ES2339456T3 - Derivados de pirrol(2,3-b)piridina activos como inhibidores de quinasa, procedimientos para su preparacion y composiciones farmaceuticas que los comprenden. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula (I) **(Ver fórmula)** en la que R está seleccionado del grupo constituido por -Ra, -CORa, -CONRaRb, -SO2Ra o -COORa. R1 es un grupo -NRcRd o -ORc; en los que Ra, Rb, Rc y Rd, son el mismo o diferentes, y son cada uno independientemente hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido adicionalmente, seleccionado de alquilo C1-C6 lineal o ramificado, alquenilo C2-C6 lineal o ramificado, alquinilo C2-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6 o cicloalquilalquilo C1-C6, arilo o arilalquilo C1-C6, o heterociclo o heterocicloalquilo C1-C6 o, tomados conjuntamente con el átomo de nitrógeno al que están unidos, tanto Ra como Rb así como Rc y Rd pueden formar un heterociclo de 4 a 7 miembros opcionalmente sustituido, que contiene opcionalmente un heteroátomo o grupo heteroatómico de anillo adicional seleccionado de S, O, N o NH; o isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Description

Derivados de pirrol[2,3-b]piridina activos como inhibidores de quinasa, procedimientos para su preparación y composiciones farmacéuticas que los comprenden.

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

La presente solicitud reivindica beneficio de la Solicitud de Patente Británica N.º 0330043.1 presentada el 24 de diciembre de 2003.

Antecedentes de la invención Campo de la invención

La presente invención se refiere a derivados de pirrolo[2,3-b]piridina activos como inhibidores de quinasa y, más en particular, se refiere a derivados de pirrolo[2,3-b]piridina sustituidos adicionalmente en posición 5, a un procedimiento para su preparación, a bibliotecas combinatorias de los mismos, a composiciones farmacéuticas que los comprenden y a su uso como agentes terapéuticos, en particular en el tratamiento de enfermedades ligadas a proteinaquinasas desreguladas.

Discusión de los antecedentes

El mal funcionamiento de proteinaquinasas (PK) es el distintivo de numerosas enfermedades. Una gran parte de los oncogenes y protooncogenes implicados en cánceres humanos codifican para PK. Las actividades potenciadas de las PK están también implicadas en muchas enfermedades no malignas tales como hiperplasia benigna de próstata, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, glomerulonefritis artrítica y estenosis post-quirúrgica y reestenosis.

Las PK están también implicadas en afecciones inflamatorias y en la multiplicación de virus y parásitos. Se cree que las PK juegan también un papel principal en la patogénesis y el desarrollo de enfermedades neurodegenerativas.

Para una referencia general al mal funcionamiento o desregulación de las PK véase, por ejemplo, Current Opinion in Chemical Biology 1999, 3, 459-465.

Sumario de la invención

Es un objeto de la invención proporcionar compuestos que sean útiles en terapia como agentes contra una gran cantidad de enfermedades causadas por, y/o asociadas a, una actividad proteinaquinasa desrregulada.

Es otro objeto de la invención proporcionar compuestos que estén dotados con actividad de inhibición de proteinaquinasas.

Los inventores presentes han descubierto ahora que algunos derivados de pirrolo[2,3-b]piridine están dotados con actividad inhibidora de proteinaquinasas y son así útiles en terapia en el tratamiento de enfermedades asociadas con proteinaquinasas desrreguladas.

Más específicamente, los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento de una diversidad de cánceres incluyendo, pero sin limitación: carcinoma tal como carcinoma de vejiga, de mama, de colon, de riñón, de hígado, de pulmón, incluyendo cáncer de pulmón de células pequeñas, esófafo, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cuello de útero, tiroides, próstata, y piel, incluyendo carcinoma de células escamosas, tumores hematopoyéticos de estirpe linfática, incluyendo leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, linfoma de células vellosas y linfoma de Burkett; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, incluyendo leucemias mielógenas, agudas y crónicas, síndrome mielodisplásico y leucemina promielocítica; tumores de origen mesenquimal incluyendo fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwannomas; otros tumores, incluyendo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentosum, queratoxantoma, cáncer folicular de tiroides y sarcoma de Kaposi.

Debido al papel clave de las PK en la regulación de la proliferación celular, estos compuestos de pirrolo[2,3-b]piridina son también útiles en el tratamiento de una diversidad de trastornos proliferativos celulares tales como, por ejemplo, hiperplasia de próstata benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, glomerulonefritis artrítica y estenosis post-quirúrgica y reestenosis.

Los compuestos de la invención son también útiles en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, como se sugiere por el hecho de que la cdk5 está implicada en la fosforilación de la proteína tau (J. Biochem., 117, 741-749, 1995).

Los compuestos de la presente invención, como moduladores de apoptosis, son útiles en el tratamiento de cáncer, infecciones virales, prevención del desarrollo del SIDA en individuos infectados con el VIH, enfermedades autoimmunes y trastornos neurodegenerativos.

Los compuestos de la presente invención son también útiles en inhibir angiogénesis y metástasis tumoral, así como en el tratamiento de rechazo de trasplante de órganos y en la enfermedad de huésped contra injerto.

Los compuestos de la invención también actúan como inhibidores de otras proteinaquinasas, por ejemplo, quinasas dependientes de ciclinas (cdk) tales como cdk2 y cdk5, proteinaquinasa C en diferentes isoformas, Met, PAK-4, PAK-5, ZC-1, STLK-2, DDR-2, Aurora 1, Aurora 2, Bub-1, PLK, Chk1, Chk2, HER2, raf 1, MEK1, MAPK, EGF-R, PDGF-R, FGF-R, IGF-R, PI3K, quinasa Weel, Src, Abi, Akt, MAPK, ILK, MK-2, IKK-2, Cdc7, Nek, y así son efectivas en el tratamiento de enfermedades asociadas con otras proteinaquinasas.

Los compuestos de la invención son también útiles en el tratamiento y prevención de alopecia inducida por radioterapia o de alopecia inducida por quimioterapia.

Descripción detallada de la invención

Los derivados de pirrolo-piridinas se conocen ampliamente en la técnica. Como un ejemplo, el compuesto 3-carboxamido-pirrolo[2,3-b]piridina se comunica como intermedio sintético en Chemical Abstracts C.A. 93 (1980): 168162.

Se revelan algunos otros derivados de 3-carboxamido de pirrolo-piridinas adicionalmente N''-sustituidos con grupos indolilo como agonistas de 5-HT2C/2B (véase documento WO 96/11929); los derivados de 3-carboxamido anteriores adicionalmente sustituidos con grupos N-(isoquinolil-etil-ciclohexilo) se describen como agentes antipsicóticos (véase documentos WO 00/24717; WO 00/21951; WO 00/21950; WO 98/50364); los compuestos de 3-carboxamido-pirrolo-piridinas N-sustituidos con anillos azabiciclo se describen también como intermedios sintéticos en la preparación de derivados de tropilo, que poseen propiedades antitusivas.

Además, los derivados de 3-hidrazido-pirrolo-piridinas se revelan como intermedios sintéticos para preparar más inhibidores de proteinaquinasas complejas, como se comunica en el documento WO 00/71537.

Se revelan también 7-azaindoles como inhibidores de quinasas N-terminales C-JUN y de esta manera útiles en el tratamiento de trastornos neurodegenerativos en el documento WO 03/082868.

Sin embargo, ninguno de los derivados de pirrolo-piridinas de la técnica anterior dio como resultado llevar un grupo amino adicional, opcionalmente funcionalizado de forma adicional, en la posición 5 del esqueleto de pirrolo-piridinas.

Los compuestos de pirrolo[2,3-b]piridina de fórmula general amplia dotados de actividad terapéutica, que incluyen también actividad inhibidora de proteinaquinasas, se describen también en los documentos WO 00/71537; WO 01/01986; WO 01/58869; WO 99/32111; WO 99/37637; WO 97/03069; WO 99/58496 y WO 95/28400.

Se describen también derivados de 3-alquenil-pirrolo[2,3-b]piridina como inhibidores de proteinaquinasas en el documento WO 01/98299 en el nombre del propio solicitante.

De acuerdo con ello, se describe un procedimiento para tratar afecciones o enfermedades causadas por, y/o asociadas con, una actividad proteína quinasa alterada, administrando a un mamífero en necesidad de la misma una cantidad efectiva de un compuesto representado por fórmula (I)

1

en el que

R está seleccionado del grupo constituido por -R^{a}, -COR^{a}, -CONR^{a}R^{b}, -SO_{2}R^{a} o -COOR^{a};

R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d} o -OR^{c};

en el que R^{a}, R^{b}, R^{c} y R^{d}, son el mismo o diferentes, y son cada uno independientemente hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido, seleccionado de alquilo C_{1}-C_{6} lineal o ramificado, alquenilo C_{2}-C_{6} lineal o ramificado, alquinilo C_{2}-C_{6} lineal o ramificado, cicloalquilo C_{3}-C_{6} o cicloalquilalquilo C_{1}-C_{6}, arilo o arilalquilo C_{1}-C_{6}, o heterociclo o heterocicloalquilo C_{1}-C_{6} o, tomados conjuntamente con el átomo de nitrógeno al que están unidos, tanto R^{a} como R^{b} así como R^{c} y R^{d} pueden formar un heterociclo de 4 a 7 miembros opcionalmente sustituido, conteniendo opcionalmente un heteroátomo de anillo o grupo heteroatómico adicional seleccionado de S, O N y NH;

o isómeros, tautómeros, vehículos, metabolitos, profármacos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En el procedimiento descrito anteriormente, la enfermedad causada por, y/o asociada con, una actividad proteinaquinasa alterada se selecciona del grupo constituido por cáncer, trastornos proliferativos celulares, enfermedad de Alzheimer, infecciones virales, enfermedades autoinmunes y trastornos neurdegenerativos.

Los tipos específicos de cáncer que los compuestos de la presente invención son útiles para tratar incluyen, pero sin limitación, carcinoma, carcinoma de células escamosas, tumores hematopoyéticos de linaje mieloide o linfoide, tumores de origen mesenquimal, tumores del sistema nervioso central y periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentosum, queratoxantoma, cáncer folicular de tiroides y sarcoma de Kaposi.

En el procedimiento descrito anteriormente, el trastorno proliferativo celular puede estar también seleccionado del grupo constituido por hiperplasia benigna de próstata, adenomatosis familiar, poliposis, neuro-fibromatosis, psoriasis, proliferación de células vasculares lisas asociadas con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, glomerulonefritis artrítica y estenosis y reestenosis post-quirúrgicas.

La presente invención proporciona adicionalmente un compuesto representado por fórmula (I)

2

en la que

R está seleccionado del grupo constituido por -R^{a}, -COR^{a}, -CONR^{a}R^{b}, -SO_{2}R^{a} o -COOR^{a};

R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d} o -OR^{c};

en el que R^{a}, R^{b}, R^{c} y R^{d}, son el mismo o diferentes, y son cada uno independientemente hidrógeno o un grupo opcionalmente adicionalmente sustituido, seleccionado de alquilo C_{1}-C_{6} lineal o ramificado, alquenilo C_{2}-C_{6} lineal o ramificado, alquinilo C_{2}-C_{6} lineal o ramificado, cicloalquilo C_{3}-C_{6} o cicloalquilalquilo C_{1}-C_{6}, arilo o arilalquilo C_{1}-C_{6}, o heterociclo o heterocicloalquilo C_{1}-C_{6} o, tomados conjuntamente con el átomo de nitrógeno al que están unidos, tanto R^{a} como R^{b} así como R^{c} y R^{d} pueden formar un heterociclo de 4 a 7 miembros opcionalmente sustituido, que contiene opcionalmente un heteroátomo de anillo o grupo heteroatómico adicional seleccionado de S, O N y NH;

o isómeros, tautómeros, vehículos, metabolitos, profármacos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

A menos que se especifique en contra, cuando hacemos referencia a los compuestos de fórmula (I) per se así como a cualquier composición farmacéutica de los mismos o a cualquier procedimiento terapéutico de tratamiento que los comprenda, la presente invención incluye todos los hidratos, solvatos, complejos. Se describen también metabolitos y profármacos de los compuestos de la presente invención. Los profármacos son cualesquiera compuestos unidos covalentemente, que liberan el fármaco parental activo de acuerdo con la fórmula (I) in vivo.

Si un centro quiral u otra forma de un centro isomérico está presente en un compuesto de la presente invención, todas las formas de tal(es) isómero o isómeros, incluyendo enantiómeros y diastereómeros, se desean para abarcarse en el presente documento. Los compuestos que contienen un centro quiral se pueden usar como una mezcla racémica o como una mezcla racémica enantioméricamente enriquecida, o la mezcla racémica se puede separar usando técnicas bien conocidas y se puede usar solo un enantiómero individual. En casos en los que existe el compuesto en formas tautómeras, tales como tautómeros cetoenólicos, cada forma tautómera se contempla como que se incluye en la presente invención tanto si existe en el equilibrio como si existe predominantemente en una forma.

En la presente descripción, a menos que se indique en contra, el término alquilo C_{1}-C_{6} lineal o ramificado incluye cualquier grupo alquilo C_{1}-C_{6} tal como, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, tert-butilo, n-pentilo, n-hexilo, y similares.

Ejemplos de alquenilo C_{2}-C_{6} o alquinilo C_{2}-C_{6} lineal o ramificado incluye cualquiera de los grupos insaturados alquenilo o alquinilo con desde 2 hasta 6 átomos, de carbono, por ejemplo incluyendo pero no limitados a vinilo, alilo, 1-propenilo, isopropenilo, 1-, 2- o 3-butenilo, pentenilo, hexenilo, etinilo, 1- o 2-propinilo, butinilo, pentinilo, hexinilo, y similares.

El término cicloalquilo C_{3}-C_{6} se define como como cualquier anillo carbocíclico de 3 a 6 miembros tal como, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo, y similares.

A menos que se especifique en contra, por arilo se quiere decir tanto un carbociclo así como un heterociclo, mono o bicíclico, con 1 ó 2 restos de anillo bien condensados o bien unidos el uno al otro por enlaces simples, en los que al menos uno de los anillos carbocíclico o heterocíclico es aromático pero ello también incluye 1 ó 2 restos de anillo en los que todos los anillos son aromáticos. A menos que se especifique en contra, el citado heterociclo es una anillo de 4 a 7 miembros con desde 1 hasta 3 heteroátomos o grupos heteroatómicos seleccionados entre N, NH, O y S.

Ejemplos no limitantes de grupos arilo de la invención son, por ejemplo, fenilo, indanilo, bifenilo, \alpha- o \beta-naftilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, indolilo, imidazolilo, imidazopiridilo, 1,2-metilenodioxifenilo, tiazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, pirrolil-fenilo, furilo, fenil-furilo, benzotetrahidrofuranilo, oxazolilo, isoxazolilo, pirazolilo, cromenilo, tienilo, benzotienilo, isoindolinilo, benzoimidazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, quinoxalinilo, benzofurazanilo, 1,2,3-triazolilo, 1-fenil-1,2,3-triazolilo y similares.

El término heterociclo (por ejemplo heterociclilo) o grupo heterocíclico es un heterociclo de 4 a 7 miembros, que abarca grupos heterocíclicos aromáticos también conocidos como grupos heteroarilo y actualmente comprendidos por el término arilo, así como grupos heterocíclicos saturados o parcialmente insaturados, que tienen de 1 a 3 heteroátomos de anillo o grupos heteroatómicos seleccionados entre N, NH, O y S.

Ejemplos de estos grupos heterocíclicos de 4 ó 7 miembros son, por ejemplo, 1,3-dioxolano, pirano, pirrolidina, pirrolina, imidazolina, imidazolidina, pirazolidina, pirazolina, piperidina, piperazina, morfolina, tetrahidrofurano, hexametilenoimina, 1,4-hexahidrodiazepina, azetidina, y similares.

Cuando se hace referencia a los compuestos de fórmula (I) en los que R es un grupo -CONR^{a}R^{b} y/o R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d} y R^{a} y R^{b} y/o R^{c} y R^{d} se toman conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos, pueden formar también un heterociclo de 4 a 7 miembros opcionalmente sustituido que contiene opcionalmente un heteroátomo de anillo o un grupo heteroatómico de anillo adicional entre S, O N o NH.

De acuerdo con los significados proporcionados para R^{a}, R^{b}, R^{c} y R^{d}, cualquiera de los grupos anteriores está insustituido o puede estar adicionalmente opcionalmente sustituido en cualquiera de sus posiciones libres por por uno o más grupos, por ejemplo 1 a 6 grupos, seleccionados de: halógeno, nitro, grupos oxo (=O), carboxi, cIano, alquilo, alquilo polifluorado, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo; grupos arilo, heterociclilo, amino y derivados de los mismos tales como, por ejemplo, grupos formilamino, alquilcarbonilamino, alquenilcarbonilamino, arilcarbonilamino, alcoxicarbonilamino; grupos hidroxilo y derivados de los mismos tales como, por ejemplo, alkoxi, ariloxi, alquilcarboniloxi, arilcarboniloxi, cicloalqueniloxi o alquilidenoaminoxi; grupos carbonilo y derivativos de los mismos tales como, por ejemplo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, cicloalquiloxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo; derivados sulfurados tales como, por ejemplo, alquilltio, ariltio, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, alquilsulfinilo, arilsulfinilo, arilsulfoniloxi, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo o dialquilaminosulfonilo.

A su vez, cuando sea apropiado, cada uno de los sustituyentes anteriores puede, además, estar adicionalmente sustituido con uno o más de los grupos anteriormente mencionados.

En la presente descripción, a menos que se especifique en contra, el término halógeno es un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo.

El término alquilo polifluorado se desea para querer decir un grupo alquilo C_{1}-C_{6} lineal o ramificado como se define anteriormente, en el que más de un átomo de hidrógeno está reemplazado por átomos de flúor tales como, por ejemplo, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 1,2-difluoroetilo, 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropil-2-ilo, y similares.

A partir de todo lo anterior, está claro para la persona experta que cualquier grupo cuyo nombre se ha identificado como un nombre de compuesto, tal como, por ejemplo, cicloalquilalquilo, arilalquilo, heterociclilalquilo, alcoxi, alquiltio, ariloxi, arilalquiloxi, alquilcarboniloxi y similares, se desea que se interprete convencionalmente a partir de las partes de las que se deriva. Hasta el momento, como un ejemplo, el término heterociclil-alquilo representa un grupo alquilo lineal o ramificado que está adicionalmente sustituido con un grupo heterocíclico, como se define anteriormente.

La expresión "sales farmacéuticamente aceptables" abarca sales usadas comúnmente para formar metales alcalinos y para formar sales de adición de los ácidos libres o de las bases libres. La naturaleza de la sal no es crítica, dado que es farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención se preparan preferentemente a partir de un ácido inorgánico o a partir de un ácido orgánico. Ejemplos de tales ácidos inorgánicos son ácido clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, carbónico, sulfúrico y fosfórico. Los ácidos orgánicos apropiados están seleccionados preferentemente de las clases alifática, cicloalifática, aromática, aralifática, heterocíclica, carboxílica y sulfónica de ácidos orgánicos, ejemplos de los cuales son ácido fórmico, acético, trifluoroacético, propiónico, succínico, glicólico, glucónico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, glucurónico, maleico, fumárico, pirúvico, aspártico, glutámico, benzoico, antranílico, mesílico, salicílico, p-hidroxibenzoico, fenilacético, mandélico, embónico (pamoico), metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico, pantoténico, toluenosulfónico, 2-hidroxietanosulfónico, sulfanílico, esteárico, ciclohexilaminosulfónico, algénico, hidroxibutírico, galactárico y galacturónico. Las sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención incluyen sales metálicas hechas de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y cinc o sales orgánicas hechas de N,N'-dibencilletilenodiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, meglumina (N-metil-glucamina) y procaína. Todas de estas sales se preparan preferentemente por medios convencionales a partir de los compuestos correspondientes de la presente invención, por ejemplo haciéndolos reaccionar con el ácido o la base apropiados.

Una primera clase de compuestos preferidos de la invención está representada por los derivados de fórmula (I) en los que R es un grupo -COR^{a} y R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d}, en el que R^{a}, R^{c} y R^{d} son como se definen anteriormente.

Otra clase de compuestos preferidos se representa por los derivados de fórmula (I) en los que R es un grupo -CONR^{a}R^{b} y R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d}, en los que R^{a}, R^{b}, R^{c} y R^{d} son como se definen anteriormente.

Otra clase de compuestos preferidos se representa por los derivados de fórmula (I) en los que R es un grupo -SO_{2}R^{a} y R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d}, en los que R^{a}, R^{c} y R^{d} son como se definen anteriormente.

Otra clase de compuestos preferidos se representa por los derivados de fórmula (I) en los que R es un grupo -COOR^{a} y R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d}, en los que R^{a}, R^{c} y R^{d} son como se definen anteriormente.

Otra clase de compuestos preferidos se representa por los derivados de fórmula (I) en los que R es como se define en fórmula (I) y R_{1} es un grupo -OR^{c}, en el que R^{c} es como se define anteriormente.

Otra clase de compuestos preferidos se representa por los derivados de fórmula (I) en los que R es un grupo R^{a} y R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d}, en los que R^{a}, R^{c} y R^{d} son como se definen anteriormente.

Preferentemente, dentro de las clases anteriores, R^{a}, R^{b}, R^{c} y R^{d} están seleccionados, cada uno independientemente, de acuerdo con los significados comunicados en tablas I y II de la sección experimental.

Para una referencia a ejemplos específicos de compuestos de fórmula (I) de la invención, opcionalmente en la forma de sales farmacéuticamente aceptables, véase la sección experimental.

Como se expone anteriormente, es un objeto adicional de la presente invención un procedimiento para preparar los compuestos de fórmula (I).

Por lo tanto, los compuestos de fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se obtienen usando técnicas estándar conocidas para alguien de habilidad ordinaria en la técnica. Por ejemplo, se obtienen por un procedimiento que comprende:

a) hacer reaccionar éster metílico de ácido 1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina-3-carboxílico con nitrato de tetrabutilamonio (TBAN) en la presencia de anhídrido trifluoroacético (TFAA), tal como para obtener un compuesto de fórmula (II)

3

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b) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (II) en condiciones de hidrólisis básicas o ácidas tal como para obtener un compuesto de fórmula (III) o una sal del mismo

4

c) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (III) con un agente protector carboxi, por ejemplo un agente esterificante, tal como para obtener un compuesto de fórmula

5

en la que Alk representa alquilo, por ejemplo metilo;

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d) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (IV) con cloruro de estaño(II) y N-metil-a-pirrolidinona (NMP), tal como para obtener un compuesto de fórmula (I)

6

en la que Alk es como se define anteriormente y, opcionalmente, se hace reaccionar de acuerdo con una cualquiera de las etapas alternativas (e.1), (e.2), (e.3) o (e.4)

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e.1) con uno cualquiera de los compuestos de fórmula (V), (VI), (VII) o (VIII)

R^{a}COZ

(V);

R^{a}NCO

(VI);

R^{a}SO_{2}Z

(VII);

R^{a}OCOZ

(VIII)

en los que R^{a} es como se define anteriormente y Z es un átomo de halógeno, tal como para obtener un compuesto de fórmula (I)

7

en la que Alk es como se define anteriormente y R es un grupo -COR^{a}, -CONHR^{a}, -SO_{2}R^{a} o -COOR^{a}, respectivamente; o

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e.2) con una amina adecuada de fórmula (IX) en la presencia de trifosgeno o de un cloroformiato adecuado

(IX)HNR^{a}R^{b}

tal como para obtener el compuesto anterior de fórmula (I) en la que R es un grupo -CONR^{a}R^{b}; o

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(e.3) con un derivado aldehído o cetona adecuado de fórmula (X) en condiciones operativas reductoras

(X)R^{a}-CO-R^{a}

en la que cada R^{a} is el mismo o diferente como se define anteriormente, tal como para obtener el compuesto anterior de fórmula (I) en la que R es un grupo -CH(R^{a})R^{a}; o

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(e.4) con un yoduro o bromuro aromático de fórmula (XI) o (XII)

R^{a}-I

(XI)

R^{a}-Br

(XII)

en presencia de un catalizador de paladio adecuado y de un ligando, tal como para obtener un compuesto de fórmula (I) en la que R es R^{a} y este último representa un grupo aromático carbocíclico o heterocíclico; y, opcionalmente

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f) convertir el compuesto de fórmula (I) que se obtiene de acuerdo con una cualquiera de las etapas (d), (e.1), (e.2), (e.3) o (e. 4) dentro de otro compuesto de fórmula (I) y/o dentro de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

El procedimiento anterior es un procedimiento análogo que se puede llevar a cabo de acuerdo con procedimientos bien conocidos.

De acuerdo con la etapa (a) del procedimiento, la nitración del éster metílico del ácido 1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina-3-carboxílico para proporcionar el compuesto de fórmula (II) se lleva a cabo con nitrato de tetrabutilamonio (TBAN) en la presencia de anhídrido trifluoroacético (TFAA). La reacción se lleva a cabo en un disolvente adecuado, por ejemplo un hidrocarburo halogenado tal como diclorometano, trabajando a una temperatura que varía desde 0ºC hasta temperatura ambiente y durante un tiempo que varía de aproximadamente 10 horas a aproximadamente 30 horas.

De acuerdo con la etapa (b) del procedimiento, el compuesto de fórmula (II) sufre hidrólisis en condiciones básicas o ácidas. Preferentemente, la reacción se lleva a cabo en la presencia de hidróxido de sodio acuoso y de 2,2,2-trifluoroetanol (TFE), a una temperatura que varía de temperatura ambiente a aproximadamente 90ºC y durante un tiempo desde 4 horas hasta un día. De acuerdo con las condiciones operativas que se emplean, el compuesto de fórmula (III) podría obtenerse bien en su forma ácida o, alternativamente, como una sal.

Preferentemente, la reacción de hidrólisis se lleva a cabo en condiciones básicas, por ejemplo en la presencia de hidróxido de sodio, tal como para obtener la sal disódica correspondiente, como por la sección experimental (véase ejemplo 2).

De acuerdo con la etapa (c) del procedimiento, el compuesto de fórmula (III) se esterifica de acuerdo con condiciones operativas bien conocidas en la presencia de alcoholes adecuados. Como un ejemplo, esta reacción se lleva a cabo en la presencia de metanol tal como para conseguir el derivado de éster carboximetílico correspondiente de fórmula (II) en el que Alk representa metilo.

Alternativamente, el compuesto de fórmula (IV) de la etapa (c) en la que Alk representa metilo se prepara por la hidrólisis directa del compuesto de fórmula (II) de acuerdo con procedimientos conocidos, por ejemplo en la presencia de trimetilsilanoato de potasio en tetrahidrofurano (THF) o de trietilamina (TEA) en metanol.

De acuerdo con la etapa (d) del procedimiento, el grupo nitro del compuesto de fórmula (IV) se reduce al derivado amino correspondiente. La reducción se lleva a cabo preferentemente en la presencia de cloruro de estaño(II) y NMP de acuerdo con procedimientos bien conocidos. Claramente, cualquiera de los varios procedimientos conocidos en la técnica para reducir grupos nitro a grupos amino, por ejemplo comprendiendo hidrogenación catalítica, pueden además implicarse adecuadamente también.

A partir de lo anterior, está claro para el hombre experto que desde la reacción anterior de la etapa (d) se obtiene un compuesto de fórmula (I) en la que R es un átomo de hidrógeno y R_{1} es un grupo -OR^{c} en el que R^{c} es justo el grupo alquilo que se introduce por la etapa (c) del procedimiento, por ejemplo metilo.

El compuesto de fórmula (I) así obtenido puede convertirse opcionalmente en una diversidad de derivados de fórmula (I) trabajando como se describe en una cualquiera de las etapas desde (e.1) hasta (e.4) del procedimiento, de acuerdo con procedimientos bien conocidos.

Típicamente, el compuesto de fórmula (I) de etapa (d), que lleva un grupo amino en posición 5, se hace reaccionar: con un compuesto de fórmula (V) tal como para conseguir el derivado carboxamido correspondiente en el que R es -COR^{a} y R^{a} es como se define anteriormente; con un compuesto de fórmula (VI) tal como para conseguir el derivado ureido correspondiente en el que R es -CONHR^{a} y R^{a} es como se define anteriormente; con un compuesto de fórmula (VII) tal como para conseguir un derivado de sulfonamido en el que R es -SO_{2}R^{a} y R^{a} es como se define anteriormente; con un compuesto de fórmula (VIII) tal como para conseguir un derivado carbamato en el que R es -COOR^{a} y R^{a} es como se define anteriormente; con un compuesto de fórmula (IX) y trifosgeno o un cloroformiato adecuado tal como para conseguir un derivado de ureido en el que R es -CONR^{a}R^{b} y R^{a} y R^{b} son como se definen anteriormente; con un compuesto de fórmula (X) en condiciones operativas reductoras tales como para conseguir un derivado en el que R es -CN(R^{a})R^{a} y cada R^{a}, el mismo o diferentes e independientemente unos de otros, es como se define anteriormente.

Una cualquiera de las reacciones anteriores se lleva a cabo de acuerdo con procedimientos convencionales usados normalmente en la preparación de derivados amino funcionalizados, empezando a partir de la amina correspondiente.

Dentro de los compuestos de fórmula (V), (VII) o (VIII) de la etapa (e.1), en particular, Z representa un átomo de halógeno e, incluso más preferentemente, un átomo de cloro.

A este respecto, el compuesto de fórmula (I) de la etapa (d) se disuelve en un disolvente adecuado tal como diclorometano, dimetilformamida, tetrahidrofurano, dioxano o similares, y se añade en ello una base adecuada tal como trietilamina, carbonato de sodio o similares.

El compuesto de fórmula general (V), (VII) o (VIII) se añade después y la mezcla se agita durante un tiempo de aproximadamente 2 horas a aproximadamente 15 horas, a una temperatura que varía desde aproximadamente 20ºC hasta aproximadamente 80ºC. Cuando se usa un isocianato de fórmula general (VI), las condiciones de reacción son las mismas que anteriormente salvo porque la base puede no requerirse. En todas estas reacciones, se puede usar opcionalmente un catalizador adecuado tal como dimetilaminopiridina.

De acuerdo con la etapa (e.2) del procedimiento, el compuesto de fórmula (I) obtenido en la etapa (d) se puede hacer reaccionar con un derivado amina de fórmula (IX) en la presencia de trifosgeno o de un cloroformiato adecuado tal como, por ejemplo, 4-nitrofenilcloroformiato.

La reacción se lleva a cabo en un disolvente adecuado tal como un hidrocarburo halogenado, preferentemente diclorometano, en la presencia de una base tal como, por ejemplo, diisopropiletilamina o trietilamina y trabajando a temperatura ambiente.

De acuerdo con la etapa (e.3) del procedimiento, se hace reaccionar el compuesto de fórmula (I) de etapa (d), en condiciones reductivas, con un derivado de aldehído o cetona de fórmula (X) tal como para obtener el compuesto correspondiente de fórmula (I) en el que R es como se define anteriormente. A partir de lo anterior, está claro para el hombre experto que empleando un derivado aldehído de fórmula (X) en el que uno de los dos R^{a} es un átomo de hidrógeno, el derivado correspondiente en el que R es -CH_{2}R^{a} se puede obtener. Asimismo, empleando un derivado de cetona, se pueden obtener los compuestos que tienen R como -CH(R^{a})R^{a}, en los que cada R^{a} es, independientemente del otro, como se expone anteriormente pero diferente de hidrógeno.

De acuerdo con la etapa (e.4) del procedimiento, el compuesto de fórmula (l) de etapa (d) se convierte en el derivado arilado correspondiente de fórmula (I) con R como R^{a} y en el que R^{a} es un grupo arilo, que por lo tanto comprende grupos aromáticos carbocíclicos o heterocíclicos.

La reacción se lleva a cabo de acuerdo con procedimientos conocidos, con cualquier yodudo o bromuro de arilo adecuado de fórmula (XI) o (XII) en la presencia de un catalizador adecuado, por ejemplo un catalizador de paladio como acetato de paladio o Pd_{2}(dba)_{3}, y de un ligando adecuado. Para una referencia general a la reacción de arilación y a las condiciones operativas de la misma (también inclusivas de disolventes, catalizadores y ligandos) véase, por ejemplo, J. Am. Chem. Soc., (2003), 125, 6653-55; JOC (2001), 66, 2560-2565; y JOC (2002), 67, 6479-6486.

Además de lo anterior, está claro para el hombre experto que, siempre que se desee, cualquiera de los compuestos anteriores de fórmula (I) así preparado puede convertirse adicionalmente en otros derivados de fórmula (I), como se expone en la etapa (f), trabajando de acuerdo con procedimientos convencionales.

Como un ejemplo, los compuestos de fórmula (I)

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en los que R es uno cualquiera de los grupos anteriormente mencionados y Alk representa un alquilo dado, por ejemplo metilo, se pueden convertir en los compuestos de fórmula (I):

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g) en los que R es como se define anteriormente y R_{1} es -OR^{c} con R^{c} distinto de metilo, por reacciones de transesterificación llevadas a cabo de acuerdo con procedimientos bien conocidos, por ejemplo con un compuesto adecuado de fórmula (XIII)

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(XIII)R^{c}-OH

en condiciones ácidas o básicas, opcionalmente en la presencia de catalizadores basados en metales, como óxido de dibutilestaño o alcóxidos de titanio tales como, por ejemplo, etóxido de titanio (IV), isopropóxido de titanio (IV) y similares;

h) en los que R es como se define anteriormente y R_{1} es un grupo -OH, por hidrólisis ácida o básica.

Como un ejemplo adicional, los compuestos de fórmula (I) en los que R es como se define anteriormente y R_{1} es un grupo -OR^{c} en el que R^{c} es un grupo alquilo se pueden convertir también en los derivados amido correspondientes de fórmula (I)

i) en los que R_{1} es -NR^{c}R^{d}, con R^{c} y R^{d} como se definen anteriormente, por tratamiento con amoniaco o con una amina adecuada de fórmula (XIV) o (XV)

(XIV);R^{c}-NH_{2}

(XV)R^{c}R^{d}NH

Opcionalmente en la presencia de catalizador adecuado tal como, por ejemplo, 2-hidroxipiridina, yoduro de potasio, cinauro de sodio o dimetilamino-piridina.

Asimismo, los compuestos de fórmula (I) en los que R es como se define anteriormente y R_{1} es un grupo -OR^{c} en el que R^{c} es hidrógeno se convierten opcionalmente en los derivados amido correspondientes de fórmula (I) trabajando como se expone en la etapa (i), opcionalmente en la presencia de un agente condensante adecuado, por ejemplo diciclohexilcarbodiimida (DCC), 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC), tetrafluoroborato de O-benzotriazoliltetrametilisouronio (TBTU) o hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitripirrolidinofosfonio (PyBOP).

A partir de todo lo anterior, está también claro para la persona experta en la técnica que si un compuesto de fórmula (I), preparado de acuerdo con el procedimiento anterior, se obtiene como una mezcla de isómeros, su separación en los isómeros individuales de fórmula (I), se llevó a cabo de acuerdo con técnicas convencionales, está aún dentro del ámbito de la presente invención.

Asimismo, la conversión en el compuesto libre (I) de una sal correspondiente del mismo, de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la técnica, está aún dentro del ámbito de la invención.

Cuando se preparan los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con cualquier variante del procedimiento, que son todos deseados dentro del ámbito de la invención, grupos funcionales opcionales dentro de los materiales de partida, los reactivos o los intermediarios de los mismos, y que podrían dar lugar a reacciones secundarias no deseadas, son necesarios para protegerse apropiadamente de acuerdo con técnicas convencionales.

Asimismo, la conversión de estos últimos en los compuestos desprotegidos libres se puede llevar a cabo de acuerdo con procedimientos conocidos.

Los materiales de partida del procedimiento objeto de la presente invención, que comprende cualquier posible variante, así como cualquier reactante de los mismos, son compuestos conocidos y si no están comercialmente disponibles per se se pueden preparar de acuerdo con procedimientos bien conocidos.

Como un ejemplo, el compuesto éster metílico del ácido 1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina-3-carboxílico se puede preparar como se describe en Tetrahedron Letters 40 (1999), 5853-5854.

Asimismo, los compuestos de fórmula (V), (VI), (VII), (VIII), (IX), (X), (XII), (XIII), (XIV) y (XV) se conocen o se obtienen fácilmente de acuerdo con procedimientos conocidos.

El compuesto intermedio de fórmula (III) del procedimiento representa un objeto adicional de la invención.

Además de lo anterior, los compuestos de fórmula (I) de la invención se preparan ventajosamente de acuerdo con técnicas de química combinatoria ampliamente conocidas en la técnica, consiguiendo las reacciones anteriormente mencionadas entre los intermedios en una forma en serie y trabajando en condiciones de síntesis en fase sólida (SPS).

Como un ejemplo, los compuestos intermedios de fórmula (III), que se obtienen de acuerdo con la etapa (b) del procedimiento, pueden mantenerse fácilmente en una resina polimérica, por ejemplo por la formación de un grupo carboxamido, y el intermedio así mantenido puede hacerse reaccionar subsiguientemente de acuerdo con las etapas que quedan del procedimiento.

Preferentemente, la resina anterior es una resina poliestirénica comercialmente disponible que incluye, por ejemplo, resina Wang, resina de tritilo, resina de Cl-tritilo, resina de amida de Rink, resina de Tentagel OH, resina formílica y derivados de las mismas.

De acuerdo con una realización preferida de la invención, la resina poliestirénica es una resina poliestirénica de formilo derivatizada que se puede obtener haciendo reaccionar una resina poliestirénica de formilo comercialmente disponible, por ejemplo resina AM de 4-(4-formil-3-metoxi-fenoxi)butirilo, con un derivado amino adecuado en condiciones reductoras, por ejemplo en la presencia de borohidruro de sodio y derivados del mismo, sustancialmente como sigue:

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La reacción se lleva a cabo preferentemente en un disolvente adecuado tal como diclorometano y en la presencia de ácido acético.

Los derivados amino con respaldo polimérico así obtenidos, en particular aquellos que son referibles como resina poliestirénica de formilo derivatizada anteriormente, se conocen ampliamente en la técnica.

En general, las aminas cargadas sobre resinas formilpoliestirénicas también conocidas como resinas de poliestireno de metoxibenzaldehído sensibles a ácidos (resinas AMEBA) se prepararon por aminación reductora estándar en la presencia de un exceso de amina en TMOF/DCE y NaBH(OAc)_{3} o AcOH/DMF y NaCNBH_{3}, por ejemplo como se comunica en Tetrahedron Letters (1997), 38, 7151-7154; J. Am. Chem. Soc. (1998), 120, 5441; y Chem. Eur. J. (1999), 5, 2787.

Por lo tanto, es un objeto adicional de la presente invención un procedimiento para preparar los compuestos de fórmula (I), y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, procedimiento que comprende:

j) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (III), que se prepara de acuerdo con la etapa (b), con una resina poliestirénica de formilo derivatizada de fórmula (XVI)

(XVI)(P)-CH_{2}-NHR^{c}

en la que (P) es la resina y R^{c} es como se define anteriormente, tal como para obtener un compuesto de fórmula (XVII)

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k) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (XVII) de acuerdo con la etapa (d) y, opcionalmente, a cualquiera de las etapas (e.1), (e.2), (e. 3) o (e.4), tal como para obtener un compuesto de fórmula (XVIII)

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en la que (P), R y R^{c} son como se definen anteriormente;

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l) escindiendo la resina a partir del compuesto de fórmula (XVIII) en condiciones ácidas tal como para obtener un compuesto de fórmula (I) en la que R es como se define anteriormente y R_{1} es un grupo -NHR^{c} en el que R^{c} es como se define anteriormente; y, opcionalmente,

m) convertir el compuesto de fórmula (I) así obtenido en otro compuesto de fórmula (I) y/o en sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

De acuerdo con la etapa (j) del procedimiento, se lleva a cabo la reacción en un disolvente adecuado, por ejemplo N-metilpirrolidona (NMP), dimetilformamida (DMF) o diclorometano (DCM), en la presencia de diisopropiletilamina (DIEA) y de un agente condensante adecuado tal como, por ejemplo, 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC), diciclohexilcarbodiimida (DCC), diisopropilcarbodiimida (DIC), dimetilaminopiridina (DMAP) y tetrafluoroborato de O-benzotriazoliltetrametilisouronio (TBTU).

De acuerdo con la etapa (k) del procedimiento, el compuesto mantenido de fórmula (XVII) se reduce primero como por la etapa (d) del procedimiento tal como para obtener el derivado amino, y opcionalmente hacerlo reaccionar adicionalmente como se indica anteriormente, tal como para dar lugar a una diversidad de compuestos funcionalizados en posición 5 del anillo de pirrolo[2,3-b]piridina. Las condiciones operativas son esencialmente aquellas antes comunicadas trabajando en condiciones operativas homogéneas.

La escisión de resina de acuerdo con la etapa (I) puede llevarse a cabo en condiciones ácidas en la presencia de ácidos adecuados tales como, por ejemplo, ácido clorhídrico o ácido trifluoroacético.

Claramente, trabajando de acuerdo con técnicas de química combinatoria como se indicó antes, se puede obtener una pluralidad de compuestos de fórmula (I).

Por consiguiente, es un objeto adicional de la presente invención una biblioteca de dos o más compuestos de fórmula (I)

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en la que

R está seleccionado del grupo constituido por -R^{a}, -COR^{a}, -CONR^{a}R^{b}, -SO_{2}R^{a} o -COOR^{a};

R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d} u -OR^{c};

en los que R^{a}, R^{b}, R^{c} y R^{d}, son el mismo o diferentes, y son cada uno independientemente hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido adicionalmente, seleccionado de alquilo C_{1}-C_{6} lineal o ramificado, alquenilo C_{2}-C_{6} lineal o ramificado, alquinilo C_{2}-C_{6} lineal o ramificado, cicloalquilo C_{3}-C_{6} o cicloalquilalquilo C_{1}-C_{6}, arilo o arilalquilo C_{1}-C_{6}, o heterociclo o heterocicloalquilo C_{1}-C_{6} o, tomados conjuntamente con el átomo de nitrógeno al que están unidos, tanto R^{a} y R^{b} así como R^{c} y R^{d} pueden formar un heterociclo opcionalmente sustituido de 4 a 7 miembros, conteniendo opcionalmente un heteroátomo de anillo adicional o un grupo heteroatómico seleccionado de S, O, N o NH;

o isómeros, tautómeros, vehículos, metabolitos, profármacos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

De acuerdo con una realización preferida de la invención, la biblioteca anteriormente mencionada comprende los compuestos de fórmula (I) en los que R es un grupo R^{a} y R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d}, en los que R^{a}, R^{c} y R^{d} son como se definen anteriormente.

En otra realización la biblioteca anteriormente mencionada comprende compuestos de fórmula (I) en los que R es un grupo -COR^{a} y R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d}, en los que R^{a}, R^{c} y R^{d} son como se definen anteriormente.

En otra realización la biblioteca mencionada anteriormente comprende compuestos de fórmula (I) en los que R es un grupo -CONR^{a}R^{b} y R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d}, en los que R^{a}, R^{b}, R^{c} y R^{d} son como se definen anteriormente.

En otra realización la biblioteca mencionada anteriormente comprende compuestos de fórmula (I) en los que R es un grupo -SO_{2}R^{a} y R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d}, en los que R^{a}, R^{c} y R^{d} son como se definen anteriormente.

En otra realización la biblioteca mencionada anteriormente comprende compuestos de fórmula (I) en los que R es un grupo -COOR^{a} y R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d}, en los que R^{a}, R^{c} y R^{d} son como se definen anteriormente.

En otra realización la biblioteca mencionada anteriormente comprende compuestos de fórmula (I) en los que R es como se define en fórmula (I) y R_{1} es un grupo -OR^{c}, en el que R^{c} es como se define anteriormente.

Para una referencia general a las bibliotecas anteriores de compuestos de fórmula (I) véase la sección experimental.

A partir de todo lo anterior, está claro para el hombre experto que una vez está preparada así una biblioteca de derivados de pirrolo[2,3-b]piridina, por ejemplo constituida por pocos miles de compuestos de fórmula (I), la citada biblioteca se puede usar muy ventajosamente para rastreo en busca de las quinasas dadas, como se comunica antes.

Véanse, para una referencia general a bibliotecas de compuestos y usos de los mismos como herramientas para rastrear actividades biológicas, J. Med. Chem. 1999, 42, 2373-2382; y Bioorg. Med. Chem. Lett. 10 (2000), 223-226.

Farmacología

Los compuestos de fórmula (I) son activos como inhibidores de proteínaquinasas y son por lo tanto útiles, por ejemplo, para restringir la proliferación desrregulada de células tumorales.

En terapia, son útiles en el tratamiento de diversos tumores,tales como aquellos antes comunicados, así como en el tratamiento de otros trastornos proliferativos celulares tales como soriasis, proliferación de células lisas vasculares asociadas con aterosclerosis y estenosis y reestenosis quirúrgica y postquirúrgica y en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.

La actividad inhibidora de inhibidores de cdk/ciclina teóricos y la potencia de compuestos seleccionados se determina por un procedimiento de ensayo en base al uso de tecnología SPA (Amersham Pharmacia Biotech).

El ensayo consiste en la transferencia de resto fosfato marcado con radiactividad por la quinasa a un sustrato biotinilado. El producto biotinilado marcado con ^{33}P resultante se deja unir a perlas de SPA recubiertas de estreptavidina (capacidad de biotina 130 pmol/mg), y la luz emitida se midió en un contador de centelleo.

Ensayo de inhibición de actividad de cdk2/ciclina A

Reacción de quinasa: sustrato de histona H1 biotinilada en el laboratorio de los autores de la presente invención (Sigma n.º: H-5505) 4 \muM, ATP (0,1 microCi P^{33}\gamma-ATP) 10 \muM, complejo ciclina A/CDK2 1,1 nM, inhibidor en un volumen final de tampón de 30 \mul (TRIS HCl 10 mM pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 7,5 mM + BSA a 0,2 mg/ml) se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en forma de U. Después de incubación durante 60 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo por adición de 100 \mul de tampón PBS que contenía EDTA 32 mM, 500 \muM de ATP frío, Tritón al 0,1% X100 y perlas de SPA revestidas de estreptavidina a 10 mg/ml. Después de incubación de 20 minutos, se retiraron 110 \mul de suspensión y se transfirieron en placas OPTIPLATE de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, las placas se leyeron durante 2 minutos en un lector de radiactividad TOP-Count de Packard.

Determinación de CI_{50}: se probaron inhibidores a diferentes concentraciones que varían desde 0,0015 a 10 \muM. Se analizaron los datos experimentales por el programa de ordenador GraphPad Prizm usando la ecuación logística de cuatro parámetros:

y = nivel basal+(nivel superior-nivel basal)/(1+10^{A}((logCI_{50}-x)*pendiente))

donde x es el logaritmo de la concentración del inhibidor, y es la respuesta; y empieza en el nivel basal y va al nivel superior con una forma sigmoidal.

Cálculo de Ki:

Procedimiento experimental: se llevó a cabo la reacción en tampón (Tris 10 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, BSA al 0,2 mg/ml, 7,5 mM DTT) conteniendo enzima 3,7 nM, histona y ATP (proporción constante de ATP 1/3000). La reacción se detuvo con EDTA y el sustrato se capturó en fosfomembrana (placas de 96 pocillos Multiscreen de Millipore). Después de lavado exhaustivo, las placas multiscreen se leyeron en un contador top. Se midió el control (a tiempo cero) para cada concentración de ATP y de histona.

Diseño experimental: se midieron las velocidades de reacción a cuatro concentraciones de ATP, sustrato (histona) e inhibidor. Se diseñó una matriz de concentración de 80 puntos alrededor de los valores de ATP y de Km de sustrato respectivos, y los valores de CI_{50} del inhibidor (0,3, 1, 3, 9 veces los valores de Km o de CI_{50}). Un experimento durante el tiempo preliminar en la ausencia de inhibidor y a las diferentes concentraciones de ATP y de sustrato permite la selección de un tiempo de punto final individual (10 min) en el intervalo lineal de la reacción para el experimento de determinación de Ki.

Parámetros cinéticos estimulados: se estimaron los parámetros cinéticos por regresión de mínimos cuadrados no lineal simultánea usando [Eq. 1] (inhibidor competitivo respecto a ATP, mecanismo al azar) usando el grupo de datos completos (80 puntos):

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en la que A=[ATP], B=[Sustrato], l=[inhibidor], Vm= velocidad máxima, Ka, Kb, Ki son las constantes de disociación de ATP, sustrato e inhibidor respectivamente. \alpha y \beta son respectivamente el factor de cooperatividad entre unión a sustrato y unión aATP y el factor de cooperatividad entre unión a sustrato y unión a inhibidor.

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Además los compuestos seleccionados se caracterizan en un panel de serina/treonina quinasas estrictamente relacionado con el ciclo celular (cdk2/ciclina E, cdkl/ciclina B1, cdk5/p25, cdk4/ciclina D1), y además se caracterizan por especificidad en MAPK, PKA, EGFR, IGF1-R, Aurora-2 y Cdc 7.

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Ensayo de inhibición de actividad de cdk2/ciclina E

Reacción de quinasa: sustrato de histona H1 biotinilada en el laborarorio de los autores de la presente invención (Sigma n.º: H-5505) 10 \muM, ATP (0,3 microCi P^{33}\gamma-ATP) 30 \muM, 4 ng de complejo GST-ciclina E/CDK2, inhibidor en un volumen final de 30 \mul de tampón (TRIS HCl 10 mM pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 7,5 mM + BSA a 0,2 mg/ml) se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en forma de U. Después de incubación durante 60 min a temperatura ambiente, la reacción se detuvo por adición de 100 \mul de tampón PBS que contenía EDTA 32 mM, 500 \muM de ATP frío, Tritón al 0,1% X100 y perlas de SPA revestidas de estreptavidina a 10 mg/ml. Después de incubación de 20 minutos, se retiraron 110 \mul de suspensión y se transfirieron en placas OPTIPLATE de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, las placas se leyeron durante 2 minutos en un lector de radiactividad TOP-Count de Packard.

Determinación de CI_{50}: véase anteriormente.

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Ensayo de inhibición de actividad de cdkl/ciclina B1

Reacción de quinasa: sustrato de histona H1 biotinilada en el laborarorio de los autores de la presente invención (Sigma n.º: H-5505) 4 \muM, ATP (0,2 microCi P^{33}\gamma-ATP) 20 \muM, 3 ng de complejo ciclina B/CDK1, inhibidor en un volumen final de 30 \mul de tampón (TRIS HCl 10 mM pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 7,5 mM + BSA a 0,2 mg/ml) se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en forma de U. Después de incubación durante 20 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo por 100 \mul de PBS + EDTA 32 mM + 0,1% Tritón X-100 + ATP 500 \muM, conteniendo 1 mg de perlas de SPA. Después se transfirió un volumen de 110 \mul a Optiplate.

Después de 20 minutos de incubación para captura de sustrato, se añadieron 100 \mul de CsCl 5M para permitir la estratificación de perlas en la parte superior de la Optiplate y se dejo permanecer 4 horas antes de la cuenta en el instrumento de Top-Count.

Determinación de CI_{50}: véase anteriormente.

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Ensayo de inhibición de actividad cdk5/p25

El ensayo de inhibición de actividad cdk5/p25 se lleva a cabo de acuerdo con el siguiente protocolo.

Reacción de quinasa: sustrato de histona H1 biotinilada (Sigma n.º: H-5505), 10 \muM ATP (0,3 microCi P^{33}\gamma-ATP) 30 \muM, 15 ng de complejo CDK5/p25, inhibidor en un volumen final de 30 \mul de tampón (TRIS HCl 10 mM pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 7,5 mM + BSA a 0,2 mg/ml) se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en forma de U. Después de incubación durante 35 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo por adición de 100 \mul de tampón PBS conteniendo EDTA 32 mM, 500 \muM de ATP frío, Tritón al 0,1% X100 y perlas de SPA revestidas de estreptavidina a 10 mg/ml. Después de incubación de 20 minutos, se retiraron 110 \mul de suspensión y se transfirieron en placas OPTIPLATE de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, las placas se leyeron durante 2 minutos en un lector de radiactividad TOP-Count de Packard.

Determinación de CI_{50}: véase anteriormente.

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Ensayo de inhibición de actividad de cdk4/ciclina D1

Reacción de quinasa: sustrato de GST-Rb de ratón (769-921) (n.º: sc-4112 de Santa Cruz) 0,4 \muM, ATP (0,5 \muCi P^{33}\gamma-ATP) 10 \muM, 100 ng de GST-cdk4/GST-ciclina D1 expresado en baculovirus, concentraciones adecuadas de inhibidor en un volumen final de 50 \mul de tampón (TRIS HCl 10 mM pH 7,5, MgCI_{2} 10 mM, DTT 7,5 mM + BSA a 0,2 mg/ml) se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en forma de U. Después de incubación durante 40 minutos a 37ºC, se detuvo la reacción por 20 \mul de EDTA 120 mM.

Captura: se transfirieron 60 \mul de cada pocillo a placa MultiScreen, para permitir la unión de sustrato a filtro de fosfocelulosa. Las placas se lavaron después 3 veces con 150 \mul de PBS libre de Ca^{++}/Mg^{++}/pocillo y se filtraron por sistema de filtración de MultiScreen.

Detección: se dejaron secar filtros a 37ºC, después se añadió compuesto centelleante a 100 \mul/pocillo y se detectó fragmento Rb marcado con ^{33}P mediante cuenta de radiactividad en el instrumento Top-Count.

Determinación de CI_{50}: véase anteriormente.

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Ensayo de inhibición de actividad MAPK

Reacción de quinasa: sustrato de MBP (Sigma n.º: M-1891) biotinilado en el laborarorio de los autores de la presente invención 10 \muM, ATP (0,15 microCi P^{33}\gamma-ATP) 15 \muM, 30 ng de GST-MAPK (Upstate Biothecnology n.º^{s}: 14-173), inhibidor en un volumen final de tampón (TRIS HCl 10 mM pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 7,5 mM + BSA a 0,2 mg/ml) de 30 \mul se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en forma de U. Después de incubación durante 35 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo por adición de 100 \mul de tampón de PBS que contenía EDTA a 32 mM, ATP frío a 500 \muM, Tritón al 0,1% X100 y perlas de SPA recubiertas de estreptavidina a 10 mg/ml. Después de 20 minutos de incubación, se retiraron y transfirieron 110 \mul de suspensión en OPTIPLATE de 96 pocillos conteniendo 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, se leyeron las placas durante 2 minutos en un lector de radioactividad TOP-Count de Packard.

Determinación de CI_{50}: véase anteriormente.

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Ensayo de inhibición de actividad PKA

Reacción de quinasa: sustrato de histona H1 biotinilada (Sigma n.º: H-5505) en el laboratorio de los autores de la presente invención 10 \muM, ATP (0,2 microCi P^{33}\gamma-ATP) 10 \muM, 0,45 unidades enzimáticas de PKA (Sigma n.º: 2645), inhibidor en un volumen final de 30 \mul de tampón (TRIS HCl 10 mM pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 7,5 mM + BSA a 0,2 mg/ml) se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en forma de U. Después de incubación durante 90 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo por adición de 100 \mul de tampón PBS conteniendo EDTA 32 mM, 500 \muM de ATP frío, Tritón al 0,1% X100 y perlas de SPA revestidas de estreptavidina a 10 mg/ml. Después de incubación de 20 minutos, se retiraron 110 \mul de suspensión y se transfirieron en placas OPTIPLATE de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, las placas se leyeron durante 2 minutos en un lector de radiactividad TOP-Count de Packard.

Determinación de CI_{50}: véase anteriormente.

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Ensayo de inhibición de actividad EGFR

Reacción de quinasa: sustrato de MBP biotinilada (Sigma n.º: M-1891) en el laborarorio de los autores de la presente invención 10 \muM, ATP (0,04 microCi P^{33}\gamma-ATP) 2 \muM, 36 ng de GST-EGFR expresado en células de insecto, inhibidor en un volumen final de 30 \mul de tampón (Hepes 50 mM pH 7,5, MgCl_{2} 3 mM, MnCl_{2} 3 mM, DTT 1 mM, NaCO_{3} 3 \muM + BSA a 0,2 mg/ml) se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en forma de U. Después de incubación durante 20 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo por adición de 100 \mul de tampón PBS conteniendo EDTA 32 mM, 500 \muM de ATP frío, Tritón al 0,1% X100 y perlas de SPA revestidas de estreptavidina a 10 mg/ml. Después de incubación de 20 minutos, se retiraron 110 \mul de suspensión y se transfirieron en placas OPTIPLATE de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, las placas se leyeron durante 2 minutos en un lector de radiactividad TOP-Count de Packard.

Determinación de CI_{50}: véase anteriormente.

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Ensayo de inhibición de actividad IGF1-R

El ensayo de inhibición de actividad IGF1-R se lleva a cabo de acuerdo con el siguiente protocolo.

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Activación de enzima: IGF1-R se debe activar por autofosforilación antes de empezar el experimento. Justo antes del ensayo, se incuba una solución de enzima concentrada (694 nM) durante media hora a 28ºC en la presencia de ATP 100 \muM y después se llevó a la dilución de trabajo en el tampón indicado.

Reacción de quinasa: sustrato de péptido IRS1 biotinilado (PRIMM) 10 \muM, inhibidor 0-20 \muM, ATP 6 \muM, 1 microCi P^{33}\gamma-ATP, y GST-IGF1-R 6 nM (preincubada durante 30 minutos a temperatura ambiente con ATP frío 60 \muM) en un volumen final de 30 \mul de tampón (Hepes 50 mM pH 7,9, MnCl_{2} 3 mM, DTT 1 mM, NaCO_{3} 3 \muM) se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en forma de U. Después de incubación durante 35 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo por adición de 100 \mul de tampón de PBS conteniendo EDTA 32 mM, ATP frío 500 \muM, Tritón al 0,1% X100 y perlas de SPA revestidas de estreptavidina a 10 mg/ml. Después de incubación de 20 minutos, se retiraron 110 \mul de suspensión y se transfirieron en placas OPTIPLATE de 96 pocillos que contenían 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, las placas se leyeron durante 2 minutos en un lector de radiactividad TOP-Count de Packard.

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Ensayo de inhibición de actividad Aurora-2

Reacción de quinasa: péptido biotinilado (4 repeticiones de LRRWSLG) 8 \muM, ATP (0,5 \muCi P^{33}\gamma-ATP) 10 \muM, 7,5 ng de Aurora 2, inhibidor en un volumen final de 30 \mul de tampón (HEPES 50 mM pH 7,0, MgCl_{2} 10 mM, DTT 1 mM, BSA a 0,2 mg/ml, ortovanadato 3 \muM) se añadieron a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo en forma de U. Después de incubación de 60 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo y el péptido biotinilado fue capturado añadiendo 100 \mul de suspensión de perlas.

Estratificación: se añadieron 100 \mul de CsCl 2,5 M a cada pocillo y se dejaron reposar 4 horas antes de que se contara la radiactividad en el instrumento Top-Count.

Determinación de CI_{50}: véase anteriormente.

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Ensayo de inhibición de actividad Cdc7/dbf4

El ensayo de inhibición de actividad de Cdc7/dbf4 se llevó a cabo de acuerdo con el siguiente protocolo.

El sustrato de biotina-MCM2 se transfosforila por el complejo Cdc7/Dbf4 en la presencia de ATP localizado con P^{33}\gamma-ATP. El sustrato biotina-MCM2 fosforilado se captura después por perlas de SPA revestidas de estreptavidina y la extensión de la fosforilación se evaluó realizando cuentas de \beta.

El ensayo de inhibición de actividad Cdc7/dbf4 se llevó a cabo en placa de 96 pocillos de acuerdo con el siguiente protocolo.

Se añadieron a cada pocillo de la placa:

- 10 \mul de sustrato (MCM2 biotinilada, concentración final 6 \muM)

- 10 \mul enzima (Cdc7/Dbf4, concentración final de 17,9 nM)

- 10 \mul de compuesto de prueba (12 concentraciones crecientes en el intervalo nM a \muM varían para generar una curva de respuesta a dosis)

- 10 \mul de una mezcla de ATP frío (concentración final de 2 \muM) y ATP radioactivo (proporción molar 1/5000 con ATP frío)

se usó después para comenzar la reacción que se dejó tener lugar a 37ºC.

Se diluyeron sustrato, enzima y ATP en HEPES 50 mM pH 7,9 conteniendo MgCl_{2} 15 mM, DTT 2 mM, NaCO_{3} 3 \muM, glicerofosfato 2 mM y BSA al 0,2 mg/ml. El disolvente para los compuestos de prueba contenía también DMSO al 10%.

Después de incubación durante 60 minutos, la reacción se detuvo añadiendo a cada pocillo 100 \mul de PBS pH 7,4 conteniendo EDTA 50 mM, ATP frío 1 mM, Tritón al 0,1% X100 y perlas de SPA revestidas de estreptavidina a 10 mg/ml.

Después de incubación de 20 minutos, se retiraron 110 \mul de suspensión y se transfirieron en OPTIPLACA de 96 pocillos que contienen 100 \mul de CsCl 5M. Después de 4 horas, las placas se leyeron durante 2 minutos en un lector de radiactividad TOP-Count de Packard.

Determinación de CI_{50}: véase anteriormente.

Los compuestos de fórmula (I) de la presente invención, adecuados para la administración a un mamífero, por ejemplo a humanos, se pueden administrar por las rutas usuales y el nivel de dosificación depende de la edad, del peso, de las afecciones del paciente y de la vía de administración.

Por ejemplo, una dosificación adecuada adoptada para administración oral de un compuesto de fórmula (I) varía preferentemente desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 500 mg por dosis, de 1 a 5 veces diarias.

Los compuestos de la invención se pueden administrar en una diversidad de formas de dosificación, por ejemplo oralmente, en forma de comprimidos, cápsulas, comprimidos revestidos de azúcar o de película, soluciones o suspensiones líquidas; rectalmente en forma de supositorios; parenteralmente, por ejemplo intramuscularmente, o por inyección o infusión intravenosa y/o intratecal y/o intraespinal.

Además, los compuestos de la invención se pueden administrar bien como agentes individuales o bien, alternativamente, en combinación con tratamientos anticancerígenos conocidos tales como terapia de radiación o régimen de quimioterapia en combinación con agentes citostáticos o citotóxicos, agentes del tipo de los antibióticos, agentes alquilantes, agentes antimetabolitos, agentes hormonales, agentes inmunológicos, agentes de tipo interferón, inhibidores de ciclooxigenasa (por ejemplo inhibidores de COX-2), inhibidores de metalomatriz-proteasa, inhibidores de telomerasa, inhibidores de tirosinaquinasa, agentes receptores de factores del crecimiento, agentes anti-HER, agentes anti-EGFR, agentes antiangiogénesis, inhibidores de farnesiltransferasa, inhibidores de ruta de transducción de señales ras-raf, inhibidores del ciclo celular, inhibidores de las otras cdk, agentes de unión a tubulina, inhibidores de topoisomerasa I, inhibidores de topoisomerasa II y similares, opcionalmente en formulaciones liposomales de los mismos.

Si se formulan como una dosis fija, tales productos de combinación emplean los compuestos de la presente invención en el intervalo de dosificación anteriormente descrito y el otro agente farmacéuticamente activo dentro del intervalo de dosificación aprobado.

Los compuestos de fórmula (I) se pueden usar secuencialmente con agentes anticancerígenos conocidos cuando es inapropiada una formulación de combinación.

La presente invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable (que puede ser un vehículo o un diluyente).

Las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la invención se preparan usualmente siguiendo procedimientos convencionales y se administran en una forma farmacéuticamente adecuada.

Por ejemplo, las formas orales sólidas pueden contener, conjuntamente con el compuesto activo, diluyentes por ejemplo lactosa, dextrosa, sacarosa, sucrosa, celulosa, almidón de patata o almidón de maíz; lubricantes, por ejemplo sílice, talco, esteárico, estearato de magnesio o estearato de calcio, y/o polietilenoglicoles; agentes de unión, por ejemplo almidones, goma arábiga, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinilpirrolidona; agentes disgregantes, por ejemplo un almidón, algínico, alginatos o glicolato de sodio almidón; mezclas efervescentes; pigmentos; edulcorantes; agentes humectantes tales como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y, en general, sustancias no tóxicas y farmacológicamente inactivas usadas en formulaciones farmacéuticas. Las preparaciones farmacéuticas se elaboraron usando técnicas conocidas, por ejemplo, por medio de procedimientos de mezcla, granulación, compresión, revestimiento con azúcar o revestimiento con película.

Las dispersiones líquidas para administración oral incluyen también por ejemplo jarabes, emulsiones y suspensiones.

Se prefiere que los jarabes incluyan, por ejemplo, sacarosa o sacarosa con glicerina y/o manitol y/o sorbitol como vehículo.

Se prefiere que las suspensiones y las emulsiones contengan como vehículo, por ejemplo, un caucho natural, agar, alginato de sodio, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, o alcohol polivinílico.

La suspensión o las soluciones para inyecciones intramusculares contiene(n) opcional y preferentemente, conjuntamente con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo agua estéril, aceite de oliva, oleato de etilo, glicoles, por ejemplo propilenoglicol, y, si se desea, una cantidad adecuada de clorhidrato de lidocaína. Las soluciones para inyecciones o infusiones intravenosas contienen opcional y preferentemente como vehículo, por ejemplo, agua estéril o preferentemente pueden estar en forma de soluciones estériles, acuosas, salinas isotónicas o pueden contener como un vehículo propilenoglicol.

Se prefiere que los supositorios contengan conjuntamente con el compuesto activo un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo manteca de cacao, polietilenoglicol, un tensioactivo éster graso de polioxietileno sorbitán o lecitina.

Los siguientes ejemplos se desean por la presente para ilustrar mejor la presente invención sin plantear limitación alguna a ella.

Sección experimental Procedimientos Generales

La cromatografía ultrarrápida se llevó a cabo en gel de sílice (calidad Merck 9395, 60A). Los tiempos de retención de cromatografía líquida a alta presión (HPLC: valores de t.r.) se determinaron por:

Procedimiento 1 (HPLC_1)

Instrumentación: bomba binaria de Hewlett Packard 1312A; automuestreador de Gilson 215 ajustado con una jeringuilla de 1 ml, Detector de Dispersión Lumínica Evaporativa (ELSD) de Polymer Labs PL1000, y un espectrómetro de masas Micromass ZMD que opera en modo de ionización positiva de electropulverización. El eluyente de CL se divide y entra en el espectrómetro de masas a aproximadamente 200 \mul/minuto, 800 \mul/minuto para el ELS.

Condición cromatográfica: fases móviles de HPLC constituidas por ácido trifluoroacético al 0,1% en agua de calidad HPLC (A) y ácido trifluoroacético al 0,1% en acetonitrilo de calidad HPLC (B). El gradiente de HPLC se muestra en la tabla a continuación

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Los tiempos de retención de ELSD (HPLC a t.r.) se dan en minutos. La masa se da como proporción m/z.

Procedimiento 2 (HPLC_2)

Instrumentación: sistema de HPLC Waters 2790 equipado con un detector PDA 996 Waters y un espectrómetro de masas de cuadrupolo individual mod. ZQ de Micromass, equipado con una fuente iónica de electropulverización (IEP).

Condición cromatográfica: columna RP18 Waters X Terra (4,6 x 50 mm, 3,5 \mum); la fase móvil A fue tampón de acetato de amonio 5 mM (pH 5,5 con ácido acético/acetonitrilo 95:5), y la fase móvil B fue H_{2}O/acetonitrilo (5:95). Gradiente de B desde el 10 al 90% en 8 minutos, mantener B al 90% 2 minutos. Detección de UV a 220 nm y a 254 nm. Velocidad de flujo 1 ml/min. Volumen de inyección 10 \mul. Rastreo completo, intervalo de masas de 100 a 800 umas. El voltaje capilar fue 2,5 KV; la temperatura de la fuente fue 120ºC; el cono fue 10 V. Los tiempos de retención (HPLC a t.r.) se dan en minutos a 220 nm o a 254 nm. La masa se da como proporción m/z.

Cuando es necesario, los compuestos se han purificado por HPLC preparativa en una columna Waters Symmetry C18 (19 x 50 mm, 5 \mum) usando una HPLC 600 preparativa de Waters equipada con detector PDA 996 Waters y un espectrómetro de masas de cuadrupolo individual mod. ZQ de Micromass, ionización de pulverización electrónica, modo positivo. La fase móvil A fue ácido trifluoroacético al 0,01% en agua (TFA), y la fase móvil B fue acetonitrilo. Gradiente de B del 10 al 90% en 8 minutos, mantenido B al 90% 2 minutos. Velocidad de flujo 20 ml/minuto.

Se llevó a cabo espectrometría de RMN ^{1}H en un instrumento de entrante individual Bruker AVANCE a 400 MHz con gradientes. Se equipó con una sonda QNP (sonda de 4 núcleos intercambiable - 1H, 13C, 19F y 31 P) (procedimiento de RMN 1) o en un Mercury VX 400 operando a 400,45 MHz equipado con una sonda de resonancia doble de 5 mm [1H (15N-31P) ID_PFG Varian] (procedimiento de RMN 2).

Como se indica antes, varios derivados de pirrolo-piridinas de fórmula (I) de la invención (también identificados como azaindoles dentro de poco) se han sintetizado en paralelo, de acuerdo con técnicas de química combinatoria.

A este respecto, algunos compuestos así preparados se han identificado convenientemente y sin ambigüedad, como por el sistema codificante de tablas III y de V a VIII, conjuntamente con tiempo de retención de HPLC (procedimientos 1 y 2) y masa. La tabla IV, en cambio, hace referencia a datos de RMN analítica para algunos compuestos representativos de fórmula (I) de la biblioteca.

Cada código, que identifica un compuesto de fórmula (I) específico individual, consta de tres unidades A-M-B.

A representa cualquier sustituyente R_{1}- [véase fórmula (I)] y está unido al resto del resto azaindol por el átomo de carbono tal como para conseguir derivados azaindol que estén sustituidos en posición 3 (A-M-B); cada radical A (sustituyente) está representado en la tabla I siguiente.

B representa cualquier sustituyente R- [véase fórmula (I)] y está unido al resto del resto azaindol por el átomo de nitrógeno tal como para conseguir derivados azaindol que estén sustituidos en posición 5 (A-M-B); cada radical B (sustituyente) está representado en la tabla II siguiente.

M se refiere al núcleo central del resto 3-carboxi-azaindol divalente que tiene el grupo -N- en posición 5, sustituido con grupos A y B.

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Para facilidad de referencia, cada uno de los grupos A o B de tablas I y II se ha identificado con la fórmula química apropiada que indica también el punto de unión con el resto de la molécula M.

Justo como un ejemplo, el compuesto A21-M-B10 de tabla V (véase Entrada 3162) representa un azaindol M que está sustituido en posición 5 por el grupo B10 y en posición 3 (a través del grupo -NH-) por el grupo A21; asimismo, el compuesto A10-M-B70 de tabla III (véase Entrada 2083) representa un azaindol M que está sustituido en posición 5 por el grupo B70 y en posición 3 (a través del grupo -NH-) por el grupo A10:

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TABLA I Grupos A

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TABLA II Grupos B

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Ejemplo 1

Preparación de 5-nitro-1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina-3-carboxilato de metilo

A una solución enfriada en hielo de 187,7 g (0,616 mol) de nitrato de tetrabutilamonio en 2,07 l de diclorometano, se añadió gota a gota durante un periodo de 25 minutos anhídrido trifluoroacético (85,7 ml, 0,616 mol), en nitrógeno. Esta mezcla se transfirió lentamente, por medio de cánula, a una solución preformada de 150,0 g (0,474 mol) de éster metílico del ácido 1-(fenilsulfonil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridina-3-carboxílico en 2,7 l de diclorometano a +4ºC. La mezcla de reacción se agitó a +4ºC durante 4 horas y después se mantuvo a esta temperatura durante 23 horas adicionales. La masa de reacción fría se vertió en 2,3 l de agua y se agitó durante 1 hora. La fase acuosa se separó y se extrajo de nuevo con 1 l de diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se concentraron a vacío hasta una suspensión amarilla espesa, que se trató con 1,05 l de metanol. La suspensión se enfrió a 0ºC y se agitó durante 1 hora adicional antes de que ello se filtrara, se lavó con metanol y se secó proporcionando 128 g de compuesto del título puro como un sólido amarillo lanoso (rendimiento = 74,7%). P.f. = 195-196ºC.

RMN ^{1}H-procedimiento 2 (DMSO): 3,91 (s, 3H), 7,64-7,69 (m, 2H), 7,76-7,81 (m, 1H), 8,25-8,27 (m, 2H), 8,74 (s, 1H), 8,96 (d, 1H, J=2,58 Hz), 9,27 (d, 1H, J=2,58 Hz).

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Ejemplo 2

Preparación de 5-nitro-1H-pirrolo[2,3-b]piridina-3-carboxilato disódico

Se añadieron a una suspensión de 95,7 g (0,265 mol) del compuesto de ejemplo 1 en 1,34 l de 2,2,2-trifluoroetanol, 0,545 l de NaOH al 17% durante un periodo de 40 minutos en agitación vigorosa. La mezcla amarillo-naranja se calentó a reflujo durante 16 horas y después se enfrió a 0ºC y se agitó durante 2 horas adicionales. El precipitado se retiró por filtración, se lavó con acetona y se secó proporcionando 79,8 g del compuesto del título como un sólido cristalino naranja (rendimiento = 93,1% como tetrahidrato). P.f. >230ºC.

RMN ^{1}H-procedimiento 2 (DMSO): 7,83 (sa, 1H), 8,89 (d, 1H, J=2,80 Hz), 9,07 (sa, 1H).

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Ejemplo 3

Preparación de ácido 5-nitro-1 H-pirrolo[2,3-b]piridina-3-carboxílico

A una solución transparente del compuesto de ejemplo 2 (88,10 g, 0,35 mol) en 2,65 l de agua, se añadió gota a gota HCl concentrado (52,6 ml, 0,526 mol) diluido con 105 ml de agua durante un periodo de 50 minutos en agitación eficiente a temperatura ambiente. La suspensión resultante se enfrió a +4ºC y se agitó durante 1 hora adicional. El precipitado se eliminó por filtración, se lavó con agua y se secó finalmente dando 55,6 g del compuesto del título como un polvo amarillo claro (rendimiento = 98,5% (95% del título)). P.f. = 282-285ºC. RMN ^{1}H-procedimiento 2 (DMSO): 8,41 (d, 1H, J=2,83 Hz), 9,00 (d, 1H, J=2,59 Hz), 9,16 (d, 1H, J=2,59 Hz), 12,5-13,0 (sa, 1H), 13,14 (s, 1H).

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Ejemplo 4

Carga de isoamilamina (correspondiente al fragmento A32 de Tabla I) sobre resina de polestireno de metoxibenzaldehído sensible a ácido (resina AMEBA)

Se hinchó en DCM resina AM de 4-(4-formil-3-metoxifenoxi)butirilo [copoli(estireno-divinilbenceno al 1%) malla 100-200] (1,5 g, 1 equivalente, carga 0,94 mmol/g) y después se filtró. Se añadió una mezcla de THF/DCM (4:1,15 ml), isoamilamina (6 eq.) y AcOH (6 eq.). Después de 15 minutos, se añadió NaBH(OAc)_{3} y la reacción se agitó durante toda una noche a temperatura ambiente. Después de filtración, la resina se lavó con metanol (x 3), DMF/DCM (1:1) (x 3) y DCM (x 5).

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Ejemplo 5

Preparación de A32-M-B47

Etapa (a)

Carga del armazón de 7-azaindol (compuesto del título de ejemplo 3) sobre la resina del ejemplo 4

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Se añadió a la resina de ejemplo 4 (10 g, 0,77 mmol/g, 7,7 mmol) en DMF anhidro (100 ml) 3-carboxi-5-nitro-7-azaindol (2,39 g, 11,55 mmol), TBTU (3,71 g, 11,55 mmol) y DIPEA (2,92 g, 23,10 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas y después la resina se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (100 ml), DCM (100 ml), DMF (100 ml), DCM (100 ml), MeOH (100 ml), DCM (100 ml), MeOH (100 ml), DCM (100 ml), MeOH (100 ml) y TBME (100 ml x 2) y se secó a vacío dando la resina unida a 7-azaindol (11,30 g).

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Control de carga de resina

Se llevó a cabo control de carga de resina mostrando la carga completa del bloque de construcción sobre la resina y que no ha ocurrido ninguna oligomerización mientras tuvo lugar el acoplamiento con TBTU. Se usó cloruro de benzoílo con el fin de terminar amina cargada de resina sin reaccionar (es decir isoamilamina, por ejemplo 5) y de acilar el 1-NH-azaindol. La ausencia de benzamida (es decir isoamilbenzamida, por ejemplo 5) en la mezcla escindida muestra la carga cuantitativa del armazón en la resina. La presencia de 1-N-benzoilazaindol o de 1-NH-azaindol, mostró que no ha ocurrido homoacoplamiento del 3-carboxi-5-nitro-7-azaindol durante la etapa de carga de resina.

Se añadieron DIPEA (0,035 g, 0,265 mmol) y cloruro de benzoilo (0,038 g, 0,265 mmol) a la resina obtenida tras el procedimiento descrito en el ejemplo 5 (etapa a) (0,035 g, 0,027 mmol) en DCM (1 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 4 horas y la resina se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (1 ml), DCM (1 ml), DMF (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), agua (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), TBME (1 ml x 2) y después se secó al aire. El producto se escindió de la resina (1 ml de TFA al 60%/DCM durante 20 minutos) dando un sólido blanquecino (0,008 g, al 80%). CLEM (muestra una mezcla del azaindol 1-N-benzoilado y del 1-NH-azaindol): m/z 277 [M+H]+ m/z 318 [M+MeCN+H]^{+} (pureza al 17% a 215 nm) y m/z 381 [M+H]^{+}, m/z 422 [M+MeCN+H]^{+} y m/z 761 [2M+H]^{+} a t.r. 2,04 minutos (pureza del 74% a 215 nm).

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Etapa (b)

Reducción del grupo nitro

A la resina obtenida en la etapa (a) (11 g, 7,5 mmol) en NMP (100 ml), se añadió cloruro dihidrato de estaño(II) (15,94 g, 77 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas y después la resina se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (100 ml), DCM (100 ml), DMF (100 ml), DCM (100 ml), MeOH (100 ml), agua (100 ml), MeOH (100 ml), DCM (100 ml), MeOH (100 ml), DCM (100 ml), MeOH (100 ml), TBME (100 ml x 2) y se secó a vacío dando el azaindol unido a resina (11,05 g). Se escindieron 0,01 g de resina con 1 ml de TFA al 60%/DCM durante 20 minutos, dando un sólido blanquecino (0,0014 g, al 74%).

CLEM: m/z 247 [M+H]+ y m/z 288 [M+MeCN+H]+ a t.r. 1,35 minutos (pureza al 96% a 215 nm).

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Etapa c

Terminación con cloruros ácidos

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Se añadió base de Hunig (0,050 g, 0,385 mmol) a la resina de la etapa (b) (0,11 g, 0,075 mmol) en DCM (1 ml) seguida por cloruro de 4-metoxibenzoílo (que corresponde al fragmento B47 de Tabla II, 0,065 g, 0,385 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas y después la resina se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (1 ml), DCM (1 ml), DMF (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), agua (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), TBME (1 ml x 2) y después se secó al aire.

La resina se agitó en una solución de acetonitrilo/amoniaco (1 ml, 4:1) durante 4 horas y después se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (1 ml), DCM (1 ml), DMF (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), agua (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), TBME (1 ml x 2) y después se secó al aire. El producto se escindió de la resina (TFA al 60%/DCM, 3 x (3 x 0,5 ml)) dando un sólido blanquecino (0,016 g, al 55%) de fórmula (I) que corresponde a A32-M-B47 (véase Entrada 964 de tabla III más adelante).

RMN ^{1}H-procedimiento 1 (MeOH d-4): 8,75 (1H, d, 2,3 Hz), 8,67 (1H, s), 7,97 (1H, s), 7,85 (2H, d, 8,8 Hz), 6,92 (2H, d, 8,9 Hz), 3,75 (3H, s), 3,39 (2H, t, 7,5 Hz), 1,62-1,52 (1H, m), 1,44-1,37 (2H, m), 0,85 (6H, d, 6,6 Hz), no se observaron indol y NH-amidas;

CLEM (HPLC_1): m/z 381 [M+H]+ a t.r. 1,24 minutos (al 100% por detección de ELS).

Tras el procedimiento descrito anteriormente, es decir partiendo de cualquier derivado de amino adecuado que se mantenga sobre la resina de acuerdo con el ejemplo 4, y trabajando como por las etapas anteriores desde (a) hasta (c) de ejemplo 5 en la presencia de cualquier derivado de cloruro de acilo, se prepararon los siguientes compuestos de tabla III (es decir biblioteca):

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TABLA II

30

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95

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Para las entradas desde la 2774 hasta la 2813 de la Tabla III, también se hace funcionar RMN ^{1}H (RMN-procedimiento 2) y los datos se comunicaron en la Tabla IV siguiente

TABLA IV

96

97

98

99

Ejemplo 6

Preparación de A32-M-B13

Trabajando como se describe en los ejemplos 4 y 5 y llevando a cabo la reacción de terminación con cloruro de sulfonilo de 2-trifluorometil-benceno (correspondiente a fragmento B13 de tabla II) en lugar del derivado de cloruro de acilo, el compuesto del título se se obtuvo de acuerdo con las siguientes condiciones operativas.

Se añadieron a la resina que se obtiene en la etapa (b) de ejemplo 5 (0,11 g, 0,075 mmol) en DCM (1 ml), piridina (0,030 g, 0,385 mmol), DMAP (0,001 g, 0,0077 mmol) y cloruro de 2-trifluorometilbenceno sulfonilo (0,094 g, 0,385 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas y después la resina se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (1 ml), DCM (1 ml), DMF (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), agua (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), TBME (1 ml x 2) y después se secaron al aire. El producto se escindió de la resina (TFA al 60%/DCM, 3 x (3 x 0,5 ml)) dando un sólido blanquecino (0,02 g, 55%) que corresponde al compuesto A32-M-B13 (véase Entrada 3364 de la tabla V más adelante).

CLEM (HPLC_1): m/z 455 [M+H]^{+} y 496 [M+MeCN+H]^{+} a t.r. 1,36 minutos (97,5% por detección ELS).

Trabajando de acuerdo con cualquier ejemplo anterior, es decir empezando de acuerdo con cualquier derivado de amino mantenido en resina adecuado y llevando a cabo la reacción de terminación con cualquier derivado de cloruro de sulfonilo adecuado, se obtuvieron así los siguientes compuestos de la Tabla V (es decir biblioteca).

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TABLA V

101

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Ejemplo 7

Carga de 4-fluorobencilamina (correspondiente al fragmento A12 de Tabla I) sobre resina de poliestireno de metoxibenzaldehído sensible a ácidos (resina AMEBA II)

La reacción se llevó a cabo trabajando como se comunica en el ejemplo 4, en la presencia de 4-fluorobencilamina en vez de isoamilamina.

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Ejemplo 8

Preparación de A12-M-B139

Etapa a

Carga del armazón de 7-azaindol (compuesto del título del ejemplo 3) sobre la resina del ejemplo 7

A la resina del ejemplo 7 (7,5 g, 0,77 mmol/g, 5,7 mmol) en DMF anhidro (75 ml), se añadieron 3-carboxi-5-nitro-7-azaindol (1,794 g, 8,67 mmol), TBTU (2,78 g, 8,67 mmol) y DIPEA (2,24 g, 17,34 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas y después la resina se aisló mediante filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (75 ml), DCM (75 ml), DMF (75 ml), DCM (75 ml), MeOH (75 ml), DCM (75 ml), MeOH (75 ml), DCM (75 ml), MeOH (75 ml), TBME (75 ml x 2) y se secó a vacío dando el 7-azaindol unido a resina (8,50 g).

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Control de carga de resina

El control de carga de resina se llevó a cabo mostrando la carga completa del bloque de construcción en la resina y que no ha ocurrido ninguna oligomerización durante el acoplamiento con TBTU.

Se añadieron DIPEA (0,035 g, 0,265 mmol) y cloruro de benzoílo (0,038 g, 0,265 mmol) a la resina (0,035 g, 0,027 mmol) en DCM (1 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 4 horas y la resina se aisló mediante filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (1 ml), DCM (1 ml), DMF (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), agua (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), TBME (1 ml x 2) y se secó al aire. El producto se escindió a partir de la resina (1 ml de TFA al 60%/DCM durante 20 minutos) dando un sólido blanquecino (0,007 g, al 64%). CLEM (HPLC_1) (indol N-benzoilado): m/z 419 [M+H]+ a t.r. 1,56 min (al 97% por detección ELS).

Etapa b

Protección N-BOC de 7-azaindol en fase sólida

121

Se añadieron a la resina de la etapa (a) (8,4 g, 5,7 mmol) en DCM anhidro (75 ml), DMAP (0,07 g, 0,58 mmol) y di-terc-butilcarbonato (12,60 g, 57,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas y después se aisló la resina mediante filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (75 ml), DCM (75 ml), DMF (75 ml), DCM (75 ml), MeOH (75 ml), DCM (75 ml), MeOH (75 ml), DCM (75 ml), MeOH (75 ml), TBME (75 ml x 2) y se secó a vacío dando el 7-azaindol protegido unido a resina (9,0 g).

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Control de la producción de 1-N-azaindol

Se llevó a cabo control de la protección de 1-N-azaindol mostrando la protección completa con terc-butoxicarbonilo (boc) en el átomo de nitrógeno de indazol en la posición 1, y que no estuvieron presentes grupos NH.

A la resina (0,035 g, 0,027 mmol) en DCM (1 ml), se añadieron DIPEA (0,035 g, 0,265 mmol) y cloruro de benzoílo (0,038 g, 0,265 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 4 horas y la resina se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (1 ml), DCM (1 ml), DMF (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), agua (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), TBME (1 ml x 2) y después se secó al aire. El producto se escindió de la resina (1 ml de TFA al 60%/DCM durante 20 minutos) dando un sólido blanquecino (0,008 g, al 80%). CLEM (HPLC_1): m/z 315 [M+H]^{+} a t.r. 1,26 min (al 91% por detección de ELS).

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Etapa c

Reducción del grupo nitro

Se añadió cloruro dihidrato de estaño (II) (13,03 g, 57,75 mmol) a la resina de la etapa (b) (9 g, 5,7 mmol) en NMP (100 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas y después se aisló la resina mediante filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (100 ml), DCM (100 ml), DMF (100 ml), DCM (100 ml), MeOH (100 ml), agua (100 ml), MeOH (100 ml), DCM (100 ml), MeOH (100 ml), DCM (100 ml), MeOH (100 ml), TBME (100 ml x 2) y se secó a vacío dando el azaindol unido a resina (8,8 g). Se escindieron 0,01 g de resina (1 ml de TFA al 60%/DCM durante 20 minutos) dando un sólido blanquecino (0,0015 g, al 69%).

CLEM (HPLC_1): m/z 285 [M+H]+ a t.r. 0,91 min (al 100% por detección ELS).

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Etapa d

Formación de fenilcarbamato (y carbamato de bis-fenilo)

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122

A la resina de la etapa (c) (8,8 g, 5,78 mmol) en DCM (70 ml), se añadieron trietilamina (11,66 g, 115,5 mmol) y cloroformiato de fenilo (18,01 g, 115,5 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas y después la resina se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (100 ml), DCM (100 ml), DMF (100 ml), DCM (100 ml), MeOH (100 ml), DCM (100 ml), MeOH (100 ml), DCM (100 ml), MeOH (100 ml), TBME (100 ml x 2) y se secó a vacío dando el azaindol unido a resina (9,5 g). Se escindieron 0,01 g de resina (1 ml de TFA al 60%/DCM durante 20 minutos) dando un sólido blanquecino (0,0025 g, 62%).

CLEM (HPLC_1) (sólo bis-carbamato observado): m/z 525 [M+H]+ a t.r. 1,47 minutos (al 97% por detección de ELS).

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Etapa e

Formación de urea

A la resina de la etapa (d) (0,11 g, 0,077 mmol) en DCM (1 ml), se añadió 2,6 dimetilpiperazina (correspondiente a fragmento B139 de Tabla II, 0,176 g, 1,54 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas y después la resina se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (1 ml), DCM (1 ml), DMF (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), agua (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), TBME (1 ml x 2) y después se secó al aire. El producto se escindió a partir de la resina (TFA al 60%/DCM, 3 x (3 x 0,5 ml)) dando un sólido blanquecino (0,031 g, al 95%) que corresponde al compuesto A12-M-B139 (véase Entrada 3769 de Tabla VI más adelante).

RMN ^{1}H -procedimiento 1 (MeOH d-4): 8,65 (1H, d, 2,3 Hz), 8,46 (1H, d, 2,3 Hz), 8,13 (1H, s), 7,44-7,37 (2H, m), 7,10-7,03 (2H, m), 4,57 (2H, s), 4,42 (1H, dd, 14,4 Hz, 2,0 Hz), 3,49-3,38 (1H, m), 3,34-3,31 (2H, m), 2,98-2,89 (2H, m), 1,39 (6H, d, 6,6 Hz), indol y amidas-NH no se observaron;

CLEM (HPLC_1): m/z 425 [M+H]+ a t.r. 0,95 min (al 98% por detección ELS).

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Trabajando en analogía a lo que se ha descrito y usando cualquier material adecuado de partida y reactante del mismo, se prepararon los siguientes compuestos de Tabla VI (es decir biblioteca):

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TABLA VI

123

124

125

126

127

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Ejemplo 9

Carga de piperazina (correspondiente a fragmento A50 de Tabla I) sobre la resina Wang de PNP

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A una suspensión agitada de resina Wang de PNP (resina Wang de p-nitrofenilcarbonato, 4,7 g, 0,52 mmol/g, 2,5 mmol) en DMF anhidro (50 ml) a temperatura ambiente se añadió piperazina (0,637 g, 7,41 mmol) y base de Hunig (0,956 g, 7,41 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 20 horas y se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente conh DMF (50 ml), DCM (50 ml), DMF (50 ml), DCM (50 ml), MeOH (50 ml), DCM (50 ml), MeOH (50 ml), DCM (50 ml), MeOH (50 ml), TBME (50 ml x 2) y se secó a vacío dando la diamina unida a resina (4,6 g).

La resina unida a carbamato se tomó en la siguiente etapa sin análisis adicional.

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Ejemplo 10

Preparación de A50-M-B25

Etapa a

Carga del armazón de 7-azaindol (compuesto del título de ejemplo 3) en la resina del ejemplo 9

A la resina (4,6 g, 0,52 mmol/g, 2,4 mmol) en DMF anhidro (50 ml), se añadieron 3-carboxi-5-nitro-7-azaindol (0,743 g, 3,588 mmol), TBTU (1,152 g, 3,588 mmol) y DIPEA (0,927 g, 7,176 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas y después la resina se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (50 ml), DCM (50 ml), DMF (50 ml), DCM (50 ml), MeOH (50 ml), DCM (50 ml), MeOH (50 ml), DCM (50 ml), MeOH (50 ml), TBME (50 ml x 2) y se secó a vacío dando el 7-azaindol unido a resina (5,2 g).

Control de carga de resina

Se añadieron DIPEA (0,024 g, 0,182 mmol) y cloruro de benzoílo (0,025 g, 0,182 mmol) a la resina (0,035 g, 0,0182 mmol) en DCM (1 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 4 horas y la resina se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (1 ml), DCM (1 ml), DMF (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), agua (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), TBME (1 ml x 2) y después se secó al aire. El producto se escindió de la resina (1 ml de TFA al 40%/DCM) dando un sólido blanquecino (0,008 g, al 80%).

CLEM: m/z 380 [M+H]+, m/z 421 [M+MeCN+H]+ a t.r. 1,44 minutos (pureza del 84% a 215 nm).

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Etapa b

Reducción del grupo nitro

A la resina (5 g, 2,3 mmol) en NMP (50 ml) se añadió cloruro dihidrato de estaño (II) (5,4 g, 23,92 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas y después la resina se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (50 ml), DCM (50 ml), DMF (50 ml), DCM (50 ml), MeOH (50 ml), agua (50 ml), MeOH (50 ml), DCM (50 ml), MeOH (50 ml), DCM (50 ml), MeOH (50 ml), TBME (50 ml x 2) y se secó a vacío dando el azaindol unido a resina (5,0 g). Se escindieron 0,01 g de resina (1 ml de TFA al 40%/DCM) dando un sólido blanquecino (0,0009 g, al 75%).

CLEM: m/z 246 [M+H]+ a t.r. 0,22 min (pureza al 94% a 215 nm).

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Etapa c

Terminación con cloruros ácidos

A la resina (0,11 g, 0,05 mmol) en DCM (1 ml) se añadió base de Hunig (0,034 g, 0,26 mmol) y cloruro de benzoílo (que corresponde a fragmento B25 de tabla II, 0,036 g, 0,26 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas y después la resina se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (1 ml), DCM (1 ml), DMF (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), agua (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), TBME (1 ml x 2) y después se secó al aire. La resina se agitó en solución de acetonitrilo/amoniaco (1 ml, 4:1) durante 4 horas y después se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (1 ml), DCM (1 ml), DMF (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), agua (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), TBME (1 ml x 2) y después se secó al aire. El producto se escindió de la resina (TFA al 40%/DCM, 3 x 0,5 ml) dando un sólido blanquecino (0,012 g, al 63%) que corresponde al compuesto A50-M-B25 (véase Entrada 3808 de la tabla VII más adelante).

CLEM (HPLC_1): m/z 350 [M+H]+ a t.r. 0,83 minutos (al 95% por detección de ELS).

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Trabajando como se describe en el ejemplo 10 y usando cualquier derivado amino mantenido en resina adecuado y cualquier reactante de cloruro de acilo, se prepararon los siguientes compuestos (por ejemplo biblioteca):

TABLA VII

128

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Ejemplo 11

Preparación de A50-M-B1

El compuesto del título se preparó trabajando como se describe en las etapas (a) y (b) del ejemplo 10 y llevando a cabo la reacción de la etapa (c) con cloruro de sulfonilo, como sigue:

Etapa (c)

Terminación con cloruros de sulfonilo

A la resina (0,11 g, 0,052 mmol) que se obtiene en la etapa (b) de ejemplo 10, en DCM (1 ml), se añadieron piridina (0,021 g, 0,26 mmol), DMAP (0,001 g, 0,0052 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (correspondiente al fragmento B1 de tabla II, 0,030 g, 0,26 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas y después la resina se aisló por filtración. La resina se lavó secuencialmente con DMF (1 ml), DCM (1 ml), DMF (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), agua (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), DCM (1 ml), MeOH (1 ml), TBME (1 ml x 2) y después se secó al aire. El producto se escindió a partir de la resina (TFA al 40%/DCM 3 x 0,5 ml) dando un sólido blanquecino (0,018 g, al 100%) correspondiente al compuesto del título A50-M-B1 (véase Entrada 3858 de la tabla VIII).

CLEM (HPLC_1): m/z 324 [M+H]+ a t.r. 0,22 min (al 92% por detección con ELS).

Trabajando como se describe en el ejemplo 11 y usando cualquier derivado amino mantenido adecuadamente en resina y cualquier reactante de cloruro de sulfonilo, se prepararon los siguientes compuestos:

TABLA VIII

130

Claims (19)

1. Un compuesto de fórmula (I)

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131

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en la que

R está seleccionado del grupo constituido por -R^{a}, -COR^{a}, -CONR^{a}R^{b}, -SO_{2}R^{a} o -COOR^{a}.

R_{1} es un grupo -NR^{c}R^{d} o -OR^{c};

en los que R^{a}, R^{b}, R^{c} y R^{d}, son el mismo o diferentes, y son cada uno independientemente hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido adicionalmente, seleccionado de alquilo C_{1}-C_{6} lineal o ramificado, alquenilo C_{2}-C_{6} lineal o ramificado, alquinilo C_{2}-C_{6} lineal o ramificado, cicloalquilo C_{3}-C_{6} o cicloalquilalquilo C_{1}-C_{6}, arilo o arilalquilo C_{1}-C_{6}, o heterociclo o heterocicloalquilo C_{1}-C_{6} o, tomados conjuntamente con el átomo de nitrógeno al que están unidos, tanto R^{a} como R^{b} así como R^{c} y R^{d} pueden formar un heterociclo de 4 a 7 miembros opcionalmente sustituido, que contiene opcionalmente un heteroátomo o grupo heteroatómico de anillo adicional seleccionado de S, O, N
o NH;

o isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

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2. El compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en el que R_{1} es -NR^{c}R^{d}.

3. El compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en el que R^{1} es -OR^{c}.

4. El compuesto de fórmula (l) según la reivindicación 1, en el que R^{a}, R^{b}, R^{c} y R^{d} están seleccionados, cada uno independientemente, según se definen en las tablas I y II.

5. El compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, que comprende adicionalmente R^{a}, R^{b}, R^{c} y R^{d} que está sustituido independiente y opcionalmente por un resto seleccionado del grupo constituido por grupos halógeno, nitro, oxo (=O), carboxi, ciano, alquilo, alquilo polifluorado, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo; arilo, heterociclilo, amino alquillamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino, ureido, alquilureido o arilureido; carbonilamino, formilamino, alquilcarbonilamino, alquenilcarbonilamino, arilcarbonilamino, alcoxicarbonilamino; hidroxialcoxi, ariloxi, alquilcarboniloxi, arilcarboniloxi, cicloalqueniloxi o alquilidenoaminoxi; alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, cicloalquiloxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo; alquiltio, ariltio, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, alquilsulfinilo, arilsulfinilo, arilsulfoniloxi, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo y dialquilaminosulfonilo.

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6. El compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1 seleccionado del grupo constituido por:

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171

172

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en los que

la estructura de A-M-B es

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173

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y M representa el núcleo central del resto 3-carboxi-azaindol divalente que tiene el grupo -N- en posición 5 sustituido con grupos A y B;

A representa cualquier sustituyente R_{1} y está unido al resto azaindol por el átomo de carbono tal como para conseguir derivados de azaindol sustituidos en posición 3, y cada A es:

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y,

B representa cualquier sustituyente R y está unido al resto azaindol a través del átomo de nitrógeno tal como para conseguir derivados de azaindol que estén sustituidos en la posición 5, y cada B es:

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7. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 o de isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables del mismo para fabricar un medicamento para tratar enfermedades o afecciones causadas por y/o asociadas con una actividad proteinaquinasa alterada mediante la administración a un mamífero en necesidad del mismo de una cantidad efectiva del compuesto de la reivindicación 1 o de isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

8. El uso según la reivindicación 7 en el que la enfermedad causada por y/o asociada con una actividad proteinaquinasa alterada es un trastorno de proliferación celular seleccionado del grupo constituido por cáncer, enfermedad de Alzheimer, infecciones virales, enfermedades autoinmunes y trastornos neurodegenerativos.

9. El uso según la reivindicación 8 en el que el cáncer está seleccionado del grupo constituido por carcinoma, carcinoma de células escamosas, tumores hematopoyéticos de linaje linfoide o mieloide, tumores de origen mesenquimal, tumores del sistema nervioso central y periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentosum, queratoxantoma, cáncer folicular de tiroides y sarcoma de Kaposi y el trastorno proliferativo celular está seleccionado del grupo constituido por hiperplasia benigna de próstata, poliposis de adenomatosis familiar, neuro-fibromatosis, soriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y reestenosis postquirúrgicas.

10. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 o de isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables del mismo para fabricar un medicamento para inhibir angiogénesis o metástasis de tumores en un mamífero mediante la administración a dicho mamífero en necesidad de tratamiento de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto según la reivindicación 1 o de isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

11. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 o de isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables del mismo para fabricar un medicamento para tratar rechace de transplante de órganos o enfermedad huésped frente a injerto en un mamífero mediante la administración a dicho mamífero en necesidad de tratamiento de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto según la reivindicación 1 o de isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

12. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 o de isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables del mismo para fabricar un medicamento para tratar o evitar alopecia inducida por radioterapia o alopecia inducida por quimioterapia en un mamífero mediante la administración a dicho mamífero en necesidad de tratamiento de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto según la reivindicación 1 o de isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

13. El uso según la reivindicación 7 en el que dicho tratamiento comprende adicionalmente someter al mamífero en necesidad del mismo a un régimen de terapia de radiación o de quimioterapia en combinación con al menos un agente citostático o citotóxico.

14. El uso según la reivindicación 7 en el que el mamífero en necesidad del mismo es un ser humano.

15. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 o de isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables del mismo para fabricar un medicamento para inhibir actividad proteinaquinasa poniendo en contacto la citada quinasa con una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 o isómeros, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

16. Una biblioteca que comprende dos o más compuestos de acuerdo con la reivindicación 1, preparada dicha biblioteca de acuerdo con técnicas de química combinatoria en condiciones de síntesis de fase sólida que comprenden las etapas de:

a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (III)

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con una resina polimérica, tal como para obtener un compuesto soportado en resina;

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b) hacer reaccionar el compuesto soportado en resina con cloruro de estaño (H) y N-metil-\alpha-pirrolidinona (NMP), para obtener el derivado 5-amino correspondiente y, opcionalmente, hacerlo reaccionar según una cualquiera de las etapas alternativas (c.1), (c.2), (c.3) o (c.4)

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c.1) con uno cualquiera de los compuestos de fórmula (V), (VI), (VII) o (VIII)

(V);R^{a}COZ

(VI);R^{a}NCO

(VII);R^{a}SO_{2}Z

(VIII),R^{a}OCOZ

en los que Z es un átomo de halógeno, para obtener un compuesto de fórmula (I) en el que R es un grupo -COR^{a}, -COHNR^{a}, -SO_{2}R^{a} o -COOR^{a}, respectivamente; o

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c.2) con una amina de fórmula (IX) en presencia de trifosgeno o de un cloroformiato

(IX)HNR^{a}R^{b}

para obtener un compuesto de fórmula (I) en la que R es un grupo -CONR^{a}R^{b}; o

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c.3) con un derivado aldehído o cetona de fórmula (X) según las condiciones operativas reductoras

(X)R^{a}-CO-R^{a}

para obtener un compuesto de fórmula (I) en la que R es un grupo -CH(R^{a})R^{a}; o

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c.4) con un yoduro o bromuro aromático de fórmula (XI) o (XII)

(XI);R^{a}-I

(XII),R^{a}-Br

en presencia de un catalizador de paladio y de un ligando, para obtener un compuesto de fórmula (I) en la que R es R^{a} y R^{a} es un grupo aromático carbocíclico o heterocíclico;

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d) escindir la resina del compuesto soportado en resina, para obtener un compuesto de fórmula (I); y opcionalmente

e) convertir el compuesto obtenido de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I) y/o en una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

17. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 y, al menos, un excipiente, vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.

18. La composición farmacéutica según la reivindicación 17 que comprende adicionalmente uno o más agentes quimioterapéuticos.

19. Un kit que comprende un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1 que está opcionalmente asociado con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable y uno o más agentes quimioterapéuticos.