ES2532708T3

ES2532708T3 - Vacunas peptídicas para cánceres que expresan antígenos asociados a tumores con HIG2

Info

Publication number: ES2532708T3
Application number: ES12151714.8T
Authority: ES
Inventors: Takuya Tsunoda; Ryuji Ohsawa
Original assignee: Oncotherapy Science Inc
Current assignee: Oncotherapy Science Inc
Priority date: 2007-02-21
Filing date: 2008-02-21
Publication date: 2015-03-31
Anticipated expiration: 2028-02-21
Also published as: CN103351423B; ES2541863T3; EP2121731B1; IL219041A; EP2476695A2; KR20140130507A; EP2121731A1; JP2010519176A; TWI494319B; HK1134507A1; JP5239103B2; IL219042A0; IL219041A0; EP2476693A2; IL219048A0; EP2570429A2; SI2121731T1; IL219047A0; EP2594582A3; EP2476693B1

Abstract

Un péptido de menos de 15 aminoácidos que tiene inducibilidad de células T citotóxicas, en el que dicho péptido comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 117, 114, 116 o 121.

Description

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Además, la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #5 mostrado en los pocillos encuadrados en el panel medio, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. “e” representa la capacidad de inducción de LTC de CDH3-A24-9-406 (SEQ ID NO: 22). CDH3-A24-9-406 (SEQ ID NO: 22) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #2 mostrado en los pocillos recuadrados, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo.

[figura 1-2] La figura 1 representa los resultados del cribado de péptidos epítopos que, a su vez, demuestran que CDH3-A24-10-332 (SEQ ID NO: 34), CDH3-A24-10-470 (SEQ ID NO: 358), CDH3-A24-9-513 (SEQ ID NO: 19), CDH3-A24-9-406 (SEQ ID NO: 22), CDH3-A24-10-807 (SEQ ID NO: 30) y CDH3-A24-10-655 (SEQ ID NO: 344) muestran potente producción de IFN-gamma. “f” representa la capacidad de inducción de LTC de CDH3-A24-10-807 (SEQ ID NO: 30). CDH3-A24-10-807 (SEQ ID NO: 30) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea y el clon de LTC que se establecieron del pocillo positivo #5 mostrado en los pocillos recuadrados. El clon de LTC establecido generado contra el péptido demostró la actividad de LTC específica contra COS7 transfectadas tanto con la longitud completa del gen CDH3 como la molécula HLA-A24 (gráfico derecho inferior). Por otra parte, se prepararon COS7 transfectadas con la longitud completa de CDH3 pero no con HLA-A24 y COS7 transfectadas con HLA-A24 pero no con la longitud completa de CDH3 para el control negativo. El clon de LTC mostró actividad LTC específica alta contra COS7 transfectadas tanto con CDH3 como HLA-A24. “g” representa la capacidad de inducción de LTC de CDH3-A24-10-655 (SEQ ID NO: 344). CDH3-A24-10-655 (SEQ ID NO: 344) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y se establecieron la línea y el clon de LTC del pocillo positivo #1 mostrado en los pocillos recuadrados. El clon de LTC establecido generado contra el péptido demostró la actividad LTC específica contra COS7 transfectadas tanto con la longitud completa del gen CDH3 como la molécula HLA-A24 (gráfico derecho inferior). Por otra parte, se prepararon COS7 transfectadas con la longitud completa de CDH3 pero no con HLA-A24 y COS7 transfectadas con HLA-A24 pero no con la longitud completa de CDH3 para el control negativo. El clon de LTC mostró actividad de LTC específica alta contra COS7 transfectadas tanto con CDH3 como HLA-A24.

[figura 2] La figura 2 representa los resultados del cribado de péptidos epítopos que, a su vez, demuestra que Epha4-A24-9-453 (SEQ ID NO: 41), Epha4-A24-9-5 (SEQ ID NO: 44), Epha4-A24-9-420 (SEQ ID NO: 48), Epha4A24-9-869 (SEQ ID NO: 46), Epha4-A24-10-24 (SEQ ID NO: 78) Epha4-A02-9-501 (SEQ ID NO: 376) y Epha4-A029-165 (SEQ ID NO: 379) muestran producción potente de IFN-gamma. “a” representa el ejemplo de péptidos negativos a los que no se les pudo detectar capacidad de inducción de LTC a pesar de la posible actividad de unión con HLA. “b” representa la capacidad de inducción de LTC de Epha4-A24-9-453 (SEQ ID NO: 41). Epha4-A24-9-453 (SEQ ID NO: 41) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #3 mostrado en los pocillos recuadrados, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. “c” representa la capacidad de inducción de LTC de Epha4-A24-9-5 (SEQ ID NO: 44). Epha4-A24-9-5 (SEQ ID NO: 44) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #2 mostrado en los pocillos recuadrados, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. “d” representa la capacidad de inducción de LTC de Epha4-A24-9-420 (SEQ ID NO: 48). Epha4-A24-9-420 (SEQ ID NO: 48) demostró potente producción de IFNgamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma. El pocillo #6 mostrado en pocillos recuadrados en el panel superior demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. Además, la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #6 mostrado en los pocillos recuadrados en el panel medio, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. “e” representa la capacidad de inducción de LTC de Epha4-A24-9-869 (SEQ ID NO: 46). Epha4-A24-9-869 (SEQ ID NO: 46) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFNgamma, y la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #5 mostrado en los pocillos recuadrados, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. “f” representa la capacidad de inducción de LTC de Epha4-A24-10-24 (SEQ ID NO: 78). Epha4-A24-10-24 (SEQ ID NO: 78) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #4 mostrado en los pocillos recuadrados, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. “g” representa la capacidad de inducción de LTC de Epha4A02-9-501 (SEQ ID NO: 376). Epha4-A02-9-501 (SEQ ID NO: 376) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y se estableció una línea y clon de LTC del pocillo positivo #8 mostrado en los pocillos recuadrados. La actividad citotóxica de la línea de LTC establecida contra las células diana pulsadas con el péptido se midió mediante el ensayo de liberación de Cr (CRA) (gráfico inferior), y la línea de LTC tenía actividad citotóxica específica muy potente contra las células diana pulsadas con los péptidos. “h” representa la capacidad de inducción de LTC de Epha4-A02-9-165 (SEQ ID NO: 379). Epha4-A02-9-165 (SEQ ID NO: 379) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y se estableció una línea de LTC del pocillo positivo #3 mostrado en los pocillos recuadrados. La actividad citotóxica de la línea de LTC establecida contra las células diana pulsadas con el péptido se midió mediante el ensayo de liberación de Cr (CRA) (gráfico derecho), y la línea de LTC tenía actividad citotóxica específica muy potente contra las células diana pulsadas con los péptidos.

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producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea y el clon de LTC que se establecieron del pocillo positivo #7 mostrados en los pocillos recuadrados, demostraron la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. “h” representa la capacidad de inducción de HIG2-A02-9-15 (SEQ ID NO: 116). HIG2-A02-9-15 (SEQ ID NO: 116) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y se estableció una línea de LTC del pocillo positivo #10 mostrada en los pocillos recuadrados. La línea de LTC establecida generada contra el péptido demostró la actividad LTC específica contra COS7 transfectadas tanto con la longitud completa del gen HIG2 como la molécula HLA-A02. Se prepararon COS7 transfectadas con la longitud completa de HIG2 pero no con HLA-A02, y COS7 transfectadas con HLA-A02 y pulsadas con HIG2-9-8 para el control negativo. La línea de LTC mostró actividad de LTC específica alta contra COS7 transfectadas tanto con HIG2 como HLA-A02.

[figura 4-3] La figura 4 representa los resultados del cribado de péptidos epítopos que, a su vez, demuestran que HIG2-A24-9-19 (SEQ ID NO: 110), HIG2-A24-9-22 (SEQ ID NO: 111), HIG2-A24-9-8 (SEQ ID NO: 387), HIG2-A2410-7 (SEQ ID NO: 112), HIG2-A24-10-18 (SEQ ID NO: 394), HIG2-A02-9-15 (SEQ ID NO: 116), HIG2-A02-9-4 (SEQ ID NO: 117) y HIG2-A02-10-8 (SEQ ID NO: 121) muestran producción potente de IFN-gamma. “i” representa la capacidad de inducción de LTC de HIG2-A02-9-4 (SEQ ID NO: 117). HIG2-A02-9-4 (SEQ ID NO: 117) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y se estableció una línea y clon de LTC del pocillo positivo #10 mostrado en los pocillos recuadrados. La línea de LTC establecida generada contra el péptido demostró la actividad de LTC específica contra COS7 transfectadas tanto con la longitud completa del gen HIG2 como la molécula HLA-A02 (gráfico medio). Además, se prepararon COS7 transfectadas con la longitud completa de HIG2 pero no con HLA-A02, COS7 transfectadas con HLA-A02 y el gen TTK como sustituto para longitud completa de HIG2 y COS7 transfectadas con HLA-A02 y pulsadas con HIG2-9-8 para el control negativo. La actividad citotóxica del clon de LTC contra 293T, transfectadas tanto con la longitud completa de HIG2 como la molécula HLA-A02, y la línea de células cancerosas, Caki-1 que expresa endógenamente HIG2 y HLA-A02 se midió mediante ensayo de liberación de Cr (CRA) (gráficos inferiores), y el clon de LTC tenía actividad citotóxica muy potente contra el transfectante tanto con el gen HIG2 como HLA-A02, y Caki-1. Por otra parte, las células efectoras no demostraron actividad citotóxica de la línea de LTC contra 293T transfectadas solo con HIG2 o solo con HLA-A02 y la línea de células cancerosas, A498 que expresa solo HIG2 no se detectó. “j” representa la capacidad de inducción de LTC de HIG2-A02-10-8 (SEQ ID NO: 121). HIG2-A02-10-8 (SEQ ID NO: 121) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFNgamma, y la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #9 mostrado en los pocillos recuadrados, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo.

[figura 5-1] La figura 5 representa los resultados del cribado de péptidos epítopos que, a su vez, demuestran que INHBB-A24-9-180 (SEQ ID NO: 395), INHBB-A24-10-180 (SEQ ID NO: 133), INHBB-A24-10-305 (SEQ ID NO: 135), INHBB-A24-10-7 (SEQ ID NO: 137) e INHBB-A24-10-212 (SEQ ID NO: 426) muestran producción potente de IFNgamma. “a” representa el ejemplo de péptidos negativos a los que no se les pudo detectar capacidad de inducción de LTC a pesar de posible actividad de unión con HLA. “b” representa la capacidad de inducción de LTC de INHBBA24-9-180 (SEQ ID NO: 395). INHBB-A24-9-180 (SEQ ID NO: 395) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y se estableció una línea y clon de LTC del pocillo positivo #7 mostrada en los pocillos recuadrados. Se midió la actividad citotóxica del clon de LTC establecido contra células tumorales, Miapaca2 que expresan tanto INHBB como HLA-A02 mediante ensayo de liberación de Cr (CRA), y las células efectoras mostraron actividad citotóxica específica alta contra Miapaca2. Por otra parte, no mostró actividad citotóxica significativa contra Caki-1 que expresa INHBB pero no HLA-A02. “c” representa la capacidad de inducción de LTC de INHBB-A24-10-180 (SEQ ID NO: 133). INHBB-A24-10-180 (SEQ ID NO: 133) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y se estableció una línea de LTC del pocillo positivo #3 mostrado en los pocillos recuadrados. La línea de LTC establecida generada contra el péptido demostró la actividad de LTC específica contra 293T transfectadas tanto con la longitud completa del gen INHBB como la molécula HLA-A24. Además se prepararon 293T transfectadas con la longitud completa de INHBB pero no HLA-A24 y 293T transfectadas con HLA-A24 y pulsadas con el péptido INHBB10-305 para el control negativo.

[figura 5-2] La figura 5 representa los resultados del cribado de péptidos epítopos que, a su vez, demuestran que INHBB-A24-9-180 (SEQ ID NO: 395), INHBB-A24-10-180 (SEQ ID NO: 133), INHBB-A24-l0-305 (SEQ ID NO: 135), INHBB-A24-10-7 (SEQ ID NO: 137) y INHBB-A24-10-212 (SEQ ID NO: 426) muestran producción potente de IFNgamma. “d” representa la capacidad de inducción de LTC de INHBB-A24-l0-305 (SEQ ID NO: 135). INHBB-A24-l0305 (SEQ ID NO: 135) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y se estableció una línea y clon de LTC del pocillo positivo #2 mostrado en los pocillos recuadrados. El clon de LTC establecido generado contra el péptido demostró la actividad de LTC específica contra 293T transfectadas tanto con la longitud completa del gen INHBB como la molécula HLA-A24. Además se prepararon 293T transfectadas con la longitud completa de INHBB pero no HLA-A24 y 293T transfectadas con HLA-A24 y pulsadas con el péptido INHBB-10-180 para el control negativo. “e” representa la capacidad de inducción de LTC de INHBB-A24-10-7 (SEQ ID NO: 137). INHBB-A24-10-7 (SEQ ID NO: 137) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y se establecieron líneas de LTC del pocillo positivo #8 mostrado en los pocillos recuadrados en el panel superior y #2 mostrado en pocillos recuadrados en el panel inferior. La línea de LTC del pocillo #8 mostró la actividad LTC específica contra 293T

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péptido epítopo. “c” representa la capacidad de inducción de LTC de KNTC2-A24-9-124 (SEQ ID NO: 202). KNTC2A24-9-124 (SEQ ID NO: 202) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #5 mostrado en los pocillos recuadrados, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. “d” representa la capacidad de inducción de LTC de KNTC2-A24-9-154 (SEQ ID NO: 210). KNTC2-A24-9-154 (SEQ ID NO: 210) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFNgamma, y la línea y el clon de LTC que se establecieron del pocillo positivo #5 mostrado en los pocillos recuadrados, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. “e” representa la capacidad de inducción de LTC de KNTC2-A24-9-150 (SEQ ID NO: 213). KNTC2-A24-9-150 (SEQ ID NO: 213) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #7 mostrado en los pocillos recuadrados, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo.

[figura 7-2] La figura 7 representa los resultados del cribado de péptidos epítopos que, a su vez, demuestran que KNTC2-A24-9-309 (SEQ ID NO: 196), KNTC2-A24-9-124 (SEQ ID NO: 202), KNTC2-A24-9-154 (SEQ ID NO: 210) KNTC2-A24-9-150 (SEQ ID NO: 213), KNTC2-A24-10-452 (SEQ ID NO: 214), KNTC2-A24-10-227 (SEQ ID NO: 217) y KNTC2-A24-10-273 (SEQ ID NO: 223) muestran producción potente de IFN-gamma. “f” representa la capacidad de inducción de LTC de KNTC2-A24-10-452 (SEQ ID NO: 214). KNTC2-A24-10-452 (SEQ ID NO: 214) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y las líneas y clon de LTC que se establecieron del pocillo positivo #4 mostrado en los pocillos recuadrados en el panel izquierdo superior y #5 mostrado en pocillos recuadrados en el panel medio, demostraron la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. Además, el clon de LTC seleccionado de la línea de LTC del pocillo #5 mediante dilución limitante demostró actividad LTC específica contra las células diana. La línea de LTC establecida del pocillo #4 mostró actividad LTC específica contra HEK293 transfectadas tanto con la longitud completa del gen KNTC2 como la molécula HLA-A24. Además, se prepararon HEK293 transfectadas con la longitud completa de KNTC2 pero no con HLA-A24, HEK293 transfectadas con HLA-A24 pero longitud completa de KNTC2 y HEK293 transfectadas con HLA-A24 y pulsadas con el péptido KNTC-9-309 para el control negativo. “g” representa la capacidad de inducción de LTC de KNTC2-A24-10-227 (SEQ ID NO: 217). KNTC2-A24-10-227 (SEQ ID NO: 217) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #1 mostrado en los pocillos recuadrados, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. “h” representa la capacidad de inducción de LTC de KNTC2-A24-10-273 (SEQ ID NO: 223). KNTC2-A24-10-273 (SEQ ID NO: 223) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #8 mostrado en los pocillos recuadrados, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo.

[figura 8-1] La figura 8 representa los resultados del cribado de péptidos epítopos que, a su vez, demuestran que TTK-A02-9-462 (SEQ ID NO: 227), TTK-A02-9-719 (SEQ ID NO: 233), TTK-A02-9-547 (SEQ ID NO: 228) y TTKA02-10-462 (SEQ ID NO: 254), muestran producción potente de IFN-gamma. “a” representa el ejemplo de péptidos negativos a los que no se les pudo detectar capacidad de inducción de LTC a pesar de posible actividad de unión con HLA. “b” representa la capacidad de inducción de LTC de TTK-A02-9-462 (SEQ ID NO: 227). TTK-A02-9-462 (SEQ ID NO: 227) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea y dos clones de LTC que se establecieron del pocillo positivo #4 mostrado en los pocillos recuadrados, demostraron la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. El clon de LTC establecido mostró alta actividad LTC específica contra COS7 transfectadas tanto con la longitud completa del gen TTK como la molécula HLA-A02. Además, se prepararon COS7 transfectadas con la longitud completa de TTK pero no HLA-A02, COS7 transfectadas con HLA-A02 pero no longitud completa de TTK y COS7 transfectadas con HA-A02 y pulsadas con el péptido TTK-9-547 para control negativo. “c” representa la capacidad de inducción de LTC de TTK-A02-9-719 (SEQ ID NO: 233). TTK-A02-9-719 (SEQ ID NO: 233) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea y clones de LTC se establecieron del pocillo positivo #1 mostrados en los pocillos recuadrados. La línea de LTC establecida mostró alta actividad LTC específica contra COS7 transfectadas tanto con la longitud completa del gen TTK como la molécula HLA-A02. Además, se prepararon COS7 transfectadas con la longitud completa de TTK pero no HLA-A02, y COS7 transfectadas con HLA-A02 y el gen HIG2 como sustituto para la longitud completa de TTK para control negativo.

[figura 8-2] La figura 8 representa los resultados del cribado de péptidos epítopos que, a su vez, demuestran que TTK-A02-9-462 (SEQ ID NO: 227), TTK-A02-9-719 (SEQ ID NO: 233), TTK-A02-9-547 (SEQ ID NO: 228) y TTKA02-10-462 (SEQ ID NO: 254), muestran producción potente de IFN-gamma. “d” representa la capacidad de inducción de LTC de TTK-A02-9-547 (SEQ ID NO: 228). TTK-A02-9-547 (SEQ ID NO: 228) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea y clones de LTC se establecieron del pocillo positivo #2 mostrados en los pocillos recuadrados. La línea de LTC establecida mostró alta actividad LTC específica contra COS7 transfectadas tanto con la longitud completa del gen TTK como la molécula HLA-A02. Además, se prepararon COS7 transfectadas con la longitud completa de TTK pero no HLA-A02, COS7 transfectadas con HLA-A02 pero no longitud completa de TTK y COS7 transfectadas con HA-A02 y pulsadas con el péptido TTK-10-462 para control negativo.

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[figura 8-3] La figura 8 representa los resultados del cribado de péptidos epítopos que, a su vez, demuestran que TTK-A02-9-462 (SEQ ID NO: 227), TTK-A02-9-719 (SEQ ID NO: 233), TTK-A02-9-547 (SEQ ID NO: 228) y TTKA02-10-462 (SEQ ID NO: 254), muestran producción potente de IFN-gamma. “e” representa la capacidad de inducción de LTC de TTK-A02-10-462 (SEQ ID NO: 254). TTK-A02-10-462 (SEQ ID NO: 254) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea y tres clones de LTC se establecieron del pocillo positivo #8 mostrados en los pocillos recuadrados. El clon de LTC establecido mostró alta actividad LTC específica contra COS7 transfectadas tanto con la longitud completa del gen TTK como la molécula HLA-A02. Además, se prepararon COS7 transfectadas con la longitud completa de TTK pero no HLA-A02, COS7 transfectadas con HLA-A02 pero no longitud completa de TTK y COS7 transfectadas con HA-A02 y pulsadas con el péptido TTK-9-547 para control negativo.

[figura 9-1] La figura 9 representa los resultados del cribado de péptidos epítopos que, a su vez, demuestran que URLC10-A02-9-206 (SEQ ID NO: 271), URLC10-A02-9-212 (SEQ ID NO: 272) y URLC10-A02-10-211 (SEQ ID NO: 288) muestran producción potente de IFN-gamma. “a” representa el ejemplo de péptidos negativos a los que no se les pudo detectar capacidad de inducción de LTC a pesar de posible actividad de unión con HLA. “b” representa la capacidad de inducción de LTC de URLC10-A02-9-206 (SEQ ID NO: 271). URLC10-A02-9-206 (SEQ ID NO: 271) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #7 mostrado en los pocillos recuadrados, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. “c” representa la capacidad de inducción de LTC de URLC10-A02-9-212 (SEQ ID NO: 272). URLC10-A02-9-212 (SEQ ID NO: 272) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea de LTC que se estableció del pocillo positivo #3 mostrado en los pocillos recuadrados, demostró la respuesta específica contra las células diana pulsadas con el péptido epítopo. “d” representa la capacidad de inducción de LTC de URLC10-A02-10211 (SEQ ID NO: 288). URLC10-A02-10-211 (SEQ ID NO: 288) demostró potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y la línea y clones de LTC se establecieron del pocillo positivo #5 mostrado en los pocillos recuadrados.

[figura 9-2] La figura 9 representa los resultados del cribado de péptidos epítopos que, a su vez, demuestran que URLC10-A02-9-206 (SEQ ID NO: 271), URLC10-A02-9-212 (SEQ ID NO: 272) y URLC10-A02-10-211 (SEQ ID NO: 288) muestran producción potente de IFN-gamma. “Continuación de d” El clon de LTC establecido mostró alta actividad LTC específica contra COS7, Hek293 y 293T que se transfectaron tanto con la longitud completa del gen URLC10 como la molécula HLA-A02. Además, se prepararon COS7, Hek293 y 293T que se transfectaron con la longitud completa de URLC10 pero no HLA-A02 y COS7, Hek293 y 293T que se transfectaron con HLA-A02 y se pulsaron con el péptido URCL10-10-64 para el control negativo. En estas figuras “+” significa la diana pulsada con el péptido, “-” significa la diana sin pulsar con el péptido, “R” significa respondedor, “S” significa estimulador, “E” significa efector y “D” significa diana.

Descripción detallada de la invención

Las palabras “un”, “una”, “el” y “la” como se usan en el presente documento significan “al menos uno” a menos que se indique específicamente de otra manera.

A menos que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que comúnmente entiende el experto en la materia a la que pertenece la presente invención.

La presente invención se basa en parte en el descubrimiento de dianas aplicables de inmunoterapia. La identificación de nuevos AAT, particularmente esos que inducen respuestas inmunitarias antitumorales potentes y específicas, garantiza el desarrollo adicional de la aplicación clínica de la estrategia de vacunación con péptidos en varios tipos de cáncer (Boon T et al., (1996) J Exp Med 183: 725-9; van der Bruggen P et al., (1991) Science 254: 1643-7; Brichard V et al., (1993) J Exp Med 178: 489-95; Kawakami Y et al., (1994) J Exp Med 180: 347-52; Shichijo S et al., (1998) J Exp Med 187:277-88; Chen YT et al., (1997) Proc.Natl.Acd. Sci.USA, 94: 1914-8; Harris CC, (1996) J Natl Cancer Inst 88:1442-55; Butterfield LH et al., (1999) Cancer Res 59:3134-42; Vissers IL et al., (1999) Cancer Res 59: 5554-9; van der Burg SH et al., (1996) J. Immunol 156:3308-14; Tanaka F et al., (1997) Cancer Res 57:4465-8; Fujie T et al., (1999) Int J Cancer 80:169-72; Kikuchi M et al., (1999) Int J Cancer 81 : 459-66; Oiso M et al., (1999) Int J Cancer 81:387-94). Puesto que con frecuencia los AAT no tienen inmunogenicidad, el descubrimiento de dianas ajustadas es un asunto extremadamente importante.

Como se ha indicado anteriormente,

CDH3 (N.º de acceso de GenBank NM_001793; SEQ ID Nos.1, 2),

EPHA4 (N.º de acceso de GenBank L36645; SEQ ID Nos.3, 4),

ECT2 (N.º de acceso de GenBank AY376439; SEQ ID Nos.5, 6),

HIG2 (N.º de acceso de GenBank NM_013332; SEQ ID Nos.7, 8)

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INHBB (N.º de acceso de GenBank NM_002193; SEQ ID Nos.9, 10), KIF20A (N.º de acceso de GenBank NM_005733; SEQ ID Nos.11, 12), KNTC2 (N.º de acceso de GenBank AF017790; SEQ ID Nos.13, 14), TTK (N.º de acceso de GenBank NM_003318; SEQ ID Nos.15, 16) y URLC10 (N.º de acceso de GenBank NM_017527; SEQ ID Nos.17, 18) se identificaron previamente como

sobreexpresados en varios cánceres usando tecnologías de micromatriz de ADNc.

En el presente documento, se muestra que péptidos derivados de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A,

KNTC2, TTK o URLC10 son epítopos de AAT restringidos por HLA-A24 y HLA-A2, un alelo de HLA comúnmente

encontrado en las poblaciones japonesa y blanca. Específicamente, usando sus afinidades de unión a HLA-A24 o

HLA-A2, se identificaron candidatos de péptidos de unión a HLA-A24 o HLA-A2 derivados de CDH3, EPHA4, ECT2,

HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK o URLC10. Después de la estimulación in vitro de células T por células dendríticas (CD) cargadas con estos péptidos, se establecieron con éxito LTC usando los siguientes péptidos. CDH3-A24-9-513 (SEQ ID NO: 19), CDH3-A24-9-406 (SEQ ID NO: 22), CDH3-A24-10-807 (SEQ ID NO: 30), CDH3-A24-10-332 (SEQ ID NO: 34), CDH3-A24-10-655 (SEQ ID NO: 344), CDH3-A24-10-470 (SEQ ID NO: 358), EphA4-A24-9-453 (SEQ ID NO: 41), EphA4-A24-9-5 (SEQ ID NO: 44), EphA4-A24-9-869 (SEQ ID NO: 46), EphA4-A24-9-420 (SEQ ID NO: 48), EphA4-A24-10-24 (SEQ ID NO: 78), EphA4-A02-9-501 (SEQ ID NO: 376), EphA4-A02-9-165 (SEQ ID NO: 379), ECT2-A24-9-515 (SEQ ID NO: 80), ECT2-A24-10-40 (SEQ ID NO: 100), ECT2-A24-10-101 (SEQ ID NO: 101), HIG2-A24-9-19 (SEQ ID NO: 110), HIG2-A24-9-22 (SEQ ID NO: 111), HIG2-A24-9-8 (SEQ ID NO: 387), HIG2-A24-10-7 (SEQ ID NO: 112), HIG2-A24-10-18 (SEQ ID NO: 394), HIG2-A02-9-8 (SEQ ID NO: 114), HIG2-A02-9-15 (SEQ ID NO: 116), HIG2-A02-9-4 (SEQ ID NO: 117), HIG2-A02-10-8 (SEQ ID NO: 121), INHBB-A24-9-180 (SEQ ID NO: 395), INHBB-A24-10-180 (SEQ ID NO: 133),

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cáncer gástrico, cáncer gástrico de tipo difuso, cáncer de hígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tejidos blandos y tumor testicular. Además se divulgan métodos para prevenir la recaída posoperatoria de estas enfermedades mencionadas anteriormente.

Los péptidos variantes (es decir, los péptidos que tienen una secuencia de aminoácidos modificada mediante sustitución, deleción o adición de uno, dos o varios residuos de aminoácidos a una secuencia original de aminoácidos) se sabe que retienen la actividad biológica original (Mark DF et al., (1984) Proc Natl Acad Sci USA 81: 5662-6; Zoller MJ y Smith M, (1982) Nucleic Acids Res 10:6487-500; Dalbadie-McFarland G et al., (1982) Proc Natl Acad Sci USA 79: 6409-13). En el contexto de la presente invención, es preferible que la modificación de aminoácidos produzca conservación de las propiedades de la cadena lateral del aminoácido (un proceso conocido como sustitución conservadora de aminoácidos). Los ejemplos de propiedades de cadenas laterales de aminoácidos incluyen aminoácidos hidrofóbicos (A, I, L, M, F, P, W, Y, V), aminoácidos hidrofílicos (R, D, N, C, E, Q, G, H, K, S, T) y las cadenas laterales que tienen los siguientes grupos funcionales o características en común: una cadena lateral alifática (G, A, V, L, I, P); una cadena lateral que contiene un grupo hidroxilo (S, T, Y); una cadena lateral que contiene un átomo de azufre (C, M); una cadena lateral que contiene ácido carboxílico y amida (D, N, E, Q); una cadena lateral que contiene una base (R, K, H); y una cadena lateral que contiene un aromático (H, F, Y, W). Nótese que las letras entre paréntesis indican los códigos de una letra de los aminoácidos.

En formas de realización preferidas, el péptido inmunogénico es un nonapéptido (9-mero) o un decapéptido (10mero).

También se divulga un método de inducir inmunidad antitumoral para una enfermedad asociada con la sobreexpresión de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK y/o URLC10, por ejemplo, cánceres, en un sujeto, tal método incluye las etapas de administrar al sujeto un péptido inmunogénico de la presente invención, es decir, uno que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 o 288 o una variante del mismo (es decir, incluyendo 1, 2 o varias (por ejemplo, hasta 5) sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos) al sujeto en necesidad de ello. Los cánceres contemplados incluyen, pero no están limitados a, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer cervicouterino, carcinoma colangiocelular, LMC, cáncer colorrectal, endometriosis, cáncer esofágico, cáncer gástrico, cáncer gástrico de tipo difuso, cáncer de hígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tejidos blandos y tumor testicular.

En el contexto de la presente invención, el sujeto es preferiblemente un mamífero. Los mamíferos ejemplares incluyen, pero no están limitados a, por ejemplo, un ser humano, primate no humano, ratón, rata, perro, gato, caballo

o vaca.

En la presente invención el péptido se puede administrar a un sujeto a través de un protocolo in vivo o ex vivo. Además, también se divulga el uso de un nonapéptido o decapéptido seleccionado de péptidos que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 o 288 (y variantes de los mismos) para fabricar una composición inmunogénica para el tratamiento o la prevención de una enfermedad asociada con la sobreexpresión de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK y/o URLC10, por ejemplo, cánceres. Los cánceres contemplados incluyen, pero no están limitados a, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer cervicouterino, carcinoma colangiocelular, LMC, cáncer colorrectal, endometriosis, cáncer esofágico, cáncer gástrico, cáncer gástrico de tipo difuso, cáncer de hígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tejidos blandos y tumor testicular.

Los análisis de homología de los siguientes péptidos demuestran que no tienen homología significativa con los péptidos derivados de cualquier producto génico humano conocido.

CDH3-A24-9-513 (SEQ ID NO: 19),

CDH3-A24-9-406 (SEQ ID NO: 22),

CDH3-A24-10-807 (SEQ ID NO: 30),

CDH3-A24-10-332 (SEQ ID NO: 34),

CDH3-A24-10-655 (SEQ ID NO: 344),

CDH3-A24-10-470 (SEQ ID NO: 358),

EphA4-A24-9-453 (SEQ ID NO: 41),

EphA4-A24-9-5 (SEQ ID NO: 44),

EphA4-A24-9-869 (SEQ ID NO: 46),

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KNTC2-A24-10-227 (SEQ ID NO: 217),

KNTC2-A24-10-273 (SEQ ID NO: 223),

TTK-A02-9-462 (SEQ ID NO: 227),

TTK-A02-9-547 (SEQ ID NO: 228),

TTK-A02-9-719 (SEQ ID NO: 233),

TTK-A02-10-462 (SEQ ID NO: 254),

URLC-A02-9-206 (SEQ ID NO: 271),

URLC-A02-9-212 (SEQ ID NO: 272) y

URLC-A02-10-211 (SEQ ID NO: 288).

Como se ha indicado anteriormente, se divulgan péptidos que tienen inducibilidad de células T citotóxicas, es decir los que tienen la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 o 288 o una variante de los mismos (es decir, esos en los que se sustituyen, delecionan o añaden 1, 2 o varios aminoácidos).

Es preferible que las secuencias de aminoácidos compuestas de 9 o 10 aminoácidos indicadas en SEQ ID NO: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 o 288 o una variante de las mismas no coincidan con una secuencia de aminoácidos asociada con otra proteína endógena.

En particular, la sustitución de aminoácido a leucina o metionina en el segundo aminoácido desde el extremo N, la sustitución de aminoácido a valina o leucina en el aminoácido C-terminal, y la adición de aminoácido de 1 o 2 aminoácidos en el extremo N y/o en el extremo C son ejemplos de variantes preferidas.

El experto en la materia reconocerá que además de las sustituciones y adiciones de aminoácidos, también se pueden usar fragmentos inmunológicamente activos de los péptidos en los métodos de la invención. Los métodos para determinar fragmentos activos se conocen bien en la técnica. Los clones de LTC obtenidos mediante estimulación por estos péptidos modificados pueden reconocer los péptidos originales y producir daño a células que expresan los péptidos originales.

Los péptidos de la presente invención se pueden preparar usando técnicas bien conocidas. Por ejemplo, los péptidos se pueden preparar sintéticamente, usando bien tecnología de ADN recombinante o síntesis química. Los péptidos de la presente invención se pueden sintetizar individualmente o como polipéptidos más largos compuestos de dos o más péptidos. Los péptidos de la presente invención preferiblemente están aislados, es decir, sustancialmente libres de otras proteínas naturales de la célula huésped y fragmentos de las mismas.

Los péptidos de la presente invención pueden contener modificaciones, tales como glicosilación, oxidación de cadenas laterales, o fosforilación; siempre que las modificaciones no destruyan la actividad biológica de los péptidos como se describe en el presente documento, es decir, la capacidad de unión a un antígeno HLA y de inducir LTC. Otras modificaciones incluyen la incorporación de D-aminoácidos u otros miméticos de aminoácidos que se pueden usar, por ejemplo, para aumentar la semivida en suero de los péptidos.

Además, se divulga un método de cribado para un péptido en el que 1, 2 o varios aminoácidos se sustituyen, en el que dicho péptido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217 o 223, dicho método comprende los pasos de:

(a): confirmar homología de secuencia no significativa a la secuencia entera de 1, 2 o varios sustitutos de aminoácidos;

(b): medir la inducibilidad de LTC del péptido sustituto candidato; y

(c): seleccionar el péptido cuya inducibilidad de LTC es igual o mayor que la del péptido original.

Por ejemplo, se divulga un método de identificar un péptido que tiene una capacidad de inducir LTC contra células que expresan al menos un antígeno asociado a tumor, en el que el antígeno asociado a tumor es un antígeno seleccionado del grupo que consiste en CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK y URLC10, dicho método comprende los pasos de:

(i): proporcionar o generar al menos una secuencia candidata que consiste en una secuencia de aminoácidos modificada por sustitución, deleción o adición de uno, dos o varios residuos de aminoácidos a una secuencia

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typhi, vectores de la toxina del carbunco destoxificada, y similares. Véase, por ejemplo, Shata MT, et al., (2000) Mol. Med. Today 6:66-71; Shedlock DJ y Weiner DB., et al., (2000) J. Leukoc. Biol. 68:793-806; y Hipp JD, et al., (2000) In Vivo 14:571-85.

La presente invención también proporciona métodos in vitro de inducir células presentadoras de antígeno usando uno o más péptidos de esta invención. Las células presentadoras de antígeno se pueden inducir mediante inducción de células dendríticas de monocitos de sangre periférica y después poniéndolas en contacto (estimulándolas) con uno o más péptidos de esta invención in vitro, ex vivo o in vivo. Cuando se administran péptidos de la presente invención a los sujetos, las células presentadoras de antígeno que tienen los péptidos de la presente invención inmovilizados sobre ellas se inducen en el cuerpo del sujeto. De forma alternativa, después de inmovilizar los péptidos de la presente invención a las células presentadoras de antígeno, las células se pueden administrar al sujeto como una vacuna. Por ejemplo, la administración ex vivo puede incluir las etapas de:

a: recoger células presentadoras de antígeno de un sujeto, y

b: poner en contacto las células presentadoras de antígeno de la etapa a con el péptido de la presente invención.

De forma alternativa, según la presente divulgación, se proporciona el uso de los péptidos de la presente invención para la fabricación de una composición farmacéutica que induce células presentadoras de antígeno. Además, se divulga el péptido de la presente invención para inducir células presentadoras de antígeno. Se divulga que las células presentadoras de antígeno obtenidas mediante la etapa b se pueden administrar al sujeto como una vacuna.

La presente invención también proporciona un método para inducir células presentadoras de antígeno que tienen un alto nivel de inducibilidad de células T citotóxicas, método que incluye la etapa de transferir genes compuestos de polinucleótido(s) que codifica(n) uno o más péptidos de la presente invención a células presentadoras de antígeno in vitro. Los genes introducidos pueden estar en forma de ADN o ARN. Para el método de introducción, sin limitaciones particulares, se pueden usar adecuadamente varios métodos convencionalmente realizados en este campo, tales como lipofección, electroporación y método del fosfato de calcio. Más específicamente, la transfección se puede realizar como se describe en Reeves ME, et al., (1996) Cancer Res., 56:5672-7; Butterfield LH, et al., (1998) J. Immunol., 161:5607-13; Boczkowski D, et al., (1996) J. Exp. Med., 184:465-72; traducción japonesa publicada de la publicación internacional N.º 2000-509281. Transfiriendo el gen a células presentadoras de antígeno, el gen experimenta transcripción, traducción, y similares en la célula, y después la proteína obtenida se procesa mediante MHC de clase I o clase II, y sigue a través de una ruta de presentación para presentar péptidos parciales.

La presente invención proporciona además métodos para inducir LTC usando uno o más péptidos de la presente invención. Se divulga que cuando se administran a un sujeto los péptidos de la presente invención, se inducen LTC en cuerpo del sujeto, y la fuerza del sistema inmunitario que se dirige a las células que expresan CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK y/o URLC10, por ejemplo, células cancerosas en los tejidos tumorales, por tanto aumenta.

Los cánceres contemplados incluyen, pero no están limitados a, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer cervicouterino, carcinoma colangiocelular, LMC, cáncer colorrectal, endometriosis, cáncer esofágico, cáncer gástrico, cáncer gástrico de tipo difuso, cáncer de hígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tejidos blandos y tumor testicular. De forma alternativa, se divulga que los péptidos de la presente invención se pueden usar en el contexto de un método terapéutico ex vivo, en el que células presentadoras de antígeno derivadas del sujeto y células CD8 positivas o leucocitos mononucleares de sangre periférica se ponen en contacto (estimulan) con uno o más péptidos de la presente invención in vitro y, después de inducir LTC, las células se devuelven al sujeto, por ejemplo, el método puede incluir las etapas de:

a: recoger células presentadoras de antígeno de un sujeto,

b: poner en contacto las células presentadoras de antígeno de la etapa a con el péptido de la presente invención,

c: mezclar las células presentadoras de antígeno de la etapa b con células T CD8+ y cocultivar de modo que se induzcan células T citotóxicas, y

d: recoger las células T CD8+ del cocultivo de la etapa c.

De forma alternativa, según la presente divulgación, se proporciona el uso de los péptidos de la presente invención para la fabricación de una composición farmacéutica que induce LTC. Además, se divulga el péptido de la invención para inducir LTC. Se divulga que las células T CD8+ que tienen actividad citotóxica obtenidas mediante la etapa d se pueden administrar al sujeto como una vacuna.

La presente invención proporciona además células T citotóxicas aisladas inducidas usando los péptidos de la presente invención. Las células T citotóxicas, inducidas por estimulación con una célula presentadora de antígeno que presenta uno o más péptidos de la presente invención, preferiblemente derivan de sujetos que son dianas de tratamiento y/o prevención, y se pueden administrar solas o en combinación con otros fármacos, incluyendo uno o

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Sin datos en el número de donante positivo, número de pocillos positivos y línea de LTC positiva que indica “-” significa que los péptidos no se pueden sintetizar por alguna razón. [Tabla 2A-1] Péptidos 9-meros que se unen a HLA-A*2402 derivados de CDH3

Posición inicial: Secuencia de aminoácidos Puntuación de unión Número de donantes positivos Número de pocillospositivos Línea de LTC positiva SEQ ID NO.

513: IYEVMVLAM 37,5 1/3 19

667: LFLLLVLLL 36 - - - 20

30: VFREAEVTL 24 0/3 1/22 0/1 21

406: LYVEVTNEA 16,632 1/3 22

332: KYEAHVPEN 16,5 0/3 1/22 0/1 23

180: KYELFGHAV 15 0/3 1/22 0/1 24

85: RSLKERNPL 14,4 0/3 1/22 0/1 25

5: RGPLASLLL 12 0/3 2/22 0/2 26

652: KGGFILPVL 11,2 0/3 0/22 - 27

248: TYNGVVAYS 10,5 0/3 2/22 0/2 28

65: LFSTDNDDF 10 0/3 0/22 - 29

94: KIFPSKRIL 9,6 0/1 0/8 - 306

221: RGSVLEGVL 9,6 0/1 0/8 - 307

668: FLLLVLLLL 8,4 - - - 308

754: IGNFIIENL 8,4 - - - 309

311: TAVAVVEIL 8,4 0/1 0/8 - 310

557: NQSPVRQVL 8,064 0/1 0/8 - 311

611: KQDTYDVHL 8 0/1 0/8 - 312

781: DYEGSGSDA 7,5 0/1 0/8 - 313

165: GWLLLNKPL 7,2 0/1 0/8 - 314

[Tabla 2A-2]

656: ILPVLGAVL 7,2 0/1 0/8 - 315

770: TAPPYDTLL 7,2 0/1 0/8 - 316

602: VVLSLKKFL 7,2 0/1 0/8 - 317

665: ALLFLLLVL 7,2 - - - 318

410: VTNEAPFVL 7,2 0/1 0/8 - 319

662: AVLALLFLL 7,2 - - - 320

613: DTYDVHLSL 6,72 0/1 0/8 - 321

6: GPLASLLLL 6 0/1 0/8 - 322

564: VLNITDKDL 6 0/1 0/8 - 323

159: AVEKETGWL 6 0/1 0/8 - 324

511: NNIYEVMVL 6 0/1 0/8 - 325

11: LLLLQVCWL 6 - - - 326

57: GCPGQEPAL 6 0/1 0/8 - 327

293: EYTLTIQAT 6 0/1 0/8 - 328

79: ETVQERRSL 6 0/1 0/8 - 329

475: SYRILRDPA 6 0/1 0/8 - 330

493: GQVTAVGTL 6 0/1 0/8 - 331

661: GAVLALLFL 6 0/1 0/8 - 332

388: GILTTRKGL 6 0/1 0/8 - 333

382: HPESNQGIL 6 0/1 0/8 - 334

663: VLALLFLLL 5,76 - - - 335

598: EGDTVVLSL 5,6 0/1 0/8 - 336

278: TISVISSGL 5,6 0/1 2/8 0/2 337

659: VLGAVLALL 5,6 0/1 0/8 - 338

811: EWGSRFKKL 5,28 0/1 0/8 - 339

445: KVVEVQEGI 5,04 0/1 0/8 - 340

614: TYDVHLSLS 5 0/1 0/8 - 341

142: FYSITGPGA 5 0/1 0/8 - 342

246: IYTYNGVVA 5 0/1 0/8 - 343

E12151714

11-03-2015

[Tabla 2B-1]

Péptidos 10-meros que se unen a HLA-A*2402 derivados de CDH3

Posición inicial: Secuencia Puntuación de unión Número de donantes positivos Número de pocillospositivos Línea de LTC positiva SEQ ID NO.

807: DYLNeWGSRF 150 1/3 30

248: TYNGvVAYSI 105 0/3 4/22 0/4 31

667 397: LFLLIVLLLL DFEAkNQHTL 42 30 -0/3 -2/22 -0/2 32 33

332: KYEAhVPENA 21 1/3 34

180: KYELFGHAVS 15 0/3 2/22 0/2 35

510: RNNIYEVMVL 12 0/3 4/22 0/4 36

5: RGPLASLLLL 12 0/3 1/22 0/1 37

477: RILRDPAGWL 12 0/3 1/22 0/1 38

556: CNQSPVRQVL 10,08 0/3 2/22 0/2 39

655: FILPvLGAVL 8,64 1/3 344

662: AVLAILFLLL 8,64 - - - 345

[Tabla 2B-2]

277: GTISvISSGL 8,4 0/3 0/20 - 346

781: DYEGsGSDAA 7,5 0/3 0/20 - 347

601: TVVLsLKKFL 7,2 0/3 3/20 0/3 348

158: FAVEkETGWL 7,2 0/3 0/20 - 349

665: ALLFILLVLL 7,2 - - - 350

259: SQEPkDPHDL 7,2 0/3 0/20 - 351

664: LALLfLLLVL 7,2 - - - 352

42: GAEQePGQAL 7,2 0/3 1/20 0/1 353

661: GAVLaLLFLL 7,2 - - - 354

595: VNEEgDTVVL 7,2 0/2 0/12 - 355

340: NAVGhEVQRL 7,2 0/2 0/12 - 356

411: TNEApFVLKL 6,6 0/2 0/12 - 357

470: ENQKiSYRIL 6 1/2 358

10: SLLLIQVCWL 6 0/2 1/12 0/1 359

721: GLEArPEVVL 6 0/2 2/12 0/2 360

345: EVQRITVTDL 6 0/2 4/12 0/4 361

2: GLPRgPLASL 6 0/2 3/12 0/3 362

657: LPVLgAVLAL 6 - - - 363

563: QVLNiTDKDL 6 0/2 1/12 0/1 364

159: AVEKeTGWLL 6 0/2 2/12 0/2 365

492: SGQVtAVGTL 6 0/2 - - 366

387: QGILtTRKGL 6 0/2 - - 367

525: SPPTtGTGTL 6 0/2 2/12 0/2 368

358: NSPAwRATYL 6 0/2 2/12 0/2 369

122: GPFPqRLNQL 5,76 0/2 3/12 0/3 370

753: EIGNfIIENL 5,6 0/2 1/12 0/1 371

310: TTAVaVVEIL 5,6 - - - 372

246: IYTYnGVVAY 5 0/2 2/12 0/2 373

805: DYDYINEWGS 5 0/2 0/12 - 374

5

[Tabla 3A]

Péptidos 9-meros que se unen a HLA-A*2402 derivados de EPHA4

97: VYIEIKFTL 504 0/2 1/16 0/1 40

453: RYSVALAWL 400 2/3 41

25: VYPANEVTL 300 0/3 0/22 - 42

384: HYTPQQNGL 288 0/3 1/22 0/1 43

5: FYFALFSCL 288 1/2 44

E12151714

11-03-2015

519: GYGDFSEPL 240 0/3 3/22 0/3 45

869: KFGQIYNML 67,2 1/3 46

777: AYTTRGGKI 55 0/3 1/22 0/1 47

420: KYNPNPDQS 18 1/3 48

749: RNILVNSNL 16,8 0/3 1/22 0/1 49

734: KYLSDMSYV 15 0/3 0/22 - 50

879: KLIRNPNSL 14,4 0/3 0/22 - 51

926: RYICDNFTAA 14,4 0/3 0/22 - 52

834: KAIEEGYRL 14,4 0/3 0/22 - 53

574: KYSKAKQEA 13,2 0/3 0/22 - 54

184: AFQDVGACI 12,6 0/3 1/22 0/1 55

252: WLVPIGNCL 12,096 0/3 0/22 - 56

326: RPPSAPLNL 12 0/3 0/22 - 57

203: KCPLTVRNL 12 0/3 0/22 - 58

360: SYNVVCKKC 11,55 0/3 0/22 - 59

[Tabla 3B]

Péptidos 10-meros que se unen a HLA-A*2402 derivados de EPHA4

25: VYPANEVTLL 300 0/3 0/22 - 60

244: MYCGADGEWL 200 0/3 1/22 0/1 61

657: GYTDKQRRDF 120 0/3 1/22 0/1 62

5: FYFAIFSCLF 100 - - - 63

102: KFTLRDCNSL 48 0/3 1/22 0/1 64

818: SYGERPYWDM 30 0/3 2/22 0/2 65

4: IFYFALFSCL 28,8 - - - 66

808: SYGIVMWEVM 25 - - - 67

630: EFGEVCSGRL 24 0/3 0/22 - 68

420: KYNPNPDQSV 21,6 0/3 0/22 - 69

930: NFTAAGYTTL 20 0/2 0/16 - 70

675: QFDHPNIIHL 20 0/3 0/22 - 71

708: AFLRKNDGRF 15 0/3 0/22 - 72

579: KQEADEEKHL 12 0/3 1/22 0/1 73

727: RGIGSGMKYL 12 0/3 0/22 - 74

96: RVYIEIKFTL 11,2 0/2 1/16 0/1 75

507: SYVFHVRART 10,5 0/3 1/22 0/1 76

251: EWLVPIGNCL 10,08 0/3 0/22 - 77

24: RVYPANEVTL 9,6 1/3 78

699: EYMENGSLDA 9 0/3 0/22 - 79

[Tabla 3C]

Péptidos 9-meros que se unen a HLA-A*0201 derivados de EPHA4

8: ALFSCLFGI 514,942 - - - 375

501: GLNPLTSYV 382,536 1/1 376

12: CLFGICDAV 126,098 0/1 1/5 0/1 377

977: QMHGRMVPV 115,534 0/1 1/5 0/1 378

165: KLNTEIRDV 111,979 1/1 379

252: WLVPIGNCL 98,267 0/1 1/5 0/1 380

879: KLIRNPNSL 74,768 0/1 1/5 0/1 381

559: VVILIAAFV 56,902 - - - 382

812: VMWEVMSYG 39,386 0/1 0/5 - 383

728: GIGSGMKYL 37,157 0/1 0/5 - 384

750: NILVNSNLV 35,385 0/1 1/5 0/1 385

937: TTLEAVVHV 33,705 0/1 1/5 0/1 386

E12151714

11-03-2015

[Tabla 4A]

Péptidos 9-meros que se unen a HLA-A*2402 derivados de ECT2

515: TYPPFVNFF 216 1/1 80

140: LYCTSMMNL 200 0/1 0/8 - 81

298: LYVVKQEWF 150 0/1 0/8 - 82

435: NYVNILATI 105 0/1 0/8 - 83

773: IYTADPESF 100 0/1 0/8 - 84

110: LYKADCRVI 50 0/1 0/8 - 85

739: SFQMTSDEL 33 0/1 0/8 - 86

504: IFLKYSKDL 30 0/1 0/8 - 87

867: FFERRSHTL 30 0/1 0/8 - 88

178: DFNSKVTHL 30 0/1 0/8 - 89

61: KQEELIKAL 17,28 0/1 0/8 - 90

657: RGEQVTLFL 16,8 0/1 2/8 0/2 91

568: RLPSVALLL 16,8 0/1 0/8 - 92

550: KPECGRQSL 14,4 0/1 0/8 - 93

470: IFGSIPDIF 14 0/1 0/8 - 94

116: RVIGPPVVL 12 0/1 0/8 - 95

507: KYSKDLVKT 11 0/1 0/8 - 96

223: DFYAAVDDF 10 0/1 0/8 - 97

[Tabla 4B]

Péptidos 10-meros que se unen a HLA-A*2402 derivados de ECT2

322: LYEKaNTPEL 330 0/1 0/8 - 98

435: NYVNiLATII 90 0/1 0/8 - 99

40: SYVEeEMPQI 90 1/1 100

101: DFQDsVFNDL 72,576 1/1
101

866: SFFErRSHTL 24 0/1 0/8 - 102

811: SFSKtPKRAL 20 0/1 1/8 0/1 103

268: KYLPIGDERC 18 0/1 0/8 - 104

84: EFEGIDSPEF 16,5 0/1 1/8 0/1 105

236: KVPPfQDCIL 14,4 0/1 0/8 - 106

728: RPPTeQANVL 14,4 0/1 0/8 - 107

507: KYSKdLVKTY 12 0/1 0/8 - 108

281: VVEEnIVKDL 10,08 0/1 0/8 - 109

[Tabla 5A]

Péptidos 9-meros que se unen a HLA-A*2402 derivados de HIG2

19: IFVRVMESL 42 1/3 110

22: RVMESLEGL 14,4 1/3 111

8: YLLGVVLTL 8,4 1/3 387

7: LYLLGVVLT 7,5 0/2 3/15 0/3 388

23: VMESLEGLL 7,2 0/2 0/16 - 389

9: LLGVVLTLL 5,6 - - - 390

imagen23

E12151714

11-03-2015

330: NYCEGSCPA 6 0/1 0/7 - 404

172: FVVQASLWL 6 0/1 0/8 - 405

355: VNQYRMRGL 6 0/1 0/8 - 406

307: QFFIDFRLI 6 0/1 0/7 - 407

14: LLLLAAGWL 6 - - - 408

306: QQFFIDFRL 5,6 0/1 0/6 - 409

170: NLFVVQASL 5,6 0/1 0/7 - 410

327: YYGNYCEGS 5 0/1 1/8 0/1 411

[Tabla 6B]

Péptidos 10-meros que se unen a HLA-A*2402 derivados de INHBB

180: LYLKLLPYVL 360 1/3 133

171: LFVVQASLWL 30 - - - 134

305: RQQFFIDFRL 16,8 1/3 135

73: DFLEAVKRHI 12,6 0/3 4/20 0/4 136

7: RALGAACLLL 12 1/3 137

273: RPFVVVQARL 11,2 0/3 1/20 0/1 138

338: AYLAGVPGSA 10 0/3 2/20 0/2 139

169: QNLFvVQASL 8,4 0/1 1/6 0/1 412

249: DVQCdSCQEL 7,92 0/1 4/6 0/4 413

173: VVQAsLWLYL 7,2 0/1 0/6 - 414

383: LYFDdEYNIV 7,2 0/1 0/6 - 415

229: FPLTeAIQAL 7,2 0/1 1/6 0/1 416

299: RTNLcCRQQF 7,2 0/1 5/6 0/5 417

101: AAMVtALRKL 6,6 0/1 2/6 0/2 418

368: VNSCcIPTKL 6,16 0/1 2/6 0/2 419

13: CLLLIAAGWL 6 - - - 420

354: VVNQyRMRGL 6 0/1 0/6 - 421

150: DGLAsSRVRL 6 0/1 2/6 0/2 422

293: GLECdGRTNL 6 0/1 0/6 423

330: NYCEgSCPAY 6 0/1 1/6 0/1 424

176: ASLWIYLKLL 6 0/1 1/6 0/1 425

212: WNMVeKRVDL 6 1/1 426

74: FLEAvKRHIL 6 0/1 2/6 0/2 427

331: YCEGsCPAYL 6 0/1 1/6 0/1 428

77: AVKRhILSRL 5,6 0/1 1/6 0/1 429

175: QASLwLYLKL 5,28 0/1 2/6 0/2 430

326: GYYGnYCEGS 5 0/1 1/6 0/1 431

159: LYFFiSNEGN 5 0/1 4/6 0/4 432

327: YYGNyCEGSC 5 0/1 1/6 0/1 433

[Tabla 6C]

Péptidos 9-meros que se unen a HLA-A*0201 derivados de INHBB

177: SLWLYLKLL 407,808 0/1 0/8 140

14: LLLLAAGWL 96,074 - - - 141

170: NLFVVQASL 79,041 0/1 0/8 142

213: NMVEKRVDL 63,256 0/1 0/8 143

172: FVVQASLWL 47,291 0/1 0/8 144

306: QQFFIDFRL 46,48 0/1 0/8 145

281: RLGDSRHRI 42,774 0/1 0/8 146

174: VQASLWLYL 34,427 0/1 0/8 147

257: ELAVVPVFV 28,69 0/1 1/8 0/1 148

313: RLIGWNDWI 28,116 0/1 1/8 0/1 149

139: RVSEIISFA 22,546 0/1 3/8 0/3 150

imagen24

E12151714

11-03-2015

89: RIENvETLVL 12 0/2 1/14 0/1 192

364: KNQSfASTHL 12 0/2 0/14 - 193

66: KVYLrVRPLL 11,2 1/2 194

60: DSMEkVKVYL 10,08 0/2 0/14 - 195

[Tabla 8A]

Péptidos 9-meros que se unen a HLA-A*2402 derivados de KNTC2

309: KYQAYMSNL 600 1/3 196

457: VYVPLKELL 432 0/3 0/18 - 197

414: EYHKLARKL 264 0/3 0/18 - 198

139: SYELPDTKF 165 0/3 0/18 - 199

629: KYEKKATLI 150 0/3 0/18 - 200

400: KYARGKEAI 100 0/3 1/18 0/1 201

124: DFLKIFTFL 50,4 1/3 202

134: GFLCPSYEL 33 0/3 0/18 - 203

257: LFNVDAFKL 33 0/3 0/18 - 204

242: SFDEMNAEL 26,4 0/3 0/18 - 205

128: IFTFLYGFL 24 0/3 0/18 - 206

146: KFEEEVPRI 18 0/3 1/18 0/1 207

368: RINHERNEL 15,84 0/3 1/18 0/1 208

235: SFMSGADSF 15 0/3 0/18 - 209

154: IFKDLGYPF 14,4 1/3 210

563: EYQLVVQTT 12,6 0/3 0/18 - 211

474: KALNKKMGL 12 0/3 1/18 0/1 212

150: EVPRIFKDL 10,08 1/3 213

[Tabla 8B]

Péptidos 10-meros que se unen a HLA-A*2402 derivados de KNTC2

452: KYRAQVYVPL 560 2/3 214

610: EYEECMSEDL 360 0/3 1/18 0/1 215

360: KYSVADIERI 100 0/3 0/18 - 216

227: DYTIKCYESF 100 1/3 217

146: KFEEEVPRIF 50,4 0/3 0/18 - 218

90: AFIQQCIRQL 30 0/3 0/18 - 219

20: RSQDVNKQGL 17,28 0/3 1/18 0/1 220

501: RTLKEEVQKL 15,84 0/3 0/18 - 221

403: RGKEAIETQL 13,44 0/3 1/18 0/1 222

273: RALNEQIARL 12 1/3 223

563: EYQLVVQTTT 10,5 0/3 3/22 0/3 224

467: ETEEEINKAL 10,08 0/3 1/22 0/1 225

541: LLESTVNQGL 10,08 0/3 1/22 0/1 226

[Tabla 9A]

Péptidos 9-meros que se unen a HLA-A*0201 derivados de TTK

462: YMSCFRTPV 878,055 1/1 227

547: KQIYAIKYV 312,218 1/1 228

630: NMLEAVHTI 262,897 0/1 1/8 0/1 229

278: LLNSPDCDV 118,238 0/1 1/8 0/1 230

498: ILATPLQNL 83,527 0/1 0/8 - 231

811: YVLGQLVGL 73,172 0/1 0/8 - 232

E12151714

11-03-2015

719: SLGCILYYM 62,845 1/2 233

670: QMQPDTTSV 50,232 0/1 0/8 - 234

804: GTTEEMKYV 50,102 0/1 0/8 - 235

654: LIVDGMLKL 47,088 0/1 1/8 0/1 236

363: SLLAKLEET 31,074 0/1 0/8 - 237

790: YVQIQTHPV 27,995 0/1 0/8 - 238

785: LLAHPYVQI 26,604 0/1 0/8 - 239

86: KLIGRYSQA 26,082 0/1 0/8 - 240

186: NLNLQKKQL 21,362 0/1 0/8 - 241

671: MQPDTTSVV 20,152 0/1 0/8 - 242

577: KLQQHSDKI 17,892 0/1 0/8 - 243

142: FAFVHISFA 14,856 0/1 0/8 - 244

322: CELRNLKSV 11,509 0/1 0/8 - 245

824: SILKAAKTL 10,868 0/1 0/8 - 246

[Tabla 9B]

Péptidos 10-meros que se unen a HLA-A*0201 derivados de TTK

68: LLLKLEKNSV 437,482 0/1 0/8 - 247

277: NLLNSPDCDV 257,342 0/1 0/8 - 248

653: FLIVDGMLKL 226,014 0/1 0/8 - 249

423: TTFEQPVFSV 195,487 0/1 0/8 - 250

542: VLNEKKQIYA 190,448 0/1 0/8 - 251

658: GMLKLIDFGI 161,697 0/1 0/8 - 252

194: LLSEEEKKNL 148,896 0/1 0/8 - 253

462: YMSCFRTPVV 94,738 1/1 254

57: MMANNPEDWL 70,685 0/1 0/8 - 255

600: MVMECGNIDL 48,205 0/1 0/8 - 256

689: YMPPEAIKDM 37,961 0/1 0/8 - 257

86: KLIGRYSQAI 36,515 0/1 0/8 - 258

669: NQMQPDTTSV 26,092 0/1 1/8 0/1 259

497: QILATPLQNL 24,997 0/1 0/8 - 260

654: LIVDGMLKLI 22,997 0/1 0/8 - 261

186: NLNLQKKQLL 21,362 0/1 1/8 0/1 262

670: QMQPDTTSVV 20,595 0/1 0/8 - 263

803: KGTTEEMKYV 20,102 0/1 0/8 - 264

11: LTIDSIMNKV 15,486 0/1 0/8 - 265

577: KLQQHSDKII 14,971 0/1 0/8 - 266

[Tabla 10A]

Péptidos 9-meros que se unen a HLA-A*0201 derivados de URLC10

131: KIFPRFFMV 1364,78 0/1 0/8 - 267

204: GLWLAILLL 407,808 0/1 0/8 - 268

65: LLVVALPRV 271,948 0/1 0/8 - 269

60: ALLALLLVV 242,674 - - - 270

206: WLAILLLLA 52,561 1/1 271

212: LLASIAAGL 36,316 1/1 272

210: LLLLASIAA 31,249 0/1 0/8 - 273

137: FMVAKQCSA 16,505 0/1 2/8 0/2 274

58: TMALLALLL 15,428 0/1 2/8 0/2 275

59: MALLALLLV 13,975 0/1 2/8 0/2 276

209: ILLLLASIA 12,812 0/1 0/8 - 434

208: AILLLLASI 12,208 - - - 277

69: ALPRVWTDA 8,446 0/1 0/8 - 278

197: SMGESCGGL 8,223 0/1 0/8 - 279

E12151714

11-03-2015

61: LLALLLVVA 7,964 - - - 280

67: VVALPRVWT 6,097 0/1 0/8 - 281

72: RVWTDANLT 5,412 0/1 0/8 - 282

160: FLLEEPMPF 5,2 0/1 1/8 0/1 283

62: LALLLVVAL 4,292 0/1 0/8 - 284

57: GTMALLALL 2,525 0/1 1/8 0/1 285

[Tabla 10B]

Péptidos 10-meros que se unen a HLA-A*0201 derivados de URCL10

Posición inicial: Secuencia Puntuación de unión Número de donantes positivos Número de pocillos positivos Línea de LTC positiva SEQ ID NO.

64: LLLVVALPRV 1006,21 0/1 0/8 - 286

204: GLWLAILLLL 407,808 0/1 1/8 0/1 287

211: LLLASIAAGL 134,369 1/1 288

258: TMALLALLLV 115,534 - - - 289

61: LLALLLVVAL 83,527 - - - 290

160: FLLEEPMPFF 65,782 0/1 0/8 - 291

209: ILLLLASIAA 31,249 0/1 0/8 - 292

131: KIFPRFFMVA 26,186 0/1 0/8 - 293

60: ALLALLLVVA 17,334 - - - 294

66: LVVALPRVWT 6,097 0/1 0/8 - 295

59: MALLALLLVV 5,73 - - - 296

2: RLQRPRQAPA 4,968 0/1 1/8 0/1 297

112: CQNPRRCKWT 4,156 0/1 0/8 - 298

72: RVWTDANLTA 3,608 0/1 0/8 - 299

53: WAPLGTMALL 3,139 0/1 0/8 - 300

121: TEPYCVIAAV 3,111 0/1 0/8 - 301

162: LEEPMPFFYL 2,739 0/1 1/8 0/1 302

181: LEGPPINSSV 2,299 0/1 2/8 0/2 303

170: YLKCCKIRYC 2,024 0/1 0/8 - 304

130: VKIFPRFFMV 1,81 0/1 0/8 - 305

5 Estimulación de las células T usando los péptidos predichos de CDH3 restringidos con HLA-A*2402 y establecimiento de líneas de LTC estimulados con péptidos derivados de CDH3

Se generaron LTC para esos péptidos derivados de CDH3 según los protocolos expuestos en la sección de “Materiales y Métodos” anteriormente. Los LTC resultantes que tienen actividad LTC específica detectable, determinada mediante el ensayo ELISPOT de IFN-gamma, se muestran en la figura 1. En particular, CDH3-A24-910 513 (SEQ ID NO: 19), CDH3-A24-9-406 (SEQ ID NO: 22), CDH3-A24-10-807 (SEQ ID NO: 30), CDH3-A24-10-332 (SEQ ID NO: 34), CDH3-A24-10-655 (SEQ ID NO: 344) y CDH3-A24-10-470 (SEQ ID NO: 358) demostraron potente producción de IFN-gamma comparado con el control mediante ensayo ELISPOT de IFN-gamma, y las células en el pocillo positivo #5 estimuladas con SEQ ID NO: 19, #2 con SEQ ID NO: 22, #5 con SEQ ID NO: 30, #4 con SEQ ID NO: 34, #1 con SEQ ID NO: 344 y #4 con SEQ ID NO: 358 se expandieron y se establecieron líneas de LTC. Se 15 determinaron esas líneas de LTC que tenían mayores actividades LTC específicas contra la diana pulsada con péptido comparadas con las actividades contra diana sin pulso de péptido mediante ELISA. Los resultados se muestran en la figura 1. Mientras, otros péptidos mostrados en la tabla 2 no pudieron establecer las líneas de LTC a pesar de la posible actividad de unión a HLA-A*2402. Por ejemplo, el péptido negativo típico (CDH3-A24-10-248) se mostraron en la figura 1a. En esta invención, los péptidos que pudieron establecer líneas de LTC se seleccionaron 20 como péptido potente de estimulación de LTC.

Establecimiento de clones de LTC estimulados con péptidos derivados de CDH3

Además, se realizó la dilución limitante de estas líneas de LTC según los protocolos expuestos en la sección de “Materiales y Métodos” anteriormente. El establecimiento de clones de LTC de la línea de LTC CDH3-A24-10-807 (SEQ ID NO: 30) #5 y CDH3-A24-10-655 (SEQ ID NO: 344) #1 se muestra en la figura 1f y 1g. Los clones de LTC 25 tenían actividades LTC potentes y específicas contra la diana pulsada con el péptido comparado con las actividades con la diana sin el pulso de péptido.

Actividad LTC específica contra las células diana que expresan CDH3 y HLA-A*2402

Se examinó la capacidad de las líneas de LTC establecidas generadas contra estos péptidos de reconocer células diana que expresan CDH3 y HLA-A*2402. Se probó la actividad LTC específica contra COS7 transfectadas tanto 30 con del gen CDH3 de longitud completa como la molécula HLA-A*2402, que sirve como un modelo específico para

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Claims

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