JP2012502951A - ３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン誘導体 - Google Patents

Abstract

３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン化合物の４，７−二置換誘導体である化合物、またはこれらの薬学的に許容される塩、これらの調製方法およびこれらを含む医薬組成物が開示される。これらの化合物は、癌、ウイルス感染、ＨＩＶに感染した個体のエイズ発症の予防、細胞増殖障害、自己免疫および神経変性障害などのプロテインキナーゼ活性の変化によって引き起こされる、および／または、に伴う疾患の治療に有用である。また、本発明の化合物を固相合成条件下で調製する方法および複数のこれらの化合物を含む化学ライブラリーが開示される。

Description

本発明は、プロテインキナーゼの活性を調節する３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン化合物の特定の４，７−二置換誘導体に関する。したがって、本発明の化合物は、調節異常のプロテインキナーゼ活性により引き起こされる疾患を治療するのに有用である。本発明はまた、これらの化合物を調製する方法、これらのコンビナトリアルライブラリー、これらの化合物を含む医薬組成物、およびこれらの化合物を含む医薬組成物を使用する、疾患を治療する方法に関する。

プロテインキナーゼ（ＰＫ）の機能不全は、多数の疾患の特徴である。ヒト癌に関連する大部分の腫瘍遺伝子および癌原遺伝子は、ＰＫをコードする。ＰＫの強化された活性は、良性前立腺肥大症、家族性腺腫性ポリポーシス、神経線維腫症、乾癬、アテローム性動脈硬化に伴う血管平滑細胞増殖、肺線維症、関節炎、糸球体腎炎ならびに術後狭窄および再狭窄などの、多くの非悪性疾患にも関与している。

ＰＫはまた、炎症状態ならびにウイルスおよび寄生生物の増殖にも関与している。ＰＫはさらに、神経変性障害の病因および発症において主要な役割を果たす可能性がある。

ＰＫの機能不全および調節障害についての一般的な参照としては、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １９９９，３，４５９−４６５およびＣａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ２００８，２９，１０８７−１９１を参照されたい。

ＨＩＶによる感染症の予防および治療、ならびに、ＡＩＤＳの予防、発症の遅延および治療のための８−ヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン誘導体は、Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．、ＵＳＡの名称でＷＯ２００４／０４７７２５に開示されている。

国際公開第２００４／０４７７２５号

Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １９９９，３，４５９−４６５ Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ２００８，２９，１０８７−１９１

本発明者らは、下記に述べる式（Ｉ）の新規の化合物がキナーゼ阻害剤であり、したがって、抗癌剤として治療に有用であることを発見した。

したがって、本発明は、式（Ｉ）：

［式中、
Ｒ１は−ＮＲ^ａＲ^ｂまたは−ＯＲ^ａ基であり、
Ｒ２は、−ＮＨ_２、−ＮＨＣＯＲ^ｃ、−ＮＨＣＯＮＨＲ^ｃ、−ＮＨＳＯ_２Ｒ^ｃ、−Ｃ≡ＣＲ^ｄまたはＲ^ｄであり、
ここで、Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、同一でありまたは異なり、それぞれ独立して水素、または、場合によってさらに置換され、直鎖もしくは分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニルまたはＣ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、シクロアルキルＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルＣ_１−Ｃ_６アルキル、アリール、アリールＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルから選択される基である、
または、Ｒ^ａおよびＲ^ｂは、それらが結合されている窒素原子と一緒になって、Ｓ、Ｏ、ＮまたはＮＨから選択される１個の追加ヘテロ原子またはヘテロ原子基を場合によって含有する、場合によって置換された３から７員のヘテロシクリルまたはヘテロアリールを形成してよい。］
により表される４，７−二置換３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン化合物およびこの薬学的に許容される塩を提供することを第１の目的とする。

本発明は、また標準的合成変換法からなる方法によって調製される、式（Ｉ）により表される４，７−二置換３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン化合物を合成する方法を提供する。

本発明はまた、調節異常のプロテインキナーゼ活性、特にＰＬＫファミリー、ＡＢＬ、ＡＫＴ１、ＡＬＫ、ＡＵＲ１、ＡＵＲ２、ＢＲＫ、ＣＤＣ７／ＤＢＦ４、ＣＤＫ２／ＣＹＣＡ、ＣＨＫ１、ＣＫ２、ＥＥ２ＦＫ、ＥＧＦＲ１、ＥＲＫ２、ＦＡＫ、ＦＧＦＲ１、ＦＬＴ３、ＧＳＫ３ｂｅｔａ、ＩＧＦＲ１、ＩＫＫ２、ＩＲ、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＫＩＴ、ＬＣＫ、ＭＡＰＫＡＰＫ２、ＭＥＴ、ＭＰＳ１、ＭＳＴ４、ＮＥＫ６、ＮＩＭ１、Ｐ３８ａｌｐｈａ、ＰＡＫ４、ＰＤＧＦＲ、ＰＤＫ１、ＰＥＲＫ、ＰＩＭ１、ＰＩＭ２、ＰＩＭ３、ＰＫＡａｌｐｈａ、ＰＫＣｂｅｔａ、ＰＬＫ１、ＲＥＴ、ＳＵＬＵ１、ＳＹＫ、ＴＲＫＡ、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３またはＺＡＰ７０によって引き起こされる、および／または、に伴う疾患を治療する方法を提供する。

本発明の好ましい方法は、癌、ウイルス感染、ＨＩＶに感染した個体におけるエイズ発症の予防、細胞増殖性障害、自己免疫および神経変性障害からなる群から選択される調節異常のプロテインキナーゼ活性によって引き起こされる、および／または、に伴う疾患を治療することである。

本発明の別の好ましい方法は、膀胱、乳房、結腸、腎臓、肝臓、肺小細胞癌を含む肺、食道、胆嚢、卵巣、膵臓、胃、頸部、甲状腺、前立腺、および扁平上皮癌を含む皮膚などの癌腫；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞系リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞リンパ腫およびバーキットリンパ腫を含むリンパ系統の造血器腫瘍；急性および慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群ならびに前骨髄球性白血病を含む脊髄性の系統の造血器腫瘍；繊維肉腫および横紋筋肉腫を含む間充織起源の腫瘍；星状細胞腫神経芽細胞腫、神経膠腫および神経鞘腫を含む、中枢および末梢神経系の腫瘍；黒色腫、精上皮腫、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、角質黄色腫、甲状腺濾胞癌およびカポジ肉腫を含む他の腫瘍を含むが、これらに限定されない特定のタイプの癌を治療することである。

本発明の別の好ましい方法は、例えば、良性前立腺肥大、家族性腺腫性ポリポーシス、神経線維腫症、乾癬、アテローム性動脈硬化症に伴う血管平滑筋細胞増殖、肺線維症、関節炎、糸球体腎炎ならびに術後狭窄および再狭窄などの特定の細胞増殖性障害を治療することである。

本発明の化合物は、腫瘍血管新生および転移阻害ならびに移植臓器拒絶および宿主対移植片病の治療に役に立つことができる。

本発明は、抗癌療法において同時、個別または逐次的に使用するために放射線療法または化学療法レジメンと組み合わせる式（Ｉ）の化合物を含む治療の方法をさらに提供する。

さらに、本発明は、式（Ｉ）の化合物の有効量に前記プロテインキナーゼを接触させることを含むプロテインキナーゼ活性を阻害する方法を提供する。

本発明はまた、式（Ｉ）の１種もしくは複数の化合物、またはこの薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される添加剤、担体もしくは賦形剤を含む医薬組成物を提供する。

本発明はまた、公知の細胞増殖抑制剤または細胞毒性薬、抗生物質型薬剤、ＤＮＡ損傷剤または挿入剤、プラチン系薬剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、ホルモン剤、抗エストロゲン薬、抗アンドロゲンおよびアロマターゼ阻害薬などの抗ホルモン剤、免疫学的薬剤、インターフェロン型薬剤、シクロオキシゲナーゼ阻害剤（例えば、ＣＯＸ−２阻害剤）、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、他のキナーゼ阻害剤、抗成長因子受容体剤、抗ＨＥＲ剤、抗ＥＧＦＲ剤、抗血管新生剤（例えば、血管新生阻害剤）、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ｒａｓ−ｒａｆシグナル伝達経路阻害剤、細胞周期阻害剤、他のｃｄｋ阻害剤、チューブリン結合剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、キネシン阻害剤、治療用モノクローナル抗体、ｍＴＯＲ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤ならびに低酸素応答の阻害剤などと、抗癌療法で同時、個別または連続的な使用と組み合わせる、式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物もさらに提供する。

さらに、本発明は、式（Ｉ）の化合物もしくは上記で定義されたこの薬学的に許容される塩、または抗癌療法において同時、個別もしくは逐次的に使用する合剤として、その医薬組成物および１種または複数の化学療法剤を含む製品またはキットを提供する。

さらに別の態様において、本発明は、薬物として使用するための式（Ｉ）の化合物、または上記で定義されたこの薬学的に許容される塩を提供する。

さらに、抗腫瘍活性を有する薬物の製造において、上記で定義されたように、本発明は式（Ｉ）の化合物またはこの薬学的に許容される塩の使用を提供する。

最終的に、本発明は、癌の治療法において使用する、式（Ｉ）の化合物、または上記で定義されたこの薬学的に許容される塩を提供する。

別段の定めがない限り、式（Ｉ）の化合物自体ならびにこれらの任意の医薬組成物またはこれらを含む治療の任意の治療法に言及する場合、本発明は、本発明の化合物の水和物、溶媒和物、錯体、代謝物質、プロドラッグ、担体、Ｎ酸化物および薬学的に許容される塩をすべて含む。

式（Ｉ）の化合物の代謝物質は、例えばそれを必要とする哺乳動物への投与で、式（Ｉ）の該化合物がインビボで変換される任意の化合物である。典型的には、ただし限定的な例ではなく、式（Ｉ）の化合物の投与で、該誘導体は、例えば、容易に排出されるヒドロキシル化誘導体のようなより可溶性の誘導体を含めて、種々の化合物に変換され得る。したがって、こうして生じる代謝経路に応じて、これらのヒドロキシル化誘導体のいずれもが式（Ｉ）の化合物の代謝物質とみなし得る。

プロドラッグは、式（Ｉ）の活性親薬物をインビボで放出する任意の共有結合化合物である。

Ｎ酸化物は、窒素および酸素が供与結合を介して結合している式（Ｉ）の化合物である。

キラル異性体のすべての形態またはエナンチオマーおよびジアステレオマーを含む異性体の他の形態は、本明細書に包含されるものとする。キラル中心を含む化合物は、ラセミ混合物、鏡像異性的に濃縮された混合物として使用することができ、またはラセミ混合物は周知の技術を用いて分離することができ、個々の鏡像異性体は単独で使用することができる。

化合物がケト−エノール互変異性体などの互変異性体の形態で存在することができる場合、各互変異性型は、平衡状態で存在しても、または一方の形態が主として存在しても、本発明に包含されるものとする。

本明細書において、特に断らない限り、「直鎖または分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキル」という用語によって、本発明者らは、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどの基のいずれかを意図する。

「直鎖または分枝状のＣ_２−Ｃ_６アルケニル」または「直鎖または分枝状のＣ_２−Ｃ_６アルキニル」という用語によって、本発明者らは、例えばビニル、アリル、１−プロペニル、イソプロペニル、１−、２−または３−ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、エチニル、１−または２−プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニルなどを含む、２から６個の炭素原子を有する不飽和のアルケニルまたはアルキニル基のいずれかを意図する。「Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル」という用語によって、本発明者らは、別段の定めがない限り、１個または複数の二重結合を含み得るが、完全共役π電子系を持たない、３から６員の炭素単環式環を意図する。シクロアルキル基の例としては、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキセンおよびシクロヘキサジエンが挙げられるが、これらに限定されない。

「ヘテロシクリル」という用語によって、本発明者らは、１個または複数の炭素原子が窒素、酸素、硫黄などのヘテロ原子によって置き換えられた、３から７員の飽和または部分不飽和炭素環を意図する。ヘテロシクリル基の非限定的例は、例えば、ピラン、ピロリジン、ピロリン、イミダゾリン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、ピラゾリン、チアゾリン、チアゾリジン、ジヒドロフラン、テトラヒドロフラン、１，３−ジオキソラン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリンなどである。

「アリール」という用語によって、本発明者らは、１から４環系を有する、単環、二環または多環炭素環式炭化水素を意図し、場合によってさらに縮合されまたは単結合によって連結されている。ただし、炭素環式環の少なくとも１個は「芳香族」であり、「芳香族」という用語は完全に共役しているπ電子結合系を指す。そのようなアリール基の非限定的な例は、フェニル、α−もしくはβ−ナフチルまたはビフェニル基である。

「ヘテロアリール」という用語によって、本発明者らは、芳香族複素環式環、典型的には、Ｎ、ＯまたはＳの中から選択される１から３個のヘテロ原子を有する、５から７員の複素環を意図し、ヘテロアリール環は、場合によって、さらに縮合され、または芳香族および非芳香族炭素環式ならびに複素環式環に結合していてもよい。そのようなヘテロアリール基の非限定的な例としては、例えば、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、フェニルピロリル、フリル、フェニルフリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チエニル、ベンゾチエニル、イソインドリニル、ベンゾイミダゾリル、キノリニル、イソキノリニル、１，２，３−トリアゾリル、１−フェニル−１，２，３−トリアゾリル、２，３−ジヒドロインドリル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、２，３−ジヒドロベンゾチオフェニル；ベンゾピラニル、２，３−ジヒドロベンゾオキサジニル、２，３−ジヒドロキノキサリニルなどを挙げることができる。

Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄに対して与えられる意味によれば、上記の基のいずれもが、その空位のいずれかにおいて、以下から選択される１個または複数の基、例えば、１から６個の基で、場合によってさらに置換されていてもよい：ハロゲン、ニトロ、オキソ基（＝Ｏ）、カルボキシ、シアノ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、多フッ素化アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール；アミノ基およびその誘導体、例えば、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ウレイド、アルキルウレイドまたはアリールウレイドなど；カルボニルアミノ基およびその誘導体、例えば、ホルミルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルケニルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アルコキシカルボニルアミノなど；ヒドロキシ基およびその誘導体、例えば、アルコキシ、多フッ素化アルコキシ、アリールオキシ、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、シクロアルケニルオキシまたはアルキリデンアミノオキシ；カルボニル基およびその誘導体、例えば、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルなど；硫化誘導体、例えば、アルキルチオ、アリールチオ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、アリールスルホニルオキシ、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニルまたはジアルキルアミノスルホニルなど。

さらに、適切な場合は常に、上記の各置換基は１個または複数の前述の基でさらに置換されていてもよい。

本明細書において、別段の定めがない限り、本発明者らは、「シアノ」という用語によって−ＣＮ残基を意図する。

本発明者らは、「ニトロ」という用語によって−ＮＯ_２基を意図する。

本発明者らは、「ハロゲン」という用語によってフッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を意図する。

本発明者らは、「多フッ素化アルキルまたはアルコキシ」という用語によって、複数の水素原子がフッ素原子によって置き換えられた、例えば、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、２，２，２−トリフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエトキシ、１，２−ジフルオロエチル、１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロピル−２−イルなど、上記で定義された直鎖もしくは分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキルまたはアルコキシ基を意図する。

上記のすべてから、例えば、シクロアルキルアルキル、アリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アルキルカルボニルオキシなど、その名称が複合名称として識別されている任意の基は、それが由来する部分によって従来解釈されてきたように意図されなければならないことは当業者にとって明らかである。したがって、例えば、ヘテロシクリルアルキルおよびシクロアルキルアルキルという用語は、上記で定義されたように、複素環またはシクロアルキル基で、それぞれ、さらに置換された直鎖または分枝状のアルキル基を表す。

「薬学的に許容される塩」という用語は、アルカリ金属塩を形成し、また遊離の酸または遊離の塩基の付加塩を形成するために一般に使用される塩を包含する。塩が薬学的に許容されるならば、その性質は重要ではない。本発明の化合物の適切な薬学的に許容される酸付加塩は、有機酸からまたは無機酸から調製することができる。そのような無機酸の例は、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素、硝酸、炭酸、硫酸およびリン酸である。適切な有機酸は、有機酸の脂肪族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族、複素環、カルボン酸およびスルホン酸のクラスから選択することができ、これらの例としては、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、メシル酸、サリチル酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボン酸（パモ酸）、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、トルエンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、スルファニル酸、ステアリン酸、シクロヘキシルアミノスルホン酸、アルゲン酸（ａｌｇｅｎｉｃ）、ヒドロキシ酪酸、ガラクタル酸およびガラクツロン酸を挙げることができる。本発明の化合物の適切な薬学的に許容される塩基付加塩は、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、および亜鉛から得られる金属塩、またはＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）およびプロカインから得られる有機塩を含む。これらの塩はすべて、本発明の対応する化合物から従来の手段により、例えば、適切な酸または塩基とこれらを反応させることにより調製することができる。

式（Ｉ）の好ましいクラスの化合物は、
Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂ基であり、Ｒ^ａおよびＲ^ｂがともに水素原子である、またはこれらの一方が水素原子であり、Ｒ^ａまたはＲ^ｂの他方は直鎖もしくは分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキルまたはＣ_２−Ｃ_６アルケニル基である、または、場合によって、置換されたアリールもしくはアリールＣ_１−Ｃ_６アルキル基である化合物である。

式（Ｉ）の別の好ましいクラスの化合物は、
Ｒ２が、Ｒ^ｃが前に定義された−ＮＨＣＯＲ^ｃ基である化合物である。

式（Ｉ）のさらに好ましいクラスの化合物は、
Ｒ２が、Ｒ^ｃが前に定義された−ＮＨＣＯＮＨＲ^ｃ基である化合物である。

式（Ｉ）のより好ましいクラスの化合物は、
Ｒ２が、Ｒ^ｃが前に定義された−ＮＨＳＯ_２Ｒ^ｃ基である化合物である。

場合によって薬学的に許容される塩の形態の、本発明の式（Ｉ）の任意の具体的な化合物について参照するには、実験の項を参照されたい。

本発明は、また上記で定義された式（Ｉ）の化合物の調製の方法を提供し、この方法が、
ａ）酸性条件下で式（ＩＩ）：

の化合物をニトロ化すること、
ｂ）結果として得られる式（ＩＩＩ）：

の化合物を式（ＩＶ）：

［式中、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルである］のアンモニウム塩と反応させること
結果として得られる式（Ｖ）：

［式中、Ｒ１はＯＲ^ａを表し、Ｒ^ａは上記で定義された通りである。］の化合物を、−ＯＲ^ａ基を異なるＲ１基によって置き換えることにより、Ｒ１が上記で定義された式（Ｖ）の別の化合物に、場合によって変換すること、
ｃ）式（Ｖ）の前記化合物を還元し式（Ｉ）：

［式中、Ｒ１は上記で定義された通りであり、Ｒ２はＮＨ_２である。］の化合物またはその塩を得ること、
結果として得られる式（Ｉ）の化合物を、場合によって単一異性体に分離すること、
結果として得られる式（Ｉ）の化合物を、アミノ部分を誘導体化することによって、および／もしくはＲ１が表す異なる基によって−ＯＲ^ａ基を置き換えることによって、式（Ｉ）の異なる化合物に変換すること、ならびに／または、所望の場合、薬学的に許容される塩にこれを変換することを含むことを特徴とする。

本発明は、上記で定義された式（Ｉ）の化合物の調製の方法をさらに提供し、下記の反応：
ｄ）Ｒ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、またＲ２がＮＨ_２である式（Ｉ）の化合物を、択一的段階：
ｄ．１）式（ＶＩ）：
Ｒ^ｃＣＯＺ（ＶＩ）
［式中、Ｒ^ｃは上記で定義された通りであり、Ｚはハロゲンまたは−ＯＨ基である。］の酸またはハロゲン化アシルと反応させて、式（Ｉ）：

［式中、Ｒ１は−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、またＲ^ｃは上記で定義された通りである。］の化合物を得る反応；または
ｄ．２）式（ＶＩＩ）：
Ｒ^ｃＮＣＯ（ＶＩＩ）
［式中、Ｒ^ｃが上記で定義された通りである。］のイソシアナートと反応させて、式（Ｉ）：

［式中、Ｒ１は−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、またＲ^ｃは上記で定義された通りである。］の化合物を得る反応；または
ｄ．３）式（ＶＩＩＩ）：
Ｒ^ｃＳＯ_２Ｚ’（ＶＩＩＩ）
［式中、Ｒ^ｃは上記で定義された通りであり、Ｚ’はハロゲンである。］のハロゲン化スルホニルと反応させて、式（Ｉ）：

［式中、Ｒ１は−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、またＲ^ｃは上記で定義された通りである。］の化合物を得る反応のいずれか１つ；
結果として得られる式（Ｉ）の化合物を、場合によって単一異性体に分離すること；
Ｒ１が表す異なる基によって−ＯＲ^ａ基を置き換えることによって、結果として得られる式（Ｉ）の化合物を、式（Ｉ）の異なる化合物に、および／または、所望の場合には、薬学的に許容される塩に変換すること
の１つまたは複数によって、式（Ｉ）の化合物が式（Ｉ）の別の化合物に変換されることを特徴とする。

本発明はまた、式（Ｘｌ）の化合物の調製の別の方法を提供し、この方法が、
ｅ）式（ＩＩ）：

の化合物をヨウ素化すること：
ｆ）結果として得られる式（ＩＸ）：

の化合物を式（ＩＶ）：

［式中、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルである。］のアンモニウム塩と反応させること；
ｇ）塩基性条件下で式（Ｘ）：

［式中、Ｒ^ａは上記で定義された通りである。］の結果として得られる化合物を環化し、式（ＸＩ）：

［式中、Ｒ^ａは上記で定義された通りである。］の結果として得られる化合物を得ること、
ヨードをＲ２が表す異なる基によって置き換えることにより、それを式（ＸＩ）の異なる化合物に変換すること、
これを単一異性体に、場合によって分離すること、
−ＯＲ^ａ基をＲ１が表す異なる基によって置き換えることによって、これを式（Ｘｌ）の異なる化合物に、および／または、所望の場合には、薬学的に許容される塩に変換することを含むことを特徴とする。

本発明は、上記で定義された式（Ｉ）の化合物の調製の方法をさらに提供し、方法が、
ｈ）Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（ＸＩ）の化合物を、択一的段階：
ｈ．１）式（ＸＩＩ）：
Ｒ２’Ｂ（ＯＺ’’Ｚ’’’）_２（ＸＩＩ）
［式中、Ｒ２’はＲ^ｄであり、Ｒ^ｄは上記で定義された通りであり、Ｚ’’とＺ’’’は、Ｈ、アルキルである、または、これらが結合している酸素原子と一緒になって、場合によって置換された５から６員の複素環を形成してもよい、のいずれかである。］のボロン酸またはエステルと反応させて、式（Ｉ）：

［式中、Ｒ１は−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、またＲ２’は上記で定義された通りである。］の化合物を得ること；または
ｈ．２）式（ＸＩＩＩ）：
Ｒ^ｄＣ≡ＣＨ（ＸＩＩＩ）
［式中、Ｒ^ｄは上に定義された通りである。］の末端アルキンと反応させて、式（Ｉ）：

［式中、Ｒ１は−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、また、Ｒ^ｄは上記で定義された通りである。］の化合物を得ることのいずれか１つ；
結果として得られる式（Ｉ）の化合物を、場合によって単一異性体に分離すること；
Ｒ１が表す異なる基によって−ＯＲ^ａ基を置き換えることによって、結果として得られる式（Ｉ）の化合物を、式（Ｉ）の異なる化合物に、および／または、所望の場合には、薬学的に許容される塩に変換することを含むことを特徴とする。

本発明は、上記で定義された式（Ｉ）の化合物の調製の方法をさらに提供し、下記の反応：
ｍ．１）Ｒ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｉ）の化合物を酸性または塩基性加水分解し、Ｒ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａが水素または対応する塩である式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応；
ｍ．２）式（ＸＩＶ）：
Ｒ^ａ−ＯＨ（ＸＩＶ）
の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｉ）の化合物をエステル交換し、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが異なるＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応；
ｍ．３）式（ＸＶ）：
ＨＮＲ^ａＲ^ｂ（ＸＶ）
の化合物との反応によって、Ｒ_１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｉ）の化合物をアミノ分解し、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応；
ｍ．４）上記で定義された式（ＸＩＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＨ基であるまたはその対応する塩である式（Ｉ）の化合物をエステル化し、Ｒ１が−ＯＲ^ａである式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応；
ｍ．５）上記で定義された式（ＸＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＨ基であるまたはその対応する塩である式（Ｉ）の化合物のアミド化し、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応の１種または複数によって、式（Ｉ）の化合物が式（Ｉ）の別の化合物に変換されることを特徴とする。

本発明は、上記で定義された式（Ｉ）の化合物の調製の方法をさらに提供し、下記の反応：
ｎ．１）Ｒ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｖ）の化合物を酸性または塩基性加水分解し、Ｒ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａが水素または対応する塩である式（Ｖ）の化合物を得る反応；
ｎ．２）上記で定義された式（ＸＩＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｖ）の化合物のエステル交換し、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが異なるＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｖ）の化合物を得る反応；
ｎ．３）上記で定義された式（ＸＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−０Ｒ^ａであり、Ｒ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｖ）の化合物をアミド化し、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（Ｖ）の化合物を得る反応；
ｎ．４）上記で定義された式（ＸＶＩ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａ基でありＲ^ａが水素または対応する塩である式（Ｖ）の化合物をエステル化し、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが水素とは異なる式（Ｖ）の化合物を得る反応；
ｎ．５）上に定義された式（ＸＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａが水素である式（Ｖ）の化合物をアミド化し、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（Ｖ）の化合物を得る反応の１種または複数によって、上記で定義された式（Ｖ）の化合物が式（Ｖ）の別の化合物に変換されることを特徴とする。

本発明は、上記で定義された式（Ｉ）の化合物の調製の方法をさらに提供し、下記の反応：
ｏ．１）Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（ＸＩ）の化合物を酸性または塩基性加水分解し、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが水素または対応する塩である式（ＸＩ）の化合物を得る反応；
ｏ．２）上記で定義された式（ＸＩＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（ＸＩ）の化合物のエステル交換し、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが異なるＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（ＸＩ）の化合物を得る反応；
ｏ．３）上記で定義された式（ＸＩ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（ＸＶ）の化合物をアミノ分解し、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（ＸＩ）の化合物を得る反応；
ｏ．４）上記で定義された式（ＸＶＩ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａ基でありＲ^ａが水素または対応する塩である式（ＸＩ）の化合物をエステル化し、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが水素とは異なる式（ＸＩ）の化合物を得る反応；
ｏ．５）上記で定義された式（ＸＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが水素である式（ＸＩ）の化合物をアミド化し、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（ＸＩ）の化合物を得る反応の１種または複数によって、上記で定義された式（ＸＩ）の化合物が式（ＸＩ）の別の化合物に変換されることを特徴とする。

上記のすべてから、すべての変形を包括する上記方法に従って調製される、式（Ｉ）、（Ｖ）または（Ｘｌ）の化合物が異性体の混合物として得られる場合、従来法に従ってこれらを式（Ｉ）の単一異性体に分離することが本発明の範囲内であることは、当業者にとって明らかである。

同様に、当業界で周知の手順によって、式（Ｉ）の化合物をこの薬学的に許容される塩に変換すること、または、代替として、対応する塩の遊離化合物（Ｉ）に変換することは、本発明の範囲内である。

すべて本発明の範囲内であると意図される式（Ｉ）の化合物を、何らかの変形方法に従って調製する場合、望まない副反応を起こす恐れのある、出発物質、試薬またはその中間体内の場合による官能基は、従来の技術に従って適切に保護する必要がある。

本発明の方法目的（ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｂｊｅｃｔ）の出発物質は、いかなる可能な変形をも含めて、また、いかなるその反応体も、公知の化合物であり、市販されていなければ、それ自体、周知の方法によって調製することができる。

例えば、式（ＩＩ）の化合物は市販されている。

式（ＩＶ）の化合物は、購入するまたは周知の方法に従って調製することができる、対応する４−ブロモクロトン酸エステルから出発して調製される。

例えば、４−アミノクロトン酸エチルは、
ｉ）エチル−４−ブロモクロトン酸エチル（ＸＶＩ）：

を市販のジホルミルイミドナトリウム塩（ＸＶＩＩ）：

と反応させ
ｌ）結果として得られる式（ＸＶＩＩＩ）：

の化合物を酸性条件で加水分解して調製され、Ｒ^ａがエチルである式（ＩＶ）の化合物を得る。

式（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）、（ＸＩＶ）および（ＸＶ）の化合物は公知である、または公知の方法によって容易に得られる。一般的参考文献としては以下を参照されたい：Ｓｍｉｔｈ，Ｍｉｃｈａｅｌ−Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍｉｃｈａｅｌ Ｂ．Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｊｅｒｒｙ Ｍａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （ＮＹ），２００１．
式（Ｖ）：

［式中、Ｒ１は上記で定義された通りである。］の中間化合物は新規であり、したがって、本発明のもう１つの目的を表す。

式（ＸＩ）：

［式中、Ｒ１は上記で定義された通りである。］の中間化合物は新規であり、したがって、本発明のもう１つの目的を表す。

本方法の段階（ａ）によると、酸性条件下での式（ＩＩ）の化合物のニトロ化は、従来法に従って様々な方法で行うことができる。好ましくは、反応は、硝酸および無水酢酸の存在下で、−４０℃から室温で、６時間から一晩行う。

本方法の段階（ｂ）によると、式（Ｖ）の対応するアミド誘導体の中への式（ＩＩＩ）の化合物の変換は、対応するα，α，α−トリクロロケトンからアミド誘導体を得るための従来法による様々な方法で行うことができる。好ましくは、その反応は、溶媒としてジクロロメタンを使用して、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下で式（ＩＶ）のアンモニウム塩の反応により行う。

方法の段階（ｃ）によると、式（Ｉ）の化合物を得る式（Ｖ）の化合物のニトロ基の還元は、ニトロ基を対応するアミノ誘導体に還元する従来法による様々な方法で行うことができる。好ましくは、この反応は、炭素上パラジウムの存在下で、水素雰囲気下、エタノールおよび塩酸中で室温で６から８時間行う。

段階（ｄ．１）から（ｄ．３）のいずれか１つによると、対応するアミンから出発する官能化アミノ誘導体の調製は、従来法による様々な方法で行うことができる。

好ましくは、本方法の段階（ｄ．１）および（ｄ．３）によると、式（Ｉ）の化合物は、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどの適切な溶媒に溶解し、これにトリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンまたは炭酸ナトリウムなどの適切な塩基を添加する。次いで、一般式（ＶＩ）または（ＶＩＩＩ）の化合物を添加し、この混合物を約２時間から約１５時間、約２０℃から約８０℃の温度で撹拌する。ジメチルアミノピリジンなどの適切な触媒を場合によって使用してもよい。

好ましくは、本方法の段階（ｄ．２）によると、塩基を必要としなくてもよいという点を除いて、反応条件は、段階（ｄ．１）および（ｄ．３）についての上記報告と同じである。次いで、一般式（ＶＩＩ）の化合物を添加し、混合物を段階（ｄ．１）および（ｄ．３）についての上記報告のように撹拌する。

本方法の段階（ｅ）によると、式（ＩＩ）の化合物のヨウ素化は、従来法による様々な方法で行うことができる。好ましくは、この反応は、ヨウ素およびトリフルオロ酢酸銀の存在下で、中性条件で０℃から１８℃で、５時間から一晩行う。

本方法の段階（ｆ）によると、対応する式（Ｘ）のアミド誘導体への式（ＩＸ）の化合物の変換は、対応するα，α，α−トリクロロケトンからアミド誘導体を得るための従来法による様々な方法で行うことができる。好ましくは、段階（ｂ）で記載されるように、この反応を行う。

本方法の段階（ｇ）によると、対応する式（ＸＩａ）の誘導体への式（Ｘ）の化合物の環化は、従来法による様々な方法で行うことができる。好ましくは、その反応は、ジアザ（１，３）ビシクロ［５．４．０］ウンデカンなどの塩基および溶媒としてアセトニトリルを使用して行う。

段階（ｈ．１）と（ｈ．２）のいずれか１つによると、式（Ｉ）の化合物への式（ＸＩａ）の化合物の変換は、従来法による様々な方法で行うことができる。

好ましくは、段階（ｈ．１）の反応は、Ｐｄ触媒および炭酸ナトリウムまたは炭酸セシウムなどの塩基の存在下で、ジメトキシエタンと水などの混合溶媒中、室温から８０℃の温度で変化させ、４時間から一晩式（ＸＩＩ）の有機ボロン酸誘導体および式（ＸＩａ）の化合物の間のＳｕｚｕｋｉカップリングによって行い、対応する式（Ｉ）の化合物を得る。

好ましくは、段階（ｈ．２）の反応は、Ｐｄ触媒、トリエチルアミンなどの塩基および銅（Ｉ）ヨウ化物などの添加物の存在下で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを溶媒として使用し、室温で、４時間から一晩式（ＸＩＩＩ）のアルキン誘導体および式（ＸＩａ）の化合物の間のＳｏｎｏｇａｓｈｉｒａカップリングによって行い、対応する式（Ｉ）の化合物を得る。

本方法の段階（ｉ）による、式（ＸＶＩＩＩ）の生成物を得る、式（ＸＶＩＩ）のジホルミルイミドナトリウム塩との式（ＸＶＩ）の４−ブロモクロトン酸エチルの置換反応は、１０時間から一晩還流アセトニトリル中で行う。

本方法の段階（ｌ）による、式（ＩＶ）の生成物を得る式（ＸＶＩＩＩ）の化合物の酸性加水分解は、エタノール−トリフルオロ酢酸の還流混合物中で８時間から一晩行う。

段階（ｍ．１）から（ｍ．５）のいずれか１つによると、式（Ｉ）の化合物の式（Ｉ）の別の化合物への変換は、従来法による様々な方法で行うことができる。

好ましくは、本方法の段階（ｍ．１）によると、Ｒ１は−ＯＣＨ_２ＣＨ_３である式（Ｉ）の化合物を加水分解して、Ｒ１が−ＯＨである式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応は、酸性または塩基性条件下で行う。好ましくは、段階（ａ）に記載されたように、この反応を行う。用いる作業条件に応じて、Ｒ１が−ＯＨである式（Ｉ）の化合物を、酸の形態または代替として塩として得ることができる。

好ましくは、本方法の段階（ｍ．２）によると、Ｒ１が−ＯＣＨ_２ＣＨ_３である式（Ｉ）の化合物をエステル交換し、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがエチルと異なるアルキルである式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応は、式（ＸＶ）の化合物それ自体またはジオキサンなどの適切な溶媒中で、還流温度で、場合によって、ジブチリン（ｄｉｂｕｔｙｌｉｎ）酸化物または例えばチタン（ＩＶ）エトキシド、チタン（ＩＶ）イソプロポキシドなどのチタンアルコキシドなどの適切な金属系触媒の存在下で、式（ＸＶ）の化合物と反応させることにより行う。

好ましくは、本方法の段階（ｍ．３）によると、Ｒ１が−ＯＣＨ_２ＣＨ_３である式（Ｉ）の化合物をアミノ分解し、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応は、ジオキサンまたはジクロロメタンなどの適切な溶媒中で、場合によってトリメチルアルミニウムなどの適切な金属系触媒の存在下で行う。

好ましくは、本方法の段階（ｍ．４）によると、Ｒ１が基−ＯＨである式（Ｉ）の化合物をエステル化し、Ｒ１が−ＯＲ^ａである式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応は、適切な縮合剤、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＤＨＢＴ）、Ｏ−ベンゾトリアゾリルテトラメチルイソウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯＰ）、または２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）の存在下、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）またはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）などの適切な溶媒中で行う。

好ましくは、本方法の段階（ｍ．５）によると、Ｒ１が−ＯＨ基である式（Ｉ）の化合物をアミド化して、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応は、対応する酸からアミド誘導体を得るための従来法による様々な方法で行うことができる。好ましくは、この反応は、塩化チオニル、塩化オキサリルと、または代替として適切な縮合剤、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＢＴＯＨ）、Ｏ−ベンゾトリアゾリルテトラメチルイソウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）もしくはベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯＰ）の存在下で、ジクロロメタンおよび／またはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドもしくはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドなどの適切な溶媒中で、式（Ｉ）の化合物のカルボン酸官能基を活性化した後、式（ＸＶ）の化合物と反応させることにより行う。

段階（ｎ．１）から（ｎ．５）のいずれか１つによると、式（Ｖ）の化合物の式（Ｖ）の別の化合物への変換は、従来法による様々な方法で行うことができる。

好ましくは、この変換は段階（ｍ．１）から（ｍ．５）で記載されたように行う。

段階（ｏ．１）から（ｏｎ．５）のいずれか１つによると、式（ＸＩ）の化合物の式（ＸＩ）の別の化合物への変換は、従来法による様々な方法で行うことができる。

好ましくは、この変換は段階（ｍ．１）から（ｍ．５）で記載された通りに行う。

上記に加えて、式（Ｉ）の化合物は、広く当業界で知られているコンビナトリアルケミストリー技術に従って、連続的に中間体間の前述の反応を達成することにより、また固相合成（ＳＰＳ）条件下で作業することにより有利に調製することができる。

例としては、上記方法の段階（ｂ）において得られる式（Ｖａ）の中間体のカルボキシエステル誘導体は、先ず、従来法に従って加水分解により遊離カルボン酸誘導体に変換し、次いで、例えば、カルボキサミド基の形成によってポリマー樹脂上に容易に支持することができる。

このようにして支持された中間体を、本方法の残りの段階に従って、続いて反応させてもよい。

上記の合成経路は以下のように要約することができる：

［式中、樹脂は、例えば、Ｗａｎｇ ｒｅｓｉｎ、Ｔｒｉｔｙｌ ｒｅｓｉｎ、Ｃｌ−ｔｒｉｔｙｌ ｒｅｓｉｎ、Ｒｉｎｋ ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ、Ｔｅｎｔａｇｅｌ ＯＨ ｒｅｓｉｎおよびその誘導体を含む市販のポリスチレン樹脂であり、Ｒ２’’およびＲ^ａは上記で定義された通りである。］

上記の反応のいずれも前に述べたように作業することにより、公知の方法に従って行い、上に述べた式（Ｉ）の化合物を得ることができる。

本発明の好ましい実施形態によると、ポリスチレン樹脂は、市販のホルミルポリスチレン樹脂、例えば４−（４−ホルミル−３−メトキシフェノキシ）ブチリルＡＭ樹脂を、例えばトリアセトキシホウ水素化ナトリウムおよびその誘導体の存在下、還元条件下で適切なアミノ誘導体と反応させることにより得ることができる誘導体化ホルミルポリスチレン樹脂であり、本質的に下記の通りである。

この反応は、テトラヒドロフランなどの適切な溶媒中で酢酸の存在下で行うことができる。

このようにして得られるポリマー支持アミノ誘導体、特に上記誘導体化ホルミルポリスチレン樹脂に属するものは、広く当業界で知られている。

例えば、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９７），３８，７１５１−７１５４；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９９８），１２０，５４４１；およびＣｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．（１９９９），５，２７８７．に報告されているように、一般に、Ａｃｉｄ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ＭｅｔｈｏｘｙＢｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅ ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ ｒｅｓｉｎｓ（ＡＭＥＢＡ ｒｅｓｉｎ）としても知られるホルミルポリスチレン樹脂に装入されたアミンは、ＴＭＯＦ／ＤＣＥとＮａＢＨ（０Ａｃ）_３またはＡｃＯＨ／ＤＭＦとＮａＣＮＢＨ_３の中で過剰アミンの存在下で、標準的還元アミノ化により調製する。

したがって、本発明のさらなる目的は、
ｐ）酸性または塩基性条件下でＲ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｖ）の化合物を、加水分解する反応；
ｒ）結果として得られる酸誘導体の、式（ＸＩＸ）：
（Ｐ）−ＣＨ_２−ＮＨＲ^ａ（ＸＩＸ）
［式中、（Ｐ）は樹脂でありＲ^ａは上記で定義された通りである。］の誘導体化ホルミルポリスチレン樹脂との反応；
ｓ）結果として得られる式（ＸＸ）：

［式中、（Ｐ）およびＲ^ａは上に記載された通りである。］の化合物の、塩化クロム（ＩＩ）、硫化水素テトラブチルアンモニウムまたは塩化スズ（ＩＩ）などの適切な還元剤との反応；
および、
ｔ）結果として得られる式（ＸＸＩ）：

［式中、（Ｐ）およびＲ^ａは上に記載された通りである。］の化合物の、段階（ｄ．１）または（ｄ．２）のいずれか１つに記載された反応；
ｕ）酸性条件下で結果として得られる式（ＸＸＩＩ）：

の化合物から樹脂を開裂し、Ｒ２’’が−ＮＨＣＯＲ^ｃまたは−ＮＨＣＯＮＨＲ^ｃであり、Ｒ^ｃが上記で定義された通りであり、Ｒ１が−ＮＨＲ^ａであり、Ｒ^ａが上記で定義された通りである式（Ｉ）の化合物を得る反応；
結果として得られる式（Ｉ）の化合物を単一異性体に場合によって分離すること；
結果として得られる式（Ｉ）の化合物を、式（Ｉ）の異なる化合物に、および／または、所望の場合には、薬学的に許容される塩に変換することを含む、式（Ｉ）の化合物およびこの薬学的に許容される塩を調製する方法である。

本方法の段階（ｐ）によると、式（Ｖａ）の化合物を加水分解し、Ｒ１が−ＯＨである式（Ｖ）の対応する化合物を得る反応は、段階（ｍ．１）に記載されたように行う。

本方法の段階（ｒ）によると、ポリスチレン樹脂との反応は、適切な溶媒（例えばＤＭＦ）中で、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）および適切な縮合剤、例えばベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯＰ）、Ｏ−ベンゾトリアゾリルテトラメチルイソウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）などの存在下で行う。

本方法の段階（ｓ）によると、式（ＸＸ）の支持化合物を還元し、対応するアミノ誘導体を得る。この反応は、室温で４から２４時間、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で塩化スズ（ＩＩ）の存在下で行う。

段階（ｔ）によると、（ｄ．１）から（ｄ．２）の段階のいずれか１つに記載されたように、式（ＸＸＩ）の支持化合物は場合によってさらに反応させ、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン環の４位に官能基を有する様々な化合物を得る。

段階（ｕ）によると、樹脂の開裂は、酸性条件下で、例えば塩酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸（ｐ−ｔｏｌｕｅｎｓｕｌｆｏｎｉｃ）などの適切な酸の存在下で行う。好ましくは、この反応はトリフルオロ酢酸を使用して溶媒としてジクロロメタン中で行う。

別の例として、上記方法の段階（ｇ）において得られる式（ＸＩａ）の中間体カルボン酸エステル誘導体を、先ず従来法に従って行った加水分解によって遊離カルボン酸誘導体に変換し、次いで、例えば、カルボキサミド基の形成によってポリマー樹脂上に容易に支持することができる。

このようにして支持された中間体を、本方法の残りの段階に従って、続いて反応させてもよい。

上記の合成経路は以下のように要約することができる：

［式中、Ｒ２、Ｒ２’’’、Ｒ^ａおよび樹脂は上記で定義された通りである。］
したがって、本発明のさらなる目的は、
ｖ）酸性または塩基性条件下で、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（ＸＩ）の化合物を加水分解する反応；
ｗ）結果として得られる酸誘導体の、式（ＸＩＸ）：
（Ｐ）−ＣＨ_２−ＮＨＲ^ａ（ＸＩＸ）
［式中、（Ｐ）は樹脂であり、Ｒ^ａは上記で定義された通りである。］の誘導体化ホルミルポリスチレン樹脂との反応；
ｚ）式（ＸＸＩＩＩ）：

［式中、（Ｐ）およびＲ^ａは上に記載された通りである。］の結果として得られる化合物の、式（ＸＩＩ）：
Ｒ２’’’Ｂ（ＯＺ’’Ｚ’’’）_２（ＸＩＩ）
［式中、Ｒ２’’’はＲ^ｄであり、Ｒ^ｄは直鎖もしくは分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、シクロアルキルＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルＣ_１−Ｃ_６アルキル、アリール、アリールＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルから選択される基、場合によってさらに置換された基であり、Ｚ’’とＺ’’’は上に定義された通りである。］のボロン酸またはエステルとの反応；
ｘ）式（ＸＸＶＩ）：

の結果として得られる化合物から酸性条件下で樹脂を開裂し、
Ｒ２’’’が上記で定義された通りであり、Ｒ１が−ＮＨＲ^ａであり、またＲ^ａが上記で定義された式（Ｉ）の化合物を得る反応；
結果として得られる式（Ｉ）の化合物を単一異性体に場合によって分離すること；
結果として得られる式（Ｉ）の化合物を、式（Ｉ）の異なる化合物に、および／または、所望の場合には、薬学的に許容される塩に変換することを含む、式（Ｉ）の化合物およびこの薬学的に許容される塩を調製する方法である。

本方法の段階（ｖ）によると、式（ＸＩａ）の化合物の加水分解は段階（ｍ．１）および段階（ｐ）に記載されたように行う。

本方法の段階（ｗ）によると、ポリスチレン樹脂との反応は段階（ｒ）に記載されたように行う。

本方法の段階（ｚ）によると、Ｒ２’’’がアリールまたはヘテロアリールである式（ＸＩＩ）のボロン酸またはエステルとの反応は、段階（ｈ．１）に記載されたように行う。

本方法の段階（ｘ）によると、樹脂の開裂は段階（ｕ）に記載されたように行う。

前に示したコンビナトリアルケミストリー技術によって作業することにより、複数の式（Ｉ）の化合物を得ることができるのは、明らかである。

したがって、本発明のさらなる目的は、式（Ｉ）

［式中、
Ｒ１は−ＮＲ^ａＲ^ｂまたは−ＯＲ^Ｃ基であり、
Ｒ２は、−ＮＨ_２、−ＮＨＣＯＲ^ｃ、−ＮＨＣＯＮＨＲ^ｃ、−ＮＨＳＯ_２Ｒ^ｃ、−Ｃ≡ＣＲ^ｄまたはＲ^ｄであり、
ここで、Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、同一でありまたは異なり、それぞれ独立して水素、または、場合によってさらに置換され、直鎖もしくは分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニルまたはＣ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、シクロアルキルＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルＣ_１−Ｃ_６アルキル、アリール、アリールＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルから選択される基である、または、Ｒ^ａおよびＲ^ｂは、これらが結合されている窒素原子と一緒になって、Ｓ、Ｏ、ＮまたはＮＨから選択される１個の追加ヘテロ原子またはヘテロ原子基を場合によって含有する、場合によって置換された３から７員のヘテロシクリルまたはヘテロアリールを形成してよい。］の２種以上の化合物およびこの薬学的に許容される塩のライブラリーである。

本発明の好ましい実施形態によると、前述のライブラリーは、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂ基であり、Ｒ^ａおよびＲ^ｂがともに水素原子である、またはこれらの一方が水素原子であり、Ｒ^ａまたはＲ^ｂの他方は直鎖もしくは分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキルまたはＣ_２−Ｃ_６アルケニル基である、または、場合によって、置換されたアリールもしくはアリールＣ_１−Ｃ_６アルキル基である化合物である式（Ｉ）の化合物を含む。

Ｒ２が、直鎖または分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、シクロアルキル、または、場合によって、置換アリールまたはアリールアルキル基としてＲ^ｃを有する−ＮＨＣＯＲ^ｃ基である式（Ｉ）の化合物のライブラリーがまた好ましい。

Ｒ２が、水素原子としてまたは直鎖または分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、場合によって、置換されたアリールまたはアリールアルキル基としてＲ^ｃを有する−ＮＨＣＯＮＨＲ^ｃ基である式（Ｉ）の化合物のライブラリーが、また、好ましい。

式（Ｉ）の化合物の上記ライブラリーについての一般的参考文献としては、実験の部を参照されたい。

上記のすべてから、一度、例えば約千の式（Ｉ）の化合物からなる３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン誘導体のライブラリーが、このようにして作成されると、前に記したように、前記ライブラリーを、所与のキナーゼに対するスクリーニングをすることに非常に有利に使用することができることは、当業者とって明らかである。

生物学的活性をスクリーニングするツールとしての化合物ライブラリーおよびその使用についての一般的参照文献として、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９９，４２，２３７３−２３８２；およびＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１０（２０００），２２３−２２６を参照されたい。

薬理学
推定上のキナーゼ阻害剤の阻害活性および選択した化合物の効力は、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｋｉｎａｓｅ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから市販で、Ｋｏｒｅｓａｗａ、Ｍ．およびＯｋａｂｅ、Ｔ．（２００４）Ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｗｉｔｈ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＴＰ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ：Ａ ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｎｏｎ−ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅ，ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ．Ａｓｓａｙ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２，１５３−６０に記載されている）の使用に基づいたアッセイの方法によって求めた。

キナーゼ活性の結果としてのＡＴＰの枯渇は、オキシルシフェリンおよび光を発生する反応において基質としてルシフェリン、酸素およびＡＴＰを使用するＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）またはＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｐｌｕｓ Ｒｅａｇｅｎｔの使用によって高感度でモニターすることができる。

本明細書に使用された短縮形式および略語は下記の意味を有する：
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
Ｔｒｉｓ ２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール
Ｈｅｐｅｓ Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）
ＤＴＴ スレオ−１，４−ジメルカプト−２，３−ブタンジオール
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＭＴＢＥ メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＰｙＢＯＰ ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート
ＥＤＣ １−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＤＨＢＴ ３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン
ＨＢＴＵ ２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＭＯＦ オルトギ酸トリメチル
ＤＣＥ ジクロロエタン
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＡ Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＫＤａ キロダルトン
ｍｇ ミリグラム
μｇ ミクログラム
ｎｇ ナノグラム
Ｌ リットル
ｍＬ ミリリットル
μＬ マイクロリットル
Ｍ モル濃度
ｍＭ ミリモル濃度
μＭ マイクロモル濃度
ｎＭ ナノモル濃度

キナーゼ反応条件は標的（酵素）依存性があり、したがって個別の修正を受ける。Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｋｉｎａｓｅ Ａｓｓａｙは、事実上いかなるキナーゼと基質の組合せでも使用することができる。

また、緩衝剤条件は関係するキナーゼに応じて変えてもよい（例えばＰＫＡにはＴｒｉｓ４０ｍＭ ｐＨ７．５の組成、ＭｇＣｌ２、２０ｍＭ、ＢＳＡ０．１ｍｇ／ｍｌ、最終容積５０μｌ中で使用する）。通常、ＡＴＰ滴定の範囲は０．１μＭから１０μＭである。

キナーゼ反応ウェルをキナーゼのないウェルと比較すると、最適なキナーゼ基質は、ルミネセンスの最も大きい変化を結果的にもたらす。

最適な量のキナーゼは、最適な量のＡＴＰおよび最適なキナーゼ基質を使用して、２倍階段希釈法をプレートで行うことにより求められる。続く化合物スクリーンおよびＩＣ５０測定において使用する最適な量のキナーゼは、キナーゼ滴定曲線（Ｓ字状の用量応答）のルミネセンスを線形の範囲内とするのに必要とする量である。

ロボット化Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ
このアッセイは、キナーゼ活性および／または阻害性の測定のために設定した。これはすべてのタイプのプロテインキナーゼに対して均質、適切であり、迅速で、放射能を含まない。

本発明者らは、３８４ウェルプレートでアッセイを確立した。試験混合物は、
１）３ｘ酵素混合物（キナーゼ緩衝剤中で３回実施）、５μｌ／ウェル
２）３ｘ基質およびＡＴＰ混合物（ｄｄＨ２Ｏ中で実施）、５μｌ／ウェル
３）３ｘ式（Ｉ）の化合物（ｄｄＨ２Ｏ−３％ＤＭＳＯ中に希釈）−５μｌ／ウェル）
からなる。

１０μＭでの阻害百分率を、結果として、各試験化合物に対して評価した。化合物希釈およびアッセイスキームについては、以下を参照されたい。各酵素にはそれ自体の緩衝剤組成、基質タイプおよび濃度があった。その代り、インキュベーション時間はすべての標的に対し９０分だった。

試験化合物を１００％ＤＭＳＯに溶かした１ｍＭ溶液として９６ウェルプレートに載せた。プレートはｄｄＨ_２Ｏ、３％ＤＭＳＯ中３０μＭに希釈した。各９６ウェルプレートの５μｌを３８４ウェルプレートの４つの四分円に分注することより、４つのプレートを３８４ウェルプレートに再編成する。ウェルＰ２３およびＰ２４には、内標準阻害剤スタウロスポリンを添加した。

アッセイスキーム
試験プレートに先ず化合物希釈液（３０μＭ、３倍希釈に対応する）５μｌを添加し、次いで、酵素混合物（３Ｘ）の１つのリザーバー、および検討している各標的に特定のＡＴＰ混合物（３Ｘ）の１つのリザーバーと一緒にロボット化ステーションに装入した。

アッセイを始めるために、ロボットはＡＴＰ／基質混合物５μｌを吸引し、チップ（５μｌ）内部に空隙を作り、酵素混合物５μｌを吸引した。試験プレートに続けて分注して、上下のピペット操作をロボット自体がすることによって、３サイクルの混合の後にキナーゼ反応を開始させた。この時点で、すべての試薬に対して正確な濃度が回復した。

ロボットは室温で９０分間プレートをインキュベートし、次いで、反応混合物中にＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬１５μｌをピペットで移すことによって反応を停止した。３サイクルの混合を試薬の添加直後に実施した。

Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）手法の原理は、試薬混合物中に酸素、ルシフェリンおよびルシフェラーゼ酵素が存在することである。すなわち、キナーゼ反応で残っているＡＴＰが存在すると、オキシルシフェリンが生成し、ＡＴＰの量に直接依存する光の放出を伴う。この手法で最適な性能を出すためには、キナーゼ反応は、利用可能なＡＴＰの少なくとも１５−２０％を使用する必要がある。

ルミネッセント信号を安定させるために、インキュベーションのさらに６０分後、プレートをＶｉｅｗＬｕｘ（登録商標）装置で読んだ。パーセント阻害データを得るソフトウェアパッケージＡｓｓａｙ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ（登録商標）を使用してそのデータを解析した。例として、ＡＬＫに対する式（Ｉ）の化合物の試験に使用したアッセイ条件を本明細書に記載する。（ＡＬＫタンパク質はＷＯ２００９０１３１２６に記載されているように調製した。基質ＡＬＫｔｉｄｅ ＹＦＦ ＡＰＣｏは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、Ｃａ、ＵＳＡ）からペプチド純度が９５％を超えるバッチで得られた。）

アッセイ条件：
ＡＴＰ濃度：１μＭ
酵素濃度：１００ｎＭ
基質濃度のＡＬＫｔｉｄｅ ＹＦＦ ＡＰＣｏ：８０μＭ
反応緩衝液：Ｈｅｐｅｓ ５０ｍＭ ｐＨ７．５、ＭｇＣｌ２ ５ｍＭ、ＭｎＣｌ２ １ｍＭ、ＤＴＴ １ｍＭ、ＮａＶＯ_３ ３ｕＭ、０．２ｍｇ／ｍｌＢＳＡ

アッセイ手順：式（Ｉ）化合物（３ｘ）５ｕｌを添加し、緩衝剤１ｘ中のＡＴＰ／Ｓ混合物（３ｘ）５μｌを添加する；緩衝剤２ｘ＋３Ｘ ＢＳＡ中の酵素５μｌを添加する；ブランクについては、酵素なしの緩衝剤２ｘ＋３ｘ ＢＳＡ５μｌを添加する。９０分間のインキュベーションの後、Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ試薬１５μｌ／ウェルを添加する。ルミネッセント信号を安定化するために６０−９０分間インキュベートした後、プレートをＶｉｕｗＬｕｘ装置で読む。

本発明の化合物は１０から１００００ｎＭの濃度で活性であることが分かった。

ＰＩＭ−１キナーゼ活性の阻害剤の生化学的アッセイ
推定上のキナーゼ阻害剤の阻害活性および選択した化合物の効力は、リン酸転移アッセイを使用して求めた。

特定のペプチドまたはタンパク質基質を、^３３Ｐ−γ−ＡＴＰで追跡されるＡＴＰの存在下で、またそれ自体の最適な緩衝剤および補因子の存在下で、その特異的ｓｅｒ−ｔｈｒまたはｔｙｒキナーゼによってリン酸転移する。

リン酸化反応の最後に、９８％を超える非標識ＡＴＰおよび放射性ＡＴＰを過剰のイオン交換ｄｏｗｅｘ樹脂により捕捉する；次いで、樹脂は重力により反応プレートの底に沈降する。続いて上清を抜き取り、計数プレートに移し、次いでβ計数により評価する。

試薬／アッセイ条件
ｉ．Ｄｏｗｅｘ樹脂調製
ウェット樹脂５００ｇ（ＳＩＧＭＡ、特注で調製した樹脂ＤＯＷＥＸ １ｘ８ ２００−４００メッシュ、２．５Ｋｇ）を秤量し、１５０ｍＭギ酸ナトリウム、ｐＨ３．００で２Ｌに希釈する。
樹脂を沈降させ（数時間）、次いで上清を廃棄する。
２、３日間上記のように３回洗浄後、樹脂を沈降させ、樹脂体積に対して１５０ｍＭギ酸ナトリウム緩衝剤２体積を添加する。
次いで、ｐＨを測定する。ｐＨは約３．００のはずである。
洗浄した樹脂は１週間を超えて安定であり、貯蔵樹脂を、使用するまで４℃で維持する。

ｉｉ．キナーゼ緩衝剤（ＫＢ）
ＰＩＭ−１アッセイのための緩衝剤は、１０ｍＭＭｇＣｌ_２を含む、ＨＥＰＥＳ５０ｍＭ（ｐＨ７．５）、１ｍＭＤＴＴ、３μＭ、ＮａＶＯ_３および０．２ｍｇ／ｍｌのＢＳＡで構成された。

Ｂｕｌｌｏｃｋ ＡＮら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００５，２８０，４１６７５−８２に記載されているように、短縮していないヒトＰＩＭ−１を発現させ精製した。

酵素は、下記条件において、自動リン酸化による予備活性化の段階後に線形の速度を示した：１．７μＭＰＩＭ１を１２５μＭＡＴＰの存在下で室温２８℃で１時間インキュベートした。

ｉｉｉ．アッセイ条件
ＡＴＰ濃度：２００μＭ
^３３Ｐ−μ−ＡＴＰ：６ｎＭ
酵素濃度：１ｎＭ
基質濃度Ａｋｔｉｄｅ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ Ｎｕｍｂｅｒ ３２４０２９−０１−８）：２５μＭ

ロボット化ｄｏｗｅｘアッセイ
試験混合物は、
１）３ｘ酵素混合物（キナーゼ緩衝剤中で３回実施）、５μＬ／ウェル
２）^３３Ｐ−γ−ＡＴＰと一緒に３ｘ基質およびＡＴＰ混合物（ｄｄＨ２Ｏ中で実施）、５μＬ／ウェル
３）３ｘ試験化合物（ｄｄＨ２Ｏ−３％ＤＭＳＯ中に希釈）−５μＬ／ウェル
から構成された。

化合物希釈およびアッセイスキームについては、以下を参照されたい。
化合物希釈およびアッセイのスキームを下記に定義する：
ｉ．化合物の希釈
試験化合物は１ｍＭの１００％ＤＭＳＯ溶液として受領し、９６または３８４ウェルプレートに分配し、
ａ）パーセント阻害試験（ＨＴＳ）のために、１ｍＭの個々の希釈プレートを、Ｂｅｃｋｍａｎ ＮＸ自動化ピペット台を用いて３Ｘ濃度（３０μＭ）でｄｄＨ_２Ｏで希釈する（３％ＤＭＳＯ＝最終濃度）。希釈した母プレートを試験プレートに分配するのに同装置を使用する。
ｂ）ＩＣ５０（ＫＳＳ台）を求めるために、１ｍＭ、１００％ＤＭＳＯ溶液の各化合物１００μｌを、元のプレートから別の９６ウェルプレートの第１のカラム（Ａ１からＧ１）に移す。ウェルＨ１は内標準阻害剤、通常、スタウロスポリンのために空にしておく。

連続希釈のための自動化ステーション（Ｂｉｏｍｅｋ ＦＸ、Ｂｅｃｋｍａｎ）を使用して、ラインＡ１からＡ１０まで、カラム中の７種類の化合物すべてに対して、１００％ＤＭＳＯで連続１：３希釈する。さらに、娘プレートの４−５の複製を、１００％ＤＭＳＯ希釈プレートのこの第１組の５μＬを３８４ディープウェルプレートに再配列することにより調製する。試験化合物を連続希釈した１つの娘プレートの複製は、実験の日に解凍し、水で３Ｘ濃度に再構成してＩＣ５０測定アッセイに使用する。基準実験において、すべての化合物の中で最高濃度（３Ｘ）は３０μＭであり、一方、最低濃度は１．５ｎＭである。

３８４の各ウェルプレートはＺ’および信号バックグラウンド評価のための参照ウェル（合計酵素活性対酵素不活性）を含むものとする。

ｉｉ．アッセイスキーム
３８４ウェルプレート、Ｖ底（試験プレート）を化合物希釈液（３×）５μＬを用いて調製し、次いで１個の酵素混合物（３×）用リザーバーおよび１個のＡＴＰ混合物（３×）用リザーバーと一緒に、ＰｌａｔｅＴｒａｋ１２ロボット化ステーション（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ。ロボットは、アッセイを開始する１個の３８４チップピペッティングヘッドと、樹脂を分注する１個の９６チップヘッドを有する。）上に置く。

運転開始時、ロボットは、ＡＴＰ混合物５μＬを吸引し、チップ内部に空隙（２μＬ）を設け、ＰＩＭ混合物２μＬを吸引する。プレートへの次の分注によって、ロボット自体によって行われる３サイクルの混合後にキナーゼ反応が開始する。

この時点で、全試薬について正確な濃度が回復する。

ロボットは、プレートを室温で６０分間インキュベートし、次いでＤｏｗｅｘ樹脂懸濁液７０μＬを反応混合物にピペットで移すことによって反応を停止させる。３サイクルの混合を樹脂の添加直後に行う。

樹脂懸濁液は非常に濃厚であるので、チップ目詰りを回避するために、それを分注するのに広口径チップを使用する。

全プレートが停止した後、別の混合サイクルを、今回は通常のチップを用いて実施する。次いで、ＡＴＰ捕捉を最大にするために、プレートを約１時間静止させる。この時点で、上清２０μＬを、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ ４０（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）７０μＬと一緒に３８４−Ｏｐｔｉｐｌａｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）に移す。５分間環状に振とうした後、プレートをＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｔｏｐ Ｃｏｕｎｔ放射能カウンターで読む。

ｉｉｉ．データ解析
一次アッセイの阻害％を提供する、または二次アッセイ／ヒット確認ルーチンのためのＩＣ５０測定用の１０個の希釈液（ｔｅｎ−ｄｉｌｕｔｉｏｎｓ）の曲線のＳ字形フィッティングを提供する、ＳＷパッケージ「Ａｓｓａｙ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ」の所内改良バージョンによって、データを解析する。

ＰＩＭ−２キナーゼ活性阻害剤の生化学アッセイ
推定上のキナーゼ阻害剤の阻害活性および選択した化合物の効力を、ＰＩＭ−１に対して上記のようなリン酸転移反応アッセイを使用して求めた。

ｉ．キナーゼ緩衝剤（ＫＢ）
ＰＩＭ−２アッセイの緩衝剤は、１ｍＭＭｇＣｌ_２を含む、ＨＥＰＥＳ５０ｍＭ（ｐＨ７．５）、１ｍＭＤＴＴ、３μＭＮａＶＯ_３および０．２ｍｇ／ｍｌのＢＳＡで構成された。

Ｆｅｄｏｒｏｖ Ｏら、ＰＮＡＳ ２００７ １０４、５１、２０５２３−２８に記載されているように、短縮していないヒトＰＩＭ−２を発現させ精製した。

ｉｉ．アッセイ条件
ＡＴＰ濃度：４μＭ
^３３Ｐ−μ−ＡＴＰ：１ｎＭ
酵素濃度：１．５ｎＭ
基質濃度Ａｋｔｉｄｅ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ Ｎｕｍｂｅｒ ３２４０２９−０１−８）：５μＭ
酵素は予備活性化のいかなる段階も必要とせず線形の速度を示した。

ロボット化ｄｏｗｅｘアッセイ
ＰＩＭ−１について記載されたものと同一の手順を参照されたい。

ＰＩＭ−１およびＰＩＭ−２に対して試験する場合、本発明の化合物は、１０μＭ未満のＩＣ_５０を示した。下記のいくつかの例については表Ａを参照のこと。

表Ａにおいて、試験化合物は、以下に説明するコードで識別される。

ジアステレオ異性体が分割される場合、キラリティーは３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン骨格上を対象とするものである。

上記のすべてから、本発明の式（Ｉ）の新規の化合物は、癌などの調節異常のプロテインキナーゼ活性により引き起こされる疾患の治療において特に有利と考えられる。

本発明の化合物は、単一の薬剤として投与することができ、または代替として、細胞分裂停止剤または細胞毒性薬、抗生物質型薬剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、ホルモン剤、免疫学的薬剤、インターフェロン型薬剤、シクロオキシゲナーゼ阻害剤（例えば、ＣＯＸ−２阻害剤）、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、テロメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗成長因子受容体剤、抗ＨＥＲ剤、抗ＥＧＦＲ剤、抗血管新生剤（例えば、血管新生阻害剤）、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ｒａｓ−ｒａｆシグナル伝達経路阻害剤、細胞周期阻害剤、他のｃｄｋ阻害剤、チューブリン結合剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤などと組み合わせた、放射線療法、化学療法レジメンなどの公知の抗癌治療と組み合わせて、投与することができる。

一定用量として処方する場合には、そのような組合せ製品は、下記投与量範囲内の本発明の化合物、および承認された投与量範囲内の別の活性薬剤を使用する。

式（Ｉ）の化合物は、組合せ処方が不適当であるときには、公知の抗癌剤と一緒に逐次的に使用することができる。

哺乳動物、例えばヒトへの投与に適切な本発明の式（Ｉ）の化合物は、通常の経路で投与することができ、投与量レベルは、患者の年齢、体重、状態および投与経路によって決まる。

例えば、式（Ｉ）の化合物の経口投与に適切な投与量は、約１０から約５００ｍｇ／回の範囲で、毎日１から５回であり得る。本発明の化合物は、種々の剤形、例えば、錠剤、カプセル剤、糖衣錠、フィルムコート錠、溶液剤もしくは懸濁液剤の形で経口的に、坐剤の形で直腸に、非経口的に、例えば、筋肉内に、または静脈内および／または鞘内および／または脊髄内の注射もしくは注入によって、投与することができる。

本発明は、担体または賦形剤であり得る薬学的に許容される添加剤に付随して、式（Ｉ）の化合物またはこの薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物も含む。

本発明の化合物を含む医薬組成物は、通常、従来の方法に従って調製され、適切な医薬剤形で投与される。例えば、固体経口剤形は、活性化合物と一緒に、賦形剤（例えば、ラクトース、デキストロースサッカロース、スクロース、セルロース、コーンスターチまたはジャガイモデンプン）、潤滑剤（例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムおよび／またはポリエチレングリコール）、結合剤（例えば、デンプン、アラビアゴム、ゼラチンメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはポリビニルピロリドン）、崩壊剤（例えば、デンプン、アルギン酸、アルギナートまたはデンプングリコール酸ナトリウム）、起泡混合物、色素、甘味料、湿潤剤（レシチン、ポリソルベート、ラウリル硫酸塩など）および一般に、無毒の薬理学的に不活性な医薬製剤用物質を含み得る。これらの薬剤は、公知の様式で、例えば、混合、顆粒化、錠剤化、糖衣またはフィルムコーティング方法によって、製造することができる。

経口投与用分散液剤は、例えば、シロップ剤、乳濁液剤および懸濁液剤であってよい。例として、シロップ剤は、担体として、サッカロースもしくはグリセリンを含むサッカロース、ならびに／またはマンニトールおよびソルビトールを含むことができる。

懸濁液剤および乳濁液剤は、担体の例として、天然ゴム、寒天、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはポリビニルアルコールを含むことができる。筋肉内注射用懸濁液剤または溶液剤は、活性化合物と一緒に、薬学的に許容される担体、例えば、滅菌水、オリーブ油、オレイン酸エチル、グリコール、例えばプロピレングリコール、および必要に応じて、適切な量の塩酸リドカインを含むことができる。

静脈内注射または注入用溶液剤は、担体として滅菌水を含むことができ、または好ましくは、無菌溶液、水溶液、等張性溶液、食塩水の形であってよく、またはプロピレングリコールを担体として含むことができる。

坐剤は、活性化合物と一緒に、薬学的に許容される担体、例えば、カカオ脂、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル界面活性剤またはレシチンを含むことができる。

本発明をよりよく説明するために、本発明を何ら限定することなく、以下の実施例をここで示す。

実験の部
一般的方法
フラッシュクロマトグラフィーはシリカゲル（Ｍｅｒｃｋ ｇｒａｄｅ ９３９５，６０Ａ）上記で実施した。高圧液体クロマトグラフィーの保持時間（ＨＰＬＣ：ｒ．ｔ．値）は、以下のようにして求めた。

ＨＰＬＣ法１：
可変ＵＶ検出器モデル２４８７、化学ルミネセンス窒素検出器（ＣＬＮＤ、Ａｎｔｅｋ ８０６０）およびＷａｔｅｒｓ ＺＱ２０００質量検出器（ＥＳＩインターフェース）を装備したＷａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ＬＣモデル２７９５を、本用途に使用した。全流量を分割し、固定比（６４：１５：２１ ＵＶ：ＭＳ：ＣＬＮＤ）で３つの検出器に分配した。液体クロマトグラフは、５０℃のサーモスタットを付け、３０×３．０ｍｍ内径カラム（Ｗａｔｅｒｓ ｘＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、３．５ｕｍ粒子）を装備していた。次の２種の移動相を使用した：Ａ相は、０．０５％ｗ／ｖギ酸（高度精製水中１ｍｌ／Ｌの５０％ギ酸Ｆｌｕｋａ ０９６７６）であり、Ｂ相は、７０／２５／５（ｖ／ｖ／ｖ）のＭｅＯＨ／ｉＰｒＯＨ／Ｈ２Ｏ（０．０３５％ｗ／ｖギ酸（７００ｕＬ／Ｌの５０％ギ酸Ｆｌｕｋａ ０９６７６）を含有する）であった。

５ｕＬ容積の公称１ｍＭ試料のＤＭＳＯ中溶液を注入（連続した、空隙のない部分的ループモード）し、汎用逆相勾配分析（方法「＃ＩＮ６３ＳＥＱ７９」として分類される）を行い、０．８ｍｌ／分でＢ相の０％から１００％（ｖ／ｖ）を５分にわたり、Ｂ１００％で０．７分間保持し、５．７１分でＢ０％に直ちに戻り、運転停止時間を６．３分に設定した。全分析時間（「注入間」）は７．９分であった。

ＵＶ検出器は２２０ｎｍ、５Ｈｚのサンプリングレートで運転した。ＭＳ装置は、キャピラリー電圧３．２ｋＶ、コーン３０Ｖ、エクストラクター２Ｖ、ＲＦレンズ０．５Ｖ、脱溶媒流量４００Ｌ／時間、コーン流量１００Ｌ／時間、ソース温度１００℃、脱溶媒温度１５０℃、ＥＳＩ（＋）フルスキャン１２０−１２００ａｍｕ取得、サンプリングレート１．７Ｈｚで運転した。ＣＬＮＤ検出器は、炉温度１０５０℃、導入酸素流量２８０ｍＬ／分、導入アルゴン８０ｍＬ／分、補給アルゴン２５ｍＬ／分、オゾン３０ｍＬ／分、真空度２８トール、ＰＭＴ電圧７５０Ｖ、ＰＭＴ室＋１０℃、感度は高、セレクト５およびサンプリングレート４Ｈｚで運転した。

ＨＰＬＣ法２：
ＨＰＬＣ−ＭＳ分析をＦｉｎｎｉｇａｎ ＭＡＴモデルで行った。ＬＣＱイオントラップ質量分析計は、ＥＳＩ（エレクトロスプレイ）イオン源を装備し、オートサンプラーＬｃ Ｐａｌ（ＣＴＣ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ）およびＵＶ６０００ＬＰ ＰＤＡ検出器を装備した、ＨＰＬＣ ＳＳＰ４０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）に直結されている。

ＨＰＬＣ条件：
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８、３μｍ、５０×４．６ｍｍ（初期設定）
温度 ４０℃
移動相Ａ：酢酸塩緩衝液５ｍＭ ｐＨ４．５：アセトニトリル９５：５（ｖ：ｖ）
移動相Ｂ：酢酸塩緩衝液５ｍＭ ｐＨ４．５：アセトニトリル５：９５（ｖ：ｖ）
溶離勾配：

流速：１ｍＬ／分 注入容積：１０μＬ
カラム温度：４０℃
ＭＳ条件：ＬＣＱ質量分析計を、表１に記載する運転パラメーターに従い、陽および陰イオンモードのエレクトロスプレイイオン化（ＥＳＩ）インターフェースで運転する。ＭＳ／ＭＳ試験は、Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェアにより自動的に各スキャンの最も強いイオンで実行される。前駆イオンの断片化には、４５％の衝突エネルギーを使用した。

ＨＰＬＣ法３：
ＨＰＬＣ−ＭＳ分析はＦｉｎｎｉｇａｎ ＭＡＴモデルで実施した。ＬＣＱイオントラップ質量分析計は、ＥＳＩ（エレクトロスプレイ）イオン源を装備し、オートサンプラーＬｃＰａｌ（ＣＴＣ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ）およびＵＶ６０００ＬＰ ＰＤＡ検出器を装備した、ＨＰＬＣ ＳＳＰ４０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）に直結されている。

ＨＰＬＣ条件：
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８、３μｍ、５０×４．６ｍｍ（初期設定）
温度 ４０℃
移動相Ａ：酢酸塩緩衝液５ｍＭ ｐＨ４．５：アセトニトリル９５：５（ｖ：ｖ）
移動相Ｂ：酢酸塩緩衝液５ｍＭ ｐＨ４．５：アセトニトリル５：９５（ｖ：ｖ）
溶離勾配：

流速：１ｍｌ／分
注入容積：１０μＬ
カラム温度：４０℃
ＭＳ条件：
ＬＣＱ質量分析計を、表２に記載する運転パラメーターに従い、陽および陰イオンモードのエレクトロスプレイイオン化（ＥＳＩ）インターフェースで運転する。ＭＳ／ＭＳ試験は、Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェアにより自動的に各スキャンの最も強いイオンで実行される。前駆イオンの断片化には、４５％の衝突エネルギーを使用した。

ＨＰＬＣ法４：
分析は、２９９６ＰＤＡ（紫外可視）、Ａｃｑｕｉｔｙ ＥＬＳＤＴＭ検出器を装備した、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（商標）Ｓｙｓｔｅｍで実施した。ＬＣシステムを、原子質量測定のためにＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ３１００ＳＱＤ（商標）の単一四重極質量分析計に結合した。Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（商標）ＢＥＨ Ｃ１８、１．７μｍ、２．１ｘ５０ｍｍカラム（４５℃）を、下記の二元系の溶媒システムおよび勾配の流速０．７ｍｌ／分で使用した。
移動相Ａ：Ｈ_２Ｏ／アセトニトリル（９５：５）中の０．１％トリフルオロ酢酸
移動相Ｂ：アセトニトリル／Ｈ_２Ｏ（９５：５）

ＭＳ条件：
ＬＣＱ質量分析計を、表３に記載する運転パラメーターに従い、陽および陰イオンモードのエレクトロスプレイイオン化（ＥＳＩ）インターフェースで運転する。ＭＳ／ＭＳ試験は、Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェアにより自動的に各スキャンの最も強いイオンで実行される。前駆イオンの断片化には、４５％の衝突エネルギーを使用した。

ＨＰＬＣ法５：
分析は、９９６ＰＤＡ（紫外可視）検出器を装備したＷａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ＨＴ２７９５ Ｓｙｓｔｅｍで実施した。ＬＣシステムを、原子質量測定のためのＷａｔｅｒｓ／Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱＴＭ単一四重極質量分析計に結合した。Ｗａｔｅｒｓ Ａｓｃｅｎｔｉｓ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｃ１８、２．７μｍ、４．６ｘ５０ｍｍカラムを、下記の二元系の溶媒システムおよび勾配の流速１．０ｍＬ／分で使用した。
移動相Ａ：Ｈ_２Ｏ／アセトニトリル（９５：５）中の０．１％トリフルオロ酢酸
移動相Ｂ：アセトニトリル／Ｈ_２Ｏ（９５：５）

ＭＳ条件：
ＬＣＱ質量分析計を、表４に記載する運転パラメーターに従い、陽および陰イオンモードのエレクトロスプレイイオン化（ＥＳＩ）インターフェースで運転する。ＭＳ／ＭＳ試験は、Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェアにより自動的に各スキャンの最も強いイオンで実行される。前駆イオンの断片化には、４５％の衝突エネルギーを使用した。

保持時間（ＨＰＬＣ ｒ．ｔ．）は、２２０ｎｍまたは２５４ｎｍにおいて分で得られる。質量はｍ／ｚ比として得られる。必要な場合、化合物を、９９６Ｗａｔｅｒｓ ＰＤＡ検出器およびＭｉｃｒｏｍａｓｓモデルＺＱ単一四重極質量分析計、電子スプレーイオン化、ポジティブモードを装備したＷａｔｅｒｓ ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘ Ａｕｔｏｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍを使用する、Ｗａｔｅｒｓ Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８（１９×１００ｍｍ、５μｍ）カラムまたはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８（２１．２×２５０ｍｍ、１０μｍ）カラムの２システムの１つを使用して、分取ＨＰＬＣにより精製した。移動相Ａは０．０５％ＮＨ_３水／アセトニトリル９５：５、移動相Ｂはアセトニトリルとした。８分または１５分で１０から９０％Ｂの勾配。流速２０ｍｌ／分。

代替として、４つの独立した二元系送液ポンプ、二波長（２２０および２５４ｎｍ）をモニターする４チャンネルのフローセルを備えるＵＶ検出器および４つのフラクションコレクターを装備したＢｉｏｔａｇｅ Ｐａｒａｌｌｅｘ Ｆｌｅｘ Ｓｙｓｔｅｍで精製を実施した。分画は２５４ｎｍで実施した。Ｗａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ Ｐｒｅｐ ＲＰ１８、５μｍ、１００×１９ｍｍカラムを流速２０ｍＬ／分で使用した。勾配は、分析的ＨＰＬＣ分析から得られる所望生成物の保持時間に応じて適用した。

標準二元溶媒系：
移動相Ａ：Ｈ_２Ｏ／アセトニトリル（９５：５）中の０．１％トリフルオロ酢酸
移動相Ｂ：アセトニトリル

^１Ｈ−ＮＭＲ分光測定は、勾配を有するＢｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ４００ＭＨｚシングルベイ装置で実施した。これはＱＮＰプローブ（可換性の４核プローブ−^１Ｈ、１３Ｃ、１９Ｆ、および３１Ｐ）（ＮＭＲ法１）を備えており、または４００．４５ＭＨｚで操作する、５ｍｍ二重共鳴プローブ［１Ｈ（１５Ｎ−３１Ｐ）ＩＤ＿ＰＦＧ Ｖａｒｉａｎ］を備えたＭｅｒｃｕｒｙ ＶＸ ４００を用いて行う（ＮＭＲ法２）。

不斉炭素原子を有しラセミ混合物として得られた式（Ｉ）の化合物は、キラルのカラムでＨＰＬＣ分離により分割した。詳細には、例えば、分取カラムＣＨＩＲＡＬＰＡＣＫ（登録商標）ＡＤ、ＣＨＩＲＡＬＰＡＣＫ（登録商標）ＡＳ、ＣＨＩＲＡＬＣＥＬＬ（登録商標）ＯＪを使用することができる。

代替として、Ｒ１がキラル中心を含み、一組のジアステレオマーを生じる場合、上記の、従来の逆相ＨＰＬＣ法を化学種の分割のために使用した。

溶液およびコンビナトリアルケミストリーの手法によって調製したいくつかの化合物は、ＨＰＬＣ保持時間（手法１−５）および質量と共に、表ＩＩＩのコード化システムに従って、都合よく、明確に識別されている。

式（Ｉ）の単一で特定の化合物を識別するそれぞれのコードは、３つの単位Ａ−Ｍ−Ｂからなる。

Ａは任意の置換基Ｒ２−［式（Ｉ）参照］を表し、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン部分の７位に結合されている。置換基Ａのそれぞれを下記表Ｉに表す。

Ｂは任意の置換基Ｒ１−［式（Ｉ）参照］を表し、カルボニル基の炭素原子を介して３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン部分の残部に結合され、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン誘導体を得る。置換基Ｂのそれぞれを下記表ＩＩに表す。

Ｍは、Ａ基によって７位において、Ｂ基によってカルボニル基において置換された、二価の３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン部分の中心核を指し、実質的に次の通りである：

参照を容易にするために、表ＩおよびＩＩそれぞれの各Ａ基とＢ基は、適切な化学式および分子核Ｍとの結合点を示して識別されている。

例証するために、表ＩＩＩ（エントリー１３）の化合物Ａ３−Ｍ−Ｂ５は、Ａ３基で７位において、またカルボニル基を介してＢ５基で置換された３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オンの核Ｍを表す。同様に、表ＩＩＩ（エントリー１３７）の化合物Ａ２４−Ｍ−Ｂ８は、Ａ２４基で７位において、またカルボニル基を介してＢ５基によって置換された３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オンの核Ｍを次のように表す：

２，２，２−トリクロロ−１−（４−ニトロ−１Ｈ−ピロール−２−イル）エタノン（ＩＩＩ）の調製
硝酸（９０％、２ｍＬ）を、２，２，２−トリクロロ−１−（１Ｈ−ピロール−２−イル）エタノン（ＩＩ）（１ｇ、４．７ｍｍｏｌ）の無水酢酸（１０ｍｌ）中溶液に３０分間にわたって滴下して添加し、−４０℃に冷却した。反応混合物を室温まで徐々に暖め、６時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ９：１）で精製し、式（ＩＩＩ）の化合物が黄色の固体（６７０ｍｇ、５５％収率）として得られた。２，２，２−トリクロロ−１−（５−ニトロ−１Ｈ−ピロール−２−イル）エタノンも、副産物（３４９ｍｇ、２９％収率）として得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ２５６［Ｍ−Ｈ］⁻ ｒ．ｔ．５．４４分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝１３．６５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、８．３９（ｄｄ，Ｊ＝１．４，３．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．７３（ｔ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）
エチル（７−ニトロ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］

ピラジン−４−イル）アセタート（Ｒ１＝ＯＣＨ_２ＣＨ_３であるＶ）の調製：
エチル（２Ｅ）−４−アミノブト−２−エノアートトリフルオロ酢酸塩（ＩＶ）（５．９９ｇ、２４．６ｍｍｏｌ）を、２，２，２−トリクロロ−１−（４−ニトロ−１Ｈ−ピロール−２−イル）エタノン（ＩＩＩ）（３．１７ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１２．６ｍｌ、７３．８ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２（１２０ｍｌ）中溶液に添加した。また、反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ２：３）によって精製し、Ｒ１＝ＯＣＨ_２ＣＨ_３である式（Ｖ）の化合物が淡黄色の固体（３．１９ｇ、９７％収率）として得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ２６８［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．３．４８分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６））δ＝８．１３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、８．１２（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．１４（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．７４−４．８４（ｍ，１Ｈ）、４．１１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．７５（ｄｄｄ，Ｊ＝１．８，４．２，１３．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．４４（ｄｔ，Ｊ＝４．２，１３．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．９６（ｄｄ，Ｊ＝１．６，６．８Ｈｚ，２Ｈ）、１．１９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）

エチル（７−アミノ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−イル）アセタート塩酸塩（Ｉ）の調製：
エチル（７−ニトロ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−イル）アセタート（Ｒ１＝ＯＣＨ_２ＣＨ_３であるＶ）（０．５５ｇ，２．１ｍｍｏｌ）のエタノール１００％（２０ｍｌ）中溶液に、塩酸（１，４−ジオキサン中の４Ｍ溶液、０．５２ｍｌ、２．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、Ｐｄ−Ｃ（１０％）（０．１１ｇ）存在下の水素雰囲気下（５０ｐｓｉ）で室温で撹拌した。７時間後、この固体を（エタノールで洗浄した）セライトによって濾過し、溶媒を真空下で蒸発させ、化合物エチル（７−アミノ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−イル）アセタート塩酸塩（Ｉ）が淡褐色固体（０．５６ｇ、９８％収率）として得られ、それ以上精製せずに次のステップで用いた。非常に吸湿性の生成物である。保管は不活性ガス雰囲気下で短時間とする。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ２３８［Ｍ−Ｈ］⁻ ｒ．ｔ．１．８９分（広幅なピーク）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝９．７５（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）、７．８４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、７．１０（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．６２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．６４−４．７５（ｍ，１Ｈ）、４．０５−４．１５（ｍ，２Ｈ）、３．６４−３．７５（ｍ，１Ｈ）、３．３４−３．４４（ｍ，１Ｈ）、２．８３−２．９４（ｍ，１Ｈ）、２．７３−２．８２（ｍ，１Ｈ）、１．２０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。

Ａ７−Ｍ−Ｂ１（表ＩＩＩ、エントリー３４）の調製：
４−フルオロ安息香酸（０．２９ｇ、２．１ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）（０．４ｇ，２．１ｍｍｏｌ）、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＤＨＢＴ）（０．３４ｇ，２．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（０．７５ｍｌ、４．２ｍｍｏｌ）の乾燥アセトニトリル（１０ｍｌ）中溶液を室温で１０分間撹拌し、その後、エチル（７−アミノ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−イル）アセタート塩酸塩（Ｉ）（０．５２ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、同一温度で一晩撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ＋５％ＭｅＯＨ）によって精製し、化合物Ａ７−Ｍ−Ｂ１（表ＩＩＩエントリー３４）がオフホワイト固体（０．４９ｇ、７１％収率）として得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３６１［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．３．９９分。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝１０．３７（ｓ，１Ｈ）、７．９７−８．０２（ｍ，２Ｈ）、７．６６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、７．４４（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．３１−７．３８（ｍ，２Ｈ）、６．７３（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．６３（ｄｄｄ，Ｊ＝３．２，３．３，６．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．０９（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．６６−３．７２（ｍ，１Ｈ）、３．３４−３．３９（ｍ，１Ｈ）、２．８１−２．８９（ｍ，１Ｈ）、２．６８−２．７７（ｍ，１Ｈ）、１．１９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。

Ａ９−Ｍ−Ｂ１（表ＩＩＩ、エントリー５４）の調製：
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（０．１９ｍｌ、１．１ｍｍｏｌ）を、１−フルオロ−４−イソシアナトベンゼン（０．１５ｍｌ、１．２ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン（１０ｍｌ）中溶液およびエチル（７−アミノ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−イル）アセタート塩酸塩（Ｉ）（０．３０ｇ、１．１ｍｍｏｌ）懸濁液に添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ＋５％ＭｅＯＨ）によって精製し、化合物Ａ９−Ｍ−Ｂ１（表ＩＩＩエントリー５４）がオフホワイト固体（０．３３ｇ、８０％収率）として得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３７６［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．４．０４分。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝８．５６（ｓ，１Ｈ）、８．３７（ｓ，１Ｈ）、７．５９（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．３８−７．４６（ｍ，２Ｈ）、７．１０−７．１１（ｍ，１Ｈ）、７．０５−７．１２（ｍ，２Ｈ）、６．４８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．５３−４．５９（ｍ，１Ｈ）、４．０６−４．１２（ｍ，２Ｈ）、３．６４−３．７０（ｍ，１Ｈ）、３．２９−３．３６（ｍ，１Ｈ）、２．７９−２．８５（ｍ，１Ｈ）、２．６９−２．７４（ｍ，１Ｈ）、１．１９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。

Ａ８−Ｍ−Ｂ１（表ＩＩＩ、エントリー５２）の調製：
Ｎ−メチルモルホリン（０．２８ｍｌ、２．６ｍｍｏｌ）を、４−フルオロベンゼンスルホニル塩化物（０．２５ｇ、１．３ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン（１０ｍｌ）中溶液およびエチル（７−アミノ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−イル）アセタート塩酸塩（Ｉ）（０．３２ｇ、１．２ｍｍｏｌ）（の懸濁液）に添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）によって精製し、化合物Ａ８−Ｍ−Ｂ１（表ＩＩＩエントリー５２）がオフホワイト固体（０．３０ｇ、６４％収率）として得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３９７［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．３．９６分。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝９．７５（ｓ，１Ｈ）、７．７０−７．７７（ｍ，２Ｈ）、７．６５（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．３５−７．４２（ｍ，２Ｈ）、６．６７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．２０（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．５０−４．５６（ｍ，１Ｈ）、３．９９−４．１０（ｍ，Ｊ＝３．５，３．７，７．１，７．１，１０．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．５８−３．６４（ｍ，１Ｈ）、３．２６−３．３２（ｍ，１Ｈ）、２．７８（ｄｄ，Ｊ＝６．４，１６．０Ｈｚ，１Ｈ）、２．５８−２．６８（ｍ，１Ｈ）、１．１６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。

２，２，２−トリクロロ−１−（４−ヨード−１Ｈ−ピロール−２−イル）エタノンの調製（ＩＸ）：
ヨウ素（１．２ｇ、４．７ｍｍｏｌ）を、２、２、２−トリクロロ−１−（１Ｈ−ピロール−２−イル）エタノン（１ｇ、４．７ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸銀（１．１ｇ、５ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン（２４ｍｌ）中溶液に少しずつ添加し、０℃まで冷却した。この反応混合物を１８℃（水浴）までゆっくり暖め、５時間同一温度で撹拌した。この固体を濾過し、有機相を退色が生じるまでＮａ_２Ｓ_２Ｏ_５（５％水溶液）によって洗浄し、最後にＨ_２Ｏ（１×２０ｍｌ）によって洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４上記で乾燥し、ＳｉＯ_２（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ４：１）のプラウを通して濾過し、化合物２，２，２−トリクロロ−１−（４−ヨード−１Ｈ−ピロール−２−イル）エタノン（ＩＸ）がオフホワイト固体（１．４９ｇ、９４％収率）として得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３３６［Ｍ−Ｈ］⁻ ｒ．ｔ．６．３分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝１２．７６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、７．５２（ｄｄ，Ｊ＝１．３，３．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．３９（ｄｄ，Ｊ＝１．３，２．６Ｈｚ，１Ｈ）。

エチル（２Ｅ）−４−｛［（４−ヨード−１Ｈ−ピロール−２−イル）カルボニル］アミノ｝ブト−２−エノアート（Ｒ１＝ＯＣＨ_２ＣＨ_３であるＸ）の調製：
エチル（２Ｅ）−４−アミノブト−２−エノアートトリフルオロ酢酸塩（ＩＶ）（０．９７ｇ、４ｍｍｏｌ）を、２，２，２−トリクロロ−１−（４−ヨード−１Ｈ−ピロール−２−イル）エタノン（ＩＸ）（０．６８ｇ、２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（２．７ｍｌ、１６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍｌ）中溶液に添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ１：１）によって精製し、化合物エチル（２Ｅ）−４−｛［（４−ヨード−１Ｈ−ピロール−２−イル）カルボニル］アミノ｝ブト−２−エノアート（Ｒ１＝ＯＣＨ_２ＣＨ_３であるＸ）がオフホワイト固体（０．４８ｇ、６８％収率）として得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３４９［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．４．７分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝１１．８２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、８．３９（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．０１（ｄｄ，Ｊ＝１．５，２．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．９６（ｄｄ，Ｊ＝１．５，２．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．９０（ｄｔ，Ｊ＝４．７，１５．７Ｈｚ，１Ｈ）、５．８７（ｄｔ，Ｊ＝１．８，１５．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．１２（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．９９−４．０６（ｍ，２Ｈ）、１．２１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。

エチル（７−ヨード−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−イル）アセタート（Ｒ１＝ＯＣＨ_２ＣＨ_３であるＸＩ）の調製：
ジアザ（１，３）ビシクロ［５．４．０］ウンデカン（ＤＢＵ）（０．０４ｍｌ、０．３ｍｍｏｌ）を、エチル（２Ｅ）−４−｛［（４−ヨード−１Ｈ−ピロール−２−イル）カルボニル］アミノ｝ブト−２−エノアート（Ｒ１＝ＯＣＨ_２ＣＨ_３であるＸ）（０．４５ｇ、１．３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（８ｍｌ）中溶液に添加した。また、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ１：１）によって精製し、化合物エチル（７−ヨード−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−イル）アセタート（Ｒ１＝ＯＣＨ_２ＣＨ_３であるＸＩＩ）がオフホワイト固体（０．３５ｇ、７９％収率）として得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３４９［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．４．１５分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝７．７２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、７．１３（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）、６．７２（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．５９−４．７１（ｍ，１Ｈ）、４．１０（ｑｄ，Ｊ＝１．８，７．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝１．７，４．２，１３．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．３０−３．３８（ｍ，１Ｈ）、２．８３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ）、１．１９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。

Ａ２１−Ｍ−Ｂ１（表ＩＩＩ、エントリー１２７）の調製：
ジメトキシエタン（ＤＭＥ）（１ｍｌ）中の、エチル（７−ヨード−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−イル）アセタート（Ｒ１＝ＯＣＨ_２ＣＨ_３であるＸｌ）（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）ジクロリド、すなわち、ジクロロメタンとの錯体（１：１）（１２ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）、および４−ニトロフェニルボロン酸（４７ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、その後炭酸ナトリウム（０．５ｍｌＨ_２Ｏ中４５ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をアルゴン雰囲気下で８０℃で３時間撹拌した。反応混合物をシリカ（ＥｔＯＡｃで洗浄）を通して濾過し、溶媒を真空下で蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）によって精製し、化合物Ａ２１−Ｍ−Ｂ１（表ＩＩＩエントリー１２７）（２９ｍｇ、６０％収率）が得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３４５［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．４．６１分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝８．１９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．８７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．８０（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．７６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２４（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．７１（ｄｄｄ，Ｊ＝３．４，３．６，６．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．０４−４．１７（ｍ，２Ｈ）、３．７４（ｄｄｄ，Ｊ＝１．８，４．１，１３．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．３５−３．４５（ｍ，１Ｈ）、２．８８−２．９９（ｍ，２Ｈ）、１．１５−１．２２（ｍ，３Ｈ）。

Ａ２２−Ｍ−Ｂ１（表ＩＩＩ、エントリー１２８）の調製：
ジメトキシエタン（ＤＭＥ）（１ｍｌ）中の、エチル（７−ヨード−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−イル）アセタート（Ｒ１＝ＯＣＨ_２ＣＨ_３であるＸｌ）（５０ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ｌｌ）ジクロリド、すなわちジクロロメタンとの錯体（１：１）（１２ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）およびトランス−２−（４−メトキシフェニル）ビニルホウ酸（５０ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、その後炭酸ナトリウム（０．５ｍｌＨ_２Ｏ中４５ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）および反応混合物を加え、アルゴン雰囲気下で８０℃で６時間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃで洗浄したシリカを通して濾過し、溶媒を真空下で蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）によって精製し、化合物Ａ２２−Ｍ−Ｂ１（表ＩＩＩエントリー１２８）（３１ｍｇ、６２％収率）が得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３５６［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．５．１２分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝７．６６（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．３８−７．４５（ｍ，２Ｈ）、７．１３（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．８７−６．９３（ｍ，４Ｈ）、６．７９−６．８５（ｍ，１Ｈ）、４．５８−４．６６（ｍ，１Ｈ）、４．１２（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．７６（ｓ，３Ｈ）、３．６５−３．７３（ｍ，１Ｈ）、３．３２−３．３９（ｍ，１Ｈ）、２．７６−２．９１（ｍ，２Ｈ）、１．２０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。

Ａ２７−Ｍ−Ｂ１（表ＩＩＩ、エントリー１５１）の調製：
乾燥ジメチルホルムアミド（１４ｍｌ）中の、エチル（７−ヨード−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−イル）アセタート（Ｒ１＝ＯＣＨ_２ＣＨ_３であるＸＩ）（５００ｍｇ，１．４４ｍｍｏｌ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（５０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、銅（Ｉ）ヨウ化物（４１ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、１−クロロ−４−エチニルベンゼン（０．２９ｇ、２．１５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．５８ｍｌ、５．７４ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、反応混合物をアルゴン雰囲気下で、室温で一晩撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ−ＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製し、化合物Ａ２７−Ｍ−Ｂ１（表ＩＩＩエントリー１５１）（０．５１ｇ、９９％収率）が得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３５８［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．６．４８分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝７．８２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、７．４２−７．５０（ｍ，４Ｈ）、７．３７（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．７８（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．６３−４．７０（ｍ，１Ｈ）、４．１１（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．６５−３．７４（ｍ，１Ｈ）、３．３３−３．４１（ｍ，１Ｈ）、２．８１−２．９１（ｍ，２Ｈ）、１．１９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。

エチル（２Ｅ）−４−（ジホルミルアミノ）ブト−２−エノアートの調製（ＸＶ）：
乾燥アセトニトリル（２５ｍｌ）中の、４−ブロモクロトン酸エチル（１ｇ、５．１８ｍｍｏｌ）、ジホルミルイミドナトリウム塩（０．５９ｇ、６．２２ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（０．７８ｇ、５．１８ｍｍｏｌ）の溶液を、還流で一晩撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をジクロロメタンおよび水（１：１、４０ｍｌ）の間で分割した。水相をジクロロメタン（３×１５ｍｌ）で再抽出し、合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４上記で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ６：４）によって精製し、化合物エチル（２Ｅ）−４−（ジホルミルアミノ）ブト−２−エノアート（ＸＶ）が淡褐色固体（０．９２ｇ、９６％収率）として得られた。代替として、Ｅｔ_２Ｏを濃褐色油の残渣に添加し、生成物が結晶性固体として得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ １８６［Ｍ−Ｈ］⁻ ｒ．ｔ．３．３６分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝９．０１（ｓ，２Ｈ）、６．７８（ｄｔ，Ｊ＝４．６，１５．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．８８（ｄｔ，Ｊ＝２．０，１５．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．２６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，４．５Ｈｚ，２Ｈ）、４．１２（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、１．２１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）

エチル（２Ｅ）−４−アミノブト−２−エノアートトリフルオロ酢酸塩（ＩＶ）の調製：
エチル（２Ｅ）−４−（ジホルミルアミノ）ブト−２−エノアート（ＸＶ）（０．８９ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）のトリフルオロ酢酸−エタノール（無水）（２：１、１０ｍｌ）混合物中溶液を、還流しながら一晩撹拌した（ＬＣ−ＭＳで反応を追跡し、変換が完全に達成されたら停止した。）。溶媒を真空下で蒸発させ、化合物エチル（２Ｅ）−４−アミノブト−２−エノアートトリフルオロ酢酸塩（ＩＶ）が褐色の油（収率不明）として得られ、それ以上精製せずに次のステップで用いた。

Ａ２−Ｍ−Ｂ２（表ＩＩＩ、エントリー８）の調製：
誘導体Ａ２−Ｍ−Ｂ１（表ＩＩＩ、エントリー７）（２４ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン−水混合物（１：１、２ｍｌ）中溶液に、水酸化リチウム（６ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。有機相をジクロロメタン（２×５ｍｌ）で洗浄した。水相を塩酸（１Ｍ）でｐＨ＜１に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（４×１０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４上記で乾燥し、溶媒を真空下で蒸発させ、化合物Ａ２−Ｍ−Ｂ２（表ＩＩＩ、エントリー８）がオフホワイト固体（２１ｍｇ、１００％収率）として得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３０２［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．３．０６分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝７．６４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、７．４５−７．５０（ｍ，２Ｈ）、７．３７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．９６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．８８−６．９４（ｍ，２Ｈ）、４．５７−４．６３（ｍ，１Ｈ）、３．７６（ｓ，３Ｈ）、３．６７−３．７３（ｍ，１Ｈ）、３．３７−３．４２（ｍ，１Ｈ）、２．７４−２．８６（ｍ，２Ｈ）。

Ａ５−Ｍ−Ｂ５（表ＩＩＩ、エントリー２９）の調製：
誘導体Ａ５−Ｍ−Ｂ２（表ＩＩＩエントリー２３）（４５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の乾燥混合物アセトニトリル−ジメチルホルムアミド（３：１、４ｍｌ）中溶液に、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）（３２ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＤＨＢＴ）（２８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（０．０２４ｍｌ、０．１４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１０分間撹拌し、その後ピペリジン（０．０２８ｍｌ、０．２８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を同一温度で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（４×５ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、溶媒を真空下で蒸発させ、残渣を分取ＨＰＬＣによって精製し、化合物Ａ５−Ｍ−Ｂ５（表ＩＩＩエントリー２９）が白色固体（１３ｍｇ、２３％収率）として得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３９７［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．３．７４分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝８．５０（ｓ，１Ｈ）、８．３４（ｓ，１Ｈ）、７．５１（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．２４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．１２（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、６．４８（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．５８（ｔｔ，Ｊ＝３．９，６．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．６７（ｄｄｄ，Ｊ＝１．１，４．３，１２．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．７９（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１６．１Ｈｚ，１Ｈ）、２．７４（ｄｄ，Ｊ＝７．１，１６．１Ｈｚ，１Ｈ）、１．５５（五重線，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、１．３７−１．４８（ｍ，４Ｈ）。

７−ニトロ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−カルボン酸（Ｒ１＝ＯＨであるＶ）の調製
ＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（２７ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）を、エチル（７−ニトロ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−イル）アセタート（Ｒ１＝ＯＣＨ_２ＣＨ_３であるＶ）（０．１５ｇ，０．５６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン−水混合物（１：１、９ｍｌ）中溶液に添加し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。有機相をジクロロメタン（２×１０ｍｌ）で洗浄した。水相を塩酸（１Ｍ）でｐＨ＜１に達するまで酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、溶媒を真空下で蒸発させ、化合物７−ニトロ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−カルボン酸（Ｒ１＝ＯＨであるＶ）がオフホワイト固体（１０１ｍｇ、７５％収率）として得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ２４０［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．１．０５分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝８．１３（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）、８．１１（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．１４（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．７０−４．７９（ｍ，１Ｈ）、３．７１−３．７７（ｍ，１Ｈ）、３．４４（ｄｔ，Ｊ＝４．３，１３．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．８０−２．９６（ｍ，２Ｈ）。

基本手順：フェネチルアミン（表Ｉの断片Ｂ６に対応する）の、Ａｃｉｄ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｍｅｔｈｏｘｙ Ｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅポリスレン樹脂（ＡＭＥＢＡ ＩＩ樹脂）への装入
４−（４−ホルミル−３−メトキシフェノキシ）ブチリルアミノメチル樹脂（コポリスチレン−１％ＤＶＢ）（６．０ｇ、５．８８ｍｍｏｌ、０．９８ｍｍｏｌ／ｇ、１ｅｑ．）を、乾燥ＴＨＦ（６０ｍｌ）中で懸濁させ、フェネチルアミン（２９．４ｍｍｏｌ、５ｅｑ．）を添加した。結果として得られる懸濁液を、２５℃で２時間振とうした。次いで、酢酸（１．６８ｍｌ、２９．４ｍｍｏｌ、５ｅｑ．）およびＮａＢＨ（ＡｃＯ）_３（３．１２ｇ、１４．７ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を添加し、最終懸濁液を２５℃で１６時間振とうした。樹脂をＴＨＦ（２サイクル）、ＭｅＯＨ（２サイクル）、ＤＣＭ（２サイクル）、ＭｅＯＨ（２サイクル）、ＤＭＦ（２サイクル）およびＤＣＭ（３サイクル）によってすすぎ、次いで窒素流で乾燥させた。

上記のように調製された、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン骨格の樹脂への装入

７−ニトロ−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−カルボン酸（Ｒ１＝ＯＨであるＶ）（０．２４ｇ，１ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（０．３４ｍｌ、２ｍｍｏｌ）およびベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯＰ）（０．５２ｇ、１ｍｍｏｌ）の乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（７．５ｍｌ）中溶液を３０分間撹拌し、次いで、実施例１７（０．６７ｍｍｏｌ、１ｅｑ）の樹脂に添加し、最終懸濁液を室温で２４時間振とうした。樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３回）、ＤＣＭ（３回）および１，４−ジオキサン（１回）のサイクルですすぎ、窒素流下で乾燥させた。次いで、樹脂を次の段階で用いた。

ニトロ基の還元：

式（ＸＶＩＩＩ）の樹脂（０．６７ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中のＳｎＣｌ_２．２Ｈ_２Ｏの２Ｍ溶液中で懸濁させた。最終懸濁液を室温で４８時間振とうした。樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３回）、ＤＣＭ（３回）および１，４−ジオキサン（１回）のサイクルですすぎ、窒素流下で乾燥させた。次いで、この樹脂を次の段階で用いた。

上記の樹脂に結合した３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オンを、下記の代替の段階に従ってさらに反応させ、カルボキサミドおよびウレイド誘導体が得られた。

Ａ１１−Ｍ−Ｂ６（表ＩＩＩ、エントリー７１）の調製：

Ｒ^ｃが表ＩＩのフラグメントＡ１１（１．３５ｍｍｏｌ、１５ｅｑ．）に対応する式（Ｖｌ）のカルボン酸を、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）（０．２６ｇ、１．３５ｍｍｏｌ、１５ｅｑ）および３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＤＨＢＴ）（０．２２ｇ、１．３５ｍｍｏｌ、１５ｅｑ）の乾燥Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）（１ｍｌ）中溶液に添加し、溶液を３０分間撹拌し、次いで実施例１９の樹脂（０．０９ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）に添加し、反応器（Ｑｕｅｓｔ２１０（商標）またはＭｉｎｉｂｌｏｃｋｓ（商標））内で、室温で一晩振とうした。この樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３回）、ＤＣＭ（３回）および１，４−ジオキサン（１回）のサイクルですすぎ、窒素流下で乾燥させた。樹脂をＴＦＡ−ＤＣＭ（１：１、２ｍｌ）溶液で懸濁させ、室温で２時間振とうした。溶液を回収し、樹脂を（同様に回収した）ＤＣＭですすぎ、第２のサイクルを実施した。最後の洗浄はＭｅＯＨで行った。集めた有機層すべてを減圧下で乾燥させ、化合物Ａ１１−Ｍ−Ｂ６（下記の表ＩＩＩ、エントリー７１を参照）が得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３９９［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．２．７分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝１０．５３（ｓ，１Ｈ）、９．７４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、８．０７（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．６７（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．１２−７．３２（ｍ，６Ｈ）、６．６０（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．４８−４．６７（ｍ，１Ｈ）、３．９４−４．０９（ｍ，２Ｈ）、３．６６（ｄｄ，Ｊ＝４．６，１３．３Ｈｚ，１Ｈ）、２．８１（ｓ，６Ｈ）、２．６３−２．７５（ｍ，２Ｈ）。

Ａ１７−Ｍ−Ｂ６（表ＩＩＩ、エントリー１１７）の調製：

Ｒ^ｃが表ＩＩのフラグメントＡ１７に対応する式（ＶＩＩ）のイソシアナート（１．３５ｍｍｏｌ、１５ｅｑ）を、実施例１９の樹脂（０．０９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）の乾燥ジクロロメタン（１ｍｌ）中懸濁液に添加した。最終懸濁液を、反応器（Ｑｕｅｓｔ２１０（商標）またはＭｉｎｉｂｌｏｃｋｓ（商標））内で室温で一晩振とうした。樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３回）、ＤＣＭ（３回）および１，４−ジオキサン（１回）のサイクルですすぎ、窒素流下で乾燥させた。樹脂をＴＦＡ−ＤＣＭ（１：１、２ｍｌ）溶液で懸濁させ、室温で２時間振とうした。溶液を回収し、樹脂をＤＣＭ（同様に回収した）によりすすぎ、第２のサイクルを実施した。最終洗浄をＭｅＯＨで行った。集めた有機層すべてを減圧下で乾燥させ、化合物Ａ１７−Ｍ−Ｂ６（下記の表ＩＩＩのエントリー１１７参照）が得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ４６３［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．４．０２分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝８．２９（ｓ，１Ｈ）、８．２６（ｓ，１Ｈ）、８．０７（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．５２（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．２８−７．３３（ｍ，２Ｈ）、７．１０（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．７７−６．８５（ｍ，２Ｈ）、６．４６（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．５０（ｔｔ，Ｊ＝３．９，６．９Ｈｚ，０Ｈ）、３．７０（ｓ，４Ｈ）、３．６３（ｄｄｄ，Ｊ＝１．３，４．２，１２．８Ｈｚ，１Ｈ）。

７−ヨード−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−カルボン酸（Ｒ１＝ＯＨであるＸＩ）の調製
ＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（６３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）をエチル（７−ヨード−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−イルアセタート（Ｒ１＝ＯＣＨ_２ＣＨ_３であるＸＩＩ）（０．２６ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン−水混合物（１：１、８ｍｌ）中溶液に添加し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。有機相をジクロロメタン（２×１０ｍｌ）で洗浄した。水相を塩酸（１Ｍ）でｐＨ＜１に達するまで酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、溶媒を真空下で蒸発させ、化合物７−ヨード−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−カルボン酸（Ｒ１＝ＯＨであるＸＩＩ）がオフホワイト固体（０．２３ｇ、７５％収率）として得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３２１［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．２．５２分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝１２．６３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、７．７１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、７．１４（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）、６．７２（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．５４−４．６６（ｍ，１Ｈ）、３．５９−３．７０（ｍ，１Ｈ）、３．３２−３．３８（ｍ，１Ｈ）、２．７６（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）。

前記のように調製した３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン骨格の樹脂への装入

７−ヨード−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−４−カルボン酸（Ｒ１＝ＯＨであるＸＩ）（０．９２ｇ、２．８７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（０．９９ｍｌ、５．７６ｍｍｏｌ）およびベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯＰ）（１．５ｇ、２．８７ｍｍｏｌ）の乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（９ｍｌ）中溶液を３０分間撹拌し、次いで、実施例１７の樹脂（１．４４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）に添加し、最終懸濁液を室温で２４時間振とうした。樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３回）、ＤＣＭ（３回）および１，４−ジオキサン（１回）のサイクルですすぎ、窒素流下で乾燥させた。その後、樹脂を次の段階で用いた。

Ａ２４−Ｍ−Ｂ６（表ＩＩＩ、エントリー１３５）の調製：

ジメトキシエタン−水混合物（３：１、２ｍｌ）中の、Ｒ^ｃが表ＩＩの断片Ａ２４（０．３７ｇ、３ｍｍｏｌ^＊）に対応する式（ＸＩＩ）のボロン酸、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）ジクロリド、すなわち、ジクロロメタン（１：１）との錯体（ＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）．ＣＨ_２Ｃｌ_２）（６５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（０．５２ｇ、１．６ｍｍｏｌ）、および実施例２３からの樹脂（０．２ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）の混合物を、反応器（Ｑｕｅｓｔ ２１０（商標））内で８０℃で一晩振とうした。樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨ、ＤＣＭ（３回）、ＤＣＭ（３回）および１，４−ジオキサン（１回）のサイクルですすぎ、窒素流下で乾燥させた。樹脂をＴＦＡ−ＤＣＭ（１：１、２ｍｌ）溶液中に懸濁させ、室温で２時間振とうした。溶液を回収し、樹脂をＤＣＭ（同様に回収した）ですすぎ、第２のサイクルを実施した。最終洗浄をＭｅＯＨによって行った。集めた有機層すべてを減圧下で乾燥し、化合物Ａ２４−Ｍ−Ｂ６（下記の表ＩＩＩのエントリー１３５参照）が得られた。
ＬＣＭＳ（ＨＰＬＣ 方法２）：ｍ／ｚ ３７６［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｒ．ｔ．４．１７分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ＝８．６４（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ）、８．１１（ｓ，１Ｈ）、８．０５（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）、７．９５（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．８８（ｄ，１Ｈ）、７．４７（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．２３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、７．１５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．１０（ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．４Ｈｚ，２Ｈ）、４．７３（ｔｔ，Ｊ＝３．７，７．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．６８（ｄｄｄ，１Ｈ）。

実施例４−６、９−１１、１４−１５および１６−２４に記載した手順に従い、本発明の方法ごとに何らかの適切な反応物を用いることによって、以下の表ＩＩＩの化合物も調製した。

Ｒ１がキラル中心を持つ置換基である場合、得られる化合物はジアステレオマーの混合物であり、これらは分取ＨＰＬＣにより分離した。

ジアステレオマーを分割する場合、キラリティーは３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−１−オン骨格上を対象とする。

同様の方法で作業し、以下の化合物を調製した：

Claims (34)

1. 式（Ｉ）の化合物
   

   

   ［式中、
   Ｒ１は−ＮＲ^ａＲ^ｂまたは−ＯＲ^ａ基であり、
   Ｒ２は、−ＮＨ_２、−ＮＨＣＯＲ^ｃ、−ＮＨＣＯＮＨＲ^ｃ、−ＮＨＳＯ_２Ｒ^ｃ、−Ｃ≡ＣＲ^ｄまたはＲ^ｄであり、
   ここで、Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、同一でありまたは異なり、それぞれ独立して水素、または、場合によってさらに置換され、直鎖もしくは分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニルまたはＣ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、シクロアルキルＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルＣ_１−Ｃ_６アルキル、アリール、アリールＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルから選択される基である、
   または、Ｒ^ａおよびＲ^ｂは、これらが結合されている窒素原子と一緒になって、Ｓ、Ｏ、ＮまたはＮＨから選択される１個の追加ヘテロ原子またはヘテロ原子基を場合によって含有する、場合によって置換された３から７員のヘテロシクリルまたはヘテロアリールを形成してよい。］、およびその薬学的に許容される塩。
2. Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂ基であり、Ｒ^ａおよびＲ^ｂがともに水素原子である、またはこれらの一方が水素原子であり、Ｒ^ａまたはＲ^ｂの他方は直鎖もしくは分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキルまたはＣ_２−Ｃ_６アルケニル基である、または、場合によって、置換されたアリールもしくはアリールＣ_１−Ｃ_６アルキル基である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
3. Ｒ２が、Ｒ^ｃが請求項１で定義された−ＮＨＣＯＲ^ｃ基である、請求項１または２に記載の式（Ｉ）の化合物。
4. Ｒ２が、Ｒ^ｃが請求項１で定義された−ＮＨＣＯＮＨＲ^ｃ基である、請求項１または２に記載の式（Ｉ）の化合物。
5. Ｒ２が、Ｒ^ｃが請求項１で定義された−ＮＨＳＯ_２Ｒ^ｃ基である、請求項１または２に記載の式（Ｉ）の化合物。
6. Ｒ２がコードＡ１−Ａ１５８のいずれかにより示された断片であり、Ｒ１がコードＢ１−Ｂ２７のいずれかにより示された断片である、請求項１から５のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物。
   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   
7. ｄ）式（Ｉ）：
   

   

   ［Ｒ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、またＲ２がＮＨ_２である。］の化合物を、択一的段階：
   ｄ．１）式（ＶＩ）：
   Ｒ^ｃＣＯＺ（ＶＩ）
   ［式中、Ｒ^ｃは請求項１で定義された通りであり、Ｚはハロゲンまたは−ＯＨ基である。］の酸またはハロゲン化アシルと反応させて、式（Ｉ）：
   

   

   ［式中、Ｒ１は−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、またＲ^ｃは上記で定義された通りである。］の化合物を得ること；または
   ｄ．２）式（ＶＩＩ）：
   Ｒ^ｃＮＣＯ（ＶＩＩ）
   ［式中、Ｒ^ｃが上記で定義された通りである。］のイソシアナートと反応させて、式（Ｉ）：
   

   

   ［式中、Ｒ１は−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、またＲ^ｃは上記で定義された通りである。］の化合物を得ること；または
   ｄ．３）式（ＶＩＩＩ）：
   Ｒ^ｃＳＯ_２Ｚ’（ＶＩＩＩ）
   ［式中、Ｒ^ｃは上記で定義された通りであり、Ｚ’はハロゲンである。］のハロゲン化スルホニルと反応させて、式（Ｉ）：
   

   

   ［式中、Ｒ１は−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、またＲ^ｃは上記で定義された通りである。］の化合物を得ることのいずれか１つ；
   または
   ｈ）式（ＸＩ）：
   

   

   ［Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである。］の化合物を、択一的段階：
   ｈ．１）式（ＸＩＩ）：
   Ｒ２’Ｂ（ＯＺ’’Ｚ’’’）_２（ＸＩＩ）
   ［式中、Ｒ２’はＲ^ｄであり、Ｒ^ｄは請求項１で定義された通りであり、Ｚ’’とＺ’’’は、Ｈ、アルキルである、または、これらが結合している酸素原子と一緒になって、場合によって置換された５から６員の複素環を形成してもよい、のいずれかである。］のボロン酸またはエステルと反応させて、式（Ｉ）：
   

   

   ［式中、Ｒ１は−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、またＲ２’は上記で定義された通りである。］の化合物を得ること；または
   ｈ．２）式（ＸＩＩＩ）：
   Ｒ^ｄＣ≡ＣＨ（ＸＩＩＩ）
   ［式中、Ｒ^ｄは上記で定義された通りである。］の末端アルキンと反応させて、式（Ｉ）：
   

   

   ［式中、Ｒ１は−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、また、Ｒ^ｄは上記で定義された通りである。］の化合物を得ることのいずれか１つ；
   結果として得られる式（Ｉ）の化合物を、場合によって単一異性体に分離すること；
   結果として得られる式（Ｉ）の化合物を、Ｒ１が表す異なる基によって−ＯＲ^ａ基を置き換えることによって式（Ｉ）の異なる化合物に、および／または薬学的に許容される塩に変換することを含むことを特徴とする、請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物を調製する方法。
8. Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、またＲ２がＮＨ_２である式（Ｉ）の化合物が、下記段階：
   ａ）酸性条件の下に式（ＩＩ）：
   

   

   の化合物をニトロ化する段階
   ｂ）結果として得られる式（ＩＩＩ）：
   

   

   の化合物を式（ＩＶ）：
   

   

   ［式中、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルである。］のアンモニウム塩と反応させる段階；
   結果として得られる式（Ｖ）：
   

   

   ［式中、Ｒ^ａは上記で定義された通りである。］の化合物を、請求項１で定義されたように、Ｒ１で表される基の中の異なる基によって−ＯＲ^ａ基を置き換えることにより、異なる式（Ｖ）の化合物に場合によって変換する段階、
   ｃ）式（Ｖ）の前記化合物を還元し、式（Ｉ）：
   

   

   ［式中、Ｒ１は請求項１で定義された通りであり、Ｒ２はＮＨ_２である。］の化合物またはこの塩を得る段階；
   結果として得られる式（Ｉ）の化合物を、場合によって単一異性体に分離する段階；
   結果として得られる式（Ｉ）の化合物を、アミノ部分を誘導体化することによって、および／または請求項１で定義されたように、Ｒ１で表される基の中の異なる基によって−ＯＲ^ａ基を置き換えることによって式（Ｉ）の異なる化合物に、および／または薬学的に許容される塩に変換する段階に従って調製されることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
9. 下記段階：
   ｅ）式（ＩＩ）：
   

   

   の化合物をヨウ素化する段階：
   ｆ）結果として得られる式（ＩＸ）：
   

   

   の化合物を式（ＩＶ）：
   

   

   ［式中、Ｒ^ａはＣ_１−Ｃ_６アルキルである。］のアンモニウム塩と反応させる段階；
   ｇ）塩基性条件下で式（Ｘ）：
   

   

   ［式中、Ｒ^ａは上記で定義された通りである。］の結果として得られる化合物を環化し、式（ＸＩ）：
   

   

   ［式中、Ｒ^ａは上記で定義された通りである。］の結果として得られる化合物を得る段階、
   ヨードをＲ２が表す異なる基によって置き換えることにより、結果として得られる化合物を式（ＸＩ）の異なる化合物に変換する段階、
   結果として得られる化合物を単一異性体に、場合によって分離する段階、
   結果として得られる化合物を、請求項１で定義されたように、Ｒ１が表す基の中の異なる基によって−ＯＲ^ａ基を置き換えることによって、式（ＸＩ）の異なる化合物に、および／または、所望の場合、薬学的に許容される塩に変換する段階に従って、式（ＸＩ）の化合物が調製されることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
10. 式（Ｉ）の化合物の式（Ｉ）の別の化合物への場合による変換が、下記反応：
    ｍ．１）Ｒ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｉ）の化合物を酸性または塩基性加水分解し、Ｒ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａが水素または対応する塩である式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応；
    ｍ．２）式（ＸＩＶ）：
    Ｒ^ａ−ＯＨ（ＸＩＶ）
    の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｉ）の化合物をエステル交換し、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが異なるＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応；
    ｍ．３）式（ＸＶ）：
    ＨＮＲ^ａＲ^ｂ（ＸＶ）
    の化合物との反応によって、Ｒ_１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｉ）の化合物をアミノ分解し、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応；
    ｍ．４）上記で定義された式（ＸＩＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＨ基であるまたはその対応する塩である式（Ｉ）の化合物をエステル化し、Ｒ１が−ＯＲ^ａである式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応；
    ｍ．５）上記で定義された式（ＸＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＨ基であるまたはその対応する塩である式（Ｉ）の化合物をアミド化し、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（Ｉ）の対応する化合物を得る反応の１種または複数によって実施されることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
11. 式（Ｖ）：
    

    

    ［式中、Ｒ１は請求項１で定義された通りである。］の化合物が、下記の反応：
    ｎ．１）Ｒ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｖ）の化合物を酸性または塩基性加水分解し、Ｒ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａが水素または対応する塩である式（Ｖ）の化合物を得る反応；
    ｎ．２）上記で定義された式（ＸＩＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｖ）の化合物をエステル交換し、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが異なるＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｖ）の化合物を得る反応；
    ｎ．３）上記で定義された式（ＸＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｖ）の化合物をアミド化し、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（Ｖ）の化合物を得る反応；
    ｎ．４）上記で定義された式（ＸＶＩ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａ基でありＲ^ａが水素または対応する塩である式（Ｖ）の化合物をエステル化し、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが水素とは異なる式（Ｖ）の化合物を得る反応；
    ｎ．５）上記で定義された式（ＸＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａであり、Ｒ^ａが水素である式（Ｖ）の化合物をアミド化し、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（Ｖ）の化合物を得る反応の１種または複数によって、式（Ｖ）の別の化合物に変換されることを特徴とする、請求項７および８に記載の方法。
12. 式（ＸＩ）：
    

    

    ［式中、Ｒ１は請求項１で定義された通りである。］の化合物が、下記の反応：
    ｏ．１）Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（ＸＩ）の化合物を酸性または塩基性加水分解し、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが水素または対応する塩である式（ＸＩ）の化合物を得る反応；
    ｏ．２）上記で定義された式（ＸＩＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（ＸＩ）の化合物をエステル交換し、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが異なるＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（ＸＩ）の化合物を得る反応；
    ｏ．３）上記で定義された式（ＸＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（ＸＩ）の化合物をアミド化し、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（ＸＩ）の化合物を得る反応；
    ｏ．４）上記で定義された式（ＸＶＩ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａ基でありＲ^ａが水素または対応する塩である式（ＸＩ）の化合物をエステル化し、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが水素とは異なる式（ＸＩ）の化合物を得る反応；
    ｏ．５）上記で定義された式（ＸＶ）の化合物との反応によって、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａが水素である式（ＸＩ）の化合物をアミド化し、Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂである式（ＸＩ）の化合物を得る反応の１種または複数によって、式（ＸＩ）の別の化合物に変換されることを特徴とする、請求項７および９に記載の方法。
13. ｐ）酸性または塩基性条件下で、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（Ｖ）の化合物を加水分解すること；
    ｒ）結果として得られる酸誘導体を、式（ＸＩＸ）：
    （Ｐ）−ＣＨ_２−ＮＨＲ^ａ（ＸＩＸ）
    ［式中、（Ｐ）は樹脂でありＲ^ａは請求項１で定義された通りである。］の誘導体化ホルミルポリスチレン樹脂と反応させること；
    ｓ）結果として得られる式（ＸＸ）：
    

    

    ［式中、（Ｐ）およびＲ^ａは上に記載された通りである。］の化合物を、塩化クロム（ＩＩ）、硫化水素テトラブチルアンモニウムまたは塩化スズ（ＩＩ）などの適切な還元剤と反応させること；および、
    ｔ）結果として得られる式（ＸＸＩ）：
    

    

    ［式中、（Ｐ）およびＲ^ａは上に記載された通りである。］の化合物を、請求項７に記載された通りに（ｄ．１）から（ｄ．２）の段階のいずれか１つに従って反応させること；
    ｕ）酸性条件下で結果として得られる式（ＸＸＩＩ）：
    

    

    の化合物から樹脂を開裂し、Ｒ２’’が−ＮＨＣＯＲ^ｃまたは−ＮＨＣＯＮＨＲ^ｃであり、Ｒ^ｃが請求項１で定義された通りであり、Ｒ１が、Ｒ^ａが請求項１で定義された−ＮＨＲ^ａである式（Ｉ）の化合物を得ること；または
    ｖ）酸性または塩基性条件下で、Ｒ１が−ＯＲ^ａでありＲ^ａがＣ_１−Ｃ_６アルキルである式（ＸＩ）の化合物を加水分解すること；
    ｗ）結果として得られる酸誘導体を、式（ＸＩＸ）：
    （Ｐ）−ＣＨ_２−ＮＨＲ^ａ（ＸＩＸ）
    ［式中、（Ｐ）は樹脂であり、Ｒ^ａは上記で定義された通りである。］の誘導体化ホルミルポリスチレン樹脂と反応させること；
    ｚ）式（ＸＸＩＩＩ）：
    

    

    ［式中、（Ｐ）およびＲ^ａは上に記載された通りである。］の結果として得られる化合物を、式（ＸＩＩ）：
    Ｒ２’’’Ｂ（ＯＺ’Ｚ’’’）_２（ＸＩＩ）
    ［式中、Ｒ２’’’はＲ^ｄであり、Ｒ^ｄは直鎖もしくは分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、シクロアルキルＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルＣ_１−Ｃ_６アルキル、アリール、アリールＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルから選択される基、場合によってさらに置換された基であり、Ｚ’’とＺ’’’は請求項９で定義された通りである。］のボロン酸またはエステルと反応させること；
    ｘ）式（ＸＸＶＩ）：
    

    

    の結果として得られる化合物から酸性条件下で樹脂を開裂し、
    Ｒ２’’’が上記で定義された通りであり、Ｒ１が−ＮＨＲ^ａであり、またＲ^ａが上記で定義された式（Ｉ）の化合物を得ること；
    結果として得られる式（Ｉ）の化合物を単一異性体に場合によって分離すること；
    結果として得られる式（Ｉ）の化合物を、式（Ｉ）の異なる化合物に、および／または、所望の場合には、薬学的に許容される塩に変換することを含む、請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物またはこの薬学的に許容される塩を調製する方法。
14. 式（Ｉ）：
    

    

    ［式中、
    Ｒ１は−ＮＲ^ａＲ^ｂまたは−ＯＲ^ａ基であり、
    Ｒ２は、−ＮＨ_２、−ＮＨＣＯＲ^ｃ、−ＮＨＣＯＮＨＲ^ｃ、−ＮＨＳＯ_２Ｒ^ｃ、−Ｃ≡ＣＲ^ｄまたはＲ^ｄであり、ここで、Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、同一でありまたは異なり、それぞれ独立して水素、または、場合によってさらに置換され、直鎖もしくは分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニルまたはＣ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、シクロアルキルＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルＣ_１−Ｃ_６アルキル、アリール、アリールＣ_１−Ｃ_６アルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールＣ_１−Ｃ_６アルキルから選択される基であり、または、Ｒ^ａおよびＲ^ｂは、それらが結合されている窒素原子と一緒になって、Ｓ、Ｏ、ＮまたはＮＨから選択される１個の追加のヘテロ原子またはヘテロ原子基を場合によって含有する、場合によって置換された３から７員のヘテロシクリルまたはヘテロアリールを形成してよい。］の２種以上の化合物およびこれらの薬学的に許容される塩のライブラリー。
15. Ｒ１が−ＮＲ^ａＲ^ｂ基であり、Ｒ^ａおよびＲ^ｂがともに水素原子である、またはこれらの一方が水素原子であり、Ｒ^ａまたはＲ^ｂの他方は直鎖もしくは分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキルまたはＣ_２−Ｃ_６アルケニル基であり、または、場合によって、置換されたアリールもしくはアリールＣ_１−Ｃ_６アルキル基である、請求項１４に記載のライブラリー。
16. Ｒ２が、直鎖もしくは分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、シクロアルキル、または、場合によって置換されたアリールもしくはアリールアルキル基としてＲ^ｃを有する−ＮＨＣＯＲ^ｃ基である、請求項１４または１５に記載のライブラリー。
17. Ｒ２が、水素原子としてまたは直鎖もしくは分枝状のＣ_１−Ｃ_６アルキル、場合によって、置換されたアリールもしくはアリールアルキル基としてＲ^ｃを有する−ＮＨＣＯＮＨＲ^ｃ基である、請求項１４または１５に記載のライブラリー。
18. 化合物が式：
    

    

    ［式中、断片ＡおよびＢは請求項６で定義された通りであり、化合物は本明細書の以下：
    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    にリストされたものの１つである。］を有する、請求項１４に記載のライブラリー。
19. 請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物の効果的な量を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、調節異常のプロテインキナーゼ活性によって引き起こされ、および／または、それに伴う疾患を治療する方法。
20. 調節異常のプロテインキナーゼ活性によって引き起こされ、および／または、それに伴う疾患が、癌、ウイルス感染、ＨＩＶに感染した個体のエイズ発症の予防、細胞増殖性障害、自己免疫および神経変性障害からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
21. 癌が、膀胱、乳房、結腸、腎臓、肝臓、肺小細胞癌を含む肺、食道、胆嚢、卵巣、膵臓、胃、頸部、甲状腺、前立腺、および扁平上皮癌を含む皮膚などの癌腫；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞系リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞リンパ腫およびバーキットリンパ腫を含むリンパ系統の造血器腫瘍；急性および慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群ならびに前骨髄球性白血病を含む脊髄性の系統の造血器腫瘍；繊維肉腫および横紋筋肉腫を含む間充織起源の腫瘍；星状細胞腫神経芽細胞腫、神経膠腫および神経鞘腫を含む、中枢および末梢神経系の腫瘍；黒色腫、精上皮腫、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、角質黄色腫、甲状腺濾胞癌およびカポジ肉腫を含む他の腫瘍からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
22. 細胞増殖障害が、良性前立腺肥大症、家族性腺腫性ポリポーシス、神経線維腫症、乾癬、アテローム性動脈硬化に伴う血管平滑細胞増殖、肺線維症、関節炎、糸球体腎炎ならびに術後狭窄および再狭窄からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
23. 腫瘍血管新生および転移阻害ならびに移植臓器拒絶および宿主対移植片病の治療を提供する、請求項１９に記載の方法。
24. 少なくとも１つの細胞分裂停止剤または細胞毒性薬と組み合わせて抗放射線療法または化学療法レジメンをそれを必要とする哺乳動物に施すことをさらに含む、請求項１９に記載の方法。
25. それを必要とする哺乳動物がヒトである、請求項１９に記載の方法。
26. 請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物の有効量とキナーゼを接触させることを含む、プロテインキナーゼ活性を阻害する方法。
27. 請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物の治療有効量、および少なくとも１種の薬学的に許容される添加剤、担体および／または賦形剤を含む医薬組成物。
28. 抗癌療法において同時、個別または逐次的に使用するための合剤として、１種または複数の化学療法剤をさらに含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
29. 抗癌療法において同時、個別または逐次的に使用するための合剤として、請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物、または請求項２７で定義されたその医薬組成物、および１種または複数の化学療法剤を含む製品またはキット。
30. 薬剤として使用するための、請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物またはこの薬学的に許容される塩。
31. プロテインキナーゼ活性の変化によって引き起こされ、および／または、それに伴う疾患を治療する方法において使用するための、請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物またはこの薬学的に許容される塩。
32. プロテインキナーゼ活性の変化によって引き起こされ、および／または、それに伴う疾患を治療する薬剤の製造における、請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物またはこの薬学的に許容される塩の使用。
33. 式（Ｖ）
    

    

    ［式中、Ｒ１は請求項１で定義された通りである。］の中間体。
34. 式（ＸＩ）
    

    

    ［式中、Ｒ１は請求項１で定義された通りである。］の中間体。