ES2328713T3 - Procesos para la fabricacion de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes. - Google Patents
Procesos para la fabricacion de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2328713T3 ES2328713T3 ES05735068T ES05735068T ES2328713T3 ES 2328713 T3 ES2328713 T3 ES 2328713T3 ES 05735068 T ES05735068 T ES 05735068T ES 05735068 T ES05735068 T ES 05735068T ES 2328713 T3 ES2328713 T3 ES 2328713T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- eptifibatide
- residue
- fragment
- gly
- har
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
- C07D213/70—Sulfur atoms
- C07D213/71—Sulfur atoms to which a second hetero atom is attached
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/75—Fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Cardiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
- Combined Means For Separation Of Solids (AREA)
Abstract
Proceso que comprende: proporcionar un compuesto de fórmula II: **(Ver fórmula)** en la que Har es homoarginilo; Gly es glicilo; Asp es aspartilo; Trp es triptofanilo; Pro es prolilo; Cys-NH2 es cisteinamida; Mpa es ácido mercaptopropiónico; y P2 es un grupo protector de carboxilo; y Acoplar los residuos Har y Mpa para formar un compuesto de fórmula III: **(Ver fórmula)**
Description
Procesos para la preparación de eptifibatide y
los compuestos intermedios pertinentes.
\global\parskip0.970000\baselineskip
En algunas realizaciones, la invención hace
referencia a procesos novedosos para la preparación de eptifibatide,
un fármaco utilizado para el tratamiento de la enfermedad
cardiovascular. La invención también hace referencia a compuestos
que pueden utilizarse como productos intermedios en la síntesis de
eptifibatide, a compuestos que son estructuralmente similares a
eptifibatide, y a procesos para la purificación de eptifibatide.
Eptifibatide es un antagonista heptapéptido
cíclico altamente específico de la glicoproteína IIb/IIIa
plaquetaria. Es un agente antitrombótico parenteral de acción
rápida utilizado durante las intervenciones coronarias percutáneas
para el tratamiento de la angina inestable y como complemento de los
agentes trombolíticos para el tratamiento del infarto agudo de
miocardio. Ver, por ejemplo, Phillips y otros, Journal of Biological
Chemistry (1993), 268(2), 1066-73; y
Scarborough, American Heart Journal (1999), 138(6, Pt. 1),
1093-1104. El eptifibatide también se administra a
pacientes a los que se realiza un procedimiento de angioplastia con
balón (globo), para el cual son candidatos anualmente más de 1
millón de personas en EE.UU.
Se cree que el eptifibatide actúa inhibiendo la
agregación plaquetaria, específicamente, bloqueando el receptor
plaquetario GP IIb-IIIa. La agregación de las
plaquetas puede obstruir el suministro de sangre al corazón,
provocando una angina inestable y, posiblemente, un infarto de
miocardio (ataque al corazón). Los efectos del eptifibatide son
específicos para las plaquetas, evitando interferencias con otros
procesos cardiovasculares normales, y los efectos pueden revertirse
cuando se suspende la utilización de eptifibatide.
El eptifibatide se comercializa en los EE.UU.
bajo la marca comercial INTEGRILIN® y se utiliza en el tratamiento
de pacientes con síndrome coronario agudo (angina inestable e
infarto de miocardio sin onda Q), incluyendo pacientes en los que
se realiza un tratamiento médico y aquellos en los que se realiza
una intervención coronaria percutánea (PCI). El eptifibatide
también está indicado para su utilización en el momento de las
intervenciones coronarias percutáneas, incluyendo procedimientos en
los que se utilizan endoprótesis vasculares (stents)
intracoronarios.
Varias de las estrategias sintéticas para
eptifibatide dadas a conocer han utilizado técnicas conocidas de
síntesis de péptidos en fase sólida, tal como se describe, por
ejemplo, en las patentes U.S. 5.318.899; 5.686.570 y 5.747.447.
También se ha dado a conocer un proceso en fase líquida a escala
comercial en la Conferencia IBC 1999 sobre tecnologías de péptidos
"Método de Peptisintha para la producción de péptidos GMP a escala
industrial" ("Peptisyntha's Method of Producing GMP Peptides
on an Industrial Scale"). El proceso comercial es una síntesis
convergente que supone la preparación por separado de dos
fragmentos: Mpa-Har-Gly y
Asp-Trp-Pro. El acoplamiento de
estos dos fragmentos proporciona seis de los siete residuos
necesarios para el eptifibatide. El último residuo unido es una
cisteinamida protegida con S-tritilo tal como se
describe, por ejemplo, en la patente U.S. 5.506.362. A continuación
y tras eliminar los grupos protectores de S-tritilo
(en los residuos cisteinamida y mercaptopropionilo), se consigue el
cierre del anillo mediante la formación de enlaces bisulfuro. Se ha
informado que el eptifibatide crudo obtenido mediante el proceso
comercial posee una pureza de aproximadamente el 80%. Mediante dos
etapas de cromatografía en columna se mejora la pureza a más del
99%.
La síntesis en fase líquida se ha considerado
generalmente como más viable que la síntesis en fase sólida para la
fabricación a gran escala de eptifibatide. Sin embargo, los temas de
solubilidad y de generación de mezclas de complejos de reacción
suponen problemas en los procesos en fase líquida a gran escala. Las
mezclas de complejos de reacción, por ejemplo, hacen que la
purificación del producto sea más dificultosa. Existen modos de
superar estos problemas, tales como la utilización de aminoácidos
persililados y reactivos de transferencia de fase, tal como se
describe, por ejemplo, en la patente U.S. 4.954.616, y la
purificación cromatográfica extensiva, pero dichos medios añaden
costes al proceso global.
Por ello existe la necesidad de procesos
alternativos para la fabricación de eptifibatide.
\global\parskip1.000000\baselineskip
La invención da a conocer, entre otros, procesos
para la fabricación de eptifibatide. Algunos procesos de la
invención comprenden proporcionar un compuesto de fórmula II:
en la que Har en homoarginilo; Gly
es glicilo; Asp es aspartilo; Trp es triptofanilo; Pro es prolilo;
Cis-NH_{2} es cisteinamida; Mpa es ácido
mercaptopropiónico; y P_{2} es un grupo protector de carboxilo;
acoplar los residuos Har y Mpa formando el compuesto de fórmula
III:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y
eliminar P_{2} del residuo Asp del compuesto
de fórmula III para formar eptifibatide.
La invención también da a conocer procesos en
los que un residuo homoarginina protegido en amino terminal se
acopla con un residuo de glicina, formando de este modo el fragmento
2-3 de eptifibatide de fórmula:
P_{1}-Har-Gly-OH-
También se dan a conocer procesos en los que un
residuo ácido aspártico con una cadena lateral carboxílica
protegida se acopla a un dipéptido
triptofanil-prolilo a través del residuo
triptofanilo del dipéptido, formando de este modo el fragmento de
eptifibatide 4-6 protegido de fórmula:
P_{3}-Asp(O-P_{2})-Trp-Pro-OH.
Tras la desprotección, el fragmento de
eptifibatide 2-3 y el fragmento de eptifibatide
4-6 pueden acoplarse a su vez a través de la unión
del residuo Gly del fragmento de eptifibatide 2-3 al
residuo Asp del fragmento de eptifibatide 4-6,
formando de este modo un fragmento de eptifibatide
2-6 de fórmula:
P_{1}-Har-Gly-Asp(O-P_{2})-Trp-Pro-OH
en la que Har es homoarginilo; Gly
es glicilo; Asp es aspartilo; Trp es triptofanilo; Pro es prolilo;
P_{1} es un grupo protector de amino; y P_{2} es un grupo
protector de carboxilo. En realizaciones preferentes, el fragmento
de eptifibatide 2-6 se acopla a un residuo
cisteinamida activado a través del residuo Pro del fragmento de
eptifibatide 2-6, formado de este modo un fragmento
de eptifibatide 2-7 de
fórmula:
P_{1}-Har-Gly-Asp(O-P_{2})-Trp-Pro-Acys-NH_{2}
en la que
ACys-NH_{2} es un residuo cisteinamida activada.
Puede unirse un residuo ácido mercaptopropiónico al fragmento de
eptifibatide 2-7 mediante una unión disulfuro entre
el residuo ácido mercaptopropiónico y el residuo
ACys-NH_{2} del fragmento de eptifibatide
2-7, formando de este modo un compuesto de fórmula
I:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
en la que Mpa es ácido
mercaptopropiónico; Cys-NH_{2} es cisteinamida. La
eliminación de P_{1} del residuo Har del compuesto de fórmula I
da lugar al compuesto de fórmula
II:
\vskip1.000000\baselineskip
el acoplamiento de los residuos Har
N-terminal y Mpa C-terminal de este
compuesto da lugar a un compuesto de fórmula
III:
y la eliminación subsiguiente de
P_{2} del residuo Asp da lugar a
eptifibatide.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención también de a conocer
productos obtenidos mediante los procesos descritos, tales como los
compuestos de fórmula IV:
en la que R_{1} es hidrógeno o
P_{1}; P_{1} es un grupo protector de amino; y P_{2} es un
grupo protector de carboxilo. Como otros compuestos representativos
de la invención se incluyen
Fmoc-Har-Gly-OH,
Fmoc-Har-Gly-O-P_{4}
y
Fmoc-Har-Gly-Asp(O-P_{5})-Trp-Pro-OH
en los que P_{4} y P_{5} son grupos protectores de carboxilo.
En algunas realizaciones, la invención da a conocer composiciones
que comprenden eptifibatide y menos de un 1% de algunas impurezas
del
proceso.
\vskip1.000000\baselineskip
En un aspecto, la presente invención da a
conocer procesos convergentes para la preparación de eptifibatide
que suponen la preparación de un fragmento de eptifibatide
2-3, la preparación de un fragmento de eptifibatide
4-6 y el acoplamiento de los fragmentos de
eptifibatide 2-3 y 4-6 formando un
fragmento de eptifibatide 2-6. Algunos de estos
procesos suponen el acoplamiento del fragmento de eptifibatide
2-6 a un residuo cisteinamida activada formando un
fragmento de eptifibatide 2-7, la formación de un
enlace disulfuro entre ácido mercaptopropiónico y el fragmento de
eptifibatide 2-7 formando el Precursor A, la
realización del acoplamiento peptídico intramolecular del Precursor
A y la eliminación de los grupos protectores del producto de
acoplamiento dando lugar a eptifibatide.
En realizaciones adicionales, la presente
invención hace referencia a productos producidos mediante los
procesos descritos para la preparación de eptifibatide. En otras
realizaciones, la invención hace referencia a compuestos novedosos
que pueden utilizarse como intermedios para la preparación de
eptifibatide. En realizaciones adicionales, la invención hace
referencia a compuestos que son estructuralmente similares a
eptifibatide.
Tal como se utiliza en la presente invención, el
término "grupo protector de carboxilo" hace referencia a un
grupo que puede unirse selectivamente y eliminarse de un grupo
carboxilo, para evitar que éste participe en reacciones químicas no
deseadas, sin efectos adversos inaceptables en las reacciones
deseadas. Como ejemplos de grupos protectores de carboxilo se
incluyen ésteres, tales como metilo, etilo,
t-butilo, bencilo no substituido o substituido y
ésteres de sililo, entre otros. Otros grupos protectores de
carboxilo son bien conocidos en la técnica y se describen en
detalle en "Grupos protectores en síntesis orgánica"
("Protecting Groups in Organic Synthesis"), Teodora W. Greene
y Peter G. M. Wuts, 3ª edición, 1999, publicado por John Wiley and
Sons, Inc.
Tal como se utiliza en la presente invención, el
término "grupo protector de amino" hace referencia a un grupo
que puede unirse selectivamente y eliminarse de un átomo de
nitrógeno para evitar que éste participe en reacciones químicas no
deseadas, sin efectos adversos inaceptables en las reacciones
deseadas. Como ejemplos de grupos protectores de amino se incluyen
carbamatos tales como Boc, Cbz, Fmoc, alloc, carbamatos de metilo y
etilo, entre otros; derivados de imida cíclicos, tales como
ftalamida,; amidas, tales como formilo, acetilo no substituido y
substituido, y benzolilo; grupos trialquil sililo, tales como
t-butildimetilsililo y triisopropilsililo. Otros
grupos protectores de amino son bien conocidos en la técnica y se
describen en detalle en "Grupos protectores en síntesis
orgánica" ("Protecting Groups in Organic Synthesis"),
Teodora W. Greene y Peter G. M. Wuts, 3ª edición, 1999, publicado
por John Wiley and Sons, Inc.
Tal como se utiliza en la presente invención, el
término "acoplamiento" y todas las variaciones del mismo, hace
referencia a la formación de un enlace amida, por cualquier medio,
entre los grupos que se unen.
Tal como se utiliza en la presente invención, el
término "unión" y todas las variaciones del mismo, hace
referencia a la formación de un enlace amida o disulfuro, por
cualquier medio que puede utilizarse para formar un enlace amida o
disulfuro, entre los grupos que se unen.
Tal como se utiliza en la presente invención, el
término "residuo cisteinamida activado" hace referencia a un
residuo cisteinamida que es capaz de formar un enlace disulfuro con
ácido mercaptopropiónico.
Tal como se utiliza en la presente invención, el
término "Gly-eptifibatide" hace referencia a un
compuesto que está relacionado estructuralmente a eptifibatide pero
que contiene dos residuos de glicina adyacentes en lugar de un solo
residuo glicina.
Todos los residuos de aminoácidos a los que se
hace referencia en la presente invención son aminoácidos naturales
que poseen una configuración L.
\newpage
El eptifibatide posee la siguiente estructura
química:
El eptifibatide también puede representarse con
designaciones de aminoácidos del siguiente modo:
correspondiendo las designaciones
de aminoácidos al gráfico químico mostrado a
continuación:
Para facilitar la descripción, también pueden
numerarse los residuos de (1) a (7). El residuo (1) es el ácido
mercaptopropiónico; (2) es homoarginilo (Har); (3) es glicilo (Gly);
(4) es aspartilo (Asp); (5) es triptofanilo (Trp); (6) es prolilo
(Pro); y (7) es cisteinamida (Cys-NH_{2}).
En algunas realizaciones, la presente invención
hace referencia a procesos convergentes para la preparación de
eptifibatide. En una primera secuencia de etapas, se prepara un
fragmento de eptifibatide 2-3 que contiene los
aminoácidos (2) y (3). En una segunda secuencia, se prepara un
fragmento de eptifibatide 4-6 que contiene los
aminoácidos (4), (5) y (6). A continuación se acoplan los dos
fragmentos dando lugar a un único fragmento 2-6,
que es un pentapéptido. El fragmento de eptifibatide
2-6 se protege en el extremo aminoterminal del
residuo Har y en la cadena lateral carboxilo de aspartilo. El
esquema 1 resume un proceso ejemplar para la preparación del
fragmento de eptifibatide 2-6:
Esquema
1
Preparación del fragmento
2-6 de
eptifibatide
\vskip1.000000\baselineskip
La secuencia A del Esquema 1 muestra la
preparación del fragmento 2-3 de eptifibatide y la
secuencia B muestra la preparación del fragmento
4-6 de eptifibatide. Las dos secuencias convergen
para dar lugar al fragmento 2-6 de eptifibatide.
Aunque el Esquema 1 muestra grupos protectores de aminoácidos
ejemplares, deberá apreciarse por los expertos en la técnica de la
síntesis de péptidos que también pueden utilizarse otros grupos
protectores de aminoácidos. Por ejemplo, en lugar de Fmoc
(9-fluorenilmetoxicarbonilo), pueden utilizarse
otros grupos protectores del tipo carbamato tales como Cbz
(benciloxicarbonilo), RCbz (grupos benciloxicarbonilo substituidos
en el anillo aromático),
9(2-sulfo)fluorenilmetilcarbamato,
9(2,7-dibromo)fluorenilmetilcarbamato,
2-cloro-3-indenilmetilcarbamato,
Benz[f]inden-3-ilmetilcarbamato,
o Alloc (Aliloxicarbonilo).
El éster de t-butilo en el
residuo aspartilo puede sustituirse por cualquier otro grupo
protector que pueda ser escindido mediante tratamiento ácido como,
por ejemplo, ODpm (éster de difenilmetilo) o grupos que pueden ser
escindidos mediante hidrogenolisis como, por ejemplo, OBzl (éster de
bencilo).
El grupo Fmoc-Har en los
fragmentos de eptifibatide mostrados en la Secuencia A del Esquema 1
pueden sustituirse por R_{NP1}-Har, siendo
R_{NP1} un grupo protector de amino como, por ejemplo, un grupo
Cbz (benciloxicarbonilo), un grupo RCbz (benciloxicarbonilo
substituido en el anillo aromático), o un grupo Alloc
(Aliloxicarbonilo). De forma similar, el grupo
Z-Asp (o Cbz-Asp) en los fragmentos
de eptifibatide mostrados en la Secuencia B puede sustituirse por
R_{NP2}-Asp, siendo R_{NP2} un grupo protector
de amino que puede escindirse en condiciones básicas como, por
ejemplo, Fmoc (fluorenilmetiloxicarbonilo) o en el que R_{NP2} es
un grupo protector de amino que puede escindirse mediante
hidrogenelisis como, por ejemplo, un grupo RCbz (grupo protector
benciloxicarbonilo substituido en el anillo aromático). Además, el
grupo -OtBu mostrado en el Esquema 1 puede sustituirse por
R_{CP}, siendo R_{CP} un grupo protector de carboxilo que puede
escindirse mediante tratamiento ácido como, por ejemplo, un grupo
ODpm (éster de difenilmetilo). Pfp (pentafluorofenilo) puede
sustituirse por R_{L1,} siendo R_{L1} un grupo activador de
carboxilo; Su (succinimida) puede sustituirse por R_{L2}, siendo
R_{L2} un grupo activador de carboxilo. Independientemente de la
naturaleza del fragmento, tanto Pfp como Su pueden sustituirse por
otros ésteres activos estables como, por ejemplo, ésteres mono y
dinitrofenilo, ésteres tri- y pentafenilo. Se apreciará por los
expertos en la técnica que la selección de grupos protectores
concretos depende de la identidad de los otros grupos protectores
que estén presentes en el mismo compuesto. En algunas realizaciones
de la invención, se selecciona un grupo protector concreto de manera
que pueda ser eliminado de forma selectiva bajo condiciones de
reacción que no afecten a otros grupos protectores.
En algunas realizaciones de la invención, el
fragmento de eptifibatide 2-6 se acopla a
continuación a una cisteinamida "activada" (7), tal como, por
ejemplo,
3-nitro-2-piridinsulfenil-cisteinamida
(H-Cys(Npys)-NH_{2}); Nps
(2-nitro-fenilsulfenilo);
S-feniltiocisteinamida, en la que el anillo fenilo
se halla substituido; S-alquiltiocisteinamida; o el
S-sulfonato y los
S-sulfeniltiocarbonatos de cisteinamida, dando lugar
al fragmento hexapéptido 2-7 de eptifibatide. El
residuo restante de eptifibatide es el ácido mercaptopropiónico o
Mpa-OH (1). Mpa-OH se une al
fragmento hexapéptido 2-7 bajo condiciones que
forman un enlace disulfuro entre 1 y el fragmento
2-7. La pieza disulfuro resultante, denominada en la
presente invención como Precursor A, es un precursor clave y
novedoso para la síntesis de eptifibatide. A continuación se muestra
la estructura del precursor A:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en el que P_{1} es un grupo
protector de amino y P_{2} es un grupo protector de carboxilo.
Preferentemente, el grupo P_{2} es estable bajo condiciones
adecuadas para la eliminación del grupo P_{1}. La selección de
grupos P_{1} y P_{2} compatibles que permitan la eliminación
selectiva de uno solo de los grupos es bien conocida en la técnica.
Un ejemplo de un par de grupos protectores compatibles es P_{1} =
Fmoc, que puede eliminarse bajo condiciones básicas, y P_{2} =
t-butilo, el cual es estable bajo las mismas
condiciones.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Esquema pasa a página
siguiente)
\newpage
El esquema 2 resume un proceso ejemplar para la
preparación del Precursor A:
Esquema
2
Preparación del Precursor A a
partir de
2-6
Al igual que en el Esquema 1, los grupos Fmoc y
t-butilo mostrados en el Esquema 2 pueden
sustituirse por otros grupos protectores conocidos reconocidos
generalmente como útiles en la síntesis de péptidos.
En algunas realizaciones de la invención, la
eliminación del grupo protector P_{1} del Precursor A da lugar a
otro precursor, el Precursor B, que es la parte
2-7-1 de eptifibatide:
El precursor B puede convertirse, mediante un
acoplamiento peptídico intramolecular, en el Precursor C:
El acoplamiento peptídico intramolecular puede
llevarse a cabo, por ejemplo, en un solvente orgánico en presencia
de un reactivo de acoplamiento adecuado como, por ejemplo, un agente
de acoplamiento del tipo uronio tales como, pero sin que sirva de
limitación, tetrafluorocarbonato de
O-[ciano(etoxicarbonil)pietilenamino]-N,N,N',N'-tetrametiluronio
(TOTU), HBTU, o TBTU (respectivamente hexafluorofosfato y
tetrafluoroborato de
2-(1H-Benzotriazolelil)-1,1,3,3-tetrametiluronio);
un reactivo tipo carbodiimida tal como, pero sin que sirva de
limitación, DCC (diciclohexilcarbodiimida), DIC
(diisopropilcarbodiimida), o EDC
(1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida);
ésteres activos o reactivos de acoplamiento del tipo fosfonio tales
como, por ejemplo, Bop (hexafluorofosfato de
benzotriazol-1-iloxi-tri(dimetilamino)-fosfonio
o PyBOP (hexafluorofosfato de
benzotriazol-1-iloxi-tri(pirrolidino)-fosfonio).
El acoplamiento peptídico se describe, por ejemplo en Humphrey y
Chamberlin, Chem. Rev.1997, 97, 2243-2266,
incorporado a la presente invención como referencia en su
totalidad.
La eliminación del grupo protector P_{2} del
Precursor C da lugar a eptifibatide. La eliminación de P_{2}
puede llevarse a cabo, por ejemplo, en un solvente orgánico en
presencia de un ácido, una base o cualquier otro reactivo o sistema
de reactivos en el cual el grupo protector es lábil. El Esquema 3
resume un proceso ejemplar para la preparación de eptifibatide a
partir del Precursor A:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
3
Preparación de eptifibatide a
partir del Precursor
A
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Tras la eliminación del grupo protector Fmoc, el
fragmento 2-7-1 sufre un
acoplamiento peptídico intramolecular dando lugar al éster
t-butilo de eptifibatide. La eliminación del grupo
t-butilo del residuo aspartilo da lugar a
eptifibatide.
\newpage
En algunas realizaciones, la presente invención
también hace referencia a compuestos que son estructuralmente
similares a eptifibatide y que se preparan de acuerdo con procesos
que son similares a los procesos descritos anteriormente en la
presente invención para la preparación de eptifibatide. Entre dichos
compuestos se incluyen, por ejemplo,
Gly-eptifibatide, el cual contiene dos residuos de
glicina adyacentes, en lugar de un único residuo glicina como en
eptifibatide:
Gly-eptifibatide puede
prepararse, por ejemplo, de acuerdo con el procedimiento descrito
anteriormente para la preparación de eptifibatide, a excepción de
que se acopla un dipéptido Gly-Gly a homoarginina
para formar lo que corresponde al fragmento de eptifibatide
2-3, en lugar de acoplar glicina a homoarginina para
formar el fragmento. Por ejemplo, de acuerdo con este procedimiento
modificado, el grupo H-Gly-OtBu (3)
mostrado en el Esquema 1 es sustituido por
H-Gly-Gly-OtBu.
En algunas realizaciones de la invención,
también se produce Gly-eptifibatide durante la
preparación de eptifibatide de acuerdo con los métodos descritos
anteriormente para la preparación de eptifibatide. Algunas
realizaciones de la presente invención hacen referencia a
composiciones que comprenden eptifibatide y
Gly-eptifibatide, incluyendo composiciones que
comprenden al menos un 99% de eptifibatide y
Gly-eptifibatide entre un 0,01% y un 1% y
composiciones que comprenden al menos un 99% de eptifibatide y
Gly-eptifibatide entre un 0,01% y un 0,1%.
El acoplamiento de los residuos de aminoácidos
que se produce en los procesos descritos puede llevarse a cabo
mediante métodos conocidos de síntesis de péptidos que son
familiares para los expertos en la técnica. Puede emplearse
cualquier procedimiento de acoplamiento adecuado para formar
péptidos.
Los ejemplos siguientes son ilustrativos de
algunas realizaciones de la invención y no debe considerarse que
limiten el ámbito de la presente invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
1
Z-Asp(OtBu)-Trp-Pro-OH
se obtuvo mediante procedimientos conocidos partiendo de
Z-Asp(OtBu)-OSu y
H-Trp-Pro-OH
disponibles comercialmente tal como se describe, por ejemplo, en
Bodanszky, M. (1979), "Esteres activos en la síntesis de
péptidos. Los péptidos" ("Active esters in peptide synthesis,
The peptides"), Vol. 1 (ed. E. Gross y J. Meienhofer), Capítulo
3. Academic Press, Londres, que se incorpora a la presente invención
como referencia en su totalidad.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2
Se añadieron a un reactor de 2 litros cargado
con dimetilacetamida (DMAC, 1,2 L) a una temperatura de
aproximadamente 20ºC, 0,300 kg de material de partida
Z-Asp(OtBu)-Trp-Pro-OH,
manteniendo la temperatura a aproximadamente 20ºC. Se permitió que
el
Z-Asp(OtBu)-Trp-Pro-OH
se disolviera y a continuación se purgó y cubrió la mezcla de
reacción con una atmósfera de nitrógeno. Se añadió a la mezcla de
reacción paladio sobre carbono (5% en peso) (0,015 kg), seguido de
hidrogenación a una presión de 2 bar mientras que se mantenía la
mezcla de reacción a aproximadamente 20ºC.
Tras dos horas, y cada hora a partir de ese
momento, se analizó una muestra de la reacción mediante HPLC
(cromatografía líquida de alta resolución). El análisis HPLC se
realizó en una columna Purospher Star C18 de 55*4 mm con una mezcla
solvente de agua/acetonitrilo con un 0,1% de ácido tifluoroacético
(TFA) con un gradiente 98:2 agua/acetonitrilo a 2:98
agua/acetonitrilo en 10 minutos. La detección de HPLC se realizó a
215 nm, el flujo fue de 2,0 mL/min y la temperatura de 40ºC.
La reacción se consideró completa cuando el
análisis HPLC mostró que los materiales de partida eran inferiores
o iguales a un 0,2% en relación con el porcentaje del área del
producto. Cuando la reacción se mostró completa por HPLC, se añadió
a la mezcla de reacción una solución acuosa de ácido
p-toluensulfónico (0,094 kg p-TsOH
en 0,150 L de agua). A continuación se filtró la mezcla de reacción
a través de Celite® que se había pre-lavado con
DMAC (Celite® lavado tres veces con 0,6 L). Tras la filtración de la
mezcla de reacción, se lavó tres veces la torta de filtro con DMAC
fresco (0,3 L). Se realizó un análisis mediante HPLC tras el último
lavado para confirmar que no quedaba producto en la torta de
filtro.
A continuación se transfirieron los filtrados
combinados a un nuevo recipiente a aproximadamente 20ºC, temperatura
a la cual se añadió N-etilmorfolina (0,066 L). La
temperatura se mantuvo por debajo de aproximadamente 22ºC durante la
adición. A continuación, se enfrió la mezcla a aproximadamente
8-12ºC y se añadió lentamente agua (3 L) de manera
que se mantuviera la temperatura por debajo de aproximadamente 15ºC.
A continuación, se agitó la mezcla a aproximadamente
8-12ºC durante aproximadamente 30 minutos y se
mantuvo a dicha temperatura durante 8 horas. Durante este período
de tiempo el producto cristalizó a partir de la solución. Puede
analizarse el sobrenadante mediante HPLC para determinar la
cantidad de producto que permanece en la solución y determinar si
es necesario un enfriamiento adicional. La pasta obtenida se filtró
y los sólidos recolectados se lavaron dos veces con una solución
2:1 de agua:DMAC (0,9 L cada vez). A continuación se lavaron los
sólidos dos veces con acetonitrilo (0,9 L cada vez) y se secaron
bajo vacío a una temperatura inferior a aproximadamente 25ºC hasta
conseguir un peso constante. El contenido de agua tras el secado fue
de un 3,5% (análisis de Karl-Fisher).
Se analizó el producto mediante HPLC de fase
inversa utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético
acuoso/acetonitrilo.
Un análisis LC/MS confirmó la masa [M^{+}H]
473,0 de
H-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-OH.
El rendimiento de recuperación fue del 93,2%
(0,218 kg), el rendimiento neto fue del 93,1% (sobre la base del
contenido en nitrógeno: 95,4%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
Se añadió a una pasta de
Fmoc-Har-Gly-OH
(peso neto 0,163 kg; sobre la base del contenido en péptido: 90,5%)
en THF:DMAC (0,717 L y 0,179 L respectivamente) ácido metansulfónico
(0,027 L) y pentafluorofenol (0,083 kg). Se agitó la mezcla a
aproximadamente 20ºC hasta que se disolvió el sólido. Se añadió gota
a gota N-etilmorfolina (NEM) (0,030 L), y a
continuación diciclohexilcarbodiimida (DCC) (0,072 kg) en THF (0,179
L) y se agitó la mezcla a aproximadamente 20ºC. La formación de
Fmoc-Har-Gly-OPfp
fue seguida de HPLC. Tras aproximadamente 17 horas, la relación
Fmoc-Har-Gly-OH/Fmoc-Har-Gly-OPfp
fue de 1,5/98,5.
Se añadió a la mezcla de reacción
H-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-OH
(0,146 kg, aproximadamente 3,5% peso/peso en H_{2}O) y NEM (0,049
L). Se agitó la mezcla a aproximadamente 20ºC durante 3 horas. En
ese momento, el análisis HPLC mostró que la muestra contenía
aproximadamente un 87% de producto, menos de un 2% de
Fmoc-Har-Gly-OPfp,
un 6% de
Fmoc-Har-Gly-OH,
aproximadamente un 0,5% de
H-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-OH,
y aproximadamente un 5,5% de una impureza identificada como
Fmoc-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-OH
("impureza d.a"). El análisis HPLC se realizó en una columna
Purospher Star C18 55*4 mm con una mezcla de solvente
agua/acetonitrilo que contenía un 0,1% de ácido trifluoroacético
(TFA) con un gradiente de 98:2 agua/acetonitrilo a 2:98
agua:acetonitrilo en 10 minutos. La detección de HPLC se realizó a
215 nm, el flujo fue de 2,0 mL/min y la temperatura de 40ºC.
La mezcla de reacción se filtró y el sólido se
lavó dos veces con una mezcla 5/1 de THF/DMAC (2 x 0.489 L). Se
concentró el filtrado a aproximadamente 0.815 L a una temperatura no
superior a 35ºC bajo presión reducida (aproximadamente 20 mBar). La
mezcla concentrada se añadió lentamente durante 1 hora a una mezcla
1/4 de acetonitrilo/H_{2}O (4,1 L) que contenía bicarbonato
sódico (0,059 kg). La velocidad de adición se controló
cuidadosamente para evitar la formación de un precipitado pegajoso.
Se añadió aproximadamente un 3,5% de la solución durante 15
minutos, y se interrumpió la adición para agitar la pasta a
aproximadamente 20ºC durante una hora. El precipitado pastoso se
convirtió en una pasta blanca. Se añadió un 7,5% más de la solución
durante 15 a 30 minutos, y se interrumpió la adición para agitar de
nuevo la pasta a aproximadamente 20ºC durante 2 horas. El 89%
restante de la solución se añadió en aproximadamente 12 horas. Se
agitó la mezcla a aproximadamente 20ºC durante 12 horas y a
continuación se filtró. El sólido se lavó con una mezcla 1/4 de
acetonitrilo/H_{2}O (3 x 0,7 L), una mezcla 2/3 de
acetonitrilo/di-isopropileter (DIPE) (3 x 0,7 L) y
DIPE (2 x 0,7 L). El producto sólido se secó a una temperatura
\leq a 30ºC hasta conseguir un peso constante. El contenido de
agua tras el secado fue de un 3,3% (análisis
Karl-Fisher).
Karl-Fisher).
El producto se analizó mediante HPLC inversa
utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético
acuoso/acetonitrilo.
El análisis LC/MS confirmó la masa [M^{+}H]
922,5 de
Fmoc-Har-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-OH.
El rendimiento de recuperación fue del 81,8%
(0,234 kg); el rendimiento neto fue del 82,3% (sobre la base del
contenido en nitrógeno: 96,0%).
\newpage
Ejemplo
4
Se añadió a un reactor cargado con DMF grado
para la síntesis de péptidos (0,675 L) a aproximadamente 20ºC,
Fmoc-Har-Gly-Asp(OtBu)-Trp-Pro-OH
(0,225 kg). Se enfrió la mezcla a aproximadamente 0ºC, y se añadió
H-Cys(NPys)-NH_{2} en
forma de sal hidrocloruro sólida (0,080 kg). Se añadió a la mezcla
de reacción tetrafluoroborato de
O-Benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametiluronio
(TBTU) (0,082 kg). Se ajustó el pH de la mezcla de reacción a entre
6,5 y 7,0 mediante la adición de fracciones de
di-isopropiletilamina (DIPEA) (0,112 L), manteniendo
la temperatura a aproximadamente 0ºC. Se agitó la mezcla a dicha
temperatura, analizando muestras mediante HPLC para determinar la
formación de producto cada aproximadamente 45 minutos. El pH de la
mezcla de reacción se mantuvo entre pH 6,5 y 7,0 mediante la adición
de DIPEA según fuera necesario. El análisis HPLC se realizó en una
columna Platinum EPS 100-5 C18 5 \mu de 250*4,6
mm; Solvente A: TFA al 0,1% en agua; Solvente B: TFA al 0,1% en
acetonitrilo; gradiente: 12 a 98% B en 15 minutos. La detección de
los productos de HPLC se realizó a 215 nm, flujo 2,0 mL/min y
temperatura de 40ºC. La reacción se consideró completa cuando se
mostró que los materiales de partida pentapéptido y
Cys(NPys)-NH_{2} eran ambos inferiores al
1% mediante HPLC. Por otro lado, se añadieron TBTU, DIPEA y el
material de partida que se mostrará deficiente en la mezcla.
La mezcla de reacción se añadió a otro
recipiente que contenía agua (4,5 L) a una temperatura de
aproximadamente 5ºC. Se mantuvo esta temperatura durante la adición
con agitación. Tras la agitación durante 10 minutos a
aproximadamente 5ºC, se filtró la mezcla y se lavó el sólido cinco
veces con agua (0,9 L en cada ocasión). A continuación, se lavó el
sólido tres veces con tolueno (0,675 L en cada ocasión). Los lavados
con tolueno pueden sustituirse por lavados con
di-isopropil éter. Se secó el sólido bajo vacío a
una temperatura de 35ºC o inferior hasta conseguir un peso
constante. El contenido en agua tras el secado fue del 1,2%
(análisis de Karl-Fisher).
El producto se analizó mediante HPLC inversa
utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético
acuoso/acetonitrilo.
El análisis LC/MS confirmó la masa [M^{+}H] de
1178,4 de
Fmoc-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NPys)NH_{2}.
El rendimiento de recuperación fue de 102,4%
(0,295 kg) y el rendimiento neto de 87,7% (sobre la base del
contenido en péptido: 82,0%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
5
Se añadió lentamente y con agitación a un
reactor cargado con acetonitrilo de calidad HPLC (0,570 L) y DMF
grado de síntesis de péptidos (0,285 L) bajo una atmósfera de
nitrógeno a aproximadamente 20ºC, 0,285 kg de
Fmoc-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NPys)NH_{2}
(Fmoc[2-7]). Tras la disolución de
Fmoc[2-7], se enfrió la mezcla a
aproximadamente -3ºC. Se añadió a la mezcla de reacción una solución
de ácido mercaptopropiónico (Mpa, 0,023 kg) en acetonitrilo (0,057
L), preparada a aproximadamente 20ºC, a una velocidad adecuada para
mantener la temperatura de reacción a aproximadamente -3ºC. La
reacción se controló mediante HPLC y se consideró completa cuando
el análisis mostró menos de un 1% de
Fmoc[2-7] en comparación con el contenido de
Fmoc[2-7-1]. El análisis
HPLC se realizó en una columna Purospher Star C18 de 55*4 mm con una
mezcla de solventes agua/acetonitrilo con un 0,1% de ácido
trifluoroacético (TFA) con un gradiente de 98:2 agua/acetonitrilo a
2:98 agua:acetonitrilo en 10 minutos. La detección de HPLC se
realizó a 215 nm, el flujo fue de 2,0 mL/min y la temperatura de
40ºC.
Se añadió la mezcla de reacción a un segundo
recipiente cargado con acetonitrilo de calidad HPLC (5,7 L) y
N-etilmorfolina (NEM, 0,033 L) a aproximadamente
20ºC. Tras completar la adición, se agitó la reacción a dicha
temperatura durante aproximadamente 30 minutos. Se enfrió lentamente
la pasta a aproximadamente 0ºC y se continuó la agitación a dicha
temperatura durante aproximadamente 45 minutos. A continuación se
realizó tres veces el siguiente procedimiento: (a) se detuvo la
agitación para permitir la separación del precipitado y el
sobrenadante; (b) se bombeó el sobrenadante fuera del recipiente;
(c) se añadió acetonitrilo de calidad HPLC fresco (1,425 L) al
reactor a aproximadamente 0ºC y se reinició la agitación; y (d) se
agitó la pasta durante aproximadamente 5 minutos a aproximadamente
0ºC. Se filtró la pasta restante, y se lavó el sólido dos veces con
acetonitrilo de calidad HPLC (1,140 L en cada ocasión) y una vez
con tolueno (1,425 L). El lavado con tolueno puede sustituirse por
un lavado con diisopropil éter. Se secó el sólido bajo alto vacío a
una temperatura no superior a 20ºC.
El producto se analizó mediante HPLC de fase
inversa utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético
acuoso/acetonitrilo.
El análisis LC/MS confirmó la masa [M^{+}H] de
1128,4 de
Fmoc-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NH_{2})-Mpa.
El rendimiento de recuperación fue del 93,8%
(0,256 kg); el rendimiento neto fue cuantitativo (sobre la base del
contenido en péptido: 87,4%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
6
A un reactor cargado con DMF grado de síntesis
de péptidos (0,750 L) a aproximadamente 20ºC, se añadieron
lentamente y con agitación 0,250 kg de
Fmoc-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NH_{2})-Mpa
(Fmoc[2-7-1]. Se enfrió la
mezcla a aproximadamente 10ºC y a dicha temperatura se añadió
dietilamina (0,034 L). Tras la adición de dietilamina, se dejó que
se incrementara la temperatura de la mezcla a aproximadamente 20ºC.
Se controló la progresión de la reacción mediante análisis HPLC de
muestras tomadas cada hora. El análisis HPLC se realizó en una
columna Platinum EPS 100-5 C18 5 \mu de 250*4,6
mm; Solvente A: TFA 0,1% en agua; Solvente B: TFA 0,1% en
acetonitrilo; gradiente 22 a 98% en 15 minutos. La detección de los
productos de HPLC se realizó a 215 nm, el flujo fue de 2,0 mL/min y
la temperatura de 40ºC. La reacción se consideró completa cuando el
porcentaje de Fmoc [2-7-1] fue
inferior a aproximadamente el 0,5% respecto al
[2-7-1]. La reacción se completó
habitualmente a las 3 horas.
Se añadió la mezcla de reacción a un segundo
recipiente cargado con acetato de etilo (5,0 L) y se enfrió a
aproximadamente 10ºC. Se agitó la suspensión resultante durante 10
minutos a aproximadamente 10ºC. A continuación se realizó dos veces
el siguiente procedimiento: (a) se detuvo la agitación y se permitió
la separación del precipitado y el sobrenadante durante 15 minutos
aproximadamente; (b) se bombeó el sobrenadante fuera del
recipiente; (c) se añadió acetato de etilo fresco (0,750 L) a
aproximadamente 10ºC; (d) se agitó la suspensión durante
aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 10ºC. Se filtró la
pasta, y se lavó el sólido 6 veces con acetato de etilo (0,750 L en
cada ocasión). Pueden realizarse lavados adicionales con diisopropil
éter para eliminar los restos de acetato de etilo. Se secó el
sólido bajo alto vacío a una temperatura no superior a 25ºC durante
un máximo de 18 horas.
El producto se analizó mediante HPLC de fase
inversa utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético
acuoso/acetonitrilo.
El análisis LC/MS confirma la masa [M^{+}H] de
906,3 de
H-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NH_{2})-Mpa.
Un análisis GC demostró un 3,4% de dietilamina
residual.
El rendimiento de recuperación fue del 106,1%
(0,213 kg) y el rendimiento neto del 99,2% (sobre la base del
contenido en péptido: 81,9%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
7
Se cargó el reactor con DMF grado de síntesis de
péptidos (0,768 L) y se enfrió la solución a aproximadamente 10ºC.
Se añadió tetrafluoroborato de
O-[ciano(etoxicarbonil)metilenamino]-N,N,N',N'-tetrametiluronio
(TOTU) (0,070 kg) y a continuación se diluyó con diclorometano
grado de síntesis de péptidos (1,536 L) mientras se mantenía la
temperatura por debajo de los 15ºC. Se enfrió la solución resultante
a aproximadamente -6ºC y se añadió NEM (0,024 L) en pequeñas
cantidades manteniendo la temperatura a aproximadamente -6ºC. Se
determinó el pH antes y después de la adición de NEM. Se tomó una
muestra para análisis mediante HPLC.
El análisis HPLC se realizó en una columna
Phenomenex Luna C18(2), 5 \mum, 150*4,6 mm; gradiente 12 a
98% B en 15 minutos. Solvente A: TFA 0,1% en agua, solvente B: TFA
0,1% en acetonitrilo. La detección se realizó a 215 nm, el flujo
fue de 2,0 mL/min y la temperatura de 40ºC.
Se cargó un reactor diferente con DMF grado de
síntesis de péptidos (0,768 L) a aproximadamente 20ºC y a
continuación 0,192 kg de
H-Har-Gly-Asp(O-tBu)-Trp-Pro-Cys(NH_{2})-Mpa
([2-7-1]). Una vez disuelto el
sólido se enfrió la solución resultante a aproximadamente 0ºC. Se
añadió HOBt (0,026 kg) en pequeñas cantidades (el peso de HOBt se
corrigió respecto a la pureza). Se diluyó la solución resultante con
diclorometano grado de síntesis de péptidos (0,384 L). Se tomó una
muestra para análisis mediante HPLC.
Se añadió muy lentamente la solución de
[2-7-1] a la solución de TOTU
mediante una bomba de adición durante un mínimo de 3 horas
manteniendo la temperatura a aproximadamente -6ºC. Se tomó una
muestra tras la adición del 50% de
[2-7-1] para análisis mediante HPLC.
También se determinó el pH en este punto. También se tomaron
muestras para análisis mediante HPLC y determinación de pH tras
completar la adición de [2-7-1]. Se
ajustó el pH a 7-7,5 mediante la adición de NEM en
caso necesario, manteniendo la temperatura a aproximadamente
-6ºC.
Se comprobó el pH cada 15 minutos y se ajustó a
7-7,5 en caso necesario con NEM manteniendo la
temperatura a aproximadamente -6ºC. Se tomó una muestra para
análisis mediante HPLC cada 45 minutos hasta que se completó el
ciclado. La reacción se consideró completa cuando el área porcentual
de [2-7-1] fue inferior al 0,5%
respecto al producto ciclado.
En caso de que la reacción se detenga, se añaden
1,1 equivalentes de TOTU por cantidad residual de
[2-7-1] y se ajustó el pH a
7-7,5 en caso necesario, manteniendo la temperatura
a aproximadamente -6ºC.
Cuando se completó la reacción, se concentró la
mezcla bajo vacío a una temperatura inferior a 40ºC hasta un
volumen de aproximadamente 0,8 L. Se enfrió la solución viscosa
resultante a aproximadamente 5ºC y se añadió lentamente a acetato
de etilo agitado rápidamente que se encontraba a aproximadamente 0ºC
(7,0 L). Se agitó la pasta resultante a aproximadamente 0ºC durante
20 minutos. A continuación se realizó tres veces el siguiente
procedimiento: (a) se detuvo la agitación para permitir la
separación del precipitado y el sobrenadante; (b) se bombeó el
sobrenadante fuera del recipiente; (c) se añadió al reactor acetato
de etilo fresco (1,15 L) a aproximadamente 0ºC y se reinició la
agitación; (d) se agitó la pasta durante aproximadamente 20 minutos
a aproximadamente 0ºC. La última vez que se realizó dicho
procedimiento, se añadió a la reacción un volumen menor de acetato
de etilo (0,768 L) y se reinició la agitación durante 10 minutos a
0ºC. Se filtró la pasta resultante, y se lavó el sólido una vez con
acetato de etilo (0,576 L) y tres veces con diisopropil éter (0,576
L). Se secó el sólido bajo alto vacío a aproximadamente
25ºC.
25ºC.
El producto se analizó mediante HPLC de fase
inversa utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético
acuoso/acetonitrilo.
El análisis LC/MS confirmó la masa [M^{+}H] de
888,2 del
(ciclo-[1-7](OtBu)-NH_{2}).
El rendimiento de recuperación fue del 103,7%
(0,194 kg), el rendimiento neto fue cuantitativo (sobre la base
del contenido en péptido: 79,7%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
8
Se preparó una mezcla de diclorometano (0,573
L), anisol (0,086 L) y TFA (0,122 L) a aproximadamente 20ºC. Se
enfrió la solución resultante a 15ºC y se añadió lentamente el
sólido [1-7](OtBu)-NH_{2} (0,191
kg). Durante la adición
[1-7](OtBu)-NH_{2} se mantuvo la
temperatura por debajo de los 20ºC. La mezcla de reacción se enfrió
adicionalmente a 10ºC y se añadió una cantidad adicional de TFA
(0,365 L) en aproximadamente 10 minutos. Durante la adición se
mantuvo la temperatura por debajo de los 20ºC. Tras la adición de
todo el TFA, se dejó la muestra en agitación a 20ºC y a
continuación se realizó una HPLC.
El análisis HPLC se realizó en una columna
Platinum EPS 100-5 C18, 250*4,6 mm. El gradiente fue
de 22 a 98% B en 15 minutos, siendo el solvente A TFA 0,1% en agua
y el solvente B TFA 0,1% en acetonitrilo. La detección se realizó a
215 nm, el flujo fue de 1,5 mL/min, y la temperatura de 40ºC. Se
completó la reacción cuando quedaba menos de un 3,0 del área
porcentual de [1-7](OtBu)-NH_{2}
respecto al producto.
Una vez completada la reacción, se enfrió la
mezcla a 10ºC y se añadió a una solución 2/1 de
di-isopropil éter (DIPE)/acetonitrilo (3,78 L) a
10ºC. Se agitó la pasta resultante durante 10 minutos a 10ºC y a
continuación se filtró bajo vacío. Se lavó el sólido tres veces con
una mezcla 7/3 de DIPE y acetonitrilo (0,573 L) y tres veces con
DIPE (0,573 L). El producto se secó a una temperatura no superior a
los 25ºC.
El producto se analizó mediante HPLC de fase
inversa utilizando un gradiente de ácido trifluoroacético
acuoso/acetonitrilo.
El análisis LC/MS confirmó la masa [M^{+}H] de
832,3 del
(ciclo-[1-7]-NH_{2}).
El rendimiento de recuperación fue de 0,157 kg
(87,9%) y el rendimiento neto fue del 87,2% (sobre la base del
contenido en péptido: 79,1%).
El contenido en API puro fue del 45,8%. Este
valor se obtuvo mediante el siguiente método de HPLC: Synergi
Max-RP 4 \mum 80\ring{A} 250*4,6 mm; solvente A:
52 mM H_{3}PO4/CH_{3}CN/100 mM H7SA (86/14/0.80); solvente B:
52 mM H_{3}PO4/CH_{3}CN/100mM H7SA (50/50/0,80); 220 nm; 1,3
mL/min; 50ºC; gradiente: 0%B durante 45 minutos, a continuación a
45% B durante 13 minutos, a continuación a 100% B durante 1
minuto.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
9
La purificación primaria fue una purificación
basada en ácido trifluoroacético/acetonitrilo. Las normas aplicadas
para las fracciones principales individuales fueron de \geq 92,0%.
La fase estacionaria fue una columna Kromasil C18, 10 \mum, 100 A
con un diámetro de 5 cm. La presión de la columna fue de 50 bar, la
velocidad de flujo fue de 50 mL/min, y la longitud de onda de
detección fue de 215 nm. Las fases móviles fueron las
siguientes:
- Solvente A:
- TFA 0,1% en agua procesada/CH_{3}CN (95/5); y
- Solvente B:
- TFA 0,1% en agua procesada/CH_{3}CN (50/50);
La columna se equilibró mediante la elución del
solvente A al 100% durante 15 minutos. El gradiente de purificación
fue el siguiente: elución de solvente A al 100% durante 10 minutos;
gradiente: 15% B a 45% B durante 60 minutos; y elución de solvente
B al 100% durante 15 minutos.
La purificación se controló utilizando el método
MAD-009-SF323TG1 y los objetivos de
los criterios de aceptación fueron los siguientes:
- Fracción principal (F1):
- \geq a 92%; y
- Fracción lateral (Fp):
- \geq a 60% e < a 92%.
Las fracciones recolectadas se almacenaron a una
temperatura entre 2ºC y 8ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
La purificación secundaria fue una purificación
basada en ácido acético/acetonitrilo. Las normas para las
fracciones principales individuales fueron de \geq 99,0% con
impurezas individuales <0,3/0,5%. La fase estacionaria fue una
columna Kromasil C18, 10 \mum, 100 A con un diámetro de 5 cm. La
presión de la columna fue de 40 \pm 5 bar, la velocidad de flujo
fue de 50 mL/min, y la detección se realizó a una longitud de onda
de 215 nm. Las fases móviles fueron las siguientes:
- Solvente A:
- AcOH 0,5% en agua procesada/CH_{3}CN (95/5); y
- Solvente B:
- AcOH 0,5% en agua procesada/CH_{3}CN (50/50).
La columna se equilibró mediante la elución del
solvente A al 100% durante 15 minutos. El gradiente de purificación
fue el siguiente: elución de solvente A al 100% durante 10 minutos;
gradiente: 0% B a 15% B durante 50 minutos; 15% B a 35% B durante
60 minutos y elución de solvente B al 100% durante 15 minutos.
La purificación se controló utilizando el método
MAD-009-SF323TG1 y los objetivos de
los criterios de aceptación fueron los siguientes:
- Fracción principal (F1):
- \geq a 99%; con impurezas < 0,3/0,5% y
- Fracción lateral (Fp):
- \geq a 80% e < a 99%.
\vskip1.000000\baselineskip
Las fracciones recolectadas se almacenaron a una
temperatura entre 2ºC y 8ºC.
Se realizó una etapa de desalinización doble en
solución de acetato de amonio antes de la etapa de concentración
para eliminar el contra-ión trifluoroacetato
residual y obtener la forma acetato del péptido. La etapa de
concentración redujo el volumen de la solución procesada.
La fase estacionaria para la desalinización en
NH_{4}OAc/concentración en AcOH fue una columna Kromasil C18, 10
\mum, 100 A con un diámetro de 5 cm. La presión de la columna fue
de 40 \pm 5 bar, la velocidad de flujo fue de 50 mL/min, y la
longitud de onda de detección fue de 215 nm. Las fases móviles
fueron las siguientes:
- Solvente A:
- AcOH 0,5% en agua procesada/CH_{3}CN (95/5);
- Solvente B:
- AcOH 0,5% en agua procesada/CH_{3}CN (50/50); y
- Solvente C:
- NH_{4}OAc 100 mM pH: 6,5 en agua procesada/CH_{3}CN (95/5).
La columna se equilibró mediante la elución del
solvente A al 100% durante 15 minutos. Para la carga de la columna,
se diluyó la fracción principal de la purificación en AcOH con 2
volúmenes de agua procesada.
La desalinización se realizó del modo siguiente:
10 minutos de solvente A; 10 minutos de solvente C; 10 minutos de
solvente A; y 10 minutos de solvente C.
La concentración se realizó del siguiente modo:
10 minutos de solvente A y solvente B al 50% durante 15 minutos.
La desalinización y concentración se controlaron
utilizando el método
MAD-009-SF323TG1 y los objetivos de
los criterios de aceptación fueron los siguientes:
- Fracción principal (F1):
- \geq a 99%; con impurezas < 0,3/0,5% y
- Fracción lateral (Fp):
- \geq a 80% e < a 99%.
Las fracciones recolectadas se almacenaron a una
temperatura entre 2ºC y 8ºC.
Claims (33)
1. Proceso que comprende:
proporcionar un compuesto de fórmula II:
en la
que
Har es homoarginilo;
Gly es glicilo;
Asp es aspartilo;
Trp es triptofanilo;
Pro es prolilo;
Cys-NH_{2} es
cisteinamida;
Mpa es ácido mercaptopropiónico; y
P_{2} es un grupo protector de carboxilo;
y
Acoplar los residuos Har y Mpa para formar un
compuesto de fórmula III:
2. Proceso, según la reivindicación 1, en el que
P_{2} es t-butilo.
3. Proceso, según la reivindicación 1, que
comprende además la eliminación de P_{2} del residuo Asp de la
fórmula III para formar eptifibatide.
4. Proceso, según la reivindicación 1, que
comprende además la eliminación de P_{1} del residuo Har de un
compuesto de fórmula I:
en la que P_{1} es un grupo
protector de amino, formando de este modo el compuesto de fórmula
II.
5. Proceso, según la reivindicación 4, en el que
P_{2} es estable en condiciones adecuadas para la eliminación de
P_{1}.
6. Proceso, según la reivindicación 4, en el que
P_{2} es t-butilo.
7. Proceso, según la reivindicación 4, en el que
P_{1} es 9-fluorenilmetoxicarbonilo o
benciloxicarbonilo.
8. Proceso, según la reivindicación 4, que
comprende además unir un residuo Mpa a un fragmento
2-7 de eptifibatide de fórmula:
P_{1}-Har-Gly-Asp(O-P_{2})-Trp-Pro-ACys-NH_{2}
en el que
ACys-NH_{2} es un residuo cisteinamida inactivado,
mediante una unión disulfuro entre el residuo Mpa y el residuo
ACys-NH_{2} del fragmento 2-7 de
eptifibatide, formando de este modo el compuesto de fórmula
I.
9. Proceso, según la reivindicación 8, que
comprende además el acoplamiento del fragmento 2-6
de eptifibatide de fórmula:
P_{1}-Har-Gly-Asp(O-P_{2})-Trp-Pro-OH
a un residuo cisteinamida activado
a través del residuo Pro del fragmento 2-6 de
eptifibatide, formando de este modo el fragmento
2-7 de
eptifibatide.
10. Proceso, según la reivindicación 9, en el
que el residuo cisteinamida inactivado es
H-Cys(Npys)NH_{2}.
11. Proceso, según la reivindicación 9, que
comprende además el acoplamiento de un fragmento 2-3
de eptifibatide de fórmula:
P_{1}-Har-Gly-OH
y un fragmento 4-6
de eptifibatide de
fórmula:
H-Asp(O-P_{2})-Trp-Pro-OH
mediante la unión del residuo Gly
del fragmento 2-3 de eptifibatide al residuo Asp
del fragmento 4-6 de eptifibatide, formando de este
modo el fragmento 2-6 de
eptifibatide.
12. Proceso, según la reivindicación 11, que
comprende además el acoplamiento de un residuo Asp protegido en el
extremo amino terminal que posee una cadena carboxílica lateral
protegida a un dipéptido Trp-Pro a través del
residuo Trp del dipéptido y la eliminación del grupo protector del
extremo amino terminal del residuo Asp para formar un fragmento
4-6 de eptifibatide.
13. Proceso, según la reivindicación 12, que
comprende además el acoplamiento de un residuo Har protegido en el
extremo amino terminal y un residuo Gly protegido o no protegido
para formar un fragmento 2-3 de eptifibatide.
14. Proceso que comprende:
acoplar un residuo homoarginina protegido en el
extremo amino terminal y un residuo glicina protegido o no
protegido, formando de este modo un fragmento 2-3 de
eptifibatide de fórmula:
P_{1}-Har-Gly-OH;
acoplar un residuo ácido aspártico
protegido en el extremo amino terminal que posee una cadena lateral
carboxílica protegida a un dipéptido
triptófano-prolina, a través del residuo triptófano
del dipéptido, y eliminar el grupo protector del extremo amino
terminal del residuo ácido aspártico, formando de este modo un
fragmento 4-6 de eptifibatide protegido de
fórmula:
P_{3}-Asp(O-P_{2})-Trp-Pro-OH;
acoplar el fragmento
2-3 de eptifibatide y el fragmento
4-6 de eptifibatide mediante la unión del residuo
Gly del fragmento 2-3 de eptifibatide al residuo Asp
del fragmento 4-6 de eptifibatide, formando de este
modo el fragmento 2-6 de eptifibatide de
fórmula:
P_{1}-Har-Gly-Asp(O-P_{2})-Trp-Pro-OH
en la
que
Har es homoarginilo;
Gly es glicilo;
Asp es aspartilo;
Trp es triptofanilo;
Pro es prolilo;
P_{1} y P_{3} son grupos protectores de
amino; y
P_{2} es un grupo protector de carboxilo;
y
acoplar el fragmento 2-6 de
eptifibatide a un residuo cisteinamida activado a través del residuo
Pro del fragmento 2-6 de eptifibatide, formando de
este modo el fragmento 2-7 de eptifibatide de
fórmula:
P_{1}-Har-Gly-Asp(O-P_{2})-Trp-Pro-ACys-NH_{2}
en la que
ACys-NH_{2} es una cisteinamida
activada;
unir un residuo ácido mercaptopropiónico al
fragmento 2-7 de eptifibatide mediante una unión
disulfuro entre el residuo ácido mercaptopropiónico y el residuo
ACys-NH_{2} del fragmento 2-7 de
eptifibatide, formando de este modo un compuesto de fórmula I:
en la
que
Mpa es ácido mercaptopropiónico;
Cys-NH_{2} es
cisteinamida;
eliminar P_{1} del residuo Har del compuesto
de fórmula I, formando de este modo un compuesto de fórmula II:
acoplar los residuos Har y Mpa del
compuesto de fórmula II, formado de este modo un compuesto de
fórmula
III:
y
eliminar P_{2} del residuo Asp del compuesto
de fórmula II formando eptifibatide.
15. Proceso, según la reivindicación 14, en el
que P_{2} es estable en condiciones adecuadas para la eliminación
de P_{1}.
16. Proceso, según la reivindicación 14, en el
que P_{2} es t-butilo.
17. Proceso, según la reivindicación 14, en el
que P_{1} es 9-fluorenilmetoxicarbonilo o
benciloxicarbonilo.
18. Proceso, según la reivindicación 14, en el
que ACys-NH_{2} es
H-Cys(Npys)-NH_{2}.
19. Compuesto que posee la fórmula IV:
en la
que
R^{1} es hidrógeno o P_{1};
P_{1} es un grupo protector de amino; y
P_{2} es un grupo protector de carboxilo.
20. Compuesto, según la reivindicación 19, en el
que P_{2} es t-butilo.
21. Compuesto, según la reivindicación 19, en el
que R_{1} es hidrógeno.
22. Compuesto, según la reivindicación 21, en el
que P_{2} es t-butilo.
23. Compuesto, según la reivindicación 19, en el
que R_{1} es P_{1}.
24. Compuesto, según la reivindicación 23, en el
que P_{1} es 9-fluorenilmetoxicarbonilo o
benciloxicarbonilo.
25. Compuesto, según la reivindicación 24, en el
que P_{2} es t-butilo.
26. Compuesto seleccionado del grupo formado
por:
Fmoc-Har-Gly-OH;
Fmoc-Har-Gly-O-P_{4};
y
Fmoc-Har-Gly-Asp(O-P_{5})-Trp-Pro-OH
en la que
Fmoc es
9-fluorenilmetoxicarbonilo
Har es homoarginina;
Gly es glicina;
Asp es ácido aspártico;
Trp es triptófano;
Pro es prolina;
P_{4} y P_{5} son grupos protectores de
carboxilo.
27. Compuesto, según la reivindicación 26, en el
que P_{4} es pentafluororfenol.
28. Compuesto, según la reivindicación 26, en el
que P_{5} es t-butilo.
29.
3-nitro-2-piridinsulfenil-cisteinamida
(H-Cys(Npys)-NH_{2}.
30. Compuesto que posee la fórmula
siguiente:
31. Composición que comprende eptifibatide y
Gly-eptifibatide.
32. Composición, según la reivindicación 31, que
comprende al menos un 99% de eptifibatide y
Gly-eptifibatide entre un 0,01% y un 1%.
33. Composición, según la reivindicación 32, que
comprende al menos un 99% de eptifibatide y
Gly-eptifibatide entre un 0,01% y un 0,1%.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US56045304P | 2004-04-08 | 2004-04-08 | |
| US560453P | 2004-04-08 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2328713T3 true ES2328713T3 (es) | 2009-11-17 |
Family
ID=34956145
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES05735068T Active ES2328713T3 (es) | 2004-04-08 | 2005-04-08 | Procesos para la fabricacion de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes. |
| ES09075233T Active ES2369872T3 (es) | 2004-04-08 | 2005-04-08 | Procesos para la preparación de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes. |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES09075233T Active ES2369872T3 (es) | 2004-04-08 | 2005-04-08 | Procesos para la preparación de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes. |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7674768B2 (es) |
| EP (2) | EP2204383B1 (es) |
| JP (2) | JP4926942B2 (es) |
| KR (1) | KR101238133B1 (es) |
| CN (1) | CN1972960B (es) |
| AT (2) | ATE433997T1 (es) |
| AU (1) | AU2005233603B2 (es) |
| CA (1) | CA2562157C (es) |
| CY (2) | CY1109357T1 (es) |
| DE (1) | DE602005014956D1 (es) |
| DK (2) | DK2204383T3 (es) |
| ES (2) | ES2328713T3 (es) |
| HK (2) | HK1099313A1 (es) |
| HR (2) | HRP20090490T1 (es) |
| ME (2) | ME01063B (es) |
| MX (1) | MXPA06011904A (es) |
| PL (2) | PL1735345T3 (es) |
| PT (2) | PT1735345E (es) |
| RS (2) | RS51182B (es) |
| SI (2) | SI2204383T1 (es) |
| WO (1) | WO2005100381A2 (es) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2582083A1 (en) * | 2004-10-04 | 2006-04-20 | Novetide, Ltd. | A counterion exchange process for peptides |
| NL2000126C2 (nl) * | 2005-07-15 | 2008-01-29 | Solvay | Werkwijze voor de vervaardiging van eptifibatide. |
| MX2010008655A (es) * | 2008-02-06 | 2010-10-06 | Biocon Ltd | Un metodo para purificar un peptido. |
| WO2009150657A1 (en) * | 2008-06-09 | 2009-12-17 | Natco Pharma Limited | Improved process for preparation of eptifibatide by fmoc solid phase synthesis |
| CN101538314B (zh) * | 2009-01-13 | 2012-10-03 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种纯化爱啡肽的方法 |
| CN101747412A (zh) * | 2009-12-30 | 2010-06-23 | 江苏诺泰制药技术有限公司 | 一种依替非巴肽的合成制备工艺 |
| CN102174081B (zh) * | 2011-03-09 | 2013-05-29 | 杭州华津允上医药有限公司 | 埃替非巴肽及其前体的制备方法 |
| CN102827249A (zh) * | 2011-06-14 | 2012-12-19 | 江苏豪森医药集团连云港宏创医药有限公司 | 一种依替巴肽的液相合成方法 |
| CN103408637B (zh) | 2013-06-27 | 2015-12-02 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种爱啡肽的制备方法 |
| CN104710509B (zh) * | 2013-12-11 | 2018-01-02 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种爱啡肽的制备方法 |
| CN108250265A (zh) * | 2016-12-29 | 2018-07-06 | 北京中科亚光生物科技有限公司 | 一种合成含有分子内二硫键的多肽的新工艺 |
| CN110894212B (zh) * | 2018-08-24 | 2021-06-04 | 翰宇药业（武汉）有限公司 | 一种合成依替巴肽硫醚的方法 |
| CN109251234A (zh) * | 2018-10-08 | 2019-01-22 | 重庆科脉生物化工有限公司 | 一种抗血小板聚集药物爱啡肽的制备方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2616785B1 (fr) * | 1987-06-19 | 1989-10-06 | Solvay | Composes guanidiniques comprenant un ion tetraphenylborate substitue et procede d'obtention de ces composes et utilisation des composes lors de la synthese peptidique |
| US5686568A (en) * | 1989-06-16 | 1997-11-11 | Cor Therapeutics, Inc. | Platelet aggregration inhibitors |
| US5318899A (en) * | 1989-06-16 | 1994-06-07 | Cor Therapeutics, Inc. | Platelet aggregation inhibitors |
| US5747447A (en) * | 1992-04-30 | 1998-05-05 | Cor Therapeutics | Stable polypeptide composition |
| BE1007184A3 (fr) * | 1993-06-18 | 1995-04-18 | Solvay | Procede de preparation d'un amide d'alpha-aminoacide, utilisable en synthese peptidique. |
| US5688489A (en) * | 1995-09-15 | 1997-11-18 | Resolution Pharmaceuticals, Inc. | Non-receptor mediated imaging agents |
| CA2484594C (en) * | 2002-05-03 | 2012-06-26 | Avecia Limited | Process for the synthesis of peptides |
| ES2237356T3 (es) * | 2003-04-07 | 2007-04-01 | Novetide Ltd. | Procedimiento para la produccion de peptidos ciclicos. |
| NL2000126C2 (nl) | 2005-07-15 | 2008-01-29 | Solvay | Werkwijze voor de vervaardiging van eptifibatide. |
-
2005
- 2005-04-08 RS RSP-2009/0399A patent/RS51182B/sr unknown
- 2005-04-08 PL PL05735068T patent/PL1735345T3/pl unknown
- 2005-04-08 ES ES05735068T patent/ES2328713T3/es active Active
- 2005-04-08 US US11/101,983 patent/US7674768B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2005-04-08 ME MEP-2009-347A patent/ME01063B/me unknown
- 2005-04-08 ME MEP-2011-175A patent/ME01260B/me unknown
- 2005-04-08 CN CN2005800107525A patent/CN1972960B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2005-04-08 PT PT05735068T patent/PT1735345E/pt unknown
- 2005-04-08 EP EP09075233A patent/EP2204383B1/en active Active
- 2005-04-08 WO PCT/US2005/011873 patent/WO2005100381A2/en active Application Filing
- 2005-04-08 ES ES09075233T patent/ES2369872T3/es active Active
- 2005-04-08 AU AU2005233603A patent/AU2005233603B2/en not_active Ceased
- 2005-04-08 SI SI200531388T patent/SI2204383T1/sl unknown
- 2005-04-08 AT AT05735068T patent/ATE433997T1/de active
- 2005-04-08 KR KR1020067020842A patent/KR101238133B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2005-04-08 PL PL09075233T patent/PL2204383T3/pl unknown
- 2005-04-08 DK DK09075233.8T patent/DK2204383T3/da active
- 2005-04-08 SI SI200530776T patent/SI1735345T1/sl unknown
- 2005-04-08 RS RS20110463A patent/RS51929B/en unknown
- 2005-04-08 PT PT09075233T patent/PT2204383E/pt unknown
- 2005-04-08 EP EP05735068A patent/EP1735345B1/en active Active
- 2005-04-08 JP JP2007507520A patent/JP4926942B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2005-04-08 CA CA2562157A patent/CA2562157C/en not_active Expired - Fee Related
- 2005-04-08 DK DK05735068T patent/DK1735345T3/da active
- 2005-04-08 AT AT09075233T patent/ATE519781T1/de active
- 2005-04-08 DE DE602005014956T patent/DE602005014956D1/de active Active
- 2005-04-08 MX MXPA06011904A patent/MXPA06011904A/es active IP Right Grant
-
2007
- 2007-05-22 HK HK07105387.3A patent/HK1099313A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-09-07 CY CY20091100931T patent/CY1109357T1/el unknown
- 2009-09-15 HR HR20090490T patent/HRP20090490T1/xx unknown
- 2009-10-23 US US12/604,600 patent/US20100105609A1/en not_active Abandoned
-
2010
- 2010-12-30 HK HK10112216.1A patent/HK1145691A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-10-31 CY CY20111101038T patent/CY1111904T1/el unknown
- 2011-11-02 HR HR20110812T patent/HRP20110812T1/xx unknown
- 2011-12-06 JP JP2011266478A patent/JP2012111756A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2328713T3 (es) | Procesos para la fabricacion de eptifibatide y los compuestos intermedios pertinentes. | |
| JP6334399B2 (ja) | 自己組織化ペプチド誘導体の製造方法 | |
| ES2341588T3 (es) | Sintesis de peptidos insulinotropicos. | |
| ES2344657T3 (es) | Procedimiento de intercambio de contraion para peptidos. | |
| ES2336826T3 (es) | Procedimientos para la produccion de un peptido que presenta una amida c-terminal. | |
| ES2786225T3 (es) | Método para preparar AMG 416 | |
| CN101918429B (zh) | 肽的生产和纯化方法 | |
| JP5199126B2 (ja) | グルカゴン様ペプチドの合成 | |
| CA3017926A1 (en) | Methods for synthesizing .alpha.4.beta.7 peptide antagonists | |
| ES2885869T3 (es) | Procedimiento para la fabricación de degarelix y sus productos intermedios | |
| WO2019175173A1 (en) | Process for the manufacture of pthrp analogue | |
| KR930004056B1 (ko) | 신규한 펩티드 | |
| ES2954660T3 (es) | Método para preparación de liraglutida usando un grupo de unión de BAL | |
| US9850285B2 (en) | Process for preparing eptifibatide | |
| EP3781586A1 (en) | A method for production of high purity icatibant | |
| ES2934161T3 (es) | Rutas de fase de solución lineal para hexapéptidos de WNT | |
| JP2024147650A (ja) | インクレチン類似体を作製する方法 | |
| KR20240103052A (ko) | 변형된 gcc 수용체 효능제의 제조를 위한 합성 방법 | |
| JPH04221395A (ja) | ペプチド脂質 | |
| KR20240154654A (ko) | Glp-1/글루카곤 이중 효능제의 제조 방법 | |
| CN112521459A (zh) | 一种stat3抑制多肽及其制备方法和应用 |