PT1644376E

PT1644376E - Derivados de pirrolo [3,4-c] pirazole activos como inibidores da cinase

Info

Publication number: PT1644376E
Application number: PT04763132T
Authority: PT
Inventors: Mario Varasi; Daniele Fancelli; Paola Vianello; Barbara Forte; Jurgen Moll
Original assignee: Nerviano Medical Sciences Srl
Priority date: 2003-07-09
Filing date: 2004-07-08
Publication date: 2010-09-24
Also published as: GT200400133AA; RS52155B; TNSN06009A1; RS20060004A; AR050045A1; EP1644376A1; JP4728232B2; ATE480540T1; TWI343382B; BRPI0411868B8; PE20050325A1; NO332361B1; PA8606201A1; MXPA06000362A; IL172923A; CY1110832T1; US20060276471A1; KR20060033001A; AU2004255347A1; KR101075711B1

Description

ΡΕ1644376 1 DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE PIRROLO[3,4-C]PIRAZOLE ACTIVOS COMO INIBIDORES DA CINASE"

ANTECEDENTES DO INVENTO

Domínio do Invento 0 presente invento refere-se a derivados de pirrolo-pirazole, a um processo para a sua preparação, a composições farmacêuticas compreendendo os mesmos, e à sua utilização como agentes terapêuticos, particularmente no tratamento do cancro e de doenças de proliferação das células.

Discussão dos Antecedentes 0 mau funcionamento das proteína cinases (PKs) é a marca de numerosas doenças. Uma grande parte dos oncogenes e dos proto-oncogenes envolvidos nos cancros humanos codifica PKs. As actividades aumentadas das PKs estão também implicadas em muitas doenças não malignas, tais como a hiperplasia benigna da próstata, a adenomatose familiar, polipose, neuro-fibromatose, psoríase, proliferação das células lisas vasculares associada a ateros-clerose, fibrose pulmonar, artrite, glumerulonefrite e estenose e restenose pós-cirúrgicas. 2 ΡΕ1644376

As PKs estão também implicadas em condições imflamatórias e na multiplicação de virus e parasitas. As PKs desempenham também um papel importante na patogénese e no desenvolvimento de doenças neurodegenerativas.

Para referência geral ao mau funcionamento e desregulação das PKs ver, por exemplo, Current Opinion in Chemical Biology 1999, 3, 459-465.

Entre as várias proteína cinases conhecidas na arte como estando implicadas no crescimento das células cancerígenas são as Aurora cinases, em particular a Aurora-2 .

Verificou-se que a Aurora-2 era sobre-expressada num certo número de diferentes tipos de tumores. 0 seu locus do gene está mapeado em 20gl3, uma região cromossómica frequentemente amplificada em muitos cancros, incluindo o cancro da mama [Câncer Res. 1999, 59(9), 2041-4] e do cólon. A amplificação 20ql3 correlaciona-se com um fraco prognóstico em doentes com cancro da mama do tipo nódulo-negativo e um aumento da expressão Aurora-2 é indicativo de uma fraco prognóstico e de um menor tempo de sobrevivência em doentes com cancro na bexiga [J. Natl. Câncer Inst., 2002, 94 (17), 1320-9]. Para uma referência geral ao papel da Aurora-2 na função do centrosoma anormal no cancro ver também Molecular Câncer Therapeutics, 2003, 2, 589-595. ΡΕ1644376 3

SUMÁRIO DO INVENTO É um objectivo do invento proporcionar compostos que sejam úteis em terapia como agentes contra um hospedeiro de doenças provocadas por e/ou associadas a uma actividade desregulada de proteína cinase e, mais particularmente, a actividade de Aurora cinases. É outro objecto proporcionar compostos que são dotados com actividade de inibição de proteína cinase e, mais particularmente, actividade de inibição das Aurora cinases.

Os presentes inventores verificaram agora que alguns pirrolo-pirazoles e derivados destes, são dotados de actividade de inibição de proteína cinase, e.g. actividade de inibição de Aurora cinases.

Mais especificamente, os compostos deste invento são úteis no tratamento de uma variedade de cancros, incluindo, mas não limitados a: carcinoma, tal como da bexiga, mama, cólon, rim, fígado, pulmão, incluindo cancro do pulmão de células pequenas, esófago, vesícula biliar, ovários, pâncreas, estomago, cérvix, tiróide, próstata e pele, incluindo carcinoma de células escamosas; tumores hematopoiéticos de linhagem linfóide, incluindo leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma da célula B, linfoma da célula T, linfoma de 4 ΡΕ1644376

Hodgkin, linfoma não-Hodgkin, linfoma de tricoleucitos e linfoma de Burkett; tumores hematopoiéticos da linhagem mielóide, incluindo leucemias mielóides agudas e crónicas, síndroma mielodisplástica e leucemia promielocítica; tumores de origem mesenquimal, incluindo fibrosarcoma e rabdo-miosarcoma; tumores do sistema nervosos central e periférico, incluindo astrocitoma, neuroblastoma, glioma e schwa-nomas; outros tumores, incluindo melanoma, seminoma, tera-tocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentosum, quera-toxantoma, cancro folicular da tiróide e sarcoma de Kaposi.

Devido ao papel chave das PKs e das Aurora cinases na regulação da proliferação celular, estes pirro-lo-pirazoles são também úteis no tratamento de uma variedade de doenças de proliferação das células tais como, por exemplo, hiperplasia benigna da próstata, adenomatose familiar, polipose, neurofibromatose, psoríase, proliferação das células lisas vasculares associadas à ateros-clerose, fibrose pulmonar, artrite glomerulonefrite e este-nose pós-cirúrgica e restenose.

De acordo com uma primeira forma de concretização, o presente invento proporciona uma utilização de um componente de fórmula (I) para a produção de um medicamento para tratar doenças de proliferação de células provocadas e/ou associadas a uma actividade alterada da proteína cinase que compreende a administração a um mamífero que disso necessite de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) 5 ΡΕ1644376

em que R é hidrogénio ou metilo;

Ri é hidroxi ou um grupo alquilo C1-C3 linear ou ramificado ou alcoxi; R2 é um hidrogénio ou um átomo de halogéneo; X é um grupo divalente seleccionado de metileno (-CH2-) ou fluorometileno (-CHF-) ou é um heteroátomo ou grupo heteroatómico seleccionado de oxigénio (-0-) ou azoto (-NR'-) em que R' é um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo C1-C4 linear ou ramificado ou um grupo cicloalquilo C3-C6; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. 0 medicamento anterior permite o tratamento de doenças de proliferação de células provocadas por e/ou associadas à actividade alterada de Aurora cinases. 6 ΡΕ1644376

Numa forma de concretização preferida da utilização descrita atrás, a doença de proliferação de células é o cancro.

Tipos específicos de cancro que podem ser tratados incluem carcinoma, carcinoma de célula escamosa, tumores hematopoiéticos da linhagem mielóide ou linfóide, tumores de origem mesenquimal, tumores do sistema nervoso central e periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentosum, queratoxantoma, cancro folicular da tiróide, e sarcoma de Kaposi. 0 presente invento proporciona também um composto de fórmula (I)

R é hidrogénio ou metilo; 7 ΡΕ1644376

Ri é hidroxi ou um grupo alquilo C1-C3 linear ou ramificado ou alcoxi; R2 é um hidrogénio ou um átomo de halogéneo; X é um grupo divalente seleccionado de metileno (—CH2—) ou fluorometileno (-CHF-) ou é um heteroátomo ou grupo heteroatómico seleccionado de oxigénio (-0-) ou azoto (—NR' -) em que R' é um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo C1-C4 linear ou ramificado ou um grupo cicloalquilo C3-C6; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. 0 presente invento inclui também métodos de síntese de pirrolo-pirazoles de fórmula (I) e dos sais farmaceuticamente aceitáveis, assim como as composições farmacêuticas que os compreendem.

Uma apreciação mais completa do invento e muitas das vantagens deste serão rapidamente obtidas e serão melhor compreendidas com referência à descrição detalhada seguinte.

DESCRIÇÃO DETALHADA DO INVENTO

Vários compostos heterocíclicos são conhecidos na arte como sendo inibidores da proteína cinase. Entre estes os 3-carboxamido-pirazoles e os 3-ureido-pirazoles e derivados destes foram descritos como inibidores de proteína cinase nos pedidos de patente internacional WO 8 ΡΕ1644376 01/12189, WO 01/12188, WO 02/48114 e WO 02/70515, todos em nome do próprio autor deste pedido.

Compostos bicíclicos fundidos compreendendo porções pirazole e possuindo actividade inibidora da cinase foram também descritos nos documentos WO 0069846, WO 02/12242 assim como WO 03/028720 e no pedido de patente ainda não publicado PCT/EP03/04862 (que reivindica prioridade em relação ao pedido de patente 60/381092, apresentado em 17 de Maio de 2002) todos em nome do próprio autor deste pedido.

Adicionalmente ao referido atrás, derivados de aminofenil-piperazina ou aminofenil-piperidina possuindo actividade inibidora em relação às proteínas de prenil transferase são descritos no documento WO 02/30927 em nome de Pierre Fabre Medicament.

Os compostos do presente invento estão dentro do domínio da fórmula geral do atrás mencionado documento WO 02/12242 mas não estão aí especificamente exemplificados.

Os compostos de fórmula (I) do invento possuem átomos de carbono assimétricos e podem por isso existir como isómeros ópticos individuais, como misturas racémicas ou como qualquer outra mistura compreendendo uma maioria dos dois isómeros ópticos que pretendem estar todos no domínio do presente invento. 9 ΡΕ1644376

Do mesmo modo, a utilização como agente anti-tumoral de todos os isómeros possíveis e suas misturas e quer dos metabolitos quer dos bio-precursores farmaceu-ticamente aceitáveis (de outro modo referidos como pró-drogas) dos compostos de fórmula (I) estão também dentro do domínio do presente invento.

As pró-drogas são quaisquer compostos covalen-temente ligados que libertam o fármaco-mãe activo de acordo com a fórmula (I), in vivo.

Nos casos que em os compostos podem existir em formas tautoméricas, cada forma é contemplada como estando incluída no âmbito deste invento quer existindo em equilíbrio quer predominantemente numa forma.

Como tal, a menos que proporcionado de outro modo, quando apenas uma das seguintes formas tautoméricas de fórmula (Ia) ou (Ib) é indicada, a remanescente pretende estar também compreendida no domínio deste invento:

Na descrição presente, a menos que indicado em 10 ΡΕ1644376 contrário, com o termo alquilo C1-C3 ou C1-C4 linear ou ramificado pretende significar-se qualquer um dos grupos tais como, por exemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo e sec-butilo.

Com o termo alcoxi C1-C3 linear ou ramificado pretende significar-se qualquer um dos grupos tais como, por exemplo, metoxi, etoxi, n-propoxi e isopropoxi.

Com o termo halogéneo pretende significar-se um átomo de flúor, cromo, bromo e iodo. Com o termo cicloalquilo C3-C6 pretende significar-se qualquer grupo tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo ou ciclo-hexilo. É claro que dependendo da natureza do grupo X, estando este mesmo heterociclo ligado à porção fenileno dos compostos de fórmula (I) pode representar um anel pipe-ridino, 4-fluoropiperidino, piperazino, 4-alquil-pipera-zino, 4-cicloalquil-piperazino ou morfolino.

Sais farmaceuticamente aceitáveis dos tais compostos de fórmula (I) incluem os sais de adição ácidos com ácidos inorgânicos ou orgânicos tais como, por exemplo, ácido nítrico, clorídrico, bromídrico, sulfúrico, percló-rico, fosfórico, acético, trifluoroacético, propiónico, glicólico, láctico, oxálico, malónico, málico, maleico, tartárico, cítrico, benzóico, cinâmico, mandélico, metanos-sulfónico, isetiónico e salicílico. 11 ΡΕ1644376

Uma classe preferida de compostos do invento é representada pelos derivados de fórmula (I) em que R é hidrogénio ou metilo; Ri é seleccionado de hidroxi, metilo ou metoxi; R2 é um átomo de hidrogénio ou de flúor; X é seleccionado de metileno, fluorometileno, -0- ou -NR', em que R' é tal como relatado atrás.

Para uma referência a qualquer composto de fórmula (I) especifico do invento, opcionalmente sob a forma de um sal farmaceuticamente aceitável, ver a secção experimental e as reivindicações.

Tal como atrás indicado um outro objectivo do presente invento é representado pelo processo para preparar os compostos de fórmula (I) e os sais farmaceuticamente aceitáveis destes, processo esse que compreende: a) reacçao de um composto de fórmula (II) com um composto de fórmula (III)

θ'" (II) Q

em que R e X sao tal como definidos atrás, Q é um grupo alquilo inferior, t-Bu representa terc-butilo e Z é 12 ΡΕ1644376 hidroxi ou um grupo de saída adequado, de modo a obter um composto de fórmula (IV) condições la (V)

b) reacçao do compostos de fórmula acídicas de modo a obter um composto (IV) sob de fórmu-

c) reacçao do composto de fórmula (V) com um composto de fórmula (VI)

(VI) 13 ΡΕ1644376 em que Ri e R2 são tal como definidas atrás e Z' representa hidroxi ou um grupo de saída adequado, de modo a obter um composto de fórmula (VII)

(VII) d) reacção do composto de fórmula (VII) sob condições básicas de modo a obter o composto de fórmula (I) correspondente e, se desejado, convertê-lo num sal farma-ceuticamente aceitável deste. 0 processo anterior é um processo de analogia que pode ser concretizado trabalhando de acordo com condições operativas muito bem conhecidas.

De acordo com o passo (a) do processo, a reacção entre os compostos de fórmula (II) e (III) podem ser realizados de várias maneiras, de acordo com métodos convencionais de acilação de derivados amino. Como exemplo, o composto de fórmula (II) pode ser feito reagir com um 14 ΡΕ1644376 cloreto de acilo de fórmula (III) em que Z representa um grupo de sáida adequado, um átomo de cloro.

Preferencialmente, esta reacção é realizada a uma temperatura que varia desde a temperatura ambiente até cerca de 60°C, no seio de um solvente adequado tal como, por exemplo, tetra-hidrofurano ou diclorometano e na presença de um eliminador de protões tal como trietilamina ou diisopropiletilamina. Nos compostos de fórmula (II) Q representa um grupo alquilo inferior, por exemplo, um grupo alquilo Ci-C4, mais preferencialmente metilo ou etilo.

De acordo com o passo (b) do processo, o composto de fórmula (IV) é facilmente desprotegido no átomo de azoto da pirrolidina através de tratamento acidico.

Esta reacção pode ser adequadamente realizada na presença de um ácido mineral ou orgânico, tal como, por exemplo, ácido clorídrico, trifluoroacético ou metanos-sulfónico, num solvente adequado, tal como diclorometano, 1,4-dioxano, um álcool inferior (e.g. metanol ou etanol), a uma temperatura que varia desde a temperatura ambiente até cerca de 40°C e durante um tempo que varia de cerca de 1 hora até cerca de 48 horas. O composto de fórmula (V) assim obtido é ainda feito reagir, de acordo com o passo (c) do processo, com um composto de fórmula (VI). Do que foi dito atrás fica claro para um especialista na matéria que esta reacção de 15 ΡΕ1644376 acilação pode ser também conseguida de várias maneiras e com várias condições operacionais, que são amplamente conhecidas na arte da preparação de carboxamidas.

Esta reacção entre um composto de fórmula (V) e um ácido carboxilico de fórmula (VI) em que Z' é hidroxi pode ser realizada na presença de um agente de ligação tal como, por exemplo, carbodiimida, i.e. 1,3-diciclo-hexil-carbodiimida, 1,3-diisopropilcarbodiimida, 1-(3-dimetilami-nopropil)-3-etilcarbodiimida, N-ciclo-hexilcarbodiimida-N'-propiloximetil-poliestireno ou N-ciclo-hexilcarbodiimida-N'-metil-poliestireno, no seio de um solvente adequado tal como, por exemplo, diclorometano, clorofórmio, tetra-hidrofurano, éter dietilico, 1,4-dioxano, acetonitrilo, tolueno, ou N,N-dimetilformamida a uma temperatura variando de cerca de -10°C até refluxo durante um tempo adequado, i.e. de cerca de 30 minutos até cerca de 96 horas. A referida reacção é, opcionalmente, realizada na presença de um catalisador adequado, por exemplo a 4-dimetilamino-piridina ou na presença de ainda outro agente de ligação tal como o N-hidroxibenzotriazole. A reacção entre um composto de fórmula (V) e um composto de fórmula (VI) pode ser também realizada, por exemplo, através do método do anidrido misto, utilizando um cloroformato de alquilo, tal como cloroformato de etilo, isobutilo ou isopropilo, na presença de uma base terciária, tal como trietilamina, N,N-diisopropiletilamina ou piri-dina, num solvente adequado, tal como, por exemplo, tolu- 16 ΡΕ1644376 eno, diclorometano, clorofórmio, tetra-hidrofurano, aceto-nitrilo, éter dietílico, 1,4-dioxano ou N,N-dimetil-formamida a uma temperatura variando de cerca de -30°C até à temperatura ambiente. A reacção entre um composto de fórmula (V) e um derivado carboxilico de fórmula (VI) em que Z' é um grupo de saida adequado, pode ser realizada na presença de uma base terciária tal como a trietilamina, a N,N-diisopro-piletilamina ou piridina, no seio de um solvente adequado, tal como tolueno, diclorometanol, clorofórmio, éter dietílico, tetra-hidrofurano, acetonitrilo ou N,N-dimetilfor-mamida a uma temperatura variando de cerca de -10°C até ao refluxo.

Os compostos de fórmula (VI) são caracterizados pela presença de um átomo de carbono assimétrico que está ligado a Ri e referenciado com um asterisco

Assim, os compostos de fórmula (VI) podem estar quer na forma de enantiómeros únicos quer como misturas destes, compreendendo também misturas racémicas. 17 ΡΕ1644376 É claro que dependendo da natureza dos compostos de fórmula (VI) que estão a ser utilizados no processo do invento, compostos correspondentes de fórmula (VII) possuindo uma estereoquímica adequadamente definida neste mesmo átomo de carbono podem ser obtidos.

De acordo com uma forma de concretização preferida do invento, o passo (c) é realizado fazendo reagir um composto adequado de fórmula (VI) que está numa dada forma enantiomérica.

Do mesmo modo, se forem empregues misturas racémicas do composto de fórmula (VI) e quando são desejados compostos finais de fórmula (I) em forma óptica pura, a resolução óptica do composto intermédio de fórmula (VII) ou, alternativamente, do composto final de fórmula (I) será requerida, trabalhando de acordo com meios convencionais. Apenas como exemplo, técnicas convencionais para a resolução do racemato incluem, por exemplo, a cristalização fraccionada de derivados de sal diastere-oisomérico ou HPLC quiral preparativa.

Finalmente, de acordo com o passo (d) do processo, o composto de fórmula (VII) é desprotegido no átomo de azoto do pirazole trabalhando de acordo com métodos convencionais permitindo, por exemplo, a hidrólise selectiva do grupo carbamato. 18 ΡΕ1644376

Como exemplo, esta reacção pode ser realizada sob condições básicas, por exemplo, na presença de hidróxido de sódio, potássio ou de litio, ou uma amina terciária, tal como trietilamina e qualquer solvente adequado, tal como N,N-dimetilformamida, metanol, etanol, tetra-hidrofurano, água e misturas destes. Tipicamente, a reacção é realizada a temperaturas que variam desde a temperatura ambiente até cerca de 60°C e durante um tempo que varia de cerca de 30 minutos até cerca de 96 horas.

Finalmente, sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula (I) ou, alternativamente, os compostos livres a partir destes sais podem ser também todos obtidos de acordo com métodos convencionais. O material de partida do processo do invento são conhecidos ou facilmente preparados de acordo com métodos conhecidos.

Como exemplo, a preparação do composto de fórmula (II) em que Q representa etilo é descrito no pedido de patente internacional atrás mencionado WO 02/12242 (ver, em particular), o exemplo 26 na página 249; este mesmo composto é aqui designado como éster 5-terc-butílico e 1-etílico do ácido 3-amino-4,6-di-hidro-pirrolo[3,4-c]pirazole-l,5-dicarboxílico). 19 ΡΕ1644376

Trabalhando de modo análogo, compostos adicionais de fórmula (II) em que Q representa um grupo alquilo inferior que não etilo podem ser assim também preparados.

Os compostos de fórmula (III) e (VI), por exemplo aqueles em que Z e Z' representam um átomo de halogéneo, e.g. um átomo de cloro, são quer conhecidos quer podem ser facilmente obtidos a partir dos ácidos carboxilicos conhecidos correspondentes, trabalhando de acordo com métodos convencionais.

Do mesmo modo, é também claro para um especialista na matéria que se um composto de fórmula (I), preparado de acordo com o processo anterior compreendendo qualquer variante deste, for obtido como uma mistura de isómeros, a sua separação nos isómeros únicos de fórmula (I), realizada de acordo com técnicas convencionais, está ainda no domínio do presente invento.

FARMACOLOGIA

Os compostos de fórmula (I) são activos como inibidores de proteína cinase, mais particularmente como inibidores de Aurora cinases e são por isso úteis, por exemplo, para restringir a proliferação desregulada de células tumorais.

Em terapia, estes podem ser utilizados no tratamento de vários tumores, tais como os anteriormente 20 ΡΕ1644376 relatados, assim como no tratamento de outras doenças de proliferação de células, tais como a psoriase, proliferação de células lisas vasculares associadas a aterosclerose e estenose e restenose pós-cirúrgica. A actividade e potência inibidora dos compostos seleccionados é determinada através de um método de ensaio baseado na tecnologia SPA (Amersham Pharmacia Blotech). O ensaio consiste na transferência da porção fosfato marcada com radioactividade pela cinase para um substrato bioestanhado. O produto bioestanhado marcado 33P resultante é deixado para se ligar a partículas esferóides SPA revestidas com streptavidina (capacidade de bioestanho de 130 pmol/mg) e a luz emitida foi medida num contador de cintilação.

Ensaio de inibição da actividade de Aurora-2

Reacção da cinase: 8 μΜ de péptido bioestanhado (4 repetições de LRRWSLG) , 10 μΜ de ATP (0,5 uCi P33y-ATP), 7,5 ng de Aurora 2, inibidor num volume final de 30 μΐ de tampão (HEPES 50 mM pH 7,0, MgCl2 10 mM, 1 mM DTT, 0,2 mg/ml BSA, 3 μΜ de ortovanadato) foram adicionados a cada poço de uma placa com 96 poços de fundo em U. Após uma incubação de 60 minutos à temperatura ambiente, a reacção foi parada e o péptido bioestanhado capturado adicionando 100 μΐ da suspensão de partículas esferóides. 21 ΡΕ1644376

Estratificação: 100 μΐ de CSCI2 5M foi adicionado a cada poço e deixou-se a repousar durante 4 horas antes da radioactividade ser contada no equipamento Top-Count.

Determinação da IC50: Inibidores foram testados com diferentes concentrações variando de 0,0015 a 10 μΜ. Os dados experimentais foram analisados pelo programa informático GraphPad Prizm utilizando a equação logarítmica de quatro parâmetros: y = base + (topo-base)/(1+10Λ((logIC50-x)*declive)) em que x é o logaritmo da concentração de inibidor, y é a resposta; y começa na base e vai até ao topo com uma forma sigmóide. Cálculo do Ki: Método experimental: A reacção foi realizada em tampão (10 mM Tris, pH 7,5, 10 mM MgCl2, 0,2 mg/ml BSA, 7,5 mM DTT) contendo 3,7 nM enzima, histona e ATP (razão constante de ATP não marcada/marcada 1/3000) . A reacção foi parada com EDTA e o substrato foi capturado numa fosfo-membrana (picas de 96 poços Multiscreen da Millipore). Após uma extensa lavagem as placas Multiscreen foram lidas num contador. Foi medido o controlo (tempo zero) para cada concentração de ATP e histona. 22 ΡΕ1644376

Parte experimental: As velocidades de reacção foram medidas para quatro concentrações de ATP, substrato (histona) e inibidor. Uma matriz de concentração de 80 pontos foi desenhada à volta dos respectivos valores Km de ATP e substrato e os valores do IC50 do inibidor (0,3, 1, 3, 9 vezes os valores de Km ou IC50) . Uma experiência no tempo preliminar na ausência de um inibidor e a diferentes concentrações de ATP e substrato permite a selecção de um único ponto de tempo final (10 min) na gama linear da reacção para a experiência de determinação de Ki.

Estimativas de parâmetros cinéticos: Foram estimados parâmetros cinéticos através de regressão de mínimos quadrados não linear simultânea utilizando [Eq.l] (inibidor competitivo em relação a ATP, mecanismo aleatório) utilizando o conjunto completo de dados (80 pontos): [Eq 1]

Vm ® Â a B v —

Kct B cc®Ka®Kb + a®KaoB + a<aKb®A + AoB + a« — e / ® (Kb H—)

Ki β em que A=[ATP], B=[substrato], I=[inibidor], Vm= velocidade máxima, Ka, Kb, Ki as constantes de dissociação de ATP, substrato e inibidor respectivamente, α e β o factor de cooperatividade entre a ligação de substrato e ATP e a ligação de substrato e inibidor, respectivamente.

Os compostos do invento foram ainda testados in 23 ΡΕ1644376 vitro para avaliar o efeito anti-proliferativo nas culturas de células e o efeito inibidor no ciclo das células.

Ensaio de proliferação das células in vitro

A linha de células do cancro do cólon humano HCT-116 foi desenvolvida em cultura a 5000 células/cm2 em placas de 24 poços (Costar) utilizando meio F12 (Gibco) suplementado com 10% de FCS (Euroclone, Itália) 2 mM de glutamina e 1% de penicilina/estreptomicina e mantido a 37°C, 5% CO2 e 96% de humidade relativa. No dia seguinte foram tratadas placas em duplicado com 5 μΐ de uma diluição adequada de compostos partindo de uma solução-mãe 10 mM em DMSO. Dois poços de controlo não tratados foram incluídos em cada placa. Após 72 horas de tratamento, foi retirado meio e as células foram destacadas de cada poço utilizando 0,5 ml de 0,05% (p/v) de tripsina, 0,02% (p/v) de EDTA (Gibco). As amostras foram diluídas com 9,5 ml de Isoton (Coulter) e contadas utilizando um contador de células Multisizer 3 (Beckman Coulter). Os dados foram avaliados como percentagem dos poços de controlo: % de CTR = (Tratado-Branco)/(Controlo-Branco).

Os valores de IC50 foram calculados através de LSW/Data Analysis utilizando o ajuste de curva sigmoidal do

Microsoft Excel. ΡΕ1644376 - 24 -

Análise do ciclo celular in vitro A linha de células do cancro do cólon humano HCT-116 foi desenvolvida em cultura a 5000 células/cm2 em placas de 24 poços (Costar) tal como mencionado atrás. As células na sua fase exponencial de crescimento foram tratadas durante 24 horas com diferentes concentrações de composto. O meio de cultura sobrenadante foi recolhido para evitar a perda de células apoptóticas ou mitóticas separadas. Depois disto, as células foram lavadas utilizando PBS e separadas com 0,05% (p/v) de tripsina, 0,02% (p/v) de EDTA (Gibco) . A actividade da tripsina foi parada utilizando meio de cultura, as fracções de células aderentes e não aderentes foram juntas e centrifugadas a 2000 rpm, durante 10 minutos. As células foram ressuspensas em PBS e contadas utilizando um contador de células Multisizer 3 (Beckman Coulter). Para fixação, foi adicionado etanol (70%, v/v) e as células foram mantidas a -20°C durante a noite.

Um milhão de células foi centrifugado a 2000 rpm durante 5 minutos e lavado com PBS e, subsequentemente, coradas durante 1 hora à temperatura ambiente no escuro adidionando 200 Dl de iodeto de propidio 25 Dg/ml (sigma) e 15 μg/ml de RNAse A (sigma), 0,001% (v/v) de Nonidet P40 (Sigma) em citrato de sódio (0,1% p/v, pH 7,5). As amostras foram analisadas por citometria de fluxo com excitação a 488 nm (FACSCalibur, Bekton Dickinson) utilizando o 25 ΡΕ1644376 programa informático Cell Quest 3.0 (Beckton Dickinson). Tipicamente foram recolhidos 10 000 eventos (activando o módulo de descriminação de duplos DDM e retendo apenas células únicas) e o perfil do ciclo das células foi registado utilizando CellQuest (Verity Software). A distribuição do ciclo celular da população foi calculado utilizando um modelo modificado do programa Modfit 3.1 (Verity Software) e expressado em % G0/G1, S, G2/M e poliploidia.

Dados os ensaio anteriores, os compostos de fórmula (I) do invento resultaram em possuírem uma assinalável actividade inibidora de proteína cinase, e.g. actividade inibidora da Aurora-2. Ver como exemplo a tabela I seguinte que apresenta dados experimentais de quatro compostos representativos do invento a serem testados como inibidores da Aurora-2 cinase (IC5o nM) , em relação ao seu efeito antiproliferativo (IC50 nM) , e em relação à sua capacidade de efectuar o bloqueamento do ciclo celular e induzir poliploidia (% de G2/M + polipoidia a 200 nM).

Interessantemente, estes mesmos compostos foram testados em comparação com um composto da arte precedente estruturalmente muito próximo, aqui definido como composto de referência, que é especificamente descrito no documento atrás mencionado WO 02/12242 - ver página 160, linhas 5-7 do mesmo; o composto de referência era aí designado como N-{5-fenilacetil-4,6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4-metilpiperazino)benzamida. 26 ΡΕ1644376

Composto de Referência (R = Ri = R2 = Η; X = Nme) N-{5-fenilacetil-4,6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4-metilpiperazino)benzamida;

Composto (1) (R = R2 = H; Ri = Ome; X = Nme) N-{5-[(2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidropirrolo}[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-2-il)benzamida;

Composto (11) (R = R2 = H; Ri = Me; X = Nme) N-{5-[(2R) -2-metil-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidropirrolo}[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-2-il)benzamida;

Composto (6) (R = R2 = H; Ri = Ome; X = CH2) N-{5-[(2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidropirrolo}[3,4-c]pirazol-3-il}-4-piperidin-l-ilbenzamida; 27 ΡΕ1644376

Composto (5) (R = Me; Ri = Ome; R2 = Η; X = Nme) 4-(3,4-dimetilpiperazin-l-il)-N-{5-[ (2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4, 5, 6-tetra-hidropirrolo}[3,4-c]pirazol-3-il}-benzamida.

Tabela I

Composto Inibição de Antiproliferação Bloqueamento do ciclo Aurora-2 das células celular (% G2/M + IC50 (nM) IC50 (nM) poliploidia a 200 nM) Composto de 140 220 33 referência Nenhum _ _ 19 (D 16 31 90 (11) 63 17 90 (6) 37 30 90 (5) 18 50 90

Surpreendentemente, a actividade inibidora de Aurora-2 dos compostos do invento resultou em ser constantemente e assinalavelmente superior à do composto de referência.

Adicionalmente, aqueles mesmos compostos resultaram um efeito antiproliferativo das células em conjunto com a capacidade de bloquear o ciclo celular e induzir poliploidia, siqnificativamente superior à do composto de referência que é testado nas mesmas condições. 28 ΡΕ1644376

De tudo o que referido atrás, os novos compostos de fórmula (I) do invento parecem dotados com um perfil biológico, considerado como um todo, que é inesperadamente superior ao do da arte precedente mais próxima do documento WO 02/12242 e assim são particularmente vantajosos em terapia contra doenças proliferativas associadas a uma alterada actividade de Aurora-2 cinase.

Os compostos do presente invento podem ser administrados quer como agentes únicos quer alternativamente em combinação com tratamentos anticancerígenos conhecidos tais como a terapia de radiação ou regime de quimioterapia em combinação com agentes citostáticos ou citotóxicos, agentes do tipo antibiótico, agentes alquilantes, agentes antime-tabolito, agentes hormonais, agentes imunológicos, agentes do tipo interferão, inibidores da ciclooxigenase (e.g. inibidores de COX-2), inibidores de metaloprotease de matriz, inibidores de telomerase, inibidores de tirosina cinase, agentes de recepção do factor anti-crescimento, agentes anti-HER, agentes anti-EGFR, agentes de anti-angiogénese (e.g. inibidores da angiogenése), inibidores da farnesil transferase, inibidores da via da transdução de sinal ras-raf, inibidores do ciclo das células, outros inibidores de cdks, agentes de ligação de tubulina, inibidores de topoisomerase I, inibidores da topoisomerase II e outros do género.

Se formulado como uma dose fixa, os tais produtos de combinação empregam os compostos deste invento dentro de 29 ΡΕ1644376 uma gama de dosagem descrita abaixo e outro agente farma-ceuticamente activo dentro da gama de dosagem aprovada.

Os compostos de fórmula (I) podem ser sequencialmente utilizados com agentes anticancerigenos conhecidos quando uma formulação de combinação é inadequada.

Os compostos de fórmula (I) do presente invento, adequados para administração a um mamífero, e.g. a humanos, podem ser administrados através das vias usuais e o nível de dosagem depende da idade, peso, condições do doente e via de administração.

Por exemplo, uma dosagem adequada adoptada para administração oral de um composto de fórmula (I) pode variar de cerca de 10 até cerca de 500 mg por dose, de 1 a 5 vezes diariamente. Os compostos do invento podem ser administrados numa variedade de formas de dosagem, e.g. oralmente, na forma de comprimidos, cápsulas, comprimidos revestidos com açúcar ou filme, soluções ou suspensões líquidas; rectalmente sob a forma de supositórios; paren-tericamente, e.g. intramuscularmente, ou através de injec-ção ou infusão intravenosa e/ou intratecal e/ou intras-pinal. O presente invento inclui também composições farmacêuticas que compreendem um composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste em associação com um excipiente farmaceuticamente aceitável, que pode ser um 30 ΡΕ1644376 portador ou um diluente.

As composições farmacêuticas contendo os compostos do invento são usualmente preparados seguindo métodos convencionais e são administrados numa forma farmacêutica adequada.

Por exemplo, as formas orais sólidas podem conter, em conjunto com o composto activo, diluentes, e.g. lactose, dextrose, sacarose, celulose, amido de milho ou amido de batata; lubrificantes, e.g. sílica, talco, ácido esteárico, magnésio ou estearato de cálcio e/ou poli-etilenoglicóis; agentes de ligação, e.g. amidos, goma arábica, gelatina, metilcelulose, carboximetilcelulose ou polivinilpirrolidona; agentes de desintegração, e.g. amido, ácido algínico, alginatos ou amido-glicolato de sódio; misturas efervescentes; corantes; adoçantes; agentes de molhabilidade tais como lecitina, polisorbatos, laurilsul-fatos; e, em geral, substâncias não tóxicas e farmacolo-gicamente inactivas utilizadas em formulações farmacêuticas. Estas preparações farmacêuticas, podem ser produzidas de maneira conhecida, por exemplo, através de processos de mistura, granulação, formação de comprimidos, revestimento com açúcar ou revestimento com filme.

As dispersões líquidas para administração oral podem ser, e.g. xaropes, emulsões e suspensões.

Como exemplo, os xaropes podem conter, como 31 ΡΕ1644376 portador, sacarose ou sacarose com glicerina e/ou manitol e sorbitol.

As suspensões e emulsões podem conter, como exemplos, portadores, goma natural, agar, alginato de sódio, pectina, metilcelulose, carboximetilcelulose ou poli(álcool vinilico). A suspensão ou soluções para injecções intramusculares podem conter, em conjunto com o composto activo, um portador farmaceuticamente aceitável, e.g., água estéril, azeite, oleato de etilo, glicóis, e.g. propilenoglicol e, se desejado, uma quantidade adequada de cloridrato de lidocaina. As soluções para injecções ou infusões intravenosas podem conter, como portador, água estéril ou, preferencialmente, estas podem estar sob a forma de soluções estéreis, aquosas, isotónicas, salinas ou estas podem conter propilenoglicol como portador.

Os supositórios podem conter, em conjunto com o composto activo, um portador farmaceuticamente aceitável, e.g. manteiga de cacau, polietilenoglicol, um tensioactivo de éster de ácido gordo de polioxietileno-sorbitan ou lecitina.

Com o objectivo de ilustrar melhor o presente invento, sem colocar qualquer limitação a este, são agora dados os exemplos seguintes.

EXEMPLOS ΡΕ1644376 32 Métodos Gerais

Foi realizada cromatografia rápida em silica gel (Merck grau 9385, 60A) . HPLC/MS foi realizada numa coluna Waters X Terra RP 18 (4,6 x 50 mm, 3,5 μιη) utilizando um equipamento de HPLC Waters 2790 equipado com um detector 996 Waters PDA e um espectrómetro de massa de quadropólo simples Micromass mod. ZQ, equipado com uma fonte de iões com electropulverização (IEP). A fase móvel A foi tampão de acetato de amónio 5 mM (pH 5,5 com ácido acético/aceto-nitrilo 95:5) e a fase móvel B foi H20/acetonitrilo (5:95). Gradiente de 10 a 90% de B em 8 minutos, mantido a 90% de B durante 2 minutos. Detecção por UV a 220 nm e 254 nm. Caudal de 1 ml/min. Volume de injecção 10 μΐ. Varrimento completo, gama de massas de 100 a 800 amu. A voltagem capilar foi de 2,5 KV; temperatura da fonte era de 120°C; o cone era de 10 V. Tempos de retenção (HPLC r.t.) são dados em minutos a 220 nm ou 254 nm. As massas são dadas como a razão m/z. Espectroscopia 1H-RMN foi realizada num equipamento Mercury VX 400 operando a 400,45 MHz equipado com uma sonda de ressonância dupla de 5 mm (1H {15N-31P} ID_PFG Varian).

Exemplo 1

Preparação de 3-amino-4,6-di-hidropirrolo[3,4- c]pirazole-l,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo e 1-etilo 33 ΡΕ1644376

Uma solução de clorocarbonato de etilo (8,9 ml, 93 mmol) em tetra-hidrofurano (THF, 250 ml) foi lentamente adicionado a uma mistura de 3-amino-4,6-di-hidropirrolo-[3,4-c]pirazole-5 (1H)-carboxilato de terc-butilo (20 g, 89 mmol) e diisopropiletilamina (DUEA, 92 ml, 528 mmol) em THF (500 ml) a 0-5°C. A reacção foi mantida à mesma temperatura durante 2 horas e então deixada a atingir a temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura obtida foi evaporada até à secura e o resíduo resultante foi extractado com acetato de etilo (AcOEt) e água. A camada orgânica foi separada, seca com sulfato de sódio e evaporada até à secura. A mistura foi purificada por cromatografia rápida (eluente: acetato de etilo/ciclo-hexano 4/6 a 7/3) para originar 19 g do composto do título sob a forma de um sólido branco. [M+H]+ 297

Exemplo 2

Preparação de 3—{[4—(4-metilpiperazin-l-il)ben-zoil]amino}-4, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l, 5-dicarbo-xilato de 5-terc-butilo e 1-etilo

Cloreto de oxalilo (23,2 ml, 265 mmol) foi adicionado a uma suspensão de ácido 4-(4-metil-l- piperazinil)-benzóico (11,7 g, 53 mmol) em diclorometano (DCM, 320 ml) e dimetilf ormamida (DMF, 0,52 ml). Após refluxo da mistura durante 6,5 horas, os voláteis foram cuidadosamente removidos sob pressão (tomando o resíduo 34 ΡΕ1644376 três vezes com tolueno). 0 dicloridrato do cloreto de 4-metilpiperazi-nobenzoílo resultante foi adicionado às porções a uma solução de-3-amino-4,6-di-hidropirrolo[3, 4-c]pirazole-l,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo e 1-etilo (13,1 g, 44,3 mmol) em THF seco (620 ml) e DIEA (54,4 ml, 9,32 mol) sob agitação à temperatura ambiente. A suspensão resultante foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente e 1 hora a 40 °C.

Após remoção do solvente sob pressão reduzida, o resíduo foi tomado em AcOEt (600 ml) e a camada orgânica foi lavada com carbonato de sódio aquoso (200 ml), salmoura (200 ml) e seca com sulfato de sódio. O solvente foi evaporado e o resíduo foi triturado com uma mistura de éter dietílico (Et2<3, 135 ml) e AcOEt (15 ml), filtrou-se, secou-se sob vácuo a 40°C para originar 20 g do composto do título sob a forma de um pó branco [M+H]+ 499.

Ao trabalhar de modo análogo e fazendo reagir o 3-amino-4,6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l,5-dicarboxi-lato de 5-terc-butilo e 1-etilo com o adequado derivado cloreto de acilo, foram preparados os compostos seguintes: 3 — {[4 — (4-etilpiperazin-l-il) benzoil]amino}-4,6-di- 35 ΡΕ1644376 hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo e 1-etilo; [M+H]+ 513. 3—{[4 — (4-isopropilpiperazin-l-il) benzoil]amino}- 4.6- di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo e 1-etilo; [M+H]+ 527. 3 —{[4— ( 4-ciclopropilpiperazin-l-il) benzoiljamino}- 4.6- di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo e 1-etilo; [M+H]+ 525. 3-{[4 - (3,4-dimetilpiperazin-l-il) benzoiljamino}- 4.6- di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo e 1-etilo; [M+H]+ 513. 3-[(4-piperidin-l-ilbenzoil) amino]-4,6-di-hidro-pirrolo[3,4-c]pirazole-l,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo e 1-etilo; [M+H]+ 484. 3 — {[4 — ( 4-f luoropiperidin-l-il) benzoil]amino}-4, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo e 1-etilo; [M+H]+ 502. 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil) amino]-4, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo e 1-etilo; [M+H]+ 486. 3 —{[4— ( 4-terc-butilpiperazin-l-il) benzoiljamino}- 4.6- di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo e 1-etilo; [M+H]+ 541.

Exemplo 3

Preparação de tricloridrato de 3-{f4-(4-metil-piperazin-l-il) benzoillamino}-5, 6-di-hidropirrolo[3, 4-clpi-razole-1(4H)-carboxilato de etilo 36 ΡΕ1644376

Uma solução 4N de ácido clorídrico em dioxano (122 ml, 488 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de 3-{[4-(4-metilpiperazin-l-il)benzoil]amino}-4,6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l,5-dicarboxilato de 5-terc-butilo e 1-etilo (19,5 g, 39,2 mmol), tal como preparado no Exemplo 2, em DCM seco (240 ml); precipitação de um sólido branco ocorreu guase imediatamente. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas; após diluição com Et20 (100 ml), o sólido foi filtrado, extensivamente lavado com Et20 e seco sob vácuo a 50°C para originar 20,1 g do composto do titulo, utilizado no passo seguinte sem mais purificação. [M+H]+ 399. 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 1,4 (t, 3H); 2,8 (d, 3H); 3,2 (m, 4H); 3,5 (m, 2H); 4,1 (m, 2H); 4,4 (g, 2H), 4,6 (m, 4H) ; 7,1-8,0 (m, 4H) ; 10,3 (bs, 2H) ; 10,7 (bs, 1H) ; 11,4 (s, 1H) .

Ao trabalhar tal como atrás relatado e partindo do intermediário adequado, foram preparados analogamente os seguintes compostos: tricloridrato do 3 —{[4— (4-etilpiperazin-l-il)ben-zoil]amino}-5, 6-di-hidropirrolo[3, 4-c]pirazole-l (4H) -carbo-xilato de etilo; [M+H]+ 413. tricloridrato do 3 — {[ 4 —(4-isopropilpiperazin-l-il) benzoil]amino}-5,6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H) -carboxilato de etilo; [M+H]+ 427. tricloridrato do 3 — {[ 4 — (4-ciclopropilpiperazin-l- 37 ΡΕ1644376 il) benzoil]amino}-5,6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H) -carboxilato de etilo; [M+H]+ 425. tricloridrato do 3-{[4-(4-dimetilpiperazin-l-il) benzoil]amino}-5, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H) -carboxilato de etilo; [M+H]+ 413. 3-[ (4-piperidin-l-ilbenzoil) amino]-5, 6-di-hidro-pirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 384. tricloridrato do 3-{[4-(4-fluoropiperidin-1-il) benzoil]amino}-5, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H) -carboxilato de etilo; [M+H]+ 402. tricloridrato do 3 —{[4—(4-morfolin-4-il)benzoil]-amino}-5, 6-di-hidropirrolo[3, 4-c]pirazole-l(4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 386. tricloridrato do 3 —{[4—(4-terc-butilpiperazin-1-il) benzoil]amino}-5,6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H) -carboxilato de etilo; [M+H]+ 441.

Exemplo 4

Preparação de 5-[ (2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-3-{[4- (4-metilpiperazin-l-il) benzoil]amino}-5, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H)-carboxilato de etilo

Cloreto de oxalilo (10,1,2 ml, 115 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido R-(-)-α-metoxifenil-acético (1,91 g, 11,5 mmol) em DCM (90 ml) e DMF (0,50 ml). Após agitação da mistura à temperatura ambiente durante 16 horas, os voláteis foram cuidadosamente removidos sob 38 ΡΕ1644376 pressão reduzida.

Uma solução do cloreto de R-(-)-α-metoxifenil- acetilo em DCM (20 ml) foi adicionado gota a gota a uma solução de tricloridrato do 3 —{[4—(4-metilpiperazin-l-il) benzoil]amino}-5,6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H) -carboxilato de etilo (4,5 g, 8,9 mmol) em DCM (400 ml) e DIEA (11,8 ml, 69 mmol) sob agitação à temperatura ambiente. A solução resultante foi agitada durante 20 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi então lavada com carbonato de sódio (200 ml) aquoso, salmoura (200 ml) e secou-se sobre sulfato de sódio. Foi evaporado solvente e o resíduo foi triturado com uma mistura de Et20 (100 ml) e AcOEt (10 ml), filtrou-se e secou-se sob vácuo a 40°C para originar 3,94 g do composto do título sob a forma de um pó branco utilizado no passo seguinte sem mais purificação. [M+H]+ 54 7; 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 1,3 (t, 3H); 2,3 (d, 3H); 2,6 (m, 4H); 3,3-3,4 (m, 7H); 4,3 (q, 2H); 4,6-4,9 (m, 4H); 5,1 (d, 1H); 7,0-8,0 (m, 9H); 11,1 (d, 1H).

Ao trabalhar tal como relatado atrás e partindo do derivado de cloreto de acilo adequado, os compostos seguintes foram preparados analogamente: 5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-etilpi- 39 ΡΕ1644376 perazin-l-il) benzoil]amino}-5,6-di-hidropirrolo[3,4-c]pira-zole-1 (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 561. 5 —[ (2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-isopro-pilpiperazin-l-il) benzoil]amino}-5, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 575. 5-[ (2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-ciclo-propilpiperazin-l-il) benzoil]amino}-5, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 573. 3 —{[4— (3, 4-dimetilpiperazin-l-il) benzoil]amino}-5-[(2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-5, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 561. 5-[ (2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-3-[ (4-piperidin-1-il) benzoil]amino}-5, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-1 (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 532. 3-{[4 - (4-fluoropieridin-l-il) benzoil]amino}-5-[ (2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-5, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 550. 5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoi 1]—3—[(4-morfolin-4-il) benzoil]amino}-5,6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H) -carboxilato de etilo; [M+H]+ 534. 3 — {[4 — (4-terc-butpilpiperazin-l-il)benzoil]amino}-5-[ (2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-5, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 589. 5-[ (2R)-2-meti1-2-feniletanoi1]—3 —{[4-(4-etilpiperazin-l-il) benzoil]amino}-5,6-di-hidropirrolo[3, 4-c]pirazole-l (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 545. 5-[ (2R) - 2-meti 1-2-f eniletanoil]-3-{[4 - ( 4-isopro-pi lpiper az in-l-il) benzoil]amino}-5, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 559. 5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-ciclo- 40 ΡΕ1644376 propilpiperazin-l-il) benzoil]amino}-5, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 557. 3 — {[4 — (3,4-dimetilpiperazin-l-il) benzoil]amino}-5-[ (2R) - 2-metil-2-feniletanoil]-5,6-di-hidropirrolo[3,4-c]pi-razole-1 (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 545. 5 —[ (2R)-2-metil-2-feniletanoil]-3-[ (4-piperidin-l-il) benzoil]amino}-5, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l ( 4H) -carboxilato de etilo; [M+H]+ 516. 3 — {[4 — (4-f luoropiperidin-l-il) benzoil]amino}-5-[ (2R) -2-metil-2-f eniletanoil]-5,6-di-hidropirrolo[3,4-c]pi-razole-1 (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 534. 5-[ (2R)-2-meti1-2-feniletanoil]-3-[ (4-morfolin-4-ilbenzoil) amino]-5, 6-di-hidropirrolo[3,4-c]pirazole-l ( 4H) -carboxilato de etilo; [M+H]+ 518. 3 — {[4 — ( 4-terc-butilpiperazin-l-il) benzoiljamino}-5 —[ (2R) - 2-metil-2-feniletanoil]-5,6-di-hidropirrolo[3, 4-c]-pirazole-1 (4H)-carboxilato de etilo; [M+H]+ 573. 5-[ (2R)-2-hidroxi-2-feniletanoil]-3-{[4-(4-metil-piperazin-l-il) benzoil]amino}-5,6-di-hidropirrolo[3,4-c]pi-razole-1 (4H) -carboxilato de etilo; [M+H]+ 533.

Exemplo 5

Preparação de N-{5-[(2R)-2-metoxi-2-feniletanoil]-1,4,5, 6-tetra-hidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4- (4-metilpi-perazin-l-il)benzamida (1)

Uma solução de 5-[ (2R)-2-metoxi-2-f eniletanoil]-3-{[4- ( 4-metilpiperazin-l-il) benzoil]amino}-5,6-di-hidropirro- 41 ΡΕ1644376 lo[3, 4-c]pirazole-l (4Η)-carboxilato de etilo (3,94 g, 7,2 mmol) em metanol (MeOH, 130 ml) e trietilamina (Et3N, 13 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas (ocorreu alguma precipitação). O sólido foi separado e lavado com Et20 para originar 1,6 g do composto do titulo. A solução foi evaporada em alguns milímetros e uma segunda fracção do produto sólido foi separada (1,62 g). Estas duas fracções foram juntadas e analisadas por LC-MS (pureza à volta de 90%, 254 e 220 nM) . Após purificação croma-tográfica (coluna de sílica gel curta, DCM/MeOH 45:5) 2,83 g (83%) do composto do título foi obtido sob a forma de um sólido branco. P.f. 289°C; [M+H]+ 475. 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 2,21 (s, 3H) ; 2,43 (m, 4H) ; 3,29 (m, 7H) ; 4, 20-4, 90 (m, 4H) ; 5,09 (s, 1H) ; 6,80-8,00 (m, 9H); 10,6 (br, 1H); 12,09 (br, 1H).

Ao trabalhar de modo análogo, através de hidrólise básica dos compostos do exemplo 4, foram preparados os compostos seguintes: (2) N-{5-[ (2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4- (4-etilpiperazin-l-il) benzamida; [M+H]+ 489. 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 1,1 (t, 3H); 2,3-2,7 (m, 6H); 3,2-3,4 (m, 7H); 4,3-6,0 (m, 4H); 5,1 (d, 1H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,6 (bs, 1H); 12,1 (br, 1H). (3) N-{5-[ (2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5,6- 42 ΡΕ1644376 tetra-hidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4- (4-isopropilpipe-razin-l-il) benzamida; [M+H]+ 503. 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 1,3-1,3 (dd, 6H); 3,3-3,4 (m, 9H); 4,6-4,9 (m, 4H) ; 5,1 (d, 1H) ; 7,0-8,0 (m, 9H) ; 10,7 (bs, 1H); 12,3 (bs, 1H). (4) N-{5-[ (2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidropirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}-4- (4-ciclopropilpipe-razin-l-il)benzamida; [M+H]+ 501. 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 0,3-0,5 (m, 4H); 3,2-3,4 (m, 7H) ; 3,2-5,0 (m, 4H) ; 5,1 (d, 1H) ; 6,8-8,2 (m, 9H) ; 10,5-10,7 (br, 1H); 12,0-12,4 (br, 1H). (5) 4- (3, 4-dimetilpiperazin-l-il) -N-{5-[ (2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5, 6-tetra-hidropirrolo[3, 4-c]pi-razol-3-il}benzamida; [M+H]+ 489. 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm:1,0-1,1 (m, 3H); 2,24 (s, 3H); 3,3-3,5 (m, 7H); 4,3-5,0 (m, 4H); 5,1 (d, 1H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,6 (bs, 1H); 11,9-12,6 (br, 1H). (6) N-{5-[ (2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidropirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}-4-piperidin-l-ilbenzamida; [M+H]+ 460. 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 1,5-1,7 (m, 6H); 3,2-3,4 (m, 7H) ; 4,3-4,9 (m, 4H) ; 5,1 (d, 1H) ; 6,9-8,0 (m, 9H) ; 10,4-10,7 (br, 1H). (7) 4— (4—f luoropiperidin—il) -N-{5-[ (2R) -2-metoxi- 43 ΡΕ1644376 2-feniletanoil]-l, 4,5, 6-tetra-hidropirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}benzamida; [M+H]+ 478. 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 1,65-2,1 (m, 4H); 3,15- 3,6 (m, 7H) ; 4,35-5,0 (m, 5H) ; 5,1 (d, 1H) ; 6,9-8,0 (m, 9H) ; 10,4-10,7 (br, 1H) . (8) N-{5-[ (2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidropirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}-4-morfonil-4-ilbenzamida; [M+H]+ 462. 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 3,15-3,5 (m, 7H); 3,7-3,8 (m, 4H) ; 4,3-4,9 (m, H) ; 5,1 (d, 1H) ; 6,9-8,0 (m, 9H) ; 10,4-10,7 (br, 1H) . (9) 4- (4-terc-butilpiperazin-l-il)N-{5-[ (2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5, 6-tetra-hidropirrolo[3,4-c]pi-razol-3-il}-benzamida; [M+H]+ 517. (10) N-{5-[ (2R) -2-hidroxi-2-£eniletanoil]-l, 4,5, 6-tetra-hidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4- (4-metilpiperazin-l-il)benzamida; [M+H]+ 461. 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 2,3 (s, 3H) ; 2,45-2,65 (m, 4H) ; 3,2-3,4 (m, 4H) ; 4,1-4,9 (m, 4H) ; 5,69 (d, 1H) ; 6,9-8,0 (m, 9H); 10,4-10,7 (br, 1H); 11,5-12,9 (br, 1H). (11) N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidropirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}-4- (4-metilpiperazin-l-il) benzamida; [M+H]+ 459; 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 1,33 (d, 3H) ; 2,21 (s, 3H); 3,85-5,0 (m, 5H) ; 4,2-4,9 (m, 4H); 5,1 (s, 1H) ; 6,8- 44 ΡΕ1644376 8.0 (m, 9H); 10,3-10,7 (br, 1H); 11,8-12,5 (br, 1H). (12) N-{5-[ (2R) -2-metil-2-feniletanoil]-l, 4,5, 6- tetra-hidropirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}-4- (4-etilpiperazin-l-il) benzamida; [M+H]+ 473; 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 1,06 (t, 3H) ; 1,36 (d, 3H); 2,41 (q, 2H); 2,47-2,6 (m, 4H); 3,2-3,4 (m, 4H); 3,9- 5.0 (m, 5H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,5 (bs, 1H) ; 11,9-12,5 (br, 1H) ; (13) N-{5-[ (2R) -2-metil-2-feniletanoil]-l, 4,5, 6-tetra-hidropirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}-4- (4-isopropilpipe-razin-l-il)benzamida; [M+H]+ 487; (14) N—{5—[ (2R) -2-metil-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidropirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}-4- (4-ciclopropilpi-perazin-l-il)benzamida; [M+H]+ 485; (15) 4- (3, 4-dimetilpiperazin-l-il) -N-{5-[ (2R) -2-feniletanoil]-l, 4,5, 6-tetra-hidropirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}benzamida; [M+H]+ 473; (16) N-{5-[ (2R) -2-fenilpropanoil]-l, 4,5, 6-tetra-hidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-piperidin-l-ilbenzamida; [M+H]+ 444. 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 1,37 (d, 3H) ; 1,6 (s, 6H); 3,2-3,4 (m, 4H) ; 3,90-4, 05 (m, 1H); 4,1-4,9 (m, 4H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,4-10,7 (br, 1H). 45 ΡΕ1644376 (17) 4- (4-fluoropiperidin-l-il) -N-{5-[ (2R) -2-me-til-2-feniletanoil]-l, 4,5, 6-tetra-hidropirrolo[3,4-c]pira-zol-3-il}benzamida; [M+H]+ 462. 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 1,37 (d, 3H) ; 1,65-2,05 (m, 4H); 3,15-3,6 (m, 7H) ; 3,2-3,4 (m, 4H) ; 3, 85-4, 07 (m, 1H); 4,1-5,05 (m, 5H); 5,1 (d, 1H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,4-10, 7 (br, 1H) . (18) N-{5—[ (2R) -2-metil-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidropirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}-4-morf olin-4-il) ben-zamida; [M+H]+ 446. 1H-RMN (DMSO d6) δ ppm: 1,37 (d, 3H); 3,2-3,4 (m, 4H); 3,7-3,85 (m, 4H) ; 3,9-4,1 (m, 1H) ; 4,1-4,95 (m, 4H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,4-10,7 (br, 1H). (19) 4-(4-terc-butilpiperazin-l-il)-N-{5-[ (2R) -2-fenilpropanoil]-l, 4,5, 6-tetra-hidropirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}benzamida; [M+H]+ 501.

Lisboa, 17 de Setembro de 2010

Claims

ΡΕ1644376 1 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um composto de fórmula (I)

em que R é hidrogénio ou metilo; Ri é hidroxi ou um grupo alquilo C1-C3 linear ou ramificado ou alcoxi; R2 é um hidrogénio ou um átomo de halogéneo; X é um grupo divalente seleccionado de metileno (-CH2-) ou fluorometileno (-CHF-) ou é um heteroátomo ou grupo heteroatómico seleccionado de oxigénio (-0-) ou azoto (-NR'-) em que R' é um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo C1-C4 linear ou ramificado ou grupo cicloalquilo C3-C6; 2 ΡΕ1644376 ou um sal farmaceuticamente aceitável deste para a produção de um medicamento para tratar doenças de proliferação das células provocadas por e/ou associadas a uma actividade alterada da proteína cinase que compreende a administração a um mamífero que disso necessite de uma quantidade eficaz desse composto.
2. Utilização de acordo com a reivindicação 1 para tratar doenças de proliferação das células provocadas por e/ou associadas a uma actividade alterada das Aurora cinases.
3. Utilização de acordo com a reivindicação 2, em que a Aurora cinase é a Aurora 2.
4. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a doença de proliferação das células é seleccionada do grupo constituído por cancro, doença de Alzheimer, in-fecções virais, doenças autoimunes e doenças neurode-generativas.
5. Utilização de acordo com a reivindicação 4, em que o cancro é seleccionado de carcinoma, carcinoma de célula escamosa; tumores hematopoiéticos de linhagem mie-lóide ou linfóide, tumores de origem mesenquimal, tumores do sistema nervoso central e periférico, melanoma, semi-noma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentosum, 3 ΡΕ1644376 queratoxantoma, cancro folicular da tiróide e sarcoma de Kaposi.
6. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a doença de proliferação de células é seleccionada do grupo constituído por hiperplasia benigna da próstata, adenomatose familiar, polipose, neurfibromatose, psoríase, proliferação de célula lisa vascular associada a ateros-clerose, fibrose pulmonar, artrite, glomerulonefrite e estenose e restenose pós-cirúrgica.
7. Utilização de acordo com a reivindicação 1 compreendendo ainda a sujeição do animal que disso necessite a uma terapia de radiação ou regime de quimioterapia em combinação com, pelo menos, um agente cistostático ou citotóxico.
8. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o mamífero que disso necessite é um ser humano.
9. Utilização de um composto tal como definido na reivindicação 1 para a produção de um medicamento para inibir a actividade da Aurora 2 cinase que compreende o contacto da referida cinase com uma quantidade eficaz do referido composto.
10. Composto de fórmula (I) 4 ΡΕ1644376

em que R é hidrogénio ou metilo; Ri é hidroxi ou um grupo alquilo C1-C3 linear ou ramificado ou alcoxi; R2 é um hidrogénio ou um átomo de halogéneo; X é um grupo divalente seleccionado de metileno (-CH2-) ou fluorometileno (-CHF-) ou é um heteroátomo ou grupo heteroatómico seleccionado de oxigénio (-0-) ou azoto (-NR'-) em que R' é um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo C1-C4 linear ou ramificado ou grupo cicloalquilo C3-C6; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
11. Composto de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 10 em que R é hidrogénio ou metilo; Ri é seleccionado de hidroxi, metilo ou metoxi; R2 é um átomo de hidrogénio ou de flúor; X é seleccionado de metileno, 5 ΡΕ1644376 fluorometileno, -0- ou -NR', em que R' é definido na reivindicação 10.
12. Composto de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, opcionalmente sob a forma de um sal farmaceuticamente aceitável deste, seleccionado do grupo constituído por: (1) N-{5-[(2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidro-pirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-l-il)ben-zamida; (2) N-{5-[ (2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5, 6-tetra-hidro-pirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}-4-(4-etilpiperazin-l-il)benza-mida; (3) N-{5-[(2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidro-pirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4-isopropilpiperazin-l-il)-benzamida; (4) N-{5-[(2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidro-pirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4-ciclopropilpiperazin-l- il)benzamida; (5) 4-(3,4-dimetilpiperazin-l-il)—N—{5—[ (2R) -2-metoxi-2-fe-niletanoil]-l, 4, 5,6-tetra-hidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}benzamida; (6) N-{5-[ (2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidro-pirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}-4-piperidin-l-ilbenzamida; (7) 4-(4-fluoropiperidin-il)-N-{5-[(2R) -2-metoxi-2-fenil-etanoil]-l, 4, 5,6-tetra-hidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}ben-zamida; (8) N-{5-[(2R) -2-metoxi-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidro-pirrolo[3, 4-c]pirazol-3-il}-4-morfonil-4-ilbenzamida; 6 ΡΕ1644376 ( 9 ) 4-(4-terc-butilpiperazin-l-il)N-{5-[ (2R)-2-hidroxi-2- feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-iljbenzamida; (10) N-{5-[(2R) - 2-hidroxi-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hi-dropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-l-il)ben-zamida; (11) N-{5-[(2R)-2-metil-2-feniletanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidro-pirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4-metilpiperazin-l-il)benza-mida; (12) N-{5-[(2R)-2-meti1-2-feniletanoil]-1, 4,5,6-tetra-hidro-pirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4-etilpiperazin-l-il)benza-mida; (13) N-{5-[(2R)-2-meti1-2-feniletanoil]-1, 4,5,6-tetra-hidro-pirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4-isopropilpiperazin-l-il)-benzamida; (14) N-{5-[ (2R) - 2-meti1-2-feniletanoil]-1, 4,5,6-tetra-hidro-pirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-(4-ciclopropilpiperazin-l- il)benzamida; (15) 4-(3,4-dimetilpiperazin-l-il)-N-{5-[ (2R) - 2-fenileta-noil]-l, 4,5,6-tetra-hidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}benza-mida; (16) N-{5-[ (2R) -2-fenilpropanoil]-l, 4,5,6-tetra-hidropirro-lo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-piperidin-l-ilbenzamida; (17) 4-(4-fluoropiperidin-l-il)-N-{5-[ (2R)-2-meti1-2-feniletanoil]-!, 4,5,6-tetra-hidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}ben-zamida; (18) N-{5-[(2R)-2-meti1-2-feniletanoil]-1, 4,5,6-tetra-hidro-pirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}-4-morfolin-4-il)benzamida; 7 ΡΕ1644376 (19) 4-(4-terc-butilpiperazin-l-il)-N-{5-[ (2R)-2-fenilpro-panoil]-l, 4,5, 6-tetra-hidropirrolo[3,4-c]pirazol-3-il}benza-mida.
13. Processo para preparar os compostos de fórmula (I) e os sais farmaceuticamente aceitáveis destes, de acordo com a reivindicação 10, processo esse que compreende: a) reacçao de um composto de fórmula (II) com um composto de fórmula (III)

em que R e X são tal como definidos na reivindicação 10, Q é um grupo alquilo inferior, t-Bu representa terc-butilo e Z é hidroxi ou um grupo de saida adequado, de modo a obter um composto de fórmula (IV)

COO-tBu ΡΕ1644376 b) reacçao do composto de fórmula (IV) sob condições acídicas de modo a obter um composto de fórmula (V)

c) reacção do fórmula (VI) composto de fórmula (V) com um composto de O

R. (VI) R, em que Ri e R2 são tal como definidos na reivindicação 10 e Z' representa hidroxi ou um grupo de saída adequado, de modo a obter um composto de fórmula (VII)

(VII) 9 ΡΕ1644376 d) reacção do composto de fórmula (VII) sob condições básicas de modo a obter o composto de fórmula (I) correspondente e, se desejado, convertê-lo num sal farmaceu-ticamente aceitável deste.
14. Processo de acordo com a reivindicação 13, em que, nos compostos de fórmula (II) Q representa um grupo alquilo Ci-C4 linear ou ramificado. a reivindicação 14,
15. Processo de acordo com em que Q é metilo ou etilo.
16. Processo de acordo com a reivindicação 13, em que nos compostos de fórmula (III) e (VI), Z e Z' são, cada um independentemente, hidroxi ou um átomo de halogéneo.
17. Processo de acordo com a reivindicação 16, em que o átomo de halogéneo é cloro.
18. Processo de acordo com a reivindicação 13, em que o passo (b) é realizado sob condições acidicas na presença de ácido clorídrico, trifluoroacético ou metanos-sulfónico.
19. Processo de acordo com a reivindicação 13, em que o passo (d) é realizado sob condições básicas na presença de hidróxido de sódio, potássio ou lítio ou de uma amina terciária, tal como trietilamina. 10 ΡΕ1644376
20. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, tal como definido na reivindicação 10 e, pelo menos, um excipiente, portador e/ou diluente farmaceuticamente aceitável.
21. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 20 compreendendo ainda um ou mais agentes quimioterapêuticos.
22. Produto ou "kit" compreendendo um composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, tal como definido na reivindicação 10, ou composições farmacêuticas deste tal como definido na reivindicação 20 e um ou mais agentes quimioterapêuticos, como uma preparação combinada para utilização simultânea, separada ou sequencial em terapia anticancerigena.
23. Composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, tal como definido na reivindicação 10, para utilização como medicamento. Lisboa, 17 de Setembro de 2010