BRPI0808421B1 - Composição farmacêutica para tratar câncer, exossomo, uso de um peptídeo, métodos in vitro para induzir uma célula apresentando antígeno que têm uma alta inducibilidade de célula t citotóxica ou para induzir células t citotóxicas e vacina para inibir a proliferação de uma célula - Google Patents
Composição farmacêutica para tratar câncer, exossomo, uso de um peptídeo, métodos in vitro para induzir uma célula apresentando antígeno que têm uma alta inducibilidade de célula t citotóxica ou para induzir células t citotóxicas e vacina para inibir a proliferação de uma célula Download PDFInfo
- Publication number
- BRPI0808421B1 BRPI0808421B1 BRPI0808421-1A BRPI0808421A BRPI0808421B1 BR PI0808421 B1 BRPI0808421 B1 BR PI0808421B1 BR PI0808421 A BRPI0808421 A BR PI0808421A BR PI0808421 B1 BRPI0808421 B1 BR PI0808421B1
- Authority
- BR
- Brazil
- Prior art keywords
- seq
- cancer
- ctl
- hla
- peptides
- Prior art date
Links
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 477
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 465
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 257
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 169
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 82
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 title claims abstract description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims description 84
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 44
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 44
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 44
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 14
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 64
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 38
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 33
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 29
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 108010013476 HLA-A24 Antigen Proteins 0.000 claims description 63
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 43
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 41
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 claims description 39
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 37
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 36
- 206010068771 Soft tissue neoplasm Diseases 0.000 claims description 34
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 34
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 34
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 33
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 claims description 33
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 33
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 33
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 32
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 31
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 30
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 30
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 30
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 29
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 29
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 29
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 26
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 25
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 25
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 24
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 23
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 23
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 23
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 23
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 22
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 22
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 claims description 21
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 21
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 claims description 21
- 201000010174 renal carcinoma Diseases 0.000 claims description 21
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 20
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 20
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 20
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 19
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 claims description 18
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 17
- 208000025189 neoplasm of testis Diseases 0.000 claims description 16
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 claims description 16
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 15
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 13
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 9
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 324
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 40
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 39
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 21
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 abstract description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 101150110522 INHBB gene Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 abstract description 3
- -1 kif20a Proteins 0.000 abstract description 2
- 101100004988 Caenorhabditis elegans cdh-3 gene Proteins 0.000 abstract 1
- 101150071770 NDC80 gene Proteins 0.000 abstract 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 148
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 148
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 109
- 101000839066 Homo sapiens Hypoxia-inducible lipid droplet-associated protein Proteins 0.000 description 104
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 100
- 102100028891 Hypoxia-inducible lipid droplet-associated protein Human genes 0.000 description 98
- 101001027621 Homo sapiens Kinesin-like protein KIF20A Proteins 0.000 description 95
- 102100037694 Kinesin-like protein KIF20A Human genes 0.000 description 95
- 101001054725 Homo sapiens Inhibin beta B chain Proteins 0.000 description 93
- 101000817237 Homo sapiens Protein ECT2 Proteins 0.000 description 93
- 102100027003 Inhibin beta B chain Human genes 0.000 description 93
- 102100040437 Protein ECT2 Human genes 0.000 description 93
- 102100036109 Dual specificity protein kinase TTK Human genes 0.000 description 87
- 101000659223 Homo sapiens Dual specificity protein kinase TTK Proteins 0.000 description 87
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 description 85
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 85
- 101000762242 Homo sapiens Cadherin-15 Proteins 0.000 description 85
- 101000714553 Homo sapiens Cadherin-3 Proteins 0.000 description 85
- 101001112162 Homo sapiens Kinetochore protein NDC80 homolog Proteins 0.000 description 85
- 102100024153 Cadherin-15 Human genes 0.000 description 84
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 84
- 102100023890 Kinetochore protein NDC80 homolog Human genes 0.000 description 83
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 80
- 101150078651 Epha4 gene Proteins 0.000 description 74
- 102100021616 Ephrin type-A receptor 4 Human genes 0.000 description 74
- 101100221606 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) COS7 gene Proteins 0.000 description 71
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 71
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 70
- 108010088729 HLA-A*02:01 antigen Proteins 0.000 description 55
- 230000004044 response Effects 0.000 description 39
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 38
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 34
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 30
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 26
- 239000000463 material Substances 0.000 description 26
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 23
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 21
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 20
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 19
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 19
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 18
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 17
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 16
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 15
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 14
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 12
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 12
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 12
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 12
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 12
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 10
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 10
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 9
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 9
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 9
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 9
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 8
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 7
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 7
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 6
- 101150057353 Ttk gene Proteins 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 101150053176 KIF20A gene Proteins 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 4
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 4
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 4
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 101150074651 ECT2 gene Proteins 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical group CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical group CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 101150059702 cdh-3 gene Proteins 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Chemical group 0.000 description 3
- 238000012775 microarray technology Methods 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 208000001715 Osteoblastoma Diseases 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011223 gene expression profiling Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 2
- 210000002433 mononuclear leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 2
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108010077333 CAP1-6D Proteins 0.000 description 1
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241001227713 Chiron Species 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000000666 Fowlpox Diseases 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical group C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000237988 Patellidae Species 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 102100033082 TNF receptor-associated factor 3 Human genes 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Chemical group C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000005880 cancer cell killing Effects 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 1
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N palmitic acid group Chemical group C(CCCCCCCCCCCCCCC)(=O)O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000009862 primary prevention Effects 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 108010031970 prostasin Proteins 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Chemical group OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001122—Ephrin Receptors [Eph]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464422—Ephrin Receptors [Eph]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/46443—Growth factors
- A61K39/464434—Transforming growth factor [TGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464454—Enzymes
- A61K39/464462—Kinases, e.g. Raf or Src
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464466—Adhesion molecules, e.g. NRCAM, EpCAM or cadherins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5047—Cells of the immune system
- G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
Abstract
peptídeos, composição farmacêutica, exossomo, método para induzir células, vacina para inibir a proliferação de células, uso de um peptídeos e método de triar um peptídeo. a presente invenção refere-se a peptídeos que têm uma sequência de aminoácidos como apresentada em seq id nº: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 ou 288, bem como peptídeos que têm as sequências de aminoácidos mencionadas acima nas quais 1, 2, ou vários (por exemplo, até 5) aminoácidos são substituídos, apagados ou adicionados, uma vez que os peptídeos possuem inducibilidade de célula t citotóxica. a presente invenção também fornece fármacos para tratar ou prevenir uma doença associada à superexpressão de cdh3, epha4, ect2, hig2, inhbb, kif20a, kntc2, ttk e/ou urlc10, por exemplo, cânceres contendo como um ingrediente ativo um ou mais desses peptídeos. os peptídeos da presente invenção encontram utilidade como vacinas.
Description
[001] O presente pedido reivindica o benefício do Pedido Provisó rio U.S. N° 60/902.949, depositado em 21 de fevereiro de 2007, sua descrição inteira é aqui incorporada a título de referência para todos os propósitos.
[002] A presente invenção refere-se ao campo da ciência biológi ca, mais especificamente, ao campo da terapia de câncer. Em particular, a presente invenção refere-se a novos peptídeos imunogênicos que servem como vacinas extremamente eficazes contra câncer, e fármacos para tratar e prevenir tumores contendo tais peptídeos.
[003] Vem sendo mostrado que os linfócitos T citotóxicos (CTLs) CD8+ reconhecem peptídeos de epitopo derivados de antígenos associados a tumores (TAAs) apresentados em moléculas MHC de classe I, e subsequentemente lisam as células tumorais. Desde a descoberta da família MAGE como o primeiro exemplo de TAAs, muitos outros TAAs foram descobertos usando abordagens imunológicas (Boon T. (1993) Int J Cancer 54: 177 a 180; Boon T. e outros, (1996) J Exp Med 183: 725 a 729; van der Bruggen P e outros, (1991) Science 254: 1643 a 1647; Bri- chard V e outros, (1993) J Exp Med 178: 489 a 495; Kawakami Y e outros, (1994) J Exp Med 180: 347 a 352). Alguns deles estão agora no desenvolvimento clínico como alvos de imunoterapia. Os TAAs descobertos até agora incluem MAGE (van der Bruggen P e outros, (1991) Science 254: 1643 a 1647), gpl00 (Kawakami Y e outros, (1994) J Exp Med 180: 347 a 352), SART (Shichijo S e outros, (1998) J Exp Med 187:277 a 288), e NY-ESO-1 (Chen Y.T. e outros, (1997) Proc. Natl. Acd. Sci. USA, 94: 1914 a 1918). Por outro lado, certos produtos de gene demonstrados como sendo, de certa forma, especificamente superexpressos em células tumorais se mostraram como sendo reconhecidas como alvos para induzir respostas imunes celulares. Tais produtos de genes incluem p53 (Umano Y e outros, (2001) Br J Cancer, 84:1052 a 1057) HER2/neu (Tanaka H e outros, (2001) Br J Cancer, 84: 94 a 99), CEA (Nukaya I e outros, (1999) Int. J. Cancer 80, 92 a 97) e similares.
[004] Apesar do progresso significativo na pesquisa clínica e bá sica com relação aos TAAs (Rosenberg SA e outros, (1998) Nature Med, 4: 321 a 327; Mukherji B. e outros, (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92: 8078 a 8082: Hu X e outros, (1996) Cancer Res, 56: 2479 a 2483), somente um número muito limitado de TAAs candidatos ade-quados para tratamento de cânceres está presentemente disponível. Os TAAs, que são abundantemente expressos em células canceríge-nas, e cuja expressão é restrita às células cancerígenas, seriam can-didatos promissores como alvos imunoterapêuticos.
[005] Ambos o HLA-A24 e o HLA-A0201 são alelos HLA comuns em populações Caucasianas e Japonesas (Date Y e outros, (1996) Tissue Antigens 47: 93 a 101.; Kondo A e outros, (1995) J Immunol 155: 4307 a 4312.; Kubo RT e outros, (1994) J Immunol 152: 3913 a 3924; Imanishi e outros, Proceeding of the eleventh International His-tocompatibility Workshop and Conference Oxford University Press, Oxford, 1065 (1992); Williams F e Outros, (1997) Tissue Antigen 49: 129 a 133.). Assim, os peptídeos antigênicos de cânceres apresentados por esses alelos HLA podem encontrar utilidade particular no tratamento de cânceres entre pacientes Japoneses e Caucasianos. Ademais, sabe-se que a indução de CTL de baixa afinidade in vitro resulta usualmente da exposição a altas concentrações de peptídeos, geran-do um alto nível de complexos específicos de peptídeo/MHC em célu-las que apresentam antígeno (APCs), que efetivamente ativarão esses CTLs (Alexander-Miller e outros, (1996) Proc Natl Acad Sci USA 93: 4102 a 4107).
[006] Recentemente, a sequência de peptídeo de ligação de HLA classe I pode ser esperada usando algoritmos (Journal of Immunological Methods, (1995), Vol.185, pág. 181 a 190, J. Immunol., (1994), Vol.152, pág. 163 a 175, protein science, (2000), Vol.9, pág. 1838 a 1846). Entretanto, é difícil dizer que o peptídeo de epitopo esperado pode ser cortado no tamanho e expresso na superfície celular alvo com a molécula HLA e reconhecido pelo CTL. Além disso, o algoritmo, por exemplo, o BIMAS (http://bimas.dcrt.nih.gov/cgi- bin/molbio/ken_parker_comboform) (Parker KC, e outros, (1994) J Immunol.; 152(l):163 a 175; Kuzushima K, e outros, (2001) Blood.; 98(6):1872 a 1881)) pode sugerir o peptídeo de ligação de molécula HLA, mas o peptídeo sugerido não é tão rigoroso (Bachinsky MM, e outros, Cancer Immun. 2005 Mar 22;5:6). Assim a triagem de TAA permanece ainda muitos desafios e dificuldades.
[007] Recentes desenvolvimentos em tecnologias de microarran- jos de cDNA têm capacitado a construção de perfis abrangentes de expressão de gene em células malignas quando comparadas a células normais (Okabe, H. e outros, (2001) Cancer Res., 61, 2129 a 2137.; Lin YM. e outros, (2002) Oncogene, 21;4120 a 4128.; Hasegawa S. e outros, (2002) Cancer Res 62:7012 a 7017). Essa abordagem capacita um entendimento mais completo da natureza complexa de células cancerígenas e os mecanismos de carcinogênese e facilita a identificação de genes cuja expressão é desregulada em tumores (Bienz M. e outros, (2000) Cell 103, 311 a 320). Dentre os transcritos identificados como superregulados em cânceres, CDH3 (N° Acesso ao GenBank NM_001793; SEQ ID Nos. 1, 2), EPHA4 (N° Acesso ao GenBank L36645; SEQ ID Nos. 3, 4), ECT2 (N° Acesso ao GenBank AY376439; SEQ ID Nos. 5, 6), HIG2 (N° Acesso ao GenBank NM_013332; SEQ ID Nos. 7, 8) INHBB (N° Acesso ao GenBank NM_002193; SEQ ID Nos. 9, 10), KIF20A (N° Acesso ao GenBank NM_005733; SEQ ID Nos. 11, 12), KNTC2 (N° Acesso ao GenBank AF017790; SEQ ID Nos. 13, 14), TTK (N° Acesso ao GenBank NM_003318; SEQ ID Nos. 15, 16) e URLC10 (N° Acesso ao GenBank NM_017527; SEQ ID Nos. 17, 18) foram recentemente descobertos. Os conteúdos integrais das referências que são incorporados aqui a título de referência. Esses genes são de particular interesse aos presentes inventores, sendo especificamente superregulados em células tumorais dos vários tecidos cancerígenos dos casos analisados (ver abaixo). Assim, os peptídeos imunogênicos derivados de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e URLC10 podem encontrar utilidade em seletivamente matar células tumorais que expressam tais antígenos. A presente invenção aborda essas e outras necessidades.
[008] Visto que os fármacos citotóxicos, tal como M-VAC, fre quentemente causam reações adversas graves, é claro que a seleção cuidadosa de novas moléculas-alvo com base em mecanismos bem caracterizados de ação deveriam ser úteis no desenvolvimento de fármacos eficazes anticâncer tendo um risco minimizado de efeitos colaterais. Em direção a esse objetivo, as análises de perfil de expressão foram previamente executadas em vários cânceres e tecidos humanos normais. Tais estudos levaram à descoberta de múltiplos genes que são especificamente superexpressos em câncer (Lin YM, e outros, Oncogene. 2002 13 de Jun; 21:4120 a 4128.; Kitahara O, e outros, Cancer Res. Maio de 2001 l; 61:3544 a 3549; Suzuki C, e outros, Cancer Res. 1 de Nov de 2003; 63:7038 a 7041; Ashida S, Cancer Res. 1 de Set de 2004; 64:5963 a 5972; Ochi K, e outros, Int J Oncol. Mar de 2004; 24(3):647 a 655; Kaneta Y, e outros, Int J Oncol. Set de 2003; 23:681 a 691.; Obama K, Hepatology. Jun de 2005; 41:1339 a 1348; Kato T, e outros, Cancer Res. 1 de Jul de 2005; 65:5638 a 5646; Kita- hara O, e outros, Neoplasia. Jul-Ago 2002;4:295 a 303; Saito- Hisami- nato A e outros, DNA Res 2002, 9: 35 a 45). Exemplos de tais genes identificados como superexpressos em vários cânceres incluem, mas não estão limitados a CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e URLC10. O CDH3 foi previamente identificado como superexpresso em câncer de bexiga, câncer cervical, carcinoma co- langiocelular, câncer colorretal, endometriose, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso, câncer de pulmão de células não-pequenas (NSCLC), câncer pancreático, tumor de tecido mole e tumor testicular. O EPHA4 foi identificado no câncer de bexiga, câncer cervical, carcinoma colangiocelular, endometriose, câncer gástrico do tipo difuso, câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de próstata e tumor de tecido mole. O ECT2 foi identificado em câncer da bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma colangiocelular, leucemia mielóide crônica (LMC), câncer colorretal, câncer esofageal, NSCLC, linfoma, câncer de próstata, carcinoma renal e câncer de pulmão de pequenas células (SCLC). O HIG2 foi identificado em carcinoma renal e SCLC. O INHBB foi identificado em carcinoma colangiocelular, câncer esofage- al, NSCLC, carcinoma renal, SCLC e tumor de tecido mole. O KIF20A foi identificado em câncer de bexiga, câncer de mama, carcinoma co- langiocelular, câncer esofageal, NSCLC, câncer pancreático, câncer da próstata, carcinoma renal e SCLC. O KNTC2 foi identificado em câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma colan- giocelular, LMC, câncer colorretal, câncer esofageal, NSCLC, linfoma, câncer pancreático, osteosarcoma, câncer ovariano, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC e tumor de tecido mole. TTK foi identificado em câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma co- langiocelular, LMC, câncer colorretal, câncer esofageal, câncer de fí-gado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de próstata, SCLC e tumor de tecido mole. URLC10 foi identificado em câncer de bexiga, câncer cervical, carcinoma colangiocelular, câncer esofageal, câncer gástrico, NSCLC, osteosarcona, câncer pancreático, e SCLC.
[009] A presente invenção é baseada em parte na descoberta de alvos aplicáveis de imunoterapia. Como os TAAs não têm frequente-mente imunogenicidade, a descoberta de alvos apropriados é de ex-trema importância. Como notado acima, o CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e URLC10 foram identificados como superregulados em vários cânceres. Mais particularmente, esses genes foram identificados usando perfil de expressão de genes com um microarranjo de cDNA de amplo genoma. Como discutido acima, a expressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e URLC10 se mostrou ser especificamente superregulada em várias células tumorais, de células de câncer pancreático a células de carcinomas renais. Como descrito na Tabela 1, a expressão de CDH3 é validamente elevada em 26 dentre os 34 cânceres de bexiga, 17 dentre os 19 cânceres cervicais, todos os 19 carcinomas colangiocelu- lares, 30 dentre os 34 cânceres colorretais, 20 dentre as 21 endometrioses, 13 dentre os 20 cânceres gástricos, 7 dentre os 8 cânceres gástricos do tipo difuso, 36 dentre os 37 NSCLC, todos os 16 cânceres pancreáticos, todos os 21 tumores de tecido mole e todos os 10 tumores testiculares.
[010] A Tabela 1 demonstra adicionalmente que:
[011] A expressão de EPHA4 é validamente elevada em 14 den tre os 34 cânceres de bexiga, 8 dentre os 14 cânceres cervicais, 10 dentre os 25 carcinomas colangiocelulares, 5 dentre as 15 endometri-oses, 5 dentre os 8 cânceres gástricos do tipo difuso, todos os 5 cân- ceres de ovário, todos os 14 cânceres pancreáticos, 20 dentre os 51 cânceres de próstata e 14 dentre os 23 tumores de tecido mole.
[012] A expressão de ECT2 é validamente elevada em 17 dentre os 19 cânceres de bexiga, 5 dentre os 12 cânceres de mama, todos os 14 cânceres cervicais, todos os 13 carcinomas colangiocelulares, todos os 5 CML, 7 dentre os 8 cânceres colorretais, 12 dentre os 16 cânceres esofageais, 6 dentre os 16 NSCLC, 8 dentre os 10 linfomas, 1 dentre 1 câncer pancreático, 10 dentre os 13 cânceres de próstata, 3 dentre os 6 carcinomas renais e 12 dentre os 13 cânceres SCLC.
[013] A expressão de HIG2 é validamente elevada em 19 dentre os 20 cânceres renais e 7 dentro os 9 tumores de tecido mole.
[014] A expressão de INHBB é validamente elevada em 10 den tre os 21 carcinomas colangiocelulares, todos os 12 cânceres esofa- geais, 10 dentre os 13 NSCLC, 22 dentre os 24 carcinomas renais, 8 dentre os 14 cânceres SCLC e 45 dentre os 49 tumores de tecido mo-le.
[015] A expressão de KIF20A é validamente elevada em todos dos 31 cânceres de bexiga, 38 dentre os 61 cânceres de mama, 10 dentre os 11 carcinomas colangiocelulares, 7 dentre os 19 cânceres esofageais, 21 dentre os 22 NSCLC, todos os 6 cânceres ovarianos, 17 dentre os 36 cânceres de próstata, 6 dentre os 11 carcinomas re-nais, e todos os 15 SCLC.
[016] A expressão KNTC2 é validamente elevada em 30 dentre os 32 cânceres de bexiga, 47 dentre os 56 cânceres de mama, todos os 10 cânceres cervicais, 16 dentre os 22 carcinomas colangiocelula- res, 17 dentre os 37 CML, 3 dentre os 10 cânceres colorretais, 11 dentre os 46 cânceres esofageais, 15 dentre os 19 NSCLC, 7 dentre os 8 linfomas, 20 dentre os 24 osteosarcomas, 3 dentre os 5 cânceres ova- rianos, todos os 2 cânceres pancreáticos, 15 dentre os 37 cânceres de próstata, 14 dentre os 19 carcinomas renais, todos os 15 SCLC e 40 dentre os 59 tumores de tecido mole.
[017] A expressão de TTK é validamente elevada em todos os 27 cânceres de bexiga, 25 dentre os 30 cânceres de mama, 15 dentre os 16 cânceres cervicais, todos os 10 carcinomas colangiocelulares, 5 dentre os 7 CML, 6 dentre os 10 cânceres colorretais, 24 dentre os 44 cânceres esofageais, 8 dentre os 15 cânceres de fígado, todos os 12 NSCLC, todos os 6 linfomas, 13 dentre os 16 osteoblastoma, 12 den-tre os 17 cânceres de próstata, todos os 15 SCLC e 16 dentre os 33 tumores de tecido mole.
[018] A expressão URLC10 é validamente elevada em todos os 29 cânceres de bexiga, 15 dentre os 16 cânceres cervicais, todos os 7 carcinomas colangiocelulares, 7 dentre os 19 cânceres esofageais, todos os 3 cânceres gástricos, 24 dentre os 27 NSCLC, 15 dentre os 19 osteosarcomas, 4 dentre os 5 cânceres pancreáticos, 33 dentre os 43 tumores de tecido mole.
[019] A presente invenção é baseada, ao menos em parte, na identificação de peptídeos de epitopos específicos dos produtos de gene desses genes (CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e URLC10) que possuem a capacidade de induzir os lin- fócitos T citotóxicos (CTLs) específicos às moléculas correspondentes. Como discutido em detalhes abaixo, as Células Mononucleares do Sangue Periférico (PBMC) de doador saudável foram estimuladas usando os peptídeos candidatos de ligação HLA-A*2402 ou HLA- A*0201 derivados de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK ou URLC10. Os clones e/ou linhagens de CTL foram então estabelecidos com citotoxicidade específica contra as células-alvo positivas HLA-A24 ou HLA-A2 pulsadas com cada um dos peptídeos candidatos. Esses resultados demonstram que esses peptídeos são peptídeos de epitopos restritos a HLA-A24 ou HLA-A2 que induzem respostas imunes específicas e potentes contra células que expres- sam CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK ou URLC10.
[020] Consequentemente, a presente invenção fornece métodos para tratar ou prevenir uma doença associada com a superexpressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK ou URLC10, por exemplo, o câncer. Tais métodos envolvem a etapa de administrar a um sujeito em necessidade desses os polipeptídeos CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10 da invenção. A administração de tais peptídeo(s) resulta na indução de imunidade antitumoral que é induzida pela administração desses polipeptídeos. Assim, a presente invenção fornece métodos para induzir a imunidade antitumoral em um sujeito, tais métodos en-volvem a etapa de administrar ao sujeito os pelipeptídeos CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, bem como as composições farmacêuticas para tratar e prevenir uma doença associada com a superexpressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, o câncer, que inclui os polipeptídeos CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e URLC10. Exemplos de tais cânceres incluem, mas não estão limitados a câncer de bexiga, câncer de ma-ma, câncer cervical, carcinoma colangiocelular, LMC, câncer colorre- tal, endometriose, câncer esofageal, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, cân-cer de ovário, câncer pancreático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole, e tumor testicular.
[021] A presente invenção fornece adicionalmente métodos para prevenir a recorrência pós-cirúrgica das doenças mencionadas acima.
[022] Com relação aos objetivos específicos citados acima, os versados na técnica entenderão que um ou mais aspectos desta in-venção podem reunir certos objetivos, enquanto um ou mais outros aspectos podem alcançar certos outros objetivos. Cada objetivo pode não se aplicar igualmente, em todos os seus aspectos, a cada aspecto desta invenção. Como tal, os objetivos aqui citados podem ser visualizados na alternativa com relação a qualquer um dos aspectos desta invenção.
[023] Os objetivos e características adicionais da invenção se tornarão mais completamente aparentes quando a seguinte descrição detalhada é lida em conjunto com as figuras em anexo e exemplos. Entretanto, entende-se que ambos o sumário anterior da invenção e a seguinte descrição detalhada são de modalidades preferenciais, e não-restritivos da invenção ou outras modalidades alternativas da in-venção. Em particular, enquanto a invenção é escrita aqui com relação a um número de modalidades específicas, aprecia-se que a descrição é ilustrativa da invenção e não interpretada como limitante da invenção. Várias modificações e aplicações podem ocorrer àqueles que são versados na técnica, sem abandonar o espírito e escopo da invenção, como descrito pelas reivindicações em anexo. Igualmente, outros objetivos,características, benefícios e vantagens da presente invenção estarão aparentes a partir desse sumário e certas modalidades descritas abaixo, e estarão prontamente aparentes aos versados na técnica. Tais objetivos, características, benefícios e vantagens estarão aparentes a partir dos acima em conjunto com os exemplos em anexo, dados, figuras e todas as inferências razoáveis a serem delineadas a partir daqui, sozinhos ou com a consideração das referências incorporadas aqui.
[024] Vários aspectos e aplicações da presente invenção se tor narão aparentes aos versados na técnica em consideração à breve descrição das figuras e à descrição detalhada da presente invenção e suas modalidades preferenciais que seguem:
[025] A Figura 1-1 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que CDH3-A24-10-332 (SEQ ID N°: 34), CDH3-A24-10-470 (SEQ ID N°: 358), CDH3-A24-9- 513 (SEQ ID N°: 19), CDH3-A24-9-406 (SEQ ID N°: 22), CDH3-A24- 10-807 (SEQ ID N°: 30) e CDH3-A24-10-655 (SEQ ID N°: 344) mos-tram uma potente produção de IFN-gama. "a" descreve o exemplo de peptídeos negativos que não poderiam ser detectados pela capacida-de de indução de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA-A*2402. "b" descreve a capacidade de indução de CTL de CDH3- A24-10-332 (SEQ ID N°: 34). A CDH3-A24-10-332 (SEQ ID N°: 34) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 4 mostrado em poços de-limitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com peptídeo de epitopo. "c" descreve a ca-pacidade de indução de CTL de CDH3-A24-10-470 (SEQ ID N°: 358). A CDH3-A24-10-470 (SEQ ID N°: 358) demonstrou a potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 4 mostrado em poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células pulsadas com o pep- tídeo de epitopo. "d" descreve a capacidade de indução de CTL de CDH3-A24-9-513 (SEQ ID N°: 19). A CDH3-A24-9-513 (SEQ ID N°: 19) demonstrou a potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama. O poço N° 6 mostrada em poços delimitados por um retângulo no painel esquerdo demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o pep- tídeo de epitopo. Além disso, a linhagem de CTL que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 5 mostrada em poços delimitados por um retângulo no painel intermediário, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "e"des-creve a capacidade de indução de CTL de CDH3-A24-9-406 (SEQ ID N°: 22). A CDH3-A24-9-406 (SEQ ID N°: 22) demonstrou a potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, a linhagem de CTL, que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 2 mostrado em poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo.
[026] A Figura 1-2 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que CDH3-A24-10-332 (SEQ ID N°: 34), CDH3-A24-10-470 (SEQ ID N°: 358), CDH3-A24-9- 513 (SEQ ID N°: 19), CDH3-A24-9-406 (SEQ ID N°: 22), CDH3-A24- 10-807 (SEQ ID N°: 30) e CDH3-A24-10-655 (SEQ ID N°: 344) mos-tram potente produção de IFN-gama. "f" descreve a capacidade de in-dução de CTL de CDH3-A24-10-807 (SEQ ID N°: 30). A CDH3-A24- 10-807 (SEQ ID N°: 30) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL e o clone foram estabelecidos a partir do poço po-sitivo N° 5 mostrado em poços delimitados por um retângulo. O clone de CTL estabelecido contra o peptídeo demonstrou a atividade de CTL específica contra as células COS7 transfectadas no comprimento total do gene CDH3 e da molécula HLA-A24 (gráfico inferior à direita). Por outro lado, as células COS7 transfectadas no comprimento inteiro de CDH3, mas não HLA-A24 e células COS7 transfectadas com HLA- A24, mas não no comprimento total de CDH3, foram preparadas para o controle negativo. O clone de CTL que mostrou alta atividade de CTL específica contra a célula COS7 foi o transfectado em ambos CDH3 e HLA-A24. "g" descreve a capacidade de indução de CTL de CDH3- A24-10-655 (SEQ ID N°: 344). A CDH3-A24-10-655 (SEQ ID N°: 344) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, a linhagem de CTL e o clone foram estabelecidos a partir do poço positivo N° 1 mostrado em poços delimitadas por um retângulo. O clone de CTL estabelecido contra o peptídeo demonstrou a atividade de CTL específica contra a célula COS7 transfectada com ambos o comprimento total do gene CDH3 e da molécula HLA-A24 (gráfico inferior à direita). Por outro lado, a célula COS7 transfectada no comprimento total de CDH3, mas não em HLA-A24 e a célula COS7 transfectada com HLA-A24, mas não no comprimento total de CDH3, foram preparadas para o controle negativo. O clone de CTL que mostrou alta atividade de CTL específica contra a COS7 foi o transfectado em com ambos CDH3 e HLA-A24.
[027] A Figura 2 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que Epha4-A24-9-453 (SEQ ID N°: 41), Epha4-A24-9-5 (SEQ ID N°: 44), Epha4-A24-9-420 (SEQ ID N°: 48), Epha4-A24-9-869 (SEQ ID N°: 46), Epha4-A24- 10 24 (SEQ ID N°: 78), Epha4-A02-9-501 (SEQ ID N°: 376) e Epha4-A02- 9-165 (SEQ ID N°: 379) mostraram potente produção de IFN-gama. "a" descreve o exemplo de peptídeos negativos que poderiam não ser detectados pela capacidade de indução de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA. "b" descreve a capacidade de indução da CTL de Epha4-A24-9-453 (SEQ ID N°: 41). A Epha4-A24-9-453 (SEQ ID N°: 41) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, a linhagem de CTL que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 3 mostrada em poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "c" descreve a capacidade de indução da CTL de Epha4-A24-9-5 (SEQ ID N°: 44). A Epha4-A24-9-453 (SEQ ID N°: 44) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, a linhagem de CTL que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 2 mostrada em poços delimitados por um retângulo, de-monstrou a resposta específica contra células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "d" descreve a capacidade de indução da CTL de Epha4-A24-9-420 (SEQ ID N°: 48). A Epha4-A24-9-420 (SEQ ID N°: 481) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama. O poço N° 6, mostra-do em poços delimitados por um retângulo no painel superior, demonstrou a resposta específica contra células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. Além disso, a linhagem de CTL foi estabelecida a partir do poço positivo N° 6, mostrada em poços delimitados por um retângulo no painel intermediário, demonstrou a resposta contra células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "e" descreve a capacidade de indução de CTL de Epha4-A24-9-453 (SEQ ID N°: 46). A Epha4-A24- 9-869 (SEQ ID N°: 46) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, a linhagem de CTL, que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 5 mostrada em poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra células-alvo pulsadas com o peptídeo de epi- topo. "f" descreve a capacidade de indução de CTL de Epha4-A24-10- 24 (SEQ ID N°: 78). A Epha4-A24-10-24 (SEQ ID N°: 78) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, a linhagem de CTL, que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 4 mostrado em poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "g" descreve a capacidade de indução de CTL de Epha4-A02-9-501 (SEQ ID N°: 376). A Epha4-A02- 9-501 (SEQ ID N°: 376) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL e o clone foram estabelecidos a partir do poço positivo N° 8 mostrado em poços delimitados por um retângulo. A ativi- dade citotóxica da linhagem de CTL estabelecida contra as células- alvo pulsadas com o peptídeo foi medida pelo ensaio de liberação de Cr (CRA) (gráfico inferior), e a linhagem de CTL teve atividade citotóxi- ca específica muito potente contra as células-alvo pulsadas com os peptídeos. "h" descreve a capacidade de indução de CTL de Epha4- A02-9-165 (SEQ ID N°: 379). A Epha4-A02-9-165 (SEQ ID N°: 379) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, a linhagem de CTL foi estabelecida a partir do poço positivo N° 3 mostrado em poços delimi-tados por um retângulo. A atividade citotóxica da linhagem de CTL es-tabelecida contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo foi medida pelo ensaio de liberação de Cr (CRA) (gráfico da direita), e a linhagem de CTL teve atividade citotóxica específica muito potente contra as células-alvo pulsadas com os peptídeos.
[028] A Figura 3 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que ECT2-A24-9-515 (SEQ ID N°: 80), ECT2-A24-10-40 (SEQ ID N°: 100) e ECT2-A24-10- 101 (SEQ ID N°: 101) mostram potente produção de IFN-gama. "a" descreve o exemplo de peptídeos negativos que poderiam não ser de-tectados pela capacidade de indução de CTL, apesar da possível ati-vidade de ligação com HLA. "b" descreve a capacidade de indução de CTL de ECT2-A24-9-515 (SEQ ID N°: 80). A ECT2-A24-9-515 (SEQ ID N°: 80) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama. Os poços N° 5 e N° 7 mostrados em poços delimitadas por um retângulo no painel da esquerda demonstraram a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. Além disso, a linhagem de CTL, que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 7 mostrado em poços delimitadas por um retângulo no segundo painel, demonstrou a resposta específica contra células-alvo pulsadas com o peptídeo de epi- topo. A atividade citotóxica da linhagem de CTL contra a linhagem de célula cancerígena, o TE6 expressando de forma endógena o ECT2 e a HLA-A24 foi medida pelo ensaio de liberação de Cr (CRA), e o clone de CTL teve atividade citotóxica muito potente contra o TE6. Por outro lado, as células efetoras não demonstraram a atividade citotóxica da linhagem de CTL contra a linhagem de célula cancerígena, o TE5 ex-pressando somente ECT2 não foi detectado. "c" descreve a capacida-de de indução de CTL de ECT2-A24-10-40 (SEQ ID N°: 100). A ECT2- A24-10-40 (SEQ ID N°: 100) demonstrou potente produção de IFN- gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN- gama, e a linhagem de CTL e o clone foram estabelecidos a partir do poço positivo N° 2 mostrado em poços delimitados por um retângulo. O clone CTL estabelecido contra o peptídeo demonstrou a atividade de CTL específica contra a célula COS7 transfectada com ambos o comprimento total do gene ECT2 e na molécula HLA-A24. Por outro lado, a célula COS7 transfectada no comprimento total de ECT2, mas não em HLA-A24, COS7 transfectada com HLA-A24 e no gene URLC10 como um substituto para o comprimento total de ECT2 e COS7 transfectada com HLA-A24 e pulsada com ECT2-10-101, foram preparadas para o controle negativo. O clone de CTL que mostrou alta atividade de CTL específica contra a célula COS7 foi o transfectado com ambos ECT2 e HLA-A24. "d" descreve a capacidade de indução de CTL de ECT2- A24-10-101 (SEQ ID N°: 101). A ECT2-A24-10-101 (SEQ ID N°: 101) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, a linhagem de CTL foi estabelecida a partir do poço positivo N° 1 mostrado em poços delimitados por um retângulo. A linhagem de CTL estabelecida contra o pep- tídeo demonstrou atividade de CTL específica contra a célula COS7 transfectada com ambos o comprimento total do gene ECT2 e da molécula HLA-A24. A célula COS7 transfectada no comprimento total de ECT2, mas não em HLA-A24, a célula COS7 transfectada com HLA- A24 e no gene URLC10 como um substituto para o comprimento total de ECT2 e a célula COS7 transfectada com HLA-A24 e pulsada com ECT2-10-40 foram preparadas para o controle negativo. O clone de CTL que mostrou alta atividade de CTL específica contra COS7 foi o transfectado com ambos ECT2 e HLA-A24.
[029] A Figura 4-1 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que HIG2-A24-9-19 (SEQ ID N°: 110), HIG2-A24-9-22 (SEQ ID N°: 111), HIG2-A24-9-8 (SEQ ID N°: 387), HIG2-A24-10-7 (SEQ ID N°: 112), HIG2-A24-10-18 (SEQ ID N°: 394), HIG2-A02-9-15 (SEQ ID N°: 116), HIG2-A02-9-4 (SEQ ID N°: 117) e HIG2-A02-10-8 (SEQ ID N°: 121) mostram potente produção de IFN-gama. "a" descreve o exemplo de peptídeos negativos que poderiamnão ser detectados pela capacidade de indução de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA. "b" descreve a capacidade de indução de CTL de HIG2-A24-9-19 (SEQ ID N°: 110). A HIG2-A24- 9-19 (SEQ ID N°: 110) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL, que foi estabelecida a partir do poço N° 6 mostrado em poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "c" descreve a capacidade de indução de CTL de HIG2-A24-9-22 (SEQ ID N°: 111). A HIG2-A24-9-22 (SEQ ID N°: 111) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELIS- POT de IFN-gama, a linhagem de CTL e o clone que foi estabelecido a partir do poço positivo N° 7 mostrado em poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "d" descreve a capacidade de indução de CTL de HIG2-A24-9-8 (SEQ ID N°: 387). A HIG2-A24-9-8 (SEQ ID N°: 387) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, a linha-gem de CTL e o clone, que foi estabelecido a partir do poço positivo N° 5 mostrado em poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "e" descreve a Capacidade de indução de CTL de HIG2-A02- 9-8 (SEQ ID N°: 114). A HIG2-A02-9-8 (SEQ ID N°: 114) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL foi estabelecida a partir do poço positivo N° 10 mostrado em poços delimitados por um retângulo. A linhagem de CTL estabelecida contra o peptídeo demonstrou a atividade de CTL específica contra célula 293T transfectada no comprimento total do gene HIG2 e HLA-A02. As células 293T transfec- tadas no comprimento total de HIG2, mas não em HLA-A02, as células 293T transfectadas com HLA-A02 e no gene FoxP3 como substituto para o comprimento total de HIG2 e as células 293T transfectadas com HLA-A02 e pulsadas com a HIG2-9-15 foram preparadas para o controle negativo. A linhagem de CTL que mostrou alta atividade de CTL específica contra 293T foi a transfectada com ambos HIG2 e HLA-A02.
[030] A Figura 4-2 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que HIG2-A24-9-19 (SEQ ID N°: 110), HIG2-A24-9-22 (SEQ ID N°: 111), HIG2-A24-9-8 (SEQ ID N°: 387), HIG2-A24-10-7 (SEQ ID N°: 112), HIG2-A24-10-18 (SEQ ID N°: 394), HIG2-A02-9-15 (SEQ ID N°: 116), HIG2-A02-9-4 (SEQ ID N°: 117) e HIG2-A02-10-8 (SEQ ID N°: 121) mostram potente produção de IFN-gama. "f" descreve a capacidade de indução de HIG2-A24-10-7 (SEQ ID N°: 112). A HIG2-A24-10-7 (SEQ ID N°: 112) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL ou clone de CTL, que foram estabelecidos a partir dos poços N° 1 e N° 7 mostrados em poços delimitados por um retângulo, demonstraram a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "g" descreve a capacidade de indução da CTL de HIG2-A24-10-18 (SEQ ID N°: 394). A HIG2-A24-10-18 (SEQ ID N°: 394) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, a linhagem de CTL e o clone de CTL, que foramestabelecidos a partir do poço positivo N° 7 mostrado em poços delimitados por um retângulo, demonstraram a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "h" descrevea capacidade de indução de CTL de HIG2-A02-9-15 (SEQ ID N°: 116). A HIG2-A02-9-15 (SEQ ID N°: 116) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELIS- POT de IFN-gama, a linhagem de CTL foi estabelecida a partir do poço positivo N° 10 mostrado em poços delimitados por um retângulo. A linhagem de CTL estabelecida contra o peptídeo demonstrou a atividade de CTL específica contra a COS7 transfectada com ambos o comprimento total do gene HIG2 e a molécula HLA-A02. As células COS7 transfectadas com o comprimento total de HIG2, mas não HLA- A02 e as células COS7 transfectadas com HLA-A02 e pulsadas com o peptídeo HIG2-9-8 foram preparadas para o controle negativo. A linhagem de CTL que mostrou alta atividade de CTL específica contra a COS7 foi a transfectada com ambos HIG2 e HLA-A02.
[031] A Figura 4-3 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que HIG2-A24-9-19 (SEQ ID N°: 110), HIG2-A24-9-22 (SEQ ID N°: 111), HIG2-A24-9-8 (SEQ ID N°: 387), HIG2-A24-10-7 (SEQ ID N°: 112), HIG2-A24-10-18 (SEQ ID N°: 394), HIG2-A02-9-15 (SEQ ID N°: 116), HIG2-A02-9-4 (SEQ ID N°: 117) e HIG2-A02-10-8 (SEQ ID N°: 121) mostram potente produção de IFN-gama. "i" descreve a capacidade de indução de CTL de HIG2- A02-9-4 (SEQ ID N°: 117). A HIG2-A02-9-4 (SEQ ID N°: 117) demons- trou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL e o clone de CTL foram estabelecidos a partir do poço N° 10 mostrado em poços delimitados por um retângulo. A linhagem de CTL estabelecida contra o peptídeo demonstrou a atividade de CTL específica contra a COS7 transfectada com ambos o comprimento total do gene HIG2 e a molé-cula HLA-A02 (gráfico intermediário). Também, a COS7 transfectada com o comprimento total de HIG2, mas não HLA-A02 e as COS7s transfectadas com HLA-A02 e o gene TTK como substituto para o comprimento total de HIG2 e as COS7s transfectadas com HLA-A02 e pulsadas com HIG2-9-8 foram preparadas para o controle negativo. A atividade citotóxica do clone de CTL contra 293T, transfectada com ambos o comprimento total do gene HIG2 e a molécula HLA-A02, e a linhagem de célula cancerígena, Caki-1 expressando de forma endó-gena HIG2 e a HLA-A02 foi medida pelo ensaio de liberação de Cr (CRA) (gráficos inferiores), e o clone de CTL teve atividade citotóxica muito potente contra o transfectante com ambos o gene HIG2 e HLA- A02, e Caki-1. Por outro lado, as células efetoras não demonstraram a atividade citotóxica da linhagem de CTL contra 293T, transfectada so-mente com HIG2 ou somente com HLA-A02, e a linhagem de célula cancerígena, A498 expressando somente HIG2 não foi detectada. "j" descreve a capacidade de indução de CTL de HIG2-A02-10-8 (SEQ ID N°: 121). A HIG2-A02-10-8 (SEQ ID N°: 121) demonstrou potente pro-dução de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELIS- POT de IFN-gama, e a linhagem de CTL, que foi estabelecida a partir do poço N° 9 mostrado em poços delimitados por um retângulo, de-monstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo.
[032] A Figura 5-1 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que INHBB-A24-9-180 (SEQ ID N°: 395), INHBB-A24-10-180 (SEQ ID N°: 133), INHBB-A24- 10-305 (SEQ ID N°: 135), INHBB-A24-10-7 (SEQ ID N°: 137) e INHBB- A24-10-212 (SEQ ID N°: 426) mostram forte produção de IFN-gama. "a" descreve o exemplo de peptídeos negativos que poderiam não ser detectados pela capacidade de indução de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA. "b" descreve a capacidade de indução de CTL de INHBB-A24-9-180 (SEQ ID N°: 395). A INHBB-A24-9-180 (SEQ ID N°: 395) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e linhagem de CTL e o clone de CTL foram estabelecidos a partir do poço positivo N° 7 mostrado em poços delimitados por um retângulo. A atividade citotóxica do clone de CTL estabelecido contra células tumo- rais, Miapaca2 expressando ambos INHBB e HLA-A02, foi medida pelo ensaio de liberação de Cr (CRA), e as células efetoras mostraram alta atividade citotóxica específica contra Miapaca2. Por outro lado, ele não mostrou atividade citotóxica específica significativa contra Caki-2 expressando INHBB, mas não HLA-A02. "c" descreve a capacidade de indução de CTL de INHBB-A24-10-180 (SEQ ID N°: 133). A INHBB- A24-10-180 (SEQ ID N°: 133) demonstrou potente produção de IFN- gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN- gama, e a linhagem de CTL foi estabelecida a partir do poço N° 3 mostrada nas células encaixotadas. A linhagem de CTL estabelecida contra o peptídeo demonstrou a atividade de CTL específica contra 293T transfectada com ambos o comprimento total do gene INHBB e a molécula HLA-A24. Também a 293T transfectada com o comprimento to-tal de INHBB, mas não HLA-A24 e as 293Ts transfectadas com HLA- A02 e pulsadas com o peptídeo INHBB-10-305 foram preparadas para o controle negativo.
[033] A Figura 5-2 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que INHBB-A24-9-180 (SEQ ID N°: 395), INHBB-A24-10-180 (SEQ ID N°: 133), INHBB-A24- 10-305 (SEQ ID N°: 135), INHBB-A24-10-7 (SEQ ID N°: 137) e INHBB- A24-10-212 (SEQ ID N°: 426) mostram potente produção de IFN- gama. "d" descreve a capacidade de indução de CTL de INHBB-A24- 10-305 (SEQ ID N°: 135). INHBB-A24-10-305 (SEQ ID N°: 135) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e linhagem de CTL e o clone estabelecidos a partir do poço positivo N° 2 mostrado em poços delimitados por um retângulo. O clone de CTL estabelecido contra o peptí- deo demonstrou alta atividade de CTL específica, contra a 293T trans- fectada com ambos o comprimento total do gene INHBB e a molécula HLA-A24. Também, a 293T transfectada com o comprimento total de INHBB, mas não com HLA-A24 e as 293Ts transfectadas com HLA- A24 e pulsadas com o peptídeo INHBB-10-180 foram preparadas para o controle negativo. "e" descreve a capacidade de indução de CTL de INHBB-A24-10-7 (SEQ ID N°: 137). INHBB-A24-10-7 (SEQ ID N°: 137) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e as linhagens de CTL foram estabelecidas a partir do poço positivo N° 8 mostrados em poços delimitados por um retângulo no painel superior e poço N° 2 mostrado em poços delimitados por um retângulo no painel inferior. A linhagem de CTL do poço N° 8 demonstrou atividade específica de CTL contra células 293T transfectadas com ambos o comprimento completo do gene INHBB e a molécula HLA-A24. Também, as células 293T trans- fectadas com o comprimento completo de INHBB, mas não com HLA- A24 e as células 293T transfectadas com HLA-A24 e pulsadas com o peptídeo INHBB-10-40 foram preparadas para o controle negativo. "f" descreve a capacidade de indução de CTL de INHBB-A24-10-212 (SEQ ID N°: 426). INHBB -A24-10-212 (SEQ ID N°: 426) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL, que foi estabelecida a partir do poço N° 1 mostrado em poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo.
[034] A Figura 6-1 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186), KIF20A-A24-9-383 (SEQ ID N°: 178), KIF20A-A24- 10-66 (SEQ ID N°: 194) e KIF20A-A24-9-305 (SEQ ID N°: 174) mos-tram potente produção de IFN-gama. "a" descreve o exemplo de pep- tídeos negativos que poderiam não ser detectados pela capacidade de indução de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA. "b" descreve a capacidade de indução de CTL de KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186). A KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama. O poço N° 5 mostrado em poços delimitados por um retângulo no painel inferior à direita demonstrou a resposta específica contra células-alvo pulsadas com o peptídeo de epi- topo. Além disso, a linhagem de CTL e o clone de CTL, que foram estabelecidos a partir do poço positivo N° 5 mostrado em poços no painel superior à esquerda, também demonstraram a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. O clone CTL estabelecido contra o peptídeo demonstrou a atividade de CTL específica contra célula 24-LCL transfectada com o comprimento inteiro do gene KIF20A. Também, A24-LCL transfectada com o vetor de simulação foi preparada para o controle negativo. A atividade citotóxi- ca do clone de CTL contra células tumorais, Miapaca2 expressando ambos KIF20A e HLA-A24, foi medida pelo ensaio de liberação de Cr (CRA), e o clone de CTL teve atividade citotóxica específica muito potente contra Miapaca2 (gráfico inferior à direita). Por outro lado, ele não mostrou atividade citotóxica específica significativa contra PK59 expressando KIF20A, mas não HLA-A24. "c" descreve a capacidade de indução de CTL de KIF20A-A24-9-383 (SEQ ID N°: 178). A KIF20A- A24-9-383 (SEQ ID N°: 178) demonstrou potente produção de IFN- gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN- gama. Os poços N° 3 e N° 4 mostrados nos poços delimitados por um retângulo no painel da direita demonstraram a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. Além disso, a linhagem de CTL, que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 3 mostrado em poços delimitados por um retângulo no painel da esquerda,também demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. A linhagem de CTL estabelecida demonstrou alta atividade de CTL específica contra a COS7 transfec- tada com ambos o comprimento total do gene KIF20A e da molécula HLA-A24. Também, as células COS7 transfectadas com o comprimento total de KIF20A, mas não com HLA-A24 e as células COS7s trans- fectadas com HLA-A24 e pulsadas com o peptídeo KIF20A-9-621 foram preparadas para o controle negativo.
[035] A Figura 6-2 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186), KIF20A-A24-9-383 (SEQ ID N°: 178), KIF20A-A24- 10-66 (SEQ ID N°: 194) e KIF20A-A24-9-305 (SEQ ID N°: 174) mos-tram potente produção de IFN-gama. "d" descreve a capacidade de indução de CTL de KIF20A-A24-10-66 (SEQ ID N°: 194). KIF20A-A24- 10-66 (SEQ ID N°: 194) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e as linhagens de CTL, que foram estabelecidas a partir do poço positivo N° 6 mostrado nos poços delimitados por um retângulo no painel superior da esquerda e do poço N° 3 mostrado nos poços delimitados por um retângulo no painel intermediário inferior, demonstraram a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. Além disso, o clone de CTL selecionado a partir da linhagem de CTL a partir do poço N° 6 limitando a diluição demonstrou a atividade de CTL específica contra as células-alvo. O clone de CTL estabelecido que mostrou atividade de CTL específica contra a COS7 foi o transfectado com ambos o comprimento total do gene KIF20A e a molécula HLA- A24. Também, a COS7 transfectada com o comprimento total de KIF20A, mas não HLA-A24, as COS7s transfectadas com HLA-A24 e o gene URLC10 como substituto para o comprimento total de KIF20A e as COS7 transfectadas com HLA-A24 e pulsadas com peptídeo KIF20A-10-308 foram preparadas para o controle negativo. "e"descreve a capacidade de indução de CTL de KIF20A-A24-9-305 (SEQ ID N°: 174). KIF20A-A24-9-305 (SEQ ID N°: 174) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, as linhagens de CTL, que foram estabelecidas a partir do poço positivo N° 2 mostrado nos poços delimitados por um retângulo no painel superior da esquerda e do poço N° 6 mostrado nos poços delimitados por um retângulo no painel intermediário inferior, demonstraram a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. Além disso, o clone de CTL selecionado a partir da linhagem de CTL a partir do poço N° 2 limitando a diluição demonstrou a atividade de CTL específica contra as células-alvo. A atividade citotóxica do clone de CTL contra as células tumorais, PK45P expressando ambos KIF20A e HLA-A24, foi medida pelo ensaio de liberação de Cr (CRA), e o clone de CTL teve atividade citotó- xica muito potente contra PK45P. Por outro lado, ele não mostrou atividade citotóxica específica significativa contra PK59 expressando KIF20A, mas não HLA-A24.
[036] A Figura 7-1 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que KNTC2-A24-9-309 (SEQ ID N°: 196), KNTC2-A24-9-124 (SEQ ID N°: 202), KNTC2-A24-9- 154 (SEQ ID N°: 210) KNTC2-A24-9-150 (SEQ ID N°: 213), KNTC2- A24-10-452 (SEQ ID N°: 214), KNTC2-A24-10-227 (SEQ ID N°: 217) e KNTC2-A24-10-273 (SEQ ID N°: 223) mostram potente produção de IFN-gama. "a" descreve o exemplo de peptídeos negativos que pode-riamnão ser detectados pela capacidade de indução de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA. "b" descreve a capacidade de indução de CTL de KNTC2-A24-9-309 (SEQ ID N°: 196). A KNTC2- A24-9-309 (SEQ ID N°: 196) demonstrou potente produção de IFN- gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN- gama, e a linhagem de CTL, que foi estabelecida partir do poço positi-vo N° 8 mostrado nos poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "c" descreve a capacidade de indução de CTL de KNTC2- A24-9-124 (SEQ ID N°: 202). A KNTC2-A24-9-124 (SEQ ID N°: 202) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL, que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 5 mostrado nas poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "d" descreve a capacidade de indução de CTL de KNTC2-A24-9-154 (SEQ ID N°: 210). A KNTC2-A24-9-154 (SEQ ID N°: 210) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELIS- POT de IFN-gama, e a linhagem de CTL e o clone de CTL, que foram estabelecidos a partir do poço positivo N° 5 mostrado nos poços delimitados por um retângulo, demonstraram a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "e" descreve a capacidade de indução de CTL de KNTC2-A24-9-150 (SEQ ID N°: 213). A KNTC2-A24-9-150 (SEQ ID N°: 213) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELIS- POT de IFN-gama, e a linhagem de CTL, que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 7 mostrado nos poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo.
[037] A Figura 7-2 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que KNTC2-A24-9-309 (SEQ ID N°: 196), KNTC2-A24-9-124 (SEQ ID N°: 202), KIF20A-A24- 9-154 (SEQ ID N°: 210), KNTC2-A24-9-150 (SEQ ID N°: 213), KNTC2- A24-10-452 (SEQ ID N°: 214), KNTC2-A24-10-227 (SEQ ID N°: 217) e KNTC2-A24-10-273 (SEQ ID N°: 223) mostram potente produção de IFN-gama. "f" descreve a capacidade de indução de CTL de KNTC2- A24-10-452 (SEQ ID N°: 214). A KNTC2-A24-10-452 (SEQ ID N°: 214) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e as linhagens e o clone de CTL, que foram estabelecidos partir do poço positivo N° 4 mostrado nas poços delimitados por um retângulo no painel da esquerda superior e do poço N° 5 mostrado nos poços delimitados por um retângulo no painel intermediário, demonstraram a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. Além disso, o clone de CTL selecionado a partir da linhagem de CTL do poço N° 5 limitando a diluição demonstrou a atividade de CTL específica contra as células-alvo. A linhagem de CTL estabelecida a partir do poço N° 4 mostrou atividade de CTL específica contra HEK293 transfectada com ambos o comprimento total do gene KNTC2 e a molécula HLA-A24. Também, a célula HEK293 transfectada com o comprimento total de KNTC2, mas não HLA-A24, a HEK293 transfectada com HLA-A24, mas não com o comprimento total do KNTC2, a HEK293 transfectada com HLA-H24 pulsada com o peptídeo KNTC-9-309 foram preparadas para o controle negativo. "g" descreve a capacidade de indução de CTL de KNTC2-A24-10-227 (SEQ ID N°: 217). A KNTC2-A24-10-227 (SEQ ID N°: 217) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linha-gem de CTL, que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 1 mos-trado nos poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "h" descreve a capacidade de indução de CTL de KNTC2-A24-10-273 (SEQ ID N°: 223). A KNTC2-A24-10-273 (SEQ ID N°: 223) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL, que foi estabelecidaa partir do poço positivo N° 8 mostrado nos poços delimitados delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo.
[038] A Figura 8-1 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que TTK-A02-9-462 (SEQ ID N°: 227), TTK-A02-9-719 (SEQ ID N°: 233), TTK-A02-9-547 (SEQ ID N°: 228) e TTK- A02-10-462 (SEQ ID N°: 254), mostram forte pro-dução de IFN-gama. "a" descreve o exemplo de peptídeos negativos que não poderiam ser detectados pela capacidade de indução de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA. "b" descreve a ca-pacidade de indução de CTL de TTK-A02-9-462 (SEQ ID N°: 227). A TTK-A02-9-462 (SEQ ID N°: 227) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL e dois clones, que foram estabeleci-dosa partir do poço positivo N° 4 mostrado nos poços delimitados por um retângulo, demonstraram a resposta específica contra as células- alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. O clone de CTL estabeleci-do que mostrou alta atividade de CTL específica contra a COS7 foi o transfectado com ambos o comprimento total do gene TTK e da molé-cula HLA-A02. Também, as COS7 transfectadas com o comprimento total de TTK, mas não HLA-A02, 547 foram preparadas para o controle negativo. "c" descreve a capacidade de indução de CTL de TTK-A02- 9-719 (SEQ ID N°: 233). A TTK-A02-9-719 (SEQ ID N°: 233) demons-trou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL e os clones foram estabelecidos a partir do poço positivo N° 1 mostrado nos poços delimitados por um retângulo. A linhagem de CTL estabelecida que mostrou alta atividade de CTL específica contra COS7 foi a transfecta- da com ambos o comprimento total do gene TTK e a molécula HLA- A02. Também, a célula COS7 transfectada com o comprimento total de TTK, mas não HLA-A02 e as COS7s transfectadas com HLA-A02 e o gene HIG2 como substituto para o comprimento total de TTK foram preparadas para o controle negativo.
[039] A Figura 8-2 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que TTK-A02-9-462 (SEQ ID N°: 227), TTK-A02-9-719 (SEQ ID N°: 233), TTK-A02-9-547 (SEQ ID N°: 228) e TTK-A02-10-462 (SEQ ID N°: 254), mostram potente produção de IFN-gama. "d" descreve a capacidade de indução de CTL de TTK-A02-9-547 (SEQ ID N°: 228). A TTK-A02-9-547 (SEQ ID N°: 228) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL e os clones foram estabelecidos a partir do poço positivo N° 2 mostra-do nos poços delimitados por um retângulo. A linhagem de CTL esta-belecida que mostrou atividade de CTL específica contra a COS7 foi a transfectada com ambos o comprimento total do gene TTK e a molécula HLA-A02. Também, a COS7 transfectada com o comprimento total de TTK, mas não HLA-A02 e as COS7 transfectadas com HLA-A02, mas não o comprimento total do TTK e as COS7s transfectadas com HLA-A02 e pulsadas com o peptídeo TTK-10-462 foram preparadas para o controle negativo.
[040] A Figura 8-3 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que TTK-A02-9-462 (SEQ ID N°: 227), TTK-A02-9-719 (SEQ ID N°: 233), TTK-A02-9-547 (SEQ ID N°: 228) e TTK- A02-10-462 (SEQ ID N°: 254), mostram forte produção de IFN-gama. "e" descreve a capacidade de indução de CTL de TTK-A02-10-462 (SEQ ID N°: 254). A TTK- A02-10-462 (SEQ ID N°: 254) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL e três clones foram estabelecidos a partir do poço positivo N° 8 mostrado nos poços delimitados por um retângulo. O clone de CTL estabelecido que mostrou atividade de CTL específica contra a COS7 foi o transfectado com ambos o comprimento total do gene TTK e a molécula HLA-A02. Também, a célula COS7 transfectada com o comprimento total de TTK, mas não HLA-A02, as COS7 transfectadas com HLA- A02, mas não o comprimento total de TTK e as COS7 transfectadas com HLA-A02 e pulsadas com o peptídeo TTK-9-547 foram preparadas para o controle negativo.
[041] A Figura 9-1 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que URLC10-A02-9-206 (SEQ ID N°: 271), URLC10-A02-9-212 (SEQ ID N°: 272) e URLC 10- A02-10-211 (SEQ ID N°: 288), mostram potente produção de IFN- gama. "a" descreve o exemplo de peptídeos negativos que não pode-riam ser detectados pela capacidade de indução de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA. "b" descreve a capacidade de indução de CTL de URLC10-A02-9-206 (SEQ ID N°: 271). A URLC10- A02-9-206 (SEQ ID N°: 271) demonstrou potente produção de IFN- gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN- gama, e a linhagem de CTL, que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 7 mostrado nos poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o pep- tídeo de epitopo. "c" descreve a capacidade de indução de CTL de URLC10-A02-9-212 (SEQ ID N°: 272). URLC10-A02-9-212 (SEQ ID N°: 272) demonstrou potente produção de IFN-gama quando compa-rada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e a linhagem de CTL que foi estabelecida a partir do poço positivo N° 3 mostrado nos poços delimitados por um retângulo, demonstrou a resposta específica contra as células-alvo pulsadas com o peptídeo de epitopo. "d"descreve a capacidade de indução de CTL de URLC10-A02-10-211 (SEQ ID N°: 288). URLC 10—A02- 10-211 (SEQ ID N°: 288) demonstrou potente produção de IFN-gama quando comparada ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, a linhagem de CTL e os clones, que foram estabelecidos a partir do poço positivo N° 5 mostrado nos poços delimitados por um retângulo.
[042] A Figura 9-2 ilustra os resultados da triagem dos peptídeos de epitopos, que, por sua vez, demonstram que URLC10-A02-9-206 (SEQ ID N°: 271), URLC10-A02-9-212 (SEQ ID N°: 272) e URLC 10- A02- 10-211 (SEQ ID N°: 288), mostram potente produção de IFN- gama. "Continuação de d" O clone de CTL estabelecido que mostrou alta atividade de CTL específica contra a COS7, HEK293 e 293T foi o transfectado com ambos o comprimento total do gene URLC10 e a molécula HLA-A02. Também a COS7, a HEK293 ou a 293T que foram transfectados pelo comprimento total do URLC10, mas não pela HLA- A02 e os COS7s, os HEK293s ou os 293Ts, que foram transfectadas com HLA-A02 e pulsadas com o URLC10-10-64, foram preparadas para o controle negativo. Nesses desenhos, "+" significa o alvo pulsa-do de peptídeo, "-" significa o alvo pulsado sem peptídeo, "R" significa Respondente, "S" significa o Estimulador, "E" significa o Efetor, e "T" significa Alvo.
[043] Os artigos "um", "uma", "o" e "a", como usados aqui, signifi cam"ao menos um", a menos que de outra forma especificamente in-dicado.
[044] A menos que de outra forma definido, todos os termos téc nicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado usualmente entendido por um versado na técnica à qual esta invenção pertence.
[045] A presente invenção é baseada em parte na descoberta de alvos aplicáveis de imunoterapia. A identificação de novos TAAs, particularmente aqueles que induzem respostas imunes específicas anti- tumorais, garante o desenvolvimento adicional da aplicação clínica da estratégia de vacinação à base de peptídeos em vários tipos de câncer (Boon T e outros,(1996) J Exp Med 183: 725 a 729.; van der Bruggen P e outros, (1991) Science 254: 1643 a 1647.; Brichard V e outros, (1993) J Exp Med 178: 489 a 495.; Kawakami Y e outros, (1994) J Exp Med 180: 347 a 352.; Shichijo S e outros, (1998) J Exp Med 187:277 a 288.; Chen YT e outros, (1997) Proc. Natl. Acd. Sci.USA, 94: 1914 a 1918.; Harris CC, (1996) J Natl Cancer Inst 88:1442 a 1455.; Butterfield LH e outros, (1999) Cancer Res 59:3134 a 3142.; Vissers JL e outros, (1999) Cancer Res 59: 5554 a 5559.; van der Burg SH e outros, (1996) J. Immunol 156:3308 a 3314.; Tanaka F e outros, (1997) Cancer Res 57:4465 a 4468.; Fujie T e outros, (1999) Int J Cancer 80:169 a 172.; Kikuchi M e outros, (1999) Int J Cancer 81 : 459 a 466.; Oiso M e outros, (1999) Int J Cancer 81:387 a 394). Como TAAs frequentementenão têm imunogenicidade, a descoberta de alvos de ajuste é um evento extremamente importante.
[046] Como notado acima,
[047] CDH3 (Número de acesso ao GenBank NM_001793; SEQ ID Nos. 1, 2),
[048] EPHA4 (Número de acesso ao GenBank L36645; SEQ ID Nos. 3, 4),
[049] ECT2 (Número de acesso ao GenBank AY376439; SEQ ID Nos. 5, 6),
[050] HIG2 (Número de acesso ao GenBank NM_013332; SEQ ID Nos. 7, 8)
[051] INHBB (Número de acesso ao GenBank NM_002193; SEQ ID Nos. 9, 10),
[052] KIF20A (Número de acesso ao GenBank NM_005733; SEQ ID Nos. 11, 12),
[053] KNTC2 (Número de acesso ao GenBank AF017790; SEQ ID Nos. 13, 14),
[054] TTK (Número de acesso ao GenBank NM_003318; SEQ ID Nos. 15, 16) e
[055] URLC10 (Número de acesso ao GenBank NM_017527; SEQ ID Nos.17, 18)
[056] foram previamente identificados como superexpressos em vários cânceres usando as tecnologias de microarranjo de cDNA.
[057] Na presente invenção, os peptídeos derivados de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK ou URLC10 são mostrados como sendo epitopos de TAA restritos por HLA-A24 e HLA- A2, um alelo HLA comumente encontrado nas populações Japonesas e Caucasianas. Especificamente, usando suas afinidades de ligação à HLA-A24 ou à HLA-A2, os candidatos dos peptídeos de ligação HLA- A24 ou HLA-A2 derivados de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK ou URLC10 foram identificados. Após a estimulação in vitro de células T por células dendríticas (DCs) carregadas com estes peptídeos, os CTLs foram estabelecidos com sucesso usando os seguintes peptídeos. CDH3-A24-9-513 (SEQ ID N°: 19), CDH3-A24-9-406 (SEQ ID N°: 22), CDH3-A24-10-807 (SEQ ID N°: 30), CDH3-A24-10-332 (SEQ ID N°: 34), CDH3-A24-10-655 (SEQ ID N°: 344), CDH3-A24-10-470 (SEQ ID N°: 358), EphA4-A24-9-453 (SEQ ID N°: 41), EphA4-A24-9-5 (SEQ ID N°: 44), EphA4-A24-9-869 (SEQ ID N°: 46), EphA4-A24-9-420 (SEQ ID N°: 48), EphA4-A24-10-24 (SEQ ID N°: 78), EphA4-A02-9-501 (SEQ ID N°: 376), EphA4-A02-9-165 (SEQ ID N°: 379), ECT2-A24-9-515 (SEQ ID N°: 80), ECT2-A24-10-40 (SEQ ID N°: 100), ECT2-A24-10-101 (SEQ ID N°: 101), HIG2-A24-9-19 (SEQ ID N°: 110), HIG2-A24-9-22 (SEQ ID N°: 111), HIG2-A24-9-8 (SEQ ID N°: 387), HIG2-A24-10-7 (SEQ ID N°: 112), HIG2-A24-10-18 (SEQ ID N°: 394), HIG2-A02-9-8 (SEQ ID N°: 114), HIG2-A02-9-15 (SEQ ID N°: 116), HIG2-A02-9-4 (SEQ ID N°: 117), HIG2-A02-10-8 (SEQ ID N°: 121), INHBB-A24-9-180 (SEQ ID N°: 395), INHBB-A24-10-180 (SEQ ID N°: 133), INHBB-A24- 10-305 (SEQ ID N°: 135), INHBB-A24-10-7 (SEQ ID N°: 137), INHBB-A24-10-212 (SEQ ID N°: 426), KIF20A-A24-9-305 (SEQ ID N°: 174), KIF20A-A24-9-383 (SEQ ID N°: 178), KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186), KIF20A-A24-10-66 (SEQ ID N°: 194), KNTC2-A24-9-309 (SEQ ID N°: 196), KNTC2-A24-9-124 (SEQ ID N°: 202), KNTC2-A24-9-154 (SEQ ID N°: 210), KNTC2-A24-9-150 (SEQ ID N°: 213), KNTC2-A24- 10-452 (SEQ ID N°: 214), KNTC2-A24- 10-227 (SEQ ID N°: 217), KNTC2-A24- 10-273 (SEQ ID N°: 223), TTK-A02-9-462 (SEQ ID N°: 227), TTK-A02-9-547 (SEQ ID N°: 228), TTK-A02-9-719 (SEQ ID N°: 233), TTK- A02-10-462 (SEQ ID N°: 254), URLC-A02-9-206 (SEQ ID N°: 271), URLC-A02-9-212 (SEQ ID N°: 272) e URLC-A02-10-211 (SEQ ID N°: 288).
[058] Esses peptídeos são peptídeos de epitopos de cada TAA restrito por HLA-A24 ou HLA-A2. Visto que esses antígenos são supe- rexpressos na maioria dos cânceres e estão associados com a proliferação das células tumorais, eles encontram utilidade como alvos imu- noterapêuticos contra cânceres. Os cânceres exemplificados incluem, mas não estão limitados a, câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma colangiocelular, CML, câncer colorretal, endome- triose, câncer esofageal, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso,câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de ovário,câncer pancreático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular.
[059] Consequentemente, a presente invenção fornece adicio nalmente os métodos de tratar ou prevenir uma doença associada com a superexpressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres em um sujeito, tais métodos incluem as etapas de administrar ao sujeito um peptídeo imunogênico com menos de aproximadamente 40 aminoácidos, frequentemente com menos de aproximadamente 20 aminoácidos, usu- almente com menos de aproximadamente 15 aminoácidos e tendo a sequência de aminoácido de SEQ ID Nos: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 ou 288.
[060] Alternativamente, o peptídeo imunogênico pode ter uma sequência de aminoácidos como apresentada em SEQ ID Nos: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 ou 288 nas quais 1, 2 ou vários (por exemplo, até 5) aminoácidos são substituídos, apagados ou adicionados, visto que o peptídeo vari-ante resultante retém a atividade imunogênica (isto é, a capacidade de induzir as CTLs específicos às células expressando CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, os cânceres).
[061] O número de resíduos a serem substituídos, apagados, ou adicionados é geralmente 5 aminoácidos ou menos, preferencialmente de 4 aminoácidos ou menos, mais preferencialmente de 3 aminoácidos ou menos, ainda mais preferencialmente um ou dois aminoácidos. Os cânceres observados incluem, mas não estão limitados a câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma colangiocelular, CML, câncer colorretal, endometriose, câncer esofageal, câncer gástrico,câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de ovário, câncer pancreático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular. Ademais, a presente invenção fornece métodos para prevenir a recorrência pós-cirúrgica dessas doenças mencionadas acima.
[062] Peptídeos variantes (isto é, peptídeos tendo uma sequência de aminoácidos modificada pela substituição, apagamento ou adição de um, dois ou vários resíduos de aminoácidos a uma sequência de aminoácidos) são conhecidos por reter a atividade biológica original (Mark DF e outros, (1984) Proc Natl Acad Sci USA 81: 5662 a 5666; Zoller MJ e Smith M, (1982) Nucleic Acids Res 10: 6487 a 6500; Dal- badie-McFarland G e outros, (1982) Proc Natl Acad Sci USA 79: 6409 a 6413). No contexto da presente invenção, é preferível que a modificação de aminoácidos resulte na conservação das propriedades da cadeia lateral de aminoácido original (um processo conhecido como substituição conservativa de aminoácido). Exemplos de propriedades de cadeias laterais de aminoácido incluem os aminoácidos hidrofóbi- cos (A, I, L, M, F, P, W, Y, V), aminoácidos hidrofílicos (R, D, N, C, E, Q, G, H, K, S, T), e cadeias laterais tendo os seguintes grupos funcionais ou características em comum: uma cadeia lateral alifática (G, A, V, L, I, P); uma cadeia lateral contendo um grupo hidroxila (S, T, Y); uma cadeia lateral contendo um átomo de enxofre (C, M); uma cadeia lateral contendo um ácido carboxílico e amida (D, N, E, Q); uma cadeia lateral contendo base (R, K, H); e uma cadeia lateral contendo aromático (H, F, Y, W). Nota-se que, as letras entre parênteses indicam os códigos de uma letra dos aminoácidos.
[063] Em modalidades preferidas, o peptídeo imunogênico é um nonapeptídeo (9-mer) ou um decapeptídeo (10-mer).
[064] A presente invenção adicionalmente fornece um método de induzir imunidade antitumoral para uma doença associada com uma superexpressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres, em um sujeito, tal como um método que inclui as etapas de administrar ao sujeito um peptídeo imunogênico da presente invenção, ou seja, um tendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID Nos: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 ou 288, ou uma variante dessas (isto é, incluindo 1, 2 ou vários (por exemplo, até 5) substituições, apagamentos ou adições de aminoácidos ao sujeito em necessidade desses. Os cânceres observados incluem, mas não estão limitados a câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma colangiocelular, CML, câncer colorretal, endometriose, câncer esofageal, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de ovário, câncer pan- creático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular.
[065] No contexto da presente invenção, o sujeito é preferencial mente um mamífero. Mamíferos exemplificados incluem, mas não es-tão limitados a, por exemplo, um humano, primata não-humano, ca-mundongo, rato, cão, cavalo, ou vaca.
[066] Na presente invenção, o peptídeo pode ser administrado a um sujeito via um protocolo in vivo ou ex vivo. Ademais, a presente invenção também fornece o uso de nonapeptídeos ou decapeptídeos selecionados a partir de peptídeos que têm a sequência de aminoáci- dos de SEQ ID Nos: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 ou 288 (e variantes dessas) para fabricar uma composição imunogênica para tratar ou prevenir uma do-ença associada com a superexpressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cân-ceres. Os cânceres observados incluem, mas não estão limitados a, ao câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma co- langiocelular, CML, câncer colorretal, endometriose, câncer esofageal, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de ovário, câncer pancreático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular.
[067] As análises de homologia dos seguintes peptídeos demons tram que eles não têm homologia significativa com os peptídeos deri-vados a partir de quaisquer produtos de gene humano. CDH3-A24-9-513 (SEQ ID N°: 19), CDH3-A24-9-406 (SEQ ID N°: 22), CDH3-A24-10-807 (SEQ ID N°: 30), CDH3-A24-10-332 (SEQ ID N°: 34), CDH3-A24-10-655 (SEQ ID N°: 344), CDH3-A24-10-470 (SEQ ID N°: 358), EphA4-A24-9-453 (SEQ ID N°: 41), EphA4-A24-9-5 (SEQ ID N°: 44), EphA4-A24-9-869 (SEQ ID N°: 46), EphA4-A24-9-420 (SEQ ID N°: 48), EphA4-A24-10-24 (SEQ ID N°: 78), EphA4-A02-9-501 (SEQ ID N°: 376), EphA4-A02-9-165 (SEQ ID N°: 379), ECT2-A24-9-515 (SEQ ID N°: 80), ECT2-A24-10-40 (SEQ ID N°: 100), ECT2-A24-10-101 (SEQ ID N°: 101), HIG2-A24-9-19 (SEQ ID N°: 110), HIG2-A24-9-22 (SEQ ID N°: 111), HIG2-A24-9-8 (SEQ ID N°: 387), HIG2-A24-10-7 (SEQ ID N°: 112), HIG2-A24-10-18 (SEQ ID N°: 394), HIG2-A02-9-8 (SEQ ID N°: 114), HIG2-A02-9-15 (SEQ ID N°: 116), HIG2-A02-9-4 (SEQ ID N°: 117), HIG2-A02-10-8 (SEQ ID N°: 121), INHBB-A24-9-180 (SEQ ID N°: 395), INHBB-A24-10-180 (SEQ ID N°: 133), INHBB-A24-10-305 (SEQ ID N°: 135), INHBB-A24-10-7 (SEQ ID N°: 137), INHBB-A24-10-212 (SEQ ID N°: 426), KIF20A-A24-9-305 (SEQ ID N°: 174), KIF20A-A24-9-383 (SEQ ID N°: 178), KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186), KIF20A-A24-10-66 (SEQ ID N°: 194), KNTC2-A24-9-309 (SEQ ID N°: 196), KNTC2-A24-9-124 (SEQ ID N°: 202), KNTC2-A24-9-154 (SEQ ID N°: 210), KNTC2-A24-9-150 (SEQ ID N°: 213), KNTC2-A24-10-452 (SEQ ID N°: 214), KNTC2-A24-10-227 (SEQ ID N°: 217), KNTC2-A24-10-273 (SEQ ID N°: 223), TTK-A02-9-462 (SEQ ID N°: 227), TTK-A02-9-547 (SEQ ID N°: 228), TTK-A02-9-719 (SEQ ID N°: 233), TTK- A02-10-462 (SEQ ID N°: 254), URLC-A02-9-206 (SEQ ID N°: 271), URLC-A02-9-212 (SEQ ID N°: 272) e URLC-A02-10-211 (SEQ ID N°: 288)
[068] Consequentemente, a possibilidade de respostas imunes indesejáveis ou desconhecidas com a imunoterapia contra essas mo-léculas é significativamente reduzida.
[069] Com relação aos antígenos HLA, os dados apresentados aqui demonstram que os usos de antígenos do tipo A-24 ou do tipo A- 2 (que são ditos como sendo altamente expressos entre os Japone-ses) são favoráveis na obtenção de resultados eficazes. Os usos dos subtipos tal como A-2402 e A-0201 são ainda mais preferenciais. Tipi-camente, na clínica, o tipo de antígeno HLA do paciente que solicita tratamento é investigado com antecedência, o que, por sua vez, capa-cita a seleção de peptídeos apropriados tendo altos níveis de afinidade de ligação ao antígeno do paciente, ou tendo inducibilidade de célula T citotóxica (CTL) pela apresentação de antígeno. Ademais, de modo a obter os peptídeos tendo alta afinidade de ligação e inducibilidade de CTL, substituição, apagamento, ou adição de 1, 2, ou vários (por exemplo, até 5) aminoácidos podem ser executados com base na sequência de aminoácidos do peptídeo parcial de ocorrência natural CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e URLC10. Aqui, o termo, "vários"significa referir-se a 5 ou menos, mais preferencialmente 3 ou menos. Ademais, a adição aos peptídeos que são naturalmente exibidos, visto que a regularidade das sequências de peptí- deos exibidos pela ligação aos antígenos HLA já é conhecida (Kubo RT, e outros, (1994) J. Immunol., 152, 3913 a 3924.; Rammensee HG, e outros, (1995) Immuno-genetics. 41:178 a 228.; Kondo A, e outros, (1995) J. Immunol. 155:4307 a 4312), modificações baseadas em tal regularidade podem ser executadas nos peptídeos imunogênicos da invenção. Por exemplo, os peptídeos que possuem alta afinidade de ligação HLA-A24 na qual o segundo aminoácido do término N substituído com fenilalanina, tirosina, metionina, ou triptofano podem ser favo-ravelmente usados. Por outro lado, os peptídeos possuind alta afinida-de de ligação com HLA-A2 na qual a segunda sequência de aminoáci- do do término N substituída com leucina ou metionina, e peptídeos cu-joaminoácido de término C são substituídos com valina ou leucina po-dem ser usados favoravelmente. A substituição é executada não so-mente nos aminoácidos terminais, mas também na posição de reco-nhecimento de TCR potencial de peptídeos. Vários estudos demons-traram que as substituições de aminoácido em um peptídeo podem ser iguais ou melhores que as originais, por exemplo, CAP1, p53 (264-272), Her-2/neu (369-377) ou gp100 (209-217) (Zaremba e outros, Cancer Res. 57, 4570 a 4577, 1997, T. K. Hoffmann e outros J Immu-nol. (2002) 1 de Fev; 168(3): 1338 a 1347, S. O. Dionne e outros. Can-cer Immunol immunother. (2003) 52: 199 a 206 e S. O. Dionne e ou-tros, Cancer Immunology, Immunotherapy (2004) 53, 307 a 314). Ademais, 1 a 2 aminoácidos podem ser adicionados ao término N e/ou término C do peptídeo.
[070] Entretanto, quando a sequência de peptídeo é idêntica a uma parte da sequência de aminoácidos de uma proteína exógena ou endógena tendo uma função diferente, os efeitos colaterais tais como distúrbios autoimunes ou sintomas alérgicos contra as substâncias específicas podem ser induzidos. Portanto, é preferencial evitar a situação na qual a sequência imunogênica combina-se com a sequência de aminoácidos de uma proteína conhecida. Essa situação pode ser evitada executando-se a procura de homologia usando os bancos de dados disponíveis. Se as procuras de homologia confirmam que os pep- tídeos nos quais 1, 2, ou vários aminoácidos diferentes não existem na natureza, então o risco de que as modificações da sequência de ami- noácidos mencionada acima que, por exemplo, aumentem a afinidade de ligação com os antígenos HLA, e/ou aumentem a inducibilidade de CTL, pode ser evitado.
[071] Embora os peptídeos tendo alta afinidade de ligação aos antígenos HLA descritos acima sejam esperados como sendo alta-mente eficazes como vacinas contra o câncer, os peptídeos candida-tos, que são selecionados de acordo com a presença da alta afinidade de ligação como um indicador, devem ser examinados quanto à pre-sença real de inducibilidade de CTL. A inducibilidade de CTL pode ser rotineiramente confirmada pela indução de células apresentando antí- genos que transportam antígenos MHC humanos (por exemplo, B- linfócitos, macrófagos, e células dendríticas), ou mais especificamente células dendríticas derivadas de leucócitos mononucleares do sangue periférico humano, após a estimulação com o peptídeo de interesse, misturando com as células CD8 positivas e medindo-se a atividade citotóxica contra as células-alvo. Como o sistema reacional, os animais transgênicos produzidos para expressar um antígeno HLA (por exemplo, aqueles descritos em BenMohamed L, e outros, (2000) Hum. Immunol.; 61(8):764 a 779 Related Articles, Books, Linkout.) podem ser usados. Por exemplo, as células-alvo podem ser radiomarcadas com 51Cr e tal, e a atividade citotóxica pode ser calculada a partir da radioatividade liberada a partir das células-alvo. Alternativamente, elas podem ser examinadas medindo-se o IFN-gama produzido e liberado pela CTL na presença de células apresentando antígeno que transportam os peptídeos imobilizados, e visualizando-se a zona de inibição no meio usando os anticorpos monoclonais anti-IFN-gama.
[072] Como um resultado do exame da inducibilidade de CTL de peptídeos como descrito acima, concluiu-se que aqueles peptídeos que têm alta afinidade de ligação a um antígeno HLA não têm neces-sariamente alta inducibilidade. Entretanto, os nonapeptídeos e os de- capeptídeos selecionados a partir do grupo de peptídeos tendo as se-quências de aminoácidos indicados pelos seguintes peptídeos mostraram particularmente alta inducibilidade de CTL. CDH3-A24-9-513 (SEQ ID N°: 19), CDH3-A24-9-406 (SEQ ID N°: 22), CDH3-A24-10-807 (SEQ ID N°: 30), CDH3-A24-10-332 (SEQ ID N°: 34), CDH3-A24-10-655 (SEQ ID N°: 344), CDH3-A24-10-470 (SEQ ID N°: 358), EphA4-A24-9-453 (SEQ ID N°: 41), EphA4-A24-9-5 (SEQ ID N°: 44), EphA4-A24-9-869 (SEQ ID N°: 46), EphA4-A24-9-420 (SEQ ID N°: 48), EphA4-A24-10-24 (SEQ ID N°: 78), EphA4-A02-9-501 (SEQ ID N°: 376), EphA4-A02-9-165 (SEQ ID N°: 379), ECT2-A24-9-515 (SEQ ID N°: 80), ECT2-A24-10-40 (SEQ ID N°: 100), ECT2-A24-10-101 (SEQ ID N°: 101), HIG2-A24-9-19 (SEQ ID N°: 110), HIG2-A24-9-22 (SEQ ID N°: 111), HIG2-A24-9-8 (SEQ ID N°: 387), HIG2-A24-10-7 (SEQ ID N°: 112), HIG2-A24-10-18 (SEQ ID N°: 394), HIG2-A02-9-8 (SEQ ID N°: 114), HIG2-A02-9-15 (SEQ ID N°: 116), HIG2-A02-9-4 (SEQ ID N°: 117), HIG2-A02-10-8 (SEQ ID N°: 121), INHBB-A24-9-180 (SEQ ID N°: 395), INHBB-A24-10-180 (SEQ ID N°: 133), INHBB-A24-10-305 (SEQ ID N°: 135), INHBB-A24-10-7 (SEQ ID N°: 137), INHBB-A24-10-212 (SEQ ID N°: 426), KIF20A-A24-9-305 (SEQ ID N°: 174), KIF20A-A24-9-383 (SEQ ID N°: 178), KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186), KIF20A-A24-10-66 (SEQ ID N°: 194), KNTC2-A24-9-309 (SEQ ID N°: 196), KNTC2-A24-9-124 (SEQ ID N°: 202), KNTC2-A24-9-154 (SEQ ID N°: 210), KNTC2-A24-9-150 (SEQ ID N°: 213), KNTC2-A24-10-452 (SEQ ID N°: 214), KNTC2-A24-10-227 (SEQ ID N°: 217), KNTC2-A24- 10-273 (SEQ ID N°: 223), TTK-A02-9-462 (SEQ ID N°: 227), TTK-A02-9-547 (SEQ ID N°: 228), TTK-A02-9-719 (SEQ ID N°: 233), TTK- A02-10-462 (SEQ ID N°: 254), URLC-A02-9-206 (SEQ ID N°: 271), URLC-A02-9-212 (SEQ ID N°: 272) e URLC-A02-10-211 (SEQ ID N°: 288).
[073] Como notado acima, a presente invenção fornece os peptí- deos que têm inducibilidade de célula T citotóxica, ou seja, aqueles que têm sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 ou 288 ou uma variante dessas (isto é, aquelas nas quais 1, 2, ou vá-rios aminoácidos são substituídos, apagados, ou adicionados).
[074] É preferencial que as sequências de aminoácidos compos tos de 9 ou 10 aminoácidos indicados em SEQ ID NOs: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 ou 288 ou uma variante desta não combine uma sequência de amino- ácidos associada com outra proteína endógena.
[075] Em particular, a substituição de aminoácidos por leucina ou metionina no segundo aminoácido a partir do término N, a substituição de aminoácido por valina ou leucina no aminoácido de término C, e a adição de aminoácido de 1 a 2 aminoácidos no término N e/ou término C são exemplos de variantes preferenciais.
[076] Um dos versados na técnica reconhecerá que em adição às substituições e adições de aminoácidos, os fragmentos imunologica- mente ativos dos peptídeos podem também ser usados nos métodos da invenção. Os métodos para determinar os fragmentos ativos são bem-conhecidos na técnica. Os clones de CTL obtidos pela estimula-ção por esses peptídeos modificados podem reconhecer os peptídeos originais e causar danos às células expressando os peptídeos origi-nais.
[077] Os peptídeos da presente invenção podem ser preparados usando técnicas bem-conhecidas. Por exemplo, os peptídeos podem ser preparados sinteticamente, usando ou tecnologia de DNA recom- binante ou síntese química. Os peptídeos da presente invenção po-dem ser sintetizados individualmente ou como polipeptídeos mais lon-gos compostos de dois ou mais peptídeos. Os peptídeos da presente invenção são preferencialmente isolados, isto é, substancialmente li-vres de outras proteínas de células hospedeiras que ocorrem natural-mente e fragmentos dessas.
[078] Os peptídeos da presente invenção podem conter modifica ções, tais como, glicosilação, oxidação de cadeia lateral, ou fosforila- ção; contanto que as modificações não destruam a atividade biológica dos peptídeos como descrito aqui, ou seja, a capacidade de ligarem-se a um antígeno HLA e induzir CTL. Outras modificações incluem a incorporação de D-aminoácidos ou outras miméticas de aminoácidos que podem ser usados, por exemplo, para aumentar a meia-vida em soro dos peptídeos.
[079] Além disso, esta invenção pode conter um método de triar um peptídeo em que 1, 2, ou vários aminoácidos são substituídos, on-de o dito peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos seleci-onada a partir do grupo que consiste em SEQ ID N°: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217 ou 223, o dito método compreendendo as etapas de: (a) adequar homologia de sequência não significativa à sequência integral de 1,2, ou vários aminoácidos substitutos; (b) medir a inducibilidade de CTL do peptídeo substituto candidato; e (c) selecionar o peptídeo no qual a inducibilidade de CTL é a mesma ou mais alta do que o peptídeo original.
[080] Por exemplo, em modalidades preferenciais, a presente in venção fornece um método de identificar um peptídeo que tem uma capacidade de induzir a CTL contra as células que expressam ao me-nos um antígeno associado ao tumor, onde o antígeno associado ao tumor é o antígeno selecionado a partir do grupo que consiste de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e URLC10, o dito método compreendendo as etapas de: (i) fornecer ou gerar ao menos uma sequência candidata que consiste de uma sequência de aminoácidos modificada pela substituição, apagamento ou adição de um, dois ou vários resíduos de aminoácidos a uma sequência de aminoácidos original, onde a se-quência de aminoácidos original é selecionada a partir do grupo que consiste de SEQ ID N°: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41,44, 46, 48, 78, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217 ou 223; (ii) selecionar a sequência candidata que não tem homolo-gia significativa substancial com os peptídeos derivados de quaisquer produtos de gene humano conhecidos além dos ditos antígenos asso-ciados ao tumor; (iii) contatar um peptídeo que consiste na sequência candidata selecionada na etapa (ii) com células apresentando antígeno; (iv) contatar as células apresentando antígeno da etapa (iii) como células T para avaliar a capacidade do peptídeo de estimular as células T; e (v) identificar o peptídeo do qual a inducibilidade de CTL é a mesma ou mais alta que um peptídeo consistindo na sequência de aminoácidos original.
[081] Preferencialmente, o aminoácido é substituído por um ami- noácido diferente no qual as propriedades da cadeia lateral de amino- ácidos são conservadas (processo conhecido como substituição con- servativa de aminoácidos). Os exemplos de propriedades de cadeias laterais de aminoácidos são os aminoácidos hidrofóbicos (A, I, L, M, F, P, W, Y, V), aminoácidos hidrofílicos (R, D, N, C, E, Q, G, H, K, S, T), e cadeias laterais tendo os seguintes grupos funcionais ou características em comum: uma cadeia lateral alifática (G, A, V, L, I, P); uma cadeia lateral contendo um grupo hidroxila (S, T, Y); uma cadeia lateral contendo um átomo de enxofre (C, M); uma cadeia lateral contendo amida e ácido carboxílico (D, N, E, Q); uma cadeia lateral contendo uma base (R, K, H); e uma cadeia lateral contendo o aromático (H, F, Y, W). Nota-se que as letras entre parênteses indicam os códigos de uma letra dos aminoácidos. Na presente invenção, homologia significativa substancial é, por exemplo, mais de 90%, preferencialmente 95%, mais preferencialmente 99% ou 100% de identidade com um produto de gene humano conhecido a ser comparado.
[082] Os peptídeos desta invenção podem ser preparados como uma combinação, que inclui dois ou mais dos peptídeos da invenção, para uso como uma vacina para uma doença associada com a supe- rexpressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres, tal como uma vacina que induz CTL in vivo. Os cânceres observados incluem, mas não estão limitados a câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carci-noma colangiocelular, CML, câncer colorretal, endometriose, câncer esofageal, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de ovário, câncer pan- creático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular. Os peptídeos podem estar em um coquetel ou podem ser conjugados uns com os outros usando técnicas-padrão. Por exemplo, os peptídeos podem ser expressos como uma única se-quência de polipeptídeos. Os polipeptídeos na combinação podem ser os mesmos ou diferentes.
[083] Através da administração dos peptídeos desta invenção, os peptídeos são apresentados em uma alta densidade nos antígenos HLA de células apresentando antígeno, que, por sua vez, induzem CTLs que reagem especificamente em direção ao complexo formado entre o peptídeo exibido e o antígeno HLA. Alternativamente, as célu-las apresentando antígeno tendo imobilizado os peptídeos desta in-venção sobre sua superfície celular, obtidas pela remoção de células dendríticas dos sujeitos, podem ser estimulados pelos peptídeos desta invenção. A readministração destas células aos respectivos sujeitos induz CTL, e, como um resultado, a agressividade em direção às células-alvo pode ser aumentada.
[084] Mais especificamente, a presente invenção fornece os fár- macos para tratar e prevenir a proliferação e metástase de uma doen-ça associada com uma superexpressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cân-ceres, que incluem um ou mais dos peptídeos da presente invenção, ou um polinucleotídeo codificando os peptídeos. Os peptídeos ou poli- nucleotídeos da presente invenção encontram utilidade particular no tratamento de uma doença associada a CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres. Os cânceres observados incluem, mas não estão limitados a câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma colangiocelu- lar, CML, câncer colorretal, endometriose, câncer esofageal, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, lin- foma, osteosarcoma, câncer de ovário, câncer pancreático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular.
[085] Os peptídeos desta invenção podem ser administrados a um sujeito diretamente, como uma composição farmacêutica que foi formulada pelos métodos de formulação convencionais. Em tais casos, em adição aos peptídeos desta invenção, os veículos, excipientes, e tais que são normalmente usados para fármacos podem ser incluídos como apropriado, sem limitações particulares. As composições imuno- gênicas desta invenção podem ser usadas para o tratamento e prevenção de uma doença associada com a superexpressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres. Os cânceres observados incluem, mas não estão limitados ao câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma colangiocelular, CML, câncer colorretal, endometriose, câncer esofageal, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de ovário, câncer pan- creático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular.
[086] As composições imunogênicas para tratar e/ou prevenir uma doença associada com a superexpressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exem-plo,cânceres, que incluem como o ingrediente ativo um ou mais peptí- deos da presente invenção, podem adicionalmente incluir um adjuvan-te tal como a imunidade celular que será estabelecida eficazmente. Alternativamente, elas podem ser administradas com outros ingredientes ativos, tal como os agentes anticâncer.
[087] Os cânceres observados incluem, mas não estão limitados ao câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma co- langiocelular, CML, câncer colorretal, endometriose, câncer esofageal, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de ovário, câncer pancreático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular. As formulações adequadas incluem grânulos. Os adjuvantes adequados são descritos na literatura (Johnson AG. (1994) Clin. Microbiol. Rev., 7:277 a 289).
[088] Os adjuvantes exemplificados incluem, mas não estão limi tados a fosfato de alumínio, hidróxido de alumínio, e alume. Ademais, as formulações de lipossoma, formulações granulares nas quais o fármaco é ligado a poucas esferas de diâmetro m, e formulações nas quais um lipídeo é ligado ao peptídeo podem ser convenientemente usadas. O método de administração pode ser via oral, intradérmica, subcutânea, injeção intravenosa, ou tal, e pode incluir a administração sistêmica ou administração local à vizinhança do tumor-alvo.
[089] A dose do(s) peptídeo(s) desta invenção pode ser ajustada apropriadamente de acordo com a doença a ser tratada, idade do pa-ciente, peso, método de administração e tal. Apesar da dosagem ser ordinariamente de 0,001 mg a 1000 mg, preferencialmente de 0,01 mg a 100 mg, mais preferencialmente de 0,1 a 10 mg, preferencialmente administrada uma vez em poucos dias a poucos meses, um versado na técnica pode prontamente selecionar a dose apropriada e o método de administração, à medida que a seleção e a otimização desses pa-râmetros são bem-adequadas à rotina.
[090] A presente invenção fornece adicionalmente vesículas in tracelulares chamadas de exossomos, que apresentam complexos formados entre os peptídeos desta invenção e os antígenos HLA em sua superfície. O exossomos podem ser preparados, por exemplo, usando os métodos descritos em detalhes na Publicação Internacional da Tradução Japonesa Publicada Nos. Hei 11-510507 e 2000-512161, e são preferencialmente preparados usando células que apresentam antígeno obtidas a partir de sujeitos que são alvos de tratamento e/ou prevenção. Os exossomos desta invenção podem ser inoculados co-mo vacinas contra o câncer, similarmente aos peptídeos desta inven-ção.
[091] O tipo de antígenos HLA usados deve combinar o do sujeito exigindo tratamento e/ou prevenção. Por exemplo, na população Ja-ponesa, HLA-A24 ou HLA-A2, particularmente HLA-A2402 ou HLA- A0201, é frequentemente apropriado.
[092] Em algumas modalidades, as composições de vacina da presente invenção incluem um componente que prima pelos linfócitos T citotóxicos. Os lipídeos foram identificados como agentes capazes de primar por CTL in vivo contra os antígenos virais. Por exemplo, os resíduos de ácido palmítico podem ser anexados aos grupos epsilon e alfa-amino de um resíduo de lisina e então ligados a um peptídeo imu- nogênico da invenção. O peptídeo lipidado pode então ser administra-do ou diretamente, em uma micela ou partícula, incorporado em um lipossoma, ou emulsificado em um adjuvante. Como outro exemplo de um lipídeo preparando respostas de CTL, lipoproteínas E. coli, tal co-mo tripalmitoil-S-glicerilcisteinliseril-serina (P3CSS), podem ser usadas para preparar a CTL quando covalentemente anexada a um peptídeo apropriado (ver, por exemplo, Deres K, e outros, (1989) Nature 342:561 a 564).
[093] As composições imunogênicas da presente invenção po demtambém incluir ácidos nucleicos codificando um ou mais peptí- deos imunogênicos descritos aqui. Ver, por exemplo, Wolff JA e ou-tros, (1990) Science 247:1465 a 1468; Patente U.S. Nos. 5.580.859, 5.589.466, 5.804.566, 5.739.118, 5.736.524, 5.679.647, e WO 98/04720. Os exemplos de tecnologias de entrega baseadas em DNA incluem "DNA nu", entrega facilitada (bupivicaína, polímeros, mediada por peptídeos), complexos de lipídeo catiônico, e entrega mediada por partícula ("arma de genes") ou entrega mediada por pressão (ver, por exemplo, Patente U.S. N° 5.922.687).
[094] Os peptídeos imunogênicos da presente invenção podem também ser expressos por vetores virais ou bacterianos. Os exemplos de vetores de expressão adequados incluem hospedeiros virais atenuados, tal como varíola ou fowlpox. Esta abordagem envolve o uso do vírus da varíola, por exemplo, como um vetor para expressar as sequências de nucleotídeos que codificam o peptídeo. Mediante a introdução em um hospedeiro, o vírus da varíola recombinante expressa o peptídeo imunogênico, e desse modo produz uma resposta imune. Os vetores da varíola e métodos usados nos protocolos de imunização são descritos, por exemplo, na Patente U. S. N° 4.722.848. Outro vetor adequado é BCG (Bacilo de Calmette-Guérin). Os vetores BCG são descritos em Stover CK, e outros, (1991) Nature 351:456 a 460. Uma ampla variedade de outros vetores úteis para a administração terapêutica ou imunização, por exemplo, vetores adenovirais e vetores virais adenoassociados, vetores retrovirais, vetores da Salmonella typhi, vetores de toxina antraz detoxificada e similares, é conhecida na técnica. Ver, por exemplo, Shata MT, e outros, (2000) Mol. Med. Today 6:66 a 71; Shedlock DJ e Weiner DB., e outros, (2000) J. Leukoc. Biol. 68:793 a 806; e Hipp JD, e outros, (2000) In Vivo 14:571 a 585.
[095] A presente invenção também fornece os métodos de indu ção de células que apresentam antígenos usando um ou mais peptí- deos desta invenção. As células que apresentam antígenos podem ser induzidas induzindo células dendríticas a partir de monócitos do sangue periférico e então contatando-as (estimulando-as) com um ou mais peptídeos desta invenção in vitro, ex vivo ou in vivo. Quando os peptídeos da presente invenção são administrados aos sujeitos, as células que apresentam antígenos que têm os peptídeos desta inven-ção imobilizados por elas são induzidas no corpo do sujeito. Alternati-vamente,após a imobilização dos peptídeos desta invenção às células que apresentam antígenos, as células podem ser administradas ao sujeito como uma vacina. Por exemplo, a administração ex vivo pode incluir as etapas de: (a) coletar células apresentando antígenos a partir de um sujeito, e (b) contatar as células apresentando antígeno da etapa (a) com um peptídeo da presente invenção.
[096] Alternativamente, de acordo com a presente invenção, o uso dos peptídeos desta invenção para fabricar uma composição far-macêutica que induz as células apresentando antígeno é fornecido. Ademais, a presente invenção também fornece o peptídeo da presente invenção para induzir as células apresentando antígeno. As células apresentando antígeno obtidas pela etapa (b) podem ser administra-das ao sujeito como uma vacina.
[097] Esta invenção também fornece um método para induzir as células apresentando antígeno que têm um nível alto de inducibilidade de célula T citotóxica, na qual o método inclui a etapa de transferência de genes compostos de polinucleotídeo(s) que codificam um ou mais peptídeos desta invenção a células apresentando antígeno in vitro. Os genes introduzidos podem estar na forma de DNAs e RNAs. Para o método de introdução, sem limitações particulares, vários métodos aplicados convencionalmente neste campo, tal como a lipofecção, ele- troporação, e método de fosfato de cálcio, podem ser usados adequadamente. Mais especificamente, a transfecção pode ser executada como descrito em Reeves ME, e outros, (1996) Cancer Res., 56:5672 a 5677; Butterfield LH, e outros, (1998) J. Immunol., 161:5607 a 5613.; Boczkowski D, e outros, (1996) J. Exp. Med., 184:465 a 472; Tradução Japonesa Publicada da Publicação Internacional N° 2000-509281. Através da transferência do gene em células apresentando antígeno, o gene passa por transcrição, tradução, e tal na célula, e então a proteína obtida é processada por MHC Classe I ou classe II, e prossegue através de um caminho de apresentação para apresentar os peptídeos parciais.
[098] A presente invenção fornece adicionalmente métodos para induzir CTL usando um ou mais peptídeos desta invenção. Quando os peptídeos desta invenção são administrados a um sujeito, as CTLs são induzidas no corpo do sujeito, e a resistência do sistema imune visando as células que expressam CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, células câncerígenas nos tecidos tumorais é desse modo intensificada.
[099] Os cânceres observados incluem, mas não estão limitados a câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma co- langiocelular, CML, câncer colorretal, endometriose, câncer esofageal, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de ovário, câncer pancreático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular. Alternativamente, os peptídeos da presente invenção podem ser usados no contexto de um método terapêutico ex vivo, no qual as células apresentando antígenos derivadas do sujeito e células positivas CD8 ou leucócitos mononucleares do sangue periférico são contatados (estimulados) com um ou mais peptídeos desta invenção in vitro, e, após a indução de CTL, as células são retornadas ao sujeito. Por exemplo, o método pode incluir as etapas de: (a) coletar células apresentando antígenos de um sujeito, e (b) contatar as células apresentando antígeno da etapa (a) com um peptídeo da presente invenção, (c) misturar as células apresentando antígeno da etapa (b) com células T CD8+ e cocultivar tal como para induzir células T citotó- xicas; e (d) coletar células T CD8+ a partir da cocultura da etapa (c).
[0100] Alternativamente, de acordo com a presente invenção, o uso dos peptídeos desta invenção para fabricar uma composição far-macêutica induzindo CTLs é fornecido. Ademais, a presente invenção também fornece o peptídeo da presente invenção para induzir as CTLs. As células T CD8+ tendo atividade citotóxica obtida pela etapa (d) podem ser administradas ao sujeito como uma vacina.
[0101] A presente invenção fornece adicionalmente células T cito- tóxicas isoladas induzidas usando os peptídeos desta invenção. As células T citotóxicas, induzidas pela estimulação com uma célula que apresenta antígeno apresentando um ou mais peptídeos desta inven-ção, são preferencialmente derivadas de sujeitos que são o alvo de tratamento e/ou prevenção, e podem ser administradas sozinhas ou em conjunto com outros fármacos, incluindo um ou mais peptídeos desta invenção ou exossomos tendo uma atividade antitumoral. As células T citotóxicas obtidas agem especificamente contra células-alvo que apresentam os peptídeos desta invenção, ou preferencialmente o(s) mesmo(s) peptídeo(s) usados para indução. As células-alvo podem ser células que expressam de endógena CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, ou células que são transfectadas com os genes CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10. As células que apresentam os peptídeos desta invenção na superfície celular, devido à estimulação com esses peptídeos, podem também se tornar alvos de ataque.
[0102] A presente invenção também fornece complexos apresen tando células que apresentam antígenos formadas entre antígenos HLA e um ou mais peptídeos desta invenção. As células apresentando antígeno, obtidas através do contato com os peptídeos desta invenção ou os nucleotídeos codificando tais peptídeos, são preferencialmente derivadas de sujeitos que são o alvo de tratamento e/ou prevenção, e podem ser administradas como vacinas, sozinhas ou em combinação com outros fármacos, incluindo os peptídeos, exossomos, ou células T citotóxicas da presente invenção.
[0103] A presente invenção também fornece uma composição composta de ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos que são capazes de formar uma subunidade de um receptor de célula T (TCR), e métodos que usam a mesma. As subunidades TCR têm a capacidade de formar TCRs que conferem especificidade às células T para células tumorais que apresentam CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK ou URLC10. Usando o método conhecido na técnica, os ácidos nucleicos de cadeia alfa e beta como as subunida- des TCR da CTL induzida com um ou mais peptídeos desta invenção podem ser identificados (WO2007/032255 e Morgan e outros, J Immunol, 171, 3288 (2003)). Os TCRs derivados preferencialmente se ligam às células-alvo exibindo os peptídeos CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK, ou URLC10 com alta avidez, e opcionalmente mediam morte eficaz de células-alvo apresentando os peptí- deos CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK ou URLC10 in vivo e in vitro.
[0104] Os ácidos nucleicos que codificam as subunidades TCR podem ser incorporados em vetores adequados, por exemplo, vetores retrovirais. Esses vetores são bem-conhecidos na técnica. Os ácidos nucleicos ou os vetores que os contêm podem ser transferidos util-mente em uma célula T, a qual é preferencialmente de um paciente. Vantajosamente, a invenção fornece uma composição em circulação que permite a rápida modificação das células T do próprio paciente (ou aquelas de outro mamífero) para produzir rapidamente e facilmente as células T modificadas tendo excelentes propriedades de morte de cé- lula cancerígena.
[0105] Também, a presente invenção fornece as CTLs que são preparadas pela tradução com ácidos nucleicos codificando os poli- peptídeos de subunidades TCR ligando com os peptídeos CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK ou URLC10, por exemplo, SEQ ID NOs: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 ou 288 no contexto de HLA- A24 ou HLA-A2. As CTLs traduzidas são capazes de retornar às célu-lascancerígenas in vivo, e expandidas pelo método de cultivo in vitro bem-conhecido (por exemplo, Kawakami e outros, J Immunol., 142, 3452 a 3461 (1989)). As células T da invenção podem ser usadas para formar uma composição imunogênica útil no tratamento e prevenção do câncer em um paciente em necessidade da terapia ou proteção (WO 2006/031221).
[0106] No contexto da presente invenção, o termo "vacina"(tam bém referido como uma composição imunogênica) refere-se a uma substância que induz imunidade antitumoral ou suprime cânceres me-diante a inoculação em animais. De acordo com a presente invenção, os polipeptídeos que tem a sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217 ou 223 foram sugeridos como sendo peptídeos de epitopos restritos a HLA-A24 e aqueles de SEQ ID N°: 376, 379, 114, 116, 117, 121, 227, 228, 233, 254, 271, 272 ou 288 foram sugeridos como sendo peptídeos de epitopos restritos a HLA-A2 que podem in-duzir a resposta imune potente e específica contra células que expressam CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, células cancerígenas que expressam CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10. Os cânceres observados incluem, mas não esão limitados a câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma colangiocelular, CML, câncer colorretal, endometriose, câncer esofageal, câncer gás-trico,câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de ovário, câncer pancreático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular.
[0107] Assim, a presente invenção também abrange um método de induzir imunidade antitumoral usando polipeptídeos que têm a se-quência de aminoácidos de SEQ ID N°: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 ou 288 ou uma variante dessas (isto é, incluindo 1, 2, vários (por exemplo, até 5) substituições, apagamentos, ou adições de aminoácidos). Em geral, a imunidade antitumoral inclui respostas imunes tal como segue: - uma indução de linfócitos citotóxicos contra células con-tendo tumores que expressam CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, - uma indução de anticorpos que reconhecem células con-tendo tumores que expressam CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10 e - uma indução de produção de citocina antitumoral.
[0108] Portanto, quando um certo peptídeo induz qualquer uma dessas respostas imunes mediante inoculação em um animal, decide- se que o peptídeo tenha um efeito de indução de imunidade antitumo- ral. A indução da imunidade antitumoral por um peptídeo pode ser de-tectada através da observação in vivo ou in vitro da resposta do siste-ma imune no hospedeiro contra o peptídeo.
[0109] Por exemplo, um método para detectar a indução de linfóci- tos T citotóxicos é bem-conhecido. A substância estranha que penetra no corpo vivo é apresentada às células T e às células B através da ação de células apresentando antígeno (APCs). As células T que respondem ao antígeno apresentado pela APC de maneira específica de antígeno diferenciam-se em células T citotóxicas (também referidas como linfócitos T citotóxicos ou CTLs) devido à estimulação pelo antí- geno, e então proliferam-se; esse processo é referido aqui como "ativação"de células T. Portanto, a indução de CTL por um certo peptídeo pode ser avaliada apresentando o peptídeo a uma célula T pela APC, e detectando a indução da CTL. Ademais, as APCs têm o efeito de ativar as células T CD4+, células T CD8+, macrófagos, eosinófilos, e células NK. Visto que as células T CD4+ são também importantes na imunidade antitumoral, a imunidade antitumoral que induz a ação do peptídeo pode ser avaliada usando o efeito de ativação destas células como indicadores.
[0110] Um método para avaliar a ação de indução de CTL usando células dendríticas (DCs) como APC é bem-conhecido na técnica. DC é uma APC representativa que tem a mais potente ação de indução de CTL dentre as APCs. Neste método, o polipeptídeo de teste é inicial-mente contatado com a DC e então essa DC é contatada com células T. A detecção de células T tendo efeitos citotóxicos contra as células de interesse após o contato com a DC mostra que o polipeptídeo de teste tem uma atividade de induzir as células T citotóxicas. A atividade da CTL contra tumores pode ser detectada, por exemplo, usando a lise de células tumorais marcadas por 51Cr como o indicador. Alternativamente, sabe-se bem como avaliar o Pontuação de risco de células tu- morais usando a atividade de absorção da 3H-timidina ou liberação de LDH (lactose desidrogenase) como o indicador. Ademais, ele pode também ser examinado através da medição do IFN-gama produzido e liberado pela CTL na presença de células apresentando antígeno que transportam os peptídeos imobilizados através por visualização usan-do os anticorpos anti-IFN-gama, tal como um ensaio ELIPSOT.
[0111] Com exceção da DC, as células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) podem ser usadas como APC. A indução da CTL é relatada como sendo intensificada através do cultivo de PBMC na presença de GM-CSF e IL-4. Similarmente, a CTL tem-se mostrado como sendo induzida pelo cultivo de PBMC na presença de hemocianina do molusco keyhole limpet (KLH) e IL-7.
[0112] Os polipeptídeos de teste confirmados de possuir atividade de indução de CTL por esses métodos são os polipeptídeos tendo efeito de ativação de DC e subsequente atividade de indução de CTL. Portanto, os polipeptídeos que induzem CTL contra as células expres-sas por CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10 são úteis como vacinas contra doenças associadas a CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres. Ademais, a APC que adquiriu a ca-pacidade de induzir a CTL contra uma doença associada com a supe- rexpressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres, através do contato com os polipeptídeos que são úteis como vacinas contra a doença. Ademais, a CTL que adquiriu a citotoxicidade devido à apresentação dos antíge- nos de polipeptídeo pela APC pode também ser usada como vacinas contra uma doença associada a CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres. Tais métodosterapêuticos para a doença associada com CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo,cânceres, usando a imunidade antitumoral devido à APC e à CTL, são referidas como imunoterapia celular. Os cânceres observados incluem, mas não estão limitados a câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma colangiocelular, CML, câncer colorretal, endometriose, câncer esofageal, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de ovário, câncer pancreático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular.
[0113] Geralmente, quando se usa um polipeptídeo para imunote- rapia celular, a eficiência da indução de CTL pode ser aumentada combinando-se uma pluralidade de polipeptídeos tendo diferentes es-truturas e contatando-os com a DC. Portanto, quando se estimula a DC com fragmentos de proteínas, é vantajoso usar uma mistura de múltiplos tipos de fragmentos.
[0114] A indução de imunidade antitumoral por um polipeptídeo pode ser adicionalmente confirmada observando-se a indução de pro-dução de anticorpos contra tumores. Por exemplo, quando os anticor-pos contra um polipeptídeo são induzidos em um animal de laboratório imunizado com o polipeptídeo, e quando crescimento, proliferação e/ou metástase de células tumorais é suprimida por aqueles anticor-pos, o polipeptídeo é determinado para induzir a imunidade antitumo- ral.
[0115] A imunidade antitumoral pode ser induzida administrando- se uma vacina desta invenção, e a indução de imunidade antitumoral capacita o tratamento e prevenção de uma doença associada com a superexpressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres. A terapia contra ou prevenção do início de uma doença associada com a superexpres- são de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres, pode incluir a inibição do cres-cimento de células que expressam CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, células cancerígenas, a involução destas células e a supressão da ocorrência dessas células, por exemplo, células cancerígenas. A diminuição da mortalidade de indivíduos que têm doença associada com CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres, a diminuição dos marcadores da doença no sangue, o alívio de sintomas detectáveis que acompanham a doença e tais são também incluídos na terapia ou prevenção da doença, por exemplo, cânceres. Tais efeitos preventivos e terapêuticos são prefe-rencialmente estatisticamente significativos, por exemplo, observados em um nível de significância de 5% ou menos, onde o efeito preventivo ou terapêutico de uma vacina contra a doença associada a CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres, é comparado a um controle sem administração de vacina. Por exemplo, o teste t de Student, o test U de Mann-Whitney ou o teste ANOVA podem ser usados para determinar a significância estatística.
[0116] Visto que a presente invenção fornece um método para tra tar, ou prevenir uma doença associada com a superexpressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres, os compostos terapêuticos ou com-posições podem ser administrados profilática ou terapeuticamente a sujeitos que sofrem da doença ou que estão em risco de (ou suscetí-veis a) desenvolver a doença. Tais sujeitos podem ser identificados usando métodos clínicos-padrão. No contexto da presente invenção, a administração profilática ocorre antes da manifestação de sintomas clínicos evidentes da doença, de tal forma que uma doença ou distúr-bio seja prevenida ou alternativamente atrasada em sua progressão. No contexto do campo da medicina, o termo "prevenção"abrange qualquer atividade que reduz a carga de mortalidade ou morbidez a partir da doença. A prevenção pode ocorrer em níveis primários, se-cundários e terciários de prevenção. Enquanto a prevenção primária evita o desenvolvimento de uma doença, os níveis secundários e ter- ciários de prevenção abrangem as atividades reivindicadas na prevenção do progresso de uma doença e de emergência de sintomas, bem como na redução do impacto negativo de uma doença já estabelecida restaurando a função e reduzindo complicações relacionadas à doença.
[0117] No contexto do tratamento do câncer, o termo "eficaz"refe re-se a um tratamento que leva a uma diminuição no tamanho, preva-lência ou potencial metástico do câncer em um sujeito. Quando um tratamento é aplicado profilaticamente, "eficaz" significa que o trata-mento retarda ou previne a ocorrência de câncer ou alivia um sintoma clínico de câncer. A avaliação do câncer pode ser feita usando-se protocolosclínicos-padrão. Ademais, a eficácia de um tratamento pode ser determinada em conjunto com qualquer método conhecido para diagnosticar ou tratar câncer. Por exemplo, o câncer pode ser diagnosticado histopatologicamente ou através da identificação de anomalias sintomáticas.
[0118] O peptídeo mencionado acima, que tem atividade imunoló- gica, ou um polinucleotídeo ou vetor codificando tal peptídeo, pode ser combinado com um adjuvante. Um adjuvante refere-se a um composto que intensifica a resposta imune contra o peptídeo quando administrado junto (ou sucessivamente) com o peptídeo que tem atividade imu- nológica. Exemplos de adjuvantes adequados incluem a toxina cólera, toxina salmonela, alume e tal, mas não são limitados a esses. Ademais, uma vacina desta invenção pode ser combinada apropriadamente com um veículo farmaceuticamente aceitável. Exemplos de tais veículossão a água esterilizada, solução salina fisiológica, tampão de fosfato, fluido de cultivo e tal. Ademais, a vacina pode conter se necessário, estabilizantes, suspensões, conservantes, tensoativos e tais. A vacina é administrada sistemática ou localmente. A administração de vacina pode ser executada através de uma única administração ou es- timulada por múltiplas administrações.
[0119] Quando usando a APC ou a CTL como a vacina desta in venção, uma doença associada com a superexpressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres, pode ser tratada ou prevenida, por exemplo, pelo método ex vivo. Mais especificamente, as PBMCs do sujeito que recebe o tratamento ou prevenção são coletadas, contatadas ex vivo com um peptídeo da presente invenção. Seguindo a indução da APC ou CTL, as células podem ser administradas ao sujeito. A APC pode ser também induzida introduzindo um vetor que codifica o peptídeo nas PBMCs ex vivo. A APC ou CTL induzida in vitro pode ser clonada antes da administração. Clonando-se e cultivando-se células tendo alta atividade de danificar células-alvo, a imunoterapia celular pode ser aplicada mais eficazmente. Ademais, a APC e a CTL isoladas desta forma podem ser usadas para imunoterapia celular, não somente contra indivíduos dos quais as células são derivadas, mas também contra tipos similares de doenças em outros indivíduos.
[0120] Os aspectos da presente invenção são descritos nos se guintes exemplos, que são apresentados somente para ilustrar a pre-sente invenção e para auxiliar um dos versados na técnica em produzir e usar a mesma. Os exemplos não são destinados, de qualquer forma, a limitar o escopo da invenção.
[0121] Embora os métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos aqui podem ser usados na prática ou teste da pre-sente invenção, métodos e materiais adequados são descritos abaixo. Exemplos
[0122] A seguir, a presente invenção é exemplificada, mas não- restrita pelos seguintes exemplos. Entretanto, os materiais, métodos e tais descritos aqui somente ilustram os aspectos da invenção e forma alguma são destinados a limitar o escopo da presente invenção. Como tal, os materiais, métodos e tais similares ou equivalentes àqueles descritos neste documento podem ser usados na prática ou teste da presente invenção.
[0123] As células A24-LCL (HLA-A24), a linhagem celular B- linfoblastoide humana, foi estabelecida transformando com o virus Epstain-bar. As células T2, COS7, A498, Caki-2 e HEK 293 foram ad-quiridas a partir de ATCC. As células Caki-1 e MIAPaca-2 foram adquiridas a partir de JCRB. As células PK-45P, PK-59, TE-5 e TE-6 foram adquiridas a partir de TKG. A célula 293 T foi adquirida a partir de GenHunter.
[0124] Os peptídeos 9-mer e 10-mer derivados de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK ou URLC10 que se ligam à molécula HLA-A*2402 ou à molécula HLA-A*0201 foram preditados usando o software de predição de ligação "BIMAS" (http://bimas.dcrt.nih.gov/cgi-bin/molbio/ken_parker_comboform) (Parker KC, e outros, (1994) J Immunol.;152(l):163 a 175.; Kuzushima K, e outros, (2001) Blood.;98(6):1872 a 1881). Esses peptídeos foram sintetizados por Sigma (Sapporo, Japão) de acordo com o método de síntese de fase sólida-padrão e purificados por HPLC de fase reversa. A pureza (<90%) e a identidade dos peptídeos foram determinadas por HPLC analítico e por análise de espectrometria de massa, respectiva-mente. Os peptídeos foram dissolvidos em dimetil sulfóxido (DMSO) a 20 mg/ml e armazenados a -80o C.
[0125] As células dendríticas derivadas de monócitos (DCs) foram usadas como células que apresentam antígenos (APCs) para induzir as respostas de CTL contra os peptídeos apresentados em HLA. As DCs foram geradas in vitro como descrito em outro documento (Nuka- ya I e outros, (1999) Int. J. Cancer 80, 92 a 97., Tsai V e outros, (1997) J. Immunol 158:1796 a 1802). Brevemente, as células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) isoladas de um voluntário normal (HLA- A*2402 e/ou HLA-A*0201) através da solução Ficoll-Paque (Pharma- cia) foram separadas por aderência a um frasco plástico de cultura de tecido (Becton Dickinson) de tal forma a enriquecê-las para a fração de monócito. A população enriquecida de monócito foi cultivada na presença de 1000 U/ml de GM-CSF (Genzyme) e 1000 U/ml de IL-4 (Genzyme) em AIM-V (Invitrogen) contendo 2% de soro autólogo (AS) desativado por calor. Após 7 dias na cultura, as DCs geradas por cito- cina foram pulsadas com 20 micro g/ml de peptídeos sintetizados na presença de 3 micro g/ml de beta 2-microglobulina por 4 horas a 20o C em AIM-V. Essa DCs pulsadas por peptídeos foram então desativadas por MMC (30 micro g/ml por 30 mins) e misturadas em uma razão de 1:20 com células T CD8+autólogas, obtidas por seleção positiva com Dynabeads M-450 CD8 (Dynal) e DETACHa BEAD® (Dynal). Essas culturas foram preparadas em placas com 48 poços (Corning), cado poço continha 1,5 x 104 DCs pulsadas com peptídeos, 3 x 105células T CD8+ e 10 ng/ml de IL-7 (Genzyme) em 0,5 ml de AIM-V/2% AS. Três dias depois, essas culturas foram suplementadas com IL-2 (CHI-RON) a uma concentração final de 20 IU/ml. No dia 7 e 14, as células T foram adicionalmente re-estimuladas com as DCs pulsadas com peptídeos autólogas. As DCs foram preparadas todas as vezes da mesma forma descrita acima. A CTL foi testada contra as células A24- LCL pulsadas com peptídeos ou com células T2 após o terceiro ciclo de estimulação de peptídeo no dia 21.
[0126] As CTLs foram expandidas em cultura usando o método similar descrito por Riddell SR, e outros, (Walter EA e outros, (1995) N Engl J Med 333:1038 a 1044.; Riddel SR, e outros, (1996) Nature Med. 2:216 a 223.). Um total de 5xl04 CTLs foram ressuspensas em 25 ml de AIM-V/5% AS com 2 tipos de linhagens celulares de B- linfoblastóide humano, desativadas por MMC, na presença de 40 ng/ml de anticorpos monoclonais antiCD3 (Pharmingen). Um dia após o início das culturas, 120 IU/ml de IL-2 foram adicionados às culturas. As culturas foram alimentadas com AIM-V/5% AS fresco contendo 30 IU/ml de IL-2 nos dias 5, 8 e 11.
[0127] As diluições foram feitas para ter 0,3, 1, e 3 CTLs/poço em 96 placas de microconcentração de fundo redondo (Nalge Nunc Inter-national). As CTLS foram cultivadas com 7 x 104células/poços de 2 tipos de linhagens celulares de B-linfoblastoide humano, 30 ng/ml de anticorpos antiCD3, e 125 U/ml de IL-2 no total de 150 micro l/poço de AIM-V contendo 5% de AS. 50 micro l/poço de IL-2 foi adicionado ao meio 10 dias depois tal que IL-2 tornou-se em 125 U/ml na concentra-çãofinal. A atividade de CTL da CTLs foi testada no 14° dia, e os clo-nes de CTL foram expandidos usando o mesmo método acima.
[0128] Para examinar a atividade de CTL específica, o ensaio ELISPOT de IFN-gama e o ensaio ELISA de IFN-gama foram execu-tados.
[0129] Brevemente, a célula A24-LCL ou célula T2 pulsada com peptídeo (1 x 104/poço) foi preparada como células estimuladoras. As células cultivadas em 48 poços ou clones de CTL após limitar a dilui-ção foram usadas como células respondedoras. O ensaio ELISPOT de IFN-gama e o ensaio ELISA foram executados sob procedimento de fabricação.
[0130] Estabelecimento de células expressando forçadamente qualquer um ou ambos o gene-alvo e HLA-A02 ou HLA-A24
[0131] O cDNA codificando um quadro de leitura aberto dos ge nes-alvo ou de HLA-A02 ou HLA-A24 foi amplificado por PCR. O pro-duto amplificado por PCR foi clonado no vetor pcDNA3.1 mycHis (Invi- trogen). Os plasmídeos foram transfectados nas células-alvo, a linhagem celular humana normal nula de HLA-A02 e a HLA-A24, COS7 ou 293T, usando a lipofectamina (Invitrogen) de acordo com os procedimentos recomendados pelo fabricante. Alternativamente, o plasmídeo contido nos genes-alvo foi transfectado em A24-LCL por eletroporação usando GenePulserII (Biorad). Brevemente, 2,5 x 106 células A24-LCL foram pulsadas com 10 mcg de plasmídeo a 140 V e 1000 micro F. Após 2 dias de transfecção, as células transfectadas foram tratadas com a solução de dissociação celular e usadas como células-alvo para ensaio de atividade de CTL.
[0132] A atividade citotóxica foi avaliada por um ensaio de libera ção de 51Cr de quatro horas. As células-alvo foram pulsadas com uma concentração de 20 micro g/ml de peptídeo por toda a noite. As células-alvo foram marcadas com 100 micro Ci de Na251CrO4 a 37o C por uma hora, e então lavadas por três vezes com RPMI1640. As células- alvo (1 x 104/100 micro L) e 100 micro L de células efetoras em várias quantidades com um volume total de 200 micro L foram colocadas em placas de microconcentração de fundo redondo de 96 poços (Corning), e cultivadas a 37o C em um incubador de CO2 por quatro horas. Após o cultivo, 100 micro L de sobrenadante foram coletados a partir de cado poço, e mediu-se a radioatividade usando um contador gama. A liberação espontânea era a radioatividade das células-alvo com o meio na ausência de células efetoras, e a liberação máxima foi a radioatividade das células-alvo com 1 M de HCl.
[0133] A porcentagem de citotoxicidade específica foi determinada através da seguinte fórmula: %lise específica = [(liberação experimental - liberação espontânea) / (liberação máxima - liberação espontânea)] x 100.
[0134] Expressão intensificada de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e URLC10 em cânceres
[0135] O dados de perfil de expressão do gene global obtidos a partir de vários cânceres usando microarranjo de cDNA revelaram que a expressão dos seguintes genes foi elevada. CDH3 (N° de acesso ao GenBank NM_001793; SEQ ID Nos. 1,2), EPHA4 (N° de acesso ao GenBank L36645; SEQ ID Nos. 3, 4), ECT2 (N° de acesso ao GenBank AY376439; SEQ ID Nos. 5, 6), HIG2 (N° de acesso ao GenBank NM_013332; SEQ ID Nos. 7, 8), INHBB (N° de acesso ao GenBank NM_002193; SEQ ID Nos. 9, 10), KIF20A (N° de acesso ao GenBank NM_005733; SEQ ID Nos. 11, 12), KNTC2 (N° de acesso ao GenBank AF017790; SEQ ID Nos. 13, 14), TTK (N° de acesso ao GenBank NM_003318; SEQ ID Nos. 15, 16) e URLC10 (N° de acesso ao GenBank NM_017527; SEQ ID Nos. 17, 18).
[0136] A expressão de CDH3 foi validamente elevada nos seguin tes cânceres em comparação com o tecido normal correspondente.
[0137] 26 dentre os 34 cânceres de bexiga,
[0138] 17 dentre os 19 cânceres cervicais,
[0139] todos os 19 carcinomas colangiocelulares,
[0140] 30 dentre os 34 cânceres colorretais,
[0141] 20 dentre as 21 endometrioses,
[0142] 13 dentre os 20 cânceres gástricos,
[0143] 7 dentre os 8 cânceres gástricos do tipo difuso,
[0144] 36 dentre os 37 NSCLC,
[0145] todos os 16 cânceres pancreáticos,
[0146] todos os 21 tumores de tecido mole e
[0147] todos os 10 tumores testiculares.
[0148] A expressão de EPHA4 foi validamente elevada nos se guintescânceres em comparação com o tecido normal corresponden-te.
[0149] 14 dentre os 34 cânceres de bexiga,
[0150] 8 dentre os 14 cânceres cervicais,
[0151] 10 dentre os 25 carcinomas colangiocelulares,
[0152] 5 dentre os 15 endometriose,
[0153] 5 dentre os 8 cânceres gástricos do tipo difuso,
[0154] todos os 5 cânceres de ovário,
[0155] todos os 14 cânceres pancreáticos,
[0156] 20 dentre os 51 cânceres de próstata e
[0157] 14 dentre os 23 tumores de tecido mole.
[0158] A expressão de ECT2 foi validamente elevada nos seguin tescânceres em comparação com o tecido normal correspondente.
[0159] 17 dentre os 19 cânceres de bexiga,
[0160] 5 dentre os 12 cânceres de mama,
[0161] todos os 14 cânceres cervicais
[0162] todos os 13 carcinomas colangiocelulares,
[0163] todos os 5 CML,
[0164] 7 dentre os 8 cânceres colorretais,
[0165] 12 dentre os 16 cânceres esofageais,
[0166] 6 dentre os 16 NSCLC,
[0167] 8 dentre os 10 linfomas,
[0168] 1 dentre 1 câncer pancreático,
[0169] 10 dentre os 13 cânceres de próstata,
[0170] 3 dentre os 6 carcinomas renais e
[0171] 12 dentre os 13 cânceres SCLC.
[0172] A expressão de HIG2 foi validamente elevada em 19 dentre os 20 cânceres renais e 7 dentre os 9 tumores de tecido mole em comparação com o tecido normal correspondente.
[0173] A expressão de INHBB foi validamente elevada nos seguin tescânceres em comparação com o tecido normal correspondente.
[0174] 10 dentre os 21 carcinomas colangiocelulares,
[0175] todos os 12 cânceres esofageais,
[0176] 10 dentre os 13 NSCLC,
[0177] 22 dentre os 24 carcinomas renais,
[0178] 8 dentre os 14 cânceres SCLC e
[0179] 45 dentre os 49 tumores de tecido mole
[0180] A expressão de KIF20A foi validamente elevada nos se guintescânceres em comparação com o tecido normal corresponden-te.
[0181] todos os 31 cânceres de bexiga,
[0182] 38 dentre os 61 cânceres de seio,
[0183] 10 dentre os 11 carcinomas colangiocelulares,
[0184] 7 dentre os 19 cânceres esofageais,
[0185] 21 dentre os 22 NSCLC,
[0186] todos os 6 cânceres de ovário,
[0187] 17 dentre os 36 cânceres de próstata,
[0188] 6 dentre os 11 carcinomas renais e
[0189] todos os 15 SCLCs.
[0190] A expressão de KNTC2 foi validamente elevada nos se guintescânceres em comparação com o tecido normal corresponden-te.
[0191] 30 dentre os 32 cânceres de bexiga,
[0192] 47 dentre os 56 cânceres de mama,
[0193] todos os 10 cânceres cervicais,
[0194] 16 dentre os 22 carcinomas colangiocelulares,
[0195] 17 dentre os 37 CML,
[0196] 3 dentre os 10 cânceres colorretais,
[0197] 11 dentre os 46 cânceres esofageais,
[0198] 15 dentre os 19 NSCLC,
[0199] 7 dentre os 8 linfomas,
[0200] 20 dentre os 24 osteosarcoma,
[0201] 3 dentre os 5 cânceres de ovário
[0202] todos os 2 cânceres pancreáticos,
[0203] 15 dentre os 37 cânceres de próstata,
[0204] 14 dentre os 19 carcinomas renais,
[0205] todos os 15 SCLC e
[0206] 40 dentre os 59 tumores de tecido mole.
[0207] A expressão de TTK foi validamente elevada nos seguintes cânceres em comparação com o tecido normal correspondente.
[0208] todos os 27 cânceres de bexiga,
[0209] 25 dentre os 30 cânceres de seio,
[0210] 15 dentre os 16 cânceres cervicais,
[0211] todos os 10 carcinomas colangiocelulares,
[0212] 5 dentre os 7 CMLs,
[0213] 6 dentre os 10 cânceres colorretais,
[0214] 24 dentre os 44 cânceres esofageais,
[0215] 8 dentre os 15 cânceres de fígado,
[0216] todos os 12 NSCLC,
[0217] todos os 6 linfomas,
[0218] 13 dentre os 16 osteoblastomas,
[0219] 12 dentre os 17 cânceres de próstata,
[0220] todos os 15 SCLC e
[0221] 16 dentre os 33 tumores de tecido mole.
[0222] A expressão de URLC10 foi validamente elevada nos se guintescânceres em comparação com o tecido normal corresponden-te.
[0223] todos os 29 cânceres de bexiga,
[0224] 15 dentre os 16 cânceres cervicais,
[0225] todos os 7 carcinomas colangiocelulares,
[0226] 7 dentre os 19 cânceres esofageais,
[0227] todos os 3 cânceres gástricos,
[0228] 24 dentre os 27 NSCLC,
[0229] 15 dentre os 19 osteosarcoma,
[0230] 4 dentre os 5 cânceres pancreáticos,
[0231] 33 dentre os 43 tumores de tecido mole. Tabela 1
[0232] Razão da super-regulação observada em casos de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK ou URLC10 em tecido cancerígeno quando comparado ao tecido normal correspon-dente.
[0233] Predição de peptídeos de ligação HLA-A24 ou HLA-A2 de rivados de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK ou URLC10
[0234] A Tabela 2 apresenta os peptídeos de ligação HLA-A*2402 para CDH3 na ordem de afinidade de ligação. A Tabela 2A apresenta os peptídeos 9-mer derivados de CDH3 e a Tabela 2B apresenta os peptídeos 10-mer derivados de CDH3.
[0235] A Tabela 3 apresenta os peptídeos de ligação HLA-A*2402 e HLA-A*0201 para EPHA4 em ordem de afinidade de ligação. A Tabela 3A apresenta os peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de EPHA4, a Tabela 3B mostra os peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de EPHA4 e a Tabela 3C apresenta os peptí- deos 9-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de EPHA4.
[0236] A Tabela 4 apresenta os peptídeos de ligação HLA-A*2402 para ECT2 em ordem de afinidade de ligação. A Tabela 4A apresenta os peptídeos 9-mer derivados de ECT2 e a Tabela 4B mostra os pep- tídeos 10-mer derivados de ECT2.
[0237] A Tabela 5 apresenta os peptídeos de ligação HLA-A*2402 e HLA-A*0201 para HIG2, a Tabela 5A apresenta os peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de HIG2, a Tabela 5B apresenta os peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de HIG2, a Tabela 5C apresenta os peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de HIG2 e a Tabela 5D apresenta os peptídeos 10-mer de ligação HLA- A*0201 derivados de HIG2.
[0238] A Tabela 6 apresenta os peptídeos de ligação HLA-A*2402 e HLA-A*0201 para INHBB, a Tabela 6A apresenta os peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de INHBB, a Tabela 6B apresenta os peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de INHBB, a Tabela 6C apresenta os peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de INHBB e a Tabela 6D apresenta os peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de INHBB.
[0239] A Tabela 7 apresenta os peptídeos de ligação HLA-A*2402 para KIF20A em ordem de afinidade de ligação. A Tabela 7A apresenta os peptídeos 9-mer derivados de KIF20A e a Tabela 7B apresenta os peptídeos 10-mer derivados de KIF20A.
[0240] A Tabela 8 apresenta os peptídeos de ligação HLA-A*2402 para KNTC2 em ordem de afinidade de ligação. A Tabela 8A apresenta os peptídeos 9-mer derivados de KNTC2 e a Tabela 8B apresenta os peptídeos 10-mer derivados de KNTC2.
[0241] A Tabela 9 apresenta os peptídeos de ligação HLA-A*0201 para TTK em ordem de afinidade de ligação. A Tabela 9A apresenta os peptídeos 9-mer derivados de TTK e a Tabela 9B apresenta os peptídeos 10-mer derivados de TTK.
[0242] A Tabela 10 apresenta os peptídeos de ligação HLA- A*0201 para URLC10 em ordem de afinidade de ligação. A Tabela 10A apresenta os peptídeos 9-mer derivados de URLC10 e a Tabela 10B apresenta os peptídeos 10-mer derivados de URLC10.
[0243] A posição inicial indica o número de aminoácidos do termi nal N.
[0244] Pontuação para ligação é derivado de "BIMAS" descrito em Materiais e Métodos.
[0245] O número de doadores positivos indica o número de doado res cujas células T CD8+- podem ser induzidas à CTL específica através da estimulação ex vivo com células que apresentam antígeno. Esse é mostrado como (número de doadores positivos / número de doadores negativos).
[0246] O número de poço positivos indica o número de poços onde a produção de IFN-gama específica pode ser detectada através do ensaio de ELISPOT de IFN-gama. 4 a 8 poços podem ser preparados a partir de um doador. Esse é mostrado como (número de poços positivos / número de poços negativos testados pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama).
[0247] A linhagem de CTL positiva indica o número de linhagem de CTL estabelecida a partir dos poços positivos. A geração da linhagem de CTL é determinada por ELISA. Esse é mostrado como (número de linhagem de CTL estabelecido / número de poços positivos testados pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama).
[0248] A inexistência de doador positivo não é definida por poços positivos não-detectados, mas sim pela linhagem de CTL não estabelecida.
[0249] Os peptídeos mostrados por caractere em negrito nas tabe las possuem a atividade de estimulação das células T.
[0250] A inexistência de dados no número de doadores positivos, o número de poços positivos e linhagem de CTL positiva indicando "-" significa que os peptídeos não podem ser sintetizados por qualquer razão. Tabela 2A-1 Peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de CDH3
Tabela 2A-2 
Tabela 2B-1
[0251] Peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de CDH3
Tabela 2B-2 
Tabela 3A
[0252] Peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de EPHA4
Tabela 3B
[0253] Peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de EPHA4
Tabela 3C Peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de EPHA4 
Tabela 4A
[0254] Peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de ECT2
Tabela 4B Peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de ECT2 
Tabela 5A Peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de HIG2 
Tabela 5B Peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de HIG2 
Tabela 5C Peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de HIG2 
Tabela 5D Peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de HIG2 
Tabela 6A Peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de INHBB 
Tabela 6B Peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de INHBB 
Tabela 6C Peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de INHBB 
Tabela 6D Peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de INHBB 
Tabela 7A Peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de KIF20A 
Tabela 7B Peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de KIF20A 
Tabela 8A Peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de KNTC2 
Tabela 8B Peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*2402 derivados de KNTC2 
Tabela 9A Peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de TTK 
Tabela 9B Peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de TTK 
Tabela 10A Peptídeos 9-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de URLC10 
Tabela 10B Peptídeos 10-mer de ligação HLA-A*0201 derivados de URLC10 
[0255] Estimulação das células T usando os peptídeos preditados de CDH3 restritos com HLA-A*2402 e estabelecimento para linhagens de CTL estimuladas com peptídeos derivados de CDH3.
[0256] As CTLs para aqueles peptídeos derivados de CDH3 foram geradas de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". As CTLs que tem atividade de CTL específica detectável, como determinado pelo ensaio ELISPOT IFN-gama são mostradas na Figura 1. Em particular, CDH3-A24-9-513 (SEQ ID N°: 19), CDH3-A24-9-406 (SEQ ID N°: 22), CDH3-A24-10-807 (SEQ ID N°: 30), CDH3-A24-10-332 (SEQ ID N°: 34), CDH3-A24-10-655 (SEQ ID N°: 344) e CDH3-A24- 10-470 (SEQ ID N°: 358) demonstraram potente produção de IFN-gama quando comparadas ao controle pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e as células na poço positiva número N° 5 estimuladas com SEQ ID N°: 19, N° 2 com SEQ ID N°: 22, N° 5 com SEQ ID N°: 30, N° 4 com SEQ ID N°: 34, N° 1 com SEQ ID N°: 344 e N° 4 com SEQ ID N°: 358 foram expandidas e as linhagens de CTL foram estabelecidas. Aquelas linhagens de CTL tendo atividades CTL específicas mais altas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparadas às atividades contra o alvo sem peptídeo foram determinadas por ELISA. Os resultados são mostrados na Figura 1. Enquanto, outros peptídeos mostrados na tabela 2 poderiam não estabelecer as linhagens de CTLs apesar da possível atividade de ligação com HLA- A*2402. Por exemplo, o peptídeo negativo típico (CDH3-A24- 10-248) foi mostrado na Figura 1a. Nesta invenção, os peptídeos que poderiam estabelecer a linhagem de CTL foram selecionados como potentes peptídeos de estimulação de CTL.
[0257] Estabelecimento para clones de CTL estimulados com pep- tídeos derivados de CDH3
[0258] Ademais, a diluição limitante destas linhagens de CTL foi executada de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". O estabelecimento dos clones de CTL das linhagens de CTL N° 5 CDH3-A24-10-807 (SEQ ID N°: 30) e N° 1 CDH3-A24-10-655 (SEQ ID N°: 344) são mostradas na figura 1f e 1g. Os clones de CTL tiveram atividades de CTL potentes e específicas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparado às atividades contra o alvo sem pulso de peptídeo.
[0259] Atividade de CTL específica contra as células-alvo que ex pressam CDH3 e HLA-A*2402.
[0260] A linhagem de CTL estabelecida contra esses peptídeos foi examinada quanto à capacidade dos peptídeos de reconhecerem as células-alvo que expressam CDH3 e HLA-A*2402. A atividade de CTL específica contra COS7 transfectada com ambos o gene CDH3 de comprimento total e a molécula HLA-A*2402, que serve como um modelo específico para as células-alvo expressando endogenamente CDH3 e HLA-A*2402, foi testada usando como células efetoras as li- nhagens de CTL destacadas por CDH3-A24-10-807 (SEQ ID N°: 30) e CDH3-A24-10-655 (SEQ ID N°: 344). A célula COS7 transfectada com CDH3 de comprimento total, mas não HLA-A*2402 e a COS7 transfec- tada com HLA-A*2402, mas não CDH3 de comprimento total foram preparadas como controles. Os clones de CTL demonstrando a mais alta atividade de CTL específica contra COS7 que foi transfectada com ambos CDH3 e HLA-A2402 (Figura 1f e g).
[0261] Esses resultados demonstram claramente que a CDH3- A24-10-807 (SEQ ID N°: 30) e CDH3-A24-10-655 (SEQ ID N°: 344) são naturalmente expressos na superfície celular alvo com a molécula HLA-A2402 e reconhecem CTL. Ademais, esses peptídeos são peptí- deos de epitopos, que podem servir como vacinas contra o câncer visando tumores expressos por CDH3.
[0262] Estimulação das células T usando os peptídeos preditados a partir de EPHA4 restritos com HLA-A*2402 ou HLA-A*0201, e esta-belecimento de linhagens de CTL estimuladas com peptídeos derivados de EPHA4
[0263] As CTLs para aqueles peptídeos derivados de EPHA4 fo ram geradas pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama. As CTLs que têm atividade de CTL específica detectável, como determinado pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, são mostradas na Figura 2. Em particular, EphA4-A24-9-453 (SEQ ID N°: 41), EphA4-A24-9-5 (SEQ ID N°: 44), EphA4-A24-9-869 (SEQ ID N°: 46), EphA4-A24-9-420 (SEQ ID N°: 48), EphA4-A24- 10-24 (SEQ ID N°: 78), EphA4-A02-9-501 (SEQ ID N°: 376) e EphA4-A02-9-165 (SEQ ID N°: 379) demonstraram potente produção de IFN-gama por ensaio ELISPOT de IFN-gama, e as células na poço positiva número N°3 estimuladas com EphA4-A24-9-453 (SEQ ID N°: 41), N°2 com EphA4-A24-9-5 (SEQ ID N°: 44), N° 5 com EphA4-A24-9-869 (SEQ ID N°: 46), N° 6 com EphA4-A24-9-420 (SEQ ID N°: 48), N° 4 com EphA4-A24-10-24 (SEQ ID N°: 78), N° 8 com EphA4-A02-9-501 (SEQ ID N°: 376) e N° 3 com EphA4-A02-9-165 (SEQ ID N°: 379) foram expandidas e as linhagens de CTLs foram estabelecidas. Aquelas linhagens de CTLs tendo atividades de CTL específicas mais altas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparadoàs atividades contra o alvo não-pulsado com peptídeo foram determinadas por ELISA. Especialmente, as linhagens de CTL estimuladas com EphA4-A02-9-501 (SEQ ID N°: 376) e EphA4-A02-9-165 (SEQ ID N°: 379) foram testadas pelo ensaio de liberação de 51Cr de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". Os resultados são mostrados na Figura 2a-h. Enquanto isso, outros peptídeos mostrados na tabela 3 não puderam estabelecer as linhagens de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA-A*2402 ou HLA-A*0201. Por exemplo, o peptídeo negativo típico (EphA4-A24-9-384) foi mostrado na Figura 2a. Nesta invenção, os peptídeos que poderiam estabelecer a linhagem de CTL foram seleci-onados como potentes peptídeos de estimulação da CTL.
[0264] Estimulação das células T usando os peptídeos preditados a partir de ECT2 restritos com HLA-A*2402, e estabelecimento de li-nhagens de CTL estimuladas com peptídeos derivados de ECT2.
[0265] As CTLs para aqueles peptídeos derivados de ECT2 foram geradas de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". As CTLs resultantes tendo atividade de CTL específica detectável como determinado pelo ensaio ELISPOT de IFN- gama são mostradas na Figura 3. Em particular, ECT2-A24-9-515 (SEQ ID N°: 80), ECT2-A24-10-40 (SEQ ID N°: 100) e ECT2-A24-10- 101 (SEQ ID N°: 101) mostraram potente produção de IFN-gama, e as células no poço positivo número N° 7 estimuladas com ECT2-A24-9- 515 (SEQ ID N°: 80), N° 2 com ECT2-A24-10-40 (SEQ ID N°: 100) e N° 1 com ECT2-A24-10-101 (SEQ ID N°: 101) foram expandidas e as linhagens de CTLs foram estabelecidas. Aquelas linhagens de CTLs tendo atividades de CTL específicas mais altas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparado às atividades contra o alvo não- pulsado com peptídeo foram determinadas por ELISA. Os resultados são mostrados na Figura 3a-d. Enquanto isso, outros peptídeos mostrados na tabela 4 não puderam estabelecer as linhagens de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA-A*2402. Por exemplo, os peptídeos negativos típicos (ECT2-A24-10-322, ECT2-A24-9-657 e ECT2-A24-10-811) foram mostrados na Figura 3a. Nesta invenção, os peptídeos que poderiam estabelecer a linhagem de CTL foram selecionados como potentes peptídeos de estimulação da CTL.
[0266] Estabelecimento para clones de CTL estimulados com pep- tídeos derivados de ECT2
[0267] Ademais, a diluição limitante dessas linhagens de CTL foi executada de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". O estabelecimento dos clones de CTL da linhagem de CTL N° 2 ECT2-A24-10-40 (SEQ ID N°: 100) é mostrado na Figura 3c. Os clones de CTL tiveram atividades de CTL potentes e específicas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparado às atividades contra o alvo não-pulsado com peptídeo.
[0268] Atividade de CTL específica contra as células-alvo expres sando ECT2 e HLA-A*2402
[0269] A linhagem de CTL estabelecida contra esses peptídeos foi examinada quanto à capacidade dos peptídeos de reconhecerem as células-alvo que expressam ECT2 e HLA-A*2402. A atividade de CTL específica contra a célula COS7 transfectada com ambos o gene ECT2 de comprimento total e a molécula HLA-A*2402, que serve como um modelo para as células-alvo expressas de forma endógena com ECT2 e HLA-A*2402, foi testada usando como células efetoras o clone de CTL cultivado por ECT2-A24-10-40 (SEQ ID N°: 100) e a linhagem de CTL cultivada por ECT2-A24-10-101 (SEQ ID N°: 101). A célula COS7 transfectada com ECT2 de comprimento total, mas não com HLA-A*2402 e a COS7 transfectada com HLA-A*2402, mas não com ECT2 de comprimento total (substituiu outro gene, por exemplo, URLC10 ou INHBB) foram preparadas como controles. A linhagem de CTL que demonstra a atividade de CTL específica mais alta contra a COS7 foi a transfectada com ambos ECT2 e HLA-A2402 (Figuras 3c e d).
[0270] Esses resultados demonstram claramente que ECT2-A24- 10-40 (SEQ ID N°: 100) e ECT2-A24-10-101 (SEQ ID N°: 101) são na-turalmente expressos na superfície celular alvo com a molécula HLA- A2402 e reconhecem a CTL. Ademais, esses peptídeos são peptídeos de epitopos, que podem servir como vacinas contra o câncer direcionadas a tumores expressos por ECT2.
[0271] Atividade citotóxica contra a linhagem de célula canceríge na expressando de forma endógena HLA-A*2402 e ECT2
[0272] Ademais, a atividade citotóxica foi executada através do ensaio de citotoxicidade de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". Como um resultado mostrado na figura 3b, o clone de CTL estimulado com ECT2-A24-9-515 (SEQ ID N°: 80) mostrou efeito citotóxico consideravelmente alto em relação às linhagens celulares cancerígenas TE6 de HLA-A24 positiva e ECT positivo, comparado às linhagens celulares cancerígenas TE5 de ECT positivo e HLA-A24 negativa.
[0273] Estimulação de células T usando os peptídeos preditados a partir de HIG2 restritos com HLA-A*2402 ou HLA-A*0201, e estabele-cimento de linhagens de CTL estimuladas com peptídeos derivados de HIG2
[0274] As CTLs para aqueles peptídeos derivados de HIG2 foram geradas de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". As CTLs resultantes tendo atividade de CTL específica detectável como determinado pelo ensaio ELISPOT de IFN- gama são mostrados na Figura 4. Em particular, HIG2-A24-9-19 (SEQ ID N°: 110), HIG2-A24-9-22 (SEQ ID N°: 111), HIG2-A24-9-8 (SEQ ID N°: 387), HIG2-A24-10-7 (SEQ ID N°: 112), HIG2-A24-10-18 (SEQ ID N°: 394), HIG2-A02-9-8 (SEQ ID N°: 114), HIG2-A02-9-15 (SEQ ID N°: 116), HIG2-A02-9-4 (SEQ ID N°: 117) e HIG2-A02-10-8 (SEQ ID N°: 121) demonstraram potente produção de IFN-gama pelo ensaio ELIS- POT de IFN-gama, e as células na poço positiva número N° 6 estimuladas com HIG2-A24-9-19 (SEQ ID N°: 110), N° 7 com HIG2-A24-9-22 (SEQ ID N°: 111), N° 5 com HIG2-A24-9-8 (SEQ ID N°: 387), N° 1 com HIG2-A24-10-7 (SEQ ID N°: 112), N° 7 com HIG2-A24-10-18 (SEQ ID N°: 394), N° 10 com HIG2-A02-9-8 (SEQ ID N°: 114), N° 10 com HIG2- A02-9-15 (SEQ ID N°: 116), N° 10 com HIG2-A02-9-4 (SEQ ID N°: 117) e N° 9 com HIG2-A02-10-8 (SEQ ID N°: 121) foram expandidos e as linhagens de CTLs foram estabelecidas. Aquelas linhagens de CTLs tendo atividades de CTL específicas mais altas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparado às atividades contra o alvo não-pulsado com peptídeo foram determinadas por ELISA. Os resultadossão mostrados na Figura 4a-j. Enquanto isso, outros peptídeos mostrados na tabela 5 não puderam estabelecer as linhagens de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA-A*2402. Por exemplo, o peptídeo negativo típico (HIG2-A24-9-7) foi mostrado na Figura 4a. Nesta invenção, os peptídeos que poderiam estabelecer a linhagem de CTL foram selecionados como potentes peptídeos de estimulação da CTL.
[0275] Estabelecimento de clones de CTL estimulados com peptí- deos derivados de HIG2
[0276] Ademais, a diluição limitante dessas linhagens de CTL foi executada de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". O estabelecimento dos clones de CTL da linha- gem de CTL N° 7 HIG2-A24-9-22 (SEQ ID N°: 111), linhagem de CTL N° 5 HIG2-A24-9-8 (SEQ ID N°: 387), linhagem de CTL N° 1 HIG2- A24-10-7 (SEQ ID N°: 112), linhagem de CTL N° 7 HIG2-A24-10-18 (SEQ ID N°: 394) e linhagem de CTL N° 10 HIG2-A02-9-4 (SEQ ID N°: 117) são mostradas nas Figuras 4c, 4e, 4f, 4g e 4i. Os clones de CTL tiveram atividades CTL potentes e específicas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparado às atividades contra o alvo não- pulsado com peptídeo.
[0277] Atividade de CTL específica contra as células-alvo expres sando HIG2 e HLA-A*0201
[0278] A linhagem de CTL estabelecida contra esses peptídeos foi examinada quanto à capacidade dos peptídeos de reconhecerem as células-alvo expressando HIG2 e HLA-A*0201. A atividade de CTL es-pecífica contra 293T ou COS7 transfectada com ambos o gene HIG2 de comprimento total e a molécula HLA-A*0201, que serve como um modelo específico para as células-alvo expressando de forma endógena HIG2 e HLA-A*0201, foi testada usando como células efetoras as linhagens de CTL cultivadas por HIG2-A02-9-8 (SEQ ID N°: 114), HIG2-A02-9-15 (SEQ ID N°: 116) e o clone de CTL cultivado por HIG2- A02-9-4 (SEQ ID N°: 117). A célula 293T ou COS7 transfectadas com ECT2 de comprimento total, mas não com HLA-A*0201 e 293T ou COS7 transfectada com HLA-A*0201, mas não com ECT2 de comprimento total (ou substituiu outro gene, por exemplo, o FoxP3 ou TTK) foram preparadas como controles. A linhagem de CTL que demonstra a atividade de CTL específica mais alta contra 293T ou COS7 foi a transfectada com ambos ECT2 e HLA-A*0201 (Figuras 4e, 4h e 4i).
[0279] Esses resultados demonstram claramente que HIG2-A02-9- 8 (SEQ ID N°: 114), HIG2-A02-9-15 (SEQ ID N°: 116) e HIG2-A02-9-4 (SEQ ID N°: 117) são naturalmente expressos na superfície celular- alvo com as moléculas HLA-A2402 ou HLA-A0201 e reconhecem a CTL. Ademais, esses peptídeos são peptídeos de epitopos, que podem servir como vacinas contra o câncer direcionada a tumores expressos por HIG2.
[0280] Atividade citotóxica contra a linhagem de célula canceríge na expressando de forma endógena HLA-A*0201 e HIG2
[0281] Ademais, a atividade citotóxica foi executada através do ensaio de citotoxicidade de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". Como um resultado mostrado na figura 4i, o clone de CTL estimulado com HIG2-A02-9-4 (SEQ ID N°: 117) mostrou efeito citotóxico consideravelmente alto em relação às linhagens de células cancerígenas CAki-1 de HLA-A02 positiva e HIG2 positiva, comparado às linhagens de células cancerígenas A498de HLA-A02 negativa e HIG2 positiva.
[0282] Estimulação de células T usando os peptídeos preditados a partir de INHBB restritos com HLA-A*2402 ou HLA-A*0201, e estabe-lecimento de linhagens de CTL estimuladas com peptídeos derivados de INHBB
[0283] As CTLs para aqueles peptídeos derivados de INHBB fo ram geradas de acordo com os protocolos apresentados acima na se-ção"Materiais e Métodos". As CTLs resultantes tendo atividade de CTL específica detectável como determinada pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama são mostradas na Figura 5. Em particular, INHBB-A24-9- 180 (SEQ ID N°: 395), INHBB-A24-10-180 (SEQ ID N°: 133), INHBB- A24-10-305 (SEQ ID N°: 135), INHBB-A24-10-7 (SEQ ID N°: 137) e INHBB-A24-10-212 (SEQ ID N°: 426) demonstraram potente produção de IFN-gama pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e as células na poço positiva número N° 7 estimuladas com INHBB-A24-9-180 (SEQ ID N°: 395), N° 3 com INHBB-A24-10-180 (SEQ ID N°: 133), N° 2 com INHBB-A24-10-305 (SEQ ID N°: 135), N° 8 e N° 2 com INHBB-A24-10- 7 (SEQ ID N°: 137) e N° 1 com INHBB-A24-10-212 (SEQ ID N°: 426) foram expandidos e as linhagens de CTL foram estabelecidas. Aquelas linhagens de CTL tendo atividades de CTL específicas mais altas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparadas às atividades contra o alvo sem peptídeo foram determinadas por ELISA. Os resultadossão mostrados nas Figuras de 5b a 5e. Enquanto isso, outros peptídeos mostrados na tabela 6 não poderiam estabelecer as linhagens de CTLs apesar da possível atividade de ligação com HLA- A*2402 e HLA*0201. Por exemplo, o peptídeo negativo típico (INHBB- A24-9-238) foi mostrado na Figura 5a. Nesta invenção, os peptídeos que poderiam estabelecer a linhagem de CTL foram selecionados como potentes peptídeos de estimulação de CTL.
[0284] Estabelecimento de clones de CTL estimulados com peptí- deos derivados de INHBB
[0285] Ademais, a diluição limitante dessas linhagens de CTL foi executada de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". O estabelecimento dos clones de CTL a partir da linhagem de CTL N° 7 INHBB-A24-9-180 (SEQ ID N°: 395) e linhagem celular N° 2 INHBB-A24-10-305 (SEQ ID N°: 135) é mostrado nas Figuras 5b e 5d. Os clones de CTL tiveram atividades de CTL potentes e específicas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparado às atividades contra o alvo não-pulsado com peptídeo.
[0286] Atividade de CTL específica contra as células-alvo expres sando INHBB e HLA-A*2402
[0287] A linhagem de CTL estabelecida contra esses peptídeos foi examinada quanto à capacidade dos peptídeos de reconhecerem as células-alvo expressando INHBB e HLA-A*2402. A atividade de CTL específica contra 293T transfectada com ambos o gene INHBB de comprimento total e a molécula HLA-A*2402, que serve como um modelo específico para as células-alvo expressando de forma endógena INHBB e HLA-A*2402, foi testada usando como células efetoras as linhagens de CTL cultivadas por INHBB-A24-10-180 (SEQ ID N°: 133) e INHBB-A24-10-7 (SEQ ID N°: 137) e clone de CTL cultivado por INHBB-A24-10-305 (SEQ ID N°: 135). A célula 293T transfectada com INHBB de comprimento total, mas não com a HLA-A*2402 e a 293T transfectada com HLA-A*2402, mas não com INHBB de comprimento total foram preparadas como controles. A linhagem de CTL que demonstra a atividade de CTL mais alta contra 293T foi a transfectada com ambos INHBB e HLA-A2402 (Figuras 5c, 5d e 5e).
[0288] Esses resultados demonstram claramente que INHBB-A24- 10-305 (SEQ ID N°: 135), INHBB-A24-10-180 (SEQ ID N°: 133) e INHBB-A24-10-7 (SEQ ID N°: 137) são naturalmente expressos ma superfície celular alvo com a molécula HLA-A2402 e reconhecem a CTL. Ademais, esses peptídeos são peptídeos de epitopos, que podem servir como vacinas contra o câncer direcionadas aos tumores expressos por INHBB.
[0289] Atividade citotóxica contra a linhagem de célula canceríge na expressando de forma endógena HLA-A*2402 e INHBB
[0290] Ademais, a atividade citotóxica foi executada através do ensaio de citotoxicidade de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". Como um resultado mostrado na figura 5b, o clone de CTL estimulado com INHBB-A24-9-180 (SEQ ID N°: 395) mostrou efeito citotóxico consideravelmente alto em relação às linhagens de células cancerígenas MIAPaca2 de HLA-A24 positiva e INHBB positivo, comparado às linhagens de células cancerígenas CAki-2 de INHBB positivo e HLA-A24 negativa.
[0291] Estimulação de células T usando os peptídeos preditados a partir de KIF20A restritos com HLA-A*2402, e estabelecimento de linhagens de CTL estimuladas com peptídeos derivados de KIF20A
[0292] As CTLs para aqueles peptídeos derivados de KIF20A fo ram geradas de acordo com os protocolos apresentados acima na se- ção "Materiais e Métodos". As CTLs resultantes tendo atividade de CTL específica detectável como determinada pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama são mostradas na Figura 6. Em particular, KIF20A-A24-9- 305 (SEQ ID N°: 174), KIF20A-A24-9-383 (SEQ ID N°: 178), KIF20A- A24-10-304 (SEQ ID N°: 186) e KIF20A-A24-10-66 (SEQ ID N°: 194) demonstraram potente produção de IFN-gama pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e as células na poço positiva número N° 2 estimuladas com KIF20A-A24-9-305 (SEQ ID N°: 174), N° 3 com KIF20A-A24-9- 383 (SEQ ID N°: 178), N° 5 com KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186) e N° 6 com KIF20A-A24-10-66 (SEQ ID N°: 194) foram expandidos e as linhagens de CTLs foram estabelecidas. Aquelas linhagens de CTLs tendo atividades de CTL específicas mais altas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparado às atividades contra alvo não-pulsado com peptídeo foram determinadas por ELISA. Os resultadossão mostrados nas Figuras de 6a a 6e. Enquanto isso, outros pep- tídeos mostrados na tabela 7 não puderam estabelecer as linhagens de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA-A*2402. Por exemplo, os peptídeos negativos típicos (KIF20A -A24-9-647 e KIF20A -A24-10-182) foram mostrados na Figura 6a. Nesta invenção, os pep- tídeos que poderiam estabelecer a linhagem de CTL foram selecionados como potentes peptídeos de estimulação da CTL.
[0293] Estabelecimento de clones de CTL estimulados com peptí- deos derivados de KIF20A
[0294] Ademais, a diluição limitante dessas linhagens de CTL foi executada de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". O estabelecimento dos clones de CTL a partir da linhagem de CTL N° 2 KIF20A-A24-9-305 (SEQ ID N°: 174), linhagem celular N° 5 KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186) e linhagem celular N° 6 KIF20A-A24-10-66 (SEQ ID N°: 194) é mostrado nas Figuras 6b, 6d e 6e. Os clones de CTL tiveram atividades de CTL potentes e específicas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparado às atividades contra o alvo não-pulsado com peptídeo.
[0295] Atividade de CTL específica contra as células-alvo expres sando KIF20A e HLA-A*2402
[0296] A linhagem de CTL estabelecida contra esses peptídeos foi examinada quanto à capacidade dos peptídeos de reconhecerem as células-alvo expressando KIF20A e HLA-A*2402. A atividade de CTL específica contra COS7 transfectada com ambos o gene KIF20A de comprimento total e a molécula HLA-A*2402 e A24-LCL transfectada por eletroporação com gene KIF20A de comprimento total, que servem como um modelo específico para as células-alvo expressando de forma endógena KIF20A e HLA-A*2402, foi testada usando como células efetoras as linhagens de CTL cultivadas por KIF20A-A24-9-383 (SEQ ID N°: 178) e KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186) e o clone de CTL cultivado por KIF20A-A24-10-66 (SEQ ID N°: 194). A célula COS7 transfectada com KIF20A de comprimento total, mas não com HLA- A*2402 e a COS7 transfectada com HLA-A*2402, mas não com KIF20A de comprimento total (ou substituído pelo gene URLC10 de comprimento total), a COS7 transfectada com HLA-A*2402 e pulsada com KIF20A-10-308, e a A24-LCL transfectada com o vetor de simulação foram preparadas como controles. A linhagem de CTL que demonstra a atividade de CTL mais alta contra COS7 que foi a transfec- tada com ambos KIF20A e HLA-A*2402 (Figuras 6b, 6c e 6d). Alternativamente, a linhagem de CTL estimulada com KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186) demonstrada contra A24-LCL transfectada com KIF20A.
[0297] Esses resultados demonstram claramente que KIF20A-A24- 9-383 (SEQ ID N°: 178), KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186) e KIF20A-A24-10-66 (SEQ ID N°: 194) são naturalmente expressos na superfície celular alvo com a molécula HLA-A2402 e reconhecem a CTL. Ademais, esses peptídeos são peptídeos de epitopos, que podem servir como vacinas contra o câncer direcionadas aos tumores expressos por KIF20A.
[0298] Atividade citotóxica contra a linhagem de célula canceríge na expressando de forma endógena HLA-A*2402 e KIF20A
[0299] Ademais, a atividade citotóxica foi executada através do ensaio de citotoxicidade de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". Como um resultado mostrado na figura 6b e 6e, o clone de CTL estimulado com KIF20A-A24-9-305 (SEQ ID N°: 174) ou KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186) mostrou efeito citotóxico consideravelmente alto em relação às linhagens de células cancerígenas PK45P de HLA-A24 positiva e KIF20A positivo ou MIAPaca2 respectivamente, comparado às linhagens de células cancerígenas PK59 de KIF20A positivo e HLA-A24 negativa.
[0300] Estimulação de células T usando os peptídeos preditados a partir de KNTC2 restritos com HLA-A*2402, e estabelecimento de linhagens de CTL estimuladas com peptídeos derivados de KNTC2.
[0301] As CTLs para aqueles peptídeos derivados do KNTC2 fo ram geradas de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". As CTLs resultantes tendo atividade de CTL específica detectável como determinada pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama são mostradas na Figura 7. Em particular, KNTC2-A24-9- 309 (SEQ ID N°: 196), KNTC2-A24-9-124 (SEQ ID N°: 202), KNTC2- A24-9-154 (SEQ ID N°: 210), KNTC2-A24-9-150 (SEQ ID N°: 213), KNTC2-A24-10-452 (SEQ ID N°: 214), KNTC2-A24-10-227 (SEQ ID N°: 217) e KNTC2-A24-10-273 (SEQ ID N°: 223) demonstraram potenteprodução de IFN-gama pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e as células na poço positiva número N° 8 estimuladas com KNTC2-A24-9- 309 (SEQ ID N°: 196), N° 5 com KNTC2-A24-9-124 (SEQ ID N°: 202), N° 5 com KNTC2-A24-9-154 (SEQ ID N°: 210), N° 7 com KNTC2-A24- 9-150 (SEQ ID N°: 213), N° 4 e N° 5 com KNTC2-A24-10-452 (SEQ ID N°: 214), N° 1 com KNTC2-A24-10-227 (SEQ ID N°: 217) e N° 8 com KNTC2-A24-10-273 (SEQ ID N°: 223) foram expandidos e as linhagens de CTLs foram estabelecidas. Aquelas linhagens de CTLs tendo atividades de CTL específicas mais altas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparado às atividades contra o alvo não-pulsado com peptídeo foram determinadas por ELISA. Os resultados são mostrados nas Figuras 7a a 7h. Enquanto isso, outros peptídeos mostrados na tabela 8 não puderam estabelecer as linhagens de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA-A*2402. Por exemplo, o peptídeo negativo típico (KNTC2-A24-10-610) foi mostrado na Figura 7a. Nesta invenção, os peptídeos que poderiam estabelecer a linhagem de CTL foram selecionados como potentes peptídeos de estimulação da CTL.
[0302] Estabelecimento de clones de CTL estimulados com peptí- deos derivados de KNTC2
[0303] Ademais, a diluição limitante dessas linhagens de CTL foi executada de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". O estabelecimento dos clones de CTL a partir da linhagem de CTL N° 5 KNTC2-A24-9-154 (SEQ ID N°: 210) e linhagem celular N° 5 KNTC2-A24-10-452 (SEQ ID N°: 214) são mostrados nas Figuras 7d e 7f. Os clones de CTL tiveram atividades de CTL potentes e específicas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparado às atividades contra o alvo não-pulsado com peptídeo.
[0304] Atividade de CTL específica contra as células-alvo expres sando KNTC2 e HLA-A*2402
[0305] A linhagem de CTL estabelecida contra esses peptídeos foi examinada quanto à capacidade dos peptídeos de reconhecerem as células-alvo expressando KNTC2 e HLA-A*2402. A atividade de CTL específica contra o HEK293 transfectada com ambos o gene KNTC2 de comprimento total e a molécula HLA-A*2402, que servem como um modelo específico para as células-alvo expressando de forma endógena KNTC2 e HLA-A*2402, foi testada usando como células efetoras os clones de CTL cultivados por KNTC2-A24-10-452 (SEQ ID N°: 214). A célula HEK293 transfectada com KNTC2 de comprimento total, mas não com HLA-A*2402, a HEK293 transfectada com HLA-A*2402, mas não com KNTC2 de comprimento total e a HEK293 transfectada com HLA-A*2402 e pulsada com KNTC2-9-309 foram preparadas como controles. A linhagem de CTL que demonstra a atividade de CTL mais alta contra HEK293 foi a transfectada com ambos KNTC2 e HLA- A*2402 (Figura 7f).
[0306] Esses resultados demonstram claramente que KNTC2-A24- 10-452 (SEQ ID N°: 214) é naturalmente expresso na superfície celular alvo com a molécula HLA-A2402 e reconhece a CTL. Ademais, esses peptídeos são peptídeos de epitopos, que podem servir como vacinas contra o câncer direcionadas aos tumores expressos por KNTC2.
[0307] Estimulação de células T usando os peptídeos preditados a partir de TTK restritos com HLA-A*0201, e estabelecimento de linhagens de CTL estimuladas com peptídeos derivados de TTK
[0308] As CTLs para aqueles peptídeos derivados de TTK foram geradas de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". As CTLs resultantes tendo atividade de CTL específica detectável como determinada pelo ensaio ELISPOT de IFN- gama são mostradas na Figura 8. Como descrito nas Figuras 8b a 8d, TTK-A2-9-462 (SEQ ID N°: 227), TTK-A2-9-547 (SEQ ID N°: 228), TTK-A2-9-719 (SEQ ID N°: 233) e TTK-A2-10-462 (SEQ ID N°: 254) demonstraram potente produção de IFN-gama pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e as células na poço positiva número N° 4 estimuladas com TTK-A2-9-462 (SEQ ID N°: 227), N° 2 com TTK-A2-9-547 (SEQ ID N°: 228), N° 1 com TTK-A2-9-719 (SEQ ID N°: 233) e N° 8 com TTK-A2-10-462 (SEQ ID N°: 254) foram expandidas. Aquelas linhagens de CTLs tendo atividades de CTL específicas mais altas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparado às atividades contra o alvo não-pulsado com peptídeo foram determinadas por ELISA. Enquanto isso, outros peptídeos mostrados na tabela 9 não puderam estabelecer as linhagens de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA-A*0201. Por exemplo, o peptídeo negativo típico (TTK-A2-9- 278) foi mostrado na Figura 8a. Nesta invenção, os peptídeos que poderiam estabelecer a linhagem de CTL foram selecionados como potentespeptídeos de estimulação da CTL.
[0309] Estabelecimento de clones de CTL estimulados com peptí- deos derivados de TTK
[0310] Ademais, a diluição limitante dessas linhagens de CTL foi executada de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". O estabelecimento dos clones de CTL a partir da linhagem de CTL N° 4 TTK-A2-9-462 (SEQ ID N°: 227), linhagem de CTL N° 2 TTK-A2-9-547 (SEQ ID N°: 228), linhagem de CTL N° 1 TTK-A2-9-719 (SEQ ID N°: 233), linhagem de CTL N° 8 TTK-A2-10- 462 (SEQ ID N°: 254) são mostrados nas Figuras 8b, 8c, 8d e 8e. Os clones de CTL tiveram atividades de CTL potentes e específicas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparado às atividades contra o alvo não-pulsado com peptídeo.
[0311] Atividade de CTL específica contra as células-alvo expres sando TTK e HLA-A*0201
[0312] O clone de CTL estabelecido contra esses peptídeos foi examinado quanto à capacidade dos peptídeos de reconhecerem as células-alvo expressando de forma endógena TTK e HLA-A*0201. A atividade de CTL específica contra COS7 transfectada com ambos o gene TTK de comprimento total e a molécula HLA-A*0201, que é um modelo específico para as células-alvo expressando de forma endó- gena TTK e HLA-A*0201, foi testada usando como células efetoras os clones de CTL cultivados por TTK-A2-9-462 (SEQ ID N°: 227), TTK- A02-9-547 (SEQ ID N°: 228), TTK-A2-9-719 (SEQ ID N°: 233) e TTK- A2-10-462 (SEQ ID N°: 254). A célula COS7 transfectada com TTK de comprimento total, mas não com HLA-A*0201 e a COS7 transfectada com HLA-A*0201, mas não com TTK de comprimento total (ou substituído pelo gene HIG2 de comprimento total), a COS7 transfectada com HLA-A*0201 e pulsada com peptídeo de epitopo alvo diferente, foram preparadas como controles. O clone de CTL tendo a atividade de CTL mais alta específica contra COS7 foi o transfectado com ambos o TTK e HLA-A*0201 (Figuras 8b, 8c, 8d e 8e).
[0313] Esses resultados demonstram claramente que TTK-A2-9- 462 (SEQ ID N°: 227), TTK-A02-9-547 (SEQ ID N°: 228), TTK-A2-9- 719 (SEQ ID N°: 233) e TTK-A02-10-462 (SEQ ID N°: 254) são naturalmente expressos na superfície celular alvo com molécula HLA-A2 e reconhecem a CTL. Ademais, esses peptídeos são peptídeos de epitopos, que podem servir como vacinas contra o câncer direcionadas aos tumores expressos por TTK.
[0314] Estimulação de células T usando os peptídeos preditados a partir de URLC10 restritos com HLA-A*0201, e estabelecimento de li-nhagens de CTL estimuladas com peptídeos derivados de URLC10.
[0315] As CTLs para aqueles peptídeos derivados de URLC10 fo ram geradas de acordo com os protocolos apresentados acima na seção "Materiais e Métodos". As CTLs resultantes tendo atividade de CTL específica detectável como determinada pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama são mostradas na Figura 9. Como mostrado nas Figuras de 9b a 9d, URLC-A2-9-206 (SEQ ID N°: 271), URLC-A2-9-212 (SEQ ID N°: 272) e URLC-A2-10-211 (SEQ ID N°: 288) demonstraram potente produção de IFN-gama pelo ensaio ELISPOT de IFN-gama, e as células na poço positiva número N° 7 estimuladas com URLC-A2-9-206 (SEQ ID N°: 271), N° 3 com URLC-A2-9-212 (SEQ ID N°: 272) e N° 5 com URLC-A2-10-211 (SEQ ID N°: 288) foram expandidas. Aquelas linhagens de CTLs tendo atividades de CTL específicas mais altas contra o alvo pulsado com peptídeo quando comparado às atividades contra alvo não-pulsado com peptídeo foram determinadas por ELISA. Enquanto isso, outros peptídeos mostrados na tabela 10 não puderam estabelecer as linhagens de CTL apesar da possível atividade de ligação com HLA-A*0201. Por exemplo, o peptídeo negativo típico (URLC- A2-9-58) foi mostrado na Figura 9a. Nesta invenção, os peptídeos que poderiam estabelecer a linhagem de CTL foram selecionados como potentes peptídeos de estimulação da CTL.
[0316] Atividade de CTL específica contra as células-alvo expres sando URLC10 e HLA-A*0201
[0317] A linhagem de CTL estabelecida contra esses peptídeos foi examinada quanto à capacidade dos peptídeos de reconhecerem as células-alvo que expressam URLC10 e HLA-A*0201. A atividade de CTL específica contra COS7, HEK293 e 293T transfectadas com ambos o gene URLC10 de comprimento total e a molécula HLA-A*0201, que servem como um modelo específico para as células-alvo expressando de forma endógena URLC10 e HLA-A*0201, foi testada usando como células efetoras a linhagem de CTL cultivada por URLC10-A02- 10-211. A célula COS7, HEK293 ou 293T transfectada com URLC10 de comprimento total, mas não com HLA-A*0201 (substituído pela HLA*2402), COS7, HEK293 ou 293T transfectada com HLA-A*0201, mas não com o URLC10 de comprimento total, a COS7 transfectada com HLA-A*0201 e pulsada com peptídeo de epitopo-alvo diferente, foram preparadas como controles. A linhagem de CTL que demonstra a atividade de CTL específica mais alta contra COS7, HEK293 ou 293T foi a transfectada com ambos URLC10 e HLA-A0201 (Figura 92).
[0318] Esses resultados demonstram claramente que URLC10- A02-10-211 é naturalmente expressa na superfície celular-alvo com a molécula HLA-A*0201 e reconhecem a CTL. Ademais, esses peptí- deos foram peptídeos de epitopos, que podem utilizar a vacina contra o câncer direcionada aos tumores expressos por URLC10.
[0319] Análise de homologia dos peptídeos dos antígenos
[0320] Os clones de CTL estabelecidos contra os seguintes peptí- deos mostraram potente e específica atividade de CTL. CDH3-A24-9-513 (SEQ ID N°: 19), CDH3-A24-9-406 (SEQ ID N°: 22), CDH3-A24-10-807 (SEQ ID N°: 30), CDH3-A24-10-332 (SEQ ID N°: 34), CDH3-A24-10-655 (SEQ ID N°: 344), CDH3-A24-10-470 (SEQ ID N°: 358), EphA4-A24-9-453 (SEQ ID N°: 41), EphA4-A24-9-5 (SEQ ID N°: 44), EphA4-A24-9-869 (SEQ ID N°: 46), EphA4-A24-9-420 (SEQ ID N°: 48), EphA4-A24-10-24 (SEQ ID N°: 78), EphA4-A02-9-501 (SEQ ID N°: 376), EphA4-A02-9-165 (SEQ ID N°: 379), ECT2-A24-9-515 (SEQ ID N°: 80), ECT2-A24-10-40 (SEQ ID N°: 100), ECT2-A24-10-101 (SEQ ID N°: 101), HIG2-A24-9-19 (SEQ ID N°: 110), HIG2-A24-9-22 (SEQ ID N°: 111), HIG2-A24-9-8 (SEQ ID N°: 387), HIG2-A24-10-7 (SEQ ID N°: 112), HIG2-A24-10-18 (SEQ ID N°: 394), HIG2-A02-9-8 (SEQ ID N°: 114), HIG2-A02-9-15 (SEQ ID N°: 116), HIG2-A02-9-4 (SEQ ID N°: 117), HIG2-A02-10-8 (SEQ ID N°: 121), INHBB-A24-9-180 (SEQ ID N°: 395), INHBB-A24-10-180 (SEQ ID N°: 133), INHBB-A24-10-305 (SEQ ID N°: 135), INHBB-A24-10-7 (SEQ ID N°: 137), INHBB-A24-10-212 (SEQ ID N°: 426), KIF20A-A24-9-305 (SEQ ID N°: 174), KIF20A-A24-9-383 (SEQ ID N°: 178), KIF20A-A24-10-304 (SEQ ID N°: 186), KIF20A-A24-10-66 (SEQ ID N°: 194), KNTC2-A24-9-309 (SEQ ID N°: 196), KNTC2-A24-9-124 (SEQ ID N°: 202), KNTC2-A24-9-154 (SEQ ID N°: 210), KNTC2-A24-9-150 (SEQ ID N°: 213), KNTC2-A24-10-452 (SEQ ID N°: 214), KNTC2-A24-10-227 (SEQ ID N°: 217), KNTC2-A24-10-273 (SEQ ID N°: 223), TTK-A02-9-462 (SEQ ID N°: 227), TTK-A02-9-547 (SEQ ID N°: 228), TTK-A02-9-719 (SEQ ID N°: 233), TTK- A02-10-462 (SEQ ID N°: 254), URLC-A02-9-206 (SEQ ID N°: 271), URLC-A02-9-212 (SEQ ID N°: 272) e URLC-A02-10-211 (SEQ ID N°: 288).
[0321] Isso sugera que as sequências de SEQ ID N°: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41, 44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 ou 288 são homólogas aos peptídeos derivados de outras moléculas, que são conhecidos por sintetizar o sistema imune humano.
[0322] Para excluir esta possibilidade, a análise de homologia foi executada com as sequências de peptídeo como consultas usando o algoritmo de BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/blast.cgi). Nenhuma homologia de sequência significativa foi revelada.
[0323] Esses resultados sugerem que as sequências de SEQ ID N°: 19, 22, 30, 34, 344, 358, 41,44, 46, 48, 78, 376, 379, 80, 100, 101, 110, 111, 387, 112, 394, 114, 116, 117, 121, 395, 133, 135, 137, 426, 174, 178, 186, 194, 196, 202, 210, 213, 214, 217, 223, 227, 228, 233, 254, 271, 272 ou 288 são únicas e assim possuem um baixo risco de produzir resposta imunológica não pretendida para qualquer molécula não-relacionada.
[0324] A identificação de novos TAAs, particularmente aqueles que induzem potentes e específicas respostas imunes antitumorais, garante o desenvolvimento adicional da aplicação clínica de estratégias de vacinação à base de peptídeos em vários tipos de câncer (Boon T. e outros, (1996) J Exp Med 183: 725 a 729.; van der Bruggen P e outros, (1991) Science 254: 1643 a 1647.; Brichard V e outros, (1993) J Exp Med 178: 489 a 495.; Kawakami Y e outros, (1994) J Exp Med 180: 347 a 352.; Shichijo S e outros, (1998) J Exp Med 187:277 a 288.; Chen YT e outros, (1997) Proc. Natl. Acd. Sci. USA, 94: 1914 a 1918.; Harris CC, (1996) J Natl Cancer Inst 88:1442 a 1445.; Butterfield LH e outros, (1999) Cancer Res 59:3134 a 3142.; Vissers JL e outros, (1999) Cancer Res 59: 5554 a 5559.; van der Burg SH e outros, (1996) J. Immunol 156:3308 a 3314.; Tanaka F e outros, (1997) Cancer Res 57:4465 a 4468.; Fujie T e outros, (1999) Int J Cancer 80:169 a 172.; Kikuchi M e outros, (1999) Int J Cancer 81 : 459 a 466.; Oiso M e ou- tros, (1999) Int J Cancer 81:387 a 394).
[0325] As tecnologias de microarranjo de cDNA podem descrever os perfis abrangentes de expressão de gene de células malignas (Lin YM, e outros, Oncogene. 13 de Junho de 2002;21:4120 a 4128.; Kita- hara O, e outros, Cancer Res. 1 de Maio de 2001;61:3544 a 3549.; Suzuki C, e outros, Cancer Res. 1 de Novembro de 2003;63:7038 a 7041.; Ashida S, Cancer Res. 1 de Setembro de 2004;64:5963 a 5972.; Ochi K, e outros, Int J Oncol. Março de 2004;24(3):647 a 655.; Kaneta Y, e outros, Int J Oncol. Setembro de 2003;23:681 a 691.; Obama K, Hepatology. Junho de 2005;41:1339 a 1348.; Kato T, e outros, Cancer Res. 1 de Julho de 2005;65:5638 a 5646.; Kitahara O, e outros, Neoplasia. Julho-Agosto de 2002;4:295 a 303.; Saito- Hisaminato A e outros, DNA Res 2002, 9: 35 a 45) e encontram utilidade na identificação das potenciais TAAs. Dentre as transcrições que são superreguladas em vários cânceres, novos genes humanos, CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e URLC10 mencionados, foram identificados usando essas tecnologias.
[0326] Como demonstrado acima, CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e URLC10, são superexpressos em vá-rioscânceres, mas mostram a expressão mínima em tecidos normais. Em adição, esses genes foram mostrados como tendo uma função significativa relacionada à proliferação celular. Assim, os peptídeos derivados de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e URLC10, podem servir como epitopos de TAA, que, por sua vez, podem ser usados para induzir as respostas imunes significativas e específicas contra células cancerígenas. Assim, como CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e URLC10 são novos TAAs, as vacinas que usam esses peptídeos de epitopos encontram utilidade como imunoterapêuticos contra vários carcinomas ou outra doença expressando essas moléculas.
[0327] A presente invenção identifica novos TAAs, particularmente aqueles que induzem respostas imunes antitumorais potentes e espe-cíficas. Tais TAAs garantem o desenvolvimento adicional como vacinas à base de peptídeos contra doenças associadas com a superex- pressão de CDH3, EPHA4, ECT2, HIG2, INHBB, KIF20A, KNTC2, TTK e/ou URLC10, por exemplo, cânceres.
[0328] Todas as patentes, pedidos de patentes, e publicações ci tados aqui são incorporados a título de referência.
[0329] Enquanto a invenção foi descrita em detalhes e com rela ção às modalidades específicas da mesma, entende-se que a descrição anterior é de natureza exemplificada e explicativa e é destinada a ilustrar a invenção e suas modalidades preferenciais. Através da experimentação de rotina, um versado na técnica reconhecerá prontamente que as várias mudanças e modificações podem ser feitas nesta sem abandonar o espírito e escopo da invenção. Assim, a invenção é destinada a ser definida não pela descrição acima, mas sim pelas seguintes reivindicações e seus equivalentes.
Claims (13)
1. Composição farmacêutica para tratar câncer, caracteri-zada pelo fato de que a dita composição compreende um peptídeo consistindo em uma sequência de aminoácido selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 30, 19, 22, 34 e 358 e um excipiente far- maceuticamente aceitável em combinação com um adjuvante, em que o excipiente farmaceuticamente aceitável é tampão fosfato.
2. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo que consiste em câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, car-cinoma colangiocelular, CML, câncer colorretal, endometriose, câncer esofageal, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de ovário, câncer pan- creático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular.
3. Exossomo, caracterizado pelo fato de que apresenta em sua superfície um complexo compreendendo um peptídeo consistindo em uma sequência de aminoácido selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 30, 19, 22, 34 e 358 e um antígeno HLA.
4. Exossomo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o antígeno HLA é HLA-A24.
5. Exossomo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o antígeno HLA é HLA-A2402.
6. Método in vitro para induzir uma célula apresentando an- tígeno que têm uma alta inducibilidade de célula T citotóxica, caracte-rizado pelo fato de que compreende a etapa de contatar uma célula apresentadora de antígeno com um peptídeo consistindo em uma se-quência de aminoácido selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 30, 19, 22, 34 e 358.
7. Método in vitro para induzir células T citotóxicas, caracte- rizado pelo fato de que compreende a etapa de contatar uma célula T com um peptídeo consistindo em uma sequência de aminoácido sele-cionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 30, 19, 22, 34 e 358.
8. Vacina para inibir a proliferação de uma célula que ex-pressa o gene da SEQ ID NO: 1, caracterizada pelo fato de que a vacina compreende um peptídeo consistindo em uma sequência de ami- noácido selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 30, 19, 22, 34 e 358, como um ingrediente ativo, e um excipiente farmaceutica- mente aceitável em combinação com um adjuvante, em que o excipi- ente farmaceuticamente aceitável é tampão fosfato.
9. Vacina de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que a célula que expressa o gene da SEQ ID NO: 1 é uma célula de câncer.
10. Vacina de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo que consiste em câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma colan- giocelular, CML, câncer colorretal, endometriose, câncer esofageal, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de ovário, câncer pancreático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular.
11. Vacina de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que é formulada para administração a um sujeito cujo an- tígeno HLA é HLA-A24.
12. Uso de um peptídeo, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de uma vacina para o tratamento de câncer em que o dito peptídeo consiste em uma sequência de aminoácido selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 30, 19, 22, 34 e 358.
13. Uso de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo que consiste em câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, carcinoma colan- giocelular, CML, câncer colorretal, endometriose, câncer esofageal, câncer gástrico, câncer gástrico do tipo difuso, câncer de fígado, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, câncer de ovário, câncer pancreático, câncer de próstata, carcinoma renal, SCLC, tumor de tecido mole e tumor testicular.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BR122020021065-6A BR122020021065B1 (pt) | 2007-02-21 | 2008-02-21 | Composição farmacêutica e vacina à base de peptídeos para antígenos associados a tumores expressando câncer, exossomo, método in vitro para induzir células apresentando antígeno que têm uma alta inducibilidade de célula t citotóxica e uso de um peptídeo |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US90294907P | 2007-02-21 | 2007-02-21 | |
| US60/902,949 | 2007-02-21 | ||
| PCT/JP2008/000290 WO2008102557A1 (en) | 2007-02-21 | 2008-02-21 | Peptide vaccines for cancers expressing tumor-associated antigens |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BRPI0808421A2 BRPI0808421A2 (pt) | 2017-08-29 |
| BRPI0808421B1 true BRPI0808421B1 (pt) | 2021-10-05 |
Family
ID=39709837
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BRPI0808421-1A BRPI0808421B1 (pt) | 2007-02-21 | 2008-02-21 | Composição farmacêutica para tratar câncer, exossomo, uso de um peptídeo, métodos in vitro para induzir uma célula apresentando antígeno que têm uma alta inducibilidade de célula t citotóxica ou para induzir células t citotóxicas e vacina para inibir a proliferação de uma célula |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (20) | EP2570430A3 (pt) |
| JP (6) | JP5239103B2 (pt) |
| KR (8) | KR20160045939A (pt) |
| CN (4) | CN101663315B (pt) |
| AR (1) | AR068302A1 (pt) |
| AU (1) | AU2008218463B2 (pt) |
| BR (1) | BRPI0808421B1 (pt) |
| CA (3) | CA2919248A1 (pt) |
| CO (1) | CO6190536A2 (pt) |
| CY (2) | CY1114590T1 (pt) |
| DK (3) | DK2476694T3 (pt) |
| ES (6) | ES2540893T3 (pt) |
| HK (7) | HK1172043A1 (pt) |
| HR (3) | HRP20131044T1 (pt) |
| IL (10) | IL200478A (pt) |
| MX (4) | MX2009009022A (pt) |
| MY (2) | MY173379A (pt) |
| NZ (4) | NZ579768A (pt) |
| PH (1) | PH12014501642B1 (pt) |
| PL (3) | PL2465864T3 (pt) |
| PT (2) | PT2121731E (pt) |
| RU (1) | RU2464275C2 (pt) |
| SG (3) | SG10201909675QA (pt) |
| SI (3) | SI2476694T1 (pt) |
| TW (5) | TWI615403B (pt) |
| UA (1) | UA100372C2 (pt) |
| WO (1) | WO2008102557A1 (pt) |
| ZA (1) | ZA200905881B (pt) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005019475A2 (en) | 2003-08-20 | 2005-03-03 | Oncotherapy Science, Inc. | Hypoxia-inducible protein 2 (hig2), a novel therapeutic potential target of renal cell carcinoma (rcc) |
| BRPI0816236A2 (pt) | 2007-08-20 | 2015-08-18 | Oncotherapy Science Inc | Peptídeo cdh3 e agente medicinal contendo o mesmo |
| KR20110025215A (ko) | 2008-06-30 | 2011-03-09 | 온코세라피 사이언스 가부시키가이샤 | 방사성 동위원소 표지로 표지된 항―ｃｄｈ３ 항체 및 이의 용도 |
| TW201008574A (en) | 2008-08-19 | 2010-03-01 | Oncotherapy Science Inc | INHBB epitope peptides and vaccines containing the same |
| TWI543767B (zh) * | 2008-08-19 | 2016-08-01 | 腫瘤療法 科學股份有限公司 | Ｈｉｇ２與ｕｒｌｃ１０抗原決定位胜肽以及含此胜肽之疫苗 |
| EP2362906B1 (en) * | 2008-10-22 | 2015-04-08 | Oncotherapy Science, Inc. | Rab6kifl/kif20a epitope peptide and vaccines containing the same |
| TWI500932B (zh) | 2008-12-05 | 2015-09-21 | Oncotherapy Science Inc | Ｗｄｒｐｕｈ抗原決定位胜肽以及含此胜肽之疫苗 |
| WO2010073551A1 (en) * | 2008-12-24 | 2010-07-01 | Oncotherapy Science, Inc. | C1orf59 peptides and vaccines including the same |
| TW201102081A (en) * | 2009-05-11 | 2011-01-16 | Oncotherapy Science Inc | TTK peptides and vaccines including the same |
| US8703808B2 (en) | 2009-06-23 | 2014-04-22 | Centre National De La Recherche Scientifique | Use of derivatives of indoles for the treatment of cancer |
| EP2519542B1 (en) | 2009-12-28 | 2018-10-10 | OncoTherapy Science, Inc. | Anti-cdh3 antibodies and uses thereof |
| DK2547359T3 (en) * | 2010-03-15 | 2016-06-06 | The Board Of Trustees Of The Univ Of Illionis | Inhibitors of beta integrin G-protein alpha subunit-BINDING INTERACTIONS |
| TW201627003A (zh) | 2010-04-02 | 2016-08-01 | 腫瘤療法 科學股份有限公司 | Ｅｃｔ２胜肽及含此胜肽之疫苗 |
| SG10201509823WA (en) | 2010-12-02 | 2015-12-30 | Oncotherapy Science Inc | TOMM34 Peptides And Vaccines Including The Same |
| KR102355121B1 (ko) * | 2011-12-14 | 2022-02-09 | 더 보드 오브 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 | 암 요법을 위한 병립 유전자 비활성화 생물표식과 표적들 |
| US20150359864A1 (en) * | 2012-03-09 | 2015-12-17 | Oncotherapy Science, Inc. | Pharmaceutical composition containing peptides |
| EP2872531A4 (en) * | 2012-07-10 | 2016-04-06 | Oncotherapy Science Inc | LY6K EPITOPE PEPTIDES FOR TH1 CELLS AND VACCINES CONTAINING SAME |
| US9561265B2 (en) * | 2012-07-10 | 2017-02-07 | Oncotherapy Science, Inc. | KIF20A epitope peptides for TH1 cells and vaccines containing the same |
| EP2891663B8 (en) | 2012-08-31 | 2018-04-04 | Vasculead Inc. | Psf1-derived peptide |
| RU2663350C2 (ru) | 2012-09-11 | 2018-08-03 | Онкотерапи Сайенс, Инк. | Пептиды ube2t и содержащие их вакцины |
| WO2014141652A1 (en) * | 2013-03-11 | 2014-09-18 | Oncotherapy Science, Inc. | Smyd3 peptides and vaccines containing the same |
| TWI658049B (zh) * | 2013-03-12 | 2019-05-01 | 腫瘤療法 科學股份有限公司 | Ｋｎｔｃ２胜肽及含此胜肽之疫苗 |
| US20160166666A1 (en) * | 2013-07-12 | 2016-06-16 | Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. | Tumor antigen peptide |
| JP2015227292A (ja) * | 2014-05-30 | 2015-12-17 | 国立大学法人高知大学 | 膵がん細胞浸潤転移抑制ワクチン |
| JP2017520575A (ja) | 2014-07-01 | 2017-07-27 | ファイザー・インク | 二重特異的ヘテロ二量体ダイアボディおよびその使用 |
| CN106795204B (zh) * | 2014-08-04 | 2021-09-28 | 肿瘤疗法科学股份有限公司 | Urlc10衍生的肽和含有它们的疫苗 |
| GB201507719D0 (en) * | 2015-05-06 | 2015-06-17 | Immatics Biotechnologies Gmbh | Novel peptides and combination of peptides and scaffolds thereof for use in immunotherapy against colorectal carcinoma (CRC) and other cancers |
| CN104975082B (zh) * | 2015-06-05 | 2018-11-02 | 复旦大学附属肿瘤医院 | 一组用于评估肺癌预后的基因及其应用 |
| KR20180129899A (ko) * | 2016-03-31 | 2018-12-05 | 네온 테라퓨틱스, 인크. | 신생항원 및 이것의 사용 방법 |
| CN110214144B (zh) * | 2016-11-16 | 2023-05-02 | 深圳华大生命科学研究院 | 多肽及其应用 |
| HRP20220605T1 (hr) | 2017-01-25 | 2022-07-08 | Ose Immunotherapeutics | Postupak za proizvodnju stabilne emulzije za isporuku peptida |
| EP3601539A4 (en) * | 2017-03-28 | 2021-01-13 | Zhenglun Zhu | METHODS OF TREATING NEOPLASIC DISEASES |
| JP7364237B2 (ja) * | 2017-08-10 | 2023-10-18 | グッド ティー セルズ、 インコーポレイテッド | 癌治療のためのｔ細胞の活性化方法 |
| JP6857930B2 (ja) * | 2018-02-15 | 2021-04-14 | 国立大学法人旭川医科大学 | がん抗原ペプチド |
| KR102335916B1 (ko) * | 2019-04-22 | 2021-12-08 | 한국과학기술연구원 | 인간 백혈구 항원 a02:01 대립유전자에 특이적으로 결합하는 펩타이드 및 이의 용도 |
| KR102322832B1 (ko) * | 2019-04-22 | 2021-11-12 | 한국과학기술연구원 | 인간 백혈구 항원 a24:02 대립유전자에 특이적으로 결합하는 펩타이드 및 이의 용도 |
Family Cites Families (60)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4722848A (en) | 1982-12-08 | 1988-02-02 | Health Research, Incorporated | Method for immunizing animals with synthetically modified vaccinia virus |
| NZ231899A (en) * | 1985-10-03 | 1991-07-26 | Genentech Inc | Human or porcine inhibin peptide compositions and dna encoding them |
| US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
| IL103928A0 (en) * | 1991-12-11 | 1993-04-04 | American Home Prod | Expression of specific immunogens using viral antigens |
| US5679647A (en) | 1993-08-26 | 1997-10-21 | The Regents Of The University Of California | Methods and devices for immunizing a host against tumor-associated antigens through administration of naked polynucleotides which encode tumor-associated antigenic peptides |
| US5804566A (en) | 1993-08-26 | 1998-09-08 | The Regents Of The University Of California | Methods and devices for immunizing a host through administration of naked polynucleotides with encode allergenic peptides |
| US5739118A (en) | 1994-04-01 | 1998-04-14 | Apollon, Inc. | Compositions and methods for delivery of genetic material |
| WO1995028484A1 (en) * | 1994-04-15 | 1995-10-26 | Amgen Inc. | Hek5, hek7, hek8, hek11, new eph-like receptor protein tyrosine kinases |
| US5736524A (en) | 1994-11-14 | 1998-04-07 | Merck & Co.,. Inc. | Polynucleotide tuberculosis vaccine |
| US5922687A (en) | 1995-05-04 | 1999-07-13 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Intracellular delivery of nucleic acids using pressure |
| US20030198642A1 (en) | 1995-08-03 | 2003-10-23 | Johannes J. Geuze | Cell derived antigen presenting vesicles |
| US5853719A (en) | 1996-04-30 | 1998-12-29 | Duke University | Methods for treating cancers and pathogen infections using antigen-presenting cells loaded with RNA |
| WO1998004720A1 (en) | 1996-07-26 | 1998-02-05 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Method and reagents for genetic immunization |
| WO1998045433A1 (en) * | 1997-04-04 | 1998-10-15 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Proteins and compositions for modulating mitosis |
| FR2766205B1 (fr) | 1997-07-16 | 2002-08-30 | Inst Nat Sante Rech Med | Nouveau procede de sensibilisation de cellules presentatrices d'antigene et nouveaux moyens pour la mise en oeuvre du procede |
| EP1022286A4 (en) * | 1997-10-07 | 2003-04-09 | Ono Pharmaceutical Co | POLYPEPTIDES, FOR ENDING CODNA AND THEIR USE |
| US20070014787A1 (en) * | 1998-07-15 | 2007-01-18 | Human Genome Sciences, Inc. | 71 human secreted proteins |
| WO2001029221A2 (en) * | 1999-10-20 | 2001-04-26 | Zymogenetics, Inc. | Proteins and polynucleotides encoding them |
| US6682902B2 (en) * | 1999-12-16 | 2004-01-27 | Schering Aktiengesellschaft | DNA encoding a novel RG1 polypeptide |
| US20030013649A1 (en) * | 2000-01-31 | 2003-01-16 | Rosen Craig A. | Nucleic acids, proteins, and antibodies |
| CN1469926A (zh) * | 2000-03-29 | 2004-01-21 | 科里克萨有限公司 | 治疗和诊断肺癌的组合物和方法 |
| WO2002008262A2 (en) * | 2000-07-26 | 2002-01-31 | Stanford University | Bstp-5 proteins and related reagents and methods of use thereof |
| US6830885B1 (en) * | 2000-08-18 | 2004-12-14 | Phenogene Therapeutiques Inc. | Nucleic acid molecule, method and kit for selecting a nucleic acid having a desired feature |
| US20090062512A1 (en) * | 2000-10-10 | 2009-03-05 | Hildebrand William H | Comparative ligand mapping from MHC class I positive cells |
| US7919467B2 (en) * | 2000-12-04 | 2011-04-05 | Immunotope, Inc. | Cytotoxic T-lymphocyte-inducing immunogens for prevention, treatment, and diagnosis of cancer |
| CN100400099C (zh) * | 2001-01-04 | 2008-07-09 | 北京迪威华宇生物技术有限公司 | 预防和治疗人前列腺癌的重组蛋白疫苗 |
| AU2002311787A1 (en) * | 2001-03-28 | 2002-10-15 | Zycos Inc. | Translational profiling |
| AU2002309583A1 (en) * | 2001-04-18 | 2002-11-05 | Protein Desing Labs, Inc. | Methods of diagnosis of lung cancer, compositions and methods of screening for modulators of lung cancer |
| JP2005508144A (ja) * | 2001-06-18 | 2005-03-31 | イオス バイオテクノロジー，インコーポレイティド | 卵巣癌の診断方法、卵巣癌のモジュレーターをスクリーニングする組成物及び方法 |
| US20030124579A1 (en) * | 2001-09-05 | 2003-07-03 | Eos Biotechnology, Inc. | Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer |
| EP1487857A4 (en) * | 2002-03-07 | 2006-08-09 | Ludwig Inst Cancer Res | BLOOD AND LYMPHATIC ENDOTHELIAL CELL GENES |
| US20030194704A1 (en) * | 2002-04-03 | 2003-10-16 | Penn Sharron Gaynor | Human genome-derived single exon nucleic acid probes useful for gene expression analysis two |
| US20070015271A1 (en) * | 2002-04-04 | 2007-01-18 | Rosen Craig A | Human secreted proteins |
| US20070224201A1 (en) * | 2002-10-02 | 2007-09-27 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
| EP1572736A2 (en) * | 2002-12-10 | 2005-09-14 | Endocube SAS | Thap proteins as nuclear receptors for chemokines and roles in transcriptional regulation, cell proliferation and cell differentiation |
| JP2006517788A (ja) * | 2002-12-20 | 2006-08-03 | ミレニアム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | １５９８６、２１８８、２０７４３、９１４８、９１５１、９７９１、４４２５２、１４１８４、４２４６１、８２０４、７９７０、２５５５２、２１６５７、２６４９２、２４１１、１５０８８、１９０５、２８８９９、６３３８０、３３９３５、１０４８０、１２６８６、２５５０１、１７６９４、１５７０１、５３０６２、４９９０８、２１６１２、３８９４９、６２１６、４６８６３、９２３５、２２０１、６９８５、９８８３、１２２３８、１８０５７、２１６１７、３９２２８、４９９２８、５４４７６、６２１１３、６４３１６、１２２６４、３２３６２、５８１９８、２８８７、３２０５、８５５７、９６００、９６９３、４４８６７、５３０５８、５５５５６、５７６５８、２２０８、１０２５２、１０３０２、１４２１８、３３８７７、１０３１７、１０４８５、２５９６４、１４８１５、１３６３、１３９７、１４８２７、２１７０８、３８０１、６４６９８、２１７９または１３２４９を使用する癌を処置するための方法および組成物 |
| TWI324608B (en) * | 2003-02-28 | 2010-05-11 | Oncotherapy Science Inc | Genes and polypeptides relating to human colorectal cancers |
| EP1651775A2 (en) * | 2003-06-18 | 2006-05-03 | Arcturus Bioscience, Inc. | Breast cancer survival and recurrence |
| WO2005019258A2 (en) * | 2003-08-11 | 2005-03-03 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
| WO2005019475A2 (en) * | 2003-08-20 | 2005-03-03 | Oncotherapy Science, Inc. | Hypoxia-inducible protein 2 (hig2), a novel therapeutic potential target of renal cell carcinoma (rcc) |
| WO2005083086A2 (en) * | 2004-02-27 | 2005-09-09 | Oncotherapy Science, Inc. | Epha4 as therapeutic target of prc and pdaca |
| EP2520652B1 (en) * | 2004-04-09 | 2015-06-10 | Genecare Research Institute Co., Ltd | Cancer cell-specific apoptosis-inducing agents that target chromosome stabilization-associates genes |
| CA2566506A1 (en) * | 2004-06-01 | 2005-12-15 | Innogenetics N.V. | Peptides for inducing a ctl and/or htl response to hepatitis c virus |
| WO2006031221A1 (en) | 2004-09-13 | 2006-03-23 | Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Compositions comprising t cell receptors and methods of use thereof |
| CN100381460C (zh) * | 2004-11-30 | 2008-04-16 | 北京市肿瘤防治研究所 | Her-2模拟抗原表位及含有该表位的肽 |
| KR20080003321A (ko) * | 2005-02-24 | 2008-01-07 | 세미네스 인코퍼레이티드 | 생물학적 샘플을 분류하는 조성물 및 방법 |
| ES2459492T3 (es) * | 2005-02-25 | 2014-05-09 | Oncotherapy Science, Inc. | Vacunas de péptidos para cánceres de pulmón que expresan polipéptidos TTK, URLC10 o KOC1 |
| CN100348614C (zh) * | 2005-06-03 | 2007-11-14 | 北京大学 | 一种肝癌－睾丸特异性抗原蛋白质和抗原肽 |
| US8053556B2 (en) * | 2005-08-09 | 2011-11-08 | Oncotherapy Science, Inc. | Glypican-3 (GPC3)-derived tumor rejection antigenic peptides useful for HLA-A2-positive patients and pharmaceutical comprising the same |
| EP1930427B1 (en) * | 2005-08-09 | 2012-04-11 | Kurume University | Squamous cell carcinoma antigen-derived peptide binding to hla-a24 molecule |
| WO2007032255A1 (ja) | 2005-09-13 | 2007-03-22 | Mie University | Ｔ細胞レセプター及び該レセプターをコードする核酸 |
| US20090263832A1 (en) * | 2005-11-30 | 2009-10-22 | Roberto Polakiewicz | Reagents for the Detection of Protein Phosphorylation in Leukemia Signaling Pathways |
| US7695928B2 (en) * | 2006-04-10 | 2010-04-13 | Genentech, Inc. | Disheveled PDZ modulators |
| EP2030984B1 (en) * | 2006-06-16 | 2011-05-11 | Onco Therapy Science, Inc. | Sparc-derived cancer rejection antigen peptide and pharmaceutical comprising the same |
| EP1972639A3 (en) * | 2007-03-07 | 2008-12-03 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in carcinoma signaling pathways |
| EP1983003A3 (en) * | 2007-04-19 | 2009-03-11 | Peter Hornbeck | Tyrosine phosphorylation sites and antibodies specific for them |
| BRPI0816236A2 (pt) * | 2007-08-20 | 2015-08-18 | Oncotherapy Science Inc | Peptídeo cdh3 e agente medicinal contendo o mesmo |
| EP2080812A1 (en) * | 2008-01-18 | 2009-07-22 | Transmedi SA | Compositions and methods of detecting post-stop peptides |
| TWI543767B (zh) * | 2008-08-19 | 2016-08-01 | 腫瘤療法 科學股份有限公司 | Ｈｉｇ２與ｕｒｌｃ１０抗原決定位胜肽以及含此胜肽之疫苗 |
| WO2011039289A1 (de) * | 2009-09-29 | 2011-04-07 | Protagen Ag | Markersequenzen für pankreaskrebserkrankungen, pankreaskarzinom und deren verwendung |
-
2008
- 2008-02-18 TW TW105108412A patent/TWI615403B/zh active
- 2008-02-18 TW TW097105594A patent/TWI438207B/zh not_active IP Right Cessation
- 2008-02-18 TW TW104120673A patent/TWI596109B/zh not_active IP Right Cessation
- 2008-02-18 TW TW103107156A patent/TWI610939B/zh active
- 2008-02-18 TW TW103114624A patent/TWI494319B/zh not_active IP Right Cessation
- 2008-02-21 KR KR1020167010159A patent/KR20160045939A/ko not_active Application Discontinuation
- 2008-02-21 ES ES12151722.1T patent/ES2540893T3/es active Active
- 2008-02-21 SI SI200831368T patent/SI2476694T1/sl unknown
- 2008-02-21 WO PCT/JP2008/000290 patent/WO2008102557A1/en active Application Filing
- 2008-02-21 SI SI200831332T patent/SI2465864T1/sl unknown
- 2008-02-21 PL PL12151711T patent/PL2465864T3/pl unknown
- 2008-02-21 KR KR1020157002221A patent/KR101644877B1/ko active IP Right Grant
- 2008-02-21 EP EP12175483.2A patent/EP2570430A3/en not_active Withdrawn
- 2008-02-21 PL PL12151717T patent/PL2476694T3/pl unknown
- 2008-02-21 PT PT87104436T patent/PT2121731E/pt unknown
- 2008-02-21 SI SI200831053T patent/SI2121731T1/sl unknown
- 2008-02-21 KR KR1020097019583A patent/KR101511134B1/ko active IP Right Grant
- 2008-02-21 EP EP12175489.9A patent/EP2594582A3/en not_active Withdrawn
- 2008-02-21 EP EP12151717.1A patent/EP2476694B1/en active Active
- 2008-02-21 DK DK12151717.1T patent/DK2476694T3/en active
- 2008-02-21 NZ NZ579768A patent/NZ579768A/en not_active IP Right Cessation
- 2008-02-21 MX MX2009009022A patent/MX2009009022A/es active IP Right Grant
- 2008-02-21 EP EP12151711.4A patent/EP2465864B1/en not_active Not-in-force
- 2008-02-21 EP EP12175480.8A patent/EP2567971A3/en not_active Withdrawn
- 2008-02-21 CN CN200880012937.3A patent/CN101663315B/zh active Active
- 2008-02-21 MY MYPI2012004306A patent/MY173379A/en unknown
- 2008-02-21 KR KR1020157026286A patent/KR20150116463A/ko active IP Right Grant
- 2008-02-21 EP EP08710443.6A patent/EP2121731B1/en active Active
- 2008-02-21 JP JP2009534784A patent/JP5239103B2/ja active Active
- 2008-02-21 CN CN201410449753.0A patent/CN104292299B/zh active Active
- 2008-02-21 NZ NZ602122A patent/NZ602122A/en not_active IP Right Cessation
- 2008-02-21 CA CA2919248A patent/CA2919248A1/en not_active Abandoned
- 2008-02-21 CA CA2678755A patent/CA2678755C/en active Active
- 2008-02-21 EP EP12151714.8A patent/EP2476693B1/en active Active
- 2008-02-21 CA CA2992074A patent/CA2992074C/en active Active
- 2008-02-21 SG SG10201909675Q patent/SG10201909675QA/en unknown
- 2008-02-21 MY MYPI20093446A patent/MY155029A/en unknown
- 2008-02-21 EP EP12151723A patent/EP2476695A3/en not_active Withdrawn
- 2008-02-21 ES ES08710443T patent/ES2435194T3/es active Active
- 2008-02-21 MX MX2013009906A patent/MX337417B/es unknown
- 2008-02-21 AU AU2008218463A patent/AU2008218463B2/en active Active
- 2008-02-21 ES ES12151711.4T patent/ES2527397T3/es active Active
- 2008-02-21 SG SG2012012126A patent/SG179402A1/en unknown
- 2008-02-21 EP EP12175488.1A patent/EP2583976A3/en not_active Withdrawn
- 2008-02-21 EP EP12151719.7A patent/EP2465865B1/en not_active Not-in-force
- 2008-02-21 EP EP12175478A patent/EP2565203A1/en not_active Withdrawn
- 2008-02-21 UA UAA200909469A patent/UA100372C2/ru unknown
- 2008-02-21 DK DK08710443.6T patent/DK2121731T3/da active
- 2008-02-21 EP EP12175484.0A patent/EP2594581A3/en not_active Withdrawn
- 2008-02-21 CN CN201210352621.7A patent/CN102863514B/zh active Active
- 2008-02-21 DK DK12151711.4T patent/DK2465864T3/en active
- 2008-02-21 KR KR1020147026728A patent/KR101543623B1/ko active IP Right Grant
- 2008-02-21 EP EP12151705.6A patent/EP2476692B1/en not_active Not-in-force
- 2008-02-21 NZ NZ602119A patent/NZ602119A/en not_active IP Right Cessation
- 2008-02-21 ES ES12151717T patent/ES2530777T3/es active Active
- 2008-02-21 ES ES12151705.6T patent/ES2541863T3/es active Active
- 2008-02-21 EP EP12175487.3A patent/EP2573110A3/en not_active Withdrawn
- 2008-02-21 BR BRPI0808421-1A patent/BRPI0808421B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-02-21 EP EP12151722.1A patent/EP2465867B1/en active Active
- 2008-02-21 EP EP12175479.0A patent/EP2573109A3/en not_active Withdrawn
- 2008-02-21 AR ARP080100718A patent/AR068302A1/es unknown
- 2008-02-21 EP EP12151720A patent/EP2465866A3/en not_active Withdrawn
- 2008-02-21 MX MX2016002567A patent/MX359680B/es unknown
- 2008-02-21 PT PT121517114T patent/PT2465864E/pt unknown
- 2008-02-21 SG SG10201506589WA patent/SG10201506589WA/en unknown
- 2008-02-21 EP EP12175490.7A patent/EP2574623A3/en not_active Withdrawn
- 2008-02-21 KR KR1020137004417A patent/KR101511140B1/ko active IP Right Grant
- 2008-02-21 MX MX2013009905A patent/MX337456B/es unknown
- 2008-02-21 EP EP12175481.6A patent/EP2570428A3/en not_active Withdrawn
- 2008-02-21 KR KR1020157013656A patent/KR101644871B1/ko active IP Right Grant
- 2008-02-21 PL PL08710443T patent/PL2121731T3/pl unknown
- 2008-02-21 ES ES12151714.8T patent/ES2532708T3/es active Active
- 2008-02-21 EP EP12175482.4A patent/EP2570429A3/en not_active Withdrawn
- 2008-02-21 RU RU2009135020/10A patent/RU2464275C2/ru active
- 2008-02-21 CN CN201310183458.0A patent/CN103351423B/zh active Active
- 2008-02-21 NZ NZ591704A patent/NZ591704A/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-02-21 KR KR1020147026715A patent/KR101540000B1/ko active IP Right Grant
-
2009
- 2009-08-18 IL IL200478A patent/IL200478A/en active IP Right Grant
- 2009-08-25 ZA ZA200905881A patent/ZA200905881B/xx unknown
- 2009-09-21 CO CO09102283A patent/CO6190536A2/es not_active Application Discontinuation
-
2010
- 2010-02-02 JP JP2010021234A patent/JP5239104B2/ja active Active
- 2010-03-10 HK HK12112899.3A patent/HK1172043A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2010-03-10 HK HK12112988.5A patent/HK1172345A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2010-03-10 HK HK12112897.5A patent/HK1172041A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2010-03-10 HK HK12112989A patent/HK1172346A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2010-03-10 HK HK10102517.8A patent/HK1134507A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2010-03-10 HK HK12112898.4A patent/HK1172042A1/zh not_active IP Right Cessation
- 2010-03-10 HK HK12112987.6A patent/HK1172344A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2012
- 2012-04-04 IL IL219043A patent/IL219043A/en not_active IP Right Cessation
- 2012-04-04 IL IL219044A patent/IL219044A/en active IP Right Grant
- 2012-04-04 IL IL219047A patent/IL219047A0/en unknown
- 2012-04-04 IL IL219045A patent/IL219045A0/en unknown
- 2012-04-04 IL IL219046A patent/IL219046A/en not_active IP Right Cessation
- 2012-04-04 IL IL219042A patent/IL219042A/en not_active IP Right Cessation
- 2012-04-04 IL IL219040A patent/IL219040A/en active IP Right Grant
- 2012-04-04 IL IL219041A patent/IL219041A/en not_active IP Right Cessation
- 2012-04-04 IL IL219048A patent/IL219048A/en not_active IP Right Cessation
- 2012-11-29 JP JP2012260412A patent/JP5614761B2/ja active Active
- 2012-11-29 JP JP2012260421A patent/JP5608953B2/ja active Active
-
2013
- 2013-11-05 HR HRP20131044AT patent/HRP20131044T1/hr unknown
- 2013-11-08 CY CY20131100994T patent/CY1114590T1/el unknown
-
2014
- 2014-07-17 PH PH12014501642A patent/PH12014501642B1/en unknown
- 2014-07-24 JP JP2014150295A patent/JP5874158B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2014-12-17 HR HRP20141233AT patent/HRP20141233T1/hr unknown
- 2014-12-18 CY CY20141101067T patent/CY1115841T1/el unknown
-
2015
- 2015-01-28 HR HRP20150108TT patent/HRP20150108T1/hr unknown
- 2015-12-25 JP JP2015252737A patent/JP2016094459A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9545437B2 (en) | Peptide vaccines for cancers expressing MPHOSPH1 or DEPDC1 polypeptides | |
| BRPI0808421B1 (pt) | Composição farmacêutica para tratar câncer, exossomo, uso de um peptídeo, métodos in vitro para induzir uma célula apresentando antígeno que têm uma alta inducibilidade de célula t citotóxica ou para induzir células t citotóxicas e vacina para inibir a proliferação de uma célula | |
| AU2012261725B2 (en) | Peptide vaccines for cancers expressing tumor-associated antigens | |
| BR122020021065B1 (pt) | Composição farmacêutica e vacina à base de peptídeos para antígenos associados a tumores expressando câncer, exossomo, método in vitro para induzir células apresentando antígeno que têm uma alta inducibilidade de célula t citotóxica e uso de um peptídeo |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B06F | Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette] | ||
| B07D | Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette] | ||
| B07E | Notification of approval relating to section 229 industrial property law [chapter 7.5 patent gazette] | ||
| B06U | Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette] | ||
| B06A | Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette] | ||
| B06F | Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette] | ||
| B09A | Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette] | ||
| B16A | Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette] |
Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 21/02/2008, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. PATENTE CONCEDIDA CONFORME ADI 5.529/DF, QUE DETERMINA A ALTERACAO DO PRAZO DE CONCESSAO. |
|
| B21F | Lapse acc. art. 78, item iv - on non-payment of the annual fees in time |
Free format text: REFERENTE A 16A ANUIDADE. |
|
| B24J | Lapse because of non-payment of annual fees (definitively: art 78 iv lpi, resolution 113/2013 art. 12) |
Free format text: EM VIRTUDE DA EXTINCAO PUBLICADA NA RPI 2762 DE 12-12-2023 E CONSIDERANDO AUSENCIA DE MANIFESTACAO DENTRO DOS PRAZOS LEGAIS, INFORMO QUE CABE SER MANTIDA A EXTINCAO DA PATENTE E SEUS CERTIFICADOS, CONFORME O DISPOSTO NO ARTIGO 12, DA RESOLUCAO 113/2013. |