ES2345776T3 - Sales maleato de un derivado de quinazolina util como agente antiangiogenico. - Google Patents

Abstract

Una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina, en la Forma A cristalina, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con por lo menos un pico en 2-teta = 21,5º más o menos 0,5º 2-teta o en 2-teta = 16,4º más o menos 0,5º 2-teta.

Description

Sales maleato de un derivado de quinazolina útil como agente antiangiogénico.

La presente invención se refiere a formas cristalinas particulares de sal de maleato AZD2171, a procedimientos para su preparación, a composiciones farmacéuticas que las contienen como ingrediente activo y a su uso en la elaboración de medicamentos para uso en la producción de permeabilidad antiangiogénica y/o vascular que reduce los efectos en animales de sangre caliente, tales como seres humanos para el tratamiento de estados de enfermedad asociados con angiogénesis y/o aumento de la permeabilidad vascular.

La angiogénesis normal juega un importante papel en diversos procesos, que incluyen el desarrollo embrionario, la cicatrización de las heridas y varios componentes de la función reproductora femenina. La angiogénesis indeseable o patológica ha sido asociada a estados de enfermedad que incluyen la retinopatía diabética, la soriasis, el cáncer, la artritis reumatoide, el ateroma, el sarcoma de Kaposi y el hemangioma (Fan et al, 1995, Trends Pharmacol. Sci. 16: 57-66; Folkman, 1.995, Nature Medicine 1: 27-31). Se cree que la alteración de la permeabilidad vascular juega un papel tanto en procesos fisiológicos normales como patológicos (Cullinan-Bove et al, 1993, Endocrinology 133: 829-837; Senger et al, 1993, Cancer and Metastasis Reviews, 12: 303-324). Se han identificado varios polipéptidos con actividad promotora del crecimiento celular endotelial in vitro, que incluyen factores de crecimiento de fibroblastos ácidos y básicos (aFGF y bFGF) y el factor A de crecimiento endotelial vascular (VEGF). En virtud de la expresión restringida de sus receptores, la actividad de factor de crecimiento del VEGF, en contraste con la de los FGF, es relativamente específica hacia las células endoteliales. Pruebas recientes indican que el VEGF es un importante estimulador tanto de la angiogénesis normal como patológica (Jakeman et al, 1993, Endocrinology, 133: 848-859; Kolch et al, 1995, Breast Cancer Research and Treatment, 36:139-155) y de la permeabilidad vascular (Connolly et al, 1989, J. Biol. Chem. 264: 20017-20024). El antagonismo de la acción del VEGF por secuestro del VEGF con anticuerpo puede dar como resultado la inhibición del crecimiento tumoral (Kim et al, 1993, Nature 362: 841-844).

Las tirosina cinasas receptoras (RTK, por sus siglas en inglés) son importantes en la transmisión de señales bioquímicas a través de la membrana plasmática de las células. Estas moléculas transmembranales consisten de manera característica en un dominio extracelular de unión al ligando conectado mediante un segmento de la membrana plasmática a un dominio intracelular con actividad tirosina cinasa. La unión del ligando al receptor da como resultado la estimulación de la actividad de la tirosina cinasa asociada al receptor, que conduce a la fosforilación de los restos de tirosina tanto en el receptor como en otras moléculas intracelulares. Estos cambios en la fosforilación de la tirosina inician una cascada de señales que conduce a una variedad de respuestas celulares. Hasta la fecha, se han identificado al menos diecinueve subfamilias distintas de RTK, definidas por la homología de secuencias de aminoácidos. Una de estas subfamilias está actualmente comprendida por el receptor de tirosina cinasa de tipo fms, Flt-1, el receptor que contiene el dominio de inserción de cinasa, KDR -1 (también referido como Flk-1) y otro receptor de tirosina cinasa de tipo fms, Flt-4. Se ha demostrado que dos de estas RTK relacionadas, Flt-1 y KDR, se unen a VEGF con gran afinidad (De Vries et al., 1992, Science 255: 989-991; Terman et al., 1.992, Biochem. Biophys. Res. Comm. 1.992, 187: 1579-1586). La fijación de VEGF a estos receptores expresados en células heterólogas se ha asociado con cambios en el estado de fosforilación de la tirosina de las proteínas celulares y en los flujos de calcio.

El VEGF es un estímulo clave para la vasculogénesis y la angiogénesis. Esta citocina induce un fenotipo de crecimiento vascular rápido induciendo la proliferación de células endoteliales, la expresión y migración de proteasa, y la posterior organización de las células para formar un tubo capilar (Keck, P.J., Hauser, S.D., Krivi, G., Sanzo, K., Warren, T., Feder, J., y Connolly, D.T., Science (Washington DC), 246: 1309-1312, 1989; Lamoreaux, W.J., Fitzgerald, M.E., Reiner, A., Hasty, K.A., y Charles, S.T., Microvasc. Res., 55: 29-42, 1998; Pepper, M.S., Montesano, R., Mandroita, S.J., Orci, L. y Vassalli, J.D., Enzyme Protein, 49: 138-162, 1996.). Además, el VEGF induce una significativa permeabilidad vascular (Dvorak, H.F., Detmar, M., Claffey, K.P., Nagy, J.A., van de Water, L., y Senger, D.R., (Int. Arch. Allergy Immunol., 107: 233-235, 1995; Bates, D.O., Heald, R.I., Curry, F.E. y Williams, B. J. Physiol. (Lond.), 533: 263-272, 2001), promoviendo la formación de una red vascular inmadura, hiperpermeable, que es característica de la angiogénesis patológica.

Se ha demostrado que la activación del KDR solo es suficiente para promover todas las respuestas fenotípicas principales al VEGF, incluyendo proliferación, migración y supervivencia de células endoteliales, y la inducción de permeabilidad vascular (Meyer, M., Clauss, M., Lepple-Wienhues, A., Waltenberger, J., Augustin, H.G., Ziche, M., Lanz, C., Büttner, M., Rziha, H-J., y Dehio, C., EMBO J., 18: 363-374, 1999; Zeng, H., Sanyal, S. y Mukhopadhyay, D., J. Biol. Chem., 276: 32714-32719, 2001; Gille, H., Kowalski, J., Li, B., LeCouter, J., Moffat, B, Zioncheck, T.F., Pelletier, N. y Ferrara, N., J. Biol. Chem., 276: 3222-3230, 2001).

Los compuestos que inhiben los efectos de VEGF tienen valor en el tratamiento de estados de enfermedad asociados con angiogénesis y/o aumento de la permeabilidad vascular tales como cáncer (incluyendo leucemia, mieloma múltiple y linfoma), diabetes, soriasis, artritis reumatoidea, sarcoma de Kaposi, hemangioma, nefropatías agudas y crónicas, ateroma, restenosis arterial, enfermedades autoinmunitarias, inflamación aguda, formación excesiva de cicatrices y adherencias, endometriosis, linfoedema, hemorragia uterina disfuncional y enfermedades oculares con proliferación de vasos de la retina, incluyendo degeneración macular.

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Los derivados de quinazolina que son inhibidores de tirosina cinasa VEGF se describen en el documento WO 00/47212. El compuesto AZD2171 se ejemplifica en el documento WO 00/47212, (véase Ejemplo 240), y es 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina de la fórmula I:

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El AZD2171 muestra una excelente actividad en los ensayos in vitro (a) enzimáticos y (b) HUVEC que se describen en el documento WO 00/47212 y a continuación en este documento. Los valores IC_{50} del AZD2171 respecto a la inhibición de las actividades tirosina cinasa aisladas de KDR (VEGFR-2) y Flt-1 (VEGFR-1) en el ensayo enzimático fueron < 2 nM y 5 \pm 2 nM respectivamente. El AZD2171 inhibe potencialmente la proliferación de células endoteliales estimulada por VEGF (índice IC_{50} de 0,4 \pm 0,2 nM en el ensayo HUVEC), pero no inhibe la proliferación basal de células endoteliales apreciablemente a una concentración > que 1250 veces mayor (el índice IC_{50} es > 500 nM). El crecimiento de un xenoinjerto de tumor Calu-6 en el modelo de tumor sólido in vivo (c) descrito a continuación en este documento fue inhibido en un 49%**, 69%*** y 91%*** tras 28 días de tratamiento oral una vez por día con 1,5, 3 y 6 mg/kg/día de AZD2171 respectivamente (P**< 0,01, P***< 0,0001; análisis t de una cola).

Se prefieren formas más estables de un compuesto farmacéuticamente activo, por ejemplo formas cristalinas más estables, para la formulación y procesamiento a escala comercial. Esto se debe a la mayor estabilidad de la forma utilizada, el menor riesgo de que se convierta en otra forma durante los procedimientos de formulación, tales como compresión. Esto a su vez provee mayor predicción de las propiedades de la formulación final, como índice de disolución de los comprimidos, biodisponibilidad del ingrediente activo. El uso de una forma más estable del ingrediente activo nos permite un mayor control de las propiedades físicas de la formulación.

La base libre AZD2171 (4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina) es un monohidrato cristalino bajo condiciones ambiente. El análisis de calorimetría de barrido diferencial (DSC) se llevó a cabo de acuerdo con el método descrito a continuación y muestra un amplio endotermo entre 95º y 170ºC debido a la pérdida de agua y fusión (Figura 1). El análisis termogravimétrico (TGA) (se exponen detalles a continuación) muestra una pérdida de peso de 4,02% entre 80ºC y 115ºC (Figura 1). El análisis de agua de Karl Fischer (se exponen detalles a continuación) produce una figura de 3,9% indicando que toda la pérdida de peso se debe a la pérdida de agua.

Se ha de entender que los valores de temperatura inicio/pico del análisis DSC pueden variar levemente de una máquina a otra o de una muestra a otra, y entonces los valores mencionados no deben interpretarse como absolutos.

La base libre AZD2171 se caracteriza por proveer por lo menos uno de los siguientes valores 2\theta medidos usando radiación CuKa: 18,3 y 20,8. La base libre AZD2171 se caracteriza por proveer un patrón de difracción de rayos x de polvo, como en la Figura 2. Los diez picos más prominentes se muestran en la Tabla 1.

TABLA 1 Los diez picos más prominentes de la difracción de polvos de rayos x para la base libre AZD2171

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Se ha descubierto que cuando una muestra de la base libre AZD2171 se hidrata, por ejemplo calentando a 100ºC, la muestra se torna amorfa (Figura 3) y luego no se rehidrata sino que permanece amorfa en lo sucesivo. Esto podría ser problemático si la base libre AZD2171 se formulara como una composición farmacéutica porque la base libre AZD2171 podría deshidratarse durante ciertos procedimientos, p. ej., reducción del tamaño de partícula (como trituración), secado del fármaco a granel, formulación, fabricación. Con el fin de formular la base libre AZD2171 como composición farmacéutica, sería necesario reducir el tamaño de partícula en algún punto, y esto conllevaría un riesgo de deshidratación y, en consecuencia, el riesgo de formación de material amorfo. Esto se investigó sometiendo una muestra de la base libre AZD2171 monohidratada a reducción del tamaño de partícula por micronización y luego analizándola para buscar material amorfo. La Figura 4 muestra que el material amorfo en realidad se forma durante la reducción del tamaño de partícula de la base libre AZD2171. Esto se muestra ampliando los picos y formando un "saliente" amorfo - véase Figura 4. Una forma amorfa o semiamorfa de la base libre AZD2171 podría dar lugar a problemas de fabricación y biodisponibilidad no reproducible.

La identificación de formas alternativas de AZD2171, formas que son diferentes de la base libre y que tienen mejores propiedades en estado sólido, es el objeto de la presente invención.

Un ejemplo de una forma diferente es una sal de AZD2171. En el documento WO 00/47212 se indica que las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esa invención pueden incluir sales de adición de ácido de los compuestos de la invención que son suficientemente básicas como para formar dichas sales. Se dice que dichas sales de adición de ácido incluyen sales con ácidos inorgánicos u orgánicos que proporcionan aniones farmacéuticamente aceptables tales como con haluros de hidrógeno, en especial, ácido clorhídrico o bromhídrico o con ácido sulfúrico o fosfórico, o con ácido trifluoroacético, cítrico o maleico. Además, el documento WO 00/47212 afirma que si los compuestos de esa invención son suficientemente ácidos, las sales farmacéuticamente aceptables se pueden formar con una base inorgánica u orgánica que proporciona un catión farmacéuticamente aceptable. Se dice que estas sales con bases inorgánicas u orgánicas incluyen una sal de metal alcalino, tal como una sal de sodio o de potasio, una sal de metal alcalino-térreo tal como una sal de calcio o de magnesio, una sal de amonio o, por ejemplo, una sal con metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina o tris-(2-hidroxietil)amina.

Las sales preferidas del documento WO 00/47212 son hidrocloruros e hidrobromuros, especialmente hidrocloruros.

En ninguna parte del documento WO 00/47212 se establece que una sal particular de un compuesto particular de ese documento poseerá propiedades sorprendentemente beneficiosas.

Inesperada y sorprendentemente, hemos descubierto ahora que la sal maleato de AZD2171 es una forma ventajosamente estable de AZD2171 con mejores propiedades en estado sólido que la base libre y que otras sales que han sido ensayadas.

El maleato AZD2171 cristaliza fácilmente, es altamente cristalino, no higroscópico y tiene una relación estequiométrica reproducible de fármaco a contraión de 1:1.

Se prepararon varias sales de AZD2171 y se halló que siete eran cristalinas: malonato, succinato, fumarato, maleato, tartarato, adipato y malato. Se ensayaron las propiedades en estado sólido de estas 7 sales y los resultados se muestran en la Tabla 2:

TABLA 2 Propiedades de las sales AZD2171

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La sal de maleato AZD2171 fue sorprendentemente mejor debido a las 7 sales que fue posible cristalizar, se halló que era la única sal no higroscópica, altamente cristalina y con una relación estequiométrica reproducible de fármaco a contraión de 1:1.

La sal de maleato AZD2171 está sustancialmente libre de material amorfo y puede esperarse que se formule más fácilmente que la base libre AZD2171 y que proporcione resultados de dosificación más reproducibles. Por "sustancialmente libre de material amorfo" se entiende que la cantidad de material amorfo es inferior a 10%, preferiblemente inferior a 5%, más preferiblemente inferior a 2%.

La sal de maleato AZD2171 es no higroscópica, lo que debería prevenir o reducir cualquier problema asociado con cambios de peso del ingrediente activo durante procedimientos tales como la micronización.

El maleato AZD2171 posee dos formas cristalinas A y B.

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De acuerdo con la presente invención se provee una sal de maleato de AZD2171 en una primera forma cristalina, la Forma A.

La Forma A del Maleato AZD2171 se caracteriza por proveer por lo menos uno de los siguientes valores 2\theta medidos usando radiación CuKa: 21,5 y 16,4. La Forma A del Maleato AZD2171 se caracteriza por proveer un patrón de difracción de rayos x de polvo, sustancialmente como se muestra en la Figura 5. Los diez picos más prominentes se muestran en la Tabla 3:

TABLA 3

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De acuerdo con la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171 en una primera forma cristalina, la Forma A, en donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo sustancialmente igual al patrón de difracción de rayos x de polvo que se muestra en la Figura 5.

Según la presente invención se provee una sal de maleato de AZD2171 en una primera forma cristalina, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con por lo menos un pico específico en 2-teta = 21,5º más o menos 0,5º 2-teta.

Según la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171 en una primera forma cristalina, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con por lo menos un pico específico en 2-teta = 16,4º más o menos 0,5º 2-teta.

Según la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171 en una primera forma cristalina, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con por lo menos dos picos específicos en 2-teta = 21,5º y 16,4, donde dichos valores pueden ser más o menos 0,5º 2-teta.

Según la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171 en una primera forma cristalina, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con por lo menos dos picos específicos en 2-teta = 21,5, 16,4, 24,4, 20,7, 25,0, 16,9, 12,1, 22,2, 17,4 y 17,6, donde dichos valores pueden ser más o menos 0,5º 2-teta.

Según la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171 en una primera forma cristalina, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con picos específicos en 2-teta = 21,5, 16,4, 24,4, 20,7, 25,0, 16,9, 12,1, 22,2, 17,4 y 17,6º.

De acuerdo con la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171 en una primera forma cristalina, la Forma A, en donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x como se muestra en la Figura 5.

El análisis DSC muestra que la Forma A del maleato AZD2171 es un sólido de gran fusión con un inicio de fusión a 198,3ºC y un pico a 200,08ºC (Figura 6).

Por lo tanto, el análisis DSC muestra que la Forma A del maleato AZD2171 es un sólido de gran fusión con un inicio de fusión a aproximadamente 198,3ºC y un pico a aproximadamente 200,08ºC.

De acuerdo con la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171 en una segunda forma cristalina, la Forma B.

La Forma B del Maleato AZD2171 se caracteriza por proveer por lo menos uno de los siguientes valores 2\theta medidos usando radiación CuKa: 24,2 y 22,7. La Forma B del Maleato AZD2171 se caracteriza por proveer un patrón de difracción de rayos x de polvo, sustancialmente como se muestra en la Figura 8. Los diez picos más prominentes se muestran en la Tabla 4:

TABLA 4 Los diez picos más prominentes de la difracción de rayos x de polvo para la Forma B del Maleato AZD2171

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De acuerdo con la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171 en una segunda forma cristalina, la Forma B, en donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo sustancialmente igual al patrón de difracción de rayos x de polvo que se muestra en la Figura 8.

Según la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171 en una segunda forma cristalina, la Forma B, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con por lo menos un pico específico en 2-teta = 24,2º más o menos 0,5º 2-teta.

Según la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171 en una segunda forma cristalina, la Forma B, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con por lo menos un pico específico en 2-teta = 22,7º más o menos 0,5º 2-teta.

Según la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171 en una segunda forma cristalina, la Forma B, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con por lo menos dos picos específicos en 2-teta = 24,2º y 22,7, donde dichos valores pueden ser más o menos 0,5º 2-teta.

Según la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171 en una segunda forma cristalina, la Forma B, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con por lo menos dos picos específicos en 2-teta = 24,2, 22,7, 15,7, 12,0, 27,1, 25,0, 17,7, 15,0, 23,1 y 12,6, donde dichos valores pueden ser más o menos 0,5º 2-teta.

De acuerdo con la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171 en una segunda forma cristalina, la Forma B, en donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x como se muestra en la Figura 8.

El análisis DSC muestra que la Forma B del maleato AZD2171 es un sólido de gran fusión con un inicio de fusión a 194,43ºC y un pico a 195,97ºC (Figura 9).

Por lo tanto, el análisis DSC muestra que la Forma B del maleato AZD2171 es un sólido de gran fusión con un inicio de fusión a aproximadamente 194,43ºC y un pico a aproximadamente 195,97ºC.

La Forma B es metaestable con respecto a la Forma A (el punto de fusión y el calor de fusión de la Forma B son menores que aquellos de la Forma A). La Forma A es la forma más termodinámicamente estable. Una mezcla de la Forma A y B convierte la Forma A tras suspender en metanol a 40ºC durante 4 días (Figura 10).

Se prefiere la Forma A a la Forma B.

El maleato AZD2171 es no higroscópico, absorbiendo < 1% de humedad a 80% de humedad relativa (Figura 7).

Los detalles de RMN se exponen después de la preparación de la sal de maleato en el Ejemplo 1 y muestran, para los datos de estequiometría, una relación de 1:1.

Cuando se afirma que la presente invención se refiere a una forma cristalina de la base libre AZD2171, o a la Forma A del maleato AZD2171 o a la Forma B del maleato AZD2171, el grado de cristalinidad es convenientemente mayor que aproximadamente 60%, más convenientemente mayor que aproximadamente 80%, preferiblemente mayor que aproximadamente 90% y más preferiblemente mayor que aproximadamente 95%. Más preferiblemente, el grado de cristalinidad es mayor que aproximadamente 98%.

Las formas A y B de sal del maleato AZD2171 proveen patrones de difracción de rayos x de polvo sustancialmente iguales a los patrones de difracción de rayos x de polvo que se muestran en las Figuras 5 y 8 respectivamente y tienen sustancialmente los diez picos más prominentes (valores de ángulos 2-teta) que se muestran en las Tablas 3 y 4 respectivamente. Se entenderá que los valores de 2-zeta del patrón de difracción de rayos x de polvo pueden variar ligeramente de una máquina a otra o de una muestra a otra, y por lo tanto los valores mencionados no deben considerarse como absolutos.

Se sabe que puede obtenerse el patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene uno o más errores de medición, dependiendo de las condiciones de medición (como los equipos o máquinas utilizados). En particular, se sabe en general que las intensidades en un patrón de difracción de rayos x de polvo pueden fluctuar dependiendo de las condiciones de medición. Por lo tanto, debe entenderse que las formas de sal del maleato AZD2171 de la presente invención no se limitan a los cristales que proveen patrones de difracción de rayos x de polvo idénticos a los patrones de difracción de rayos x de polvo que se muestran en las Figuras 5 y 8, y que cualquiera de los cristales que provean los patrones de difracción de rayos x de polvo sustancialmente iguales a los que se muestran en las Figuras 5 y 8 se encuentra dentro del alcance de la presente invención. El experto en la técnica de difracción de rayos x de polvo puede juzgar la identidad sustancial de los patrones de difracción de rayos x de polvo.

Las personas con experiencia en la técnica de difracción de rayos x de polvo se darán cuenta de que la intensidad relativa de los picos puede verse afectada, por ejemplo, por granos con un tamaño superior a 30 micrómetros y relaciones de aspecto no unitario, que pueden afectar el análisis de las muestras. El experto en la técnica también se dará cuenta de que la posición de las reflexiones puede verse afectada por la altura precisa en la que yace la muestra en el difractómetro y la calibración cero del difractómetro. La planaridad de la superficie de la muestra puede también tener un pequeño efecto. En consecuencia, los datos del patrón de difracción presentados no deben tomarse como valores absolutos. (Jenkins, R & Snyder, R.L. "Introduction to X-Ray Powder Diffractometry" John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, Londres; Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-Ray Diffraction Procedures).

Generalmente, un error de medición del ángulo de difracción en un difractograma de rayos x de polvo es de aproximadamente 5% o menos, en particular más o menos 0,5º 2-teta, y dicho grado de error de medición debe tomarse en cuenta al considerar los patrones de difracción de rayos x de polvo en las Figuras 2, 3, 4, 5, 8 y 10 y al leer las Tablas 1, 3 y 4. Además, debe entenderse que las intensidades pueden fluctuar dependiendo de las condiciones experimentales y de la preparación de la muestra (orientación preferida).

Para evitar dudas, las expresiones tales como "sal del maleato AZD2171" y "una sal del maleato de AZD2171" se refieren a todas y cada una de las formas de sal del maleato AZD2171, mientras que la Forma A del maleato "AZD2171" se refiere a la forma cristalina particular conocida como la Forma A y la "Forma B del maleato AZD2171" se refiere a la forma cristalina particular conocida como Forma B.

De acuerdo con otro aspecto de la invención, se provee una composición farmacéutica que comprende una sal del maleato AZD2171 como se definió anteriormente en relación con un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

La composición puede estar en una forma adecuada para administración oral, (por ejemplo como comprimidos, pastillas para chupar, cápsulas de gelatina duras o blandas, suspensiones acuosas u oleosas, emulsiones, polvos o gránulos dispersables, jarabes o elixires), para administración por inhalación (por ejemplo como un polvo finamente dividido o un aerosol líquido), para administración por insuflación (por ejemplo como un polvo finamente dividido), para inyección parenteral (por ejemplo como una disolución estéril, suspensión o emulsión para administración intravenosa, subcutánea, intramuscular, intravascular o por infusión), para administración tópica (por ejemplo como cremas, ungüentos, geles o disoluciones o suspensiones acuosas u oleosas), o para administración rectal (por ejemplo como un supositorio). Preferiblemente, la sal de maleato AZD2171 se administra oralmente. En general las composiciones anteriores se pueden preparar de una forma convencional usando excipientes convencionales.

Las composiciones de la presente invención se presentan de modo ventajoso en forma de dosis unitaria. El maleato AZD2171 se administrará normalmente a un animal de sangre caliente a una dosis unitaria dentro del intervalo de 1-50 mg por metro cuadrado de área corporal del animal, por ejemplo aproximadamente 0,03-1,5 mg/kg en un ser humano. Se prevé una dosis unitaria en el intervalo de, por ejemplo, 0,01-1,5 mg/kg, por ejemplo 0,05-0,75 mg/kg, preferiblemente 0,03-0,5 mg/kg y esto normalmente proporciona una dosis terapéuticamente eficaz. Una forma de dosis unitaria tal como un comprimido o cápsula contendrá usualmente, por ejemplo, 1-50 mg de ingrediente activo. Preferiblemente, se emplea una dosis diaria en el intervalo de 0,03-0,5 mg/kg. El tamaño de la dosis requerido para el tratamiento terapéutico o profiláctico de un estado de enfermedad particular variará necesariamente dependiendo del huésped tratado, de la vía de administración y de la intensidad de la enfermedad que se está tratando. Por consiguiente, la dosis óptima puede determinarla el médico que está tratando a un paciente particular.

Según otro aspecto de la presente invención se provee una sal del maleato AZD2171, según se definió anteriormente en este documento, para uso en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal por terapia.

Otra característica de la presente invención es una sal del maleato AZD2171 según se definió anteriormente para uso como medicamento, convenientemente como una sal del maleato AZD2171 según se definió anteriormente para uso como medicamento para producir un efecto antiangiogénico y/o reductor de la permeabilidad vascular en un animal de sangre caliente, tal como un ser humano.

Por lo tanto, de acuerdo con otro aspecto de la invención, se provee el uso de una sal del maleato de AZD2171 según se definió anteriormente en la elaboración de un medicamento para uso en la producción de un efecto antiangiogénico y/o reductor de permeabilidad vascular en un animal de sangre caliente tal como un ser humano.

La sal del maleato AZD2171 es un agente antiangiogénico y/o reductor de la permeabilidad vascular y puede aplicarse como única terapia o puede implicar, además del maleato AZD2171, una o más de otras sustancias y/o tratamientos. Dicho tratamiento conjunto puede conseguirse por medio de la administración simultánea, secuencial o separada de los componentes individuales del tratamiento. En el campo de la oncología médica es práctica normal utilizar una combinación de diferentes formas de tratamiento para tratar cada paciente con cáncer. En oncología médica, el otro componente(s) de dicho tratamiento conjunto además de la sal del maleato AZD2171 puede ser: cirugía, radioterapia o quimioterapia. Tal quimioterapia puede cubrir tres categorías principales de agente
terapéutico:

(i)

otros agentes antiangiogénicos tales como aquellos que inhiben los efectos del factor de crecimiento endotelial vascular, (por ejemplo el anticuerpo de factor de crecimiento de células endoteliales antivasculares [Avastin^{TM}], y aquellos que funcionan por mecanismos diferentes de aquellos definidos anteriormente en este documento (por ejemplo linomida, inhibidores de la función de integrina \alphav\beta3, angiostatina, razoxina, talidomida), incluyendo agentes de direccionamiento vascular (por ejemplo fosfato de combretastatina y los compuestos descritos en las solicitudes de patentes internacionales WO00/40529, WO 00/41669, WO01/92224, WO02/04434 y WO02/08213, y los agentes de daño vascular descritos en la publicación de solicitud de patente internacional Nº WO 99/02166, cuya descripción completa se incorpora a la presente memoria por referencia, (por ejemplo N-acetilcolquinol-O-fosfato));

(ii)

agentes citostáticos tales como antiestrógenos (por ejemplo tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, yodoxifeno), agentes de descenso del receptor de estrógenos (por ejemplo fulvestrant), progestógenos (por ejemplo acetato de megestrol), inhibidores de aromatasa (por ejemplo anastrozol, letrazol, vorazol, exemestano), antiprogestógenos, antiandrógenos (por ejemplo flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona), agonistas y antagonistas de LHRH (por ejemplo acetato de goserelin, luprolida, buserelin), inhibidores de 5\alpha-reductasa (por ejemplo finasterida), agentes anti-invasión (por ejemplo inhibidores de metaloproteinasa como marimastat e inhibidores de la función del receptor activador de plasminógeno urocinasa) e inhibidores de la función del factor de crecimiento, (dichos factores de crecimiento incluyen, por ejemplo, factor de crecimiento derivado de plaquetas y factor de crecimiento de hepatocitos), dichos inhibidores incluyen anticuerpos del factor de crecimiento, anticuerpos del receptor del factor de crecimiento, (por ejemplo el anticuerpo anti-erbb2 trastuzumab [Herceptin^{TM}] y el anticuerpo anti-erbb1 cetuximab [C225]), inhibidores de farnesil transferasa, inhibidores de tirosina cinasa, por ejemplo inhibidores de la familia del factor de crecimiento epidérmico (por ejemplo inhibidores de la familia de tirosina cinasa EGFR tales como N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-metoxi-6-(3-morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina (gefitinib, AZD1839), N-(3-etinilfenil)-6,7-bis(2-metoxietoxi)quinazolin-4-amina (erlotinib, OSI-774) y 6-acrilamido-N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-(3-morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina (CI 1033)) e inhibidores de serina/treonina cinasa); y

(iii)

fármacos antiproliferativos/antineoplásicos y sus combinaciones, usados en oncología médica, tales como antimetabolitos (por ejemplo antifolatos como metotrexato, fluoropirimidinas como 5-fluorouracilo, tegafur, purina y análogos de adenosina, arabinósido de citosina); antibióticos antitumorales (por ejemplo antraciclinas como: adriamicina, bleomicina, doxorubicina, daunomicina, epirubicina, idarubicina, mitomicina-C, dactinomicina y mitramicina); derivados de platino (por ejemplo cisplatino, carboplatino); agentes alquilantes (por ejemplo mostazas nitrogenadas, melfalán, clorambucilo, busulfán, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosoureas, tiotepa); agentes antimitóticos (por ejemplo vinca-alcaloides como vincristina, vinblastina, vindesina y vinorrelbina y taxoides como taxol, taxótero); inhibidores de la topoisomerasa (por ejemplo epipodofilotoxinas como etopósido y tenipósido, amsacrina, topotecan, camptotecina y también irinotecan); también enzimas (por ejemplo asparaginasa); e inhibidores de la timidilato sintasa (por ejemplo raltitrexed); y otros tipos de agentes quimioterapeuticos incluyen:

(iv)

modificadores de la respuesta biológica (por ejemplo, interferón);

(v)

anticuerpos (por ejemplo edrecolomab);

(vi)

terapias complementarias, por ejemplo aquellas que se dirigen a las dianas listadas anteriormente, tal como ISIS 2503, una anti-ras complementaria;

(vii)

métodos de terapia génica, incluyendo por ejemplo métodos para remplazar genes aberrantes tales como p53 aberrante o BRCA1 aberrante o BRCA2, GDEPT (terapia profármaco con enzima dirigida al gen), métodos tales como los que utilizan citosina desaminasa, timidina cinasa o una enzima bacteriana nitrorreductasa y métodos para aumentar la tolerancia del paciente a la quimioterapia o radioterapia tal como la politerapia génica; y

(viii)

métodos de inmunoterapia, incluyendo por ejemplo métodos ex-vivo e in-vivo para aumentar la inmunogenicidad de las células tumorales del paciente, tal como la transfección con citocinas como por ejemplo la interleucina 2, la interleucina 4 o el factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos, métodos para disminuir energía de los linfocitos T, métodos que utilizan inmunocitos transfectados tales como los dendrocitos transfectados con citocina, métodos que utilizan líneas celulares tumorales transfectadas con citocina y métodos que utilizan anticuerpos antidiotípicos.

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Por ejemplo dicho tratamiento conjunto se puede lograr mediante administración simultánea, secuencial o separada de una sal del maleato AZD2171 según se definió anteriormente y un agente de direccionamiento vascular descrito en el documento WO 99/02166 tal como N-acetilcolquinol-O-fosfato (Ejemplo 1 del documento WO 99/02166).

Se sabe del documento WO 01174360 que los antiangiogénicos pueden combinarse con antihipertenores. Una sal de la presente invención también se puede administrar en combinación con un antihipertensor. Un antihipertensor es un agente que reduce la presión arterial, véase el documento WO 01174360 que se incorpora a la presente por referencia.

De acuerdo con otra característica de la presente invención, se provee una composición farmacéutica que comprende una sal del maleato AZD2171 según se definió anteriormente y un agente antihipertensor para el tratamiento de un estado de enfermedad asociado con angiogénesis en un mamífero de sangre caliente, tal como un ser humano.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se provee el uso de una combinación de una sal del maleato AZD2171 según se definió anteriormente y un agente antihipertensor para la elaboración de un medicamento para producir un efecto antiangiogénico y/o reductor de permeabilidad vascular en un mamífero de sangre caliente tal como un ser humano.

Los agentes antihipertensores preferidos son bloqueantes del canal de calcio, inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (inhibidores ACE), antagonistas del receptor de angiotensina II (antagonistas de A-II), diuréticos, bloqueantes del receptor beta-adrenérgico (\beta-bloqueantes), vasodilatadores y bloqueantes del receptor alfa-adrenérgico (\alpha-bloqueantes). Los agentes antihipertensores particulares son bloqueantes del canal de calcio, inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (inhibidores de ACE), antagonistas del receptor de angiotensina II (antagonistas de A-II) y bloqueantes del receptor beta-adrenérgico (\beta-bloqueantes), específicamente bloqueantes del canal de calcio.

Como se mencionó anteriormente, la sal del maleato AZD2171 es de interés por sus efectos antiangiogénicos y/o reductores de la permeabilidad vascular. Se espera que la sal del maleato AZD2171 sea útil en una amplia gama de enfermedades que incluyen el cáncer, la diabetes, psoriasis, artritis reumatoide, sarcoma de Kaposi, hemangioma, linfoedema, nefropatías agudas y crónicas, ateroma, restenosis arterial, enfermedades autoinmunes, inflamación aguda, formación excesiva de cicatrices y adherencias, endometriosis, sangrado uterino disfuncional y enfermedades oculares con proliferación de vasos retinales incluyendo la degeneración macular relacionada con la edad. El cáncer puede afectar a cualquier tejido e incluye la leucemia, el mieloma múltiple y el linfoma. En particular, es de esperar que dichos compuestos de la invención ralenticen ventajosamente el crecimiento de tumores sólidos primarios y recurrentes, por ejemplo, de colon, mama, próstata, pulmones y piel. Más particularmente, se espera que tales compuestos de la invención inhiban cualquier forma de cáncer asociado con VEGF incluyendo leucemia, mieloma múltiple y linfoma, y también, por ejemplo, inhiban el crecimiento de los tumores sólidos primarios y recurrentes que están asociados con VEGF, especialmente los tumores que dependen significativamente de VEGF respecto a su crecimiento y extensión, incluyendo por ejemplo, ciertos tumores de colon, mama, cerebro próstata, pulmón, vulva y piel.

Además de su uso en medicina terapéutica, las sales del maleato AZD2171 anteriormente definidas son también útiles como herramientas farmacológicas en el desarrollo y normalización de sistemas de ensayo in vitro e in vivo para la evaluación de los efectos de inhibidores de la actividad de tirosina cinasa del receptor VEGF en animales de laboratorio tales como gatos, perros, conejos, monos, ratas y ratones, como parte de la búsqueda de nuevos agentes terapéuticos.

Los ensayos descritos en el documento WO 00/47212 y utilizados para ensayar AZD2171 son los siguientes:

(a) Ensayo de inhibición del receptor de tirosina cinasa in vitro

Este ensayo determina la capacidad de un compuesto de ensayo para inhibir la actividad de la tirosina cinasa. El ADN que codifica los dominios citoplásmicos del receptor VEGF, FGF o EGF se puede obtener por síntesis de genes total (Edwards M, International Biotechnology Lab 5(3), 19-25, 1987) o por clonación. Éstos pueden luego expresarse en un sistema de expresión adecuado para obtener polipéptido con actividad tirosina cinasa. Por ejemplo, se halló que los dominios citoplásmicos del receptor VEGF, FGF y EGF, que se obtuvieron por expresión de proteína recombinante en células de insectos exhiben actividad tirosina cinasa intrínseca. En el caso del receptor de VEGF Flt-1 (número de acceso en Genbank X51602), un fragmento de ADN de 1,7kb que codifica la mayor parte del dominio citoplásmico, comenzando con la metionina 783 e incluyendo el codón de terminación, descrito por Shibuya et al (Oncogene, 1990, 5: 519-524), se aisló a partir de ADNc y se clonó en un vector de translocación de baculovirus (por ejemplo pAcYM1 (véase The Baculovirus Expression System: A Laboratory Guide, L.A. King and R. D. Possee, Chapman and Hall, 1992) r pAc360 o pBlueBacHis (disponible de Invitrogen Corporation)). Este constructo recombinante se co-transfectó en células de insecto (por ejemplo Spodoptera frugiperda 21(Sf21)) con ADN vírico (p. ej., Pharmingen BaculoGold) para preparar baculovirus recombinante. (Los detalles de los métodos para el ensamble de moléculas de ADN recombinante y la preparación y uso de baculovirus recombinante pueden hallarse en los textos convencionales, por ejemplo, Sambrook et al, 1989, Molecular cloning - A Laboratory Manual, 2a edición, Cold Spring Harbour Laboratory Press and O'Reilly et al, 1992, Baculovirus Expression Vectors - A Laboratory Manual, W. H. Freeman and Co, New York). Para KDR (número de acceso en Genbank L04947), se clonó un fragmento citoplásmico que comienza a partir de metionina 806 y se expresó en un modo similar.

Para expresión de la actividad de tirosina cinasa cFlt-1, se infectaron células Sf21 con virus recombinante cFlt-1 de placa pura a una multiplicidad de infección de 3 y se cosecharon 48 horas después. Las células cosechadas se lavaron con disolución salina tamponada con fosfato enfriada con hielo (PBS) (fosfato sódico 10 mM pH7,4, cloruro de sodio 138 mM, cloruro de potasio 2,7 mM), luego se resuspendieron en HNTG/PMSF enfriado con hielo (Hepes 20 mM pH7,5, cloruro de sodio 150 mM, 10% v/v glicerol, 1% v/v Triton X100, cloruro de magnesio 1,5 mM, etilenglicol-bis 1 mM(\betaaminoetiléter) ácido N,N,N',N'-tetraacético (EGTA), PMSF 1 mM (fluoruro de fenilmetilsulfonilo); el PMSF se añade justo antes del uso desde una disolución 100 mM recién preparada en metanol) usando 1 ml de HNTG/PMSF por 10 millones de células. La suspensión se centrifugó durante 10 minutos a 13.000 rpm a 4ºC, se eliminó el sobrenadante (patrón de enzima) y se conservó en alícuotas a -70ºC. Cada nueva partida de enzima patrón se valoró en el ensayo por dilución con diluyente de enzimas (Hepes 100 mM pH 7,4, ortovanadato sódico 0,2 mM, 0,1% v/v Triton X100, ditiotreitol 0,2 mM). Para un lote típico, se diluyó enzima patrón 1 en 2000 con diluyente de enzima y se usaron 50 \mul de enzima diluida para cada pozo de ensayo.

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Se preparó un patrón de disolución de sustrato a partir de un copolímero aleatorio que contenía tirosina, por ejemplo Poly (Glu, Ala, Tyr) 6:3:1 (Sigma P3899), conservado como 1 mg/ml patrón en PBS a -20ºC y se diluyó 1 en 500 con PBS para recubrimiento de placas.

El día anterior al ensayo, se dispensaron 100 \mul de disolución de sustrato diluida en todos los pocillos de las placas de ensayo (inmunoplacas de 96 pocillos Nunc maxisorp), que se sellaron y dejaron durante la noche a 4ºC.

El día del ensayo, la disolución del sustrato se desechó y los pocillos de las placas de ensayo se lavaron una vez con PBST (PBS que contenía 0,05% v/v Tween 20) y una vez con Hepes 50 mM pH7,4.

Se diluyeron los compuestos de ensayo con 10% sulfóxido de dimetilo (DMSO) y se transfirieron 25 \mul de compuesto diluido a los pocillos en las placas de ensayo lavadas. Los pocillos control "total" contenían DMSO al 10% en lugar del compuesto. Se añadieron 25 microlitros de cloruro de manganeso (II) 40 mM que contenía 8 \muM adenosina-5'-trifosfato (ATP) a todos los pocillos de ensayo, excepto a los pocillos control "blanco" que contenían cloruro de manganeso (II) sin ATP. Para empezar las reacciones, se añadieron alícuotas (50\mul) de enzima recién diluida a cada pocillo y las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 20 minutos. El líquido luego se desechó y los pocillos se lavaron dos veces con PBST. Se añadieron cien microlitros de anticuerpo IgG anti-fosfotirosina de ratón (Upstate Biotechnology Inc. producto 05-321), diluidos en 1 en 6000 con PBST que contenía 0,5% p/v albúmina de suero bovino (BSA), a cada pocillo y las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente antes de desechar el líquido y lavar los pocillos dos veces con PBST. Se añadieron cien microlitros de anticuerpo Ig anti-ratón de oveja unido a (HRP) de peroxidasa de rábano picante (producto Amersham NXA 931), diluido en 1 en 500 con PBST que contenía 0,5% p/v albúmina de suero bovino (BSA), a cada pocillo y las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente antes de desechar el líquido y lavar los pocillos dos veces con PBST. Cien microlitos de disolución de 2,2'-azino-bis(ácido 3-etilbenztiazolina-6-sulfónico) (ABTS) recién preparada usando una tableta de ABTS (Boehringer 1204 521) en 50 ml de tampón de fosfato-citrato 50 mM recién preparado pH5,0 + 0,03% perborato sódico (hecho con una cápsula de tampón de fosfato-citrato con perborato sódico (PCSB) (Sigma P4922) por 100 ml de agua destilada), se añadieron a cada pocillo. Las placas luego se incubaron durante 20 a 60 minutos a temperatura ambiente hasta que el valor de la densidad óptica de los pocillos control "total", medida a 405 nm utilizando un espectrofotómetro para lectura de placas, fue aproximadamente 1,0. Los valores control "blanco" (sin ATP) y "total" (sin compuesto) se utilizaron para determinar el intervalo de dilución del compuesto de ensayo que proporcionaba un 50% de inhibición de la actividad enzimática.

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(b) Ensayo in vitro de proliferación HUVEC

Este ensayo determina la capacidad de un compuesto de ensayo de inhibir la proliferación estimulada por el factor de crecimiento de células endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC).

Se aislaron células HWEC en MCDB 131 (Gibco BRL) + 7,5% v/v suero de ternero fetal (FCS) y se dispusieron en placas (en pasaje 2 a 8), en MCDB 131 + 2% v/v FCS + 3 pg/ml heparina + 1\mug/ml hidrocortisona, a una concentración de 1000 células/pocillo en placas de 96 pocillos. Después de un mínimo de 4 horas, se dosificaron con VEGF (3 ng/ml) y compuesto. Los cultivos se incubaron luego durante 4 días a 37ºC con 7,5% CO_{2}. En el día 4, los cultivos se pulsaron con 1 \muCi/pocillo de timidina tritiada (producto Amersham TRA 61) y se incubaron durante 4 horas. Las células se cosecharon usando un cosechador de placas de 96 pocillos (Tomtek) y luego se ensayaron para incorporación de tritio con un contador de placas Beta. La incorporación de radiactividad en células, expresada como cpm, se usó para medir la inhibición de la proliferación estimulada por el factor de crecimiento por parte de los compuestos. Esta metodología se usó también para evaluar los efectos del compuesto frente al crecimiento HLJVEC basal (es decir, proliferación celular endotelial en MCDB 131 + 2% v/v FCS + 3\mug/ml heparina + 1\mug/ml hidrocortisona sin la adición de VEGF exógeno).

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(c) Modelo de enfermedad con tumor sólido in vivo

Este ensayo mide la capacidad de los compuestos para inhibir el crecimiento de tumores sólidos.

Se establecieron xenoinjertos de tumores CaLu-6 en el flanco de ratones atímicos hembra suizos nu/nu, por inyección subcutánea de 1x10^{6} Calu-6 células/ratón en 100 ul de una disolución 50% (v/v) de Matrigel en medio de cultivo libre de suero. Diez días después del implante celular, los ratones se asignaron a grupos de 8-10, como para lograr volúmenes promedio grupales comparables. Los tumores se midieron usando calibre de nonio y se calcularon los volúmenes como: (l x w) x \sqrt (l x w) x (\pi/6), donde l es el diámetro más largo y w el diámetro perpendicular al más largo. Los compuestos de ensayo se administraron oralmente una vez al día por un mínimo de 21 días, y los animales control recibieron el diluyente del compuesto. Los tumores se midieron dos veces por semana. El nivel de inhibición de crecimiento se calculó por comparación del volumen de tumor promedio del grupo control frente al grupo de tratamiento, usando una prueba T de Student y/o un Ensayo de suma de rangos Mann-Whitney. El efecto inhibidor del tratamiento con el compuesto se consideró significativo si p<0,05.

Una sal del maleato AZD2171 según se definió anteriormente se puede preparar por un procedimiento conocido aplicable a la preparación de compuestos relacionados químicamente. Dichos procedimientos incluyen, por ejemplo, aquellos ilustrados por la solicitud de patente internacional No. WO 00/47212, todos incorporados a la presente memoria por referencia. Dichos procedimientos también incluyen, por ejemplo, síntesis de fase sólida. Los materiales de partida necesarios pueden obtenerse por procedimientos convencionales de química orgánica. La base libre de AZD2171 se puede preparar según cualquier procedimiento descrito en el documento WO00/47212, véase en particular el Ejemplo 240 del documento 00/47212. Como alternativa, los materiales de partida necesarios pueden obtenerse por procedimientos análogos a los ilustrados, que están dentro de la experiencia habitual de un químico orgánico.

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Los siguientes procedimientos (a) (b) y (c) constituyen otras características de la presente invención.

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Síntesis de la Forma A de la sal del maleato AZD2171

(a) Dicho procedimiento provee otro aspecto de la presente invención y comprende, por ejemplo, las etapas de:

(i)

disolver la base libre AZD2171 en un disolvente orgánico para formar una disolución;

(ii)

añadir una disolución acuosa de ácido maleico o añadir una disolución de ácido maleico en un disolvente orgánico;

(iii)

permitir que ocurra la nucleación espontánea;

(iv)

opcionalmente aislar la mezcla cristalina de las Formas A y B de AZD2171 así formadas;

(v)

suspender la mezcla en un disolvente, por ejemplo metanol, hasta que todo el maleato AZD2171 se convierta en la Forma A, (según pueda determinarse por la difracción de rayos x de polvo), por ejemplo esto puede tomar 4 días; y

(vi)

aislar el sólido cristalino así formado.

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(b) Otro de dichos procedimientos provee otro aspecto de la presente invención y comprende, por ejemplo, las etapas de:

(i)

disolver la base libre AZD2171 en un disolvente orgánico para formar una disolución;

(ii)

añadir una disolución acuosa de ácido maleico o añadir una disolución de ácido maleico en un disolvente orgánico;

(iii)

obtener una disolución, por ejemplo calentando o añadiendo más disolvente, y añadiendo una semilla de la Forma A del maleato AZD2171 para iniciar la cristalización de la Forma A del maleato AZD2171; y

(iv)

aislar el sólido cristalino así formado.

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Para la parte (i) de (a) y (b) la mezcla puede, si se requiere, calentarse hasta reflujo hasta que ocurra una disolución. Alternativamente, la mezcla puede, por ejemplo, calentarse hasta una temperatura inferior a la temperatura de reflujo del disolvente, siempre que haya ocurrido la disolución de más o menos todo el material sólido. Se ha de apreciar que se pueden eliminar pequeñas cantidades de material insoluble por filtración de la mezcla calentada.

Para la parte (i) de (a) y (b), el disolvente orgánico es preferiblemente un alcohol, por ejemplo metanol o isopropanol.

Para la parte (Ii) de (a) y (b), el disolvente orgánico es preferiblemente un alcohol, por ejemplo metanol.

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(c) Síntesis de la Forma B de la sal del maleato AZD2171

Dicho procedimiento provee otro aspecto de la presente invención y comprende, por ejemplo, las etapas de:

(i)

disolver el maleato AZD2171 en un disolvente orgánico para formar una disolución;

(ii)

añadir la disolución a un disolvente en el que el maleato AZD2171 tiene una solubilidad inferior a la que tiene en NMP, por ejemplo tolueno o acetato de etilo;

(iii)

entonces ocurre la cristalización de la Forma B del maleato AZD2171; y

(iv)

aislar el sólido cristalino así formado.

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En (c) un disolvente orgánico preferido es un disolvente altamente solubilizante tal como 1-metil-2-pirrolidinona.

Para la parte (i) de (c) la mezcla puede, si se requiere, calentarse hasta reflujo hasta que ocurra una disolución. Alternativamente, la mezcla puede, por ejemplo, calentarse hasta una temperatura inferior a la temperatura de reflujo del disolvente, siempre que haya ocurrido la disolución de más o menos todo el material sólido. Se ha de apreciar que se pueden eliminar pequeñas cantidades de material insoluble por filtración de la mezcla calentada.

En (a), (b) y (c) anteriores, el sólido cristalino así formado puede aislarse por cualquier método convencional, por ejemplo por filtración.

La invención se ilustrará a continuación mediante los siguientes Ejemplos, datos y Figuras no limitativos en los que, a menos que se indique lo contrario:

(i)

las evaporaciones se llevaron a cabo por evaporación giratoria al vacío y los procedimientos del tratamiento final se llevaron a cabo después de retirar los sólidos residuales tales como agentes de secado por filtración;

(ii)

los rendimientos se proporcionan sólo para ilustrar y no son necesariamente los máximos que se pueden conseguir;

(iii)

los puntos de fusión están sin corregir y se determinaron usando un Mettler DSC820e;

(iv)

las estructuras de los productos finales de fórmula I se confirmaron por resonancia magnética nuclear (RMN) (generalmente de protón) y técnicas de espectroscopía de masas; los valores de los desplazamientos químicos de resonancia magnética de protón se determinaron en la escala delta y las multiplicidades de los picos se muestran como sigue: s, singlete; d, doblete; t, triplete; m, multiplete; a, ancho; c, cuadruplete, quin, quintuplete; todas las muestras se pasan por un Bruker DPX 400 MHz a 300K en d_{6}-DMSO, 16 exploraciones, tiempo de repetición de pulso 10 segundos;

(v)

los intermedios en general no se caracterizaron totalmente y se evaluó la pureza por análisis RMN; y

(vi)

se han utilizado las abreviaturas siguientes:

\quad

DMSO sulfóxido de dimetilo

\quad

NMP 1-metil-2-pirrolidinona

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Ejemplo 1 Forma A del maleato AZD2171

En una atmósfera inerte de nitrógeno se suspendió la base libre bruta de AZD2171 (4,52 g), (preparada, por ejemplo, como se describe en el Ejemplo 240 del documento WO 00/47212) con isopropanol (58,8 mL). La mezcla se calentó a reflujo durante 15 minutos para proporcionar una disolución negra clara. La mezcla se enfrió hasta 75ºC y se añadió carbón (0,226 g). La mezcla se volvió a calentar hasta reflujo y se mantuvo a reflujo durante una hora. La mezcla luego se filtró en caliente. La torta de filtro del carbón se lavó con isopropanol caliente (9 mL). La temperatura del filtrado y el lavado combinado se ajustó hasta 55ºC y se añadió una disolución prefiltrada de ácido maleico (1,173 g) en agua (2,71 mL) gota a gota durante 5 minutos. La base libre bruta, que previamente se cristalizó, se disolvió durante la adición. Se añadió un lavado en agua (0,9 mL). La mezcla se mantuvo a 55ºC durante 15 minutos y se añadió una semilla de la Forma A del maleato AZD2171 (0,023 g). La mezcla se mantuvo a 55ºC durante 4 horas. Durante el mantenimiento de 4 horas, la cristalización se estableció. Se enfrió la mezcla hasta 0ºC durante 8 horas. La mezcla se mantuvo a 0ºC durante un mínimo de 8 horas. La mezcla se filtró. La torta del filtro se lavó con isopropanol (9 mL). El sólido se secó en un horno de vacío a 50ºC para dar la Forma A del maleato 4-([4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il]oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina.

Espectro ^{1}H RMN: (400 MHz, DMSO): 1 1,36 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,18 (d, 1H), 7,01 (d, 1H), 6,25 (s, 1H), 6,04 (s, 2H), 4,33 (t, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,26-3,3,70 (b, 4H), 2,44, (s, 3H), 2,24 (m, 2H), 2,02 (m, 4H).

p.f.: Análisis DSC: inicio de fusión a 198,3ºC y un pico a 200,08ºC.

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Ejemplo 2 Forma A del maleato AZD2171

En una atmósfera inerte de nitrógeno se suspendió la base libre bruta de AZD2171 (23,0 g), (preparada, por ejemplo, como se describe en el Ejemplo 240 del documento WO 00/47212) en metanol (223 mL) en el recipiente 1. La mezcla se desgaseó manteniendo a vacío y luego liberando el vacío con nitrógeno. Esto se repitió cinco veces. La suspensión luego se calentó hasta reflujo y se mantuvo así durante 15 minutos para dar una disolución de color pardo oscuro. La disolución se enfrió hasta 60ºC y luego se filtró a través de una almohadilla Celite® (4,00 g) en el recipiente 2. La almohadilla de Celite® se lavó con metanol caliente (60ºC) (78 mL), el filtrado se pasó nuevamente al recipiente 2.

Al recipiente 1 se le cargó luego metanol (111 mL), que se enfrió hasta 0ºC. Al recipiente 1 se le cargó luego ácido maleico (5,50 g) y la mezcla se agitó a 0ºC durante 15 minutos hasta que todo el ácido maleico se había disuelto.

Los contenidos del recipiente 1 se cargaron luego al recipiente 2 a través de un filtro en línea mientras se mantenía la temperatura por encima de 52ºC. Se añadió una semilla de la Forma A del maleato AZD2171 (0,045 g) al recipiente 2 a 55ºC y la mezcla se mantuvo a 55ºC durante 3 horas. La mezcla se enfrió luego hasta 40ºC durante 7 horas, después se enfrió más hasta -5ºC durante 6 horas. El sólido se filtró y se lavó con metanol (100 mL) a -5ºC. El producto se secó en un horno de vacío durante 24 horas para dar la Forma A del maleato 4-([4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il]oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina.

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Ejemplo 3 Forma B del maleato AZD2171

La Forma A del maleato ZD2171 (2,31 g) se disolvió en NMP tibio (50ºC). A esta disolución se añadió gota a gota tolueno (23 ml) en el transcurso de 2 minutos a temperatura ambiente. El material originalmente precipitó como un sólido, luego se transformó en un aceite y después en un sólido nuevamente. Después de agitar durante 10 minutos a temperatura ambiente, el sólido se filtró y se lavó con tolueno (10 ml). El sólido se secó en un horno de vacío a temperatura ambiente durante una noche para dar la Forma B del maleato 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina.

p.f.: Análisis DSC: inicio de fusión a 194,43ºC y un pico a 195,97ºC

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Breve descripción de las figuras

Figura 1: Termogramas DSC y TGA para el monohidrato de la base libre AZD2171 - con temperatura en ºC trazados en el eje horizontal y flujo térmico/% pérdida de peso en el eje vertical

Figura 2: Patrón de difracción de rayos x de polvo para la base libre AZD2171 - con los valores 2\theta trazados en el eje horizontal y la intensidad lineal relativa (recuento) trazada en el eje vertical.

Figura 3: Patrón de difracción de rayos x de polvo para la base libre AZD2171 monohidratada y calentada hasta 100ºC- con los valores 2\theta trazados en el eje horizontal y la intensidad lineal relativa (recuento) trazada en el eje vertical.

Figura 4: Patrón de difracción de rayos x de polvo para la base libre AZD2171 micronizada - con los valores 2\theta trazados en el eje horizontal y la intensidad lineal relativa (recuento) trazada en el eje vertical.

Figura 5: Patrón de difracción de rayos x de polvo para la Forma A del maleato AZD2171 - con los valores 2\theta trazados en el eje horizontal y la intensidad lineal relativa (recuento) trazada en el eje vertical.

Figura 6: Termograma DSC para la Forma A del maleato AZD2171 - con temperatura en ºC trazada en el eje horizontal y flujo de calor endotérmico (milivatios) (mW)) trazado en el eje vertical

Figura 7: Isotermo de Sorción de Vapor de la Forma A del Maleato AZD2171 a 25ºC - con humedad relativa (HR) diana (%) trazado en el eje horizontal y cambio en masa seca (%) trazado en el eje vertical.

Figura 8: Patrón de difracción de rayos x de polvo para la Forma B del maleato AZD2171 - con los valores 2\theta trazados en el eje horizontal y la intensidad lineal relativa (recuento) trazada en el eje vertical.

Figura 9: Termograma DSC para la Forma B del maleato AZD2171 - con temperatura en ºC trazados en el eje horizontal y flujo de calor endotérmico (milivatios) (mW)) trazado en el eje vertical

Figura 10: Patrones de difracción de rayos x de polvo para el experimento de suspensión del maleato AZD2171 - con los valores 2\theta trazados en el eje horizontal y la intensidad lineal relativa (recuento) trazada en el eje vertical.

Detalles de las técnicas utilizadas Difracción de rayos x de polvo TABLA 5

8

Los espectros de difracción de rayos x de polvo se determinaron preparando una muestra de la sal cristalina en pastillas de monocristal de silicio (SSC) Siemens y extendiendo la muestra en una capa fina con ayuda de un portaobjetos. La muestra se hizo girar a 30 revoluciones por minuto (para mejorar la estadística del recuento) y se irradió con rayos X generados con un tubo de cobre de foco fino largo funcionando a 40 kV y 40 mA con una longitud de onda de 1,5406 angstroms. La fuente de rayos X colimada se pasó por un conjunto de rendijas de divergencia variables automáticas de V20 y la radiación reflejada se dirigió por una rendija antidispersión de 2 mm y una rendija del detector de 0,2 mm. La muestra se expuso durante 1 segundo por 0,02 grados de incremento 2-zeta (modo de barrido continuo) a lo largo del intervalo de 2 grados a 40 grados 2-zeta en el modo zeta-zeta. El tiempo de registro fue 31 minutos y 41 segundos. El instrumento estaba equipado con un contador de centelleo como detector. El control y captura de datos se hizo mediante una estación de trabajo Dell Optiplex 686 NT 4.0 funcionando con el software Diffract+. Las personas con experiencia en la técnica de difracción de rayos x de polvo se darán cuenta de que la intensidad relativa de los picos puede verse afectada, por ejemplo, por granos con un tamaño superior a 30 micrómetros y relaciones de aspecto no unitario, que pueden afectar el análisis de las muestras. El experto en la técnica también se dará cuenta de que la posición de las reflexiones puede verse afectada por la altura precisa en la que yace la muestra en el difractómetro y la calibración cero del difractómetro. La planaridad de la superficie de la muestra puede también tener un pequeño efecto. En consecuencia, los datos del patrón de difracción presentados no deben tomarse como valores absolutos.

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Tamizado/Micronización

Se tamizó la base libre AZD2171 antes de micronizar usando un tamiz de acero inoxidable de 1 mm, donde la base se utiliza para la recolección del producto y para alimentación manual directamente al micronizador. Se tamizaron aproximadamente 7,5 g de base libre AZD2171.

Se utilizó un micronizador limpio y revestido S/S de 2''.

Índice de alimentación manual: aproximadamente 2/3 g por minuto.

Intervalo de presión de aire para trituración 10/20 psi (0,67/1,33 atmósferas).

Intervalo de presión de aire venturi 20/25 psi (1,33/1,67 atmósferas).

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Sorción dinámica de vapor

Instrumento analítico: Analizador de Sorción de Vapor Dinámica Measurements Systems. Se sometieron aproximadamente 5 mg de material contenido en un soporte de cuarzo a 25ºC a nitrógeno humidificado en las siguientes humedades relativas (HR): 0, 20, 40, 60, 80, 95, 80, 60, 40, 20, 0% HR por duplicado.

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Calorimetría de barrido diferencial Instrumento analítico: Mettler DSC820e

Típicamente menos de 5 mg de material contenido en un recipiente de aluminio de 40 \mul equipado con una tapa perforada se calentaron en el intervalo de temperatura de 25ºC a 325ºC a un índice de calentamiento constante de 10ºC por minuto. Se usó un gas de purga que emplea nitrógeno - caudal de 100 ml por minuto.

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Análisis termogravimétrico Instrumento analítico: Mettler TG851

Típicamente entre 3 y 12 mg del material contenido en un crisol de óxido de aluminio de 70 \mul se calentó en el intervalo de temperatura de 25ºC a 325ºC a un índice de calentamiento constante de 10ºC por minuto. Se usó un gas de purga que emplea helio - caudal de 50 ml por minuto.

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Contenido de agua Karl Fischer Instrumento analítico: Mitsubishi Moisture Meter CA-05

Típicamente se usaron aproximadamente 50 mg de material.

Claims (14)

1. Una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina, en la Forma A cristalina, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con por lo menos un pico en 2-teta = 21,5º más o menos 0,5º 2-teta o en 2-teta = 16,4º más o menos 0,5º 2-teta.

2. Una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina, en la Forma A cristalina, según la reivindicación 1 donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con por lo menos dos picos específicos en 2-teta = 21,5º y 16,4º, en donde dichos valores pueden ser más o menos 0,5º 2-teta.

3. Una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-S-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidan-1-il)propoxi)quinazolina, en la Forma A cristalina, según la reivindicación 1, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con picos específicos en 2-teta - 21,5, 16,4, 24,4, 20,7, 25,0, 16,9, 12,1, 22,2, 17,4 y 17,6º, donde dichos valores pueden ser más o menos 0,5º 2-teta.

4. Una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina, en la Forma A cristalina, según la reivindicación 1, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo sustancialmente igual al patrón de difracción de rayos x que se muestra en la Figura 5.

5. Una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina, en la Forma B cristalina, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de de rayos x de polvo con por lo menos un pico en 2-teta = 24,2º más o menos 0,5º 2-teta o en 2-teta = 22,7º más o menos 0,5º 2-teta.

6. Una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina, en la Forma B cristalina, según la reivindicación 5, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con por lo menos dos picos específicos en 2-teta = 24,2º y 22,7º en donde dichos valores pueden ser más o menos 0,5º 2-teta.

7. Una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina, en la Forma B cristalina, según la reivindicación 5, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo con picos específicos en 2-teta = 24,2, 22,7, 15,7, 12,0, 27,1, 25,0, 17,7, 15,0, 23,1 y 12,6º, donde dichos valores pueden ser más o menos 0,5º 2-teta.

8. Una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina, en la Forma B cristalina, según la reivindicación 5, donde dicha sal tiene un patrón de difracción de rayos x de polvo sustancialmente igual al patrón de difracción de rayos x que se muestra en la Figura 8.

9. Una composición farmacéutica que comprende una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina en la Forma A cristalina, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en asociación con un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Una composición farmacéutica que comprende una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina en la Forma B cristalina, según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, en asociación con un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

11. Un procedimiento para la preparación de una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina en la Forma A cristalina, según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende:

(i)

disolver la base libre de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina en un disolvente orgánico para formar una disolución;

(ii)

añadir una disolución acuosa de ácido maleico o añadir una disolución de ácido maleico en un disolvente orgánico;

(iii)

permitir que ocurra la nucleación espontánea;

(iv)

suspender la mezcla en un disolvente hasta que todo el maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina se transforma en la Forma A; y

(v)

aislar el sólido cristalino así formado.

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12. Un procedimiento para la preparación de una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina en la Forma A cristalina, según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende:

(i)

disolver la base libre de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina en un disolvente orgánico para formar una disolución;

(ii)

añadir una disolución acuosa de ácido maleico o añadir una disolución de ácido maleico en un disolvente orgánico;

(iii)

obtener una disolución y añadir una semilla de la Forma A del maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina para iniciar la cristalización de la Forma A del maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina; y

(iv)

aislar el sólido cristalino así formado.

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13. Un procedimiento para la preparación de una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina en la Forma B cristalina, según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, que comprende:

(i)

disolver maleato de 4-((4-fluora-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidia-1-il)propoxi)quinazolina en NMP;

(ii)

añadir una disolución a un disolvente en el que el maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina tiene una solubilidad inferior que en NMP;

(iii)

luego ocurre la cristalización de la Forma B del maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina; y

(iv)

aislar el sólido cristalino así formado.

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14. Uso de una sal de maleato de 4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il)oxi)-6-metoxi-7-(3-(pirrolidin-1-il)propoxi)quinazolina según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 en la elaboración de un medicamento para uso en la producción de un efecto antiangiogénico y/o reductor de la permeabilidad vascular en un animal de sangre caliente tal como un ser humano.