TWI343382B - Pyrrolo[3,4-c]pyrazole derivatives active as kinase inhibitors, process for their preparation and pharmaceutical compositions comprising them - Google Patents

Description

1343382 (1) 九、發明說明 cs月所屬之技術領域】 本發明係關於式（I )之吡咯並[3，4 一 c ]吡唑衍生 物類、製備彼之方法、含彼之醫藥組成物及彼等作爲 治療劑之用途，特別係治療癌症及細胞增殖異常。 【先前技術】 蛋白激酶（P K S )的機能障礙係許多疾病的標記。大 部份的致癌基因及原致癌基因涉及P K s之人類癌症編碼。 經增強之P K s活性也與許多非惡性疾病有牽連，如良性攝 護腺肥大、家族性腺瘤病、多息肉症' 神經纖維瘤病、牛 皮癬、與動脈粥樣硬化症有關連的血管平滑肌細胞增殖、 肺部纖維化、關節炎、腎絲球體腎炎及手術後狹窄症和再 狹窄症。 P K s也|4發炎症狀及病毒和寄生蟲繁殖有牽連。ρ κ s 也在神經退化性異常的發病原因及發生現象中扮演主要的 角色。 關於PKs機能障礙及失調的槪述文獻，參考例如 Current Opinion in Chemical Biology 1999, 3.459-465 »' 在本技藝已知的g午多蛋白激酶之中，與癌症細胞生長 有牽連的蛋白激酶係奧羅拉（Aurora)激酶，特別係奧羅 拉-2。 頃發現奧羅拉- 2會在許多不同的腫瘤型式中過度表 現。其基因位置標示於2 0 q 1 3 ’其係常在許多癌症中擴展 (2) (2)1343382 的染色體區域’包括乳癌[Cancer Res, 1999, 59 ( 9), 2〇4〗-4]及結腸癌。 2 〇q 1 3擴展作用與具有淋巴結陰性乳癌之病患的預後 不良互相有關連’以及增加的奧羅拉一 2表現係預後不良 和低膀脱癌病患存活期的表徵[_j. Natl. Cancer Inst·, 2002，94(17)，1320-9]。關於奧羅拉_2在不正常的癌 症中心體機Bb的角色’也參考 Molecular Cancer Therapeutics: 2 000. 2，5 8 9 - 5 9 5 〇 【發明內容】 本發明的目的係提供在治療學中用作對抗以失調的蛋 白激酶活性及更特別的奧羅拉激酶活性引起及/或與其有 關連的疾病宿主之試劑的化合物。 另一個目的係提供被賦與蛋白激酶抑制活性及更特別 的奧羅拉激酶抑制活性的化合物。 本發明者目前已發現一些被賦與蛋白激酶抑制活性的 吡咯並-吡唑及其衍生物，例如，奧羅拉激酶抑制活性。 更特定言之，本發明的化合物有用於治療各種癌症， 包括（但不限於此）：肉瘤（如膀胱癌、乳癌、結腸癌、 腎癌、肝癌、肺癌（包括小細胞肺癌）、食道癌、膽囊癌 、卵巢癌、胰臟癌、胃癌、子宮頸癌'甲狀腺癌'攝護腺 癌和皮膚癌（包括鱗狀細胞瘤））：淋巴系統的造血腫瘤 (包括白血病、急性淋巴細胞白血病、急性淋巴性白血病 、B -細胞淋巴瘤、T -細胞淋巴瘤、何杰金氏（ -6- (3) (3)1343382

Hodgkin’s )淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、髮狀細胞淋巴 瘤和勃克氏（B u r k i U ' s )淋巴瘤）；骨髓細胞系統的造血 腫瘤（包括急性和慢性淋巴性白血病、骨髓異生徵候群和 前骨髓細胞性白血病）：間葉來源的腫瘤（包括纖維肉瘤 和橫紋肌肉瘤）；中樞和末梢神經系統的腫瘤（包括星狀 細胞瘤 '神經母細胞瘤、膠質瘤和神經鞘瘤）：其它腫瘤 (包括黑色素瘤、精母細胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、著色性 乾皮病、角黃瘤、甲狀腺濾泡瘤和卡波西氏（Kaposi's ) 肉瘤）。 由於PKs及奥羅拉激酶在細胞增殖調節作用的關鍵性 角色，故這些吡咯並-吡唑也有用於治療各種細胞增殖異 常，如例如良性攝護腺肥大、家族性腺瘤病 '多息肉症、 神經纖維瘤病、牛皮癬、與動脈粥樣硬化症有關連的血管 平滑肌細胞增殖、肺部纖維化、關節炎、腎絲球體腎炎及 手術後狹窄症和再狹窄症。 因此，在本發明的第一個具體實施例中，其係提供治 療以變更的蛋白激酶活性引起及/或與其有關連的細胞增 殖異常的方法’其包含以有效量之式（η化合物投予需 要其之哺乳類， (4) 1343382

其中 R係氫或甲基； R,係羥基或直鏈或支鏈C 1 - C3烷基或烷氧基； R2係氫或鹵素原子； X係選自亞甲基（一CH2 —)或氟亞甲基（一CHF—) 之二價基，或其係選自氧（一 0 -）或氮（一 N R '—)之 雜原子或雜原子基，其中R '係氫原子、直鏈或支鏈C j -C 4院基或C 3 - C 6環院基， 或其在醫藥上可接受之鹽。 以上的方法能夠治療以變更的奧羅拉激酶活性引起及 /或與其有關連的細胞增殖異常。 在上述的方法較佳的具體實施例中，細胞增殖異常係 癌症。 可治療的特殊型式的癌症包括肉瘤、鱗狀細胞瘤、骨 髓細胞或淋巴系統的造血腫瘤、間葉來源的腫瘤、中樞和 末梢神經系統的腫瘤、黑色素瘤、精母細胞瘤、畸胎癌、 骨肉瘤、著色性乾皮病、角黃瘤、甲狀腺濾泡瘤及卡波西 -8- (5) 1343382 氏肉瘤。 本發明也提供式（】）化合物

R係氬或甲基； R!係羥基或直鏈或支鏈Ci-Cs烷基或烷氧基； R2係氫或鹵素原子；

X係選自亞甲基（一CH2 —)或氟亞甲基（—CHF —) 之二價基，或其係選自氧（一 ◦一）或氮（一 N R > -）之 雜原子或雜原子基，其中R '係氫原子、直鏈或支鏈C ,-C4院基或C3 — C6環院基； 或其在醫藥上可接受之鹽。 本發明也包括合成式（I)之毗咯並-吡唑及其在醫 藥上可接受之鹽類的方法，與含彼之醫藥組成物。 在參考以下詳細的說明會更了解本發明更完整的理解 及許多其附加的優點時，可輕易獲得這些理解及優點。 【實施方式】 在本技藝中已知許多作爲蛋白激酶抑制劑之雜環系化 (6) (6)1343382 合物。其中，已在所有以申請者名義的國際專利申請案 WO Oi/12189、W0 01/12188、W0 02/48114 及 WO 02/705 1 5揭示作爲蛋白激酶抑制劑之3 -甲醯胺基口比 唑及3 -脲基吡唑。 也在所有以申請者名義的WO 00/69 84 6 ' WO 02 / 1 2 24 2 與 WO 03 /0 2 8 7 2 0 及仍未發表的 PCT/EP03/04 8 62申請案（比2 002年5月]7日提出申請 的美國專利申請案6 0 / 3 8 1 0 9 2優先提出）揭示含有吡唑部 份及具有激酶抑制活性之稠合雙環系化合物。 除了以上之外，在以Pierre Fabre Medicament名義的 W Ο Ο 2 / 3 Ο 9 2 7揭示對苯蕋轉移酶蛋白質具有抑制活性之胺 基苯基六氫吡畊或胺基苯基六氫吡啶衍生物。 本發明的化合物落在上述倂入本文以供參考之 WO 02/ 1 22 42的通式範圍內，但未在其中特別以實例說明 〇 本發明的式（I )化合物具有不對稱碳原子，並因此 可以個別的光學異構物、外消旋混合物或任何含有大部份 的其中兩種光學異構物之一的其它混合物存在，希望所有 都是在本發明的範圍內。 同樣用作抗腫瘤劑的式（丨）化合物所有可能的異構 物和彼等的混合物，以及代謝物及在醫藥上可接受之生物 前驅體（另外稱爲前體藥物）兩者也在本發明的範圍內。 前體藥物係共價鍵結之化合物，其在活體內釋出根據 式（I)之活性母體藥物。 -10- (7) (7)1343382 如果化合物可以互變體型式存在時，則將每一種型式 涵蓋在本發明的範圍內’不論係以平衡或優勢型式存在與 照此情況，在只以其中一種以下的式（1 a )或（1 b ) 之互變體型式表示時，則仍希望將其餘的型式涵蓋在本發 明的範圍，除非有其它另外的條件：

在發明內容中，吾等希望直鏈或支鏈（^-匚3或Ci — c4院基術語係任何如例如甲基、乙基、正丙基、異丙基 、正丁基、異丁基、特丁基及第二丁基之基，除非有其它 另外的指定。 吾等希望直鏈或支鏈C ! - C 3烷氧基術語係任何如例 如甲氧基 '乙氧基、正丙氧基及異丙氧基之基。 吾等希望鹵素原子術語係氟、氯、溴或碘原子。 吾等希望C 3 - C6環烷基術語係任何如環丙基、環丁 基、環戊基或環己基之基。 依據X基本性而定’顯然與式（I )化合物的苯撐部 份連結的該相同的雜環可以代表六氫吡啶並、4 -氟基六 氫吡啶並、六氫吡啡並、4 -烷基六氫吡哄並、.4 一環烷基 六氫.吡哄並或嗎啉代。 -11 - (8) 1343382 式（I )化合物在醫藥上可接受之鹽類包括具有無機 或有機酸的酸加成鹽類，如例如硝酸、氫氯酸、氫溴酸、 硫酸、高氯酸、磷酸、醋酸、三氟醋酸、丙酸、乙醇酸、 乳酸、草酸、丙二酸、蘋果酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸 、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲烷磺酸、羥乙磺酸及水楊 酸。

以其中 R係氫或甲基；R!係選自羥基、甲越或甲氧 基，R2係氫或氟原子及X係選自亞甲基、氟亞甲基、 —0 -或-N R '(其中 R '係如以上之報告）的式（I ) 之衍生物代表本發明較佳的化合物種類。 關於論及的本發明任何特殊的式（I )化合物及視需 要在醫學上可接受之鹽型式，參考實驗章節及申請專利範 圍。 如以上所述，本發明尙有的目的係說明以製備式（I )化合物及其在醫藥上可接受之鹽類的方法，該方法包含

(I Π )化合物反應 a )將式（11 )化合物與式

其中R及X係如以上之定義，Q係低碳烷基，t - B u代表 特丁基及Z係羥基或適合的離棄基，以便於獲得式（IV ) 化合物 -12 - (9) 1343382

b )將式（I V )化合物在酸性條件下反應，以便於獲得式 (V )化合物

c )將式（V )化合物與式（VI )化合物反應 0

2

其中1^及r2係如以上之定義，以及Z'代表羥基或適合 的離棄基，以便於獲得式（VII)化合物 -13 - (10) (10)1343382

d )將式（V 11 )化合物在鹼性條件下反應，以便於獲得對 應的式（I )化合物’以及若必要時，將其轉化成其在醫 藥上可接受之鹽。 以上的方法係可根據非常熟悉的操作條件運作進行的 類似方法。 根據本方法的步驟（a ) ’可以各種根據使胺基衍生 物醯化的慣周方法進行在式（丨I )與（III )化合物之間的 反應。可將式（π )化合物與式（I n )之醯基氯反應，當 作該反應的實例，其中Z代表作爲適合的離棄基之氯原子 〇 較佳地係在從室溫至約6 0 °C爲範圍之溫度下在適合 的溶劑中（如例如四氫呋喃或二氯甲烷）及在質子淸除劑 的存在下（如三乙胺或二異丙基乙胺）進行該反應。在式 (π )化合物內’ Q代表低碳烷基，例如，C , 一 C 4烷基， 以甲基或乙基更佳。 根據本方法的步驟（b )，以酸性處理，可將式（IV )化合物的吡咯烷氮原子輕易地去保護。 -14 - (11) (11)1343382 可以方便在無機或有機酸的存在下（如例如氫氯酸、 三氟醋酸或曱烷磺酸）、在適合的溶劑中（如二氯甲烷、 I，4 一二噁烷、低碳醇（例如，甲醇或乙醇））、在從室 溫至約4 0 °C爲範圍之溫度下及從約1小時改變至約4 8小 時的時間進行該反應。 根據本方法的步驟（c )，將因此獲得的式（V )化合 物與式（V I )化合物反應。熟悉本技藝的人從以上明白也 可以各種方式及操作條件完成該醯化反應^其係甲醯胺類 製備技藝廣泛已知的反應。 可在偶合劑的存在下（如例如碳化二醯亞胺，即1， 3 -二環己基碳化二醯亞胺、I，3-二異丙基碳化二醯亞 胺、1 — ( 3 -二甲基胺基丙基）一 3 —乙基碳化二醯亞胺 、N—環己基碳化二醯亞胺—N - -丙氧基甲基聚苯乙烯 或N -環己基碳化二醯亞胺—N — -甲基聚苯乙烯）、在 適合的溶劑中（如例如二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、二乙 醚' 1，4 _二噁烷、乙腈、甲苯或N，N —二甲基甲醯胺 )及在從約- 1 0 °C至回流爲範圍之溫度下以適合的時間（ 即從約3 0分鐘至約9 6小時）進行在式（V )化合物與式 (VI )之羧酸（其中Z —係羥基）之間的反應。可視需要 在適合的觸媒存在下（例如，4 一二甲基胺基吡啶）或在 進一步的偶合劑存在下（如N —羥基苯並三唑）進行該反 應。 也可以經由混合的酐方法，使用氯基甲酸烷基酯（如 氣基甲酸乙酯、異丁酯或異丙酯）、在三級鹼的存在下（ -15- (12) (12)1343382 如三乙胺、N ’ N -二異丙基乙胺或吡啶）、在適合的溶 劑中（如例如曱苯、二氯甲烷 '氯仿、四氫呋喃、乙腈、 二乙醚'1，4一二噁烷或N，N__二甲基甲醯胺）及在從 約- 3 0 C至室溫爲軺圍之溫度下進行在式（v ).化合物與 式（V I )化合物之間的反應。 可在二級鹼的存在下（如三乙胺' N，N 一二異丙基 乙胺或吡啶） '在適合的溶劑中（如甲苯、二氯甲烷 '氯 仿、二乙醚、四氫呋喃、乙腈或N ’ n -二甲基甲醯胺） 及在從約一〗〇 °C至回流爲範圍之溫度下進行在式（v )化 合物與式（VI )之羧酸（其中Z /係適合的離棄基）化合 物之間的反應。 式（VI )化合物係以連結至R,及在此以星號註明的 不對稱的碳原子存在爲特徵。

於是式（V 1 )化合物可以或具有單對映異構物形式或 成爲其混合，也包含外消旋性混合物。 根據在本發明的方法所使用的式（v I )化合物本性而 定’顯然可能因此獲得在該相同的碳原子上具有適當定義 之立體化學性的對應的式（V I )化合物。 根據本發明較佳的具體實施例中，以具有既定的對掌 丨生異搆物形式的適合的式（V I )化合物反應，進行步驟 -16 - (13) 1343382 c ) ° 同樣如果使用式（V I )化合物的外消旋性 任何時候希望具有最終光學形式的式（1 )化 需要根據慣用的方式運作式（V 11 )中間化合 式（1 )化合物的光學解析作用。慣用的外消 術包括例如非對映異構鹽衍生物的分段結晶作 對掌性HPLC，只以其當作實例而已。 最終，根據本方法的步驟（d ) ’根據能 性水解胺基甲酸酯基的慣用方法的運作’將5 合物的吡唑氮原子去保護。 可在鹼性條件下（例如，在氬氧化鈉、鉀 級胺（如三乙胺）的存在下）及在適合的溶劑 N —二甲基甲醯胺、甲醇、乙醇、四氫呋喃、 物）進行該反應，當作該反應的實例。典型係 約6 0 °C爲範圍之溫度下及從約3 〇分鐘改變至 的時間進行反應。 最終’根據慣闬的方法，可以完全獲得5 '物在醫藥上可接受之鹽類或這其這些鹽類的自 已知或根據已知的方法可輕易製備本發明 料。 在上述的國際專利申請案W0 02/ 1 224 2 代表乙基的式（丨丨）化合物之製備作用，當作 例（特別參考第2W頁的實例26 ;在本文將 合物稱爲3 -胺基—4，6 -二氫吡咯並[3,4- 混合物時及 合物時，則 物或最終的 旋物解析技 用或製備性 夠例如選擇 尤（VI"化 或鋰，或三 中（如N， 水及其混合 在從室溫至 約9 6小時 I ( I )化合 由化合物。 的方法的原 揭不其中 Q 該製備的實 該相同的化 -C ]吡I]坐一】 -17- (14) (14)1343382 ，5-二羧酸5 -特丁酯1 一乙酯）。 以類似的方式運作，也因此可以製備另外其中Q代 表除了乙基之外的其它低碳烷基的式（II )化合物。 式（m)及（VI)化合物，例如，那些其中Z及Z/ 代表鹵素原子（例如，氯原子）的化合物係或已知的化合 物，或根據慣用方法的運作，自對應已知的羧酸可輕易獲 得的化合物。 熟悉本技藝的人也同樣明白如果根據以上包含任何其 變體的方法所製備獲得的式（I )化合物成爲異構物的摻 合物時，則根據慣用技術進行成爲單一的式（I )異構物 的分離作用仍在本發明的範圍內。 藥理性 式（η化合物具有作爲蛋白激酶抑制劑之活性，更 特別係作爲奧羅拉激酶抑制劑，並因此有用於例如限制失 調之腫瘤細胞增殖。 在治療時，可以使用該化合物治療各種腫瘤（如那些 先前的報告）與治療其它的細胞增殖異常，如牛皮癬、與 動脈粥樣硬化症及手術後狹窄症和再狹窄症有關連的各種 平滑肌細胞增殖。 經由使用SPA科技爲基準的檢定方法（Amersham Pharmacia Biotech )測定選擇之化合物的抑制活性及藥效 。檢定法包含將標記放射活性之磷酸鹽部份以激酶轉換成 生物素化基質。允許所得以3 3 - P標記之生物素化產物與 -18- (15) (15)1343382 以抗生蛋白鏈菌素塗佈之SPA珠（130皮莫耳/毫克之生 物素容量）結合，並在閃爍計數器測量放射之光線。 奧羅拉- 2活性的抑制檢定法 激酶反應：將8 // Μ生物素化肽（LRRWSLG的4重 複）、10//Μ ATP(0.5uCi Ρ33 γ - ATP )、在最終 30 微 升體積之緩衝液中（50mM HEPES pH7.0、10mM MgCl2、 ImM DTT、0.2毫克/毫升之BSA、3yM原釩酸鹽）的 7.5毫微克奧羅拉2抑制劑加入9 6 υ形底井盤的每一個并 中。在室溫下培育60分鐘之後，將反應終止及以加入 】〇 〇微升珠懸浮液捕獲生物素化 。 成層作用：將5 Μ之1 0 0微升C s C丨2加入每一個井中 ’並在Τ ο ρ - C 〇 u n t儀器中計數放射活性之前，至少放置 4小時。 I C 5 0測定作用：在從〇 · 〇 〇 1 5至1 〇 M Μ爲範圍的不同 濃度下測試抑制劑。使用4參數對數方程式之電腦程式 GraphPad Prizm分析實驗數據： y =底部+(頂端+底部）/(]+1〇Λ (對數lC5〇-X)•斜率）） 其中X係抑制劑濃度的對數，y係回應値；y自底部 開始及以S形前進至頂端。

Ki計算： 貫驗方法：在包括3 . 7 η Μ酵素、組蛋白及a Τ P (冷 標記之A Ρ Τ 1 / 3 0 0 0之常數比）之緩衝液中（i 〇 m M 丁 -19 - (16) 1343382 ，pH7.5、lOmM MgCl2、0.2 毫克 / 毫升之 BSA、7.5mM D TT )進行反應。將反應以E D T A終止及在磷酸薄膜上（ 取自Millipore之多飾選96平盤）井捕獲基質。在·延長淸 洗之後，在桌上計數器讀取多篩選平盤。測量每一個ATP 及組蛋白濃度的控制品（0時）° 實驗設計：在4種ATP、基質（組蛋白）及抑制劑濃 度下測量反應速度。在各個Λ Τ P和基質K m値及抑制劑 IC50値（0.3、I、3、9倍Km或IC50値）附近設計80 點濃度矩陣。在沒有抑制劑的存在及在不同的ATP和基 質濃度下初步的時間過程實驗允許在K i測定實驗的反應 線型範圍內選擇單一終點時間（]0分鐘）。 動態參數預估：使用[方程式 U的同步非線型最小一 乘方回歸（關係於 A Τ P之比較抑制劑，隨機機制）使用 完整的數據組（8 0點）預估動態參數： [方程式1]

Vm· Α· B

Κο B 'Κα · Kb + α·Κα·Β + α· Kb ·Α + Α·Β + α· ―― · I · (Kb + —) Κι β 其中 A = [ATP]，B =[基質]，1 =[抑制劑]，=最大速 度，Ka、Kb、Ki分別係ATP、基質及抑制劑之離解常數 。α及/3分別係基質與結合之ΑΤΡ之間及基質與結合之 抑制劑之間的協同因子。 進一步在活體外測試本發明的化合物，評定對細胞培 育物的抗增殖效應及對細胞週期的抑制效應。 在活體外的細胞增殖檢定法 -20- (17) (17)1343382 將人類結腸癌細胞株H C T - 1 1 6以5 Ο 〇 〇個細胞/平 方公分接種在使用以1 〇 % F C S (義大利的E u r 〇 C 1 ο n e ) ' 2 mM L~谷胺醯胺及丨％青霉素/鏈霉素補充之F12介 質（G ! b c 〇 )及維持在3 7 °C，5 % C 0 2和9 6 %相對濕度下 的2 4井平盤（c 0 s t e r )中。在隔天將平盤以5微升適當 的化合物稀釋液（從在D M S Ο中的1 0 m Μ貯液開始）重 複處理。在每一個平盤中包括兩個未處理之控制井。在處 理7 2小時之後，將介質抽出及使用〇 . 5毫升之〇 . 〇 5 % ( 重量/體積）胰蛋白酶、〇 . 〇 2 % (重量/體積）E D T A ( Gibco )自井分離出細胞。將樣品以 9.5毫升Is〇t〇n ( Coulter)稀釋及使用 Multisizer 3細胞計數器（Beckman Coulter )計數。以控制井百分比評估數據： CRT% =(經處理一空白）/ (控制品一空白） 以使用Microsoft Excel S形曲線配套軟體的LSW/ 數據分析計算1 C 5 〇値。 在活體外的細胞週期分析 將人類結腸癌細胞株H C T - 1 1 6以5 0 0 0個細胞/平 方公分接種在24井平盤（Costar )中及如以上所述培育 。將彼等的指數生長期的細胞以不同濃度的化合物處理 24小時。也收集培育介質上層淸液，避免損失分離的凋 亡或有絲分裂細胞。然後將細胞使用P B S淸洗及以0.05 % (重量/體積）胰蛋白酶、0.02% (重量/體積） EDTA ( Gibco )分離。使用培育介質終止胰蛋白酶活性。 -21 - (18) (18)1343382 匯集黏著及非黏著細胞飽分，並在2 Ο Ο 0 r p m下離心]〇分 鐘。將細胞再懸浮在P B S充及使出M u 11 i s i z e r 3細胞計數 器（Beckman Coulter)計數。加入乙醇（70%，體積/ 體積）固定及將細胞在- 2 0 t下保存隔夜。 將1百萬個固定細胞在2 000 rpm下離心5分鐘及以 P B S淸洗，並接著在室溫下的暗室中加入2 0 0 / : 2 5公克 /毫升之砩化丙H定（Sigma)及15微克/毫升之RNASeA (Sigma )、在檸檬酸鈉（0 . 1 % (重量/體積），p Η 7 . 5 )中的0 · 0 0 1 % (體積/體積）經1小時染色。將樣品以 在 488毫微米激發下的流式細胞儀（FACSCalibur， Beckton Dickinson)使用 Cell Quest 3.0 軟體（Beckton D i c k i n s ο η )分析。典型係收集 1 〇 0 〇 〇次（啓動雙區別模 式D D Μ及只選通單細胞），並使用C e Π Q u e s t ( V e r i t y

Software)記錄細胞週期分布。使用改良的Modfit 3」軟 體模式計算群數的細胞週期分布，並分別以％ G0 / G ] ' S 和G2/M及多倍體表示。 以上的檢定法使本發明的式（I )化合物具有顯著的 蛋白激酶抑制活性’例如，奧羅拉一 2抑制活性。參考當 作實例的以下表〗報告4種作爲奧羅拉—2激酶抑制劑（ I C $ ο π Μ )的本發明的代表性化合物、’彼等的抗細胞增殖 效應（ICw ηΜ )及彼等致力於細胞週期阻斷和減少多倍 體的能力（在2〇〇nM2%G2/JVI +多倍體）。 有趣地係測試這些相同的化合物，與在結構上非常接 近的先則技藝化合物比較，在此定義成參考化合物’尤其 -22- (19) 1343382 係上述 WO 02/1 2 24 2所揭示的化合物—參考第1 60頁， 第5 — 7頁；在此將參考化合物命名爲 N — { 5 -苯基乙醯 基一 4，6 - 一 氨批略並[3，4 一 c]Dj：t 哩—3_基}_4一 （4 -甲基六氫吡哄並）苯醯胺。

參考化合物（; X = NMe) N - { 5 —苯基乙醯基—4，6 —二氫吡咯並[3，4 _ c ]吡 唑一 3 -基} - 4 — ( 4 一甲基六氫吡D井並）苯醯胺； 化合物（])(R^I^^H’ReOMeiXsNMe) N - { 5 - [ ( 2R ) — 2—甲氧基—2_苯基乙醯基]—1， 4，5，6 —四氫吡咯並[3，4— c]吡唑一 3 —基}— 4_ (4 一 甲基六氫吡畊一]一基）苯醯胺； 化合物（Η) ( R = R2 = H，R, = Me ； X = NMe) N - { 5 - [ ( 2 R ) — 2 —甲基—2 -苯基乙醯基]—1，4 ，5，6 —四氫吡咯並[3，4 — c ]吡唑_ 3 —基} — 4 — ( 4 一 甲基六氫吡畊-1 一基）苯醯胺； 化合物（6) ( R = R2 = H，R】 = 0Me ; X二 CH2) N — { 5 — [ ( 2 R ) — 2 —甲氧基一 2 —苯基乙醯基]—1， -23 - (20) 1343382 4，5，6 —四氫吡咯並[3，4— c]吡唑一 3 —基}一 4 —六氫 砒啶一 1 -基苯醯胺； 化合物（5) (R = Me，Ri = OMe，R2 = H; X二NMe) 4 — (3，4 —.一 甲基六氣 D比啡—1 一 基）—N — { 5 一 [( 2R) — 2 —甲氧基-2—苯基乙醯基]—1，4，5，6 —四氫 吡咯並[3，4 一 c]吡唑一 3 -基} 一苯醯胺；

化合物 奧羅拉-2 抑制作用 IC5〇(nM) 抗細胞增 殖作用 IC5〇(nM) 細胞週期阻斷 在 200nM 2%G2/M +多 倍體 參考化合物 1 40 220 3 3 Μ 19 ⑴ 16 3 1 90 (11) 63 17 90 (6) 3 7 3 0 90 (5) 18 5 0 90

本發明化合物的奧羅拉- 2抑制活性得到比參考化合 物更固定及顯著卓越的活性。 此外，那些相同的化合物得到具有抗細胞增殖效應與 阻斷細胞週期和減少多倍體的能力，顯然比在相同的條件 下測試的參考化合物卓越。 從所有以上的試驗，本發明的新穎式（I )化合物顯 -24 - (21) (21)1343382 現被賦與生物分布，以整體考慮，其意想不到竟比最接近 的先前技藝W Ο ϋ 2 / 1 2 2 4 2更卓越，並因此在治療時特別 有利於對抗與變更的奧羅拉- 2激酶活性有關連的增殖異 常。 可將本發明的化合物或以單一試劑或另一選擇係與已 知的抗癌治療組合投藥，如與細胞抑制劑或胞毒劑、抗體 型試劑、烷基化試劑、抗代謝物試劑、荷爾蒙劑、免疫劑 、干擾素型試劑、環氧酶抑制劑（例如，COX - 2抑制劑 ) '介質金屬蛋白酶抑制劑、端粒酶抑制劑、酪胺酸激酶 抑制劑 '抗生長因子受體劑、抗一 HER試劑、抗一 EG FR 試劑、抗腫瘤生長劑（例如，腫瘤生長抑制劑）、法呢基 轉移酶抑制劑、r a s - r a f信號轉導路徑抑制劑、細胞週期 抑制劑 '其它的Cdks抑制劑、微小管蛋白結合劑、拓樸 異構酶I抑制劑、拓樸異構酶11抑制劑及類似物組合的 照射治療法或化療法。 如果5周配成固足劑量’則适些組合產物使用在上述劑 量範圍內的本發明化合物及在認可的劑量範圍內的其它醫 藥活性試劑。 當組合調配物不適當時，則可以連續使用式（I )化 合物與已知的抗癌劑。 可將適合投予哺乳類（例如，人類）的本發明的式（ I )化合物以常見途徑及依據病患年齡 '重量、症狀及投 藥路徑而定的劑量値投藥。 例如’選擇口服投予式（I )化合物之適合劑量可以 -25 - (22) (22)1343382 每份劑I計從約1 〇至約5 Ο 0毫克爲範圍，每天從丨至5 次。可將本發明的化合物以各種劑型投藥，例如，以藥片 、膠囊 '以糖或膜塗佈之藥片、液體溶液或懸浮液形式的 口服投樂；以栓劑形式的直腸投藥；例如，肌肉內或經靜 脈內及/或椎管內及/或脊髓內注射或灌入。 本發明也包括含有式（I )化合物或其在醫藥上可接 受之鹽與在醫藥上可接受之賦形劑（其可以係載體或稀釋 劑）締結的醫藥組成物。 糸;吊依照|負用的方法製備包括本發明化合物的醫藥組 成物，並以適合的醫藥形式投藥。 例如’固體口服形式可以一起包括活性化合物 '稀釋 劑（例如，乳糖、右旋糖蔴糖、蔗糖、玉米澱粉或馬鈴薯 锻粉）'潤滑劑（例如，二氧化矽' 硬脂酸、硬脂鎂或鈣 及/或聚乙一醇）.、結合劑（例如’激粉 '阿拉伯膠、白 明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯基環吡啶酮） 、崩散劑（例如，澱粉、藻酸、藻酸酯或澱粉乙醇酸鈉） 起泡沫之混合物、染料、甜味劑、濕潤劑（如卵憐脂' 山梨酸醋 '硫酸月桂醋）與在醫藥調配物中所使用的一 般無毒性和無藥理活性之物質。可以已知的方式製造這些 醫藥製劑，例如，以混合、粒化、製錠、以糖塗佈或以膜 塗佈法方式。 用於口服投藥之液體分散液可以係例如糖漿、乳液及 懸浮液。 當作實例的糖漿可以包括作爲載體的蔗糖、鹿糖與甘 -26 - (23) (23)1343382 油酯及/或甘露醇及山梨醇。 懸浮液及乳液可以包括作爲載體實例的天然膠、瓜膠 、藻酸鈉 '果膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯醇 。用於肌肉內注射之懸浮液或溶液可以一起包括活性化合 物與在醫藥上可接受之載體’例如，無菌水、橄攬油 '油 酸乙酯、乙二醇類’例如’丙二醇及若必要時適量的利多 卡因（lid0caine )鹽酸。用於靜脈內注射或灌入之溶液可 以包括作爲載體的無菌水’或較佳地係彼等可以具有無菌 '水性、等滲性之食鹽水溶液形式或彼等可以包括作爲載 體的丙二醇。 栓劑可以一起包括活性化合物與在醫藥上可接受之載 體’例如’可可油、聚乙二醇、聚氣乙烯花椒聚糖脂肪酸 酯界面活性劑或卵磷脂。 現在提供以下的實例，有助於更詳細例證本發明，不 是對本發明提出任何限制。 實例 __ 通用方法 在矽膠上（M e r c k級9 3 8 5， 6 0埃）進行閃蒸色層分 離法。在使用配備9 9 6 W a t e r s P D A偵測器及M i c r o m a s s 型ZQ單一四極質譜計（配備電灑（ESI )離子來源）之 Waters 2790 HPLC 系統的 Waters X Terra RP18 ( 4.6x50 毫米，3 . 5微米）管柱上進行Η P L C / M S。移動相A係5 m Μ醋酸銨緩衝液（ρ Η 5 . 5，9 5 : 5之醋酸/乙腈）及移動 -27 - (24) (24)1343382 相B係H2O /乙腈（5· 95)。在8分鐘內從ι〇至go% Β及以2分鐘固定爲9 0 % Β之梯度。在2 2 υ毫微米及2 5 4 毫微米下之UV偵測。丨毫升/分鐘之流速。1 〇微升之注 射體積。1 〇 0至8 0 0 a m u之兒整掃描的質量範圍。毛細 管體積係2.5 K V ;光源溫度係1 2 0 °C :錐體係丨〇 v。提供 在220毫微米或2 5 4毫微米下以分鐘計之逗留時間（ HPLC r.t.)。提供以m / z比之質量。在400.45MHz下操 作配備5毫米雙共振探針（1H{15N — 3iP)l〇 PFG Varian )之MercuryV；X 400 上進行lH—NMR光譜法。 實例1 3 -胺基—4’ 6 -二氣卩比略並[3，4— c]卩比哗—i，5 —二梭 酸5 —特丁基1 -乙酯之製備作用 將在四氫呋喃（T H F ’ 2 5 0毫升）中的氯基碳酸乙酯 (8.9毫升，9 3毫莫耳）之溶液緩慢加入在0 — 5。(：下在 THF ( 5 00毫升）中的3 -胺基—4，6 —二氫吡咯並[3，4 —c]D比哩一 5 (1Η) -孩酸特丁酯（20公克，89毫莫耳） 與二異丙基乙胺（DIEA，92毫升，5 2 8毫莫耳）之混合 物中。將反應在相同的溫度下維持2小時，接著允許達到 室溫及攪拌隔夜。將所獲得的混合物在真空下蒸發至乾燥 ，並將所得殘餘物以醋酸乙酯（Ac OEt )及水萃取。將有 機層分開，經硫酸鈉乾燥及蒸發至乾燥。將混合物以閃蒸 色層分離法（洗提液：4 / 6至7 / 3之醋酸乙酯/環己烷 )純化，得到成爲白色固體之]9公克標題化合物。 -28- (25) 1343382 [M + H] + 2 9 7。 實例2 3 - { [4 一 （ 4 一甲基六氫吡哄—i —基）苯醯基]胺 ，6 —二氫吡咯並[3，4 一 c ]吡D坐—丨，5 —二羧酸 5 —特丁基1 一乙酯之製備作用 將草醒氯（23.2毫升，265毫莫耳）加入在二 (DCM，320篭升）及二甲基甲酿胺（DMF，〇52 中的4 一 （ 4 一甲基—1 六氫吡哄基）一苯甲酸（ 克，5 3毫莫耳）之懸浮液中。在將混合物回流6.5 後’在減壓下小心地移除揮發物（將殘餘物以甲苯 次）。 將所得4 -甲基六氫吡啡並苯醯氯二鹽酸鹽分 在室溫下在無水T H F ( 6 2 0毫升）中的3 —胺基一 二氫毗咯並[3，4— c]吡唑一 ]，5 —二羧酸5 -特丁 乙酯（】3.1公克，44.3毫莫耳）及 DIEA(54.4 0.32莫耳）之攪拌下的溶液中。將所得懸浮液在室 拌]6小時及在40 °C下攪拌1小時。 在減壓下移除溶劑之後，將殘餘物以AcOEt ( 升）處理，並將有機層以水性碳酸鈉（2〇〇毫升） 水（2 0 0毫升）淸洗，並經硫酸鈉乾燥。 將溶劑蒸發，並將殘餘物以二乙醚（Et2〇，1 3 )與A c 0 E t (] 5毫升）之混合物濕磨’過濾’在 真空下乾燥，得到成爲白色粉末之2 0公克標題化 基} 一 4 氯甲烷 毫升） 1 1 .7 公 小時之 處理 3 批加入 4，6 -基 1 -毫升， 溫下攪 6 0 0毫 及食鹽 5毫升 4 0°C 之 合物。 -29- (26) (26)1343382 [M + H] + 499。 以類i以的方式操作及以3 -胺基一 4，6 -二氫吡咯並 [3，4 一 c]毗唑—]，5 —二羧酸5 -特丁基1 一乙酯與適當 的醯基氯衍生物反應，製備以下的化合物： 3 - {[4 一 （4 —乙基六氫吡畊一 1 一基）苯醯基]胺基} 一 4 ’ 6 -二氫吡咯並[3，4 — c ]吡唑一 1，5 -二羧酸5 -特 丁基 1 —乙酯；[Μ + Η ] + 5 1 3。 3 — { [4 — ( 4 —異丙基六氫咄畊一 1 一基）苯醯基]胺 基} 一 4，6 —二氫吡咯並[3，4 — c ]吡唑一 1，5 -二羧酸 5 --特丁基]—乙酯；[Μ + Η] + 527。 3-{[4 - （4 —環丙基六氫吡D并一 1 一基）苯醯基]胺 基} 一 4，6 —二氫吡咯並[3，4 — c ]吡唑—]，5 -二羧酸 5 一特 丁基]一乙酯；[Μ + Η ] + 5 2 5。 3 - {[4— (3，4_二甲基六氫吡畊一 1_基）苯醯基] 胺基} 一 4，6 —二氫吡咯並[3，4 — c ]吡唑一 1，5 -二羧酸 5 —特丁基 1 —乙酯；[Μ + Η Γ 5 ] 3。 3— [(4 -六氫吡啶一 1—基苯醯基）胺基]_4，6 -二氫吡咯並[3，4 — c ]吡唑一 1，5 -二羧酸5 -特丁基I -乙酯；[M + H]+4 8 4。 3 - {[4— (4 一鎮基六氣卩比D定一 1 一基）苯醯基]胺基} 一 4，6 —二氫吡咯並[3，4 — c ]吡唑一1，5 —二羧酸5 -特 丁基 1 —乙酯；[M + Η ] + 5 0 2。 3 - [( 4 一嗎咐一 4 —基苯醯基）胺基]_ 4，6 -二氫 吡咯並[3，4 — c ]吡唑一 ]，5 -二羧酸5 -特丁基1 一乙酯 -30 - (27) (27)1343382 ；[M + H]+486。 3 - { [4 一 （ 4 一特丁基六氫吡啡一 1 —基）苯醯基]胺 基} 一 4 ’ 6 -二氫吡咯並[3，4 — c ]吡唑一 1，5 -二羧酸 5 一特丁基 1 一 乙酯；[M + H] + 54 1。 實例3 3 一 { [4 - ( 4 —甲基六氫吡畊一]一基）苯醯基]胺基} 一 5 ，6 -二氫吡咯並[3，4 一 c ]吡唑一 ](4 Η ) -羧酸乙酯 三鹽酸鹽之製備作用 將在二噁烷中的4當量氫氯酸溶液（1 2 2毫升，4 8 8 毫莫耳）逐滴加入在無水D C Μ ( 2 4 0毫升）中如實例2所 製備的 3 — {[ 4 - （ 4 —甲基六氫吡畊一 1 —基）苯醯基]胺 基} 一 4 ’ 6 -二氫吡咯並[3，4 一 c ]吡唑一 1，5 -二羧酸 5 -特丁基1 —乙酯（1 9.5公克，39.2毫莫耳）之攪拌溶液 中，幾乎立即發生白色固體沉澱作用。將所得混合物在室 溫下攪拌24小時，在以Et20 (] 00毫升）稀釋之後，將 固體過濾，以Et20徹底淸洗及在50°C之真空下乾燥，得 到2 0 . 1公克標題化合物，在下一個步驟中使用未進一步 純化之該化合物。[M + Η ] + 3 9 9。 1 Η - NMR ( DMSO - d6 ) 0ppm:].4(t，3H) > 2.8 (d，3H) ，3.2(m，4H) ，3.5 (m，2H) ，4.1 (m，

2H) ，4.4(q，2H) ，4.6(m，4H) ，7.1-8.0( m，4H )，：10.3(bs，2H) ' 10.7 (bs> 1H) > 1 1 .4 ( s > 1 H ) -31 - (28) (28)1343382 以如以上報告的方式操作及自適合的中間物開始，以 類似的方式製備以下的化合物： 3— {[4 - （4 —乙基六氫吡哄一 1—基）苯醯基]胺基} 一 5，6 -二氫吡咯並[3，4 一 c]吡唑一 1 ( 4 Η ) -羧酸乙酯 三鹽酸鹽；[Μ + Η ] + 4】3。 3 - {[4 - ( 4 -異丙基六氫毗畊—1 一基）苯醯基〕胺 基} 一 5，6 —二氫吡咯並[3，4 一 c ]毗唑—](4 Η ) _羧酸 乙酯三鹽酸鹽；[Μ + Η] + 427。 3 一 {[4 一 （4 -環丙基六氫吡G井—1 一基）苯醯基]胺 基} — 5，6 —二氫吡咯並[3，4 一 c ]吡唑—1 ( 4 Η )—羧酸 乙酯三鹽酸鹽；[Μ + Η] + 425。 3 一 {[ 4 一 （ 3，4 —二甲基六氫吡哄一 1 一基）苯醯基] 胺基} 一 5，6 -二氫毗咯並[3，4 — c ]吡唑—1 ( 4 Η ) -羧 酸乙酯三鹽酸鹽；[Μ + Η] + 4Ι3。 3 — [( 4 -六氫吡啶—1 _基苯醯基）胺基]_ 5，6 -二氫吡咯並[3，4 — c]吡唑一 1 ( 4Η )-羧酸乙酯； [Μ + Η] + 3 8 4。 3 一 {[4 一 （4 一氟基六氫吡啶一 1—基）苯醯基]胺基} —5，6 -二氫吡咯並[3，4 - c ]吡唑一 1 ( 4 Η )-羧酸乙酯 三鹽酸鹽；[Μ + Η ] + 4 0 2。 3 一 {[4— (4 一嗎啉一 4一基）苯醯基]胺基}— 5，6- 二氫吡咯並[3，4 一 c ]吡唑一】（4 Η ) -羧酸乙酯三鹽酸鹽 ；[Μ + Η] + 3 8 6。 3 - { [ 4 一 （ 4 一特丁基六氫吡D井一]—基）苯醯基]胺 -32 - (29) (29)1343382 基}一5，ό一二氫吡咯並[3’ 4— c]吡唑—1 (4H)—羧酸 乙酯三鹽酸鹽；[Μ + Η Γ 4 4 1。 實例4 5_[(2R) _2 -甲氧基一2_苯基乙醯基]—3-{[4— (4 一甲基六氫吡畊一 1 一基）苯醯基]胺基} 一 5，6 —二氣卩比 咯並[3 ’ 4 — c ]吡唑一 1 ( 4 Η )—羧酸乙酯之製備作用 將草醯氯（1 0 1 .2毫升，Π 5毫莫耳）加入在D C Μ ( 9 0毫升）及D M F ( 0. 5 0毫升）中的R — （ 一 ) — α 一甲 氧基苯基醋酸（】.9】公克，Π.5毫莫耳）之溶液中。在 將混合物在室溫下攬拌1 6小時之後，在減壓下小心地移 除揮發物。 將在DCM中的所得R— (― ) — 甲氧基苯基乙 醯氯之溶液（20毫升）逐滴加入在室溫下在 DCM (400 毫升）中的3— U4 - （4 一甲基六氫吡U井—1 一基）苯醯基 ]胺基} _ 5，6 —二氫吡咯並[3，4 一 c ]吡唑一1 ( 4 Η )—羧 酸乙酯（4.5公克，8.9毫莫耳）及DIEA ( 1 1 .8毫升，69 毫莫耳）之攪拌下的溶液中。將所得溶液在室溫下搜拌 2 0小時。 接著將反應混合物以水性碳酸鈉（200毫升）及食鹽 水（200毫升）淸洗，並經硫酸鈉乾燥。將溶劑蒸發，並 將殘餘物以E12 〇 ( 1 〇 〇毫升）與A c Ο E t ( 1 0毫升）之混 合物濕磨，過濾，在4 0 °C之真空下乾燥，得到成爲白色 粉末之3 . 94公克標題化合物’在以下的步驟中使用未進 -33- (30) (30)1343382 一步純化之該化合物。[Μ + Η ] + 5 4 7 ; iH — NMR ( DMSO — d6) <5ppm:1.3(t，3H) 5 2.3 (d，3H) ，2.6(m，4H) ，3.3— 3.4(m，7H) ，4.3( q，2H) > 4.6-4.9 (m-4H) ，5.1(d，lH) > 7.0 - 8.0 (m，9H) ，] 1 . 1 ( d，]H )。 以如以上報告的方式操作及自適合的醯基氯衍生物開 始，以類似的方式製備以下的化合物： 5 - [ ( 2R ) 一 2 —甲氧基_2_苯基乙醯基]—3-{[4 一 （4 一乙基六氫吡哄一]一基）苯醯基]胺基} 一 5，6 —二 氫吡咯並[3，4 — c]吡唑一 1 ( 4H )—羧酸乙酯； [M + Η ] + 5 6 1。 5 - [ ( 2 R ) — 2 —甲氧基一 2 —苯基乙醯基]—3 — {[4 --(4 一異丙基六氫吡D并一〗一基）苯醯基]胺基} 一 5，6 — 二氫吡咯並[3，4 - c ]吡唑一 1 ( 4 Η ) -羧酸乙酯； [Μ + Η] + 5 7 5。 5-1 ( 2R ) 一 2 —甲氧基一 2 -苯基乙醯基]一 3 — {[4 一 （4 一環丙基六氫吡畊一 1—基）苯醯基]胺基}一 5，6-二氫吡咯並[3，4 一 c]吡唑一】（4Η ) -羧酸乙酯； [Μ + Η] + 5 7 3。 3 一 {[4 一 （3，4 —二甲基六氫吡畊—1—基）苯酸基] 胺基}一5— [(2R) — 2 -甲氧基—2 -苯基乙醯基]—5，6 -二氫吡咯並[3，4 一 c]毗唑一 ](4Η ) -羧酸乙酯； [Μ + Η] + 56 ]。 5 —丨（2R) — 2 —甲氧基—2 —苯基乙醯基]—3— [(4 -34 - (31) (31)1343382 -六氫吡畊—1 —基苯醯基）胺基]一 5，6 -二氫吡咯並[3 ，4 — c ]吡唑—1 ( 4 Η )—羧酸乙酯；[Μ + Η Γ 5 3 2。 3— {[4 - （4 一氟基六氫吡啶一 1 一基）苯醯基]胺基} -5 - [ ( 2R ) — 2 -甲氧基—2 —苯基乙醯基]一 5，6_二 氫吡咯並[3，4 一 c]吡唑—1 ( 4Η ) -羧酸乙酯； [Μ + Η] + 5 5 0。 5 - [ ( 2 R ) 一 2 —甲氧基一 2 —苯基乙醯基]一 3— [(4 一嗎啉一 4 一基苯醯基）胺基]_ 5，6 —二氫吡咯並[3，4 —c ]吡唑一 1 ( 4 Η )—羧酸乙酯；[Μ + Η ] + 5 3 4。 3 — { [4 一 （ 4 -特丁基六氫吡畊一 1 一基）苯醯基]胺 基}一5—[(211) — 2—甲氧基-2—苯基乙醯基]_5，6- 二氫毗咯並[3，4 一 c]吡唑—](4Η ) —羧酸乙酯： [Μ + Η] + 5 8 9。 5 — [ ( 2R) —2 —甲基—2 —苯基乙醯基]-3 — {〖4 — (4 一乙基六氫吡畊一基）苯醯基]胺基}一 5，6 -二氫 吡咯並[3，4 — c ]吡唑—1 ( 4 Η )—羧酸乙酯；[Μ + Η ] + 5 4 5 〇 5 — [(2R) — 2 —甲基-2—苯基乙醯基]一 3— {[4 — (4 —異丙基六氫吡畊一 1 一基）苯醯基]胺基}一 5，6-二 氫吡咯並[3，4 — c]吡唑一 1 ( 4Η ) -羧酸乙酯； [Μ + Η] + 5 5 9 〇 5 - [ ( 2R ) 一 2 —甲氧基—2—苯基乙醯基]一 3— {[4 一 （4 一環丙基六氫吡畊一 1 一基）苯醯基]胺基}一 5，6-二氫毗咯並[3，4 — c]毗唑—](4Η ) —菝酸乙酯； -35 - (32) (32)1343382 [M + H] + 5 5 7。 3 一 {[4 一 （3，4 —二甲基六氫吡哄一 1 一基）苯醯基] 胺基}— 5—[(2R) — 2 -甲基一 2 —苯基乙醯基]一 5，6 — 二氫吡咯迪[3，4 一 c]吡唑一 1 ( 4H )—羧酸乙酷； [Μ + ΗΓ 5 4 5。 5 - [ ( 2R ) 一 2 -甲基一2 —苯基乙醯基]一 3— [(4 — 六氫吡啶一]—基苯醯基）胺基]一 5，6 —二氫吡咯並[3， 4 一 c ]吡唑—1 ( 4 Η )—羧酸乙酯；[M + Η ] + 5 1 6。 3 — 4 - ( 4 -氟基六氫吡啶一 1 —基）苯醯基]胺基} -5 - [ ( 2R ) — 2 —甲基一 2 —苯基乙醯基]—5，6 —二氫 吡咯並[3，4 — c ]毗唑一 ](4 Η )—羧酸乙酯；[Μ + Η ] + 5 3 4 〇 5 - t ( 2 R ) — 2 —甲基一2 —苯基乙醯基]一 3 - [(4 一 嗎啉一 4 一基苯醯基）胺基]一 5，6 —二氫吡咯並[3，4 一 c ] 吡唑一 ](4H )—羧酸乙酯；[M+H] + 51 8。 3 - { [4 - ( 4 一特丁基六氫吡畊—1 一基）苯醯基]胺 基}— 5 — [ ( 2 R ) 一 2 —甲基一 2 —本基乙酿基]一 5’6 - __. 氫吡咯並[3，4 — c]吡唑一 1 ( 4H )—羧酸乙酯； [M + H] + 5 73。 5 - [ ( 2R ) — 2 -羥基一 2 —苯基乙醯基]—3_{[4 — (4 一甲基六氫吡哄一 1 一基）苯醯基]胺基}一 5，6—二氫 吡咯並[3，4 — c]吡唑—1 ( 4H ) -羧酸乙酯；[M + H] + 533 〇 -36 - (33) (33)1343382 實例5 N - { 5 - [ ( 2 R ) — 2 —曱氧基一2 —苯基乙醯基]一 1，4，5 ，6 —四氫吡咯並[3，4 一 c ]吡唑—3 -基} 一 4 一 （ 4 一甲基 六氫吡畊一 1 -基）苯醯胺（1 )之製備作用 將在甲醇（MeOH，130毫升）及三乙胺（Et3N，13 毫升）中的 5— [(2R) — 2 -甲氧基—2 —苯基乙醯基]— 3 — { [ 4 — (4 —甲基六氫卩比哄一 1—基）苯酿基]胺基}一 5 ，6 —二氫吡咯並[3，4 — c]吡唑一 1 ( 4H )—羧酸乙酯（ 3.9 4公克·，7.2毫莫耳）之溶液在室溫下攪拌1 6小時（ 發生一些沉澱作用）。將固體分開及以Et20淸洗，得到 1 . 6公克標題化合物。將溶液蒸發至數毫升，並將第二個 固體產物餾份分開（1 . 6 2公克）。將兩個餾份合倂及以 L C - M S分析（在2 5 4及2 2 0毫微下具有約9 0 %純度）。 在以色層分離純化（短矽膠管柱，4 5 : 5之 D C M / M e Ο Η )之後，獲得成爲白色固體之2.8 3公克（8 3 % )標題化 合物。熔點 2 8 9 °C ; [ M + Η ] + 4 7 5 ; 1 Η - NMR ( DMSO - d6 ) ¢5 ppm ： 2.2 1 (s，3 H )， 2.43 (m，4H) ，3.29(m，7H) ，4.20-4.90 (m，4H)

，5.09(s，lH) ，6.80 - 8.00(m，9H) ，]0.6(br，lH )，12.09 ( br，1H )。 以類似的方式操作，經由實例4之化合物的鹼性水解 作用製備以下的化合物= (2) N-{5— [(2R) — 2 —甲氧基—2 —苯基乙醯基] —]，4，5 ’ 6 —四氫吡咯並[3，4 一 c ]吡唑—3 -基} 一 4 — -37 - (34) (34)1343382 (4 —乙基六氫吡畊—]—基）苯醯胺；[M + H]+ 4 8 9 ; i Η - N M R ( D JM S Ο - d 6 ) ¢5 ppm ： 1.1 ( t - 3 H ) ，2.3 一 2.7(m，6H) 1 3.2 — 2.4 (m 5 7H) ，4.3— 6.0(m， 4H ) > 5.1 ( d > 1 H ) ，6.9— 8.0(m，9H) ，10.6(bs， 1 H ) > 12.1 ( br > 1 H )。 (3) N - {5— [(2R) — 2-甲氧基一 2 —苯基乙醯基] 一]，4，5’ 6 —四氫吡咯並[3，4— c]吡唑一 3 —基}— 4 — (4 —異丙基六氫吡D井一 1 —基）苯醯胺；[M + H] + 5 03 ;

1 Η - NMR ( DMS Ο - d6 ) <5 ppm : 1.3 —] .3 ( dd，6H )，3.3— 3.4(m，9H) > 4.6 - 4.9 ( m · 4H ) ，5.1(d， 1 H ) ，7.0-8.0( m，9H) ，10.7 (bs，1 H ) ，12.3 ( bs ，：1 H )。 (4) N— {5— [(2R) — 2 -甲氧基一 2 —苯基乙醯基] 一 1，4，5，6 —四氫吡咯並[3，4 一 c ]吡唑一 3 -基} — 4 — (4 —環丙基六氫吡畊一 1_基）苯醯胺；[M + H] + 501; 1H - NMR ( DM SO - d6) <5 ppm : 0.3 - 0.5 ( m > 4H ) > 3.2-3.4 (m' 7H) ，3.2— 5.0(m，4H) - 5.1 ( d > 1 H )，6.8— 8.2(m，9H) > 1 0.5 - 1 0.7 ( b r > 1 H ) > 12.0- 1 2.4 ( b !·，1 H )。 (5) 4- (3，4 一二甲基六氫吡哄—1—基）—N — { 5 - [ ( 2 R ) 一2—甲氧基一2 —苯基乙醯基]-1，4，5，6 一四氫吡咯並[3，4 一 c ]吡唑-3 -基}苯醯胺；[M + Η ] + 4 8 9 ]Η - NMR ( DMSO - d 6 ) 〇 ppm ： 1 . 0 - 1 . 1 ( m > 3 H ) -38 - (35) (35)1343382 ，2.24(s，3H) - 3.3-3.5 (m> 7H) > 4.3 - 5.0 ( m > 4H ) ，5.i(d，lH) ，6.9—8.0(m，9H) ，10.6(br， 1 H ) - 11.9-12.6( br- 1H)。 (6) N — {5— [(2R) —2 —甲氧基_2-苯基乙醯基] —1，4，5，6 —四氫吡咯並[3，4 一 c ]吡唑—3 —基} — 4 — 六氫吡啶一 1 —基苯醯胺；[M + Η ] + 4 6 0 ; 1 Η - NMR ( DMSO - d6 ) t5ppm: 1.5 — 1.7(m，6H)

> 3.2-3.4 (m> 7H) ，4.3-4.9 (m，4H) ，5.1(d，lH )，6.9— 8.0(m，9H) > 10.4 - 10.7 (br· 1H)。 (7) 4— (4 —氣基六氣 Q]iD定—1 一基）—N - {5 —[( 2R) — 2 —甲氧基-2—苯基乙醯基]一1，4，5，6 —四氫 吡咯並[3，4 — c ]吡唑一 3 —基}苯醯胺；[M + Η ] + 4 7 8 ;

1Η - NMR ( DMSO - d6) 5 ppm: 1.65-2.1 (m> 4H )> 3.15-3.6 (m> 7H) ，4.35—5.0(m，5H) ，5.1(d ，1H) ，6.9-8.0(m，9H) ，10.4-10.7 (br，1H) 。 (8) N— {5— [(2R) — 2—甲氧基—2 -苯基乙醯基] 一 1，4’ 5，6 —四氫吡咯並[3，4— c]吡唑—3 —基}— 4 — 嗎啉—4 一基苯醯胺；[M + Η ] + 4 6 2 ;

]Η - NMR ( DMSO - d6 ) ¢5 ppm : 3.15 — 3.5 ( m，7H )-3.7-3.8 (m> 4H) > 4.3-4.9 (m- H) ，5.1(d， 1 H ) ，6.9-8.0(m，9H) > 10.4 - 10.7 (br- 1H)。 (9 ) 4 — ( 4 _特丁基六氫吡畊—1 一基）一 N - { 5 - [ (2R) -2 -甲氧基—2—苯基乙醯基]—1，4，5，6—四 氫毗咯並[3，4 — c]吡唑一 3 —基）苯醯胺；[M + H] + 5 ] 7 ; -39- (36) (36)1343382 (10 ) N - {5 - [ ( 2R ) — 2 -羥基—2 —苯基乙醯基] —i，4，5，6 -四氫吡咯並[3，4 一 c ]吡唑—3 -基} — 4 — (4 —甲基六氫吡啡—1 一基）苯醯胺；[M + Η ] + 4 6 1 ; 1Η - NMR ( DMSO - d6) δ ppm ： 2.3 ( s > 3H )， 2.4 5 - 2.6 5 ( m - 4H ) ，3.2—3.4(m，4H) ，4.1-4.9( m，4H) ，5.69(d，lH) > 6.9 - 8.0 (m- 9H) > 10.4- 10.7(br，1H) ，11.5-12.9(br，]H)。 (11) N - {5 - [ ( 2R ) — 2 -甲基—2 —苯基乙醯基] 一 1，4，5，6 —四氫吡咯並[3，4— c]吡唑—3 -基}— 4 — (4 —甲基六氫吡哄—1 —基）苯醯胺；[M + H] + 4 5 9 ; 1H - NMR ( DMSO - d6) 5 ppm ： 1.33 ( d > 3 H )，

2.21 (s，3H) ，3.85— 5.0(m，5H) ，4.2-4.9 (m，4H )，5.](d，lH) ，6.8— 8.0(m，9H) > 1 0.3 - 1 0.7 ( br ，1 H ) ，1 1 .8 — 1 2.5 ( br，1 H )。 (12 ) N - {5 - [ ( 2R ) - 2 -甲基-2-苯基乙醯基] —1，4，5，6 —四氫吡咯並[3，4 — c ]吡唑—3 —基} 一 4 — (4 -乙基六氫吡畊—1 -基）苯醯胺；[M + H] + 4 73 ; 1 Η - NMR ( DMSO - d6 ) <5 ppm : 1.06 ( t，3H )， 1.36 ( d > 3H ) ，2.41(q，2H) ，2.47—2.6 (m，4H)， 3.2-3.4 (m，4H) > 3.9-5.0 (m> 5H) - 6.9 - 8.0 ( m ，9H) - 10.5 (bs> 1H) ，：11.9-12.5(br，lH)。 (13)N— {5 —丨（2R) — 2—甲基_2 —苯基乙醯基] —]，4，5，6 —四氫吡咯並[3，4—c]吡唑一 3 —基}— 4一 (4 —異丙基六氫吡畊—1 一基）苯醯胺；[M + H]+ 4 8 7 ; -40 - (37) (37)1343382 (14) N - {5 - [ ( 2R ) — 2 —甲基—2 —苯基乙醯基] 一 i，4，5，6 —四氫吡咯並[3，4 — c ]吡唑-3 -基} 一 4 一 (4 一環丙基六氫吡哄一 1 一基）苯醯胺；[M + H] + 485; (15) 4 — （3，4 —二甲基六氫吡畊一 1 一基）—N — {5 - [ ( 2R ) 一 2 —苯基丙醯基]一 1，4，5，6 —四氫吡咯 並[3，4 — c ]吡唑一 3 —基}苯醯胺；[M + Η ] + 4 7 3 ; (16) Ν — {5—[(2R) — 2- 甲基丙醯基]一1，4，5 ，6 —四氫吡咯並[3，4 一 c ]吡唑一 3 —基} — 4 一六氫吡啶 —1 基苯醯胺；[M + Η ] + 4 4 4 ; 1Η- NMR ( DMSO - d6) 5 ppm ： 1.37 ( d，3 Η )，

l_6(s，6H) ，3.2— 3.4(m，4H) ，3.90-4.05 (m，]H )，4.]-4.9(m，4H) ，6.9-8.0 (m，9H) - 10.4- 10.7 ( br，] H )。 (17) 4 - （4 —氟基六氫吡啶—基）—N — {5—[ (2R) — 2 -甲基—2 -苯基乙醯基]—1，4，5，6 —四氫 吡咯並[3，4 一 c ]吡唑—3 —基}苯醯胺；[M + Η ] + 4 6 2 ; 1 Η - NMR ( DMSO - d6 ) 5ppm:1.37(d，3H)， 1 .6 5 - 2.0 5 ( m - 4H ) ，3.15-3.6 (m，7H) > 3.2-3.4 (m > 4H ) ，3.85-4.07 (m，1 H ) ，4.1-5.05 (m，5 H )，5.1 (d，1H) ，6.9-8.0(m，9H) > 10.4 - 10.7 (br ，：1 H )。 (18) N - {5 - [ ( 2R ) — 2 -甲基一 2 —苯基乙醯基] —1，4，5，6 —四氫吡咯並[3，4 — c ]吡唑一 3 -基} — 4 — 嗎啉一 4 一基苯醯胺；[M + Η ] + 4 4 6 ; -41 - (38) (38)1343382 1H-NMR ( DMSO— d6) <5 ppm : 1.37 ( d，3H )， 3.2— 3.4 (m，4H) > 3.7-3.85 (m - 4H) ，3.9-4.1 (m > 1 H ) > 4.1-4.95 (m> 4H) ，6.9-8.0(m，9H)， 1 0.4 - 1 0.7 ( br，1H )。 (19)4- (4 一特丁基六氬吡畊基）一 N— {5 -[(2R ) 一 2 -苯基丙醯基]一1，4，5，6_四氫吡咯並 [3，4 — c ]吡唑 一 3 -基}苯醯胺；[M + Η ] + 5 0 1。

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Claims (1)

1343382 十' 申請專利範圍 附件2A : 第93 1 20474號專利申請案 中文申請專利範圍替換本 民國95年10月27日修正 1· 一種式（I)化合物或其醫藥上可接受之鹽於製造 用於治療哺乳類因改變的奧羅拉-2 ( Aurora-2 )激酶活性

所引起及/或與其有關的癌症的藥物上之用途，其中下式 代表該式（I )

其中 R係氫或甲基： R!係羥基或直鏈或支鏈Ci-Ca烷基或烷氧基； R2係氫原子； X係選自亞甲基（一 CH2—)或氟亞甲基（―CHF—) 之二價基’或其係雜原子基（一 NR’-)，其中R’係直鏈 或支鏈C, — C4烷基。 2.根據申請專利範圍第1項之用途，其中癌症係選 自肉瘤、鱗狀細胞瘤、骨髓細胞或淋巴系統的造血腫瘤、 1343382 間葉來源的腫瘤、中樞和末梢神經系統的腫瘤、黑色素瘤 、精母細胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、著色性乾皮病、角黃瘤 、甲狀腺濾泡瘤及卡波西氏肉瘤。 3 .根據申請專利範圍第1項之用途，其進一步包含 與至少一種細胞抑制劑或胞毒劑組合的照射治療法或化療 攝取法。 4. 根據申請專利範圍第1項之用途，其中哺乳類係 人類。 Φ 5. —種式（I )化合物

其中 R係氫或甲基； 係羥基或直鏈或支鏈烷基或烷氧基： I係氫或鹵素原子； X係選自亞甲基（―CH2—)或氟亞甲基（一 CHF—) 之二價基，或其係選自氧（―0—)或氮（―NR’—）之 雜原子或雜原子基，其中R，係氫原子、直鏈或支鏈G-h烷基或C3— C6環烷基； -2- 1343382 或其在醫藥上可接受之鹽。 6 ·根據申請專利範圍第5項之式（I )化合物，其視 需要爲其醫藥上可接受之鹽的形式，且其係選自： (1 ) N - { 5 - [ ( 2R ) _2—甲氧基—2—苯基乙醯基] 一 1，4，5，6-四氫吡咯並[3，4— c]吡唑一3 —基}— 4-(4 _甲基六氫吡哄一 1 _基）苯醯胺； (5) 4- (3，4 -二甲基六氫吡畊一1 一基）一N-

{5 - [ ( 2R ) -2 —甲氧基—2—苯基乙醯基]—1，4，5，6 一四氫吡咯並[3，4 — c]吡唑—3 _基}苯醯胺； (6) N - {5 — [(2R) - 2-甲氧基一2 -苯基乙醯基] -1，4，5，6-四氫吡咯並[3，4— c]吡唑一3-基}-4-六氫吡畊_ 1 一基苯醯胺； (7) 4— (4 —氟基六氫啦！1 定—1—基）—N— {5—[( 2R) — 2—甲氧基—2 —苯基乙醯基]一1，4，5，6 —四氫 吡咯並[3，4-c]吡唑一 3 —基}苯醯胺；或

(11) N - {5— [(2R) - 2—甲基一 2 —苯基乙醯基] _1，4，5，6_四氫吡咯並[3，4— c]吡唑_3_基}— 4 — (4 一甲基六氫吡畊―〗一基）苯醯胺。 7 . —種製備申請專利範圍第5項之式（I )化合物及 其醫藥上可接受之鹽之方法，該方法包含： a )將式（Π )化合物與式（ΠI )化合物反應

COO-tBu

3- 1343382 其中R及X係如申請專利範圍第5項中所定義者，Q係 低碳烷基，t- Bu代表特丁基及Z係羥基或適合的離棄基 ，以便於獲得式（IV )化合物

b )將式（IV )化合物在酸性條件下反應，以便於獲得 式（V )化合物

c )將式（V )化合物與式（VI )化合物反應

(VI) 其中R,及R2係如申請專利範圍第5項中所定義者，以及 Z’代表羥基或適合的離棄基，以便於獲得式（VII )化合 1343382

d )將式（V 11 )化合物在鹼性條件下反應，以便於獲得 對應的式（I )化合物，以及若必要時，將其轉化成其在 醫藥上可接受之鹽。 8-根據申請專利範圍第7‘項之方法，其中在式（II )化合物內的Q代表直鏈或支鏈Ci-C4烷基。 9.根據申請專利範圍第8項之方法，其中Q係甲基 或乙基。 10·根據申請專利範圍第7項之方法，其中在式（ ΙΠ)及（VI)化合物內的Z及Z’係各自獨立爲羥基或鹵 素原子。 1 1 .根據申請專利範圍第]0項之方法，其中鹵素原 子係氯。 12. 根據申請專利範圍第7項之方法，其中步驟（b )係在氫氯酸、三氟醋酸或甲烷磺酸存在的酸性條件下進 行。 13. 根據申請專利範圍第7項之方法，其中步驟（d )係在氫氧化鈉 '鉀或鋰、或三級胺（如三乙胺）存在的 -5- 1343382 鹼性條件下進行。 14. 一種用於治療因改變的奧羅拉-2 ( Aurora-2 )激 酶活性所引起及/或與其有關的癌症之醫藥組成物，其包 含治療有效量之申請專利範圍第5項之式（1)化合物或 其醫藥上可接受之鹽及至少一種醫藥上可接受之賦形劑、 載體及/或稀釋劑。 1 5 ·根據申請專利範圍第1 4項之醫藥組成物，其進 一步包含一或多種化療試劑。 1 6. —種產品或套組，其包含申請專利範圍第5項之 式（I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，或申請專利範圍 第I 4項之醫藥組成物及一或多種化療試劑，其作爲抗癌 治療法中同時、單獨或連續使用的組合製劑。 17.如申請專利範圍第5項之式（1)化合物或其在 醫薬上可接受之鹽，其作爲藥劑。 -6-