ES2369872T3 - Procesos para la preparación de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes. - Google Patents

Procesos para la preparación de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes. Download PDF

Info

Publication number
ES2369872T3
ES2369872T3 ES09075233T ES09075233T ES2369872T3 ES 2369872 T3 ES2369872 T3 ES 2369872T3 ES 09075233 T ES09075233 T ES 09075233T ES 09075233 T ES09075233 T ES 09075233T ES 2369872 T3 ES2369872 T3 ES 2369872T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
eptifibatide
residue
fragment
asp
har
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES09075233T
Other languages
English (en)
Inventor
Guojie Ho
Antoinette D. Paone
Luciano Forni
Catherine Detollenaere
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Millennium Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Millennium Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Millennium Pharmaceuticals Inc filed Critical Millennium Pharmaceuticals Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2369872T3 publication Critical patent/ES2369872T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/70—Sulfur atoms
    • C07D213/71—Sulfur atoms to which a second hetero atom is attached
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/75—Fibrinogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Combined Means For Separation Of Solids (AREA)

Abstract

Producto producido por un proceso que comprende: * proporcionar 5 un compuesto de fórmula II: en la que Har es homoarginilo; Gly es glicilo; Asp es aspartilo; Trp es triptofanilo; Pro es prolilo; Cys-NH2 es cisteinamida; Mpa es ácido mercaptopropiónico; y P2 es un grupo protector de carboxilo; y * acoplar los residuos Har y Mpa para formar un compuesto de fórmula III: **Fórmula**

Description

Procesos para la preparación de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes.
SECTOR DE LA INVENCIÓN
La invención se refiere a compuestos que pueden ser utilizados como intermediarios sintéticos para eptifibatide, medicamento para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Eptifibatide es un antagonista heptapéptido cíclico altamente específico de la glicoproteína IIb/IIIa plaquetaria. Es un agente antitrombótico parenteral de acción rápida utilizado durante las intervenciones coronarias percutáneas para el tratamiento de la angina inestable y como complemento de los agentes trombolíticos para el tratamiento del infarto agudo de miocardio. Ver, por ejemplo, Phillips y otros, Journal of Biological Chemistry (1993), 268(2), 1066-73; y Scarborough, American Heart Journal (1999), 138(6, Pt. 1), 1093-1104. El eptifibatide también se administra a pacientes a los que se realiza un procedimiento de angioplastia con balón (globo), para el cual son candidatos anualmente más de 1 millón de personas en EE.UU.
Se cree que el eptifibatide actúa inhibiendo la agregación plaquetaria, específicamente, bloqueando el receptor plaquetario GP IIb-IIIa. La agregación de las plaquetas puede obstruir el suministro de sangre al corazón, provocando una angina inestable y, posiblemente, un infarto de miocardio (ataque al corazón). Los efectos del eptifibatide son específicos para las plaquetas, evitando interferencias con otros procesos cardiovasculares normales, y los efectos pueden revertirse cuando se suspende la utilización de eptifibatide.
El eptifibatide se comercializa en los EE.UU. bajo la marca comercial INTEGRILIN® y se utiliza en el tratamiento de pacientes con síndrome coronario agudo (angina inestable e infarto de miocardio sin onda Q), incluyendo pacientes en los que se realiza un tratamiento médico y aquellos en los que se realiza una intervención coronaria percutánea (PCI). El eptifibatide también está indicado para su utilización en el momento de las intervenciones coronarias percutáneas, incluyendo procedimientos en los que se utilizan endoprótesis vasculares (stents) intracoronarios.
Varias de las estrategias sintéticas para eptifibatide dadas a conocer han utilizado técnicas conocidas de síntesis de péptidos en fase sólida, tal como se describe, por ejemplo, en las patentes U.S. 5.318.899; 5.686.570 y 5.747.447. También se ha dado a conocer un proceso en fase líquida a escala comercial en la Conferencia IBC 1999 sobre tecnologías de péptidos, “Método de Peptisintha para la producción de péptidos GMP a escala industrial” (“Peptisyntha’s Method of Producing GMP Peptides on an Industrial Scale"). El proceso comercial es una síntesis convergente que supone la preparación por separado de dos fragmentos: Mpa-Har-Gly y Asp-Trp-Pro. El acoplamiento de estos dos fragmentos proporciona seis de los siete residuos necesarios para el eptifibatide. El último residuo unido es una cisteinamida protegida con S-tritilo tal como se describe, por ejemplo, en la patente U.S.
5.506.362. A continuación y tras eliminar los grupos protectores de S-tritilo (en los residuos cisteinamida y mercaptopropionilo), se consigue el cierre del anillo mediante la formación de enlaces bisulfuro. Se ha informado que el eptifibatide crudo obtenido mediante el proceso comercial posee una pureza de aproximadamente el 80%. Mediante dos etapas de cromatografía en columna se mejora la pureza a más del 99%.
La síntesis en fase líquida se ha considerado generalmente como más viable que la síntesis en fase sólida para la fabricación a gran escala de eptifibatide. Sin embargo, los temas de solubilidad y de generación de mezclas de complejos de reacción suponen problemas en los procesos en fase líquida a gran escala. Las mezclas de complejos de reacción, por ejemplo, hacen que la purificación del producto sea más dificultosa. Existen modos de superar estos problemas, tales como la utilización de aminoácidos persililados y reactivos de transferencia de fase, tal como se describe, por ejemplo, en la patente U.S. 4.954.616, y la purificación cromatográfica extensiva, pero dichos medios añaden costes al proceso global.
Por ello existe la necesidad de procesos alternativos para la fabricación de eptifibatide.
RESUMEN DE LA INVENCIÓN
La presente invención da a conocer, entre otros, procesos para la fabricación de eptifibatide. Algunos procesos de la invención comprenden proporcionar un compuesto de fórmula II:
en la que Har en homoarginilo; Gly es glicilo; Asp es aspartilo; Trp es triptofanilo; Pro es prolilo; Cis-NH2 es cisteinamida; Mpa es ácido mercaptopropiónico; y P2 es un grupo protector de carboxilo; acoplar los residuos Har y 5 Mpa formando el compuesto de fórmula III:
y eliminar P2 del residuo Asp del compuesto de fórmula III para formar eptifibatide.
La invención también da a conocer procesos en los que un residuo homoarginina protegido en amino terminal se 10 acopla con un residuo de glicina, formando de este modo el fragmento 2-3 de eptifibatide de fórmula:
P1-Har-Gly-OH
También se dan a conocer procesos en los que un residuo ácido aspártico con una cadena lateral carboxílica 15 protegida se acopla a un dipéptido triptofanil-prolilo a través del residuo triptofanilo del dipéptido, formando de este modo el fragmento de eptifibatide 4-6 protegido de fórmula:
P3-Asp(O-P2)-Trp-Pro-OH.
20 Tras la desprotección, el fragmento de eptifibatide 2-3 y el fragmento de eptifibatide 4-6 pueden acoplarse a su vez a través de la unión del residuo Gly del fragmento de eptifibatide 2-3 al residuo Asp del fragmento de eptifibatide 4-6, formando de este modo un fragmento de eptifibatide 2-6 de fórmula:
P1-Har-Gly-Asp(O-P2)-Trp-Pro-OH
25 en la que Har es homoarginilo; Gly es glicilo; Asp es aspartilo; Trp es triptofanilo; Pro es prolilo; P1 es un grupo protector de amino y P2 es un grupo protector de carboxilo. En realizaciones preferentes, el fragmento de eptifibatide 2-6 se acopla a un residuo cisteinamida activado a través del residuo Pro del fragmento de eptifibatide 2-6, formado de este modo un fragmento de eptifibatide 2-7 de fórmula:
30 P1-Har-Gly-Asp(O-P2)-Trp-Pro-Acys-NH2
en la que ACys-NH2 es un residuo cisteinamida activada. Puede unirse un residuo ácido mercaptopropiónico al fragmento de eptifibatide 2-7 mediante una unión disulfuro entre el residuo ácido mercaptopropiónico y el residuo 35 ACys-NH2 del fragmento de eptifibatide 2-7, formando de este modo un compuesto de fórmula I:
en la que Mpa es ácido mercaptopropiónico; Cys-NH2 es cisteinamida. La eliminación de P1 del residuo Har del 40 compuesto de fórmula I da lugar al compuesto de fórmula II:
el acoplamiento de los residuos Har N-terminal y Mpa C-terminal de este compuesto da lugar a un compuesto de fórmula III:
y la eliminación subsiguiente de P2 del residuo Asp da lugar a eptifibatide.
10 La presente invención también de a conocer productos obtenidos mediante los procesos descritos, tales como los compuestos de fórmula IV:
15 en la que R1 es hidrógeno o P1; P1 es un grupo protector de amino y P2 es un grupo protector de carboxilo. Como otros compuestos representativos de la invención se incluyen Fmoc-Har-Gly-OH, Fmoc-Har-Gly-O-P4 y Fmoc-HarGly-Asp(O-P5)-Trp-Pro-OH en los que P4 y P5 son grupos protectores de carboxilo. La invención incluye también composiciones que comprenden eptifibatide y menos de 1% de determinadas impurezas del proceso. La invención también incluye procesos de purificación de eptifibatide. El objeto de la presente invención se define en las
20 reivindicaciones adjuntas.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE REALIZACIONES ILUSTRATIVAS
En un aspecto, la presente invención da a conocer procesos convergentes para la preparación de eptifibatide que
25 suponen la preparación de un fragmento de eptifibatide 2-3, la preparación de un fragmento de eptifibatide 4-6 y el acoplamiento de los fragmentos de eptifibatide 2-3 y 4-6 formando un fragmento de eptifibatide 2-6. Algunos de estos procesos suponen el acoplamiento del fragmento de eptifibatide 2-6 a un residuo cisteinamida activada formando un fragmento de eptifibatide 2-7, la formación de un enlace disulfuro entre ácido mercaptopropiónico y el fragmento de eptifibatide 2-7 formando el precursor A, la realización del acoplamiento peptídico intramolecular del precursor A y la eliminación de los grupos protectores del producto de acoplamiento dando lugar a eptifibatide.
5 La invención hace referencia a compuestos novedosos que pueden utilizarse como intermedios para la preparación de eptifibatide
Tal como se utiliza en la presente invención, el término “grupo protector de carboxilo” hace referencia a un grupo que puede unirse selectivamente y eliminarse de un grupo carboxilo, para evitar que éste participe en reacciones
10 químicas no deseadas, sin efectos adversos inaceptables en las reacciones deseadas. Como ejemplos de grupos protectores de carboxilo se incluyen ésteres, tales como metilo, etilo, t-butilo, bencilo no substituido o substituido y ésteres de sililo, entre otros. Otros grupos protectores de carboxilo son bien conocidos en la técnica y se describen en detalle en “Grupos protectores en síntesis orgánica” (“Protecting Groups in Organic Synthesis”), Teodora W. Greene y Peter G. M. Wuts, 3ª edición, 1999, publicado por John Wiley and Sons, Inc.
15 Tal como se utiliza en la presente invención, el término “grupo protector de amino” hace referencia a un grupo que puede unirse selectivamente y eliminarse de un átomo de nitrógeno para evitar que éste participe en reacciones químicas no deseadas, sin efectos adversos inaceptables en las reacciones deseadas. Como ejemplos de grupos protectores de amino se incluyen carbamatos tales como Boc, Cbz, Fmoc, alloc, carbamatos de metilo y etilo, entre
20 otros; derivados de imida cíclicos, tales como ftalimida,; amidas, tales como formilo, acetilo no substituido y substituido y benzoilo; y grupos trialquil sililo, tales como t-butildimetilsililo y triisopropilsililo. Otros grupos protectores de amino son bien conocidos en la técnica y se describen en detalle en “Grupos protectores en síntesis orgánica” (“Protecting Groups in Organic Synthesis”), Teodora W. Greene y Peter G. M. Wuts, 3ª edición, 1999, publicado por John Wiley and Sons, Inc.
25 Tal como se utiliza en la presente invención, el término “acoplamiento” y todas las variaciones del mismo, hace referencia a la formación de un enlace amida, por cualquier medio, entre los grupos que se unen.
Tal como se utiliza en la presente invención, el término “unión” y todas las variaciones del mismo, hace referencia a 30 la formación de un enlace amida o disulfuro, por cualquier medio que puede utilizarse para formar un enlace amida o disulfuro, entre los grupos que se unen.
Tal como se utiliza en la presente invención, el término “residuo cisteinamida activado” hace referencia a un residuo cisteinamida que es capaz de formar un enlace disulfuro con ácido mercaptopropiónico.
35 Tal como se utiliza en la presente invención, el término “Gly-eptifibatide” hace referencia a un compuesto que está relacionado estructuralmente a eptifibatide pero que contiene dos residuos de glicina adyacentes en lugar de un solo residuo glicina.
40 Todos los residuos de aminoácidos a los que se hace referencia en la presente invención son aminoácidos naturales que poseen una configuración L.
El eptifibatide también puede representarse con designaciones de aminoácidos del siguiente modo:
correspondiendo las designaciones de aminoácidos al gráfico químico mostrado a continuación:
5 Para facilitar la descripción, también pueden numerarse los residuos de (1) a (7). El residuo (1) es el ácido mercaptopropiónico; (2) es homoarginilo (Har); (3) es glicilo (Gly); (4) es aspartilo (Asp); (5) es triptofanilo (Trp); (6) es prolilo (Pro) y (7) es cisteinamida (Cys-NH2).
La presente invención hace referencia a procesos convergentes para la preparación de eptifibatide. En una primera
10 secuencia de etapas, se prepara un fragmento de eptifibatide 2-3 que contiene los aminoácidos (2) y (3). En una segunda secuencia, se prepara un fragmento de eptifibatide 4-6 que contiene los aminoácidos (4), (5) y (6). A continuación se acoplan los dos fragmentos dando lugar a un único fragmento 2-6, que es un pentapéptido. El fragmento de eptifibatide 2-6 se protege en el extremo aminoterminal del residuo Har y en la cadena lateral carboxilo de aspartilo. El esquema 1 resume un proceso ejemplar para la preparación del fragmento de eptifibatide 2-6:
Esquema 1: Preparación del fragmento 2-6 de eptifibatide
Secuencia A
5
Secuencia B
La secuencia A del esquema 1 muestra la preparación del fragmento 2-3 de eptifibatide y la secuencia B muestra la
10 preparación del fragmento 4-6 de eptifibatide. Las dos secuencias convergen para dar lugar al fragmento 2-6 de eptifibatide. Aunque el esquema 1 muestra grupos protectores de aminoácidos ejemplares, deberá apreciarse por los expertos en la técnica de la síntesis de péptidos que también pueden utilizarse otros grupos protectores de aminoácidos. Por ejemplo, en lugar del grupo Fmoc (9-fluorenilmetoxicarbonilo), pueden utilizarse otros grupos protectores del tipo carbamato tales como los grupos Cbz (benciloxicarbonilo), RCbz (grupos benciloxicarbonilo
15 substituidos en el anillo aromático), 9(2-sulfo)fluorenilmetilcarbamato, 9(2,7-dibromo)fluorenilmetilcarbamato, 2-cloro3-indenilmetilcarbamato, Benz[f]inden-3-ilmetilcarbamato o Alloc (Aliloxicarbonilo).
El éster de t-butilo en el residuo aspartilo puede sustituirse por cualquier otro grupo protector que pueda ser escindido mediante tratamiento ácido como, por ejemplo, ODpm (éster de difenilmetilo) o grupos que pueden ser 20 escindidos mediante hidrogenolisis como, por ejemplo, OBzl (éster de bencilo).
El grupo Fmoc-Har en los fragmentos de eptifibatide mostrados en la secuencia A del esquema 1 pueden sustituirse por RNP1-Har, siendo RNP1 un grupo protector de amino como, por ejemplo, un grupo Cbz (benciloxicarbonilo), un grupo RCbz (benciloxicarbonilo substituido en el anillo aromático), o un grupo Alloc (Aliloxicarbonilo). De forma 25 similar, el grupo Z-Asp (o Cbz-Asp) en los fragmentos de eptifibatide mostrados en la Secuencia B puede sustituirse por RNP2-Asp, siendo RNP2 un grupo protector de amino que puede escindirse en condiciones básicas como, por ejemplo, Fmoc (fluorenilmetiloxicarbonilo) o en el que RNP2 es un grupo protector de amino que puede escindirse mediante hidrogenelisis como, por ejemplo, un grupo RCbz (grupo protector benciloxicarbonilo substituido en el anillo aromático). Además, el grupo –OtBu mostrado en el esquema 1 puede sustituirse por RCP, siendo RCP un grupo protector de carboxilo que puede escindirse mediante tratamiento ácido como, por ejemplo, un grupo ODpm 5 (éster de difenilmetilo). Pfp (pentafluorofenilo) puede sustituirse por RL1, siendo RL1 un grupo activador de carboxilo; Su (succinimida) puede sustituirse por RL2, siendo RL2 un grupo activador de carboxilo. Independientemente de la naturaleza del fragmento, tanto Pfp como Su pueden sustituirse por otros ésteres activos estables como, por ejemplo, ésteres mono y dinitrofenilo, ésteres tri-y pentafenilo. Se apreciará por los expertos en la técnica que la selección de grupos protectores concretos depende de la identidad de los otros grupos protectores que estén
10 presentes en el mismo compuesto. En algunas realizaciones de la invención, se selecciona un grupo protector concreto de manera que pueda ser eliminado de forma selectiva bajo condiciones de reacción que no afecten a otros grupos protectores.
En algunas realizaciones de la invención, el fragmento de eptifibatide 2-6 se acopla a continuación a una
15 cisteinamida “activada” (7), tal como, por ejemplo, 3-nitro-2-piridinsulfenil-cisteinamida (H-Cys(Npys)-NH2); Nps (2nitro-fenilsulfenilo); S-feniltiocisteinamida, en la que el anillo fenilo se halla substituido; S-alquiltiocisteinamida; o el S-sulfonato y los S-sulfeniltiocarbonatos de cisteinamida, dando lugar al fragmento hexapéptido 2-7 de eptifibatide. El residuo restante de eptifibatide es el ácido mercaptopropiónico o Mpa-OH (1). Mpa-OH se une al fragmento hexapéptido 2-7 bajo condiciones que forman un enlace disulfuro entre 1 y el fragmento 2-7. La pieza disulfuro
20 resultante, denominada en la presente invención como precursor A, es un precursor clave y novedoso para la síntesis de eptifibatide. A continuación se muestra la estructura del precursor A:
25 en el que P1 es un grupo protector de amino y P2 es un grupo protector de carboxilo. Preferentemente, el grupo P2 es estable bajo condiciones adecuadas para la eliminación del grupo P1. La selección de grupos P1 y P2 compatibles que permitan la eliminación selectiva de uno solo de los grupos es bien conocida en la técnica. Un ejemplo de un par de grupos protectores compatibles es P1 = Fmoc, que puede eliminarse bajo condiciones básicas, y P2 = t-butilo, el cual es estable bajo las mismas condiciones.
30 El esquema 2 resume un proceso ejemplar para la preparación del precursor A:
Al igual que en el esquema 1, los grupos Fmoc y t-butilo mostrados en el esquema 2 pueden sustituirse por otros
grupos protectores conocidos reconocidos generalmente como útiles en la síntesis de péptidos.
En algunas realizaciones de la invención, la eliminación del grupo protector P1 del precursor A da lugar a otro precursor, el precursor B, que es la parte 2-7-1 de eptifibatide:
El precursor B puede convertirse, mediante un acoplamiento peptídico intramolecular, en el precursor C:
El acoplamiento peptídico intramolecular puede llevarse a cabo, por ejemplo, en un solvente orgánico en presencia de un reactivo de acoplamiento adecuado como, por ejemplo, un agente de acoplamiento del tipo uronio tales como, pero sin que sirva de limitación, tetrafluorocarbonato de O-[ciano(etoxicarbonil)pietilenamino]-N,N,N’,N’tetrametiluronio (TOTU), HBTU, o TBTU (respectivamente hexafluorofosfato y tetrafluoroborato de 2-(1HBenzotriazolelil)-1,1,3,3-tetrametiluronio); un reactivo tipo carbodiimida tal como, pero sin que sirva de limitación, DCC (diciclohexilcarbodiimida), DIC (diisopropilcarbodiimida) o EDC (1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida); ésteres activos o reactivos de acoplamiento del tipo fosfonio tales como, por ejemplo, Bop (hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tri(dimetilamino)-fosfonio o PyBOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tri(pirrolidino)fosfonio). El acoplamiento peptídico se describe, por ejemplo en Humphrey y Chamberlin, Chem. Rev.1997, 97, 2243-2266, incorporado a la presente invención como referencia en su totalidad.
La eliminación del grupo protector P2 del precursor C da lugar a eptifibatide. La eliminación de P2 puede llevarse a cabo, por ejemplo, en un solvente orgánico en presencia de un ácido, una base o cualquier otro reactivo o sistema de reactivos en el cual el grupo protector es lábil. El esquema 3 resume un proceso ejemplar para la preparación de eptifibatide a partir del precursor A:
Esquema 3: Preparación de eptifibatide a partir del Precursor A
Tras la eliminación del grupo protector Fmoc, el fragmento 2-7-1 sufre un acoplamiento peptídico intramolecular 5 dando lugar al éster t-butilo de eptifibatide. La eliminación del grupo t-butilo del residuo aspartilo da lugar a eptifibatide.
La presente invención también hace referencia a compuestos que son estructuralmente similares a eptifibatide y que se preparan de acuerdo con procesos que son similares a los procesos descritos anteriormente en la presente 10 invención para la preparación de eptifibatide. Entre dichos compuestos se incluyen, por ejemplo, Gly-eptifibatide, el cual contiene dos residuos de glicina adyacentes, en lugar de un único residuo glicina como en eptifibatide:
Gly-eptifibatide puede prepararse, por ejemplo, de acuerdo con el procedimiento descrito anteriormente para la preparación de eptifibatide, a excepción de que se acopla un dipéptido Gly-Gly a homoarginina para formar lo que corresponde al fragmento de eptifibatide 2-3, en lugar de acoplar glicina a homoarginina para formar el fragmento. Por ejemplo, de acuerdo con este procedimiento modificado, el grupo H-Gly-OtBu (3) mostrado en el esquema 1 es sustituido por H-Gly-Gly-OtBu.
En algunas realizaciones de la invención, también se produce Gly-eptifibatide durante la preparación de eptifibatide de acuerdo con los métodos descritos anteriormente para la preparación de eptifibatide. La invención incluye composiciones que comprenden eptifibatide y Gly-eptifibatide, incluyendo composiciones que comprenden al menos un 99% de eptifibatide y Gly-eptifibatide entre un 0,01% y un 1% y composiciones que comprenden al menos un 99% de eptifibatide y Gly-eptifibatide entre un 0,01% y un 0,1%.
La presente invención incluye también métodos para purificar eptifibatide que comprenden, por ejemplo, establecer contacto de una solución de eptifibatide con una fase estacionaria que comprende, por ejemplo, cadenas de octadecil carbono fijadas a sílice, lavar la fase estacionaria en contacto con la solución de eptifibatide con una solución de ácido trifluoroacético/acetonitrilo, lavando opcionalmente la fase estacionaria en contacto con la solución de eptifibatide con una solución de ácido acético/acetonitrilo y lavando la fase estacionaria en contacto con la solución de eptifibatide con una solución de ácido amónico/acetonitrilo. Las fases estacionarias inversas son bien conocidas por los técnicos en la materia y otras de dichas fases pueden ser sustituidas por sílice basado en octadecil carbono.
En casos específicos de la invención, la fase estacionaria en contacto con la solución de eptifibatide es lavada con un gradiente que tiene concentraciones iniciales de 95% de una solución acuosa de ácido trifluoroacético al 0,1% y 5% de una solución de acetonitrilo y unas concentraciones finales de 50% de una solución acuosa de ácido trifluoroacético al 0,1% y 50% de una solución de acetonitrilo.
La invención incluye otros casos en los que la fase estacionaria en contacto con la solución de eptifibatide es lavada con un gradiente que tiene concentraciones iniciales de 95% de una solución acuosa de ácido acético al 0,5% y 5% de una solución de acetonitrilo y concentraciones finales de 50% de una solución acuosa de ácido acético 0,5% y 50% de una solución de acetonitrilo. En algunos casos, la fase estacionaria es lavada con el gradiente de ácido acético/acetonitrilo después de uno o más lavados con un gradiente de ácido trifluoroacético/acetonitrilo.
La invención incluye también casos en los que la solución de ácido amónico/acetonitrilo es una solución que comprende 95% de una solución acuosa de ácido amónico 100 mM y 5% de una solución de acetonitrilo. En algunos casos, la fase estacionaria es lavada con una solución de ácido amónico/ácido nitrilo seguido de lavado con un gradiente de ácido trifluoroacético/acetonitrilo y/o un gradiente de ácido acético/acetonitrilo.
El acoplamiento de los residuos de aminoácidos que se produce en los procesos descritos puede llevarse a cabo mediante métodos conocidos de síntesis de péptidos que son familiares para los expertos en la técnica. Puede emplearse cualquier procedimiento de acoplamiento adecuado para formar péptidos.
Los ejemplos siguientes son ilustrativos de algunas realizaciones de la invención y no debe considerarse que limiten el ámbito de la invención.
Ejemplo 1: Preparación de Z-Asp(OtBu)-Trp-Pro-OH
Z-Asp(OtBu)-Trp-Pro-OH se obtuvo mediante procedimientos conocidos partiendo de Z-Asp(OtBu)-OSu y H-Trp-Pro-OH disponibles comercialmente tal como se describe, por ejemplo, en Bodanszky, M. (1979), “Esteres activos en la síntesis de péptidos, Los péptidos” (“Active esters in peptide synthesis, The peptides”), Vol. 1 (ed. E. Gross y J. Meienhofer), Capítulo 3. Academic Press, Londres, que se incorpora a la presente invención como referencia en su totalidad.
Ejemplo 2: Preparación de H-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-OH
Se añadieron a un reactor de 2 litros cargado con dimetilacetamida (DMAC, 1,2 L) a una temperatura de aproximadamente 20ºC, 0,300 kg de material de partida Z-Asp(OtBu)-Trp-Pro-OH, manteniendo la temperatura a aproximadamente 20ºC. Se permitió que el Z-Asp(OtBu)-Trp-Pro-OH se disolviera y a continuación se purgó y cubrió la mezcla de reacción con una atmósfera de nitrógeno. Se añadió a la mezcla de reacción paladio sobre carbono (5% en peso) (0,015 kg), seguido de hidrogenación a una presión de 2 bar mientras que se mantenía la mezcla de reacción a aproximadamente 20ºC.
Tras dos horas, y cada hora a partir de ese momento, se analizó una muestra de la reacción mediante HPLC (cromatografía líquida de alta resolución). El análisis HPLC se realizó en una columna Purospher Star C18 de 55*4 mm con una mezcla solvente de agua/acetonitrilo con un 0,1% de ácido tifluoroacético (TFA) con un gradiente 98:2 agua/acetonitrilo a 2:98 agua/acetonitrilo en 10 minutos. La detección de HPLC se realizó a 215 nm, el flujo fue de 2,0 mL/min y la temperatura de 40ºC.
La reacción se consideró completa cuando el análisis HPLC mostró que los materiales de partida eran inferiores o iguales a un 0,2% en relación con el porcentaje del área del producto. Cuando la reacción se mostró completa por HPLC, se añadió a la mezcla de reacción una solución acuosa de ácido p-toluensulfónico (0,094 kg p-TsOH en 0,150 L de agua). A continuación se filtró la mezcla de reacción a través de Celite® que se había pre-lavado con DMAC (Celite® lavado tres veces con 0,6 L). Tras la filtración de la mezcla de reacción, se lavó tres veces la torta de filtro con DMAC fresco (0,3 L). Se realizó un análisis mediante HPLC tras el último lavado para confirmar que no quedaba producto en la torta de filtro.
A continuación se transfirieron los filtrados combinados a un nuevo recipiente a aproximadamente 20 ºC, temperatura a la cual se añadió N-etilmorfolina (0,066 L). La temperatura se mantuvo por debajo de aproximadamente 22 ºC durante la adición. A continuación, se enfrió la mezcla a aproximadamente 8-12 ºC y se añadió lentamente agua (3 L) de manera que se mantuviera la temperatura por debajo de aproximadamente 15 ºC. A continuación, se agitó la mezcla a aproximadamente 8-12 ºC durante aproximadamente 30 minutos y se mantuvo a dicha temperatura durante 8 horas. Durante este período de tiempo el producto cristalizó a partir de la solución. Puede analizarse el sobrenadante mediante HPLC para determinar la cantidad de producto que permanece en la solución y determinar si es necesario un enfriamiento adicional. La pasta obtenida se filtró y los sólidos recolectados se lavaron dos veces con una solución 2:1 de agua:DMAC (0,9 L cada vez). A continuación se lavaron los sólidos dos veces con acetonitrilo (0,9 L cada vez) y se secaron bajo vacío a una temperatura inferior a aproximadamente 25 ºC hasta conseguir un peso constante. El contenido de agua tras el secado fue de un 3,5% (análisis de Karl-Fisher).
Se analizó el producto mediante HPLC de fase inversa utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético acuoso/acetonitrilo.
Un análisis LC/MS confirmó la masa [M+H] 473,0 de H-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-OH.
El rendimiento de recuperación fue del 93,2% (0,218 kg), el rendimiento neto fue del 93,1% (sobre la base del contenido en nitrógeno: 95,4%).
Ejemplo 3: Preparación de Fmoc-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-OH
Se añadió a una pasta de Fmoc-Har-Gly-OH (peso neto 0,163 kg; sobre la base del contenido en péptido: 90,5%) en THF:DMAC (0,717 L y 0,179 L respectivamente) ácido metansulfónico (0,027 L) y pentafluorofenol (0,083 kg). Se agitó la mezcla a aproximadamente 20 ºC hasta que se disolvió el sólido. Se añadió gota a gota N-etilmorfolina (NEM) (0,030 L), y a continuación diciclohexilcarbodiimida (DCC) (0,072 kg) en THF (0,179 L) y se agitó la mezcla a aproximadamente 20 ºC. La formación de Fmoc-Har-Gly-OPfp fue seguida de HPLC. Tras aproximadamente 17 horas, la relación Fmoc-Har-Gly-OH / Fmoc-Har-Gly-OPfp fue de 1,5/98,5.
Se añadió a la mezcla de reacción H-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-OH (0,146 kg, aproximadamente 3,5 % peso/peso en H2O) y NEM (0,049 L). Se agitó la mezcla a aproximadamente 20ºC durante 3 horas. En ese momento, el análisis HPLC mostró que la muestra contenía aproximadamente un 87% de producto, menos de un 2% de Fmoc-Har-Gly-OPfp, un 6% de Fmoc-Har-Gly-OH, aproximadamente un 0,5% de H-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-OH, y aproximadamente un 5,5% de una impureza identificada como Fmoc-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-OH (“impureza d.a”). El análisis HPLC se realizó en una columna Purospher Star C18 55*4 mm con una mezcla de solvente agua/acetonitrilo que contenía un 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA) con un gradiente de 98:2 agua/acetonitrilo a 2:98 agua:acetonitrilo en 10 minutos. La detección de HPLC se realizó a 215 nm, el flujo fue de 2,0 mL/min y la temperatura de 40ºC.
La mezcla de reacción se filtró y el sólido se lavó dos veces con una mezcla 5/1 de THF/DMAC (2 x 0.489 L). Se concentró el filtrado a aproximadamente 0,815 L a una temperatura no superior a 35 ºC bajo presión reducida (aproximadamente 20 mBar). La mezcla concentrada se añadió lentamente durante 1 hora a una mezcla 1/4 de acetonitrilo/H2O (4,1 L) que contenía bicarbonato sódico (0,059 kg). La velocidad de adición se controló cuidadosamente para evitar la formación de un precipitado pegajoso. Se añadió aproximadamente un 3,5% de la solución durante 15 minutos, y se interrumpió la adición para agitar la pasta a aproximadamente 20ºC durante una hora. El precipitado pastoso se convirtió en una pasta blanca. Se añadió un 7,5% más de la solución durante 15 a 30 minutos, y se interrumpió la adición para agitar de nuevo la pasta a aproximadamente 20 ºC durante 2 horas. El 89% restante de la solución se añadió en aproximadamente 12 horas. Se agitó la mezcla a aproximadamente 20 ºC durante 12 horas y a continuación se filtró. El sólido se lavó con una mezcla 1/4 de acetonitrilo/H2O (3 x 0,7 L), una mezcla 2/3 de acetonitrilo/di-isopropileter (DIPE) (3 x 0,7 L) y DIPE (2 x 0,7 L). El producto sólido se secó a una temperatura ≤ a 30 ºC hasta conseguir un peso constante. El contenido de agua tras el secado fue de un 3,3% (análisis Karl-Fisher).
El producto se analizó mediante HPLC inversa utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético acuoso/acetonitrilo.
El análisis LC/MS confirmó la masa [M+H] 922,5 de Fmoc-Har-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-OH.
El rendimiento de recuperación fue del 81,8% (0,234 kg); el rendimiento neto fue del 82,3% (sobre la base del contenido en nitrógeno: 96,0%).
Ejemplo 4: Preparación de Fmoc-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NPys)-NH2
Se añadió a un reactor cargado con DMF grado para la síntesis de péptidos (0,675 L) a aproximadamente 20 ºC, Fmoc-Har-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-OH (0,225 kg). Se enfrió la mezcla a aproximadamente 0ºC, y se añadió H-Cys(NPys)-NH2 en forma de sal hidrocloruro sólida (0,080 kg). Se añadió a la mezcla de reacción tetrafluoroborato de O-Benzotriazol-1-il-N,N,N’,N’-tetrametiluronio (TBTU) (0,082 kg). Se ajustó el pH de la mezcla de reacción a entre 6,5 y 7,0 mediante la adición de fracciones de di-isopropiletilamina (DIPEA) (0,112 L), manteniendo la temperatura a aproximadamente 0ºC. Se agitó la mezcla a dicha temperatura, analizando muestras mediante HPLC para determinar la formación de producto cada aproximadamente 45 minutos. El pH de la mezcla de reacción se mantuvo entre pH 6,5 y 7,0 mediante la adición de DIPEA según fuera necesario. El análisis HPLC se realizó en una columna Platinum EPS 100-5 C18 5μ de 250*4,6 mm; Solvente A: TFA al 0,1% en agua; Solvente B: TFA al 0,1% en acetonitrilo; gradiente: 12 a 98% B en 15 minutos. La detección de los productos de HPLC se realizó a 215 nm, flujo 2,0 mL/min y temperatura de 40ºC. La reacción se consideró completa cuando se mostró que los materiales de partida pentapéptido y Cys(NPys)-NH2 eran ambos inferiores al 1% mediante HPLC. Por otro lado, se añadieron TBTU, DIPEA y el material de partida que se mostrará deficiente en la mezcla.
La mezcla de reacción se añadió a otro recipiente que contenía agua (4,5 L) a una temperatura de aproximadamente 5ºC. Se mantuvo esta temperatura durante la adición con agitación. Tras la agitación durante 10 minutos a aproximadamente 5ºC, se filtró la mezcla y se lavó el sólido cinco veces con agua (0,9 L en cada ocasión). A continuación, se lavó el sólido tres veces con tolueno (0,675 L en cada ocasión). Los lavados con tolueno pueden sustituirse por lavados con di-isopropil éter. Se secó el sólido bajo vacío a una temperatura de 35ºC o inferior hasta conseguir un peso constante. El contenido en agua tras el secado fue del 1,2% (análisis de Karl-Fisher).
El producto se analizó mediante HPLC inversa utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético acuoso/acetonitrilo.
El análisis LC/MS confirmó la masa [M+H] de 1178,4 de Fmoc-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NPys)NH2.
El rendimiento de recuperación fue de 102,4% (0,295 kg) y el rendimiento neto de 87,7% (sobre la base del contenido en péptido: 82,0%).
Ejemplo 5: Preparación de Fmoc-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NH2)-Mpa (Fmoc[2-7-1])
Se añadió lentamente y con agitación a un reactor cargado con acetonitrilo de calidad HPLC (0,570 L) y DMF grado de síntesis de péptidos (0,285 L) bajo una atmósfera de nitrógeno a aproximadamente 20ºC, 0,285 kg de Fmoc-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NPys)NH2 (Fmoc[2-7]). Tras la disolución de Fmoc[2-7], se enfrió la mezcla a aproximadamente -3ºC. Se añadió a la mezcla de reacción una solución de ácido mercaptopropiónico (Mpa, 0,023 kg) en acetonitrilo (0,057 L), preparada a aproximadamente 20ºC, a una velocidad adecuada para mantener la temperatura de reacción a aproximadamente -3ºC. La reacción se controló mediante HPLC y se consideró completa cuando el análisis mostró menos de un 1% de Fmoc[2-7] en comparación con el contenido de Fmoc[2-7-1]. El análisis HPLC se realizó en una columna Purospher Star C18 de 55*4 mm con una mezcla de solventes agua/acetonitrilo con un 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA) con un gradiente de 98:2 agua/acetonitrilo a 2:98 agua:acetonitrilo en 10 minutos. La detección de HPLC se realizó a 215 nm, el flujo fue de 2,0 mL/min y la temperatura de 40ºC.
Se añadió la mezcla de reacción a un segundo recipiente cargado con acetonitrilo de calidad HPLC (5,7 L) y Netilmorfolina (NEM, 0,033 L) a aproximadamente 20ºC. Tras completar la adición, se agitó la reacción a dicha temperatura durante aproximadamente 30 minutos. Se enfrió lentamente la pasta a aproximadamente 0ºC y se continuó la agitación a dicha temperatura durante aproximadamente 45 minutos. A continuación se realizó tres veces el siguiente procedimiento: (a) se detuvo la agitación para permitir la separación del precipitado y el sobrenadante;
(b) se bombeó el sobrenadante fuera del recipiente; (c) se añadió acetonitrilo de calidad HPLC fresco (1,425 L) al reactor a aproximadamente 0ºC y se reinició la agitación; y (d) se agitó la pasta durante aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 0ºC. Se filtró la pasta restante, y se lavó el sólido dos veces con acetonitrilo de calidad HPLC (1,140 L en cada ocasión) y una vez con tolueno (1,425 L). El lavado con tolueno puede sustituirse por un lavado con diisopropil éter. Se secó el sólido bajo alto vacío a una temperatura no superior a 20ºC.
El producto se analizó mediante HPLC de fase inversa utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético acuoso/ acetonitrilo.
El análisis LC/MS confirmó la masa [M+H] de 1128,4 de Fmoc-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NH2)-Mpa.
El rendimiento de recuperación fue del 93,8% (0,256 kg); el rendimiento neto fue cuantitativo (sobre la base del contenido en péptido: 87,4%).
Ejemplo 6: Preparación de H-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NH2)-Mpa ([2-7-1])
A un reactor cargado con DMF grado de síntesis de péptidos (0,750 L) a aproximadamente 20ºC, se añadieron lentamente y con agitación 0,250 kg de Fmoc-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NH2)-Mpa (Fmoc[2-7-1]. Se enfrió la mezcla a aproximadamente 10ºC y a dicha temperatura se añadió dietilamina (0,034 L). Tras la adición de dietilamina, se dejó que se incrementara la temperatura de la mezcla a aproximadamente 20ºC. Se controló la progresión de la reacción mediante análisis HPLC de muestras tomadas cada hora. El análisis HPLC se realizó en una columna Platinum EPS 100-5 C18 5μ de 250*4,6 mm; Solvente A: TFA 0,1% en agua; Solvente B: TFA 0,1% en acetonitrilo; gradiente 22 a 98% en 15 minutos. La detección de los productos de HPLC se realizó a 215 nm, el flujo fue de 2,0 mL/min y la temperatura de 40ºC. La reacción se consideró completa cuando el porcentaje de Fmoc [2-71] fue inferior a aproximadamente el 0,5% respecto al [2-7-1]. La reacción se completó habitualmente a las 3 horas.
Se añadió la mezcla de reacción a un segundo recipiente cargado con acetato de etilo (5,0 L) y se enfrió a aproximadamente 10ºC. Se agitó la suspensión resultante durante 10 minutos a aproximadamente 10ºC. A continuación se realizó dos veces el siguiente procedimiento: (a) se detuvo la agitación y se permitió la separación del precipitado y el sobrenadante durante 15 minutos aproximadamente; (b) se bombeó el sobrenadante fuera del recipiente; (c) se añadió acetato de etilo fresco (0,750 L) a aproximadamente 10ºC; (d) se agitó la suspensión durante aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 10ºC. Se filtró la pasta, y se lavó el sólido 6 veces con acetato de etilo (0,750 L en cada ocasión). Pueden realizarse lavados adicionales con diisopropil éter para eliminar los restos de acetato de etilo. Se secó el sólido bajo alto vacío a una temperatura no superior a 25ºC durante un máximo de 18 horas.
El producto se analizó mediante HPLC de fase inversa utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético acuoso/ acetonitrilo.
El análisis LC/MS confirma la masa [M+H] de 906,3 de H-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NH2)-Mpa.
Un análisis GC demostró un 3,4% de dietilamina residual.
El rendimiento de recuperación fue del 106,1% (0,213 kg) y el rendimiento neto del 99,2% (sobre la base del contenido en péptido: 81,9%).
Ejemplo 7: Preparación de [MPA-Har-Gly-As(O-tBu)-Trp-Pro-Cys](NH2) (ciclo-[1-7](OtBu)-NH2)
Se cargó el reactor con DMF grado de síntesis de péptidos (0,768 L) y se enfrió la solución a aproximadamente 10ºC. Se añadió tetrafluoroborato de O-[ciano(etoxicarbonil)metilenamino]-N,N,N’,N’-tetrametiluronio (TOTU) (0,070 kg) y a continuación se diluyó con diclorometano grado de síntesis de péptidos (1,536 L) mientras se mantenía la temperatura por debajo de los 15ºC. Se enfrió la solución resultante a aproximadamente -6ºC y se añadió NEM (0,024 L) en pequeñas cantidades manteniendo la temperatura a aproximadamente -6ºC. Se determinó el pH antes y después de la adición de NEM. Se tomó una muestra para análisis mediante HPLC.
El análisis HPLC se realizó en una columna Phenomenex Luna C18(2), 5µm, 150*4,6 mm; gradiente 12 a 98% B en 15 minutos. Solvente A: TFA 0,1% en agua, solvente B: TFA 0,1% en acetonitrilo. La detección se realizó a 215 nm, el flujo fue de 2,0 mL/min y la temperatura de 40ºC.
Se cargó un reactor diferente con DMF grado de síntesis de péptidos (0,768 L) a aproximadamente 20ºC y a continuación 0,192 kg de H-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NH2)-Mpa ([2-7-1]). Una vez disuelto el sólido se enfrió la solución resultante a aproximadamente 0ºC. Se añadió HOBt (0,026 kg) en pequeñas cantidades (el peso de HOBt se corrigió respecto a la pureza). Se diluyó la solución resultante con diclorometano grado de síntesis de péptidos (0,384 L). Se tomó una muestra para análisis mediante HPLC.
Se añadió muy lentamente la solución de [2-7-1] a la solución de TOTU mediante una bomba de adición durante un mínimo de 3 horas manteniendo la temperatura a aproximadamente -6ºC. Se tomó una muestra tras la adición del 50% de [2-7-1] para análisis mediante HPLC. También se determinó el pH en este punto. También se tomaron muestras para análisis mediante HPLC y determinación de pH tras completar la adición de [2-7-1]. Se ajustó el pH a 7-7,5 mediante la adición de NEM en caso necesario, manteniendo la temperatura a aproximadamente -6ºC.
Se comprobó el pH cada 15 minutos y se ajustó a 7-7,5 en caso necesario con NEM manteniendo la temperatura a aproximadamente -6ºC. Se tomó una muestra para análisis mediante HPLC cada 45 minutos hasta que se completó el ciclado. La reacción se consideró completa cuando el área porcentual de [2-7-1] fue inferior al 0,5% respecto al producto ciclado.
En caso de que la reacción se detenga, se añaden 1,1 equivalentes de TOTU por cantidad residual de [2-7-1] y se ajustó el pH a 7-7,5 en caso necesario, manteniendo la temperatura a aproximadamente -6ºC.
Cuando se completó la reacción, se concentró la mezcla bajo vacío a una temperatura inferior a 40ºC hasta un volumen de aproximadamente 0,8 L. Se enfrió la solución viscosa resultante a aproximadamente 5ºC y se añadió lentamente a acetato de etilo agitado rápidamente que se encontraba a aproximadamente 0ºC (7,0 L). Se agitó la pasta resultante a aproximadamente 0ºC durante 20 minutos. A continuación se realizó tres veces el siguiente procedimiento: (a) se detuvo la agitación para permitir la separación del precipitado y el sobrenadante; (b) se bombeó el sobrenadante fuera del recipiente; (c) se añadió al reactor acetato de etilo fresco (1,15 L) a aproximadamente 0ºC y se reinició la agitación; (d) se agitó la pasta durante aproximadamente 20 minutos a aproximadamente 0ºC. La última vez que se realizó dicho procedimiento, se añadió a la reacción un volumen menor de acetato de etilo (0,768 L) y se reinició la agitación durante 10 minutos a 0ºC. Se filtró la pasta resultante, y se lavó el sólido una vez con acetato de etilo (0,576 L) y tres veces con diisopropil éter (0,576 L). Se secó el sólido bajo alto vacío a aproximadamente 25ºC.
El producto se analizó mediante HPLC de fase inversa utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético acuoso/ acetonitrilo.
El análisis LC/MS confirmó la masa [M+H] de 888,2 del (ciclo-[1-7](OtBu)-NH2).
El rendimiento de recuperación fue del 103,7% (0,194 kg), el rendimiento neto fue cuantitativo (sobre la base del contenido en péptido: 79,7%).
Ejemplo 8: Preparación de [MPA-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys](NH2) (ciclo-[1-7]-NH2) (ejemplo de referencia)
Se preparó una mezcla de diclorometano (0,573 L), anisol (0,086 L) y TFA (0,122 L) a aproximadamente 20ºC. Se enfrió la solución resultante a 15ºC y se añadió lentamente el sólido [1-7](OtBu)-NH2 (0,191 kg). Durante la adición [1-7](OtBu)-NH2 se mantuvo la temperatura por debajo de los 20ºC. La mezcla de reacción se enfrió adicionalmente a 10ºC y se añadió una cantidad adicional de TFA (0,365 L) en aproximadamente 10 minutos. Durante la adición se mantuvo la temperatura por debajo de los 20ºC. Tras la adición de todo el TFA, se dejó la muestra en agitación a 20ºC y a continuación se realizó una HPLC.
El análisis HPLC se realizó en una columna Platinum EPS 100-5 C18, 250*4,6 mm. El gradiente fue de 22 a 98% B en 15 minutos, siendo el solvente A TFA 0,1% en agua y el solvente B TFA 0,1% en acetonitrilo. La detección se realizó a 215 nm, el flujo fue de 1,5 mL/min, y la temperatura de 40ºC. Se completó la reacción cuando quedaba menos de un 3,0 del área porcentual de [1-7](OtBu)-NH2 respecto al producto.
Una vez completada la reacción, se enfrió la mezcla a 10ºC y se añadió a una solución 2/1 de di-isopropil éter (DIPE) / acetonitrilo (3,78 L) a 10ºC. Se agitó la pasta resultante durante 10 minutos a 10ºC y a continuación se filtró bajo vacío. Se lavó el sólido tres veces con una mezcla 7/3 de DIPE y acetonitrilo (0,573 L) y tres veces con DIPE (0,573 L). El producto se secó a una temperatura no superior a los 25ºC.
El producto se analizó mediante HPLC de fase inversa utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético acuoso/ acetonitrilo.
El análisis LC/MS confirmó la masa [M+H] de 832,3 del (ciclo-[1-7]-NH2).
El rendimiento de recuperación fue de 0,157 kg (87,9%) y el rendimiento neto fue del 87,2% (sobre la base del contenido en péptido: 79,1%).
El contenido en API puro fue del 45,8%. Este valor se obtuvo mediante el siguiente método de HPLC: Synergi Max-RP 4 μm 80Å 250*4,6 mm; solvente A: 52 mM H3PO4/CH3CN/100 mM H7SA (86/14/0.80); solvente B: 52 mM H3PO4/CH3CN/100mM H7SA (50/50/0,80); 220 nm; 1,3 mL/min; 50°C; gradiente: 0%B durante 45 minutos, a continuación a 45% B durante 13 minutos, a continuación a 100% B durante 1 minuto.
Ejemplo 9: Purificación de Eptifibatide (ejemplo de referencia)
Purificación primaria:
La purificación primaria fue una purificación basada en ácido trifluoroacético/ acetonitrilo. Las normas aplicadas para las fracciones principales individuales fueron de ≥ 92,0%. La fase estacionaria fue una columna Kromasil C18, 10 μm, 100 A con un diámetro de 5 cm. La presión de la columna fue de 50 bar, la velocidad de flujo fue de 50 mL/min,
y la longitud de onda de detección fue de 215 nm. Las fases móviles fueron las siguientes:
Solvente A: TFA 0,1% en agua procesada/ CH3CN (95/5); y
Solvente B: TFA 0,1% en agua procesada/ CH3CN (50/50);
La columna se equilibró mediante la elución del solvente A al 100% durante 15 minutos. El gradiente de purificación fue el siguiente: elución de solvente A al 100% durante 10 minutos; gradiente: 15% B a 45% B durante 60 minutos; y elución de solvente B al 100% durante 15 minutos.
La purificación se controló utilizando el método MAD-009-SF323TG1 y los objetivos de los criterios de aceptación
fueron los siguientes:
Fracción principal (F1): ≥ 92%; y
Fracción lateral (Fp): ≥ 60% y < 92%.
Las fracciones recolectadas se almacenaron a una temperatura entre 2ºC y 8ºC.
Purificación secundaria:
La purificación secundaria fue una purificación basada en ácido acético/acetonitrilo. Las normas para las fracciones principales individuales fueron de ≥ 99,0% con impurezas individuales <0,3 / 0,5%. La fase estacionaria fue una columna Kromasil C18, 10 μm, 100 A con un dimetro de 5 cm. La presión de la columna fue de 40 ± 5 bar, la
á velocidad de flujo fue de 50 mL/min, y la detección se realizó a una longitud de onda de 215 nm. Las fases móviles fueron las siguientes:
Solvente A: AcOH 0,5% en agua procesada / CH3CN (95/5); y
Solvente B: AcOH 0,5% en agua procesada / CH3CN (50/50).
La columna se equilibró mediante la elución del solvente A al 100% durante 15 minutos. El gradiente de purificación fue el siguiente: elución de solvente A al 100% durante 10 minutos; gradiente: 0% B a 15% B durante 50 minutos; 15% B a 35% B durante 60 minutos y elución de solvente B al 100% durante 15 minutos.
La purificación se controló utilizando el método MAD-009-SF323TG1 y los objetivos de los criterios de aceptación
fueron los siguientes:
Fracción principal (F1): ≥ 99%; con impurezas < 0,3 / 0,5% y
Fracción lateral (Fp): 80% y 99%.
Las fracciones recolectadas se almacenaron a una temperatura entre 2ºC y 8ºC.
Desalinización/concentración:
Se realizó una etapa de desalinización doble en solución de acetato de amonio antes de la etapa de concentración para eliminar el contra-ión trifluoroacetato residual y obtener la forma acetato del péptido. La etapa de concentración redujo el volumen de la solución procesada.
La fase estacionaria para la desalinización en NH4OAc/ concentración en AcOH fue una columna Kromasil C18, 10 μm, 100 A con un diámetro de 5 cm. La presión de la columna fue de 40 ± 5 bar, la velocidad de flujo fue de 50 mL/min, y la longitud de onda de detección fue de 215 nm. Las fases móviles fueron las siguientes:
Solvente A: AcOH 0,5% en agua procesada/ CH3CN (95/5);
Solvente B: AcOH 0,5% en agua procesada/ CH3CN (50/50); y
Solvente C: NH4OAc 100 mM pH: 6,5 en agua procesada/ CH3CN (95/5).
La columna se equilibró mediante la elución del solvente A al 100% durante 15 minutos. Para la carga de la columna, se diluyó la fracción principal de la purificación en AcOH con 2 volúmenes de agua procesada.
La desalinización se realizó del modo siguiente: 10 minutos de solvente A; 10 minutos de solvente C; 10 minutos de solvente A; y 10 minutos de solvente C.
La concentración se realizó del siguiente modo: 10 minutos de solvente A y solvente B al 50% durante 15 minutos.
La desalinización y concentración se controlaron utilizando el método MAD-009-SF323TG1 y los objetivos de los
criterios de aceptación fueron los siguientes:
Fracción principal (F1): ≥ 99%; con impurezas < 0,3 / 0,5% y
Fracción lateral (Fp): 80% y < 99%.
Las fracciones recolectadas se almacenaron a una temperatura entre 2ºC y 8ºC.

Claims (11)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Producto producido por un proceso que comprende:
    en la que
    Har es homoarginilo;
    Gly es glicilo; 10 Asp es aspartilo;
    Trp es triptofanilo;
    Pro es prolilo;
    Cys-NH2 es cisteinamida;
    Mpa es ácido mercaptopropiónico; y 15 P2 es un grupo protector de carboxilo; y
    • acoplar los residuos Har y Mpa para formar un compuesto de fórmula III:
  2. 2.
    Producto, según la reivindicación 1, en el que P2 es t-butilo.
  3. 3.
    Producto, según la reivindicación 1, que comprende además la eliminación de P1 del residuo Har de un
    en la que P1 es un grupo protector de amino, formando de este modo el compuesto de fórmula II.
  4. 4. Producto, según la reivindicación 3, en el que P2 es estable en condiciones adecuadas para la eliminación de P1. 30
  5. 5.
    Producto, según la reivindicación 3, en el que P2 es t-butilo.
  6. 6.
    Producto, según la reivindicación 3, en el que P1 es 9-fluorenilmetoxicarbonilo o benciloxicarbonilo.
    35 7. Producto, según la reivindicación 3, en el que dicho proceso comprende además unir un residuo Mpa a un fragmento 2-7 de eptifibatide de fórmula:
    P1-Har-Gly-Asp(O-P2)-Trp-Pro-ACys-NH2
    40 en el que ACys-NH2 es un residuo cisteinamida inactivado, mediante una unión disulfuro entre el residuo Mpa y el residuo ACys-NH2 del fragmento 2-7 de eptifibatide, formando de este modo el compuesto de fórmula I.
  7. 8. Producto, según la reivindicación 7, en el que dicho proceso comprende además el acoplamiento del fragmento
    2-6 de eptifibatide de fórmula: 45
    P1-Har-Gly-Asp(O-P2)-Trp-Pro-OH
    a un residuo cisteinamida activado a través del residuo Pro del fragmento 2-6 de eptifibatide, formando de este modo el fragmento 2-7 de eptifibatide.
  8. 9.
    Producto, según la reivindicación 8, en el que el residuo cisteinamida inactivado es H-Cys(Npys)NH2.
  9. 10.
    Producto, según la reivindicación 8, en el que dicho proceso comprende además el acoplamiento de un fragmento 2-3 de eptifibatide de fórmula: P1-Har-Gly-OH y un fragmento 4-6 de eptifibatide de fórmula:
    H-Asp(O-P2)-Trp-Pro-OH mediante la unión del residuo Gly del fragmento 2-3 de eptifibatide al residuo Asp del fragmento 4-6 de eptifibatide, formando de este modo el fragmento 2-6 de eptifibatide.
  10. 11.
    Producto, según la reivindicación 10, que comprende además el acoplamiento de un residuo Asp protegido en el extremo amino terminal que posee una cadena carboxílica lateral protegida a un dipéptido Trp-Pro a través del residuo Trp del dipéptido y la eliminación del grupo protector del extremo amino terminal del residuo Asp para formar un fragmento 4-6 de eptifibatide.
  11. 12.
    Producto, según la reivindicación 11, que comprende además el acoplamiento de un residuo Har protegido en el extremo amino terminal y un residuo Gly protegido o no protegido para formar un fragmento 2-3 de eptifibatide.
ES09075233T 2004-04-08 2005-04-08 Procesos para la preparación de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes. Expired - Lifetime ES2369872T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US56045304P 2004-04-08 2004-04-08
US560453P 2004-04-08

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2369872T3 true ES2369872T3 (es) 2011-12-07

Family

ID=34956145

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES05735068T Expired - Lifetime ES2328713T3 (es) 2004-04-08 2005-04-08 Procesos para la fabricacion de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes.
ES09075233T Expired - Lifetime ES2369872T3 (es) 2004-04-08 2005-04-08 Procesos para la preparación de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes.

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES05735068T Expired - Lifetime ES2328713T3 (es) 2004-04-08 2005-04-08 Procesos para la fabricacion de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes.

Country Status (20)

Country Link
US (2) US7674768B2 (es)
EP (2) EP2204383B1 (es)
JP (2) JP4926942B2 (es)
KR (1) KR101238133B1 (es)
CN (1) CN1972960B (es)
AT (2) ATE519781T1 (es)
AU (1) AU2005233603B2 (es)
CA (1) CA2562157C (es)
CY (2) CY1109357T1 (es)
DE (1) DE602005014956D1 (es)
DK (2) DK1735345T3 (es)
ES (2) ES2328713T3 (es)
HR (2) HRP20090490T1 (es)
ME (2) ME01063B (es)
MX (1) MXPA06011904A (es)
PL (2) PL1735345T3 (es)
PT (2) PT1735345E (es)
RS (2) RS51182B (es)
SI (2) SI1735345T1 (es)
WO (1) WO2005100381A2 (es)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006041945A2 (en) * 2004-10-04 2006-04-20 Novetide, Ltd. A counterion exchange process for peptides
NL2000126C2 (nl) * 2005-07-15 2008-01-29 Solvay Werkwijze voor de vervaardiging van eptifibatide.
RU2461564C2 (ru) * 2008-02-06 2012-09-20 Байокон Лимитид Способ очистки циклического или нециклического пептида
WO2009150657A1 (en) * 2008-06-09 2009-12-17 Natco Pharma Limited Improved process for preparation of eptifibatide by fmoc solid phase synthesis
CN101538314B (zh) * 2009-01-13 2012-10-03 深圳翰宇药业股份有限公司 一种纯化爱啡肽的方法
CN101747412A (zh) * 2009-12-30 2010-06-23 江苏诺泰制药技术有限公司 一种依替非巴肽的合成制备工艺
CN102174081B (zh) * 2011-03-09 2013-05-29 杭州华津允上医药有限公司 埃替非巴肽及其前体的制备方法
CN102827249A (zh) * 2011-06-14 2012-12-19 江苏豪森医药集团连云港宏创医药有限公司 一种依替巴肽的液相合成方法
CN103408637B (zh) 2013-06-27 2015-12-02 深圳翰宇药业股份有限公司 一种爱啡肽的制备方法
CN104710509B (zh) * 2013-12-11 2018-01-02 深圳翰宇药业股份有限公司 一种爱啡肽的制备方法
CN108250265A (zh) * 2016-12-29 2018-07-06 北京中科亚光生物科技有限公司 一种合成含有分子内二硫键的多肽的新工艺
CN110894212B (zh) * 2018-08-24 2021-06-04 翰宇药业（武汉）有限公司 一种合成依替巴肽硫醚的方法
CN109251234A (zh) * 2018-10-08 2019-01-22 重庆科脉生物化工有限公司 一种抗血小板聚集药物爱啡肽的制备方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2616785B1 (fr) 1987-06-19 1989-10-06 Solvay Composes guanidiniques comprenant un ion tetraphenylborate substitue et procede d'obtention de ces composes et utilisation des composes lors de la synthese peptidique
US5770564A (en) 1989-06-16 1998-06-23 Cor Therapeutics, Inc. Platelet aggregation inhibitors
US5318899A (en) 1989-06-16 1994-06-07 Cor Therapeutics, Inc. Platelet aggregation inhibitors
US5747447A (en) 1992-04-30 1998-05-05 Cor Therapeutics Stable polypeptide composition
BE1007184A3 (fr) 1993-06-18 1995-04-18 Solvay Procede de preparation d'un amide d'alpha-aminoacide, utilisable en synthese peptidique.
US5688489A (en) * 1995-09-15 1997-11-18 Resolution Pharmaceuticals, Inc. Non-receptor mediated imaging agents
CA2484594C (en) * 2002-05-03 2012-06-26 Avecia Limited Process for the synthesis of peptides
ES2237356T3 (es) * 2003-04-07 2007-04-01 Novetide Ltd. Procedimiento para la produccion de peptidos ciclicos.
NL2000126C2 (nl) 2005-07-15 2008-01-29 Solvay Werkwijze voor de vervaardiging van eptifibatide.

Also Published As

Publication number Publication date
EP1735345B1 (en) 2009-06-17
CA2562157A1 (en) 2005-10-27
ME01063B (me) 2012-10-20
DK1735345T3 (da) 2009-10-26
JP2007537161A (ja) 2007-12-20
US7674768B2 (en) 2010-03-09
JP2012111756A (ja) 2012-06-14
HK1099313A1 (en) 2007-08-10
WO2005100381A2 (en) 2005-10-27
ES2328713T3 (es) 2009-11-17
AU2005233603B2 (en) 2011-07-21
EP2204383B1 (en) 2011-08-10
KR101238133B1 (ko) 2013-03-04
EP2204383A1 (en) 2010-07-07
US20060036071A1 (en) 2006-02-16
CY1109357T1 (el) 2014-07-02
ATE519781T1 (de) 2011-08-15
EP1735345A2 (en) 2006-12-27
HK1145691A1 (en) 2011-04-29
KR20070015537A (ko) 2007-02-05
RS51929B (sr) 2012-02-29
MXPA06011904A (es) 2007-01-25
ME01260B (me) 2013-06-20
PT2204383E (pt) 2011-10-31
CY1111904T1 (el) 2015-11-04
CA2562157C (en) 2013-09-10
CN1972960B (zh) 2010-05-12
SI2204383T1 (sl) 2011-11-30
AU2005233603A1 (en) 2005-10-27
PL2204383T3 (pl) 2012-01-31
JP4926942B2 (ja) 2012-05-09
CN1972960A (zh) 2007-05-30
DE602005014956D1 (de) 2009-07-30
HRP20090490T1 (en) 2009-10-31
DK2204383T3 (da) 2011-10-17
PT1735345E (pt) 2009-09-11
HRP20110812T1 (en) 2011-11-30
PL1735345T3 (pl) 2009-12-31
RS51182B (sr) 2010-10-31
US20100105609A1 (en) 2010-04-29
WO2005100381A3 (en) 2006-07-27
ATE433997T1 (de) 2009-07-15
SI1735345T1 (sl) 2010-01-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2786225T3 (es) Método para preparar AMG 416
ES2336826T3 (es) Procedimientos para la produccion de un peptido que presenta una amida c-terminal.
ES2344657T3 (es) Procedimiento de intercambio de contraion para peptidos.
ES2809678T3 (es) Método para preparar semaglutida
JP2025122030A (ja) ＥｐｈＡ２に特異的な二環式ペプチドリガンド
CA3017926C (en) Methods for synthesizing .alpha.4.beta.7 peptide antagonists
US20100105609A1 (en) Processes for Preparing Eptifibatide
Gunasekera et al. Making ends meet: microwave-accelerated synthesis of cyclic and disulfide rich proteins via in situ thioesterification and native chemical ligation
JP2022518210A (ja) インテグリンαｖβ３に特異的な二環式ペプチドリガンド
JP2024147650A (ja) インクレチン類似体を作製する方法
ES2885869T3 (es) Procedimiento para la fabricación de degarelix y sus productos intermedios
EP3765488A1 (en) Process for the manufacture of pthrp analogue
ES2954660T3 (es) Método para preparación de liraglutida usando un grupo de unión de BAL
US20030125243A1 (en) Synthesis of cyclic peptides
ES2934161T3 (es) Rutas de fase de solución lineal para hexapéptidos de WNT
CA3238634A1 (en) Synthetic process for production of modified gcc receptor agonists
HK1145691B (en) Processes for preparing eptifibatide and pertinent intermediate compounds
HK1099313B (en) Processes for preparing eptifibatide and pertinent intermediate compounds
HK40052155B (zh) 二聚的肽-磷脂缀合物的优化方法