ES2351366T3

ES2351366T3 - Compuestos de 1h-furo[3,2-c]pirazol útiles como inhibidores de quinasas.

Info

Publication number: ES2351366T3
Application number: ES07729539T
Authority: ES
Inventors: Daniele Fancelli; Tiziano Bandiera; Maurizio Pulici; Jurgen Moll
Original assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Current assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Priority date: 2006-05-31
Filing date: 2007-05-25
Publication date: 2011-02-03
Anticipated expiration: 2027-05-25
Also published as: EP2051981A1; DE602007008736D1; US8119641B2; EP2051981B1; JP2009538864A; JP5303454B2; WO2007138017A1; ATE478875T1; US20090239924A1

Abstract

Un compuesto de fórmula (I): **(Ver fórmula)**en el que -A es un anillo arilo o heteroarilo; en el que heteroarilo es un anillo heterocíclico aromático que puede comprender un heterociclo de 5 o 6 miembros opcionalmente benzocondensado con 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre N, O o S; - NHZR5 está en posición orto al ligador CONH; 10 -R1 y R2 son iguales o diferentes y, en forma independiente entre sí, representan un átomo de hidrógeno, un alquilo C1-C3 lineal o ramificado o un grupo CONH2, -CH2OR' o -CH2NR'R o, tomados juntos con el átomo de carbono al que están unidos, R1 y R2 pueden formar un grupo ciclo alquilo C3-C6; R' y R son iguales o diferentes y, en forma independiente entre sí, representan un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C3 lineal o ramificado o, tomados juntos con el átomo de nitrógeno al que están unidos, R' y R pueden formar un anillo heterocíclico de fórmula **(Ver fórmula)**en el que R' es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C3 lineal o ramificado; -R3 es un átomo de hidrógeno o halógeno o un grupo seleccionado de hidroxi, ciano, alquilo C1-C3 lineal o ramificado, alquilamino C1-C6 y alcoxi C1-C3; -R4 es un átomo de hidrógeno o halógeno o un grupo seleccionado de hidroxi, alquilo C1-C3 lineal o ramificado, alcoxi C1-C3, alquilamino C1-C6, dialquilamino C1-C6, azetidin-1-ilo, pirrolidin-1-ilo, piperidin-1-ilo, (1-metil-piperazin-4-ilo), (morfolino-4-ilo), (azetidin-1-il)metilo, (pirrolidin-1-il)metilo, (piperidin-1-il)metilo, (1-metil-piperazin-4il)metilo, (morfolino-4-il)metilo, (1-metil-piperidin-4-iloxi) metilo, (alquilamino C1C6)metilo y (dialquilamino C1-C6)metilo; 10 -Z es un enlace directo, >C=O, o -C(=O)NH-; - R5 es hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado de alquilo C1-C6, alquenilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6, arilo, heteroarilo y heteroarilo saturado; en el que heteroarilo es un anillo heterocíclico aromático que puede comprender un heterociclo de 5 o 6 miembros opcionalmente benzocondensado con 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre N, O o S o sus isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables.

Description

Campo de la invención

La presente invención se refiere al uso de derivados de furo-pirazol, a un proceso para su preparación, a las composiciones farmacéuticas que los comprenden, 5 y a su uso como agentes terapéuticos, en particular en el tratamiento de los trastornos

de cáncer y proliferación celular.

Descripción de los antecedentes

El malfuncionamiento de las proteínas quinasas (PK) es el marcador de numerosas enfermedades. Una gran parte de los oncogenes y protooncogenes 10 involucrados en los cánceres humanos codifican para las PK. Las actividades aumentadas de las PK también están implicadas en muchas enfermedades no malignas, tales como hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación celular del músculo liso vascular asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y restenosis

15 posquirúrgica. Las PK también están implicadas en las afecciones inflamatorias y en la multiplicación de los virus y parásitos. Las PK pueden cumplir un papel importante en la patogénesis de y el desarrollo de los trastornos neurodegenerativos.

Para una referencia general para el malfuncionamiento o desregulación de la 20 PK ver, por ejemplo, Current Opinion in Chemical Biology 1999, 3, 459 – 465. Entre las varias proteína quinasas conocidas en la técnica implicadas en el crecimiento de las células cancerosas están las Aurora quinasas, en particular Aurora

2. Se halló que la Aurora-2 se sobreexpresó en numerosos tipos tumorales

25 diferentes. Su locus génico mapea en 20q13, una región cromosómica frecuentemente amplificada en muchos cánceres, que incluye de mama [Cancer Res. 1999, 59(9), 2041-4] y colon. La amplificación del 20q13 se correlaciona con mal pronóstico en los pacientes con cáncer de mama con ganglios negativos y el aumento de la expresión de Aurora-2

30 es indicador de mal pronóstico y disminución de la supervivencia en los pacientes con cáncer de vejiga [J. Natl. Cancer Inst., 2002, 94(17), 1320-9]. Para una referencia general al papel Aurora-2 en la función del centrosoma anormal en el cáncer, ver también Molecular Cancer Therapeutics, 2003, 2, 589 -595.

El receptor del factor de crecimiento tipo insulina 1 (IGF-1R, IGF1R) es un 35 miembro de la subfamilia del receptor de insulina de RTK.

Existen varas líneas de evidencia que sugieren que la señalización de IGF-1R puede contribuir a la génesis del tumor, y que interferir en la función de IGF-1R representa una opción terapéutica válida para el cáncer. La expresión forzada del receptor lleva al crecimiento transformado dependiente del ligando de los fibroblastos

5 murino y de rata (por ejemplo, Kaleko M., Rutter W.J. y Miller A.D. Mol Cell Biol vol. 10, páginas 464-73, 1990; Rubini M., Hongo A., D’Ambrosio C. y Baserga R. Exp Cell Res vol. 230, páginas 284-92, 1997), y tales células transformadas son capaces de formar tumores in vivo, con transformación in vitro y formación tumoral in vivo que son dependientes del dominio de quinasa activa (revisado en Blakesley V.A., Stannard

10 B.S., Kalebic T., Helman L.J., y LeRoith D. J Endocrinol vol. 152, páginas 339-44, 1997). COMPENDIO DE LA INVENCIÓN

Es un objeto de la invención proporcionar compuestos, que son útiles en la terapia como agentes contra un huésped de enfermedades causadas por y/o 15 asociadas con una actividad de proteína quinasa desregulada y, más particularmente, la actividad de las Aurora quinasas o actividad de IGF-1R. Otro objeto es proporcionar compuestos, que están dotados con la actividad de inhibición de la proteína quinasa y más particularmente, actividad inhibidora de Aurora quinasas o IGF-1R. La presente invención en particular se refiere a nuevos compuestos de furo-pirazol y sus derivados, 20 dotados con actividad inhibidora de Aurora-2 quinasa muy alta. Más específicamente, los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento de una variedad de cánceres que incluyen, pero sin limitación: carcinoma tal como de vejiga, mama, colon, riñón, hígado, pulmón, que incluye cáncer pulmonar de células pequeñas, esófago, vesícula, ovario, páncreas, estómago, cuello uterino, tiroides, próstata, y piel, 25 que incluye carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyéticos de linaje linfoide, que incluyen leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células pilosas y linfoma de Burkett; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, que incluyen leucemias mielógenas aguda y crónica, síndrome 30 mielodisplásico y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimático, que incluyen fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, que incluyen astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwannomas; otros tumores, que incluyen melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentoso, queratoxantoma, cáncer folicular tiroideo y sarcoma de

35 Kaposi.

Debido al papel clave de las PK y Aurora quinasas en la regulación de la proliferación celular, estos derivados de furo-pirazol también son útiles en el tratamiento de una variedad de trastornos proliferativos celulares tales como, por ejemplo, hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación celular del músculo liso vascular asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y restenosis posquirúrgica.

Por consiguiente, en una primera realización, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I)

imagen1

10

en el que -A es un anillo arilo o heteroarilo, -NHZR5 está en posición orto al ligador CONH; -R1 y R2 son iguales o diferentes y, en forma independiente entre sí,

15 representan un átomo de hidrógeno, un alquilo C1-C3 lineal o ramificado o un grupo CONH2, -CH2OR’ o

CH2NR’R" o, tomados juntos con el átomo de carbono al que están unidos, R1 y R2 pueden formar un grupo ciclo alquilo C3-C6; R’ y R" son iguales o diferentes y, en forma independiente entre sí, representan un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo

20 C1-C3 lineal o ramificado o, tomados juntos con el átomo de nitrógeno al que están unidos, R’ y R" pueden formar un anillo heterocíclico de fórmula

imagen1

en el que R"’ es una átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C3 lineal o ramificado; -R3 es un átomo de hidrógeno o halógeno o un grupo seleccionado de hidroxi, 5 ciano, alquilo C1-C3 lineal o ramificado, alquilamino C1-C6 y alcoxi C1-C3;

-R4 es un átomo de hidrógeno o halógeno o un grupo seleccionado de hidroxi, alquilo C1-C3 lineal o ramificado, alcoxi C1-C3, alquilamino C1-C6, dialquilamino C1-C6, azetidin-1-ilo, pirrolidin-1-ilo, piperidin-1-ilo, (1-metil-piperazin-4-ilo), (morfolino-4-ilo), (azetidin-1-il)metilo, (pirrolidin-1-il)metilo, (piperidin-1-il)metilo, (1-metil-piperazin-4

10 il)metilo, (morfolino-4-il)metilo, (1-metil-piperidin-4-iloxi)metilo, (alquilamino C1

C6)metilo y (dialquilamino C1-C6)metilo; -Z es un enlace directo, >C=O, o -C(=O)NH-; -R5 es hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado de alquilo

C1-C6, alquenilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6, arilo, heteroarilo y heteroarilo saturado; 15 o sus isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables.

Los típicos específicos de cáncer que se pueden tratar incluyen carcinoma, carcinoma de células escamosas, tumores hematopoyéticos de linaje mieloide o linfoide, tumores de origen mesenquimático, tumores del sistema nervioso central y periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma

20 pigmentoso, queratoxantoma, cáncer folicular de tiroides, y sarcoma de Kaposi.

La presente invención también incluye métodos de sintetizar los compuestos furo-pirazol de fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables, así como las composiciones farmacéuticas que los comprenden.

Una apreciación más completa de la invención y muchas de sus ventajas 25 concomitantes se obtendrán fácilmente a medida que la misma sea comprendida mejor con referencia a la siguientes descripción detallada.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Varios compuestos heterocíclicos son conocidos en la técnica como inhibidores de proteína quinasa.

30 A modo de ejemplo, los derivados 2-carboxamido-pirazol y 2-ureido-pirazol se han descripto como inhibidores de proteína quinasa en las solicitudes de patente internacional WO 01/12189, WO 01/12188, WO 02/48114 y WO 02/70515, todas en nombre de la Pharmacia Italia SpA.

Los compuestos bicíclicos o tricíclicos fusionados que comprenden restos de pirazol y poseen actividad inhibidora de quinasa también se han descripto en WO 00/69846, WO 02/12242, WO 03/028720, WO 03/097610, WO 04/007504, WO

5 04/013146, US 20050026984, WO 2005095387, US 2005215612, US 2006160874, WO 2003097609, WO 2007/009 898 y WO 2005/074 922.

Los compuestos de fórmula (I) de la invención tienen átomos de carbono asimétricos y en consecuencia pueden existir como isómeros ópticos individuales, como mezclas racémicas o como cualquier otra mezcla que comprende una mayoría

10 de uno de los dos isómeros ópticos, los cuales están incluidos en el ámbito de la presente invención. Como tal, a menos que se proporcione de otro modo, cuando se indica una sola de las siguientes formas tautoméricas de fórmula (Ia) o (Ib), la restante también se considera comprendida en el ámbito de la invención:

imagen2

En la presente descripción, a menos que se especifique de otro modo, con el término grupo arilo se incluye cualquier sistema anular carbocíclico aromático de 1 o 2 restos anulares, fusionado o ligado entre sí a través de un enlace simple, por ejemplo que incluye grupos fenilo, � o �-naftilo o bifenilo.

20 Con el término heteroarilo se incluyen cualquier anillo heterocíclico aromático que puede comprender un heterociclo de 5 o 6 miembros opcionalmente benzocondensado con 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre N, O o S. Los ejemplos no limitantes de grupos heteroarilo de acuerdo con la invención en consecuencia pueden incluir, por ejemplo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo,

25 indolilo, imidazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, fenil-pirrolilo, furilo, fenil-furilo, oxazolilo, isoxazolilo, pirazolilo, tienilo, benzotienilo, isoindolinilo, benzoimidazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, 1,2,3-triazolilo, 1-fenil-1,2,3-triazolilo, y similares.

Con el término heteroarilo saturado se incluye cualquier heteroarilo saturado o parcialmente insaturado como se definió anteriormente. Los ejemplos no limitantes de heterociclos de 5 a 7 miembros, opcionalmente benzocondensados o adicionalmente sustituidos, son 1,3-dioxolano, pirano, pirrolidina, pirrolina, imidazolidina, pirazolidina,

5 pirazolina, piperidina, piperazina, morfolina, tetrahidrofurano, azabiciclononano y similares.

Con el término alquilo C1-C3 o alcoxi C1-C3 lineal o ramificado se incluye alguno de los grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, metoxi, etoxi, n-propoxi y isopropoxi.

10 Con el término átomo de halógeno se incluye un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. Con el término cicloalquilo C3-C6 se incluye cualquier grupo tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo. Evidentemente, como estos mismos grupos cicloalquilo se pueden formar cuando R1 y R2 se toman juntos con el carbono al que están unidos, en consecuencia

15 se pueden obtener compuestos espirocíclicos. Solo como ejemplo, cuando R1 y R2 juntos forman un grupo ciclopentilo, los derivados que tienen la siguiente fórmula general se consideran en la presente:

imagen1

Cuando se consideran los derivados de la fórmula (I) en la que R1 o R2

20 representa un grupo -CH2NR’R" y R’ y R" están ligados entre sí con el átomo de nitrógeno al que están unidos, los restos heterocíclicos se pueden formar de este modo como por la fórmula general. Solo como ejemplo, al considerar R1 como hidrógeno y R2 como un grupo -CH2NR’R" con R’ y R" ligados entre sí para formar un grupo pirrolidinil-1-ilo, compuestos que tienen la siguiente fórmula general se

25 consideran en la presente: Cuando se consideran los derivados de la fórmula (I) en la que R1 o R2 representa un grupo -CH2NR’R" y R’ y R" están ligados entre sí con el átomo de nitrógeno al que están unidos, los restos heterocíclicos se pueden formar de este

modo como por la fórmula general. Solo como ejemplo, al considerar R1 como hidrógeno y R2 como un grupo -CH2NR’R" con R’ y R" ligados entre sí para formar un grupo pirrolidinil-1-ilo, los compuestos que tienen la siguiente fórmula general se consideran en la presente:

imagen1

5

Los inventores han hallado de modo sorprendente una nueva clase de compuestos de fórmula (I) como se definió anteriormente dotados con alta actividad de inhibición de proteína quinasas, que tienen como rasgo característico un anillo arilo o heteroarilo en el cual el sustituyente -NHZR5 está en posición orto al ligador CONH.

10 De acuerdo con los significados provistos para los sustituyentes, cualquiera de los anteriores grupos arilo o heteroarilo pueden estar opcionalmente también sustituidos en alguna de sus posiciones libres con uno o más grupos, por ejemplo 1 a 6 grupos, seleccionados de: halógeno, nitro, grupos oxo (=O), carboxi, ciano, alquilo, alquilo polifluorado, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo; arilo, heterociclilo,

15 alquil-heterociclilo, heterociclil-alquilo, grupos amino y sus derivados tales como, por ejemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino, ureido, alquilureido o arilureido; grupos carbonilamino y sus derivados tales como, por ejemplo, formilamino, alquilcarbonilamino, alquenilcarbonilamino, arilcarbonilamino, alcoxicarbonilamino; grupos hidroxi y sus derivados tales como, por ejemplo, alcoxi, alcoxi polifluorado,

20 ariloxi, heterocililoxi, alquilcarboniloxi, arilcarboniloxi, cicloalqueniloxi o alquilidenaminoxi; grupos carbonilo y sus derivados tales como, por ejemplo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, cicloalquiloxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo; derivados azufrados tales como, por ejemplo, alquiltio, ariltio, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, alquilsulfinilo,

25 arilsulfinilo, arilsulfoniloxi, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo o dialquilaminosulfonilo. A su vez, cuando sea apropiado, cada uno de los anteriores sustituyentes se

puede sustituir adicionalmente con uno o más de los grupos mencionados anteriormente. Con el término grupo alquilo o alcoxi se incluye, a menos que se proporcione de otro modo, cualquier grupo alquilo o alcoxi C1-C6 lineal o ramificado, que por lo

5 tanto comprende los anteriormente mencionados grupos alquilo o alcoxi C1-C3 y que también comprende n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, terc-butilo, n-pentilo, n-hexilo, nbutoxi, iso-butoxi, sec-butoxi, terc-butoxi, n-pentiloxi, n-hexiloxi, y similares.

Con el término grupo alquenilo o alquinilo se incluye, a menos que se proporcione de otro modo, cualquier grupo alquenilo o alquinilo C2-C6 lineal o

10 ramificado insaturado tal como, por ejemplo, vinilo, alilo, 1-propenilo, isopropenilo, 1-, 2-o 3-butenilo, pentenilo, hexenilo, etinilo, 1-o 2-propinilo, butinilo, pentinilo, hexinilo, y similares. Con el término alquilo o alcoxi polifluorado se incluye cualquier grupo alquilo o alcoxi C1-C6 lineal o ramificado como se definió anteriormente, en el que más de un

15 átomo de hidrógeno se reemplaza con átomos de flúor tales como, por ejemplo, trifluorometilo, trifluorometoxi, 2,2,2-trifluoroetilo, 2,2,2-trifluoroetoxi, 1,2-difluoroetilo, 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropil-2-ilo, y similares.

Con el término heterociclo, grupo heterociclilo o heterocíclico también se incluye un heterociclo de 4 a 7 miembros opcionalmente benzocondensado, que por lo 20 tanto abarca grupos heterocíclicos aromáticos también conocidos como grupos heteroarilo, saturados o parcialmente insaturados, con 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre N, O y S. Los ejemplos de estos grupos heterocíclicos de 4 a 7 miembros son, por ejemplo, 1,3-dioxolano, pirano, pirrolidina; pirrolina, imidazolina, imidazolidina, pirazolidina, pirazolina, piperidina, piperazina, morfolina,

25 tetrahidrofurano, hexametilenimina, 1,4-hexahidrodiazepina, azetidina, y similares. Con el término cicloalquenilo se incluye cualquiera de los grupos cicloalquilo C3-C6 que además comprenden un doble enlace tal como, por ejemplo, 2-ciclopenten1-ilo, 3-ciclopenten-1-ilo, 1-ciclohexen-1-ilo, 2-ciclohexen-1-ilo, 3-ciclohexen-1-ilo, y similares. De todos los anteriores, es evidente para los expertos en la técnica que

30 cualquier grupo cuyo nombre se ha identificado como un nombre compuesto tal como, por ejemplo, alquilamino, dialquilamino, cicloalquiloalquilo, arilalquilo, heterociclilalquilo, alquiltio, ariloxi, arilalquiloxi, alquilcarboniloxi y similares, debe considerarse que está formado convencionalmente de las partes de las cuales derivan. Hasta aquí, como ejemplo, el término alcoxi-heterociclil-alquilo quiere decir un grupo

35 alquilo lineal o ramificado sustituido con un heterociclo adicionalmente sustituido con

alcoxi, en el que alquilo, heterociclo y alcoxi son como se definieron antes. Asimismo, el término alquil-heterocicliloxi quiere decir un grupo heterocicliloxi adicionalmente sustituido con alquilo.

El término "sales farmacéuticamente aceptables" abarca sales comúnmente

5 usadas para formar sales de metal alcalino y para formar sales de adición de ácidos libres o bases libres. La naturaleza de la sal no es crítica, con la condición de que sea farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables adecuadas de los compuestos de la presente invención se pueden preparar a partir de un ácido inorgánico u orgánico. Los ejemplos de tales ácidos

10 inorgánicos son ácido clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, carbónico, sulfúrico, y fosfórico. Los ácidos orgánicos apropiados se pueden seleccionar de clases de ácidos orgánicos alifáticos, cicloalifáticos, aromáticos, arilalifáticos, heterocíclicos, carboxílicos y sulfónicos, cuyos ejemplos son ácido fórmico, acético, trifluoroacético, propiónico, succínico, glicólico, glucónico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico,

15 glucurónico, maleico, fumárico, pirúvico, aspártico, glutámico, benzoico, antranílico, mesílico, salicílico, p-hidroxibenzoico, fenilacético, mandélico, embónico (pamoico), metanosulfónico, etanosulfónico, bencensulfónico, pantoténico, toluensulfónico, 2hidroxietanosulfónico, sulfanílico, esteárico, ciclohexilaminosulfónico, algínico, hidroxibutírico, galactárico y galacturónico. Las sales de adición de bases

20 farmacéuticamente aceptables adecuadas de los compuestos de la presente invención incluyen sales metálicas obtenidas de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y zinc o sales orgánicas obtenidas de N,N’-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina (N-metil-glucamina) y procaína. Todas estas sales se pueden preparar por medios convencionales a partir de los compuestos

25 correspondientes de la presente invención, por ejemplo por la reacción de ellos con un ácido o base apropiada. Una clase preferida de los compuestos de la invención está representada por un compuesto de fórmula (I) en el que A es un grupo tienilo, furilo, pirrolilo o fenilo opcionalmente también sustituido.

30 Más preferiblemente, A es un grupo fenilo y R4 está en la posición 4 y representa hidrógeno, halógeno, metoxi, azetidin-1-ilo, pirrolidin-1-ilo, piperidin-1-ilo, (1-metil-piperazin-4-ilo), (morfolino-4-ilo), (azetidin-1-il)metilo, (pirrolidin-1-il)metilo, (piperidin-1-il)metilo, (1-metil-piperazin-4-il)metilo, (morfolino-4-il)metilo, (1-metilpiperidin-4-iloxi)metilo, (alquilamino C1-C6)metilo (dialquilamino C1-C6)metilo.

35 Aun más preferiblemente, Z es >C=O.

En otra clase preferida de los compuestos de fórmula (I), R1 y R2 son un grupo metilo o, tomados juntos con el átomo de carbono al que están unidos, forman un grupo ciclo alquilo C3-C6.

En otra clase preferida de compuestos de fórmula (I), R3 representa un átomo 5 de hidrógeno o halógeno.

Para una referencia a cualquier compuesto de fórmula (I) específico de la invención, opcionalmente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, véase la siguiente sección experimental. Como se indicó antes, un objeto adicional de la presente invención está representado por un proceso para preparar los compuestos de

10 fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de estos, tal proceso comprende: a) reacción de un compuesto bicíclico de fórmula (II):

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en el que ALK es un grupo alquilo C1-C4 con cualquier agente protector adecuado del átomo de nitrógeno del pirazol; 15 b) acilación del compuesto resultante de fórmula (III):

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en el que ALK es como se definió anteriormente y Q representa cualquier agente protector adecuado del nitrógeno del pirazol, con un compuesto de fórmula (IV):

imagen1

20

en el que A y R4 son como se definieron anteriormente y LG representa un grupo saliente adecuado;

c) hidrólisis del grupo éster alquílico y eliminación del grupo protector Q del compuesto resultante de fórmula (V):

imagen1

en el que ALK, A, R4 y Q son como se definieron anteriormente; d) reacción del compuesto resultante de fórmula (VI):

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en el que A y R4 son como se definieron anteriormente, con un compuesto de fórmula (VII)

10

imagen1

en el que R1, R2 y R3 son como se definieron anteriormente, en presencia de cualquier agente condensante adecuado; e) reducir el grupo nitro del compuesto resultante de fórmula (VIII)

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15

en el que A, R1, R2, R3, R4 y Q son como se definieron anteriormente;

f) acilación del compuesto resultante de fórmula (IX):

imagen1

en el que A, R1, R2, R3 y R4 son como se definieron anteriormente, con un compuesto de fórmula (X) o (XI):

5

R5-Z-LG (X)

R5-NCO (XI)

10 en el que Z es >C=O o -C(=O)NH-, y R5 y LG son como se definió anteriormente; g) desacilación selectiva del compuesto resultante de fórmula (XII):

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en el que A, R1, R2, R3, R4 y Q son como se definieron anteriormente y Z es

15 >C=O o -C(=O)NH-, por la hidrólisis selectiva del sustituyente ZR5 del nitrógeno pirazólico para obtener un compuesto de fórmula (I) en el que A, R1, R2, R3 y R4 son como se definieron anteriormente y Z es >C=O o -C(=O)NH-,

o f’) tratar un compuesto de fórmula (IX) como se definió anteriormente con un 20 compuesto carbonilo de fórmula W-CO-Y (XIII) en el que W y Y son átomos de

hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado de alquilo C1-C5, cicloalquilo C1-C5, arilo, heteroarilo o heteroarilo saturado, en la presencia de un agente reductor oportuno, para obtener un compuesto de fórmula (I) en el que A, R1, R2, R3 y R4 son como se definieron anteriormente y Z es un enlace directo y, si desea

5 o es necesario,

h) convertir un compuesto de fórmula (I) como se definió anteriormente en un compuesto de fórmula (I) diferente por reacciones conocidas, o convertir un compuesto de fórmula (I) como se definió anteriormente en una sal farmacéuticamente aceptable o convertir la sal de este en el compuesto de fórmula (I) libre como se

10 definió anteriormente. Alternativamente, los compuestos de la fórmula (I) de la presente también se pueden obtener por medio de i) reducir el grupo nitro del compuesto de fórmula (V) como se definió anteriormente, y 15 j) acilar el compuesto resultante de fórmula (XIV):

imagen1

en el que A, R4, ALK y Q son como se definieron anteriormente, con un compuesto de fórmula (X) o (XI) como se definieron anteriormente para obtener un compuesto de fórmula (XV):

imagen1

20

en el que A, R4, R5, ALK y Q son como se definieron anteriormente y Z es >C=O o -C(=O)NH-; o

j’) tratar un compuesto de fórmula (XIV) como se definió anteriormente con un compuesto carbonilo de fórmula W-CO-Y (XIII) como se describió anteriormente, para obtener un compuesto de fórmula (XV) en el que A, R4, R5, ALK y Q son como se definieron anteriormente y Z es un enlace directo;

k) hidrolizar el grupo éster alquílico y eliminar el grupo protector Q del

compuesto resultante de fórmula (XV) en el que Z es >C=O o -C(=O)NH-o un enlace

directo;

l) hacer reaccionar el compuesto resultante de fórmula (XVI)

imagen1

10 en el que A, R4, R5 y Z son como se definieron anteriormente, con un compuesto de fórmula (VII) como se describió anteriormente;

m) convertir un compuesto de fórmula (I) como se definió anteriormente en un compuesto de fórmula (I) diferente por reacciones conocidas o convertir un compuesto de fórmula (I) como se definió anteriormente en una sal farmacéuticamente aceptable

15 o convertir la sal de este en el compuesto de fórmula (I) libre como se definió anteriormente.

Cabe mencionar que un compuesto de fórmula (I), (II), (VI), (VIII), (IX), (XVI) como se definió anteriormente puede estar en cualquiera de sus formas tautoméricas a o b, no solo en la forma descripta antes

imagen1

20

En los compuestos protegidos, el grupo protector de nitrógeno pirazólico adecuado que Q representa puede estar en el átomo de nitrógeno en la posición 2, aun si se prefiere el isómero que tiene Q en la posición 1 y es el único indicado.

El proceso anterior es un proceso de analogía, que se puede realizar de acuerdo con los métodos conocidos en la técnica.

A partir de lo anterior, es evidente para los expertos en la técnica que si un compuesto de fórmula (I), preparado de acuerdo con el proceso anterior, se obtiene como una mezcla de isómeros, su separación en los isómeros individuales de fórmula

5 (I), realizada de acuerdo con técnicas convencionales, está aún dentro del ámbito de la presente invención.

De acuerdo con la etapa (a) del proceso, el derivado furo-pirazol de fórmula (II) se protege, de acuerdo con métodos bien conocidos, en el átomo de nitrógeno pirazólico. Como ejemplo, la protección anterior puede ocurrir con clorocarbonato de

10 alquilo, en un disolvente adecuado tal como tetrahidrofurano, diclorometano, cloroformo, acetonitrilo, tolueno o mezclas de estos, a una temperatura que varía de aproximadamente -5ºC a aproximadamente 35ºC y durante un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 72 horas, en la presencia de un depurador de protones oportuno tal como trietilamina o diisopropiletilamina.

15 De acuerdo con la etapa (b) del proceso, el compuesto de fórmula (III) posteriormente se hace reaccionar con cualquier agente acilante adecuado de fórmula

(IV) para producir el compuesto de fórmula (V), por acción de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica para la preparación de derivados de carboxamido. Normalmente, dentro del compuesto de fórmula (IV), LG representa un átomo de

20 halógeno y, aun más preferiblemente, un átomo de bromo o cloro. La reacción se lleva a cabo en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano, dimetilformamida, diclorometano, cloroformo, acetonitrilo, tolueno o mezclas de estos, a una temperatura que varía de aproximadamente -10ºC a reflujo y durante un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 96

25 horas, en la presencia de un depurador de protones oportuno tal como trietilamina, N,N-diisopropiletilamina o piridina. A partir de lo anterior, es evidente para los expertos que la protección anterior en el átomo de nitrógeno pirazólico, de la etapa (a), es de particular ventaja ya que impide que ocurra la acilación con el compuesto de fórmula (IV), en la etapa (b), en el

30 átomo de nitrógeno pirazólico. De acuerdo con la etapa (c) del proceso, el grupo funcional carboxiéster del compuesto de fórmula (V) se hidroliza para producir el correspondiente grupo carboxi y al mismo tiempo, se elimina el grupo protector Q.

La reacción se lleva a cabo en condiciones alcalinas, preferiblemente por 35 tratamiento con hidróxido de sodio o potasio acuoso en la presencia de un codisolvente adecuado tal como metanol o etanol, por la operación a una temperatura que varía de temperatura ambiente a la temperatura de reflujo de la mezcla y durante un tiempo adecuado, por ejemplo hasta 72 horas.

De acuerdo con la etapa (d) del proceso, el compuesto de fórmula (VI) 5 posteriormente se hace reaccionar con un derivado amino adecuado de fórmula (VII) para producir el correspondiente compuesto de fórmula (VIII).

A partir de lo anterior, es evidente para los expertos que esta reacción se puede obtener de una variedad de maneras y condiciones operativas, que son ampliamente conocidas en la técnica para la preparación de carboxamidas.

10 Como ejemplo, la reacción entre los compuestos de fórmula (VI) y (VII) se puede llevar a cabo en la presencia de un agente de acoplamiento tal como, por ejemplo, 2-(1H-tetrafluoroborato de benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TBTU), 1,3-diciclohexilcarbodiimida, 1,3-diisopropilcarbodiimida, 1-(3-dimetilaminopropil)-3etilcarbodiimida, N-ciclohexilcarbodiimida-N’-propiloximetil poliestireno o N

15 ciclohexilcarbodiimida-N’-metil poliestireno, en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, diclorometano, cloroformo, tetrahidrofurano, éter dietílico, 1,4-dioxano, acetonitrilo, tolueno, o N,N-dimetilformamida a una temperatura que varía de aproximadamente -10ºC a reflujo y durante un tiempo adecuado, por ejemplo de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 96 horas. Dicha reacción se lleva a

20 cabo opcionalmente en presencia de un catalizador adecuado, por ejemplo 4dimetilaminopiridina, o en la presencia de un reactivo de acoplamiento adicional tal como N-hidroxibenzotriazol. En forma alternativa, esta misma reacción también se puede llevar a cabo, por ejemplo, a través de un método de anhídrido mixto, por el uso de un cloroformiato de

25 alquilo tal como cloroformiato de etilo, iso-butilo, o isopropilo, en la presencia de una base terciaria tal como trietilamina, N,N-diisopropiletilamina o piridina, en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, tolueno, diclorometano, cloroformo, tetrahidrofurano, acetonitrilo, éter dietílico, 1,4-dioxano, o N,N-dimetilformamida, a una temperatura que varía de aproximadamente -30°C a temperatura ambiente.

30 De acuerdo con la etapa (e) del proceso, el grupo nitro aromático del compuesto de fórmula (VIII) se reduce a amino. La reacción se puede llevar a cabo en una variedad de maneras y condiciones operativas, que son ampliamente conocidas en la técnica para reducir un grupo nitro a un amino. Preferiblemente, esta reacción se lleva a cabo en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, agua, tetrahidrofurano,

35 1,4-dioxano, N,N-dimetilformamida, acetato de etilo, o una mezcla de ellos, en la

presencia de un agente reductor adecuado, tal como, por ejemplo, hidrógeno y un catalizador de la hidrogenación, o por tratamiento con ciclohexeno o ciclohexadieno y un catalizador de la hidrogenación, o por tratamiento con cloruro de estaño (II), o por tratamiento con In y ácido clorhídrico, o por tratamiento con hipofosfito de sodio y 5 catalizadores de la hidrogenación a una temperatura que varía de 0ºC a reflujo y durante un tiempo que varía de aproximadamente 1 hora a aproximadamente 96 horas. El catalizador de la hidrogenación es usualmente un metal, con máxima frecuencia paladio, que se puede usar como tal o sobre un soporte de carbón. De acuerdo con la etapa (f) del proceso, el compuesto de fórmula (IX) posteriormente se 10 hace reaccionar con cualquier agente acilante adecuado de fórmula (X) o (XI) para producir compuestos de fórmula (XII), actuando de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica para la preparación de derivados de carboxamido y ureido. Normalmente, dentro del compuesto de fórmula (X), LG representa un átomo de halógeno, preferiblemente un átomo de cloro, o un grupo 2,4-dinitro-fenoxi. La 15 reacción se lleva a cabo en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano, dimetilformamida, diclorometano, cloroformo, acetonitrilo, tolueno o mezclas de estos, a una temperatura que varía de aproximadamente -10ºC a reflujo y durante un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 96 horas. Si se necesita, La reacción se lleva a cabo en la presencia de un depurador de

20 protones oportuno tal como trietilamina, N,N-diisopropil-etilamina o piridina. De acuerdo con la etapa g) del proceso, el compuesto de fórmula (XII) posteriormente se desacila en el átomo de nitrógeno pirazólico en condiciones básicas y actuando de acuerdo con técnicas convencionales, por ejemplo por el tratamiento con hidróxido de sodio o potasio acuoso en la presencia de un codisolvente adecuado

25 tal como metanol, etanol, dimetilformamida, 1,4-dioxano, o por el tratamiento con una amina terciaria tales como trietilamina o N,N-diisopropiletilamina y por el uso de un alcohol como metanol o etanol como el disolvente.

La reacción puede ocurrir a una temperatura que varía de aproximadamente 18ºC a la temperatura de reflujo del disolvente, durante un tiempo que varía de 30 aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 72 horas. Finalmente, de acuerdo con la etapa f’) del proceso, la reacción entre un compuesto de fórmula (IX) y un aldehído o una cetona se puede llevar a cabo en una variedad de maneras, de acuerdo con métodos convencionales para llevar a cabo la alquilación reductora, para dar un compuesto de fórmula (I) en el que Z es un enlace directo. Preferiblemente, 35 esta reacción se lleva a cabo en un disolvente adecuado tal como, por ejemplo,

metanol, N,N-dimetilformamida, diclorometano, tetrahidrofurano, o una mezcla de ellos, en la presencia de un agente reductor adecuado tal como, por ejemplo, borohidruro de sodio, borohidruro de tetra-alquilamonio, cianoborohidruro de sodio, triacetoxiborohidruro de sodio, triacetoxi borohidruro de tetrametilamonio, hidrógeno y

5 un catalizador de la hidrogenación, y en la presencia de un catalizador ácido, tal como, por ejemplo, ácido acético, ácido trifluoroacético, a una temperatura que varía de aproximadamente 0ºC a reflujo y durante un tiempo que varía de aproximadamente 1 hora a aproximadamente 96 horas.

De acuerdo con la etapa (i) del proceso, el grupo nitro aromático del compuesto 10 de fórmula (V) se reduce a amino. La reacción se puede llevar a cabo como se describió antes para la etapa e) anterior. De acuerdo con la etapa j) del proceso, el compuesto de fórmula (XIV) posteriormente se hace reaccionar con cualquier agente acilante adecuado de fórmula

(X) o (XI) para producir compuestos de fórmula (XV), actuando como se describió 15 antes para la etapa e) anterior.

De acuerdo con la etapa j’) del proceso, la reacción entre un compuesto de fórmula (XIV) y un aldehído o una cetona se puede llevar a cabo de una variedad de maneras, de acuerdo con métodos convencionales para llevar la alquilación reductora, para dar un compuesto de fórmula (XV) en el que Z es un enlace directo.

20 Preferiblemente, esta reacción se lleva a cabo como se describió antes para la etapa f’) anterior. De acuerdo con la etapa (k) del proceso, la función carboxiéster del compuesto de fórmula (XVI) se hidroliza para producir el correspondiente grupo carboxi y, al mismo tiempo, se elimina el grupo protector Q. La reacción se lleva a cabo como se

25 describió antes para la etapa c) anterior. Finalmente de acuerdo con la etapa (k) del proceso, el compuesto de fórmula

(XVI) posteriormente se hace reaccionar con un derivado amino adecuado de fórmula

(VII) para llevar al correspondiente compuesto de fórmula (I). A partir de lo anterior, es evidente para los expertos que esta reacción se 30 puede llevar a cabo de una variedad de maneras y condiciones operativas, que son ampliamente conocidas en la técnica para la preparación de carboxamidas. Como ejemplo, la reacción entre los compuestos de fórmula (XVI) y (VII) se puede llevar a cabo como se describió antes para la etapa d) anterior.

Todos los compuestos de partida de fórmula (II), (IV), (VII), (VIII), (X), (XI) y 35 (XIII) son conocidos o se pueden obtener de acuerdo con métodos conocidos.

Para una referencia a la preparación de los compuestos de fórmula (II) véase WO 2004007504, así como la siguiente sección experimental.

FARMACOLOGÍA

Los compuestos de fórmula (I) son activos como inhibidores de proteína

5 quinasa, más particularmente como inhibidores de Aurora quinasas o inhibidores de IGF-R1 y en consecuencia útiles, por ejemplo, para restringir la proliferación desregulada de las células tumorales.

En la terapia, se pueden usar en el tratamiento de los diversos tumores, tales como los informados anteriormente, así como en el tratamiento de otros trastornos 10 proliferativos celulares tales como psoriasis, proliferación celular del músculo liso

vascular asociada con aterosclerosis y estenosis y restenosis posquirúrgica.

La actividad inhibidora y la potencia de los compuestos seleccionados se determinan mediante un método de ensayo basado en el uso de la tecnología SPA (Amersham Pharmacia Biotech).

15 El ensayo consiste en la transferencia de un resto fosfato marcado con radiactividad por la quinasa a un sustrato biotinilado. El producto biotinilado marcado con 33P resultante se deja unir con perlas de SPA revestidas con estreptavidina (capacidad de biotina 130 pmol/mg), y se midió la luz emitida en un contador de centelleo.

20 Ensayo de inhibición para la actividad de quinasa IGF-1R Los buffer/componentes usados en el ensayo fueron los siguientes. El buffer de quinasa (buffer KB) estaba compuesto de 50 mM de HEPES, 3 mM de MnCl2, 1 mM de DTT, 3 microM de Na3VO4, pH 7,9. El buffer de enzima (buffer EB) estaba compuesto de buffer KB que contiene 0,6 mg/ml de BSA (albúmina sérica bovina). Las

25 perlas de centelleo SPA (Número de Código del Producto RPNQ0007, Amersham Biosciences, Piscataway, NJ USA) se prepararon como una suspensión de 10 mg/ml en PBS que contiene 32 mM de EDTA, 500 microM de ATP no marcado, y Triton X100 0,1%. Esta preparación se denomina a continuación como "suspensión de perlas SPA". El día del ensayo, IGF-1R se pre-fosforiló a fin de linealizar la cinética de la

30 reacción. Para obtener esto, la cantidad deseada de enzima se incubó durante 30 min a 28ºC a una concentración de 1050 nM de enzima en buffer EB que contiene 100 microM de ATP no marcado. Después de la preincubación, e inmediatamente antes del ensayo, esta preparación de quinasa IGF-1R prefosforilada se diluyó a una concentración de enzima de 60 nM por la adición de 16,5 volúmenes de buffer KB.

35 Esta enzima prefosforilada diluida se denomina a continuación "mezcla de enzima".

El sustrato usado en el ensayo fue un péptido biotinilado carboxi-terminal de la siguiente secuencia: KKKSPGEYVNIEFGGGGGK-biotina. El péptido se obtuvo en lotes de >95% de pureza de péptido de American Peptide Company, Inc. (Sunnyvale, CA, USA). La "mezcla de ATP”, referida a continuación, consistía en buffer KB que

5 contiene 6 nM de 33Pg-ATP (marcado con gamma fosfato, Redivue™ Número de Código AH9968, 1000-3000Ci/mmol, Amersham Biosciences Piscataway, NJ USA), 18 microM de ATP no marcado, y 30 microM de péptido de sustrato biotinilado. Esta solución contenía estos componentes a 3X de sus concentraciones de reacción finales. Los compuestos a analizar se prepararon en DMSO 100% en concentraciones

10 apropiadas. Estas preparaciones posteriormente se diluyeron 33 veces usado buffer KB, para obtener el compuesto a 3X de la concentración de ensayo final deseada en buffer KB que contiene DMSO 3%. Esta preparación 3X se denomina a continuación como "solución de trabajo del compuesto". Reacción de quinasa: Las reacciones se realizaron en placas de microtitulación

15 de 96 pocillos con fondo en U (tales como Producto #650101, Greiner Bio-One, Kremsmuenster Austria) en un volumen de reacción final de 30 microlitros. A cada pocillo de ensayo se añadieron 10 microlitros de "solución de trabajo del compuesto" que contiene una dilución apropiada del compuesto, seguida por 10 microlitros de "mezcla de ATP" y 10 microlitros de "mezcla de enzima", de este modo comienza la

20 reacción. Los contenidos del pocillo se mezclaron inmediatamente por pipeteo, y las reacciones se incubaron durante 60 minutos a temperatura ambiente. Después de la incubación, las reacciones se detuvieron por la adición de 100 microlitros/pocillo de "suspensión de perlas SPA". Los pocillos se incubaron durante 15 minutos adicionales a temperatura ambiente, posteriormente se extrajeron 110 microlitros de cada pocillo y

25 se transfirieron a pocillos separados de placas de recuento de centelleo opacas de 96 pocillos (tales como OptiPlate™-96, PerkinElmer LAS, Inc. Boston, MA, USA), cada una con 100 microlitros/pocillo de 5 M de CsCl. Después de 4 horas de reposo a temperatura ambiente para permitir la flotación de las perlas de SPA, estas placas se leyeron usando un contador de centelleo (Packard TopCount NXT, PerkinElmer LAS,

30 Inc. Boston, MA, USA) a fin de cuantificar la luz emitida de cada pocillo (proporcional a la cantidad de fosfato incorporado en el péptido sustrato durante la reacción de quinasa).

Muchas de las etapas descriptas antes, tales como las que involucran la dilución del compuesto, la adición de las mezclas a la reacción, y la transferencia de la 35 reacción finalizada a las placas de recuento se pueden automatizar usando estaciones de pipeteo robotizado (tales como dispensadores de líquidos Multimek y Biomek, Beckman Coulter Inc., Fullerton CA USA), y una curva de dilución de un inhibidor de quinasa conocido tal como estaurosporina se puede incluir de rutina como un control positivo para inhibición de IGF-1R. Resultados: los datos se analizaron usando el 5 paquete de programa de ordenador "Assay Explorer" (Elsevier MDL, San Leandro, CA 94577). Para las concentraciones del compuesto solo, la actividad inhibidora normalmente se expresó como % de inhibición obtenido en presencia del compuesto, en comparación con la actividad total de la enzima obtenida cuando se omitió el inhibidor. Los compuestos que muestran la inhibición deseada se puede analizar

10 adicionalmente a fin de estudiar la potencia del inhibidor a través del cálculo de IC50. En este caso, los datos de inhibición obtenidos usando las diluciones seriadas del inhibidor se pueden ajustar por regresión no lineal usando la siguiente ecuación:

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donde vb es la velocidad basal, v es la velocidad de la reacción observada, vo es la 15 velocidad en la ausencia de los inhibidores, y [I] es la concentración del inhibidor.

Análisis de transferencia Western de una fosforilación del receptor después de la estimulación con IGF-1 en células de cáncer de mama humanas MCF-7

Las células MCF-7 (ATCC# HTB-22) se sembraron en placas de cultivo de

20 tejidos de 12 pocillos a razón de 2x10^5 células/pocillo en medio E-MEM (MEM+ BSS de Earle + 2 mM de glutamina + 0,1 mM de aminoácidos no esenciales) + 10% de FCS, y se incubaron durante la noche a 37ºC, 5% de CO2, 100% de humedad relativa. Las células posteriormente se privaron por el reemplazo de E-MEM +10% de FCS con E-MEM +0,1% de BSA, y se incubaron durante la noche. Después de esta incubación,

25 los pocillos se trataron con las concentraciones deseadas del compuesto durante 1 hora a 37ºC, y posteriormente se estimularon con 10 nM de IGF-1 humana recombinante (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) durante 10 minutos a 37ºC. Las células posteriormente se lavaron con PBS y se lisaron en 100 microlitros/pocillo de buffer de lisis celular (Reactivo de Extracción de Proteína de Mamífero M-PER [Producto

30 #78501, Pierce, Rockford, IL, USA] + 10 mM de cóctel de inhibidor proteasa EDTA+ [producto Sigma-Aldrich #P8340] + cóctel inhibidor de fosfatasa [productos de Sigma-Aldrich #P2850 + #P5726]). Los lisados celulares se aclararon por centrifugación a 10.000xg durante 5 minutos, y 10 microg/calle de proteína de lisado aclarado se corrieron sobre geles de NuPAGE (NuPAGE 4-12% geles de Bis-Tris de 10 calles,

Invitrogen) con buffer de corrida MOPS, posteriormente se transfirieron a filtros de nitrocelulosa de Hybond-ECL (Amersham Biosciences, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK) usando cámaras Mini PROTEAN II (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Los filtros que portan proteína transferida se incubaron durante 1 5 hora en buffer de bloqueo (TBS + 5% de BSA + 0,15% de Tween 20), y se sondaron durante 2 horas en el mismo buffer que contiene 1/1000 de anticuerpo anti-fosfo IGF1R TyR1131/InsRTyr 1146 de conejo (producto #3021, Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA) para la detección de IGF-1R fosforilado, o dilución 1/1000 de anticuerpo IGF-Ir�(H-60) de conejo (producto #sc-9038, Santa Cruz Biotechnology, 10 Inc., Santa Cruz, CA, USA) para la detección de la cadena de IGF-1R � total. En cada caso, los filtros se lavaron posteriormente durante 30 minutos con varios cambios de TBS + 0,15% de Tween 20, y se incubaron durante 1 hora en buffer de lavado que contiene dilución 1/5000 de IgG anti-conejo conjugada con peroxidasa de rábano (Amersham, producto #NA934), posteriormente se lavaron nuevamente y se

15 desarrollaron usando el sistema quimioluminiscente ECL (Amersham) de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. A menos que se indique lo contrario, los reactivos usados fueron Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA. El factor de crecimiento indujo la fosforilación de la proteína ribosómica S6 en los fibroblastos humanos primarios

20 La fosforilación de la proteína ribosómica S6 en respuesta a la estimulación del factor de crecimiento de los fibroblastos dérmicos humanos normales (NHDF) se usó para evaluar la potencia del compuesto para inhibir la transducción de señales inducida por IGF-1 en las células, y la selectividad hacia el estímulo de EGF y PDGF. Las células de NHDF obtenidas de PromoCell (Heidelberg, Alemania), se mantuvieron

25 a 37ºC en una atmósfera humidificada con 5% de CO2 en Medio de Crecimiento de Fibroblastos Completo (PromoCell). En el ensayo, se sembraron NHDF en placas de cultivo de tejido de 384 pocillos (placas negras de fondo transparente y plano; Matrix Technologies Inc., Hudson, NH, USA) a una densidad de 5000 células/pocillo en medio libre de suero que contiene 0,1% de albúmina sérica bovina (BSA) y se incubó

30 durante 5 días. Las células deprivadas se trataron durante 1 hora con dosis deseadas de compuestos y posteriormente se estimularon durante 2 horas adicionales con 10 nM de IGF-1 (Invitrogen Corp., CA, USA), 10 nM de EGF (Gibco BRL, USA) o 1 nM de PDGF-B/B (Roche Diagnostics GmbH, Alemania). Las células posteriormente se fijaron en PBS/3,7% de paraformaldehído durante 20 minutos a temperatura ambiente,

35 se lavaron X2 con PBS, y permeabilizaron con PBS/0,3% de Triton X-100 durante 15

minutos. Los pocillos posteriormente se saturaron con PBS/1% de leche en polvo descremada (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA) durante 1 hora, y posteriormente se sondaron durante 1 hora a 37ºC con anticuerpo anti-fosfo-S6 (Ser 235/236) (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA, cat. #2211) a una dilución 5 1/200 en PBS/1% de leche/0,3% de Tween 20. Los pocillos posteriormente se lavaron dos veces con PBS, y se incubaron durante 1 hora a 37ºC con PBS/1% de leche/0,3% de Tween 20 + 1 microg/ml de DAPI (4,6-diamidino-2-fenilindol) + 1/500 de anticuerpo secundario conjugado Cy5™ anti-conejo de cabra (Amersham Biosciences, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK). Los pocillos se lavaron posteriormente X2 con PBS, y 10 40 microlitros de PBS se dejaron en cada pocillo para el análisis de inmunofluorescencia. Las imágenes de fluorescencia en los canales DAPI y Cy5™ se obtuvieron, almacenaron y analizaron automáticamente usando un instrumento Cellomics ArrayScan™ IV (Cellomics, Pittsburgh, USA); el Algoritmo de Citotoxicidad de Cellomics se usó para cuantificar la fluorescencia citoplásmica asociada con fosfo

15 S6 (parámetro de señal Cy5™: "media de Liso Masa-pH") para cada célula en 10 campos/pocillo, y finalmente se expresaron como un valor de población medio. A menos que se indique de otro modo, los reactivos se obtuvieron en Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA. Ensayo de inhibición de la actividad de Aurora-2

20 Reacción de quinasa: 8 µM de péptido biotinilado (4 repeticiones de LRRWSLG), 10 µM de ATP (0,5 uCi de P33-ATP), 7,5 ng de Aurora 2, inhibidor en un volumen final de 30 µl de buffer (50 mM de HEPES, pH 7,0, 10 mM de MgCl2, 1 mM de DTT, 0,2 mg/ml de BSA, 3 µM de ortovanadato) se añadieron a cada pocillo de una placa de fondo en U de 96 pocillos. Después de 60 minutos de incubación a

25 temperatura ambiente, la reacción se detuvo y se capturó el péptido biotinilado por la adición de 100 µl de suspensión de perlas. Estratificación: 100 µl de CsCl 5 M se añadieron a cada pocillo y se dejaron estacionar 4 horas antes de contar la radiactividad en el instrumento Top-Count. Determinación de IC50: los inhibidores se analizaron a diferentes

30 concentraciones que varían de 0,0015 a 10 µM. Los datos experimentales se analizaron con el programa de ordenador GraphPad Prizm usando la ecuación lógica de cuatro parámetros:

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donde x es el logaritmo de la concentración del inhibidor, y es la respuesta: y 35 comienza en la parte inferior y va hacia la parte superior con una forma sigmoidea.

Cálculo de Ki:

Método experimental: La reacción se llevó a cabo en buffer (10 mM de Tris, pH 7,5, 10 mM de MgCl2, 0,2 mg/ml de BSA, 7,5 mM de DTT) que contiene 3,7 nM de enzima, histona y ATP (relación constante de ATP frío/marcado 1/3000). La reacción

5 se detuvo con EDTA y el sustrato se capturó en una fosfomembrana (placas de 96 pocillos Multiscreen de Millipore). Después del lavado intensivo, las placas multiscreen se leyeron en un Top Counter. Se midió el control (tiempo cero) para cada concentración de ATP e histona. Diseño experimental: Las velocidades de reacción se miden a cuatro

10 concentraciones de ATP, sustrato (histona) e inhibidor. Se diseñó una matriz de concentración de 80 puntos alrededor de los valores de Km de ATP y sustrato respectivas y los valores de IC50 del inhibidor (0,3, 1, 3, 9 veces la Km o los valores de IC50). Un experimento de curso de tiempo preliminar en ausencia del inhibidor y en las diferentes concentraciones de ATP y sustrato permite la selección de un solo tiempo

15 de punto final (10 min) en el intervalo lineal de la reacción para el experimento de determinación de Ki. Estimados de parámetros cinéticos: Los parámetros cinéticos se estimaron por regresión de cuadrados mínimos no lineal simultánea usado la [Ec.1] (inhibidor competitivo respecto de ATP, mecanismo aleatorio) usando el conjunto de datos

20 completos (80 puntos):

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donde A=[ATP], B=[Sustrato], I=[inhibidor], Vm= velocidad máxima, las constantes de disociación Ka, Kb, Ki del ATP, sustrato e inhibidor respectivamente, factor de cooperatividad � y � entre la unión del sustrato y ATP y la unión del sustrato e

25 inhibidor respectivamente. Los compuestos de la invención se analizaron adicionalmente, in vitro, para evaluar el efecto antiproliferante en los cultivos celulares. Ensayo de proliferación celular in vitro La línea celular de cáncer de colon humano HCT-116 se sembró a razón de

30 5000 células/cm2 en placas de 24 pocillos (Costar) usando medio F12 (Gibco) suplementado con 10% de FCS (EuroClone, Italia) 2 mM de L-glutamina y 1% de penicilina/estreptomicina y se mantuvo a 37ºC, 5% de CO2 y 96% de humedad relativa. El día siguiente, las placas se trataron por duplicado con 5 ul de una dilución apropiada a partir de un patrón de 10 mM en DMSO. Dos pocillos de controles no tratados se incluyeron en cada placa. Después de 72 horas de tratamiento, el medio se extrajo y las células se desprendieron de cada pocillo usando 0,5 ml de 0,05% (p/v) de tripsina, 0,02% (p/v) de EDTA (Gibco). Las muestras se diluyeron con 9,5 ml de Isoton (Coulter) y se contaron usando un contador de células Multisizer 3 (Beckman Coulter). Los datos se evaluaron como por ciento de pocillos control:

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Los valores de IC50 se calcularon por el LSW/Análisis de Datos usando el 10 ajuste de curva sigmoidea Microsoft Excel.

Dados los ensayos anteriores, los compuestos de fórmula (I) de la invención dieron como resultado que poseen una marcada actividad inhibidora de proteína quinasa, por ejemplo actividad inhibidora de Aurora-2. Ver, como ejemplo, la siguiente tabla I que informa los datos experimentales de algunos compuestos representativos

15 de la invención analizados como inhibidores de Aurora-2 quinasa (IC50 nM) y para su efecto antiproliferativo celular (IC50 nM).

Tabla 1

Compuesto (1) [Fórmula (I), R1=R2= metilo, R3=R4=H, Z=CO; R5= pirrol-2-ilo]: (1-metilfenil-etil)amida del ácido 3-2-[(1H-pirrol-2-carbonil)amino]benzolamino]-1H-furo[3,2c]pirazol-5-carboxílico

Compuesto: Inhibición de Aurora-2 IC50 (nM) Antiproliferación celular IC50 (nM)

(1): 6 5

Cabe mencionar que la actividad inhibidora de Aurora-2 del compuesto (1) es 20 sorprendentemente alta. Los siguientes compuestos, se analizaron de acuerdo con los métodos descriptos en la sección de farmacología anterior, todos mostraron tener valores de

IC50 para la inhibición de Aurora-2 menores de 50 nM: (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(tiofeno-2-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (2); [1-(2-fluoro-fenilo)-1-metil-etil]-amida del ácido 3-{2-[(1H-pirrol-2-carbonil)5 amino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico) (5); (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(1-metil-1H-pirrol-2-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (7); (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(2-metil-2H-pirazol-3-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico(8); 10 (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(1-metil-1H-pirazol-3-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (9); (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-(2-benzoilamino-benzoilamino)-1Hfuro[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (10); (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(5-metil-1H-pirazol-3-carbonil)-amino]15 benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (11); (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(tiazol-4-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (12); (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{4-(4-metil-piperazin-1-il)-2-[(1H-pirrol-2carbonil)-amino]-benzoilamino} -1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (13);

20 (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{4-(4-metil-piperazin-1-il)-2-[(1-metil-1Hpirrol-2-carbonil)-amino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (14) y (1metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(1-metil-1H-imidazol-2-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (15).

Además, los compuestos analizados dieron como resultado que poseen un 25 muy marcado efecto antiproliferante.

A partir de todo lo precedente, los nuevos compuestos de fórmula (I) de la invención parecen estar dotados de un perfil biológico, considerado en conjunto, que es inesperadamente superior al de la técnica previa y, en consecuencia, son particularmente ventajosos, en la terapia contra los trastornos proliferativos asociados

30 con una actividad de quinasa alterada, en particular actividad de Aurora-2 quinasa alterada.

Los compuestos de la presente invención se pueden administrar como agentes únicos o, en forma alternativa, en combinación con tratamientos anticáncer conocidos tales como terapia de radiación o régimen de quimioterapia en combinación con

35 agentes citostáticos o citotóxicos, agentes tipo antibióticos, agentes alquilantes,

agentes antimetabolito, agentes hormonales, agentes inmunológicos, agentes tipo interferón, inhibidores de ciclooxigenasa (por ejemplo, inhibidores de COX-2), inhibidores de metaloproteasa de matriz, inhibidores de telomerasa, inhibidores de tirosina quinasa, agentes del receptor del factor anti-crecimiento, agentes anti-HER,

5 agentes anti-EGFR, agentes anti-angiogénesis (por ejemplo, inhibidores de angiogénesis), inhibidores de farnesil transferasa, inhibidores de vía de transducción de señales ras-raf, inhibidores del ciclo celular, otros inhibidores cdk, agentes de unión de tubulina, inhibidores de topoisomerasa I, inhibidores de topoisomerasa II, y similares.

10 Si se formulan como una dosis fija, tales productos de combinación emplean los compuestos de la presente invención dentro del intervalo de dosis que se describe a continuación y los otros agentes farmacéuticamente activos dentro del intervalo de dosis aprobado. Los compuestos de fórmula (I) se pueden usar secuencialmente con agentes

15 anticáncer conocidos cuando una formulación de combinación es inapropiada. Los compuestos de fórmula (I) de la presente invención, adecuadas para la administración a un mamífero, por ejemplo, a seres humanos, se pueden administrar por las vías usuales y el nivel de dosis depende de la edad, el peso y las condiciones del paciente y vía de administración.

20 Por ejemplo, una dosis adecuada adoptada para la administración oral de un compuesto de fórmula (I) pueden variar de aproximadamente 10 a aproximadamente 500 mg por dosis, de 1 a 5 veces por día. Los compuestos de la invención se pueden administrar en una variedad de formas de dosis, por ejemplo, por vía oral, en la forma de comprimidos, cápsulas, comprimidos con cubierta de azúcar o pelicular, soluciones

25 o suspensiones líquidas; en forma rectal en la forma de supositorios; parenteral, por ejemplo, intramuscular, o a través de inyección o infusión intravenosa y/o intratecal y/o intraespinal.

La presente invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de 30 este en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable, que puede ser un portador o un diluyente. Otro objeto es en consecuencia el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de este, como se definió anteriormente, en la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad causada por y/o asociada con una actividad de proteína quinasa desregulada, en 35 particular para tratar una enfermedad causada por y/o asociada con actividad

desregulada de IGF-1R o Aurora quinasas, preferiblemente con una actividad desregulada de Aurora quinasa. Tal medicamento también proporciona angiogénesis tumoral e inhibición de la metástasis.

La enfermedad tratada se selecciona preferiblemente del grupo que consiste

5 en cáncer, trastornos proliferativos celulares, infecciones virales, retinopatías que incluyen retinopatías diabética y neonatal y degeneración macular relacionada con la edad, arterosclerosis y afecciones que involucran la proliferación del músculo liso vascular o formación de neoíntima tal como restenosis después de la angioplastia o cirugía, enfermedad vascular del injerto, tal como puede producirse después del

10 transplante vascular o de un órgano, acromegalia y trastornos secundarios a la acromegalia así como otras afecciones hipertróficas en las que está implicada la señalización de IGF/IGF-1R, tales como hiperplasia prostática benigna, psoriasis, enfermedad pulmonar fibrótica, fibrosis pulmonar, patologías relacionada a estrés oxidativo crónico o agudo o daño tisular inducido por hiperoxia y trastornos

15 metabólicos en los que están implicados niveles de IGF o actividad de IGF-1R elevados, tales como obesidad. Otro objeto de la presente invención es el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de este, como se definió anteriormente, en la fabricación de un medicamento con actividad antitumoral.

20 De acuerdo con la invención, el cáncer tratado se selecciona del grupo que consiste en carcinoma, carcinoma de células escamosas, tumores hematopoyéticos de linaje mieloide o linfoide, tumores de origen mesenquimático, tumores del sistema nervioso central y periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentoso, queratoxantomas, cáncer folicular de tiroides y sarcoma de

25 Kaposi. Además, el cáncer tratado se puede seleccionar del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, cáncer ovárico, cáncer endometrial, cáncer gástrico, carcinoma de células renales claras, melanoma uveal, mieloma múltiple, rabdomiosarcoma, sarcoma de Ewing, sarcoma de Kaposi y meduloblastoma.

30 El trastorno proliferativo celular tratado se selecciona del grupo que consiste en hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neuro-fibromatosis, psoriasis, proliferación celular del músculo liso vascular asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y restenosis posquirúrgica. Las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la

35 invención se preparan usualmente siguiendo métodos convencionales y se administran en una forma farmacéutica adecuada.

Por ejemplo, las formas orales sólidas pueden contener junto con el compuesto activo, diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, sucrosa, celulosa, almidón de maíz o almidón de papa; lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico,

5 estearato de magnesio o calcio, y/o polietilenglicoles; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidones, goma arábiga, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinilpirrolidona; agentes desintegrantes, por ejemplo, almidón, ácido algínico, alginatos o glicolato de almidón sódico; mezclas efervescentes; colorantes; edulcorantes; agentes humectantes tales como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y,

10 en general, sustancias no tóxicas y farmacológicamente inactivas usadas en las formulaciones farmacéuticas. Estas preparaciones farmacéuticas se pueden preparar de manera conocida, por ejemplo, por medio de mezcla, granulación, formación de comprimidos, procesos de revestimientos con azúcar o cubierta pelicular.

Las dispersiones líquidas para la administración oral pueden ser, por ejemplo, 15 jarabes, emulsiones y suspensiones. Como ejemplo los jarabes pueden contener, como un portador, sacarosa o sacarosa con glicerina y/o manitol y sorbitol. Las suspensiones y las emulsiones pueden contener, como ejemplos de los portadores, goma natural, agar, alginato de sodio, pectina, metilcelulosa, 20 carboximetilcelulosa, o alcohol polivinílico.

La suspensión o las soluciones para inyecciones intramusculares pueden contener, junto con el compuesto activo, un portador farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, agua estéril, aceite de oliva, oleato de etilo, glicoles, por ejemplo, propilenglicol y, si se desea, una cantidad adecuada de hidrocloruro de lidocaína.

25 Las soluciones para inyecciones o infusiones intravenosas pueden contener, como portador, agua estéril o preferiblemente pueden estar en la forma de soluciones salinas estériles, acuosas, isotónicas o pueden contener propilenglicol como portador.

Los supositorios pueden contener junto con el compuesto activo, un portador farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, manteca de cacao, polietilenglicol, un 30 tensioactivo de polioxietilensorbitan éster de ácido graso o lecitina. Con el propósito de ilustrar mejor la presente invención, sin imponerle ninguna limitación, a continuación se dan los siguientes ejemplos.

SECCIÓN EXPERIMENTAL

Se usó el siguiente método HPLC en el análisis de los compuestos, como se 35 especifica en los ejemplos de síntesis expuestos a continuación. Como se usa en la presente, el término "Rt" se refiere al tiempo de retención (minutos) para el compuesto usando el método de HPLC especificado a continuación.

Método LC-MS

El HPLC/MS se realizó en una columna Waters X Terra RP 18 (4,6 x 50 mm,

5 3,5 mm) usando un sistema de HPLC Waters 2790 equipado con un detector de PDA Waters 996 y un espectrómetro de masa cuadripolar individual Micromass mod. ZQ, equipado con una fuente de ion por electroaspersión (ESI). La fase móvil A fue buffer acetato de amonio 5 mM (pH 5,5 con ácido acético / acetonitrilo 95:5), y la fase móvil B fue agua / acetonitrilo (5:95). Gradiente de 10 a 90% de B en 8 minutos, retención de

10 90% de B 2 min. Detección al UV a 220 nm y 254 nm. Velocidad de flujo 1 ml/min. Volumen de inyección 10 �l. Barrido completo, intervalo de masa de 100 a 800 amu. El voltaje capilar fue 2,5 KV; la temperatura de la fuente fue 120ºC; el cono fue de 10 V. Los tiempos de retención (LC-MS Rt) se dan en minutos a 220 nm o 254 nm. Las masas se dan como relación m/z.

15 Ejemplo 1 1-Etil éster 5-propil éster del ácido 3-amino-furo[3,2-c]pirazol-1,5dicarboxílico

imagen1

20 Una solución de clorocarbonato de etilo (4,90 ml, 51,7 mmol) en tetrahidrofurano (THF, 60 ml) se añadió lentamente a una mezcla de propil éster del ácido 3-amino-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (12,0 g, 50,2 mmol) y diisopropiletilamina (DIEA, 51,5 ml, 301 mmol) en THF (300 ml), manteniendo la temperatura en el intervalo de -5 y -10ºC. La reacción se mantuvo a la misma temperatura durante 5

25 minutos posteriormente se dejó alcanzar la temperatura ambiente. La mezcla obtenida se evaporó a sequedad al vacío y el residuo se extrajo con acetato de etilo (AcOEt) y agua. La fase orgánica se separó, se secó en sulfato de sodio y se evaporó a sequedad. El material bruto resultante se trituró con éter dietílico para dar 13,7 g del compuesto del título en forma de sólido blanco.

30 LC-MS: Rt 4,87; [M+H]+ 282. 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 0,97 (t, 3 H) 1,35 (t, 3 H) 1,67 -1,81 (m, 2 H) 4,28 (t, 2 H) 4,36 (q, 2 H) 6,35 (s, 2 H) 7,39 (s, 1 H).

Ejemplo 2

1-Etil éster 5-propil éster del ácido 3-(2-nitro-benzoilamino)-furo[3,2c]pirazol-1,5-dicarboxílico

imagen4

A una solución de 1-etil éster 5-propil éster del ácido 3-amino-furo[3,2-c]pirazol1,5-dicarboxílico (500 mg, 1,606 mmol) y diisopropiletilamina (DIEA, 0,824 ml, 4,818 mmol) en tetrahidrofurano (THF, 20 ml) a 0 ºC, se añadió cloruro de 2-nitro-benzoílo

10 (0,318 ml, 2,409 mmol). La mezcla de reacción se mantuvo a la misma temperatura durante 10 minutos posteriormente se dejó alcanzar temperatura ambiente y se dejó reaccionar durante la noche. El disolvente se extrajo al vacío, el residuo se disolvió en diclorometano (DCM) y se lavó con 10% de solución de ácido acético (AcOH), agua, NaHCO3 saturado y salmuera. El producto bruto se purificó en gel de sílice (eluyente

15 diclorometano/metanol 96/4) produciendo 512 mg (69 %) del compuesto del título. LC-MS: Rt 7,48; [M+H]+ 431. 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 0,98 (t, 3 H) 1,41 (t, 3 H) 1,68 -1,82 (m, 2 H) 4,31 (t, 2 H) 4,48 (q, 2 H) 7,54 (s, 1 H) 7,76 -7,96 (m, 3 H) 8,18 (d, 1 H) 12,09 (s, 1 H). Por la operación de un modo análogo y por la reacción de 1-etil éster 5-propil

20 éster del ácido 3-amino-furo-[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxílico con el derivado de cloruro de acilo correspondiente, de este modo se prepararon los siguientes compuestos: 1-etil éster 5-propil éster del ácido 3-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-2-nitrobenzoilamino]-furo[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxílico LC-MS: Rt 4,65; [M+H]+ 529.

25 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 0,97 (t, J=7,38 Hz, 3 H) 1,40 (t, J=7,07 Hz, 3 H) 1,68 -1,81 (m, 2 H) 2,20 -2,28 (m, 3 H) 2,42 -2,49 (m, 4 H) 3,36 -3,44 (m, 4 H) 4,31 (q, J=6,58 Hz, 2 H) 4,48 (q, J=7,07 Hz, 2 H) 7,24 (dd, J=8,90, 2,44 Hz, 1 H) 7,45 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 7,51 -7,53 (m, 1 H) 7,72 (d, J=8,78 Hz, 1 H) 11,87 (s, 1 H).

Ejemplo 3 30 Ácido 3-(2-Amino-benzoilamino)-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico

imagen1

A una solución de 1-etil éster 5-propil éster del ácido 3-(2-nitro-benzoilamino)furo[3,2-c]pirazol-1,5-dicarboxílico (7,6 g, 0,0176 mol) en metanol (100 ml), se añadió NaOH 2N (44,1 ml, 0,0882 mmol). La mezcla se sometió a reflujo suavemente durante

5 8 horas, posteriormente el disolvente se evaporó al vacío, y la solución acuosa residual se diluyó con agua y hielo. Se añadió ácido clorhídrico (12 N) hasta pH 2. Se recolectó el sólido amarillento que precipitó, se lavó con agua y se secó al vacío a 60ºC. De este modo se obtuvieron 6,5 g del compuesto del título.

LC-MS: Rt 1,13; [M+H]+ 317.

10 Por la operación de un modo análogo y por el uso de 1-etil éster 5-propil éster del ácido 3-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-2-nitro-benzoilamino]-furo[3,2-c]pirazol-1,5dicarboxílico como material de partida, se prepararon de este modo los siguientes compuestos: Ácido 3-[2-Amino-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzoilamino]-furo[3,2-c]pirazol-5

15 carboxílico. [M+H]+ 415 Ejemplo 4 (1-Metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-(2-Nitro-benzoilamino)-1H-furo[3,2c]pirazol-5-carboxílico

imagen5

Ácido 3-(2-Amino-benzoilamino)-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (11,6 g, 0,03668 mol) se disolvió en dimetilformamida anhidra (DMF, 70 ml). Se añadieron diisopropiletilamina (DIEA, 31,4 ml, 0,1834 mol), cumilamina (7,43 ml, 0,055 mol) y tetrafluoroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TBTU, 15,31 g, 25 0,0476 mol) respectivamente. La solución se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Posteriormente se vertió en una solución saturada de bicarbonato de sodio (700 ml) y se extrajo con diclorometano (2 X 250 ml). La fase orgánica se lavó con agua y se secó sobre Na2SO4. La solución posteriormente se evaporó a sequedad, se tomó con tolueno y se evaporó a sequedad, se tomó con éter etílico y se filtró. El sólido posteriormente se purificó por cromatografía en columna flash en gel de sílice 5 eluyendo con diclorometano-metanol 46/4. El compuesto del título se obtuvo de este

modo (3,87 g, 24,4% de rendimiento). LC-MS: Rt 5,17; [M+H]+ 434; 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,70 (s, 6 H) 7,16 -7,24 (m, 1 H) 7,27

7,34 (m, 2 H) 7,36 -7,44 (m, 3 H) 7,74 -7,82 (m, 2 H) 7,87 (ddd, 1 H) 8,15 (d, 1 H) 10 8,18 (s, 1 H) 11,29 (s, 1 H) 12,50 (s, 1 H).

Por la operación de un modo análogo y por la reacción del ácido 3-(2-nitrobenzoilamino)-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico con el derivado amino apropiado, los siguientes compuestos se prepararon de este modo:

[1-(2-fluoro-fenil)-1-metil-etil]-amida del ácido 3-(2-Nitro-benzoilamino)-1H15 furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico. LC-MS: Rt 5,23; [M+H]+ 452;

1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,76 (s, 6 H) 7,00 -7,21 (m, 2 H) 7,22 7,33 (m, 1 H) 7,35 -7,45 (m, 2 H) 7,72 -7,82 (m, 2 H) 7,83 -7,92 (m, 1 H) 8,13 (d, 1 H) 8,21 (s, 1 H) 11,28 (s, 1 H) 12,50 (s, 1 H)

((R)-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-(2-Nitro-benzoilamino)-1H-furo[3,2-c]pirazol20 5-carboxílico;[M+H]+ 420; (1-fenil)-ciclopropil)-amida del ácido ((S)-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-(2-Nitro

benzoilamino)-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico;[M+H]+ 420; Ácido 3-(2-Nitro-benzoilamino)-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; [M+H]+ 432; ((S)-1-fenil-2-pirrolidin-1-il-etil)-amida del ácido 3-(2-Nitro-benzoilamino)-1H

25 furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; [M+H]+ 489.

Por la operación de un modo análogo y por la reacción del ácido 3-[2-Amino-4(4-metil-piperazin-1-il)-benzoilamino]-furo [3,2-c]pirazol-5-carboxílico con el derivado amino apropiado, los siguientes compuestos se prepararon de este modo:

[1-(2-fluoro-fenil)-1-metil-etil]-amida del ácido 3-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-230 nitro-benzoilamino]-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; [M+H]+ 532.

Ejemplo 5 (1-Metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-(2-Amino-benzoilamino)-1H-furo[3,2c]pirazol-5-carboxílico

imagen1

A una solución de (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-(2-nitro-benzoilamino)1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (1 g, 0,0023 mol) en etanol (30 ml) se añadió dihidrato de cloruro de estaño (2,08 g, 0,00923 mol). La mezcla se calentó a reflujo

5 durante 4 horas. Después de enfriar, el disolvente se evaporó a sequedad y el producto bruto se purificó por cromatografía en columna flash en gel de sílice (eluyendo con diclorometano-metanol 47/3. El producto aislado se trituró con éter etílico y se secó al vacío, que produce 550 mg del compuesto del título (59% de rendimiento).

10 LC-MS: Rt 4,34; [M+H]+ 404; 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,69 (s, 6 H) 6,46 -6,72 (m, J=6,95, 6,95 Hz, 3 H) 6,76 (dd, 1 H) 7,13 -726 (m, 302 H) 7,27 -7,35 (m, 3 H) 7,37 -7,46 (m, 2 H) 7,78 (d, J=6,71 Hz, 1 H) 8,31 (s, 1 H) 10,51 (s, 1 H) 12,46 (s, 1 H). En forma alternativa el mismo producto se puede obtener siguiendo el

15 procedimiento informado a continuación: A una solución de (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-(2-nitro-benzoilamino)1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (2,6 g, 0,006 mol) en acetato de etilo (200 ml) se añadió 10% de Pd/C (250 mg). La mezcla se hidrogenó bajo presión de 50 psi de hidrógeno usando un aparato Parr. El catalizador se renovó cada 8 horas y la reacción

20 se llevó a cabo durante un total de 40 horas. El catalizador posteriormente se filtró y se lavó con acetato de etilo. La fase orgánica se evaporó al vacío a sequedad, y el sólido así obtenido se trituró con éter etílico produciendo 1,49 g del compuesto del título.

Por la operación de un modo análogo los siguientes derivados 3-(2-Aminobenzoilamino)-furo[3,2-c]pirazol se prepararon mediante los correspondientes 25 derivados de 3-(2-nitro-benzoilamino)-furo[3,2-c]pirazol: [1-(2-fluorofenil)-1-metil-etil]-amida del ácido 3-(2-amino-benzoilamino)-1Hfuro[3,2-c]pirazol-5-carboxílico LC-MS: Rt 5,13; [M+H]+ 422; 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,75 (s, 6 H) 6,51 -6,64 (m, 3 H) 6,78 (d, 1 H) 7,03 -7,31 (m, 4 H) 7,34 (s, 1 H) 7,40 (ddd, 1 H) 7,77 (d, 1 H) 8,34 (s, 1 H) 10,50 30 (s, 1 H) 12,46 (s, 1 H)

((R)-1-feniletil)-amida del ácido 3-(2-Amino-benzoilamino)-1H-furo[3,2-o]pirazol5-carboxílico; [M+H]+ 390; ((S)-1-feniletil)-amida del ácido 3-(2-amino-benzoilamino)-1H-furo[3,2-c]pirazol5-carboxílico; [M+H]+ 390; 5 (1-fenilciclopropil)-amida del ácido 3-(2-amino-benzoilamino)-1H-furo[3,2c]pirazol-5-carboxílico; [M+H]+ 402; ((S)-1-fenil-2-pirrolidin-1-il-etil)-amida del ácido 3-(2-Amino-benzoilamino)-1Hfuro[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; [M+H]+ 459. [1-(2-fluoro-fenil)-1-metil-etil]-amida del ácido 3-[2-amino-4-(4-metil-piperazin-1

10 il)-benzoilamino]-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; LC-MS: Rt 3,73; [M+H]+ 502; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) � ppm 1,67 (s, 6 H) 2,20 (s, 3 H) 2,38 -2,43 (m,

4 H) 3,14 -3,21 (m, 4 H) 6,15 (d, J=2,44 Hz, 1 H) 6,17 -6,24 (m, 1 H) 6,58 (br. s., 2 H) 7,13-7,19 (m, 1 H) 7,24 -7,31 (m, 3 H) 7,35 -7,40 (m, 2 H) 7,67 (d, J=9,02 Hz, 1 H) 15 8,27 (s, 1 H) 10,12 (s, 1 H) 12,34 (br. s., 1 H)

Ejemplo 6 (1-Metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(1H-Pirrol-2-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (1)

imagen1

20 Se disolvió el ácido pirrol–2-carboxílico (0,284 g, 0,00255 mol) en diclorometano (DCM, 30 ml). Unas pocas gotas de dimetilformamida anhidra (DMF) se añadieron después de la adición gota a gota de cloruro de oxalilo (0,0153 g, 1,34 ml). Después de agitar durante la noche at temperatura ambiente, el disolvente se extrajo al vacío y la mezcla se tomó con tolueno y se evaporó a sequedad (dos veces). Esto

25 fue recientemente disuelto en diclorometano (DCM, 25 ml) y se compuso una solución de (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-(2-amino-benzoilamino)-1H-furo[3,2-c]pirazol5-carboxílico (286 mg, 0,711 mmol), piridina (4,27 mmol, 0,731 ml) y se añadió gota a gota diisopropiletilamina (10,6 mmol, 0,858 ml) en diclorometano (DCM, 30 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Posteriormente, se diluyó

30 con diclorometano, se lavó respectivamente con una solución saturada de bicarbonato de sodio, con salmuera con agua, y posteriormente se secó en sulfato de sodio. El disolvente orgánico se evaporó a sequedad y el producto bruto se tomó con tolueno y se evaporó a sequedad. El producto bruto posteriormente se disolvió en una solución de trietilamina (TEA) 10% en metanol y se agitó a 50ºC durante dos horas y a

5 temperatura ambiente durante la noche. La mezcla posteriormente se evaporó a sequedad y el residuo se purificó por cromatografía en columna flash en gel de sílice (eluyendo con diclorometano-metanol 46/4). El material aislado se trituró con éter etílico lo que produjo 110 mg del compuesto del título.

[M+H]+ 497;

10 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,69 (s, 6 H) 6,06 -6,21 (m, 1 H) 6,77 6,89 (m, 1 H) 6,94 -7,05 (m, 1 H) 7,15 -7,26 (m, 2 H) 7,27 -7,36 (m, J=12,44 Hz, 3 H) 7,36 -7,46 (m, 2 H) 7,56 -7,70 (m, 1 H) 8,08 (d, 1 H) 8,25 (s, 1 H) 8,63 (d, 1 H) 11,19 (s, 1 H) 11,83 (s, 1 H) 11,89 -12,01 (m, 1 H) 12,65 (s, 1 H).

Por la operación como antes informada y por comenzar desde el intermedio 15 adecuado, los siguientes derivados de furo[3,2-c]pirazol se prepararon en forma análoga.

(2) (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(tiofeno-2-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico. LC-MS: Rt 6,37; [M+H]+ 514;

20 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,68 (s, 6 H) 7,13 (dd, 1 H) 7,20 (tt, 1 H) 7,25 -7,34 (m, 3 H) 7,37 (s, 1 H) 7,38 -7,44 (m, 2 H) 7,65 (ddd, 1 H) 7,78 (dd, 1 H) 7,84 (dd, 1 H) 8,09 (d, 1 H) 8,29 (s, 1 H) 8,53 (d, 1 H) 11,25 (s, 1 H) 11,91 -12,39 (m, 1 H) 12,64 (s, 1 H) 3) (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-(2-acetilamino-benzoilamino)-1H

25 furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico LC-MS: Rt 4,87; [M+H]+ 446; 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,68 (s, 6 H) 2,09 (s, 3 H) 7,10 -7,24 (m, J=7,32 Hz, 2 H) 7,31 (d, J=15,97 Hz, 3 H) 7,36 -7,45 (m, 2 H) 7,54 (ddd, 1 H) 7,90 (d, 1 H) 8,23 -8,38 (m, 2 H) 10,80 (s, 1 H) 11,08 (s, 1 H) 12,56 (s, 1 H).

30 4) [1-(2-fluoro-fenil)-1-metil-etil]-amida del ácido 3-(2-acetilaminobenzoilamino)-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico LEMS: Rt 4,93; [M+H]+ 464; 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,75 (s, 6 H) 2,10 (s, 3 H) 7,03 -7,32 (m,

5 H) 7,32 -7,44 (m, 2 H) 7,52 -7,60 (m, 1 H) 7,92 (d, 1 H) 8,32 (s, 1 H) 10,77 -10,94 35 (m, 1 H) 11,08 (s, 1 H) 12,57 (s, 1 H).

5) [1-(2-fluoro-fenilo)-1-metil-etil]-amida del ácido 3-{2-[(1H-pirrol-2-carbonil)

amino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico LC-MS: Rt 5,72; [M+H]+ 515; 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,75 (s, 6 H) 6,08 -6,15 (m, 1 H) 6,80

5 6,85 (m, 1 H) 6,97 -7,01 (m, 1 H) 7,07 -7,24 (m, 3 H) 7,24 -7,32 (m, 1 H) 7,35 (s, 1 H) 7,41 (ddd, 1 H) 7,62 (ddd, 1 H) 8,07 (d, 1 H) 8,25 (s, 1 H) 8,64 (d, 1 H) 11,19 (s, 1 H) 11,78 -11,88 (m, 1 H) 11,90 -11,98 (m, 1 H) 12,64 (s, 1 H).

6) (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-(2-isobutirilamino-benzoilamino)-1Hfuro[3,2-c]pirazol-5-carboxílico 10 LC-MS: Rt 5,75; [M+H]+ 474;

1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,14 (d, J=6,83 Hz, 6 H) 1,68 (s, 6 H) 2,51 -2,63 (m, 1 H) 7,11 -7,24 (m, 2 H) 7,25 -7,35 (m, 3 H) 7,35 -7,44 (m, 2 H) 7,51 7,64 (m, 1 H) 7,97 (d, J=7,80 Hz, 1 H) 8,22 (s, 1 H) 8,42 (d, J=8,29 Hz, 1 H) 11,09 (s, 2 H) 12,58 (s, 1 H).

15 7) (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(1-Metil-1H-pirrol-2-carbonil)

amino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico LC-MS: RT 6,32; [M+H]+ 511; 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,68 (s, 6 H) 3,91 (s, 3 H) 6,05 (ddd, 1 H)

6,86 (ddd, 1 H) 7,04 (ddd, 1 H) 7,21 (s, 2 H) 7,27 -7,33 (m, 2 H) 7,35 (s, 1 H) 7,38 20 7,46 (m, 2 H) 7,61 (ddd, 1 H) 8,06 (d, 1 H) 8,25 (s, 1 H) 8,60 (d, 1 H) 11,17 (s, 1 H) 11,89 (s, 1 H) 12,64 (s, 1 H). 8) 1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(2-Metil-2H-pirazol-3-carbonil)amino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico LC-MS: Rt 5,65; [M+H]+ 512;

25 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,68 (s, 6 H) 4,11 (s, 3 H) 6,92 (d, 1 H) 7,15 -7,24 (m, 1 H) 7,26 -7,35 (m, 3 H) 7,36 (s, 1 H) 7,38 -7,47 (m, 3 H) 7,65 (ddd, 1 H) 8,08 (d, 1 H) 8,26 (s, 1 H) 8,51 (d, 1 H) 11,24 (s, 1 H) 12,03 (s, 1 H) 12,63 (s, 1 H).

9) (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(1-Metil-1H-pirazol-3-carbonil)amino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico 30 LC-MS: Rt 5,51; [M+H]+ 512;

1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,68 (s, 6 H) 3,87 (s, 3 H) 6,76 (d, 1 H) 7,14-7,45 (m, 7 H) 7,62 (ddd, 1 H) 7,82 (d, 1 H) 7,99 (d, 1 H) 8,36 (s, 1 H) 8,65 (d, 1 H) 11,06 (s, 1 H) 11,90 (s, 1 H) 12,63 (s, 1 H).

10) (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-(2-benzoilamino-benzoilamino)-1H35 furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico LC-MS: Rt 6,42; [M+H]+ 508;

1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,66 (s, 6 H) 7,16 -7,24 (m, 1 H) 7,25 7,34 (m, 3 H) 7,35 -7,45 (m, 4 H) 7,47 -7,61 (m, 2 H) 7,67 (dt, 1 H) 7,91 -8,00 (m, 2 H) 8,09 (d, 1 H) 8,29 (s, 1 H) 8,65 (d, 1 H) 11,22 (s, 1 H) 12,16 (s, 1 H) 12,64 (s, 1 H).

5 11) (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(5-Metil-1H-pirazol-3-carbonil)

amino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico LC-MS: Rt 4,81; [M+H]+ 512; 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,68 (s, 6 H) 2,27 (s, 3 H) 6,51 (s, 1 H)

7,15 -7,26 (m, 2 H) 7,26 -7,33 (m, 2 H) 7,36 -7,43 (m, 3 H) 7,61 (dt, 1 H) 7,97 (d, 1 H) 10 8,33 (s, 1 H) 8,67 (d, 1 H) 11,07 (s, 1 H) 11,95 (s, 1 H) 12,62 (s, 1 H) 13,05 (s, 1 H). 12) (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(Tiazol-4-carbonil)-amino]

benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico LC-MS: Rt 5,86; [M+H]+ 515; 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6) � ppm 1,68 (s, 6 H) 7,19 (tt, 1 H) 7,24 -7,35 (m,

15 3 H) 7,34 -7,44 (m, 3 H) 7,65 (dt, 1 H) 8,00 (d, 1 H) 8,32 (s, 1 H) 8,54 (d, 1 H) 8,71 (d, 1 H) 9,21 (d, 1 H) 11,10 (s, 1 H) 12,29 (s, 1 H) 12,64 (s, 1 H). 13) (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{4-(4-Metil-piperazin-1-il)-2-[(1Hpirrol-2-carbonil)-amino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico LC-MS: Rt 4,15; [M+H]+ 595;

20 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) � ppm 1,69 (s, 6 H) 2,26 (s, 3 H) 2,42 -2,61 (m, 4 H) 3,21 -3,49 (m, 4 H) 6,10 (dd, 1 H) 6,67 -6,77 (m, 2 H) 6,82 (dd, 1 H) 7,00 (dd, 1 H) 7,35 -7,49 (m, 4 H) 7,52 -7,59 (m, 2 H) 8,02 (d, 1 H) 8,25 (br. s., 1 H) 8,39 (br. s., 1 H) 10,80 (s, 1 H) 11,72 (br. s., 1 H) 12,58 (s, 1 H).

14) (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{4-(4-Metil-piperazin-1-il)-2-[(1-metil25 1H-pirrol-2-carbonil)-amino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico

LC-MS: Rt 4,54; [M+H]+ 609; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) � ppm 1,68 (s, 6 H) 2,26 (s, 3 H) 2,46 -2,50 (m, 4 H) 3,33 -3,38 (m, 4 H) 3,92 (s, 3 H) 6,03 (dd, J=3,84, 2,62 Hz, 1 H) 6,73 (dd, J=9,08, 2,38 Hz, 1 H) 6,88 (dd, J=4,02, 1,71 Hz, 1 H) 7,03 (t, J=2,01 Hz, 1 H) 7,15 -7,23 (m, 1 H)

30 7,25 -7,33 (m, 3 H) 7,37 -7,43 (m, 2 H) 8,02 (d, J=9,15 Hz, 1 H) 8,25 (s, 1 H) 8,35 (d, J=2,56 Hz, 1 H) 10,78 (s, 1 H) 12,56 (s, 1 H). 15) (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(1-metil-1H-imidazol-2-carbonil)amino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico LC-MS: Rt 6,08; [M+H]+ 512; 35 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) � ppm 1,67 (s, 6 H) 4,00 (s, 3 H) 7,03 (d, J=0,61

Hz, 1 H) 7,17 (t, J=7,19 Hz, 1 H) 7,35 (s, 1 H) 7,42 (br. s., 1 H) 7,61 (ddd, J=7,90, 7,70, 1,00 Hz, 1 H) 7,97 (d, J=7,68 Hz, 1 H) 8,28 (s, 1 H) 8,63 (d, J=8,29 Hz, 1 H) 11,07 (s, 1 H) 12,15 (s, 1 H) 12,61 (s, 1 H). 16) (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[4-(4-Metil-piperazin-1-il)5 benzoilamino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico[M+H]+ 512; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) � ppm 1,68 (s, 6 H) 2,50 -3,77 (m, 11 H) 7,12 (d, 2 H) 7,16 -7,27 (m, 2 H) 7,27 -7,34 (m, 2 H) 7,37 -7,44 (m, 3 H) 7,59 -7,68 (m, 1 H) 7,85 (d, 2 H) 8,07 (dd, 1 H) 8,32 (br. s., 1 H) 8,69 (dd, 1 H) 11,24 (s, 1 H) 12,12 (s, 1 H) 12,65 (s, 1 H).

10

Claims

Reivindicaciones

1. Un compuesto de fórmula (I):

imagen1

en el que

5 -A es un anillo arilo o heteroarilo; en el que heteroarilo es un anillo heterocíclico aromático que puede comprender un heterociclo de 5 o 6 miembros opcionalmente benzocondensado con 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre N, O o S;

-NHZR5 está en posición orto al ligador CONH;

10 -R1 y R2 son iguales o diferentes y, en forma independiente entre sí, representan un átomo de hidrógeno, un alquilo C1-C3 lineal o ramificado o un grupo CONH2, -CH2OR’ o -CH2NR’R" o, tomados juntos con el átomo de carbono al que están unidos, R1 y R2 pueden formar un grupo ciclo alquilo C3-C6; R’ y R" son iguales o diferentes y, en

15 forma independiente entre sí, representan un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C3 lineal o ramificado o, tomados juntos con el átomo de nitrógeno al que están unidos, R’ y R" pueden formar un anillo heterocíclico de fórmula

imagen1

20 en el que R"’ es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C3 lineal o

ramificado; -R3 es un átomo de hidrógeno o halógeno o un grupo seleccionado de hidroxi, ciano, alquilo C1-C3 lineal o ramificado, alquilamino C1-C6 y alcoxi C1-C3; -R4 es un átomo de hidrógeno o halógeno o un grupo seleccionado de hidroxi,

5 alquilo C1-C3 lineal o ramificado, alcoxi C1-C3, alquilamino C1-C6, dialquilamino C1-C6, azetidin-1-ilo, pirrolidin-1-ilo, piperidin-1-ilo, (1-metil-piperazin-4-ilo), (morfolino-4-ilo), (azetidin-1-il)metilo, (pirrolidin-1-il)metilo, (piperidin-1-il)metilo, (1-metil-piperazin-4il)metilo, (morfolino-4-il)metilo, (1-metil-piperidin-4-iloxi) metilo, (alquilamino C1C6)metilo y (dialquilamino C1-C6)metilo;

10 -Z es un enlace directo, >C=O, o -C(=O)NH-;

-R5 es hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado de alquilo C1-C6, alquenilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6, arilo, heteroarilo y heteroarilo saturado; en el que heteroarilo es un anillo heterocíclico aromático que puede comprender un heterociclo de 5 o 6 miembros opcionalmente benzocondensado con 1 a 3

15 heteroátomos seleccionados entre N, O o S o sus isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables.
2. Un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1 en el que R1 y R2 no son átomos de hidrógeno.
3. Un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1 o 2

20 en el que A es un grupo tienilo, furilo, pirrolilo o fenilo opcionalmente también sustituido.
4. Un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1 o 2 en el que A es un grupo fenilo y R4 está en la posición 4 y representa un grupo hidrógeno, halógeno, metoxi, azetidin-1-ilo, pirrolidin-1-ilo, piperidin-1-ilo, (1-metil

25 piperazin-4-ilo), (morfolino-4-ilo), (azetidin-1-il)metilo, (pirrolidin-1-il)metilo, (piperidin-1il)metilo, (1-metil-piperazin-4-il)metilo, (morfolino-4-il)metilo, (1-metil-piperidin-4iloxi)metilo, (alquilamino C1-C6)metilo o (dialquilamino C1-C6)metilo.
5. Un compuesto de fórmula (I) como se define en una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que Z es >C=O.

30 6. Un compuesto de fórmula (I) como se define en una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que R1 y R2 son ambos un grupo metilo o, tomados juntos con el átomo de carbono al que están unidos, forman un grupo cicloalquilo C3C6.
7.

Un compuesto de fórmula (I) como se define en una cualquiera de las 35 reivindicaciones precedentes en el que R3 representa un átomo de hidrógeno o

halógeno.
8.

Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en: (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(1H-pirrol-2-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; 5 (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(tiofeno-2-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; [1-(2-fluoro-fenil)-metil-etil]-amida del ácido 3-{2-[(1H-pirrol-2-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(1-metil-1H-pirrol-2-carbonil)-amino]10 benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico ; 1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(2-metil-2H-pirazol-3-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(1-metil-1H-pirazol-3-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; 15 (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-(2-benzoilamino-benzoilamino)-1Hfuro[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(5-metil-1H-pirazol-3-carbonil)-amino]benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(tiazol-4-carbonil)-amino]20 benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{4-(4-metil-piperazin-1-il)-2-[(1H-pirrol-2carbonil)-amino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{4-(4-metil-piperazin-1-il)-2-[(1-metil-1Hpirrol-2-carbonil)-amino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico y

25 (1-metil-1-fenil-etil)-amida del ácido 3-{2-[(1-metil-1H-imidazol-2-carbonil)amino]-benzoilamino}-1H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; o sus isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables.
9. Un proceso para preparar los compuestos de fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de estos como se define en la reivindicación 1, tal

30 proceso comprende: a) reacción de un compuesto bicíclico de fórmula (II):

imagen1

en el que ALK es un grupo alquilo C1-C4 con cualquier agente protector adecuado del átomo de nitrógeno del pirazol; b) acilación del compuesto resultante de fórmula (III):

imagen1

en el que ALK es como se definió anteriormente y Q representa cualquier agente protector adecuado del nitrógeno del pirazol, con un compuesto de fórmula (IV):

imagen1

10 en el que A y R4 son como se definieron en la reivindicación 1 y LG representa un grupo saliente adecuado; c) hidrólisis del grupo éster alquílico y eliminación del grupo protector Q del compuesto resultante de fórmula (V):

imagen1

15

en el que ALK, A, R4 y Q son como se definieron anteriormente;

d) reacción del compuesto resultante de fórmula (VI):

imagen1

en el que A y R4 son como se definieron anteriormente, con un compuesto de fórmula (VII)

imagen1

en el que R1, R2 y R3 son como se definieron en la reivindicación 1, en la presencia de cualquier agente de condensación adecuado; e) reducir el grupo nitro del compuesto resultante de fórmula (VIII)

imagen1

10 en el que A, R1, R2, R3, R4 y Q son como se definieron anteriormente; f) acilación del compuesto resultante de fórmula (IX):

imagen1

en el que A, R1, R2, R3 y R4 son como se definieron anteriormente, con un compuesto de fórmula (X) o (XI):

R5-Z-LG (X)

5

R5-NCO (XI)

en el que Z es >C=O o -C(=O)NH-, R5 es como se define en la reivindicación 1 y LG es como se definió anteriormente; 10 g) desacilación selectiva del compuesto resultante de fórmula (XII):

imagen1

en el que A, R1, R2, R3, R4 y Q son como se definieron anteriormente y Z es >C=O o -C(=O)NH-, por la hidrólisis selectiva del sustituyente ZR5 del nitrógeno pirazólico para obtener un compuesto de fórmula (I) en el que A, R1, R2, R3 y R4 son

15 como se definieron anteriormente y Z es >C=O o -C(=O)NH-, o f) tratar un compuesto de fórmula (IX) como se definió anteriormente con un

compuesto carbonilo de fórmula W-CO-Y (XIII) en el que W y Y son átomos de hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado de alquilo C1-C5, 20 cicloalquilo C1-C5, arilo, heteroarilo o heteroarilo saturado, en la presencia de un agente reductor oportuno, para obtener un compuesto de fórmula (I) en el que A, R1, R2, R3 y R4 son como se definieron anteriormente y Z es un enlace directo y, si desea

o es necesario, h) convertir un compuesto de fórmula (I) como se definió anteriormente en un

25 compuesto de fórmula (I) diferente por reacciones conocidas, o convertir un compuesto de fórmula (I) como se definió anteriormente en una sal farmacéuticamente aceptable o convertir la sal de este en el compuesto de fórmula (I) libre como se definió anteriormente.
10. Un proceso para preparar un compuesto de la fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, que comprende: i) reducir el grupo nitro del compuesto de fórmula (V) como se define en la

reivindicación 9, y j) acilar el compuesto resultante de fórmula (XIV):

imagen1

en el que A, R4, ALK y Q son como se define en la reivindicación 9, con un compuesto de fórmula (X) o (XI) como se define en la reivindicación 9 para obtener un 10 compuesto de fórmula (XV):

imagen1

en el que A, R4, R5, ALK y Q son como se define en la reivindicación 9 y Z es >C=O o -C(=O)NH-; o j’) tratar un compuesto de fórmula (XIV) como se definió anteriormente con un

15 compuesto carbonilo de fórmula W-CO-Y (XIII) como se describió en la reivindicación 9, para obtener un compuesto de fórmula (XV) en el que A, R4, R5, ALK y Q son como se definieron anteriormente y Z es un enlace directo;

k) hidrolizar el grupo éster alquílico y eliminar el grupo protector Q del compuesto de resultante fórmula (XV) en el que Z es >C=O o -C(=O)NH-o un enlace 20 directo; l) hacer reaccionar el compuesto resultante de fórmula (XVI)

imagen1

en el que A, R4, R5 y Z son como se definieron anteriormente, con un compuesto de fórmula (VII) como se describió en la reivindicación 9;

m) convertir un compuesto de fórmula (I) como se definió anteriormente en un 5 compuesto de fórmula (I) diferente por reacciones conocidas o convertir un compuesto de fórmula (I) como se definió anteriormente en una sal farmacéuticamente aceptable

o convertir la sal de este en el compuesto de fórmula (I) libre (I) como se definió anteriormente.
11. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad

10 terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de este, como se define en la reivindicación 1, y al menos un excipiente, portador y/o diluyente farmacéuticamente aceptable.
12. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 11 que además comprende uno o más agentes quimioterapéuticos.

15 13. Un producto o kit que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de este, como se define en la reivindicación 1, o composiciones farmacéuticas de estas como se define en la reivindicación 11 y uno o más agentes quimioterapéuticos, en forma de preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en la terapia anticáncer.

20 14. Un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable, como se define en la reivindicación 1, para uso como medicamento.
15. Un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de este, de acuerdo con la reivindicación 14 para uso como un medicamento para tratar una enfermedad causada y/o asociada con IGF-1R desregulado o actividad de Aurora

25 quinasas.