ES2536730T3 - Derivados de 3,4-dihidro-2H-pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de fórmula (I):**Fórmula** en la que: R1 es un grupo -NRaRb o -ORa y R2 es - NH2, -NHCORc, -NHCONHRc, -NHSO2Rc, -C>=CRd o Rd en donde Ra, Rb, Rc y Rd, iguales o diferentes, son cada uno independientemente hidrógeno o un grupo además opcionalmente sustituido, seleccionado de alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6 o alquinilo C2-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, cicloalquil-alquilo(C1-C6), heterociclilo, heterociclil-alquilo(C1-C6), arilo, aril-alquilo(C1-C6), heteroarilo y heteroaril-alquilo(C1-C6), o Ra y Rb, considerados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, pueden formar un heterociclilo o heteroarilo de 3 a 7 miembros opcionalmente sustituido, que contiene opcionalmente un heteroátomo o grupo heteroatómico adicional seleccionado de S, O, N o NH, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
Description
Derivados de 3,4-dihidro-2H-pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona
La presente invención se refiere a determinados derivados 4,7-disusutituidos de compuestos 3,4-dihidro-2Hpirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que modulan la actividad de proteína quinasas. Por lo tanto, los compuestos de esta invención son útiles en el tratamiento de enfermedades producidas por la desregulación de la actividad de proteína quinasas. La presente invención describe también métodos para preparar estos compuestos, bibliotecas combinatorias de los mismos, composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos, y métodos de tratamiento de enfermedades que usan composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos. El mal funcionamiento de las proteína quinasas (PK) es la característica de numerosas enfermedades. Una gran parte de los oncogenes y protooncogenes implicados en los cánceres humanos codifican PK. Las actividades potenciadas de las PK también están implicadas en muchas enfermedades no malignas, tales como hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y reestenosis postquirúrgica.
Las PK también están implicadas en afecciones inflamatorias y en la multiplicación de virus y parásitos. Las PK también pueden tener una función principal en la patogénesis y desarrollo de enfermedades neurodegenerativas.
Para referencias generales al mal funcionamiento o desregulación de las PK véase, por ejemplo, Current Opinion in Chemical Biology 1999, 3, 459 -465 y Carcinogenesis 2008, 29, 1087-191.
Se describen derivados de 8-hidroxi-3,4-dihidro-2H-pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona para prevenir y tratar la infección por el VIH y en la prevención, retraso del inicio y tratamiento del SIDA, en el documento WO 2004/047725 de Merck & Co., Inc., EE.UU. Los autores de la presente invención ahora han descubierto que los nuevos compuestos de fórmula (I), descritos más adelante, son inhibidores de quinasa y por lo tanto son útiles en terapia como agentes antitumorales.
Por lo tanto, un primer objeto de la presente invención es proporcionar un compuesto 4,7-disustituido-3,4-dihidro-2Hpirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona representado por la fórmula (I):
en donde:
R1 es un grupo -NRaRb o -ORa y
R2 es -NH2, -NHCORc, -NHCONHRc, -NHSO2Rc, -C≡CRd o Rd,
en donde Ra, Rb, Rc y Rd, iguales o diferentes, son cada uno independientemente hidrógeno o un grupo además opcionalmente sustituido, seleccionado de alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6 o alquinilo C2-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, cicloalquil-alquilo(C1-C6), heterociclilo, heterociclil-alquilo(C1-C6), arilo, aril-alquilo(C1-C6), heteroarilo y heteroaril-alquilo(C1-C6), o Ra y Rb, considerados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, pueden formar un heterociclilo o heteroarilo de 3 a 7 miembros opcionalmente sustituido, que contiene opcionalmente un heteroátomo o grupo heteroatómico adicional seleccionado de S, O, N o NH, y sus sales farmacéuticamente aceptables.
La presente invención también proporciona métodos de síntesis de compuestos 4,7-disustituido-3,4-dihidro-2Hpirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, representados por la fórmula (I), preparados por un procedimiento que consiste en transformaciones sintéticas convencionales.
La presente invención también describe un método para tratar enfermedades causadas y/o asociadas con la actividad de proteína quinasa desregulada, en particular la familia de PLK, ABL, AKT1, ALK, AUR1, AUR2, BRK, CDC7/DBF4, CDK2/CYCA, CHK1, CK2, EE2FK, EGFR1, ERK2, FAK, FGFR1, FLT3, GSK3beta, IGFR1, IKK2, IR, JAK2, JAK3, KIT, LCK, MAPKAPK2, MET, MPS1, MST4, NEK6, NIM1, P38alfa, PAK4, PDGFR, PDK1, PERK, PIM1, PIM2, PIM3, PKAalfa, PKCbeta, PLK1, RET, SULU1, SYK, TRKA, VEGFR2, VEGFR3 o ZAP70.
Un método descrito preferido de la presente invención es tratar una enfermedad causada por y/o asociada con la actividad de proteína quinasa desregulada seleccionada del grupo que consiste en cáncer, infección vírica, prevención del desarrollo del SIDA en individuos infectados por el VIH, trastornos de proliferación celular, trastornos
autoinmunitarios y neurodegenerativos. Otro método descrito preferido de la presente invención es tratar tipos específicos de cánceres que incluyen: carcinoma tal como de vejiga, mama, colon, riñón, hígado, pulmón, que incluye cáncer del pulmón de células pequeñas, esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cuello del útero, tiroides, próstata y piel, que incluye carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyéticos de línea linfoide que incluyen leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, linfoma de células pilosas y linfoma de Burkitt; tumores hematopoyéticos de línea mieloide, que incluyen leucemias mieloides aguda y crónica, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimatoso, que incluyen fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, que incluyen astrocitoma neuroblastoma, glioma y schwannomas; otros tumores, que incluyen melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentoso, queratoxantoma, cáncer folicular tiroideo y sarcoma de Kaposi.
Otro método descrito preferido de la presente invención es tratar trastornos de proliferación celular específicos tales como, por ejemplo, hiperplasia prostática benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y reestenosis postquirúrgica.
Los compuestos de esta invención pueden ser útiles en la inhibición de la angiogénesis tumoral y metástasis, así como en el tratamiento del rechazo de trasplante de órgano y enfermedades de hospedante contra injerto.
La presente invención describe además un método de tratamiento que comprende un compuesto de fórmula (I) en combinación con terapia de radiación o régimen de quimioterapia para uso simultáneo, separado o secuencial en la terapia anticáncer. Además la invención proporciona un método in vitro para inhibir la actividad de proteína quinasa, que comprende poner en contacto dicha proteína quinasa con una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I).
La presente invención proporciona también una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y un excipiente, vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula
(I) en combinación con agentes citostáticos o citotóxicos conocidos, agentes de tipo antibiótico, agentes que dañan o intercalantes del ADN, agentes basados en platino, agentes alquilantes, agentes antimetabolitos, agentes hormonales, agentes antihormonales tales como antiestrógenos, antiandrógenos e inhibidores de aromatasa, agentes inmunológicos, agentes de tipo interferón, inhibidores de ciclooxigenasa (p. ej., inhibidores de la COX-2), inhibidores de metaloproteasas de la matriz, inhibidores de proteína quinasa, inhibidores de otras quinasas, agentes anti-receptores de factores de crecimiento, agentes anti-HER, agentes anti-EGFR, agentes antiangiogénesis (p. ej., inhibidores de la angiogénesis), inhibidores de la farnesil-transferasa, inhibidores de la ruta de transducción de señales ras-raf, inhibidores del ciclo celular, otros inhibidores de cdk, agentes de unión a tubulina, inhibidores de topoisomerasa I, inhibidores de topoisomerasa II, inhibidores de quinesinas, anticuerpos monoclonales terapéuticos, inhibidores de mTOR, inhibidores de histona desacetilasa, inhibidores de la respuesta hipóxica y similares, para el uso simultáneo, separado o secuencial en la terapia anticáncer. Adicionalmente, la invención proporciona un producto o kit que comprende un compuesto de fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, como se ha definido antes, o composiciones farmacéuticas del mismo y uno o más agentes quimioterapéuticos, como un preparado combinado para uso simultáneo, separado o secuencial en la terapia anticáncer.
En otro aspecto más la invención proporciona un compuesto de fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, como se ha definido antes, para usar como un medicamento.
Además, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, como se ha definido antes, en la fabricación de un medicamento con actividad antitumoral.
Finalmente, la invención proporciona un compuesto de fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, como se ha definido antes, para usar en un método de tratamiento del cáncer.
A menos que se especifique otra cosa, cuando se refiere a los compuestos de fórmula (I) per se además de cualquier composición farmacéutica del mismo o a cualquier método de tratamiento terapéutico que los comprende, la presente invención incluye todos los hidratos, solvatos, complejos, vehículos, N-óxidos y sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención.
Los N-óxidos son compuestos de fórmula (I) en donde el nitrógeno y oxígeno están unidos por un enlace dativo.
Todas las formas de isómeros quirales u otras formas de isómeros incluyendo enantiómeros y diastereoisómeros, se pretende que estén cubiertas en la presente memoria. Los compuestos que contienen un centro quiral pueden usarse como una mezcla racémica o como una mezcla enantioméricamente enriquecida, o la mezcla racémica puede separarse usando técnicas bien conocidas y se puede usar un enantiómero individual solo.
En casos en donde los compuestos pueden existir en formas tautómeras, tal como tautómeros ceto-enólico, cada forma tautómera se contempla como que está incluida en esta invención existan en equilibrio o predominantemente en una forma.
En la presente descripción, a menos que se especifique otra cosa, con la expresión "alquilo C1-C6 lineal o ramificado" se indica cualquier grupo tal como, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, secbutilo, terc-butilo, n-pentilo, n-hexilo, y similares.
Con la expresión "alquenilo C2-C6 lineal o ramificado" o "alquinilo C2-C6 lineal o ramificado" se indica cualquiera de los grupos alquenilo o alquinilo con de 2 a 6 átomos de carbono, por ejemplo, incluyendo vinilo, alilo, 1-propenilo, isopropenilo, 1-, 2-o 3-butenilo, pentenilo, hexenilo, etinilo, 1-o 2-propinilo, butinilo, pentinilo, hexinilo, y similares. Con la expresión "cicloalquilo C3-C6" se indica, a menos que se especifique otra cosa, un anillo monocíclico todo de carbonos de 3 a 6 miembros, que puede contener uno o más dobles enlaces pero no tiene un sistema de electrones π completamente conjugado. Los ejemplos de grupos cicloalquilo son ciclopropano, ciclobutano, ciclopentano, ciclopenteno, ciclohexano, ciclohexeno y ciclohexadieno.
Con el término "heterociclilo" se indica un anillo carbocíclico saturado o parcialmente insaturado, de 3 a 7 miembros, donde uno o más átomos de carbono se sustituyen por heteroátomos tales como nitrógeno, oxígeno y azufre. Ejemplos no limitantes de grupos heterociclilo son, por ejemplo, pirano, pirrolidina, pirrolina, imidazolina, imidazolidina, pirazolidina, pirazolina, tiazolina, tiazolidina, dihidrofurano, tetrahidrofurano, 1,3-dioxolano, piperidina, piperazina, morfolina y similares.
Con el término "arilo" se indica un hidrocarburo mono, bi o poli-carbocíclico con de 1 a 4 sistemas anulares, opcionalmente además condensados o unidos los unos a los otros por enlaces sencillos, en donde al menos uno de los anillos carbocíclicos es "aromático", en donde el término "aromático" se refiere a un sistema de enlaces de electrones π completamente conjugado. Ejemplos no limitantes de dichos grupos arilo son grupos fenilo, α-o βnaftilo o bifenilo.
Con el término "heteroarilo" se indica anillos heterocíclicos aromáticos, típicamente heterociclos de 5 a 7 miembros con de 1 a 3 heteroátomos seleccionados entre N, O o S; el anillo de heteroarilo puede opcionalmente estar adicionalmente condensado o unido a anillos carbocíclicos y heterocíclicos aromáticos y no aromáticos. Ejemplos no limitantes de dichos grupos heteroarilos son, por ejemplo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, indolilo, imidazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, fenil-pirrolilo, furilo, fenil-furilo, oxazolilo, isoxazolilo, pirazolilo, tienilo, benzotienilo, isoindolinilo, benzoimidazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, 1,2,3-triazolilo, 1-fenil-1,2,3-triazolilo, 2,3-dihidroindolilo, 2,3dihidrobenzofuranilo, 2,3-dihidrobenzotiofenilo; benzopiranilo, 2,3-dihidrobenzoxazinilo, 2,3-dihidroquinoxalinilo y similares.
De acuerdo con los significados proporcionados para Ra, Rb, Rc y Rd, cualquiera de los grupos anteriores puede estar además opcionalmente sustituido en cualquiera de las posiciones libres, con uno o más grupos, por ejemplo de 1 a 6 grupos, seleccionados de: halógeno, nitro, grupo oxo (=O), carboxi, ciano, alquilo C1-C6, alquilo polifluorado, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6, heterociclilo, arilo, heteroarilo; grupos amino y derivados de los mismos, tales como por ejemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino, ureido, alquilureido o arilureido; grupos carbonilamino y derivados de los mismos, tales como, por ejemplo, formilamino, alquilcarbonilamino, alquenilcarbonilamino, arilcarbonilamino, alcoxicarbonilamino; grupos hidroxi y derivados de los mismos, tales como, por ejemplo, alcoxi, alcoxi polifluorado, ariloxi, alquilcarboniloxi, arilcarboniloxi, cicloalqueniloxi o alquilidenaminoxi; grupos carbonilo y derivados de los mismos, tales como, por ejemplo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, cicloalquiloxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo; derivados sulfurados tales como, por ejemplo, alquiltio, ariltio, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, alquilsulfinilo, arilsulfinilo, arilsulfoniloxi, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo o dialquilaminosulfonilo.
Con el término "nitro" se indica un grupo -NO2.
Con el término "halógeno" se indica un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo.
Con la expresión "alquilo o alcoxi polifluorado" se indica un grupo alquilo o alcoxi C1-C6 lineal o ramificado como se ha definido antes, en donde más de un átomo de hidrógeno se sustituye por átomos de flúor, tal como, por ejemplo, trifluorometilo, trifluorometoxi, 2,2,2-trifluoroetilo, 2,2,2-trifluoroetoxi, 1,2-difluoroetilo, 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropil-2ilo, y similares.
A partir de todo lo anterior, está claro para el experto en la técnica que cualquier grupo cuyo nombre se haya identificado como un nombre compuesto, tal como, por ejemplo, cicloalquilalquilo, arilalquilo, heterociclilalquilo, alcoxi, alquiltio, ariloxi, arilalquiloxi, alquilcarboniloxi y similares, debe considerarse como formado convencionalmente de las partes de las que deriva. Por lo tanto, como un ejemplo, los términos heterociclil-alquilo y cicloalquil-alquilo indican un grupo alquilo lineal o ramificado que está además sustituido con un grupo heterocíclico
o cicloalquilo, respectivamente, como se han definido antes.
La expresión "sales farmacéuticamente aceptables" abarca sales usadas habitualmente para formar sales de metales alcalinos y formar sales de adición de ácidos libres o bases libres. La naturaleza de la sal no es crítica, con
la condición de que sea farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención, se pueden preparar a partir de un ácido inorgánico o a partir de un ácido orgánico. Los ejemplos de dichos ácidos inorgánicos son ácido clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, carbónico, sulfúrico y fosfórico. Los ácidos orgánicos adecuados se pueden seleccionar de clases de ácidos orgánicos de clases carboxílico y sulfónico, alifáticos, cicloalifáticos, aromáticos, aralifáticos, heterocíclicos, ejemplos de los cuales son ácido fórmico, acético, trifluoroacético, propiónico, succínico, glicólico, glucónico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, glucurónico, maleico, fumárico, pirúvico, aspártico, glutámico, benzoico, antranílico, mesílico, salicíclico, p-hidroxibenzoico, fenilacético, mandélico, embrónico (pamoico), metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico, pantoténico, toluenosulfónico, 2-hidroxietanosulfónico, sulfanílico, esteárico, ciclohexilaminosulfónico, algénico, hidroxibutírico, galactárico y galacturónico. Las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención incluyen sales metálicas hechas de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y cinc, o sales orgánicas hechas de N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina (N-metil-glucamina) y procaína. Todas estas sales se pueden preparar por medios convencionales a partir de los correspondientes compuestos de la presente invención, por ejemplo haciéndolos reaccionar con el ácido o base adecuados.
Una clase preferida de compuestos de fórmula (I) son los compuestos en donde:
R1 es un grupo -NRaRb y Ra y Rb son ambos átomos de hidrógeno o uno de ellos es un átomo de hidrógeno y el que queda de Ra o Rb es un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6 lineal o ramificado, o es un grupo arilo opcionalmente sustituido o aril-alquilo(C1-C6).
Otra clase preferida de compuestos de fórmula (I) son los compuestos en donde:
R2 es un grupo -NHCORc en donde Rc es como se ha definido antes.
Una clase adicional preferida de compuestos de fórmula (I) son los compuestos en donde:
R2 es un grupo -NHCONHRc en donde Rc es como se ha definido antes.
Una clase más preferida de compuestos de fórmula (I) son los compuestos en donde:
R2 es un grupo -NHSO2Rc en donde Rc es como se ha definido antes.
Para una referencia a cualquier compuesto específico de fórmula (I) de la invención, opcionalmente en forma de sales farmacéuticamente aceptables, véase la sección experimental.
La presente invención también proporciona un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) como se ha definido antes, caracterizado en que el procedimiento comprende:
a) nitrar en condiciones ácidas el compuesto de fórmula (II):
b) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (III) resultante:
con una sal de amonio de fórmula (IV):
en donde Ra es alquilo C1-C6;
opcionalmente convertir el compuesto de fórmula (V) resultante:
en donde R1 representa ORa y Ra es como se ha definido antes, en otro compuesto de fórmula (V) en donde R1 es como se ha definido antes, sustituyendo el grupo -ORa por un grupo R1 diferente,
c) reducir dicho compuesto de fórmula (V) para dar un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo:
en donde R1 es como se ha definido antes, y R2 es NH2;
opcionalmente separar el compuesto resultante de fórmula (I) en los isómeros individuales; convertir el compuesto de fórmula (I) resultante en un compuesto de fórmula (I) diferente, por derivatización del resto amino, y/o 10 sustituyendo el grupo -ORa por un grupo diferente que representa R1, y/o convirtiéndolo en una sal farmacéuticamente aceptable, si se desea.
La presente invención proporciona además un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I) como se ha definido antes, caracterizado porque el compuesto de fórmula (I) se convierte en otro compuesto de fórmula (I), llevándose a cabo dicha conversión mediante una o más de las siguientes reacciones:
15 d) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, y R2 es NH2 de acuerdo con una cualquiera de las etapas alternativas:
d.1) con un ácido o un haluro de acilo de fórmula (VI):
RcCOZ (VI)
en donde Rc es como se ha definido antes y Z es un halógeno o un grupo -OH, para dar un compuesto de fórmula 20 (I):
en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6 y Rc es como se ha definido antes; o
d.2) con un isocianato de fórmula (VII):
RcNCO (VII)
en donde Rc es como se ha definido antes, para dar un compuesto de fórmula (I):
en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6 y Rc es como se ha definido antes; o d.3) con un haluro de sulfonilo de fórmula (VIII): RcSO2Z' (VIII) en donde Rc es como se ha definido antes y Z' es un halógeno, para dar un compuesto de fórmula (I):
en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6 y Rc es como se ha definido antes,
opcionalmente separar el compuesto resultante de fórmula (I) en los isómeros individuales; convertir el compuesto 10 de fórmula (I) resultante en un compuesto de fórmula (I) diferente, sustituyendo el grupo -ORa por un grupo diferente que representa R1, y/o en una sal farmacéuticamente aceptable, si se desea.
La presente invención también proporciona otro procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (XI), caracterizado porque el procedimiento comprende:
e) yodación del compuesto de fórmula (II):
f) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (IX) resultante:
con una sal de amonio de fórmula (IV):
20 en donde Ra es alquilo C1-C6;
g) ciclar en condiciones básicas el compuesto de fórmula (X) resultante:
en donde Ra es como se ha definido antes, para dar el compuesto de fórmula (XI):
5 en donde Ra es como se ha definido antes;
convirtiéndolo en un compuesto de fórmula (XI) diferente sustituyendo el yodo por un grupo diferente que representa R2, opcionalmente separándolo en los isómeros individuales, convirtiéndolo en un compuesto de fórmula (XI) diferente sustituyendo el grupo -ORa por un grupo diferente que representa R1 y/o en una sal farmacéuticamente aceptable si se desea. La presente invención proporciona además un procedimiento para preparar compuestos de
10 fórmula (I) como se han definido antes, caracterizados porque el procedimiento comprende:
h) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XI) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, de acuerdo con una cualquiera de las etapas alternativas:
h.1) con un ácido o éster borónico de fórmula (XII):
R2'B(OZ"Z"')2 (XII)
15 en donde R2' es Rd y Rd es como se ha definido antes, Z" y Z"' son H, alquilo o considerados junto con los átomos de oxígeno a lo que están unidos, pueden formar un heterociclo de 5 a 6 miembros opcionalmente sustituido, para dar un compuesto de fórmula (I):
en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6 y R2' es como se ha definido antes; o 20 h.2) con un alquino terminal de fórmula (XIII): RdC≡CH (XIII)
en donde Rd es como se ha definido antes, para dar un compuesto de fórmula (I):
en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6 y Rd es como se ha definido antes, opcionalmente separar el compuesto de fórmula (I) resultante en los isómeros individuales; convertir el compuesto de fórmula (I) resultante en un compuesto de fórmula (I) diferente, sustituyendo el grupo -ORa por un grupo diferente que representa R1, y/o en una sal farmacéuticamente aceptable, si se desea.
La presente invención proporciona además un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I) como se ha definido antes, caracterizado porque el compuesto de fórmula (I) se convierte en otro compuesto de fórmula (I), dicha conversión se lleva a cabo mediante una o más de las siguientes reacciones:
m.1) hidrólisis ácida o básica de un compuesto de fórmula (I), en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -ORa y Ra es hidrógeno, o la sal correspondiente;
m.2) transesterificación de un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, por reacciones con un compuesto de fórmula (XIV):
Ra-OH (XIV)
para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -ORa y Ra es un alquilo C1-C6 diferente;
m.3) aminolisis de un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, por reacción con un compuesto de fórmula (XV):
HNRaRb (XV)
para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -NRaRb;
m.4) esterificación de un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es un grupo -OH o su sal correspondiente, por reacción con un compuesto de fórmula (XIV) como se ha definido antes, para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -ORa;
m.5) amidación de un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es un grupo -OH o su sal correspondiente, por reacción con un compuesto de fórmula (XV) como se ha definido antes, para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -NRaRb.
La presente invención proporciona además un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I) como se ha definido antes, caracterizado porque el compuesto de fórmula (V) como se ha definido antes, se convierte en otro compuesto de fórmula (V), dichas conversiones se llevan a cabo por una o más de las siguientes reacciones:
n.1) hidrólisis ácida o básica de un compuesto de fórmula (V), en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, para dar un compuesto de fórmula (V) en donde R1 es -ORa y Ra es hidrógeno, o la sal correspondiente;
n.2) transesterificación de un compuesto de fórmula (V) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, por reacción con un compuesto de fórmula (XIV) como se ha definido antes, para dar un compuesto de fórmula (V) en donde R1 es -ORa y Ra es un alquilo C1-C6 diferente;
n.3) amidación de un compuesto de fórmula (V) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, por reacción con un compuesto de fórmula (XV) como se ha definido antes, para dar un compuesto de fórmula (V) en donde R1 es -NRaRb;
n.4) esterificación de un compuesto de fórmula (V) en donde R1 es -ORa y Ra es hidrógeno, o la sal correspondiente, por reacción con un compuesto de fórmula (XVI) como se ha definido antes, para dar un compuesto de fórmula (V) en donde R1 es -ORa y Ra es distinto de hidrógeno;
n.5) amidación de un compuesto de fórmula (V) en donde R1 es -ORa y Ra es hidrógeno, por reacción con un compuesto de fórmula (XV) como se ha definido antes, para dar un compuesto de fórmula (V) en donde R1 es -NRaRb.
La presente invención proporciona además un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I) como se ha definido antes, caracterizado porque el compuesto de fórmula (XI) como se ha definido antes, se convierte en otro compuesto de fórmula (XI), dichas conversiones se llevan a cabo por una o más de las siguientes reacciones:
o.1) hidrólisis ácida o básica de un compuesto de fórmula (XI), en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, para dar un compuesto de fórmula (XI) en donde R1 es -ORa y Ra es hidrógeno, o la sal correspondiente;
o.2) transesterificación de un compuesto de fórmula (XI) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, por reacción con un compuesto de fórmula (XIV) como se ha definido antes, para dar un compuesto de fórmula (XI) en donde R1 es -ORa y Ra es un alquilo C1-C6 diferente;
o.3) amidación de un compuesto de fórmula (XI) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, por reacción con un compuesto de fórmula (XV) como se ha definido antes, para dar un compuesto de fórmula (XI) en donde R1 es -NRaRb;
o.4) esterificación de un compuesto de fórmula (XI) en donde R1 es -ORa y Ra es hidrógeno, o la sal correspondiente, por reacción con un compuesto de fórmula (XVI) como se ha definido antes, para dar un compuesto de fórmula (XI) en donde R1 es -ORa y Ra es distinto de hidrógeno;
o.5) amidación de un compuesto de fórmula (XI) en donde R1 es -ORa y Ra es hidrógeno, por reacción con un compuesto de fórmula (XV) como se ha definido antes, para dar un compuesto de fórmula (XI) en donde R1 es -NRaRb.
A partir de todo lo anterior, está claro para el experto en la técnica que si un compuesto de fórmula (I), (V), o (XI) preparado de acuerdo con los procedimientos anteriores comprendiendo cualquiera de sus variantes, se obtiene como una mezcla de isómeros, su separación en isómeros individuales de fórmula (I), llevada a cabo de acuerdo con técnicas convencionales, está todavía dentro del alcance de la presente invención.
Igualmente, la conversión de un compuesto de fórmula (I) en una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o alternativamente, la conversión en el compuesto libre (I) de una sal correspondiente, de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la técnica, está todavía dentro del alcance de la invención.
Cuando se preparan los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con cualquier variante del procedimiento, que se pretende que estén todas dentro del alcance de la invención, los grupos funcionales opcionales dentro de los materiales de partida, los reactivos o los compuestos intermedios de los mismos, y que podrían dar lugar a reacciones secundarias indeseadas, es necesario que estén protegidos de forma adecuada de acuerdo con técnicas convencionales.
Los materiales de partida del procedimiento objeto de la presente invención, que comprende cualquier variante posible, así como cualquier reaccionante de los mismos, son compuestos conocidos, y si no están disponibles en el comercio ellos mismos, se pueden preparar de acuerdo con métodos bien conocidos.
Por ejemplo, el compuesto de fórmula (II) está disponible en el comercio.
Los compuestos de fórmula (IV) se preparan partiendo de los correspondientes
4-bromocrotonatos que a su vez están disponibles en el comercio o se puede preparar de acuerdo con métodos bien conocidos.
Por ejemplo, el 4-aminocrotonato de etilo se prepara a partir del 4-bromocrotonato de etilo (XVI):
i) haciéndolo reaccionar con la sal sódica de la diformilimida (XVII) disponible en el comercio: 5
l) hidrolizando en condiciones ácidas el compuesto de fórmula (XVIII) resultante:
para dar el compuesto de fórmula (IV) en donde Ra es etilo.
Los compuestos de fórmula (VI), (VII), (VIII), (XII), (XIII), (XIV) y (XV) son conocidos o se obtienen fácilmente de acuerdo con métodos conocidos, para una referencia general véase: Smith, Michael -March's Advanced Organic Chemistry: reactions mechanisms and structure -5ª Edición, Michael B. Smith and Jerry March, John Wiley & Sons Inc., New York (NY), 2001.
El compuesto intermedio de fórmula (V):
en donde R1 es como se ha definido antes, es nuevo y por lo tanto representa un objeto adicional de la invención. El compuesto intermedio de fórmula (XI):
en donde R1 es como se ha definido antes, es nuevo y por lo tanto representa un objeto adicional de la invención.
De acuerdo con la etapa (a) del procedimiento, la nitración del compuesto de fórmula (II) en condiciones ácidas se puede llevar a cabo en una variedad de formas de acuerdo con métodos convencionales. Preferiblemente, la reacción se lleva a cabo en presencia de ácido nítrico y anhídrido acético, a una temperatura en el intervalo de -40ºC a temperatura ambiente, y durante un tiempo de 6 horas a toda la noche.
De acuerdo con la etapa (b) del procedimiento, la conversión del compuesto de fórmula (III) en el correspondiente derivado amido de fórmula (V), se puede llevar a cabo en una variedad de formas de acuerdo con métodos convencionales para obtener derivados amido a partir de las correspondientes α,α,α-triclorocetonas. Preferiblemente, la reacción se lleva a cabo por reacción de una sal de amonio de fórmula (IV) en presencia de N,Ndiisopropiletilamina, usando diclorometano como disolvente.
De acuerdo con la etapa (c) del procedimiento, la reducción del grupo nitro del compuesto de fórmula (V) para dar un compuesto de fórmula (I) se puede llevar a cabo en una variedad de formas, de acuerdo con métodos convencionales para reducir el grupo nitro al correspondiente derivado amino. Preferiblemente, la reacción se lleva a cabo en presencia de paladio sobre carbón en etanol y ácido clorhídrico, en una atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente, durante un tiempo en el intervalo de 6 a 8 horas.
De acuerdo con una cualquiera de las etapas (d.1) a (d.3), la preparación de derivados funcionalizados con amino partiendo de la correspondiente amina, se puede llevar a cabo en una variedad de formas, de acuerdo con métodos convencionales.
Preferiblemente, de acuerdo con la etapa (d.1) y (d.3) del procedimiento, el compuesto de fórmula (I) se disuelve en un disolvente adecuado tal como diclorometano, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, tetrahidrofurano, dioxano o similares, y se añade al mismo una base adecuada tal como trietilamina, N,N-diisopropiletilamina o
carbonato sódico. Después se añaden los compuestos de fórmula general (VI) u (VIII) y la mezcla se agita durante un tiempo de aproximadamente 2 horas a aproximadamente 15 horas, a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 20ºC a aproximadamente 80ºC. Se puede usar opcionalmente un catalizador adecuado tal como dimetilaminopiridina.
Preferiblemente, de acuerdo con la etapa (d.2) del procedimiento, las condiciones de reacción son las mismas que las indicadas antes para las etapas (d.1) y (d.3) excepto que puede no ser necesaria la base. Después se añade el compuesto de fórmula general (VII) y la mezcla se agita como se ha descrito antes para las etapas (d.1) y (d.3).
De acuerdo con la etapa (e) del procedimiento, la yodación del compuesto de fórmula (II) se puede llevar a cabo en una variedad de formas de acuerdo con métodos convencionales. Preferiblemente, la reacción se lleva a cabo en condiciones neutras en presencia de yodo y trifluoroacetato de plata, a una temperatura en el intervalo de 0ºC a 18ºC y durante un tiempo de 5 horas a toda la noche.
De acuerdo con la etapa (f) del procedimiento, la conversión del compuesto de fórmula (IX) en el correspondiente derivado amido de fórmula (X), se puede llevar a cabo en una variedad de formas de acuerdo con métodos convencionales para obtener derivados amido a partir de las correspondientes α,α,α-triclorocetonas. Preferiblemente, la reacción se lleva a cabo como se describe en la etapa (b).
De acuerdo con la etapa (g) del procedimiento, la ciclación del compuesto de fórmula (X) en el correspondiente derivado de fórmula (XIa) se puede llevar a cabo en una variedad de formas de acuerdo con métodos convencionales. Preferiblemente, la reacción se lleva a cabo usando una base tal como diaza(1,3)biciclo[5.4.0]undecano y acetonitrilo como el disolvente.
De acuerdo con una cualquiera de las etapas (h.1) y (h.2) la conversión de un compuesto de fórmula (XIa) en un compuesto de fórmula (I) se puede llevar a cabo en una variedad de formas, de acuerdo con métodos convencionales.
Preferiblemente la reacción de la etapa (h.1) se lleva a cabo por el acoplamiento de Suzuki entre un derivado organoborónico de fórmula (XII) y un compuesto de fórmula (XIa), para dar el correspondiente compuesto de fórmula
(I) en presencia de un catalizador de Pd y una base tal como carbonato de sodio o cesio, en una mezcla de disolventes, tal como dimetoxietano y agua, a una temperatura que varía de temperatura ambiente a 80ºC y durante un tiempo entre 4 horas y toda la noche. Preferiblemente, la reacción de la etapa (h.2) se lleva a cabo por el acoplamiento de Sonogashira entre un derivado de alquino de fórmula (XIII) y un compuesto de fórmula (Xla), para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en presencia de un catalizador de Pd, una base tal como trietilamina y un aditivo tal como yoduro de cobre(I), usando N,N-dimetilformamida como disolvente, a temperatura ambiente y durante un tiempo entre 4 horas y toda la noche.
De acuerdo con la etapa (i) del procedimiento, la reacción de sustitución del 4-bromocrotonato de etilo de fórmula
(XVI) con la sal sódica de la diformilimida de fórmula (XVII) para dar un producto de fórmula (XVIII) se lleva a cabo en acetonitrilo a reflujo durante un tiempo entre 10 horas y toda la noche.
De acuerdo con la etapa (I) del procedimiento, la hidrólisis ácida de un compuesto de fórmula (XVIII) para dar un producto de fórmula (IV) se lleva a cabo en una mezcla a reflujo de etanol-ácido trifluoroacético durante un tiempo entre 8 horas y toda la noche.
De acuerdo con cualquiera de las etapas (m.1) a (m.5) la conversión de un compuesto de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I), se puede llevar a cabo en una variedad de formas, de acuerdo con métodos convencionales.
Preferiblemente, de acuerdo con la etapa (m.1) del procedimiento, la hidrólisis de un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -OCH2CH3, para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -OH se lleva a cabo en condiciones ácidas o básicas. Preferiblemente, la reacción se lleva a cabo como se describe en la etapa (a). De acuerdo con las condiciones de operación que se van a usar, el compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -OH se podría obtener en su forma ácida o, alternativamente, como una sal.
Preferiblemente, de acuerdo con la etapa (m.2) del procedimiento, la transesterificación de un compuesto de fórmula
(I) en donde R1 es -OCH2CH3, para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -ORa y Ra es un alquilo diferente de etilo, se lleva a cabo por reacción con un compuesto de fórmula (XV) en un disolvente adecuado, tal como el propio compuesto de fórmula (XV) o dioxano a la temperatura de reflujo, opcionalmente en presencia de un catalizador basado en metal adecuado, como óxido de dibutilestaño o alcóxidos de titano tales como, por ejemplo, etóxido de titanio (IV), isopropóxido de titanio (IV) y similares.
Preferiblemente, de acuerdo con la etapa (m.3) del procedimiento, la aminolisis de un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -OCH2CH3, para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -NRaRb, se lleva a cabo en un disolvente adecuado tal como dioxano o diclorometano, opcionalmente en presencia de un catalizador basado en metal adecuado, como trimetilaluminio.
Preferiblemente, de acuerdo con la etapa (m.4) del procedimiento, la esterificación de un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es un grupo -OH para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -ORa; se lleva a cabo en presencia de un agente de condensación adecuado, por ejemplo diciclohexilcarbodiimida (DCC), 1-etil-3-(3'dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC), 3,4-dihidro-3-hidroxi-4-oxo-1,2,3-benzotriazina (DHBT), tetrafluoroborato de O-benzotriazoliltetrametilisouronio (TBTU), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitripirrolidinofosfonio (PyBOP), o hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (HBTU), en un disolvente adecuado tal como diclorometano (DCM), N,N-dimetilformamida (DMF) o N,N-dimetilacetamida (DMA).
Preferiblemente, de acuerdo con la etapa (m.5) del procedimiento, la amidación de un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es un grupo -OH para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -NRaRb se puede llevar a cabo en una variedad de formas, de acuerdo con métodos convencionales para obtener derivados amido a partir de los correspondientes ácidos. Preferiblemente, la reacción se lleva a cabo por reacción con el compuesto de fórmula (XV) después de activación de la función carboxílica del compuesto de fórmula (I) por reacción con cloruro de tionilo, cloruro de oxalilo o alternativamente en presencia de un agente de condensación adecuado, por ejemplo diciclohexilcarbodiimida (DCC), 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC), 3,4-dihidro-3-hidroxi-4-oxo-1,2,3benzotriazina (HBTOH), tetrafluoroborato de O-benzotriazoliltetrametilisouronio (TBTU) o hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitripirrolidinofosfonio (PyBOP), en un disolvente adecuado tal como diclorometano, y/o N,Ndimetilformamida o N,N-dimetilacetamida.
De acuerdo con una cualquiera de las etapas (m.1) a (m.5) la conversión de un compuesto de fórmula (V) en otro compuesto de fórmula (V), se puede llevar a cabo en una variedad de formas, de acuerdo con métodos convencionales.
Preferiblemente, se lleva a cabo como se ha descrito en las etapas (m.1) a (m.5).
De acuerdo con una cualquiera de las etapas (o.1) a (o.5) la conversión de un compuesto de fórmula (XI) en otro compuesto de fórmula (XI), se puede llevar a cabo en una variedad de formas, de acuerdo con métodos convencionales.
Preferiblemente, se lleva a cabo como se ha descrito en las etapas (m.1) a (m.5).
Además de lo anterior, los compuestos de fórmula (I) se pueden preparar de forma ventajosa de acuerdo con técnicas de química combinatoria ampliamente conocidas en la técnica, llevando a cabo las reacciones mencionadas antes entre los compuestos intermedios de una forma seriada y trabajando en condiciones de síntesis en fase sólida (SPS).
Como un ejemplo, los derivados intermedios ésteres carboxílicos de fórmula (Va) que se obtienen en la etapa (b) de los procedimientos anteriores, se pueden convertir primero en el derivado de ácido carboxílico libre mediante hidrólisis llevada a cabo de acuerdo con métodos convencionales, después pueden ser soportados fácilmente sobre una resina polimérica, por ejemplo, mediante la formación de un grupo carboxamido.
El compuesto intermedio soportado de esta forma se puede hacer reaccionar posteriormente de acuerdo con las etapas restantes del procedimiento. La ruta sintética anterior se puede resumir como sigue:
en donde la resina es una resina poliestirénica disponible en el comercio que incluye, por ejemplo, resina de Wang, resina de tritilo, resina de Cl-tritilo, resina de amida de Rink, resina Tentagel OH y derivados de las mismas, R2" y Ra son como se han definido antes.
Cualquiera de las reacciones anteriores se lleva a cabo de acuerdo con métodos conocidos, trabajando como se ha descrito anteriormente, y permite obtener compuestos de fórmula (I) como se ha expuesto antes.
De acuerdo con una realización preferida de la invención, la resina poliestirénica es una resina formil-poliestirénica derivatizada que se puede obtener haciendo reaccionar una resina formil-poliestirénica disponible en el comercio, p. ej. resina de 4-(4-formil-3-metoxifenoxi)butiril-AM, con un derivado de amino adecuado en condiciones reductoras, por ejemplo, en presencia de triacetoxiborohidruro sódico y derivados de los mismos, sustancialmente como sigue:
La reacción se puede llevar a cabo en un disolvente adecuado tal como tetrahidrofurano y en presencia de ácido acético. Los derivados de amino soportado sobre polímero así obtenidos, en particular los que se pueden denominar como resina formil-poliestirénica derivatizada, son ampliamente conocidos en la técnica.
En general, las aminas cargadas en resinas formil-poliestirénicas también conocidas como resinas de metoxi
15 benzaldehído-poliestireno sensibles a ácido (resina AMEBA) se preparan por aminación reductora convencional en presencia de un exceso de amina en TMOF/DCE y NaBH(OAc)3 o AcOH/DMF y NaCNBH3, por ejemplo como se describe en Tetrahedron Letters (1997), 38, 7151-7154; J. Am. Chem. Soc. (1998), 120, 5441; y Chem. Eur. J. (1999), 5, 2787.
Por lo tanto, un objeto adicional de la presente invención es un procedimiento para preparar los compuestos de 20 fórmula (I), y las sales farmacéuticas aceptables de los mismos, cuyo procedimiento comprende:
p) hidrolizar en condiciones ácidas o básicas el compuesto de fórmula (V) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6;
r) hacer reaccionar el derivado de ácido resultante con una resina formil-poliestirénica derivatizada de fórmula (XIX):
(P)-CH2-NHRa (XIX)
25 en donde (P) es la resina y Ra es como se ha definido antes;
s) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (XX) resultante:
en donde (P) y Ra son como se han descrito antes, con un agente de reducción adecuado tal como cloruro de cromo (II), hidrogenosulfuro de tetrabutilamonio o cloruro de estaño (II); 30 y t) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (XXI) resultante:
en donde (P) y Ra son como se han descrito antes, como se describe en una cualquiera de las etapas (d.1) o (d.2);
u) escindir la resina en condiciones ácidas del compuesto de fórmula (XXII) resultante:
para dar un compuesto de fórmula (I), en donde R2" es -NHCORc o -NHCONHRc, en donde Rc es como se ha definido antes, y R1 es -NHRa, en donde Ra es como se ha definido antes;
5 opcionalmente separar el compuesto de fórmula (I) resultante en los isómeros individuales; convertir el compuesto de fórmula (I) resultante en un compuesto de fórmula (I) diferente y/o en una sal farmacéuticamente aceptable si se desea.
De acuerdo con la etapa (p) del procedimiento, la hidrólisis de un compuesto de fórmula (Va), para dar el correspondiente compuesto de fórmula (V) en donde R1 es -OH se lleva a cabo como se ha descrito en la etapa
10 (m.1).
De acuerdo con la etapa (r) del procedimiento, la reacción con la resina de poliestireno se lleva a cabo en un disolvente adecuado, por ejemplo DMF, en presencia de N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) y de un agente de condensación adecuado tal como, por ejemplo, hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitripirrolidinofsofonio (PyBOP), tetrafluoroborato de O-benzotriazolil-tetrametilisouronio (TBTU) o hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol
15 1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (HBTU).
De acuerdo con la etapa (s) del procedimiento, el compuesto de fórmula (XX) se reduce para obtener el correspondiente derivado de amino; la reacción se lleva a cabo en presencia de cloruro de estaño (II) en dimetilformamida (DMF) a temperatura ambiente durante un tiempo en el intervalo de 4 a 24 horas.
De acuerdo con la etapa (t), el compuesto de fórmula (XXI) soportado se hace reaccionar además opcionalmente
20 para dar una variedad de compuestos funcionalizados en la posición 4 del anillo de 3,4-dihidro-2H-pirrolo[1,2a]pirazin-1-ona, como se describe en una cualquiera de las etapas (d.1) y (d.2).
De acuerdo con la etapa (u), la escisión de la resina se lleva a cabo en condiciones ácidas en presencia de ácidos adecuados tales como, por ejemplo, ácido clorhídrico, trifluoroacético, metanosulfónico o p-toluenosulfónico. Preferiblemente, la reacción se lleva a cabo usando ácido trifluoroacético en diclorometano como disolvente.
25 Como otro ejemplo, los derivados intermedios ésteres carboxílicos de fórmula (XIa) que se obtienen en la etapa (g) de los procedimientos anteriores, se pueden convertir primero en el derivado de ácido carboxílico libre mediante hidrólisis llevada a cabo de acuerdo con métodos convencionales, después pueden ser soportados fácilmente sobre una resina polimérica, por ejemplo, mediante la formación de un grupo carboxamido.
El compuesto intermedio soportado de esta forma se puede hacer reaccionar posteriormente de acuerdo con las 30 etapas restantes del procedimiento.
La ruta sintética anterior se puede resumir como sigue:
en donde R2, R2"', Ra y la resina son como se han definido antes. Por lo tanto, un objeto adicional de la presente invención es un procedimiento para preparar los compuestos de 5 fórmula (I), y sus sales farmacéuticamente aceptables, cuyo procedimiento comprende:
v) hidrolizar en condiciones ácidas o básicas el compuesto de fórmula (XI) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-
C6;
w) hacer reaccionar el derivado de ácido resultante con una resina formil-poliestirénica derivatizada de fórmula (XIX):
(P)-CH2-NHRa (XIX) 10 en donde (P) es la resina y Ra es como se ha definido antes; z) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (XXIII) resultante:
en donde (P) y Ra son como se han descrito antes, con un ácido o éster borónico de fórmula (XII):
R2"'B(OZ"Z"')2 (XII)
15 en donde R2'" es Rd y Rd es un grupo además opcionalmente sustituido, seleccionado de alquilo C1-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6 , cicloalquil-alquilo(C1-C6), heterociclilo, heterociclil-alquilo(C1-C6), arilo, aril-alquilo(C1-C6), heteroarilo o heteroaril-alquilo(C1-C6), y Z" y Z"' son como se han definido antes;
x) escindir la resina en condiciones ácidas del compuesto de fórmula (XXVI) resultante:
para dar un compuesto de fórmula (I), en donde R2'" es como se ha definido antes y R1 es -NHRa,
en donde Ra es como se ha definido antes, separando opcionalmente el compuesto de fórmula (I) resultante en los isómeros individuales; convertir el compuesto de fórmula (I) resultante en un compuesto de fórmula (I) diferente y/o en una sal farmacéuticamente aceptable si se desea.
De acuerdo con la etapa (v) del procedimiento, la hidrólisis de un compuesto de fórmula (XIa) se lleva a cabo como se ha descrito en la etapa (m.1) y etapa (p).
De acuerdo con la etapa (w) del procedimiento, la reacción con la resina de poliestireno se lleva a cabo como se ha descrito en la etapa (r). De acuerdo con la etapa (z) del procedimiento, la reacción con el ácido o éster borónico de fórmula (XII) en donde R2'" es arilo o heteroarilo, se lleva a cabo como se ha descrito en la etapa (h.1).
De acuerdo con la etapa (x) del procedimiento, la escisión de la resina se lleva a cabo como se ha descrito en la etapa (u).
Claramente, trabajando de acuerdo con técnicas de química combinatoria como se ha indicado anteriormente, se puede obtener una pluralidad de compuestos de fórmula (I).
Por lo tanto, un objeto adicional de la presente invención es una biblioteca de dos o más compuestos de fórmula (I)
en donde
R1 es un grupo -NRaRb o -ORc;
R2 es -NH2, -NHCORc, -NHCONHRc, -NHSO2Rc, -C≡CRd o Rd,
en donde Ra, Rb, Rc y Rd, iguales o diferentes, son cada uno independientemente hidrógeno o un grupo además opcionalmente sustituido, seleccionado de alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6 o alquinilo C2-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, cicloalquil-alquilo(C1-C6), heterociclilo, heterociclil-alquilo(C1-C6), arilo, aril-alquilo(C1-C6), heteroarilo y heteroaril-alquilo(C1-C6), o Ra y Rb, considerados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, pueden formar un heterociclilo o heteroarilo de 3 a 7 miembros opcionalmente sustituido, que contiene opcionalmente un heteroátomo o grupo heteroatómico adicional seleccionado de S, O, N o NH, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
De acuerdo con una realización preferida de la invención, la biblioteca mencionada antes comprende los compuestos de fórmula (I) en donde R1 es un grupo -NRaRb y Ra y Rb son ambos átomos de hidrógeno o uno de ellos es un átomo de hidrógeno y el otro que queda de Ra o Rb es un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6 lineal o ramificado, o es un grupo arilo opcionalmente sustituido o aril-alquilo(C1-C6).
También se prefiere una biblioteca de compuestos de fórmula (I) en donde R2 es un grupo -NHCORc con Rc como un alquilo C1-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo o grupo arilo opcionalmente sustituido o arilalquilo.
También se prefiere una biblioteca de compuestos de fórmula (I) en donde R2 es un grupo -NHCONHRc con Rc como un átomo de hidrógeno o como un alquilo C1-C6 lineal o ramificado, grupo arilo opcionalmente sustituido o arilalquilo.
Para una referencia general a las bibliotecas anteriores de compuestos de fórmula (I), véase la sección experimental.
A partir de todo lo anterior, está claro para el experto en la técnica que una vez que se ha preparado así una biblioteca de derivados de 3,4-dihidro-2H-pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que consiste, por ejemplo, en miles de compuestos de fórmula (I), dicha biblioteca se puede usar ventajosamente para la selección frente a quinasas dadas, como se ha descrito anteriormente.
Para una referencia general a bibliotecas de compuestos y usos de las mismas como herramientas para selección de actividades biológicas, véase, J. Med. Chem. 1999, 42, 2373-2382; y Bioorg. Med. Chem. Lett. 10 (2000), 223
226.
Farmacología
La actividad inhibidora de inhibidores de quinasa putativos y la potencia de compuestos seleccionados se determina por un método de ensayo basado en el uso del ensayo de quinasa luminiscente Kinase-Glo® (disponible en el comercio en Promega corporation y descrito en Koresawa, M. y Okabe, T. (2004) "High-throughput screening with quantitation of ATP consumption: A universal non-radioisotope, homogeneous assay for protein kinase". Assay Drug Dev. Technol. 2, 153-60).
La reducción drástica del ATP como resultado de la actividad de quinasa se puede controlar de una forma muy sensible mediante el uso de Kinase-Glo® o Kinase-Glo® Plus Reagent, que usa luciferina, oxígeno y ATP como sustratos en una reacción que produce oxiluciferina y luz.
Las formas cortas y abreviaturas usadas en la presente memoria tienen el siguiente significado:
BSA albúmina de suero bovino Tris 2-Amino-2-(hidroximetil)-1,3-propanodiol Hepes N-(2-hidroxietil)piperazina-N'-(ácido 2-etanosulfónico) DTT treo-1,4-Dimercapto-2,3-butanodiol THF tetrahidrofurano MTBE éter de terc-butilo y metilo DIPEA N,N-diisopropiletilamina PyBOP hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(pirrolidino)fosfonio EDC 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida DHBT 3,4-dihidro-3-hidroxi-4-oxo-1,2,3-benzotriazina HBTU hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio TFA ácido trifluoroacético TMOF ortoformiato de trimetilo DCE dicloroetano DCM diclorometano DMF N,N-dimetilformamida DMA N,N-dimetilacetamida DMSO dimetilsulfóxido KDa kiloDalton mg miligramos µg microgramos ng nanogramos l litros ml mililitros µl microlitros M molar mm milimolar µM micromolar nM nanomolar
Las condiciones de reacción de quinasa son dependientes de la diana (enzima) y por lo tanto se someten a adaptaciones individuales. El ensayo de quinasa luminiscente Kinase-Glo® se puede usar prácticamente con cualquier combinación de quinasa y sustrato.
Las condiciones del tampón también pueden variar dependiendo de la quinasa de interés (p. ej., para la PKA se usa una composición de Tris 40 mM a pH 7,5, MgCl2 20 mM, BSA 0,1 mg/ml, en un volumen final de 50 µl). Típicamente el intervalo de valoración del ATP es de 0,1 µM a 10 µM.
El sustrato de quinasa óptimo produce el mayor cambio en luminiscencia cuando se comparan pocillos de reacción con quinasa con pocillos sin quinasa.
La cantidad óptima de quinasa se determina haciendo diluciones seriadas de dos veces a través de las placas usando la cantidad óptima de ATP y el sustrato de quinasa óptimo. La cantidad óptima de quinasa para usar en los posteriores cribados de compuestos y determinaciones de CI50 es la cantidad necesaria para que la luminiscencia esté dentro del intervalo lineal de la curva de valoración de quinasa (respuesta a la dosis sigmoidal).
Ensayo de Kinase-Glo® robotizado
Este ensayo se estableció para la medición de la actividad y/o la inhibición de quinasa. Es homogéneo, adecuado para todo tipo de proteína quinasas, es rápido y está exento de radioactividad.
Se estableció el ensayo en placas de 384 pocillos: la mezcla de ensayo consistía en:
1) 3x mezcla enzimática (hecha en tampón de quinasa 3X), 5 µl/pocillo
2) 3x mezcla de sustrato y ATP (hecha en ddH2O), 5 µl/pocillo
3) 3x compuesto de fórmula (I) (diluido en ddH2O -DMSO al 3%) -5 µl/pocillo)
Como resultado, se evaluó el porcentaje de inhibición con concentración 10 µM para cada compuesto ensayado: véase a continuación la dilución de compuestos y el esquema de ensayo. Cada enzima tenía su propia constitución de tampón, tipo de sustrato y concentración. En cambio el tiempo de incubación era 90 min para todas las dianas.
Los compuestos de ensayo se recibieron como una solución 1 mM en DMSO al 100% en placas de 96 pocillos. Las placas se diluyeron a 30 µM en ddH2O, DMSO al 3%; 4 placas se reorganizaron en una placa de 384 pocillos dispensando 5 µl de cada placa de 96 pocillos en los cuatro cuadrantes de una placa de 384 pocillos. En los pocillos P23 y P24 se añadió el inhibidor de referencia interna estaurosporina.
Esquema de ensayo
Primero se añadieron en las placas de ensayo 5 µl de la dilución de compuesto (30 µM, correspondiente a dilución 3X) y después se cargaron en una estación robotizada junto con un depósito para la mezcla enzimática (3X) y uno para la mezcla de ATP (3X), específico para cada diana que se estudia.
Para empezar el ensayo, el robot aspiraba 5 µl de ATP/mezcla de sustrato, creaba un espacio de aire dentro de las puntas (5 µl) y aspiraba 5 µl de mezcla enzimática. La dispensación posterior en las placas de ensayo permitió que se iniciara la reacción de quinasa después de 3 ciclos de mezcla, realizados por el propio robot pipeteando arriba y abajo. En este punto se restableció la concentración correcta para todos los reactivos.
El robot incubó las placas durante 90 minutos a temperatura ambiente, y después paró la reacción pipeteando 15 µl de reactivo Kinase-Glo® en la mezcla de reacción. Se realizaron inmediatamente tres ciclos de mezclamiento después de la adición del reactivo.
El principio de la técnica de Kinase-Glo® es la presencia en la mezcla de reactivos de oxígeno, luciferina y enzima luciferasa: En presencia de ATP, que queda de la reacción de quinasa, se produce oxiluciferina con emisión de luz, directamente dependiente de la cantidad de ATP. Para los rendimientos óptimos de esta técnica, la reacción de quinasa debería usar al menos 15-20% del ATP disponible.
Después de otros 60 min de incubación para estabilizar la señal luminiscente, las placas se leyeron en un instrumento ViewLux®. Los datos se analizaron usando el paquete de software Assay Explorer® que proporcionó datos de porcentaje de inhibición. Como ejemplo, en la presente memoria se describen las condiciones de ensayo usadas para ensayar los compuestos de fórmula (I) contra ALK (la proteína ALK se preparó como se describe en el documento WO2009013126, el sustrato ALKtide YFF APCo se obtuvo en lotes de >95% de pureza de péptido de American Peptide Company, Inc. (Sunnyvale, CA, EE.UU.).
Condiciones de ensayo:
Concentración de ATP: 1 µm Concentración enzimática: 100 nM Concentración de sustrato ALKtide YFF APCo: 80 µM Tampón de reacción: Hepes 50 mM a pH 7,5, MgCl2 5 mM, MnCl2 1 mM, DTT 1 mM, NaVO3 3 uM, BSA 0,2 mg/ml
Procedimiento de ensayo: añadir 5 ul de compuesto de fórmula (I) (3x), añadir 5 µl de mezcla de ATP/S (3x) en tampón 1x ; añadir 5 µl de enzima en tampón 2x + 3X BSA; para el blanco, añadir 5 µl de tampón 2x + 3x BSA sin enzima. Después de 90 min de incubación, añadir 15 µl/pocillo de reactivo Kinase-Glo. Después de 60-90 min de incubación para estabilizar la señal luminiscente, las placas se leen en un instrumento ViuwLux.
Los compuestos de la presente invención se encontraron activos con una concentración de 10 a 10000 nM.
Ensayo bioquímico para inhibidores de la actividad de quinasa PIM-1
La actividad inhibidora de inhibidores de quinasa putativos y la potencia de compuestos seleccionados se determinaron usando un ensayo de trans-fosforilación.
Los sustratos péptidos o proteínas específicos son trans-fosforilados por su ser-thr o tyr quinasa específica en presencia de ATP seguido con 33P-γ-ATP, y en presencia de su propio tampón y cofactores óptimos.
Al final de la reacción de fosforilación, más de 98% de ATP no marcado y ATP radiactivo es capturado por un exceso de la resina de intercambio iónico Dowex; después la resina se deposita en la parte inferior de la placa de reacción por gravedad. Posteriormente el líquido sobrenadante se extrae y se transfiere a una placa de recuento, después se evalúa por recuento β.
Reactivos/condiciones de ensayo
i. Preparación de la resina Dowex
Se pesan 500 g de resina húmeda (SIGMA, resina preparada adaptada DOWEX 1x8 nº de malla 200-400, 2,5 Kg) y
se diluyen en 2 litros de formiato sódico 150 mM, pH 3,00.
La resina se deja sedimentar (algunas horas) y después el líquido sobrenadante se descarta.
Después de 3 lavados como antes a lo largo de un par de días, la resina se deja sedimentar y se añaden dos
volúmenes (wrt el volumen de resina) de tampón de formiato amónico 150 mM.
Después se mide el pH y debería ser alrededor de 3,00
La resina lavada es estable durante más de una semana; la resina almacenada se mantiene a 4ºC antes de usar.
ii. Tampón de quinasa (KB)
El tampón para el ensayo de PIM-1 estaba compuesto de HEPES 50 mM, a pH 7,5, con MgCl2 10 mM, DTT 1 mM, NaVO3 3 µM, y BSA 0,2 mg/ml
La PIM-1 humana de longitud completa se expresó y se purificó como se describe en Bullock AN, et al., J. Biol. Chem. 2005, 280. 41675-82.
La enzima mostraba una cinética lineal después de una etapa de pre-activación por autofosforilación en las siguientes condiciones: se incubó PIM1 1,7 µM 1 h a t.a. a 28ºC en presencia de ATP 125 µM
iii. Condiciones de ensayo. Concentración de ATP: 200 µM33P-µ-ATP: 6 nM
Concentración enzimática: 1 nM Concentración de sustrato Aktide (número de registro de Chemical Abstract Service 324029-01-8): 25 µM Ensayo Dowex robotizado La mezcla de ensayo consistía en: 1) 3x mezcla enzimática (hecha en tampón de quinasa 3X), 5 µl/pocillo
2) 3x mezcla de sustrato y ATP (hecha en ddH2O), junto con 33P-γ-ATP, 5 µl/pocillo
3) 3x compuestos de ensayo (diluido en ddH2O -DMSO al 3%) -5 µl/pocillo
Véase a continuación la dilución de compuestos y el esquema de ensayo.
La dilución de compuestos y el esquema de ensayo se definen a continuación:
i. Dilución de compuestos
Los compuestos de ensayo se reciben como una solución 1 mM en DMSO al 100%, distribuidos en placas de 96 o 384 pocillos:
a) para estudios de porcentaje de inhibición (HTS), las placas de dilución individuales 1 mM se diluyen a una concentración 3X (30 µM) en ddH2O (DMSO al 3% = concentración final) usando una plataforma de pipeteo automática Beckman NX. Se usa el mismo instrumento para distribuir las placas madre diluidas en las placas de ensayo.
b) para la determinación de la CI50 (plataforma KSS), se transfieren 100 µl de cada compuesto 1 mM en DMSO al 100% desde la placa original a la primera columna de otra placa de 96 pocillos (de A1 a G1); el pocillo H1 se deja vacío para el inhibidor de referencia interna, normalmente estaurosporina.
Se usa una estación automatizada para diluciones seriadas (Biomek FX, Beckman) para producir diluciones 1:3 en DMSO al 100%, desde la fila A1 a A10, y para los 7 compuestos en la columna. Además, se preparan 4-5 copias de placas hija cambiando el formato de 5 µl de este primer conjunto de placas de dilución en DMSO al 100% en placas de 384 pocillos profundos: una copia de las placas hija con las diluciones seriadas de los compuestos de ensayo se descongelará el día de los experimentos, se reconstituirá a una concentración 3X con agua y se usará en los ensayos de determinación de CI50. En un experimento de referencia, la concentración más alta (3X) de todos los compuestos es 30 µM, mientras que la más baja es 1,5 nM.
Cada placa de 384 pocillos contendrá pocillos de referencia (actividad enzimática total frente a sin actividad enzimática) para Z' y la evaluación de señal a señal de fondo.
ii. Esquema de ensayo
Se preparan placas de 384 pocillos, de fondo en V (placas de ensayo) con 5 µl de la dilución de compuesto (3X) y después se ponen en una estación robotizada PlateTrak 12 (Perkin Elmer; el robot tiene una cabeza de pipeteo de 384 puntas para empezar el ensayo más una cabeza de 96 puntas para dispensar la resina) junto con un depósito para la mezcla enzimática (3X) y uno para la mezcla de ATP (3X).
Al inicio de la ejecución, el robot aspira 5 µl de la mezcla de ATP, crea un espacio de aire dentro de las puntas (2 µl) y aspira 2 µl de mezcla de PIM. La siguiente dispensación en las placas permite que empiece la reacción de quinasa tras 3 ciclos de mezclamiento, realizados por el propio robot.
En este punto, se establece la concentración correcta para todos los reactivos.
El robot incuba las placas durante 60 min a temperatura ambiente, y después detiene la reacción mediante pipeteo de 70 µl de suspensión de resina Dowex en la mezcla de reacción. Inmediatamente después de la adición de la resina se realizan tres ciclos de mezclamiento.
La suspensión de resina es muy densa; con el fin de evitar la obstrucción, se usan puntas de diámetro ancho para dispensarla.
Se lleva a cabo otro ciclo de mezclamiento después de detener todas las placas, esta vez usando puntas normales: después se deja que las placas reposen durante aproximadamente 1 hora con el fin de maximizar la captura de ATP. En este punto, se transfieren 20 µl del líquido sobrenadante a placas 384-OptiPlate (Perkin-Elmer), con 70 µl de Microscint 40 (Perkin-Elmer); después de 5 min de agitación orbital las placas se leen en un contador de radiactividad Perkin-Elmer TopCount.
iii. Análisis de datos
Los datos se analizan mediante una versión adaptada internamente del paquete de SW "Assay Explorer" que proporciona el % de inhibición para los ensayos primarios o los ajustes sigmoidales de las curvas de 10 diluciones para la determinación de la CI50 en los ensayos secundarios/rutinas de confirmación de aciertos.
Ensayo bioquímico para inhibidores de la actividad de quinasa de PIM-2
La actividad inhibidora de inhibidores de quinasa putativos y la potencia de compuestos seleccionados se determinaron usando un ensayo de trans-fosforilación como se ha descrito antes para PIM-1.
i. Tampón de quinasa (KB)
El tampón para el ensayo de PIM-2 estaba compuesto de HEPES 50 mM, a pH 7,5, con MgCl2 1 mM, DTT 1 mM, NaVO3 3 µM, y BSA 0,2 mg/ml
La PIM-2 humana de longitud completa se expresó y purificó como se describe en Fedorov O, et al, PNAS 2007 104, 51, 20523-28).
ii. Condiciones de ensayo
Concentración de ATP: 4 µM33P-µ-ATP: 1 nM Concentración enzimática: 1,5 nM Concentración de sustrato Aktide (número de registro de Chemical Abstract Service 324029-01-8): 5 µM
La enzima mostraba una cinética lineal sin necesidad de ninguna etapa de preactivación.
Ensayo Dowex robotizado
Véase el mismo procedimiento descrito para PIM-1.
Los compuestos de la presente invención mostraban CI50 menor de 10 µM cuando se ensayaban frente a PIM-1 y
PIM-2, véase la tabla A a continuación para algunos ejemplos.
En la tabla A, los compuestos ensayados se identifican con un código que se explica más adelante.
Cuando se resuelven los diastereoisómeros, la quiralidad se indica en la estructura de 3,4-dihidro-2H-pirrolo[1,2
a]pirazin-1-ona.
A partir de todo lo anterior, los nuevos compuestos de fórmula (I) de la invención parece que son particularmente ventajosos en la terapia de enfermedades causadas por la actividad de proteína quinasa desregulada tales como el cáncer.
Los compuestos de la presente invención pueden administrarse o bien como agentes sencillos o, de forma alternativa, en combinación con tratamientos anticáncer conocidos tal como terapia de radiación o régimen de quimioterapia en combinación con agentes citostáticos o citotóxicos, agentes tipo antibiótico, agentes alquilantes, agentes antimetabolito, agentes hormonales, agentes inmunológicos, agentes tipo interferón, inhibidores de ciclooxigenasa (por ejemplo, inhibidores de COX-2), inhibidores de metaloproteasas de matriz, inhibidores de telomerasa, inhibidores de tirosina quinasa, agentes anti-receptor del factor de crecimiento, agentes anti-HER, agentes anti-EGFR, agentes antiangiogénesis (por ejemplo, inhibidores de angiogénesis), inhibidores de farnesil transferasa, inhibidores de la ruta de transducción de señales ras-raf, inhibidores del ciclo celular, otros inhibidores de cdk, agentes de unión a tubulina, inhibidores de topoisomerasa I, inhibidores de topoisomerasa II y similares.
Si se formula como una dosis fija, dichos productos de combinación emplean los compuestos de esta invención en el intervalo de dosis descrito a continuación y el otro agente farmacéuticamente activo en el intervalo de dosis aprobado.
Los compuestos de fórmula (I) pueden usarse secuencialmente con agentes anticáncer conocidos cuando la formulación de combinación es inapropiada.
Los compuestos de fórmula (I) de la presente invención, adecuados para la administración a un mamífero, por ejemplo, a seres humanos, pueden administrarse por las rutas normales y el nivel de dosificación depende de la edad, peso, condiciones del paciente y ruta de administración.
Por ejemplo, una dosis adecuada adoptada para administración oral de un compuesto de fórmula (I) puede oscilar de aproximadamente 10 a aproximadamente 500 mg por dosis, de 1 a 5 veces al día. Los compuestos de la invención pueden administrarse en una variedad de formas farmacéuticas, por ejemplo, por vía oral, en forma de comprimidos, cápsulas, comprimidos recubiertos de azúcar o película, disoluciones o suspensiones líquidas; por vía reactal en forma de supositorios; por vía parenteral, por ejemplo, por vía intramuscular, o por inyección o infusión intravenosa y/o intratecal y/o intraespinal.
La presente invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable, que puede ser un vehículo o un diluyente.
Las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la invención se preparan normalmente siguiendo métodos convencionales y se administran en una forma farmacéutica adecuada. Por ejemplo, las formas orales sólidas pueden contener, junto con el compuesto activo, diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, azúcar, celulosa, almidón de maíz o almidón de patata; lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio o calcio, y/o polietilenglicoles; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidones, goma arábiga, gelatina metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinilpirrolidona; agentes disgregantes, por ejemplo, almidón, ácido algínico, alginatos o glicolato sódico de almidón; mezclas efervescentes; colorantes; edulcorantes; agentes humectantes tales como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y, en general, sustancias no tóxicas y farmacológicamente inactivas usadas en formulaciones farmacéuticas. Estos preparados farmacéuticos pueden fabricarse de forma conocida, por ejemplo, por medio de procedimientos de mezcla, granulado, formación de comprimidos, recubrimiento con azúcar o recubrimiento con película.
Las dispersiones líquidas para administración oral pueden ser, por ejemplo, jarabes, emulsiones y suspensiones. Como un ejemplo, los jarabes pueden contener, como vehículo, sacarosa o sacarosa con glicerina y/o manitol y sorbitol.
Las suspensiones y las emulsiones pueden contener, como ejemplos de vehículos, goma natural, agar, alginato sódico, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o poli(alcohol vinílico). La suspensión o disoluciones para inyecciones intramusculares pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, agua estéril, aceite de oliva, oleato de etilo, glicoles, por ejemplo, propilenglicol y, si se desea, una cantidad adecuada de hidrocloruro de lidocaína.
Las disoluciones para inyecciones o infusiones intravenosas pueden contener, como un vehículo, agua estéril o preferiblemente pueden estar en forma de soluciones salinas, estériles, acuosas, isotónicas, o pueden contener propilenglicol como un vehículo.
Los supositorios pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, manteca de cacao, polietilenglicol, un tensioactivo de éster de ácido graso de polietilensorbitano o lecitina.
Con el objetivo de ilustrar mejor la presente invención, ahora se dan los siguientes ejemplos.
Sección experimental
Métodos generales
La cromatografía ultrarrápida se llevó a cabo en gel de sílice (Merck calidad 9395, 60A). Los tiempos de retención de la cromatografía líquida de alta presión (HPLC: valores de t.r.) se determinaron mediante:
Método de HPLC 1:
En esta aplicación se usó el equipo Waters Alliance LC modelo 2795 equipado con un detector de UV variable modelo 2487, un detector de quimioluminiscencia de nitrógeno (CLND, Antek 8060) y un detector de masas Waters ZQ2000 (interfase ESI). El flujo total se dividió y se distribuyó en los tres detectores con una relación fijada (UV:MS:CLND 64:15:21). El cromatógrafo de líquidos estaba equipado con una columna de 30 x 3,0 mm D.I. (Waters xBridge C18, partículas de 3,5 um), regulada por termostato a 50ºC. Se usaron dos fases móviles: la fase A era ácido fórmico al 0,05% en p/v (1 ml/l de ácido fórmico al 50% Fluka 09676 en agua altamente purificada) y la fase B era MeOH/iPrOH/H2O 70/25/5 (v/v/v) que contenía ácido fórmico al 0,035% en p/v (700 ul/l de ácido fórmico al 50% Fluka 09676).
Se inyectó un volumen de 5 ul de solución de muestra nominal 1 mM en DMSO (modo de bucle parcial, secuencial, sin espacios de aire) y se llevó a cabo un análisis con gradiente de fase inversa genérico (clasificado como método "nº IN63SEQ79") a 0,8 ml/min de 0% a 100% de fase B (v/v) a lo largo de 5 min, mantenido 0,7 min a 100% de B y se invirtió abruptamente a 0% de B a los 5,71 min, con el tiempo de parada de la ejecución fijado en 6,3 min. El tiempo de análisis total ("entre inyecciones") era 7,9 min.
El detector UV trabajaba a 220 nm, velocidad de muestreo de 5 Hz. El dispositivo de MS trabajaba a un voltaje del capilar de 3,2 kV, cono 30 V, extractor 2 V, lentes RF 0,5 V, flujo de desolvatación 400 l/h, flujo de cono 100 l/h, temperatura de la fuente 100°C, temperatura de desolvatación 150°C, ESI(+) barrido completo adquisición de 1201200 uma, a la velocidad de muestreo de 1,7 Hz. El detector CLND trabajaba a una temperatura del horno de 1050ºC, flujo de entrada de oxígeno 280 ml/min, entrada de argón 80 ml/min, argón de reposición 25 ml/min, ozono 30 ml/min, vacío 28 torr, voltaje PMT 750 V, cámara PMT a +10ºC, sensibilidad alta, selección 5, velocidad de muestreo 4 Hz.
Método de HPLC 2:
Los análisis de HPLC-MS se llevaron a cabo en un espectrómetro de masas de trampa de iones Finnigan MAT modelo LCQ, equipado con una fuente de iones de ESI (electropulverización), el espectrómetro de masas está conectado directamente a un HPLC SSP4000 (Thermo Separation) equipado con un muestreador automático Lc Pal (CTC Analytics) y un detector UV6000LP PDA.
Condiciones de HPLC:
- Columna:
- Phenomenex Gemini C18, 3 µm, 50 x 4,6 mm (por defecto)
- Temperatura
- 40°C
- Fase móvil A:
- Tampón de acetato 5 mM pH 4,5 : acetonitrilo 95:5 (v:v)
- Fase móvil B:
- Tampón de acetato 5 mM pH 4,5 : acetonitrilo 5:95 (v:v)
- Gradiente de elución:
- Tiempo (min)
- % de fase móvil A
- 0
- 100
- 7
- 0
- 9
- 0
- 11
- 100
- 13
- 100
- Caudal:
- 1 ml/min, volumen de inyección: 10 µl
- Temperatura de la columna:
- 40°C
Condiciones de MS: El espectrómetro de masas LCQ trabaja con una interfase de ionización por electropulverización (ESI) en un modo de ion positivo y negativo siguiendo los parámetros de trabajo indicados en la tabla 1. Los experimentos de MS/MS se llevan a cabo automáticamente en el ion más intenso de cada barrido
mediante el software Xcalibur. Se usó una energía de colisión de 45% para la fragmentación de los iones precursores.
Tabla 1. Parámetros del instrumento espectrómetro de masas
- Parámetro
- Valor
- Temperatura del capilar (ºC)
- 255
- Voltaje de la fuente (kV)
- 4,00
- Voltaje del capilar (V)
- 21,0
- Offset de lente tubular (V)
- -5,0
- Amplificador de RF multipolo (Vp-p)
- 400,0
- Offset multipolo 1 (V)
- -3,00
- Offset multipolo 2 (V)
- -6,50
- Voltaje lente intermultipolo (V)
- -16,00
- Voltaje de offset de trampa DC (V)
- -10,00
- Microbarridos completos
- 3
- Iones objetivo AGC completo
- 5*107
- Tiempo de iones máx. completo (ms)
- 150
- Microbarridos MSn
- 3
- Iones objetivo de AGC MSn
- 2*107
- Tiempo de iones máx. MSn (ms)
- 200
- Electromultiplicador (V)
- -950,0
5 Método de HPLC 3:
Los análisis de HPLC-MS se llevaron a cabo en un espectrómetro de masas de trampa de iones Finnigan MAT modelo LCQ, equipado con una fuente de iones ESI (electropulverización), el espectrómetro de masas está conectado directamente a un HPLC SSP4000 (Thermo Separation) equipado con un muestreador automático Lc Pal (CTC Analytics) y un detector UV6000LP PDA.
10 Condiciones de HPLC:
- Columna:
- Phenomenex Gemini C18, 3 µm, 50 x 4,6 mm (por defecto)
- Temperatura
- 40°C
- Fase móvil A:
- Tampón de acetato 5 mM pH 4,5 : acetonitrilo 95:5 (v:v)
- Fase móvil B:
- Tampón de acetato 5 mM pH 4,5 : acetonitrilo 5:95 (v:v)
- Gradiente de elución:
- Tiempo (min)
- % de fase móvil A
- 0
- 100
- 2
- 80
- 9
- 60
- 10
- 0
- 12
- 0
- 12,10
- 100
- Caudal:
- 1 ml/min
- Volumen de inyección:
- 10 µl
- Temperatura de la columna:
- 40°C
Condiciones de MS:
El espectrómetro de masas LCQ trabaja con una interfase de ionización por electropulverización (ESI) en un modo de ion positivo y negativo siguiendo los parámetros de trabajo indicados en la tabla 2. Los experimentos de MS/MS 15 se llevan a cabo automáticamente en el ion más intenso de cada barrido mediante el software Xcalibur. Se usó una energía de colisión de 45% para la fragmentación de los iones precursores.
Tabla 2. Parámetros del instrumento espectrómetro de masas
- Parámetro
- Valor
- Temperatura del capilar (ºC)
- 255
- Voltaje de la fuente (kV)
- 4,00
- Voltaje del capilar (V)
- 21,0
- Offset de lente tubular (V)
- -5,0
- Amplificador de RF multipolo (Vp-p)
- 400,0
- Offset multipolo 1 (V)
- -3,00
- Offset multipolo 2 (V)
- -6,50
- Voltaje lente intermultipolo (V)
- -16,00
- Voltaje de offset de trampa DC (V)
- -10,00
- Microbarridos completos
- 3
- Iones objetivo de AGC completo
- 5*107
- Tiempo de iones máx. completo (ms)
- 150
- Microbarridos MSn
- 3
- Iones objetivo de AGC MSn
- 2*107
- Tiempo de iones máx. MSn (ms)
- 200
- Electromultiplicador (V)
- -950,0
Método de HPLC 4:
Los análisis se realizaron en un Sistema Waters Acquity UPLCTM equipado con unos detectores 2996 PDA (UV-VIS) y Acquity ELSDTM. El sistema LC se acopló a un espectrómetro de masas de cuadrupolo sencillo Waters Acquity 3100 SQDTM para determinaciones de masa atómica. Una columna Waters Acquity UPLCTM BEH C18, de 1,7 µm, 2,1x50 mm a 45ºC se usó con un caudal de 0,7 ml/min del siguiente sistema disolvente binario y gradiente.
Fase móvil A: Ácido trifluoroacético al 0,1% en H2O/Acetonitrilo (95:5)
Fase móvil B: Acetonitrilo/H2O (95:5)
- Tiempo (min)
- % de fase móvil A % de fase móvil B
- 0,00
- 95% 5%
- 2,00
- 5% 95%
Condiciones de MS:
El espectrómetro de masas LCQ trabaja con una interfase de ionización por electropulverización (ESI) en un modo de ion positivo y negativo siguiendo los parámetros de trabajo indicados en la tabla 3. Los experimentos de MS/MS se llevan a cabo automáticamente en el ion más intenso de cada barrido mediante el software Xcalibur. Se usó una
15 energía de colisión de 45% para la fragmentación de los iones precursores.
Tabla 3. Parámetros del instrumento espectrómetro de masas
- Modo de ionización
- ESI+ y ESI-
- Voltaje del capilar
- 3 kV (ES+); 3 kV (ES-)
- Voltaje del cono
- 30 V (ES+); 30 V (ES-)
- Voltaje del extractor
- 1 V
- Voltaje de la lente RF
- 0,1 V
- Temperatura de la fuente
- 120°C
- Temperatura de desolvatación
- 350°C
- Flujo de gas en el cono
- 100 l/h
- Flujo de gas de desolvatación
- 600 l/h
- Resolución LM
- 15,0
- Resolución HM
- 15,0
- Energía iónica
- 0,3
- Ganancia
- 1
- Modo barrido
- Barrido completo (Intervalo = 100-800 m/z) Tiempo de barrido = 0,1 s Demora entre barridos = 0,02 s
Método de HPLC 5:
Los análisis se realizaron en un Sistema Waters Alliance HT 2795 equipado con un detector 996 PDA (UV-VIS). El sistema LC se acopló a un espectrómetro de masas de cuadrupolo sencillo Waters/Micromass ZQTM para determinaciones de masa atómica. Una columna Waters Ascentis Express C18, de 2,7 µm, 4,6x50 mm se usó con un caudal de 1,0 mL/min del siguiente sistema disolvente binario y gradiente.
Fase móvil A: Ácido trifluoroacético al 0,1% en H2O/Acetonitrilo (95:5)
Fase móvil B: Acetonitrilo/H2O (95:5)
- Tiempo (min)
- % de fase móvil A % de fase móvil B
- 0,00
- 90% 10%
- 4,00
- 10% 90%
- 4,10
- 0% 100%
Condiciones de MS:
10 El espectrómetro de masas LCQ trabaja con una interfase de ionización por electropulverización (ESI) en un modo de ion positivo y negativo siguiendo los parámetros de trabajo indicados en la tabla 4. Los experimentos de MS/MS se llevan a cabo automáticamente en el ion más intenso de cada barrido mediante el software Xcalibur. Se usó una energía de colisión de 45% para la fragmentación de los iones precursores.
Tabla 4. Parámetros del instrumento espectrómetro de masas
- Modo de ionización
- ESI+ y ESI-
- Voltaje del capilar
- 3,48 kV (ES+); 2,76 kV (ES-)
- Voltaje del cono
- 15 V (ES+); 27 V (ES-)
- Voltaje del extractor
- 1 V
- Voltaje de la lente RF
- 0,1 V
- Temperatura de la fuente
- 120°C
- Temperatura de desolvatación
- 240°C
- Flujo de gas en el cono
- 100 l/h
- Flujo de gas de desolvatación
- 600 l/h
- Resolución LM
- 15,0
- Resolución HM
- 15,0
- Energía iónica
- 0,5
- Multiplicador
- 600
- Modo barrido
- Barrido completo (Intervalo = 100-800 m/z) Tiempo de barrido = 0,5 s; Demora entre barridos = 0,3 s
Los tiempos de retención (t.r. HPLC) se dan en minutos a 220 nm o a 254 nm. La masa se da como la relación m/z.
Cuando era necesario, los compuestos se purificaron por HPLC preparativa usando uno de los siguientes dos sistemas. Una columna Waters X-Bridge Prep Shield RP18 (19 x 100 mm, 5 µm) o una columna Phenomenex Gemini C18 (21,2 x 250 mm, 10 µm), usando un sistema de autopurificación Waters FractionLynx equipado con un
20 detector 996 Waters PDA y un espectrómetro de masas de cuadrupolo simple Micromass mod. ZQ, ionización por electropulverización, modo positivo. La fase móvil A era NH3 al 0,05% en agua/acetonitrilo 95:5, y la fase móvil B era acetonitrilo. Gradiente de 10 a 90% de B en 8 min o 15 min. Caudal 20 ml/min.
Alternativamente, las purificaciones se realizaron en un Sistema Biotage Parallex Flex, equipado con cuatro bombas de corriente de flujo binario independientes, un detector UV con celdas de flujo de cuatro canales que controlan dos
25 longitudes de onda (220 y 254 nm), y cuatro colectores de fracciones. El fraccionamiento se realizó a 254 nm. Se usaron columnas Waters XTerra Prep RP18, de 5 µm, 100 x 19 mm, con un caudal de 20 ml/min. Los gradientes se aplicaron según el tiempo de retención del producto deseado obtenido del análisis de HPLC analítico.
Sistema disolvente binario estándar:
Fase móvil A: Ácido trifluoroacético al 0,1% en H2O/Acetonitrilo (95:5)
30 Fase móvil B: Acetonitrilo
Gradiente A:
- Tiempo (min)
- % de fase móvil A % de fase móvil B
- 0,0
- 100% 0%
- 6,0
- 80% 20%
- 8,0
- 80% 50%
- 8,5
- 50% 100%
Gradiente B:
- Tiempo (min)
- % de fase móvil A % de fase móvil B
- 0,0
- 100% 0%
- 6,0
- 70% 30%
- 8,0
- 0% 100%
Gradiente C:
- Tiempo (min)
- % de fase móvil A % de fase móvil B
- 0,0
- 100% 0%
- 6,0
- 50% 50%
- 8,0
- 0% 100%
Gradiente D:
- Tiempo (min)
- % de fase móvil A % de fase móvil B
- 0,0
- 90% 10%
- 6,0
- 30% 70%
- 8,0
- 0% 100%
La espectrometría de RMN de 1H se llevó a cabo en un instrumento Bruker AVANCE 400MHz single bay con
10 gradientes. Está equipado con una sonda QNP (sonda de 4 núcleos intercambiables -1H, 13C, 19F y 31P) (método de RMN 1) o en un Mercury VX 400 que trabaja a 400,45 MHz equipado con una sonda doble de resonancia de 5 mm [1H (15N-31P) ID_PFG Varian] (método de RMN 2).
Los compuestos de fórmula (I), que tienen un átomo de carbono asimétrico y obtenidos como mezcla racémica, se resolvieron por separación por HPLC en columnas quirales. En particular, por ejemplo, se pueden usar las columnas 15 preparativas CHIRALPACK® AD, CHIRALPACK® AS, CHIRALCELL®OJ.
Alternativamente, cuando R1 contiene un centro quiral y da lugar a una pareja de diastereoisómeros, se usaron técnicas de HPLC de fase inversa tradicionales descritas antes para resolver las especies.
Algunos compuestos preparados de acuerdo con técnicas de química en disolución y combinatoria se han identificado de forma conveniente y sin ambigüedad, conforme al sistema de codificación de las tablas III junto con el 20 tiempo de retención de HPLC (métodos 1-5) y masa.
Cada código, que identifica un solo compuesto de fórmula (I) específico, consiste en tres unidades A-M-B.
A representa cualquier sustituyente R2-[véase la fórmula (I)] y está unido en la posición 7 del resto de 3,4-dihidro2H-pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona; cada sustituyente A está representado en la siguiente tabla I.
B representa cualquier sustituyente R1-[véase la fórmula (I)] y está unido al resto del resto de 3,4-dihidro-2H25 pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona por el átomo de carbono del grupo carbonilo, para así tener derivados de 3,4-dihidro-2Hpirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona; cada sustituyente B está representado en la siguiente tabla II.
M se refiere al núcleo central del resto 3,4-dihidro-2H-pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona divalente que está sustituido en la posición 7 con grupos A y en el grupo carbonilo con grupo B, sustancialmente como sigue:
Para facilitar la referencia, cada grupo A y B, en las tablas I y II respectivamente, se ha identificado con la fórmula 5 química adecuada y una indicación del punto de unión con el núcleo de la molécula M.
Como ilustración, el compuesto A-127-M-B22 de la tabla III (entrada 913) representa el núcleo M, 3,4-dihidro-2Hpirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que está sustituido en la posición 7 con el grupo A127 y con el grupo B22 por el grupo carbonilo; igualmente, el compuesto A150-M-B40 de la tabla III (entrada 1241) representa el núcleo M, 3,4-dihidro2H-pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona, que está sustituido en la posición 7 con el grupo A150 y con el grupo B40 por el grupo
10 carbonilo, como sigue:
Preparación de 2,2,2-tricloro-1-(4-nitro-1H-pirrol-2-il)etanona (III):
Se añadió gota a gota ácido nítrico (90%, 2 ml) a lo largo de un periodo de 30 minutos a una solución de 2,2,2
5 tricloro-1-(1H-pirrol-2-il)etanona (II) (1 g, 4,7 mmol) en anhídrido acético (10 ml), se enfrió a -40ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 6 h. El disolvente se evaporó a vacío y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc 9:1) para obtener el compuesto de fórmula (III) en forma de un sólido amarillo (670 mg, 55% de rendimiento). También se obtuvo la 2,2,2-tricloro-1-(5nitro-1H-pirrol-2-il)etanona como producto secundario (349 mg, 29% de rendimiento).
10 LCMS (Método de HPLC 2): m/z 256 [M-H]-a t.r. 5,44 min. RMN 1H (400 MHz, DMSD-d6) δ= 13,65 (s ancho, 1 H), 8,39 (dd, J = 1,4, 3,6 Hz, 1 H), 7,73 (t, J= 1,8 Hz, 1H)
Preparación de (7-nitro-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4-il)acetato de etilo (V, donde R1=OCH2CH3):
Se añadió trifluoroacetato de (2E)-4-aminobut-2-enoato de etilo (IV) (5,99 g, 24,6 mmol) a una solución de 2,2,2tricloro-1-(4-nitro-1H-pirrol-2-il)etanona (III) (3,17 g, 12,3 mmol) y DIPEA (12,6 ml, 73,8 mmol) en CH2Cl2 seco (120 15 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El disolvente se evaporó a vacío y el
residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc 2:3), para obtener el compuesto de fórmula (V) (donde R1=OCH2CH3) en forma de un sólido amarillo claro (3,19 g, 97% de rendimiento).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 268 [M+H]+ a t.r. 3,48 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6)) δ= 8,13 (s ancho, 1 H), 8,12 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 7,14 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 4,74 -4,84 (m, 1 H), 4,11 (q, J = 7,2 Hz, 2 H), 3,75 (ddd, J = 1,8, 4,2, 13,4 Hz, 1H), 3,44 (dt, J = 4,2,13,4 Hz, 1 H), 2,96 (dd, J = 1,6, 6,8 Hz, 2 H), 1,19 (t, J = 7,1 Hz, 3 H)
Ejemplo 1
Preparación del hidrocloruro de (7-amino-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4-il)acetato de etilo (I):
A una solución de (7-nitro-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4-il)acetato de etilo (V, donde R1=OCH2CH3) (0,55 g, 2,1 mmol) en etanol al 100% (20 ml) se añadió ácido clorhídrico (solución 4 M en 1,4-dioxano, 0,52 ml, 2,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente en presencia de Pd-C (10%) (0,11 g), en atmósfera de argón (3,5 kg/cm2 (50 psi)). Después de 7 h, el sólido se filtró a través de Celite (se lavó con etanol) y el disolvente se evaporó a vacío, para obtener el compuesto hidrocloruro de (7-amino-1-oxo-1,2,3,4tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4-il)acetato de etilo (I) en forma de un sólido marrón claro (0,56 g, 98% de rendimiento), usado sin más purificación en las siguientes etapas. Producto muy higroscópico. Para almacenar durante un periodo de tiempo corto y en atmósfera de gas inerte. LCMS (Método de HPLC 2): m/z 238 [M-H]-a t.r. 1,89 min (pico ancho). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ= 9,75 (s ancho, 2 H), 7,84 (s ancho, 1 H), 7,10 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 6,62 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 4,64 -4,75 (m, 1 H), 4,05 -4,15 (m, 2 H), 3,64 -3,75 (m, 1 H), 3,34 -3,44 (m, 1 H), 2,83 -2,94 (m, 1 H), 2,73 -2,82 (m, 1 H), 1,20 (t, J= 7,1 Hz, 3 H).
Ejemplo 2
Preparación de A7-M-B1 (entrada 34, tabla III):
Una solución de ácido 4-fluorobenzoico (0,29 g, 2,1 mmol), 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) (0,4 g, 2,1 mmol), 3,4-dihidro-3-hidroxi-4-oxo-1,2,3-benzotriazina (DHBT) (0,34 g, 2,1 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (0,75 ml, 4,2 mmol) en acetonitrilo seco (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 10 min, antes de añadir hidrocloruro de (7-amino-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4-il)acetato de etilo (I) (0,52 g, 1,9 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a la misma temperatura. El disolvente se evaporó a vacío y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (EtOAc + MeOH al 5%), para obtener el compuesto A7-M-B1 (entrada 34, tabla III) en forma de un sólido blanquecino (0,49 g, 71% de rendimiento).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 361 [M+H]+ a t.r. 3,99 min. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ = 10,37 (s, 1 H), 7,97 8,02 (m, 2 H), 7,66 (s ancho, 1 H), 7,44 (d, J=1,6 Hz, 1 H), 7,31 -7,38 (m, 2 H), 6,73 (d, J=1,6 Hz, 1 H), 4,63 (ddd, J = 3,2, 3,3, 6,8 Hz, 1 H), 4,09 (q, J = 7,0 Hz, 2 H), 3,66 -3,72 (m, 1 H), 3,34 -3,39 (m, 1 H), 2,81 -2,89 (m, 1 H), 2,68 -2,77 (m, 1 H), 1,19 (t, J = 7,1 Hz, 3 H).
Ejemplo 3
Preparación de A9-M-B1 (entrada 54, tabla III):
Se añadió N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (0,19 ml, 1,1 mmol) a una solución de 1-fluoro-4-isocianatobenceno (0,15 ml, 1,2 mmol) y (una suspensión de) hidrocloruro de (7-amino-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4il)acetato de etilo (I) (0,30 g, 1,1 mmol) en diclorometano seco (10 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, el disolvente se evaporó a vacío y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (EtOAc + MeOH al 5%), para obtener el compuesto A9-M-B1 (entrada 54, tabla III) en forma de un sólido blanquecino (0,33 g, 80% de rendimiento). LCMS (Método de HPLC 2): m/z 376 [M+H]+ a t.r. 4,04 min. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ = 8,56 (s, 1 H), 8,37 (s, 1 H), 7,59 (d, J = 2,6 Hz, 1 H), 7,38 -7,46 (m, 2 H), 7,10 -7,11 (m, 1 H), 7,05 -7,12 (m, 2 H), 6,48 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 4,53 -4,59 (m, 1 H), 4,06 -4,12 (m, 2 H), 3,64 -3,70 (m, 1 H), 3,29 3,36 (m, 1 H), 2,79 -2,85 (m, 1 H), 2,69 -2,74 (m, 1 H), 1,19 (t, J = 7,1 Hz, 3 H).
Ejemplo 4
Preparación de A8-M-B1 (entrada 52, tabla III):
Se añadió N-metilmorfolina (0,28 ml, 2,6 mmol) a una solución de cloruro de 4-fluorobencenosulfonilo (0,25 g, 1,3 mmol) y (una suspensión de) hidrocloruro de (7-amino-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4-il)acetato de etilo (I) (0,32 g, 1,2 mmol) en diclorometano seco (10 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El disolvente se evaporó a vacío y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (EtOAc), para obtener el compuesto A8-M-B1 (entrada 52, tabla III) en forma de un sólido blanquecino (0,30 g, 64% de rendimiento).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 397 [M+H]+ a t.r. 3,96 min. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ = 9,75 (s, 1 H), 7,70 7,77 (m, 2 H), 7,65 (d, J = 2,9 Hz, 1 H), 7,35 -7,42 (m, 2 H), 6,67 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 6,20 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 4,50 4,56 (m, 1 H), 3,99 -4,10 (m, J = 3,5, 3,7, 7,1, 7,1,10,6 Hz, 2 H), 3,58 -3,64 (m, 1 H), 3,26 -3,32 (m, 1 H), 2,78 (dd, J = 6,4,16,0 Hz, 1 H), 2,58 -2,68 (m, 1 H), 1,16 (t, J = 7,1 Hz, 3 H).
Preparación de 2,2,2-tricloro-1-(4-yodo-1H-pirrol-2-il)etanona (IX):
Se añadió yodo (1,2 g, 4,7 mmol) en porciones a una solución de 2,2,2-tricloro-1-(1H-pirrol-2-il)etanona (1 g, 4,7 mmol) y trifluoroacetato de plata (1,1 g, 5 mmol) en diclorometano seco (24 ml), se enfrió a 0ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a 18ºC (baño de agua) y se agitó a la misma temperatura durante 5 h. El sólido se filtró, la fase orgánica se lavó con Na2S2O5 (solución acuosa al 5%) hasta que se produjo la decoloración y finalmente se lavó con H2O (1 x 20 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 y se filtró a través de un tapón de SiO2 (hexano-EtOAc 4:1), para obtener el compuesto 2,2,2-tricloro-1-(4-yodo-1H-pirrol-2-il)etanona (IX) en forma de un sólido blanquecino (1,49 g, 94% de rendimiento).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 336 [M-H]-a t.r. 6,3 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12,76 (s ancho, 1 H), 7,52 (dd, J =1,3, 3,3 Hz, 1 H), 7,39 (dd, J =1,3, 2,6 Hz, 1 H).
Preparación de (2E)-4-{[(4-yodo-1H-pirrol-2-il)carbonil)amino}but-2-enoato de etilo (X, donde R1=OCH2CH3):
Se añadió trifluoroacetato de (2E)-4-aminobut-2-enoato de etilo (IV) (0,97 g, 4 mmol) a una solución de 2,2,2-tricloro1-(4-yodo-1H-pirrol-2-il)etanona (IX) (0,68 g, 2 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (2,7 ml, 16 mmol) en diclorometano (20 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El disolvente se evaporó a vacío y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (SiO2, hexano-EtOAc 1:1) para obtener el compuesto (2E)-4-{[(4-yodo-1H-pirrol-2-il)carbonil]amino}but-2-enoato de etilo (X, donde R1=OCH2CH3) en forma de un sólido blanquecino (0,48 g, 68% de rendimiento).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 349 [M+H]+ a t.r. 4,7 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11,82 (s ancho, 1 H), 8,39 (t, J = 5,8 Hz, 1 H), 7,01 (dd, J = 1,5, 2,9 Hz, 1 H), 6,96 (dd, J = 1,5, 2,5 Hz, 1 H), 6,90 (dt, J = 4,7, 15,7 Hz, 1 H), 5,87 (dt, J =1,8, 15,7 Hz, 1H), 4,12 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 3,99 -4,06 (m, 2 H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3 H).
Preparación de (7-yodo-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4-il)acetato de etilo (XI, donde R1=OCH2CH3):
Se añadió diaza(1,3)biciclo[5.4.0]undecano (DBU) (0,04 ml, 0,3 mmol) a una solución de (2E)-4-{[(4-yodo-1H-pirrol2-il)carbonil]amino}but-2-enoato de etilo (X, donde R1=OCH2CH3) (0,45 g, 1,3 mmol) en acetonitrilo (8 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El disolvente se evaporó a vacío y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (SiO2, hexano-EtOAc 1:1) para obtener el compuesto (7-yodo-1-oxo-1,2,3,4tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4-il)acetato de etilo (XII, donde R1=OCH2CH3) en forma de un sólido blanquecino (0,35 g, 79% de rendimiento).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 349 [M+H]+ a t.r. 4,15 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7,72 (s ancho, 1 H), 7,13 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 6,72 (d, J =1,6 Hz, 1 H), 4,59 -4,71 (m, 1 H), 4,10 (qd, J = 1,8, 7,1 Hz, 2 H), 3,66 (ddd, J = 1,7, 4,2, 13,1 Hz, 1 H), 3,30 -3,38 (m, 1 H), 2,83 (d, J = 6,7 Hz, 2 H), 1,19 (t, J = 7,1 Hz, 3 H).
Ejemplo 5
Preparación de A21-M-B1 (entrada 127, tabla III):
Una mezcla de (7-yodo-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4-il)acetato de etilo (XI, donde R1=OCH2CH3) (50 mg, 0,14 mmol), dicloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaladio(II), complejo con diclorometano (1:1) (12 mg, 0,015 mmol) y ácido 4-nitrofenilborónico (47 mg, 0,28 mmol) en dimetoxietano (DME) (1 ml) se desgasificó antes de añadir carbonato sódico (45 mg, 0,42 mmol en 0,5 ml de H2O) y la mezcla de reacción se agitó a 80ºC durante 3 h, en atmósfera de argón. La mezcla de reacción se filtró a través de sílice (se lavó con EtOAc) y el disolvente se evaporó a vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (EtOAc-hex), para obtener el compuesto A21M-B1 (entrada 127, tabla III) (29 mg, 60% de rendimiento).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 345 [M+H]+ a t.r. 4,61 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,19 (d, J = 9,0 Hz, 2 H), 7,87 (d, J = 9,0 Hz, 2 H), 7,80 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 7,76 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,24 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 4,71 (ddd, J = 3,4, 3,6, 6,6 Hz, 1 H), 4,04 -4,17 (m, 2 H), 3,74 (ddd, J = 1,8, 4,1, 13,3 Hz, 1 H), 3,35-3,45 (m, 1 H), 2,88 -2,99 (m, 2 H),1,15 -1,22 (m, 3 H).
Ejemplo 6
Preparación de A22-M-B1 (entrada 128, tabla III):
Una mezcla de (7-yodo-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4-il)acetato de etilo (XI, donde R1=OCH2CH3) (50 mg, 0,14 mmol), dicloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaladio(II), complejo con diclorometano (1:1) (12 mg, 0,015 mmol) y ácido trans-2-(4-metoxifenil)vinilborónico (50 mg, 0,28 mmol) en dimetoxietano (DME) (1 ml) se desgasificó antes de añadir carbonato sódico (45 mg, 0,42 mmol en 0,5 ml de H2O) y la mezcla se agitó a 80ºC durante 6 h, en atmósfera de argón. La mezcla de reacción se filtró a través de sílice (se lavó con EtOAc) y el disolvente se evaporó a vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (EtOAc-hex), para obtener el compuesto A22-M-B1 (entrada 128, tabla III) (31 mg, 62% de rendimiento).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 356 [M+H]+ a t.r. 5,12 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7,66 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 7,38 -7,45 (m, 2 H), 7,13 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 6,87 -6,93 (m, 4 H), 6,79 -6,85 (m, 1 H), 4,58 -4,66 (m, 1 H), 4,12 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 3,76 (s, 3 H), 3,65 -3,73 (m, 1 H), 3,32 -3,39 (m, 1 H), 2,76 -2,91 (m, 2 H), 1,20 (t, J = 7,1 Hz, 3 H).
Ejemplo 7
Preparación de A27-M-B1 (entrada 151, tabla III):
Una mezcla de (7-yodo-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4-il)acetato de etilo (XI, donde R1=OCH2CH3) (500 mg, 1,44 mmol), dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio(II) (50 mg, 0,07 mmol), yoduro de cobre(I) (41 mg, 0,22 mmol), 1-cloro-4-etinilbenceno (0, 29 g, 2,15 mmol) y trietilamina (0,58 ml, 5,74 mmol) en dimetilformamida seca (14 ml) se desgasificó y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, en atmósfera de argón. El disolvente se evaporó a vacío el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (EtOAc-CH2Cl2), para obtener el compuesto A27-M-B1 (entrada 151, tabla III) (0,51 g, 99% de rendimiento).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 358 [M+H]+ a t.r. 6,48 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7,82 (s ancho, 1 H), 7,42 -7,50 (m, 4 H), 7,37 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 6,78 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 4,63 -4,70 (m, 1 H), 4,11 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 3,65 -3,74 (m, 1 H), 3,33 -3,41 (m, 1 H), 2,81 -2,91 (m, 2 H), 1,19 (t, J = 7,1 Hz, 3 H).
Preparación de (2E)-4-(diformilamino)but-2-enoato de etilo (XV):
Una solución de 4-bromo-crotonato de etilo (1 g, 5,18 mmol), sal sódica de la diformilimida (0,59 g, 6,22 mmol) y yoduro sódico (0,78 g, 5,18 mmol) en acetonitrilo seco (25 ml) se agitó a temperatura de reflujo durante la noche. El disolvente se evaporó a vacío y el residuo se repartió entre diclorometano y agua (1:1, 40 ml). La fase acuosa se volvió a extraer con diclorometano (3 x 15 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se evaporó a vacío y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc 6:4) para obtener el compuesto (2E)-4-(diformilamino)but-2-enoato de etilo (XV) en forma de un sólido marrón claro (0,92 g, 96% de rendimiento). Alternativamente, se añadió Et2O al residuo aceitoso marrón oscuro para obtener el producto en forma de un sólido cristalino.
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 186 [M-H]-a t.r. 3,36 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9,01 (s, 2 H), 6,78 (dt, J = 4,6, 15,9 Hz, 1 H), 5,88 (dt, J = 2,0, 15,8 Hz, 1 H), 4,26 (dd, J = 2,0, 4,5 Hz, 2 H), 4,12 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3 H)
Preparación de trifluoroacetato de (2E)-4-aminobut-2-enoato de etilo (IV):
Una solución de (2E)-4-(diformilamino)but-2-enoato de etilo (XV) (0,89 mg, 4,8 mmol) en una mezcla de ácido trifluoroacético-etanol (absoluto) (2:1, 10 ml) se agitó a reflujo durante la noche (la reacción se siguió por LC-MS y se detuvo cuando se logró la conversión completa). El disolvente se evaporó a vacío para obtener el compuesto trifluoroacetato de (2E)-4-aminobut-2-enoato de etilo (IV) en forma de un aceite marrón (rendimiento indeterminado), que se usó sin más purificación en la siguiente etapa.
Ejemplo 8
Preparación de A2-M-B2 (entrada 8, tabla III):
A una solución del derivado A2-M-B1 (entrada 7, tabla III) (24 mg, 0,07 mmol) en una mezcla de tetrahidrofuranoagua (1:1, 2 ml) se añadió hidróxido de litio (6 mg, 0,04 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La fase orgánica se lavó con diclorometano (2 x 5 ml). La fase acuosa se acidificó con ácido clorhídrico (1 M) hasta pH<1 y se extrajo con EtOAc (4 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y el disolvente se evaporó a vacío para obtener el compuesto A2-M-B2 (entrada 8, tabla III) en forma de un sólido blanquecino (21 mg, 100% de rendimiento).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 302 [M+H]+ a t.r. 3,06 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7,64 (s ancho, 1 H), 7,45 -7,50 (m, 2 H), 7,37 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 6,96 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 6,88 -6,94 (m, 2 H), 4,57 -4,63 (m, 1 H), 3,76 (s, 3 H), 3,67 -3,73 (m, 1 H), 3,37 -3,42 (m, 1 H), 2,74 -2,86 (m, 2 H).
Ejemplo 9
Preparación de A5-M-B5 (entrada 29, tabla III):
A una solución del derivado A5-M-B2 (entrada 23, tabla III) (45 mg, 0,14 mmol) en una mezcla de acetonitrilodimetilformamida seca (3:1, 4 ml), se añadieron 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) (32 mg, 0,17 mmol), 3,4-dihidro-3-hidroxi-4-oxo-1,2,3-benzotriazina (DHBT) (28 mg, 0,17 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (0,024 ml, 0,14 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min antes de añadir piperidina (0,028 ml, 0,28 mmol). La mezcla de reacción se agitó a la misma temperatura durante la noche. Después la mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (4 x 5 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, el disolvente se evaporó a vacío y el residuo se purificó por HPLC
preparativa para obtener el compuesto A5-M-B5 (entrada 29, tabla III) en forma de un sólido blanco (13 mg, 23% de rendimiento).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 397 [M+H]+ a t.r. 3,74 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,50 (s, 1 H), 8,34 (s, 1 H), 7,51 (d, J = 2,9 Hz, 1 H), 7,42 (d, J = 7,6 Hz, 2 H), 7,24 (t, J = 8,0 Hz, 2 H), 7,12 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 6,92 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 6,48 (d, J =1,7 Hz, 1 H), 4,58 (tt, J = 3,9, 6,7 Hz, 1 H), 3,67 (ddd, J = 1,1, 4,3, 12,9 Hz, 1 H), 2,79 (dd, J = 5,7,16,1 Hz, 1 H), 2,74 (dd, J = 7,1, 16,1 Hz, 1H), 1,55 (quin, J = 5,6 Hz, 2 H), 1,37 -1,48 (m, 4 H).
Preparación de ácido 7-nitro-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-4-carboxílico (V, donde R1=OH)
Se añadió LiOH.H2O (27 mg, 1,12 mmol) a una solución de (7-nitro-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4il)acetato de etilo (V, donde R1=OCH2CH3) (0,15 g, 0,56 mmol) en una mezcla de tetrahidrofurano-agua (1:1, 9 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La fase orgánica se lavó con diclorometano (2 x 10 ml). La fase acuosa se acidificó con ácido clorhídrico (1 M) hasta alcanzar pH<1 y se extrajo con EtOAc (3 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y el disolvente se evaporó a vacío para obtener el compuesto ácido 7-nitro-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-4-carboxílico (V, donde R1=OH) en forma de un sólido blanquecino (101 mg, 75% de rendimiento).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 240 [M+H]+ a t.r. 1,05 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,13 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 8,11 (d, J =1,7 Hz, 1 H), 7,14 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 4,70 -4,79 (m, 1 H), 3,71 -3,77 (m, 1 H), 3,44 (dt, J = 4,3, 13,4 Hz, 1 H), 2,80 -2,96 (m, 2 H).
Procedimiento general: carga de fenetilamina (que corresponde al fragmento B6 de la tabla I) en resina de metoxibenzaldehído-poliestireno sensible a ácido (resina AMEBA II).
Se suspendió resina de 4-(4-formil-3-metoxifenoxi)butiril-aminometilo (copoliestireno-DVB 1%) (6,0 g, 5,88 mmol, 0,98 mmol/g, 1 eq.) en THF seco (60 ml) y se añadió fenetilamina (29,4 mmol, 5 eq.). La suspensión resultante se agitó a 25ºC durante 2 h. Después se añadieron ácido acético (1,68 ml, 29,4 mmol, 5 eq.) y NaBH(AcO)3 (3,12 g, 14,7 mmol, 3 eq.) y la suspensión final se agitó durante 16 h a 25ºC. La resina se lavó con THF (2 ciclos), MeOH (2 ciclos), DCM (2 ciclos), MeOH (2 ciclos), DMF (2 ciclos) y DCM (3 ciclos) y después se secó en flujo de nitrógeno.
Carga de la estructura de 3,4-dihidro-2H-pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona en la resina preparada como se ha descrito antes.
Una solución de ácido 7-nitro-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-4-carboxílico (V, donde R1=OH) (0,24 g, 1 mmol), N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (0,34 ml, 2 mmol) y hexafluorofosfato de benzotriazol-1iloxitripirrolidinofosfonio (PyBOP) (0,52 g, 1 mmol) en N,N-dimetilacetamida seca (7,5 ml) se agitó durante 30 min, después se añadió a la resina del ejemplo 17 (0,67 mmol, 1 eq) y la suspensión final se agitó durante 24 h a temperatura ambiente. La resina se lavó con un ciclo de DMF, MeOH, DCM (3 veces), DCM (3 veces) y 1,4-dioxano (1 vez) y se secó en flujo de nitrógeno. Después la resina se usó en la siguiente etapa.
Reducción del grupo nitro:
La resina de fórmula (XVIII) (0,67 mmol, 1 eq) se suspendió en una solución 2 M de SnCl2,2H2O en N,Ndimetilformamida (10 ml). La suspensión final se agitó durante 48 h a temperatura ambiente. La resina se lavó con 5
un ciclo de DMF, MeOH, DCM (3 veces), DCM (3 veces) y 1,4-dioxano (1 vez) y se secó en flujo de nitrógeno.
Después la resina se usó en la siguiente etapa.
La resina anterior unida a 3,4-dihidro-2H-pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona se hizo reaccionar además de acuerdo con las
siguientes etapas alternativas para así conseguir derivados de carboxamido y ureido.
Ejemplo 10
Preparación de A11-M-B6 (entrada 71, tabla III):
Se añadió un ácido carboxílico de fórmula (VI), en donde Rc corresponde al fragmento A11 de la tabla II (1,35 mmol, 15 eq.) a una solución de 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) (0,26 g, 1,35 mmol, 15 eq) y 3,4-dihidro3-hidroxi-4-oxo-1,2,3-benzotriazina (DHBT) (0,22 g, 1,35 mmol, 15 eq) en N-metilpirrolidona seca (NMP) (1 ml) y la solución se agitó durante 30 min, después se añadió a la resina del ejemplo 19 (0,09 mmol, 1 eq.) y se agitó durante la noche a temperatura ambiente en un reactor (Quest 210™ o Miniblocks™). La resina se lavó con un ciclo de DMF, MeOH, DCM (3 veces), DCM (3 veces) y 1,4-dioxano (1 vez) y se secó en flujo de nitrógeno. La resina se suspendió en una solución de TFA-DCM (1:1, 2 ml) y se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. Se recogió la solución y la resina se lavó con DCM (recogido también), y se llevó a cabo un segundo ciclo. El lavado final se llevó a cabo con MeOH. Todas las capas orgánicas recogidas se secaron a presión reducida dando el compuesto A11-M-B6 (véase la entrada 71 de la tabla III más adelante).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 399 [M+H]+ a t.r. 2,7 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10,53 (s, 1 H), 9,74 (s ancho, 1 H), 8,07 (t, J = 5,6 Hz, 1 H), 7,67 (d, J= 3,5 Hz, 1 H), 7,12 -7,32 (m, 6 H), 6,60 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 4,48 4,67 (m, 1 H), 3,94 -4,09 (m, 2 H), 3,66 (dd, J = 4,6,13,3 Hz, 1 H), 2,81 (s, 6 H), 2,63 -2,75 (m, 2 H).
Ejemplo 11
Preparación de A17-M-B6 (entrada 117, tabla III):
Un isocianato de fórmula (VII) en donde Rc corresponde al fragmento A17 de la tabla II (1,35 mmol, 15 eq) se añadió a una suspensión de la resina del ejemplo 19 (0,09 mmol, 1 eq) en diclorometano seco (1 ml). La suspensión final se agitó durante la noche a temperatura ambiente en un reactor (Quest 210™ o Miniblocks™). La resina se lavó con un ciclo de DMF, MeOH, DCM (3 veces), DCM (3 veces) y 1,4-dioxano (1 vez) y se secó en flujo de nitrógeno. La resina se suspendió en una solución de TFA-DCM (1:1, 2 ml) y se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. Se recogió la solución y la resina se lavó con DCM (recogido también), y se llevó a cabo un segundo ciclo. El lavado final se llevó a cabo con MeOH. Todas las capas orgánicas recogidas se secaron a presión reducida dando el compuesto A17-M-B6 (véase la entrada 117 de la tabla III más adelante).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 463 [M+H]+ a t.r. 4,02 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,29 (s, 1 H), 8,26 (s, 1 H), 8,07 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 7,52 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 7,28 -7,33 (m, 2 H), 7,10 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 6,77 -6,85 (m, 2 H), 6,46 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 4,50 (tt, J = 3,9,6,9 Hz, 0 H), 3,70 (s, 4 H), 3,63 (ddd, J = 1,3, 4,2,12,8 Hz, 1 H).
Preparación de ácido 7-yodo-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-4-carboxílico (XI, donde R1=OH)
Se añadió LiOH.H2O (63 mg, 1,5 mmol) a una solución de (7-yodo-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazin-4il)acetato de etilo (XII, donde R1=OCH2CH3) (0,26 g, 0,75 mmol) en una mezcla de tetrahidrofurano-agua (1:1, 8 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La fase orgánica se lavó con diclorometano (2 x 10 ml). La fase acuosa se acidificó con ácido clorhídrico (1 M) hasta alcanzar pH<1 y se extrajo con EtOAc (3 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y el disolvente se evaporó a vacío para obtener el
compuesto ácido 7-yodo-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-4-carboxílico (XII, donde R1=OH) en forma de un sólido blanquecino (0,23 g, 75% de rendimiento).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 321 [M+H]+ a t.r. 2,52 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12,63 (s ancho, 1 H), 7,71 (s ancho, 1 H), 7,14 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 6,72 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 4,54 -4,66 (m. 1 H), 3,59 -3,70 (m, 1 H), 3,32 -3,38 (m, 1 H), 2,76 (d, J = 7,0 Hz, 2 H).
Carga de la estructura de 3,4-dihidro-2H-pirrolo[1,2-a]pirazin-1-ona en la resina preparada como se ha descrito previamente.
Una solución de ácido 7-yodo-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-4-carboxílico (XI, donde R1=OH) (0,92 g,
10 2,87 mmol), N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (0,99 ml, 5,76 mmol) y hexafluorofosfato de benzotriazol-1iloxitripirrolidinofosfonio (PyBOP) (1,5 g, 2,87 mmol) en N,N-dimetilacetamida seca (9 ml) se agitó durante 30 min, después se añadió la resina del ejemplo 17 (1,44 mmol, 1 eq) y la suspensión final se agitó durante 24 h a temperatura ambiente. La resina se lavó con un ciclo de DMF, MeOH, DCM (3 veces), DCM (3 veces) y 1,4-dioxano (1 vez) y se secó en flujo de nitrógeno. Después la resina se usó en la siguiente etapa.
15 Ejemplo 12
Preparación de A24-M-B6 (entrada 135, tabla III):
Una mezcla del ácido borónico de fórmula (XII), en donde Rc corresponde al fragmento A24 de la tabla II (0,37 g, 3 mmol*), complejo de dicloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaladio(II) con diclorometano (1:1) 20 (PdCl2(dppf).CH2Cl2) (65 mg, 0,08 mmol), carbonato de cesio (0,52 g, 1,6 mmol) y la resina del ejemplo 23 (0,2 mmol, 1 eq.) en una mezcla de dimetoxietano-agua (3:1, 2 ml) se agitó durante la noche a 80ºC en un reactor (Quest 210™). La resina se lavó con un ciclo de DMF, MeOH, DCM (3 veces), DCM (3 veces) y 1,4-dioxano (1 vez) y se secó en un flujo de nitrógeno. La resina se suspendió en una solución de TFA-DCM (1:1, 2 ml) y se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. Se recogió la solución y la resina se lavó con DCM (recogido también), y se llevó a cabo un
25 segundo ciclo. El lavado final se llevó a cabo con MeOH. Todas las capas orgánicas recogidas se secaron a presión reducida dando el compuesto A24-M-B6 (véase la entrada 135 de la tabla III más adelante).
LCMS (Método de HPLC 2): m/z 376 [M+H]+ a t.r. 4,17 min. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,64 (d, J = 6,3 Hz, 2 H), 8,11 (s, 1 H), 8,05 (d, J = 6,5 Hz, 2 H), 7,95 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 7,88 (d, 1 H), 7,47 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 7,23 (t, J = 7,4 Hz, 2 H), 7,15 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 7,10 (dd, J = 1,5, 7,4 Hz, 2 H), 4,73 (tt, J = 3,7, 7,1 Hz, 1 H), 3,68 (ddd, 1 H).
30 Siguiendo el procedimiento descrito en los ejemplos 4-6, 9-11, 14-15 y 16-24 y usando cualquier reaccionante adecuado para el procedimiento de la invención, se prepararon también los siguientes compuestos de la tabla III.
Cuando R1 es un sustituyente con un centro quiral, los compuestos obtenidos eran mezcla de diastereoisómeros y se separaron por HPLC preparativa.
Cuando se resuelven los diastereoisómeros, la quiralidad se indica en la estructura de 3,4-dihidro-2H-pirrolo[1,2a]pirazin-1-ona.
Trabajando de una forma paralela, se prepararon los siguientes compuestos:
- Entrada
- Compuesto RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) Método de HPLC HPLC t.r. min. [M+H]+
- 1374
- A157-M-B65 isómero S δ = 8,50 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,83 (s ancho, 1H), 7,44 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 5,08 -5,17 (m, 1H), 4,61 -4,75 (m, 1H), 3,73 (dd, J = 13,1, 4,0 Hz, 1 H), 3,36 -3,46 (m, 1H), 3,10 -3,18 (m, 1H), 2,90 -3,04 (m, 1H), 2,68 -2,84 (m, 2H). 4 1,196 408,2
- 1375
- A157-M-B65 isómero R δ = 8,61 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 5,11 (td, J = 8,9, 4,6 Hz, 1H), 4,63 -4,72 (m, 1H), 2,78 (d, J = 6,7 Hz, 2H) 4 1,224 408,2
- Entrada
- Compuesto RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) Método de HPLC HPLC t.r. min. [M+H]+
- 1376
- A133-M-B61 isómero R 4 1,373 464,2
- 1377
- A127-M-B61 isómero R 4 1,332 414,2
- 1378
- A157-M-B161 isómero R 8,41 -8,60 (m, 1H), 6,90 -8,36 (m, 5H), 4,71 (dd, J = 33,3, 3,3 Hz, 2H), 3,56 -3,82 (m, 1H), 2,61 -2,82 (m, 2H), 1,37 1,75 (m, 2H), 0,80-1,23 (m, 10H) 4 1,052 415,2
- 1379
- A158-M-B61 isómero R 4 1,238 432,2
- 1380
- A133-M-B61 isómero S 7,54 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 4,69 (sxt, J = 4,2 Hz, 1H), 4,49 (s ancho, 1H), 3,72 (dd, J = 13,0, 4,1 Hz, 1H), 3,59 (dq, J = 8,9, 5,8 Hz, 1H), 2,82 (dd, J = 14,9, 8,7 Hz, 1H), 2,57 (dd, J = 14,5, 5,4 Hz, 1H) 4 1,375 464,2
- 1381
- A127-M-B61 isómero S 7,68 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,28 -7,42 (m, 4H), 7,09 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 6,90 -6,99 (m, 1H), 4,61 4,72 (m, 1H), 4,50 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 3,69 (ddd, J = 13,0, 4,2, 1,2 Hz, 1H), 3,60 (dq, J = 9,2, 5,8 Hz, 1H), 2,79 (dd, J = 14,6, 8,4 Hz, 1H), 2,58 (dd, J = 14,8, 5,8 Hz, 1H) 4 1,363 414,2
- 1382
- A133-M-B62 isómero R 7,60 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 4,89 (dt, J = 7,9, 6,3 Hz, 1H), 4,73 -4,95 (m, 1 H), 4,59 -4,69 (m, 1H), 2,83 (dd, J = 14,8, 6,5 Hz, 1H), 2,74 (dd, J = 14,9, 7,2 Hz, 1H) 4 1,426 458,2
- 1383
- A127-M-B62 isómero R 8,49 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 6,91 -7,00 (m, 1H), 4,82 -4,94 (m, 1H), 4,62 (dd, J = 9,5, 2,8 Hz, 1H), 3,57 -3,66 (m, 1H), 3,50 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 2,68 -2,83 (m, 2H) 4 1,092 408,2
- 1384
- A157-M-B62 isómero R 8,51 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,18 -7,27 (m, 1H), 4,84 -4,93 (m, 1H), 4,61 4,72 (m, 1H), 3,64 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 3,34 (s ancho, 1H), 2,69 -2,87 (m, 2H) 4 409,2 1,003
- 1385
- A158-M-B62 isómero R 8,45 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,76 (s ancho, 1H), 7,55 (ddd, J = 9,8, 6,3, 3,2 Hz, 1H), 7,45 -7,50 (m, 1H), 7,26 -7,34 (m, 5H), 7,18 -7,25 (m, 1H), 7,13 -7,16 (m, 1H), 6,99 -7,08 (m, 1H), 4,82 -4,90 (m, 1H), 4,79 (s ancho, 1H), 4,68 (s, 1H), 3,65 (dd, J = 9,0, 1,8 Hz, 1H), 3,50 (s ancho, 2H), 3,37 (d, J = 2,3 Hz, 9H), 2,68 -2,85 (m, 2H) 4 1,109 426,2
- 1386
- A133-M-B62 isómero S 8,41 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 1,8 Hz, 1H),7,15-7,18 (m,1H), 4,79 -4,90 (m, 2H), 4,66 (s ancho, 1H), 3,68 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 3,45 -3,61 (m, 1H), 3,34 -3,43 (m, 1H), 2,79 2,88 (m, 1H), 2,70 (dd, J = 15,0, 6,8 Hz, 1H) 4 1,332 458,2
- 1387
- A127-M-B62 isómero S 8,43 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,03 -7,43 (m, 11H), 6,93 -7,01 (m, J = 5,1, 4,0, 0,9, 0,9, 0,9 Hz, 1H), 4,88 (q, J =6,0 Hz, 1H), 4,64 (q, J = 3,3 Hz, 1H), 3,62 -3,71 (m, 2H), 3,55 (dd, J = 7,4, 5,5 Hz, 2H), 3,34 (s ancho, 2H), 2,65 -2,73 (m, 1H) 4 1,121 408,2
- 1388
- A133-M-B63 Mezcla de diast. no resuelta 7,85 (s ancho, 1H), 7,65 (s ancho, 2H), 7,49 (s, 2H), 7,36 (s ancho, 2H), 7,17 (s, 2H), 4,75 (s ancho, 1H), 2,18 (s, 1H), 2,07 (s, 1H), 1,96 (s, 1H), 1,75 (s, 1H), 1,63 (s, 7H), 1,23 (s ancho, 2H), 0,14 -0,34 (m, 2H) 4 1,173 497,2
- 1389
- A127-M-B63 Mezcla de diast. no resuelta 7,59 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,40 (s ancho, 2H), 5,44 -6,15 (m, J = 155,3 Hz, 1H), 4,33 -5,20 (m, 1H), 4,17 (dd, J = 13,4, 11,8 Hz, 1H), 3,67 -3,94 (m, 1H), 2,80 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 0,15 -0,35 (m, 1H) 4 1,02 447,2
- 1390
- A157-M-B63 Mezcla de diast. no resuelta 4 0,782 448,2
- 1391
- A158-M-B63 P26 Mezcla de diast. no resuelta. 7,13 -7,40 (m, 1H), 3,28 -3,58 (m, 16H), 3,08 -3,28 (m, 1H), 2,41 -2,60 (m, 5H) 4 1,031 465,2
- Entrada
- Compuesto RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) Método de HPLC HPLC t.r. min. [M+H]+
- 1392
- A133-M-B64 isómero R 7,96 (s, 1H), 7,36 -7,90 (m, 1H), 7,12 -7,31 (m, 1H), 7,09 7,39 (m, 1H), 4,54 (s, 1H), 3,95 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 3,53 (s ancho, 1H), 3,33 (s, 13H), 3,15 -3,41 (m, 1H), 3,08 -3,29 (m, 1H), 2,52 -2,90 (m, 1H), 2,41 -2,62 (m, 4H) 4 1,44 472,2
- 1393
- A127-M-B64 isómero R 8,00 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,65 (s ancho, 1H), 7,39 -7,41 (m, 1H), 7,24 -7,30 (m, 2H), 7,18 -7,22 (m, 2H), 7,08 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 6,92 -7,00 (m, 1H), 4,53 (s, 1H), 3,93 (s ancho, 1H), 3,51 (s, 3H), 2,53 -2,93 (m, 4H) 4 1,148 422,2
- 1394
- A157-M-B64 isómero R 8,10 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,73 (s ancho, 1H), 7,63 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,44 -7,54 (m, 1H), 7,27 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 4,56 (s ancho, 1H), 3,92 (s ancho, 1H), 3,49 -3,60 (m, 1H), 3,26 -3,38 (m, 1H), 3,23 (s ancho, 1H), 3,16 (s, 1H), 2,82 (s, 1H), 2,65 (s, 1H), 2,48 -2,56 (m, 4H) 4 0,92 423,2
- 1395
- A158-M-B64 isómero S 7,94 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,15-7,16 (m, 1H), 7,14 -7,20 (m, 2H), 7,09 -7,13 (m, 2H), 7,03 -7,08 (m, 1H), 4,77 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,56 (s ancho, 1H), 3,87 3,99 (m, 1H), 3,56 -3,63 (m, 1H), 2,54 -2,80 (m, 4H) 4 1,331 472,2
- 1396
- A127-M-B64 6,91 -7,00 (m, 1H), 4,50 -4,59 (m, J = 7,1, 3,4, 3,4 Hz, 1H), 4 1,181 422,2
- isómero S
- 3,89 -3,99 (m, J = 5,9 Hz, 1H), 3,53 -3,63 (m, J = 13,6, 3,2
- Hz, 1H), 2,76 (dd, J = 13,5, 5,7 Hz, 1H), 2,62 -2,70 (m, 1H),
- 2,52 -2,62 (m, 2H)
- 1397
- A133-M-B65 isómero S 8,62 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,81 -8,00 (m, 2H), 7,75 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 5,00 -5,18 (m, J = 2,7 Hz, 1H), 4,60 -4,75 (m, J = 4,3 Hz, 1H) 4 1,571 457,2
- 1398
- A127-M-B65 isómero S 8,62 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,89 (s ancho, 3H), 7,73 (s ancho, 1H), 5,05 -5,22 (m, J = 3,5 Hz, 1H), 4,58 -4,72 (m, J = 6,9, 6,9, 3,3 Hz, 1 H) 4 1,44 407,2
- 1399
- A158-M-B65 isómero S 8,58 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,45 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,02 -5,26 (m, J = 9,0, 4,6, 4,6 Hz, 1H), 4,63 -4,77 (m, 1H) 4 1,451 425,2
Claims (10)
- REIVINDICACIONES1. Un compuesto de fórmula (I):en la que:5 R1 es un grupo -NRaRb o -ORa yR2 es -NH2, -NHCORc, -NHCONHRc, -NHSO2Rc, -C=CRd o Rden donde Ra, Rb, Rc y Rd, iguales o diferentes, son cada uno independientemente hidrógeno o un grupo además opcionalmente sustituido, seleccionado de alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6 o alquinilo C2-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, cicloalquil-alquilo(C1-C6), heterociclilo, heterociclil-alquilo(C1-C6), arilo, aril-alquilo(C1-C6),10 heteroarilo y heteroaril-alquilo(C1-C6), o Ra y Rb, considerados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, pueden formar un heterociclilo o heteroarilo de 3 a 7 miembros opcionalmente sustituido, que contiene opcionalmente un heteroátomo o grupo heteroatómico adicional seleccionado de S, O, N o NH, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
- 2. Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en donde R2 es un fragmento indicado por cualquiera de 15 los códigos A1-A158 y R1 es un fragmento indicado por cualquiera de los códigos B1-B27:
- 3. Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, caracterizado porque el procedimiento comprende:d) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (I):en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, y R2 es NH2, según una cualquiera de las etapas alternativas:d.1) con un ácido o un haluro de acilo de fórmula (VI): RcCOZ (VI) en donde Rc es como se define en la reivindicación 1 y Z es un halógeno o un grupo -OH, para dar un compuesto de fórmula (I):5 en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6 y Rc es como se ha definido antes; o d.2) con un isocianato de fórmula (VII): RcNCO (VII) en donde Rc es como se ha definido antes, para dar un compuesto de fórmula (I):10 en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6 y Rc es como se ha definido antes; o d.3) con un haluro de sulfonilo de fórmula (VIII): RcSO2Z' (VIII) en donde Rc es como se ha definido antes y Z' es un halógeno, para dar un compuesto de fórmula (I):15 en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6 y Rc es como se ha definido antes; o h) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XI):en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, según una cualquiera de las etapas alternativas: h.1) con un ácido o éster borónico de fórmula (XII): R2'B(OZ"Z'")2 (XII) en donde R2' es Rd y Rd es como se define en la reivindicación 1, Z" y Z"' son H, alquilo o considerados junto con los átomos de oxígeno a lo que están unidos, pueden formar un heterociclo de 5 a 6 miembros opcionalmente sustituido, para dar un compuesto de fórmula (I):10 en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6 y R2' es como se ha definido antes; o h.2) con un alquino terminal de fórmula (XIII): RdC≡CH (XIII) en donde Rd es como se ha definido antes, para dar un compuesto de fórmula (I):15 en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6 y Rd es como se ha definido antes;opcionalmente separar el compuesto de fórmula (I) resultante en los isómeros individuales; convertir el compuesto de fórmula (I) resultante en un compuesto de fórmula (I) diferente, sustituyendo el grupo -ORa por un grupo diferente que representa R1, y/o en una sal farmacéuticamente aceptable.
- 4. Un procedimiento según la reivindicación 3, caracterizado porque la conversión opcional de un compuesto de 20 fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I), se lleva a cabo por una o más de las siguientes reacciones:m.1) hidrólisis ácida o básica de un compuesto de fórmula (I), en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -ORa y Ra es hidrógeno, o la sal correspondiente;m.2) transesterificación de un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, por reacciones con un compuesto de fórmula (XIV): Ra-OH (XIV) para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -ORa y Ra es un alquilo C1-C6 diferente; 5 m.3) aminolisis de un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6, por reacción con un compuesto de fórmula (XV): HNRaRb (XV) para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -NRaRb; m.4) esterificación de un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es un grupo -OH o su sal correspondiente, por 10 reacción con un compuesto de fórmula (XIV) como se ha definido antes, para dar el correspondiente compuesto defórmula (I) en donde R1 es -ORa; m.5) amidación de un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es un grupo -OH o su sal correspondiente, por reacción con un compuesto de fórmula (XV) como se ha definido antes, para dar el correspondiente compuesto de fórmula (I) en donde R1 es -NRaRb.15 5. Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, o una de sussales farmacéuticamente aceptables, cuyo procedimiento comprende: p) hidrolizar en condiciones ácidas o básicas el compuesto de fórmula (V) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1- C6;r) hacer reaccionar el derivado de ácido resultante con una resina formil-poliestirénica derivatizada de fórmula (XIX):20 (P)-CH2-NHRa (XIX) en donde (P) es la resina y Ra es como se define en la reivindicación 1; s) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (XX) resultante:en donde (P) y Ra son como se han descrito antes, con un agente de reducción adecuado tal como cloruro de cromo 25 (II), hidrogenosulfuro de tetrabutilamonio o cloruro de estaño (II);yt) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (XXI) resultante:en donde (P) y Ra son como se han descrito antes, como se describen en la reivindicación 3 en una cualquiera de 30 las etapas (d.1) y (d.2);u) escindir la resina en condiciones ácidas del compuesto de fórmula (XXII) resultante:para dar un compuesto de fórmula (I), en donde R2" es -NHCORc o -NHCONHRc, en donde Rc es como se define en la reivindicación 1, y R1 es -NHRa, en donde Ra es como se define en la reivindicación 1;5o v) hidrolizar en condiciones ácidas o básicas el compuesto de fórmula (XI) en donde R1 es -ORa y Ra es alquilo C1-C6;w) hacer reaccionar el derivado de ácido resultante con una resina formil-poliestirénica derivatizada de fórmula (XIX): (P)-CH2-NHRa (XIX) 10 en donde (P) es la resina y Ra es como se ha definido antes; z) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (XXIII) resultante:en donde (P) y Ra son como se han descrito antes, con un ácido o éster borónico de fórmula (XII): R2"'B(OZ"Z'")2 (XII) 15 en donde R2'" es Rd y Rd es un grupo además opcionalmente sustituido, seleccionado de alquilo C1-C6 lineal oramificado, cicloalquilo C3-C6 , cicloalquil-alquilo(C1-C6), heterociclilo, heterociclil-alquilo(C1-C6), arilo, aril-alquilo(C1- C6), heteroarilo o heteroaril-alquilo(C1-C6), y Z" y Z"' son como se definen en la reivindicación 3; x) escindir la resina en condiciones ácidas del compuesto de fórmula (XXVI) resultante:20 para dar un compuesto de fórmula (I), en donde R2'" es como se ha definido antes y R1 es -NHRa,en donde Ra es como se ha definido antes;opcionalmente separar el compuesto de fórmula (I) resultante en los isómeros individuales; convertir el compuesto de fórmula (I) resultante en un compuesto de fórmula (I) diferente y/o en una sal farmacéuticamente aceptable si se desea.
- 6. Una biblioteca de dos o más compuestos de fórmula (I):en la que:R1 es un grupo -NRaRb o -ORa y5 R2 es -NH2, -NHCORc, -NHCONHRc, -NHSO2Rc, -C=CRd o Rden donde Ra, Rb, Rc y Rd, iguales o diferentes, son cada uno independientemente hidrógeno o un grupo además opcionalmente sustituido, seleccionado de alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6 o alquinilo C2-C6 lineal o ramificado, cicloalquilo C3-C6, cicloalquil-alquilo(C1-C6), heterociclilo, heterociclil-alquilo(C1-C6), arilo, aril-alquilo(C1-C6), heteroarilo y heteroaril-alquilo(C1-C6), o Ra y Rb, considerados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos,10 pueden formar un heterociclilo o heteroarilo de 3 a 7 miembros opcionalmente sustituido, que contiene opcionalmente un heteroátomo o grupo heteroatómico adicional seleccionado de S, O, N o NH, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
- 7. Una biblioteca según la reivindicación 6, en donde el compuesto tiene la fórmula:15 en donde los fragmentos A y B son como se definen en la reivindicación 2, y en donde el compuesto es uno de los citados en la presente memoria a continuación:
- Entrada
- Compuesto Método de HPLC HPLC t.r. min. [M+H]+
- 1374
- A157-M-B65 isómero S 4 1,196 408,2
- 1375
- A157-M-B65 isómero R 4 1,224 408,2
- 1376
- A133-M-B61 isómero R 4 1,373 464,2
- 1377
- A127-M-B61 isómero R 4 1,332 414,2
- 1378
- A157-M-B161 isómero R 4 1,052 415,2
- 1379
- A158-M-B61 isómero R 4 1,238 432,2
- 1380
- A133-M-B61 isómero S 4 1,375 464,2
- 1381
- A127-M-B61 isómero S 4 1,363 414,2
- 1382
- A133-M-B62 isómero R 4 1,426 458,2
- 1383
- A127-M-B62 isómero R 4 1,092 408,2
- 1384
- A157-M-B62 isómero R 4 409,2 1,003
- 1385
- A158-M-B62 isómero R 4 1,109 426,2
- 1386
- A133-M-B62 isómero S 4 1,332 458,2
- 1387
- A127-M-B62 isómero S 4 1,121 408,2
- 1388
- A133-M-B63 Mezcla de diast. no resuelta 4 1,173 497,2
- 1389
- A127-M-B63 Mezcla de diast. no resuelta 4 1,02 447,2
- 1390
- A157-M-B63 Mezcla de diast. no resuelta 4 0,782 448,2
- 1391
- A158-M-B63 P26 Mezcla de diast. no resuelta. 4 1,031 465,2
- 1392
- A133-M-B64 isómero R 4 1,44 472,2
- 1393
- A127-M-B64 isómero R 4 1,148 422,2
- 1394
- A157-M-B64 isómero R 4 0,92 423,2
- 1395
- A158-M-B64 isómero S 4 1,331 472,2
- 1396
- A127-M-B64 isómero S 4 1,181 422,2
- 1397
- A133-M-B65 isómero S 4 1,571 457,2
- 1398
- A127-M-B65 isómero S 4 1,44 407,2
- 1399
- A158-M-B65 isómero S 4 1,451 425,2
-
- 8.
- Un método in vitro para inhibir la actividad de proteína quinasa que comprende poner en contacto la quinasa con una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1.
-
- 9.
- Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula
5 (I), como se define en la reivindicación 1, y al menos un excipiente, vehículo y/o diluyente farmacéuticamente aceptable. - 10. Un producto o kit que comprende un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1 o una composición farmacéutica del mismo como se define en la reivindicación 9, y uno o más agentes quimioterapéuticos, como un preparado combinado para uso simultáneo, separado o secuencial en la terapia anticáncer.10 11. Un compuesto de fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, como se define en la reivindicación 1, para usar como un medicamento.
- 12. Un compuesto de fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, como se define en la reivindicación 1, para usar en un método para tratar enfermedades causadas y/o asociadas con una actividad de proteína quinasa alterada.15 13. Un compuesto intermedio de fórmula (V)en donde R1 es como se define en la reivindicación 1. 14. Un compuesto intermedio de fórmula (XI)en donde R1 es como se define en la reivindicación 1.
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