TWI339119B - 4-((4-fluoro-2-methyl-1h-indol-5-yl)oxy)-6-methoxy-7-(3-pyrrolidin-1-yl)propoxy)quinazoline and composition,preparation,and use thereof - Google Patents

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1339119 九、發明說明： T· 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於AZD2171馬來酸鹽，特定結晶形式的 ’ AZD2171馬來酸鹽，其製備方法，含此等化合物作為活性 成分的醫藥組合物，其在製成藥物供於溫血動物如人產生 抗血管發生及/或降低血管滲透性上的用途，及其在治療伴 有血管發生及/或血管滲透性增高的病情之方法上的用途。 【先前技術】 正常的血管生成在包括胚胎發育、傷口癒合及數種女性 生育功能因素的過程上扮演重要角色。非必需的或病理性 的也管生成伴發各種及病情況，包括糖尿病性視網膜病 變' 牛皮癬、癌、類風濕關節炎、動脈粥樣硬化、卡普氏 肉瘤（Kaposi's sarcoma)及血管瘤（Fan et al·，1995，Trends

Pharmacol. Sci. 16: 57-66; Folkman, 1995, Nature Medicine 1: 27-3 1)。血管滲透性的改變被認為在正常及病理生理過 程上扮演角色（Cullinan-Bove et al, 1993，Endocrinology φ 133: 829-837; Senger et al, 1993, Cancer and Metastasis Reviews，12: 302-324)。現已證實有數種具活體外促進内否 細胞生長活性的多肽’包括酸性及鹼性成纖維細胞生長因 子（aFGF & bFGF)及血管内皮生長因子（Vegf)。藉由其受 體的有限製的表達，VEGF生長因子活性與FGFs的生長因子 活性相比，對内皮細胞比較有特異性。最近的研就證實 VEGF為正常及病理性血管生成的重要刺激器（stimulat〇r) (Jakerman et al，1993, Endocrinology, 133: 848-859; Kolch 98263.doc 1339119 et al, 1995, Breast Cancer Research and Treatment, 36: r 13 9-155)及血管滲透性刺激器（c〇nn〇iiy et al, 1989, J. Biol. . Chem· 264: 20017-20024)。以抗體使VEGF螯合所產生的 VEGF活性的拮抗作用可導致腫瘤生長的抑制et al， 1993, Nature 362: 841-844)。 受體酪胺酸激酶（RTKs)在生化信號之跨細胞漿膜的傳遞 上是重要的。此類跨膜分子的特點是其係由細胞外配位體 結合域經由漿膜的節段（segment)聯於細胞内齡胺酸激酶域 · 構成。配位體結合於受體上導致對與受體有關的酪胺酸激 酶活性受刺激’從而導致受體及其他細胞内分子的磷酸 化。酪胺酸磷酸化的改變引起一聯串信號從而產生各種細 胞反應。現在已證實，以胺基酸排序界定而言，至少有十 九種不同的RTK次系，此等次系之一是由fms樣酪胺酸激酶 受體，Flt-Ι ’含激酶插入域的受體，KDR(也稱作Flk-Ι)， 及另一種fms樣酪胺酸激酶受體，Flt-4，所構成。現已證實 此二種相關的RTKs，Flt-Ι及FU-4，對結合於VEGF上有高 籲 親合性（De Vries et al，1992, Science 255: 989-991; Terman et al，1992，Biochem. Biophys. Res· Comm. 1992，187: 1579-15 85)。VEGF之結合於不同源細胞所表達的受體上因 細胞蛋白質的酪胺酸磷酸化情況及鈣通量而改變。 VEGF是維管生成（vascu〖0genesis)及血管發生的關鍵性 刺激。此細胞因子藉誘發内皮細胞增殖、蛋白酶表達及移 動、導致維管發芽表型（vascular sprouting phenotype)及之 後之細胞基體形成（organization)而生成微管（Keck, P.J.， 98263.doc 1339119

Hauser, S.D., Krivi, G., Sanzo, K., Warren, T., Feder, J., and -Connolly, D.T., Science (Washington DC), 246: 1309-1312, ^ 1989; Lamoreaux, W. J., Fitzgerald, M.E., Reiner, A., Hasty, K.A., and Charles, S.T., Microvasc. Res., 55: 29-42, 1998; Pepper, M.S., Montesano, R., Mandroita, S.J., Orci, L. and Vassalllo, J.D., Enzyme Protein, 49: 138-162, 1996) ° it匕外· VEGF還引起明顯的血管滲透（Dvorak, H.F.，Detmar, M.， Claffey, K.P., Nagy, J.A. van de Water, L., and Senger, D.R., φ (Int. Arch. Allergy Immunol., 107: 233-235, 1995; Bates, D.O., Healld , R.I., Curry, F.E. and Williams, B.J. Physiol. (Lond.)，533: 263-272, 2001)，促進高滲透的不成熟的血管 網，此為病理性血管發生的特點。 現已知單獨KDR之活化即足以促進對VEGF的所有主要 表型反應，包括内皮細胞增殖，移動及存活，及血管滲透 性的誘發（Meyer，M,，Clauss，M.，Lepple-Wienhues，A.， Waltenberger, J., Ausgustin, H. G., Ziche, M., Lanz., C., Buttner, # M., Rziha, H-J., and Dejio, C., EMBO J., 18: 363-374, 1999; Zeng, H., Sanyal., S. and Mukhopadhyay, D., J. Biol. Chem., 276: 32714-32719, 2001； Gille, H., Kowsalski, J., Li, B., LeCouter, J., Moffat, B. Zioncheck, T.F., Pelletier, N. and Ferrara, N·，I. Biol. Chem., 276: 3222-3230, 20001)。 抑制VEGF效果的化合物在治療伴有血管發生及/或血管 /參透性增南的疾病如癌（包括白企病、多發性骨趙瘤及淋巴 瘤）’糖尿病’牛皮癬，類風濕關節炎，卡普氏肉瘤，血管 98263.doc 1339119 瘤，急性及慢性腎臟病，動脈粥樣化，動脈再狹窄，自體 免疫疾病，急性發炎，過度傷疤生成及粘連，子宮内膜異 位，淋巴水腫，功能不良性子宮出血及包括黃斑退化在内 的伴發視網膜血管增生的眼科疾病上是有價值的。 W0 00/47212說明VEGF受體酪胺酸激酶的抑制劑喹唑啉 衍生物。WO 00/47212例證了化合物AZD2171(見實例24〇) ，此化合物為式I之4-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基）氧基）冬 甲氧基-7_(3-(〇比洛烧-1-基）丙氧基）喧π坐琳。 Η

(I) 如WO 00/47212所述，AZD2171於活體外⑷酶及（b) HUVEC鑑定顯示有極佳活性。於酶鐘定申，AZD21 71抑制 分離出的KDR(VEGFR-2)及Flt-l(VEGFR-l)酪胺酸激酶活 · 性的IC5〇值分別為<2 nM及5±2 nM。AZD2171有效地抑制 VEGF刺激所致之内皮細胞增生（於HUVEC鑑定其IC50值為 0.4±0.2 nM)’但濃度大到>1250倍時並不抑制基底内皮細胞 增生（ICw值>500 nM)。後述於活體内（c)實體腫瘤型之異種 移植Calu-6腫瘤之生長，在每天口服1.5、3及6毫克 AZD2171/公斤/天治療28天後，只抑制49%“，69%··*及 91%…(ρ“<〇.〇ι，ρ·“<〇·〇〇〇ι ; —尾 t 試驗）。 98263.doc 1339119 更文&形式的醫藥活性的化合物，例如更安定的晶體形 式，較佳是供調配及以商業尺度生產的。這是因為所用的 形式越安定，其在調配過程中轉化成另一形式的危險越 v 低。而其越能提供終調配物的可預期性，如錠的溶解度， ’舌丨生成分的生物利用率，就越大。使用較安定形式的活性 成分更易於控制調配物的物理性質。 AZD2171自由態鹼4-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基）氧 基）-6-甲氧基-7-(3-(吡咯烷-1-基）丙氧基）喹唑啉是周邊條_ 件下的單水合晶體。差示掃描量熱法（DSC)分析是以後述方 法進行，顯示於95 C至170°C間因有水分喪失及炫解的關係 有較大吸熱。熱重力（TGA)分析（詳情後述）顯示於8〇〇c及 11 5 c間有4.02%的重量損失。Karl Fischer水分析（詳情後述） 有3.9%圖示’這表示所有的重量損失是原於水的損失。 應了解到’ DSC之起始/峰溫度值可因所用機械及樣品而 有些許變化，所以所引各值不能視作是絕對的。 AZD2 1 71自由態驗之特點在提供至少一種以cuKa放射所 鲁 測定的2Θ值：8.3及20.8 ° AZD2171自由態鹼之特點在提供 X-射線粉衍射型，如圖2所示。其最主要的峰如下表1所示。 98263.doc 表1:AZD2171自由態鹼之十種最主要的χ·射線粉衍射峰 2-Θ角 強度計數 相對強度 18.287 100 Vs 20.807 66.7 Vs 27.277 48,9 Vs 一 23.370 42.8 Vs 14.684 Γ 39.8 Vs 25.070 37.6 Vs 13.966 32.2 Vs 21.711 26.6 Vs 22.898 23.1 Vs 26.790 22.9 Vs Vs=彳艮強

現已發現’在AZD2 1 71自由態絵·脫水時，例如加熱到1 〇〇 °C時，樣品變成無定形（圖3)並不再水合化而以後也保持不 定形β如果用AZD2171自由態鹼調配成醫藥組合物，這會 是报有問題的，因為AZD2 171自由態鹼在有些加工過程 中’如使微粒變小（如磨）、批量藥物乾燥、調配、製造中，_ 會脫水。為要將AZD2171自由態鹼調配成醫藥組合物，於 某些階段會需使微粒變小，而這會有脫水的危險，從而有 生成無定形物質的危險。這方面的研究是，將單水合 AZD2 17 1自由態鹼微粒化然後再作分析觀察無定形物質。 圖4顯示在AZD2171自由態鹼微粒化過程中確實有無定形 物貝生成。這由圖4之峰之變寬及無定形’馬它峰，可看出—見 圖4。無定形或半無定形AZD2171自由態鹼會產生製造問題 及缺乏生物利用率。 98263.doc -10- 本發明的主題即在確定他2171之另外形式，其係不同 於自由態鹼的及有改良的固態性質的形式。 不同形式的例子是AZD2171的鹽。w〇 〇〇/47212說明本發 明化合物的醫藥上可接受的鹽可包括本發明化合物的酸加 成鹽’此等化合物的驗性足生成此種鹽。此類酸加成鹽據 稱包括與能提供醫藥上可接受的陰離子的無機或有機酸所 生成的鹽，如與幽素化氫，特別是鹽酸或氫溴酸或與硫酸 或％酸，或與二氟醋酸、檸檬酸或馬來酸所形成的鹽。此 外，WO 00/47212並稱在該發明化合物的酸性足以與提供醫 藥上可接受的陽離子的無機或有機鹼生成醫藥上可接受的 鹽。據稱此類與無機或有機鹼所生成的鹽包括鹼金屬鹽， 如鈉或鉀鹽，鹼土金屬鹽，如鈣或鎂鹽，銨鹽或與甲基胺、 —甲基胺、三甲基胺、六氫吡啶、嗎福啉或參（2·羥基乙基） 胺所成的鹽。 WO 00/472 12中較佳的鹽是鹽酸鹽及氫溴酸鹽，尤其是鹽 酸鹽。 WO 00/472 12並未說明特定化合物的特定鹽有令人驚奇 的有益性質。 【發明内容】 發明人等意外令人驚奇地發現AZD2 171的馬來酸鹽為 AZD2171的有益的安定形式，相較於自由態鹼及其他試驗 過的鹽乃具有改良的固態性質。 AZD2 171馬來酸鹽易於結晶，為高度晶體，非收濕性的， 並具有藥物與相對離子1:1的再現性化學計量。 98263.doc ^39119 現已製成數種AZD2171鹽，其中七種是晶體：丙二酸鹽， 丁二酸鹽，富馬酸鹽，馬來酸鹽，酒石酸鹽，己二酸鹽及 頻果酸鹽。已就此7種鹽的固態性質作過試驗，其結果如表 2所示：

丙二酸鹽 丁二酸鹽 富馬酸鹽 馬來緩鹽 酒石酸鹽 己二酸鹽 蘋果酸鹽 是 是 是 是 是 1:0.63 1:0.5 1:1 1:0.75 1:0.75 11.4 3.5 0.4 9.3 是 否 否 否 否 否 是 ^3 ^2 ^3 ^2 ^1 ^3 藥物：相對離子化學計量比來自iH NMR譜數據 嶋相對濕度（RH)時之水分含量1蒸汽 及水吸收則重力學分析（TGA)所得水合彳_ (__烟 由差示掃描計熱(DSC)所得多形態證明 AZD2171馬來酸鹽相較於其他的鹽好得令人驚奇，因為 這可結晶的7種鹽中只有馬來酸鹽是非收濕性的鹽，且能高 度結晶，並有藥物：相對離子為1:1的再現性化學計量比。 ㈣2171馬來酸鹽實質上不含不定形物質，預期其較 AZD2171自由態鹼易於調配’提供多種投藥結果。所謂"實 質上不含不定形物質，，一詞是指不定形物質的含量少於 10%，較佳是少於5。/。，更佳是少於2%。 、 AZD21?1馬來酸鹽是非收濕性的，這可避免在例如微教 化過程中預防或減少因活性成分重量變化而發生的問題。 98263.doc •12· 1339119 根據本發明’提供一種AZD2 1 71馬來酸鹽。 AZD2171馬來酸鹽有A及b二種結晶形式。 根據本發明，提供第一晶體形式（A型）之AZD2171之馬來 酸鹽。 A型AZD2171馬來酸鹽之特點在於其產生215及16 4中 的至少一個2Θ值，此值是用CuKa放射測定。八型AZD2m 馬來酸鹽的特點在於提供基本上如圖5所示的χ_射線粉衍 射型。十種最主要的峰如表3所示： 表3 Α型AZD2171馬來酸鹽之十種最主要的χ射線粉衍射峰

17.627

Vs =很強 根據本發明’提供第—晶體形式型）之AZD2171之馬來 S文鹽’其中該鹽之X-射線粉衍射型於約2-θ=21.5。有至少一 特異峰。 根據本發明’提供第—晶體形式型）之ΑΖ而7工之馬來 98263.doc -13- 1339119 酸鹽’其中該鹽之χ·射線粉衍射型於約2_θ=16 有至少一. 特異♦ ^ 根據本發明’提供第一晶體形式（A型）之AZD2171之馬來 酸鹽’其中該鹽之X-射線粉衍射型於約2-θ=21.5。及16.4。有 至少二特異峰。 根據本發明’提供第一晶體形式（Α型）之AZD2 1 7 1之馬來 酸鹽，其中該鹽之射線粉衍射型於約2_0=2丨.5、16 4、 24’4、20.7、25.0、16.9、12.1 ' 22.2、17.4及 17.6。有特異鲁 峰。 零 根據本發明’提供第一晶體形式（Α型）之AZD2 1 71之馬來 西久瓜其中邊鹽之X-射線粉衍射型實質上與圖5所示之X-射線粉衍射型相同。 根據本發明’提供第一晶體形式（A型）之AZD2 171之馬來 ^ ^其中忒鹽之X-射線粉衍射型於2-θ=21.5。加或減0.5。 2-Θ有至少一個特異峰。 根據本發明，提供第一晶體形式（Α型）之AZD2 1 71之馬來籲 文|其中5玄鹽之X-射線粉衍射型於2-θ=16.4。加或減0.5。 2-Θ有至少一個特異峰。 根據本叙明，提供第一晶體形式（Α型）之AZD2 171之馬來 酉文獻，其中該鹽之Χ-射線粉衍射型於2-θ=21.5。加或減16.4。 2 θ有至》二個特異峰，其中該值可加或減m冬 把據本發明，提供第一晶體形式（A型）之AZD2 1 7 1之馬來 ^ 1其中邊鹽之X'射線粉衍射型於2-θ=21.5、16.4、24.4、 2〇·7、25.0、16 9 ' 12」、22 2、ΐ7 4及 I? 6。有特異峰其 98263.doc -14- 1339119 中該值可加或減0.5。2-Θ。 · 根據本發明，提供第一晶體形式（Α型）之AZD2171之馬來 酸鹽’其中該鹽之X-射線粉衍射型於2-θ = 16.4。有至少一個 特異峰。 根據本發明，提供第一晶體形式（Α型）之AZD2 171之馬來 酸鹽’其中該鹽之χ_射線粉衍射型於2_θ=21 5。及16 4。2_θ 有至少二個特異峰。 根據本發明，提供第一晶體形式（Α型）之AZD21 7 1之馬來籲 酸鹽’其中該鹽之X-射線粉衍射型於2-θ=21.5、16,4、24,4、 2〇’7、25’0、16.9、12.1、22.2、17‘4及 17.6。有特異峰 根據本發明，提供第一晶體形式（Α型）之AZD2I7I之馬來 酸鹽，其中該鹽之X-射線粉衍射型如圖5所示。 DSC分析顯示α型AZD2m馬來酸鹽為高熔固體，於 196‘9°C開始熔化於i98.8°C有峰（圖6)。 是以DSC*析顯示A型AZD2171馬來酸鹽為高熔固體，於 196.9°C開始熔化於約i98.8°C有峰。 β 根據本發明，&供第二晶體形式（Β型）之azd2 171之馬來 酸鹽。 B型之AZD21 71馬來酸鹽之特點在於提供至少一種以 CuKa放射測出的2Θ值之一 ：24 2及22 7。5型azd2丨71馬來 酸鹽之特點在於提供實質上如圖8所示之χ_射線粉衍射 型。十種主要的峰如表4所示： 98263.doc •15· 1339119 表4 B型AZD2171馬來酸鹽之十種最主要的χ_射線粉衍射峰 2-Θ角（2Θ) 強度計數 相對強度 24.156 100 Vs 22.740 84.3 Vs 15.705 64.0 Vs 11.995 63.7 Vs 27.087 60.9 Vs 25.032 56.8 Vs 17.724 37.7 Vs 15.044 35.4 Vs 23.102 34.5 Vs 12.625 34.2 Vs

Vs =很強 根據本發明提供第二晶體形（B型）之AZD2丨7丨馬來酸 鹽，其中s玄鹽於約2Θ=24·2。有至少一個特異峰之X射線粉 衍射型。 根據本發明提供第二晶體形（Β型）之AZD2ni馬來g 鹽’其中該鹽於約2Θ=22.7。有至少一個特異峰之又_射線搞 衍射型。 根據本發明提供第二晶體形（Β型）之AZD2ni馬來酸 鹽’其中該鹽㈣2Θ=24·2。及22’7°有至少二個特異峰之χ 射線粉衍射型。 根據本發明提供第二晶體形（Β型）之AZD2ni馬來越 鹽，其卡該鹽於約2Θ=24·2、22.7、丨ή"」”」” 98263.doc -16· 丨1339119 根據本發明提供第二晶體形（B型）之Αζ〇2丨71馬來酸 鹽，其中該鹽之X-射線粉衍射型實質上與圖8所示之χ_射線 粉衍射型相同。 根據本發明七供第二晶體形（Β型）之17 1馬來酸 鹽，其中該鹽於約2Θ=24.2。加或減〇·5。2-Θ有至少一個特異 峰之X-射線粉衍射型。 根據本發明提供第二晶體形（Β型）之AZD2171馬來酸 鹽，其中該鹽於約2Θ=22.7。加或減〇.5。2_θ有至少一個特異 峰之X-射線粉衍射型。 根據本發明提供第二晶體形（5型）之AZD2171馬來酸 鹽，其中該鹽於約2Θ=24.2。及22_7。有至少二個特異峰之χ_ 射線粉衍射型’其中該值可加或減〇 5。2_θ。 根據本發明提供第二晶體形（Β型）之aZD2171馬來酸 鹽’其甲該鹽於約 20 = 24.2、22.7、15.7、12.0、27.1、25 0、 !7·7、15.0、23.1及12.6°有特異峰之χ_射線粉衍射型，其中 該值可加或減0.5。2_θ。 根據本發明提供第二晶體形（Β型）之AZd2171馬來酸 鹽，其中該鹽於約2Θ=24·2。有至少一個特異峰之χ_射線粉 衍射型。 根據本發明提供第二晶體形（Β型）之AZd2171馬來酸 鹽，其中該鹽於約2Θ=22.7。有至少一個特異峰之χ_射線粉 衍射型。 根據本發明提供第二晶體形（Β型）之AZD2 17 1馬來酸 鹽’其中該鹽於約2Θ = 24·2。及22.7。有至少二個特異峰之又_ 98263.doc 1339119 射線粉衍射型。 根據本發明提供第二晶體形（B型）之AZD2丨7丨馬來酸— 鹽’其中該鹽於約 2Θ=24.2、22.7、15.7、12.0、27」、25.0、 17.7 15.〇、23·1及丨2.6。有特異峰之乂_射線粉衍射型。 根據本發明提供第二晶體形（Β型）之AZD2丨7丨馬來酸 鹽’其中s亥鹽之X-射線粉衍射型如圖8所示。 DSC分析顯示B型AZD2 171馬來酸鹽為高溶固體，於 194_4。(：開始熔化而於196.1。(：有峰（圖9)。 鲁 是以，DSC分析顯示B型AZD2 171馬來酸鹽為高溶固體， 於194.4°C開始炫化而於196.有峰。 與A型相比’ β型是亞安定的型之溶點及 融合熱（heat of fusi〇n)較a型者為低）^ A型是熱動力學上較 安定的。A及B型混合物在甲醇内於4〇〇c成泥樣物4天時轉 化成A型（圖1〇)。 A型較B型為佳。 AZD2 1 71馬來酸鹽是非吸濕性的（圖7)。 _ 製備之馬來酸鹽之NMR詳情見實例1並示出化學計量數 據比為1:1。 根據本發明另一方面，提供AZD217 1之二馬來酸鹽^二 馬來酸鹽可經由將二莫耳之馬來酸加於一莫耳AZD2 1 71自 由態鹼製備。 在說本發明係關於AZD21 71自由態鹼的晶體形式，或a 型AZD2171馬來酸鹽或b型AZD2171馬來酸鹽時，結晶度較 佳是大於約60%，更佳是大於約80%，尤佳是大於約9〇%甚 98263.doc • 18- 1339119 或大於約95%。最佳是結晶度大於約98%。 A及B型AZD2171馬來酸鹽提供的X_射線粉衍射型實質 上與圖5及圖8分別所示之X-射線粉衍射型相同並如表3 及4所示有十個最主要的峰（角20值）(> 應了解到，射線粉 何射型之2-Θ值可因所用一種機械與第二種機械而有些微 差別也可因一種樣品與另一樣品有些微差別，所以所引值 不此視為是絕對的。 現已知所得X-射線粉衍射型可因測定條件（如所用裝置_ 或機械）而有一或多個測定錯誤。具體地說，—般都知道χ_ 射線粉衍射型可視測定條件而有波動。所以應了解到，本 發明AZD2 1 71馬來酸鹽形式並不限於其χ_射線粉衍射型與 圖5及8所示之X-射線衍射型相同的機晶體，任何晶體其能 提供之X -射線粉衍射型與圖5及8所示之χ _射線粉衍射型基 上相同者都屬於本發明範圍。精於χ·射線粉衍射者能判斷 X-射線粉衍射型的基本相同處。 一般而言，X-射線粉衍射圖衍射角之測定誤差約5%或更 籲 小，具體地說是正、負0.5。2-G，在考慮圖 及10的X-射線粉衍射型時及讀表丨、3及4時都應計入此誤 差。此外’也應了解到視實驗條件及樣品製備（較佳是定向 的）而定，強度也會有起伏a 為避免懷疑’有些詞如，AZD2171馬來酸鹽，及，AZD2171 的馬來酸鹽•是指各種形式的AZD2171馬來酸鹽，其中Ά型 AZD2 1 7 1馬來酸鹽'是指稱作a型的特定結晶形，而，B型 AZD2 1 7 1馬來酸鹽'是指稱作B型的特定結晶形。 98263.doc •19- 根據本發明m，提供-種醫藥組合物，其含此處 所界定的AZD2171馬來酸鹽與醫藥上可接受的賦形劑或載 劑。 此組合物可為適於經口投藥的形式（例如錠，糖衣錠，硬 或軟膠囊，水性或油性懸浮液，乳液，可分散的散或顆粒， 糖锻或酿劑），供吸人給予（例如以分得很細的散或液體霧 劑），供非經腸注射（例如以滅菌溶液，懸浮液或乳液供靜 脈内、皮下、肌肉内、血管内或輸液投藥)，供局部投藥⑼ 如霜、膏、凝膠、或水性或油性溶液或懸浮液），或供直腸 ㈣（例如以塞劑投藥）。AZD2m馬來酸鹽較佳是經口投 樂…般而言’上述組合物可以習用方式用習用賦形 備。 本發明組合物較佳是製成單位劑形。ZD2171馬來酸鹽一 般是以1 50毫克/動物平方米體表面帛’例如用於人時約 0.03-1.5毫克/公斤，的單位劑量給予溫血動物。單位劑量 的範圍可為’例如0·01-1.5毫克/公斤，例如0.05-0.75毫克/ :斤，杈佳是0.03-0.5毫克/公斤，這也是一般的治療有效 劑量。單位劑形如錠或膠囊一般含，例如1-50毫克活性成 /刀。較佳是每日使用劑量在〇.〇3_〇 5毫克/公斤範圍内。治 療或預防治療特定疾病所需的劑量大小取決於要治療的病 ^予途後及要治療的疾病的嚴重性。因之，適宜的劑 星可由病人的主治醫生決定。 根據本發明又一方面’提供上述之AZD2 171馬來酸鹽在 治療人或動物身體的方法上的用途。 98263.doc •20· 1339119 本發明的又—特點是用作藥物的上述AZD2 1 71馬來酸. 鹽K圭是用作藥物供於人產生抗血管發生及/降低血管滲. 透性的上述AZD2171馬來酸鹽。 - 疋以，根據本發明又一方面，提供上述AZD2 1 7〖馬來酸 1在製成藥物供於溫血動物如人產生抗血管發生及/降低 血管滲透性的用途。 根據本發明又一特點，提供—種於需此治療的溫血動物 如人產生抗血官發生及/降低血管滲透性效果的方法，此法鲁 包括給予該動物有效量的前述AZD2丨7丨馬來酸鹽。 AZD2 I 71馬來酸鹽是抗血管發生及/或降低血管滲透性 的劑，可用作唯一治療劑，也可包括，除AZD2丨7丨馬來酸 鹽之外的一或多種其他物質及/或治療。此種結合治療可藉 同時、相繼或分別給予個別治療成分達成。於醫學腫瘤學 領域，正常的操作是結合不同形式的治療以治療環癌的每 一病人。於腫瘤學領域’此類結合治療的成分除AZD2171 馬來酸鹽外尚包括：外科、放射治療或化學治療。此種化鲁 學治療可包括三類治療劑： (1)其他柷血管發生劑如抑制血管内皮生長因子的劑（例 如抗血管内皮細胞生長因子抗體貝乏西組邁布 (bevaciziimab)[AVaSdnT、，及以不同於前述機制作用的劑 (例如羅奎美克（linomide)，整聯蛋白ανβ3功能抑制劑，制 管張素（angiostatin)，丙亞胺（raz〇xin)，沙立度胺 (thalidomide)，並包括血營標的劑（vascular targeting agents)(例如康它司它停（c〇mbrestastatin)鱗酸鹽及w〇 98263.doc -21 . 1339119 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434及 WO 02/08213所揭示的化合物，及國際專利申請公佈WO 99/02 166號所揭示的化合物，今附上此揭示全文供參考（例 如 N-acetylcolchinol-O-phosphate)); (ii)(例如他莫昔芬（tamoxifen)，濤瑞米芬（toremifene)， 雷洛昔芬（raloxifene)，著洛昔芬（droloxifene)，碘昔芬 (iodoxifene))，雌激素受體調降劑（例如福維司川 (fulvestrant))，孕激素（例如甲地孕酮醋酸鹽（megestr〇1 鲁 acetate)，芳香酶抑制劑（例如阿那曲唑（anastr〇z〇le)，來曲 唑（letrazole)，福洛唑（vorazole)，依西美坦（exemetane)), 抗孕激素’抗雄激素（例如氟利坦（flutaniide)，尼魯米特 (nilutamide) ’比卡魯胺（bicalutamide)，環丙孕酮醋酸酯 (cyproterone acetate))，LHRH激動劑及拮抗劑（例如性瑞林 醋酸鹽（goserelin acetate)，魯普來得（〖upr〇Ude)，布塞來靈 (busedin)) ，5α-還原酶抑制劑（例如非那雄胺 (finasteride))，抗侵入劑（例如金屬蛋白酶抑制劑如馬馬司 鲁 它（madmastat)及尿激酶纖溶酶原活化劑受體功能抑制劑） 及生長因子功能抑制劑(此類生長因子包括，例如衍生自血 小板的生長因子及肝細胞生長因子)’此類抑制劑包括生長 因子抗體、生長因子受體抗體（例如抗_—2抗體司徒曼^ (traStUZ_ab)(Herceptin、及抗抗體昔徒邁布 (CetUximab)[C225])、法尼基轉移酶抑制劑、路胺酸激酶抑 制劑例如…長因子系抑制劑(例如剛系路胺酸激酶 抑制劑如㈣-氣-4-氟苯基）_7.甲氧基_6_(3·嗎福咐丙氧基） 98263.doc •22· 1339119 喹唑啉-4-胺（gefitinib, AZD1839)、士（3-乙炔基笨基）-6,7- . 雙（2-甲氧吉乙氧基）喹唑啉-4-胺（erlotinib，OSI-774)及6-丙 ， 稀基酿胺基-ί£-(3-氣-4 -氟苯基）-7-(3-嗎福琳基丙氧基）喧《坐 啉-4-胺（CI 1 033)及絲胺酸/蘇胺酸激酶抑制劑）；及 (iii) 抗增生/抗新生藥物及其混合物，如醫學腫瘤科所用 者’如抗代謝藥物（例如抗葉酸如甲胺蝶呤，氟嘧啶如5-氟 尿嘧啶，喃氟啶（tegafur)，嘌呤及腺苷類似物，阿糖胞苷）； 抗腫瘤抗生素（例如安慈那環素如阿黴素，博來黴素’阿黴 _ 素（doxorubicin) ’柔紅黴素（daunomycin)，表阿黴素 (epirubicin及去甲柔毛黴素（丨darubicin)，絲裂黴素 C(mitomycin-C)，放線菌素（dactinomycin)，光輝黴素 (mithramycin));鉑衍生物（例如順鉑，碳鉑）；烷基化劑（例 如氮芥，笨丙胺酸氮芥（melphaian)，笨丁酸氮芥 (chlorambucil)，白消安（busulphan)，環磷醯胺，異環磷醯 胺’亞硝基脲’噻替哌（thiotepa));抗有絲分裂劑（例如長 春花生物鹼如長春新鹼（vincristine)，長春鹼（vinblastine)， φ 長春地辛（vindesine) ’長春稀驗（vinoreibine)及紫杉類 (taxoids)如紫杉醇，多西他賽（tax〇tere));拓仆異構酶抑制劑 (例如依托泊苷（epipodophyllotoxin)如依托泊苷（etoposide) 及替尼泊苷（teniposide) ’苯胺吖啶（amsacrine)，拓扑替康 (topotecan) ’吾樹驗以及伊立替康（丨rin〇tecan));及酶（例如 天冬酿胺酶）；及胸苷酸合成酶抑制劑（例如雷替曲赛 (raltitrexed));及其他形式的化療劑，包括： (iv) 生物反應修正劑（例如干擾素）； 98263.doc -23· 1339119 (v) 抗體（例如 edrecolomab); * (vi) 反義治療（antisense therapies)，例如導向上述標的的 治療，如ISIS 2503 ’ 一種anti-ras反義； (vii) 基因治療接近（gene therapy approaches)，包括例如 接近取代異常基因如異常p53或異常BRCA1或BRCA2， GDEPY(基因導向酶藥前體治療）接近如使用胞苷去胺酶、 胸腺苷激酶或細菌硝基還原酶的接近，及增加病人對化學 治療或放射治療耐性的接近，多藥物抗性基因治療；及 _ (viii) 免疫治療接近，包括例如活體外及活體内接近以增 加病人腫瘤細胞產生免疫的能力，如以細胞因子如介白素 2、介白素4或粒細胞-巨噬細胞菌落次激因子作轉染，以降 低T-細胞無反應性接近，使用轉染免疫細胞如細胞因子轉 染的樹突細胞接近’使用細胞因子轉染的腫瘤細胞系接近 及使用抗獨特型抗體接近。 例如，此類結合治療可藉同時、相繼或分別給予上述 AZD2171馬來酸鹽及WO 99/02166如N-乙醯基喜樹醇_〇-磷籲 酸酯（WO 99/02 166實例1)血管標的劑作結合治療達成。 由WO 01/74360知道抗血管發生劑可與抗高血壓劑合 用。本發明的鹽也可與抗高血壓劑合併給予。抗高血壓劑 疋降低it壓的劑，見所附w〇〇 1/743 60。 是以，根據本發明，提供治療伴發血管發生的病情的方 法此法包括給予溫血動物如人有效量的上述AZD2 1 71馬 來酸鹽及抗高血壓劑的混合物。 根據本發明又一方面，提供上述Αζ〇2丨71馬來酸鹽與抗 98263.doc -24- 1339119 高血壓劑的組合物在製成藥物以治療溫企動物如人伴發血， 管發生的病情上的用途。 根據本發明又一方面，提供一種醫藥組合物，其含上述 ， AZD2 171馬來酸鹽及抗高血壓劑以治療溫血動物如人伴發 血管發生的病情。 根據本發明又一方面，提供一種方法供於溫血動物如人 產生抗血官發生及/降低血管滲透性的方法，此法包括給予 該動物有效量的前述AZD2171馬來酸鹽及抗高血壓劑。 $ 根據本發明又一方面，提供上述AZD2171馬來酸鹽與抗 高血壓劑的組合物在製成藥物以於溫血動物如人產生抗發 血管發生及/或降低血管滲透性上的用途。 較佳的抗高血壓劑是鈣通路阻斷劑，血管緊張素轉化酶 抑制劑（ACE抑制劑），血管緊張素π受體拮抗劑（α_π拮抗 劑），利尿劑，β-腎上腺素能受體阻斷劑（β_阻斷劑），金館 舒張劑及α-腎上腺素能受體阻斷劑（α_阻斷劑）。特佳的抗高 血壓劑是妈通路阻斷劑，企管緊張素轉化酶抑制劑（似抑# 制劑），血管緊張素II受體拮抗劑（Α_„拮抗劑），及卜腎上腺 素能受體阻斷劑（β-阻斷劑），尤其是鈣通路阻斷劑。 如上所述，AZD2171馬來酸鹽因其具抗血管發生及/或降 低血管滲透性效果是較有利的。AZD2m馬來酸鹽預期可 用於多種疾病，包括癌，糖尿病，牛皮癬，類風濕關節炎， 卡普氏肉瘤，血管瘤’淋巴水腫’急性及慢性腎病，動脈 粥樣化，動脈再狹窄，自體免疫疾病，急性炎，過度症生 成及钻連’子宮内膜異位，功能不良性子宮出血及有視網 98263.doc -25- :S增生之眼睛疾病，包括與年齡有關的黃斑退化。癌 1&響任何H癌包括白A病，多發性骨趙瘤及淋巴瘤。 本發明此類化合物特別可用於有益地減缓原發性及復發性 貝體瘤的生長’例如結腸癌，乳癌，冑列腺癌，肺癌及皮 膚癌。更特疋的是，本發明化合物可望用於抑制任何伴發 VEGF的癌，包括白血病，多發性骨髓瘤及淋巴瘤，以及抑 制伴發VEGF的原發性及復發性實體瘤的生長，尤其是其生 長擴散有賴於VEGF的腫瘤，包括，例如特定的結腸癌，乳 癌，前列腺癌，肺癌，腦，外陰及皮膚的腫瘤。 其除了用於醫學治療外，此處所述AZE>2丨7 1馬來酸鹽也 可作藥理學工具用於實驗室動物如貓、狗、兔、猴、鼠㈣) 及小氣（mice)以發展及標準化活體外及活體内試驗系統以 評估VEGF受體酪胺酸激酶抑制劑活性，作為研究新治療劑 的一部分。 W0 00/47212所述及用於試驗AZD2171之鑑定如下： (a)活體外党體酷胺酸激酶抑制試驗 此鑑定測定試驗化合物抑制酪胺酸激酶活性的能力。以

全基因合成（Edwards M，International Biotechnology Lab 5(3)，19-25，1987)或克隆取得 DNA 編碼的 VEGF，FGF 或 EGF 受體胞質域（cytoplasmic domains)。然後將此等胞質域以適 宜的表達系統表達取得有酪胺酸激酶活性的多肽。例如以 尾蟲細胞重組蛋白表達取得的VEGF、FGF、及EGF受體胞 質域即發現展現内在的路胺酸激酶活性β於VEGF受體

Flt-l(Genbank accessiopn number X51602)的情形，即由 98263.doc -26- 1339119 cDNA分離出i.7kbDNA片段，此片段，如Sjibuyaetal所述 · (Oncogene，1990, 5:519-524)，以甲硫胺酸783開始並包括終 端編碼子’編碼大多數胞質域，並將片段克隆入桿狀病毒 置換型載體（transplacement vector)(例如 pAcYMl(見 The Baculovirus Expression System: A Laboratory Guide, L.A.

King and R.D. Possee, Chapman and Hall, 1992)或 pAc360

或 pBlueBacHis (可由 Invitrogen Corporation購得））。將此重 組結構以病毒DNA(例如Pharmingen baculoGold)共轉染 (co-transfect)給昆蟲細胞（例如 Spodoptera frugiperda 21(Sf21)製成重組桿狀病毒。（有關重組DNA分子的組建及 重組桿狀病毒的製備與應用詳情，見於標準教科書如

Sambrook et al, 1989, Molecular cloning - A Laboratory Manual, 2nd edition, Cold Spring Harbour Laboratory Press and O'Reilly et al, 1992, Baculovirus Expression Vectors - A Laboratory Manual, W. H. Freeman and Co., New York)。作 KDR(Genbank accession number L04947)時 > 克隆以曱硫胺 酸806起始的胞質片段並以類似方法表達。

作cFlt-1路胺酸激酶活性表達時，用純嗟斑（plaque-pure) cFlt-1重組病毒感染Sf21細胞3次，48小時後收穫。收穫的 細胞用冰冷的磷酸鹽緩衝的生理鹽水溶液（PBS)( 10 mM磷 酸鈉pH 7.4，138 mM氣化鈉，2.7 mM氣化鉀）洗，然後懸浮 於冰冷的 HNTG/PMSF(20 mM Hepes pH 7.5，150 mM 氣化 鈉，10% v/v甘油 ’ 1% v/v Triton X100, 1.5 mM氣化鎂，1 mM 乙二醇雙（β胺基乙基醚）N，N，N'，N，-四乙酸（EGTA)，1 mM 98263.doc -27- 1339119 PMSF(笨基甲基磺醯氟）内；PMSF是於臨用前加於新製備的~ 於甲醇内的100 mM溶液中）内，每1〇百萬細胞用丨毫升 一 HNTG/PMSF。此懸浮液於4。〇以13 〇〇〇轉/分鐘離心1〇分 鐘，移除上清液（酶儲液），以整數份儲於_7〇(>c ^於此鑑定 中將每一新製備的酶儲液以酶稀釋液（1〇〇 mM Hepes pH 7·4，0.2 mM原飢酸鈉 ’ 〇 p/。v/v Trit〇n χ1〇〇，〇 2 福 dithiothreitol)滴定。作典型批量生產時，將酶儲液以1:2〇〇〇 稀釋’每一鑑定凹使用5〇微升稀釋酶。 籲 用含酪胺酸的共聚物，例如p〇ly((Hu，aU，Tyr)6:3:1(Sigma P3899)製成基質儲液，以1毫克/毫升pBS的儲液於^『〔存 儲’並以PBS作1:500稀釋供碟塗覆。 於鑑定前一天，將100微升稀釋基質溶液分散於鑑定碟的 所有凹内（Nunc maxisorp 96-凹免疫碟），此碟已於使用前密 封並於4°C靜置過夜。 於鑑疋當天，將基質溶液倒出，鑑定碟凹用pBST(含 0·05ο/〇 v/v吐溫 20 的PBS)洗一次，再用 5〇 mM Hepes pH 7 4 φ 洗一次。 試驗化合物用10〇/〇二甲基亞砜（DMS〇)稀釋，將25微升稀 釋的化合物移至洗過的鑑定碟内的凹内。"T〇tal"控制凹含 1 0〇/〇 DMS0代替化合物。將25微升4〇 mlv[含8 μΜ腺苷-5·-三 磷酸（ΑΤΡ)的氣化鎂（II)加於所有試驗凹内，但不加於 "blank”控制凹内，此凹含無ΑΤρ的氣化鎂（11)。開始反應 時，將新製備的稀釋過的酶加於每一凹内，將碟於室溫培 氧20分鐘。然後傾出液體，凹用PBST洗二次。於每一凹内 98263.doc -28- 1339119 加100微升以PBST作1:6000稀釋的内含0.5%重量/容積牛血 ， 清卵蛋白（BSA)的鼠IgG抗·磷酸酪胺酸抗體（Upstate w Biotechnology Inc.產物編號05-321)，將碟於室溫培養1小 時，然後傾出液體，用PBST洗二次。加以含0.5%重量/容積 BSA的PBST作1:500稀釋的100微升聯有馬蘿蔔過氧化酶 (horse radish peroxidase)(HRP)的羊抗鼠 Ig 抗體（Amershan ，產物編號NXA 931)，此碟於室溫培養1小時，然後傾出液 體，用PBST洗凹二次。於每一凹内加100微升2,2'-連氮基-鲁 雙（3-乙基苯并噻啉-6-磺酸）（ABTS)溶液，此溶液是用一個 50毫克的ABTS錠（Boehringer 1204 521)於50毫升新製的50 mM磷酸鹽-檸檬酸鹽缓衝液pH 5.0+0.03%高硼酸鈉（以1磷 酸鹽檸檬酸鹽缓衝劑與高硼酸鈉（PCSB)膠囊（Sigma P4922)/100毫升蒸餾水製成）製備。然後將碟於室溫培氧 20-60分鐘，直至"Total"控制凹之以碟讀分光光度計於405 毫微米測定之光學密度值為約1.0。用”blank”（無ATP)及 "total”（無化合物）對照值測出產生50%酶活性抑制的化合 ® 物之稀釋範圍。 (b)活體外HUVEC增生鑑定 此鑑定測定試驗化合物抑制生長因子刺激的人臍帶靜脈 内皮細胞（HUVEC)之增生。 將 HUVEC 細胞分離入 MCDB 131(Gibco BRL) + 7.5°/〇容積 / 容積胎牛血清（FCS)内，然後於MCDB 131+2%容積/容積 FCS + 3微克/毫升肝素+1微克/毫升氫化可的松内以1000個 細胞/凹的濃度置（經2至8通道）於96凹的碟内。經至少4小時 -29- 98263.doc 1339119 後’投藥VEGF(3毫微克/毫升）及化合物。然後將培養物於 4 37°C有7.5% C02下培養4天。於第4天用1 μ〇Μ/凹氚化的胸腺 嘧啶（Amersham產物編號TRA 61)脈衝並培養4小時。用96 凹碟收穫器（Tomtek)收穫細胞，然後用β-碟碟計數器鑑定氚 之加入。用以cpm測定細胞内加放射活性後化合物對生長因 子刺激的細胞增生。此法也用於評估化合物對基底HUVEC 生長影響的評估（即内皮細胞在MCDB 13 1 +2%容積/容積 FCS + 3微克/毫升肝素+1微克/毫升氫化可的松而無外生性 _ VEGF内的增生）。 (c)活體内實體腫瘤模型 此試驗測定化合物抑制實體腫瘤生長的能力。 藉注射1 00微升50%(容積/容積）Matrige丨於無血清培養基 内的1x10個Calu-6細胞/鼠於滩性無胸腺Swiss « 鼠的 脅下完成Calu-6腫瘸異種移植。細胞植入丨〇天後，將鼠分 組，每組8-1 0隻，以便達成可比較的組平均體積。使用游 標測徑器測量腫瘤’並如下計算體積：（/xwjx φ χ(π/<5)，其中/為最長直徑’ w為垂直於最長直徑的直徑。每 天給予化合物一次，至少給予2 1天，控制動物給予化合物 稀釋劑°母星期測量腫瘤二次。生長抑制的程度以比較控 制組的平均腫瘤體積與治療組的相比計算，使用Student 丁 3式驗及 /或 Mann-Whitney Rank Sum Test。在 ρ<〇·〇5 時認作化 合物治療的抑制效果是明顯的。 上述AZD2 1 7 1馬來酸鹽可以任何已知可用於製備化學上 顓似的化合物的方法製備。此類方法包括，例如，國際專 98263.doc •30· 1339119 利申請WQ_4721·所述者，今附上供參考。此類方法也 包括’例如’固體相合成。此類方法也是本發明特點，將 於稍後說明。必需的起始物質可以標準有機化學工序製 得。AZD2m自由態鹼可根據w〇 〇〇/47212所述任何方法製 備，見wo 00/47212實例24〇。或者，·必需起始物質也可用 精於有機化學者所知的相似工序製備。 【實施方式】 下述方法（a)(b)及（C)構成本發明的又一些特點。 A型AZD2 171馬來酸鹽之合成 ⑷此法提供本發明的X —方面，其包括，例如，如下步驟. ⑴將㈣2171自由態鹼溶於有機溶劑内生成溶液； (U)加馬來酸水溶液或加馬來酸於有機溶劑内的溶 液： ' (111)任其自然發生成核現象； (iv)視需要分離a型及B型AZD2171結晶混合物； ω將此混合物於溶劑，如甲醇，内製成泥樣物至 有AZD2171馬來酸鹽都型，（可以χ_射線粉 射測定），此可需，例如，4天時間；及 (vi)分離生成之結晶固體。 如

(b)此另一法提供本發明的又—方 乃甶，其包括，例如 步驟： ⑴將AZD2171自由態鹼溶於有 於有機冷劑内生成溶液； (η)加馬來酸水溶液或加馬來 液； 令機/合劑内的溶 98263.doc •31 · I1339119 (ill)藉加熱或加更多溶劑’並加A型AZD2171馬來酸鹽， 日日種起始結晶出八型AZD2丨7丨馬來酸鹽；及 (iv)分離生成之結晶固體。 於⑷及（b)之⑴部分，如有需要，可加熱至回流直至溶解 出現或者疋，將混合物，例如，加熱至低於溶劑回流溫 度的溫度，先決條件是有更多或少於全部的固體物質出 現應了解到，少量不溶解的物質可藉過遽加溫的混合物 除去。 於（a)及（b)之⑴部分，有機溶劑較佳是醇，如曱醇或異丙 醇0 於（a)及（b)之（ii)部分，有機溶劑較佳是醇，如甲醇或異 丙醇。 (c)B型AZD2m馬來酸鹽之合成 此法提供本發明的又一方面，其包括，例如，如下步驟： (1)將AZD2171馬來酸鹽溶於有機溶劑内生成溶液； (H)將此溶液加於AZD2171馬來酸鹽於其内較κΝΜρ 内溶解度較低的溶劑，如甲苯或促醋酸乙酯，内； (iii) 有Β型AZD2171馬來酸鹽結晶出現；及 (iv) 分離生成之晶體。 於（0中較佳的有機溶劑是高助溶的溶劑如丨_甲基_2_吡 咯燒酮。 土 於（c)之（i)中，如有需要， 解出現。或者是，將混合物 溫度的溫度，先決條件是有 可將混合物加熱至回流直至溶 ，例如，加熱至低於溶劑回流 更多或少於全部的固體物質出 98263.doc •32· 1339119 里不〉谷解的物質可 現。應了解到，少 除去。 藉過濾加溫的混合物 可以任何習用方法分離生成之結 於以上（a)、（b)及（c)中， 日日固體，例如以過濾法分離。 明，除非 後面將以非限難實例、數據及圖解說明本發 另有說明，其中：_ =)蒸發是於真空以迴轉蒸發進行，收取工序是於例Μ 乾鉍劑除去殘餘固體後以過濾進行；

⑴）產出率只供參考，並非可達到的最大產出率； (⑴）熔點並未經校對，是以MettlerDSC82〇e測定；

㈣式I終產物的構造是以核（一般是質子）磁供振_R 及質譜技術證實；質子磁共振化學位移值是以§尺度測定1 峰數的表示是：s，單峰；d，雙峰；t，三重峰、，多重 峰，br，廣，q，四重峰；qui，五重峰；所有樣品都是以 BΓUkerDPX 400 MHZ於300 K在d6-DMS0内進行，16掃描， 脈衝重複時間1 0秒； (v) 中間體一般並未完全定性，純度是以NMR分析評估；及 (vi) 使用如下縮寫：_ DMSO 二甲基亞颯 NMP 1 -甲基-2-0比洛炫酮 實例1 : A型AZD2171馬來酸鹽 在惰性氣體氮下將AZD2 171粗製自由態鹼（4.52克），（如 W〇 00/472〗2實例240所製備）以異丙醇（58.8毫升）製成泥樣 物。此混合物於回流加熱1 5分鐘得澄清暗色溶液。將混合 98263.doc •33· 1339119 物冷至75°C，加活性碳（〇 226克）。再將混合物加熱至回流. 並維持於回流1小時。將混合物趁熱過濾。活性碳濾過餅用 熱異丙醇（9毫升）洗。將合併之濾過物溫度調整至55ι，費5 分鐘滴加預濾的馬來酸（1173克）於水（2.毫升）内的溶 液於加入間有原結晶的粗製自由態驗溶解。再加線洗（Hne wash)水（0.9毫升）。將此混合物維持於55°c，15分鐘，加 AZD2171馬來酸鹽晶種（〇 〇23克）^將此混合物維持於55<>c 4小時。於此4小時期間結晶作用完成。再將混合物冷至〇籲 °C 8小時。並將混合物維持於〇〇c至少8小時。過濾混合物。 滤餅用異丙醇（9毫升）洗。固體於真空爐内於5 0°C乾燥，得 A型4-([4-氟-2-甲基-1H_吲哚-5-基】氧基）-6-甲氧基-7-(3-吡 洛炫-1-基）丙氧基）嗜唾琳馬來酸鹽。 'HNMRtf ： (400 MHz, DMSO): 11.36 (s, 1H), 8.53 (S}1H), 7.65 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.01 (d,lH), 6.25 (s, 1H), 6.04 (s, 2H), 4.33 (t, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.26-3.3.70 (b, 4H)，2.44 (s, 3H), 2,24 (m，2H)，2.02 (m，4H)。 籲 熔點：DSC分析：於196.9eC開始熔化，於198.8t達峰 實例2 : A型AZD2171馬來酸鹽 在氮载惰性氣體下將AZS2I71粗製自由態驗（23·〇克）（如 WO 00/47212實例240所製備）於容器的甲醇（223毫升）内 製成泥樣物《將此混合物持於真空下去氣，然後以氮氣排 除真空。此工序重複五次》再將泥樣物加熱至回流，於回 流維持15分鐘得澄清暗棕色溶液。將此溶液冷至6〇充，然 後用矽澡土（Celite®)墊（4.00克）過濾至容器2。矽藻土墊用 98263.doc -34. 1339119 熱（6〇°C)甲醇（78毫升）洗，再將渡過物置於容器2内。 · 於容器1内載入曱酵（111毫升），冷至〇<t。於容器丨内載入γ 馬來酸（5.50克），此混合物於〇。〇攪拌15分鐘至所有馬來酸 都溶解。 將谷器1内之内容物經由線内（in_丨ine)過濾器載入容器 2 ’同時維持溫度於52 °C。將晶種A型AZD21 71馬來酸鹽 (0.0454克）於55°C加於容器2内，此混合物於55°c維持3小 時β再將混合物於40°C冷卻7小時，再於_5°C冷卻6小時。肇 過濾固體，用甲醇（1 00毫升）於-5 °C洗》將產物於真空爐乾 燥24小時，得A型4-([4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基】氧基）-6-甲氧基-7-(3-°Λ洛炫-1-基）丙氧基）啥嗤琳馬來酸鹽。 實例3 : Β型AZD2171馬來酸鹽 將Α型AZD2171馬來酸鹽（2.31克）溶於溫（約5(TC )ΝΜΡ 内。將此溶液於週邊溫度費時2分鐘滴加於曱苯（23毫升） 内。最出沉澱出的固體變成油體，然後又變成固體。於週 邊溫度攪拌10分鐘後過濾固體，用甲苯（10毫升）洗。將此固 · 體於真空爐乾燥過夜，得Β型4-(丨4-氟-2-甲基-1Η-吲哚-5-基丨氧基）-6-甲氧基·7·(3-吡咯烷-1-基）丙氧基）喹唑啉馬來 酸鹽。 熔點：DSC分析：於194.4°C開始熔化，於196.1 °C達高峰。 所用技術詳情 X-射線粉衍射 98263.doc •35· 表5 %相對強度* 25-100 10-25 3-10 1-3 定義 Vs(很強） s(強） m(中度） w(弱） 相對強度係衍生自以固定裂縫測定的衍射圖 分析儀器：Siemens D5000 將結晶鹽樣品置於Siemens單一矽晶體（sSC)薄片架上， 益將樣品用顯微鏡玻片擴散入薄層，以測定χ_射線粉衍射 5晋。將樣品以30轉/分鐘（增進計數統計）旋轉並以χ射線照 射此X-射線是用銅製細長焦點管（focus tube)以40千瓦及 4〇毫安培波長1,5406 A產生。此經調節後的χ_射線源穿過 定於V20的自動變數調整的裂縫，反射放射穿過2毫米抗散 播縫及0.2毫米測定縫。於2度至40度2-Θ之Θ-Θ型間，樣品每 增加0,02度2-Θ曝露1秒中（聯續掃描型）。掃描時為31分鐘及 41分鐘。儀器上裝有閃爍計數器作為檢測器。控制及數據 搜集是用 Dell 〇ptiplex 686 NT 4.0 Workstation，以 Diffract+ so ft ware操作。精於χ-射線粉衍射者會承認峰的相對強度會 文，例如，30微米以上大小的微粒及不同方向比的影響而 ’?、ν β刀析結果。精於此技藝者也會承認，反射的位置會受 樣α。在衍射儀上的準確高度及衍射儀的零校對的影響。樣 品的表面的平面也會有稍許影響。所以所得衍射型數據不 能認作是絕對的。 篩/微粒化 98263.doc •36- 1339119 在微粒化之前AZD2 171自由態鹼須先用1毫米不銹鋼篩 篩過’用於產物收取及手操作的鹼直接飼入微粒化器。 篩過約7.5克AZD2171自由態驗。 使用清潔S/S襯裡的2"微粒化機。 手飼入速度：約2/3克每分鐘。 研磨氣壓範圍：10/20磅/吋2(〇.67/1.33氣壓）。 文氏管（Venturi)氣壓範圍：2〇/25磅/忖2(丨67氣壓）。 動力蒸汽吸著 分析儀器：表面測量系統動力蒸汽吸著分析儀（Surface Measurements systems Dynamic Vapour Sorption Analyzer) 。將裝於石英夾内的5毫克物質於25°C置於濕氮内，相對濕 度（RH)為：〇、20、40、60、80、95、80、60、40、20、〇〇/〇 RH，作雙份。 差示掃描量熱法 分析儀器：Mettler DSC820e。 一般是將裝於40微升有蓋的鋁盤5毫克物質於25°C至325 °C以10°C /分鐘的恆定加熱速度加熱。使用氮氣作沖洗氣· 流速100毫升/分鐘* 熱重力分析 分析儀器：Mettler TG851。 一般是將盛於7〇微升氧化鋁坩鍋内的3至I2毫克物質於 25°C至325°C以10°C /分鐘的恆定加熱速度加熱。使用氮氣 作沖洗氣·流速50毫升/分鐘。

Karl Fischer水含量 98263.doc -37- 1339119 刀析儀器[Mitsubishi Moisture Meter CA-05 一般使用約50毫克物質。 m 【圖式簡單說明】 圖1: AZD2171自由態鹼之DSC及TGA熱圖一於〇°C水平軸 δ己錄溫度，於垂直轴記錄熱流/0/。重量損失。 圖2 : AZD2 1 71自由態鹼之X-射線粉衍射型—於水平軸上 記錄2-Θ值，於垂直軸上記錄相對線強度（計數）。 圖3 :加熱至l〇〇t時之單水合AZD2171自由態鹼之X-射 線粉衍射型一於水平轴上記錄2-Θ值，於垂直軸上記錄相對® 線強度（計數）。 圖4:微粒化之AZD2171自由態鹼之X-射線粉衍射型—於 水平軸上記錄2-Θ值’於垂直軸上記錄相對線強度（計數）。 圖5 : A型AZD2 1 71馬來酸鹽之X-射線粉衍射型—於水平 軸上記錄2-Θ值’於垂直轴上記錄相對線強度（計數）。 圖6 : A型AZD2 171馬來酸鹽之DSC熱圖一水平軸記錄溫 度°C，垂直轴記錄吸熱熱流（毫瓦（mw))。 圖7 :於25°C等溫線A型AZD2171馬來酸鹽之蒸汽吸著—_ 水平軸記錄標的相對濕度（RH)(%)，於垂直軸記錄乾物質之 變化（％)。 圖8 : B型AZD2171馬來酸鹽之X-射線粉衍射型—於水平 軸上記錄2-Θ值，於垂直軸上記錄相對線強度（計數）。 圖9 ·· B型AZD2171馬來酸鹽之DSC熱圖—水平軸記錄溫 度°C，垂直軸記錄吸熱熱流（毫瓦（mW))。 圖10 · AZD217 1馬來酸鹽泥樣物之χ_射線粉衍射型實 驗’ 2Θ值記錄於水平軸，相對線強度（計數）記錄於垂直軸。 98263.doc -38·

Claims (1)

1339119 第093140588號專利申請案 中文申請專利範圍替換木车丨丨μ _ 十、申凊專利範圍日修正本 1·種Α型結晶形之4_((4_氟甲基⑴吲哚_5基)氧 基）-6_甲氧基-7_(3十比錢小基）丙氧基）喧。坐琳馬來酸 >其中該鹽之χ_射線粉衍射型於2_θ=21 5。加或減〇尸 2-Θ或於2-θ = 16·4。加或減〇 5。2部至少一特異峰。 2. 根據請求項1之Α型結晶形之4-((4备2-甲基-! Η令朵·5_ 基^氧基）-6-甲氧基_7_(3十比哈烧小基）丙氧基）啥唑啉馬 來其中該鹽之X-射線粉衍射型於2_θ=21 5。及16 4。 有至少―特異峰，其中該值可加或減〇.5。μ。 3. 根據請求項i之Α型結晶形之4_((4•氣_2甲基_im 基）氧基Μ-甲氧基_7_(3十比洛烧-丨基）丙氧基）啥吐啉馬 來S夂孤其中該鹽之X-射線粉衍射型於2-θ=21.5、16.4、 24.4 20.7、25.0 ' 16.9、12.卜 22.2、17.4及 17.6。有特異 岭’其中該值可加或減0.5。2-Θ。 4·根據請求項1之Α型結晶形之4-((4-氟-2-甲基-i Hm 基甲氧基_7-(3-(。比°各坑-1·基）丙氧基）啥唾淋馬 來酸鹽’其中該鹽之χ_射線粉衍射型基本上與圖5所示之 X-射線粉衍射型相同。 5. 6· 土培晶形之4-((4-氟士甲基-爪十朵_5-基）氧基）_6_ 甲S' 土 7 (3_(吡咯烷_1_基）丙氧基）喹唑啉馬來酸鹽，其中 泫鹽之X_射線粉衍射型於2-θ = 24·2。加或減〇.5。2_θ或於 2 θ 22.7加或減〇 5。2_θ有至少一特異峰。 根=用求項& Β型結晶形之4{4_氟_2_甲基_1Η·吲哚巧_ 土）氧基）-6-甲氧基·7_(3十比咯烧小基）丙氧基）啥唑琳馬 98263-991129.doc 1339119 來酸盟，其令該瞄 /血之、射線粉衍射型於2-θ=24 21 π 1 有至少二特異峰，一 2 ^22*7' 丹嗶其令該值可加或減0.5。2_θ。 7.根據請求項5之Β型处曰γ , 其、 1巧日日形之4-((4-氟甲基-1Η-吲哚 基）氧基）-6~甲氧其、 來酸越，(各丙氧基心坐琳馬 來§“丨中該鹽之X·射線粉衍射型於2如 / 15.7 ^ 12.0，?7 I . oc η . 7 ' • 25,〇、17.7、15.0、23」及12.6。有拉思 峰，其中該值可加或減0.5。2·θ。 ，、 8.根據請求項5之Β型結晶形之4.(⑷氣_2甲基_ 基）氧基）-6-〒氣Α 7门,L Λ ^'5~ Τ礼基-7-(3个比咯院小基）丙氧基）啥唑啉 來酸鹽，其中該鹽之X-射線粉衍射型基本上與圓8所示之 X-射線粉衍射型相同。 9· 一，醫藥組合物’其包含根據請求項1至4中任-項之八型 ...。日0形之4-((4氟-2-f基-爪十朵巧基成基卜卜尹氧基 -7-(3-(吡咯烷-i-基)丙氧基)喹唑啉‘馬來酸鹽及與其相^ 合的醫藥上可接受的賦形劑或載劑。 10. —種醫藥組合物，其包含根據請求項5至8中任一項之B 型結晶形之4·((4-氟-2-曱基-1H_叫卜朵_5_基）氧基）_6甲氧 基-7-(3-(吡咯烷-1-基）丙氧基）喹唑啉馬來酸鹽及與其相 混合的醫藥上可接受的賦形劑或載劑〇 I I. 一種製備根據請求項1至4中任一項之A型結晶形之4_((4_ 氟-2-甲基-1H·吲哚-5-基）氧基）_6_甲氧基_7_(3·(吡咯烷 基）丙氧基）喧唾琳馬來酸鹽的方法，其包括： (i)將4-((4-氟-2-曱基-iH_吲哚_5_基）氧基）_6曱氧基 -7-(3-(吡咯烷-1-基）丙氡基）喹唑啉自由態鹼溶於有 98263-991129.doc -2. 1339119 機溶劑内生成溶液； (ii) 加馬來酸水溶液或馬來酸於有機溶劑内的溶液； (iii) 任其自然出現核化； (iv) 將混合物於溶劑内製成泥樣物直至所有4_((‘氟_2_ 甲基-111-吲哚-5-基）氧基）-6-甲氧基_7-(3-(»比：1各烧_1-基）丙氧基）喹唑啉馬來酸鹽都成A型；及 (v) 分離生成之結晶固體。 1 2· —種製備根據請求項丨至4中任一項之a型結晶形之4_((4_ 氟-2-曱基-1H-吲哚-5-基）氧基）-6-甲氧基-7-(3-(吨咯烷_ι· 基）丙氧基）啥°坐嘛馬來酸鹽的方法，其包括： (i) 將4-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基）氧基）·6_ρ氧基 -7-(3-(吡咯烷-1-基）丙氧基）喹唑啉自由態鹼溶於有 機溶劑内生成溶液； (ii) 加馬來酸水溶液或馬來酸於有機溶劑内的溶液； (iii) 製成溶液，並加A型4-((4-氟-2-曱基_1H-吲哚_5_基） 氧基）·6-甲氧基-7-(3-(。比咯烷-丨—基）丙氧基）喹唑啉 馬來酸鹽晶種以啟動Α型4-((4-氟甲基 -5-基）氧基）-6-曱氧基-7-(3-(吼咯烷_丨_基）丙氡基）喹 唑啉馬來酸鹽之結晶；及 (iv) 分離這樣生成之結晶固體。 13. —種製備根據請求項5至8中任一項之B型結晶形之4_((4_ 氟_2-甲基-1H-吲哚_5_基）氧基）_6_曱氧基_7_(3•(吡咯烷-^ 基）丙氧基）喹唑啉馬來酸鹽的方法，其包括： ⑴將4-((4-氣-2-甲基-1H-。弓卜朵基）氧基）曱氧基 98263-991129.doc 1339119 -7-(3-(吡咯烷_丨-基）丙氧基）喹唑啉馬來酸鹽溶於 NMP ； 將此溶液加於4-((4-氟-2-曱基-1H_吲哚_5•基）氧 基）-6_曱氧基-7-(3-(吡咯烷_丨_基）丙氧基）喹唑啉馬 來酸鹽較溶於NMP内不易溶解的溶劑内； 出現” 4-((4•氟·2_甲基_! Η,。朵_5_基）氧基）6_甲 氧土 7 (3 -(吡咯烷·丨_基）丙氧基）喹唑啉馬來酸鹽結 晶：及 (iv)分離這樣生成之結晶固體。 14. (ϋ) (iii) 5美）-^項1至8中任—項之4_((4-氟甲基魯°引°朵 馬X:鹽:)用：氧 抗血管發生及/或血^用於製造供於溫血動物（如人）產生 5 s滲透性較低效果之藥物。 98263-991129.doc