ES2531926T3 - Ligandos de proteínas priones y procedimientos de uso - Google Patents
Ligandos de proteínas priones y procedimientos de uso Download PDFInfo
- Publication number
- ES2531926T3 ES2531926T3 ES10176707.7T ES10176707T ES2531926T3 ES 2531926 T3 ES2531926 T3 ES 2531926T3 ES 10176707 T ES10176707 T ES 10176707T ES 2531926 T3 ES2531926 T3 ES 2531926T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- seq
- ligands
- huprpsc
- bind
- beads
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000003446 ligand Substances 0.000 title abstract description 65
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 title abstract description 39
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 title abstract description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 10
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 13
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 abstract description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 5
- 241000894007 species Species 0.000 abstract description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 abstract 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 abstract 1
- 230000000979 retarding effect Effects 0.000 abstract 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 56
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 42
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 42
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 36
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 35
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 28
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 24
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 24
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 22
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 15
- 239000011049 pearl Substances 0.000 description 11
- -1 aromatic amino acid Chemical class 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 101710138751 Major prion protein Proteins 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 6
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 6
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 5
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 208000002704 Sporadic Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 3
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- 239000012707 chemical precursor Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 125000001909 leucine group Chemical class [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-1-ylamino)propanoic acid Chemical class C1=CC=C2C(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=CC2=C1 IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- RWLSBXBFZHDHHX-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=C21 RWLSBXBFZHDHHX-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000573901 Homo sapiens Major prion protein Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 229920003180 amino resin Polymers 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102100034452 Alternative prion protein Human genes 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 208000020406 Creutzfeldt Jacob disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010859 Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229920005601 base polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000005710 macrocyclization reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 208000008864 scrapie Diseases 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/081—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0819—Tripeptides with the first amino acid being acidic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
- G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
- G01N2800/2828—Prion diseases
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Un procedimiento ex vivo de detección de una proteína prión en una muestra, que comprende: poner en contacto la muestra con un ligando que se puede unir a una o más proteínas priones, un fragmento de las mismas, o un péptido derivado de las mismas, en condiciones suficientes para provocar la formación de un complejo entre la proteína prión, el fragmento de la misma, o el péptido derivado de la misma y el ligando; donde el ligando es un péptido que tiene una secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 114 y un peso molecular inferior a 6 kDa; y detectar el complejo en la muestra.
Description
E10176707
11-03-2015
- 29
- KLGWG(A/G)A
- 30
- GSKKKEA
Las secuencias de aminoácidos expuestas en la tabla 4 siguiente (SEC ID N.º: 31-47) son ejemplos de secuencias de aminoácidos que se unen a la SEC ID N.º: 4. Las secuencias de aminoácidos expuestas en la tabla 4 se identificaron en una colección 6-mera rastreada para 6-meros que se unen a la SEC ID N.º: 4. La colección se construyó con una 5 alanina (A) como espaciador entre la resina y los péptidos combinatorios de la colección y está representada como la A final en las secuencias. Los expertos en la técnica entenderán que los ligandos proporcionados en el presente documento no se limitan a aquellos que tienen las secuencias ejemplares expuestas en esta tabla 4. En los casos de ambigüedad en la identificación de la secuencia, se dan uno o más aminoácidos en una única posición, por ejemplo, (W/G) como se demuestra en la SEC ID N.º: 33. El aminoácido en la segunda posición de la SEC ID N.º: 37 no se pudo 10 identificar positivamente. La secuencia "LL" (dos leucinas) aparece en las SEC ID N.º: 31, 32, 41, 43 y 45 y sus análogos cercanos LI, VL, II (isoleucina o valina) aparecen en las SEC ID N.º: 33, 36, 38, 40 y 44. LL no aparece en ningún otro rastreo para péptidos derivados de priones o proteínas. Además, 15 de 17 péptidos contienen un aminoácido aromático, tal como fenilalanina, triptófano o tirosina (F, W o Y). Siete secuencias peptídicas tienen carga neutra, pero tienen un grupo amino terminal positivo. Por lo tanto, son preferentes seis-meros que contienen una o más
15 leucinas (L) o análogos de leucina tales como isoleucina o valina (I o V) en la secuencia, preferentemente LL, LI, VL o II; seis-meros que contienen un aminoácido aromático tal como fenilalanina, triptófano o tirosina (F, W o Y); y seis-meros que tienen carga neutra, pero tienen un grupo amino terminal positivo.
Tabla 4 20 Secuencias de seis aminoácidos que se unen a la SEC ID N.º: 4
- SEC ID N.º
- SECUENCIA
- 31
- PLLVVWA
- 32
- WLLVGGA
- 33
- (W/G)QVLVYA
- 34
- RRHQRQA
- 35
- LPWTFGA
- 36
- IFIIITA
- 37
- P(X)IEPHA
- 38
- EWGIIWA
- 39
- GWYIYFA
- 40
- TLILFHA
- 41
- FLLSNHA
- 42
- WQIRFFA
- 43
- VLLVFEA
- 44
- GWVLEIA
- 45
- FLLIDTA
- 46
- GFLFKFA
- 47
- PWTIYIA
Ligandos que se unen a PrPc de hámster
El ligando es un péptido que se une con especificidad y selectividad a una o más formas de proteínas priones
25 encontradas en una especie particular, tales como un ser humano u otro mamífero, tal como un hámster. A continuación se proporcionan ligandos ejemplares que se unen a proteína prión (PrPc), que tienen diferentes longitudes de secuencia de aminoácidos, dos-mera, tres-mera, cuatro-mera, cinco-mera y seis-mera, tienen preferentemente un peso molecular de 6 kDa o menos.
30 Ligandos dos-meros ejemplares que se unen a prion natural en hámsteres (haPrPc) se exponen en las SEC ID N.º: 48-50, que se enumeran en la tabla 5A. El ligando contiene el aminoácido triptófano (W). El ligando está cargado neutralmente, pero tiene un grupo amino terminal con carga positiva a pH 7. El ligando es un dos-mero que contiene el triptófano (W). La sustitución de naftil-alanina (na) por triptófano también da como resultado la unión de PrP en estas secuencias. La colección se sintetizó directamente sobre la resina (una resina amino ToyopearlTM de Tosoh Bioscience
E10176707
11-03-2015
- 65
- LQWYDA
- 66
- YTHSEA
- 67
- WIDYEA
- 68
- VWIDAA
Ligandos seis-meros ejemplares que se unen a prion natural en hámsteres (haPrPc) se exponen en las SEC ID N.º:
69-100, que se enumeran en la tabla 5E. La colección se construyó con un espaciador de alanina entre la resina y el
péptido combinatorio y está presente en las secuencias siguientes en la última posición. Un aminoácido aromático, F,
5 W o Y aparece en la mayoría (29 de 32) de los péptidos seleccionados como ocurre con D o E (29 de 32). Además, 20
péptidos tienen dos aminoácidos aromáticos en su secuencia. El secuencia consenso "WXD" aparece en las SEC ID
N.º: 75, 79, 83, 86 y 89. Una secuencia que contiene una (F/W/Y)X(D/E)(F/W/Y) SEC ID N.º: )) aparece en las SEC ID
N.º: 71, 73, 77, 78, 91 y 95 y (F/W/Y)(D/E)X(F/W/Y) SEC ID N.º: )) aparece en las SEC ID N.º: 70, 72, 82, 91 y 95.
Veinticuatro de los 32 péptidos tienen un aminoácido aromático más un grupo ácido en las posiciones 1-3; 23 tienen 10 una carga negativa neta en las posiciones 4-6. Veinte péptidos tienen tanto un aminoácido aromático más como un
aminoácido ácido en las posiciones 1-3 y también son de carga negativa neta en las posiciones 4-6.
Tabla 5E
Secuencias de seis aminoácidos que se unen a haPrPc
- SEC ID N.º
- SECUENCIA
- 69
- WDEAEEA
- 70
- YDSYDDA
- 71
- NDFIDFA
- 72
- YEPWGSA
- 73
- EYGDWWA
- 74
- WDYDQEA
- 75
- DWGDPFA
- 76
- DWPEVWA
- 77
- FHDFSEA
- 78
- DTFWDYA
- 79
- WNDLDNA
- 80
- ASALVYA
- 81
- LINAGGA
- 82
- WESYVTA
- 83
- WSDEGYA
- 84
- YRWTGPA
- 85
- YEDQWQA
- 86
- EWADDNA
- 87
- YEIDYGA
- 88
- EFGYFDA
- 89
- WGDEQDA
- 90
- HEEDWAA
- 91
- FEDFELA
- 92
- TWGIDEA
- 93
- WDPTDYA
- 94
- NDKIHTA
- 95
- FEDFFSA
E10176707
11-03-2015
- 96
- YEWAEQA
- 97
- THVYFLA
- 98
- (S/T/W)XDFSDA
- 99
- YRTPNEA
- 100
- (G/L)RSETA
Ligandos que se unen a PrPc de hámster y PrPsc de hámster
A continuación se proporcionan ligandos que se unen tanto a la proteína prión (PrPc) como a la (PrPsc) cambiada
5 conformacionalmente. Ligandos tres-meros ejemplares que se unen a prion en hámsteres (haPrPc) se exponen en las SEC ID N.º: 101-115, que se enumeran en la tabla 6. Un aminoácido aromático aparece en la mayoría (15 de 18) de los péptidos seleccionados como ocurre con D o E (15 de 18). Además, siete péptidos tienen dos estructuras aromáticas y un aminoácido ácido. La secuencia WXD aparece en las SEC ID N.º: 105 y 115. Las estructuras seleccionadas para unirse de forma preferente a PrPsc sobre PrPc son las SEC ID N.º: 111 y SEC ID N.º: 114, teniendo ambas R en la
10 posición 3. SEC ID N.º: 101-115 se identificaron en una colección 3-mera porque se unen a haPrPc y/o PrPsc a partir de homogeneizado cerebral infectado de tembladera solos (*), o bien mezclados con cerebro de hámster normal.
Tabla 6 Secuencias de tres aminoácidos que se unen a haPrPc y a haPrPsc
- SEC ID N.º
- Secuencia Color de la perla (rojo muestra unión a PrPc fuerte) Señal lumínica tras desnaturalización (fuerte muestra fuerte unión a PrPc y/o PrPsc)
- 52
- EFW* Rosa brillante Fuerte
- 54
- YEY Rosa
- 101
- IHN Rosa claro
- 102
- WEY Rosa brillante
- 103
- DYW Rosa
- 104
- WDW Rosa
- 105
- WQD Rosa
- 106
- YFE Rosa
- 106
- YFE* Rojo Fuerte
- 107
- NYE Rosa
- 108
- SYA Rosa claro Ninguno
- 109
- WDL Rosa brillante Fuerte
- 110
- WLE Rosa brillante Débil
- 111
- VQR Rosa brillante Muy fuerte
- 112
- YID* Rosa brillante Fuerte
- 113
- RWD* Rosa brillante Fuerte
- 114
- DVR* Blanco Fuerte
- 115
- WSD* Rojo Fuerte
15 Ligandos que se unen a PrPc humana
A continuación se proporcionan ligandos que se unen a proteína prión (huPrPc). Ligandos tres-meros ejemplares que se unen a prión en humanos (haPrPc) se exponen en las SEC ID N.º: 116-139, que se enumeran en las tablas 7 A y B. 20 De las secuencias trímeras (tabla 7A) W/YXD aparece en cuatro de las seis secuencias trímeras y cinco de las seis tienen un residuo hidrófobo y un aminoácido ácido.
Tabla 7A Secuencias de tres aminoácidos que se unen a huPrPc
E10176707
11-03-2015
- 116
- HWD
- 117
- WQD
- 118
- WDD
- 119
- WED
- 120
- ITN
- 121
- YED
La colección seis-mera se construyó con un espaciador de alanina entre la resina y el péptido combinatorio y está
presente en las secuencias siguientes en la última posición (tabla 7B). Los aminoácidos F, W o Y aparecen en 13 de
los 18 péptidos 6-meros, y D o E en 17 de los 18 péptidos. Seis péptidos tienen un aminoácido aromático y uno ácido
5 en las posiciones 1-3 y también son de carga negativa neta en las posiciones 4-6. Además, cinco péptidos tienen dos
estructuras aromáticas y un aminoácido ácido. WxD está presente en la SEQ ID N.º: 124 y (F/W/Y)x(D/E)(F/W/Y) (SEC
ID N.º: 223) está presente en las SEC ID N.º: 124 y 133. Excluyendo la carga de amino N-terminal, la mayoría de las
secuencias son de carga negativa neta y sólo la SEQ ID N.º: 139 lleva una carga positiva neta parcial a pH neutro. SEC
ID N.º: 116-121 se identificaron en una colección 3-mera que se une a huPrPc a partir de homogeneizado cerebral 10 humano normal. SEC ID N.º: 122-139 se identificaron en una colección 6-mera que se une a huPrPc derivado de
plasma pobre en plaquetas humanas o bien de plasma rico en plaquetas (*).
Tabla 7B
Secuencias de seis aminoácidos que se unen a huPrPc
- SEC ID N.º
- SECUENCIA
- 122
- RVADEEA
- 123
- EYYVDAA
- 124
- WQDFNLA
- 125
- YDNPIDA
- 126
- YFNEHEA
- 127
- EWGADGA
- 128
- DVIYSHA
- 129
- WHILEEA*
- 130
- NPHENFA*
- 131
- HEDNGGA
- 132
- SDSEGPA
- 133
- EFQEFTA
- 134
- QEGDEIA
- 135
- DIYAETA
- 136
- DRVRETA
- 137
- FEEPQWA*
- 138
- FEGEEFA*
- 139
- (T/L)FNIHA*
15 * huPrPc derivado de plasma rico en plaquetas unido
Ligandos que se unen a PrP recombinante humana
A continuación se proporcionan ligandos que se unen a proteína prión (PrPr). Ligandos tres-meros ejemplares que se
20 unen a prión recombinante en seres humanos (huPrPr) se exponen en las SEC ID N.º: 54, 105,140-153, que se enumeran en la tabla 8. Los aminoácidos W, F o Y aparecen en todos los 16 péptidos seleccionados y D o E en 13 de los 16 péptidos. La secuencia consenso WXD aparece en las SEC ID N.º: 105, 143 y 145. Algunos péptidos se han identificado previamente porque se unen a PrPc y las SEC ID N.º: 149 y 153 se identificaron dos veces en este rastreo. SEC ID N.º: 54 105, 140-153 se identificaron en una colección 3-mera porque se unen a huPrPr (Prionics AG, Suiza,
25 N.º de cat. 03-040) diluido en (*) sarcosilo al 0,5% o (**) PBS. En la tabla 8, se expusieron 2,5 mg de peso seco de resina de una colección combinatoria por columna a 0,5 µg/ml de PrPr diluido en sarcosilo al 0,5% (*) o en solución
E10176707
11-03-2015
salina tamponada con fosfato (**) que contiene BSA al 1%. Las secuencias que se encontraron dos veces en el rastreo se indican como 2x.
Tabla 8 Secuencias de tres aminoácidos que se unen a huPrPr
- SEC ID N.º
- SECUENCIA
- 54
- YEY**
- 105
- WQD* y **(2x)
- 140
- YDW*
- 141
- NYT*
- 142
- SYT*
- 143
- WAD*
- 144
- QWG*
- 145
- WGD*
- 146
- EYF*
- 147
- WEH*
- 148
- LYD*
- 149
- DYY**(2x)
- 150
- FYE**
- 151
- EYY**
- 152
- YDY**
- 153
- WDH** (2x)
(*)PrPr humana diluida en sarcosilo al 0,5%
(**)PrPr humana diluida en PBS
2x indica secuencias encontradas dos veces en el rastreo
10 Ligandos seis-meros que se unen a PrPc humana, PrPsc humana o a ambas
En la tabla 9A se proporcionan ligandos seis-meros que se unen a proteína prión (PrPc), proteína prión cambiada
conformacionalmente (PrPsc), o a ambas. La colección seis-mera se construyó con un espaciador de alanina entre la
resina y el péptido combinatorio y está presente en las secuencias siguientes en la última posición. Los ligandos se 15 pueden unir preferentemente a huPrPsc. Los ligandos ejemplares se exponen en las SEC ID N.º: 154-173, que se
enumeran en la tabla 9A. Todos los ligandos excepto la SEC ID N.º: 156 contenían un aminoácido aromático y 15 de
20 contenían un aminoácido ácido. Aquellos con mayor especificidad por huPrPsc sobre PrPc son las SEC ID N.º: 154,
155 y 156. La detección de ligandos con un incremento en la especificidad para PrPsc en un homogeneizado cerebral
procedente de un paciente de ECJ esporádica se obtuvo a través de proteolisis selectiva de PrPc antes de la 20 transferencia de proteína desde las perlas hasta la membrana. Esta colección incluía el aminoácido aromático no
natural 2-naftil-alanina (na).
Tabla 9A Secuencias de seis aminoácidos que se unen a huPrPc, huPrPsc o a ambas
- SEC ID N.º:
- Secuencia
- 154*
- RES(na)NVA
- 155*
- ES(na)PRQA
- 156*
- VARENIA
- 157*
- RWEREDA
- 158**
- EWWETV
- 159**
- SVYQLDA
- 160**
- (na)HEFYGA
- 161**
- HE(na)(na)LVA
E10176707
11-03-2015
- 162**
- A(na)VPV(na)A
- 163**
- YFDYWLA
- 164**
- FE(na)HRQA
- 165**
- WRHEPAA
- 166***
- SS(na)KKDA
- 167***
- R(na)DKEAA
- 168****
- (na)HEIFPA
- 169****
- KWYHHRA
- 170****
- HWWPHNA
- 171****
- HWQVFYA
- 172****
- FHE(na)EIA
- 173****
- HADF(na)QA
* homogeneizado cerebral (huPrPsc) de ECJ esporádica al 0,5% sin tratamiento con PK ** homogeneizado cerebral de huPrPsc al 5% sin tratamiento con PK *** homogeneizado cerebral de huPrPsc al 0,5% con tratamiento con PK, pero sin desarrollo de color **** homogeneizado cerebral de huPrPsc al 5% con tratamiento con PK, pero sin desarrollo de color
5 na indica 2-naftil-alanina
Ligandos que se unen a PrPsc humana
A continuación se proporcionan ligandos que se unen a proteína prión cambiada conformacionalmente (PrPsc). Las
10 colecciones seis-meras se construyeron con un espaciador de alanina entre la resina y el péptido combinatorio y se incluyen en las secuencias siguientes en la última posición. Ligandos ejemplares se exponen en las SEC ID N.º: 174-194, que se enumeran en la tabla 9B. SEC ID N.º: 188, 189, 190 y 191 mostraron todas la mayor diferenciación de señal (señal de color blanco y luz fuerte). SEC ID N.º: 174-194 se identificaron en una colección 6-mera que se une a huPrPsc a partir de homogeneizado cerebral de ECJ esporádica enriquecido en plasma humano. Las perlas con
15 ligandos con la mayor especificidad para PrPsc fueron blancas en la tinción para PrPc, pero produjeron una fuerte señal quimioluminiscente tras la desnaturalización.
Tabla 9B Secuencias de seis aminoácidos que se unen a huPrPsc
- SEC ID N.º
- Secuencia
- 174*
- ALHFETA
- 175*
- DDPTGFA
- 176*
- VAPGLGA
- 177*
- IFRLIEA
- 178*
- GLERPEA
- 179*
- IVVRLWA
- 180*
- WHNPHYA
- 181*
- LIYKSDA
- 182**
- EKPIFNA
- 183**
- HWSEPAA
- 184**
- GHNWKEA
- 185**
- YWHHDDA
- 186**
- GYPKENA
- 187**
- PVYWLYA
- 188***
- FGEHTPA
- 139***
- FQGTREA
E10176707
11-03-2015
- 190***
- TGTNRYA
- 191***
- KWATRYA
- 192***
- NSTKFDA
- 193***
- LIYKEEA
- 194***
- EHATYRA
* perlas de 100-300 µm rastreadas con homogeneizado cerebral derivado de cerebro con ECJ esporádica (huPrPsc) con tratamiento con PK ** perlas de 100-300 µm rastreadas con huPrPsc sin tratamiento con PK *** perlas de 65 µm rastreadas con huPrPsc sin tratamiento con PK
5 Ligandos tres-meros que se unen a PrPc humana, PrPsc humana o a ambas
A continuación se proporcionan ligandos tres-meros que se unen a proteína prión (huPrPc), proteína prión cambiada
conformacionalmente (PrPsc), o a ambas. Los ligandos se pueden unir de forma preferente a huPrPsc. Los ligandos 10 ejemplares se exponen en las SEC ID N.º: 195-212, que se enumeran en la tabla 9C. En este rastreo, el
homogeneizado cerebral de ECJ esporádica se diluyó en CPD y se usó como fuente de huPrPsc. HYD se descubrió 3
veces en este rastreo. Las perlas rojas significaron la unión de PrPc; 8 de 13 secuencias contenían H. Los aminoácidos
F, W o Y se encontraron en las 13, y R o K aparecieron sólo una vez. Tres de cinco perlas que unieron de forma
preferente PrPsc (señal fuerte) con relación a PrPc (perla blanca) contenían K o R. WXD apareció las en SEC ID N.º: 15 200 y 208. Las SEC ID N.º: 195-212 se identificaron en una colección 3-mera que se une a huPrPc y/o huPrPsc tratado
con PK.
Tabla 9C Secuencias de tres aminoácidos que se unen a huPrPc, huPrPsc o a ambas (resistente a PK)
- SEC ID N.º
- Secuencia
- 195*
- HND
- 196*
- HER
- 197*
- HGD
- 198*
- HSD
- 199*
- HFD
- 200****
- WND
- 201****
- YEH
- 202****
- HWD
- 203****
- YHD
- 204****
- YDW
- 205****
- WDY
- 206**
- HYD (3x)
- 207**
- HWD
- 208**
- WTD
- 209***
- FPK
- 210***
- HWK
- 211***
- WEE
- 212***
- LLR
20 * huPrPsc al 0,5% en sarcosilo al 0,05% más tratamiento PK ** huPrPsc al 1,0% en sarcosilo al 0,1% sin tratamiento con PK *** huPrPsc al 1,0% en sarcosilo al 0,1% con tratamiento con PK **** se seleccionaron perlas del gel antes de la transferencia; para las SEC ID N.º: 204 y 205, las perlas incubadas en huPrPsc al 0,1% en sarcosilo al 0,01% con tratamiento con PK se seleccionaron después del lavado y se tomaron
25 directamente del gel
Ligandos tres-meros que se unen a PrPc humana, PrPsc humana o a ambas
E10176707
11-03-2015
A continuación se proporcionan ligandos tres-meros que se unen a proteína prión (PrPc), proteína prión cambiada conformacionalmente (PrPsc), o a ambas. Los ligandos se pueden unir de forma preferente a huPrPsc. Los ligandos ejemplares se exponen en las SEC ID N.º: 147, 152, 206 213y 214, que se enumeran en la tabla 9D. Estas secuencias se identifican en una colección 3-mera que se une a huPrPsc y/o huPrPc a partir de homogeneizado cerebral de ECJ esporádica en (*) tampón CPD o (**) PBS.
Tabla 9D Secuencias de tres aminoácidos que se unen a huPrPc, huPrPsc o a ambas
- SEC ID N.º
- Secuencia
- 147*
- WEH
- 152*
- YDY
- 206*
- HYD
- 213**
- SYF
- 214**
- EYY
10 (*) homogeneizado cerebral de ECJ esporádica diluido en tampón CPD (**) homogeneizado cerebral de ECJ esporádica diluido en PBS
Síntesis de Ligandos
15 Los ligandos descritos en el presente documento se pueden producir por síntesis química. En la técnica son comunes una variedad de procedimientos de síntesis proteica, incluyendo la síntesis que usa un sintetizador de péptidos. Véase, por ejemplo, Peptide Chemistry, A Practical Textbook, Bodasnsky, Ed. Springer-Verlag, 1988; Merrifield, Science 232: 241-247 (1986). Preferentemente, los péptidos se sintetizan, se purifican y después se acoplan a una resina o una membrana usada para el rastreo. De forma alternativa, los péptidos se sintetizan directamente sobre una
20 resina, y los péptidos unidos a la resina entonces se purifican.
Los péptidos se purifican de modo que estén sustancialmente libres de precursores químicos o de otros productos químicos usados en técnicas de purificación de péptido convencionales. El lenguaje "sustancialmente libre de precursores químicos o de otros productos químicos" incluye preparaciones de un péptido en las que el péptido se
25 separa de precursores químicos o de otros productos químicos que están implicados en la síntesis del péptido.
La síntesis química de péptidos facilita la incorporación de aminoácidos modificados o no naturales, incluyendo aminoácidos D y otras moléculas orgánicas pequeñas. La sustitución de uno o más aminoácidos L en un péptido por la correspondiente isoforma de aminoácido D se puede usar para incrementar la resistencia de los péptidos a la hidrólisis 30 enzimática, y para potenciar una o más propiedades de los péptidos activos, tales como la unión a prion o ligando. El péptido prión y los ligandos péptidos descritos en el presente documento pueden ser polímeros de aminoácidos L-o D,
o una combinación de ambos. También se incluyen ligandos en los que análogos de los ligandos péptidos descritos en el presente documento están presentes en uniones no peptidilo.
35 Por ejemplo, en distintas realizaciones, los ligandos péptidos son péptidos de isómeros D-retro-inversos. El término "isómero retro-inverso" se refiere a un isómero de un péptido lineal en el que la dirección de la secuencia se revierte y la quiralidad de cada residuo aminoácido se invierte.
Véase, por ejemplo, Jameson y cols., Nature, 368: 744-746 (1994). El resultado neto de combinar D-enantiómeros y de
40 revertir la síntesis es que las posiciones de los grupos carbonilo y amino en cada enlace amida se intercambian, mientras que la posición de los grupos de cadena lateral en cada carbono α se mantiene. A menos que se establezca de otro modo, se supone que cualquier secuencia de aminoácidos L dada de la invención se puede elaborar en un péptido de isómero D-retro-inverso.
45 En la secuencia peptídica se pueden introducir otras uniones cruzadas covalentes para constreñir la estructura del esqueleto peptídico. Esta estrategia se puede usar para desarrollar análogos de péptidos con un incremento de la potencia, selectividad y estabilidad. A menudo la macrociclización se lleva a cabo formando un un enlace amida entre los extremos N-y C-terminales peptídicos, entre una cadena lateral y el extremo N-o C-terminal, por ejemplo, con K3Fe(CN)6 a pH 8,5 (Samson y cols., Endocrinology, 137: 5182-5185 (1996)) o entre dos cadenas laterales de
50 aminoácidos. Véase, por ejemplo, DeGrado, Adv. Protein Chem., 39: 51-124 (1988).
Otros procedimientos también pueden introducir constreñimientos conformacionales en secuencias peptídicas para mejorar su potencia, estabilidad y selectividad. Estos incluyen el uso de C metilaminoácidos α (véase, por ejemplo, Rose y cols., Adv. Proteína Chem., 37: 1-109 (1985)) o N metilaminoácidos α (véase, por ejemplo, Aubry y cols., Int. J.
55 Pept. Proteins Res., 18: 195-202 (1981)).
E10176707
11-03-2015
La invención se describirá con mayor detalle a modo de ejemplos específicos. Los siguientes ejemplos se ofrecen con fines ilustrativos, y no están destinados ni para limitar ni para definir la invención de ninguna manera.
5
Los ligandos de unión a priones descritos en las tablas expuestas en el presente documento se identificaron como sigue.
Síntesis de colección de péptidos
Se sintetizaron los péptidos y las colecciones de péptidos útiles para la identificación de los ligandos de unión a priones descritos en el presente documento por Peptides International (Louisville, KY) o bien por Commonwealth
15 Biotechnologies (Richmond, VA) directamente sobre resina amino ToyopearlTM (TosoBioSep, Montgomeryville, PA) usando química de Fmoc estándar basada en los procedimientos descritos por Buettner, y cols. 1996. Las densidades de péptidos logradas con el esquema anterior estuvieron normalmente en el intervalos de 0,1-0,5 mmoles/gramo de resina. Se sintetizaron colecciones que comprendían 1, 2, 3, 4, 5 y 6 aminoácidos. Se sintetizaron las colecciones de aminoácidos 4, 5 y 6 sobre ToyopearlTM de amino y contenían una mezcla de tBoc y Fmoc alanina como espaciador entre el aminoácido y el grupo amino sobre la resina. Se sintetizaron los péptidos a partir de de la Fmoc alanina y se acetiló el tBoc. La presencia de "A" se encontró a menudo en la primera posición de esta colección, junto con el aminoácido amino terminal del ligando. Probablemente esto fue debido a la desacilación parcial durante la síntesis peptídica, la desprotección y/o la degradación de Edman durante la secuenciación.
25 En algunas realizaciones, se inmovilizan perlas individuales, llevando cada una múltiples copias de un único ligando, en agarosa después del contacto previo con una solución que contenía PrP. Puesto que se puede sintetizar un gran número de ligandos sobre la superficie de las perlas, es posible producir un número enorme de perlas, cada una de las cuales lleva teóricamente un único ligando. Se rastrean estos ligandos usando los procedimientos descritos para modelos iniciales. Una vez se ha identificado un modelo, se sintetizan ligandos adicionales (sub-colecciones) basándose en el ligando modelo. El rastreo de estas sub-colecciones puede conducir a ligandos adicionales con características mejoradas. A través de un procedimiento de iteración de síntesis y rastreo es posible identificar ligandos preferidos.
Rastreo de la unión de colecciones de péptidos
35 Se colocaron diversas cantidades de perlas (5-500 mg de perlas secas) de una colección en una columna de cromatografía desechable Bio-Spin® (Bio-Rad Laboratories, N.º de cat. 732-6008), y se lavaron con 20 volúmenes de columna (VC) de MeOH al 20% en H2O para retirar posibles impurezas y disolventes orgánicos usados en síntesis peptídica. Después, se lavaron las perlas y se equilibraron usando 20 CV de 1xTBS, pH 7,6 (1x TBS se preparó por dilución 10-veces de 10x TBS, BioSource International, Camarillo, CA N.º de cat. 616US-000). Después se detuvo el flujo y se suspendieron las perlas en 1 ml de 1xTBS recién preparado y se dejaron hinchar durante 15 minutos adicionales. Se extrajo el TBS por gravedad y se cerró la columna. Para prevenir la unión no específica del material de prueba a la resina, se aplicó una solución de 1 ml de caseína Blocker™ en TBS (Pierce, Rockford, II. N.º de cat. 37532) con BSA al 0,5% añadido (Sigma, N.º de cat. A-7030) a las perlas. Después de cubrir ambos extremos de la columna,
45 se realizó el bloqueo durante la noche a 4ºC, bajo agitación suave. Se extrajo la solución de bloqueo, y se añadió 1 ml de material de prueba que contenía PrPr, PrPc y/o PrPsc a la resina. Se cerró la columna herméticamente en ambos extremos, se colocó en posición horizontal, y se agitó suavemente a temperatura ambiente, durante tres horas. Se extrajo el material que contenía PrP y se lavaron las perlas bajo gravedad, se condujo con 10 ml de TBS que contenía Tween 20 al 0,05% seguido de 10 ml de TBS.
Detección de PrPc unida
Se realizó la detección de PrPc normal usando anticuerpos monoclonal de ratón 3F4 (Signet, Dedham, MA) diluido
1:8.000 en TBS que contenía caseína al 1%. El anticuerpo monoclonal se une a haPrPc, huPrPc y huPrPr, pero no
55 tiene ninguna, o tiene extremadamente poca, afinidad para haPrPsc o huPrPsc; sin embargo, sí se une a haPrPsc y huPrPsc desnaturalizada. Se añadió un mililitro de anticuerpo 3F4 diluido a las perlas a partir de una colección combinatoria expuesta previamente a material que contenía PrPc. Se agitaron suavemente las perlas con 3F4 a temperatura ambiente, durante una hora. Se extrajo la solución conteniendo que contenía anticuerpo no unido y se lavaron las perlas con 10 ml de TBS y 10 ml de TBS que contenía Tween 20 al 0,1%. Después, se incubaron las perlas en 1 ml de IgG anti-ratón de cabra marcada con fosfatasa alcalina (γ) (KPL, Gaithersburg, MD N.º de cat. 741806.) diluida 1:2.000 en caseína al 0,5%/BSA al 0,5% en TBS. Se llevó a cabo la incubación con agitación suave durante 1 hora a temperatura ambiente. Se extrajo la solución que contenía anticuerpo secundario no unido y se lavaron las perlas con 10 ml de TBS y 10 ml de T-TBS. A continuación, se preparó 1 ml de solución de ImmunoPureTM Fast, un sustrato para fosfatasa alcalina (Pierce, Rockford, IL, N.º de cat. 34034) como se describe por el fabricante y se aplicó
65 a las perlas. Se procedió a la incubación a temperatura ambiente durante aproximadamente 15 minutos o hasta que las perlas comenzaron a volverse de color rosa claro, y aparecieron unas pocas perlas de color rojo oscuro. Se extrajo
E10176707
11-03-2015
- 161
- ** HE(na)(na)LVA Blanco Medio
- 162
- ** A(na)VPV(na)A Rosa Medio
- 163
- ** YFDYWLA Rosa Medio
- 164
- ** FE(na)HRQA Rosa Medio
- 165
- ** WRHEPAA Rojo Medio
- 166
- huPrPsc +PK*** SS(na)KKDA Blanco Medio
- 167
- *** R(na)DKEAA Blanco Medio
- 168
- huPrPsc +PK**** (na)HEIFPA NA Medio
- 169
- **** KWYHHRA NA Medio
- 170
- **** HWWPHNA NA Medio
- 171
- **** HWQVFYA NA Medio
- 172
- **** FHE(na)EIA NA Medio
- 173
- **** HADF(na)QA NA Medio
* homogeneizado cerebral de ECJ esporádica al 0,5% (huPrPsc) sin tratamiento con PK ** huPrPsc al 5% sin tratamiento con PK *** huPrPsc al 0,5% con tratamiento con PK, pero sin desarrollo de color **** huPrPsc al 5% con tratamiento con PK, pero sin desarrollo de color “NA” indica que no se hizo, na indica naftil-alanina
Tabla 10B Secuencias de seis aminoácidos que se unen a huPrPsc
- SEC ID N.º
- Material rastreado Secuencia Color de la perla Señal lumínica tras desnaturalización
- 174
- HuPrPsc +PK* ALHFETA Blanco Débil
- 175
- * DDPTGFA Blanco Débil
- 176
- * VAPGLGA Blanco
- 177
- * IFRLIEA Blanco Débil
- 178
- * GLERPEA Blanco Débil
- 179
- * IVVRLWA Rosa Débil
- 180
- * WHNPHYA Rosa Débil
- 181
- * LIYKSDA Rosa Débil
- 182
- huPrPsc sin PK** EKPIFNA Blanco Débil
- 183
- ** HWSEPAA Rojo Débil
- 184
- ** GHNWKEA Rosa Fuerte
- 185
- ** YWHHDDA Rosa Fuerte
- 186
- ** GYPKENA Rosa Fuerte
- 187
- ** PVYWLYA Blanco Fuerte
- 188
- huPrPsc sin PK *** FGEHTPA Blanco Débil
- 189
- *** FQGTREA Blanco Fuerte
- 190
- *** TGTNRYA Blanco Fuerte
- 191
- *** KWATRYA Blanco Fuerte
- 192
- *** NSTKFDA Rosa Fuerte
- 193
- *** LIYKEEA Rosa Fuerte
- 194
- *** EHATYRA Blanco Fuerte
E10176707
11-03-2015
- 215 (Control)
- **** DRDLTFA Blanco Ninguno
- 216 (Control)
- **** HNWWIIA Blanco Ninguno
- 217 (Control)
- **** EVKIGNA Blanco Ninguno
* perlas de 100-300 µm rastreadas con homogeneizado cerebral con ECJ esporádica (huPrPsc) con tratamiento con PK ** perlas de 100-300 µm rastreadas con huPrPsc sin tratamiento con PK *** perlas de 65 µm rastreadas con huPrPsc sin tratamiento con PK
5 **** perlas de control demuestran falta de digestión significativa del ligando tras incubación con PK en ausencia de PrP
En la tabla 10C, a continuación, se realizó el rastreo de la colección 3-mera en presencia de homogeneizado cerebral preparado a partir de un paciente con ECJ esporádica (huPrPsc) y se trataron las perlas con PK antes de la inmunodetección de aglutinantes específicos para PrP. En este ensayo, se incubaron 10 mg de resina por columna 10 con 1 ml de homogeneizado cerebral al 0,5% (p/v) o al 1% (p/v) diluido en CPD y que contenía sarcosilo al 0,05% o al 0,1% (v/v), respectivamente, y 0,2 mM del inhibidor de proteasa (PMSF). Se realizaron lavados apropiados descritos en el protocolo general, y se trataron las perlas con 1 ml de PK (100 µg/ml) a 37ºC durante una hora. Después, se siguieron los procedimientos generales descritos anteriormente. Las secuencias obtenidas en dos experimentos se enumeran en la tabla 10C. La concentración apropiada de material de homogeneizado cerebral presente durante la
15 incubación está indicada para cada grupo de secuencias.
En la tabla 10D, se incubó resina de una colección combinatoria en la cantidad de 5 mg de peso seco por columna con 1 ml de homogeneizado cerebral al 0,1% (p/v) diluido en PBS o CPD y que contenía sarcosilo al 0,01% (v/v) y 0,2 mM de PMSF. Se realizaron todos los procedimientos de acuerdo con los protocolos mencionados anteriormente.
20 Tabla 10C Secuencias de tres aminoácidos que se unen a huPrPc, huPrPsc o a ambas
- SEC ID N.º
- Material rastreado Secuencia Color de la perla Señal lumínica tras desnaturalización
- 195
- huPrPsc +PK* HND Blanco Medio
- 196
- * HER Rojo Medio
- 197
- * HGD Rojo Fuerte
- 198
- * HSD Rojo Fuerte
- 199
- * HFD Rojo Fuerte
- 200
- **** WND Rojo Ninguno
- 201
- **** YEH Rojo Ninguno
- 202
- **** HWD Rojo Ninguno
- 203
- **** YHD Rojo Ninguno
- 204
- **** YDW Rojo Ninguno
- 205
- **** WDY Rojo Ninguno
- 218 (Control)
- ***** SIV Blanco Ninguno
- 219 (Control)
- ***** AYP Blanco Ninguno
- 206
- huPrPsc sin PK** HYD (3x) Rojo Fuerte
- 207
- ** HWD Rojo Fuerte
- 208
- ** WTD Rojo Fuerte
- 209
- huPrPsc +PK*** FPK Blanco Medio
- 210
- *** HWK Blanco Medio
- 211
- *** WEE Blanco Medio
- 212
- *** LLR Blanco Medio
* huPrPsc al 0,5% en sarcosilo al 0,05% más tratamiento PK ** huPrPsc al 1,0% en sarcosilo al 0,1% sin tratamiento con PK
25 *** huPrPsc al 1,0% en sarcosilo al 0,1% con tratamiento con PK **** se seleccionaron perlas del gel antes de la transferencia
26
E10176707
11-03-2015
***** se tomaron perlas después del lavado 3x indica secuencias detectadas tres veces
Tabla 10D Secuencias de tres aminoácidos que se unen a huPrPc, huPrPsc o a ambas
- SEC ID N.º
- Material rastreado Secuencia Color de la perla Señal lumínica tras desnaturalización
- 147
- huPrPsc en CPD* WEH Rojo Fuerte
- 152
- * YDY Rojo Fuerte
- 206
- * HYD Rojo Fuerte
- 213
- huPrPsc en PBS** SYF Blanco Débil
- 214
- ** EYY Rojo Fuerte
Ejemplo 2
10 Los siguientes ejemplos proporcionan información sobre el rastreo secundario de ligandos seleccionados a partir de diversas colecciones durante el rastreo primario para confirmar además que los ligandos se unen a PrP.
La unión de PrPc de cerebro humano normal a resinas de trímeros se muestra en la figura 2. Se usaron diez mg de
15 cada resina (amino, HYD (SEC ID N.º: 206)), RWD (SEC ID N.º: 113), SYA (SEC ID N.º: 108), SYF (SEC ID N.º: 213), y YEY (SEC ID N.º: 154)), por columna. La resina de amino es el polímero base a partir del que se sintetizan los péptidos y tiene alguna afinidad por la proteína prión. Se equilibraron las resinas con PBS o bien CPD a pH 7,4. Se usó tejido cerebral humano normal congelado como fuente de huPrPc. En primer lugar, se descongeló sobre hielo húmedo. Se solubilizó una muestra de homogeneizado cerebral al 10% preparada en PBS o en CPD con sarcosilo al 1% y
20 aclarada por centrifugación a 14.000 rpm durante cinco minutos. Se recuperó el sobrenadante y se diluyó 100 veces hasta una concentración final de homogeneizado cerebral y sarcosilo del 0,1% y 0,01%, respectivamente. Se aplicó un mililitro de este material a la columna y se recogió el flujo continuo. Se lavaron las perlas con 20 ml de PBS o CPD, y se usó 1 mg de perlas (peso seco) para la evaluación de la unión a PrPc por bandas de Western, como se describe a continuación.
25 Después del lavado, se suspendió aproximadamente 1 mg de equivalente en peso seco de perlas en 100 ul de tampón, y se calienta al 100ºC para 10 minutos en 30 µl de tampón Laemmli que contenía β-mercaptoetanol al 2%. Se centrifugaron las perlas a 14.000 rpm durante un minuto, y se evaluó el sobrenadante por transferencia de bandas de Western y sondeo para PrP. Se redisolvieron las muestras sobre gel Bis-Tris al 12% de NuPAGE (Invitrogen Life
30 Technologies, Carlsbad, CA, EE.UU.) bajo condiciones de desnaturalización reducida, y se sometieron a electrotransferencia a una membrana nitrocelulosa (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, EE.UU.). Se visualizaron bandas de PrP específicas usando anticuerpo monoclonal 3F4 diluido 1:10.000. Se desarrollaron las bandas usando el sistema de detección SuperSignal West Pico (Pierce, Rockford, IL, EE.UU.) que contenía un reactivo quimioluminiscente para la detección de peroxidasa de rábano picante. Se registraron las señales sobre una
35 película X-Omat™ Blue XB-1 (Eastman Kodak Company, Rochester, NY, (SEC ID N.º: 113), SYA (SEC ID N.º: 108), WEY (SEC ID N.º: 102), WSD (SEC ID N.º: 115), YID (SEC ID N.º: 112), YFE (SEC ID N.º: 106), YEY (SEC ID N.º: 154), y WQD) por columna que se usó y se procesó de acuerdo con el protocolo general descrito anteriormente. se equilibraron las columnas con PBS, pH 7,4. Se usó tejido cerebral congelado de un paciente con ECJ espontánea para la preparación de PrPsc. También contenía PrPc. Se preparó una muestra de homogeneizado cerebral al 10% en PBS
40 tratada con sarcosilo al 1% y aclarada por centrifugación a 14.000 rpm durante cinco minutos. Se recuperó el sobrenadante y se diluyó 100 veces hasta una concentración final de homogeneizado cerebral y sarcosilo del 0,1% y 0,01 %, respectivamente. Se aplicó un mililitro de este material a las perlas y se incubó a temperatura ambiente en un formato en lotes durante tres horas. Después se lavaron las perlas con 20 ml de PBS, y se incubó 1 mg de perlas (peso seco) con PBS o con PK (100 (µg/ml) en PBS a 37ºC durante una hora. Estas condiciones digieren totalmente la PrPc.
45 Por tanto, esto ayudó a discriminar entre los ligandos específicos para PrPsc y PrPc. El procesamiento habitual de las perlas para bandas de Western se siguió como se describe en el ejemplo 1.
La unión de PrPsc en un homogeneizado cerebral tomado de un paciente con ECJ esporádica para resinas en un formato de flujo continuo se muestra en la figura 4. Se usaron cincuenta miligramos de cada resina (amino, RWERED 50 (SEC ID N.º: 157), LW (SEC ID N.º: 50), EYY (SEC ID N.º: 214), HYD (SEC ID N.º: 206)), RWD (SEC ID N.º: 113), SYA (SEC ID N.º: 108), SYF (SEC ID N.º: 213) y YEY (SEC ID N.º: 154)) en el experimento. Se usó la placa de filtro de 96 pocillos Captiva (CaptiVac Vacuum System, ANSYS Technologies, Inc, N.º de cat. 796) en lugar de columnas individuales. Se prepararon resinas de acuerdo con el protocolo general descrito anteriormente. Se equilibraron las resinas con CPD a pH 7,4. Se usó tejido cerebral congelado de un paciente con ECJ esporádica como fuente de 55 huPrPc y huPrPsc. Se preparó una muestra de homogeneizado cerebral al 10% en CPD tratada con sarcosilo al 1% y
Claims (1)
-
imagen1
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US43042302P | 2002-12-03 | 2002-12-03 | |
| US430423P | 2002-12-03 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2531926T3 true ES2531926T3 (es) | 2015-03-20 |
Family
ID=32469468
Family Applications (4)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES10176708.5T Expired - Lifetime ES2527408T3 (es) | 2002-12-03 | 2003-12-03 | Ligandos de proteínas priones y procedimientos de uso |
| ES08150151T Expired - Lifetime ES2460641T3 (es) | 2002-12-03 | 2003-12-03 | Ligandos de proteínas priones y procedimientos de uso |
| ES03808431T Expired - Lifetime ES2375958T3 (es) | 2002-12-03 | 2003-12-03 | Ligandos de prote�?nas priones y procedimientos de uso. |
| ES10176707.7T Expired - Lifetime ES2531926T3 (es) | 2002-12-03 | 2003-12-03 | Ligandos de proteínas priones y procedimientos de uso |
Family Applications Before (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES10176708.5T Expired - Lifetime ES2527408T3 (es) | 2002-12-03 | 2003-12-03 | Ligandos de proteínas priones y procedimientos de uso |
| ES08150151T Expired - Lifetime ES2460641T3 (es) | 2002-12-03 | 2003-12-03 | Ligandos de proteínas priones y procedimientos de uso |
| ES03808431T Expired - Lifetime ES2375958T3 (es) | 2002-12-03 | 2003-12-03 | Ligandos de prote�?nas priones y procedimientos de uso. |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US7863411B2 (es) |
| EP (4) | EP2312318B1 (es) |
| JP (1) | JP4485367B2 (es) |
| CN (3) | CN1739029B (es) |
| AT (1) | ATE529744T1 (es) |
| AU (2) | AU2003302500B2 (es) |
| CA (2) | CA2507936C (es) |
| DK (4) | DK2317317T3 (es) |
| ES (4) | ES2527408T3 (es) |
| HK (4) | HK1088948A1 (es) |
| IL (3) | IL168904A (es) |
| MX (2) | MXPA05005920A (es) |
| NZ (3) | NZ572892A (es) |
| PT (4) | PT2312318E (es) |
| WO (1) | WO2004050851A2 (es) |
Families Citing this family (49)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050026165A1 (en) | 2001-05-31 | 2005-02-03 | Cindy Orser | Detection of conformationally altered proteins and prions |
| MXPA03011000A (es) | 2001-05-31 | 2004-02-27 | Arete Associates | Metodo de sensor de proteinas deformadas. |
| DK2317317T3 (en) | 2002-12-03 | 2015-03-02 | Univ North Carolina State | Prion protein ligands, as well as methods of use thereof |
| CN1806053A (zh) * | 2003-04-14 | 2006-07-19 | 美国红十字会 | 对蛋白的结构同工型特异的配体的鉴定方法 |
| WO2005016127A2 (en) | 2003-08-13 | 2005-02-24 | Chiron Corporation | Prion-specific peptide reagents |
| US20060035242A1 (en) * | 2004-08-13 | 2006-02-16 | Michelitsch Melissa D | Prion-specific peptide reagents |
| US20060057671A1 (en) * | 2004-09-10 | 2006-03-16 | Orser Cindy S | Immobilized probes and methods of detecting conformationally altered prion proteins |
| AU2006214463B2 (en) * | 2005-02-15 | 2012-08-30 | Presympto, Inc. | Method for detecting misfolded proteins and prions |
| KR20080048527A (ko) | 2005-09-09 | 2008-06-02 | 노파르티스 아게 | 프리온-특이적 펩토이드 시약 |
| US8168181B2 (en) | 2006-02-13 | 2012-05-01 | Alethia Biotherapeutics, Inc. | Methods of impairing osteoclast differentiation using antibodies that bind siglec-15 |
| DK1994155T4 (da) | 2006-02-13 | 2022-07-25 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Polynukleotid- og polypeptidsekvenser involveret i fremgangsmåden med knogleremodellering |
| WO2008005960A2 (en) * | 2006-07-07 | 2008-01-10 | Pall Corporation | Prion processing |
| EP2156181B1 (en) * | 2006-07-28 | 2015-11-04 | Adlyfe, Inc. | Peptide probes for diagnostics and therapeutics |
| JP2010515879A (ja) * | 2007-01-12 | 2010-05-13 | オールプリオン・アーゲー | プリオンタンパク質を取り出すための方法 |
| US20110189692A1 (en) * | 2008-04-30 | 2011-08-04 | Novartis Ag | Assay for pathogenic conformers |
| PL2419732T3 (pl) * | 2009-04-15 | 2020-05-18 | Abraxis Bioscience, Llc | Kompozycje nanocząstek wolnych od prionów i sposoby ich wytwarzania |
| AU2010250104B2 (en) * | 2009-05-21 | 2014-04-24 | American National Red Cross | Inhibition of prion protein propagation by receptor associated protein (RAP). its derivatives, mimetics and synthetic peptides |
| US8841429B2 (en) * | 2009-11-03 | 2014-09-23 | Vivonics, Inc. | Nucleic acid ligands against infectious prions |
| US20130109581A1 (en) * | 2009-11-04 | 2013-05-02 | David Peretz | Positively charged species as binding reagents in the separation of protein aggregates from monomers |
| US9162223B2 (en) | 2011-12-21 | 2015-10-20 | North Carolina State University | Alkaline-stable chromatographic resins |
| JP6268173B2 (ja) | 2012-07-19 | 2018-01-24 | 第一三共株式会社 | 抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体 |
| CN103336124B (zh) * | 2012-12-11 | 2015-07-15 | 武汉工业学院 | 一种检测朊病毒蛋白(PrPSC)的方法和试剂盒 |
| EP2995621A1 (en) | 2014-09-10 | 2016-03-16 | Previpharma AG | Ligands and methods for isolating or removing proteins |
| MX2018001681A (es) | 2015-08-10 | 2018-07-06 | Essenlix Corp | Dispositivos de ensayos bio/quimicos y metodos para pasos simplificados, muestras pequeñas, velocidad acelerada y facilidad de uso. |
| MX2018003147A (es) | 2015-09-14 | 2018-09-06 | Essenlix Corp | Dispositivo y sistema para recolectar y analizar condensado de vapor, particularmente condensado de exhalacion de la respiracion y un metodo para usarlo. |
| EP3341728A4 (en) | 2015-09-14 | 2019-04-17 | Essenlix Corp. | DEVICE AND SYSTEM FOR ANALYZING A SAMPLE, PARTICULARLY BLOOD AND METHODS OF USING SAME |
| WO2018119318A1 (en) | 2016-12-21 | 2018-06-28 | Essenlix Corporation | Devices and methods for authenticating a sample and use of the same |
| JP7003158B2 (ja) | 2017-02-07 | 2022-01-20 | エッセンリックス コーポレーション | 圧縮開放流アッセイおよび使用 |
| WO2018148470A1 (en) | 2017-02-08 | 2018-08-16 | Essenlix Corporation | Sample collection and handling for delayed analysis |
| US12066434B2 (en) | 2017-02-08 | 2024-08-20 | Essenlix Corporation | QMAX assays and applications |
| US11927560B2 (en) | 2017-02-08 | 2024-03-12 | Essenlix Corporation | Bio/chemical material extraction and assay |
| WO2018148609A2 (en) | 2017-02-09 | 2018-08-16 | Essenlix Corporation | Colorimetric assays |
| EP3580565B1 (en) | 2017-02-09 | 2024-05-29 | Essenlix Corporation | Assay using different spacing heights |
| US11940382B2 (en) | 2017-02-09 | 2024-03-26 | Essenlix Corporation | Assay with amplification |
| CA3053301A1 (en) | 2017-02-16 | 2018-08-23 | Essenlix Corporation | Assay with textured surface |
| EP3406632A1 (en) | 2017-05-23 | 2018-11-28 | S.I.S.S.A. Scuola Internazionale Superiore di Studi Avanzati | Ligands binding to prion protein for use in the treatment of synucleinopathies |
| WO2019028123A1 (en) | 2017-08-01 | 2019-02-07 | Essenlix Corporation | COLLECTION, MAINTENANCE AND DETERMINATION OF SAMPLES |
| US11725227B2 (en) | 2017-08-01 | 2023-08-15 | Essenlix Corporation | Devices and methods for examining drug effects on microorganisms |
| US11280706B2 (en) | 2017-08-01 | 2022-03-22 | Essenlix Corporation | Dilution calibration |
| WO2019075415A1 (en) | 2017-10-13 | 2019-04-18 | Essenlix Corporation | DEVICES AND METHODS FOR AUTHENTICATING MEDICAL ANALYSIS AND USES THEREOF |
| US11609224B2 (en) | 2017-10-26 | 2023-03-21 | Essenlix Corporation | Devices and methods for white blood cell analyses |
| US11237113B2 (en) | 2017-10-26 | 2022-02-01 | Essenlix Corporation | Rapid pH measurement |
| US10807095B2 (en) | 2017-10-26 | 2020-10-20 | Essenlix Corporation | Making and tracking assay card |
| WO2019118652A1 (en) | 2017-12-12 | 2019-06-20 | Essenlix Corporation | Sample manipulation and assay with rapid temperature change |
| US11510608B2 (en) | 2017-12-14 | 2022-11-29 | Essenlix Corporation | Devices, systems, and methods for monitoring hair |
| WO2019140334A1 (en) | 2018-01-11 | 2019-07-18 | Essenlix Corporation | Homogeneous assay (ii) |
| US11885952B2 (en) | 2018-07-30 | 2024-01-30 | Essenlix Corporation | Optics, device, and system for assaying and imaging |
| JP7376040B2 (ja) * | 2019-09-03 | 2023-11-08 | 国立大学法人京都工芸繊維大学 | 神経変性疾患におけるバイオマーカー分子の検出方法 |
| CN115838395A (zh) * | 2022-11-15 | 2023-03-24 | 西北农林科技大学 | 具有可溶性环氧化物水解酶抑制作用的活性肽及其应用 |
Family Cites Families (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3601398A1 (de) * | 1986-01-18 | 1987-07-23 | Fresenius Ag | Verwendung von oligopeptiden zur behandlung von cerebralen stoerungen |
| US5133866A (en) * | 1988-03-24 | 1992-07-28 | Terrapin Technologies, Inc. | Method to identify analyte-bending ligands |
| US5010175A (en) * | 1988-05-02 | 1991-04-23 | The Regents Of The University Of California | General method for producing and selecting peptides with specific properties |
| DE68905387T2 (de) * | 1988-06-22 | 1993-10-21 | Ajinomoto Kk | Aminosäure-Nahrungsmittelzusammensetzungen. |
| WO1991005262A1 (en) * | 1989-10-02 | 1991-04-18 | University Of Michigan | Bioanalytical detection system |
| US5498538A (en) * | 1990-02-15 | 1996-03-12 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Totally synthetic affinity reagents |
| EP0732399A3 (en) | 1990-03-05 | 1997-03-12 | Cephalon Inc | Chymotrypsin-like proteases and their inhibitors |
| US5416013A (en) * | 1990-04-04 | 1995-05-16 | Sterling Winthrop Inc. | Interleukin 1β protease and interleukin 1β protease inhibitors |
| US6995141B1 (en) * | 1990-04-04 | 2006-02-07 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Interleukin 1β protease and interleukin 1β protease inhibitors |
| US5650489A (en) | 1990-07-02 | 1997-07-22 | The Arizona Board Of Regents | Random bio-oligomer library, a method of synthesis thereof, and a method of use thereof |
| GB9024005D0 (en) * | 1990-11-05 | 1990-12-19 | British Bio Technology | Process for amplifying nucleic acid |
| JP4233604B2 (ja) * | 1991-12-03 | 2009-03-04 | プロセリックス メディスンズ ディベロップメント リミテッド | プリオンタンパク質のフラグメント |
| US5312730A (en) * | 1992-05-27 | 1994-05-17 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Immune complex transfer with lypophilic bridge |
| CA2109646C (en) * | 1992-11-24 | 2000-03-07 | Gaston O. Daumy | Para-nitroanilide peptides |
| JPH08178926A (ja) * | 1994-10-25 | 1996-07-12 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | イムノアッセイプレートおよびその用途 |
| US5834318A (en) | 1995-05-10 | 1998-11-10 | Bayer Corporation | Screening of combinatorial peptide libraries for selection of peptide ligand useful in affinity purification of target proteins |
| US5948763A (en) * | 1995-06-07 | 1999-09-07 | New York University | Peptides and pharmaceutical compositions thereof for treatment of disorders or diseases associated with abnormal protein folding into amyloid or amyloid-like deposits |
| WO1997012992A2 (en) * | 1995-10-02 | 1997-04-10 | Royal Netherlands Academy Of Arts And Sciences | Diagnosis method for a disease caused by a frameshift mutation in a gene and reagents therefore |
| US5750361A (en) | 1995-11-02 | 1998-05-12 | The Regents Of The University Of California | Formation and use of prion protein (PRP) complexes |
| DE69724619T2 (de) * | 1996-05-14 | 2004-07-01 | Winnacker, Ernst-Ludwig, Prof. | Chaperone, die prionproteine binden und zwischen den isoformen prpc und prpsc unterscheiden können |
| JP2000512131A (ja) * | 1996-05-29 | 2000-09-19 | マクギル ユニバーシティー | プリオン蛋白結合蛋白およびその使用法 |
| US5808011A (en) * | 1996-07-01 | 1998-09-15 | Biopure Corporation | Method for chromatographic removal of prions |
| US6126939A (en) * | 1996-09-03 | 2000-10-03 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Anti-inflammatory dipeptide and pharmaceutical composition thereof |
| JPH10182695A (ja) * | 1996-12-27 | 1998-07-07 | Teikoku Seiyaku Co Ltd | ｇｐ１２０に対して親和性を有するペプチド |
| US6221614B1 (en) * | 1997-02-21 | 2001-04-24 | The Regents Of The University Of California | Removal of prions from blood, plasma and other liquids |
| GB9710582D0 (en) * | 1997-05-22 | 1997-07-16 | Oxford Glycosciences Uk Ltd | A method for de novo peptide sequence determination |
| US6211149B1 (en) * | 1998-08-03 | 2001-04-03 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors of formation of protease resistant prion protein |
| US6750025B1 (en) * | 1998-07-09 | 2004-06-15 | V.I. Technologies, Inc. | Method of detecting and isolating prion protein and variants thereof |
| DE19917838A1 (de) * | 1999-01-12 | 2000-07-13 | Bundesrepublik Deutschland Let | Arzneimittel zur prophylaktischen oder therapeutischen Behandlung von transmissiblen spongiformen Enzephalopathien, Morbus Alzheimer und Corea Huntington und anderen neurodegenerativen Erkrankungen sowie diagnostische Mittel |
| DE10027695A1 (de) * | 1999-05-27 | 2001-04-19 | Max Delbrueck Centrum | Vakzine gegen konformationsabhängige Antigene sowie gegen Antigene, die keine oder nicht ausschließlich Proteine oder Peptide sind |
| EP1194164B8 (en) * | 1999-06-23 | 2007-03-21 | IDEXX Laboratories Inc | Prion protein peptides and uses thereof |
| JP2003531356A (ja) * | 1999-06-29 | 2003-10-21 | マクギル ユニバーシティー | プリオンタンパク質結合タンパク質及びそれらの使用 |
| US6261790B1 (en) * | 1999-07-15 | 2001-07-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Monoclonal antibodies and antibody cocktail for detection of prion protein as an indication of transmissible spongiform encephalopathies |
| JP2003531570A (ja) * | 1999-07-27 | 2003-10-28 | アブジェニックス インク． | 神経障害に関連したポリペプチド蓄積を阻害する方法および組成物 |
| WO2001019867A1 (de) * | 1999-09-14 | 2001-03-22 | Memorec Stoffel Gmbh | Prionen-verwandtes protein |
| US6437102B1 (en) * | 1999-11-24 | 2002-08-20 | Bayer Corporation | Method of separating prions from biological materials |
| AU2001245945A1 (en) * | 2000-03-23 | 2001-10-03 | Pe Corporation (Ny) | Detection kits, such as nucleic acid arrays, for detecting the expression of 10,000 or more drosophila genes and uses thereof |
| JP2003530554A (ja) * | 2000-04-05 | 2003-10-14 | ブイ．アイ．テクノロジーズ，インコーポレイテッド | プリオン結合ペプチドリガンドおよび同一物を使用する方法 |
| KR20020040676A (ko) * | 2000-04-12 | 2002-05-30 | 이데이 노부유끼 | 데이터 전송 방법 및 데이터 전송 장치 |
| GB0009918D0 (en) | 2000-04-20 | 2000-06-07 | Rose Keith | Covalent capture facilitating purification of polypeptides |
| US20020155106A1 (en) * | 2000-12-01 | 2002-10-24 | Hammond David J. | Method of identifying a ligand for a target molecule |
| CA2407299A1 (en) | 2001-08-13 | 2003-02-13 | Douglas A. Campbell | Peptide sequence tags and method of using same |
| DE10152677A1 (de) * | 2001-10-19 | 2003-05-08 | Aventis Behring Gmbh | Antikörper zum spezifischen Nachweis von pathogenen Prionen humanen Ursprungs und damit durchgeführten Nachweisverfahren |
| JP2003149461A (ja) * | 2001-11-12 | 2003-05-21 | Allied Tereshisu Kk | 収納装置 |
| DK2317317T3 (en) * | 2002-12-03 | 2015-03-02 | Univ North Carolina State | Prion protein ligands, as well as methods of use thereof |
| US7510848B2 (en) * | 2003-04-04 | 2009-03-31 | North Carolina State University | Prion protein binding materials and methods of use |
| PL1615992T3 (pl) * | 2003-04-04 | 2014-03-31 | Pathogen Removal And Diagnostic Tech Inc | Materiały wiążące białko prionowe i sposoby ich zastosowania |
| WO2006102099A2 (en) | 2005-03-18 | 2006-09-28 | The Regents Of The University Of California | ANTIBODIES SPECIFIC FOR HUMAN AND BOVINE PrP |
-
2003
- 2003-12-03 DK DK10176707T patent/DK2317317T3/en active
- 2003-12-03 AT AT03808431T patent/ATE529744T1/de active
- 2003-12-03 EP EP20100176708 patent/EP2312318B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-03 EP EP20080150151 patent/EP1953551B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-03 PT PT101767085T patent/PT2312318E/pt unknown
- 2003-12-03 PT PT03808431T patent/PT1573323E/pt unknown
- 2003-12-03 ES ES10176708.5T patent/ES2527408T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-03 US US10/727,335 patent/US7863411B2/en active Active
- 2003-12-03 MX MXPA05005920A patent/MXPA05005920A/es active IP Right Grant
- 2003-12-03 WO PCT/US2003/038343 patent/WO2004050851A2/en active Application Filing
- 2003-12-03 CN CN2003801090433A patent/CN1739029B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-03 NZ NZ572892A patent/NZ572892A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-12-03 CA CA2507936A patent/CA2507936C/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-03 NZ NZ540417A patent/NZ540417A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-12-03 CN CN201110113280.3A patent/CN102297798B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-03 CN CN2011101132413A patent/CN102241741B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-03 JP JP2004557512A patent/JP4485367B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-03 DK DK10176708T patent/DK2312318T3/en active
- 2003-12-03 PT PT10176707T patent/PT2317317E/pt unknown
- 2003-12-03 EP EP20100176707 patent/EP2317317B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-03 DK DK03808431.5T patent/DK1573323T3/da active
- 2003-12-03 ES ES08150151T patent/ES2460641T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-03 ES ES03808431T patent/ES2375958T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-03 EP EP03808431A patent/EP1573323B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-03 DK DK08150151T patent/DK1953551T3/da active
- 2003-12-03 AU AU2003302500A patent/AU2003302500B2/en not_active Expired
- 2003-12-03 PT PT08150151T patent/PT1953551E/pt unknown
- 2003-12-03 NZ NZ560410A patent/NZ560410A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-12-03 ES ES10176707.7T patent/ES2531926T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-03 CA CA2836951A patent/CA2836951C/en not_active Expired - Lifetime
-
2005
- 2005-05-31 IL IL168904A patent/IL168904A/en unknown
- 2005-06-02 MX MX2013012129A patent/MX337569B/es unknown
-
2006
- 2006-08-22 HK HK06109265.3A patent/HK1088948A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-02-22 US US12/035,917 patent/US8604161B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-02-05 HK HK09101031A patent/HK1124388A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2009-08-18 IL IL200468A patent/IL200468A/en active IP Right Grant
-
2010
- 2010-04-15 AU AU2010201499A patent/AU2010201499B2/en not_active Expired
- 2010-06-01 IL IL206129A patent/IL206129A/en active IP Right Grant
-
2011
- 2011-10-19 HK HK11111159.1A patent/HK1157009A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2011-10-19 HK HK11111172.4A patent/HK1157010A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-10-31 US US14/069,052 patent/US9678085B2/en active Active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2531926T3 (es) | Ligandos de proteínas priones y procedimientos de uso | |
| US20080160501A1 (en) | Plasma protein-binding ligands | |
| Borovsky et al. | Development of specific RIA and ELISA to study trypsin modulating oostatic factor in mosquitoes | |
| Chamorro et al. | Selection of synthetic receptors capable of sensing the difference in binding of d-Ala-d-Ala or d-Ala-d-Lac ligands by screening of a combinatorial CTV-based library | |
| JP2001226371A (ja) | ダイオキシン誘導体およびこれを使用した測定法 | |
| Glenner et al. | The immunoglobulin origin of amyloid fibril proteins | |
| Sun | Synthesis of peptides with hydroxamic acid side chain appendages |