ES2533954T3

ES2533954T3 - Derivados de resorcinol como inhibidores de HSP90

Info

Publication number: ES2533954T3
Application number: ES10714268.9T
Authority: ES
Inventors: Maria Gabriella Brasca; Elena Casale; Ron Ferguson; Paolo Polucci; Fabio Zuccotto
Original assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Current assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Priority date: 2009-04-21
Filing date: 2010-04-16
Publication date: 2015-04-16
Anticipated expiration: 2030-04-16
Also published as: US8993556B2; HK1166077A1; EP2421833B1; WO2010121963A1; TW201041856A; AR076645A1; CN102438988B; JP2012524743A; CN102438988A; EP2421833A1; JP5731479B2; US20120046266A1

Abstract

Un compuesto de la fórmula (I):**Fórmula** en donde: Z es -CH>=CH-, -(CH2)p, en donde p es 0, 1, 2 o 3, NH, O, S, >S>=O, >SO2 o >C>=O; R es un alquilo C1-C7, alquenilo C2-C7 o alquinilo C2-C7, lineal o ramificado, opcionalmente sustituido, cicloalquilo C3- C7, cicloalquenilo C4-C7, fenilo, naftilo, heteroarilo de 5 o 6 miembros, anillo heterocíclico saturado o parcialmente saturado que comprende uno o más átomos de oxígeno, azufre o nitrógeno, o es un grupo CONHR2, CH2NHR2, NHCOR2, NHCONHR2 en donde R2 es un grupo alquilo C1-C7, alquenilo C2-C7 o alquinilo C2-C7 lineal o ramificado, opcionalmente sustituido, cicloalquilo C3-C7, cicloalquenilo C4-C7, fenilo, naftilo, heteroarilo de 5 o 6 miembros, anillo heterocíclico saturado o parcialmente saturado que comprende uno o más átomos de oxígeno, azufre o nitrógeno; X es N, NH u O; W es CH e Y es N, NH u O; R1 es grupo NH2, NHCONHR2, NHCOR2, NHSO2R2 o CONHR2, en donde R2 es como se define anteriormente; el anillo que contiene X, Y y W como se define anteriormente que es un grupo heteroarilo, en donde los sustituyentes opcionales en esta memoria se seleccionan independientemente de: halógeno, nitro, grupos oxo (>=O) ciano, alquilo C1-C6, alquilo polifluorado, alcoxi polifluorado, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, hidroxialquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, cicloalquilo C3-C7, hidroxi, alcoxi, ariloxi, heterocicliloxi, metilenodioxi, alquilcarboniloxi, arilcarboniloxi, cicloalqueniloxi, heterociclilcarboniloxi, alquilidenoaminooxi, carboxi, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, cicloalquiloxicarbonilo, heterociclilalquiloxicarbonilamino, ureido, alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino, heterociclilamino, formilamino, alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, heterociclilcarbonilamino, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, heterociclilaminocarbonilo, alcoxicarbonilamino, hidroxiaminocarbonilalcoxiimino, alquilsulfonilamino, arilsulfonilamino, heterociclilsulfonilamino, formilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, cicloalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo, arilaminosulfonilo, heterociclilaminosulfonilo, ariltio, alquiltio, fosfonato y alquilfosfonato, a su vez, cuando sea apropiado, cada uno de los sustituyentes anteriores pueden estar sustituidos adicionalmente por uno o más de los grupos mencionados anteriormente; o una de sus sales farmacéuticamente aceptable.

Description

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11.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(2-metoxietil)isoxazol-3-carboxamida,

12.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(3-metoxipropil)isoxazol-3-carboxamida,

13.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(2-fluoroetil)isoxazol-3-carboxamida,

14.: N-[2-(acetilamino)etil]-5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida,

15.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[3-(dimetilamino)propil]isoxazol-3-carboxamida,

16.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[2-(1-metilpirrolidin-2-il)etil]isoxazol-3-carboxamida,

17.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[(1-metilpiperidin-4-il)metil]isoxazol-3-carboxamida,

18.: N-(acetidin-3-ilmetil)-5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida,

19.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N,N-dimetilisoxazol-3-carboxamida,

20.: 5-[2-(4-aminofenoxi)-4,6-dihidroxifenil]-N-etilisoxazol-3-carboxamida,

21.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(furan-2-ilmetil)isoxazol-3-carboxamida,

22.: N-bencil-5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida,

23.: N-(ciclohexilmetil)-5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida,

24.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[3-(1H-imidazol-1-il)propil]isoxazol-3-carboxamida,

25.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[2-(piperidin-1-il)etil]isoxazol-3-carboxamida,

26.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[2-(morfolin-4-il)etil]isoxazol-3-carboxamida,

27.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[3-(2-oxopirrolidin-1-il)propil]isoxazol-3-carboxamida,

28.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[3-(4-metilpiperazin-1-il)propil]isoxazol-3-carboxamida, terc-butilo,

29.: {2-[({5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-il}carbonil)amino]etil}metilcarbamato,

30.: N-(trans-4-aminociclohexil)-5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida,

31.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(trans-4-hidroxiciclohexil)isoxazol-3-carboxamida,

32.: 4-[({5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-il}carbonil)amino]piperidina-1-carboxilato de terc-butilo,

33.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(piperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida,

34.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida,

35.: N-ciclohexil-5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida,

36.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[2-(metilamino)etil]isoxazol-3-carboxamida,

37.: 5-{2-[4-(bencilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-etilisoxazol-3-carboxamida,

38.: 5-{2-[4-(acetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-etilisoxazol-3-carboxamida,

39.: 5-[2-(4-amino-3-clorofenoxi)-4,6-dihidroxifenil]-N-etilisoxazol-3-carboxamida,

40.: 5-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-etilisoxazol-3-carboxamida,

41.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida,

42.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida,

43.: 5-{2,4-dihidroxi-6-[4-(propan-2-ilamino)fenoxi]fenil}-N-etilisoxazol-3-carboxamida,

44.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(piperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida,

45.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[1-(propan-2-il)piperidin-4-il]isoxazol-3-carboxamida,

46.: N-(1-ciclohexilpiperidin-4-il)-5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida,

47.: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[1-(4-hidroxiciclohexil)piperidin-4-il]isoxazol-3-carboxamida,

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115.: N-[1'-(ciclohexilmetil)-1,4'-bipiperidin-4-il]-5-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}isoxazol-3-carboxamida,

116.: N-(1'-bencil-1,4'-bipiperidin-4-il)-5-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}isoxazol-3-carboxamida,

117.: (4-{4-[({5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-il}carbonil)amino]piperidin-1-il}butil)carbamato de tercbutilo,

118.: N-[1-(4-aminobutil)piperidin-4-il]-5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida

119.: (3-{4-[({5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-il}carbonil)amino]piperidin-1-il}propil)carbamato de tercbutilo,

120.: N-[1-(3-aminopropil)piperidin-4-il]-5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida,

121.: 5-{2,4-dihidroxi-6-[4-(tetrahidro-2H-piran-4-ilamino)fenoxi]fenil}-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida,

122.: 5-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida,

123.: 5-{2,4-dihidroxi-6-[4-(propan-2-ilamino)fenoxi]fenil}-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida,

124.: 5-{2-[4-(ciclobutilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida,

125.: 5-{2,4-dihidroxi-6-[4-(pirrolidin-1-il)fenoxi]fenil}-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida,

126.: 3-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-5-carboxamida,

127.: 3-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-5-carboxamida,

128.: 3-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-5-carboxamida,

129.: 4-{[(3-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}isoxazol-5-il)carbonil]amino}piperidina-1-carboxilato de tercbutilo,

130.: 3-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-(piperidin-4-il)isoxazol-5-carboxamida,

131.: 3-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-[1-(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-il)piperidin-4-il]isoxazol-5carboxamida,

132.: 3-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-[1-(3,3-dimetil-1,5-dioxaspiro[5.5]undec-9-il)piperidin-4il]isoxazol-5-carboxamida,

133.: 5-[2-(benciloxi)-4,6-dihidroxifenil]-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida,

134.: 4-(3-aminoisoxazol-5-il)-5-(4-nitrofenoxi)benceno-1,3-diol,

135.: 1-{5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-il}-3(1-metilpiperidin-4-il)urea,

136.: N-{5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-il}-1-metilpiperidina-4-carboxamida y

137.: N-{5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-il}etanosulfonamida.

La presente invención también proporciona un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) como se define anteriormente, caracterizado en que el procedimiento comprende: 1a) condensar un compuesto de fórmula (II):

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en donde PG representa un grupo bencilo (Bn), metilo (Me), metoximetilo (MOM) o 2-metoxietoximetilo (MEM) y Z y R son como se definen anteriormente, con oxalato de etilo en presencia de una base tal como hidruro sódico, etóxido sódico, bis-trimetilsililamida de litio en un disolvente tal como tetrahidrofurano (THF), dioxano;

1 b) hacer reaccionar el compuesto resultante de fórmula (III):

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o bien 7a) hacer reaccionar cualquiera de los compuestos de fórmula (IV), (V) y (XXI) como se define anteriormente con una base inorgánica tal como NaOH, LiOH, KOH en un disolvente tal como etanol, metanol, THF y

7b) hacer reaccionar el compuesto resultante de fórmula (XXIII):

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en donde X, Y, W, PG, Z y R son como se definen anteriormente, con R2NH2 en donde R2 se define como anteriormente, en presencia de un agente activante tal como DIC, TBTU, HOBT, EDC, DCC en un disolvente tal como THF, dioxano, DMF, DMA, para así obtener un compuesto de fórmula (XXIV):

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en donde X, Y, W, PG, Z, R y R2 son como se definen anteriormente;

10 o 7a') hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IV), (V) y (XXI) como se definen anteriormente con R2NH2 en donde R2 se define como anteriormente, en presencia de un catalizador tal como cianuro de potasio, piridina-2-ol, en disolvente tal como etanol, THF, dioxano, DMF, para dar un compuesto de fórmula (XXIV) como se define anteriormente;

o 7b') hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XXIII) como se define anteriormente con difenilfosforilazida 15 (DPPA) en presencia de TEA o DIPEA en un disolvente tal como dioxano, THF a reflujo;

7c') hacer reaccionar el compuesto resultante de fórmula (XXV):

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en donde X, Y, W, PG, Z y R son como se definen anteriormente, con R2NH2 en donde R2 es como se define anteriormente, en un disolvente tal como dioxano, THF, DMF, para dar un compuesto de fórmula (XXVI):

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en donde X, Y, W, PG, Z, R y R2 son como se definen anteriormente;

: o 7c") hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XXV) como se define anteriormente, con H2O, en un disolvente tal como dioxano, THF, DMF en presencia de HCl, ácido acético, H2SO4 y

: o bien 7d) hacer reaccionar el compuesto resultante de fórmula (XXVII):

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en donde X, Y, W, PG, Z y R son como se definen anteriormente, con R2COOH en presencia de un agente activante tal como CDI, TBTU, EDC, DIC o DCC en presencia de HOBT, en un disolvente tal como THF, DMF, DMA o con R2COCl en un disolvente tal como THF, piridina, CHCl3 en presencia de una base orgánica tal como trietilamina, 4metilmorfolina, etildiisopropilamina para dar un compuesto de fórmula (XXVIII):

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en donde X, Y, W, PG, Z, R y R2 son como se definen anteriormente;

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o 7d') hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XXVII) como se define anteriormente, con R2SO2Cl, en un disolvente tal como THF, piridina, CHCl3 en presencia de una base orgánica tal como trietilamina, 4-metilmorfolina, etildiisopropilamina, para dar un compuesto de fórmula (XXIX):

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en donde X, Y, W, PG, Z, R y R2 son como se definen anteriormente; 8a) desproteger cualquiera de los compuestos resultantes de la fórmula (XXX):

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en donde Z y R son como se definen anteriormente y R'1 es R1 o un grupo COOC2H5 o COOH, para dar un compuesto de fórmula (XXXI):

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en donde X, Y, W , Z son como se definen anteriormente y R'1 es un grupo COOC2H5 o COOH, o para dar un compuesto de la formula (I) como se define anteriormente, llevándose a cabo la desprotección por tratamiento o bien con H2 y un catalizador adecuado, en un disolvente tal como ácido acético, etanol o metanol cuando PG es un grupo bencilo, o con BCl3 o BBr3 en un disolvente tal como CH2Cl2, CHCl3, ClCH2CH2Cl, CH3CN, cuando PG es un grupo bencilo o metilo; o

9a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XXX) como se define anteriormente, en donde PG es un grupo metoximetilo o 2-metoxietoximetilo, con disolución acuosa de HCl, disolución acuosa de H2SO4 o disolución acuosa de ácido trifluoroacético en un disolvente tal como etanol, metanol, para dar un compuesto de fórmula (XXXI) o un compuesto de fórmula (I) como se define anteriormente; o

10a) convertir un compuesto de fórmula (XXXI) como se define en un compuesto de fórmula (I) mediante reacciones químicas conocidas.

Ejemplos de reacciones posibles para una conversión de etapa 10a anterior son:

1) hidrólisis bajo condición ácida o básica de un compuesto de fórmula (XXXI) en donde R'1 es un grupo COOC2H5 para la conversión en un compuesto de fórmula (XXXI) en donde R'1 es un COOH, según procedimientos estándar como se presenta en The Chemistry of Carboxylic Acids and Esters, Saul Patai, Interscience Publisher (John Wiley&Sons 1969), y posterior amidación para obtener las correspondientes amidas de la fórmula (I), en donde R1 es un grupo CONHR2, en donde R2 es como se define anteriormente, bajo condiciones conocidas;

2) amidación directa de un compuesto de fórmula (XXXI) en donde R'1 es un grupo COOC2H5 para obtener las amidas correspondientes de la fórmula (I) en donde R1 es un grupo CONHR2, en donde R2 es como se define anteriormente, por reacción con una amina primaria adecuada según los procedimientos estándar como se presenta en The Chemistry of Amides, Saul Patai, Interscience Publisher (John Wiley&Sons 1970).

Si fuera necesario o se quisiera, el procedimiento comprende convertir un compuesto de fórmula (I) en un compuesto diferente de fórmula (I) por reacciones químicas conocidas; y/o, si se desea, convertir un compuesto de fórmula (I) en una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o convertir una sal en el compuesto libre de fórmula (I).

Ejemplos de posibles reacciones para dicha conversión son:

1) reducción de derivados de amida por conversión en las aminas correspondientes según procedimientos estándar como se presenta en The Chemistry of Amino Group, Saul Patai, Interscience Publisher (John Wiley&Sons 1968);

2) cetalización de derivados de carbonilo por conversión en los cetales correspondientes según procedimientos estándar como se presenta en The Chemistry of Carbonil Group, Saul Patai, Interscience Publisher (John Wiley&Sons 1966);

3) alquilación o alquilación reductora de aminas primarias o secundarias en las aminas secundarias y terciarias correspondientes según el procedimiento estándar como se presenta en The Chemistry of Amino Group, Saul Patai,

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Interscience Publisher (John Wiley&Sons 1968), o J. Am. Chem. Soc., 1971, 93, 2897, o en Comprensive Organic

Synthesis, Trost B. N., Fleming L, (Eds. Pergamon Press: Nueva York, 1991; Vol, 8). Los siguientes intermedios útiles son los ésteres de la fórmula (IV), (V) y (XXI) como se define anteriormente, y también son objeto de la presente invención, con la condición de que:

éster etílico de ácido 5-((2,4,5-trimetoxifenil)-3-isoxazolcarboxílico, éster etílico de ácido 5-[5-etil-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxílico, éster etílico de ácido 5-[5-(2-metilpropil)-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxílico, éster etílico de ácido 5-[5-(1-metiletil)-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxílico, éster etílico de ácido 5-[5-(1,1-dimetiletil)-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxílico y éster etílico de ácido 3-((2,4,6-trimetoxifenil)-5-isoxazolcarboxílico están excluidos. Otros intermedios útiles son los ácidos de la fórmula (XXIII) como se define anteriormente, y también son objeto de

la presente invención, con la condición de que: ácido 3-((2,4,5-trimetoxifenil)-5-isoxazolcarboxílico, ácido 3-((2,4,6-trimetoxifenil)-5-isoxazolcarboxílico, ácido 2-((2,4,5-trimetoxifenil)-5-tiazolcarboxílico, ácido 2-((2,4,6-trimetoxifenil)-5-tiazolcarboxílico, ácido 5-((2,4,5-trimetoxifenil)-3-isoxazolcarboxílico y ácido 5-((2,4,6-trimetoxifenil)-3-isoxazolcarboxílico están excluidos. Otros intermedios útiles son las amidas de la fórmula (XXIV) como se define anteriormente, y también son objeto de

la presente invención, con la condición de que: N-etil-5-[4'-fluoro-4,6-bis(fenilmetoxi)[1,1'-bifenil]-3-il]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[2'-metil-4,6-bis(fenilmetoxi)[1,1'-bifenil]-3-il]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[2'-fluoro-4,6-bis(fenilmetoxi)[1,1'-bifenil]-3-il]-3-isoxazolcarboxamida, 5-[4,6-bis(fenilmetoxi)[1,1'-bifenil]-3-il]-N-etil-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-[2-(3-fluorofenil)etil]-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-[2-(3-fluorofenil)etenil]-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-[2-(4-fluorofenil)etil]-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-[(1E)-2-(4-fluorofenil)etenil]-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-etil-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-lsoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-[(1E)-2-feniletenil]-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-(2-metilpropil)-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-(1-metiletil)-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, 5-[5-(1,1-dimetiletil)-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-N-etil-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-(2-feniletil)-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-(2-feniletenil)-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida y

N-[5,6,7,8-tetrahidro-6-(1-piperidinilmetil)-2-naftalenil]-3-(2,4,5-trietoxifenil)-5-isoxazolcarboxamida están excluidos.

Otros intermedios útiles son los compuestos de la fórmula (XXXI) como se definen anteriormente, y también son objeto de la presente invención, con la condición de que: ácido 1H-pirazol-3-carboxílico, 5-[5-[5-(hidrazinilcarbonil)-1H-pirazol-3-il]-2,4-dihidroxifenil]-, etiléster y

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ácido 1H-pirazol-3-carboxílico, 5,5'-(4,6-dihidroxi-1,3-fenileno)bis-, dietiléster están excluidos.

Específicamente, la presente invención proporciona los siguientes compuestos intermedios: ácido 5-[2,4-dihidroxi-6(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxílico y 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxilato de metilo.

La síntesis de un compuesto de fórmula (I), según el procedimiento sintético descrito anteriormente, puede realizarse en una manera de etapas, así cada intermedio se aísla y purifica por técnicas de purificación estándar, como, por ejemplo, cromatografía en columna, antes de realizar la reacción posterior. De forma alternativa, dos o más etapas de la secuencia sintética pueden realizarse en un procedimiento denominado "en un reactor", como se conoce en la técnica, así solo el compuesto resultante de las dos o más etapas se aísla y purifica.

Según cualquier variante del procedimiento para preparar los compuestos de fórmula (I), los materiales de partida y cualquier otro reactivo se conocen o se preparan fácilmente según métodos conocidos. Como un ejemplo, los compuestos de fórmula (II) y (XXII) están disponibles comercialmente o pueden prepararse según síntesis química bien conocida, como por ejemplo se describe en los siguientes ejemplos.

Farmacología

Las potencias de los compuestos de la presente invención se evaluaron midiendo la degradación de Her2 como un marcador para la inhibición de HSP90.

HSP90 es un componente clave de una maquinaria de chaperona que cataliza el plegado y control de calidad de varias proteínas. Su inhibición perjudica la capacidad de plegar o estabilizar sus proteínas cliente, llevando a la degradación dependiente de proteosoma de estas proteínas no plegadas. En este momento, hay un número creciente (>100) de clientes de HSP90 presentados, pero una de las formas más frecuentes para detectar la inhibición de HSP90 chaperona es la detección de niveles de proteína Her2 después de tratamiento de corto tiempo (normalmente 8-24h), para estar seguros sobre la especificidad de este efecto. La actividad celular de inhibidores de HSP90 se evaluó midiendo la pérdida inducida de niveles de proteína Her2 en células de cáncer de mama BT474 (ATTCC núm. HTB-20). Los niveles de Her2 celular se midieron por inmunocitoquímica, y se cuantificaron usando un instrumento ArrayScan vTi (Cellomics Thermo Scientific).

Ensayo de degradación de Her2

La actividad celular de inhibidores de HSP90 se evaluó midiendo la pérdida inducida de niveles de proteína Her2 en células de cáncer de mama BT474 (ATTCC núm. HTB-20). Los niveles de Her2 celular se midieron por inmunocitoquímica, y se cuantificaron usando un instrumento ArrayScan vTi (Cellomics Thermo Scientific).

Los estudios se realizaron como sigue: 5000 células/pocillo se siembran en platos de 96 pocillos (Perkin Elmer) en DMEM / FCS al 5% y se incuban durante 48 horas a 37°C, 5% de CO2.

El medio se sustituye entonces con medio fresco que contiene compuestos de ensayo a la concentración necesaria. Las curvas de concentración se preparan en DMEM/FCS al 10% a partir de existencias de compuesto en DMSO, y la concentración final en DMSO es 0,1% (v/v). Se preparan pocillos duplicados para cada punto de concentración, con una concentración de compuesto más alta típica de 30 µM. Después de la adición del compuesto, los platos se devuelven a la incubadora durante 8 horas, después se fijan sustituyendo el medio con PBS que contiene 3,7% de disolución de paraformaldehído. Los platos se incuban durante 20 minutos a temperatura ambiente, después los pocillos se lavan en PBS y las células se permeabilizan incubando con PBS que contiene 0,3% de Triton X-100 durante 15 minutos a temperatura ambiente. Se bloquean los sitios de unión no específica incubando pocillos durante 1 hora en PBS que contiene 3% (p/v) de BSA. Los pocillos se incuban entonces durante 1 hora a temperatura ambiente en PBS que contiene monoclonal de ratón anti Her2 (Anti-c-ErbB2/c-Neu, Ratón mAb 3B5, Calbiochem Cat N° OP15) diluido 1:100 en 1% (p/v) de BSA. Después de 3 lavados en PBS, los pocillos se incuban en PBS (p/v) 1% de BSA que contiene unos 2 µg/ml de anticuerpo secundario anti ratón de cabra conjugado con Cy2 (Amersham Pharmacia Biothech cat. N° PA 42002) (Absorción máxima 489 nm fluorescencia máxima 506 nm) y 1 µg/ml de DAPI (Absorción máxima 359 nm fluorescencia máxima 461 nm) (4',6-Diamidina-2-fenilindol, dilactato) (Sigma cat. N° D 9564) un tinte de alta sensibilidad para detectar ácido nucleico por teñido nuclear. Después de lavar unas 3 veces adicionales en PBS, la inmunorreactividad de Her2 celular se evalúa usando el instrumento ArrayScan vTi, con un objetivo Zeiss 10X 0,5 N.A., y aplicando el algoritmo Citotoxicidad.V3 (Cellomics/Thermo Fisher) con un filtro XF100. Al menos 10 campos, que corresponden a al menos 900 células, se leen para cada pocillo. Los valores IC50 representan la concentración de compuesto al que la señal de Her2 celular se disminuye en 50% en comparación con los controles no tratados.

La siguiente fórmula se usa:

IC50 es la respuesta; IC50 comienza al fondo y va a la parte superior con una forma sigmoide.

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Ensayo de proliferación celular in vitro

Células de ovario humano A2780 (1250 células/pocillo) se sembraron en platos blancos de 384 pocillos en medio completo (RPMI1640 o EMEM más 10% de suero bovino fetal) y se trataron con compuestos disueltos en 0,1% de DMSO, 24h después de la siembra. Las células se incubaron a 37°C y 5 % de CO2 y después de 72 horas los platos se procesaron usando ensayo CellTiter-Glo (Promega) siguiendo las instrucciones del fabricante.

CellTiter-Glo es un método homogéneo basado en la cuantificación del ATP presente, un indicador de células metabólicamente activas. ATP se cuantifica usando un sistema basado en luciferasa y D-luciferina que resulta en generación de luz. La señal luminiscente es proporcional al número de células presentes en el cultivo.

Brevemente 25 µL/pocillo de disolución reactiva se añaden a cada pocillo y después de 5 minutos agitando los microplatos son rojos mediante un luminómetro. La señal luminiscente es proporcional al número de células presentes en el cultivo.

Determinación de KD por medio de Biacore

La evaluación de la afinidad de unión (KD) de los compuestos de fórmula (I) a la proteína HSP90 se hizo usando Biacore T100.

El dominio del extremo N de His-HSP90 se inmovilizó por captura de su marca mediante el Ab unido de forma covalente anteriormente a la superficie del chip (CM5). Un procedimiento de reticulado corto después de la unión a HSP90 fue necesario para obtener una señal más estable.

Los compuestos se analizaron usando el siguiente tampón de marcha: Tris/HCl 20 mM pH 7,6, KCI 150 mM, MgCl2 5 mM, 0,05% de P20 y 1% de DMSO. El caudal fue de 50 ul/min con un tiempo de asociación de 60 segundos. Los cpds se diluyeron en tampón de marcha a partir de disolución madre 100X; las diferentes concentraciones inyectadas se obtuvieron a partir de una dilución secuencial para tener la misma concentración de DMSO en cada muestra y evitar cualquier corrección de disolvente.

Una serie de 5 inyecciones secuenciales de concentraciones crecientes de compuesto se realizaron y los resultados se analizaron usando un método presentado en la bibliografía (Robert Karlsson et al "Analyzing a kinetic titration series using affinity biosensors". (Analitical Biochemistry 349 (2006) 136-147). Cada análisis se realizó dos veces, mostrando una muy alta reproducibilidad de los resultados.

Dados los ensayos anteriores, los compuestos de fórmula (I) resulta que poseen una notable actividad inhibidora de HSP90, como se prueba por la inducción de la degradación de proteína Her2, actividad inhibidora de la proliferación celular (línea celular A2780) y alta afinidad de unión a la proteína, como se muestra en la siguiente Tabla 1.

Tabla 1

Compuesto: IC50 de degradación de Her2 (µM) IC50 de proliferación de A2780 (µM) Kd (nM) Biacore

5-[2,4-Dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-etilisoxazol-3-carboxamida: 0,059 0,07 0,8

5-[2-(4-Clorofenoxi)-4,6-dihidroxifenil]-N-etilisoxazol-3-carboxamida: 0,059 0,304 9,2

5-[2,4-Dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[1-(propan-2-il)piperidin-4il]isoxazol-3-carboxamida: 0,058 0,05 3,2

5-[2,4-Dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[1-(4,4,4-trifluorobutil)piperidin-4il]isoxazol-3-carboxamida: 0,071 0,06

N-(1-Ciclohexilpiperidin-4-il)-5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol3-carboxamida: 0,071 0,04 0,3

5-{2-[4-(Dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-(1-metilpiperidin-4il)isoxazol-3-carboxamida: 0,039 0,03 0,12

5-[2-(4-Cianofenoxi)-4,6-dihidroxifenil]-N-etilisoxazol-3-carboxamida: 0,277 0,147

N-[1-(4,4-Difluorociclohexil)piperidin-4-il]-5-[2,4-dihidroxi-6-(4nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida: 0,027 0,05 0,8

5-[2,4-Dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-3: 0,11 0,06 0,35

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carboxamida

5-{2-[4-(Dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-[1-(1,4dioxaspiro[4.5]dec-8-il)piperidin-4-il]isoxazol-3-carboxamida: 0,012 0,02 0,057

3-{2-[4-(Dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-[1-(1,4dioxaspiro[4.5]dec-8-il)piperidin-4-il]isoxazol-5-carboxamida: 0,003 0,020 0,043

3-{2-[4-(Dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-(1-metilpiperidin-4il)isoxazol-5-carboxamida: 0,008 0,03 0,066

5-(2,4-Dihidroxi-6-{4-[(1-metiletil)amino]fenoxi}fenil)-N-(1-metilpiperidin-4il)isoxazol-3-carboxamida: 0,065 0,020 0,218

5-{2-[4-(Dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-[1-(3,3-dimetil-1,5dioxaspiro[5.5]undec-9-il)piperidin-4-il]isoxazol-3-carboxamida: 0,037 0,035 0,080

5-{2-[4-(Dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-[1-(7,12dioxaspiro[5.6]dodec-3-il)piperidin-4-il]isoxazol-3-carboxamida: 0,045 0,023 0,423

5-{2-[4-(Dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-[1-(1,5dioxaspiro[5.5]undec-9-il)piperidin-4-il]isoxazol-3-carboxamida: 0,038 0,021 0,079

N-[1-(Ciclohexilmetil)piperidin-4-il]-5-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6dihidroxifenil}isoxazol-3-carboxamida: 0,020 0,010 0,188

N-[1-(4,4-Difluorociclohexil)piperidin-4-il]-5-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6dihidroxifenil}isoxazol-3-carboxamida: 0,002 0,020 0,057

3-[2,4-Dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-5carboxamida: 0,022 0,020 0,24

N-(1-Ciclohexilpiperidin-4-il)-5-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6dihidroxifenil}isoxazol-3-carboxamida: 0,003 0,020 0,09

Eficacia antitumoral in vivo

La actividad antitumoral de los inhibidores de HSP90 se evaluó in vivo usando la línea celular de carcinoma de ovario humano A2780 trasplantado en ratones inmunodeficientes. Este modelo tumoral se seleccionó en base a la 5 sensibilidad demostrada en el ensayo basado en células a inhibidores de HSP90.

El estudio se realizó como sigue:

Balb Nu/Nu, ratones macho, (ratones atímicos) de Harlan, Italia, se mantuvieron en jaulas con coberturas de filtro de papel, comida y camas esterilizadas y agua acidulada. Los tumores de A2780 se mantuvieron in vivo por trasplante en serie y, en el momento de los experimentos de eficacia, se implantaron de forma subcutánea en ratones atímicos.

10 Los tratamientos comenzaron 8 días más tarde cuando los tumores fueron evidentes. Los inhibidores de HSP90 se prepararon inmediatamente antes de usar y se administraron de forma intravenosa en un volumen de 10 ml/kg a dosis diferentes.

El crecimiento tumoral se evaluó por calibrado. Los dos diámetros se grabaron, y el peso tumoral se calculó según la siguiente fórmula: longitud (mm) x anchura2 (mm)/2. El efecto del tratamiento antitumoral se determinó como

15 inhibición de crecimiento tumoral (TGI %) del grupo tratado respecto a los controles tratados con vehículo.

El compuesto 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida, se administró a 30 y 60 mg/kg durante 10 días consecutivos. Cada 3 días el crecimiento tumoral y el peso corporal neto se evaluaron. Dicho compuesto mostró una actividad antitumoral significativa con un TGI de 74% a 60 mg/kg y 53% a 30 mg/kg, sin señales de toxicidades.

20 En el mismo modelo distintos compuestos mostraron actividad antitumoral significativa: por ejemplo:

5-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-[1-(1,5-dioxaspiro[5.5]undec-9-il)piperidin-4-il]isoxazol-3carboxamida y 5-{2-[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida, mostró un TGI de 92% y 77% respectivamente cuando se da de forma intravenosa a 30 y 40 mg/Kg diarios, mientras 3-{2[4-(dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-(1-metilpiperidin-4-il)isoxazol-5-carboxamida mostró una actividad

25 antitumoral medida como 88% de TGI cuando se administra de forma intravenosa a 40 mkg/kg cada tres días.

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Evaluación farmacocinética in vivo El perfil farmacocinético de los compuestos de la presente invención se investigó como se presenta en la Tabla 2. Tabla 2

Formulaciones: IV: 10% de Tween 80 en 5% de dextrosa OS: 0,5% de Methocel

Especie, Cepa y Fuente: Ratón, Balb, Nu/Nu, Harlan, Italia

Núm. de animales/género: 3/M ruta. Total: 6

Dosis, Ruta y Frecuencia: 10 mg/kg, IV Bolus, única 10 mg/kg, Oral, única

Calendario de recogida de especímenes (Sangre/plasma): IV: 0,083, 0,5; 1, 3, 6, 24 h después de la dosis; OS: 0,25, 0,5, 1, 3, 6, 24 h después de la dosis; Todas las muestras de sangre se tomaron de la vena retro-orbital.

Análisis y detalles experimentales: Bioanálisis: LC/MS/MS en sistema Waters Acquity-TQD. Farmacocinética: análisis por WinNonlin software 5.2.1. Se usó el método no compartimental (regla lineal trapezoidal y análisis de regresión lineal de concentraciones en plasma con transformada logarítmica natural frente a datos de tiempo).

5 Condiciones bioanalíticas Preparación de patrón y de muestra Patrones de calibrado y controles de calidad se prepararon echando plasma de ratón blanco con disoluciones de

trabajo apropiadas. Las proteínas de plasma de la muestra se precipitaron añadiendo 160 µL de acetonitrilo/metanol 90/10 a 20 µL de

10 plasma de ratón en un plato de 96 pocillos. Después de sellar por calor y mezclar durante 3 minutos, el plato se centrifugó durante 15 minutos a 4000 rpm. El sobrenadante se consideró como extracto final y se inyectó en el sistema LC-MS-MS. Parámetros de LC/MS/MS Sistema UPLC: Waters Acquity BSM

15 Fase móvil A: 95:5 -formiato de amonio 5 mM pH 3,5: Acetonitrilo Fase móvil B: 5:95 -Formiato de amonio 5 mM pH 3,5: Acetonitrilo Columna analítica: BEH C18 50x2.11.7 µm Condiciones de elución:

Tiempo (min): 0,00 0,80 1,00 1,01 2,00

% de A: 80 0 0 80 80

% de B: 20 100 100 20 20

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5-{2-[4-(Dimetilamino)fenoxi]-4,6-dihidroxifenil}-N-[1-(7,12-dioxaspiro[5.6]dodec3-il)piperidin-4-il]isoxazol-3-carboxamida: 6,87 5981 1312 14

Abreviaturas usadas en la Tabla 3: T1/2 (IV) = vida media terminal, Vdss = Volumen de distribución en estado estacionario, CL = aclaramiento de plasma, F = biodisponibilidad oral

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse o bien como agentes sencillos o, de forma alternativa, en combinación con tratamientos anticáncer conocidos tal como terapia de radiación o régimen de quimioterapia en combinación con agentes citostáticos o citotóxicos, agentes tipo antibiótico, agentes alquilantes, agentes antimetabolito, agentes hormonales, agentes inmunológicos, agentes tipo interferona, inhibidores de ciclooxigenasa (por ejemplo, inhibidores de COX-2), inhibidores de metaloproteasa de matriz, inhibidores de telomerasa, inhibidores de tirosina quinasa, agentes de receptor del anti-factor de crecimiento, agentes anti-HER, agentes anti-EGFR, agentes anti-angiogénesis (por ejemplo, inhibidores de angiogénesis), inhibidores de farnesil transferasa, inhibidores de la ruta de transducción de la señal ras-raf, inhibidores del ciclo celular, inhibidores de otros cdks, agentes de unión a tubulina, inhibidores de topoisomerasa I, inhibidores de topoisomerasa II y similares.

Si se formula como una dosis fija, dichos productos de combinación emplean los compuestos de esta invención en el intervalo de dosis descrito a continuación y el otro agente farmacéuticamente activo en el intervalo de dosis aprobado. Los compuestos de fórmula (I) pueden usarse secuencialmente con agentes anticáncer conocidos cuando la formulación de combinación es inapropiada.

Los compuestos de fórmula (I) de la presente invención, adecuados para la administración a un mamífero, por ejemplo, a seres humanos, pueden administrarse por las rutas normales y el nivel de dosificación depende de la edad, peso, condiciones del paciente y ruta de administración.

Por ejemplo, una dosis adecuada adoptada para administración oral de un compuesto de fórmula (I) puede oscilar de aproximadamente 10 a aproximadamente 500 mg por dosis, de 1 a 5 veces al día. Los compuestos de la invención pueden administrarse en una variedad de formas de dosificación, por ejemplo, oralmente, en forma de comprimidos, cápsulas, comprimidos recubiertos de azúcar o película, disoluciones o suspensiones líquidas; rectalmente en forma de supositorios; parenteralmente, por ejemplo, intramuscularmente, o a través de inyección o infusión intravenosa y/o intratecal y/o intraespinal.

La presente invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable, que puede ser un vehículo o un diluyente.

Las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la invención se preparan normalmente siguiendo métodos convencionales y se administran en una forma farmacéutica adecuada. Por ejemplo, las formas orales sólidas pueden contener, junto con el compuesto activo, diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, azúcar, celulosa, almidón de maíz o almidón de patata; lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio o calcio, y/o polietilenglicoles; agentes de unión, por ejemplo, almidones, goma arábiga, gelatina metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinilpirrolidona; agentes disgregantes, por ejemplo, almidón, ácido algínico, alginatos o glicolato de almidón sódico; mezclas de efervescencia; tintes; edulcorantes; agentes humectantes tal como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y, en general, sustancias no tóxicas y farmacológicamente inactivas usadas en formulaciones farmacéuticas. Estos preparados farmacéuticos pueden fabricarse de forma conocida, por ejemplo, por medio de procedimientos de mezcla, granulado, formación de comprimidos, recubrimiento con azúcar o recubrimiento con película.

Las dispersiones líquidas para administración oral pueden ser, por ejemplo, jarabes, emulsiones y suspensiones. Como un ejemplo, los jarabes pueden contener, como vehículo, sacarosa o sacarosa con glicerina y/o manitol y sorbitol.

Las suspensiones y las emulsiones pueden contener, como ejemplos de vehículos, goma natural, agar, alginato sódico, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o poli(alcohol de vinilo). La suspensión o disoluciones para inyecciones intramusculares pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, agua estéril, aceite de oliva, oleato de etilo, glicoles, por ejemplo, propilenglicol y, si se desea, una cantidad adecuada de hidrocloruro de lidocaina. Las disoluciones para inyecciones o infusiones intravenosas pueden contener, como un vehículo, agua estéril o preferiblemente pueden estar en forma de soluciones salinas, estériles, acuosas, isotónicas, o pueden contener propilenglicol como un vehículo.

Los supositorios pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, mantequilla de cacao, polietilenglicol, un tensioactivo de éster de ácido graso de polietilensorbitano o lecitina.

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Ejemplo 9 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(1,2,2,6,6-pentametilpiperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida [(I); (Z)-R =4-Nitrofenoxi, X=O, Y=N, W=CH, R1=C11H21N2O]

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5 Operando como en el Ejemplo 4 Etapa 2, pero empleando 1,2,2,2,6,6-pentametil-piperidin-4-ilamina en vez de (2aminoetil)metilcarbamato de terc-butilo, el compuesto del título se obtuvo en 21% de rendimiento.

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,96 -1,10 (m, 12 H) 1,35 -1,48 (m, 2 H) 1,53 -1,67 (m, 2 H) 2,16 (br.s., 3 H) 4,02 -4,20 (m, 1 H) 6,10 (d, 1 H) 6,46 (d, 1 H) 6,79 (s, 1 H) 7,04 -7,15 (m, 2 H) 8,15 -8,27 (m, 2 H) 8,46 (d, 1 H) 10,31 (br.s., 1 H) 10,71 (br.s., 1 H).

10 Ejemplo 10

Operando de forma análoga como en el Ejemplo 4 Etapa 2, pero empleando las aminas adecuadas, los compuestos de los títulos presentados en las siguientes tablas se prepararon.

Estructura: Nombre M+H TA MÉTODO

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxilato de metilo: 373,3 3,8 3

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N,N-dimetilisoxazol-3carboxamida: 386,3 1,162 1

5-[2,4-Dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(2hidroxietil)isoxazol-3-carboxamida: 402,3 2,4 3

5-[2,4-Dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(2-fluoroetil)isoxazol3-carboxamida: 404,3 1,167 1

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[2(metilamino)etil]isoxazol-3-carboxamida: 415,4 4,11 4

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(3hidroxipropil)isoxazol-3-carboxamida: 416,4 1,019 1

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5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(2metoxietil)isoxazol-3-carboxamida: 416,4 1,151 1

N-(acetidin-3-ilmetil)-5-[2,4-dihidroxi-6-(4nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida: 427,4 1,379 1

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[2(dimetilamino)etil]isoxazol-3-carboxamida: 429,4 2,1 3

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(3metoxipropil)isoxazol-3-carboxamida: 430,4 1,195 I

imagen32: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(furan-2ilmetil)isoxazol-3-carboxamida 438,4 1,32 1

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(2,2,2trifluoroetil)isoxazol-3-carboxamida: 440,3 3,3 3

N-ciclohexil-5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3carboxamida: 440,4 1,489 1

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(piperidin-4il)isoxazol-3-carboxamida: 441,4 1,464 1

N-[2-(acetilamino)etil]-5-[2,4-dihidroxi-6-(4nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida: 443,4 0,996 1

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[3(dimetilamino)propil]isoxazol-3-carboxamida: 443,4 0,957 1

imagen33: N-bencil-5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3carboxamida 448,4 1,424 1

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N-(ciclohexilmetil)-5-[2,4-dihidroxi-6-(4nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida: 454,5 1,561 1

N-(trans-4-aminociclohexil)-5-[2,4-dihidroxi-6-(4nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida: 455,4 1,051 1

5-[2,4-Dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(1-metilpiperidin-4il)isoxazol-3-carboxamida: 455,4 0,95 1

imagen34: 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(piperidin-4ilmetil)isoxazol-3-carboxamida 455,4 3,7 3

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(trans-4hidroxiciclohexil)isoxazol-3-carboxamida: 456,4 1,083 1

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[3-(1H-imidazol-1il)propil]isoxazol-3-carboxamida: 466,4 0,981 1

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[2-(1-metilpirrolidin-2il)etil]isoxazol-3-carboxamida: 469,5 1,002 1

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[(1-metilpiperidin-4il)metil]isoxazol-3-carboxamida: 469,5 0,977 1

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[2-(piperidin-1il)etil]isoxazol-3-carboxamida: 469,5 1,049 1

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[2-(morfolin-4il)etil]isoxazol-3-carboxamida: 471,4 0,966 1

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[2-(4hidroxifenil)etil]isoxazol-3-carboxamida: 478,4 3 3

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E10714268

26-03-2015

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[3-(2-oxopirrolidin-1il)propil]isoxazol-3-carboxamida: 483,5 1,124 1

5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-[3-(4-metilpiperazin1-il)propil]isoxazol-3-carboxamida: 498,5 0,869 1

{2-[({5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3il}carbonil)amino]etil}metilcarbamato de terc-butilo: 515,5 1,361 1

imagen35: 4-[({5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3il}carbonil)amino]piperidin-1-carboxilato de terc-butilo 541,5 1,464 1

Ejemplo 11 N-(1-Ciclohexilpiperidin-4-il)-5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxamida [(I); (Z)-R =4-Nitrofenoxi, X=O, Y=N, W=CH, R1=C12H21N2O]

imagen36

A una disolución agitada de hidrocloruro de 5-[3,5-dihidroxi-2-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(piperidin-4-il)isoxazol-3carboxamida (0,75 g, 1,7 mmoles) y ciclohexanona (0,24 g, 1,5 eq.) en DMF (25 mL) se añadió una parte de (CH3)4NBH(CH3COO)3 (1,33 g, 3 eq.). Después de agitar a temperatura ambiente durante 3 horas, la disolución se absorbió en acetato de etilo y se lavó cuidadosamente con salmuera. Después de secar sobre Na2SO4, el disolvente

10 se eliminó y el residuo se cromatografió cuidadosamente sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/hexano 7/3, para proporcionar el compuesto del título (0,57 g, 64% de rendimiento).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6,11 (d, 1 H) 6,47 (d, 1 H) 6,81 (s, 1 H) 7,05-7,14 (m, 2 H) 8,17-8,26 (m, 2 H) 10,34 (br. s., 1 H) 10,66 -10,87 (m, 1 H).

Ejemplo 12

15 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]-N-(1'-metil-1,4'-bipiperidin-4-il)isoxazol-3-carboxamida

[(I); (Z)-R =4-Nitrofenoxi, X=O, N=O, W=CH, R1=C12H22N3O]

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Claims

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en donde PG, Z y R son como se definen anteriormente, con hidrato de hidrazina (NH2NH2.H2O), hidrocloruro de hidrazina (NH2NH2.HCl) o sulfato de hidrazina (NH2NH2.H2SO4) en un disolvente tal como etanol, THF, ácido acético, piridina para dar un compuesto de fórmula (IV):

imagen6

en donde PG, Z y R son como se definen en la reivindicación 1;

o 1'b) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (III) como se define anteriormente con hidrocloruro de hidroxilamina (NH2OH.HCl) o sulfato de hidroxilamina (NH2OH.H2SO4) en un disolvente tal como piridina, etanol, para dar un compuesto de fórmula (V):

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10 en donde PG, Z y R son como se definen anteriormente;

5a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II) como se define anteriormente con NH2OH.HCl o NH2OH.H2SO4 en un disolvente tal como etanol, THF o ácido acético, en presencia de una base tal como acetato de sodio y potasio;

5b) hacer reaccionar el compuesto resultante de fórmula (XIX):

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en donde PG, Z y R son como se definen anteriormente, con n-ButLi y (COOC2H5)2 en un disolvente tal como THF a una temperatura que oscila de -78°C a -35°C;

5c) hacer reaccionar el compuesto resultante de fórmula (XX):

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20 en donde PG, Z y R son como se definen anteriormente, con un ácido tal como ácido canforsulfónico, bencenosulfónico o toluenosulfónico, en un disolvente tal como dioxano, tolueno, xileno, a una temperatura que oscila de 110°C a 150°C, para dar un compuesto de fórmula (XXI):

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en donde PG, Z y R son como se definen anteriormente; o 6a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XXII):

imagen11

en donde PG, Z y R son como se definen anteriormente, con propiolato de etilo o con una amida de ácido propiónico sustituido apropiadamente en diclorometano (DCM) en presencia de un oxidante tal como disolución de NaOCl 5 M

o NBS en presencia de TEA para dar un compuesto de fórmula (XXI) como se define anteriormente;

o bien 7a) hacer reaccionar cualquiera de los compuestos de fórmula (IV), (V) y (XXI) como se define anteriormente con una base inorgánica tal como NaOH, LiOH, KOH en un disolvente tal como etanol, metanol, THF y

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7b) hacer reaccionar el compuesto resultante de fórmula (XXIII):

imagen12

en donde X, Y, W, PG, Z y R son como se definen anteriormente con R2NH2 en donde R2 se define como anteriormente, en presencia de un agente activante tal como DIC, TBTU, HOBT, EDC, DCC en un disolvente tal como THF, dioxano, DMF, DMA, para así obtener un compuesto de fórmula (XXIV):

imagen13

en donde X, Y, W, PG, Z y R son como se definen anteriormente y R2 es como se define en la reivindicación 1;

10 o 7a') hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IV), (V) y (XXI) como se define anteriormente con R2NH2 en donde R2 se define como anteriormente, en presencia de un catalizador tal como cianuro de potasio, piridina-2-ol, en disolvente tal como etanol, THF, dioxano, DMF, para dar un compuesto de fórmula (XXIV) como se define anteriormente;

o 7b') hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XXIII) como se define anteriormente con difenilfosforilazida 15 (DPPA) en presencia de TEA o DIPEA en un disolvente tal como dioxano, THF a reflujo;

7c') hacer reaccionar el compuesto resultante de fórmula (XXV):

imagen14

en donde X, Y, W, PG, Z y R son como se definen anteriormente, con R2NH2 en donde R2 es como se define anteriormente, en un disolvente tal como dioxano, THF, DMF, para dar un compuesto de fórmula (XXVI):

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en donde X, Y, W, PG, Z, R y R2 son como se definen anteriormente;

o 7c") hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XXV) como se define anteriormente, con H2O, en un disolvente tal como dioxano, THF, DMF en presencia de HCl, ácido acético, H2SO4 y

o bien 7d) hacer reaccionar el compuesto resultante de fórmula (XXVII):

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imagen16

en donde X, Y, W, PG, Z y R son como se definen anteriormente, con R2COOH en presencia de un agente activante tal como CDI, TBTU, EDC, DIC o DCC en presencia de HOBT, en un disolvente tal como THF, DMF, DMA o con R2COCl en un disolvente tal como THF, piridina, CHCl3 en presencia de una base orgánica tal como trietilamina, 4metilmorfolina, etildiisopropilamina para dar un compuesto de fórmula (XXVIII):

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en donde X, Y, W, PG, Z, R y R2 son como se definen anteriormente;

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imagen18

ácido 5-((2,4,6-trimetoxifenil)-3-isoxazolcarboxílico están excluidos. 7.-Un compuesto intermedio de la fórmula (XXIV) como se define en la reivindicación 4, con la condición que: N-etil-5-[4'-fluoro-4,6-bis(fenilmetoxi)[1,1'-bifenil]-3-il]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[2'-metil-4,6-bis(fenilmetoxi)[1,1'-bifenil]-3-il]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[2'-fluoro-4,6-bis(fenilmetoxi)[1,1'-bifenil]-3-il]-3-isoxazolcarboxamida, 5-[4,6-bis(fenilmetoxi)[1,1'-bifenil]-3-il]-N-etil-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-[2-(3-fluorofenil)etil]-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-[2-(3-fluorofenil)etenil]-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-[2-(4-fluorofenil)etil]-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-[(1E)-2-(4-fluorofenil)etenil]-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-etil-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-lsoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-[(1E)-2-feniletenil]-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-(2-metilpropil)-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-(1-metiletil)-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, 5-[5-(1,1-dimetiletil)-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-N-etil-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-(2-feniletil)-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida, N-etil-5-[5-(2-feniletenil)-2,4-bis(fenilmetoxi)fenil]-3-isoxazolcarboxamida y N-[5,6,7,8-tetrahidro-6-(1-piperidinilmetil)-2-naftalenil]-3-(2,4,5-trietoxifenil)-5-isoxazolcarboxamida están excluidos.
8.

Un compuesto intermedio de la fórmula (XXXI) como se define en la reivindicación 4, con la condición que: ácido 1H-pirazol-3-carboxílico, 5-[5-[5-(hidrazinilcarbonil)-1 H-pirazol-3-il]-2,4-dihidroxifenil]-, etiléster y ácido 1 H-pirazol-3carboxílico, 5,5'-(4,6-dihidroxi-1,3-fenilen)bis-, dietiléster están excluidos.
9.

Los compuestos intermedios ácido 5-[2,4-dihidroxi-6-(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxílico y 5-[2,4-dihidroxi-6(4-nitrofenoxi)fenil]isoxazol-3-carboxilato de metilo.
10.-Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I), como se define en la reivindicación 1, y al menos un vehículo y/o diluyente farmacéuticamente aceptable.
11.

Un producto que comprende un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1 o una composición farmacéutica del mismo como se define en la reivindicación 10, y uno o más agentes quimioterapéuticos, como un preparado combinado para uso simultáneo, separado o secuencial en la terapia anticáncer.
12.

Un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, para usar como un medicamento.
13.

Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, para usar en un método para tratar cáncer o un trastorno neurodegenerativo.
14.

Un método in vitro para inhibir la actividad de HSP90 que comprende poner en contacto la enzima dicha con una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1.

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