencias de aminoácidos que la secuencia de referencia, estando ésta relacionada con la degeneración del código genético, o secuencias de complementariedad que son probablemente para hibridarse específicamente con las secuencias de referencia, preferentemente en condiciones muy rigurosas, en particular las que se definen a continuación.
25 Hibridación en condiciones muy rigurosas significa que se seleccionan condiciones relacionadas con la temperatura y la fuerza iónica de tal manera que permiten que la hibridación se mantenga entre dos fragmentos de ADN complementarios. Sobre una base puramente ilustrativa, las condiciones muy rigurosas de la etapa de hibridación a fin de definir los fragmentos de polinucleótidos descritos anteriormente son ventajosamente las siguientes.
30 La hibridación de ADN-ADN o ADN-ARN se lleva a cabo en dos etapas: (1) prehibridación a 42°C durante tres horas en tampón de fosfato (20 mM, pH 7,5) que contienen 5X SSC (1X SSC corresponde a una solución de NaCl 0,15 M
+ citrato de sodio 0,015 M), 50% de formamida, 7% de dodecil sulfato de sodio (SDS), 10X solución de Denhardt, 5% de sulfato de dextrano y 1% de ADN de esperma de salmón; (2) hibridación primaria durante 20 horas a una 35 temperatura en función de la longitud de la sonda (es decir: 42°C para una sonda > 100 nucleótidos de longitud)
17
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