ES2349780T3

ES2349780T3 - DERIVADOS DE PIRROLO[3,4-c]PIRAZOL ACTIVOS COMO INHIBIDORES DE CINASAS.

Info

Publication number: ES2349780T3
Application number: ES04763132T
Authority: ES
Inventors: Daniele Fancelli; Barbara Forte; Mario Varasi; Jurgen Moll; Paola Vianello
Original assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Current assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Priority date: 2003-07-09
Filing date: 2004-07-08
Publication date: 2011-01-11
Anticipated expiration: 2024-07-08
Also published as: MY139072A; KR101075711B1; DE602004029045D1; KR20060033001A; ATE480540T1; CA2531759C; RS20060004A; US7582628B2; JP4728232B2; IL172923A0; MEP51908A; GT200400133AA; ECSP056246A; CR8171A; ZA200600095B; AP2214A; AP2006003480A0; US7141568B2; PA8606201A1; PE20050325A1

Abstract

El uso de un compuesto de fórmula (I) R es hidrógeno o metilo; 24 R1 es hidroxi o un grupo alquilo o alcoxi C1-C3 lineal o ramificado; R2 es un átomo de hidrógeno o de halógeno; X es un grupo divalente seleccionado de metileno (-CH2-) o fluorometileno (-CHF-), o es un heteroátomo o grupo heteroatómico seleccionado de oxígeno (-O-) o nitrógeno (-NR'-) en el que R' es un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C4 lineal o ramificado o un grupo cicloalquilo C1-C6; o una sal farmacéutica aceptable del mismo para preparar un medicamento para tratar trastornos de la proliferación celular producidos por y/o asociados a una actividad de proteincinasa alterada que comprende administrar a un mamífero en necesidad del mismo una cantidad eficaz de ese compuesto.

Description

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Campo de la invención

La presente invención se refiere a derivados de pirrolo-pirazol, a un procedimiento para su preparación, a composiciones farmacéuticas que los comprenden y a su uso como agentes terapéuticos, particularmente en el tratamiento de cáncer y trastornos de proliferación celular. Discusión de los antecedentes

La disfunción en proteincinasas (PK) es el distintivo de numerosas enfermedades. Una gran parte de los oncogenes y proto-oncogenes implicados en cánceres humanos codifican PK. Las actividades potenciadas de las PK también participan en muchas enfermedades no malignas tales como hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada a aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y restenosis posquirúrgicas.

Las PK también participan en afecciones inflamatorias y en la multiplicación de virus y parásitos. Las PK también pueden desempeñar una función importante en la patogénesis y el desarrollo de trastornos neurodegenerativos.

Para una referencia general a la disfunción o desregulación de las PK véase, por ejemplo, Current Opinion in Chemical Biology 1999, 3, 459 -465.

Entre las diversas proteincinasas conocidas en la técnica implicadas en el crecimiento de células cancerosas están las cinasas Aurora, en particular Aurora 2.

Se ha encontrado que Aurora 2 se expresaba en exceso en varios tipos de tumores diferentes. Su locus génico se encuentra en 20q13, una región cromosómica frecuentemente amplificada en muchos cánceres incluyendo los de mama [Cancer Res. 1999, 59(9), 2041-4] y colon.

La amplificación de 20q13 está relacionada con un mal pronóstico en pacientes con cáncer de mama sin afectación ganglionar y un aumento en la expresión de Aurora 2 es indicativo de un mal pronóstico y de disminución del tiempo de supervivencia en pacientes con cáncer de vejiga [J. Natl. Cancer Inst., 2002, 94(17), 1320-9]. Para una referencia general a la función de Aurora 2 en la función centrosómica anormal en cáncer véase también Molecular Cancer Therapeutics, 2003, 2, 589 -595. RESUMEN DE LA INVENCIÓN

Es un objetivo de la invención proporcionar compuestos que sean útiles en terapia como agentes contra un conjunto de enfermedades producidas por y/o asociadas a una actividad de proteincinasa desregulada y, más particularmente la actividad de cinasas Aurora.

Es otro objetivo proporcionar compuestos que estén dotados de actividad inhibidora de

proteincinasa y, más particularmente actividad inhibidora las cinasas Aurora.

Los presentes inventores han descubierto ahora que algunos pirrolo-pirazoles y derivados de los mismos están dotados de actividad inhibidora de proteincinasa, por ejemplo, actividad inhibidora de cinasas Aurora.

Más específicamente, los compuestos de esta invención son útiles en el tratamiento de una variedad de cánceres que incluyen, pero no se limitan a: carcinoma tal como de vejiga, mama, colon, riñón, hígado, pulmón, que incluye cáncer de pulmón de células pequeñas; esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cuello del útero, tiroides, próstata y piel, que incluye carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyéticos de linaje linfoide que incluyen leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de linfocitos B, linfoma de linfocitos T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células pilosas y linfoma de Burkett; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide que incluyen leucemias mielógenas agudas y crónicas, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimatoso que incluyen fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico que incluyen astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwannomas; otros tumores que incluyen melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xerodermia pigmentosa, queratoxantoma, cáncer folicular de tiroides y sarcoma de Kaposi.

Debido a la función clave de PK y cinasas Aurora en la regulación de la proliferación celular, estos pirrolo-pirazoles también son útiles en el tratamiento de una variedad de trastornos de la proliferación celular tales como, por ejemplo, hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada a aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y restenosis posquirúrgicas.

Por consiguiente, en una primera realización, la presente invención proporciona un uso de un compuesto de fórmula (I) para preparar un medicamento para tratar trastornos de la proliferación celular producidos por y/o asociados a una actividad de proteincinasa alterada que comprende administrar a un mamífero en necesidad del mismo una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I)

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en la que R es hidrógeno o metilo;

5 R1 es hidroxi o un grupo alquilo o alcoxi C1-C3 lineal o ramificado; R2 es un átomo de hidrógeno o de halógeno; X es un grupo divalente seleccionado de metileno (-CH2-) o fluorometileno (-CHF-), o es un heteroátomo o grupo heteroatómico seleccionado de oxígeno (-O-) o nitrógeno (-NR'-) en el que R' es un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C4 lineal o ramificado o un grupo cicloalquilo C3-C6;

10 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El medicamento anterior permite el tratamiento de trastornos de la proliferación celular producidos por y/o asociados a actividad de cinasas Aurora alterada. En una realización preferida del uso descrito anteriormente, el trastorno de la proliferación celular es cáncer.

15 Tipos específicos de cáncer que pueden tratarse incluyen carcinoma, carcinoma de células escamosas, tumores hematopoyéticos de linaje mieloide o linfoide, tumores de origen mesenquimatoso, tumores del sistema nervioso central y periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xerodermia pigmentosa, queratoxantoma, cáncer folicular de tiroides y sarcoma de Kaposi.

20 La presente invención también proporciona un compuesto de fórmula (I)

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en la que R es hidrógeno o metilo; R1 es hidroxi o un grupo alquilo o alcoxi C1-C3 lineal o ramificado; R2 es un átomo de hidrógeno o de halógeno; X es un grupo divalente seleccionado de metileno (-CH2-) o fluorometileno (-CHF-), o es un heteroátomo o grupo heteroatómico seleccionado de oxígeno (-O-) o nitrógeno (-NR'-) en el que R' es un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C4 lineal o ramificado o un grupo cicloalquilo C3-C6;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención también incluye procedimientos para sintetizar los pirrolo-pirazoles de fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables, así como las composiciones farmacéuticas que los comprenden.

Una apreciación más completa de la invención y muchas de las ventajas que conlleva la misma se obtendrán fácilmente a medida que la misma se entienda mejor por referencia a la siguiente descripción detallada. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

En la técnica se conocen varios compuestos heterocíclicos como inhibidores de proteincinasa. Entre ellos, los 3-carboxamido-pirazoles y los 3-ureido-pirazoles y derivados de los mismos se han desvelado como inhibidores de proteincinasa en las solicitudes de patente internacional WO 01/12189, WO 01/12188, WO 02/48114 y WO 02/70515, todas a nombre del propio solicitante.

También se han desvelado dos compuestos bicíclicos condensados que comprenden restos de pirazol y que poseen actividad inhibitoria de cinasas en los documentos WO 00/69846, WO 02/12242, además del documento WO 03/028720 y la solicitud todavía sin publicar

PCT/EP03/04862 (que reivindica prioridad de la solicitud de patente de EE.UU. 60/381092 presentada el 17 de mayo de 2002), todas a nombre del propio solicitante. Además de los anteriores, en el documento WO 02/30927 a nombre de Pierre Fabre Medicament se desvelan derivados de aminofenil-piperazina o aminofenil-piperidina que poseen 5 actividad inhibitoria hacia proteinpreniltransferasas.

Los compuestos de la presente invención se encuentran dentro del alcance de la fórmula general del documento WO 02/12242 anteriormente mencionado, pero no se ejemplifican específicamente en dicho documento.

Los compuestos de fórmula (I) de la invención tienen átomos de carbono asimétricos y, por

10 tanto, pueden existir como isómeros ópticos individuales, como mezclas racémicas o como cualquier otra mezcla que comprenda una mayoría de uno de los dos isómeros ópticos, todos los cuales se pretende que estén dentro del alcance de la presente invención.

Asimismo, el uso como agente antitumoral de todos los isómeros posibles y sus mezclas y de tanto los metabolitos como de los bioprecursores farmacéuticamente aceptables (denominados 15 de otra forma en lo sucesivo profármacos) de los compuestos de fórmula (I) también están dentro

del alcance de la presente invención. Los profármacos son cualquier compuesto covalentemente unido que libera el fármaco original activo, según la fórmula (I), in vivo. En casos en los que los compuestos puedan existir en formas tautómeras, se contempla 20 que cada forma esté incluida dentro de esta invención tanto si existe en equilibrio como predominantemente en una forma.

Como tal, a menos que se manifieste de otro modo, cuando sólo se indica una de las siguientes formas tautómeras de fórmula (Ia) o (Ib), la otra sigue teniendo que considerarse como comprendida dentro del alcance de la invención:

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En la presente descripción, a menos que se especifique de otra forma, con el término alquilo C1-C3 o C1-C4 lineal o ramificado los inventores pretenden cualquiera de los grupos tales como, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo y sec

butilo. Con el término alcoxi C1-C3 lineal o ramificado los inventores pretenden cualquiera de los grupos tales como, por ejemplo, metoxi, etoxi, n-propoxi e isopropoxi. Con el término átomo de halógeno los inventores pretenden un átomo de flúor, cloro, 5 bromo o yodo. Con el término cicloalquilo C3-C6 los inventores pretenden cualquier grupo tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo.

Claramente, dependiendo de la naturaleza del grupo X, este mismo heterociclo que está ligado al resto fenileno de los compuestos de fórmula (I) puede representar un anillo piperidino, 4fluoropiperidino, piperazino, 4-alquil-piperazino, 4-cicloalquil-piperazino o morfolino.

10 Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) incluyen las sales de adición de ácido con ácidos inorgánicos u orgánicos tales como, por ejemplo, ácido nítrico, clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, perclórico, fosfórico, acético, trifluoroacético propiónico, glicólico, láctico, oxálico, malónico, málico, maleico, tartárico, cítrico, benzoico, cinámico, mandélico, metanosulfónico, isetiónico y salicílico.

15 Una clase preferida de compuestos de la invención está representada por los derivados de fórmula (I) en la que R es hidrógeno o metilo; R1 se selecciona de hidroxi, metilo o metoxi; R2 es un átomo de hidrógeno o de flúor; X se selecciona de metileno, fluorometileno, -O-o -NR' en la que R' es como se presenta anteriormente.

Para una referencia a cualquier compuesto específico de fórmula (I) de la invención, 20 opcionalmente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, véase la sección experimental y las reivindicaciones.

Como se indica previamente, otro objeto de la presente invención lo representa el procedimiento para preparar los compuestos de fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, procedimiento que comprende:

25 a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II) con un compuesto de fórmula (III)

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en las que R y X son como se han definido anteriormente, Q es un grupo alquilo inferior, t- Bu representa terc-butilo y Z es hidroxi o un grupo saliente adecuado, de manera que se

obtenga un compuesto de fórmula (IV)

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b) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (IV) en condiciones ácidas de manera que se obtenga un compuesto de fórmula (V)

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c) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (V) con un compuesto de fórmula (VI)

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en la que R1 y R2 son como se han definido anteriormente y Z' representa hidroxi o un grupo saliente adecuado, de manera que se obtenga un compuesto de fórmula (VII)

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d) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (VII) en condiciones básicas de manera que

se obtenga el compuesto correspondiente de fórmula (I) y, si se desea, convertirlo en una

sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

El procedimiento anterior es un procedimiento de analogía que puede llevarse a cabo trabajando según condiciones de operación muy conocidas.

Según la etapa (a) del procedimiento, la reacción entre los compuestos de fórmula (II) y

(III) puede llevarse a cabo en una variedad de formas según procedimientos convencionales para acilar derivados de amino. Como ejemplo, el compuesto de fórmula (II) puede hacerse reaccionar con un cloruro de acilo de fórmula (III) en la que Z representa un átomo de cloro como grupo saliente adecuado.

Preferentemente, esta reacción se lleva a cabo a una temperatura que oscila de temperatura ambiente a aproximadamente 60ºC en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano o diclorometano y en presencia de un secuestrante de protones tal como trietilamina o diisopropiletilamina. Dentro de los compuestos de fórmula (II) Q representa un grupo alquilo inferior, por ejemplo, un grupo alquilo C1-C4, más preferentemente metilo o etilo.

Según la etapa (b) del procedimiento, el compuesto de fórmula (IV) se desprotege fácilmente en el átomo de nitrógeno de la pirrolidina mediante tratamiento ácido.

Esta reacción puede llevarse a cabo convenientemente en presencia de un ácido mineral u orgánico tal como, por ejemplo, ácido clorhídrico, trifluoroacético o metanosulfónico en un disolvente adecuado tal como diclorometano, 1,4-dioxano, un alcohol inferior (por ejemplo, metanol o etanol) a una temperatura que oscila de temperatura ambiente a aproximadamente 40ºC y durante un tiempo variable de aproximadamente 1 hora a aproximadamente 48 horas.

El compuesto de fórmula (V) así obtenido se hace reaccionar adicionalmente según la etapa (c) del procedimiento con un compuesto de fórmula (VI). De lo anterior es evidente para el experto que esta reacción de acilación también puede llevarse a cabo en una variedad de formas y condiciones de operación que son ampliamente conocidas en la técnica para la preparación de carboxamidas.

La reacción entre un compuesto de fórmula (V) y un ácido carboxílico de fórmula (VI) en la que Z' es hidroxi puede llevarse a cabo en presencia de un agente de acoplamiento tal como, por ejemplo, carbodiimida, es decir, 1,3-diciclohexilcarbodiimida, 1,3-diisopropilcarbodiimida, 1-(3dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, N-ciclohexilcarbodiimida-N'-propiloximetilpoliestireno o Nciclohexilcarbodiimida-N'-metilpoliestireno en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, diclorometano, cloroformo, tetrahidrofurano, éter dietílico, 1,4-dioxano, acetonitrilo, tolueno o N,Ndimetilformamida a una temperatura que oscila de aproximadamente -10ºC a reflujo durante un tiempo adecuado, es decir, de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 96 horas. Dicha reacción se lleva a cabo opcionalmente en presencia de un catalizador adecuado, por ejemplo, 4dimetilaminopiridina o en presencia de otro reactivo de acoplamiento tal como Nhidroxibenzotriazol.

La reacción entre un compuesto de fórmula (V) y un compuesto de fórmula (VI) también puede llevarse a cabo, por ejemplo, mediante un procedimiento con anhídridos mixtos usando un cloroformiato de alquilo tal como cloroformiato de etilo, isobutilo o isopropilo en presencia de una base terciaria tal como trietilamina, N,N-diisopropiletilamina o piridina en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, tolueno, diclorometano, cloroformo, tetrahidrofurano, acetonitrilo, éter dietílico, 1,4-dioxano o N,N-dimetilformamida a una temperatura que oscila de aproximadamente 30ºC hasta temperatura ambiente.

La reacción entre un compuesto de fórmula (V) y un derivado carboxílico de fórmula (VI) en la que Z' es un grupo saliente adecuado puede llevarse a cabo en presencia de una base terciaria tal como trietilamina, N,N-diisopropiletilamina o piridina en un disolvente adecuado tal como tolueno, diclorometano, cloroformo, éter dietílico, tetrahidrofurano, acetonitrilo o N,Ndimetilformamida a una temperatura que oscila de aproximadamente -10ºC a reflujo.

Los compuestos de fórmula (VI) se caracterizan por la presencia de un átomo de carbono asimétrico que está unido a R1 y se indica ahora con un asterisco.

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Por tanto, los compuestos de fórmula (VI) pueden estar en forma tanto de enantiómeros individuales como de mezclas de los mismos, es decir, el conjunto de mezclas racémicas.

Claramente, dependiendo de la naturaleza del compuesto de fórmula (VI) que se use en el procedimiento de la invención, podrán obtenerse compuestos correspondientes de fórmula (VII) que tienen una estereoquímica adecuadamente definida en este mismo átomo de carbono.

Según una realización preferida de la invención, la etapa (c) se lleva a cabo haciendo reaccionar un compuesto adecuado de fórmula (VI), que es una forma enantiomérica dada.

Asimismo, si se emplean mezclas racémicas del compuesto de fórmula (VI), y siempre que se deseen compuestos finales de fórmula (I) en forma óptica pura, se requerirá la resolución óptica del compuesto intermedio de fórmula (VII) o, alternativamente, del compuesto final de fórmula (I) trabajando según medios convencionales. Sólo como ejemplo, técnicas convencionales para la resolución de racematos incluyen, por ejemplo, cristalización fraccionada de derivados de sales diestereoisoméricas o HPLC quiral preparativa.

Finalmente, según la etapa (d) del procedimiento, el compuesto de fórmula (VII) se desprotege en el átomo de nitrógeno del pirazol trabajando según procedimientos convencionales que permiten, por ejemplo, la hidrólisis selectiva del grupo carbamato.

Como ejemplo, esta reacción puede llevarse a cabo en condiciones básicas, por ejemplo, en presencia de hidróxido de sodio, potasio o litio o una amina terciaria tal como trietilamina, y en un disolvente adecuado tal como N,N-dimetilformamida, metanol, etanol, tetrahidrofurano, agua y mezclas de los mismos. Normalmente, la reacción se lleva a cabo a temperaturas que oscilan de temperatura ambiente a aproximadamente 60ºC y durante un tiempo variable de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 96 horas.

Finalmente, todas las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula

(I) o, alternativamente, los compuestos libres de sus sales pueden obtenerse según

procedimientos convencionales. Los materiales de partida del procedimiento de la invención son conocidos o se preparan

fácilmente según procedimientos conocidos.

Como ejemplo, la preparación del compuesto de fórmula (II) en la que Q representa etilo se desvela en la solicitud de patente internacional WO 02/12242 anteriormente mencionada (véase, en particular, el Ejemplo 26 en la página 249; este mismo compuesto se llama allí dentro éster 5-terc-butílico, éster 1-etílico de ácido 3-amino-4,6-dihidro-pirrolo[3,4-c]pirazol-1,5dicarboxílico).

Por tanto, trabajando de una forma análoga también pueden prepararse compuestos adicionales de fórmula (II) en la que Q representa un grupo alquilo inferior distinto de etilo.

Los compuestos de fórmula (III) y (VI), por ejemplo, aquellos en los que Z y Z' representan un átomo de halógeno, por ejemplo, un átomo de cloro, son o conocidos o pueden obtenerse a partir de los ácidos carboxílicos conocidos correspondientes trabajando según procedimientos convencionales.

Asimismo, es evidente para el experto en la materia que si un compuesto de fórmula (I) preparado según el procedimiento anterior que comprende cualquier variante del mismo se obtiene como mezcla de isómeros, su separación en los isómeros individuales de fórmula (I) llevada a cabo según técnicas convencionales todavía está dentro del alcance de la presente invención. FARMACOLOGÍA

Los compuestos de fórmula (I) son activos como inhibidores de proteincinasas, más particularmente como inhibidores de cinasas Aurora y, por tanto, son útiles, por ejemplo, para limitar la proliferación no regulada de células tumorales.

En terapia, se pueden usar en el tratamiento de diversos tumores tales como aquellos previamente indicados, además de en el tratamiento de otros trastornos de la proliferación celular tales como psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada a aterosclerosis y estenosis y restenosis posquirúrgicas.

La actividad inhibitoria y la potencia de los compuestos seleccionados se determinan mediante un procedimiento de ensayo basado en el uso de la tecnología SPA (Amersham Pharmacia Biotech).

El ensayo consiste en la transferencia mediante la cinasa del resto fosfato marcado con radiactividad a un sustrato biotinilado. Se deja que el producto biotinilado marcado con 33P resultante se una a perlas de SPA recubiertas de estreptavidina (capacidad de la biotina 130 pmol/mg) y la luz emitida se midió en un contador de centelleo. Ensayo de inhibición de la actividad de Aurora 2

Reacción de cinasas: Se añadieron péptido biotinilado 8 µM (4 repeticiones de LRRWSLG), ATP 10 µM (0,5 uCi de P32γ-ATP), 7,5 ng de inhibidor de Aurora 2 en un volumen final de 30 µl de tampón (HEPES 50 mM, pH 7,0, MgCl2 10 mM, DTT 1 mM, BSA 0,2 mg/ml, ortovanadato 3 µM) a cada pocillo de una placa de 96 pocillos con fondo en U. Después de 60 minutos de incubación a temperatura ambiente, la reacción se detuvo y el péptido biotinilado se capturó añadiendo 100 µl de suspensión de perlas.

Estratificación: Se añadieron 100 µl de CsCl 5 M a cada pocillo y se dejó reposar 4 horas antes de contarse la radiactividad en el instrumento Top-Count

Determinación de CI50: Los inhibidores se probaron a diferentes concentraciones que oscilaban de 0,0015 a 10 µM. Los datos experimentales se analizaron mediante el programa informático GraphPad Prizm usando la ecuación logística de cuatro parámetros:

y = parte inferior + (parte superior – parte inferior)/(1+10^((log CI50-x)*pendiente)) en la que x es el logaritmo de la concentración de inhibidor, y es la respuesta; y empieza en la parte inferior y va hacia arriba con una forma sigmoide. Cálculo de Ki:

Procedimiento experimental: La reacción se llevó a cabo en tampón (Tris 10 mM, pH 7,5, MgCl2 10 mM, BSA 0,2 mg/ml, DTT 7,5 mM) que contenía enzima 3,7 nM, histona y ATP (relación constante de ATP frío/marcado 1/3000). La reacción se detuvo con EDTA y el sustrato se capturó sobre fosfomembrana (placas de 96 pocillos Multiscreen de Millipore). Después de lavar exhaustivamente, las placas Multiscreen se leyeron en un Top counter. Se midió el control (tiempo cero) para cada concentración de ATP y de histona.

Diseño experimental: Las velocidades de reacción se miden a cuatro concentraciones de ATP, sustrato (histona) e inhibidor. Se diseñó una matriz de 80 puntos de concentración alrededor de los valores de Km de ATP y de sustrato respectivos y los valores de CI50 del inhibidor (0,3, 1, 3, 9 veces los valores de Km o de CI50). Un experimento preliminar del transcurso del tiempo en ausencia de inhibidor y a las diferentes concentraciones de ATP y sustrato permite la selección de un único tiempo de punto final (10 min) en el intervalo lineal de la reacción para el experimento de determinación de Ki.

Cálculos aproximados de parámetros cinéticos: Los parámetros cinéticos se estimaron mediante regresión no lineal simultánea por mínimos cuadrados usando [Ec.1] (inhibidor competitivo respecto a ATP, mecanismo aleatorio) usando el conjunto de datos completo (80 puntos):

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en la que A=[ATP], B=[sustrato], I=[inhibidor], Vm= velocidad máxima, Ka, Kb, Ki las constantes de disociación de ATP, sustrato e inhibidor, respectivamente. α y β el factor de cooperatividad entre la unión de sustrato y ATP y la unión de sustrato e inhibidor, respectivamente.

Los compuestos de la invención se probaron adicionalmente in vitro para evaluar el efecto antiproliferativo sobre cultivos celulares y el efecto inhibitorio sobre el ciclo celular. Ensayo in vitro de proliferación celular

La línea de células de cáncer de colon humano HCT-116 se sembró a 5000 células/cm2 en una placa de 24 pocillos (Costar) usando medio F12 (Gibco) complementado con SBF al 10% (EuroClone, Italia), L-glutamina 2 mM y penicilina al 1%/estreptomicina y se mantuvo a 37ºC, 5% de CO2 y 96% de humedad relativa. Al día siguiente, las placas se trataron por duplicado con 5 ul de una dilución apropiada de compuestos a partir de una disolución madre 10 mM en DMSO. En cada placa se incluyeron dos pocillos de control sin tratar. Después de 72 horas de tratamiento, el medio se extrajo y las células se desprendieron de cada pocillo usando 0,5 ml de 0,05% de tripsina (p/v), 0,02% de EDTA (p/v) (Gibco). Las muestras se diluyeron con 9,5 ml de Isoton (Coulter) y se contaron usando un contador de células Multisizer 3 (Beckman Coulter). Los datos se evaluaron como porcentaje de los pocillos de control:

% de CTR = (Tratado – blanco) / (control – blanco)

Los valores de CI50 se calcularon por LSW/Data Analysis usando el ajuste a curva sigmoide de Microsoft Excel. Análisis in vitro del ciclo celular

La línea de células de cáncer de colon humano HCT-116 se sembró a 5000 células/cm2 en una placa de 24 pocillos (Costar) y se cultivó como se menciona anteriormente. Las células en su fase de crecimiento exponencial se trataron durante 24 horas con diferentes concentraciones de compuesto. Entonces, el sobrenadante del medio de cultivo se recogió para evitar la pérdida de células apoptóticas o mitóticas desprendidas. Después de esto, las células se lavaron usando PBS y se desprendieron mediante 0,05% de tripsina (p/v), 0,02% de EDTA (p/v) (Gibco). La actividad de la tripsina se detuvo usando medio de cultivo. Las fracciones de células adherentes y no adherentes se reunieron y se centrifugaron a 2000 rpm durante 10 minutos. Las células se resuspendieron en PBS y se contaron usando un contador de células Multisizer 3 (Beckman Coulter). Para la fijación se añadió etanol (70%, v/v) y las células se mantuvieron a -20ºC durante la noche.

Se centrifugó un millón de células fijadas a 2000 rpm durante 5 minutos y se lavaron con PBS y posteriormente se tiñeron durante 1 hora a temperatura ambiente en la oscuridad añadiendo 200 □I: 25 □g/ml de yoduro de propidio (Sigma) y 15 ug/ml de RNAsa A (Sigma), 0,001% (v/v) de Nonidet P40 (Sigma) en citrato de sodio (0,1% en p/v, pH 7,5). Las muestras se analizaron por citometría de flujo a 488 nm de excitación (FACSCalibur, Beckton Dickinson) usando el software Cell Quest 3.0 (Beckton Dickinson). Normalmente se recogieron 10000 acontecimientos (activando el módulo discriminador de dobles DDM y seleccionando sólo células individuales) y se registraron perfiles de ciclo celular usando CellQuest (Verity Software). La distribución del ciclo celular de la población se calculó usando un modelo modificado en el software Modfit 3.1 (Verity Software) y se expresó en % de G0/G1, S, G2/M y poliploidía.

Dados los ensayos anteriores, resultó que los compuestos de fórmula (I) de la invención

5 poseían una marcada actividad inhibitoria de proteincinasa, por ejemplo, actividad inhibitoria de Aurora 2. Véase como ejemplo la siguiente Tabla I que informa de los datos experimentales de cuatro compuestos representativos de la invención que se probaron como inhibidores de la cinasa Aurora 2 (CI50 nM) para su efecto antiproliferativo de células (CI50 nM) y para su capacidad para ejercer el bloqueo del ciclo celular e inducir poliploidía (% de G2/M + poliploidía a 200 nM).

10 De manera interesante, estos mismos compuestos se probaron en comparación con un compuesto de la técnica anterior estructuralmente muy próximo, aquí definido como Compuesto de referencia, que se desvela específicamente en el documento WO 02/12242 anteriormente mencionado – véase la página 160, líneas 5-7 de la misma; el Compuesto de referencia se llamó allí N-{5-fenilacetil-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4-metilpiperazino)benzamida.

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Compuesto de referencia (R = R1 = R2 = H; X = NMe)

N-{5-fenilacetil-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4-metilpiperazino)benzamida;

Compuesto (1) (R = R2 = H; R1 = OMe; X = NMe)

20 N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4metilpiperazin-1-il)benzamida;

Compuesto (11) (R = R2 = H; R1 = Me; X = NMe)

N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4metilpiperazin-1-il)benzamida;

25 Compuesto (6) (R = R2 = H; R1 = OMe; X = CH2)

N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-piperidin-1ilbenzamida;

Compuesto (5) (R = Me; R1 = OMe; R2= H; X = NMe)

4-(3,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4c]pirazol-3-il}benzamida.

Tabla I

Compuesto: Inhibición de Aurora 2, CI50 (nM) Antiproliferación de células, CI50 (nM) Bloqueo del ciclo celular (% de G2/M + poliploidía a 200 nM)

Compuesto de referencia: 140 220 33

ninguno: -- -- 19

(1): 16 31 90

(11): 63 17 90

(6): 37 30 90

(5): 18 50 90

Sorprendentemente resultó que la actividad inhibitoria de Aurora 2 de los compuestos de la invención era constante y notablemente superior a la del Compuesto de referencia. Además, resultó que aquellos mismos compuestos poseían un efecto antiproliferativo de 10 células, junto con la capacidad de bloquear el ciclo celular e inducir poliploidía, significativamente superior al del Compuesto de referencia que se probó en las mismas condiciones.

De todo lo anterior, parece que los compuestos novedosos de fórmula (I) de la invención están dotados de un perfil biológico, considerado en conjunto, que es inesperadamente superior al de la técnica anterior más próxima del documento WO 02/12242 y, por tanto, son particularmente

15 ventajosos en terapia contra trastornos proliferativos asociados a una actividad de la cinasa Aurora 2 alterada.

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse tanto como agentes individuales como, alternativamente, en combinación con tratamientos anticancerosos conocidos tales como pauta de radioterapia o quimioterapia en combinación con agentes citostáticos o

20 citotóxicos, agentes de tipo antibiótico, agentes alquilantes, agentes antimetabólicos, agentes hormonales, agentes inmunológicos, agentes de tipo interferón, inhibidores de ciclooxigenasa (por ejemplo, inhibidores de COX-2), inhibidores de las metaloproteasas de la matriz, inhibidores de la telomerasa, inhibidores de tirosincinasa, agentes contra receptores de factores de crecimiento, agentes anti-HER, agentes anti-EGFR, agentes antiangiogénicos (por ejemplo, inhibidores de la

25 angiogénesis), inhibidores de la farnesiltransferasa, inhibidores de la ruta de transducción de señales ras-raf, inhibidores del ciclo celular, otros inhibidores de cdks, agentes de unión de tubulina, inhibidores de la topoisomerasa I, inhibidores de la topoisomerasa II y similares.

Si se formulan como una dosis fija, tales productos de combinación emplean los compuestos de esta invención dentro del intervalo de dosificación descrito más adelante y el otro agente farmacéuticamente activo dentro del intervalo de dosificación autorizado.

Los compuestos de fórmula (I) se pueden usar secuencialmente con agentes anticancerosos conocidos cuando sea inapropiada una formulación de combinación.

Los compuestos de fórmula (I) de la presente invención adecuados para administración a un mamífero, por ejemplo, a seres humanos, pueden administrarse por las vías usuales y el nivel de dosificación depende de la edad, peso, condiciones del paciente y vía de administración.

Por ejemplo, una dosificación adecuada adoptada para la administración por vía oral de un compuesto de fórmula (I) puede oscilar de aproximadamente 10 a aproximadamente 500 mg por dosis, de 1 a 5 veces al día. Los compuestos de la invención pueden administrarse en una variedad de formas farmacéuticas, por ejemplo, por vía oral en forma de comprimidos, cápsulas, comprimidos recubiertos de azúcar o película, disoluciones o suspensiones líquidas; rectalmente en forma de supositorios; parenteralmente, por ejemplo, intramuscularmente, o mediante inyección o infusión intravenosa y/o intratecal y/o intraespinal.

La presente invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable que puede ser un vehículo o un diluyente.

Las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la invención se preparan normalmente siguiendo procedimientos convencionales y se administran en una forma farmacéutica adecuada.

Por ejemplo, las formas orales sólidas pueden contener, junto con el compuesto activo, diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, celulosa, almidón de maíz o almidón de patata; lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico, magnesio o estearato de calcio, y/o polietilenglicoles; aglutinantes, por ejemplo, almidones, goma arábiga, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinilpirrolidona; agentes de disgregación, por ejemplo, almidón, ácido algínico, alginatos o glicolato sódico de almidón; mezclas efervescentes; colorantes; edulcorantes; agentes humectantes tales como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y, en general, sustancias no tóxicas y farmacológicamente inactivas usadas en formulaciones farmacéuticas. Estas preparaciones farmacéuticas pueden prepararse de manera conocida, por ejemplo, por medio de procedimientos de mezclado, granulado, formación de comprimidos, recubrimiento con azúcar o de recubrimiento con película.

Las dispersiones líquidas para administración por vía oral puede ser, por ejemplo, jarabes,

emulsiones y suspensiones.

Como ejemplo, los jarabes pueden contener como vehículo sacarosa o sacarosa con glicerina y/o manitol y sorbitol.

Las suspensiones y las emulsiones pueden contener como ejemplos de vehículos goma natural, agar, alginato de sodio, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o poli(alcohol vinílico). La suspensión o las disoluciones para inyecciones intramusculares pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, agua estéril, aceite de oliva, oleato de etilo, glicoles, por ejemplo, propilenglicol y, si se desea, una cantidad adecuada de clorhidrato de lidocaína. Las disoluciones para inyecciones o infusiones intravenosas pueden contener como vehículo agua estéril o preferentemente pueden estar en forma de soluciones salinas estériles, acuosas, isotónicas, o pueden contener propilenglicol como vehículo.

Los supositorios pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, manteca de cacao, polietilenglicol, un tensioactivo de éster de ácido graso de polioxietilensorbitano o lecitina.

Con el objetivo de ilustrar mejor la presente invención, sin representar ninguna limitación para la misma, ahora se facilitan los siguientes ejemplos. EJEMPLOS Procedimientos generales

La cromatografía ultrarrápida se realizó sobre gel de sílice (Merck calidad 9385, 60 Å). La HPLC/EM se realizó en una columna Waters X Terra RP 18 (4,6 x 50 mm, 3,5 µm) usando un sistema de HPLC Waters 2790 HPLC equipado de un detector 996 Waters PDA y un espectrómetro de masas de un solo cuadrupolo Micromass mod. ZQ equipado con una fuente de ionización por electropulverización (ESI). La fase móvil A era tampón de acetato de amonio 5 mM (pH 5,5 con ácido acético / acetonitrilo 95:5) y la fase móvil B era H2O / acetonitrilo (5:95). Gradiente del 10 al 90% de B en 8 minutos, retención al 90% de B 2 min. Detección UV a 220 nm y 254 nm. Velocidad de flujo 1 ml/min. Volumen de inyección 10 µl. Barrido completo, intervalo de masa de 100 a 800 uma. El voltaje del capilar fue 2,5 KV; la temp. de la fuente fue 120ºC; el cono tenía 10 V. Los tiempos de retención (t.r. de HPLC) se dan en minutos a 220 nm o 254 nm. Las masas se dan como la relación m/z. La espectroscopía de RMN 1H se realizó en un Mercury VX 400 que operaba a 400,45 MHz equipado con una sonda de resonancia doble de 5 mm (1H {15N31P} ID_PFG Varian). Ejemplo 1 Preparación de 3-amino-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo y 1-etilo

Una disolución de clorocarbonato de etilo (8,9 ml, 93 mmoles) en tetrahidrofurano (THF, 250 ml) se añadió lentamente a una mezcla de 3-amino-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-5(1H)carboxilato de terc-butilo (20 g, 89 mmoles) y diisopropiletilamina (DIEA, 92 ml, 528 mmoles) en THF (500 ml) a 0-5ºC. La reacción se mantuvo a la misma temperatura durante dos horas, luego se dejó que alcanzara la temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La mezcla obtenida se evaporó a sequedad a vacío y el residuo resultante se extrajo con acetato de etilo (AcOEt) y agua. La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó a sequedad. La mezcla se purificó por cromatografía ultrarrápida (eluyente: acetato de etilo/ciclohexano 4/6 a 7/3) dando 19 g del compuesto del título como un sólido blanco. [M+H]+ 297

Ejemplo 2 Preparación de 3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol1,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo y 1-etilo

Se añadió cloruro de oxalilo (23,2 ml, 265 mmoles) a una suspensión de ácido 4-(4-metil-1piperazinil)-benzoico (11,7 g, 53 mmoles) en diclorometano (DCM, 320 ml) y dimetilformamida (DMF, 0,52 ml). Después de someter a reflujo la mezcla durante 6,5 horas, el material volátil se eliminó cuidadosamente a presión reducida (recogiendo el residuo tres veces con tolueno).

El diclorhidrato del cloruro de de 4-metilpiperazinobenzoílo resultante se añadió en partes a una disolución de 3-amino-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo y 1etilo (13,1 g, 44,3 mmoles) en THF seco (620 ml) y DIEA (54,4 ml, 0,32 mol) con agitación a temperatura ambiente. La suspensión resultante se agitó 16 horas a temperatura ambiente y 1 hora a 40ºC.

Después de eliminar el disolvente a presión reducida, el residuo se recogió con AcOEt (600 ml) y la fase orgánica se lavó con carbonato sódico acuoso (200 ml), salmuera, (200 ml) y se secó sobre sulfato de sodio.

El disolvente se evaporó y el residuo se trituró con una mezcla de éter dietílico (Et2O, 135 ml) y AcOEt (15 ml), se filtró, se secó a vacío a 40ºC dando 20 g del compuesto del título como un polvo blanco [M+H]+ 499.

Operando de una forma análoga y haciendo reaccionar 3-amino-4,6-dihidropirrolo[3,4c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo y 1-etilo con el derivado de cloruro de acilo apropiado se prepararon los siguientes compuestos:

3-{[4-(4-etilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de

5-terc-butilo y 1-etilo; [M+H]+ 513.

3-{[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-4,6-dihidropirrolo[3,4-(5)c]pirazol-1,5

dicarboxilato de 5-terc-butilo y 1-etilo; [M+H]+ 527.

3-{[4-(4-ciclopropilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1,5

dicarboxilato de 5-terc-butilo y 1-etilo; [M+H]+ 525.

3-{[4-(3,4-dimetilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1,5dicarboxilato de 5-terc-butilo y 1-etilo; [M+H]+ 513. 3-[(4-piperidin-1-ilbenzoil)amino]-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 5-tercbutilo y 1-etilo; [M+H]+ 484. 3-{[4-(4-fluoropiperidin-1-il)benzoil]amino}-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo y 1-etilo; [M+H]+ 502. 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-4,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 5-tercbutilo y 1-etilo; [M+H]+ 486. 3-{[4-(4-terc-butilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-4,6-dihidropirrolo[3,4-(5)c]pirazol-1,5dicarboxilato de 5-terc-butilo y 1-etilo; [M+H]+ 541.

Ejemplo 3 Preparación de triclorhidrato de 3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo

Una disolución 4 N de ácido clorhídrico en dioxano (122 ml, 488 mmoles) se añadió gota a gota a una disolución con agitación de 3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-4,6dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo y 1-etilo (19,5 g, 39,2 mmoles), como se preparó en el Ejemplo 2, en DCM seco (240 ml); la precipitación de un sólido blanco se produjo casi inmediatamente. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas; después de diluir con Et2O (100 ml), el sólido se filtró, se lavó exhaustivamente con Et2O y se secó a vacío a 50ºC dando 20,1 g del compuesto del título, usado en la siguiente etapa sin más purificación. [M+H]+ 399.

RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 1,4 (t, 3H); 2,8 (d, 3H); 3,2 (m, 4H); 3,5 (m, 2H); 4,1 (m, 2H); 4,4 (q, 2H); 4,6 (m, 4H); 7,1-8,0 (m, 4H); 10,3 (s a, 2H); 10,7 (s a, 1H); 11,4 (s, 1H). Operando como se informa anteriormente y partiendo del producto intermedio adecuado

se prepararon análogamente los siguientes compuestos: triclorhidrato de 3-{[4-(4-etilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 413. triclorhidrato de 3-{[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 427. triclorhidrato de 3-{[4-(4-ciclopropilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 425. triclorhidrato de 3-{[4-(3,4-dimetilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 413. 3-[(4-piperidin-1-ilbenzoil)amino]-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 384. triclorhidrato de 3-{[4-(4-fluoropiperidin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol

1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 402. triclorhidrato de 3-{[4-(4-morfolin-4-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)carboxilato de etilo; [M+H]+ 386. triclorhidrato de 3-{[4-(4-terc-butilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 441.

Ejemplo 4 Preparación de 5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo

Se añadió cloruro de oxalilo (10.1.2 ml, 115 mmoles) a una disolución de ácido R-(-)-αmetoxifenilacético (1,91 g, 11,5 mmoles) en DCM (90 ml) y DMF (0,50 ml). Después de agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 16 horas, el material volátil se eliminó cuidadosamente a presión reducida.

Una disolución del cloruro de R-(-)-α-metoxifenilacetilo resultante en DCM (20 ml) se añadió gota a gota a una disolución de triclorhidrato de 3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo (4,5 g, 8,9 mmoles) en DCM (400 ml) y DIEA (11,8 ml, 69 mmoles) con agitación a temperatura ambiente. La disolución resultante se agitó durante 20 horas a temperatura ambiente.

Entonces, la mezcla de reacción se lavó con carbonato sódico acuoso (200 ml), salmuera, (200 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporó y el residuo se trituró con una mezcla de Et2O (100 ml) y AcOEt (10 ml), se filtró y se secó a vacío a 40ºC dando 3,94 g del compuesto del título como un polvo blanco usado en la siguiente etapa sin más purificación. [M+H]+ 547.

RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 1,3 (t, 3H); 2,3 (d, 3H); 2,6 (m, 4H); 3,3 -3,4 (m, 7H); 4,3 (q, 2H); 4,6 -4,9 (m, 4H); 5,1 (d, 1H) 7,0 -8,0 (m, 9H); 11,1 (d, 1H). Operando como se informa anteriormente y partiendo del derivado de cloruro de acilo

adecuado se prepararon análogamente los siguientes compuestos: 5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-etilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 561. 5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 575. 5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-ciclopropilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 573. 3-{[4-(3,4-dimetilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 561. 5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-3-[(4-piperidin-1-ilbenzoil)amino]-5,6-dihidropirrolo[3,4c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 532. 3-{[4-(4-fluoropiperidin-1-il)benzoil]amino}-5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 550. 5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-5,6-dihidropirrolo[3,4c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 534. 3-{[4-(4-terc-butilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 589. 5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-etilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 545. 5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 559. 5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-ciclopropilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 557. 3-{[4-(3,4-dimetilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 545. 5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-3-[(4-piperidin-1-ilbenzoil)amino]-5,6-dihidropirrolo[3,4c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 516. 3-{[4-(4-fluoropiperidin-1-il)benzoil]amino}-5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 534. 5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-5,6-dihidropirrolo[3,4c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 518. 3-{[4-(4-terc-butilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 573. 5-[(2R)-2-hidroxi-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 533.

Ejemplo 5 Preparación de N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}4-(4-metilpiperazin-1-il)benzamida (1)

Una disolución de 5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-metilpiperazin-1il)benzoil]amino}-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-carboxilato de etilo (3,94 g, 7,2 mmoles) en metanol (MeOH,130 ml) y trietilamina (Et3N, 13 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas (se produjo algo de precipitación). El sólido se separó y se lavó con Et2O dando 1,6 g del compuesto del título. La disolución se evaporó hasta algunos mililitros y se separó una segunda fracción de producto sólido (1,62 g). Las dos fracciones se unieron y se analizaron por EM-CL (pureza de aproximadamente el 90%, 254 y 220 nM). Después de la purificación cromatográfica (columna corta de gel de sílice, DCM/MeOH 45:5) se obtuvieron 2,83 g (83%) del compuesto del título como un sólido blanco. P.f. 289ºC; [M+H]+ 475.

RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 2,21 (s, 3H); 2,43 (m, 4H); 3,29 (m, 7H); 4,20 -4,90 (m, 4H); 5,09 (s, 1H) 6,80-8,00 (m, 9H); 10,6 (a, 1H); 12,09 (a, 1H).

Los siguientes compuestos se prepararon operando de una forma análoga mediante hidrólisis básica de los compuestos del Ejemplo 4:

(2): N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4etilpiperazin-1-il)benzamida; [M+H]+ 489; RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 1,1 (t, 3H); 2,3 -2,7 (m, 6H); 3,2 -3,4 (m, 7H); 4,3-6,0 (m, 4H); 5,1 (d, 1H) 6,9 -8,0 (m, 9H); 10,6 (s a, 1H); 12,1 (a, 1H).

(3): N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}4-(4isopropilpiperazin-1-il)benzamida; [M+H]+ 503; RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 1,3 -1,3 (dd, 6H); 3,3 -3,4 (m, 9H); 4,6 -4,9 (m, 4H); 5,1 (d, 1H); 7,0 -8,0 (m, 9H); 10,7 (s a, 1H); 12,3 (s a, 1H).

(4): N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4ciclopropilpiperazin-1-il)benzamida; [M+H]+ 501; RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 0,3 -0,5 (m, 4H); 3,2 -3,4 (m, 7H); 3,2 -5,0 (m, 4H); 5,1 (d, 1H); 6,8 -8,2 (m, 9H); 10,5 -10,7 (a, 1H); 12,0-12,4 (a, 1H).

(5): 4-(3,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}benzamida; [M+H]+ 489; RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 1,0 -1,1 (m, 3H); 2,24 (s, 3H); 3,3 -3,5 (m, 7H); 4,3 -5,0 (m, 4H); 5,1 (d, 1H); 6,9 -8,0 (m, 9H); 10,6 (s a, 1H); 11,9 -12,6 (a, 1H).

(6): N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4piperidin-1-ilbenzamida; [M+H]+ 460; RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 1,5 -1,7 (m, 6H); 3,2 -3,4 (m, 7H); 4,3 -4,9 (m, 4H); 5,1 (d, 1H); 6,9 -8,0 (m, 9H); 10,4 -10,7 (a, 1H).

(7): 4-(4-fluoropiperidin-1-il)-N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}benzamida; [M+H]+ 478; RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 1,65 -2,1 (m, 4H); 3,15 -3,6 (m, 7H); 4,35 -5,0 (m, 5H); 5,1 (d, 1H); 6,9 -8,0 (m, 9H); 10,4 -10,7 (a, 1H).

(8): N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4morfolin-4-ilbenzamida; [M+H]+ 462; RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 3,15 -3,5 (m, 7H); 3,7 -3,8 (m, 4H); 4,3 -4,9 (m, H); 5,1 (d, 1H); 6,9 -8,0 (m, 9H); 10,4 -10,7 (a, 1H).

(9) 4-(4-terc-butilpiperazin-1-il)-N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}benzamida; [M+H]+ 517.

(10): N-{5-[(2R)-2-hidroxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4metilpiperazin-1-il)benzamida; [M+H]+ 461; RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 2,3 (s, 3H); 2,45 -2,65 (m, 4H); 3,2 -3,4 (m, 4H); 4,1 -4,9 (m, 4H); 5,69 (d, 1H); 6,9 -8,0 (m, 9H); 10,4 -10,7 (a, 1H); 11,5 -12,9 (a, 1H).

(11): N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4metilpiperazin-1-il)benzamida; [M+H]+ 459; RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 1,33 (d, 3H); 2,21 (s, 3H); 3,85 -5,0 (m, 5H); 4,2 -4,9 (m, 4H); 5,1 (s, 1H) 6,8 -8,0 (m, 9H); 10,3 -10,7 (a, 1H); 11,8 -12,5 (a, 1H).

(12): N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4etilpiperazin-1-il)benzamida; [M+H]+ 473; RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 1,06 (t, 3H); 1,36 (d, 3H); 2,41 (q, 2H); 2,47 -2,6 (m, 4H); 3,2 3,4 (m, 4H); 3,9 -5,0 (m, 5H); 6,9 -8,0 (m, 9H); 10,5 (s a, 1H); 11,9 -12,5 (a, 1H).

(13): N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4isopropilpiperazin-1-il)benzamida; [M+H]+ 487;

(14): N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4ciclopropilpiperazin-1-il)benzamida; [M+H]+ 485;

(15): 4-(3,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-{5-[(2R)-2-fenilpropanoil],1,4,5,6tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}benzamida; [M+H]+ 473;

(16): N-{5-[(2R)-2-fenilpropanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4piperidin-1-ilbenzamida; [M+H]+ 444; RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 1,37 (d, 3H); 1,6 (s, 6H); 3,2 -3,4 (m, 4H); 3,90 -4,05 (m, 1H); 4,1 -4,9 (m, 4H); 6,9 -8,0 (m, 9H); 10,4 -10,7 (a, 1H).

(17): 4-(4-fluoropiperidin-1-il)-N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-1,4,5,6tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}benzamida; [M+H]+ 462; RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 1,37 (d, 3H); 1,65 -2,05 (m, 4H); 3,15 -3,6 (m, 7H); 3,2 -3,4 (m, 4H); 3,85 -4,07 (m, 1H); 4,1 -5,05 (m, 5H); 5,1 (d, 1H); 6,9 -8,0 (m, 9H); 10,4 -10,7 (a, 1H).

(18): N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4morfolin-4-ilbenzamida; [M+H]+ 446; RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 1,37 (d, 3H); 3,2 -3,4 (m, 4H); 3,7 -3,85 (m, 4H); 3,9 -4,1 (m, 1H); 4,1 -4,95 (m, 4H); 6,9 -8,0 (m, 9H); 10,4 -10,7 (a, 1H).

(19) 4-(4-terc-butilpiperazin-1-il)-N-{5-[(2R)-2-fenilpropanoil]-1,4,5,6tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}benzamida; [M+H]+ 501.

Claims

REIVINDICACIONES

1.-El uso de un compuesto de fórmula (I)

imagen1

5

en la que R es hidrógeno o metilo; R1 es hidroxi o un grupo alquilo o alcoxi C1-C3 lineal o ramificado; R2 es un átomo de hidrógeno o de halógeno;

10 X es un grupo divalente seleccionado de metileno (-CH2-) o fluorometileno (-CHF-), o es un heteroátomo o grupo heteroatómico seleccionado de oxígeno (-O-) o nitrógeno (-NR'-) en el que R' es un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C4 lineal o ramificado o un grupo cicloalquilo C1-C6;

o una sal farmacéutica aceptable del mismo para preparar un medicamento para tratar trastornos de la proliferación celular producidos por y/o asociados a una actividad de proteincinasa alterada 15 que comprende administrar a un mamífero en necesidad del mismo una cantidad eficaz de ese compuesto. 2.-El uso según la reivindicación 1 para tratar trastornos de la proliferación celular producidos por y/o asociados a una actividad de cinasas Aurora alterada. 3.-El uso según la reivindicación 2, en el que la cinasa Aurora es Aurora 2.

20 4.-El uso según la reivindicación 1, en el que el trastorno de la proliferación celular se selecciona del grupo que está constituido por cáncer, enfermedad de Alzheimer, infecciones virales, enfermedades autoinmunitarias y trastornos neurodegenerativos.
5.-El uso según la reivindicación 4, en el que el cáncer se selecciona del grupo que está constituido por carcinoma, carcinoma de células escamosas, tumores hematopoyéticos de linaje 25 mieloide o linfoide, tumores de origen mesenquimatoso, tumores del sistema nervioso central y

periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xerodermia pigmentosa, queratoxantoma, cáncer folicular de tiroides y sarcoma de Kaposi. 6.-El uso según la reivindicación 1, en el que el trastorno de la proliferación celular se selecciona del grupo que está constituido por hiperplasia prostática benigna, adenomatosis

5 familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada a aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y reestenosis posquirúrgicas.
7.-El uso según la reivindicación 1 que comprende además someter al mamífero en necesidad del mismo a una pauta de radioterapia o quimioterapia en combinación con al menos 10 un agente citostático o citotóxico. 8.-El uso según la reivindicación 1, en el que el mamífero en necesidad del mismo es un ser humano. 9.-El uso de un compuesto como se define en la reivindicación 1 para preparar un medicamento para inhibir la actividad de la cinasa Aurora 2 que comprende poner en contacto 15 dicha cinasa con una cantidad eficaz de dicho compuesto. 10.-Un compuesto de fórmula (I)

imagen1

en la que

20 R es hidrógeno o metilo; R1 es hidroxi o un grupo alquilo o alcoxi C1-C3 lineal o ramificado; R2 es un átomo de hidrógeno o de halógeno; X es un grupo divalente seleccionado de metileno (-CH2-) o fluorometileno (-CHF-), o es un heteroátomo o grupo heteroatómico seleccionado de oxígeno (-O) o nitrógeno (-NR'-) en el que R'

25 es un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C4 lineal o ramificado o un grupo cicloalquilo C3-C6;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
11.-Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 10, en el que R es hidrógeno o metilo; R1 se selecciona de hidroxi, metilo o metoxi; R2 es un átomo de hidrógeno o de flúor; X se selecciona de metileno, fluorometileno, -O-o -NR' en el que R' es como se define en la reivindicación 10.
12.-Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, opcionalmente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado del grupo que está constituido por:

(1)

N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4metilpiperazin-1-il)benzamida;

(2)

N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4etilpiperazin-1-il)benzamida;

(3)

N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4isopropilpiperazin-1-il)benzamida;

(4)

N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il]-4-(4ciclopropilpiperazin-1-il)benzamida;

(5)

4-(3,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}benzamida;

(6)

N-(5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il)-4-piperidin1-ilbenzamida;

(7)

4-(4-fluoropiperidin-1-il)-N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4c]pirazol-3-il}benzamida;

(8)

N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-morfolin4-ilbenzamida;

(9)

4-(4-terc-butilpiperazin-1-il)-N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}benzamida;

(10)

N-{5-[(2R)-2-hidroxi-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4metilpiperazin-1-il)benzamida;

(11)

N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4metilpiperazin-1-il)benzamida;

(12)

N-5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4etilpiperazin-1-il)benzamida;

(13)

N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4isopropilpiperazin-1-il)benzamida;

(14)

N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4ciclopropilpiperazin-1-il)benzamida;

(15)

4-(3,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-{5-[(2R)-2-fenilpropanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4c]pirazol-3-il}benzamida;

(16)

N-{5-[(2R)-2-fenilpropanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-piperidin-1ilbenzamida;

5 (17) 4-(4-fluoropiperidin-1-il)-N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4c]pirazol-3-il}benzamida;

(18) N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-morfolin4-ilbenzamida;

(19) 4-(4-terc-butilpiperazin-1-il)-N-{5-[(2R)-2-fenilpropanoil]-1,4,5,6-tetrahidropirrolo[3,410 c]pirazol-3-il}benzamida.
13.-Un procedimiento para preparar los compuestos de fórmula (I) y las sales

farmacéuticamente aceptables de los mismos según la reivindicación 10, procedimiento que

comprende

a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II) con un compuesto de fórmula (III)

imagen2

en las que R y X son como se definen en la reivindicación 10, Q es un grupo alquilo inferior, t-Bu representa terc-butilo y Z es hidroxi o un grupo saliente adecuado, de manera

imagen3

b) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (IV) en condiciones ácidas de manera que se

obtenga un compuesto de fórmula (V)

imagen1

c) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (V) con un compuesto de fórmula (VI)

imagen1

en la que R1 y R2 son como se definen en la reivindicación 10 y Z' representa hidroxi o un grupo saliente adecuado, de manera que se obtenga un compuesto de fórmula (VII)

imagen1

d) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (VII) en condiciones básicas de manera que

se obtenga el compuesto correspondiente de fórmula (I) y, si se desea, convertirlo en una

sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
14.-El procedimiento según la reivindicación 13, en el que dentro de los compuestos de fórmula (II) Q representa un grupo alquilo C1-C4 lineal o ramificado.
15.-El procedimiento según la reivindicación 14, en el que Q es metilo o etilo.
16.-El procedimiento según la reivindicación 13, en el que dentro de los compuestos de fórmula (III) y (VI) Z y Z' son cada uno independientemente hidroxi o un átomo de halógeno.
17.-El procedimiento según la reivindicación 16, en el que el átomo de halógeno es cloro.
18.-El procedimiento según la reivindicación 13, en que la etapa (b) se lleva a cabo en condiciones ácidas en presencia de ácido clorhídrico, trifluoroacético o metanosulfónico.
19.-El procedimiento según la reivindicación 13, en el que la etapa (d) se lleva a cabo en condiciones básicas en presencia de hidróxido de sodio, potasio o litio, o de una amina terciaria tal como trietilamina.
20.-Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define en la reivindicación 10, y al menos un excipiente, vehículo y/o diluyente farmacéuticamente aceptable.
21.-Una composición farmacéutica según la reivindicación 20 que comprende además uno o más agentes quimioterapéuticos.
22.-Un producto o kit que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como se define en la reivindicación 10 o composiciones farmacéuticas del mismo como se definen en la reivindicación 20, y uno o más agentes quimioterapéuticos como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en terapia anticancerosa.
23.-Un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como se define en la reivindicación 10 para uso como un medicamento.