KR20140027902A - 키나제 억제제로서 치환된 피라졸로-퀴나졸린 유도체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 단백질 키나제의 활성을 변조시키며, 따라서 조절장애된 단백질 키나제 활성, 특히 PIM 키나제에 의해서 야기된 질병을 치료하는데 유용한 치환된 파라졸로[4,3-h]퀴나졸린 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 이들 화합물을 제조하는 방법, 이들 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 및 이러한 이들 화합물 또는 이들을 함유하는 약제학적 조성물을 이용하여 질병을 치료하는 방법을 제공한다.

Description

키나제 억제제로서 치환된 피라졸로-퀴나졸린 유도체{SUBSTITUTED PYRAZOLO-QUINAZOLINE DERIVATIVES AS KINASE INHIBITORS}

본 출원은 전체가 참고로 포함된 2010년 12월 17일자 유럽특허출원 제 10195675.3호를 35 USC § 119(a) 하에서 우선권으로 주장한다.

본 발명은 단백질 키나제, 특히 Pim 키나제(Pim-1, Pim-2, 및/또는 Pim-3) 억제제의 활성을 변조시키는 특정의 치환된 파라졸로[4,3-h]퀴나졸린 화합물에 관한 것이다. 따라서 본 발명의 화합물은 조절장애된 단백질 키나제 활성에 의해서 야기된 질병을 치료하는데 유용하다. 본 발명은 또한, 이들 화합물을 제조하는 방법, 이들 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 및 이들 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 이용하여 질병을 치료하는 방법을 제공한다.

단백질 키나제(PK)의 기능부전은 다수의 질병의 특징(hallmark)이다. 인간 암에 포함된 대부분의 종양유전자 및 원-종양유전자(proto-oncogene)는 PK를 암호화한다. PK의 증진된 활성은 또한, 양성 전립선 비대증, 가족성 선종성 용종증, 신경섬유종증, 건선, 혈관 평활세포 증식과 연관된 아테롬성 경화증, 폐섬유증, 관절염, 사구체신염, 및 수술-후 협착증 및 재발협착증과 같은 다수의 비-악성 질환에도 연루된다.

PK는 또한, 염증성 상태 및 바이러스 및 기생충의 증식에도 연루된다. PK는 또한, 신경변성 장애의 병인론 및 발현에 중요한 역할을 할 수 있다.

PK 기능부전 또는 조절장애에 대한 일반적인 참조를 위해서는 예를 들어, 문헌 [Current Opinion in Chemical Biology 1999, 3, 459-465; 및 Carcinogenesis 2008, 29, 1087-1091]을 참고로 한다.

림프종 마우스 모델에서 프로바이러스 돌연변이유발에 의해 활성화된 유전자로서 최초로 확인된 PIM(본 발명 전체에서 PIM1, PIM2 및/또는 PIM-3)는 단백질-세린/트레오닌 키나제이다. PIM 키나제는 정상 조직에서는 열등하게 발현되며, 림프종, 백혈병, 전립선암, 췌장암 및 위암을 포함하는 다수의 인간 암에서 과발현되거나 돌연변이까지 된다[Shah et al. Eur . J. Cancer, 44, 2144-51,(2008)].

PIM 키나제는 구성적으로 활성이며, 그들의 활성은 몇 가지 세포 주기 조절인자 및 세포소멸 매개자를 포함하는 이소형태-특이적 기질뿐만 아니라 공통적인 것의 증가하는 수의 변형을 통해서 시험관내 및 생체내 종양 세포 성장 및 생존을 유지시킨다. PIM1은 또한, 케모카인 수용체 표면 발현을 조절함으로써 정상 및 악성 조혈세포의 귀소(homing) 및 이동을 매개하는 것으로 보이지만, PIM2는 그렇지 않다[Brault et al. Haematologica 95 1004-1015(2010)].

PIM1 및 PIM2 키나제가 일부의 급성 골수성 백혈병(AML)-연관된 종양유전자의 종양원성 효과, 특히 FLT3-돌연변이(AML의 30%에 존재하는, ITD 및 KD 돌연변이) 및/또는 MLL 유전자를 포함하는 전위(AML의 20%에서 나타남)의 종양원성 역할을 매개하는데 포함될 수 있다는 증거가 증가하고 있다[Kumar, et al.(2005) J. Mol. Biol. 348, 183-193]. PIM1은 WT 골수세포에서보다 FLT3-ITD-변형된 AML 세포에서 더 많이 발현된다. 데이터는 PIM1뿐만 아니라 PIM2 억제가 AML 세포의 FLT3ITD-의존성 사망을 매개할 수 있음을 시사한다. 흥미롭게도, 소분자 티로신 키나제 억제제에 대한 저항성을 부여하는 FLT3 돌연변이에 의해서 변형된 세포는 PIM2, 또는 RNAi에 의한 PIM-1 및 PIM-2의 녹다운(knockdown)에 대해서 여전히 민감하였다[Kim et al.(2005) Blood 105: 1759-67].

또한, PIM2는 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 맨틀세포(mantle cell) 림프종(MCL) 또는 골수종과 같은 B-세포계로부터 유래하는 몇 가지의 악성종양의 진행과 연관되고 과발현되는 것으로 보고되었다 [Cohen et al.(2004) Leuk . Lymphoma 94:51; Huttmann et al(2006) Leukemia 20 1774].

흥미롭게도, PIM 및 AKT/PKB는 아마도 십중팔구 BAD, p21^{WAF1 / CIP1}, p27^KIP1, 또는 Cot/Tpl-2와 같은 중복성 기질에 기인하여 조혈세포의 성장 및 생존을 매개하는데 부분적으로 과다한 역할을 하는 것으로 보인다 [Choudhary et al, Mol Cell. 36 326-39(2009)].

PIM 키나제는 mTOR 억제(라파마이신) 저항성, 증식 및 생존을 조절하는 것으로 나타났다. 따라서, 몇 개의 생존 키나제를 표적으로 하는 소분자 억제제의 조합이 강력한 암 치료 플랫폼을 위해서 필수적일 수 있다 [Amaravadi R., et al. J. Clin. Invest. 2005, 115(10) 2618-24]. eIF4E 결합 단백질 1(4E-BP1)을 통한 종양원성 단백질 합성은 mTOR-독립적이고 PIM-2에 의해서 조절되는 것으로 보인다. 이러한 관찰결과는 종양원성 eIF4F 해독-개시 컴플렉스가 소분자 PIM-2 억제제에 의해서 차단될 수 있었음을 시사한다 [Tamburini J. et al. Blood 2009, 114(8), 1718-27; 및 Brault L. et al. Haematologica 2010, 95(6) 1004-1015].

키나제 억제활성을 갖는 피라졸로-퀴나졸린 유도체는 또한, Pharmacia Italia S.P.A.의 이름으로 WO 04/104007에 개시되었다. 전술한 WO 04/104007의 몇 가지 특정한 화합물은 본 발명의 일반 화학식으로부터 제외된다.

이들 발전에도 불구하고, 상기 질병에 대한 효과적인 약제에 대한 필요성은 여전하다.

발명의 요약

본 발명에서, 신규 부류의 치환된 피라졸로[4,3-h]퀴나졸린 화합물은 이전에 선행기술에서 달성된 것보다 더 높은 활성을 갖는 것으로 확인되었다. 이들 화합물은 현저하게 낮은 농도에서 인간 종양세포의 증식을 방지함으로써 항종양 효능을 최대화하면서 동시에 대량의 약물의 투여와 관련된 부작용의 위험을 감소시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다.

신규의 화합물은 하기 화학식 I로 나타낸 구조를 갖는 화합물, 및 그의 약제학적으로 허용되는 염이다:

[화학식 I]

상기 식에서,

R1은 수소, CN, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 XR4기이며, 여기에서

X는 O, S, SO, S0₂ 및 NR6으로부터 선택된 2가 래디칼이고, 여기에서

R6은 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬이거나, R6 및 R4는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 N, O 및 S로부터 선택된 1개의 추가의 헤테로 원자를 함유하는, 5 내지 6 원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴기를 형성할 수 있으며;

R2는 수소, 또는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, 직쇄 또는 분지된 C₂-C₆ 알케닐, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이고;

R3은 NR'R" 및 N(OH)R'로부터 선택된 기이며, 여기에서

R' 및 R"는 각각 독립적으로 수소, 또는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이고;

R4는 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 기이며;

R5는 수소 또는 NR'R"이고, 여기에서

R' 및 R"는 각각 독립적으로 수소, 또는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이거나, R' 및 R"는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 N, O 및 S로부터 선택된 1개의 추가의 헤테로 원자를 함유하는, 5 내지 6 원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴기를 형성할 수 있으며;

A는 -(CH₂)₂- 및 -CH=CH-로부터 선택된 2가의 기이고;

단, 여기에서

1-메틸-8-(피페리딘-1-일)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,

1-메틸-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드, 및

1-메틸-8-(메틸설포닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드는 제외된다.

본 발명은 또한, 표준 합성 변형 및 이성체, 호변이성체, 수화물, 용매화물, 컴플렉스, 대사산물, 프로드럭, 담체, N-옥사이드로 구성된 방법을 통해서 제조되는, 화학식 I로 나타낸 치환된 피라졸로[4,3-h]퀴나졸린 화합물을 합성하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한, 상기 정의된 바와 같은 화학식 I로 나타낸 치환된 피라졸로[4,3-h]퀴나졸린 화합물의 유효량을 이를 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 조절장애된 단백질 키나제 활성, 특히 인간 PIM-1, PIM-2, PIM-3, Flt-3, c-Kit, MPSl(TTK), PLK 패밀리 구성원, 다양한 이소형태의 단백질 키나제 C, Met, PAK-4, PAK-5, PERK, STLK-2, DDR-2, 오로라(Aurora) 1, 오로라 2, Bub-1, Chkl, Chk2, HER2, C-raf, B-raf rafl, Melk, PDK1, MEK1, MAPK, EGF-R, PDGF-R, FGF-R, IGF-R, PI3K, 윌(weel) 키나제, Src, Abl, Akt, MAPK, ILK, MK-2, IKK-2, Cdc7, Nek, Cdk/사이클린 키나제 패밀리, 더욱 특히 인간 PIM-1, PIM-2, PIM-3에 의해서 야기되고/되거나 이들과 관련된 질병을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 방법은 암, 세포 증식 장애, 및 면역세포-관련된 질병 및 장애로 구성된 군으로부터 선택된, 조절장애된 단백질 키나제 활성에 의해서 야기되고/되거나 그와 관련된 질병을 치료하는 것이다.

본 발명의 다른 방법은 방광암, 유방암, 결장암, 신장암, 간암, 소세포 폐암을 포함한 폐암, 식도암, 담낭암, 난소암, 췌장암, 위암, 경부암, 갑상선암, 전립선암 및 편평세포 암종을 포함한 피부암과 같은 암종; 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, B-세포 림프종, T-세포-림프종, 호지킨(Hodgkin) 림프종, 비-호지킨 림프종, 모발성 세포(hairy cell) 림프종 및 버킷(Burkett) 림프종을 포함한 림프계의 조혈성 종양; 급성 및 만성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군 및 전골수성 백혈병을 포함한 골수계의 조혈성 종양; 섬유육종 및 횡문근육종을 포함한 간엽 기원의 종양; 성상세포종, 신경아세포종, 신경교종 및 신경초종을 포함한 중추 및 말초 신경계의 종양; 흑색종, 정상피종, 기형암종, 골육종, 색소성 건피증, 각막황색종(keratoxanthoma), 갑상선 여포암, 카포시(Kaposi) 육종 및 중피종 등을 포함한 그 밖의 다른 종양을 포함하나, 이들로 제한되지 않는, 특정한 유형의 암을 치료하는 것이다.

본 발명의 또 다른 방법은 예를 들어, 양성 전립선 비대증, 가족성 선종성 용종증, 신경섬유종증, 건선, 혈관 평활세포 증식과 관련된 아테롬성 경화증, 폐섬유증, 관절염, 사구체신염, 및 수술-후 협착증 및 재발협착증과 같은 특정의 세포 증식 장애를 치료하는 것이다.

본 발명의 또 다른 방법은 염증성 및 자가면역 질환, 예를 들어, 다발성 경화증, 전신성 홍반성 낭창, 염증성 장질환(IBD), 크론(Crohn)병, 과민성 장 증후군, 췌장염, 궤양성 대장염, 게실증, 중증 근무력증, 맥관염, 건선, 공피증, 천식, 알레르기, 전신 경화증, 백반증(vitiligo), 골관절염, 연소기 류마티스성 관절염과 같은 관절염, 강직성 척추염과 같은 면역세포-관련된 질환 및 장애를 치료하는 것이다.

또한, 본 발명의 방법은 역시 종양 혈관형성 및 전이 억제뿐만 아니라 기관 이식 거부반응 및 이식편대숙주질환의 치료를 제공한다.

본 발명은 또한, 하나 이상의 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 및 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 더 나아가 세포증식억제 또는 세포독성제, 항생제-유형 약제, 알킬화제, 항대사물질제, 호르몬제, 면역학적 약제, 인터페론-유형 약제, 사이클로옥시게나제 억제제(예를 들어, COX-2 억제제), 매트릭스메탈로프로테아제 억제제, 텔로머라제 억제제, 티로신 키나제 억제제, 항-성장인자 수용체 약제, 항-HER 약제, 항-EGFR 약제, 항-혈관형성제(예를 들어, 혈관형성 억제제), 파르네실 트랜스퍼라제 억제제, ras-raf 시그날 전달경로 억제제, 세포 주기 억제제, 그 밖의 다른 cdks 억제제, 튜불린 결합제, 토포이소머라제 I 억제제, 토포이소머라제 II 억제제 등과 조합한 방사선요법 또는 화학요법 레지멘과 같은 공지의 항암 치료법과 조합한, 화학식 I의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 추가로, 키나제를 상기 정의한 바와 같은 화학식 I의 화합물의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는, PIM-1, PIM-2, PIM-3 단백질 키나제 활성을 억제하는 시험관내 방법을 제공한다.

추가로, 본 발명은 항암 요법에서 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한 복합제제로서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 그의 약제학적 조성물 및 하나 이상의 화학요법제를 포함하는 제품 또는 키트를 제공한다.

다른 관점에서, 본 발명은 의약으로 사용하기 위한, 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.

더 나아가, 본 발명은 항암 활성을 갖는 의약의 제조에 있어서의 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.

마지막으로, 본 발명은 암을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.

도 1은 화학식 I의 화합물의 제조를 포함한 화합물 I-VIII의 전환을 나타내며, 여기에서 R1은 수소, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 SR4기 또는 OR4기이고; R2, R3, R4, R5, R', R" 및 A는 상기 정의된 바와 같다.
도 2는 DMSO 처리된 세포(대조군 제1 레인)와 비교하여 화합물 85로 예시된 화학식 I의 화합물로 처리한 경우에, MV-4-11 세포(FLT3/ITD 돌연변이를 함유하는 인간 백혈병 세포주)에서의 BAD 단백질(포스포BAD)의 용량 의존적 감소를 측정하는 웨스턴 블럿 분석에 의한 pBAD(s112)의 수준을 나타낸다.

이하, 본 발명의 특정한 구체예가 상세히 언급되며, 그의 예는 첨부된 구조 및 화학식에 예시되 어 있다. 본 발명은 열거된 구체예와 함께 기술될 것이지만, 이들은 본 발명을 이들 구체예로 제한하고자 하는 것이 아닌 것으로 이해될 것이다. 그와는 반대로, 본 발명은 특허청구범위에 의해서 정의된 바와 같은 본 발명의 범위 내에 포함될 수 있는 모든 대안, 변형 및 등가물을 포함하고자 한다. 본 기술분야에서 숙련된 전문가는 본 발명을 실시하는데 사용될 수 있는 것으로 본 명세서에 기술된 것과 유사하거나 동등한 다수의 방법 및 물질을 인식할 것이다. 본 발명은 결코 기술된 방법 및 물질로 제한되지 않는다. 인용된 문헌, 특허 및 유사한 자료 중의 하나 이상이 정의된 용어, 용어 용법, 개시된 기술 등을 포함하나, 이들로 제한되지 않는, 본 발명과 상이하거나 모순되는 경우에, 본 출원이 컨트롤한다. 다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 발명에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 같은 의미를 갖는다. 본 발명에 기술된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 물질은 이하에 기술된다. 본 출원에 언급된 모든 간행물, 특허출원, 특허, 및 그 밖의 다른 문헌은 온전히 참고로 포함된다. 본 발명에서 사용된 명명법은 다른 식으로 나타내지 않는 한, IUPAC 체계적 명명법을 기초로 한다.

다른 식으로 명시되지 않는 한, 화학식 I의 화합물 그 자체뿐만 아니라 그의 모든 약제학적 조성물 또는 이들을 포함하는 모든 치료학적 처리를 언급하는 경우에, 본 발명은 본 발명의 화합물의 이성체, 호변이성체, 수화물, 용매화물, 복합체, 대사산물, 전구약물, 담체, N-옥사이드 및 약제학적으로 허용되는 염 모두를 포함한다.

다시 말해서, 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물로부터 용이하게 수득될 수 있다면, 이들의 이성체, 호변이성체, 수화물, 용매화물, 복합체, 대사산물, 전구약물, 담체 및 N-옥사이드도 또한 본 발명의 목적이다.

화학식 I이 화합물의 대사 산물은 생체 내에서, 예를 들어, 필요한 포유동물에게 투여하였을 때 이 화학식 I의 화합물이 전환되는 모든 화합물이다. 제한적인 예를 나타내지는 않지만 전형적으로, 화학식 I의 화합물을 투여하면 이 동일한 유도체는 예를 들어, 쉽게 배설되는 하이드록실화된 유도체와 같은 더욱 가용성인 유도체를 포함한 다양한 종류의 화합물로 전환될 수 있다. 따라서, 이렇게 하여 나타나는 대사경로에 따라 임의의 이들 하이드록실화된 유도체는 하나에 화학식 I의 화합물의 대사산물로 간주될 수 있다.

전구약물은 생체내에서 화학식 I에 따르는 활성 모약물(parent drug)을 방출하는 임의의 공유적으로 결합된 화합물이다.

N-옥사이드는 질소 및 산소가 부여결합(dative bond)을 통해서 속박된 화학식 I의 화합물이다.

하기 화학식 I에서 R2는 하기 화학식 Ia 및 Ib에 따라 피라졸 환의 질소 원자 중의 임의의 하나에 결합될 수 있다:

[화학식 I]

[화학식 Ia]

[화학식 Ib]

입체 중심, 또는 이성체 중심의 또 다른 형태가 본 발명의 화합물에 존재한다면, 에난티오머 및 부분입체이성체를 포함한 이러한 이성체 또는 이성체들의 모든 형태는 본 발명에 포함된다. 입체 중심을 함유하는 화합물은 라세미 혼합물, 에난티오머적으로 풍부한 혼합물로 사용될 수 있거나, 라세미 혼합물은 잘 알려진 기술을 사용하여 분리될 수 있고, 개별적인 에난티오머는 단독으로 사용될 수 있다. 화합물이 불포화된 탄소-탄소 이중결합을 갖는 경우에는 시스(Z) 및 트랜스(E) 이성체 둘 다가 본 발명의 범위 내에 포함된다.

화합물이 호변이성체 형태로 존재할 수 있는 경우에, 각각의 형태는 평형 상태로 존재하든지 하나의 형태가 주로 존재하든지 본 발명에 포함되는 것으로 생각된다.

따라서, 다른 식으로 제시되지 않는 한, 화학식 I의 화합물에서 R2가 수소인 경우에는 하기 화학식 Ia' 또는 Ib'의 호변이성체 형태 중의 단지 하나가 표시되며, 나머지 하나도 여전히 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 한다:

[화학식 Ia']

[화학식 Ib']

화합물이 케토-에놀 호변이성체와 같은 다른 호변이성체 형태로 존재할 수 있는 경우에, 각각의 호변이성체 형태는 평형 상태로 존재하든지 하나의 형태가 주로 존재하든지 본 발명에 포함되는 것으로 생각된다.

용어 아릴은 융합되거나 단일 결합에 의해서 서로에 연결된 1 내지 2 개의 환 부분을 갖는 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 탄화수소를 포함하며, 여기에서 환 중의 적어도 하나는 방향족이고; 존재하는 경우에 임의의 방향족 헤테로사이클릭 탄화수소는 또한 헤테로아릴기로도 불리며, N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 3 개의 헤테로 원자를 갖는 5 내지 6 원 환을 포함한다.

본 발명에 따르는 아릴기의 예는 예를 들어, 페닐, 비페닐, α- 또는 β-나프틸, 디하이드로나프틸, 티에닐, 벤조티에닐, 푸릴, 벤조푸라닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 피리딜, 피라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 인돌릴, 이소인돌릴, 푸리닐, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 디하이드로퀴놀리닐, 퀴녹살리닐, 벤조디옥솔릴, 인다닐, 인데닐, 트리아졸릴 등이다.

용어 "헤테로사이클릴"(또한 "헤테로사이클로알킬"로 알려짐)은 하나 이상의 탄소 원자가 질소, 산소 및 황과 같은 헤테로 원자에 의해서 대체된 3- 내지 7-원의 포화 또는 부분적으로 불포화된 카보사이클릭 환을 의미한다. 헤테로사이클릴기의 비-제한적 예는 예를 들어, 피란, 피롤리딘, 피롤린, 이미다졸린, 이미다졸리딘, 피라졸리딘, 피라졸린, 티아졸린, 티아졸리딘, 디하이드로푸란, 테트라하이드로푸란, 1,3-디옥솔란, 피페리딘, 피페라진, 모르폴린 등이다.

C₄-C₇ 사이클로알킬을 포함하는 용어 "C₃-C₇ 사이클로알킬"은 다른 식으로 제시되지 않는 한, 하나 이상의 이중결합을 함유할 수 있지만 완전히 접합된 π-전자 시스템을 갖지 않는 3- 내지 7-원의 모두 탄소인 모노사이클릭 환을 의미한다. 사이클로알킬기의 예로는 제한이 없이 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로펜텐, 사이클로헥산, 사이클로헥센, 사이클로헥사디엔, 사이클로헵탄, 사이클로헵텐, 사이클로헵타디엔이다.

C₁-C₄ 알킬을 포함하는, 용어 "직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬"은 예를 들어, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, tert-부틸, sec-부틸, n-펜틸, n-헥실 등과 같은 임의의 기를 의미한다.

용어 "직쇄 또는 분지된 C₂-C₆ 알케닐"은 예를 들어, 비닐, 알릴, 1-프로페닐, 이소프로페닐, 1-부테닐, 2-부테닐, 3-부테닐, 2-펜테닐, 1-헥세닐 등과 같은 임의의 기를 의미한다.

본 발명에 따라 다른 식으로 제시되지 않는 한, 임의의 상기 R1, R2, R4, R6, R' 및 R"기는 임의의 그들의 자유 위치에서 할로겐 원자, 니트로, 옥소기(=0), 시아노, C₁-C₆ 알킬, 폴리불소화 알킬, 폴리불소화 알콕시, 알케닐, 알키닐, 하이드록시알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴, C₃-C₇ 사이클로알킬, 하이드록시, 알콕시, 아릴옥시, 헤테로사이클릴옥시, 메틸렌디옥시, 알킬카보닐옥시, 아릴카보닐옥시, 사이클로알케닐옥시, 헤테로사이클릴카보닐옥시, 알킬리덴아미노옥시, 카복시, 알콕시카보닐, 아릴옥시카보닐, 사이클로알킬옥시카보닐, 헤테로사이클릴옥시카보닐, 아미노, 우레이도, 알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노, 헤테로사이클릴아미노, 포르밀아미노, 알킬카보닐아미노, 아릴카보닐아미노, 헤테로사이클릴카보닐아미노, 아미노카보닐, 알킬아미노카보닐, 디알킬아미노카보닐, 아릴아미노카보닐, 헤테로사이클릴아미노카보닐, 알콕시카보닐아미노, 하이드록시아미노카보닐, 알콕시이미노, 알킬설포닐아미노, 아릴설포닐아미노, 헤테로사이클릴설포닐아미노, 포르밀, 알킬카보닐, 아릴카보닐, 사이클로알킬카보닐, 헤테로사이클릴카보닐, 알킬설포닐, 아릴설포닐, 아미노설포닐, 알킬아미노설포닐, 디알킬아미노설포닐, 아릴아미노설포닐, 헤테로사이클릴아미노설포닐, 아릴티오, 알킬티오, 포스포네이트 및 알킬포스포네이트로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기, 예를 들어, 1 내지 6 개의 기에 의해서 임의로 치환될 수 있다.

마찬가지로, 적절한 경우에는 언제라도 상기 치환체 각각은 하나 이상의 전술한 기에 의해 추가로 치환될 수 있다.

이 점에 있어서, 용어 "할로겐 원자"는 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자를 의미한다.

용어 "시아노"는 -CN 잔기를 의미한다.

용어 "니트로"는 -N0₂ 기를 의미한다.

용어 "알케닐" 및 "알키닐"은 각각 이중 또는 삼중 결합을 더 갖는 임의의 전술한 직쇄 또는 분지된 C₂-C₆ 알킬기를 의미한다. 본 발명의 알케닐 또는 알키닐기의 비-제한적 예는 예를 들어, 비닐, 알릴, 1-프로페닐, 이소프로페닐, 1-부테닐, 2-부테닐, 3-부테닐, 2-펜테닐, 1-헥세닐, 에티닐, 2-프로피닐, 4-펜티닐 등이다.

용어 "폴리불소화 알킬" 또는 "폴리불소화 알콕시"는 예를 들어, 트리플루오로메틸, 트리플루오로에틸, 1,1,1,3,3,3-헥사플루오로프로필, 트리플루오로메톡시 등과 같이 한 개 이상의 불소 원자에 의해서 치환된 상기의 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬 또는 알콕시기 중의 어떤 것을 의미한다.

용어 "알콕시", "아릴옥시", "헤테로사이클릴옥시" 및 그의 파생어들은 산소 원자(-O-)를 통해서 분자의 나머지에 연결된 임의의 상기의 C₁-C₆ 알킬, 아릴 또는 헤테로사이클릴기를 의미한다.

상기한 모든 것으로부터, 명칭이 예를 들어, 아릴아미노와 같은 복합 명칭인 임의의 기는 이것이 유래하는 부분에 의해서, 예를 들어, 아릴에 의해서 추가로 치환된 아미노기에 의해서 통상적으로 이해되는 것으로 쓰인다는 것은 숙련된 전문가에게 명백하다.

마찬가지로, 예를 들어, 알킬티오, 알킬아미노, 디알킬아미노, 알콕시카보닐, 알콕시카보닐아미노, 헤테로사이클릴카보닐, 헤테로사이클릴카보닐아미노, 사이클로알킬옥시카보닐 등과 같은 임의의 용어는 알킬, 알콕시, 아릴, C₃-C₇ 사이클로알킬 및 헤테로사이클릴 부분이 상기 정의된 바와 같은 기를 포함한다.

화학식 I의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염은 무기 또는 유기산, 예를 들어, 질산, 염산, 브롬화수소산, 황산, 과염소산, 인산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 푸마르산, 락트산, 옥살산, 말론산, 말산, 말레산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 이세티온산 및 살리실산에 의한 산부가염을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 화합물의 산부가염은 하이드로클로라이드 및 메실레이트 염 사이에서 선택된다.

화학식 I의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염은 또한, 무기 또는 유기 염기, 예를 들어, 알칼리 또는 알칼리토 금속, 특히 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄 하이드록사이드, 카보네이트 또는 바이카보네이트, 아사이클릭 또는 사이클릭 아민, 바람직하게는 메틸아민, 에틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 피페리딘 등에 의한 염을 포함한다.

화학식 I의 바람직한 화합물은

R1이 CN, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 XR4기이며, 여기에서

X는 O, S, SO, S0₂ 및 NR₆으로부터 선택된 2가 래디칼이고, 여기에서

R6은 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬이거나, R6 및 R4는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 N, O 및 S로부터 선택된 한 개의 추가의 헤테로 원자를 함유하는, 5 내지 6 원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴기를 형성할 수 있으며;

R2는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, 직쇄 또는 분지된 C₂-C₆ 알케닐, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이고;

R5는 수소 또는 NR'R"이며, 여기에서

R' 및 R"는 수소이고,

R3, R4 및 A는 상기 정의된 바와 같은 화합물이다.

화학식 I의 화합물의 또 다른 바람직한 부류는

R1이 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 XR4기이며, 여기에서

X는 O, S, SO, S0₂ 및 NR₆으로부터 선택된 2가 래디칼이고, 여기에서

R6은 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬이거나, R6 및 R4는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 N, O 및 S로부터 선택된 한 개의 추가의 헤테로 원자를 함유하는, 5 내지 6 원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴기를 형성할 수 있으며;

R2는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이고;

R3은 NR'R" 및 N(OH)R'로부터 선택된 기이며, 여기에서

R' 및 R"는 수소이고,

R4, R5 및 A는 상기 정의된 바와 같은 화합물이다.

화학식 I의 화합물의 추가의 바람직한 부류는

R1이 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, 아릴 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 XR4기이며, 여기에서

X는 O, S, 및 NR6으로부터 선택된 2가 래디칼이고, 여기에서

R6은 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬이거나, R6 및 R4는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 N, O 및 S로부터 선택된 한 개의 추가의 헤테로 원자를 함유하는, 5 내지 6 원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴기를 형성할 수 있으며;

R3은 NR'R"이고, 여기에서

R' 및 R"는 수소이며;

R4는 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 기이고;

R5는 수소이며,

R2 및 A는 상기 정의된 바와 같은 화합물이다.

화학식 I의 화합물의 특히 바람직한 부류는

R1이 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬 및 아릴로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 XR4기이며, 여기에서

X는 O, S, 및 NR6으로부터 선택된 2가 래디칼이고, 여기에서

R6은 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬이거나, R6 및 R4는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 N, O 및 S로부터 선택된 한 개의 추가의 헤테로 원자를 함유하는, 5 내지 6 원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴기를 형성할 수 있으며;

R4는 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, 아릴, 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 기이고;

A는 2가의 -CH=CH-기이며,

R2, R3 및 R5는 상기 정의된 바와 같은 화합물이다.

생물학적 평가

화학식 I의 화합물의 Pim 키나제 활성의 측정은 다수의 직접 및 간접 검출방법에 의해서 가능하다. 본 발명에 기술된 특정한 예시적 화합물을 이소형태 Pim-1, Pim-2, 및 Pim-3을 포함한 그들의 Pim 키나제 결합 활성(실시예 901), 및 종양 세포에 대한 시험관내 활성(실시예 902)에 대해서 시험하였다. 본 발명의 특정한 예시적 화합물은 약 1 마이크로몰(μM) 미만의 Pim 결합 활성 IC₅₀ 값을 가졌다. 본 발명의 특정한 화합물은 약 1 마이크로몰(μΜ) 미만의 종양 세포-기본 활성 EC₅₀ 값을 가졌다. 실시예 901 및 902에 기술된 시험에서 1 μΜ 미만의 Ki/IC₅₀/EC₅₀을 갖는 화학식 I의 화합물은 Pim 키나제 억제제(Pim-1, Pim-2 및/또는 Pim-3)로서 치료학적으로 유용할 수 있다.

표 1에서의 예시적인 화학식 I의 화합물을 제조하고, 특성화하고, 본 발명의 방법에 따라 Pim 키나제의 억제에 관해서 시험하였으며, 이들은 다음의 구조 및 해당하는 명칭을 갖는다[ChemBioDraw Ultra, Version 11.0, CambridgeSoft Corp., Cambridge MA].

[표 1]

임의로 약제학적으로 허용되는 염의 형태인 본 발명의 화학식 I의 임의의 특정한 화합물에 대한 참조를 위해서는 실험 항목 및 특허청구범위를 참고한다.

본 발명은 또한, 본 기술분야에서 이용가능한 기술 및 쉽게 입수할 수 있는 출발물질을 이용하여 이하에 기술된 반응 경로 및 합성 반응식을 사용함으로써 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물의 제조방법을 제공한다. 본 발명의 특정한 구체예의 제조는 이하의 실시예에 기술되지만, 본 기술분야에서 통상적으로 숙련된 전문가는 기술된 제조방법이 본 발명의 다른 구체예를 제조하기 위해서 쉽게 적용될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 예를 들어, 본 발명에 따르는 비-예시된 화합물의 합성은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 명백한 변형에 의해서, 예를 들어, 간섭성 기를 적절하게 보호하거나, 본 기술분야에서 공지된 다른 적합한 시약으로 변화시키거나, 반응조건을 일상적으로 변형시킴으로써 수행될 수 있다. 대안적으로, 본 발명에 언급되거나 본 기술분야에서 공지된 다른 반응들은 본 발명의 다른 화합물을 제조하기 위한 적응성을 갖는 것으로 인식될 것이다.

도 1은 R1이 수소, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 SR4기 또는 OR4기이며; R2, R3, R4, R5, R', R" 및 A는 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물의 제조방법을 나타낸다.

본 기술분야에서 통상적으로 숙련된 모든 전문가는 상기한 방법에 따라 수행되는 임의의 변형반응은 예를 들어, 방해기의 보호, 본 기술분야에서 공지된 다른 적합한 시약으로의 변화, 또는 반응조건에 대한 일상적인 변형과 같은 필요한 변형을 필요로 할 수 있음을 인식할 것이다.

따라서, 본 발명의 방법은 하기 단계를 포함한다:

단계(st.) 1) 하기 화학식 II의 화합물을 산성 조건 하에서 하기 화학식 III의 하이드라진 유도체와 혼합시켜 하기 화학식 IV의 화합물을 제공하는 단계:

[화학식 II]

상기 식에서, A는 -(CH₂)₂-이고,

[화학식 III]

상기 식에서, R2는 상기 정의된 바와 같고,

[화학식 IV]

상기 식에서, A는 -(CH₂)₂-이고 R2는 상기 정의된 바와 같음; 또는

단계 1a) R2가 수소인 화학식 IV의 화합물을 하기 화학식 V의 화합물과 혼합시켜 R2가 상기 정의된 바와 같지만 수소는 아닌 화학식 IV의 화합물을 제공하는 단계:

[화학식 V]

상기 식에서, R2는 상기 정의된 바와 같으나, 수소가 아니고, Y는 요오도, 브로모, 클로로 또는 설포네이트기(예를 들어, -OS(0)₂CF₃, -OS(0)₂CH₃ 또는 -OS(0)₂PhMe)와 같은 적합한 이탈기임;

단계 2) 생성된 화학식 IV의 화합물을 디메틸포름아미드-디-알킬아세탈과 혼합시켜 하기 화학식 VI의 화합물을 제공하는 단계:

[화학식 VI]

상기 식에서, -(CH₂)₂-이고 R2는 상기 정의된 바와 같음;

단계 3) 생성된 화학식 VI의 화합물을 하기 대체 단계(단계 3a),(단계 3b) 또는 (단계 3c) 중 어느 하나에 따라 반응시켜 하기 화학식 VIII의 화합물을 제공하는 단계:

단계 3a) 하기 화학식 VIIa의 이소티오우레아 또는 그의 염과 반응시키는 단계:

[화학식 VIIa]

상기 식에서, R4는 상기 정의된 바와 같음,

단계 3b) 하기 화학식 VIIb의 이소우레아 또는 그의 염과 반응시키는 단계:

[화학식 VIIb]

상기 식에서, R4는 상기 정의된 바와 같음,

단계 3c) 하기 화학식 IX의 적합한 아미딘 또는 그의 염과 반응시키는 단계:

[화학식 IX]

상기 식에서, R1은 수소, 또는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기임,

[화학식 VIII]

상기 식에서, R1은 각각 SR4, OR4, 수소, 또는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이며, A는 -(CH₂)₂-이고 R2 및 R4는 상기 정의된 바와 같음;

단계 4) 생성된 상기 화학식 VIII의 화합물을 산화제와 혼합시키거나, Pd 또는 Pt 촉매의 존재 하에서 탈수소화 작업조건 하에 처리하여 화학식 VIII의 화합물을 제공하는 단계로서, 여기에서 R1은 각각 SR4, OR4, 수소, 또는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이고, A가 -CH=CH-이며, R2 및 R4는 상기 정의된 바와 같은 단계;

단계 5) 단계 3a), 단계 3b), 단계 3c) 또는 단계 4)에 기술된 바와 같이 수득되고, R2가 t-부틸 또는 트리틸과 같은 보호기인 화학식 VIII의 화합물을 산성 조건 하에서 반응시켜, R2가 수소인 화학식 VIII의 화합물을 수득하고, 생성된 화학식 VIII의 화합물을 하기 화학식 V의 화합물과의 반응을 통해서 R2가 상기 정의된 바와 같지만 수소는 아닌 화학식 VIIIa 및 화학식 VIIIb의 두 가지 화합물의 혼합물로 전환시키는 단계:

[화학식 V]

상기 식에서, Y는 상기 정의된 바와 같고 R2는 상기 정의된 바와 같지만 수소는 아님:

단계 6) 단계 3a), 단계 3b), 단계 3c), 단계 4) 또는 단계 5)에 기술된 바와 같이 수득된 화학식 VIII의 화합물을 대체 단계 6a), 단계 6b) 또는 단계 6c) 중 어느 하나에 따라 반응시키는 단계:

단계 6a) 암모늄 하이드록사이드 또는 하기 화학식 XII의 아민과 반응시켜 하기 화학식 I의 화합물을 수득하는 단계:

[화학식 XII]

상기 식에서, R' 및 R"는 상기 정의된 바와 같음:

[화학식 I]

상기 식에서, R1은 수소, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 SR4기 또는 OR4기이며, R3은 NR'R"이고, R5는 수소이며, R2, R4 및 A는 상기 정의된 바와 같음;

단계 6b1) 산성 또는 염기성 가수분해 조건 하에서 반응시켜 하기 화학식 XI의 화합물 또는 그의 염을 제공하는 단계:

[화학식 XI]

상기 식에서, R1은 수소, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 SR4기 또는 OR4기이며, R2, R4 및 A는 상기 정의된 바와 같음;

단계 6b2) 생성된 화학식 XI의 화합물 또는 그의 염을 염기성 조건 및 적합한 축합제의 존재 하에서, 암모늄염 또는 화학식 XII의 유도체 또는 화학식 X의 유도체와 혼합시켜 하기 화학식 I의 화합물을 제공하는 단계:

[화학식 X]

[화학식 I]

상기 식에서, R1은 수소, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 SR4기 또는 OR4기이며, R5는 수소이고, R2, R4, R3 및 A는 상기 정의된 바와 같음;

단계 6c) 강염기의 존재 하에서 암모늄염 또는 화학식 XII의 적합한 아민과 반응시켜 하기 화학식 I의 화합물을 제공하는 단계:

[화학식 I]

상기 식에서, R1은 수소, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 SR4기 또는 OR4기이며, R3은 NR'R"이고, R2, R4, R5, A, R' 및 R"는 상기 정의된 바와 같음;

임의로 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 또 다른 상이한 화합물로 전환시키고, 필요한 경우에, 화학식 I의 화합물을 그의 약제학적으로 허용되는 염으로 전환시키거나 염을 유리 화합물 I로 전환시키는 단계.

본 발명은 추가로 하기의 반응식 2에 제시된 것으로서, 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물의 제조를 위한 대체 방법을 제공한다.

[반응식 2]

상기 반응식에서, R1은 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 임의로 치환된 기이며, R2는 상기 정의된 바와 같지만 수소는 아니고, R3 및 A는 상기 정의된 바와 같으며; 이 대체 방법은 다음의 단계를 포함한다:

단계 7) 하기 화학식 XIII의 화합물을 하기 화학식 V의 화합물과 반응시키는 단계:

[화학식 XIII]

상기 식에서, R3 및 A는 상기 정의된 바와 같고,

[화학식 V]

상기 식에서, Y는 상기 정의된 바와 같고, R2는 상기 정의된 바와 같지만, 수소는 아님;

단계 8) 생성된 하기 화학식 XIV의 화합물을 하기 화학식 XV의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 I의 화합물을 제공하는 단계:

[화학식 XIV]

상기 식에서, R2는 상기 정의된 바와 같지만 수소는 아니며, R3 및 A는 상기 정의된 바와 같고,

[화학식 XV]

상기 식에서, R1은 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 임의로 치환된 기이며, Q는 -B(OH)₂, -B(OAlk)₂, -Sn(Alk)₄, -Al(Alk)₃, ZnHal, MgHal, 또는 ZrCp₂Hal과 같은, 팔라듐 매개된 탄소 결합 형성을 겪을 수 있는 적합한 기이며,

[화학식 I]

상기 식에서, R1은 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 임의로 치환된 기이며, R2는 상기 정의된 바와 같지만 수소는 아니고, R3 및 A는 상기 정의된 바와 같으며, R5는 수소임;

임의로 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 다른 상이한 화합물로 전환시키고, 필요한 경우에, 화학식 I의 화합물을 그의 약제학적으로 허용되는 염으로 전환시키거나 염을 유리 화합물 I로 전환시키는 단계.

본 발명은 추가로 하기의 반응식 3에 제시된 것으로서, 상기 정의된 바와 같은 화학식 VIII의 화합물의 제조를 위한 대체 방법을 제공한다.

[반응식 3]

상기 반응식에서, R1은 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 임의로 치환된 기이고, R2는 상기 정의된 바와 같지만 수소는 아니며, A는 상기 정의된 바와 같고; 이 대체 방법은 다음의 단계를 포함한다:

단계 9) 하기 화학식 XVIII의 화합물을 화학식 R1-Q(XV)의 화합물과 반응시켜 화학식 VIII의 화합물을 제공하는 단계:

[화학식 XVIII]

상기 식에서, R2는 상기 정의된 바와 같지만 수소는 아니며, A는 상기 정의된 바와 같고,

[화학식 XV]

상기 식에서, R1은 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 임의로 치환된 기이며, Q는 팔라듐 매개된 탄소 결합 형성을 겪을 수 있는 상기 정의된 바와 같음.

상기 정의된 바와 같이, 본 발명의 목적인 방법에 따라 제조된 화학식 I의 화합물은 잘 알려진 합성 조건에 따라 작업함으로써 화학식 I의 다른 화합물로 편리하게 전환될 수 있으며, 가능한 전환반응의 예는 다음과 같다:

전환(Conv.) a) R1이 R4-S-와 같은 기이고, 여기에서 R4는 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물을 산화 조건 하에서 R1이 R4-S(0)₂-기인 화학식 I의 화합물로 전환시키는 것:

;

전환 b) 설포닐 유도체를 화학식 R4-OH(XVI)의 화합물과 반응시킴으로써 R1이 R4-S(0)₂-와 같은 기이고, 여기에서 R4는 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물을 R1이 R4-0- 기인 화학식 I의 화합물로 전환시키는 것:

;

전환 c) 설포닐 유도체를 화학식 R4R6-NH(XVII)의 화합물과 반응시킴으로써 R1이 R4-S(0)₂-와 같은 기인 화학식 I의 화합물을 R1이 R4-NR6기이고, 여기에서 R4 및 R6은 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물로 전환시키는 것:

;

상기 식에서, R4 및 R6은 상기 정의된 바와 같음,

전환 d) 설포닐 유도체를 나트륨 시아나이드(NaCN) 또는 칼륨 시아나이드(KCN)와 반응시킴으로써 R1이 R4-S(0)₂-와 같은 기인 화학식 I의 화합물을 R1이 -CN인 화학식 I의 화합물로 전환시키는 것:

;

전환 e) R1, R3 및 A가 상기 정의된 바와 같고, R2는 수소인 화학식 I의 화합물을 하기 화학식 V의 화합물과의 반응을 통해서 R2가 상기 정의된 바와 같지만 수소는 아닌 화학식 I의 화합물로 전환시키는 것:

[화학식 V]

상기 식에서, Y'는 OH, 또는 임의로 활성화시키면 요오도, 브로모, 클로로 또는 설포네이트기(예를 들어, -OS(0)₂CF₃, -OS(0)₂CH₃ 또는 -OS(0)₂PhMe)와 같은 적합한 이탈기로 작용할 수 있는 기이며, R2는 상기 정의된 바와 같지만 수소는 아님,

;

전환 f) R2가 할로에틸인 화학식 I의 화합물을 염기성 조건을 적용함으로써 R2가 비닐인 화학식 I의 화합물로 전환시키는 것:

;

전환 g) R2가 클로로로 치환된 화학식 L-CH₂C1의 기이고, 여기에서 L은 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기인 화학식 I의 화합물을 화학식 R'R"NH(XII)의 화합물과 반응시킴으로써 R2가 L-CH₂NR'R"기이고, R' 및 R"는 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물로 전환시키는 것:

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전환 h) R2가 화학식 L-CH₂OH의 기이고, 여기에서 L은 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물을, 우선 CH₂OH기를 CHO로 전환시킨 다음에 생성된 알데히드 유도체를 적합한 환원제의 존재 하에서 화학식 R'R"NH(XII)의 화합물과 반응시킴으로써 R2가 L-CH₂NR'R"기인 화학식 I의 화합물로 전환시키는 방법:

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전환 i) R2가 화학식 L-COO알킬의 기이고, 여기에서 L은 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물을 적합한 환원제와 반응시킴으로써 R2가 L-CH₂OH인 화학식 I의 화합물로 전환시키는 것:

;

전환 j) X가 O이고, R4가 -CHO에 의해서 치환된 아릴, 즉 페닐인 화학식 I의 화합물을 적합한 환원제의 존재 하에서 화학식 R'R"-NH(XII)의 아민으로 처리함으로써 R4가 CH₂NR'R"에 의해서 치환된 아릴, 즉 페닐이고, 여기에서 R' 및 R"는 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물로 전환시키는 것:

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전환 k) X가 O이고, R4가 -NO₂에 의해서 치환된 아릴, 즉 페닐인 화학식 I의 화합물을 적합한 환원제로 처리함으로써 R4가 NH₂에 의해서 치환된 아릴, 즉 페닐인 화학식 I의 화합물로 전환시키는 것:

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전환 l) R2, R3 및 A가 상기 정의된 바와 같고 R1은 Me-S-와 같은 기인 화학식 I의 화합물을, R1은 상기 정의된 바와 같고 Q'는 팔라듐 매개된 탄소 결합 형성을 겪을 수 있는 -B(OH)₂, -MgHal, -ZnHal과 같은 적합한 기인 화학식 R1-Q'(XV)의 화합물과 반응시킴으로써, R1이 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 임의로 치환된 기인 화학식 I의 화합물로 전환시키는 것:

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전환 m) R1 및 R2가 상기 정의된 바와 같고, R5는 수소이며, A는 -CH=CH-인 화학식 I의 화합물을, 강염기의 존재 하에서 암모늄염 또는 화학식 R'R"NH(XII)의 적합한 아민과 반응시킴으로써 R5가 NR'R"인 화학식 I의 화합물로 전환시키는 것:

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전환 n) R2가 화학식 L-N(H)R'의 기이고, 여기에서 L 및 R'는 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물을, R2가 화학식 L-NR'R"의 기이고, 여기에서 R' 및 R"는 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물이 형성되도록 하는 조건 하에서 화학식 R"-CHO(XIX)의 화합물로 처리함으로써 전환시키는 것:

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전환 o) R2가 화학식 L-N(H)R'의 기이고, 여기에서 L 및 R'는 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물을, R2가 화학식 L-N(R')COR7의 기이고, 여기에서 R'는 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물이 형성되도록 하는 조건 하에서, R7은 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬이고, W는 하이드록실 또는 할로겐인 화학식 R7-COW(XX)의 화합물로 처리함으로써 전환시키는 것:

전환 p) R2가 화학식 L-N(H)R'의 기이고, 여기에서 L 및 R'는 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물을, R2가 화학식 L-N(R')CONHR8의 기이고, 여기에서 R'는 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물이 형성되도록 하는 조건 하에서, R8은 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기인 화학식 R8-N=C=0(XXI)의 화합물로 처리함으로써 전환시키는 것:

전환 q) R2가 화학식 L-N(H)R'의 기이고, 여기에서 L 및 R'는 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물을, R2가 화학식 L-N(R')NHCNHR8의 기이고, 여기에서 R'는 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물이 형성되도록 하는 조건 하에서 화학식 R8-NHC(NH)G(XXII)의 화합물로 처리함으로써 전환시키는 것:

전환 r) R1, R2 및 R3은 상기 정의된 바와 같고 A는 -CH₂-CH₂-와 같은 2가 기인 화학식 I의 화합물을, 산화제로 처리하거나, Pd 또는 Pt 촉매의 존재 하에서 탈수소화 작업 조건 하에서 처리함으로써 A가 -CH=CH-기인 화학식 I의 화합물로 전환시키는 것:

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전술한 합성방법에 따른 화학식 I의 화합물의 합성은 단계적 방식으로 수행될 수 있으며, 따라서 각각의 중간체는 후속 반응을 수행하기 전에 예를 들어, 칼럼 크로마토그래피와 같은 표준 정제기술에 의해서 분리 및 정제된다. 대안적으로, 합성 순서의 2 개 이상의 단계는 본 기술분야에서 공지된 것으로서 소위 "원-포트(one-pot)" 공정으로 수행될 수 있으며, 따라서 2 개 이상의 단계로부터 생성된 화합물만이 분리 및 정제된다.

제조방법의 단계(단계 1(st.1))에 따르면, 화학식 II의 화합물을 아세트산의 존재 하에 에탄올과 같은 용매 중에서 화학식 III의 하이드라진 또는 하이드라진 유도체와 반응시키고, 이 반응은 실온 내지 80℃ 범위의 온도에서 수행됨으로써 화학식 IV의 화합물을 수득한다.

임의로, R2가 수소인 화학식 IV의 화합물을 적합한 용매, 예를 들어, 아세토니트릴, 테트라하이드로푸란, 디메틸포름아미드 등에 용해시키고, 나트륨 하이드라이드 또는 세슘 카보네이트와 같은 적합한 염기를 그에 첨가한다. 그 후, 화학식 R2Y(V)의 화합물을 첨가하고, 혼합물을 약 2 시간 내지 약 15 시간의 시간 동안, 약 20℃ 내지 약 80℃ 범위의 온도에서 교반한다.

제조방법의 단계(단계 2)에 따르면, 화학식 IV의 엔아미논 유도체의 합성은 실온 내지 100℃ 범위의 온도에서 30 분 내지 약 24 시간 범위의 시간 동안, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 톨루엔 등과 같은 적합한 용매 중에서, 예를 들어, 디메틸포름아미드-디-tert-부틸아세탈, 디메티포름아미드-디에틸아세탈 등과 같은 N,N-디메틸포름아미드 디알킬 아세탈을 사용하여 성취된다.

제조방법의 대체 단계(단계 3a),(단계 3b) 또는(단계 3c) 중의 하나에 따르면, 화학식 VI의 화합물의 화학식 VIII의 화합물로의 전환은 화학식 VIIa의 이소티오우레아, 또는 화학식 VIIb의 이소우레아, 또는 화학식 IX의 적합한 아미딘을 사용하여 성취된다. 상기 반응들은 모두 통상적인 방법에 따라 수행된다. 예를 들어, 메틸이소티오우레아, 또는 설페이트와 같은 그의 염을 사용하는 반응은 50℃ 내지 100℃ 범위의 온도에서 2 시간 내지 약 48시간 범위의 시간 동안, 칼륨 아세테이트, 나트륨 바이카보네이트, 나트륨 또는 칼륨 카보네이트 등과 같은 염기의 존재 하에 N,N-디메틸포름아미드, 테트라하이드로푸란, 아세토니트릴 등과 같은 적합한 용매 중에서 수행된다.

제조방법의 단계(단계 4)에 따르면, 화학식 VIII의 화합물은 90℃ 내지 환류 온도 범위의 온도에서 2 시간 내지 8 시간 사이의 시간 동안 톨루엔, 1,4-디옥산, 클로로벤젠, 디클로로벤젠과 같은 적합한 용매 중에서 작업함으로써, 임의로 지지된(supported) 팔라듐 또는 백금 또는 2,3-디클로로-5,6-디시아노-l,4-벤조퀴논(DDQ)의 존재 하에서 탈수소화 반응을 겪어 화학식 VIII의 상응하는 방향족 유도체를 수득할 수 있다.

제조방법의 단계(단계 5)에 따르면, R2가 t-부틸 또는 트리틸과 같은 보호 r기인 화학식 VIII의 화합물에서 이들의 분해는 통상적인 방법에 따른 다양한 방식으로 성취될 수 있다. 바람직하게는, R2가 수소인 화학식 VIII의 화합물이 발생하도록 디클로로메탄 등과 같은 적합한 용매의 존재 하에서 염산 또는 트리플루오로아세트산과 혼합시킴으로써 수행된다.

따라서, 화학식 VIII의 수득된 화합물을 아세토니트릴 또는 N,N-디메틸포름아미드와 같은 적합한 용매 중에서 칼륨 또는 세슘 카보네이트와 같은 염기의 존재 하에 R2는 상기 정의된 바와 같지만 수소는 아니며, Y는 상기 정의된 바와 같은 화학식 R2Y(V)의 화합물과 반응시킨다. 후자의 반응은 실리카겔 크로마토그래피 또는 분취용 HPLC와 같은 공지된 방법에 의해서 분할될 수 있는 화학식 VIIIa 및 VIIIb의 위치이성체의 혼합물을 제공할 수 있다.

제조방법의 단계(단계 6a)에 따르면, 화학식 VIII의 화합물은 카복시에스테르기(-COOEt)를 카복사미드(-CONH₂), N-치환된 카복사미드(-CONHR'), 또는 N,N-이치환된 카복사미드(-CONRR")로 전환시키는 본 기술분야에서 잘 알려진 방법에 따라 화학식 I의 화합물로 변형시킨다. 바람직하게는, 이 반응은 약 50℃ 내지 약 100℃ 범위의 온도에서 메탄올/N,N-디메틸포름아미드 혼합물 중의 암모늄 하이드록사이드를 사용하여 수행된다.

유사한 작업조건이 N-치환된 카복사미드 또는 N,N-이치환된 카복사미드의 제조에 적용되며, 여기에서 적합한 일급 또는 이급 아민이 암모니아 또는 암모늄 하이드록사이드 대신에 사용된다.

바람직하게는, 제조방법의 단계(단계 6b1)에 따르면, 화학식 XI의 화합물의 상응하는 카복실산을 제공하는 화학식 VIII의 화합물의 가수분해는 산성 또는 염기성 조건 하에서 수행된다. 바람직하게는, 반응은 저급 알콜, 테트라하이드로푸란, N,N-디메틸포름아미드 또는 이들의 혼합물과 같은 적합한 용매의 존재 하에서 수성 리튬, 나트륨 또는 칼륨 하이드록사이드와 같은 알칼리성 수용액을 사용하여 수행되고; 바람직하게는 반응은 대략 실온 내지 약 100℃ 범위의 온도에서 메탄올/N,N-디메틸포름아미드 혼합물 중의 칼륨 하이드록사이드를 사용하여 수행된다. 사용된 작업조건에 따라, 화학식 XI의 화합물은 그의 산성 형태, 또는 대신으로 염으로 수득될 수 있다.

바람직하게는 제조방법의 단계(단계 6b2)에 따르면, 화학식 I의 상응하는 화합물을 제공하는 화학식 XI의 카복실산의 아미드화는 적합한 축합제, 예를 들어, 디사이클로헥실카보디이미드(DCC), 1-에틸-3-(3'-디메틸아미노프로필)카보디이미드(EDC), 3,4-디하이드로-3-하이드록시-4-옥소-1,2,3-벤조트리아진(DHBT), O-벤조트리아졸릴테트라메틸이소우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU), 벤조트리아졸-1-일옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP), 또는 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HBTU)의 존재 하에, 디클로로메탄, N,N-디메틸포름아미드, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산 또는 N,N-디메틸아세트아미드와 같은 적합한 용매 중에서 염기성 조건 하에, 바람직하게는 N,N-디이소프로필-N-에틸아민 또는 트리에틸아민을 사용하여, 암모늄 클로라이드 또는 화학식 R'R"NH(XII)의 적합한 일급 또는 이급 아민 또는 화학식 R'NHOH(X)의 치환된 하이드록실아민 유도체의 존재 하에서 수행된다. 상기의 반응은 임의로, 4-디메틸아미노피리딘과 같은 적합한 촉매의 존재 하에서, 또는 N-하이드록시벤조트리아졸과 같은 추가의 커플링제의 존재 하에서 수행된다. 대안적으로, 동일한 이 반응은 또한 예를 들어, 혼합 무수물 방법(mixed anhydride method)을 통해, 실온에서 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민 또는 피리딘과 같은 3급 아민의 존재 하에, 예를 들어, 톨루엔, 디클로로메탄, 테트라하이드로푸란, N,N-디메틸포름아미드 등과 같은 적합한 용매 중에서 에틸, 이소-프로필, 벤질 클로로포르메이트와 같은 알킬 클로로포르메이트를 사용함으로써 수행된다.

제조방법의 단계(단계 6c)에 따르면, 화학식 VIII의 화합물의 카복시에스테르 기는 암모늄 클로라이드 또는 적합한 일급 또는 이급 아민을 사용하여 THF 중의 1 N 리튬 비스-트리메틸실릴아미드와 같은 염기성 조건 하에서 카복사미드 또는 N-치환된 카복사미드 또는 N,N-이치환된 카복사미드로 전환시킬 수 있으며; 바람직하게는 이 반응은 0℃ 내지 환류 온도 범위의 온도에서 테트라하이드로푸란 중에서 수행된다.

흥미롭게도, 이 반응에서 A가 -CH=CH-인 경우에는 R3가 R'R"N-이고, R5가 수소 또는 R'R"N-기인 화학식 I의 목적하는 생성물의 혼합물이 수득되었다. 그 후에, 이들 두 가지 유도체는 통상적인 방법에 따라, 예를 들어, 크로마토그래피 또는 분취용 HPLC에 의해서 반응 혼합물로부터 분할된다.

제조방법의 단계(단계 7)에 따르면, 화학식 XIII의 화합물을 칼륨 또는 세슘 카보네이트와 같은 염기의 존재 하에 아세토니트릴 또는 디메틸포름아미드와 같은 적합한 용매 중에서 R2는 상기 정의된 바와 같지만 수소는 아니고, Y는 상기 정의된 바와 같은 화학식 R2Y(V)의 화합물과 반응시켜 화학식 XIV의 유도체를 수득한다.

제조방법의 단계(단계 8)에 따르면, 화학식 XIV의 화합물은 탄소-탄소 결합의 형성에 적합한 교차-커플링 반응 중 어느 것을 이용하여서라도 화학식 I의 화합물로 변형시킬 수 있다. 본 기술분야에서 잘 알려져 있는 상기의 반응은 예를 들어, 유기 붕소(스즈키(Suzuki) 반응), 유기 주석(스틸(Stille) 반응), 유기 마그네슘(쿠마다(Kumada) 반응), 유기 아연, 또는 유기 알루미늄, 또는 유기 지르코늄(네기쉬(Negishi) 반응) 등과 같은 적합한 유기 금속 시약을 사용한 커플링을 포함한다. 바람직한 반응은 스즈키 반응이며, 여기에서는 적절한 아릴 또는 헤테로아릴보론 유도체를 실온 내지 80℃로 변화하는 온도에서 2 시간 내지 하룻밤의 시간 동안, 디메톡시에탄 및 물과 같은 용매의 혼합물 중에서 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 디클로라이드 디클로로메탄 복합체(PdCl₂(dppf)₂ㆍCH₂Cl₂)와 같은 팔라듐 기본 촉매 및 나트륨 또는 세슘 카보네이트와 같은 염기의 존재 하에 사용한다.

제조방법의 단계(단계 9)에 따르면, 화학식 XVIII의 화합물은 단계 8에서 이미 기술된 바와 같은 탄소-탄소 결합의 형성에 적합한 교차-커플링 반응 중의 어떤 것을 이용함으로써 화학식 VIII의 화합물로 변형시킬 수 있다.

제조방법의 전환반응(전환 a)에 따르면, 티오기의 설포닐기로의 변형은 실온에서 예를 들어, 임의로 공용매로서 물의 존재 하에서 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산 또는 아세톤과 같은 적합한 용매 중의 옥손, 또는 적합한 용매, 바람직하게는 DCM의 존재 하의 m-클로로퍼벤조산과 같은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 잘 알려진 산화제와의 반응에 의해 수득될 수 있다.

제조방법의 전환반응(전환 b)에 따르면, R4가 상기 정의된 바와 같고, X가 -O-인 화학식 I의 화합물은 상응하는 설포닐 유도체를 화학식 R4-OH(XVI)의 유도체와 반응시킴으로써 쉽게 수득할 수 있다. 반응은 아세토니트릴, N,N-디메틸포름아미드 또는 디메틸설폭사이드와 같은 적합한 용매 중에서 칼륨 또는 나트륨 카보네이트, 나트륨 또는 리튬 하이드록사이드 등과 같은 염기의 존재 하에 실온 내지 약 100℃ 범위의 온도에서 작업함으로써 수행될 수 있다.

흥미롭게도, 이 반응이 A가 -CH₂-CH₂-인 화학식 I의 화합물을 사용하여 수행되는 경우에는, A가 -CH₂-CH₂-기 또는 -CH=CH-기인 화학식 I의 목적하는 생성물의 혼합물이 수득되었다. 그 후에, 이들 2 개의 유도체는 통상적인 방법에 따라, 예를 들어, 크로마토그래피 또는 분취용 HPLC에 의해서 반응 혼합물로부터 분할된다.

제조방법의 전환반응(전환 c)에 따르면, 화학식 I의 설포닐 유도체를 화학식 R4R6NH의 이급 아민과 같은 적합한 친핵체로 처리하여 R1이 R4R6N-인 화학식 I의 화합물을 생성시킨다. 상기의 반응은 동일한 아민을 과량으로 사용하거나, 대안적으로 예를 들어, 아세토니트릴, N,N-디메틸포름아미드, 디메틸설폭사이드와 같은 적합한 용매 중에서, 실온 내지 약 100℃ 범위의 온도에서 2 시간 내지 24 시간 동안 작업함으로써 성취된다.

제조방법의 전환반응(전환 d)에 따르면, 화학식 I의 설포닐 유도체의 R1이 -CN인 화학식 I의 화합물로의 전환은 예를 들어, 20℃ 내지 환류 온도 범위의 온도에서 2 시간 내지 24 시간의 시간 동안 아세토니트릴, N,N-디메틸포름아미드 또는 이들의 혼합물과 같은 적합한 용매 중에서 나트륨 시아나이드를 사용하여 성취될 수 있다.

제조방법의 전환반응(전환 e)에 따르면, 화학식 I의 화합물의 화학식 I의 또 다른 화합물로의 전환은 화학식 R2-Y'(V)의 화합물을 사용하여 성취될 수 있으며, 여기에서 Y'는 미츠노부(Mitsunobu) 조건이 사용될 수 있는 경우에는 OH이거나, Y는 할로겐 원자, 토실레이트, 메실레이트 또는 트리플레이트와 같이 임의로 활성화되면 이탈기로 작용할 수 있는 기이다.

전자의 경우에, 즉 미츠노부 프로토콜이 사용되는 경우에, 반응은 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산 1,2-디메톡시에탄, 아세토니트릴과 같은 적합한 용매 중에서 트리알킬 또는 트리아릴 포스핀, 바람직하게는 트리페닐 포스핀의 존재 하에 디에틸아조디카복실레이트(DEAD), 디이소프로필 아조디카복실레이트(DIAD) 등과 같은 디알킬 아조디카복실레이트를 사용하여 성취될 수 있다. Y가 할로겐, 또는 토실레이트, 메실레이트 또는 트리플레이트 등과 같은 기인 경우에, 전환반응은 테트라하이드로푸란, 아세토니트릴, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드 등과 같은 적합한 용매 중에서 예를 들어, NaH, K₂CO₃, Cs₂CO₃, DBU, KO-t-Bu 등과 같은 적합한 염기를 사용하여 성취될 수 있다. 상기의 반응들은 0℃ 내지 환류 온도 범위의 온도에서 30 분 내지 약 48 시간 범위의 시간 동안 수행될 수 있다.

제조방법의 전환반응(전환 f)에 따르면, R2가 할로에틸, 바람직하게는 클로로에틸인 화학식 I의 화합물을 20℃ 내지 80℃ 범위의 온도에서 염기, 바람직하게는 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]운데크-7-엔(DBU)으로 처리하여 R2가 비닐인 화학식 I의 상응하는 화합물을 수득한다.

제조방법의 전환반응(전환 g)에 따르면, R2가 화학식 L-CH₂C1인 화학식 I의 화합물을 50℃ 내지 100℃ 범위의 온도에서 적합한 시간, 예를 들어, 2 시간 내지 24 시간 동안 테트라하이드로푸란, 아세토니트릴, N,N-디메틸포름아미드 및 이들의 혼합물과 같은 적합한 용매 중에서, 예를 들어, 칼륨 카보네이트, 세슘 카보네이트, 트리에틸아민, 또는 DBU와 같은 염기의 존재 하에 화학식 NHR'R"(XII)의 일급 또는 이급 아민과 같은 적합한 친핵체와 혼합시킨다.

제조방법의 전환반응(전환 h)에 따르면, R2가 L-CH₂OH 기인 화학식 I의 화합물의 R2가 L-CH₂NR'R"기인 화학식 I의 화합물로의 전환반응은 본 기술분야에서 숙련된 전문가들 사이에서 잘 정립된 다수의 방식 및 작업 조건으로 성취될 수 있다. 단지 예로서, 우선 R2가 L-CHO기인 화학식 I의 알데히드를 형성시키고, 그 후에 이것을 환원적 아미노화 조건 하에서 화학식 NHR'R"(XII)의 아민과 반응시키는 것을 포함하는 2-단계 절차가 여기에 보고된다. 따라서, L-CH₂OH기를 갖는 화학식 I의 화합물을 우선 50℃ 내지 환류 온도 범위의 온도에서 적합한 시간, 예를 들어, 30 분 내지 4 시간 동안 에틸 아세테이트, 테트라하이드로푸란 등과 같은 적합한 용매 중에서, 예를 들어, 2-요오독시벤조산(IBX)과 같은 산화제로 처리함으로써 상응하는 알데히드로 전환시킨다. 수득된 알데히드는 그 후에 0℃ 내지 실온 사이의 온도에서 30 분 내지 6 시간 동안, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, N,N-디메틸포름아미드, 또는 이들의 혼합물과 같은 적합한 용매 중에서 예를 들어, 나트륨 시아노보로하이드라이드, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 또는 테트라메틸암모늄 트리아세톡시보로하이드라이드와 같은 환원제의 존재 하에 화학식 NHR'R"(XII)의 적합한 아민과 반응시킨다.

제조방법의 전환반응(전환 i)에 따르면, 카복실산 에스테르의 상응하는 일급 알콜로의 환원반응은 0℃ 내지 실온 범위의 온도에서 30 분 내지 24 시간의 적합한 반응시간 동안, 테트라하이드로푸란, 디에틸 에테르, 톨루엔, 에탄올 등과 같은 적합한 용매 중에서 예를 들어, 리튬 알루미늄 하이드라이드, 리튬 보로하이드라이드, 나트륨 보로하이드라이드 등과 같은 적합한 환원제를 사용함으로써 성취된다.

제조방법의 전환반응(전환 j)에 따르면, R' 및 R"가 상기 정의된 바와 같은 알데히드 잔기의 상응하는 알킬아민 유도체 -CH₂NR'R"로의 변형은 0℃ 내지 실온 범위의 온도에서 30 분 내지 6 시간 동안, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, N,N-디메틸포름아미드 또는 이들의 혼합물과 같은 적합한 용매 중에서, 환원적 아미노화 조건 하에, 바람직하게는 예를 들어, 나트륨 시아노보로하이드라이드, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드, 또는 테트라메틸암모늄 트리아세톡시보로하이드라이드와 같은 환원제를 사용하여 알데히드 유도체를 화학식 XII의 아민과 반응시킴으로써 수득될 수 있다.

제조방법의 전환반응(전환 k)에 따르면, 니트로기를 갖는 화학식 I의 화합물은 50℃ 내지 환류 온도 범위의 온도에서 30 분 내지 6 시간 동안 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 에탄올 및 물 또는 이들의 혼합물과 같은 적합한 용매 중에서 암모늄 클로라이드의 존재 하에, 환원적 조건 하에서, 바람직하게는 예를 들어, 아연 분말과 같은 환원제를 사용하여 아미노기를 갖는 화학식 I의 화합물로 전환시킨다.

제조방법의 전환반응(전환 l)에 따르면, R1이 Me-S-인 화학식 I의 화합물의 R1이 예를 들어, 아릴 또는 헤테로아릴인 화학식 I의 화합물로의 변형은 예를 들어, 화학식 R1-B(OH)₂의 유기 보론산과 같은 적합한 유기 금속 시약과의 반응에 의해서 성취된다. 이 반응은 "리베스킨드-스로글(Liebeskind-Srogl) 반응"으로 일반적으로 알려진 Pd-촉매화된 Cu-매개 탈설파이트화(desulfitative) C-C 교차 커플링이다. 상기의 반응은 환류 온도에서 30 분 내지 6 시간 동안, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, N,N-디메틸포름아미드와 같은 적합한 용매 중에서, 예를 들어, 테트라키스 트리페닐포스피노 팔라듐 [Pd(PPh₃)₄] 등과 같은 적합한 팔라듐 공급원 및 구리 티오펜-2-카복실레이트와 같은 금속 보조-인자로서 구리^(I)-카복실레이트의 존재 하에서 성취된다.

제조방법의 전환반응(전환 m)에 따르면, R5가 수소인 화학식 I의 화합물은 암모늄 클로라이드 또는 적합한 일급 또는 이급 아민을 사용하여, THF 중의 1 N 리튬 비스-트리메틸실릴아미드와 같은 강염기성 조건 하에서 R5가 R'R"N-인 화학식 I의 화합물로 전환시킬 수 있으며; 바람직하게는 이 반응은 0℃ 내지 환류 온도 범위의 온도에서 테트라하이드로푸란 중에서 수행된다.

제조방법의 전환반응(전환 n)에 따르면, L-N(H)R'와 같은 일급 또는 이급 아미노기가 존재하는 화학식 I의 화합물을 상응하는 이급 또는 삼급 아미노 유도체로 변형시킨다. 바람직하게는, 이 반응은 0℃ 내지 실온 범위의 온도에서 30 분 내지 6 시간 동안, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, N,N-디메틸포름아미드 또는 이들의 혼합물과 같은 적합한 용매 중에서, 환원적 아미노화 조건 하에서, 바람직하게는 예를 들어, 나트륨 시아노보로하이드라이드, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드, 또는 테트라메틸암모늄 트리아세톡시보로하이드라이드와 같은 환원제를 사용하여 화학식 R"CHO(XIX)의 알데히드에 의해 수행된다.

제조방법의 전환반응(전환 o)에 따르면, L-N(H)R'와 같은 일급 또는 이급 아미노기가 존재하는 화학식 I의 화합물을 화학식 R7-COW(XX)의 화합물과 반응시킴으로써 상응하는 카복사미드 유도체로 전환시킨다. 이 반응을 카복사미드의 제조에 관해서 본 기술분야에서 광범하게 공지된 다양한 방식 및 작업 조건으로 수행할 수 있음은 숙련된 전문가에게 명백하다. 예를 들어, W가 클로라이드와 같은 할로겐인 경우에, 반응은 약 -10℃ 내지 환류 온도 범위의 온도에서, 적합한 시간, 예를 들어, 약 30 분 내지 약 96 시간 동안, 예를 들어, 디클로로메탄, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세토니트릴, 또는 N,N-디메틸포름아미드 등과 같은 적합한 용매 중에서 수행된다. 반응은 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민 또는 피리딘과 같은 적절한 양자 스캐빈저(proton scavenger)이 존재 하에서 수행된다. W가 하이드록실기인 경우에, 반응은 약 -10℃ 내지 환류 온도 범위의 온도에서 적합한 시간, 예를 들어, 약 30 분 내지 약 48 시간 동안, 예를 들어, 디클로로메탄, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 아세토니트릴, N,N-디메틸포름아미드와 같은 적합한 용매 중에서, 예를 들어, 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU), 1,3-디사이클로헥실카보디이미드, 1,3-디이소프로필카보디이미드, 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드, N-사이클로헥실카보디이미드-N'-프로필메틸 폴리스티렌 또는 N-사이클로헥실카보디이미드-N'-메틸 폴리스티렌과 같은 커플링제의 존재 하에서 수행된다. 상기의 반응은 임의로, 적합한 촉매, 예를 들어, 4-디메틸아미노피리딘의 존재 하에서, 또는 N-하이드록시벤조트리아졸과 같은 추가의 커플링제의 존재 하에서 수행된다.

제조방법의 전환반응(전환 p)에 따르면, L-N(H)R'와 같은 일급 또는 이급 아미노기가 존재하는 화학식 I의 화합물은 화학식 R8-N=C=0(XXI)의 적절한 이소시아네이트와 반응시켜 상응하는 우레아를 수득함으로써 상응하는 우레아 유도체로 변형된다. 이 반응은 바람직하게는 약 20℃ 내지 환류 온도 범위의 온도에서 약 30 분 내지 약 48 시간의 시간 동안, 디클로로메탄, 테트라하이드로푸란 등과 같은 적합한 용매 중에서 수행된다.

제조방법의 전환반응(전환 q)에 따르면, L-N(H)R'와 같은 일급 또는 이급 아미노기가 존재하는 화학식 I의 화합물을 G가 -S-Me, N-S(0)₂CF₃, 또는 1H-피라졸릴과 같은 적합한 이탈기인 화학식 R8NHC(NH)-G의 화합물과 반응시킴으로써 상응하는 구아니딘 유도체로 변형시킨다. 예를 들어, 이 반응은 메탄올, 에탄올, N,N-디메틸포름아미드 및 이들의 혼합물과 같은 적합한 용매 중에서 염기성 조건 하에, 예를 들어, 트리에틸아민 또는 칼륨 카보네이트의 존재 하에서 수행될 수 있다. 우선적으로, 이 반응은 실온 내지 약 80℃ 범위의 온도에서 약 30 분 내지 약 24 시간의 시간 동안 수행된다.

제조방법의 전환반응(전환 r)에 따르면, A가 -(CH₂)₂-인 화학식 I의 화합물은 임의로 지지된 팔라듐 또는 백금 또는 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(DDQ)의 존재 하에 90℃ 내지 환류 온도 범위의 온도에서 2 시간 내지 8 시간의 시간 동안 톨루엔, 1,4-디옥산, 클로로벤젠과 같은 적합한 용매 중에서 작업함으로써 탈수소화를 겪어 화학식 I의 상응하는 방향족 유도체를 수득할 수 있다.

말할 필요도 없이, 또한 상술한 제조방법의 임의의 중간체는 원하고 필요하다면, 본 발명에서 상술한 전환반응 중의 어느 하나에서와 유사한 방식으로 작업함으로써 상이한 유도체로 전환될 수 있다.

상기한 모든 것으로부터, 본 기술분야에서 잘 알려진 방법에 따라 작업함으로써 또 다른 작용기로 더 유도체화되어 화학식 I의 다른 화합물을 유도할 수 있는 작용기를 갖는 화학식 I의 모든 화합물이 본 발명의 범위 내에 포함된다는 것은 숙련된 전문가에게 명백하다.

또한, 필요한 경우에, 반응성기는 문헌 [예를 들어,, Protective groups in organic synthesis]에 잘 알려진 방법에 따라 보호된 다음에 제거될 수 있다는 것은 숙련된 전문가에게 명백하다.

화학식 I의 화합물을 제조하는 방법의 모든 변형방법에 따르면, 출발물질 및 모든 다른 반응물들은 공지되어 있거나, 공지된 방법에 따라 쉽게 제조된다.

화학식 II의 화합물은 WO 2004/104007에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다.

화학식 XIII 및 XVIII의 화합물은 WO 2008/074788에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다.

화학식 III, VIIa, VIIb, IX, X, XII, XV, XVII, XIX, XX, XXI 및 XXII의 화합물은 상업적으로 이용할 수 있거나, 공지의 방법으로 제조될 수 있다.

화학식 V 및 XVI의 화합물은 상업적으로 이용할 수 있거나, 공지의 방법으로 제조할 수 있거나, 또는 이하의 실험부(제조예 O 내지 제조예 R)에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다.

상기한 모든 것으로부터, 전술한 제조방법 변형 중의 어느 하나에 따라 화학식 I의 화합물을 제조하는 경우에는, 원치 않는 부반응을 야기할 수 있는 출발물질 또는 그의 중간체 내의 임의의 작용기는 통상적인 기술에 따라 적절하게 보호하는 것이 필요하다는 것은 숙련된 전문가에게 명백하다. 마찬가지로, 이들 후자의 탈보호된 화합물로의 전환은 공지된 절차에 따라 수행될 수 있다.

쉽게 이해될 수 있는 바와 같이, 상술한 제조방법에 따라 제조된 화학식 I의 화합물이 이성체의 혼합물로서 수득된다면, 통상적인 기술을 사용한 이들의 화학식 I의 단일 이성체로의 분리가 본 발명의 범위 내에 포함된다.

라세메이트 분할을 위한 통상적인 기술은 예를 들어, 부분입체이성체 염 유도체의 분배 결정화 또는 분취용 키랄 HPLC를 포함한다.

본 발명의 화합물은 단일 약제로서, 또는 대신에 세포증식억제 또는 세포독성제, 항생제-유형 약제, 알킬화제, 항대사물질제, 호르몬제, 면역학적 약제, 인터페론-유형 약제, 사이클로옥시게나제 억제제(예를 들어, COX-2 억제제), 매트릭스메탈로프로테아제 억제제, 텔로머라제 억제제, 티로신 키나제 억제제, 항-성장인자 수용체 약제, 항-HER 약제, 항-EGFR 약제, 항-혈관형성제(예를 들어, 혈관형성 억제제), 파르네실 트랜스퍼라제 억제제, ras-raf 시그날 전달경로 억제제, 세포 주기 억제제, 그 밖의 다른 cdks 억제제, 튜불린 결합제, 토포이소머라제 I 억제제, 토포이소머라제 II 억제제 등과 조합한 방사선요법 또는 화학요법 레지멘과 같은 공지의 항암 치료법과 조합하여 투여될 수 있다.

고정 용량으로 제형화된 경우에, 이러한 조합 생성물은 이하에 기술된 투약량 범위 내의 본 발명의 화합물 및 공인된 투약량 범위 내의 다른 약제학적 활성제를 사용한다.

조합 제형이 부적절한 경우에, 화학식 I의 화합물은 공지의 항암제와 순차적으로 사용될 수 있다.

포유동물에게, 예를 들어, 인간에게 투여하는데 적합한 본 발명의 화학식 I의 화합물은 통상적인 경로로 투여될 수 있으며, 투약량 수준은 환자의 연령, 체중, 상태, 및 투여 경로에 따라 좌우된다.

예를 들어, 화학식 I의 화합물의 경구 투여를 위해서 채택된 적합한 투약량은 1일에 1 내지 5 회, 용량당 약 10 내지 약 500 ㎎의 범위일 수 있다. 본 발명의 화합물은 다양한 투약형으로, 예를 들어, 정제, 캅셀제, 당 또는 필름 코팅 정제, 액체 용액 또는 현탁액의 형태로 경구로; 좌제의 형태로 직장으로; 비경구적으로, 예를 들어, 근육내 또는 정맥내 및/또는 척수강내 및/또는 척수내 주사 또는 주입을 통해서 투여될 수 있다.

본 발명은 또한, 담체 또는 희석제일 수 있는 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다.

본 발명의 화합물을 함유하는 약제학적 조성물은 통상적으로 통상적인 방법에 따라 제조되며, 적합한 약제학적 형태로 투여된다. 예를 들어, 고체 경구용 형태는 활성 화합물과 함께 희석제, 예를 들어, 락토즈, 덱스트로즈, 사카로즈, 슈크로즈, 셀룰로오즈, 옥수수 전분 또는 감자 전분; 윤활제, 예를 들어, 실리카, 탈크, 스테아르산, 마그네슘 또는 칼슘 스테아레이트, 및/또는 폴리에틸렌 글리콜; 결합제, 예를 들어, 전분, 아라비아 고무, 젤라틴 메틸셀룰로즈, 카복시메틸셀룰로즈 또는 폴리비닐 피롤리돈; 붕해제, 예를 들어, 전분, 알긴산, 알기네이트 또는 나트륨 전분 글리콜레이트; 발포성 혼합물(effervescing mixtures); 염료; 감미제; 레시틴, 폴리소르베이트, 라우릴설페이트와 같은 습윤제; 및 일반적으로, 약제학적 제제에서 사용되는 비독성이며 약제학적으로 불활성인 물질을 함유할 수 있다. 이들 약제학적 제제는 공지의 방식으로, 예를 들어, 혼합, 과립화, 타정, 당-코팅, 또는 필름-코팅 방법을 이용하여 제조할 수 있다.

경구 투여를 위한 액체 분산액은 예를 들어, 시럽, 에멀션 및 현탁액일 수 있다. 예를 들어, 시럽제는 담체로서 사카로즈, 또는 글리세린 및/또는 만니톨 및 소르비톨과 함께 사카로즈를 함유할 수 있다.

현탁액 및 에멀션은 담체의 예로서 천연 고무, 한천, 나트륨 알기네이트, 펙틴, 메틸셀룰로즈, 카복시메틸셀룰로즈, 또는 폴리비닐 알콜을 함유할 수 있다. 근육내 주사를 위한 현탁액 또는 용액은 활성 화합물과 함께 약제학적으로 허용되는 담체, 예를 들어, 멸균수, 올리브유, 에틸 올리에이트, 글리콜, 예를 들어, 프로필렌 글리콜, 및 필요에 따라, 적합한 양의 리도카인 하이드로클로라이드를 함유할 수 있다.

정맥내 주사 또는 주입을 위한 용액은 담체로서 멸균수를 함유할 수 있거나, 바람직하게는 이들은 멸균, 수성, 등장성, 식염수 용액의 형태일 수 있거나, 이들은 담체로서 프로필렌 글리콜을 함유할 수 있다.

좌제는 활성 화합물과 함께 약제학적으로 허용되는 담체, 예를 들어, 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 계면활성제 또는 레시틴을 함유할 수 있다.

본 발명에 대한 어떤 제한도 두지 않으면서 본 발명을 더 잘 설명할 목적으로 이하의 실시예가 제시된다.

실험 항목

약물학

화학식 I의 화합물은 단백질 키나제 억제제로서 활성이 있으며, 따라서 예를 들어, 종양 세포의 비조절된 증식을 제한하는데 유용하다.

치료법에서, 이들은 이전에 정의된 것과 같은 다양한 종양의 치료뿐만 아니라 그 밖의 다른 세포 증식 장애 및 면역 세포-관련된 질환 및 장애의 치료에 사용될 수 있다.

PIM-1 및 2 억제제의 억제활성 및 선택된 화합물의 효력은 이하에 기술된 시험방법을 통해서 결정되었다.

임의로 약제학적으로 허용되는 염의 형태인 본 발명의 화학식 I의 어떤 특정한 화합물에 관해서는 실험 항목 및 특허청구범위를 참고로 한다. 이하의 실시예를 참고로 하여, 본 발명의 화합물은 본 발명에 기술된 방법, 또는 본 기술분야에서 잘 알려진 다른 방법을 사용하여 합성하였다.

본 발명에서 사용된 단축 용어 및 약어는 다음의 의미를 갖는다:

BSA 소혈청 알부민

Tris 2-아미노-2-(하이드록시메틸)-1,3-프로판디올

Hepes N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(2-에탄설폰산)

THF 테트라하이드로푸란

MTBE 메틸 3급 부틸 에테르

DIPEA N,N-디이소프로필에틸아민

PyBOP 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(피롤리디노)포스포늄 헥사플루오 로포스페이트

EDC 1-에틸-3-(3'-디메틸아미노프로필)카보디이미드

DHBT 3,4-디하이드로-3-하이드록시-4-옥소-1,2,3-벤조트리아진

HBTU 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트

TFA 트리플루오로아세트산

TMOF 트리메틸오르토포르메이트

DCE 디클로로에탄

DCM 디클로로메탄

DMF N,N-디메틸포름아미드

DMA N,N-디메틸아세트아미드

DMSO 디메틸설폭사이드

KDa 킬로달톤

mg 밀리그램

㎍ 마이크로그램

ng 나노그램

L 리터

㎖ 밀리리터

㎕ 마이크로리터

M 몰

mM 밀리몰

μM 마이크로몰

nM 나노몰

MHz 메가-헤르츠

Hz 헤르츠

min 분

mol 몰(moles)

TLC 박층 크로마토그래피

r.t. 실온

TEA 트리에틸아민

Hex 헥산

MeOH 메탄올

bs 브로드한 단일선(broad singlet)

Ac 아세틸

BOC tert-부틸옥시카보닐

Ac₂0 아세트산 무수물

ESI 전자분무 이온화

NaH 나트륨 하이드라이드, 광유 중의 60%

NMP N-메틸-피롤리돈

RP-HPLC 역상 고성능 액체 크로마토그래피

본 발명에 어떤 제한을 부여하지 않으면서 본 발명을 더 잘 설명할 목적으로, 이하의 실시예가 제공된다.

본 발명에서 사용된 것으로서, 제조방법, 반응식 및 실시예에서 사용된 기호(symbols) 및 관습은 동시대의 과학 문헌, 예를 들어, Journal of the American Chemical Society 또는 Journal of Biological Chemistry에서 사용된 것과 일치한다.

다른 식으로 명시되지 않는 한, 모든 물질들은 상업적 공급자들로부터 최상 등급으로 획득하여, 더 정제하지 않고 사용하였다. DMF, THF, CH₂Cl₂ 및 톨루엔과 같은 무수 용매는 Aldrich Chemical Company로부터 획득하였다. 공기- 또는 수분-민감성 화합물을 포함하는 모든 반응은 질소 또는 아르곤 대기 하에서 수행하였다.

PIM-1 키나제 활성의 억제제에 대한 생화학적 시험

추정상의 키나제 억제제의 억제활성 및 선택된 화합물의 효력은 트랜스-포스포릴화 시험을 사용하여 결정되었다.

특정한 펩타이드 또는 단백질 기질은 ³³P-γ-ATP로 추적되는 ATP의 존재 하, 및 그들 자신의 최적 완충액 및 보조인자의 존재 하에서 그들의 특정한 ser-thr 또는 tyr 키나제에 의해서 트랜스-포스포릴화된다.

포스포릴화 반응의 종료 시에, 98% 이상의 비표지된 ATP 및 방사성 ATP가 과량의 이온교환 다우엑스®(Dowex®) 수지에 의해서 포착되며; 그 후, 수지는 중력에 의해서 반응 플레이트의 바닥에 침강한다.

이어서 상등액을 배출시키고, 계수 플레이트(counting plate) 내로 옮긴 다음에 β-계수에 의해서 평가한다.

시약/시험 조건

다우엑스 ®( Dowex ®) 수지 제조:

500 g의 습윤 수지(SIGMA, 주문 제조된 수지 다우엑스®(DOWEX®) 1x8 200-400 메쉬, 2.5 Kg)를 정량하고, 150 mM 나트륨 포르메이트 pH 3.00 내에서 2 ℓ로 희석한다.

수지를 침강시킨(몇 시간) 다음에 상청액은 버린다.

2일 정도에 걸쳐서 상기한 바와 같이 3 회 세척한 후에, 수지를 침강시키고, 2 용적(wrt 수지 용적)의 150 mM 나트륨 포르메이트 완충액을 첨가한다.

그 후, pH를 측정하고, 대략 3.00이어야 한다.

세척된 수지는 1 주일 이상 동안 안정하며; 저장 수지는 사용하기 전에 4℃에서 유지시킨다.

키나제 완충액 ( KB ):

PIM-1 시험을 위한 완충액은 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 3 μM NaV0₃, 및 0.2 ㎎/㎖ BSA와 함께 pH 7.5에서 HEPES 50 mM로 구성되었다.

전장 인간 PIM-1은 문헌 [Bullock AN, et al., J. Biol. Chem. 2005, 280, 41675-82]에 기술된 바와 같이 발현시키고 정제하였다.

효소는 다음의 조건에서 자동-포스포릴화에 의한 전-활성화의 단계 후에 선형 동력학을 나타내었다:

1.7 μM PIM1은 125 μM ATP의 존재 하에 RT 28℃에서 1 시간 동안 배양한다.

시험 조건:

ATP 농도: 200 μM

³³P-γ-ATP: 6 nM

효소 농도: 1 nM

기질 농도 액타이드(Aktide)(Chemical Abstract Service Registry Number 324029-01-8): 25 μM

로봇화된 다우엑스 ®( Dowex ®) 시험:

시험 믹스(mix)는 다음으로 구성되었다:

1) 3x 효소 믹스(키나제 완충액 3X 내에서 이루어짐), 5 ㎕/웰

2) ³³P-γ-ATP와 함께 3x 기질 및 ATP 믹스(ddH20 중에서 이루어짐), 5 ㎕/웰

3) 3x 시험 화합물(ddH20 - 3% DMSO 내에 희석됨) - 5 ㎕/웰

화합물 희석 및 시험 체계에 대해서는 이하를 참조한다.

화합물의 희석

IC₅₀ 결정을 위해서, 시험 화합물을 100% DMSO 중의 1 mM 용액으로 수용하고, 96-웰 플레이트 내에 분배시킨다: 그 후, 화합물(100 ㎕/웰)을 새로운 96-웰 플레이트(A1 내지 G1)의 제1 칼럼 내에 플레이팅한다.

일련의 희석을 위해서 자동화 스테이션(Biomek FX®, Beckman)을 사용하여 칼럼 내의 모든 화합물에 대해 라인 A1부터 A10까지 100% DMSO 내에서 1:3 희석액을 생성시킨다. 또한, 4-5 카피(copies)의 딸 플레이트는 5 ㎕의 상기 제1 세트의 100% DMSO 희석 플레이트를 384-딥웰(deep well) 플레이트 내에 재포맷팅함으로써 제조한다: 시험 화합물을 갖는 이들 일련의 희석 플레이트의 하나의 카피를 시험일에 해동시키고, 작업 농도(최종 농도의 3-배)에서 162 ㎕/웰의 물로 재구성하고, IC₅₀ 측정시험을 위해서 사용한다. 표준 실험에서, 화합물의 최고 농도(3X)는 전형적으로 30 μM인 반면에, 최저 농도는 전형적으로 1.5 nM이다.

각각의 384-웰 플레이트는 Z' 및 시그날 대 배경(S/B) 비의 평가를 위한 표준 억제제 스타우로스포린 및 대조 웰의 적어도 하나의 곡선(총 효소 활성 대 비 효소 활성)를 생성시킨다.

시험 체계:

V 바닥 384-웰 플레이트(시험 플레이트)는 전술한 바와 같이 희석된(3X) 화합물 5 ㎕를 사용하여 준비한 다음에, 플레이트트랙(PlateTrak®) 12 로봇화 스테이션(Perkin Elmer; 로봇은 효소 믹스(3X)를 위한 하나의 저장소 및 ATP 믹스(3X)를 위한 하나의 저장소와 함께, 수지 분배를 위한 하나의 96-팁(tip) 헤드와 시험 시작을 위한 하나의 384-팁 피펫팅(pipetting) 헤드를 갖는다.

데이터는 통상적인 이차 시험/히트 확인(hit confirmation)에서 IC₅₀ 결정을 위한 10-희석 곡선의 s자형 피팅(sigmoidal fitting)을 제공하는 "에세이 익스플로러®(Assay Explorer®)" SW 패키지의 내부적으로 맞춤형인 버전에 의해서 분석한다.

PIM-2 키나제 억제 시험: 다우엑스 기술

키나제 완충액 ( KB ):

PIM-2 시험을 위한 완충액은 1 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 3 μM Na₃V0₄, 및 0.2 ㎎/㎖ BSA와 함께 pH 7.5에서 HEPES 50 mM로 구성되었다.

전장 인간 PIM-2는 문헌 [Fedorov O, et al.(2007) PNAS 104, 51, 20523-28]에 기술된 바와 같이 발현시키고 정제하였다.

시험 조건(최종 농도):

효소 농도 = 1.5 nM

액타이드 기질(Chemical Abstract Service Registry Number 324029-01-8) = 5 μM

ATP = 4 μM

³³P-γ-ATP = 1 nM

로봇화된 다우엑스 시험:

상기 참조: PIM-1에 대해 기술된 바와 같은 동일한 절차.

시험관내 세포 증식시험:

MV-4-11(이표현성(biphenotypic) B 골수단구성 백혈병) 세포(1250 세포/웰)를 완전 배지(10% 소 태아 혈청과 함께 RPMI 1640 또는 EMEM) 내의 백색 384 웰-플레이트 내에 접종하고, 접종한 지 24 시간 후에 0.1% DMSO에 용해된 화합물로 처리하였다. 세포를 37℃ 및 5% CO₂ 하에서 인큐베이션시키고, 72 시간 후에 플레이트를 제조자의 사용설명서에 따라 셀타이터-글로®(CellTiter-Glo®) 시험(Promega)을 사용하여 처리하였다. 셀타이터 글로®(CellTiter-Glo®)는 대사적으로 활성인 세포의 지표인 존재하는 ATP의 정량을 기초로 하는 균일한 방법이다. ATP는 광 생성을 야기하는 루시퍼라제 및 D-루시페린을 기초로 하는 시스템을 사용하여 정량화된다.

요컨대, 25 ㎕/웰의 시약 용액을 각각의 웰에 첨가하고, 5 분 진탕한 후에 마이크로플레이트는 엔비전®(Envision®; PerkinElmer) 발광측정기에 의해서 적색이었다. 발광 시그날은 배양물 내에 존재하는 세포의 수에 비례하였다.

억제활성은 에세이 익스플로러(MDL) 프로그램을 사용하여 처리군 대 대조군 데이터를 비교함으로써 평가하였다. IC₅₀은 s자형 내삽 곡선(sigmoidal interpolation curve)을 사용하여 계산하였다.

상기 억제시험의 경우에, 본 발명의 화학식 I의 화합물은 전형적으로 1 μM보다 훨씬 작은 IC₅₀을 갖는 우수한 PIM-1 억제활성, 및 전형적으로 10 μM 이하의 IC₅₀을 갖는 우수한 PIM-2 억제활성을 갖는 것으로 결론이 지어졌다. 또한, 본 발명의 화학식 I의 화합물은 전형적으로 MV-4-11 세포에서 0.010 내지 2 μM 범위의 IC₅₀을 갖는 우수한 세포 증식 억제활성을 나타낸다.

이하의 표 A는 상술한 특이적 시험관내 키나제 시험에서 PIM-1, 및 2 효소에 대해서 시험한 화학식 I의 본 발명의 몇 가지 대표적 화합물의 실험 데이터를 보고한다(IC₅₀ μM).

이하의 표 A는 또한, 선행기술의 가장 근접한 화합물 중의 몇 가지의 PIM-1 및 PIM-2에 대한 억제활성을 보고한다.

대조 화합물 1은 1-메틸-8-(피페리딘-1-일)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드(화합물 코드 B76-X06-M00(C01)-D03)이고; 대조 화합물 2는 상기 인용된 특허출원 WO 2004/104007에서의 1-메틸-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드(화합물 코드 B67-X04-M00(C01-D03)이다. 대조 화합물 1 및 2는 각각 본 발명의 특허청구에서 제외된 첫 번째 및 두 번째 화합물이다.

이하의 표 A는 또한, 골수단구성 백혈병 MV-4-11 세포에 대한 본 발명의 몇 가지 대표적 화합물의 항증식 활성을 보고한다.

[표 A]

놀랍게도, 본 발명의 화합물의 PIM-1 및 PIM-2 억제활성은 대조 화합물의 억제활성에 비해 현저하게 탁월한 것으로 결론이 지어졌다.

본 발명의 신규 화합물은 예기치 않게, 전술한 WO 2004/104007의 구조적으로 가장 근접한 선행기술 화합물에 비해서 훨씬 더 큰 PIM-1 및 PIM-2 억제활성이 부여되며, 따라서 변화된 키나제 활성과 관련된 증식 장애에 대한 치료방법에 특히 유리하다.

본 발명의 화합물의 세포독성이 PIM 키나제의 억제로부터 유래하였음을 더 입증하기 위해서, 본 발명자들은 MV-4-11 백혈병 세포주에서 PIM 억제제의 존재 또는 부재 하에서 PIM 키나제에 의한 전-세포소멸성 단백질 BAD의 포스포릴화를 검사하였다.

PIM 키나제의 하류 표적인 BAD는 Ser 112에서 PIM-1, PIM-2 및 PIM-3에 의해서 직접 포스포릴화되는 것으로 입증되었다 [Pogacic V. et al(2007) Cancer Research, 67(14); 6916-24].

본 발명의 화합물은 MV-4-11 내의 Ser 112에서 BAD의 포스포릴화를 효율적으로 및 용량-의존적으로 억제하였고, 따라서 이들 화합물은 PIM 억제제인 것으로 밝혀졌으며, 결과는 도 2에 나타내었다.

MV-4-11 세포를 6 웰 플레이트 내에 1.5 x10⁶ 세포/㎖로 플레이팅하고, 3 시간 동안 상이한 농도의 PIM-억제제로 처리하였다. 세포를 수확하고, PBS 완충액으로 세척하고, 용해 완충액(2% SDS, 1OO mM Tris ph 7.5, 1:100 포스파타제 억제제 칵테일 1(SIGMA) 및 1:100 포스파타제 억제제 칵테일 2(SIGMA) 및 완전 프로테아제 억제제(Roche))로 용해시켰다. 용해물 내의 단백질 농도는 BCA 단백질 시험 키트(Pierce)를 사용하여 정량화하였다. 동등한 양의 단백질을 SDS-PAGE 분석을 위한 4-12% 구배 트리-글리신 겔 상에 부하시켰다. 그 후에, 단백질을 웨스턴 블럿팅(Western Blotting)을 위해서 PVDF 막(Millipore)으로 전이시켰다. 막을 포스포-Bad(Ser112)에 대한 항체로 프로브화시켰다(세포 시그날링 기술).

실시예

본 발명의 일부의 화학식 I의 화합물의 합성 제조는 이하의 실시예에 기술된다.

이하의 실시예에 따라서 제조된 본 발명의 화합물은 또한 ¹H NMR 또는 HPLC/MS 분석 데이터에 의해서 특정화되었으며; HPLC/MS 데이터는 방법 1, 2, 3 및 4 중 임의의 하나에 따라 수집하였다.

HPLC MS 분석 방법 1

HPLC 장치는 2996 워터스(Waters) PDA 검출기가 장착된 워터스 액퀴티^TM(Waters Acquity^TM) UPLC 시스템, 및 전자분무(ESI) 이온 공급원이 장착된 마이크로매스 모드(Micromass mod.) ZQ 단일 사중극 질량 분석기로 구성하였다. 기기 제어, 데이터 획득 및 데이터 처리는 엠파워®(Empower®) 및 매스린스®(MassLynx®) 4.0 소프트웨어에 의해서 제공하였다.

HPLC는 BEH C18 1.7 미크론 워터스 액퀴티®(Waters Acquity®) UPLC(2.1 x 50 ㎜) 칼럼을 사용하여 45℃에서 0.8 ㎖/min의 유속으로 수행하였다. 이동상 A는 포름산 0.1% pH=3.3 완충액과 아세토니트릴(98:2)이었으며, 이동상 B는 H₂0/아세토니트릴(5:95)이었고; 구배는 2 분에 걸쳐서 5 내지 95% B였으며, 그 다음에는 0.1 분에 걸쳐서 95% B였다. 주입 용적은 2 ㎕였다. 질량 분석기는 양이온 및 음이온 모드에서 작동하였으며, 모세관 전압(capillary voltage)은 3.5 KV(ES⁺) 및 28 V(ES^~)로 설정되었고; 공급원 온도는 120℃였으며; 콘(cone)은 14 V(ES⁺) 및 2.8 KV(ES^-)였고; 질량 범위 100 내지 800 amu의 풀 스캔(full scan)이 설정되었다.

HPLC / MS 분석 방법 2

HPLC-MS 분석은 ESI(전자분무) 이온 공급원이 장치된 피니간 MAT 모드(Finnigan MAT mod.) LCQ® 이온 트랩 질량 분석기 상에서 수행되었으며, 질량 분석기는 오토샘플러(autosampler) Lc Pal(CTC Analytics) 및 UV6000LP PDA 검출기가 장치된 HPLC SSP4000(Thermo Separation)에 직접 연결된다.

HPLC는 페노메넥스 제미니(Phenomenex Gemini) C18, 3 ㎛, 50 x 4.6 ㎜ 칼럼을 사용하여 40℃에서 1.0 ㎖/min의 유속으로 수행되었다. 이동상 A는 아세테이트 완충액 5 mM pH 4.5 : 아세토니트릴 95:5(v:v)이었으며, 이동상 B는 아세테이트 완충액 5 mM pH 4.5 : 아세토니트릴 5:95(v:v)이었고, 구배는 7 분에 걸쳐서 0 내지 100% B였으며, 그 다음에 평형화시키기 전에 2 분에 걸쳐서는 100% B로 유지시켰다. 총 LC 시간은 10 분이었다. 주입 용적은 10 ㎕였다.

MS 조건: LCQ 질량 분석기는 양이온 및 음이온 모드의 전자분무 이온화(ESI) 계면과 함께 작동한다. ESI 분무기 전압 4.0 kV, 가열된 모세관 온도 255℃, 5.0 바(bar)의 압력을 갖는 외장(sheath) 가스 질소. 풀 스캔 검출 모드(50 내지 1000 amu)가 사용되었다.

MS/MS 실험은 엑스칼리버®(Xcalibur®) 소프트웨어에 의해서 자동적으로 각 스캔의 가장 강력한 이온 상에서 수행되었다. 45% 충돌 에너지가 전구체 이온의 단편화(fragmentation)를 위해서 사용되었다.

HPLC / MS 분석 방법 3

HPLC 장치는 2996 워터스 PDA 검출기가 장치된 워터스 2795 알리안스(Alliance) 시스템, 및 전자분무(ESI) 이온 공급원이 장치된 마이크로매스 모드. ZQ 단일 사중극 질량 분석기로 구성되었다. 기기 제어, 데이터 획득 및 데이터 처리는 임파워®(Empower®) 및 매스린스®(MassLynx®) 4.0 소프트웨어에 의해서 제공되었다.

HPLC는 C18, 3 미크론 페노메넥스(Phenomenex)(4.6 x 50 ㎜) 칼럼을 사용하여 30℃에서 1.0 ㎖/min의 유속으로 수행되었다. 이동상 A는 암모늄 아세테이트 5 mM pH=5.2 완충액과 아세토니트릴(95:5)이었으며, 이동상 B는 H₂O/아세토니트릴(5:95)이었고; 구배는 8 분에 걸쳐서 10 내지 90% B였고, 그 다음에 1.0 분에 걸쳐서 100% B까지 상승시켰다. 주입 용적은 10 ㎕였다. 질량 분석기는 양이온 및 음이온 모드로 작동하였으며, 모세관 전압은 3.5 KV(ES⁺) 및 28 V(ES^~)로 설정되었고; 공급원 온도는 120℃였으며; 콘은 14 V(ES⁺) 및 2.8 KV(ES^~)였고; 질량 범위 100 내지 800 amu의 풀 스캔이 설정되었다.

HPLC / MS 분석 방법 4

HPLC 장치는 996 워터스 PDA 검출기가 장치된 워터스 2790 HPLC 시스템, 및 전자분무(ESI) 이온 공급원이 장치된 마이크로매스 모드. ZQ 단일 사중극 질량 분석기로 구성되었다. 기기 제어, 데이터 획득 및 데이터 처리는 임파워 및 매스린스 4.0 소프트웨어에 의해서 제공되었다.

HPLC는 RP18 워터스 X 테라(Waters X Terra)(3.0 x 20 ㎜) 칼럼을 사용하여 25℃에서 1 ㎖/min의 유속으로 수행되었다. 이동상 A는 암모늄 하이드록사이드 0.05% pH=10 완충액과 아세토니트릴(95:5)이었으며, 이동상 B는 H₂0/아세토니트릴(5:95)이었고; 구배는 4 분에 걸쳐서 10 내지 90% B였고, 그 다음에는 1 분에 걸쳐서 90% B로 유지시켰다. 주입 용적은 10 ㎕였다. 질량 분석기는 양이온 및 음이온 모드로 작동하였으며, 모세관 전압은 2.5 KV로 설정되었고; 공급원 온도는 120℃였으며; 콘은 10 V였고; 질량 범위 100 내지 800 amu의 풀 스캔이 설정되었다.

이하의 실시예에 따라 제조된 화학식 I의 본 발명의 몇 가지 화합물은 분취용 HPLC에 의해서 정제되었다.

작업 조건은 이하에 정의되었다:

HPLC / MS 분취용 방법 1

HPLC 장치는 996 워터스 PDA 검출기가 장치된 워터스 2790 HPLC 시스템, 및 전자분무(ESI) 이온 공급원이 장치된 마이크로매스 모드. ZQ 단일 사중극 질량 분석기로 구성되었다. 기기 제어, 데이터 획득 및 데이터 처리는 임파워 및 매스린스 4.0 소프트웨어에 의해서 제공되었다.

HPLC는 RP18 워터스 X 테라 10 미크론(19 x 250 ㎜) 칼럼을 사용하여 25℃에서 20 ㎖/min의 유속으로 수행되었다. 이동상 A는 암모늄 하이드록사이드 0.05% pH=10 완충액과 아세토니트릴(95:5)이었으며, 이동상 B는 아세토니트릴이었고; 구배는 15 분에 걸쳐서 10 내지 90% B였고, 그 다음에는 3 분에 걸쳐서 90% B로 유지시켰다. 주입 용적은 10 ㎕였다.

질량 분석기는 양이온 및 음이온 모드로 작동하였으며, 모세관 전압은 2.5 KV로 설정되었고; 공급원 온도는 120℃였으며; 콘은 10 V였고; 질량 범위 100 내지 800 amu의 풀 스캔이 설정되었다.

HPLC / MS 분취용 방법 2

HPLC 장치는 996 워터스 PDA 검출기가 장치된 워터스 2790 HPLC 시스템, 및 전자분무(ESI) 이온 공급원이 장치된 마이크로매스 모드. ZQ 단일 사중극 질량 분석기로 구성되었다. 기기 제어, 데이터 획득 및 데이터 처리는 임파워 및 매스린스 4.0 소프트웨어에 의해서 제공되었다.

HPLC는 RP18 워터스 X 테라 10 미크론(19 x 250 ㎜) 칼럼을 사용하여 25℃에서 20 ㎖/min의 유속으로 수행되었다. 이동상 A는 물 중의 0.1% 트리플루오로아세트산/아세토니트릴(95:5)이었으며, 이동상 B는 아세토니트릴이었고; 구배는 15 분에 걸쳐서 10 내지 90% B였고, 그 다음에는 3 분에 걸쳐서 90% B로 유지시켰다. 주입 용적은 10 ㎕였다.

질량 분석기는 양이온 및 음이온 모드로 작동하였으며, 모세관 전압은 2.5 KV로 설정되었고; 공급원 온도는 120℃였으며; 콘은 10 V였고; 질량 범위 100 내지 800 amu의 풀 스캔이 설정되었다.

정확한 MS

정확한 질량 데이터 ESI(⁺)는 이전에 기술된 바와 같이 마이크로 HPLC 1100 애질런트(Agilent)와 직접적으로 연결된 워터스 Q-토프 울티마®(Waters Q-Tof Ultima®) 상에서 획득하였다 [M. Colombo, F. Riccardi-Sirtori, V. Rizzo, Rapid Commun. Mass Spectrom . 2004, 18, 511-517].

¹H-NMR 분광분석은 구배를 사용한 브루커 어밴스®(Bruker AVANCE®) 400MHz 단일 베이(bay) 기기 상에서 수행되었다. 이것은 QNP 프로브(상호교환가능한 4 개의 핵 프로브 - ¹H, 13C, 19F 및 31P)(NMR 방법 1)가 장치되었거나, 5 ㎜ 이중 공명 프로브 [1H(15N-31P) ID_PFG Varian]가 장치된 400.45 MHz에서 작동하는 머큐리(Mercury) VX 400 상에 장치되었다.

제조예 A

에틸 1-tert-부틸-7-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인다졸-3-카복실레이트[(IV), R2 = t-부틸, A = -(CH₂)₂-]

단계 1

실온에서 무수 에탄올(150 ㎖) 중의 에틸(3-에톡시-2-옥소사이클로헥스-3-엔-1-일)(옥소)아세테이트 10 g(42.6 mmol) 및 아세트산 5 ㎖의 용액에 tert-부틸 하이드라진 하이드로클로라이드 6 g(48 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하고, 잔류물을 DCM으로 희석하고, NaHCO₃의 포화 수용액 및 염수로 세척하였다. 유기상을 나트륨 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조물질을 에틸 아세테이트 및 헥산(1:2)으로 용출시키는 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해서 정제하여 에틸 1-tert-부틸-7-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인다졸-3-카복실레이트를 90% 수율로 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 6.08 min. ¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 4.18(q, J=6.83 Hz, 2H), 2.93-2.30(3m, 6H), 1.58(s, 9H), 1.16(t, J=6.83 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₄H₂₀N₂O₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 287.1366, 실측치 287.1356.

동일한 방법에 따르지만 하이드라진을 사용하여 다음의 화합물을 제조하였다:

에틸 7-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인다졸-3-카복실레이트 [(IV), R2 = H, A = -(CH₂)₂-]. ¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 14.39(s, 1H), 4.27(q, J=7.11 Hz, 2H), 2.87(t, J=6.10 Hz, 2H), 2.51(m, 2H), 2.04(m, 2H), 1.28(t, J=7.07 Hz, 3H).

제조예 B

에틸 1-(4-메톡시벤질)-7-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인다졸-3-카복실레이트[(IVa), R2 = p 메톡시벤질, A = -(CH₂)₂-] 및 에틸 2-(4-메톡시벤질)-7-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로-2H-인다졸-3-카복실레이트 [(IVb), R2 = p 메톡시벤질, A = -(CH₂)₂-].

단계 1a

50 mg의 에틸 7-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인다졸-3-카복실레이트 및 120 ㎎(0.37 mmol)의 세슘 카보네이트를 1 ㎖의 무수 DMF에 용해시키고, 42 ㎕(0.288 mmol)의 p-메톡시벤질 브로마이드를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 H₂0와 DCM 사이에 분배시켰다. 유기층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 섬광 칼럼 크로마토그래피(DCM/아세톤 95/5)에 의해서 정제하여 2 개의 위치이성체를 제공하였다:

에틸 1-(4-메톡시벤질)-7-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인다졸-3-카복실레이트, 20% 수율. ¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 7.10-7.30(m, 2H), 6.75-6.96(m, 2H), 5.64(s, 2H), 4.29(q, J=7.16 Hz, 2H), 3.71(s, 3H), 2.93(t, J=6.10 Hz, 2H), 2.55(dd, J=5.55, 7.26 Hz, 2H), 1.90-2.15(m, 2H), 1.30(t, J=7.14 Hz, 3H).

에틸 2-(4-메톡시벤질)-7-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로-2H-인다졸-3-카복실레이트, 25% 수율. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d₆) δ 7.12-7.32(m, 2H), 6.76-6.97(m, 2H), 5.70(s, 2H), 4.32(q, J=7.12 Hz, 2H), 3.71(s, 3H), 2.91(t, J=6.10 Hz, 2H), 2.52-2.57(m, 2H), 1.97-2.09(m, 2H), 1.30(t, J=7.08 Hz, 3H).

제조예 C

에틸(6E)-1-tert-부틸-6-[(디메틸아미노)메틸리덴]-7-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인다졸-3-카복실레이트[(VI), R2 = t-부틸, A = -(CH₂)₂-]

단계 2

중간체 에틸 1-tert-부틸-7-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인다졸-3-카복실레이트 10 g(37.8 mmol)을 50 ㎖의 N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈에 용해시키고, 110℃에서 교반하였다. 반응액을 그 온도에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시킨 다음에 H₂O와 DCM 사이에 분배시켰다. 유기층을 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켜 정량적 수율로 표제 화합물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.85 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d₆) δ 7.55(s, 1H), 4.22-4.33(m, 2H), 3.11(s, 6H), 2.82(s, 4H), 1.66(s, 9H), 1.25-1.32(m, 3H).

제조예 D

에틸 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIII), R1 = Me-S-, R2 = t-부틸, A = -(CH₂)₂-]

단계 3a

50 ㎖의 무수 DMF 중의 9 g(28.17 mmol)의 에틸(6E)-1-tert-부틸-6-[(디메틸아미노)메틸리덴]-7-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인다졸-3-카복실레이트의 용액에 9.2 g(112 mmol)의 무수 칼륨 아세테이트 및 23.52 g( 84.51 mmol)의 메틸이소티오우레아 설페이트를 첨가하였다. 반응액을 100℃에서 8 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, H₂O로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조물질을 실리카겔 크로마토그래피(에틸 아세테이트:헥산 1:3)에 의해서 정제하여 표제 화합물을 제공하였다(50%). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 7.46 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d₆) δ 8.58(s, 1H), 4.22-4.38(m, 2H), 2.95-3.01(m, 2H), 2.80-2.86(m, 2H), 2.57(s, 2H), 1.76-1.83(m, 9H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₂N₄0₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 347.1536, 실측치 347.1523.

동일한 방법을 적용하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

에틸 8-(메틸설파닐)-1-트리틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIII), R1 = Me-S-, R2 = 트리틸, A = -(CH₂)₂-]. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d₆) δ 7.19-7.35(m, 10H), 6.92-7.01(m, 6H), 4.22-4.31(m, 2H), 3.04(t, J=6.59 Hz, 1H), 2.55-2.60(m, 2H), 2.41(s, 3H), 1.22-1.30(m, 4H).

에틸 1-메틸-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트 [(VIII), R1 = Me-S-, R2 = 메틸, A = -(CH₂)₂-]. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d₆) δ 8.55(s, 1H), 4.33(s, 3H), 4.29(q, J=7.08 Hz, 2H), 2.97-3.04(m, J=1.10, 6.84 Hz, 2H), 2.88-2.95(m, 2H), 2.56(s, 3H), 1.31(t, J=7.08 Hz, 3H).

에틸 1-(2-하이드록시에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIII), R1 = Me-S-, R2 = 2-하이드록시에틸, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.27 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d₆) δ 8.55(s, 1H), 4.87(br. s., 1H), 4.83(t, J=6.04 Hz, 2H), 4.30(q, J=7.08 Hz, 2H), 3.82(t, J=5.80 Hz, 2H), 2.97-3.06(m, 2H), 2.85-2.95(m, 2H), 2.55(s, 3H), 1.32(t, J=7.08 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₅H₁₈N₄0₃S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 335.1172, 실측치 335.1175.

제조예 E

에틸 1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIII), R1 = H, R2 = Me, A = -(CH₂)₂-]

단계 3c

20 ㎖의 무수 DMF 중의 0.5 g(1.80 mmol)의 에틸(6E)-6-[(디메틸아미노)메틸리덴]-1-메틸-7-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인다졸-3-카복실레이트의 용액에 746 ㎎(5.4 mmol)의 칼륨 카보네이트 및 510 ㎎(5.4 mmol)의 포름아미딘 아세테이트를 첨가하였다. 반응액을 100℃에서 8 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, H₂O로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르와 함께 분쇄하여 표제 화합물 450 ㎎(95%)을 제공하였다. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.09(s, 1H), 8.74(s, 1H), 4.35(s, 3H), 4.31(q, J=7.08 Hz, 2H), 2.98-3.05(m, 4H), 1.33(t, J=7.08 Hz, 3H).

동일한 방법을 적용하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

에틸 1-tert-부틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIII), R1 = H, R2 = tert-부틸, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(m/z): 301.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 2 Rt 5.89 min. ¹H NMR(500 MHz, DMSO-d₆) δ 9.13(s, 1H), 8.75(s, 1H), 4.31(q, J=7.14 Hz, 2H), 2.95-3.06(m, 2H), 1.81(s, 9H), 2.85-2.95(m, 2H), 1.31(t, J=7.14 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₆H₂₀N₄O₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 301.1659, 실측치 301.1663

포름아미딘 대신에 아세트아미딘을 사용하여 제조예 E에 기술된 바와 같이 제조하였다:

에틸 1,8-디메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIII), R1 = Me, R2 = Me, A = -(CH₂)₂-]. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.62(s, 1H), 4.36(s, 3H), 4.30(q, J=7.08 Hz, 2H), 2.91-3.05(m, 4H), 2.65(s, 3H), 1.32(t, J=7.08 Hz, 3H).

에틸 1-tert-부틸-8-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트 [(VIII), R1 = Me, R2 = tert-부틸, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(m/z): 315.3 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 6.52 분.

제조예 F

에틸 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트 [(VIII), R1 = Me-S-, R2 = t-부틸, A = -CH=CH-]

단계 4

클로로벤젠 중의 1.5 g(4.35 mmol)의 에틸 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트 및 1.97 g(8.7 mmol)의 DDQ의 용액을 4 시간 동안 환류 하에 가열하였다. 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트로 용해시키고, NaHCO₃의 포화 수용액으로 세척하였다. 유기상을 Na₂S0₄로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조물질을 에틸 아세테이트 및 헥산(1:4)으로 용출시키는 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해서 정제하여 1.19 g(80%)의 표제 화합물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 7.78 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.52(s, 1H), 8.18-8.43(m, 1H), 7.89(d, J=8.79 Hz, 1H), 4.24-4.61(m, 2H), 2.74(s, 3H), 2.00(s, 9H), 1.40(t, J=7.08 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₀N₄O₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 345.1380, 실측치 345.1371.

상기 예에 기술된 것과 동일한 방법을 사용하여 이하의 유사체를 또한 합성하였다:

에틸 1-메틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIII), R1 = Me-S-, R2 = 메틸, A = -CH=CH-]. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) 시프트(Shift) 9.49(s, 1H), 8.15(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.82(d, J=8.79 Hz, 1H), 4.74(s, 3H), 4.44(q, J=7.20 Hz, 2H), 2.73(s, 3H), 1.40(t, J=7.14 Hz, 3H)

에틸 1-(2-하이드록시에틸)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트 [(VIII), R1 = Me-S-, R2 = 2-하이드록시에틸, A = -CH=CH-]. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.49 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.49(s, 1H), 8.17(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.83(d, J=8.79 Hz, 1H), 5.24(t, J=5.92 Hz, 2H), 4.39-4.49(m, 2H), 3.98(t, J=5.80 Hz, 2H), 2.70(s, 3H), 1.41(t, J=7.14 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₅H₁₆N₄0₃S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 333.1016, 실측치 333.1017.

에틸 1-tert-부틸-8-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIII), R1 = Me-, R2 = tert-부틸, A = -CH=CH-]. LC/MS(m/z): 313.2 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 2 Rt 6.79. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d₆) δ 9.62(s, 1H), 8.33(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.92(d, J=8.79 Hz, 1H), 4.39-4.50(m, 2H), 2.92(s, 3H), 2.02(s, 9H), 1.41(t, J=7.08 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₀N₄O₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 313.1659, 실측치 313.1653.

에틸 1-tert-부틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트 [(VIII), R1 = H, R2 = tert-부틸, A = -CH=CH-]. LC/MS(m/z): 299.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 2 Rt 6.36 min. ¹H NMR(500 MHz, DMSO-d₆) δ 9.75(s, 1H), 9.56(s, 1H), 8.44(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.98(d, J=8.79 Hz, 1H), 4.46(q, J=7.14 Hz, 2H), 2.01(s, 9H), 1.41(t, J=7.00 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₆H₁₈N₄0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 299.1503, 실측치 299.1502

실시예 1: 1-(2-하이드록시에틸)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2= 2-하이드록시에틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 1)

단계 6a

메탄올 중의 7 N NH₃ 10 ㎖ 중의 1.2 g(3.61 mmol)의 에틸 1-(2-하이드록시에틸)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트의 현탁액을 120℃에서 4 시간 동안 마이크로웨이브 조사에 적용하였다. 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하고, 잔류물을 디에틸 에테르로 희석하고, 고체를 여과하여 0.6 g(55%)의 표제 화합물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.29 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.46(s, 1H), 8.28(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.84(s, 1H), 7.73(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.52(br. s., 1H), 5.21(t, J=5.98 Hz, 2H), 4.82-4.96(m, J=0.61 Hz, 1H), 3.94-4.07(m, 2H), 2.70(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₃N₅0₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 304.0863, 실측치 304.0857.

상기 실시예에 기술된 것과 동일한 방법을 사용하여 이하의 유사체들을 또한 합성하였다:

1-tert-부틸-8-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-, R2= tert-부틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 5) LC/MS(m/z): 284.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 5.95 분.

1-tert-부틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R2= tert-부틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 3) LC/MS(m/z): 270.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 4.55 분.

실시예 2: 1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = H, R2= Me, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-]

단계 6b1 및 단계 6b2

단계 a. 에탄올(30 ㎖) 및 300 ㎎(5.2 mmol)의 칼륨 하이드록사이드 중의 440 ㎎(1.74 mmol)의 에틸 1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트의 현탁액을 2 시간 동안 환류 하에 가열하였다. 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하고, 잔류물을 에탄올(3 ㎖)로 희석하고, 고체를 여과하여 374 ㎎(80%)의 칼륨 1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트를 제공하였다.

단계 b. DMF(10 ㎖) 중의 200 ㎎(0.74 mmol)의 칼륨 1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트의 현탁액에 286 ㎎(1.49 mmol)의 EDCI, 1 ㎖(10 mmol)의 DIPEA, 및 300 ㎎(1.98 mmol)의 HOBt-NH₄를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하고, 이어서 용액을 DCM으로 희석하고, NaHCO₃의 포화 수용액으로 세척하였다. 유기층을 Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 조물질을 사이클로헥산/EtOAc 4/1로 용출시키는 섬광 크로마토그래피에 의해서 정제하여 백색 고체로서 118 ㎎(70%)의 표제 화합물을 수득하였다. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.08(s, 1H), 8.73(s, 1H), 7.51(bs, 2H), 4.33(s, 3H), 3.05(m, 2H), 2.97(m, 2H).

상기 실시예에 기술된 것과 동일한 방법을 사용하여 이하의 유사체를 또한 합성하였다:

1-tert-부틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = H, R2= tert-부틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 2) LC/MS(m/z): 272 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 2 Rt 4.28 min. ¹H NMR(500 MHz, DMSO-d₆) 9.10(s, 1H), 8.73(s, 1H), 7.41(br. s., 1H), 7.31(br. s., 1H), 2.97-3.03(m, 2H), 2.83-2.91(m, 2H), 1.81(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₄H₇N₅0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 272.1506, 실측치 272.1514

실시예 3

1-(2-하이드록시에틸)-8-메톡시-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = R4 = Me, X = O, R2= 2-하이드록시에틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 6)

단계 3b, 단계 4, 단계 6a

에틸 1-(2-하이드록시에틸)-8-메톡시-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트의 제조(단계 3b)

50 ㎖의 무수 DMF 중의 15 g(49 mmol)의 에틸(6E)-6-[(디메틸아미노)메틸리덴]-1-(2-하이드록시에틸)-7-옥소-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인다졸-3-카복실레이트의 용액에 14.4 g(147 mmol)의 무수 칼륨 아세테이트 및 12.60 g(73.0 mmol)의 메틸이소우레아 설페이트를 첨가하였다. 반응액을 100℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, H₂O로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조물질을 칼럼(에틸 아세테이트:헥산 1:3)에 의해서 정제하여 1.2 g(10%)의 표제 화합물을 제공하였다. HRMS(ESI) C₁₅H₁₈N₄0₄에 대한 계산치 [M+H]⁺ 319.3278, 실측치 319.3256.

에틸 1-(2-하이드록시에틸)-8-메톡시-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트의 제조(단계 4)

톨루엔(20 ㎖) 중의 1.2 g(3.76 mmol)의 에틸 1-(2-하이드록시에틸)-8-메톡시-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트의 현탁액에 500 ㎎(2.2 mmol)의 4,5-디클로로-3,6-디옥소사이클로헥사-1,4-디엔-1,2-디카보니트릴을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 바이알 내에서 3 시간 동안 100℃에서 마이크로웨이브 조사에 적용하였다. 휘발성 물질을 증발시키고, 조물질을 에틸 아세테이트로 용해시키고, 포화 NaHC0₃로 분배시키고, 유기층을 농축 건조시켰다. 잔류물을 크로마토그래피(에틸 아세테이트/헥산 7/3)에 의해서 정제하여 520 ㎎(46%)의 목적하는 화합물을 수득하였다. HRMS(ESI) C₁₅H₁₆N₄0₄에 대한 계산치 [M+H]⁺ 317.3119, 실측치 317.3126.

제조된 250 ㎎(0.79 mmol)의 에틸 1-(2-하이드록시에틸)-8-메톡시-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트를 메탄올 중의 7 M NH_{3 (}8 ㎖)에 용해시켰다. 혼합물을 밀봉된 바이알 내에서 4 시간 동안 120℃에서 마이크로웨이브 조사에 적용하였다. 휘발성 물질을 증발시키고, 조물질을 크로마토그래피(용출제 DCM/MeOH 95/5)에 의해서 정제하여 136 ㎎(60%)의 목적하는 화합물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.75 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.51(s, 1H), 8.20(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.82(br. s., 1H), 7.74(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.51(br. s., 1H), 5.19(t, J=5.92 Hz, 1H), 4.90(t, J=6.29 Hz, 3H), 4.12(s, 3H), 3.97-4.07(m, J=5.00 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₃N₅0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 288.1091, 실측치 288.1086.

제조예 G

칼륨 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(XI), R1 = Me-S-, R2= tert-부틸, A = -CH=CH-]

단계 6b1

에틸 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트(300 ㎎, 0.87 mmol)를 2 ㎖의 무수 에탄올에 현탁시키고, 실온에서 2 시간 동안 에탄올 중의 칼륨 하이드록사이드의 1.5 M 용액(5 ㎖, 7.5 mmol)으로 처리하였다.생성된 침전을 여과에 의해 수거하여 회백색 고체로서 215 ㎎(70%)의 표제 화합물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.79 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d₆) δ 9.38(s, 1H), 8.61(d, J=8.54 Hz, 1H), 7.58(d, J=8.67 Hz, 1H), 2.72(s, 3H), 1.95(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₅H₁₆N₄0₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 317.1067, 실측치 317.1052.

실시예 4

1-tert-부틸-N-메틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2= tert-부틸, R' = Me, A = -CH=CH-](화합물 7)

단계 6b2

무수 N,N-디메틸포름아미드(2 ㎖) 중의 칼륨 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트(50 ㎎, 0.142 mmol)의 현탁액을 N,N-디이소프로필에틸아민(100 ㎕, 0.71 mmol)의 존재 하에서, 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HBTU)(82 ㎎, 0.255 mmol) 및 메틸아민 하이드로클로라이드(15 ㎎, 0.213 mmol)로 처리하였다. 반응액을 3 시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시키고, 유기층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조생성물을 칼럼 크로마토그래피(EtOAc/헥산 7/3)에 의해서 정제하여 회백색 고체로서 20 ㎎(45%)의 표제 화합물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 6.89 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.49(s, 1H), 8.42(d, J=8.67 Hz, 1H), 8.32(d, J=4.52 Hz, 1H), 7.80(d, J=8.67 Hz, 1H), 2.87(d, J=4.76 Hz, 3H), 2.74(s, 3H), 1.98-2.04(m, 9H). HRMS(ESI) C₁₆H₁₉N₅0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 330.1383, 실측치 330.1383.

유사한 방식으로 수행하여 이하의 화합물을 제조하였다:

1-tert-부틸-N-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2= tert-부틸, R' = 2-(디메틸아미노)에틸, A = -CH=CH-](화합물 8) LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.28 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.49(s, 1H), 8.43(d, J=8.67 Hz, 1H), 8.22(t, J=5.86 Hz, 1H), 7.81(d, J=8.67 Hz, 1H), 3.44(q, J=6.59 Hz, 2H), 2.74(s, 3H), 2.46(t, J=6.77 Hz, 2H), 2.21(s, 6H), 2.01(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₉H₂₆N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 387.1962, 실측치 387.1974.

1-tert-부틸-N-(2-하이드록시에틸)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = Me-S-, R2= tert-부틸, R' = 2-하이드록시에틸, A = -CH=CH-](화합물 9) LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 6.07 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.49(s, 1H), 8.43(d, J=8.54 Hz, 1H), 8.22(t, J=5.92 Hz, 1H), 7.81(d, J=8.67 Hz, 1H), 4.80(t, J=5.43 Hz, 1H), 3.58(q, J=6.02 Hz, 2H), 3.43(q, J=6.27 Hz, 2H), 2.74(s, 3H), 2.01(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₁N₅0₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 360.1489, 실측치 360.1495.

1-tert-부틸-N-(1-메틸피페리딘-4-일)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3 -h]퀴나졸린-3-카복사미드 [R1= [(I), R1 = Me-S-, R2= tert-부틸, R' = 1-메틸피페리딘-4-일, A = -CH=CH-](화합물 10) LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.09 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.48(s, 1H), 8.40(d, J=8.67 Hz, 1H), 8.06(d, J=8.06 Hz, 1H), 7.80(d, J=8.79 Hz, 1H), 3.84(dd, J=3.30, 7.57 Hz, 1H), 2.74-2.83(m, 2H), 2.73(s, 3H), 2.18(s, 3H), 2.01(s, 9H), 1.94-1.99(m, 2H), 1.63-1.84(m, 4H). HRMS(ESI) C₂₁H₂₈N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 413.2118, 실측치 413.2112.

1-tert-부틸-N-[2-(1H-이미다졸-5-일)에틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[R1[(I), R1 = Me-S-, R2= tert-부틸, R' = 2-(1H-이미다졸-5-일)에틸, A = -CH=CH-](화합물 11) LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.49 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.49(s, 1H), 8.55(d, J=2.93 Hz, 1H), 8.43(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.81(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.57(d, J=0.98 Hz, 1H), 6.89(s, 1H), 3.51-3.64(m, 2H), 2.82(t, J=7.38 Hz, 2H), 2.70-2.76(m, 3H), 2.01(s, 9H). HRMS(ESI) C₂₀H₂₃N₇OS에 대한 계산치 [M+H]⁺ 410.1758, 실측치 410.1751.

제조예 H

에틸 8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트 [(VIII), R1= Me-S-, R2 = H, A = -CH=CH-]

단계 5

에틸 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트(800 ㎎, 2.32 mmol)를 트리플루오로아세트산(5 ㎖)으로 처리하였다. 생성된 혼합물을 70℃로 가열하고, 4 시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 중에서 제거한 후에, 잔류물을 DCM으로 용해시키고, 포화 NaHC0₃로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 연황색 고체로서 표제 화합물(670 ㎎, >99%)을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.66 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d₆) δ 9.50(s, 1H), 8.14(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.80(d, J=8.79 Hz, 1H), 4.41-4.47(m, 2H), 2.75(s, 3H), 1.41(t, J=7.14 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₂N₄0₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 289.0754, 실측치 289.0752.

제조예 I

에틸 1-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIIIa), R1 = Me-S-, R2 = 2-(디메틸아미노)에틸, A = -CH=CH-], 및

에틸 2-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIIIb), R1 = Me-S-, R2 = 2-(디메틸아미노)에틸, A = -CH=CH-]

단계 5

무수 디메틸포름아미드(4 ㎖) 중의 에틸 8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트(150 ㎎, 0.52 mmol)의 용액에 세슘 카보네이트(339 ㎎, 1.04 mmol)를 첨가하고, 이어서 2-브로모-N,N-디메틸에탄아민(135 ㎎, 0.88 mmol)을 첨가하였다. 균질한 혼합물을 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 처리하고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조물질을 EtOAc/에탄올 85/15로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해서 정제하여 주이성체로서 에틸 1-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트(60 ㎎, 32%) [¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.51(s, 1H), 8.16(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.83(d, J=8.79 Hz, 1H), 5.29(t, J=6.59 Hz, 1H), 4.32-4.49(m, 2H), 2.94(br. s., 2H), 2.71(s, 3H), 2.24(br. s., 6H), 1.41(t, J=7.08 Hz, 3H)]; 및

부이성체로서 에틸 2-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트(20 ㎎, 10%) [¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.39(s, 1H), 8.26(d, J=8.78 Hz, 1H), 7.87(d, J=8.78 Hz, 1H), 4.66(t, J=6.57 Hz, 1H), 4.45(q, J=7.06 Hz, 2H), 2.71(br. s., 3H), 2.67(s, 2H), 2.37(br. s., 6H), 1.46(t, J=7.08 Hz, 3H)]를 제공하였다.

실시예 5

1-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3 -h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2= 2-(디i메틸아미노)에틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 12)

단계 6c

에틸 1-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트(46 ㎎, 0.128 mmol)를 2 ㎖의 테트라하이드로푸란에 현탁시켰다. 암모늄 클로라이드(20 ㎎, 0.384 mmol), 및 THF 중의 1 N LiN(TMS)₂₍0.8 ㎖, 0.8 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 그 후, 용매를 증발 건조시키고,잔류물을 실리카겔 상에서 섬광 크로마토그래피(용출제: DCM/MeOH/NH₄OH 95/5/0.1)에 의해서 정제하여 18 ㎎(42%)의 표제 화합물 및 2 ㎎의 부생성물 6-아미노-1-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.75 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.48(s, 1H), 8.27(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.84(br. s., 1H), 7.74(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.54(br. s., 1H), 5.25(t, J=6.71 Hz, 2H), 2.93(br. s., 2H), 2.71(s, 3H), 2.23(br. s., 6H). HRMS(ESI) C₁₅H₁₈N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 331.1336, 실측치 331.1334.

6-아미노-1-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [R1= [(I), R1 = Me-S-, R2= 2-(디메틸아미노)에틸, R3 = NH₂, R5= NH₂, A = -CH=CH-](화합물 13)

LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.97 분. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.01(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.88(br. s., 1H), 7.84(d, J=8.91 Hz, 1H), 7.74(br. s., 1H), 7.45(br. s., 1H), 5.22(t, J=5.61 Hz, 2H), 2.88(br. s., 2H), 2.58(s, 3H), 2.15-2.29(m, J=6.47 Hz, 6H). HRMS(ESI) C₁₅H₁₉N₇0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 346.1445, 실측치 346.1439.

실시예 6: 2-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2= 2-(디메틸아미노)에틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 14)

단계 6a

메탄올 중의 7 N NH₃ 4 ㎖ 중의 20 ㎎(0.055 mmol)의 에틸 2-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트의 현탁액을 120℃에서 4 시간 동안 마이크로웨이브 조사에 적용하였다. 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(용출제 DCM/MeOH/NH₃ 97/3/1)에 의해서 정제하여 2.6 ㎎(15%)의 표제 화합물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.13 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.34(s, 1H), 8.34(br. S., 1H), 8.04(br. S., 1H), 7.80(d, J=8.91 Hz, 1H), 7.59(d, J=9.03 Hz, 1H), 4.89(t, J=6.47 Hz, 2H), 2.80(t, J=6.41 Hz, 2H), 2.69(s, 3H), 2.18(s, 6H). HRMS(ESI) C₁₅H₁₈N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 331.1336, 실측치 331.1331.

실시예 7: tert-부틸{2-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]에틸}카바메이트[(I), R1 = Me-S-, R2= N₁-2-[(tert-부톡시카보닐)아미노]에틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-], 및

tert-부틸{2-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-2-일]에틸}카바메이트[(I), R1 = Me-S-, R2= N₂-2-[(tert-부톡시카보닐)아미노]에틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-]

무수 디메틸포름아미드(4 ㎖) 중의 에틸 8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트(200 ㎎, 0.69 mmol)의 용액에 세슘 카보네이트(337 ㎎, 1.03 mmol)에 이어서 tert-부틸(2-브로모에틸)카바메이트(186 ㎎, 0.83 mmol)를 첨가하였다. 균질한 혼합물을 실온에서 48 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 처리하고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조물질을 EtOAc/에탄올 85/15로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해서 정제하여 2 가지 미분할된 위치이성체 에틸 1-{2-[(tert-부톡시카보닐)아미노]에틸}-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트 및 에틸 2-{2-[(tert-부톡시카보닐)아미노]에틸}-8-(메틸설파닐)-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트의 혼합물(282 ㎎, 95%)을 제공하였다.

수득된 2 개의 위치이성체의 혼합물을 메탄올 중의 7 N NH₃ 10 ㎖에 현탁시키고, 120℃에서 5 시간 동안 마이크로웨이브 조사에 적용하였다. 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(용출제 DCM/MeOH/NH₃ 97/3/1)에 의해서 정제하여 주이성체로서 145 ㎎(55%)의 tert-부틸{2-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]에틸}카바메이트 [LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.53 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.46(s, 1H), 8.27(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.74(s, 2H), 7.54(br. S., 1H), 6.91(t, J=6.29 Hz, 1H), 5.21(t, J=5.86 Hz, 2H), 3.58(q, J=6.14 Hz, 2H), 2.71(s, 3H), 1.23(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₈H₂₂N₆0₃S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 403.1547, 실측치 403.1534; 및

부이성체로서 18 ㎎(7%)의 tert-부틸 {2-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-2-일]에틸}카바메이트 [LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.08 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.33(s, 1H), 8.08(d, J=15.01 Hz, 2H), 7.84(d, J=8.91 Hz, 1H), 7.60(d, J=8.91 Hz, 1H), 6.95(t, J=6.71 Hz, 1H), 4.82(t, J=6.29 Hz, 2H), 3.49(q, J=6.51 Hz, 2H), 2.69(s, 3H), 1.28(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₈H₂₂N₆0₃S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 403.1547, 실측치 403.1552]를 수득하였다.

이 방법에 따라 수행함으로써, 이하의 화합물을 제조하였다:

tert-부틸 4-{[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]메틸}피페리딘-1-카복실레이트 [(I), R1 = Me-S-, R2= N₁-tert-부틸 4-메틸피페리딘-1-카복실레이트, R3 = NH₂, A = -CH=CH-] LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 6.56 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.47(s, 1H), 8.28(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.81(s, 1H), 7.74(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.55(s, 1H), 5.07(d, J=7.57 Hz, 2H), 3.90(d, J=12.08 Hz, 2H), 2.69-2.70(m, 3H), 2.59-2.68(m, J=2.01, 3.72 Hz, 2H), 2.22-2.41(m, 1H), 1.41-1.51(m, J=6.10 Hz, 2H), 1.38(s, 9H), 1.22(dq, J=4.33, 12.31 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₂₂H₂₈N₆0₃S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 479.1836, 실측치 479.1849.

실시예 8: 1-(2-아미노에틸)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S-, R2= N₁ 2-아미노에틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 15)

tert-부틸{2-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]에틸}카바메이트(40 ㎎, 0.1 mmol)를 1,4-디옥산 중의 4 M HCl 1 ㎖로 처리하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하고, 수득된 잔류물을 디에틸 에테르와 함께 분쇄하고, 여과하고, Et₂0로 세척하고, 진공 중에서 건조시켜 백색 고체로서 32 ㎎(97%)의 표제 화합물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.59 min. HCl염, ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.50(s, 1H), 8.29(d, J=8.67 Hz, 1H), 8.12(br. s., 2H), 8.04(br. s., 1H), 7.78(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.65(s, 1H), 5.32-5.58(m, 2H), 3.57-3.72(m, 2H), 2.72(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₄N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 303.1023, 실측치 303.1021.

이 방법에 따라 수행하여 이하의 화합물들을 제조하였다:

2-(2-아미노에틸)-8-(메틸설파닐)-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S-, R2= N₂ 2-아미노에틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 16) LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.33 min. HCl 염, ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.34-9.40(m, 1H), 7.93-8.29(m, 5H), 7.85-7.91(m, 1H), 7.66(d, J=9.03 Hz, 1H), 5.01(t, J=6.16 Hz, 2H), 3.43-3.53(m, 2H), 2.67-2.71(m, 3H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₄N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 303.1023, 실측치 303.1017;

8-(메틸설파닐)-1-(피페리딘-4-일메틸)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S-, N₁ R2= 피페리딘-4-일메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 17). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.94 min. HCl 염, ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.49(s, 1H), 8.62(br. s., 1H), 8.47(d, J=10.25 Hz, 1H), 8.29(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.81(s, 1H), 7.76(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.59(s, 1H), 5.13(d, J=7.32 Hz, 2H), 3.23(d, J=12.21 Hz, 2H), 2.81(q, J=11.76 Hz, 2H), 2.74(s, 3H), 2.36-2.48(m, 1H), 1.43-1.68(m, 4H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₀N₆OS에 대한 계산치 [M+H]⁺ 357.1492, 실측치 357.149; 및

8-(메틸설파닐)-2-(피페리딘-4-일메틸)-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S-, N₂ R2= 피페리딘-4-일메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 18). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.7 min. HCl 염, ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.36(s, 1H), 8.64(d, J=10.37 Hz, 1H), 7.94-8.39(m, 3H), 7.83(d, J=9.03 Hz, 1H), 7.62(d, J=9.03 Hz, 1H), 4.67-4.90(m, 2H), 2.78-2.94(m, 2H), 2.69(s, 3H), 2.34-2.43(m, 1H), 1.58-1.71(m, J=12.45 Hz, 2H), 1.41-1.56(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₀N₆OS에 대한 계산치 [M+H]⁺ 357.1492, 실측치 357.1481.

실시예 9: 1-메틸-8-[4-(피페라진-1-일)페녹시]-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 4-(피페라진-1-일)페녹시, R2 = 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 19)

전환 b

154 ㎎(0.5 mmol)의 1-메틸-8-(메틸설포닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드(WO 2004/104007A1에 기술된 바와 같이 제조) 및 107 ㎎(0.6 mmol)의 4-(피페라진-1-일)페놀을 70℃에서 2 시간 동안, Cs₂C0₃(0.487 g, 1.5 mmol)의 존재 하에 5 ㎖의 무수 DMF 중에서 반응시켰다. 냉각시킨 후에, 반응액을 진공 하에서 건조시키고, 한 스푼의 실리카와 혼합시키고, 섬광 크로마토그래피(DCM/MeOH/MeOH 중의 7 N NH₃ 9/1/0.4%)에 의해서 용출시켜 목적하는 생성물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.73 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.68(br. s., 2H), 8.49(s, 1H), 7.44(s, 1H), 7.29(s, 1H), 7.12-7.19(m, 2H), 7.03-7.08(m, 2H), 4.06(s, 3H), 3.20-3.39(m, 8H), 2.97-3.04(m, 2H), 2.85-2.92(m, 2H). HRMS(ESI) C₂₁H₂₃N₇0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 406.1986, 실측치 406.19825.

유사한 방식으로 수행하여 이하의 화합물들을 제조하였다:

1-메틸-8-페녹시-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 20) LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.23 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.53(s, 1H), 7.42-7.49(m, 3H), 7.22-7.30(m, 4H), 3.99(s, 3H), 2.98-3.04(m, 2H), 2.85-2.93(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₇H₁₅N₅0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 322.1299, 실측치 322.1293;

8-(3-아미노페녹시)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 3-아미노페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 21) LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.43 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.51(s, 1H), 7.45-7.51(m, 1H), 7.26(br. s., 1H), 7.04(t, J=7.99 Hz, 1H), 6.43(ddd, J=0.85, 2.08, 8.06 Hz, 1H), 6.38(t, J=2.14 Hz, 1H), 6.32(ddd, J=0.79, 2.23, 7.96 Hz, 1H), 5.21(br. s., 2H), 4.06(s, 3H), 2.98-3.04(m, 2H), 2.85-2.92(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₇H₁₆N₆0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 337.1408, 실측치 337.1411;

8-(4-아미노페녹시)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 4-아미노페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 22) LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.23 min. δH NMR(401 MHz, DMSO-d6) 쉬프트 8.48(s, 1H), 7.47(s, 1H), 7.25(br. s., 1H), 6.84-6.94(m, 2H), 6.54-6.63(m, 2H), 4.99(s, 2H), 4.04(s, 3H), 2.95-3.04(m, 2H), 2.83-2.91(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₇H₁₆N₆0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 337.1408, 실측치 337.1405;

1-메틸-8-(피리딘-4-일옥시)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 피리딘-4-일옥시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 23) LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.68 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.81-8.86(m, 2H), 8.79(s, 1H), 7.53(s, 1H), 7.32(br. s., 1H), 6.30-6.36(m, 2H), 4.36(s, 3H), 3.04-3.11(m, 2H), 3.00(br. s., 2H). HRMS(ESI) C₁₆H₁₄N₆0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 323.1251, 실측치 323.1238;

8-에톡시-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 에틸, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-] LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.47 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.48(s, 1H), 7.45-7.48(m, 1H), 7.26(br. s., 1H), 4.39(q, J=7.04 Hz, 2H), 4.29(s, 3H), 2.95-3.03(m, 2H), 2.81-2.90(m, 2H), 1.36(t, J=7.02 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₅N₅0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 274.1299, 실측치 274.1296;

1-메틸-8-(프로판-2-일옥시)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 프로판-2-일옥시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-] LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.84 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.47(s, 1H), 7.47(br. s., 1H), 7.26(br. s., 1H), 5.21(quin, J=6.16 Hz, 1H), 4.28(s, 3H), 2.96-3.03(m, 2H), 2.80-2.89(m, 2H), 1.35(d, J=6.10 Hz, 6H). HRMS(ESI) C₁₄H₁₇N₅0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 288.1455, 실측치 288.144;

1-메틸-8-(2-옥소프로폭시)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 2-옥소프로폭시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-] LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.81 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.42-8.50(m, 1H), 7.49(s, 1H), 7.27(br. s., 1H), 5.07(s, 2H), 4.22(s, 3H), 2.96-3.04(m, 2H), 2.81-2.89(m, 2H), 2.14(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₄H₁₅N₅0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 302.1248, 실측치 302.1249; 및

8-(2-플루오로에톡시)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 2-플루오로에톡시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 24) LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.23 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.51(s, 1H), 7.41-7.59(m, 1H), 7.28(br. s., 1H), 4.80-4.88(m, 1H), 4.69-4.76(m, 1H), 4.61-4.67(m, 1H), 4.53-4.59(m, 1H), 4.29(s, 3H), 2.95-3.05(m, 2H), 2.83-2.92(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₄FN₅0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 292.1205, 실측치 292.1209.

실시예 10: 1-메틸-8-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시, R2 = 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 25) 및

1-메틸-8-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = 4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시, R2 = 메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 26)

전환b

400 ㎎(1.3 mmol)의 1-메틸-8-(메틸설포닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 및 360 ㎎(1.43 mmol)의 4-(4-메틸피페라진-1-일)페놀을 70℃에서 4 시간 동안 717 ㎎(5.2 mmol)의 K₂C0₃의 존재 하에 25 ㎖의 무수 DMF 중에서 반응시켰다. 냉각시킨 후에, 반응액을 진공 하에서 건조시키고, 한 스푼의 실리카와 혼합시키고, 섬광 크로마토그래피(DCM/MeOH/MeOH 중의 7 N NH₃ 9/1/0.4%)에 의해서 용출시켜 두 가지 화합물의 1:1 혼합물을 제공하였다. 그 후에, 각각의 생성물을 분취용 HPLC 방법 2에 의해서 분리시켰다:

1-메틸-8-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.88 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.46(s, 1H), 7.44(s, 1H), 7.24(s, 1H), 7.01-7.09(m, 2H), 6.91-6.98(m, 2H), 4.02(s, 3H), 3.06-3.11(m, 4H), 2.94-3.01(m, 2H), 2.81-2.88(m, 2H), 2.42-2.45(m, 4H), 2.20(s, 3H). HRMS(ESI) C₂₂H₂₅N₇0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 420.2143, 실측치 420.2148; 및

1-메틸-8-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.03 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.56(s, 1H), 8.21(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.83(s, 1H), 7.76(d, J =8.91Hz, 1H), 7.49(s, 1H), 7.18-7.24(m, 1H), 6.99-7.07(m, 2H), 4.35(s, 3H), 3.12-3.19(m, 4H), 2.45-2.49(m, 4H), 2.22-2.26(m, 3H). HRMS(ESI) C₂₂H₂₃N₇0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 418.1986, 실측치 418.1985.

동일한 방법에 따라 적합한 출발물질을 사용하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

1-메틸-8-[4-(피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 27). LC/MS(254) HPLC 방법 2 Rt 3.91 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.57(s, 1H), 8.70(br. s., 2H), 8.23(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.79(br. s., 1H), 7.77(d, J=8.79 Hz, 2H), 7.52(s, 1H), 7.25-7.31(m, 2H), 7.09-7.14(m, 2H), 4.36(s, 3H), 3.25-3.40(m, 8H). HRMS(ESI) C₂₁H₂₁N₇0₄에 대한 계산치 [M+H]⁺ 404.183, 실측치 404.1836;

8-[2-브로모-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트 [(I), R1 = 2-브로모-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 28). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.35 min. TFA 염, ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.52(s, 1H), 7.57(d, J=2.07 Hz, 1H), 7.47(s, 1H), 7.28(br. s., 1H), 7.20-7.27(m, 2H), 4.06(s, 3H), 2.94-3.04(m, 6H), 2.84-2.94(m, 2H), 2.54(br. s., 4H), 2.26(s, 3H). HRMS(ESI) C₂₂H₂₄BrN₇0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 498.1248, 실측치 498.1239;

8-[2-브로모-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트 [(I), R1 = 2-브로모-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 29). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.55 min. TFA 염, ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.59(s, 1H), 8.24(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.83(s, 1H), 7.78(d, J=8.91 Hz, 1H), 7.73(d, J=2.69 Hz, 1H), 7.51(s, 1H), 7.35-7.42(m, 1H), 7.26-7.32(m, 1H), 4.36(s, 2H), 2.95-3.08(m, 2H), 2.54-2.61(m, 2H), 2.29(br. s., 2H). HRMS(ESI) C₂₂H₂₂BrN₇0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 496.1091, 실측치 496.1082;

1-메틸-8-[3-(피페라진-1-일)페녹시]-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = 3-(피페라진-1-일)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 30). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.9 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.51(s, 1H), 7.47(br. s., 1H), 7.26-7.28(m, 1H), 7.17-7.28(m, 1H), 6.77-6.83(m, J=1.22, 1.22, 8.42 Hz, 1H), 6.75(t, J=2.26 Hz, 1H), 6.55-6.63(m, 1H), 4.03(s, 3H), 3.05(dd, J=4.09, 5.92 Hz, 4H), 2.97-3.03(m, 2H), 2.89(s, 1H), 2.86-2.93(m, 2H), 2.77-2.84(m, J=4.09, 5.92 Hz, 4H). HRMS(ESI) C₂₁H₂₃N₇0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 406.1986, 실측치 406.1980;

1-메틸-8-[3-(피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 3-(피페라진-1-일)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 31). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.1 min. TFA 염, ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.59(s, 1H), 8.65(br. s., 2H), 8.24(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.79(d, J=8.79 Hz, 2H), 7.51-7.54(m, 1H), 7.38(t, J=8.12 Hz, 1H), 7.01(t, J=2.20 Hz, 1H), 6.96(d, J=2.44 Hz, 1H), 6.86(dd, J=1.59, 7.93 Hz, 1H), 4.34(s, 3H), 3.36-3.41(m, 4H), 3.22(br. s., 4H). HRMS(ESI) C₂₁H₂₁N₇0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 404.183, 실측치 404.1835;

8-[3-(디메틸아미노)페녹시]-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 3-(디메틸아미노)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.53 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.51(s, 1H), 7.47(br. s., 1H), 7.26(br. s., 1H), 7.22(t, J=8.18 Hz, 1H), 6.62(dd, J=2.08, 8.30 Hz, 1H), 6.57(t, J=2.20 Hz, 1H), 6.51(dd, J=1.77, 7.87 Hz, 1H), 4.05(s, 3H), 2.98-3.04(m, 2H), 2.85-2.94(m, 8H). HRMS(ESI) C₁₉H₂₀N₆O₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 365.1721, 실측치 365.171;

8-[3-(디메틸아미노)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 3-(디메틸아미노)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 32). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.8 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.57(s, 1H), 8.22(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.83(br. s., 1H), 7.77(d, J=8.91 Hz, 1H), 7.45-7.52(m, 1H), 7.25-7.30(m, 1H), 6.60-6.74(m, 3H), 4.35(s, 3H), 2.92(s, 6H). HRMS(ESI) C₁₉H₁₈N₆0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 363.1564, 실측치 363.1574;

8-(2-클로로페녹시)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 2-클로로페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.55 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.55(s, 1H), 7.62(dd, J=0.92, 7.99 Hz, 1H), 7.48(d, J=2.81 Hz, 1H), 7.40-7.46(m, 2H), 7.33(ddd, J=2.75, 6.26, 7.96 Hz, 1H), 7.27(br. s., 1H), 3.95(s, 3H), 2.98-3.07(m, 2H), 2.86-2.94(m, J=7.93 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₁₇H₁₄C1N₅0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 356.0909, 실측치 356.0898;

8-(2-클로로페녹시)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = 2-클로로페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 33). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.81 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.63(s, 1H), 8.25(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.85(br. s., 1H), 7.80(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.68(dd, J=1.46, 7.93 Hz, 1H), 7.55(dt, J=1.53, 8.15 Hz, 1H), 7.46-7.53(m, 2H), 7.34-7.43(m, 1H), 4.23(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₇H₁₂C1N₅0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 354.0753, 실측치 354.0746;

8-(2-플루오로페녹시)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 2-플루오로페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.33 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.55(s, 1H), 7.48(br. s., 1H), 7.28-7.46(m, 4H), 7.26-7.28(m, 1H), 3.97(s, 3H), 2.97-3.05(m, 2H), 2.87-2.94(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₇H₁₄FN₅0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 340.1205, 실측치 340.1208;

8-(2-플루오로페녹시)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 2-플루오로페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 34). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.58 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.63(s, 1H), 8.26(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.85(s, 1H), 7.80(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.55(dt, J=1.89, 7.90 Hz, 1H), 7.50(br. s., 1H), 7.44-7.49(m, 1H), 7.38-7.44(m, J=2.14, 4.64, 6.68, 6.68 Hz, 1H), 7.31-7.38(m, 1H), 4.26(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₇H₁₂FN₅0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 338.1048, 실측치 338.1037;

8-[2-플루오로-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-4,5-디하이드로- 1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 2-플루오로-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 35). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.06 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.65(br. s., 1H), 8.50(s, 1H), 7.45(s, 1H), 7.23-7.34(m, J=9.09, 9.09 Hz, 2H), 7.07(dd, J=2.81, 13.79 Hz, 1H), 6.87(dd, J=2.08, 9.03 Hz, 1H), 4.07(s, 3H), 3.78-3.98(m, J=13.79 Hz, 2H), 3.46-3.59(m, 2H), 3.08-3.23(m, 2H), 2.94-3.07(m, 4H), 2.84-2.94(m, 5H). HRMS(ESI) C₂₂H₂₄FN₇0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 438.2049, 실측치 438.2039;

8-[2-플루오로-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 2-플루오로-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 36). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.25 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.68(br. s., 1H), 9.56-9.61(m, 1H), 8.25(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.79(d, J=8.91 Hz, 2H), 7.53(s, 1H), 7.41(t, J=9.09 Hz, 1H), 7.14(dd, J=2.81, 13.79 Hz, 1H), 6.93(dd, J=2.26, 8.97 Hz, 1H), 4.37(s, 3H), 3.79-4.05(m, J=8.79 Hz, 2H), 3.47-3.61(m, 2H), 3.17(br. s., 2H), 3.03(br. s., 2H), 2.88(s, 3H). HRMS(ESI) C₂₂H₂₂FN₇0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 436.1892, 실측치 436.1875;

8-[2-아세틸-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 2-아세틸-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.83 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.57(br. s., 1H), 8.48(s, 1H), 7.44(s, 1H), 7.36(d, J=2.93 Hz, 1H), 7.27-7.32(m, 2H), 7.23-7.27(m, 1H), 4.03(s, 3H), 3.84-3.96(m, J=12.45 Hz, 2H), 3.48-3.61(m, J=11.23 Hz, 2H), 2.98-3.06(m, J=7.32 Hz, 4H), 2.85-2.92(m, 5H), 2.45(s, 3H). HRMS(ESI) C₂₄H₂₇N₇0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 462.2248, 실측치 462.2229;

8-[2-아세틸-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 2-아세틸-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 37). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.99 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.60(br. s., 1H), 9.57(s, 1H), 8.24(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.78(d, J=8.79 Hz, 2H), 7.53(s, 1H), 7.42(d, J=2.93 Hz, 1H), 7.36-7.40(m, 2H), 4.32(s, 3H), 3.88-4.04(m, J=15.01 Hz, 2H), 3.47-3.65(m, J=11.47 Hz, 2H), 2.96-3.12(m, 2H), 2.90(br. s., 3H), 2.46(s, 3H). HRMS(ESI) C₂₄H₂₅N₇0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 460.2092, 실측치 460.207;

8-[2-아세틸-4-(피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 2-아세틸-4-(피페라진-1-일)페녹시)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.75 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.72(d, J=5.37 Hz, 2H), 8.49(s, 1H), 7.44(s, 1H), 7.35(d, J=2.93 Hz, 1H), 7.26-7.32(m, 2H), 7.22-7.26(m, 1H), 4.02(s, 3H), 3.37-3.42(m, 4H), 3.28(br. s., 4H), 2.98-3.04(m, 2H), 2.85-2.92(m, 2H), 2.41-2.46(m, 3H). HRMS(ESI) C₂₃H₂₅N₇0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 448.2092, 실측치 448.2071;

8-[2-아세틸-4-(피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 2-아세틸-4-(피페라진-1-일)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 38). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.9 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.57(s, 1H), 8.74(br. s., 2H), 8.23(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.78(d, J=8.91 Hz, 2H), 7.51-7.54(m, 1H), 7.42(d, J=2.69 Hz, 1H), 7.37-7.40(m, 1H), 7.32-7.37(m, 1H), 4.31(s, 3H), 3.41-3.45(m, 4H), 3.30(d, J=5.13 Hz, 4H), 2.45-2.47(m, 3H). HRMS(ESI) C₂₃H₂₃N₇0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 446.1935, 실측치 446.1927;

8-[2-시아노-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 2-시아노-4-(4-메틸피페라진-1-일, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.7 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.69(br. s., 1H), 8.54(s, 1H), 7.53-7.56(m, 1H), 7.47(br. s., 1H), 7.42-7.44(m, 1H), 7.31(s, 1H), 4.08(s, 3H), 3.00-3.05(m, 2H), 2.89-2.95(m, J=7.81 Hz, 2H), 2.87(s, 3H). HRMS(ESI) C₂₃H₂₄N₈0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 445.2095, 실측치 445.2090; 및

8-[2-시아노-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 2-시아노-4-(4-메틸피페라진-1-일, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 39). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.1 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) 쉬프트 9.71(br. s., 1H), 9.63(s, 1H), 8.29(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.75-7.87(m, 2H), 7.60(d, J=2.93 Hz, 1H), 7.55-7.59(m, 1H), 7.54(br. s., 1H), 7.45-7.52(m, 1H), 4.37(s, 3H), 3.89-4.05(m, J=13.79 Hz, 2H), 3.50-3.61(m, J=14.28 Hz, 2H), 3.19(br. s., 2H), 3.03-3.13(m, J=13.43 Hz, 2H), 2.88(s, 3H). HRMS(ESI) C₂₃H₂₂N₈0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 443.1939, 실측치 443.1938.

실시예 11: 8-(2-아세틸페녹시)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드, 및

8-[2-(2-하이드록시페닐)-2-옥소에틸]-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드

전환 b

약 15 ㎖의 NMP 중의 307 ㎎(1 mmol)의 1-메틸-8-(메틸설포닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드, 322 ㎎(1.5 mmoles)의 2-하이드록시아세토페논, 975 ㎎(3.0 mmoles)의 세슘 카보네이트의 용액을 95℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 출발물질의 소실 후에, 반응액을 냉각시키고, 물 및 에틸 아세테이트로 추출하였다. 형성된 침전물을 여과에 의해서 분리시키고, 분취용 역상 HPLC에 의해서 회수하여 다음의 2 가지 화합물을 유도하였다:

8-(2-아세틸페녹시)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 2-아세틸페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.0 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.52(s, 1H), 7.87(dd, J=1.71, 7.81 Hz, 1H), 7.67(ddd, J=1.71, 7.45, 8.06 Hz, 1H), 7.48(br. s., 1H), 7.41(dt, J=1.10, 7.57 Hz, 1H), 7.35(dd, J=0.85, 8.18 Hz, 1H), 7.26(br. s., 1H), 3.94(s, 3H), 2.96-3.06(m, 2H), 2.89(t, J=7.90 Hz, 2H), 2.46(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₉H₁₇N₅0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 364.1404, 실측치 364.1406; 및

8-[2-(2-하이드록시페닐)-2-옥소에틸]-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 2-아세틸페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.12 min. ¹H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 11.62(s, 1H), 8.66(s, 1H), 7.92-7.97(m, 1H), 7.52(s, 1H), 7.48(br. s., 1H), 7.27(br. s., 1H), 6.98(d, J=7.48 Hz, 1H), 6.94-6.97(m, 1H), 4.70(s, 2H), 4.11(s, 3H), 2.97-3.06(m, 2H), 2.89-2.95(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₉H₁₇N₅0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 363.3770, 실측치 363.3774.

실시예 12: 8-시아노-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = CN, R2 = Me, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 40)

전환 d

136 ㎎(0.44 mmol)의 1-메틸-8-(메틸설포닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 약 8 ㎖의 DMF에 용해시키고, 116 ㎎(1.77 mmol)의 칼륨 시아나이드의 존재 하에 70℃에서 가열하였다. 30 분 후에, 출발물질이 소실되었으며, 이렇게 하여 반응액을 냉각시키고, 물 및 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 증발시키고, 무수 에탄올에 현탁시키고, 65℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 생성물을 여과에 의해서 35 ㎎(31%)의 황색 분말로서 분리시켰다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.67 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.89(s, 1H), 7.56(br. s., 1H), 7.33(br. s., 1H), 4.28(s, 3H), 3.06(s, 4H). HRMS(ESI) C₁₂H₁₀N₆O에 대한 계산치 [M+H]⁺ 255.0989, 실측치 255.0978.

실시예 13: 1-메틸-8-(1H-피라졸-1-일)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = 1H-피라졸-1-일, R2 = Me, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 41)

전환 c

DMSO(3 ㎖) 중의 100 ㎎(0.32 mmol)의 1-메틸-8-(메틸설포닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 용액에 44 ㎎(0.65 mmol)의 피라졸 및 134.9 ㎎(0.976 mmol)의 K₂CO₃을 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응은 물을 첨가함으로써 진행시키고, 침전을 여과하여 물로 세척하였다. 고체를 뜨거운 에탄올로 세척하고, 여과하여 65 ㎎(67%)의 표제 화합물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.38 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.74(s, 1H), 8.69(d, J=2.44 Hz, 1H), 7.88(d, J=0.85 Hz, 1H), 7.51(br. s., 1H), 7.31(br. s., 1H), 6.62(dd, J=1.59, 2.56 Hz, 1H), 4.40(s, 3H), 3.06(d, J=6.96 Hz, 2H), 2.97-3.02(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₄H₁₃N₇0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 296.1255, 실측치 296.1261.

유사한 방법에 따라서 적합한 출발물질을 사용하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

1-메틸-8-[3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-1-일]-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-1-일, R2 = Me, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 42). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.7 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.91(dd, J=0.98, 2.69 Hz, 1H), 8.82(s, 1H), 7.54(br. s., 1H), 7.32(br. s., 1H), 7.10(d, J=2.56 Hz, 1H), 4.38-4.40(m, 3H), 2.96-3.15(m, 4H). HRMS(ESI) C₁₅H₁₂F₃N₇0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 364.1128, 실측치 364.1134;

8-(1H-이미다졸-1-일)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 1H-이미다졸-1-일, R2 = Me, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 43). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.33 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.74(s, 1H), 8.64(t, J=0.98 Hz, 1H), 7.99(t, J=1.34 Hz, 1H), 7.52(br. s., 1H), 7.31(br. s., 1H), 7.10-7.21(m, 1H), 4.34-4.38(m, 3H), 3.03-3.10(m, 2H), 2.94-3.02(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₄H₁₃N₇0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 296.1255, 실측치 296.1249; 및

1-메틸-8-(4-니트로-1H-이미다졸-1-일)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 4-니트로-1H-이미다졸-1-일, R2 = Me, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 44). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.82 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.93(d, J=1.46 Hz, 1H), 8.84(s, 1H), 8.81(d, J=1.46 Hz, 1H), 7.51-7.61(m, 1H), 7.20-7.41(m, 1H), 4.39(s, 3H), 3.06(dd, J=6.23, 12.94 Hz, 4H). HRMS(ESI) C₁₄H₁₂N₈0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 341.1105, 실측치 341.1103.

실시예 14: 1-메틸-8-(메틸설포닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = Me, X= S0₂-, R2= Me, R3 = NH₂, A = -CH=CH-]

전환 a

0.2 g(0.74 mmol)의 1-메틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 10 ㎖의 DCM에 현탁시키고, 0.52 g(3.04 mmol)의 MCPBA와 3 시간 동안 반응시켰다. 물 및 NaHC0₃를 첨가하고, 고체를 분리시키고, 여과하고, NaHC0₃의 포화 수용액으로 세척하여 180 ㎎(80%)의 백색 화합물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.72 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.97(s, 1H), 8.60(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.99(d, J=8.79 Hz, 2H), 7.63(br. s., 1H), 4.72(s, 3H), 3.61(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₂H₁₁N₅0₃S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 306.0656, 실측치 306.0645

유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

1-(2-하이드록시에틸)-8-(메틸설포닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = Me, X= SO₂-, R2= 2-하이드록시에틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-]. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.39. HRMS(ESI) C₁₃H₁₃N₅0₄S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 336.0761, 실측치 336.0776;

1-tert-부틸-8-(메틸설포닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = Me, X= SO₂-, R2= t-부틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-]. LC/MS(m/z): 348.2 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 4.59; 및

8-(메틸설포닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = Me, X= S0₂-, R2= H, R3 = NH₂, A = -CH=CH-]. LC/MS(m/z): 292.2 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 2.21.

실시예 15: 1-(2-하이드록시에틸)-8-페녹시-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 페녹시, R2= 2-하이드록시에틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 45)

전환 b

N,N-디메틸포름아미드(5 ㎖) 중의 100 ㎎(0.298 mmol)의 1-(2-하이드록시에틸)-8-(메틸설포닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 용액에 160 ㎎(1.2 mmol)의 칼륨 카보네이트 및 35 ㎎(0.36 mmol)의 페놀을 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 3 시간 동안 교반하고, 그 후에 이것을 EtOAc와 H₂0 사이에 분배시켰다. 유기층을 합하여 Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 조물질을 크로마토그래피(DCM/MeOH 9/1)에 의해서 정제하여 목적하는 생성물을 제공하였다(40 ㎎, 40%). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.79 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.61(s, 1H), 8.25(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.75-7.84(m, J=8.79 Hz, 1H), 7.45-7.57(m, 3H), 7.31-7.40(m, 3H), 4.69-4.75(m, 2H), 4.55-4.63(m, 1H), 3.59(q, J=5.61 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₁₈H₁₅N₅0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 350.1248, 실측치 350.1247.

상기 실시예에 기술된 것과 유사한 방법을 사용하여, 다음의 유사체들을 또한 합성하였다:

1-(2-하이드록시에틸)-8-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시, R2= 2-하이드록시에틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 46). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.78 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.57(s, 1H), 8.23(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.77(d, J=8.91 Hz, 2H), 7.46-7.53(m, 1H), 7.16-7.27(m, 2H), 6.98-7.10(m, 2H), 4.77(t, J=5.19 Hz, 2H), 4.55-4.63(m, 1H), 3.64(q, J=5.53 Hz, 2H), 3.13-3.21(m, 4H), 2.52(br. s., 4H), 2.26(s, 3H). HRMS(ESI) C₂₃H₂₅N₇0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 448.2092, 실측치 448.2082;

1-(2-하이드록시에틸)-8-[3-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 3-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시, R2= 2-하이드록시에틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 47). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.92 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.59(s, 1H), 8.24(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.79(s, 1H), 7.77(s, 2H), 7.48-7.50(m, 1H), 7.28-7.36(m, 1H), 6.84-6.93(m, 2H), 6.68-6.77(m, 1H), 4.70-4.78(m, 2H), 4.57(t, J=5.68 Hz, 1H), 3.62(q, J=5.53 Hz, 2H), 3.15-3.22(m, 4H), 2.39-2.47(m, 4H), 2.21(s, 3H). HRMS(ESI) C₂₃H₂₅N₇0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 448.2092, 실측치 448.2086;

1-(2-하이드록시에틸)-8-(3-니트로페녹시)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = 3-니트로페녹시, R2= 2-하이드록시에틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 48). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.9 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.66(s, 1H), 8.30(t, J=2.14 Hz, 1H), 8.28(d, J=8.79 Hz, 1H), 8.20-8.24(m, 1H), 7.89-7.93(m, 1H), 7.80-7.86(m, 2H), 7.50-7.52(m, 1H), 4.69(t, J=5.74 Hz, 1H), 4.61-4.65(m, 1H), 3.57(q, J=5.45 Hz, 1H). HRMS(ESI) C₁₈H₁₄N₆0₅에 대한 계산치 [M+H]⁺ 395.1099, 실측치 395.1098;

1-메틸-8-(3-니트로페녹시)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 3-니트로페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 49). ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.65(s, 1H), 8.34(t, J=2.14 Hz, 1H), 8.27(d, J=8.67 Hz, 1H), 8.21(ddd, J=0.98, 2.20, 8.18 Hz, 2H), 7.91-7.95(m, 2H), 7.86(br. s., 1H), 7.78-7.85(m, 4H), 7.51(br. s., 3H), 4.29(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₇H₁₂N₆0₄에 대한 계산치 [M+H]⁺ 365.0993, 실측치 365.0997;

1-메틸-8-[3-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 3-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시, R2= 메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 50). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.24 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.58(s, 1H), 8.22(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.83(s, 1H), 7.77(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.49(s, 1H), 7.31(t, J=8.18 Hz, 1H), 6.90-6.93(m, 1H), 6.87(dd, J=1.77, 8.36 Hz, 1H), 6.71-6.77(m, 1H), 4.31-4.35(m, 3H), 3.12-3.20(m, 4H), 2.44(d, J=9.28 Hz, 4H), 2.21(s, 3H). HRMS(ESI) C₂₂H₂₃N₇0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 418.1986, 실측치 418.1983; 및

1-tert-부틸-8-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시, R2= tert-부틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 51). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.63 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.60(s, 1H), 8.34(d, J=8.54 Hz, 1H), 7.82(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.67(s, 1H), 7.43-7.57(m, 1H), 7.12-7.20(m, 2H), 6.99-7.09(m, 2H), 3.09-3.21(m, 4H), 2.25(s, 3H), 1.55(s, 9H). HRMS(ESI) C₂₅H₂₉N₇0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 460.2456, 실측치 460.2448.

실시예 16: 1-tert-부틸-8-(디메틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = R4 및 R6 = Me, X = N, R2= tert-부틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 52)

전환 c

N,N-디메틸포름아미드(2 ㎖) 중의 10 ㎎(0.028 mmol)의 1-tert-부틸-8-(메틸설포닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 용액에 160 ㎎(0.112 mmol)의 칼륨 카보네이트 및 10 ㎕ ㎎(0.36 mmol)의 40% 수성 디메틸아민을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하고, 그 후에 이것을 H₂O로 희석하였다. 침전을 여과하고, 물로 세척하고, 진공 중에서 건조시켜 5 ㎎(65%)의 목적하는 생성물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 6.44 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.23(s, 1H), 8.05(d, J=8.54 Hz, 1H), 7.61(br. s., 1H), 7.56(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.41(br. s., 1H), 2.00(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₆H₂₀N₆O에 대한 계산치 [M+H]⁺ 313.1772, 실측치 313.1777.

실시예 17: 8-메톡시-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = Me, X= O, R2= 메틸, A = -CH=CH-](화합물 53)

전환 b

1-메틸-8-(메틸설포닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드(30 ㎎, 0.1 mmol)를 3 ㎖의 메탄올에 용해시키고, 칼륨 카보네이트(27 ㎎, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 디에틸 에테르와 함께 분쇄하고, 여과하고, 건조시켜 20 ㎎(80%)의 표제 생성물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.28 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.51(s, 1H), 8.18(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.83(br. s., 1H), 7.73(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.47-7.57(m, 1H), 4.70(s, 3H), 4.14(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₂H₁₁N₅0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 258.0986, 실측치 258.0987

유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

8-에톡시-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = Et, X= O, R2= 메틸, A = -CH=CH-](화합물 54). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.71 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.46-9.55(m, 1H), 8.17(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.79-7.89(m, 1H), 7.72(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.50(br. s., 1H), 4.68(s, 3H), 4.55-4.63(m, 2H), 1.46(t, J=7.08 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₃N₅0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 272.1142, 실측치 272.1149; 및

8-메톡시-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = Me, X= O, R2= H, A = -CH=CH-](화합물 55). LC/MS(m/z): 244.2 [M+H]+, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 2.89 min.

실시예 18: 8-(3-포르밀페녹시)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = 3-포르밀페닐, X= O, R2= 메틸, A = -CH=CH-](화합물 56)

전환 b

N,N-디메틸포름아미드(3 ㎖) 중의 120 ㎎(0.39 mmol)의 1-메틸-8-(메틸설포닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 용액에 칼륨 카보네이트(108 ㎎, 0.78 mmol) 및 m-하이드록시벤즈알데히드(70 ㎎, 0.58 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 4 시간 동안 교반한 다음에, EtOAc와 H₂0 사이에 분배시켰다. 유기층을 합하여 Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 진공 중에서 농축시켜 목적하는 생성물(100 ㎎, 74%)을 제공하였다. LC/MS(m/z): 348.0 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 5.05 min.

실시예 19: 1-메틸-8-{3-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]페녹시}-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = 3-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]페닐, X= O, R2= 메틸, A = -CH=CH-](화합물 57), 및

8-[3-(하이드록시메틸)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R4 = 3-하이드록시메틸페닐, X= O, R2= 메틸, A = -CH=CH-](화합물 58)

전환 j

N,N-디메틸포름아미드(2 ㎖) 및 아세트산(50 ㎕)중의 30 ㎎(0.086 mmol)의 8-(3-포르밀페녹시)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 용액에 N-메틸 피페라진(13 ㎕, 0.13 mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(6 ㎎, 0.26 mmol)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 3 시간 동안 교반하고, TLC 및 LC/MS 둘 다에 의해서 모니터링하였다(방법 1). 반응액을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 칼럼(DCM/MeOH/NH₄OH 95/5/0.1)으로 정제하여 주생성물로서 1-메틸-8-{3-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]페녹시}-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드(15 ㎎, 40%) [LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.14 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.60(s, 1H), 8.23(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.83(s, 1H), 7.78(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.49-7.50(m, 1H), 7.46(t, J=7.81 Hz, 1H), 7.26(dt, J=1.71, 7.69 Hz, 3H), 4.27(s, 3H), 3.53(s, 2H), 2.30-2.47(m, 8H), 2.17(br. s., 3H). HRMS(ESI) C₂₃H₂₅N₇0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 432.2143, 실측치 432.2141; 및

부산물로서 8-[3-(하이드록시메틸)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드(10 ㎎, 33%) [LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.54 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.60(s, 1H), 8.23(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.83(s, 1H), 7.78(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.49(s, 1H), 7.42-7.48(m, 1H), 7.30-7.33(m, J=1.83 Hz, 1H), 7.20-7.28(m, 2H), 5.27(t, J=5.80 Hz, 1H), 4.56(d, J=5.74 Hz, 2H), 4.30(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₈H₁₅N₅0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 350.1248, 실측치 350.1253]를 제공하였다.

동일한 방법에 따라 수행하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

8-{3-[(디메틸아미노)메틸]페녹시}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = 3-[(디메틸아미노)메틸]페닐, X= O, R2= 메틸, A = -CH=CH-](화합물 59). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.89 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.61(s, 1H), 8.23(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.82(s, 1H), 7.78(d, J=8.91 Hz, 1H), 7.49-7.50(m, 1H), 7.46(t, J=7.81 Hz, 1H), 7.29(d, J=1.46 Hz, 1H), 7.21-7.28(m, 2H), 4.27(s, 3H), 3.46(s, 2H), 2.18(s, 6H). HRMS(ESI) C₂₀H₂₀N₆O₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 377.1721, 실측치 377.1719; 및

1-메틸-8-[3-(모르폴린-4-일메틸)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = 3-(모르폴린-4-일메틸)페닐, X= O, R2= 메틸, A = -CH=CH-](화합물 60). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.72 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.60(s, 1H), 8.23(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.83(s, 1H), 7.78(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.49-7.50(m, 1H), 7.46(t, J=7.87 Hz, 1H), 7.29-7.32(m, 1H), 7.23-7.29(m, 2H), 4.27(s, 3H), 3.55-3.60(m, 4H), 3.53(s, 2H), 2.36-2.41(m, 4H). HRMS(ESI) C₂₂H₂₂N₆0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 419.1826, 실측치 419.1815.

실시예 20: 8-(3-아미노페녹시)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = 3-아미노페닐, X= O, R2= 메틸, A = -CH=CH-](화합물 61)

전환 k

55 ㎎(0.15 mmol)의 1-메틸-8-(3-니트로페녹시)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 1,4-디옥산(5 ㎖) 및 물(1 ㎖)에 현탁시키고, 43 mg(0.6 mmol)의 아연 분말 및 88 ㎎(1.5 mmol)의 암모늄 클로라이드를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 및 물에 용해시키고, 유기물질을 추출하여 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 고체를 실리카겔 상에서의 섬광 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 95/5)에 의해서 정제하여 10 ㎎(20% 수율)의 표제 화합물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.7 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.57(s, 1H), 8.22(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.84(s, 1H), 7.77(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.49(s, 1H), 7.11(t, J=7.99 Hz, 1H), 6.50-6.53(m, 1H), 6.41-6.50(m, J=0.92, 2.23, 8.68, 8.68 Hz, 2H), 5.26(s, 2H), 4.38(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₇H₁₄N₆0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 335.1251, 실측치 335.1258.

동일한 방법에 따라 수행하여 다음의 화합물을 제조하였다:

8-(3-아미노페녹시)-1-(2-하이드록시에틸)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = 3-아미노페닐, X= O, R2= 2-하이드록시에틸, A = -CH=CH-](화합물 62). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.26 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.58(s, 1H), 8.23(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.74-7.83(m, J=8.79 Hz, 1H), 7.49(s, 1H), 7.12(t, J=8.12 Hz, 1H), 6.47-6.55(m, 2H), 6.40-6.47(m, 1H), 5.27(s, 2H), 4.81(t, J=5.19 Hz, 2H), 4.61(t, J=5.68 Hz, 1H), 3.69(q, J=5.57 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₁₈H₁₆N₆0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 365.1357, 실측치 365.1363.

제조예 J: 에틸 8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIII), R1 = Me-S-, R2 = H]

단계 5

DCM(20 ㎖) 중의 에틸 8-(메틸설파닐)-1-트리틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트(1.0 g, 1.99 mmol)를 트리플루오로아세트산(5 ㎖)으로 처리하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 용매를 진공 중에서 제거하였다. 잔류물을 디에틸 에테르와 함께 분쇄하고, 여과하고, 건조시켜 500 ㎎(96%)의 표제 화합물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.62 min.

실시예 21: 8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = H, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 63)

단계 6a

메탄올 중의 7 N NH₃ 5 ㎖ 중의 0.5 g(1.91 mmol)의 에틸 8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트의 현탁액을 60℃에서 72 시간 동안 가열하였다. 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하고, 잔류물을 디에틸 에테르와 함께 분쇄하고, 고체를 여과하여 0.4 g(80%)의 표제 화합물을 제공하였다. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 14.13(br. s., 1H), 8.52(s, 1H), 7.53(br. s., 1H), 7.26(br. s., 1H), 2.96-3.08(m, J=7.45 Hz, 2H), 2.83-2.94(m, 2H), 2.56(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₁H₁₁N₅0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 262.0757, 실측치 262.07575.

실시예 22: 1-(2-플루오로에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 2-플루오로에틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 64)

전환 e

아세토니트릴 중의 8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드(50 ㎎, 0.191 mmol)의 용액에 2-플루오로-1-요오도에탄(66.7 ㎎, 0.38 mmol) 및 세슘 카보네이트(124 ㎎, 0.38 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 4 시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시켰다. 유기층을 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조물질을 실리카겔 크로마토그래피(DCM/EtOH 9/1)에 의해서 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.82 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.52-8.58(m, 1H), 7.50(br. s., 1H), 7.33(br. s., 1H), 5.07-5.15(m, J=4.88 Hz, 1H), 5.03(t, J=4.94 Hz, 1H), 4.93-4.99(m, 1H), 4.85(t, J=4.88 Hz, 1H), 3.00-3.06(m, J=7.69 Hz, 2H), 2.85-2.93(m, J=8.06 Hz, 2H), 2.53(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₄FN₅0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 308.0976, 실측치 308.0976.

동일한 방법에 따라 수행하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

1-(2-클로로에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 2-클로로에틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 65). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.25 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.55(s, 1H), 7.53(br. s., 1H), 7.35(br. s., 1H), 5.09(t, J=6.23 Hz, 2H), 4.11(t, J=6.29 Hz, 2H), 2.98-3.06(m, 2H), 2.86-2.92(m, 2H), 2.56(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₄ClN₅0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 324.0681, 실측치 324.0676;

1-(2-하이드록시에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = Me-S-, R2 = 2-하이드록시에틸, R3 = NH₂, -(CH₂)₂-](화합물 66). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.1 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.53(s, 1H), 7.35-7.60(m, 1H), 7.28(br. s., 1H), 4.84-4.90(m, 1H), 4.79(t, J=6.16 Hz, 2H), 3.79-3.90(m, 2H), 2.95-3.08(m, 2H), 2.82-2.94(m, 2H), 2.55(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₅N₅0₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 306.1019, 실측치 306.1023;

1-(2-메톡시에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 2-메톡시에틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 67). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.76 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.54(s, 1H), 7.47(br. s., 1H), 7.30(br. s., 1H), 4.90(t, J=5.86 Hz, 2H), 3.76-3.89(m, 2H), 3.23(s, 3H), 2.98-3.06(m, 2H), 2.84-2.91(m, 2H), 2.54(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₄H₁₇N₅0₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 320.1176, 실측치 320.1187;

1-[3-(디메틸아미노)프로필]-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 3-(디메틸아미노)프로필, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 68). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.69 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.53(s, 1H), 7.46(br. s., 1H), 7.29(br. s., 1H), 4.70-4.77(m, 2H), 2.97-3.05(m, 2H), 2.83-2.91(m, 2H), 2.54-2.58(m, 3H), 2.22-2.31(m, 2H), 2.11(s, 6H), 1.92-2.03(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₆H₂₂N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 347.1649, 실측치 347.1638; 및

1-(1-아미노-2-메틸-1-옥소프로판-2-일)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 1-아미노-2-메틸-1-옥소프로판-2-일, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 69). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.13 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.49(s, 1H), 7.42(s, 1H), 7.29(s, 1H), 6.96-7.14(m, 1H), 2.94-3.05(m, 2H), 2.75-2.85(m, 2H), 2.55(s, 3H), 1.90(s, 6H). HRMS(ESI) C₁₅H₁₈N₆0₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 347.1285, 실측치 347.1282.

실시예 23: 8-(메틸설파닐)-1-(피페리딘-4-일메틸)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 피페리딘-4-일메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 70)

아세토니트릴 중의 8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드(50 ㎎, 0.191 mmol)의 용액에 tert-부틸-피페리딘-4-일메틸브로뮤로 카바메이트(105.71 ㎎, 0.38 mmol) 및 세슘 카보네이트(124 ㎎, 0.38 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 4 시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시켰다. 유기층을 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고 농축시켰다. 조물질을 실리카겔 크로마토그래피(DCM/EtOH 9/1)에 의해서 정제하여 tert-부틸 4-{[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]메틸}피페리딘-1-카복실레이트(30 ㎎, 0.65 mmol)를 제공하였다. 그 후, 이 화합물을 1,4-디옥산 중의 4 M HC1 2 ㎖로 처리하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하고, 수득된 잔류물을 디에틸 에테르와 함께 분쇄하고, 여과하고, Et₂0로 세척하고, 진공 중에서 건조시켜 백색 고체로서 32 ㎎(97%)의 표제 화합물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.83 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.62(d, J=10.01 Hz, 1H), 8.55(s, 1H), 8.27-8.49(m, J=8.42 Hz, 1H), 7.44(s, 1H), 7.35(s, 1H), 4.63-4.78(m, 2H), 3.18-3.28(m, J=6.10 Hz, 2H), 2.99-3.07(m, 2H), 2.85-2.92(m, J=7.93 Hz, 2H), 2.74-2.85(m, J=10.38 Hz, 2H), 2.57(s, 3H), 2.18-2.31(m, 1H), 1.56-1.70(m, 2H), 1.37-1.51(m, J=3.72, 13.98 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₂N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 359.1649, 실측치 359.1634.

동일한 방법에 따라 수행하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

1-(3-아미노프로필)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 3-아미노프로필, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 71). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.58 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.56(s, 1H), 7.79(br. s., 3H), 7.47-7.50(m, 1H), 7.38(br. s., 1H), 4.77(t, J=6.53 Hz, 2H), 2.99-3.06(m, 2H), 2.86-2.93(m, 2H), 2.76-2.83(m, 2H), 2.54-2.59(m, 3H), 2.17(br. s., 2H). HRMS(ESI) C₁₄H₁₈N₆0S [M+H]⁺ 319.1336, 실측치 319.1344;

8-(메틸설파닐)-1-(피페리딘-4-일)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = Me-S-, R2 = 피페리딘-4-일, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 72). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.65 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.58-8.65(m, 1H), 8.56(s, 1H), 8.46(br. s., 1H), 7.41(br. s., 1H), 7.38(br. s., 1H), 5.52-5.73(m, J=6.84, 6.84 Hz, 1H), 3.46-3.62(m, 2H), 3.04-3.13(m, J=6.84 Hz, 2H), 2.97-3.04(m, 2H), 2.82-2.91(m, J=8.18 Hz, 2H), 2.58(s, 3H), 2.19-2.32(m, J=7.32 Hz, 4H). HRMS(ESI) C₁₆H₂₀N₆OS에 대한 계산치 [M+H]⁺ 345.1492, 실측치 345; 및

1-(2-아미노에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = Me-S-, R2 = 2-아미노에틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 73). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.46 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.58(s, 1H), 7.92(br. s., 3H), 7.74(s, 1H), 7.43(s, 1H), 4.85-5.09(m, 2H), 3.42-3.57(m, J=5.98 Hz, 2H), 2.96-3.09(m, 2H), 2.80-2.94(m, 2H), 2.56(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₆N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 305.1179, 실측치 305.1191.

실시예 24: 1-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸]-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 74), 및

1-에테닐-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 에테닐, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 75)

전환 f 및 g

메탄올(3 ㎖) 중의 1-(2-클로로에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드(50 ㎎, 0.15 mmol)의 용액에 N-메틸피페라진(62 ㎕, 0.61 mmol) 및 세슘 카보네이트(97 ㎎, 0.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 48 시간 동안 가열하였다. 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하고, 조 고체를 에틸 아세테이트 및 물로 용해시키고, 유기층을 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고 농축시켰다. 조물질을 실리카겔 크로마토그래피(DCM/EtOAc 8/2)에 의해서 정제하여 황색 고체로서 화합물 1-에테닐-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 제공하였다(15 ㎎, 35% 수율). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.34 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.58(s, 1H), 8.35(dd, J=8.73, 15.44 Hz, 1H), 7.71(s, 1H), 7.46(br. s., 1H), 5.96(d, J=15.38 Hz, 1H), 5.15(d, J=8.67 Hz, 1H), 3.00-3.09(m, 2H), 2.86-2.94(m, 2H), 2.56(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₃N₅0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 288.0914, 실측치 288.0913.

DCM/MeOH/NH₄OH 9/1/0.1과 같은 용출제를 변화시켜 극성 화합물 1-(2-[N-메틸피페라진]에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 황색 고체로서 수집하였다(17 ㎎, 30% 수율). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.79 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.35(s, 1H), 7.46(s, 1H), 7.28(s, 1H), 4.82(t, J=6.84 Hz, 2H), 2.98-3.04(m, 2H), 2.88(d, J=7.93 Hz, 2H), 2.55(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₈H₂₅N₇0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 388.1914, 실측치 388.1909

실시예 25: 1-{2-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]에틸}-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 2-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]에틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 76)

전환 h

에틸 아세테이트(2 ㎖) 중의 1-(2-하이드록시에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드(20 ㎎, 0.077 mmol)의 용액에 IBX(64 ㎎, 0.23 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 4 시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응 혼합물을 여과하고, 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하고, 조물질로서 알데히드를 다음 반응을 위해서 사용하였다. 알데히드를 THF/DMF(3/1 ㎖)로 용해시키고, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(49 ㎎, 0.233 mmol) 및 4-디메틸아미노피페리딘(20 ㎕, 0.156 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 72 시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 수득된 조물질을 크로마토그래피(DCM/MeOH/NH₄OH 8/2/0.2)에 의해서 정제하여 15 ㎎(48%)의 표제 화합물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.93 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.55(s, 1H), 7.46(s, 1H), 7.29(s, 1H), 4.81(t, J=6.90 Hz, 2H), 2.96-3.04(m, 2H), 2.79-2.93(m, J=8.18 Hz, 5H), 2.71(t, J=6.59 Hz, 2H), 2.56(s, 3H), 2.14(s, 6H), 1.93-2.06(m, J=16.11 Hz, 3H), 1.53-1.68(m, J=14.16 Hz, 2H), 1.04-1.20(m, J=3.17 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₂₀H₂₉N₇OS에 대한 계산치 [M+H]⁺ 416.2227, 실측치 416.2234.

실시예 26: 8-에톡시-1-(피페리딘-4-일메틸)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R4 = Et, X = O, R2 = 2-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]에틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 77)

전환 e

DMF(3 ㎖) 중의 8-에톡시-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드(40 ㎎, 0.154 mmol)의 용액에 tert-부틸-피페리딘-4-일메틸브로뮤로 카바메이트(85 ㎎, 0.308 mmol) 및 Cs₂C0_{3 (}121 ㎎, 0.370 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 가열하고, 4 시간 동안 교반하였다. 냉각된 혼합물을 물(10 ㎖)로 처리하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 합하여 물 및 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조물질을 DCM/EtOAc/EtOH 7/2/1로 용출시키는 섬광 크로마토그래피에 의해서 정제하여 백색 고체로서 50 ㎎(70%)의 목적 생성물 tert-부틸 4-{[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]메틸}-피페리딘-1-카복실레이트를 수득하였다. 후자의 생성물을 DCM(2 ㎖)에 용해시키고, 1,4-디옥산 중의 4 M HCl(2 ㎖)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 증발 건조시켰다. 고체를 디에틸 에테르와 함께 분쇄하고, 여과하고, 진공 중에서 건조시켜 40 ㎎(95%)의 목적 생성물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.65 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.65(d, J=11.60 Hz, 1H), 8.51(s, 1H), 8.31-8.46(m, J=15.38 Hz, 1H), 7.42(br. s., 1H), 7.34(s, 1H), 4.69(d, J=7.20 Hz, 1H), 4.39(q, J=6.96 Hz, 1H), 3.18-3.27(m, 2H), 2.97-3.04(m, 2H), 2.74-2.90(m, J=7.93 Hz, 4H), 2.18-2.32(m, J=5.98 Hz, 1H), 1.59-1.70(m, J=11.84 Hz, 2H), 1.40-1.53(m, J=4.03 Hz, 2H), 1.38(t, J=7.02 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₈H₂₄N₆0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 357.2033, 실측치 357.2041.

동일한 방법에 따라 수행하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

1-[3-(디메틸아미노)프로필]-8-에톡시-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = Et, X = O, R2 = 3-(디메틸아미노)프로필, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 78). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.63 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.49(s, 1H), 7.44(s, 1H), 7.29(br. s., 1H), 4.67-4.78(m, 2H), 4.39(q, J=7.08 Hz, 2H), 2.93-3.05(m, 2H), 2.81-2.93(m, 2H), 2.32-2.42(m, J=1.92, 1.92, 3.72 Hz, 2H), 2.19(br. s., 6H), 1.90-2.07(m, 2H), 1.36(t, J=7.02 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₄N₆0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 345.2033, 실측치 345.203; 및

8-에톡시-1-(피페리딘-4-일)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R4 = Et, X = O, R2 = 피페리딘-4-일, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 79). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.59 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.57-8.95(m, 2H), 8.52(s, 1H), 7.39(br. s., 2H), 5.58(quin, J=7.23 Hz, 1H), 4.36-4.45(m, 2H), 2.96-3.02(m, 3H), 2.82-2.89(m, J=8.18 Hz, 2H), 1.37(t, J=7.02 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₂N₆0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 343.1877, 실측치 343.1876

실시예 27: 8-에톡시-1-[(1-메틸피페리딘-4-일)메틸]-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R4 = Et, X = O, R2 =(1-메틸피페리딘-4-일)메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 80)

전환 n

DMF(3 ㎖) 중의 8-에톡시-1-(피페리딘-4-일메틸)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드(30 ㎎, 0.084 mmol)의 용액에 1 ㎖의 포름알데히드(물 중의 37%, 12.3 mmol) 및 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(71 ㎎, 0.33 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 물 및 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 혼합물을 DCM/EtOAc/EtOH 7/2/1로 용출시키는 실리카 상에서 크로마토그래피하여 20 ㎎(64%)의 목적 생성물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.7 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.49(s, 1H), 7.43(s, 1H), 7.30(br. s., 1H), 4.65(d, J=7.45 Hz, 1H), 4.38(q, J=7.08 Hz, 2H), 2.97-3.04(m, 2H), 2.83-2.90(m, 2H), 2.79(br. s., 1H), 2.18(br. s., 2H), 1.86-2.03(m, 2H), 1.44-1.53(m, 2H), 1.34-1.39(m, 3H), 1.29(d, J=4.03 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₁₉H₂₆N₆0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 371.219, 실측치 371.2191.

제조예 K: tert-부틸 4-[(3-카바모일-8-요오도-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일)메틸]피페리딘-1-카복실레이트 [(XIV)]

단계 7

DMF(3 ㎖) 중의 50 ㎎(0.146 mmol)의 8-요오도-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드(WO2008074788A1에 보고된 방법에 따라 제조)의 용액에 61 ㎎(0.219 mmol)의 tert-부틸 4-(브로모메틸)피페리딘-1-카복실레이트 및 95 ㎎(0.293 mmol)의 Cs₂CO₃를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 가열하고, 4 시간 동안 교반하였다. 냉각된 혼합물을 물(10 ㎖)로 처리하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 물 및 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조물질을 DCM/EtOH 9/1로 용출시키는 섬광 크로마토그래피에 의해서 정제하여 백색 고체로서 63 ㎎(80%)의 목적하는 표제 생성물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 6.51 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.46(s, 1H), 7.47(s, 1H), 7.32(s, 1H), 4.50-4.55(m, 2H), 3.84-3.96(m, 2H), 2.99-3.07(m, 2H), 2.84-2.95(m, 2H), 2.59-2.75(m, 2H), 2.07(s, 1H), 1.56(br. s., 2H), 1.39(s, 9H), 1.08-1.22(m, 2H). HRMS(ESI) C₂₁H₂₇IN₆0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 539.1262, 실측치 539.1274.

상술한 것과 유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

에틸 1-{3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]프로필}-8-요오도-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트 및 에틸 2-{3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]프로필}-8-요오도-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트. LC/MS(m/z): 528.0 [M+H]+, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 6.43 min.

실시예 28: 8-(2,6-디플루오로페닐)-1-(피페리딘-4-일메틸)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = 2,6-디플루오로페닐, R2 = 피페리딘-4-일메틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 81)

단계 8

아르곤 대기 하에서 3 ㎖의 1,4-디옥산 및 1 ㎖의 물 중의 tert-부틸 4-[(3-카바모일-8-요오도-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일)메틸]피페리딘-1-카복실레이트(30 ㎎, 0.036 mmol)의 용액에 17.6 ㎎(0.11 mmol)의 2,6-디플루오로페닐보론산, 13.7 ㎎(0.017 mmol)의 디클로로메탄과 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센팔라듐 복합체, 및 54 ㎎(0.167 mmol)의 세슘 카보네이트를 순차적으로 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 바이알 내에서 1 시간 동안, 80℃에서 마이크로웨이브 조사에 적용하였다. 반응액을 셀라이트 패드를 통해서 여과하고, 용매를 증발 건조시켰다. 그 후, 조물질을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시키고, 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 진공 중에서 제거하였다. 실리카겔 칼럼 상에서의 섬광 크로마토그래피(DCM/EtOAc 7/3)에 의해서 정제한 후에, 20 ㎎(70%)의 tert-부틸 4-{[3-카바모일-8-(2,6-디플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]메틸}피페리딘-1-카복실레이트를 수득하였다.생성물을 DCM(2 ㎖)에 용해시키고, 1,4-디옥산 중의 4 M HCl(2 ㎖)을 첨가하였다. 반응액을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 용매를 증발 건조시켰다. 고체를 에틸 에테르로 처리하고, 침전을 여과에 의해서 수거하여 연황색 고체로서 17 ㎎(85%)의 표제 화합물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.14 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.89(s, 1H), 8.57(d, J=9.76 Hz, 1H), 8.30(d, J=10.01 Hz, 1H), 7.55-7.69(m, 1H), 7.45(s, 1H), 7.37(s, 1H), 7.23-7.33(m, 2H), 4.57-4.66(m, 2H), 3.16-3.26(m, 2H), 3.01-3.14(m, 4H), 2.69-2.85(m, J=10.74 Hz, 2H), 2.09-2.29(m, J=7.20 Hz, 1H), 1.56-1.70(m, J=12.94 Hz, 2H), 1.32-1.48(m, 2H). HRMS(ESI) C₂₁H₂₇IN₆0₃에 대한 계산치 [M+H]⁺ 425.1896, 실측치 425.1896

상술한 것과 유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물을 제조하였다:

8-(2,6-디플루오로페닐)-1-(2-플루오로에틸)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 2,6-디플루오로페닐, R2 = 2-플루오로에틸, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.31 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.89(s, 1H), 7.61(tt, J=6.44, 8.45 Hz, 1H), 7.53(br. S., 1H), 7.35(s, 1H), 7.19-7.32(m, 2H), 4.96-5.11(m, 2H), 4.74-4.96(m, 2H), 2.98-3.18(m, 4H). HRMS(ESI) C₁₈H₁₄F₃N₅0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 374.1223, 실측치 374.1225.

제조예 L: 에틸 8-(4-플루오로페닐)-1-트리틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIII), R1 = 4-플루오로페닐, R2 = 트리틸, A = -(CH₂)₂-]

단계 9

톨루엔(10 ㎖) 및 228 ㎎(1.63 mmol)의 4-플루오로벤젠보론산 중의 500 ㎎(0.82 mmol)의 에틸 8-요오도-1-트리틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트(WO2008074788A1에 보고된 방법에 따라 제조)의 용액에 물(0.5 ㎖) 중의 103 ㎎(2.46 mmol)의 리튬 클로라이드 및 339.8 ㎎(2.46 mmol)의 칼륨 카보네이트를 첨가하였다. 반응액을 아르곤으로 탈기(degass)시킨 다음에, 22 ㎎(0.041 mmol, 5% mol)의 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드를 첨가하고, 반응액을 100℃에서 60 분 동안 가열하였다. LC/MS 분석은 출발물질의 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 다음에, 진공 중에서 농축시키고, 실리카겔에 융합시켰다. 조생성물을 DCM/EtOH 10/0.5로 용출시키는 섬광 크로마토그래피에 의해서 정제하여 380 ㎎(80%)의 목적 생성물을 제공하였다. LC/MS(m/z): 581.2 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 9.02.

상술한 것과 유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

에틸 8-(4-메톡시페닐)-1-트리틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIII), R1 = 4-메톡시페닐, R2 = 트리틸, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(m/z): 593.2 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 8.91 min.

에틸 1-{3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]프로필}-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIII), R1 = 4-플루오로페닐, R2 = 3-(tert-부톡시카보닐)아미노프로필, A = -(CH₂)₂-], 및

에틸 2-{3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]프로필}-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트[(VIII), R1 = 4-플루오로페닐, R2 = 3-(tert-부톡시카보닐)아미노프로필, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(m/z): 496.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 7.87 min.

제조예 M: 8-(4-플루오로페닐)-1-트리틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실산[(XI), R1 = 4-플루오로페닐, R2 = 트리틸, A = -(CH₂)₂-]

단계 6b1

에탄올(20 ㎖) 중의 380 ㎎(0.65 mmol)의 에틸 8-(4-플루오로페닐)-1-트리틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트의 용액에 3 ㎖(6 mmol)의 2 N 수성 NaOH를 첨가하였다. 혼합물을 30 분 동안 80℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하였다. 잔류물을 물 및 아세트산(pH = 4)으로 희석하고, 형성된 침전을 여과하여 에탄올로 세척하였다. 고체를 오븐(진공 중에서 40℃) 내에서 2 시간 동안 건조시켰다. 360 ㎎(99%). LC/MS(m/z): 553.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 5.84.

상술한 것과 유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

8-(4-메톡시페닐)-1-트리틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실산[(XI), R1 = 4-메톡시페닐, R2 = 트리틸, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(m/z): 565.2 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 6.03;

1-{3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]프로필}-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실산[(XI), R1 = 4-플루오로페닐, R2 = 3-(tert-부톡시카보닐)아미노프로필, A = -(CH₂)₂-]; 및

2-{3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]프로필}-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실산[(XI), XI R1 = 4-플루오로페닐, R2 = 3-(tert-부톡시카보닐)아미노프로필, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(m/z): 468.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 4.27 min.(주생성물) 및 4.55 min(부생성물).

실시예 29: 8-(4-플루오로페닐)-N-(3-하이드록시프로필)-1-트리틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 4-플루오로페닐, R2 = 트리틸, R' = 3-하이드록시프로필, A = -(CH₂)₂-]

358 ㎎(0.65 mmol)의 8-(4-플루오로페닐)-1-트리틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실산을 실온에서 3 시간 동안 무수 DMF 중에서 0.060 ㎖(0.78 mmol)의 프로판올아민, 250 ㎎(0.78 mmol)의 TBTU 및 0.268 ㎖(1.5 mmol)의 DIPEA와 반응시켰다. 반응액을 물 및 포화 NaHCO₃로 후처리하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시킨 유기상을 에틸 아세테이트/헥산 7/3을 사용하여 실리카 상에서 정제하여 300 ㎎(75%)의 순수한 생성물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 8.08 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.52(s, 1H), 7.34(t, J= 5.73 Hz, 1H), 6.93-6.99(m, 2H), 4.52(t, J=5.00 Hz, 1H), 3.43-3.50(m, 2H), 3.25-3.32(m, 2H), 3.10(d, J=8.05 Hz, 2H), 2.78(t, J=7.44 Hz, 2H), 1.61(quin, J=6.40 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₃₈H₃₂FN₅0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 610.2613, 실측치 610.262.

상술한 것과 유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물을 제조하였다:

N-(3-하이드록시프로필)-8-(4-메톡시페닐)-1-트리틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 4-메톡시페닐, R2 = 트리틸, R' = 3 -하이드록시프로필, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(m/z): 622.2 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 7.07 min.

실시예 30: 8-(4-플루오로페닐)-N-(3-하이드록시프로필)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = 4-플루오로페닐, R2 = H, R' = 3-하이드록시프로필, A = -(CH₂)₂-]

300 ㎎(0.5 mmol)의 8-(4-플루오로페닐)-N-(3-하이드록시프로필)-1-트리틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 DCM에 용해시키고, 실온에서 2 ㎖의 트리플루오로아세트산과 반응시켰다. 반응액을 증발 건조시키고, MeOH 및 포화 NaHC0₃로 30 분 동안 처리하였다. 그 후에, MeOH를 증발시키고, 수성상을 NaH₂P0₃로 pH = 5.0으로 산성화시키고, DCM으로 추출하였다. 건조된 조물질을 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카겔 상에서 정제하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.29 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 14.20(s, 1H), 8.77(s, 1H), 8.52-8.59(m, 2H), 8.23(t, J=5.74 Hz, 1H), 7.35-7.43(m, 2H), 4.51(t, J=5.25 Hz, 2H), 3.48(q, J=6.18 Hz, 2H), 3.06-3.11(m, 2H), 3.00-3.06(m, 2H), 1.60-1.76(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₉H₁₈FN₅0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 368.1518, 실측치 368.153.

상술한 것과 유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물을 제조하였다:

N-(3-하이드록시프로필)-8-(4-메톡시페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = 4-메톡시페닐, R2 = 트리틸, R' = 3-하이드록시프로필, A = -(CH₂)₂-]. LC/MS(m/z): 380.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 4.41 min.

실시예 31: tert-부틸 {3-[3-카바모일-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]프로필}카바메이트[(I), R1 = 4-플루오로페닐, N₁ R2 = tert-부틸 3-카바모일프로필, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-], 및

tert-부틸 {3-[3-카바모일-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-2-일]프로필}카바메이트[(I), R1 = 4-플루오로페닐, N₂ R2 = tert-부틸 3-카바모일프로필, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-]

단계 6b2

1-{3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]프로필}-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실산 및 2-{3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]프로필}-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실산 358 ㎎(0.65 mmol)을 실온에서 3 시간 동안 무수 DMF(5 ㎖) 중에서 147 ㎎(0.975 mmol)의 HOBt*NH₄, 250 ㎎(0.78 mmol)의 TBTU, 및 0.268 ㎖(1.5 mmol)의 DIPEA와 반응시켰다. 반응액을 물 및 포화 NaHCO₃로 후처리하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시킨 유기상을 에틸 아세테이트/헥산 7/3을 사용하여 실리카 상에서 정제하여 212 ㎎(70%)의 위치이성체의 순수한 혼합물을 제공하였다. LC/MS(m/z): 467.2 [M+H]⁺, 및 467.2 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 5.62 및 6.12 min.

실시예 32: 1-(3-아미노프로필)-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트 [(I), R1 = 4-플루오로페닐, N₁ R2 = 3-아미노프로필, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 82), 및

2-(3-아미노프로필)-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 4-플루오로페닐, N₂ R2 = 3-아미노프로필, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 83)

tert-부틸 {3-[3-카바모일-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]프로필}카바메이트 및 tert-부틸 {3-[3-카바모일-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-2-일]프로필}카바메이트를 DCM에 현탁시키고, 60℃에서 2 ㎖의 TFA와 반응시켰다. 90 분 동안에 완결된 반응액을 증발시켰다. 조물질을 분취용-HPLC 방법 2에 의해서 정제하고, 다음의 2 개의 위치이성체를 분할시켰다:

1-(3-아미노프로필)-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트(주생성물). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.32 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.83(s, 1H), 8.43(dd, J=5.68, 8.97 Hz, 2H), 7.64(br. s., 3H), 7.48(br. s., 1H), 7.40(br. s., 1H), 7.38(t, J=8.85 Hz, 2H), 4.93(t, J=6.47 Hz, 2H), 3.05-3.13(m, 2H), 3.01(t, J=7.20 Hz, 2H), 2.82-2.91(m, 2H), 2.25(quin, J=7.20 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₁₉H₁₉FN₆0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 367.1677, 실측치 367.16785; 및

2-(3-아미노프로필)-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트(부생성물). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.14 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.78(s, 1H), 8.46(dd, J=5.68, 8.97 Hz, 2H), 7.92(br. s., 1H), 7.78(br. s., 1H), 7.74(br. s., 3H), 7.37(t, J=8.91 Hz, 2H), 4.53(t, J=6.84 Hz, 2H), 2.93-3.05(m, 4H), 2.81-2.92(m, 2H), 2.16(quin, J=7.26 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₁₉H₁₉FN₆0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 367.1677, 실측치 367.16784.

이와 동일한 방법에 따라 적합한 치환된 유도체를 사용하여 다음의 화합물을 제조하였다:

1-(3-아미노프로필)-N-(3-하이드록시프로필)-8-(4-메톡시페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 4-메톡시페닐, R2 = 3-아미노프로필, R' = 3-하이드록시프로필, A = -(CH₂)₂-](화합물 84). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt = 3.52 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.79(s, 1H), 8.32-8.37(m, 2H), 8.11(t, J=5.86 Hz, 1H), 7.67(br. s., 3H), 7.06-7.14(m, 2H), 4.94(t, J=6.53 Hz, 2H), 3.86(s, 3H), 3.49(t, J=6.23 Hz, 2H), 3.31(br. s., 2H), 3.03-3.13(m, 2H), 3.00(d, J=7.81 Hz, 2H), 2.81-2.92(m, 2H), 2.26(d, J=2.56 Hz, 2H), 1.69(quin, J= 6.56 Hz, 2H). 질량 계산치: 437.2296, 질량 실측치: 437.2291.

제조예 N: 1-(3-아미노프로필)-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실산 트리플루오로아세테이트 및 2-(3-아미노프로필)-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실산 트리플루오로아세테이트

1-{3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]프로필}-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실산 및 2-{3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]프로필}-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실산의 혼합물 165 ㎎(0.35 mmol)을 DCM에 현탁시키고, 60℃에서 2 ㎖의 TFA와 반응시켰다. 90 분 이내에 완결된 반응액을 증발시켰다. 조물질을 분취용-HP LC 방법 2에 의해서 정제하고, 2 개의 위치이성체의 혼합물로서 유도하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.2 min, 2 개의 위치이성체에 대해서 동일한 체류시간. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.83(s, 1H, 주), 8.71(s, 1H, 주), 8.41-8.51(m, 2H), 8.34(br. s., 3H), 7.26-7.42(m, 2H), 4.96(m, 2H, 부), 4.70-4.77(m, 2H, 주), 2.96-3.02(m, 2H), 2.88-2.95(m, 2H), 2.61(t, J=5.92 Hz, 2H), 2.11-2.21(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₉H₁₈FN₅0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 368.1518, 실측치 368.153.

실시예 33: 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2= tert-부틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 85), 및

6-아미노-1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2= tert-부틸, R3 = NH₂, R5 = NH₂, A= -CH=CH-](화합물 86)

단계 6c

에틸 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트(170 ㎎, 0.494 mmol)를 4 ㎖의 무수 THF에 현탁시키고, 암모늄 클로라이드(80 ㎎, 1.48 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, THF 중의 1 M LiN(TMS)₂₍3 ㎖, 3 mmol)를 첨가하였다; 반응액을 2 시간 동안 교반하였다. 그 후, 용매를 증발 건조시키고, 잔류물을 물에 현탁시키고, 여과하였다. 조물질을 DCM/MeOH 97/3으로 용출시키는 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해서 정제하여 100 ㎎(65% 수율)의 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 및 10 ㎎(6%)의 6-아미노-1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 6.07 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.49(s, 1H), 8.42(d, J=8.54 Hz, 1H), 7.80(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.75(br. s., 1H), 7.53(br. s., 1H), 2.74(s, 3H), 2.00(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₅H₁₇N₅0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 316.1227, 실측치 316.1224.

6-아미노-1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[R1 = Me-S-, R2= tert-부틸, R3 = NH₂, R5 = NH₂, A= -CH=CH-]. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.08 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.16(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.91(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.84(br. s., 2H), 7.62(br. s., 1H), 7.42(br. s., 1H), 2.61(s, 3H), 1.98(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₅H₁₈N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 331.1336, 실측치 331.1340

유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

1-메틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2= Me, R3 = NH₂, A= -CH=CH-](화합물 87). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.96 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.46(s, 1H), 8.26(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.85(br. s., 1H), 7.73(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.52(br. s., 1H), 4.71(s, 3H), 2.73(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₂H₁₁N₅0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 274.0757, 실측치 274.0757;

6-아미노-1-메틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2= Me, R3 = NH₂, R5 = NH2, A= -CH=CH-](화합물 88). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.59. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.00(d, J=8.91 Hz, 1H), 7.85(br. s., 1H), 7.83(d, J=8.91 Hz, 1H), 7.74(br. s., 1H), 7.42(br. s., 1H), 4.65(s, 3H), 2.59(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₂H₁₂N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 289.0866, 실측치 289.0859;

1-tert-부틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Η, R2= tert-부틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 3). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.63 min. ¹H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 9.71(s, 1H), 9.53(s, 1H), 8.55(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.89(d, J=8.78 Hz, 1H), 7.80(br. s., 1H), 7.58(br. s., 1H), 2.01(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₄H₁₅N₅0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 270.1350, 실측치 270.1357; 및

6-아미노-1-tert-부틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Η, R2= tert-부틸, R3 = NH₂, R5 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 122). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.29 min. ¹H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 8.65(s, 1H), 8.30(d, J=9.06 Hz, 1H), 8.12(br. s., 1H), 8.02(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.70(br. s., 1H), 7.46-7.52(m, 1H), 1.98(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₄H₁₆N₆0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 285.1459, 실측치 285.1466.

실시예 34: 1-tert-부틸-N-하이드록시-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2= tert-부틸, R3 = N(H)OH, A= -CH=CH-](화합물 89)

단계 6b2

40 ㎎(0.112 mmol)의 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실산을 실온에서 3 시간 동안, 무수 DMF(2 ㎖) 중에서 25 ㎎(0.21 mmol)의 0-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)하이드록실아민, 70 ㎎(0.21 mmol)의 TBTU 및 0.110 ㎖(1.19 mmol)의 DIPEA와 반응시켰다. 반응액을 물 및 포화 NaHCO₃로 후처리하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시킨 유기상을 DCM/EtOAc 7/3를 사용하여 실리카 상에서 정제하여 23 ㎎(50%)의 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-N-(테트라하이드로-2H-피란-2-일옥시)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 제공하였다. LC/MS(m/z): 416.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 6.94 min.

1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-N-(테트라하이드로-2H-피란-2-일옥시)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 메탄올(2 ㎖)에 용해시키고, 디옥산 중의 4 M HCl(2 ㎖)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 이에 따라 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하였다. 조물질을 우선, DCM/MeOH 6/1로 용출시키는 실리카겔에 의해서 정제하여 목적 생성물을 수득하고, 이것을 분취용 HPLC 정제방법 1에 적용하여 5 ㎎(30%)의 표제 생성물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.95 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 11.16(s, 1H), 9.49(s, 1H), 9.15(br. s., 1H), 8.33(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.80(d, J=8.67 Hz, 1H), 2.73(s, 3H), 1.99(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₅H₁₇N₅0₂S에 대한 계산치[M+H]⁺ 332.1176, 실측치 332.1185.

실시예 35: 8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = Me-S-, R2= H, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 90)

단계 6c

에틸 8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트(210 ㎎, 0.76 mmol)를 4 ㎖의 무수 THF에 현탁시키고, 암모늄 클로라이드(120 ㎎, 2.28 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, THF 중의 LiN(TMS)₂₍8 ㎖, 8.0 mmol)를 반응액에 첨가하고, 2 시간 동안 교반하였다. 그 후, 용매를 증발 건조시키고, 잔류물을 DCM으로 녹이고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기층을 Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 조물질을 DCM/MeOH 9/1로 용출시키는 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해서 정제하여 180 ㎎(86% 수율)의 표제 화합물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.46 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.48(s, 1H), 8.24(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.91(br. s., 1H), 7.71(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.49(s, 1H), 2.75(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₁H₉N₅0S에 대한 계산치[M+H]⁺ 260.0601, 실측치 260.0598

실시예 36: tert-부틸 4-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]피페리딘-1-카복실레이트 [(I), R1 = Me-S-, R2= tert-부틸 4-피페리딘 카복실레이트, R3 = NH₂, A = -CH=CH-]

DMF(5 ㎖) 중의 150 ㎎(0.58 mmol)의 8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 용액, 205 ㎎(1.16 mmol)의 tert-부틸 4-브로모피페리딘-1-카복실레이트 및 377 ㎎(1.16 mmol)의 세슘 카보네이트를 80℃에서 18 시간 동안 반응시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시켰다. 유기상을 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 조물질을 DCM/EtOAc/EtOH 6/4/0.5로 용출시키는 칼럼 크로마토그래피에 의해서 정제하여 백색 고체로서 200 ㎎(78%)의 목적 화합물을 제공하였다. LC/MS(m/z): 443.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 4 Rt 2.53.

유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물을 제조하였다:

tert-부틸 4-(3-카바모일-8-메톡시-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일)피페리딘-1-카복실레이트. LC/MS(m/z): 427.2 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 5.61.

실시예 37: 8-(메틸설파닐)-1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S-, R2= 피페리딘-4-일, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 91)

tert-부틸 4-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]피페리딘-1-카복실레이트를 1,4-디옥산(2 ㎖)에 용해시키고, 1,4-디옥산 중의 4 M HCl(3 ㎖)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하고, 잔류물을 디에틸 에테르와 함께 분쇄하고, 여과하고, 진공 하에 오븐(40℃ 내에서 2 시간 동안 건조시켜 25 ㎎(99%)의 표제 화합물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.73 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.50(s, 1H), 8.85(br. s., 1H), 8.64-8.78(m, 1H), 8.29(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.73-7.82(m, 2H), 7.64(s, 1H), 6.16(quin, J=7.05 Hz, 1H), 3.52-3.61(m, J=13.06 Hz, 2H), 3.08-3.21(m, 2H), 2.75(s, 3H), 2.37-2.47(m, 4H). HRMS(ESI) C₁₆H₁₈N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 343.1336, 실측치 343.1326.

동일한 방법에 따라 적합한 출발물질을 사용하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

8-(메틸설파닐)-1-(피페리딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 피페리딘-3-일, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 92). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.86 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.41-9.59(m, 1H), 9.27(br. s., 1H), 8.43(br. s., 1H), 8.20-8.38(m, 2H), 7.75-7.84(m, 1H), 7.69(s, 1H), 6.30(t, J=4.88 Hz, 1H), 3.90(d, J=12.33 Hz, 2H), 3.78(d, J=4.52 Hz, 2H), 2.74(br. s., 3H), 2.27-2.42(m, 3H), 2.14(dd, J=5.61, 14.16 Hz, 2H), 1.78(d, J=5.37 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₁₆H₁₈N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 343.1336, 실측치 343.1329;

1-(4-아미노사이클로헥실)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 4-아미노사이클로헥실, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 93). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.05 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.48(s, 1H), 8.28(d, J=8.67 Hz, 1H), 8.00(br. s., 3H), 7.76(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.72(s, 1H), 7.64(s, 1H), 6.18(br. s., 1H), 2.69(s, 3H), 2.25-2.37(m, 2H), 2.06-2.19(m, 4H), 1.79-1.95(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₀N₆OS에 대한 계산치 [M+H]⁺ 357.1492, 실측치 357.1491;

8-(메틸설파닐)-1-(피페리딘-3-일메틸)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 피페리딘-3-일메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 94). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.94 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 1H 9.50(s, 1H), 8.63(d, J=10.99 Hz, 1H), 8.34-8.40(m, 1H), 8.30(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.80(s, 1H), 7.78(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.63(s, 1H), 5.01-5.19(m, 2H), 3.20(d, J=13.79 Hz, 2H), 3.02(d, J=12.45 Hz, 1H), 2.76-2.88(m, 2H), 2.74(s, 3H), 2.55-2.66(m, 1H), 1.67-1.85(m, 2H), 1.31-1.64(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₀N₆OS에 대한 계산치 [M+H]⁺ 357.1492, 실측치 357.1489;

1-(아제판-4-일)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 아제판-4-일, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 95). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.94 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.49(m, 1H), 8.87(br. s., 2H), 8.28(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.83(s, 1H), 7.76(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.63(s, 1H), 6.05-6.59(m, 1H), 3.46-3.66(m, 2H), 3.10-3.24(m, 1H), 2.72(s, 3H), 2.53-2.59(m, 2H), 2.39-2.46(m, 1H), 2.25-2.35(m, 1H), 2.04-2.17(m, 1H), 1.75-1.95(m, 1H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₀N₆OS에 대한 계산치 [M+H]⁺ 357.1492, 실측치 357.1509;

1-(3-아미노-2,2-디메틸프로필)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 3-아미노-2,2-디메틸프로필, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 96). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.08 분. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.50(s, 1H), 8.32(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.99(br. s., 3H), 7.94(s, 1H), 7.78(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.71(s, 1H), 5.29(s, 2H), 2.89(q, J=6.43 Hz, 1H), 2.75(s, 3H), 1.02(s, 6H). HRMS(ESI) C₁₆H₂₀N₆OS에 대한 계산치 [M+H]⁺ 345.1492, 실측치 345.1502;

8-메톡시-1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-O-, R2 = 피페리딘-4-일, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 97). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.43 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.55(s, 1H), 8.65-8.79(m, 1H), 8.68(br. s., 1H), 8.45-8.58(m, 1H), 8.53(br. s., 1H), 8.22(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.79(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.75(s, 1H), 7.62(s, 1H), 6.10(quind, J=4.66, 9.67 Hz, 1H), 4.16(s, 3H), 3.51-3.65(m, J=12.45 Hz, 1H), 3.18-3.26(m, 2H), 2.37-2.46(m, 4H). HRMS(ESI) C₁₆H₁₈N₆0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 327.1564, 실측치 327.15575; 및

8-메톡시-1-(피페리딘-4-일메틸)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-O-, R2 = 피페리딘-4-일메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 98). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.54 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.53(s, 1H), 8.72-8.89(m, 1H), 8.57-8.70(m, J=9.52 Hz, 1H), 8.21(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.80(br. s., 1H), 7.77(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.57(s, 1H), 5.09(d, J=7.32 Hz, 2H), 4.16(s, 3H), 3.18-3.26(m, J=12.69 Hz, 2H), 2.72-2.89(m, 2H), 2.40-2.47(m, 1H), 1.50-1.68(m, 4H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₀N₆O₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 341.1721, 실측치 341.1721.

실시예 38: 1-[(3-엑소)-8-아자비사이클로[3.2.1]옥트-3-일]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = Me-S-, R2 = 8-아자비사이클로[3.2.1]옥트-3-일, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 99)

DMF(8 ㎖) 중의 50 ㎎(0.193 mmol)의 8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 90℃에서 4 시간 동안 200 ㎎(0.52 mmol)의 2,2,2-트리클로로에틸 3-[(메틸설포닐)옥시]-8-아자비사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 및 140 ㎎(0.43 mmol)의 세슘 카보네이트와 반응시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시켰다. 유기상을 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 조물질을 DCM/EtOH 9/1로 용출시키는 칼럼 크로마토그래피에 의해서 정제하여 회백색 고체로서 73 ㎎(70%)의 2,2,2-트리클로로에틸 3-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]-8-아자비사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트를 제공하였다. 이 화합물(134 mmol)을 THF(5 ㎖)에 용해시키고, 아세트산(5 ㎖) 및 35 ㎎(0.536 mmol)의 아연 분말을 첨가하였다. 혼합물을 50℃까지 가열하고, 18 시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하고, 잔류물을 DCM/MeOH 95/5로 용출시키는 크로마토그래피에 의해서 정제하였다. 추가의 정제가 필요하였으며, 분취용-HPLC 방법 1에 의해서 수행하여 25 ㎎(50%)의 표제 화합물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.08 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.50(s, 1H), 8.25(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.62-7.79(m, 3H), 7.52-7.60(m, 1H), 6.21-6.54(m, OH), 3.68(br. s., 2H), 2.76(s, 2H), 2.22-2.36(m, 2H), 2.02(br. s., 2H), 1.78-1.98(m, 5H). HRMS(ESI) C₁₈H₂₀N₆OS에 대한 계산치 [M+H]⁺ 369.1492, 실측치 369.15.

유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물을 제조하였다:

1-[(3-엔도)-8-아자비사이클로[3.2.1]옥트-3-일]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트 [(I), R1 = Me-S-, R2 = 8-아자비사이클로[3.2.1]옥트-3-일, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 100). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.0 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.49(s, 1H), 8.66(br. s., 1H), 8.32(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.85(s, 1H), 7.79(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.63(s, 1H), 6.07(t, J=8.12 Hz, 1H), 4.07(br. s., 2H), 2.81(ddd, J=4.09, 8.03, 16.20 Hz, 2H), 2.72(s, 3H), 2.63(d, J=16.36 Hz, 2H), 2.05-2.19(m, 2H), 1.79-1.94(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₈H₂₀N₆OS에 대한 계산치 [M+H]⁺ 369.1492, 실측치 369.1484.

실시예 39: 1-[4-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)부탄-2-일]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = Me-S-, R2 = 4-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)부탄-2-일, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 101)

DMF(3 ㎖) 중의 50 ㎎(0.193 mmol)의 8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 80℃에서 3 시간 동안 108 ㎎(0.38 mmol)의 2-(4-브로모-3-메틸부틸)-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온 및 132 ㎎(0.38 mmol)의 세슘 카보네이트와 반응시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시켰다. 유기상을 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조물질을 DCM/EtOH 9/1로 용출시키는 칼럼 크로마토그래피에 의해서 정제하여 연황색 고체로서 57 ㎎(65%)의 목적 화합물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 6.01 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.38(s, 1H), 8.21(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.71-7.76(m, 2H), 7.69(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.53-7.60(m, 2H), 6.29-6.45(m, 1H), 3.41-3.58(m, 2H), 2.72(dt, J=5.25, 9.70 Hz, 1H), 2.45(d, J=7.57 Hz, 1H), 2.41(s, 3H), 1.59(d, J=6.59 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₂₃H₂₀N₆O₃S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 461.1391, 실측치 461.1412.

실시예 40: 1-(4-아미노부탄-2-일)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 4-아미노부탄-2-일, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 102)

THF(5 ㎖) 중의 45 ㎎(0.097 mmol)의 1-[4-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)부탄-2-일]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 용액에 THF 중의 1 M 하이드라진(5 ㎖)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하고, 조물질을 분취용-HPLC 방법 1에 적용하여 20 ㎎(60%)의 표제 생성물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 x Rt 3.98 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.50(s, 1H), 8.29(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.81(s, 1H), 7.77(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.62(d, J=10.25 Hz, 2H), 6.23(br. s., 1H), 2.87(td, J=5.66, 11.50 Hz, 1H), 2.71(s, 3H), 2.61(dt, J=6.41, 11.81 Hz, 1H), 2.14-2.30(m, 1H), 1.66(d, J=6.59 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₁₅H₁₈N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 331.1336, 실측치 331.134.

실시예 41: 1-(1-아자비사이클로[2.2.2]옥트-3-일)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 아자비사이클로[2.2.2]옥트-3-일, R3 = NH₂, A = -CH= -](화합물 103)

DMF(3 ㎖) 중의 64 ㎎(0.247 mmol)의 8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 용액에 300 ㎎(1.06 mmol)의 1-아자비사이클로[2.2.2]옥트-3-일-4-메틸벤젠설포네이트(문헌 [Tetrahedron . Lett . 2000 41, 271-274]에 기술된 방법에 따라 제조) 및 55 ㎎(0.494 mmol)의 칼륨 tert-부톡사이드를 첨가하였다. 혼합물을 100℃까지 가열하고, 4 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온에서 냉각시키고, 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시켰다. 유기상을 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 조물질을 DCM/MeOH/NH₄OH 9/1/0.5로 용출시키는 칼럼 크로마토그래피에 의해서 정제하여 14 ㎎(15%)의 목적 생성물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.73 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.46(s, 1H), 8.17-8.41(m, 1H), 7.87-8.00(m, 1H), 7.68-7.80(m, 1H), 7.54(s, 1H), 5.94-6.38(m, 1H), 4.01(dd, J=4.09, 13.98 Hz, 1H), 3.37-3.48(m, 1H), 2.75-2.95(m, 3H), 2.73(s, 3H), 2.20-2.29(m, 1H), 1.80-1.95(m, 1H), 1.75(ddd, J=4.76, 8.48, 13.12 Hz, 1H), 1.34-1.47(m, 1H), 1.20-1.35(m, 1H). HRMS(ESI) C₁₈H₂₀N₆OS에 대한 계산치 [M+H]⁺ 369.1492, 실측치 369.1508.

실시예 42: 8-(메틸설파닐)-1-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 테트라하이드로-2H-피란-4-일, R3 = NH₂, A = -CH= -](화합물 104)

DMF(3 ㎖) 중의 30 ㎎(0.247 mmol)의 8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 용액에 62 ㎎(0.34 mmol)의 테트라하이드로-2H-피란-4-일 메탄설포네이트(US 2003/6653489에 따라 제조) 및 87 ㎎(0.266 mmol)의 세슘 카보네이트를 첨가하였다. 혼합물을 80℃까지 가열하고, 4 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온에서 냉각시키고, 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시켰다. 유기상을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고 증발시켰다. 조물질을 DCM/MeOH/NH₄OH 9/1/0.5로 용출시키는 칼럼 크로마토그래피에 의해서 정제하여 32 ㎎(38%)의 목적 생성물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.41 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.47(s, 1H), 8.28(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.84(br. s., 1H), 7.75(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.54(s, 1H), 6.25(tt, J=4.32, 11.37 Hz, 1H), 4.11(dd, J=4.15, 11.47 Hz, 1H), 3.48-3.65(m, 1H), 2.75(s, 3H), 2.23-2.40(m, 2H), 2.13(dd, J=2.38, 12.39 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₁₆H₁₇N₅0₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 344.1176, 실측치 344.1166.

실시예 43: 메틸 3-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-yl]사이클로부탄카복실레이트[(I), R1 = Me-S-, R2 = 메틸 3-사이클로부탄카복실레이트, R3 = NH₂, A = -C =CH-]

DMF(5 ㎖) 중의 100 ㎎(0.38 mmol)의 8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 용액에 200 ㎎(0.89 mmol)의 메틸 2-메틸-4-[(메틸설포닐)옥시]펜타노에이트(WO2009/71509 A1에 기술된 방법에 따라 제조) 및 191 ㎎(0.55 mmol)의 세슘 카보네이트를 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 18 시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온에서 냉각시키고, 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시켰다. 유기상을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고 증발시켰다. 조물질을 DCM/EtOH 9/1로 용출시키는 칼럼 크로마토그래피에 의해서 정제하여 백색 고체로서 100 ㎎(70%)의 목적 화합물을 제공하였다. 생성물은 시스 및 트랜스 이성체의 혼합물을 함유하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.55 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.44-9.51(m, 1H), 8.26(dd, J=1.89, 8.73 Hz, 1H), 7.87-8.02(m, 1H), 7.72-7.77(m, 1H), 7.58(br. s., 1H), 6.24-6.93(m, 1H), 3.66-3.76(m, 3H), 3.29(s, 3H), 3.04-3.25(m, 2H), 2.79-3.02(m, 3H). HRMS(ESI) C₁₇H₁₇N₅0₃S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 372.1125, 실측치 372.1119.

유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물을 제조하였다:

메틸 2-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]-2-메틸프로파노에이트 LC/MS(m/z): 360.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 4.75

실시예 44

1-[트랜스-3-(하이드록시메틸)사이클로부틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 트랜스-3-(하이드록시메틸)사이클로부틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 105), 및

1-[시스-3-(하이드록시메틸)사이클로부틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 시스-3-(하이드록시메틸)사이클로부틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 106)

전환 i

에탄올(5 ㎖) 중의 70 ㎎(0.188 mmol)의 메틸 3-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]사이클로부탄카복실레이트(시스 및 트랜스 혼합물)의 용액에 30 ㎎(0.75 mmol)의 나트륨 보로하이드라이드를 조심해서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후에, 잔류물을 에틸 아세테이트(20 ㎖), 물(10 ㎖) 및 포화 NH₄Cl 수용액(10 ㎖)로 녹였다. 층들을 혼합시키고, 분리시켰다. 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시킨 다음에, 여과하고 농축시켰다. 조생성물을 칼럼 크로마토그래피(DCM/EtOAc/EtOH 7/2/1)에 의해서 정제하여 회백색 고체로서 생성물을 제공하고, 이것을 다음의 시스/트랜스 이성체 분할을 위해 분취용-HPLC에 적용하였다:

1-[시스-3-(하이드록시메틸)사이클로부틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 5.04 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.46(s, 1H), 8.26(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.84(s, 1H), 7.73(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.57(s, 1H), 6.39(quin, J=8.33 Hz, 1H), 4.55-4.67(m, 1H), 3.55(d, J=6.10 Hz, 2H), 2.73(s, 3H), 2.57-2.65(m, J=6.35 Hz, 1H), 2.51-2.54(m, 2H), 2.31-2.40(m, 1H). HRMS(ESI) C₁₆H₁₇N₅0₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 344.1176, 실측치 344.1167; 및

1-[트랜스-3-(하이드록시메틸)사이클로부틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.91 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.39-9.48(m, 1H), 8.14-8.34(m, 1H), 7.82-8.00(m, 1H), 7.73(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.56(s, 1H), 6.64(quin, J=7.78 Hz, 1H), 4.71-4.97(m, 1H), 3.53-3.75(m, 2H), 2.82-2.97(m, 2H), 2.73-2.78(m, 3H), 2.37-2.47(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₆H₁₇N₅0₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 344.1176, 실측치 344.1174.

유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

1-(1-하이드록시-2-메틸프로판-2-일)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 1-하이드록시-2-메틸프로판-2-일, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 107). LC/MS(m/z): 332.08 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 1 Rt 1.14; 및

1-(1-하이드록시-2-메틸프로판-2-일)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 1-하이드록시-2-메틸프로판-2-일, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 108). LC/MS(m/z): 334.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 1 Rt 0.63.

실시예 45: tert-부틸 4-(3-카바모일-8-페닐-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일)피페리딘-1-카복실레이트[(I), R1 = 페닐, R2 = tert-부틸 4-피페리딘-1-카복실레이트, R3 = NH₂, A = -CH=CH-]

전환 l

건조 마이크로웨이브 처리 바이알을 30 ㎎(0.068 mmol)의 tert-부틸 4-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]피페리딘-1-카복실레이트, 3 ㎖의 무수 THF, 16.5 ㎎(0.138 mmol)의 페닐보론산, 38.7 ㎎(0.203 mmol)의 구리 티오펜카복실레이트, 및 7.8 ㎎(0.007 mmol, 10 mol%)의 Pd(PPh₃)₄로 충전시켰다. 이어서, 혼합물을 100℃의 마이크로웨이브 반응기 내에서 60 분 동안 가열하였다. 냉각시킨 후에, 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 25% 수성 암모니아로 세척하였다. 수층을 다시 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기상을 합하여 Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 증발시킨 후의 잔류물을 실리카겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피(DCM/EtOAc/EtOH, 6/4/0,2)에 의해서 정제하여 백색 고체로서 29 ㎎(90%)의 표제 생성물을 제공하였다. LC/MS(m/z): 473.0 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 4 Rt 2.95.

실시예 46: 8-페닐-1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = 페닐, R2 = 피페리딘-4-일, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 109)

tert-부틸 4-(3-카바모일-8-페닐-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일)피페리딘-1-카복실레이트를 1,4-디옥산(2 ㎖)에 용해시키고, 1,4-디옥산 중의 4 M HCl(3 ㎖)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하고, 잔류물을 디에틸 에테르와 함께 분쇄하고, 여과하고, 진공 하에 오븐(40℃) 내에서 2 시간 동안 건조시켜 27 ㎎(99%)의 표제 화합물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.47 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.82(s, 1H), 8.94(br. s., 1H), 8.85(br. s., 1H), 8.52-8.66(m, 2H), 8.41(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.89(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.84(br. s., 1H), 7.57-7.73(m, 4H), 6.16-6.37(m, 1H), 3.54-3.67(m, 2H). HRMS(ESI) C₂₁H₂₀N₆O에 대한 계산치 [M+H]⁺ 373.1771, 실측치 373.1783

유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

1-(피페리딘-4-일)-8-(티오펜-3-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 티오펜-3-일, R2 = 피페리딘-4-일, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 110). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.32 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.74(s, 1H), 8.69(br. s., 1H), 8.64(dd, J=1.10, 3.05 Hz, 1H), 8.59(br. s., 1H), 8.37(d, J=8.67 Hz, 1H), 8.03(dd, J=0.98, 5.00 Hz, 1H), 7.85(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.80(s, 1H), 7.77(dd, J=3.05, 5.00 Hz, 1H), 7.65(s, 1H), 6.11-6.43(m, 1H), 3.48-3.73(m, J=12.94 Hz, 2H), 3.35-3.42(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₉H₁₈N₆0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 379.1336, 실측치 379.1332;

1-(4-아미노사이클로헥실)-8-페닐-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = 페닐, R2 = 4-아미노사이클로헥실, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 111). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.91 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.79(s, 1H), 8.59(dd, J=1.89, 7.75 Hz, 2H), 8.40(d, J=8.67 Hz, 1H), 8.04(br. s., 3H), 7.86(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.73(br. s., 1H), 7.69(br. s., 1H), 7.56-7.67(m, 3H), 6.32(quin, J=4.61 Hz, 1H), 2.10-2.46(m, 6H), 1.85-2.03(m, J=4.52 Hz, 2H). HRMS(ESI) C₂₂H₂₂N₆0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 387.1928, 실측치 387.1929; 및

1-(4-아미노사이클로헥실)-8-(티오펜-3-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 트리플루오로아세테이트[(I), R1 = 티오펜-3-일, R2 = 4-아미노사이클로헥실, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 112). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.73 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.71(s, 1H), 8.51-8.69(m, 1H), 8.36(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.99(d, J=5.13 Hz, 1H), 7.89(br. s., 2H), 7.83(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.76(dd, J=3.05, 5.00 Hz, 2H), 7.58(s, 1H), 6.27(quin, J=4.61 Hz, 1H), 3.38-3.46(m, J=4.64 Hz, 1H), 2.31-2.42(m, 2H), 2.20-2.31(m, 2H), 2.04-2.18(m, 2H), 1.96(dd, J=5.00, 13.06 Hz, 1H). HRMS(ESI) C₂₀H₂₀N₆OS에 대한 계산치 [M+H]⁺ 393.1492, 실측치 393.1481.

실시예 47: tert-부틸 4-[3-카바모일-8-(메틸설포닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]피페리딘-1-카복실레이트[(I), R4 = Me, X = S0₂, R2 = tert-부틸 4-피페리딘-1-카복실레이트, R3 = NH₂, A = -CH=CH-]

100 ㎎(0.225 mmol)의 tert-부틸 4-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]피페리딘-1-카복실레이트를 10 ㎖의 DCM에 용해시켰다. 77.3 ㎎(0.448 mmol)의 mCPBA(m-클로로퍼벤조산)를 실온에서 첨가하고, 동일한 온도에서 60 분 동안 교반하였다. 1 ㎖의 포화 나트륨 설파이트 수용액을 첨가하고, 30 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 염수로 세척하고, Na₂O₄ 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시켜 황색 고체로서 100 ㎎(94%)의 표제 화합물을 제공하였다. LC/MS(m/z): 475.0 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 4 Rt 2.01 min.

실시예 48: 1-(피페리딘-4-일)-8-(피롤리딘-1-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = 피롤리딘-1-일, R2 = 피페리딘-4-일, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 113)

THF(3 ㎖) 중의 30 ㎎(0.063 mmol)의 tert-부틸 4-[3-카바모일-8-(메틸설포닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]피페리딘-1-카복실레이트의 용액에 70 ㎕(1 mmol)의 피롤리딘을 첨가하였다. 용액을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, LC/MS에 의해서 모니터링하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고; 분리된 고체를 여과하고 디에틸 에테르로 세척하여 15 ㎎(50%)의 tert-부틸 4-[3-카바모일-8-(피롤리딘-1-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]피페리딘-1-카복실레이트를 수득하였다. LC/MS(m/z): 475.0 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 4 Rt 2.01 min.

15 ㎎(0.032 mmol)의 tert-부틸 4-[3-카바모일-8-(피롤리딘-1-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]피페리딘-1-카복실레이트를 1,4-디옥산(2 ㎖)에 용해시키고, 1,4-디옥산 중의 4 M HCl 3 ㎖(3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하고, 수득된 잔류물을 디에틸 에테르와 함께 분쇄하고, 여과하고, 건조시켜 12 ㎎(93%)의 표제 화합물을 수득하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 4.11 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.11-9.31(m, 1H), 8.89(br. s., 1H), 8.57-8.82(m, 1H), 7.89(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.64(br. s., 1H), 7.41-7.58(m, 2H), 5.80-6.23(m, 1H), 3.69(br. s., 4H), 3.50-3.62(m, 2H), 3.07-3.27(m, 2H), 2.35-2.45(m, 4H), 1.94-2.15(m, 4H). HRMS(ESI) C₁₉H₂₃N₇0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 366.2037, 실측치 366.2047.

유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물을 제조하였다:

8-(모르폴린-4-일)-1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = 피롤리딘-1-일, R2 = 피페리딘-4-일, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 114). LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.92 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.31(s, 1H), 8.82(br. s., 1H), 8.73(br. s., 1H), 7.98(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.64-7.73(m, 1H), 7.51-7.62(m, 2H), 5.87-6.09(m, 1H), 3.85-3.91(m, 4H), 3.72-3.80(m, 4H), 3.54(d, J=13.43 Hz, 2H), 3.18(d, J=5.86 Hz, 3H), 2.35-2.44(m, 4H). HRMS(ESI) C₁₉H₂₃N₇0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 382.1986, 실측치 382.2004.

실시예 49: 1-{[1-(2-아미노에틸)피페리딘-4-일]메틸}-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S-, R2 = 1-(2-아미노에틸)피페리딘-4-일]메틸, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 115)

전환 n

메탄올(1.5 ㎖) 및 DMF(1 ㎖) 중의 26 ㎎(0.073 mmol)의 8-(메틸설파닐)-1-(피페리딘-4-일메틸)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 용액에 13 ㎕(0.219 mmol)의 아세트산, 69.6 ㎎(0.438 mmol)의 tert-부틸(2-옥소에틸)카바메이트 및 28 ㎎(0.438 mmol)의 NaCNBH₃를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하고, 이에 따라 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시키고, 물에 의해서 분배시켰다; 유기층을 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조물질을 섬광 크로마토그래피(DCM/MeOH 95/5)에 의해서 정제하여 백색 고체로서 27 ㎎(75%)의 tert-부틸 [2-(4-{[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]메틸}피페리딘-1-일)에틸]카바메이트를 제공하였다. LC/MS(254) HPLC 방법 2 Rt 3.86 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.47(s, 1H), 8.28(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.81(s, 1H), 7.74(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.54(br. s., 1H), 6.56(br. s., 1H), 5.08(d, J=7.32 Hz, 2H), 2.93-3.05(m, 2H), 2.76-2.84(m, J=10.25 Hz, 2H), 2.71(s, 3H), 2.27(br. s., 1H), 2.14(br. s., 1H), 1.75-1.94(m, 2H), 1.12-1.49(m, 17H). HRMS(ESI) C₂₄H₃₃N₇0₃S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 500.2439, 실측치 500.2436.

수득된 tert-부틸 [2-(4-{[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]메틸}피페리딘-1-일)에틸]카바메이트를 1,4-디옥산 중의 4 M HCl 2 ㎖에 용해시키고, 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 그 후에, 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하고, 잔류물을 디에틸 에테르로 현탁시키고, 여과하여 연황색 고체로서 14 ㎎(90%)의 목적 생성물을 제공하였다. LC/MS(254) HPLC 방법 2 Rt 3.29 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 10.78(br. s., 1H), 9.49(s, 1H), 8.30(d, J=8.67 Hz, 1H), 8.12-8.24(m, 2H), 7.86(s, 1H), 7.77(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.58(s, 1H), 5.12(d, J=7.32 Hz, 1H), 3.47-3.54(m, 2H), 3.16-3.28(m, 3H), 2.85-3.01(m, 1H), 2.76(s, 2H), 1.73-1.88(m, 2H), 1.60-1.71(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₉H₂₅N₇0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 400.1914, 실측치 400.1918.

유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

1-{4-[(2-아미노에틸)아미노]사이클로헥실}-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S- , R2 = 4-(2-아미노에틸)아미노사이클로헥실, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 116). HRMS(ESI) C₁₉H₂₅N₇0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 400.1914, 실측치 400.1908; 및

1-{4-[(2-아미노에틸)아미노]사이클로헥실}-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드 [(I), R1 = Me-S- , R2 = 4-(2-아미노에틸)아미노사이클로헥실, R3 = NH₂, A = -(CH₂)₂-](화합물 117). HRMS(ESI) C₁₉H₂₇N₇0S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 402.2071, 실측치 402.2074.

실시예 50: 1-[4-(글리실아미노)사이클로헥실]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드[(I), R1 = Me-S- , R2 = 4-(글리실아미노)사이클로헥실, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 118)

전환 o

30 ㎎(0.084 mmol)의 1-(4-아미노사이클로헥실)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드를 2 ㎖의 디메틸 아세트아미드에 용해시켰다. 수득된 용액에 21 ㎎(0.126 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)글리신, 60 ㎕(0.336 mmol)의 DIPEA, 및 40 ㎎(0.126 mmol)의 TBTU를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하고, 용액을 에틸 아세테이트와 NaHCO₃의 포화 수용액 사이에 분배시키고, 유기층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 진공 하에서 증발시켰다. 조물질을 실리카겔 크로마토그래피(DCM/MeOH/NH₄0H 95/5/0.1)에 의해서 정제하여 백색 고체로서 35 ㎎(81%)의 tert-부틸 [2-({4-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]사이클로헥실}아미노)-2-옥소에틸]카바메이트를 제공하였다. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.47(s, 1H), 8.27(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.78(d, J=6.35 Hz, 1H), 7.74(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.64(br. s., 1H), 7.55(br. s., 1H), 6.86(t, J=5.86 Hz, 1H), 6.00(br. s., 1H), 3.96(d, J=2.56 Hz, 1H), 3.62(d, J=5.61 Hz, 2H), 2.72(s, 3H), 2.23-2.36(m, 2H), 1.91-2.11(m, 4H), 1.68-1.82(m, 2H), 1.38(s, 9H).

1,4-디옥산(1 ㎖) 중의 20 ㎎(0.039 mmol)의 tert-부틸 [2-({4-[3-카바모일-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-1-일]사이클로헥실}아미노)-2-옥소에틸]카바메이트의 용액에 1,4-디옥산 중의 4 M HCl(2 ㎖, 8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 조물질을 디에틸 에테르로 희석하고, 여과하여 황색 고체로서 15 ㎎(88%)의 최종 하이드로클로라이드 염을 제공하였다. LC/MS(254) HPLC 방법 2 Rt 3.3 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.48(s, 1H), 8.46(d, J=6.96 Hz, 1H), 8.27(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.93-8.11(m, 3H), 7.75(d, J=8.79 Hz, 1H), 7.67(br. s., 1H), 7.51(br. s., 1H), 5.83-6.10(m, 1H), 3.96-4.12(m, 1H), 3.56-3.71(m, 2H), 2.73(s, 3H), 2.25-2.39(m, 2H), 2.04-2.15(m, 2H), 1.89-2.04(m, 3H), 1.75-1.88(m, 2H). HRMS(ESI) C₁₉H₂₃N₇0₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 414.1707, 실측치 414.1721.

실시예 51: 1-{4-[(에틸카바모일)아미노]사이클로헥실}-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S- , R2 = 에틸카바모일)아미노]사이클로헥실, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 119)

전환 p

30 ㎎(0.084 mmol)의 1-(4-아미노사이클로헥실)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드를 2 ㎖의 디메틸포름아미드에 용해시켰다. 수득된 용액에 32 ㎕(0.42 mmol)의 에틸이소시아네이트 및 60 ㎕(0.336 mmol)의 DIPEA를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 18 시간 동안 교반하고, 용액을 에틸 아세테이트와 NaHCO₃의 포화 수용액 사이에 분배시키고, 유기층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 진공 하에서 증발시켰다. 조물질을 실리카겔 크로마토그래피(DCM/MeOH/NH₄0H 95/5/1)에 의해서 정제하여 백색 고체로서 4 ㎎(11%)의 1-{4-[(에틸카바모일)아미노]사이클로헥실}-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 제공하였다. LC/MS(254) HPLC 방법 2 Rt 4.38 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.47(s, 1H), 8.27(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.74(d, J=8.67 Hz, 1H), 7.59(s, 2H), 6.06(d, J=7.08 Hz, 1H), 5.89-6.02(m, 1H), 5.81(t, J=5.49 Hz, 1H), 3.78-3.88(m, 1H), 3.00-3.07(m, 2H), 2.71-2.74(m, 3H), 2.15-2.29(m, 2H), 1.99-2.11(m, 3H), 1.90(dd, J=3.54, 13.67 Hz, 2H), 1.65-1.79(m, 2H), 1.01(t, J=7.20 Hz, 3H). HRMS(ESI) C₂₀H₂₅N₇O₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 428.1863, 실측치 428.1852.

실시예 52: 1-(4-카바미미드아미도사이클로헥실)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 [(I), R1 = Me-S- , R2 = 4-카바미미드아미도사이클로헥실, R3 = NH₂, A = -CH=CH-](화합물 120)

전환 q

30 ㎎(0.084 mmol)의 1-(4-아미노사이클로헥실)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 하이드로클로라이드를 2 ㎖의 디메틸포름아미드에 용해시켰다. 수득된 용액에 70 ㎎(0.34 mmol)의 3,5-디메틸-1H-피라졸-1-카복시이미드아미드 및 93 ㎕(0.67 mmol)의 TEA를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 48 시간 동안 교반하고, 용액을 에틸 아세테이트와 NaHCO₃의 포화 수용액 사이에 분배시키고, 유기층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 진공 하에서 증발시켰다. 조물질을 실리카겔 크로마토그래피(DCM/MeOH/NH₄OH 95/5/1)에 의해서 정제하여 황색 고체로서 6 ㎎(11%)의 1-(4-카바미미드아미도사이클로헥실)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 제공하였다. LC/MS(m/z): 399.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 4.1 min.

실시예 53: 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-6-(모르폴린-4-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드[(I), R1 = Me-S- , R2 = tert-부틸, R3 = NH₂, R5 = 모르폴린-4-일, A = -CH=CH-](화합물 121)

무수 THF(2 ㎖) 중의 50 ㎎(0.158 mmol)의 1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 용액에 137 ㎕(1.26 mmol)의 모르폴린, 및 THF 중의 1 M LiN(TMS)₂(4 ㎖, 4 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 48 시간 동안 교반한 다음에, 냉수로 희석하고, 수득된 침전을 여과하였다. 조물질을 HPLC/MS 정제방법 1에 적용하여 5 ㎎(8%)의 목적 생성물을 수득하였다. LC/MS(m/z): 401.0 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 2 Rt 6.39 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.20(d, J=8.91 Hz, 1H), 7.67(d, J=8.91 Hz, 2H), 7.44(s, 1H), 3.75-3.82(m, 4H), 3.63-3.69(m, 4H), 2.64(s, 3H), 1.97(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₉H₂₅N₆0₂S에 대한 계산치 [M+H]⁺ 401.1754, 실측치 428.1757.

제조예 O: 1-[2-하이드록시-5-(4-메틸피페라진-1-일)페닐]에타논

THF(10 ㎖) 중의 1.0 g(4.65 mmol)의 1-(5-브로모-2-하이드록시페닐)에타논, 0.83 ㎖(7.45 mmol)의 N-메틸피페라진, 16.2 ㎖(16.2 mmol)의 LiHMDSA, 68 ㎎(0.074 mmol)의 Pd₂(dba)₃, 및 29.3 ㎎(0.074 mmol)의 2-디사이클로헥실포스피노-2'-N,N-디메틸아미노비페닐을 마개가 있는 바이알 내에서 아르곤 하에 배합하고, 70℃에서 40 분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 중에서 제거하고, 수득된 잔류물을 물 및 1 N HCl(pH = 6)로 용해시키고, DCM으로 분배시켰다. 유기상을 염수로 세척하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 섬광 칼럼 크로마토그래피(10% MeOH/DCM까지의 DCM 구배)에 의해서 정제하여 갈색 고체로서 532 ㎎(51%)의 목적 생성물을 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 3.34 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 11.45(s, 1H), 7.21-7.28(m, 2H), 6.80-6.93(m, 1H), 2.98-3.10(m, 4H), 2.63(s, 3H), 2.44-2.48(m, 4H), 2.23(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₃H₁₈N₂0₂에 대한 계산치 [M+H]⁺ 235.1441, 실측치 235.1448.

동일한 방법에 따라 적합한 출발물질을 사용하여 다음의 화합물들을 제조하였다:

tert-부틸 4-(3-아세틸-4-하이드록시페닐)피페라진-1-카복실레이트. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 6.61 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 11.49(s, 1H), 7.32(d, J=2.93 Hz, 1H), 7.25-7.30(m, 1H), 6.88(d, J=8.91 Hz, 1H), 3.41-3.52(m, 4H), 2.95-3.05(m, 4H), 2.64(s, 3H), 1.42(s, 9H). HRMS(ESI) C₁₇H₂₄N₂0₄에 대한 계산치 [M+H]⁺ 321.1809, 실측치 321.1805;

2-하이드록시-5-(4-메틸피페라진-1-일)벤조니트릴. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 10.38(br. s., 1H), 7.18(dd, J=3.11, 9.09 Hz, 1H), 7.08(d, J=2.93 Hz, 1H), 6.90(d, J=9.15 Hz, 1H). HRMS(ESI) C₁₂H₁₅N₃0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 218.1288, 실측치 218.1287; 및

2-플루오로-4-(4-메틸피페라진-1-일)페놀. LC/MS(m/z): 211.1[M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 4.00 min.

제조예 P: 4-(4-메틸피페라진-1-일)페놀

2 g(11.24 mmol)의 4-(피페라진-1-일)페놀 및 4.5 ㎖(물 중의 37%, 56 mmol)의 포름알데히드를 THF/AcOH 5/1의 혼합물에 현탁시키고, 실온에서 교반하였다. 30 분 후에, 4.7 g(22.5 mmol)의 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드를 조금씩 첨가하였다. 반응액을 몇 시간 동안 교반하고, 증발시켰다. 조물질을 메탄올 중의 에틸 아세테이트/에탄올/NH₃ 7 N 8/2/0.2를 사용하여 실리카겔 상에서 정제하여 유리 염기로서 2.3 g의 분홍색 고체를 제공하였다. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt 2.4 min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 8.78(s, 1H), 6.71-6.84(m, 2H), 6.56-6.69(m, 2H), 2.85-3.03(m, 4H), 2.46(br. s., 4H), 2.23(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₁H₁₆N₂0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 193.1336, 실측치 193.1328.

유사한 방식으로 수행하여 다음의 화합물을 제조하였다:

3-(4-메틸피페라진-1-일)페놀. LC/MS(254 ㎚) HPLC 방법 2 Rt min. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 9.07(s, 1H), 6.96(t, J=8.12 Hz, 1H), 6.34-6.38(m, 1H), 6.28(t, J=2.32 Hz, 1H), 6.19(ddd, J=0.73, 2.20, 7.93 Hz, 1H), 3.02-3.09(m, 4H), 2.41-2.46(m, 4H), 2.22(s, 3H). HRMS(ESI) C₁₁H₁₆N₂0에 대한 계산치 [M+H]⁺ 193.1336, 실측치 193.1329.

제조예 Q:

단계 a. 4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐 아세테이트의 제조

DCM 중의 1.080 ㎎(5.59 mmol)의 4-(4-메틸피페라진-1-일)페놀 및 1.72 ㎖(12.3 mmol)의 TEA의 혼합물을 빙욕 중에서 냉각시키고, 0.44 ㎖(6.15 mmol)의 아세틸 클로라이드를 적가하였다. 완료 후에, 반응액을 여과하고, 유기상을 물로 빠르게 추출하고, Na₂S0₄ 상에서 건조시키고, 증발시켜 연한 분홍색 고체를 제공하였다. LC/MS(m/z): 235.4 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 1.89 min.

단계 b. 2-브로모-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐 아세테이트의 제조

아세토니트릴 중의 247 ㎎(1.05 mmol)의 4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐 아세테이트 및 209 ㎎(1.1 mmol)의 p-톨루엔설폰산의 용액을 빙욕 중에서 냉각시키고, 0.056 ㎖(1.1 mmol)의 브롬을 적가하였다. 반응액을 완결될 때까지(3-4 시간) 실온에서 교반하고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 포화 NaHCO₃로 추출하였다. Na₂SO₄ 상에서 건조시키고 증발시킨 유기상을 섬광 크로마토그래피(DCM/MeOH 85/15)에 의해서 정제하여 암갈색 오일로서 생성물을 제공하였다. HPLC(254 ㎚) 방법 2 Rt 4.05 min. ¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.25(s, 3H), 2.36(s, 3H), 2.39(m, 4H), 3.44(m, 4H), 6.50(dd, J=2.1, 8.3 Hz, 1H), 7.03(d, J=8.3 Hz, 1H), 7.21(d, J=2.1 Hz, 1H). 질량 계산치 313.0546, 질량 실측치: 313.0538.

단계 c. 2-브로모-4-(4-메틸피페라진-1-일)페놀의 제조

280 ㎎(1.03 mmol)의 2-브로모-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐 아세테이트를 메탄올에 용해시키고, 2 ㎖의 1 N NaOH와 반응시켰다. 2 시간 후에, 반응액을 빙초산으로 산성화시키고, 증발시키고, DCM/MeOH 9/1 및 MeOH 중의 0.4% 7 M NH₃를 사용하여 실리카 상에서 정제하였다. LC/MS(m/z): 273.2 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 2.96 min.

제조예 R: tert-부틸 3-[(메틸설포닐)옥시]아제판-1-카복실레이트

단계 a. tert-부틸 3-하이드록시아제판-1-카복실레이트의 제조

50 ㎖의 MeOH 중의 1.07 g(5 mmol)의 tert-부틸 3-옥소아제판-1-카복실레이트의 용액을 0℃로 냉각시키고, 213 ㎎(6.1 mmol)의 나트륨 보로하이드라이드를 첨가하였다. 용액을 서서히 실온으로 가온하고, 2 시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트로 용해시키고, 물로 분배시켰다. 유기층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 조물질을 섬광 크로마토그래피(EtOAc/헥산 3/7)에 의해서 정제하여 백색 고체로서 0.75 g(75%)의 tert-부틸 3-하이드록시아제판-1-카복실레이트를 제공하였다. ¹H NMR(401 MHz, DMSO-d6) δ 4.34-4.65(m, 1H), 3.52-3.80(m, 1H), 3.05-3.25(m, 2H), 1.70-1.89(m, 2H), 1.58-1.69(m, 1H), 1.43-1.56(m, 3H), 1.39(s, 9H).

단계 b. tert-부틸 3-[(메틸설포닐)옥시]아제판-1-카복실레이트의 제조

0℃로 냉각시킨 DCM(10 ㎖) 중의 200 ㎎(0.93 mmol)의 tert-부틸 3-하이드록시아제판-1-카복실레이트의 용액에 190 ㎕(1.4 mmol)의 TEA 및 114 ㎕(1.4 mmol)의 메실 클로라이드를 첨가하였다. 용액을 실온으로 가온하고, 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 NaHCO₃의 포화 수용액으로 희석하고, 유기층을 분리하여 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축시키고, 수득된 농후한 연황색 오일을 다음 단계에 직접 적용하였다. LC/MS(m/z) 294.0 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 5.65 min.

동일한 방법에 따라 적합한 출발물질을 사용하여 다음의 화합물을 제조하였다:

2,2,2-트리클로로에틸(3-엑소)-3-[(메틸설포닐)옥시]-8-아자비사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트. LC/MS(m/z): 381.1 [M+H]⁺, HPLC(254 ㎚) 방법 3 Rt 5.56 min.

실시예 901: Pim 키나제 결합 활성

PIM-1, -2, 및 -3 효소를 박테리아에서 발현된 융합 단백질로서 생성시키고, IMAC 칼럼 크로마토그래피에 의해서 정제하였다[Sun, X., Chiu, J.F., and He, Q.Y.(2005) Expert Rev. Proteomics, 2:649-657]. 형광-표지된 Pim-특이적 펩타이드 기질은 American Peptide Company(Sunnyvale, CA)에 의해서 주문 합성되었다. 반응 완충액은 10 mM HEPES, pH 7.2, 10 mM MgCl₂, 0.01% 트윈(Tween) 20, 2 mM DTT를 함유하였다. 종결 완충액은 190 mM HEPES, pH 7.2, 0.015% 브리즈(Brij)-35, 0.2% 코팅 시약 3(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA), 20 mM EDTA를 함유하였다. 분리 완충액은 100 mM HEPES, pH 7.2, 0.015% 브리즈-35, 0.1% 코팅 시약 3, 1:200 코팅 시약 8(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA), 10 mM EDTA 및 5% DMSO를 함유하였다.

PIM 반응은 384-웰 플레이트 내에서 웰당 10 ㎕의 최종 용적으로 수행하였다. 5 ㎕의 2X 효소 및 FAM-펩타이드에 5 ㎕의 2X ATP 및 시험 화합물을 첨가함으로써 개시된 표준 효소반응은 반응 완충액 내에 20 pM PIM1, 50 pM PIM2, 또는 55 pM PIM3, 1 μM FAM-펩타이드, 및 10 μM ATP를 함유하였다. 실온에서 90 분 배양한 후에, 10 ㎕의 종결 완충액을 첨가함으로써 포스포릴화 반응을 중지시켰다. 각각의 독립적인 반응에서 생성물 및 기질을 캘리퍼(Caliper) LC3000®(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) 상에서 진행되는 12-시퍼(sipper) 마이크로 플루이딕 칩(micro fluidic chip)(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) 상에서 분리시켰다. 생성물 및 기질의 분리는 캘리퍼 옵티마이저(Caliper's Optimizer) 소프트웨어(Hopkinton, MA)를 사용하여 전압 및 압력을 선택함으로써 최적화되었다. 분리 조건은 -500 V의 하류 전압(downstream voltage), -2150 V의 상류 전압(upstream voltage), 및 -1.2 psi의 선별 압력(screening pressure)을 사용하였다. 생성물 및 기질 형광단은 488 ㎚에서 여기되었으며, 530 ㎚에서 검출되었다. 기질 전환은 HTS 웰 분석기 소프트웨어(Well Analyzer software)(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA)를 사용하여 전기영동도로부터 계산하였다. 시험 화합물에 대한 Ki 값을 계산하였다. 예시된 화합물의 대표적인 PIM1 LC3K Ki에 대한 마이크로몰 값에 대해서는 표 1을 참고로 한다.

실시예 902: 시험관내 세포 증식 효력시험

BaF3은 키나제 종양유전자의 효력 및 하류 시그날링 둘 다를 평가하기 위한 모델 시스템으로서 유용한 쥐 인터류킨-3 의존성 프로-B 세포주이다 ["Ba/F3 cells and their use in kinase drug discovery", Warmuth, M, et al,(January 2007) Current Opinion in Oncology, Vol 19(1):55-60]. BaF3 어버이 세포주는 DSMZ 기탁기관으로부터 획득하였다. PIM1 또는 PIM2로 형질감염된 BaF3 세포주를 생성시켰다. 마우스 IL-3은 R&D Systems로부터 구입하였다. G418은 Clontech로부터 구입하였다. BaF3 어버이 세포주를 위한 배지는 RPMI, 10% FBS, 2 mM L-글루타민, 2 ng/㎖ mIL-3을 함유하였다. BaF3 PIM1 및 2 세포주를 위한 배지는 RPMI, 10% FBS, 2 mM L-글루타민, 250 ㎍/㎖를 함유하였다. MM1.S(다발성 골수종 세포) 세포주를 위한 배지는 RPMI, 10% FBS, 2 mM L-글루타민을 함유하였다.

어버이 세포, BaF3 PIM1 세포, BaF3 PIM2 세포, 및 MM1.S(다발성 골수종) 세포를 45 ㎕/웰로 384-웰 플레이트 내에 각각 2k/웰, 5k/웰, 5k/웰, 및 1Ok/웰로 접종하였다. 시험 화합물은 5 ㎕/웰로 첨가하였다. BaF3 세포(어버이 및 형질감염 세포주)는 밤새 배양하는 반면에, MM1.S 세포는 37℃, 5% CO₂ 하에서 72 시간 동안 배양하였다. 셀타이터 글로®(CELL TITER GLO®) 시약(Promega)을 50 ㎕/웰로 첨가하고, 플레이트를 30 분 동안 배양하고, 그들의 발광을 HT 아날리스트(Analyst) 상에서 판독하였다. 시험 화합물에 대한 IC₅₀/EC₅₀ 값을 계산하였다.

본 발명의 대표적인 화합물을 상술한 바와 같이 시험하였으며, 이하의 표 2에 나타낸 바와 같은 Ki/IC₅₀/EC₅₀을 나타내는 것으로 밝혀졌다.

[표 2]

Claims (25)

1. 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 약제학적으로 허용되는 염:
   [화학식 I]
   

   

   
   상기 식에서,
   R1은 수소, CN, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 XR4기이며, 여기에서
   X는 O, S, SO, S0₂ 및 NR6으로부터 선택된 2가 래디칼이고, 여기에서
   R6은 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬이거나, R6 및 R4는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 N, O 및 S로부터 선택된 1개의 추가의 헤테로 원자를 함유하는, 5 내지 6 원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴 기를 형성할 수 있으며;
   R2는 수소, 또는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, 직쇄 또는 분지된 C₂-C₆ 알케닐, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이고;
   R3은 NR'R" 및 N(OH)R'로부터 선택된 기이며, 여기에서
   R' 및 R"는 각각 독립적으로 수소, 또는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이고;
   R4는 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 기이며;
   R5는 수소 또는 NR'R"이고, 여기에서
   R' 및 R"는 각각 독립적으로 수소, 또는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이거나, R' 및 R"는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 N, O 및 S로부터 선택된 1개의 추가의 헤테로 원자를 함유하는, 5 내지 6 원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴 기를 형성할 수 있으며;
   A는 -(CH₂)₂- 및 -CH=CH-로부터 선택된 2가 기이고;
   단, 여기에서
   1-메틸-8-(피페리딘-1-일)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드, 및
   1-메틸-8-(메틸설포닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드는 제외된다.
2. 제1항에 있어서,
   R1이 CN, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 XR4기이며, 여기에서
   X는 O, S, SO, S0₂ 및 NR6으로부터 선택된 2가 래디칼이고, 여기에서
   R6은 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬이거나, R6 및 R4는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 N, O 및 S로부터 선택된 1 개의 추가의 헤테로 원자를 함유하는, 5 내지 6 원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴 기를 형성할 수 있으며;
   R2는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, 직쇄 또는 분지된 C₂-C₆ 알케닐, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이고;
   R5는 수소 또는 NR'R"이며, 여기에서
   R' 및 R"는 수소인 화학식 I의 화합물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   R1이 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 XR4 기이며, 여기에서
   X는 O, S, SO, S0₂ 및 NR6으로부터 선택된 2가 래디칼이고, 여기에서
   R6은 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬이거나, R6 및 R4는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 N, O 및 S로부터 선택된 한 개의 추가의 헤테로 원자를 함유하는, 5 내지 6 원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴 기를 형성할 수 있으며;
   R2는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이고;
   R3은 NR'R" 및 N(OH)R'로부터 선택된 기이며, 여기에서
   R' 및 R"는 수소인 화학식 I의 화합물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   R1이 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, 아릴 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 XR4기이며, 여기에서
   X는 O, S, 및 NR6으로부터 선택된 2가 래디칼이고, 여기에서
   R6은 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬이거나, R6 및 R4는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 N, O 및 S로부터 선택된 1개의 추가의 헤테로 원자를 함유하는, 5 내지 6 원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴 기를 형성할 수 있으며;
   R3은 NR'R"이고, 여기에서
   R' 및 R"는 수소이며;
   R4는 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, 아릴, 아릴알킬, 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 기이고;
   R5는 수소인 화학식 I의 화합물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
   R1이 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬 및 아릴로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 XR4기이며, 여기에서
   X는 O, S, 및 NR6으로부터 선택된 2가 래디칼이고, 여기에서
   R6은 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬이거나, R6 및 R4는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 N, O 및 S로부터 선택된 한 개의 추가의 헤테로 원자를 함유하는, 5 내지 6 원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴 기를 형성할 수 있으며;
   R4는 임의로 치환된 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, 아릴, 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 기이고;
   A는 2가 -CH=CH- 기인 화학식 I의 화합물.
6. 제1항에 있어서,
   1-(2-하이드록시에틸)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-8-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-8-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(2-하이드록시에틸)-8-메톡시-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-N-메틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-N-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-N-(2-하이드록시에틸)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-N-(1-메틸피페리딘-4-일)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-N-[2-(1H-이미다졸-5-일)에틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   6-아미노-1-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   2-[2-(디메틸아미노)에틸]-8-(메틸설파닐)-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(2-아미노에틸)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   2-(2-아미노에틸)-8-(메틸설파닐)-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(메틸설파닐)-1-(피페리딘-4-일메틸)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(메틸설파닐)-2-(피페리딘-4-일메틸)-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-[4-(피페라진-1-일)페녹시]-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-페녹시-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(3-아미노페녹시)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(4-아미노페녹시)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-(피리딘-4-일옥시)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(2-플루오로에톡시)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-[4-(피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-[2-브로모-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-[2-브로모-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-[3-(피페라진-1-일)페녹시]-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-[3-(피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-[3-(디메틸아미노)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(2-클로로페녹시)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(2-플루오로페녹시)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-[2-플루오로-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-[2-플루오로-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-[2-아세틸-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-[2-아세틸-4-(피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-[2-시아노-4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-시아노-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-(1H-피라졸-1-일)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-[3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-1-일]-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(1H-이미다졸-1-일)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-(4-니트로-1H-이미다졸-1-일)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(2-하이드록시에틸)-8-페녹시-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(2-하이드록시에틸)-8-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(2-하이드록시에틸)-8-[3-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(2-하이드록시에틸)-8-(3-니트로페녹시)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-(3-니트로페녹시)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-[3-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-8-[4-(4-메틸피페라진-1-일)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-8-(디메틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-메톡시-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-에톡시-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-메톡시-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(3-포르밀페녹시)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-{3-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]페녹시}-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-[3-(하이드록시메틸)페녹시]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-{3-[(디메틸아미노)메틸]페녹시}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-[3-(모르폴린-4-일메틸)페녹시]-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(3-아미노페녹시)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(3-아미노페녹시)-1-(2-하이드록시에틸)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(2-플루오로에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(2-클로로에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(2-하이드록시에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(2-메톡시에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-[3-(디메틸아미노)프로필]-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(1-아미노-2-메틸-1-옥소프로판-2-일)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(메틸설파닐)-1-(피페리딘-4-일메틸)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(3-아미노프로필)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(메틸설파닐)-1-(피페리딘-4-일)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(2-아미노에틸)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸]-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-에테닐-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-{2-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]에틸}-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-에톡시-1-(피페리딘-4-일메틸)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-[3-(디메틸아미노)프로필]-8-에톡시-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-에톡시-1-(피페리딘-4-일)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-에톡시-1-[(1-메틸피페리딘-4-일)메틸]-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(2,6-디플루오로페닐)-1-(피페리딘-4-일메틸)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(3-아미노프로필)-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   2-(3-아미노프로필)-8-(4-플루오로페닐)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(3-아미노프로필)-N-(3-하이드록시프로필)-8-(4-메톡시페닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   6-아미노-1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-메틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   6-아미노-1-메틸-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-N-하이드록시-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(메틸설파닐)-1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(메틸설파닐)-1-(피페리딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(4-아미노사이클로헥실)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(메틸설파닐)-1-(피페리딘-3-일메틸)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(아제판-4-일)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(3-아미노-2,2-디메틸프로필)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-메톡시-1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-메톡시-1-(피페리딘-4-일메틸)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-[(3-엑소)-8-아자비사이클로[3.2.1]옥트-3-일]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-[(3-엔도)-8-아자비사이클로[3.2.1]옥트-3-일]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-[4-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)부탄-2-일]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(4-아미노부탄-2-일)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(1-아자비사이클로[2.2.2]옥트-3-일)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(메틸설파닐)-1-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-[트랜스-3-(하이드록시메틸)사이클로부틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-[시스-3-(하이드록시메틸)사이클로부틸]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(1-하이드록시-2-메틸프로판-2-일)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(1-하이드록시-2-메틸프로판-2-일)-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-페닐-1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(피페리딘-4-일)-8-(티오펜-3-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(4-아미노사이클로헥실)-8-페닐-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(4-아미노사이클로헥실)-8-(티오펜-3-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(피페리딘-4-일)-8-(피롤리딘-1-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   8-(모르폴린-4-일)-1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-{[1-(2-아미노에틸)피페리딘-4-일]메틸}-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-{4-[(2-아미노에틸)아미노]사이클로헥실}-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-{4-[(2-아미노에틸)아미노]사이클로헥실}-8-(메틸설파닐)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-[4-(글리실아미노)사이클로헥실]-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-{4-[(에틸카바모일)아미노]사이클로헥실}-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-(4-카바미미드아미도사이클로헥실)-8-(메틸설파닐)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드,
   1-tert-부틸-8-(메틸설파닐)-6-(모르폴린-4-일)-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드, 및
   6-아미노-1-tert-부틸-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드로 구성된 군으로부터 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
7. 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 제조하는 방법:
   단계 6) 하기 화학식 VIII의 화합물을 대체 단계 6a), 6b) 또는 6c) 중 어느 하나에 따라 반응시키는 단계:
   [화학식 VIII]
   

   

   
   상기 식에서, R1은 SR4, OR4, 수소, 또는 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이고, R2, R4, A는 제1항에서 정의된 바와 같음:
   단계 6a) 암모늄 하이드록사이드 또는 하기 화학식 XII의 아민과 반응시켜 하기 화학식 I의 화합물을 수득하는 단계:
   [화학식 XII]
   

   

   :
   상기 식에서, R' 및 R"는 제1항에서 정의된 바와 같음:
   [화학식 I]
   

   

   
   상기 식에서, R1은 수소, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 SR4기 또는 OR4기이며, R3은 NR'R"이고, R5는 수소이며, R2, R4, A, R' 및 R"는 제1항에서 정의된 바와 같음;
   단계 6b1) 산성 또는 염기성 가수분해 조건 하에서 반응시켜 화학식 XI의 화합물 또는 그의 염을 제공하는 단계:
   [화학식 XI]
   

   

   
   상기 식에서, R1은 수소, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 SR4기 또는 OR4 기이며, R2, R4, A는 제1항에서 정의된 바와 같음;
   단계 6b2) 생성된 화학식 XI의 화합물 또는 그의 염을 염기성 조건 및 적합한 축합제의 존재 하에서, 암모늄염 또는 상기에서 정의된 바와 같은 화학식 XII의 유도체, 또는 하기 화학식 X의 유도체와 혼합시켜 하기 화학식 I의 화합물을 제공하는 단계:
   [화학식 X]
   

   

   
   상기 식에서, R'는 제1항에서 정의된 바와 같음:
   [화학식 I]
   

   

   
   상기 식에서, R1은 수소, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 SR4기 또는 OR4 기이며, R5는 수소이고, R2, R3, R4 및 A는 제1항에서 정의된 바와 같음;
   단계 6c) 강염기의 존재 하에서 암모늄염 또는 상기에서 정의된 화학식 XII의 적합한 아민과 반응시켜 하기 화학식 I의 화합물을 제공하는 단계:
   [화학식 I]
   

   

   
   상기 식에서, R1은 수소, 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기, 또는 SR4기 또는 OR4 기이며, R3은 NR'R"이고, R2, R4, R5, A, R' 및 R"는 제1항에서 정의된 바와 같음;
   임의로 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 또 다른 상이한 화합물로 전환시키고, 필요한 경우에, 화학식 I의 화합물을 그의 약제학적으로 허용되는 염으로 전환시키거나 염을 유리 화합물 I로 전환시키는 단계.
8. 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 제조하는 방법:
   단계 7) 하기 화학식 XIII의 화합물을 하기 화학식 V의 화합물과 반응시키는 단계:
   [화학식 XIII]
   

   

   
   상기 식에서, R3 및 A는 제1항에서 정의된 바와 같음:
   [화학식 V]
   

   

   
   상기 식에서, Y는 요오도, 브로모, 클로로 또는 설포네이트기(예를 들어, -OS(0)₂CF₃, -OS(0)₂CH₃ 또는 -OS(0)₂PhMe)과 같은 적합한 이탈기임;
   단계 8) 생성된 하기 화학식 XIV의 화합물을 화학식 XV의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 I의 화합물을 제공하는 단계:
   [화학식 XIV]
   

   

   
   상기 식에서, R2는 제1항에서 정의된 바와 같지만 수소는 아니며, R3 및 A는 제1항에서 정의된 바와 같음:
   [화학식 XV]
   

   

   
   상기 식에서, R1은 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 임의로 치환된 기이고, Q는 -B(OH)₂, -B(OAlk)₂, -Sn(Alk)₄, -Al(Alk)₃, ZnHal, MgHal, 또는 ZrCp₂Hal과 같은, 팔라듐 매개된 탄소 결합을 형성할 수 있는 적합한 기임:
   [화학식 I]
   

   

   
   상기 식에서, R1은 직쇄 또는 분지된 C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로사이클릴로부터 선택된 임의로 치환된 기이고, R2는 제1항에서 정의된 바와 같지만 수소는 아니며, R3 및 A는 제1항에서 정의된 바와 같고, R5는 수소임;
   임의로 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 또 다른 상이한 화합물로 전환시키고, 필요한 경우에, 화학식 I의 화합물을 그의 약제학적으로 허용되는 염으로 전환시키거나 염을 유리 화합물 I로 전환시키는 단계.
9. 하기 방법 중 하나를 수행하여 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 또 다른 상이한 화합물로 전환시키는 것을 특징으로 하는, 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 제조하는 방법:
   전환 e) Rl, R3 및 A가 제1항에서 정의된 바와 같고 R2가 수소인 화학식 I의 화합물을, 하기 화학식 V의 화합물과의 반응을 통해서 R2가 제1항에서 정의된 바와 같지만 수소는 아닌 화학식 I의 화합물로 전환시키는 방법:
   [화학식 V]
   R2-Y'
   상기 식에서, Y'는 OH, 또는 임의로 활성화시키면 요오도, 브로모, 클로로 또는 설포네이트기(예를 들어, -OS(0)₂CF₃, -OS(0)₂CH₃ 또는 -OS(0)₂PhMe)과 같은 적합한 이탈기로 작용할 수 있는 기이며, R2는 제1항에서 정의된 바와 같지만 수소는 아님;
   전환 r) Rl, R2 및 R3가 제1항에서 정의된 바와 같고 A는 -CH₂-CH₂-와 같은 2가 기인 화학식 I의 화합물을, 산화제로 처리하거나 Pd 또는 Pt 촉매의 존재 하에서 탈수소화 작업 조건 하에서 처리함으로써, A가 -CH=CH-기인 화학식 I의 화합물로 전환시키는 방법.
10. 제1항에서 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물의 유효량을 이를 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 조절장애된 단백질 키나제 활성에 의해서 야기되고/되거나 이들과 관련된 질병을 치료하는 방법.
11. 제10항에 있어서, 조절장애된 PIM-1, PIM-2, PIM-3 키나제 활성에 의해서 야기되고/되거나 이들과 관련된 질병을 치료하는 방법.
12. 제10항에 있어서, 상기 질병이 암, 세포 증식 장애, 및 면역세포-관련된 질병 및 장애로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법.
13. 제12항에 있어서, 상기 암이 방광암, 유방암, 결장암, 신장암, 간암, 소세포 폐암을 포함한 폐암, 식도암, 담낭암, 난소암, 췌장암, 위암, 경부암, 갑상선암, 전립선암 및 편평세포 암종을 포함한 피부암과 같은 암종; 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, B-세포 림프종, T-세포-림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 모발성 세포 림프종 및 버킷 림프종을 포함한 림프계의 조혈성 종양; 급성 및 만성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군 및 전골수성 백혈병을 포함한 골수계의 조혈성 종양; 섬유육종 및 횡문근육종을 포함한 간엽 기원의 종양; 성상세포종, 신경아세포종, 신경교종 및 신경초종을 포함한 중추 및 말초 신경계의 종양; 흑색종, 정상피종, 기형암종, 골육종, 색소성 건피증, 각막황색종, 갑상선 여포암, 카포시 육종 및 중피종을 포함한 그 밖의 다른 종양으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법.
14. 제12항에 있어서, 상기 세포 증식 장애가 양성 전립선 비대증, 가족성 선종성 용종증, 신경섬유종증, 건선, 아테롬성 경화증과 관련된 혈관 평활세포 증식, 폐섬유증, 관절염, 사구체신염, 및 수술-후 협착증 및 재발협착증으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법.
15. 제12항에 있어서, 염증성 및 자가면역 질환이 다발성 경화증, 전신성 홍반성 낭창, 염증성 장질환(IBD), 크론병, 과민성 장 증후군, 췌장염, 궤양성 대장염, 게실증, 중증 근무력증, 맥관염, 건선, 공피증, 천식, 알레르기, 전신 경화증, 백반, 골관절염, 연소기 류마티스성 관절염과 같은 관절염, 강직성 척추염으로부터 선택되는 것인 방법.
16. 제10항에 있어서, 적어도 하나의 세포증식억제제 또는 세포독성제와 함께 방사선요법 또는 화학요법을 이를 필요로 하는 포유동물에게 적용하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
17. 제17항에 있어서, 이를 필요로 하는 포유동물이 인간인 것인 방법.
18. PIM-1, PIM-2, PIM-3 키나제 단백질을 제1항에서 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는, PIM-1, PIM-2, PIM-3 키나제 단백질 활성을 억제하는 시험관내 방법.
19. 제10항에 있어서, 종양 혈관형성 및 전이 억제를 제공하는 방법.
20. 제1항에서 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 치료학적 유효량, 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체 및/또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물.
21. 제20항에 있어서, 하나 이상의 화학요법제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
22. 항암 요법에서 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한 복합제제로서 제1항에서 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 제20항에서 정의된 바와 같은 그의 약제학적 조성물, 및 하나 이상의 화학요법제를 포함하는 제품 또는 키트.
23. 의약으로 사용하기 위한, 제1항에서 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
24. 암을 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 제1항에서 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
25. 항암 활성을 갖는 의약의 제조에 있어서의, 제1항에서 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용도.

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