ES2344687T3 - Formulacion de fibrinogeno liquida, estable en almacenamiento. - Google Patents
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Abstract
Formulación de fibrinógeno líquida o líquida-viscosa, estable en almacenamiento, caracterizada porque, junto al fibrinógeno, están contenidos iones de metales bivalentes en una concentración de hasta de 100 mM y un agente formador de complejos, y la formulación de fibrinógeno es estable durante por lo menos 1 mes a unas temperaturas de almacenamiento comprendidas entre 0 y 30ºC.
Description
Formulación de fibrinógeno líquida, estable en
almacenamiento.
El presente invento se refiere a una nueva
formulación estable en almacenamiento para el fibrinógeno en una
forma líquida o líquida viscosa, que contiene iones de metales
bivalentes y un agente formador de complejos. La formulación de
fibrinógeno puede contener otros usuales componentes de
formulaciones. Además, el invento se refiere a la utilización de
las formulaciones de fibrinógeno conformes al invento.
El fibrinógeno es una proteína, que se forma
predominantemente en el hígado y que constituye aproximadamente un
2-3% del contenido de proteínas plasmáticas
sanguíneo. Él desempeña un cometido clave en la coagulación de la
sangre. En el caso de heridas o de operaciones quirúrgicas, casi
siempre son dañados algunos vasos sanguíneos, y resultan
hemorragias. Mediante la coagulación de la sangre, esta sangre se
solidifica en la zona de pequeñas heridas, y la hemorragia se
interrumpe. El sistema de coagulación protege al cuerpo de este modo
frente a elevadas pérdidas de sangre. En el caso de la coagulación
de la sangre, el fibrinógeno soluble, que está contenido en el
plasma sanguíneo, es transformado en la fibrina insoluble, a modo de
fibras, y contribuye de esta manera a conferir su estabilidad
definitiva al trombo. La transformación del fibrinógeno en fibrina
se efectúa en presencia de trombina. La trombina es puesta en
libertad en la sangre, al producirse lesiones, a través de un
complicado sistema de reacciones en cadena, en el que participan
muchos diferentes factores de la coagulación.
A causa de su importancia para el restañamiento
de la sangre y la cicatrización de heridas, el fibrinógeno tiene
una gran importancia en la aplicación clínica.
Si falta fibrinógeno, entonces la coagulación de
la sangre no funciona correctamente. Se puede compensar este
defecto administrando un fibrinógeno, p.ej. aislado a partir de un
plasma sanguíneo humano. Un defecto de fibrinógeno puede ser
provocado p.ej. por unas heridas de gran área (p.ej. en el caso de
quemaduras graves), por una coagulación intravasal diseminada, o
por hemorragias fuertes. Al fibrinógeno le corresponde una gran
importancia también como componente de un pegamento de fibrina, en
el que el fibrinógeno es transformado por regla general en fibrina
mediante la adición de una solución de trombina, que contiene
calcio. Un tal pegamento se emplea, por ejemplo, para el
aseguramiento o para la hermetización de suturas, de manera
preferida en el caso de intervenciones quirúrgicas. Especialmente
también en el caso de órganos de partes blandas, tales como el
hígado o el bazo, él se puede emplear ventajosamente para la
consecución del restañamiento de la sangre o de la
estanqueización.
La estabilidad de las proteínas es un problema
general en la industria farmacéutica, que se debe de solucionar de
nuevo en detalle para cada proteína. En dependencia de la proteína,
ciertos componentes individuales de la formulación pueden tener una
gran influencia sobre la estabilidad, pudiendo los componentes de
formulación ser dependientes también de la forma de almacenamiento
que se planea, y de la temperatura de almacenamiento.
Frecuentemente, las proteínas son liofilizadas
mediando adición de determinadas sustancias auxiliares y
almacenadas en una forma seca. En este caso, se debe de evitar en
lo posible una pérdida de estabilidad durante la desecación y,
también al realizar la reconstitución, no se debería llegar a
ninguna pérdida del efecto. Unos posibles problemas al realizar la
reconstitución son p.ej. la formación de copos o respectivamente de
enturbiamientos, o unos largos períodos de tiempo hasta llegarse a
la disolución total de la proteína, en particular en el caso de
altas concentraciones de la proteína. Por lo tanto, es ventajoso que
se pueda evitar esta etapa. La congelación de muestras de
proteínas, que se utiliza frecuentemente de un modo alternativo,
tiene las desventajas de que la descongelación y el calentamiento
requieren cierto tiempo, o de que se deben de garantizar unas
temperaturas de almacenamiento situadas por debajo de 0ºC, y de que
una congelación y una descongelación repetidas múltiples veces
están vinculadas en la mayoría de los casos con pérdidas de
efecto.
Una gran ventaja consiste, en el caso de una
conservación en forma líquida, por consiguiente de un modo general
y en particular también para la formulación de fibrinógeno, en la
posibilidad de empleo inmediato de la sustancia activa en un
paciente, puesto que es superflua la dedicación de tiempo para la
reconstitución de las formulaciones liofilizadas o respectivamente
para la descongelación y el calentamiento de las formulaciones
congeladas. Sin embargo, también en el caso de un almacenamiento
intermedio como un material liofilizado o en el estado congelado es
ventajoso que la formulación de fibrinógeno reconstituida o
respectivamente descongelada, que se presenta entonces en una forma
líquida, sea estable todavía durante un período de tiempo más
prolongado. Este hecho se pone de manifiesto, por ejemplo, en unas
situaciones en donde p.ej. para intervenciones quirúrgicas que se
había reconstituido de un modo preventivo un material, pero entonces
su empleo no era necesario por causa de consideraciones médicas.
Este material, en el caso de tener una estabilidad solamente a corto
plazo, se debería desechar y ya no podría pasar a emplearse en un
momento posterior. Una pérdida de material condicionada por la
estabilidad se ha de evitar sin embargo en particular cuando se
trata de unas sustancias terapéuticas, que proceden de donaciones
humanas, puesto que éstas sólo están disponibles en unas cantidades
limitadas. El fibrinógeno se cuenta entre estas sustancias, puesto
que se obtiene predominantemente a partir de un plasma sanguíneo
humano.
En el caso de la utilización de pegamentos de
fibrina es en particular ventajoso que el fibrinógeno se presente
en una forma líquida. En el caso de los pegamentos obtenibles
comercialmente se trata en la mayoría de los casos de dos
componentes. Uno de los componentes comprende un fibrinógeno,
frecuentemente en común con el factor XIII y la aprotinina, y el
otro componente comprende trombina, frecuentemente en común con
iones de calcio. La reconstitución, con el fin de que el pegamento
esté presto para el empleo, requiere un período de tiempo
relativamente largo, toda vez que el fibrinógeno se presenta en
altas concentraciones. Una puesta a disposición preventiva del
pegamento implica, no obstante, la desventaja de que la eficiencia
del pegamento disminuye o incluso de que éste se vuelve en su
totalidad inútil, incluso en el caso de que la solución que
contiene trombina permaneciese en estado
estable.
estable.
Otra gran ventaja adicional de la formulación de
fibrinógeno conforme al invento en una forma líquida o
líquida-viscosa es la estabilidad frente al
envejecimiento, con lo cual se pueden mejorar la posibilidad de un
almacenamiento durante un determinado período de tiempo también a
la temperatura ambiente, y por consiguiente, las propiedades de uso
en situaciones de emergencia. También en los casos de unas largas
rutas de envío, en las que unas bajas temperaturas no se pueden
garantizar constantemente, es ventajoso que la estabilidad esté
garantizada también a la temperatura ambiente durante un prolongado
período de tiempo. En casos infrecuentes, en los que se presenta un
defecto crónico de fibrinógeno (p.ej. en el caso de perturbaciones
congénitas de la síntesis de fibrinógeno), puede llegar a ser
también ventajoso que el fibrinógeno se pueda aportar continuamente
al paciente, lo que presupone que la solución de fibrinógeno se
lleve cerca del cuerpo, correspondientemente a una temperatura de
almacenamiento de aproximadamente 30ºC.
Las formulaciones líquidas estables de
fibrinógeno facilitan, por lo tanto, en muchos aspectos la
preparación, el uso, el transporte y la administración al
paciente.
Existen unas publicaciones acerca de proteínas
plasmáticas y factores de la coagulación, en las que se muestra
que, junto a otros componentes, también se puede utilizar calcio en
unas formulaciones líquidas. En este contexto se ha de remitir, por
ejemplo, al documento de solicitud de patente internacional WO
96/30041 y al documento de patente de los EE.UU. US 5.925.738, en
donde se llevaron a cabo unas investigaciones acerca de la
estabilidad en formulaciones líquidas del factor VIII y/o del
factor FIX. Unas actividades disminuidas del factor VIII o
respectivamente del factor FIX causan la hemofilia A o
respectivamente B. Para el factor VIII, p.ej. la asociación de las
cadenas pesada y ligera es dependiente de unos iones bivalentes
tales como los de calcio. Sin embargo, los datos que se habían
obtenido para estos factores evidentemente no se pueden transferir
al fibrinógeno, que es totalmente diferente desde puntos de vista
estructurales y funcionales. En el caso del fibrinógeno se trata de
una proteína muy grande con una estructura complicada. Él es una
glicoproteína de aproximadamente 340 kDa, que se compone de dos
mitades simétricas. En cada caso dos cadenas alfa, beta y gamma se
presentan en una forma alargada (de aproximadamente 47 nm), que
forma tres dominios (un dominio central E y dos idénticos dominios
D). Esta complicada estructura es imprescindible para la formación
de fibrina. El fibrinógeno es, como substrato, el precursor para la
fibrina, que forma una matriz estructural. Al contrario que éste,
unos factores de la coagulación, tales como por ejemplo el factor
VIII y el factor IX, en su forma activada, constituyen enzimas o
cofactores que, por su parte, activan a otros factores (FX) que
participan en la reacción en cadena para la formación de trombina,
o que aceleran la activación de éstos. En el caso de un
almacenamiento de fibrinógeno, no sólo se tiene que garantizar que
la complicada estructura permanezca conservada, sino además que el
fibrinógeno no se acumule para formar unas estructuras similares a
las de la fibrina, reticuladas por enlaces covalentes. Además,
dentro del estado de la técnica, en el caso de realizarse unos
almacenamientos prolongados de concentrados de fibrinógeno en el
estado líquido, se evita en lo posible combinar el fibrinógeno con
calcio. Esto se puede observar, por ejemplo, en el caso de los
pegamentos de fibrina obtenibles comercialmente. En este caso, el
calcio, que es necesario para la formación de una fibrina estable
reticulada, se añade para el almacenamiento del componente de
trombina, o se mantiene separado de los dos componentes, pero no se
combina con el componente de fibrinógeno. En el caso de un pegamento
de un solo componente, con los componentes fibrinógeno, FXIII,
factores de protrombina, un agente inhibidor de la trombina y un
agente inhibidor de la plasmina, que se desarrolló en el documento
de patente europea EP 0.253.198 partiendo de unas consideraciones
prácticas de manipulación, la concentración óptima de iones de
calcio se ajusta solamente en atención a la activación de la
trombina, y está situada en la solución para el uso en solamente 0,5
- 1 mM. En ningún lugar se hace mención al hecho de que los iones
de calcio tengan un efecto estabilizador contra a una desactivación
no proteolítica del fibrinógeno. Además, la mezcla de las sustancias
activas para el pegamento se presenta de manera preferida en una
forma sólida, tal como preferiblemente en forma de un material
liofilizado. Sin embargo, las formulaciones de fibrinógeno que aquí
se describen y reivindican no contienen unas cantidades
significativas de los factores de protrombina o de
trombina.
trombina.
Una evitación del simultáneo almacenamiento a
largo plazo de fibrinógeno y de iones de calcio en el estado
líquido también se puede observar en los casos en los que un plasma
humano o unas fracciones de éste, que es(son)
utiliza-
do(as) para la obtención de fibrinógeno, para el tratamiento térmico (la pasteurización) se mezclan, entre otros, con iones de calcio. Por medio de las subsiguientes etapas del proceso, tales como una diafiltración o una precipitación, se emprobece de nuevo el calcio, de tal manera que la formulación definitiva de fibrinógeno se presenta prácticamente sin cantidades de calcio dignas de mención, es decir, de aproximadamente 1 mmol/l o menos. En este contexto se ha de remitir al documento EP 0.103.196, en el que durante la etapa de pasteurización se utiliza CaCl_{2} 5 mM, el cual se empobrece de nuevo sin embargo luego tanto en la formulación para la infusión por vía intravenosa como también en la formulación para la producción de pegamentos de fibrina. Los componentes de la solución, que se utilizan para un tratamiento a altas temperaturas durante un corto período de tiempo (pasteurización), naturalmente tampoco se pueden utilizar de manera automática en unas soluciones, que deben de ser almacenadas a bajas temperaturas o a la temperatura ambiente durante varios meses o incluso durante varios años.
do(as) para la obtención de fibrinógeno, para el tratamiento térmico (la pasteurización) se mezclan, entre otros, con iones de calcio. Por medio de las subsiguientes etapas del proceso, tales como una diafiltración o una precipitación, se emprobece de nuevo el calcio, de tal manera que la formulación definitiva de fibrinógeno se presenta prácticamente sin cantidades de calcio dignas de mención, es decir, de aproximadamente 1 mmol/l o menos. En este contexto se ha de remitir al documento EP 0.103.196, en el que durante la etapa de pasteurización se utiliza CaCl_{2} 5 mM, el cual se empobrece de nuevo sin embargo luego tanto en la formulación para la infusión por vía intravenosa como también en la formulación para la producción de pegamentos de fibrina. Los componentes de la solución, que se utilizan para un tratamiento a altas temperaturas durante un corto período de tiempo (pasteurización), naturalmente tampoco se pueden utilizar de manera automática en unas soluciones, que deben de ser almacenadas a bajas temperaturas o a la temperatura ambiente durante varios meses o incluso durante varios años.
Finalmente, también a partir del documento de
solicitud de patente internacional WO 01/48016 ya se conoce un
procedimiento para la purificación de fibrinógeno, en el que, a
partir del material precipitado de la fracción I, el fibrinógeno se
extrae por disolución con un tampón de extracción, que puede
contener iones de calcio. En el caso de las etapas descritas del
procedimiento, se eliminan impurezas del plasminógeno, que podrían
tener como consecuencia una desactivación proteolítica del
fibrinógeno. Acerca de una estabilización del fibrinógeno mediante
iones de metales bivalentes frente a una desactivación no
proteolítica en el caso de un almacenamiento, todavía no se ha
informado nada hasta ahora.
Con el presente invento se pudo mostrar, de modo
sorprendente, que, en el caso de unos almacenamientos prolongados
en una forma líquida en el intervalo de temperaturas de
0-30ºC, se puede evitar o reducir la desactivación
no proteolítica de un fibrinógeno mediante la adición de iones de
metales bivalentes. Unos aumentos adicionales de la estabilidad se
pudieron conseguir sorprendentemente mediante la utilización
simultánea de agentes formadores de complejos. La formulación de
fibrinógeno conforme al invento es estable en el estado líquido, y
en este caso ella está ampliamente libre de conglomerados
covalentes de fibrinógeno con más de cinco moléculas de
fibrinógeno.
La misión que constituye el fundamento del
presente invento consiste, por lo tanto, en poner a disposición una
formulación estable en almacenamiento de fibrinógeno, que en el
estado líquido o líquido-viscoso, en el caso de un
almacenamiento en el intervalo de temperaturas de
0-30ºC, de manera preferida a 2-8ºC,
sea estable por lo menos durante un mes. El problema planteado por
esta misión se resuelve mediante una formulación que, junto al
fibrinógeno, contiene iones de metales bivalentes en una
concentración hasta de 100 mM y un agente formador de complejos,
así como eventualmente uno o varios otros componentes adicionales de
la formulación. Otras formas adicionales de realización se refieren
al objeto de las reivindicaciones 2 a 24, y unas adicionales
características y ventajas del invento se desprenden de la
descripción de las formas preferidas de realización y de los
Ejemplos.
El presente invento comprende una formulación
para fibrinógeno (formulación de fibrinógeno) que, mediante la
adición de iones de metales bivalentes y de un agente formador de
complejos así como eventualmente de uno o varios otros componentes
adicionales de la formulación, en el estado líquido o
líquido-viscoso, en el intervalo de temperaturas de
0-30ºC, de manera preferida de
2-8ºC, es estable durante por lo menos un mes. El
concepto de "estable" dentro del sentido del presente invento,
significa, que en el caso del almacenamiento de la formulación de
fibrinógeno no se presenta ninguna pérdida esencial de efecto por
una desactivación no proteolítica, pero que permanece conservado
por lo menos un 70% de la actividad de partida. La pérdida de efecto
se debe de determinar en este caso de manera preferida según el
método para la comprobación de una proteína coagulable, tal como se
describe en la Monografía sobre pegamentos de fibrina de la
Farmacopea Europea (3^{a} edición (1997), páginas
944-946). La temperatura de almacenamiento se sitúa
en el intervalo de 0-30ºC, de manera preferida en 2
hasta 10ºC y de manera particularmente preferida en
2-8ºC. También en el caso de unas temperaturas de
almacenamiento situadas en la región de la temperatura corporal
(37ºC) son de esperar todavía unos efectos estabilizadores
positivos de la formulación de fibrinógeno. Se prefiere
especialmente una formulación de fibrinógeno, que es estable
durante más que 3 y en particular más que 6 meses. En una forma de
realización especialmente preferida, la formulación de fibrinógeno
conforme al invento es estable durante 24 meses o más tiempo. La
formulación de fibrinógeno conforme al invento se puede emplear por
lo tanto preferiblemente cuando sea deseado un almacenamiento
prolongado en el estado líquido o líquido-viscoso
durante un mes y más.
Por el concepto de "fibrinógeno" se debe de
entender de manera preferida un fibrinógeno humano, que se había
obtenido p.ej. a partir de un plasma sanguíneo humano. En este
contexto, él puede ser aislado tanto a partir de unas donaciones
agrupadas de plasma como también de unas donaciones individuales.
También se abarca sin embargo un fibrinógeno aislado a partir de un
plasma sanguíneo o de la leche de animales, tales como de manera
preferida animales mamíferos (p.ej. un cerdo, un caballo, una res de
bovino, una cabra, un cordero y un perro). Cuando se aísla y/o
purifica un fibrinógeno a partir de un plasma sanguíneo, en la
mayoría de los casos se llega a una purificación simultánea de
otras proteínas plasmáticas, tales como en particular el factor XIII
(F XIII). Otras proteínas plasmáticas aisladas concomitantemente
pueden ser, p.ej. según sea el tipo de la purificación, la
fibronectina, unos factores de coagulación, el factor de von
Willebrand, una albúmina de suero bovino y/o unos factores del
crecimiento. Junto al fibrinógeno como componente principal, pueden
estar contenidas en la formulación de fibrinógeno conforme al
invento todavía otras proteínas plasmáticas. Por ejemplo, en este
caso se trata del factor XIII. Este FXIII es transformado por la
trombina en la forma activada y es capaz de unir por enlaces
covalentes a las moléculas polimerizadas de fibrina. Esto es
ventajoso en particular cuando la formulación de fibrinógeno se
utiliza para pegamentos de fibrina.
El concepto de fibrinógeno, que se utiliza para
la formulación de fibrinógeno conforme al invento, comprende, no
obstante, también un fibrinógeno o unos derivados activos de
fibrinógeno, que se habían preparado según métodos recombinantes.
Una preferida posibilidad de preparación por vía recombinante de un
fibrinógeno humano es a partir de unos líquidos corporales, en
particular de la leche, de animales transgénicos. Para las técnicas
conocidas, se ha de remitir en este contexto por ejemplo a los
documentos US 5.639.940 o respectivamente WO 95/23868. Un
fibrinógeno preparado por vía recombinante, en la formulación de
fibrinógeno conforme al invento, para unos usos tales como p.ej. el
pegamento de fibrina, puede estar mezclado todavía con otras
proteínas adicionales, en particular con el FXIII, con el fin de
modificar la constitución del pegamento (véase, por ejemplo, el
documento WO 99/56797) o puede contener unos aditivos, que están
destinados a una liberación lenta.
Si el fibrinógeno procedente de una preparación
por vía transgénica o recombinante, que se utiliza en la formulación
de fibrinógeno, es aislado a partir de un plasma y en particular de
un plasma humano, el fibrinógeno utilizado es sometido de manera
preferida a uno o varios procedimientos de desactivación de virus o
respectivamente de empobrecimiento en cuanto a virus. En este caso
se trata de unos procedimientos habituales, tales como por ejemplo
una pasteurización, un calentamiento en estado seco mediando
exclusión de oxígeno, una nanofiltración, el uso de aditivos
químicos (por ejemplo detergentes), una irradiación con rayos UV, o
de ciertas combinaciones de éstos.
El fibrinógeno se presenta en la formulación de
fibrinógeno de manera preferida como una unidad monomérica, pero
también son posibles unas unidades multiméricas que, no obstante, de
manera preferida no influyen negativamente sobre las propiedades de
los productos. En particular, mediante la elección de los
componentes de la formulación y de la relación del agente formador
de complejos a los iones bivalentes, se debe de evitar durante el
almacenamiento la formación de unos conglomerados unidos por
enlaces covalentes con más que cinco moléculas de fibrinógeno.
El concepto de "líquido" dentro del sentido
del presente invento comprende de manera preferida unas soluciones
acuosas, por lo tanto unas soluciones que contienen necesariamente
también agua. No obstante, también están comprendidas unas
soluciones "no acuosas", tales como p.ej. en
dimetil-sulfóxido, glicerol, un
poli(etilenglicol) y un poli(propilenglicol) o
mezclas de éstos. También están comprendidas unas soluciones
acuosas, que son combinadas con soluciones "no acuosas". El
concepto de "líquidas-viscosas" comprende unas
soluciones líquidas, que son viscosas debido a unas modificaciones
físicas o bioquímicas o debido a ciertos componentes de formulación,
tales como por ejemplo ácidos hialurónicos. Además, están
comprendidas unas suspensiones no acuosas, tales como p.ej. unas
suspensiones alcohólicas.
El fibrinógeno se puede almacenar directamente
después de la preparación en la formulación líquida de fibrinógeno
conforme al invento, o sino se puede almacenar de un modo intermedio
como un material liofilizado o en el estado congelado. La
formulación de fibrinógeno conforme al invento, que se presenta como
un líquido, se puede emplear directamente en el paciente.
En el caso de los iones de metales bivalentes
presentes en la formulación de fibrinógeno conforme al invento se
puede tratar, por ejemplo, de los de metales
alcalino-térreos, tales como por ejemplo iones de
magnesio y de calcio, o de unos elementos de los grupos
secundarios, tales como por ejemplo iones de zinc o de manganeso.
Se prefieren en particular los iones de calcio y de zinc, que se
pueden añadir, por ejemplo, en forma de CaCl_{2} y ZnCl_{2}. En
principio se adecuan los iones bivalentes que aumentan la
estabilidad del fibrinógeno, pero que, al realizar una
administración al paciente, no provocan sin embargo ningún efecto
secundario desventajoso esencial en la concentración utilizada. La
concentración de los iones de metales bivalentes se sitúa en la
región hasta de 100 mM, de manera preferida en la región hasta de 40
mM y de manera especialmente preferida en el intervalo entre 0,02 y
10 mM. Las concentraciones preferidas se deben de escoger en
dependencia de los iones bivalentes utilizados. Así, la
concentración preferida en particular para los iones de calcio se
sitúa, por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 1,5 a 10 mM,
mientras que, para los iones de zinc, la concentración preferida en
particular se sitúa en el intervalo de 0,02 a 1,5 mM.
Otro componente de formulación adicional de la
formulación de fibrinógeno conforme al invento es un agente
formador de complejos. Este agente formador de complejos está en la
situación de fijar a iones bivalentes tales como por ejemplo iones
de calcio. Sorprendentemente, dentro del marco de este invento se
pudo mostrar que, mediante una adición de un tal agente formador de
complejos, se puede aumentar aún más la estabilidad de la
formulación líquida de fibrinógeno, a pesar de que es de esperar que
una proporción esencial de los iones bivalentes estabilizadores, en
presencia de un agente formador de complejos se presente en una
forma de compuesto complejo. Unos posibles agentes formadores de
complejos son, por ejemplo, un citrato, un oxalato y el EDTA (ácido
etilendiamina-tetraacético). De manera especialmente
preferida, en este caso se trata de un citrato que, por ejemplo, se
puede añadir como citrato de sodio. El agente formador de complejos
se presenta en la formulación conforme al invento de manera
preferida en una concentración más alta que la de los iones de
metales bivalentes. El agente formador de complejos se puede
presentar en unas concentraciones hasta de 150 mM, pero de manera
preferida hasta de 50 mM, y de manera preferida en particular hasta
de 25 mM.
La formulación de fibrinógeno conforme al
invento puede contener otros componentes habituales de formulaciones
tales como por ejemplo sales de metales univalentes, aminoácidos,
sustancias auxiliares de liofilización, hidratos de carbono,
detergentes, agentes caótropos, agentes inhibidores tales como
agentes inhibidores de la fibrinólisis o de la fibrinogenólisis,
agentes inhibidores de proteasas, proteínas plasmáticas, agentes
antioxidantes, sustancias tamponadoras o sus mezclas. Estos aditivos
son ampliamente conocidos para un experto en la especialidad y se
deben de escoger en virtud de diferentes requisitos. Los aditivos se
pueden escoger, por ejemplo, en dependencia de un almacenamiento
intermedio planeado (como un material liofilizado, en estado
congelado). Unas conocidas sustancias auxiliares de liofilización
para proteínas son, por ejemplo, ciertos sacáridos tales como la
sacarosa y un dextrano, alcoholes de azúcares tales como p.ej.
manitol y sorbitol, o ciertos aminoácidos. Para la respectiva
formulación, también es decisiva naturalmente la utilización
planeada de la formulación. Para una administración por vía
intravenosa de fibrinógeno se pueden recomendar también otros
aditivos conocidos para un experto en la especialidad, tal como para
un empleo como pegamento de fibrina.
Como sales de metales univalentes se adecuan
algunas sales de metales alcalinos conocidas para un experto en la
especialidad, se prefieren las sales de sodio y de potasio o
respectivamente unas mezclas de éstas. Se prefieren en particular
los iones de sodio, que se pueden presentar p.ej. en forma de
cloruro de sodio. La concentración de las sales de metales
univalentes se sitúa de manera preferida en \leq 300 mM. En una
forma de realización especialmente preferida, la concentración se
sitúa en \leq 200 mM.
El concepto de "aminoácido" comprende tanto
a los aminoácidos que se presentan en la naturaleza como también a
sus derivados. Se prefieren especialmente p.ej. unos aminoácidos
neutros tales como glicina y los aminoácidos de carácter ácido o
básico (ácido aspártico, ácido glutámico o respectivamente
histidina, lisina y arginina) o sus mezclas. Se emplean de manera
preferida en particular arginina o ciertas mezclas con arginina. Sin
embargo, también se pueden emplear ciertos derivados de aminoácidos
tales como por ejemplo citrulina.
Entre los posibles agentes inhibidores se
cuentan unos agentes inhibidores de proteinasas, que se deben de
escoger entre sustancias habituales, de manera preferida se utilizan
la aprotinina o unos agentes inhibidores con una especificidad
similar.
Entre los agentes inhibidores de la fibrinólisis
se cuentan p.ej. unas antiplasminas, que comprenden
\alpha-2-antiplasmina,
\alpha-2-macroglobulina,
\alpha-1-antiplasmina, unos
agentes inhibidores del activador del plasminógeno (PAI), que
comprenden PAI-1 y PAI-2, el agente
inhibidor de la fibrinólisis activable por trombina (TAFI), la
aprotinina, y/o ciertas sustancias sintéticas tales como el ácido
\varepsilon-aminocaproico o el ácido
p-aminometil-benzoico. Los agentes
inhibidores de la fibrinólisis son interesantes en particular en el
caso de unas aplicaciones, en las que unos resultantes polímeros de
fibrina deben de ser estables durante un período de tiempo lo más
largo que sea posible.
Como agentes inhibidores de la fibrinólisis se
pueden emplear, por ejemplo, antiplasminas, el agente inhibidor de
C1 y antitrombina, utilizándose la antitrombina de manera preferida
en presencia de heparina.
En el caso de las proteínas plasmáticas, como ya
se ha mencionado, se puede tratar de unos factores de la
coagulación tales como por ejemplo el F XIII, o de unas proteínas
tales como p.ej. la fibronectina, el factor de von Willebrand, la
albúmina de suero o factores del crecimiento. Ellas pueden
presentarse ya como proteínas contaminantes en el fibrinógeno
aislado, o pueden ser añadidas posteriormente a la formulación de
fibrinógeno. No obstante, en el caso de las proteínas plasmáticas
no se debe de tratar de una trombina, puesto que el almacenamiento
simultáneo de fibrinógeno y de trombina puede conducir a la
formación de fibrina, y entonces ya no se puede garantizar la
estabilidad de la formulación de fibrinógeno.
Entre los hidratos de carbono se cuentan, por
ejemplo, glucosa, fructosa, sacarosa, maltosa, manosa, trehalosa,
lactosa, una celulosa y un almidón o sus derivados, también en forma
de mezclas. También están comprendidos ciertos alcoholes de
azúcares, tales como sorbitol y manitol. Por el concepto de
"hidratos de carbono" dentro del sentido del invento se han de
entender también ciertos heteropolisacáridos. Entre estos se
cuentan, por ejemplo, ciertos glicosaminoglicanos, tales como en
particular el ácido hialurónico.
Entre los detergentes se cuentan asimismo unas
sustancias habituales, pero de manera preferida unos detergentes no
iónicos tales como por ejemplo poloxameros o polisorbatos.
Como agentes caótropos se han de entender unos
agentes, que sueltan enlaces de puentes de hidrógeno. Se prefieren
especialmente urea y guanidina o respectivamente ciertos aditivos
que contienen grupos guanidino, así como compuestos afines o sus
mezclas, o unas sales caótropas tales como p.ej. el KI.
Como agentes antioxidantes se pueden utilizar
unas sustancias habituales y de manera preferida el ácido
ascórbico.
Las sustancias tamponadoras son unas sustancias,
que ajustan el valor del pH de la formulación de fibrinógeno y que
lo mantienen ampliamente constante. En las formas de realización
preferidas, el valor del pH de la formulación se ajusta a un valor
comprendido entre 5,0 y 8,0, de manera preferida entre 6,0 y 8,0, de
manera especialmente preferida el valor del pH está situado entre
6,5 y 7,5. En el caso de tales sustancias tamponadoras se puede
tratar, por ejemplo, de ciertos aminoácidos y/o de un citrato, así
como en una forma de realización especialmente preferida, de un
citrato. Otros habituales sistemas tamponadores, tales como por
ejemplo los de
tris(hidroximetil)-aminometano, fosfato,
acetato, succinato, glicil-glicina, carbonato y
bicarbonato están asimismo comprendidos. El ajuste o la corrección
del valor del pH se puede efectuar por medio de ácidos o bases,
tales como por ejemplo HCl y NaOH.
Para todos los componentes utilizables de la
formulación es válido el hecho de que ellos, en la cantidad
utilizada, no deben de provocar en el paciente ningún efecto
secundario que sea esencialmente desventajoso.
En una forma de realización especialmente
preferida, una formulación de fibrinógeno conforme al invento
contiene, junto a cloruro de calcio y citrato de sodio, p.ej.
además cloruro de sodio y arginina. En formulación preferida,
adicionalmente a cloruro de calcio, citrato de sodio, cloruro de
sodio y arginina, está contenida/o además la aprotinina o el agente
inhibidor de C1.
Otras formulaciones adicionales de fibrinógeno
que se prefieren en particular, se pueden deducir de los
Ejemplos.
Al realizar la preparación de la formulación de
fibrinógeno conforme al invento, el fibrinógeno se obtiene (aísla
y/o purifica) según unos métodos conocidos para un experto en la
especialidad. La obtención se efectúa de manera preferida a partir
de un plasma humano, pero también se puede efectuar a partir de un
plasma animal. Un fibrinógeno recombinante se puede obtener p.ej. a
partir del material sobrenadante de fermentación de cultivos de
células de animales o de la leche de animales transgénicos. Si el
fibrinógeno obtenido se encuentra primeramente en una solución, que
no corresponde a la formulación de fibrinógeno conforme al invento,
entonces ésta es reemplazada por una solución que contiene los
componentes de formulación conformes al invento que se describen en
las formas de realización, en particular unos iones de metales
bivalentes. Un intercambio o una acomodación de diferentes
soluciones es posible p.ej. mediante unos métodos tales como los de
ultrafiltración, diálisis, diluciones o la adición de unos
componentes ausentes de la formulación. Si el fibrinógeno se debiese
presentar en un estado precipitado, después de haber aplicado unos
métodos de precipitación conocidos (p.ej. con etanol, un
poli(etilenglicol), sulfato de amonio, glicina), entonces él
se puede resuspender o disolver en una solución con los iones
bivalentes conformes al invento y con otros componentes adicionales
de la formulación. Si el fibrinógeno se presenta como un material
liofilizado, él puede ser reconstituido en una solución, por lo que
la formulación resultante corresponde a la formulación de
fibrinógeno conforme al invento.
La formulación de fibrinógeno conforme al
invento, que se ha obtenido de esta manera, se puede almacenar
directamente en el estado líquido. Alternativamente, la formulación
líquida se puede de modo intermedio también congelar o liofilizar
y, después de la descongelación o reconstitución, se puede almacenar
ulteriormente en el estado líquido de manera correspondiente a una
formulación de fibrinógeno conforme al invento.
Una preparación especialmente preferida de la
formulación de fibrinógeno conforme al invento se efectúa con un
fibrinógeno que se ha obtenido a partir de un plasma sanguíneo
humano, y comprende las siguientes etapas principales:
- -
- preparación de una fracción en bruto de plasma
- -
- adsorción a hidróxido de aluminio
- -
- desactivación de los virus
- -
- precipitación
- -
- otras etapas adicionales de purificación y/o de desactivación de los virus
- -
- reemplazo de ciertos componentes de la solución por una solución que contiene por lo menos una sal de metal bivalente así como otros componentes de formulación, ajuste del valor del pH y ajuste de la concentración mediante ultrafiltración, diálisis y/o dilución
- -
- filtración en condiciones estériles
- -
- almacenamiento de la formulación de fibrinógeno directamente en el estado líquido o congelado o respectivamente liofilizado de modo intermedio con un subsiguiente almacenamiento en el estado líquido por descongelación o reconstitución.
\vskip1.000000\baselineskip
Un objeto adicional del invento es la
utilización de la formulación de fibrinógeno conforme al invento.
Para un experto en la especialidad son conocidas unas posibles
aplicaciones y la formulación de fibrinógeno conforme al invento se
puede emplear para todas las utilizaciones conocidas de un
fibrinógeno. Por lo general, la formulación de fibrinógeno conforme
al invento se adecua para la terapia de estados de defecto de
fibrinógeno. A estos estados de defecto se puede llegar por ejemplo
en el caso de grandes heridas y después de fuertes hemorragias, en
el caso de quemaduras de gran área, de una activación enfermiza del
restañamiento de la sangre (coagulopatía de consumo, también
llamada DIC (acrónimo del inglés "disseminated intravascular
coagulation" = coagulación intravascular diseminada), por medio
de medicamentos o unas enfermedades hepáticas graves (p.ej. en el
caso de la perturbación de la síntesis por daños en el parénquima
hepático). Junto a las hipofibrinogenemias adquiridas (una cantidad
disminuida de fibrinógeno en la sangre) que se han descrito, o
respectivamente junto a las afibrinogenemias (ausencia de
fibrinógeno o una cantidad altamente disminuida de éste en la
sangre), en casos infrecuentes existe también una afibrinogenemia o
respectivamente una hipofibrinogenemia congénita, que puede ser
causada por una síntesis ausente o disminuida de fibrinógeno en el
hígado.
En el caso de las hipofibrinogenemias o
respectivamente de las afibrinogenemias, la formulación de
fibrinógeno conforme al invento se inyecta al paciente de manera
preferida por vía intravenosa, con el fin de compensar unos
correspondientes estados de defecto de fibrinógeno. Las
dosificaciones se orientan al nivel del defecto que ha
aparecido.
Al fibrinógeno le corresponde una gran
importancia en la terapia de fibrina, como un componente importante
de los denominados pegamentos de fibrina. Un pegamento de fibrina
simula la última etapa de la coagulación de la sangre, mediante el
hecho de que al realizar la combinación de fibrinógeno con trombina,
en presencia de calcio y del FXIII, se llega a la formación de una
fibrina reticulada.
En la medicina existen numerosas y variadas
posibilidades de aplicación para los pegamentos de fibrina. Se han
de mencionar como importantes el restañamiento de la sangre, la
oclusión de heridas, la profilaxis en la adhesión y la
cicatrización de heridas. El restañamiento intraoperativo local de
la sangre es importante especialmente en órganos parenquimatosos
así como en el sector cardiovascular. Incluso unas fuertes
hemorragias después de unas lesiones graves del hígado pueden ser
restañadas de este modo. Se emplean también pegamentos de fibrina
para la oclusión y la fijación de heridas de la piel (inclusive un
trasplante de piel) y para la hermetización de suturas (p.ej. junto
al muñón duodenal). A modo de ejemplo, se ha de citar también la
utilización en el caso del reemplazo plástico de la dura madre y
para la obliteración de la cavidad, así como para el pegamiento de
las hojas pleurales para el tratamiento paliativo de derrames
pleurales. Para realizar un pegamiento, los pegamentos de fibrina
se pueden emplear también ventajosamente en el caso de tejidos
conjuntivos tales como huesos, cartílagos y tendones.
El fibrinógeno se puede utilizar también como un
componente para la producción de una matriz de fibrina. Un tal
material de soporte se puede utilizar para la liberación lenta de
sustancias activas, tales como por ejemplo factores del crecimiento
(p.ej. con proteínas osteoinductoras como matriz para la
regeneración de los huesos), antibióticos, aditivos
antiinflamatorios, citostáticos o favorecedores de la cicatrización
de las heridas. El soporte se puede componer también de una mezcla
de fibrina con otros materiales.
Además de esto, una matriz de fibrina encuentra
extensas posibilidades de utilización en la biotecnología, tales
como por ejemplo como un material de soporte y como un medio de
cultivo para células y tejidos en la ingeniería tisular o para el
revestimiento de implantes tales como por ejemplo biosensores.
Además, el invento se debe de ilustrar mediante
los siguientes Ejemplos, que sin embargo no deben de tener un
efecto restrictivo de ninguna de las maneras.
Para la obtención de un material de partida para
fibrinógeno se disolvió un material crioprecipitado en una solución
de NaCl y glicina y se llevó a cabo una adsorción con una suspensión
al 10% (v/v = volumen/volumen) de hidróxido de aluminio
(Al(OH)_{3}). Después de que el
Al(OH)_{3} se hubo separado por centrifugación, el
material sobrenadante remanente se precipitó con glicina
(concentración final 2,45 M).
Para realizar el tratamiento ulterior, el
material precipitado rico en fibrinógeno se disolvió en una solución
de NaCl y el valor del pH de la solución se ajustó a 7,3. La
solución de fibrinógeno se adsorbió con 80 ml de una suspensión de
hidróxido de aluminio por litro de la solución. A continuación, el
Al(OH)_{3} se separó mediante filtración o
centrifugación y se desechó. Para realizar la subsiguiente
pasteurización, la solución de fibrinógeno se diluyó con una
solución fisiológica de NaCl hasta llegar a una densidad óptica
DO_{280-320 \ nm} = 48. A la solución se le
añadieron mediando agitación, por cada litro de solución, 0,37 g de
cloruro de calcio dihidrato, 1.000 g de sacarosa y 75 g de glicina.
El valor del pH se mantuvo a un pH de 7,5.
A continuación, la solución se calentó a +60ºC y
la temperatura se mantuvo constante durante 10 h. Después de esto,
la solución se enfrió.
La solución de fibrinógeno, ahora pasteurizada,
se mezcló con un volumen tres veces mayor de la solución de
dilución (3,5 g/l de NaCl; 6 g/l de citrato de trisodio dihidrato en
agua). Por cada litro de la solución diluida, se añadieron 90 g de
glicina mediando agitación. El resultante material precipitado se
separó mediante centrifugación o filtración y se desechó.
Al material sobrenadante se le añadieron otros
75 g de glicina por cada litro. El material precipitado rico en
fibrinógeno se obtuvo mediante una centrifugación y se almacenó a -
25ºC hasta su elaboración ulterior.
Para la purificación adicional y la eliminación
del plasminógeno, el material precipitado rico en fibrinógeno se
disolvió en primer lugar en un disolvente acuoso adecuado (NaCl 50
mM; citrato de trisodio dihidrato 20 mM) y, de manera preferida,
después de haber realizado una diálisis frente al disolvente, se
bombeó a través de una columna de cromatografía con una matriz, que
lleva radicales de L-lisilo como ligando.
Para la preparación de las formulaciones de
fibrinógeno, la solución que contenía fibrinógeno, mediante unos
adecuados procedimientos de ultrafiltración, según fuese su
utilización, se llevó a una concentración de proteínas de
aproximadamente DO_{280-320 \ nm} = 2 - 200, de
manera preferida de aproximadamente 20 - 160, y a continuación se
dializó frente a unas soluciones, que contenían los componentes de
la formulación que se citan en el Ejemplo 2.
Después de una filtración en condiciones
estériles, se obtuvieron unas formulaciones de fibrinógeno, que
fueron ensayadas en cuanto a su estabilidad de manera
correspondiente a los siguientes Ejemplos.
Para realizar la investigación de la estabilidad
de un fibrinógeno en diferentes formulaciones, se utilizó un
fibrinógeno humano, preparado tal como se describe en el Ejemplo 1.
Para esto, unos recipientes con soluciones de fibrinógeno
(DO_{280-320 \ nm} = aproximadamente 100) se
almacenaron en diferentes formulaciones durante unos diversos
períodos de tiempo de almacenamiento (0, 1, 2, 3 y/o más meses) o
bien a 30ºC o a 2-8ºC. Después de los
correspondientes períodos de tiempo de almacenamiento, se determinó
el contenido remanente de fibrinógeno. Para esto, se determinó la
proporción de proteína coagulable, tal como se describe en la
Monografía sobre pegamentos de fibrina de la Farmacopea Europea
(3^{a} edición (1997), páginas 944-946).
En las tres formulaciones que se exponen a
continuación, junto a NaCl 200 mM y L-Arg x HCl al
10%, a un pH de 7,2 se añadieron o bien citrato de sodio o cloruro
de calcio, o citrato de sodio combinado con cloruro de calcio.
- Formulación 1:
- citrato de Na_{3} 20 mM/NaCl 200 mM/L-Arg x HCl al 10%/pH 7,2
- Formulación 2:
- CaCl_{2} 2,5 mM/NaCl 200 mM/L-Arg x HCl al 10%/pH 7,2
- Formulación 3:
- citrato de Na_{3} 20 mM/CaCl_{2} 2,5 mM/NaCl 200 mM/L-Arg x HCl al 10%/pH 7,2
\vskip1.000000\baselineskip
Los ensayos muestran inequívocamente que
mediante una adición de CaCl_{2} (formulación 2) se puede
conseguir una manifiesta estabilización del fibrinógeno, al
realizar un almacenamiento a 30ºC, frente a la formulación testigo
sin CaCl_{2} (Formulación 1). Incluso después de un almacenamiento
durante tres meses, se puede detectar todavía más que el doble de
cantidad de fibrinógeno coagulable que en la formulación testigo
(Tabla 1). El aumento de la estabilización es todavía más
manifiesto en la formulación, que contiene CaCl_{2} combinado con
el agente formador de complejos citrato de sodio (Formulación 3), la
cual, después de un almacenamiento durante tres meses a 30ºC,
contiene incluso todavía aproximadamente tres veces más cantidad de
proteína coagulable que la Formulación testigo 1. Mucho menos
manifiesto, pero todavía detectable, es el efecto estabilizador del
CaCl_{2} y del citrato de sodio (Formulación 3) frente a la
formulación testigo en el caso de un almacenamiento durante 3 a 6
meses a 2-8ºC (Tabla 2). Puesto que, por lo general,
al realizar un almacenamiento a 2-8ºC se ha de
contar con una mejor estabilidad, de acuerdo con lo esperado la
diferencia solamente puede resultar más pequeña.
En ensayos adicionales se investigaron
diferentes formulaciones, en las que se habían disminuido las
concentraciones de los restantes componentes de formulación. Las
formulaciones de fibrinógeno utilizadas
(DO_{280-320 \ nm} = aproximadamente 134 hasta
146) se produjeron de un modo comparable al que se describe en el
Ejemplo 1 y se almacenaron durante diferentes períodos de tiempo de
almacenamiento (0, 1, 2 y/o 3 meses) a 30ºC. Después de los
correspondientes períodos de tiempo de almacenamiento, se determinó
o bien la proporción de proteína coagulable (Monografía sobre
pegamentos de fibrina de la Farmacopea Europea, 3^{a} edición de
1997, páginas 944-946) o la de fibrinógeno según
Clauss (Clauss (1957), Acta-Haematol. 17,
237-246) (Tablas 3 y 4).
- Formulación 4:
- citrato de Na_{3} 4 mM/NaCl 100 mM/L-Arg x HCl al 5%/pH 7,2
- Formulación 5:
- citrato de Na_{3} 4 mM/CaCl_{2} 0,5 mM/NaCl 100 mM/L-Arg x HCl al 5%/pH 7,2
- Formulación 6:
- citrato de Na_{3} 20 mM/CaCl_{2} 2,5 mM/NaCl 100 mM/L-Arg x HCl al 5%/pH 7,2
- Formulación 7:
- citrato de Na_{3} 12 mM/CaCl_{2} 1,5 mM/NaCl 100 mM/L-Arg x HCl al 5%/pH 7,2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Este ensayo muestra que también en las
Formulaciones 5 hasta 7 se puede conseguir un manifiesto aumento de
la estabilidad frente a la formulación testigo (Formulación 4),
siempre y cuando que estén contenidos en ella cloruro de calcio o
respectivamente cloruro de calcio y un citrato. En este caso,
correspondientemente al ensayo del fibrinógeno según Clauss, el
efecto es tendencialmente todavía mejor para las concentraciones más
altas de cloruro de calcio y del citrato.
Claims (24)
1. Formulación de fibrinógeno líquida o
líquida-viscosa, estable en almacenamiento,
caracterizada porque, junto al fibrinógeno, están contenidos
iones de metales bivalentes en una concentración de hasta de 100 mM
y un agente formador de complejos, y la formulación de fibrinógeno
es estable durante por lo menos 1 mes a unas temperaturas de
almacenamiento comprendidas entre 0 y 30ºC.
2. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con la
reivindicación 1, caracterizada porque en el caso de los
iones de metales bivalentes se trata de iones de calcio, iones de
zinc o de mezclas de ambos.
3. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con la
reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque los iones de
metales bivalentes se presentan en una concentración hasta de 40 mM
y de manera especialmente preferida entre 0,02 y
10 mM.
10 mM.
4. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con la
reivindicación 1, caracterizada porque en el caso del agente
formador de complejos se trata de un citrato.
5. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con la
reivindicación 1 ó 4, caracterizada porque el agente formador
de complejos se presenta en una concentración más alta que los
iones de metales bivalentes.
6. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con una
de las reivindicaciones 1 ó 4 ó 5, caracterizada porque el
agente formador de complejos se presenta en unas concentraciones
hasta de 150 mM, pero de manera preferida hasta de 50 mM y de
manera preferida en particular hasta de 20 mM.
7. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con una
de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque ella
contiene uno o varios componentes de formulación adicionales,
escogidos entre el conjunto que se compone de sales de metales
univalentes, aminoácidos, sustancias auxiliares de liofilización,
detergentes, agentes inhibidores de la fibrinólisis, agentes
inhibidores de la fibrinogenólisis, agentes inhibidores de
proteasas, proteínas plasmáticas, hidratos de carbono, agentes
antioxidantes, sustancias tamponadoras y/o agentes caótropos o sus
mezclas.
8. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con la
reivindicación 7, caracterizada porque en el caso de las
proteínas plasmáticas se trata del factor XIII, de la fibronectina,
de una albúmina de suero, del factor de von Willebrand y/o de
factores del crecimiento.
9. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con las
reivindicaciones 7 u 8, caracterizada porque ella contiene
cloruro de calcio, citrato de sodio, cloruro de sodio y
arginina.
10. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con
las reivindicaciones 7 u 8, caracterizada porque ella
contiene cloruro de calcio, citrato de sodio, cloruro de sodio,
arginina y aprotinina o el agente inhibidor de C1.
11. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con
las reivindicaciones 7 u 8, caracterizada porque ella
contiene cloruro de calcio, citrato de sodio, cloruro de sodio,
arginina y una albúmina.
12. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con
una de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizada porque ella
tiene un valor del pH de 5,0 - 8,0.
13. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con la
reivindicación 12, caracterizada porque ella tiene un valor
del pH de 6,5 a 7,5.
14. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con
una de las reivindicaciones 1 a 13, estando caracterizada la
formulación de fibrinógeno porque es estable a
0-30ºC, de manera preferida a 2 hasta 8ºC, durante
un período de tiempo de por lo menos 3 meses.
15. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con la
reivindicación 14, estando caracterizada la formulación de
fibrinógeno porque es estable a 0 hasta 30ºC, de manera preferida a
2 hasta 8ºC, durante un período de tiempo de por lo menos 6
meses.
16. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con la
reivindicación 14, estando caracterizada la formulación de
fibrinógeno porque es estable a 0 hasta 30ºC, de manera preferida a
2 hasta 8ºC, durante un período de tiempo de por lo menos 24
meses.
17. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con
una de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizada porque el
fibrinógeno utilizado se había sometido a uno o varios
procedimientos de desactivación de virus o respectivamente de
empobrecimiento en cuanto a virus.
18. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con
una de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizada porque se
utiliza un fibrinógeno recombinante.
19. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con
una de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizada porque el
fibrinógeno se había aislado a partir de un plasma sanguíneo.
20. Formulación de fibrinógeno de acuerdo con
una de las reivindicaciones 1 a 19, caracterizada porque ella
tiene un valor del pH de 6,0 - 8,0.
21. Utilización de una formulación de
fibrinógeno de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 19 como
una formulación destinada al tratamiento de estados de defecto de
fibrinógeno.
22. Utilización de una formulación de
fibrinógeno de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 19 como
un componente de un pegamento de fibrina.
23. Utilización de una formulación de
fibrinógeno de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 19 como
un componente para la producción de una matriz de fibrina.
24. Utilización de una formulación de
fibrinógeno de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 19 como
un agente de diagnóstico.
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