NO332361B1

NO332361B1 - Pyrrolo(3,4-c)pyrazolderivater, fremgangsmate for fremstilling og anvendelse derav, farmasoytisk sammensetning, samt produkt eller sett

Info

Publication number: NO332361B1
Application number: NO20060113A
Authority: NO
Inventors: Mario Varasi; Daniele Fancelli; Paola Vianello; Barbara Forte; Jurgen Moll
Original assignee: Nerviano Medical Sciences Srl
Priority date: 2003-07-09
Filing date: 2006-01-06
Publication date: 2012-09-03
Also published as: GT200400133AA; RS52155B; TNSN06009A1; RS20060004A; AR050045A1; EP1644376A1; JP4728232B2; ATE480540T1; TWI343382B; BRPI0411868B8; PE20050325A1; PA8606201A1; MXPA06000362A; IL172923A; CY1110832T1; US20060276471A1; KR20060033001A; AU2004255347A1; KR101075711B1; MEP51908A

Abstract

Pyrrolo[3,4-c]pyrazolderivater med formel (I) og farmasøytisk akseptable salter derav, som definert i beskrivelsen, fremgangsmåte for fremstilling derav og farmasøytiske sammensetninger som omfatter disse er beskrevet, forbindelser ifølge oppfinnelsen kan være nyttige i terapi, i behandling av sykdommer assosiert med disregulert proteinkianseaktivitet, som cancer.

Description

BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN

Område for oppfinnelsen

Foreliggende oppfinnelse vedrører pyrrolo-pyrazolderivater, fremgangsmåter for fremstilling og anvendelse derav, farmasøytiske sammensetninger som omfatter disse og som kan anvendes for behandling av cancer og celleproliferasjonsforstyrrelser.

Beskrivelse av bakgrunnen

Feilfunksjon av proteinkinaser (PKs) er kjennetegnet på en mengde sykdommer. En stor andel av onkogener og protoonkogener involvert i human cancer koder for PK. De forøkede aktivitetene til PK har også vært implisert i mange ikke-maligne sykdommer, så som benign prostatahyperplasi, familiær adenomatose, polypose, nevro-fibromatose, psoriasis, vaskulær glatt celleproliferasjon assosiert med aterosklerose, lungefibrose, artritt glomerulonefritt og post-kirurgisk stenose og restenose.

PK er også implisert i inflammatoriske tilstander og ved multiplikasjon av viruser og parasitter. PK kan også spille en hovedrolle i patogenesen og utvikling av nevrodegenerative forstyrrelser.

For den generelle referanse til PK feilfunksjon eller feilregulering se blant annet Current Opinion in Chemical Biology 1999, 3, 459-465.

Blant flere proteinkinaser kjent innenfor fagområdet er impliserte i veksten av cancerceller er Aurora kinaser, spesielt Aurora-2.

Aurora-2 ble funnet å bli overuttrykt i et antall forskjellige tumortyper. Genlokuset derav er kartlagt til 20q13, en kromosomal region som ofte blir amplifisert i mange cancerformer, inkludert bryst [Cancer Res. 1999, 59(9) 2041-4] og tarm.

20q13-amplifikasjon korrelerer med dårlig prognose hos pasienter med node-negativ brystcancer og øket Aurora-2-ekspresjon indikerer dårlig prognose og redusert overleveIsestid i blærecancerpasienter [J. Nati. Cancer Inst., 2002, 94(17), 1320-9]. Forden generelle referanse til Aurora-2-rollen ved unormal sentrosomfunksjon i cancer se også Molecular Cancer Therapeutics, 2003, 2, 589-595.

Oppsummering av oppfinnelsen

Det er en hensikt ifølge oppfinnelsen å tilveiebringe forbindelser som er nyttige i terapi som midler mot en vert for sykdommer forårsaket av og/eller assosiert med en feilregulert proteinkinaseaktivitet og, spesielt, Aurora kinaseaktivitet.

Det er en annen hensikt å tilveiebringe forbindelser, som har proteinkinaseinhiberende aktivitet og, spesielt, Aurora kinaseinhiberende aktivitet.

Foreliggende oppfinnere har nå oppdaget at noen pyrrolo-pyrazoler, og derivater derav, har proteinkinaseinhiberende aktivitet, f.eks. Aurora kinaseinhiberende aktivitet.

Mer spesifikt er forbindelsene ifølge oppfinnelsen nyttige for behandling av forskjellige cancerformer inkludert, men ikke begrenset til: karsinomer så som blære, bryst, tarm, nyre, lever, lunge, inkludert små cellelungecancere, spiserør, galleblære, ovarie, pankreas, mave, cerviks, tyroid, prostata og hud, inkludert squamo cellekarsinom, hematopoetiske tumorer av lymfoid linje, inkludert leukemi, akutt lymfocyttisk leukemi, akutt lymfoblastisk leukemi, B-cellelymfom, T-cellelymfom, Hodgkins lymfom, ikke-Hodgkins lymfom, håret cellelymfom og Burketts lymfom; hematopoetiske tumorer av myolid linje, inkludert akutte og kroniske myelogene leukemier, myelodysplastisk syndrom og promyelocyttisk leukemi, tumorer av messenchymal opprinnelse, inkludert fibrosarkom og rabdomyosarkom, tumorer i sentrale og perifere nervesystem, inkludert astrocytom, nevroblastom, gliom og schwannomer; andre tumorer, inkludert melanom, seminom, teratokarsinom, osteosarkom, xeroderma pigmentosum, keratoksantom, tyroid follikulær cancer og Kaposis sarkom.

Grunnet nøkkelrollen til PK og Aurora kinaser ved regulering av cellulær proliferasjon er disse pyrrolo-pyrazoler også nyttige for behandling av forskjellige celleproliferative forstyrrelser så som, blant annet, benign prostatahyperplasi, familiær adenomatose, polypose, nevro-fibromatose, psoriasis, vaskulær glatt celleproliferasjon assosiert med aterosklerose, lungefibrose, artritt glomerulonefritt og post-kirurgisk stenose og restenose.

Følgelig tilveiebringer foreliggende oppfinnelse i en første utførelsesform forbindelse for terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av celleproliferative forstyrrelser forårsaket av og/eller assosiert med en endret proteinkinaseaktivitet, idet forbindelsen har formel (I)

hvor

R er hydrogen eller metyl;

Ri er hydroksy eller en lineær eller forgrenet Ci-C3-alkyl- eller alkoksygruppe;

R2er et hydrogen- eller halogenatom;

X er en divalent gruppe valgt fra metylen(-CH2-) eller fluormetylen(-CHF-), eller er et heteroatom eller heteroatomisk gruppe valgt fra oksygen(-O-) eller nitrogen(-NR')-) hvor R' er et hydrogenatom, en lineær eller forgrenet C1-C4-alkylgruppe eller en C3-C6-sykloalkylgruppe; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

Spesifikke typer av cancer som kan bli behandlet inkluderer karsinom, squamosecellekarsinom, hematopoetiske tumorer av myeloid eller lymfoid linje, tumorer av mesenchymal opprinnelse, tumorer i sentrale og perifere nervesystem, melanom, seminom, teratokarsinom, osteosarkom, xeroderma pigmentosum, keratoksantom, tyroid follikulær cancer og Kaposis sarkom.

Foreliggende oppfinnelse inkluderer også forbindelse,

kjennetegnet ved at den har formel (I)

hvor

R er hydrogen eller metyl;

R2er et hydrogen- eller halogenatom;

En mer fullstendig forståelse av oppfinnelsen og mange av fordelene derav vil lett kunne bestemmes idet den vil bli klarere med referanse til følgende detaljerte beskrivelse.

Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen

Flere heterosykliske forbindelser er kjente innenfor fagområdet som proteinkinaseinhibitorer. Blant disse er 3-karboksamidopyrrazoler og 3-ureido-pyrrazoler og derivater derav blitt beskrevet som proteinkinaseinhibitorer i internasjonal patentsøknadene WO 01/12189, WO 01/12188, WO 02/48114 og WO 02/70515, som alle er i navnet til selve søkeren.

Kondenserte bisykliske forbindelser omfattende pyrrazolgrupper og som har kinaseinhibitorisk aktivitet er også blitt beksrevet i WO 00/69846, WO 02/12242 samt WO 03/028720 og fortsatt upublisert PCT/EP03/04862 søknad (som krever prioritet fra US patentsøknad 60/381092, inngitt 17, mai 2002), idet alle er i navnet til søkeren.

I tillegg til overnevnte er aminofenyl-piperazin- eller aminofenyl-piperidinderivater med inhibitorisk aktivitet overfor prenyl transferaseproteiner beskrevet i WO 02/30927 i navnet Pierre Fabre Medicament.

Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse faller inn under rammen av den generelle formelen i overnevnte WO 02/12242 .

Forbindelsene med formel (I) ifølge oppfinnelsen har asymmetriske karbonatomer og kan derfor eksistere som individuelle optiske isomerer, som racemiske blandinger eller som en hvilken som helst annen blanding omfattende en hovedandel av én av de to optiske isomerene, som alle er ment å være innunder rammen av foreliggende oppfinnelse.

I de tilfellene hvor forbindelser kan eksistere i tautomere former, er hver form betraktet å være inkludert innenfor denne oppfinnelsen enten de eksisterer i likevekt eller hovedsakelig i én form.

Dersom ikke annet er gitt, når kun én av følgende tautomere former ifølge formlene (la) eller (Ib) er indikert er den gjenværende ment å være omfattet av rammen av oppfinnelsen:

I den foreliggende beskrivelse, dersom ikke annet er spesifisert, menes med betegnelsen lineær forgrenet C1-C3eller Ci-Ct-alkyl hvilke som helst av gruppene så som blant andre metyl, etyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl og sek-butyl.

Med betegnelsen lineær eller forgrenet CrC3-alkoksy mener vi hvilke som helst av gruppene så som blant annet metoksy, etoksy, n-propoksy og isopropoksy.

Med betegnelsen halogenatom mener vi et fluor-, klor- eller jodatom. Med betegnelsen C3-C6-sykloalkyl mener vi en hvilken som helst gruppe så som syklopropyl, syklobutyl, syklopentyl eller sykloheksyl.

Avhengig av naturen til X-gruppen kan denne samme heterosykelen som er koblet til fenylengruppen av forbindelsene med formel (I) representere en piperidino-, 4-fluorpiperidino-, piperazino-, 4-alkyl-piperazino-, 4-sykloalkyl-piperazino- eller morfolinoring.

Farmasøytisk akseptable salter av forbindelser med formel (I) inkluderer syreaddisjonssalter med uorganiske eller organiske syrer så som blant annet salpetersyre, saltsyre, hydrobromsyre, svovelsyre, perklorsyre, fosforsyre, eddiksyre, trifluoreddikpropionsyre, glykolsyre, melkesyre, oksalsyre, malonsyre, malinsyre, maleinsyre, vinsyre, sitronsyre, benzosyre, kanelsyre, mandelsyre, metansulfonsyre, isetionsyre og salisylsyre.

En foretrukket klasse av forbindelser ifølge oppfinnelsen er representert ved derivater ifølge formel (I) hvor R er hydrogen eller metyl; Ri er valgt fra hydroksy, metyl eller metoksy; R2er et hydrogen- eller fluoratom; X er valgt fra metylen, fluormetylen, -O- eller -NR', hvor R' er som angitt ovenfor.

Foreliggende oppfinnelse omfatter videre en fremgangsmåte for fremstilling av forbindelser med formel (I) og farmasøytisk akseptable salter derav ifølge krav 7, kjennetegnet ved at fremgangsmåten omfatter: a) omsetning av en forbindelse med formel (II) med en forbindelse med formel (III)

hvor R og X er som definert i krav 10, Q er en lavere alkylgruppe, t-Bu representerer tert-butyl og Z er hydroksy eller en egnet avspaltbar gruppe, for å oppnå en forbindelse med formel (IV) b) omsetning av forbindelsen ifølge formel (IV) under sure betingelser for å oppnå en forbindelse ifølge formel (V) c) omsetning av forbindelsen ifølge formel (V) med en forbindelse ifølge formel (VI)

hvor Ri og R2er som definert i krav 10 og Z' representerer hydroksy eller en egnet avspaltbar gruppe, for å oppnå en forbindelse med formel (VII)

d) omsetning av forbindelsen ifølge formel (VII) under basiske betingelser for å oppnå tilsvarende forbindelse ifølge formel (I) og, om ønskelig, omdannelse

av denne til et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

Ovennevnte fremgangsmåte er en analogifremgangsmåte som kan bli utført ved å bli drevet ifølge velkjente operative betingelser.

Ifølge trinn (a) av fremgangsmåten kan reaksjonen mellom forbindelsene ifølge formler (II) og (III) bli utført på forskjellige måter, ifølge konvensjonelle metoder for acylering av aminoderivater. Som et eksempel kan forbindelsen ifølge formel (II) bli omsatt med et acylklorid ifølge formel (III) hvor Z representerer, som en egnet avspaltbar gruppe, et kloratom.

Det er foretrukket at reaksjonen blir utført ved en temperatur som varierer fra romtemperatur til omtrent 60°C, i et egnet løsningsmiddel så som, blant annet tetrahydrofuran eller diklormetan, og i nærvær av en protonoppfanger så som trietylamin eller diisopropyletylamin. Innenfor forbindelsene ifølge formel (II) representerer Q en lavere alkylgruppe, blant annet en Ci-C4-alkylgruppe, mer foretrukket metyl eller etyl.

Ifølge trinn (b) i fremgangsmåten blir forbindelsen ifølge formel (IV) lett avbeskyttet ved pirrolidinnitrogenatomet ved sur behandling.

Reaksjonen kan hensiktsmessig bli utført i nærvær av en mineral- eller organisk syre som blant annet saltsyre, trifluoreddiksyre eller etansulfonsyre, i et egnet løsningsmiddel så som diklormetan, 1,4-dioksan, en lavere alkohol (f.eks. metanol eller etanol), ved en temperatur som varierer fra romtemperatur til omtrent 40°C og i et tidspunkt som varierer fra omtrent 1 time til omtrent 48 timer.

Forbindelsen ifølge formel (V) oppnådd på denne måten blir videre omsatt, ifølge trinn (c) ifølge fremgangsmåten, med en forbindelse ifølge formel (VI). Fra det ovennevnte er det klart for fagfolk at også denne acyleringsreaksjonen kan bli oppnådd på forskjellige måter og operative betingelser, som er velkjent innenfor fagområdet for fremstilling av karboksamider.

Reaksjonen mellom en forbindelse ifølge formel (V) og en karboksylsyre ifølge formel (VI) hvor Z' er hydroksy kan bli utført i nærvær av et koblingsmiddel så som blant annet karbodiimid, dvs. 1,3-disykloheksylkarbodiimid, 1,3-diisopropylkarbodiimid, 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid, N-sykloheksylkarbodiimid-N'-propyloksymetylpolystyren eller N-sukloheksylkarbodiimid-N'-metylpolystyren, i et egnet løsningsmiddel så som blant annet diklormetan, kloroform, tetrahydrofuran, dietyleter, 1,4-dioksan, acetonitril, toluen, eller N,N-dimetylformamid ved en temperatur varierende fra omtrent -10°C til tilbakeløp i hensiktsmessig tid, dvs. fra omtrent 30 min. til omtrent 96 timer. Nevnte reaksjon blir eventuelt utført i nærvær av en egnet katalysator, blant annet 4-dimetylaminopyridin, eller i nærvær av et ytterligere koblingsreagens så som N-hyd roksybe nzotriazol.

Reaksjonen mellom en forbindelse ifølge formel (V) og en forbindelse ifølge formel (VI) kan også bli utført f.eks. gjennom en blandet anhydridmetode, ved anvendelse av et alkylklorformat, så som etyl, iso-butyl, eller iso-propylklorformat, i nærvær av en tertiær base, så som trietylamin, N,N-diisopropyletylamin eller pyridin, i et egnet løsningsmiddel så som blant annet toluen, diklormetan, kloroform, tetrahydrofuran, acetonitril, dietyleter, 1,4-dioksan, eller N,N-dimetylformamid ved en temperatur varierende fra omtrent -30°C til romtemperatur.

Reaksjonen mellom en forbindelse ifølge formel (V) og et karboksylderivat ifølge formel (VI) hvor Z' er en egnet avspaltbar gruppe kan bli utført i nærvær av en tertiær base så som trietylamin, N,N-diisopropyletylamin eller pyridin, i et egnet løsningsmiddel, så som toluen, diklormetan, kloroform, dietyleter, tetrahydrofuran, acetonitril eller N,N-dimetylformamid, ved en temperatur som varierer fra omtrent

-10°C til tilbakeløp.

Forbindelser med formel (VI) er kjennetegnet ved tilstedeværelse av et asymmetrisk karbonatom koblet til Ri og her angitt med en stjerne

Følgelig kan forbindelser ifølge formel (VI) være enten i form av enkle enantiomerer eller som blandinger derav, også omfattende racemiske blandinger.

Avhengig av naturen til forbindelsen med formel (VI) anvendt i fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse kan tilsvarende forbindelser ifølge formel (VII) som har en riktig definert stereokjemi ved dette samme karbonatomet følgelig bli oppnådd.

Ifølge en foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen blir trinn (c) utført ved omsetning av en egnet forbindelse ifølge formel (VI), som har en gitt enantiomerisk form.

Likeledes, hvis racemiske blandinger av forbindelsen ifølge formel (VI) blir anvendt og når de endelige forbindelsene med formel (I) i optisk ren form er

ønskelige vil optisk oppløsning av mellomproduktforbindelse med formel (VII) eller, alternativt, avslutte produktet ifølge formel (I) være nødvendig ved å arbeide ifølge konvensjonelle metoder. Som et eksempel innbefatter konvensjonelle teknikker for racematoppløsning blant annet delt krystallisering av diastereomere saltderivater

eller preparativ chiral HPLC.

Ifølge trinn (d) av fremgangsmåten blir forbindelsen ifølge formel (VII) avbeskyttet ved pyrazonitrogenatomet ved å arbeide ifølge konvensjonelle metoder som muliggjør blant annet selektiv hydrolyse av karbamatgruppen.

Som et eksempel kan denne reaksjonen bli utført under basiske betingelser, blant annet i nærvær av natrium, kalium eller litiumhydroksid, eller et tertiært amin så som trietylamin, og i et egnet løsningsmiddel så som N,N-dimetylformamid, metanol, etanol, tetrahydrofuran, vann og blandinger derav. Typisk blir reaksjonen utført ved temperaturer varierende fra romtemperatur til omtrent 60°C og i et tidspunkt som varierer fra omtrent 30 min. til omtrent 96 timer.

Til slutt kan farmasøytisk akseptable salter av forbindelser med formel (I) eller, alternativt, de frie forbindelsene fra deres salter derav alle bli oppnådd ifølge konvensjonelle metoder.

Utgangsmaterialet for fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er kjent eller kan lett bli fremstilt ifølge kjente metoder.

Som et eksempel er fremstilling av forbindelsen ifølge formel (II) hvor Q representerer etyl beskrevet i overnevnte internasjonale patentsøknad WO 02/12242 (se spesielt eksempel 26 på side 249; denne samme forbindelsen er deri betegnet 3-amino-4,6-dihydro-pyrrolo-[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylsyre-5-tert-butylester-1 etylester).

Ved å arbeide på en analog måte kan ytterligere forbindelser med formel (II) hvor Q representerer en lavere alkylgruppe forskjellig fra etyl følgelig også bli fremstilt.

Forbindelser med formel (III) og (VI), blant annet de hvor Z og Z' representerer et halogenatom, f.eks. et kloratom, er enten kjent eller kan lett bli oppnådd fra tilsvarende kjente karboksylsyrer ved å arbeide ifølge konvensjonelle metoder.

Likeledes er det også klart for fagfolk innenfor dette området at dersom en forbindelse ifølge formel (I), fremstilt ifølge overnevnte fremgangsmåte med å ta hensyn til eventuelle varianter derav, blir oppnådd som en sammenblanding av isomerer er deres separering i enkeltisomerer ifølge formel (I), utført ifølge konvensjonelle teknikker, fortsatt innenfor rammen av foreliggende oppfinnelse.

Farmakologi

Forbindelser med formel (I) er aktive som proteinkinaseinhibitorer, mer spesielt som Aurora kinaseinhibitorer og er derfor nyttige blant annet for å begrense uregulert proliferasjon av tumorceller.

I terapi kan de bli anvendt for behandling av forskjellige tumorer, så som de tidligere rapporterte, samt for behandling av andre celleproliferative forstyrrelser så som psoriasis, vaskulær glatt celleproliferasjon assosiert med aterosklerose og post-kirurgisk stenose og restenose.

Den inhiberende aktiviteten og potensen til valgte forbindelser blir bestemt ved hjelp av en fremgangsmåte for analyse basert på anvendelse av SPA- teknologi (Amersham Pharmacia Biotech). Analysen består av overføring av radioaktivt merket fosfatgruppe av kinase til et biotinylert substrat. Det resulterende 33P-merkede biotinylerte produktet blir latt bundet til streptavidin-belagte SPA-kuler (biotinkapasitet 130 pmol/mg) og lys avgitt som målt i en scintillasjonsteller.

Inhibisjonsanalyse av Aurora-2-aktivitet

Kinasereaksjon: 8 \ iM biotinylert peptid (4 gjentagelser av LRRWSLG), 10 HM (0,5 uCi P<33>y-ATP), 7,5 ng Aurora 2, inhibitor i et sluttvolum på 30^l buffer (HEPES 50 mM pH 7,0, MgCI210 mM, 1 mM DTT, 0,2 mg/ml BSA, 3 ortovanadat) ble tilsatt til hver brønn av en 96 U bunnet brønnplate. Etter inkubasjon i 60 min. ved romtemperatur ble reaksjonen stoppet og biotinylert peptid oppfanget ved tilsetning av 100 \ i\ kulesuspensjon.

Stratifikasjon: 100fal av CsCI2 5 M ble tilsatt til å være brønn og latt stå i 4 timer før radioaktivitet ble oppdelt i Top-Count-instrument.

IC50-bestemmelse: inhibitorer ble testet ved forskjellige konsentrasjoner varierende fra 0,0015 til 10 \ iM. Eksperimentelle data ble analysert ved dataprogrammet GraphPad Prizm ved anvendelse av fire

parameterlogistikkligning:

y = bunn + (topp-bunn)/(1+10<A>((loglC50-x)<*>stigning))

hvor x er logaritmen av inhibitorkonsentrasjonen, y er respons, y begynner i bunnen og går til toppen med en sigmoid form.

Ki-beregning:

Eksperimentell metode: Reaksjonen ble utført i buffer (10 mM Tris, pH 7,5,10 mM MgCI2, 0,2 mg/ml BSA, 7,5 mM DTT) inneholdende 3,7 nM enzym, histon og ATP (konstant forhold mellom kald/merket ATP 1/3000). Reaksjonen ble stoppet med EDTA og substratet oppfanget på fosfomembran (Multiscreen 96-brønnplater fra Millipore). Etter omfattende vasking ble multiscreenplatene avlest på en topp counter. Kontroll (tid null) for hver ATP og histonkonsentrasjoner ble målt.

Eksperimentelt design: Reaksjonshastigheter blir målt ved fire ATP, substrat (histon) og inhibitorkonsentrasjoner. En 80-punkt konsentrasjonsmatriks ble konstruert rundt respektive ATP og substrat Km-verdier, og inhibitor IC50-verdier (0,3, 1, 3, 9 ganger Km eller IC50-verdier). Et preliminært tidsforløpeksperiment i fravær av inhibitor og nved forskjellig ATP og substratkonsentrasjoner muliggjør seleksjon av en enkel sluttpunkttid (10 min.) i det lineære området av reaksjonen for Ki-bestemmelseseksperiment.

Kinetisk parameterestimater: Kinetiske parametere ble vurdert ved samtidig ulineær minste-kvadrat regresjon ved anvendelse av [ligning 1]

(kompeptitiv inhibitor med hensyn til ATP, tilfeldig mekanisme) ved anvendelse av fullstendig datasett (80 punkter):

hvor A=[ATP], B=[substrat], l=[inhibitor], Vm= maksimal hastighet, Ka, Kb, Ki dissosiasjonskonstanter av ATP, substrat og inhibitor, a og p kooperativitetsfaktorer mellom substrat og ATP-binding og substrat og inhibitorbinding.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen ble videre testet in vitro for å vurdere den anti-proliferative effekten på cellekulturer og den inhibitoriske effekten på cellesyklusen.

In vitro celleproliferasjonsanalyse

Human tarmcancercellelinje HCT-116 ble utsådd med 5000 celler/cm<2>i 24 brønn plate (Costar) ved anvendelse av F12-medium (Gibco) supplementert med 10 % FCS (EuroClone, Italia) 2 mM L-glutamin og 1 % penicillin/streptomycin og opprettholdt ved 37°C, 5 % C02og 96 % relativ fuktighet. Neste dag ble platene behandlet i duplikater med 5fal av en hensiktsmessig fortynning av forbindelser begynnende fra en 10 mM stamløsning i DMSO. To ubehandlede kontrollbrønner ble inkludert i hver plate. Etter behandling i 72 timer ble medium tatt bort og cellene løsnet fra hver brønn ved anvendelse av 0,5 ml 0,05 % (vekt/volum) trypsin, 0,02 % (vekt/volum) EDTA (Gibco). Prøver ble fortynnet med 9,5 ml isoton (Coulter) og opptelt ved anvendelse av en Multisizer 3 cellecounter (Beckman Coulter). Data ble vurdert som prosent av kontrollbrønnene:

% av CTR = (behandlet - blank)/(kontroll - blank).

IC5o-verdier ble beregnet ved LSW/dataanalyse ved anvendelse av Microsoft Excel sigmoidal kurvetilpasning.

In vitro cellesyklusanalyse

Human tarmcancercellelinje HCT-116 ble utsådd med 5000 celler/cm<2>i 24-brønnplate (Costar) og dyrket som nevnt ovenfor. Cellene i deres eksponensielle fase av vekst ble behandlet i 24 timer med forskjellige konsentrasjoner av forbindelse. Også kulturmediumsupernatanten ble samlet for å unngå tap av løsnede apoptotiske eller mitotiske celler. Deretter ble cellene vasket ved anvendelse av PBS og løsnet av 0,05 % (vekt/volum) trypsin , 0,02 % (vekt/volum) EDTA (Gibco). Trypsinaktivitet ble stoppet ved anvendelse av kulturmedium. Adherente og ikke-adherente cellefraksjoner ble slått sammen og sentrifugert ved 2000 rpm i 10 min. Cellene ble resuspendert i PBS og opptelt ved anvendelse av en Multisizer 3 celleteller (Beckman Coulter). For fiksering ble etanol tilsatt (70 %, v/v) og cellene ble oppbevart ved -20°C over natt.

En million fikserte celler ble sentrifugert ved 2000 rpm i 5 min. og vasket med PBS og deretter farget i 1 time ved romtemperatur i mørket ved tilsetning av 200 til: 25 ug/ml propidiumjodid (Sigma) og 15^g/ml RNAse (Sigma), 0,001 %

(v/v) Nonidet P40 (Sigma) i natriumsitrat (0,1 % vekt/volum, pH 7,5). Prøvene ble analysert ved flowcytometri ved 488 nm eksitasjon (FACSCalibur, Beckton Dickinson) ved anvendelse av Cell Quest 3,0 programvare (Beckton Dickinson). Typisk ble 10000 hendelser (overføring av kun enkeltceller) samlet og cellesyklusprofiler ble registrert ved anvendelse av CellQuest (Verity Software). Cellesyklusfordelingen av populasjonen ble beregnet ved anvendelse av en modifisert modell i Modfit 3,1 programvare (Verity Software) og eksponert i % G0/G1, S, G2/M og polyploiditet.

Gitt overnevnte analyser hadde forbindelsene ifølge formel (I) ifølge oppfinnelsen en betydelig proteinkinaseinhibitoraktivitet, f.eks. Aurora-2-inhibitorisk aktivitet. Se som et eksempel følgende tabell I som angir eksperimentelle data for fire representative forbindelser ifølge oppfinnelsen testet som Aurora-2-kinaseinhibitorer (IC50nM), for deres celleproliferative effekt (IC50nM) og for deres evne til å utvise cellesyklusblokkering og indusere polyploiditet (% av G2/M + polyploidiet ved 200 nM).

Det er interessant at disse samme forbindelsene ble testet sammenlignet til en tidligere kjent strukturelt nærliggende forbindelse, heri definert som referanseforbindelse, som er spesifikt beskrevet i overnevnte WO 02/12242 - se side 160, linjer 5-7; idet referanseforbindelsen blir deri betegnet som N-{5-fenylacetyl-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-metylpoperazino)benzamid.

Referanseforbindelse (R = Ri = R2= H; X = NMe)

N-{5-fenylacetyl-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-metylpiperazino)benzamid;

Forbindelse (1) (R = R2= H; Ri = OMe; X = NMe)

N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-metylpiperazin-1-yl)benzamid;

Forbindelse (11) (R = R2= H; Ri = Me; X = NMe)

N-{5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-metylpiperazin-1-yl)benzamid;

Forbindelse (6) (R = R2= H; Ri = OMe; X = CH2)

N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-piperidin-1 -ylbenzamid;

Forbindelse (5) (R = Me; Ri = OMe; R2= H; X = NMe)

4-(3,4-dimetylpiperazin-1-yl)-N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}benzamid.

Det er overraskende at Aurora-2-inhibitorisk aktivitet til forbindelsene ifølge oppfinnelsen var konstant og betydelig overlegen i forhold til referanseforbindelsen.

I tillegg hadde de samme forbindelsene en celleantiproliferativ effekt sammen med evnen til å blokkere cellesyklusen og indusere polyploiditet, betydelig overlegen i forhold til referanseforbindelsen som blir testet ved samme betingelser.

Fra det ovennevnte har de nye forbindelsene med formel (I) ifølge oppfinnelsen en biologisk profil, betraktet i sin helhet, som er uventet overlegen i forhold til nærmeste kjente teknikk WO 02/12242 og, følgelig, spesielt fordelaktig i terapi mot proliferative forstyrrelser assosiert med en endret Aurora-2-kinaseaktivitet.

Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli administrert enten som enkeltmidler eller, alternativt, i kombinasjon med kjent anti-cancerbehandling så som bestrålingsterapi eller kjemoterapiregime i kombinasjon med cytostatiske eller cytotoksiske midler, antibiotika-type midler, alkyleringsmidler, antimetabolittmidler, hormonelle midler, immunologiske midler, interferon-type midler, syklooksygenaseinhibitorer (f.eks. COX-2-inhibitorer), matriksmetalloproteaseinhibitorer, telomeraseinhibitorer, tyrosinkinaseinhibitorer, anti-vekstfaktorreseptormidler, anti-HER-midler, anti-EGFR-midler, anti-angiogenesemidler (f.eks. angiogeneseinhibitorer), farnesyltransferaseinhibitorer, ras-raf-signaltransduksjonsveiinhibitorer, cellesyklusinhibitorer, andre cdks-inhibitorer, tubulinbindingsmidler, topoisomerase I inhibitorer, topoisomerase II inhibitorer, og lignende.

Hvis formulert som en bestemt dose anvender kombinasjonsprodukter forbindelsene ifølge denne oppfinnelsen innenfor doseringsområdet beskrevet nedenfor og annet farmasøytisk aktivt middel med godkjent doseringsområde.

Forbindelsene med formel (I) kan bli anvendt sekvensielt med kjente anticancermidler når en kombinasjonsformulering er uhensiktsmessig.

Forbindelsene med formel (I) ifølge foreliggende oppfinnelse, egnede for administrering til et pattedyr, f.eks., til mennesker, kan bli administrert ved en vanlig vei og doseringsnivået avhenger av alder, vekt, tilstand til pasienten og administreringsvei.

F.eks. kan en egnet dosering tilpasses for oral administrering av en forbindelse med formel (I) variere fra omtrent 10 til omtrent 500 mg pr. dose, fra 1-5 ganger daglig. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan bli administrert i forskjellige doseringsformer, f.eks., oralt, i form av tabletter, kapsler, sukker- eller filmbelagte tabletter, flytende løsninger eller suspensjoner; rektalt i form av suppositorier; parenteralt, f.eks. intramuskulært, eller gjennom intravenøs og/eller intratekal og/eller intraspinal injeksjon eller infusjon.

Foreliggende oppfinnelse innbefatter også farmasøytisk sammensetning, kjennetegnet ved at den omfatter en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som definert i krav 7, og minst én farmasøytisk akseptabel eksipient, bærer og/eller et fortynningsmiddel.

Foreliggende oppfinnelse innbefatter også en farmasøytisk sammensetning ifølge krav 17, kjennetegnet ved at den videre omfatter én eller flere kjemoterapeutiske midler.

Foreliggende oppfinnelse innbefatter også produkt eller sett,

kjennetegnet ved at det omfatter en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som definert i krav 7, eller farmasøytiske sammensetninger derav som definert i krav 17, og én eller flere kjemoterapeutiske midler, som et kombinert preparat for samtidig, separat eller sekvensiell anvendelse i anticancerterapi.

Foreliggende oppfinnelse innbefatter også forbindelse ifølge formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som definert i krav 7, for anvendelse som et medikament.

Foreliggende oppfinnelse innbefatter også anvendelse av en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som definert i krav 7, for fremstilling av et medikament med antitumoraktivitet.

Farmasøytiske sammensetninger inneholdende forbindelsene ifølge oppfinnelsen blir vanligvis fremstilt ved å følge konvensjonelle metoder og blir administrert i en egnet farmasøytisk form.

F.eks. kan faste orale former inneholde, sammen med den aktive forbindelsen, fortynningsmidler, f.eks. laktose, dekstrose, sakkarose, sukrose, cellulose, maisstivelse, eller potetstivelse; smøremidler, f.eks. silika, talk, stearinsyre, magnesium eller kalsiumstearat, og/eller polyetylenglykoler; bindemidler, f.eks. stivelser, arabingummi, gelatinmetylcellulose, karboksymetylcellulose eller polyvinylpyrrolidon; oppløsningsmidler, f.eks. stivelse, alginsyre, alginater eller natriumstivelseglykolat; brusende blandinger; farvemidler, søtningsmidler, fuktmidler så som lecitin, polysorbater, laurylsulfater; og, generelt, ikke-toksiske og farmasøytisk inaktive forbindelser anvendt i farmasøytiske formuleringer. Disse farmasøytiske preparatene kan bli fremstilt på kjent måte, f.eks., ved hjelp av blanding, granulering, tablettdannelse, sukkerbelegging eller filmbeleggingsprosesser.

De flytende dispersjonene for oral administrering kan f.eks. være siruper, emulsjoner og suspensjoner.

Som et eksempel kan siruper inneholde, som bærer, sakkarose eller sakkarose med glyserin og/eller mannitol og sorbitol.

Suspensjoner og emulsjoner kan inneholde, som eksempler på bærere, naturlig gummi, agar, natriumalginat, pektin, metylcellulose, karboksymetylcellulose eller polyvinylalkohol. Suspensjonen eller løsninger for intramuskulære injeksjoner kan inneholde, sammen med den aktive forbindelsen, en farmasøytisk akseptabel bærer, f.eks., sterilt vann, olivenolje, etyloleat, glykoler, f.eks. propylenglykol og, om ønskelig, en egnet mengde av lidokainhydroklorid. Løsninger for intravenøse injeksjoner eller infusjoner kan inneholde, som en bærer, sterilt vann og fortrinnsvis kan de være i form av sterile, vandige, isotoniske, saltløsninger eller de kan inneholde propylenglykol som en bærer.

Suppositorier kan inneholde, sammen med den aktive forbindelsen, en farmasøytisk akseptabel bærer, f.eks. kakaosmør, polyetylenglykol, et polyoksyetylensorbitanfettsyreesteroverflateaktivt middel eller lecitin.

For å bedre illustrere foreliggende oppfinnelse blir følgende eksempler nå gitt.

EKSEMPLER

Generelle metoder

Flashkromatografi ble utført på silikagel (Merck kvalitet 9385, 60Å), HPLC/MS ble utført på en Waters X Terra RP 18 (4,6 x 3,5^m) kolonne ved anvendelse av et Waters 2790 HPLC-system utstyrt med en 996 Waters PDA-detektorog en Micromass mod. ZQ enkel kvadrupolmassespektrometer, utstyrt med en elektrospray (ESI) ionekilde. Mobilfase A var ammoniumacetat 5 mM buffer (pH 5,5 med eddiksyre/acetonitril 95:5), og mobil fase B var h^O/acetonitril (5:95). Gradienten fra 10-90 % B i 8 min., holdt 90 % B 2 min. UV-deteksjon ved 220 nm og 254 nm. Strømningsrate 1 ml/min. Injeksjonsvolum 10 ul. Fullstendig skann, masseområde fra 100-800 amu. Kapillær strøm var 2,5 KV; kildetemp. var 120°C, Cone var 10 V. Retensjonstider (HPLC r.t.) er gitt i minutter ved 220 nm eller 254 nm. Masse er gitt som m/z forhold. 1H-NMR spektroskopi ble utført på en Mercury VX 400 drevet ved 400,45 MHz utstyrt med en 5 mm dobbel resonansprobe (1H {15N-31P}ID_PFG Varian).

Eksempel 1

Fremstilling av 5-tert-butyl-1 -etyl-3-amino-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat

En løsning av etylklorkarbonat (8,9 ml, 93 mmol) i tetrahydrofuran (THF, 250 ml) ble sakte tilsatt til en blanding av tert-butyl-3-amino-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-5(1 H)-karboksylat (20 g, 89 mmol) og diisopropyletylamin (DIEA, 92 ml, 528 mmol) i THF (500 ml) ved 0-5°C. Reaksjonen ble holdt ved samme temperatur i 2 timer og deretter latt nå romtemperatur og omrørt over natt. Den oppnådde blandingen ble avdampet til tørrhet under vakuum og den resulterende resten ble ekstrahert med etylacetat (AcOEt) og vann. Det organiske laget ble deretter separert, tørket over natriumsulfat og avdampet til tørrhet. Blandingen ble renset ved flash-kromatografi (elueringsmidde: etylacetat/sykloheksan 4/6 til 7/3) for å gi 19 g av tittelforbindelsen som et hvitt fast stoff [M+H]<+>297.

Eksempel 2

Fremstilling av 5-tert-butyl-1-etyl-3-{[4-(4-metylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat

Oksalylklorid (23,2 ml, 265 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av 4-(4-metyl-1-piperazinyl)-benzosyre (11,7 g, 53 mmol) i diklormetan (DCM, 320 ml) og dimetylformamid (DMF, 0,52 ml). Etter tilbakestrømming av blandingen i 6,5 timer ble de flyktige stoffene forsiktig fjernet under redusert trykk (opptak av resten tre ganger med toluen).

Resulterende 4-metylpiperazino-benzoylklorid-di-hydroklorid ble porsjonsvis tilsatt til en løsning av 5-tert-butyl-1-etyl-3-amino-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat (13,1 g, 44,3 mmol) i tørr THF (620 ml) og DIEA (54,4 ml, 0,32 mmol) under omrøring ved romtemperatur. Den resulterende suspensjonen ble deretter omrørt i 16 timer ved romtemperatur og 1 time ved 40°C.

Etter fjerning av løsningsmidlet under redusert trykk ble resten tatt opp med AcOEt (600 ml) og det organiske laget ble deretter vasket med vandig natriumkarbonat (200 ml), saltvann (200 ml) og tørket over natriumsulfat.

Løsningsmidlet ble deretter avdampet og resten ble triturert med en blanding av dietyleter (Et20, 135 ml) og AcOEt (15 ml), filtrert, tørket under vakuum ved 40°C for å gi 20 g av tittelforbindelsen som et hvitt pulver [M+H]<+>499.

Ved å bli drevet på analog måte og ved omsetning av 5-tert-butyl-1 -etyl-3-amino-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat med hensiktsmessig acylkloridderivat ble følgende forbindelser fremstilt: 5-tert-butyl-1-etyl-3-{[4-(4-etylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat; [M+H]<+>513.

5-tert-butyl-1-etyl-3-{[4-(4-isopropylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat; [M+H]<+>527.

5-tert-butyl-1-etyl-3-{[4-(4-syklopropylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat; [M+H]<+>525.

5-tert-butyl-1-etyl-3-{[4-(3,4-dimetylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat; [M+H]<+>513.

5-tert-butyl-1-etyl-3-[(4-piperidin-1-ylbenzoyl)amino]-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat; [M+H]<+>484.

5-tert-1-etyl-3-{[4-(4-fluorpiperidin-1-yl)benzoyl]amino}-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat; [M+H]<+>502.

5-tert-butyl-1-etyl-3-[(4-morfolin-4-ylbenzoyl)amino]-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat; [M+H]<+>486.

5-tert-butyl-1-etyl-3-{[4-(4-tert-butylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-4,6-dihydropyrrolo[3,4-(5)pyrazol-1,5-dikarboksylat; [M+H]<+>541.

Eksempel 3

Fremstilling av 3-{[4-(4-metylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1(4H)-karboksylattrihydroklorid

En 4N løsning av saltsyre i dioksan (122 ml, 488 mmol) ble dråpevis tilsatt til en omrørt løsning av 5-tert-butyl-1-etyl-3-{[4-(4-metylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat (19,5 g, 39,2 mmol), som fremstilt i eksempel 2, i tørr DCM (240 ml); presipitering av et hvitt fast stoff skjedde nesten øyeblikkelig. Den resulterende blandingen ble deretter omrørt ved romtemperatur i 24 timer, etter fortynning med Et20 (100 ml), ble faststoffet filtrert, omfattende vasket med Et20 og tørket under vakuum ved 50°C for å gi 20,1 g av tittelforbindelsen, anvendt i neste trinn uten ytterligere rensing. [M+H]<+>399.

1H-NMR (DMSO-de) 5 ppm: 1,4 (t, 3H); 2,8 (d, 3H); 3,2 (m, 4H); 3,5 (m, 2H); 4,1 (m, 2H); 4,4 (q, 2H); 4,6 (m, 4H); 7,1-8,0 (m, 4H); 10,3 (bs, 2H); 10,7 (bs, 1H); 11,4 (s, 1H).

Ved å bli drevet som angitt ovenfor og ved å begynne fra egnet mellomprodukt ble følgende forbindelser fremstilt analogt: etyl-3-{[4-(4-etylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylatrihydroklorid; [M+H]<+>413.

etyl-3-{[4-(4-isopropylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylatrihydroklorid; [M+H]<+>427.

etyl-3-{[4-(4-syklopropylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1(4H)-karboksylatrihydroklorid; [M+H]<+>

etyl-3-{[4-(3,4-dimetylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylatrihydroklorid; [M+H]<+>413.

etyl-3-[(4-piperidin-1-ylbenzoyl)amino]-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1(4H)-karboksylat; [M+H]+ 384.

etyl-3-{[4-(4-fluorpiperidin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylattrihydroklorid; [M+H]<+>402.

etyl-3-{[4-(4-morfolin-4-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1(4H)-karboksylattrihydroklorid; [M+H]<+>386.

etyl-3-{[4-(4-tert-butylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylattrihydroklorid; [M+H]<+>441.

Eksempel 4

Fremstilling av etyl-5-[(2R)-2-metoksy-fenyletanoyl]-3-{[4-metylpiperazin-1 - yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat

Oksalylklorid (10,1,2 ml, 115 mmol) ble tilsatt til en løsning av (R)-(-)-a-metoksyfenyleddiksyre (1,91 g, 11,5 mmol) i DCM (90 ml) og DMF (0,50 ml). Etter omrøring av blandingen ved romtemperatur i 16 timer ble de flyktige stoffene forsiktig fjernet under redusert trykk.

En løsning av resulterende (R)-(-)-a-metoksyfenyleddiksyreklorid i DCM (20 ml) ble dråpevis tilsatt til en løsning av etyl-3-{[4-(4-metylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1(4H)-karboksylattrihydroklorid (4,5 g, 8,9 mmol) i DCM (400 ml) og DIEA (11,8 ml, 69 mmol) under omrøring ved romtemperatur. Den resulterende løsningen ble omrørt i 20 timer ved romtemperatur.

Reaksjonsblandingen ble deretter vasket med vandig natriumkarbonat (200 ml), saltvann (200 ml) og tørket over natriumsulfat. Løsningsmidlet ble deretter avdampet og resten ble triturert med en blandning av Et20 (100 ml) og AcOEt (10 ml), filtrert og tørket under vakuum ved 40°C for å gi 3,94 g av tittelforbindelsen som et hvitt pulver som ble anvendt i følgende trinn uten ytterligere rensing.

[M+H]<+>547;

1H-NMR (DMSO-d6) 5 ppm: 1,3 (t, 3H); 2,3 (d, 3H); 2,6 (m, 4H); 3,3-3,4 (m, 7H); 4,3 (q, 2H); 4,6-4,9 (m, 4H); 5,1 (d, 1H), 7,0-8,0 (m, 9H); 11,1 (d, 1H).

Ved å bli drevet som ovenfor angitt og ved å begynne fra egnet acylkloridderivat ble følgende forbindelser analogt fremstilt: etyl-5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-3-{[4-(4-etylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1(4H)-karboksylat; [M+H]<+>561.

etyl-5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-3-{[4-(4-isopropylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat; [M+H]<+>575.

etyl-5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-3-{[4-(4-syklopropylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat; [M+H]<+>573.

etyl-3-{[4-(3,4-dimetylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat; [M+H]<+>561.

etyl-5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-3-[(4-piperidin-1-ylbenzoyl)amino]-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1(4H)-karboksylat; [M+H]<+>532.

etyl-3-{[4-(4-fluorpiperidin-1-yl)benzoyl]amino}-5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat; [M+H]<+>550.

etyl-5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-3-[(4-morfolin-4-ylbenzoyl)amino]-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1(4H)-karboksylat; [M+H]<+>534.

etyl-3-{[4-(4-tert-butylpiperazin-1-yl)bensoyl]amini}-5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat; [M+H]<+>589.

etyl-5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-3-{[4-(4-etylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat; [M+H]<+>545.

etyl-5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-3-{[4-(4-isopropylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat; [M+H]<+>559.

etyl-5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-3-{[4-(4-syklopropylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat; [M+H]<+>557.

etyl-3-{[4-(3,4-dimetylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat; [M+H]<+>545.

etyl-5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-3-[(4-piperidin-1-ylbenzoyl)amino]-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1(4H)-karboksylat; [M+H]<+>516.

etyl-3-{[4-(4-fluorpiperidin-1-yl)benzoyl]amino}-5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat; [M+H]<+>534.

etyl-5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-3-[(4-morfolin-1-ylbenzoyl)amino]-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1(4H)-karboksylat; [M+H]<+>518.

etyl-3-{[4-(4-tert-butylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat; [M+H]<+>573.

etyl-5-[(2R)-2-hydroksy-2-fenyletanoyl]-3-{[4-(4-metylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat; [M+H]<+>533.

Eksempel 5

Fremstilling av N-{5-{(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-metylpiperazin-1 -yl)benzamid (1)

En løsning av etyl-5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-3-{[4-(4-metylpiperazin-1-yl)benzoyl]amino}-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1(4H)-karboksylat (3,94 g, 7,2 mmol) i metanol (MeOH, 130 ml) og trietylamin (Et3N, 13 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 16 timer (oppstod en viss presipitasjon). Faststoffet ble deretter separert og vasket med Et20 for å gi 1,6 g av tittelforbindelsen. Løsningen ble deretter avdampet opp til noen få milliliter og en andre fraksjon av fast produkt ble separert (1,62 g). De to fraksjonene ble slått sammen og analysert ved LC-MS (renhet rundt 90 % 254 og 220 nM). Etter kromatografisk rensing (kort silikagelkolonne), DCM/MeOH 45:5) 2,83 g (83 %) av tittelforbindelsen ble oppnådd som et hvitt fast stoff. Smp. 289°C; [M+H]<+>475; 1H-NMR (DMSO-d6) 5 ppm: 2,21 (s, 3H); 2,43 (m, 4H); 3,29 (m, 7H); 4,20-4,90 (m, 4H); 5,09 (s, 1H), 6,80-8,00 (m, 9H); 10,6 (br, 1H); 12,09 (br, 1H).

Ved å bli drevet på analog måte ved hydrolyse av forbindelsene i eksempel 4 ble følgende forbindelser fremstilt: (2) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-etylpiperazin-1-yl)benzamid; [M+H]<+>489; 1H-NMR (DMSO-d6) 5 ppm: 1,1 (t, 3H); 2,3-2,7 (m, 6H); 3,2-3,4 (m, 7H); 4,3-6,0 (m, 4H); 5,1 (d, 1H), 6,9-8,0 (m, 9H); 10,6 (bs, 1H); 12,1 (br, 1H). (3) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-isopropylpiperazin-1 -yl)benzamid; [M+H]<+>503; 1H-NMR (DMSO-d6) 5 ppm: 1,3-1,3 (dd, 6H); 3,3-3,4 (m, 9H); 4,6-4,9 (m, 4H); 5,1 (d, 1H); 7,0-8,0 (m, 9H); 10,7 (bs, 1H); 12,3 (bs, 1H). (4) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-syklopropylpiperazin-1 -yl)benzamid; [M+H]<+>501; 1H-NMR (DMSO-d6) 5 ppm: 0,3-0,5 (m, 4H); 3,2-3,4 (m, 7H); 3,2-5,0 (m, 4H); 5,1 (d, 1H); 6,8-8,2 (m, 9H); 10,5-10,7 (br, 1H); 12,0-12,4 (br, 1H). (5) 4-(3,4-dimetylpiperazin-1 -yl)-N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}benzamid; [M+H]<+>489; 1H-NMR (DMSO-d6) 5 ppm: 1,0-1,1 (m, 3H); 2,24 (s, 3H); 3,3-3,5 (m, 7H); 4,3-5,0 (m, 4H); 5,1 (d, 1H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,6 (bs, 1H); 11,9-12,6 (br, 1H). (6) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-piperidin-1-ylbenzamid; [M+H]<+>460; 1H-NMR (DMSO-d6) 5 ppm: 1,5-1,7 (m, 6H); 3,2-3,4 (m, 7H); 4,3-4,9 (m, 4H); 5,1 (d, 1H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,4-10,7 (br, 1H). (7) 4-(4-fluorpiperidin-1 -yl)-N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-feyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}benzamid; [M+H]<+>478; 1H-NMR (DMSO-d6) 5 ppm: 1,65-2,1 (m, 4H); 3,15-3,6 (m, 7H); 4,35-5,0 (m, 5H); 5,1 (d, 1H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,4-10,7 (br, 1H). (8) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-morfolin-4-ylbenzamid; [M+H]<+>462; 1H-NMR (DMS0-d6) 5 ppm: 3,15-3,5 (m, 7H); 3,7-3,8 (m, 4H); 4,3-4,9 (m, H); 5,1 (d, 1H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,4-10,7 (br, 1H). (9) 4-(4-tert-butylpiperazin-1 -yl)-N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}benzamid; [M+H]<+>517. (10) N-{5-[(2R)-2-hydroksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-metylpiperazin-1-yl)benzamid; [M+H]+ 461; 1H-NMR (DMSO-d6) 5 ppm: 2,3 (s, 3H); 2,45-2,65 (m, 4H); 3,2-3,4 (m, 4H); 4,1-4,9 (m, 4H); 5,69 (d, 1H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,4-10,7 (br, 1H); 11,5-12,9 (br, 1H). (11) N-{5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-metylpiperazin-1-yl)benzamid; [M+H]<+>459; 1H-NMR (DMSO-d6) 5 ppm: 1,33 (d, 3H); 2,21 (s, 3H); 3,85-5,0 (m, 5H); 4,2-4,9 (m, 4H); 5,1 (s, 1H) 6,8-8,0 (m, 9H); 10,3-10,7 (br, 1H); 11,8-12,5 (br, 1H). (12) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-etylpiperazin-1-yl)benzamid; [M+H]<+>473; 1H-NMR (DMSO-d6) 5 ppm: 1,06 (t, 3H); 1,36 (d, 3H); 2,41 (q, 2H); 2,47-2,6 (m, 4H); 3,2-3,4 (m, 4H); 3,9-5,0 (m, 5H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,5 (bs, 1H); 11,9-12,5 (br, 1H). (13) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-isopropylpiperazin-1 -yl)benzamid; [M+H]<+>487; (14) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-syklopropylpiperazin-1 -yl)benzamid; [M+H]<+>485; (15) 4-(3,4-dimetylpiperazin-1 -yl)-N-[(2R)-2-fenylpropanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-benzamid; [M+H]<+>473; (16) N-{5-[(2R)-2-fenylpropanoyl]-2,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-4-piperidin-1-ylbenzamid; [M+H]<+>444; 1H-NMR (DMS0-d6) 5 ppm: 1,37 (d, 3H); 1,6 (s, 6H); 3,2-3,4 (m, 4H); 3,90-4,05 (m, 1H); 4,1-4,9 (m, 4H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,4-10,7 (br, 1H). (17) 4-(4-fluorpiperidin-1 -yl)-N-{5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}benzamid; [M+H]<+>462; 1H-NMR (DMSO-d6) 5 ppm: 1,37 (d, 3H); 1,65-2,05 (m, 4H); 3,15-3,6 (m, 7H); 3,2-3,4 (m, 4H); 3,85-4,07 (m, 1H); 4,1-5,05 (m, 5H) (m, 5H); 5,1 (d, 1H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,4-10,7 (br, 1H). (18) N-{5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-mofrolin-4-ylbenzamid; [M+H]<+>446; 1H-NMR (DMSO-d6) 5 ppm: 1,37 (d, 3H); 3,2-3,4 (m, 4H); 3,7-3,85 (m, 4H); 3,9-4,1 (m, 1H); 4,1-4,95 (m, 4H); 6,9-8,0 (m, 9H); 10,4-10,7 (br, 1H). (19) 4-(4-tert-butylpiperazin-1 -yl)-N-{5-[(2R)-fenylpropanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}benzamid; [M+H]<+>501.

Claims

1. Forbindelse for terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av celleproliferative forstyrrelser forårsaket av og/eller assosiert med en endret proteinkinaseaktivitet, idet forbindelsen har formel (I)

hvor R er hydrogen eller metyl; Ri er hydroksy eller en lineær eller forgrenet Ci-C3-alkyl- eller alkoksygruppe; R2er et hydrogen- eller halogenatom; X er en divalent gruppe valgt fra metylen(-CH2-) eller fluormetylen(-CHF-), eller er et heteroatom eller heteroatomisk gruppe valgt fra oksygen(-O-) eller nitrogen(-NR')-) hvor R' er et hydrogenatom, en lineær eller forgrenet C1-C4-alkylgruppe eller en C3-C6-sykloalkylgruppe; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

2. Forbindelse ifølge krav 1, idet den er for behandling av celleproliferative forstyrrelser forårsaket ved og/eller assosiert med en endret Aurora kinaseaktivitet.

3. Forbindelse ifølge krav 2, idet Aurora kinasen er Aurora 2.

4. Forbindelse følge krav 1, idet den celleproliferative forstyrrelsen er valgt fra gruppen bestående av cancer, Alzheimers sykdom, virale infeksjoner, auto-immune sykdommer og nevrodegenerative forstyrrelser.

5. Forbindelse ifølge krav 4, idet canceren er valgt fra gruppen bestående av karsinom, squamos cellekarsinom, hematopoetiske tumorer av myeloid eller lymfoid linje, tumorer av mesenchymal opprinnelse, tumorer av sentralt og perifert nervesystem, melanom, seminom, teratokarsinom, osteosarkom, xeroderm pigmentosum, keratoksantom, tyroid follikulær cancer og Kaposis sarkom.

6. Forbindelse ifølge krav 1, idet den celleproliferative forstyrrelsen er valgt fra gruppen bestående av benign prostatahyperplasi, familiær adenomatosepolypose, nevrofibromatose, psoriasis, vaskulær glatt celleproliferasjon assosiert med aterosklerose, lungefibrose, artritt, glomerulonefritt og post-kirurgisk stenose og restenose.

7. Forbindelse, karakterisert vedat den har formel (I)

hvor R er hydrogen eller metyl; Ri er hydroksy eller en lineær eller forgrenet CrC3-alkyl- eller alkoksygruppe; R2er et hydrogen- eller halogenatom; X er en divalent gruppe valgt fra metylen(-CH2-) eller fluormetylen(-CHF-), eller er et heteroatom eller heteroatomisk gruppe valgt fra oksygen(-O-) eller nitrogen(-NR')-) hvor R' er et hydrogenatom, en lineær eller forgrenet C1-C4-alkylgruppe eller en C3-C6-sykloalkylgruppe; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

8. Forbindelse med formel (I) ifølge krav 7, karakterisert vedat R er hydrogen eller metyl, Ri er valgt fra hydroksy, metyl eller metoksy; R2er et hydrogen- eller fluoratom; X er valgt fra metylen, fluormetylen, -O- eller -NR', hvor R' er som definert i krav 10.

9. Forbindelse med formel (I) ifølge krav 1, karakterisert vedat den er eventuelt i form av et farmasøytisk akseptabelt salt derav, valgt fra gruppen bestående av:

(1) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-metylpiperazin-1-yl)benzamid;

(2) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-etylpiperazin-1-yl)benzamid;

(3) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-isopropylpiperazin-1-yl)benzamid;

(4) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-syklopropylpiperazin-1-yl)benzamid;

(5) 4-(3,4-dimetylpiperazin-1-yl)-N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}benzamid;

(6) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-piperidin-1 -ylbenzamid;

(7) 4-(4-fluorpiperidin-1 -yl)-N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-feyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}benzamid;

(8) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5>6-tetrahydropyrrolo[3>4-c]pyrazol-3-yl}-4-morfolin-4-ylbenzamid;

(9) 4-(4-tert-butylpiperazin-1 -yl)-N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}benzamid;

(10) N-{5-[(2R)-2-hydroksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-metylpiperazin-1-yl)benzamid;

(11) N-{5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-metylpiperazin-1-yl)benzamid;

(12) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-etylpiperazin-1-yl)benzamid;

(13) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-isopropylpiperazin-1-yl)benzamid;

(14) N-{5-[(2R)-2-metoksy-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(4-syklopropylpiperazin-1-yl)benzamid;

(15) 4-(3,4-dimetylpiperazin-1-yl)-N-[(2R)-2-fenylpropanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-benzamid;

(16) N-{5-[(2R)-2-fenylpropanoyl]-2,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-4-piperidin-1 -ylbenzamid;

(17) 4-(4-fluorpiperidin-1-yl)-N-{5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}benzamid;

(18) N-{5-[(2R)-2-metyl-2-fenyletanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-morfolin-4-ylbenzamid;

(19) 4-(4-tert-butylpiperazin-1 -yl)-N-{5-[(2R)-fenylpropanoyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}benzamid.

10. Fremgangsmåte for fremstilling av forbindelser med formel (I) og farmasøytisk akseptable salter derav ifølge krav 7,karakterisert vedat fremgangsmåten omfatter: a) omsetning av en forbindelse med formel (II) med en forbindelse med formel (III)

hvor Ri og R2er som definert i krav 10 og Z' representerer hydroksy eller en egnet avspaltbar gruppe, for å oppnå en forbindelse med formel (VII) d) omsetning av forbindelsen ifølge formel (VII) under basiske betingelser for å oppnå tilsvarende forbindelse ifølge formel (I) og, om ønskelig, omdannelse av denne til et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

11. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert vedat innenfor forbindelsene med formel (II) representerer Q en lineær eller forgrenet d-C4-alkylgruppe.

12. Fremgangsmåte ifølge krav 11, karakterisert vedatQer metyl eller etyl.

13. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert vedat innenfor forbindelsene med formel (III) og (VI) er Z og Z', hver uavhengig, hydroksy eller et halogenatom.

14. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert vedat halogenatomet er klor.

15. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert vedat trinn (b) blir utført under sure betingelser i nærvær av saltsyre, trifluoreddiksyre eller metansulfonsyre.

16. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert vedat trinn (d) blir utført under basiske betingelser i nærvær av natrium, kalium eller litiumhydroksid, eller av et tertiært amin så som trietylamin.

17. Farmasøytisk sammensetning, karakterisert vedat den omfatter en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som definert i krav 7, og minst én farmasøytisk akseptabel eksipient, bærer og/eller et fortynningsmiddel.

18. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 17, karakterisert vedat den videre omfatter én eller flere kjemoterapeutiske midler.

19. Produkt eller sett, karakterisert vedat det omfatter en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som definert i krav 7, eller farmasøytiske sammensetninger derav som definert i krav 17, og én eller flere kjemoterapeutiske midler, som et kombinert preparat for samtidig, separat eller sekvensiell anvendelse i anticancerterapi.

20. Forbindelse ifølge formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som definert i krav 7, for anvendelse som et medikament.

21. Anvendelse av en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som definert i krav 7, for fremstilling av et medikament med antitumoraktivitet.