CN103298816A

CN103298816A - 作为激酶抑制剂的取代的吡唑并-喹唑啉衍生物

Info

Publication number: CN103298816A
Application number: CN201180059720XA
Authority: CN
Inventors: 弗朗切斯科·卡苏谢利; 克劳迪娅·皮乌蒂; 安东内拉·埃尔莫莉; 丹尼拉·法雅尔蒂
Original assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Current assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Priority date: 2010-12-17
Filing date: 2011-12-16
Publication date: 2013-09-11
Also published as: MX2013003328A; BR112013008527A2; EP2614065B1; MX342873B; KR101913441B1; JP5980225B2; CA2812223A1; WO2012080990A1; EP2614065A1; US20120190678A1; KR20140027902A; RU2652638C2; CA2812223C; RU2013109776A; US8541576B2; JP2014503531A

Abstract

本发明涉及取代的吡唑并[4,3-h]喹唑啉化合物，其调节蛋白激酶活性并因此可用于治疗由蛋白激酶活性失调引起的疾病，尤其是PIM激酶。本发明还提供用于制备这些化合物、包含这些化合物的药物组合物的方法、以及利用这样的化合物或含有这些化合物的药物组合物治疗疾病的方法。

Description

作为激酶抑制剂的取代的吡唑并-喹唑啉衍生物

本申请根据35USC§119(a)要求于2010年12月17日提交的欧洲专利申请号10195675.3的权益，其全文结合于本文作为参考。

技术领域

本发明涉及某些取代的吡唑并[4,3-h]喹唑啉化合物，其调节蛋白激酶尤其是Pim激酶（Pim-1、Pim-2和/或Pim-3）抑制剂的活性。因此，本发明的化合物用于治疗由蛋白激酶活性失调引起的疾病。本发明还提供了用于制备这些化合物、包含这些化合物的药物组合物的方法，以及利用包含这些化合物的药物组合物来治疗疾病的方法。

背景技术

蛋白激酶（PK）的功能障碍是许多疾病的标志。相当大比例的与人类癌症相关的致癌基因或原癌基因编码PK。PK的活性增强还涉及许多非恶性疾病，例如良性前列腺增生、家族性腺瘤病、息肉病、神经纤维瘤病、银屑病、与动脉粥样硬化相关的血管平滑细胞增生、肺纤维化、关节炎、肾小球肾炎以及术后狭窄和再狭窄。

PK还涉及炎性病症以及病毒和寄生虫的繁殖。PK还在神经退行性病症的发病和发展中起主要作用。

对于PK功能障碍和失调（deregulation）的一般性参考，参见例如Current Opinion in Chemical Biology1999,3,459-465和Carcinogenesis2008,29,1087-1091。

通过在淋巴瘤小鼠模型中的前病毒突变最初鉴别为活化基因，PIM（在本申请全文中为PIM1、PIM2和/或PIM-3）是蛋白-丝氨酸/苏氨酸激酶。PIM激酶在正常组织中表达较少，而在一些人类癌症（包括淋巴瘤、白血病、前列腺癌、胰腺癌和胃癌）中过表达或者甚至发生突变[Shah等人，Eur.J.Cancer,44,2144-51,(2008)]。

PIM激酶具有组成型活性（构建活性，constitutively activity）并且通过修饰越来越大量的普通底物以及同种型特异性底物（包括数种细胞周期调节剂和凋亡调节剂）它们的活性在体外和体内支持肿瘤细胞生长和存活。PIM1（而不是PIM2）似乎还通过调节趋化因子受体表面表达来介导正常和恶性造血细胞的归巢（homing）和迁移[Brault等人，Haematologica951004-1015(2010)]。

越来越多的证据表明，PIM1和PIM2激酶可能涉及介导一些急性髓性白血病（AML）相关的致癌基因的致癌作用。尤其是，FLT3-突变（ITD和KD突变，存在于30%的AML中）和/或涉及MLL基因易位（在20%AML中发生）的致癌作用（Kumar等人，(2005)J.Mol.Biol.348,183-193）。与在WY骨髓细胞中相比较，PIM1更多地表达于FLT3-ITD-转化的AML细胞中。数据表明，PIM1和PIM2抑制可介导AML细胞的FLT3ITD-依赖性死亡。令人感兴趣的是，通过赋予小分子酪氨酸激酶抑制剂耐受性的FLT3突变转化的细胞对于通过RNAi敲低（knockdown）PIM2或PIM-1和PIM-2仍然是敏感的（Kim等人，(2005)Blood105:1759-67）。

此外，已经报道PIM2被过表达并且与数种源于B细胞系的恶性肿瘤（例如慢性淋巴细胞白血病（CLL）、弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）、套细胞淋巴瘤（MCL）或骨髓瘤）发展有关（Cohen等人，(2004)Leuk.Lymphoma94:51;Huttmann等人，(2006)Leukemia201774）。

令人感兴趣的是，PIM和AKT/PKB似乎在介导造血细胞的生长或存活中起到部分冗余的作用，最可能是由于重叠底物（交叉底物，overlappingsubstrate）如BAD、p21^WAF1/CIP1、p27^KIP1或Cot/Tpl-2[Choudhary等人，Mol Cell.36326-39(2009)]。

PIM激酶已表现出控制mTOR抑制（雷帕霉素）耐受性、增殖和存活。因此，靶向数种存活激酶（survival kinases）的小分子抑制剂的组合对于有效的癌症治疗平台可能是重要的[Amaravadi R.等人，J.Clin.Invest.2005,115(10)2618-24]。通过eIF4E结合蛋白1（4E-BP1）合成致癌基因蛋白似乎是mTOR-依赖性的并且受PIM-2控制。这种观察结果表明能够用小分子PIM-2抑制剂来阻断致癌基因eIF4F翻译起始复合物[Tamburini J.等人，Blood2009,114(8),1718-27和Brault L.等人，Haematologica2010,95(6)1004-1015]。

在名称为Pharmacia Italia S.P.A的申请WO04/104007中还披露了具有激酶抑制活性的吡唑并-喹唑啉衍生物。从本发明的通式中排除了上述WO04/104007的一些具体化合物。

尽管已经取得了这些进展，但对于所述疾病仍然需要有效的药剂。

发明内容

现在已经鉴别了具有比之前的现有技术中所达到的更高活性的新类型的取代的吡唑并[4,3-h]喹唑啉化合物。发现这些化合物能够以非常低的浓度阻止人类肿瘤细胞的增殖，从而使抗肿瘤疗效最大化，同时减少与给予较大量药物相关的副作用的风险。

这类新型化合物具有式（I）中所示的结构

其中

R1为氢，CN，选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团XR4，其中

X为选自O、S、SO、SO₂和NR6的二价基团，其中

R6为可选取代的直链或支链C₁-C₆烷基或者，连同它们连接到其上的氮原子一起，R6和R4可以形成可选地含有选自N、O和S的一个另外杂原子的5至6元杂芳基或杂环基；

R2为氢，或选自直链或支链C₁-C₆烷基、直链或支链C₂-C₆烯基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团；

R3为选自NR'R"和N(OH)R'的基团，其中

R'和R"各自独立地为氢，或选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团；

R4为选自可选取代的直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的基团；

R5为氢或NR'R"，其中

R'和R"各自独立地为氢，或选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或者连同它们连接到其上的氮原子一起，R'和R"可以形成可选地含有选自N、O和S的一个另外杂原子的5至6元杂芳基或杂环基；

A为选自-(CH₂)₂-和-CH=CH-的二价基团；以及

其可药用盐，

不包括以下化合物：

1-甲基-8-(哌啶-1-基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，和

1-甲基-8-(甲基磺酰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺。

本发明还提供了合成由式（I）表示并通过由标准合成转化组成的工艺制备的取代的吡唑并[4,3-h]喹唑啉化合物，以及异构体、互变异构体、水合物、溶剂化物、络合物、代谢物、前药、载体、N-氧化物的方法。

本发明还提供了用于治疗由蛋白激酶活性失调引起和/或与其相关的疾病的方法，具体地是人PIM-1、PIM-2、PIM-3、Flt-3、c-Kit、MPSl（TTK）、PLK家族成员、不同同种型的蛋白激酶C、Met、PAK-4、PAK-5、PERK、STLK-2、DDR-2、Aurora1、Aurora2、Bub-1、Chkl、Chk2、HER2、C-raf、B-raf rafl、Melk、PDK1、MEK1、MAPK、EGF-R、PDGF-R、FGF-R、IGF-R、PI3K、weel激酶、Src、Abl、Akt、MAPK、ILK、MK-2、IKK-2、Cdc7、Nek、Cdk/细胞周期蛋白激酶家族，更加具体地是人PIM-1、PIM-2、PIM-3，该方法包括向对其有需要的哺乳动物给予有效量的通过如上定义的式（I）表示的取代的吡唑并[4,3-h]喹唑啉化合物。

本发明的方法用于治疗由蛋白激酶活性失调引起和/或与其相关的疾病，所述疾病选自由癌症、细胞增生性疾病和免疫细胞相关疾病和病症组成的组。

本发明的另一种方法用于治疗特定类型的癌症，包括但不限于：癌（carcinoma），如膀胱癌、乳癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌（包括小细胞肺癌）、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、和皮肤癌（包括鳞状细胞癌）；淋巴细胞系的造血细胞肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞白血病、急性淋巴母细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞-淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤（Burkett's lymphoma）；髓细胞系的造血细胞肿瘤，包括急性和慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞性白血病；间充质细胞来源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢神经系统和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；其他肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病、角化黄瘤（角化棘皮瘤，keratoxanthoma）、甲状腺滤泡癌、卡波西肉瘤（Kaposi's sarcoma）和间皮瘤等。

本发明的另一种方法用于治疗特定的细胞增生性病症，例如良性前列腺增生、家族性腺瘤病、息肉病、神经纤维瘤病、银屑病、与动脉粥样硬化相关的血管平滑细胞增生、肺纤维化、关节炎、肾小球肾炎以及术后狭窄和再狭窄。

本发明的另一种方法用于治疗免疫细胞相关的疾病和病症，例如炎性疾病和自身免疫疾病，例如多发性硬化症、系统性红斑狼疮、炎症性肠病（IBD）、克罗恩病（Crohn's disease）、肠易激综合征（irritable bowelsyndrome）、胰腺炎、溃疡性结肠炎、憩室病、重症肌无力、血管炎、银屑病、硬皮病、哮喘、过敏、系统性硬化症、白癜风、关节炎，如骨关节炎、幼年型类风湿关节炎、强直性脊柱炎。

另外，本发明的方法还提供了肿瘤血管生成和转移抑制以及器官移植排斥和移植物抗宿主病的治疗。

本发明还提供了包含一种或多种式（I）化合物或其可药用盐以及可药用赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。

本发明进一步提供了包含式（I）化合物的药物组合物与已知抗癌治疗相结合（联合），例如放射治疗或化疗方案与细胞生长抑制剂或细胞毒性剂、抗生素类药剂、烷化剂、抗代谢剂、激素类药剂、免疫药剂、干扰素类药剂、环氧化酶抑制剂（例如，COX-2抑制剂）、基质金属蛋白酶抑制剂、端粒酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗生长因子受体药剂、抗-HER药剂、抗-EGFR药剂、抗-血管生成药剂（例如，血管生成抑制剂）、法尼基转移酶抑制剂、ras-raf信号转导通路抑制剂、细胞周期抑制剂、其他cdk抑制剂、微管蛋白结合剂、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂等结合。

本发明进一步提供了用于抑制PIM-1、PIM-2、PIM-3蛋白激酶活性的体外方法，包括使该激酶与有效量的如上文中所定义的式（I）化合物接触。

另外，本发明提供了包含如上文定义的式（I）化合物或其可药用盐或其药物组合物和一种或多种化疗剂的产品或试剂盒，作为同时地、单独地或依次地用于抗癌治疗的组合制剂。

另一方面，本发明提供了如上文定义的式（I）化合物或其可药用盐，用作药物。

此外，本发明提供了如上文定义的式（I）化合物或其可药用盐在制备具有抗癌活性的药物中的应用。

最后，本发明提供了如上文定义的式（I）化合物或其可药用盐，用于治疗癌症的方法中。

附图说明

图1示出了化合物I-VIII的转化，包括式（I）化合物的制备，其中R1为氢，选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团SR4或OR4；并且R2、R3、R4、R5、R'、R"和A如上文中所定义。

图2示出了通过蛋白质印迹分析获得的pBAD（s112）水平，所述蛋白质印迹分析测量了与用DMSO处理的细胞相比（对照第一泳道），当用式（I）的化合物处理时（通过化合物85举例），MV-4-11细胞（含有FLT3/ITD突变的人类白血病细胞系）中BAD蛋白（phosphoBAD）的剂量依赖性减少。

具体实施方式

现在详细描述本发明的某些实施方式，在所附结构和化学式中举例说明了其实施例。尽管结合所列举的实施方式对本发明进行了描述，但应当理解这些实施方式并非旨在将本发明限于这些实施方式。相反，本发明旨在包括所有的替代、修改和等同方式，它们均包括在由权利要求限定的本发明的范围内。本领域技术人员将认识到许多类似于或等同于本文中所述的方法和材料均能够用于本发明的实践中。本发明不限于所述的方法和材料。在所结合的文献、专利和类似材料的一个或多个不同于本申请或与本申请相矛盾的情况下（包括但不限于所定义的术语、术语应用、所描述的技术等），以本申请为准。除非另外定义，本文中使用的所有科技术语具有与本发明所属领域普通技术人员所通常理解的相同含义。尽管与本文所述相似或等同的方法和材料能够用于本申请的实践和测试，下文中描述了适合的方法和材料。本文中所提到的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献均以其全文结合于本文作为参考。除非另外指出，本申请中使用的命名法基于IUPAC系统命名法。

除非另外指出，当提及式（I）化合物本身以及提及其任何药物组合物或提及包含它们的任何治疗性治疗（处治）时，本发明包括本发明化合物的所有异构体、互变异构体、水合物、溶剂化物、络合物、代谢物、前药、载体、N-氧化物和可药用盐。

换言之，如果可容易地获自如上文所定义的式（I）化合物，则它们的异构体、互变异构体、水合物、溶剂化物、络合物、代谢物、前药、载体和N-氧化物也是本发明的目的。

式（I）化合物的代谢物是例如当给予需要其的哺乳动物时式（I）化合物在体内转化成的任何化合物。通常，但并不代表限制性实例，当给予式（I）化合物时，其衍生物可被转化为可容易地被排泄掉的多种化合物，例如包括更加可溶性的衍生物（如羟基化衍生物）。因此，取决于由此产生的代谢途径，这些羟基化衍生物中的任何一种可被认为是式（I）化合物的代谢物。

前药是任何共价结合的化合物，其在体内释放式（I）的活性母体药物。

N-氧化物是其中氮和氧通过配价键（dative bond）连接的式（I）化合物。

在式（I）中

R2可结合于式（Ia）和式（Ib）的吡唑环自身的任一氮原子，

如果本发明的化合物中存在异构中心的立体异构中心或另一种形式，则这样的一种或多种异构体的所有形式（包括对映异构体和非对映异构体）都旨在包括在本文中。含有立体异构中心的化合物可用作外消旋混合物、对应异构体富集的混合物，或可利用公知的技术分离该外消旋混合物并且可单独使用单一对映异构体。在化合物具有不饱和碳-碳双键的情况下，顺式（Z）和反式（E）异构体都在本发明的范围内。

在化合物能够以互变异构体的形式存在的情况下，考虑将每种形式包括在本发明中，不论以平衡态存在还是主要处于一种形式。

因此，除非另外提供，当在式（I）化合物中R2为氢时，仅指示式（Ia'）或式（Ib'）的以下互变异构形式之一，剩余的一种形式仍旨在包括在本发明的范围内：

在其中化合物以其他互变异构形式（例如酮-烯醇互变异构体）存在的情况下，考虑将每种互变异构形式包括在本发明内，不论以平衡态存在还是主要处于一种形式。

术语芳基包括具有1至2个环部分的碳环或杂环烃，其为稠合的或通过单键彼此连接，其中至少一个环为芳香环；如果存在的话，也称为杂芳基的任何芳香族杂环烃包含具有选自N、O和S的1至3个杂原子的5至6元环。

根据本发明的芳基的实例为，例如，苯基、联苯基、α-萘基或β-萘基、二氢萘基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、异吲哚基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、二氢喹啉基、喹喔啉基、苯并二氧杂环戊烯基（benzodioxolyl）、茚满基、茚基、三唑基等。

术语"杂环基"（也被称为"杂环烷基"）是指3-至7-元饱和的或部分不饱和的碳环，其中一个或多个碳原子被如氮、氧和硫的杂原子代替。杂环基的非限制性实例为例如吡喃、吡咯烷、吡咯啉、咪唑啉、咪唑烷、吡唑烷、吡唑啉、噻唑啉、噻唑烷、二氢呋喃、四氢呋喃、1,3-二氧杂环戊烷、哌啶、哌嗪、吗啉等。

除非另外提供，术语“C₃-C₇环烷基”（因此包括C₄-C₇环烷基）是指3-至7-元全部为碳的单环，其可以含有一个或多个双键但不具有完全共轭的π-电子系统。环烷基的实例为，但不限于，环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、环己烯、环己二烯、环庚烷、环庚烯、环庚二烯。

术语“直链或支链C₁-C₆烷基”（因此包括C₁-C₄烷基）是指任何基团例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、正己基等。

术语“直链或支链C₂-C₆烯基”是指任何基团，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、1-己烯基等。

根据本发明，除非另外提供，上述R1、R2、R4、R6、R'和R"基团中的任何一种可以在其任何自由位置被独立地选自以下的一个或多个基团（例如1至6个基团）可选地取代：卤原子、硝基、氧代基团（=O）、氰基、C₁-C₆烷基、多氟化烷基、多氟化烷氧基、烯基、炔基、羟基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、C₃-C₇环烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、杂环氧基、亚甲基二氧基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、环烯氧基、杂环羰氧基、亚烷基氨基氧基、羧基、烷氧羰基、芳氧羰基、环烷氧基羰基、杂环氧基羰基、氨基、脲基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、杂环基氨基、甲酰氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、杂环基羰基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、杂环基氨基羰基、烷氧基羰基氨基、羟基氨基羰基烷氧基亚氨基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、杂环基磺酰基氨基、甲酰基、烷基羰基、芳基羰基、环烷基羰基、杂环基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、芳基氨基磺酰基、杂环基氨基磺酰基、芳基硫基、烷基硫基、膦酸酯/盐（phosphonate）和烷基膦酸酯（膦酸烷基酯）。

对于它们而言，在任何适合的情况下，每个上述取代基可以被前述基团中的一个或多个进一步取代。

在这方面，术语“卤原子”是指氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。

术语“氰基”是指-CN残基。

术语“硝基”是指-NO₂基团。

术语“烯基”和“炔基”是指分别进一步具有双键或三键的前述直链或支链C₂-C₆烷基基团中的任何一种。本发明的烯基或炔基的非限制性实例为，例如，乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、1-己烯基、乙炔基、2-丙炔基、4-戊炔基等。

术语“多氟化烷基”或“多氟化烷氧基”是指被多于一个氟原子取代的上述直链或支链C₁-C₆烷基或烷氧基中的任何一种，例如三氟甲基、三氟乙基、1,1,1,3,3,3-六氟丙基、三氟甲氧基等。

术语“烷氧基”、“芳氧基”、“杂环氧基”以及它们的衍生物是指通过氧原子（-O-）连接于分子剩余部分的上述C₁-C₆烷基、芳基或杂环基中的任何一种。

根据全部上述披露内容，本领域技术人员能够理解，其名称为复合名的任何基团（例如芳基氨基）旨在常规地被理解为由其衍生的部分，例如被芳基进一步取代的氨基，其中芳基如上文中所定义。

同样，任何术语例如烷硫基、烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、杂环基羰基、杂环基羰基氨基、环烷氧基羰基等包括其中烷基、烷氧基、芳基、C₃-C₇环烷基和杂环基部分如上文中所定义的基团。

式（I）化合物的可药用盐包括无机酸或有机酸的酸加成盐，例如，硝酸、盐酸、氢溴酸、硫酸、高氯酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、富马酸、乳酸、草酸、丙二酸、苹果酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲烷磺酸、羟乙基磺酸和水杨酸。优选地，本发明化合物的酸加成盐选自盐酸盐和甲磺酸盐。

式（I）化合物的可药用盐还包括无机碱或有机碱的盐，例如碱金属或碱土金属氢氧化物，尤其是氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铵或氢氧化镁，碳酸盐或重碳酸盐、非环状胺或环状胺，优选甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺，哌啶等。

优选的式（I）化合物为这些化合物，其中：

R1为CN，选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团XR4，其中

X为选自O、S、SO、SO₂和NR6的二价基团，其中

R6为可选取代的直链或支链C₁-C₆烷基，或者与它们连接到其上的氮原子一起R6和R4可以形成可选地含有选自N、O和S的一个另外杂原子的5至6元杂芳基或杂环基；

R2为选自直链或支链C₁-C₆烷基、直链或支链C₂-C₆烯基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团；

R5为氢或NR'R"，其中

R'和R"为氢，

且R3、R4和A如上文中所定义。

另一类优选的式（I）化合物为这样的化合物，其中：

R1为选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团XR4，其中

X为选自O、S、SO、SO₂和NR6的二价基团，其中

R6为可选取代的直链或支链C₁-C₆烷基，或者与它们连接到其上的氮原子一起R6和R4可以形成可选地含有选自N、O和S的一个另外的杂原子的5至6元杂芳基或杂环基；

R2为选自直链或支链C₁-C₆烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团；

R3为选自NR'R"和N(OH)R'的基团，其中

R'和R"为氢，

且R4、R5和A如上文中所定义。

又一类优选的式（I）化合物为这样的化合物，其中：

R1为选自直链或支链C₁-C₆烷基、芳基和杂环基的可选取代的基团或基团XR4，其中

X为选自O、S和NR6的二价基团，其中

R6为可选取代的直链或支链C₁-C₆烷基，或与它们连接到其上的氮原子一起R6和R4可以形成可选地含有选自N、O和S的一个另外杂原子的5至6元杂芳基或杂环基；

R3为NR'R"，其中

R'和R"为氢；

R4为选自可选取代的直链或支链C₁-C₆烷基、芳基、芳基烷基和杂环基的基团；

R5为氢，

且R2和A如上文中所定义。

一类尤其优选的式（I）化合物为这样的化合物，其中：

R1为选自直链或支链C₁-C₆烷基和芳基的可选取代的基团，或基团XR4，其中

X为选自O、S和NR6的二价基团，其中

R4为选自可选取代的直链或支链C₁-C₆烷基、芳基和杂环基的基团；

A为二价基团-CH=CH-，

且R2、R3和R5如上文中所定义。

生物学评价

可以通过多种直接和间接检测方法来确定式（I）化合物的Pim激酶活性。测试了本文中所述的某些示例性化合物的Pim激酶结合活性，包括同种型Pim-1、Pim-2和Pim-3（实施例901）以及它们抗肿瘤细胞的体外活性（实施例902）。本发明的某些示例性化合物具有的Pim结合活性IC₅₀值小于约1微摩尔（μΜ）。本发明的某些化合物具有的基于肿瘤细胞的活性EC50值小于约1微摩尔（μΜ）。实施例901和实施例902中所述的实验中具有小于1μΜ的Ki/IC₅₀/EC₅₀的式（I）化合物可作为Pim激酶抑制剂（Pim-1、Pim-2和/或Pim-3）用于治疗。

根据本发明的方法制备、表征并测试了表1中的示例性式（I）化合物的Pim激酶抑制作用，并且具有以下结构和相应的命名（ChemBioDrawUltra,第11.0版,CambridgeSoft Corp.,Cambridge MA）。

表1

对于本发明式（I）化合物的任何具体化合物，可选地为可药用盐形式，参见实验部分和权利要求书。

本发明还提供了通过利用下述反应途径和合成方案，采用现有技术中可用的技术和容易获得的起始材料来制备如上文定义的式（I）化合物的方法。以下实施例中描述了本发明的某些实施方式的制备，但本领域普通技术人员将认识到所述制备可容易地被用于制备本发明的其他实施方式。例如，根据本发明的非示例性化合物的合成可通过对本领域技术人员而言显而易见的修改方法来进行，例如通过适当地保护干扰基团，通过变为本领域已知的其他适合试剂，或通过对反应条件进行常规改变。可替代地，本文中提到的或本领域公知的其他反应被认为适用于制备本发明的其他化合物。

图1示出了式（I）化合物的制备，其中R1为氢，选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团SR4或OR4；并且R2、R3、R4、R5、R'、R"和A如上文中所定义。

本领域普通技术人员将理解，根据所述方法进行的任何转化都需要标准改变（standard modification），例如干扰基团的保护、变成本领域已知的其他适合的试剂、或对反应条件进行常规改变。

因此，本发明的方法包括：

st.1）在酸性条件下将式（II）的化合物

其中A为-(CH₂)₂-，

与式（III）的肼衍生物混合

R2-NHNH₂ (III)

其中R2如上文中所定义，从而得到式（IV）的化合物：

其中A为-(CH₂)₂-且R2如上文中所述；或

st.1a）将式（IV）的化合物（其中R2为氢）与式（V）的化合物混合：

R2-Y (V)

其中R2如上文中所定义但不是氢，并且Y表示适合的离去基团，例如碘基、溴基、氯基或磺酸酯基（例如，-OS(O)₂CF₃、-OS(O)₂CH₃或-OS(O)₂PhMe），从而获得式（IV）的化合物，其中R2如上文中所定义但不是氢；

st.2）将所得的式（IV）化合物与二甲基甲酰胺-二烷基缩醛混合，从而得到式（VI）的化合物：

其中A为-(CH₂)₂-且R2如上文中所定义；

st.3）根据替代步骤（st.3a）、（st.3b）或（st.3c）中任何一种使所得的式（VI）化合物：

st.3a）与式（VIIa）的异硫脲或其盐反应：

R4-S-C(=NH)NH₂ (VIIa)

其中R4如上文中所定义，

st.3b）与式（VIIb）的异脲或其盐反应：

R4-O-C(=NH)NH₂ (VIIb)

其中R4如上文中所定义，

st.3c）与式（IX）的适合的脒或其盐反应：

R1-C(=NH)NH₂ (IX)

其中R1为氢，或选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，

从而获得式（VIII）的化合物：

其中R1分别为SR4，OR4，氢，或选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，A为-(CH₂)₂-且R2和R4如上文中所定义；

st.4）将所得的式（VIII）化合物与氧化剂混合，或在脱氢操作条件下在Pd或Pt催化剂存在下混合从而获得式（VIII）的化合物，其中R1分别为SR4，OR4，氢，或选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，A为-CH=CH-，且R2和R4如上文中所定义；

st.5）使在如步骤st.3a）、st.3b）、st.3c）或st.4）中所述获得的式（VIII）化合物并且其中R2为保护基团例如叔丁基或三苯甲基在酸性条件下反应，从而获得式（VIII）的化合物其中R2为氢，通过与式（V）化合物反应使所得的式（VIII）化合物转化为式（VIIIa）和式（VIIIb）两种化合物的混合物，其中R2如上文中所定义但不是氢，

R2-Y (V)

其中Y如上文中所定义，且R2如上文中所定义但不是氢：

st.6）根据替代步骤st.6a）、st.6b）或st.6c）中任何一种使如在步骤st.3a）、st.3b）、st.3c）、st.4）或st.5）中所述得到式（VIII）的化合物：

st.6a）与式（XII）的氢氧化铵或胺反应：

R'R"-NH (XII)：

其中R'和R"如上文中所定义，从而获得式（I）的化合物：

其中R1为氢，选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团SR4或OR4；R3为NR'R"，R5为氢，且R2、R4和A如上文中所定义；

st.6b1）在酸性或碱性水解条件下反应从而得到式（XI）的化合物或其盐：

其中R1为氢，选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团SR4或OR4；且R2、R4和A如上文中所定义；

st.6b2）在碱性条件下并且在存在适合的缩合剂（condensing agent）的条件下将所得的式（XI）的化合物或其盐与式（XII）的铵盐或衍生物或式（X）的衍生物混合：

R'NHOH (X)：

从而获得式（I）的化合物：

其中R1为氢，选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团SR4或OR4；R5为氢且R2、R4、R3和A如上文中所定义；

st.6c）在强碱存在下与式（XII）的铵盐或适合的胺反应，从而得到式（I）的化合物：

其中R1为氢，选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团SR4或OR4；R3为NR'R"，且R2、R4、R5、A、R'和R"如上文中所定义；

可选地将式（I）的化合物转化为其他不同的式（I）化合物，并根据需要将式（I）的化合物转化为其可药用盐或将盐转化为游离化合物（I）。

本发明进一步提供了用于制备如上文所定义的式（I）化合物的替代方法，记载于下面方案2中。

方案2

在上述方案中，R1为选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、芳基和杂环基的可选取代的基团，R2如上文中所定义且不为氢，R3和A如上文中所定义；该替代方法包括以下步骤：

st.7）使式（XIII）的化合物：

其中R3和A如上文中所定义，与式（V）的化合物反应：

R2-Y (V)

其中Y如上文中所定义，并且R2如上文中所定义且不为氢；

st.8）使所得的式（XIV）的化合物：

其中R2如上文中所定义且不为氢，并且R3和A如上文中所定义，与式（XV）的化合物反应：

R1-Q (XV)：

其中R1为选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、芳基、和杂环基的可选取代的基团，并且Q为适合的基团如-B(OH)₂、-B(OAlk)₂、-Sn(Alk)₄、-Al(Alk)₃、ZnHal、MgHal或ZrCp₂Hal，其能够经历钯介导的碳键形成，从而得到式（I）的化合物：

其中R1为选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、芳基和杂环基的可选取代的基团，R2如上文中所定义且不为氢，R3和A如上文中所定义且R5为氢；

可选地将式（I）的化合物转化为其他不同的式（I）化合物，并且根据需要将式（I）的化合物转化为其可药用盐或将盐转化为游离的化合物（I）。

本发明进一步提供了用于制备如上文所定义的式（VIII）化合物的替代方法，记录在下面方案3中。

方案3

在上述方案中，R1为选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、芳基和杂环基的可选取代的基团，R2如上文中所定义但不为氢，并且A如上文中所定义；该替代方法包括以下步骤：

st.9）使式（XVIII）的化合物：

其中R2如上文中所定义但不为氢，并且A如上文中所定义，与式R1-Q(XV)的化合物反应：

R1-Q (XV)：

其中R1为选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、芳基和杂环基的可选取代的基团，且Q如上文中所定义，其能够经历钯介导的碳键形成，从而得到式（VIII）的化合物。

如上文中所定义，可通过根据公知的合成条件进行操作将根据本发明的方法目的制备的式（I）化合物方便地转化为式（I）的其他化合物，以下为可能转化的实例：

Conv.a）在氧化条件下将其中R1为例如R4-S-的基团，其中R4如上文中所定义的式（I）化合物转化为其中R1为基团R4-S(O)₂-的式（I）化合物：

Conv.b）通过使磺酰基衍生物与式R4-OH（XVI）的化合物反应将其中R1为例如R4-S(O)₂-的基团，其中R4如上文中所定义的式（I）化合物转化为其中R1为基团R4-O-的式（I）化合物：

Conv.c）通过使磺酰基衍生物与式R4R6-NH（XVII）的化合物反应将其中R1为例如R4-S(O)₂-的基团的式（I）化合物转化为其中R1为基团R4-NR6，其中R4和R6如上文中所定义的式（I）化合物：

其中R4和R6如上文中所定义，

Conv.d）通过使磺酰基衍生物与氰化钠（NaCN）或氰化钾（KCN）反应将其中R1为例如R4-S(O)₂-的基团的式（I）化合物转化为其中R1为-CN的式（I）化合物：

Conv.e）通过与式（V）化合物反应将其中R1、R3和A如上文中所定义且R2为氢的式（I）化合物转化为其中R2如上文中所定义但不为氢的式（I）化合物：

R2-Y'(V)

其中Y'为OH或可选地当活化时能够作为适合的离去基团起作用的基团，例如碘基、溴基、氯基或磺酸酯基团（例如-OS(O)₂CF₃、-OS(O)₂CH₃或-OS(O)₂PhMe），并且R2如上文中所定义但不为氢，

Conv.f）通过利用碱性条件将其中R2为卤代乙基的式（I）化合物转化为其中R2为乙烯基的式（I）化合物：

Conv.g）通过与式R'R"NH（XII）的化合物反应将其中R2为式L-CH₂C1的基团，其中L为选自被氯取代的直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团的式（I）化合物转化从而生成其中R2为基团L-CH₂NR'R"，R'和R"如上文中所定义的式（I）化合物：

Conv.h）通过首先将基团CH₂OH转化为CHO然后使所得的醛衍生物在适合的还原剂存在下与式R'R"NH（XII）的化合物反应将其中R2为式L-CH₂OH的基团，其中L为上文中所定义的式（I）化合物转化为其中R2为基团L-CH₂NR'R"的式（I）化合物：

Conv.i）通过与适合的还原剂反应将其中R2为式L-COO烷基的基团，其中L如上文中所定义的式（I）化合物转化为其中R2为L-CH₂OH的式（I）化合物：

Conv.j）通过在适合的还原剂存在下用式R'R"-NH（XII）的胺处理将其中X为O且R4为被-CHO取代的芳基（即苯基）的式（I）化合物转化为其中R4为被CH₂NR'R"取代的芳基（即苯基），其中R'和R"如上文中所定义的其他式（I）化合物：

Conv.k）通过用适合的还原剂处理将其中X为O且R4为被-NO₂取代的芳基（即苯基）的式（I）化合物转化为其中R4为被NH₂取代的芳基（即苯基）的其他式（I）化合物：

Conv.1）通过与式R1-Q'(XV)的化合物反应，其中R1如上文中所定义且Q'为适合基团，例如-B(OH)₂、-MgHal、-ZnHal，其能够经历钯介导的碳键形成，将其中R2、R3和A如上文中所定义且R1为例如Me-S-的基团的式（I）化合物转化为其中R1为选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、芳基和杂环基的可选取代基团的式（I）化合物：

Conv.m）通过在强碱存在下与式R'R"NH（XII）的铵盐或适合的胺反应将其中R1和R2如上文中所定义，R5为氢且A为-CH=CH-的式（I）化合物转化为其中R5为NR'R"的式（I）化合物；

Conv.n）通过在形成其中R2为式L-NR'R"的基团，其中R'和R"如上文中所定义的式（I）化合物的条件下用式R"-CHO（XIX）的化合物处理使其中R2为式L-N(H)R'的基团，其中L和R'如上文中所定义的式（I）化合物转化：

Conv.o）在形成其中R2为式L-N(R')COR7的基团，其中R'如上文中所定义的式（I）化合物的条件下，通过用其中R7为选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代基团，其中W为羟基或卤素的式R7-COW（XX）的化合物处理使其中R2为式L-N(H)R'的基团，其中L和R'如上文中所定义的式（I）化合物转化：

Conv.p）在形成其中R2为式L-N(R')CONHR8的基团，其中R'如上文中所定义的式（I）化合物的条件下，通过用其中R8为选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代基团的式R8-N=C=O（XXI）的化合物处理使其中R2为式L-N(H)R'的基团，其中L和R'如上文所定义的式（I）化合物转化：

Conv.q）在形成其中R2为式L-N(R')NHCNHR8的基团，其中R'如上文所定义的式（I）化合物的条件下，通过用其中R8如上文中所定义且G为适合的离去基团的式R8-NHC(NH)G（XXII）的化合物处理使其中R2为式L-N(H)R'的基团，其中L和R'如上文中所定义的式（I）化合物转化：

Conv.r）通过用氧化剂处理或在Pd或Pt催化剂存在下在脱氢操作条件下将其中R1、R2和R3如上文中所定义且A为例如-CH₂-CH₂-的二价基团的式（I）化合物转化为其中A为-CH=CH基团的式（I）化合物：

根据前述合成方法，式（I）化合物的合成能够以分步方式进行，从而在进行随后的反应之前通过标准纯化技术（例如柱色谱）来分离和纯化每种中间体。可替代地，能够以本领域已知的所谓的“一锅法”步骤来进行合成顺序的两个或更多个步骤，从而仅需分离和纯化获自该两个或更多个步骤的化合物。

根据该方法的步骤（st.1），使式（II）的化合物与式（III）的肼或肼衍生物在乙酸存在下在溶剂（例如乙醇）中反应，该反应在室温至80°C的温度下进行，从而获得式（IV）的化合物。

可选地，将式（IV）的化合物（其中R2为氢）溶解于适合的溶剂（例如乙腈、四氢呋喃、二甲基甲酰胺等）中，并向其中加入适合的碱，例如氢化钠或碳酸铯。然后加入通式R2Y(V)的化合物并将混合物在约20°C至约80°C的温度下搅拌约2小时至约15小时的时间。

根据该方法的步骤（st.2），在室温至100°C的温度下利用处于适合的溶剂（例如N,N-二甲基甲酰胺、Ν,Ν-二甲基乙酰胺、甲苯等）中的Ν,Ν-二甲基甲酰胺二烷基缩醛例如二甲基甲酰胺-二叔丁基缩醛、二甲基甲酰胺-二乙基缩醛等进行式（IV）的烯胺酮（enaminone）衍生物的合成并持续30分钟至约24小时的时间。

根据该方法的替代步骤（st.3a）、（st.3b）或（st.3c）之一，通过利用式（VIIa）的异硫脲、或式（VIIb）的异脲、或式（IX）的适合的脒来实现式（VI）化合物转化成式（VIII）化合物。上述反应中的任何一种可以根据常规方法进行。作为举例，在50°C至100°C的温度下在碱（例如乙酸钾、碳酸氢钠、碳酸钠或碳酸钾等）存在下在适合的溶剂（例如N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、乙腈等）中进行与甲基异硫脲或其盐（例如硫酸盐）的反应并持续2小时至约48小时的时间。

根据该方法的步骤（st.4），通过在90°C至回流的温度下在适合的溶剂（例如甲苯、1,4-二氧杂环己烷、氯苯、二氯苯）中操作持续2小时至8小时的时间，在可选地负载的钯或铂或2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌（DDQ）存在下，式（VIII）的化合物能够经历脱氢，从而获得相应的式（VIII）的芳香族衍生物。

根据本方法的步骤（st.5），式（VIII）的化合物（其中R2为保护基团，例如叔丁基或三苯甲基）它们的分裂能够根据常规方法以各种方式实现。优选地，通过在适合的溶剂（例如二氯甲烷等）存在下与盐酸、三氟乙酸混合来进行，从而得到式（VIII）的化合物，其中R2为氢。

因此，在碱（例如碳酸钾或碳酸铯）存在下在适合的溶剂（例如乙腈、N,N-二甲基甲酰胺）中使所获得的式（VIII）化合物与式R2Y（V）的化合物反应，其中R2如上文中所定义但不为氢并且Y如上文中所定义。后一个反应能够产生式（VIIIa）和式（VIIIb）的区域异构体的混合物，其能够通过已知方法（例如硅胶色谱或制备型HPLC）拆分。

根据本方法的步骤（st.6a），根据本领域公知的方法将式（VIII）的化合物转化为式（I）的化合物，从而将羧酸酯基团（-COOEt）转化为甲酰胺（-CONH₂）、N-取代的甲酰胺（-CONHR'）、Ν,Ν-二取代的甲酰胺（-CONRR"）。优选地，该反应在约50°C至约100°C的温度下利用处于甲醇/N,N-二甲基甲酰胺混合物中的氢氧化铵来进行。

类似的操作条件应用于N-取代的甲酰胺或Ν,Ν-二取代的甲酰胺的制备，其中利用适合的伯胺或仲胺代替氨或氢氧化铵。

优选地，根据该方法的步骤（st.6b1），式（VIII）化合物的水解产生式（XI）化合物的相应羧酸是在酸性或碱性条件下进行的。优选地，在适合的溶剂（例如低级醇、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺或它们的混合物）存在下利用碱性水溶液（例如氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化水溶液）进行该反应；优选地，在约室温至约100°C的温度下利用处于甲醇/N,N-二甲基甲酰胺混合物中的氢氧化钾进行该反应。根据所采用的操作条件，式(XI)的化合物能够以其酸形式获得，或者可替代地，以盐的形式获得。

优选地，根据该方法的步骤（st.6b2），在氯化铵或式R'R"NH（XII）的适合伯胺或仲胺或式R'NHOH（X）的取代的羟胺衍生物存在下，在碱性条件下，优选使用N,N-二异丙基-N-乙胺或三乙胺，在适合的溶剂（例如二氯甲烷、Ν,Ν-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、或Ν,Ν-二甲基乙酰胺）中，在适合的缩合剂（例如，二环己基碳二亚胺（DCC）、1-乙基-3-(3'-二甲基氨基丙基)碳二亚胺（EDC）、3,4-二氢-3-羟基-4-氧-1,2,3-苯并三唑（DHBT）、O-苯并三唑基四甲基异脲鎓四氟硼酸盐（TBTU）、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐（PyBOP）或2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐（HBTU））存在下，进行式（XI）羧酸的酰胺化从而得到相应的式（I）化合物。可选地在适合的催化剂（例如4-二甲基氨基吡啶）存在下，或在其他偶联剂（例如N-羟基苯并三唑）存在下进行所述反应。可替代地，还可以例如在室温下在叔胺（例如三乙胺、Ν,Ν-二异丙基乙胺或吡啶）存在下，在适合的溶剂（例如甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺等）中，通过利用氯代甲酸烷基酯（例如氯代甲酸乙酯、氯代甲酸异丙酯、氯代甲酸苄酯），通过混合酸酐方法来进行同样的反应。

根据该方法的步骤（st.6c），在碱性条件下（例如处于THF中1N的双-三甲基甲硅烷基酰胺锂），利用氯化铵或适合的伯胺或仲胺可以将式（VIII）化合物的羧酸酯基团转化为甲酰胺或N-取代的甲酰胺或N,N-二取代的甲酰胺；优选地，在0°C至回流的温度下在四氢呋喃中进行该反应。

令人感兴趣的是，在该反应中，当A为-CH=CH-时，获得了所需产物式（I）的混合物，其中R3为R'R"N-，且R5为氢或基团R'R"N-。然后根据常规方法（例如通过色谱或通过制备型HPLC）将这两种衍生物从反应混合物中拆分。

根据该方法的步骤（st.7），在碱（例如碳酸钾或碳酸铯）存在下在适合的溶剂（例如乙腈、二甲基甲酰胺）中，使式（XIII）的化合物与式R2Y（V）的化合物反应，其中R2如上文中所定义但不为氢，且Y如上文中所定义，从而获得式（XIV）的衍生物。

根据该方法的步骤（st.8），可以通过利用适合用于形成碳-碳键的任何交联反应将式（XIV）的化合物转化为式（I）的化合物。本领域中公知的所述反应暗含与适合的有机金属试剂偶联，例如有机硼（Suzuki反应）、有机锡（Stille反应）、有机镁（Kumada反应）、有机锌、或有机铝、或有机锆（Negishi反应）等。

优选的反应为Suzuki反应，其中在室温至80°C温度下，在溶剂混合物（例如二甲氧基乙烷和水）中在钯基催化剂（例如[1,1’-双(二苯基膦基)二茂络铁]合钯(II)二氯化物二氯甲烷络合物（PdCl₂(dppf)₂.CH₂Cl₂））和碱（例如碳酸钠或碳酸铯）存在下，使用适合的芳基或杂芳基硼衍生物，并且持续2小时至过夜的时间。

根据该方法的步骤（st.9），可通过利用适合用于形成碳-碳键的任何交联反应（例如在st.8中已经描述的），将式（XVIII）的化合物转化为式（VIII）的化合物。

根据该方法的转化（conv.a），在室温下通过与本领域技术人员公知的氧化剂（例如处于适合的溶剂（例如四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、丙酮）中的臭氧），可选地在作为共溶剂的水或间-氯过氧苯甲酸存在下，在适合的溶剂（优选DCM）存在下，反应可以获得硫基向磺酰基的转化。

根据该方法的转化（conv.b），可通过使相应的磺酰基衍生物与式（XVI）R4-OH的衍生物反应容易地获得式（I）的化合物（其中R4如上文中所定义，且X为-O-）。可在碱（碳酸钾或碳酸钠、氢氧化钠或氢氧化锂等）存在下，在适合的溶剂（例如乙腈、N,N-二甲基甲酰胺或二甲亚砜）中，并在室温至约100°C的温度下操作来进行该反应。

令人感兴趣的是，当用式（I）的化合物（其中A为-CH₂-CH₂-）进行该反应时，获得式（I）所需产物的混合物，其中A为基团-CH₂-CH₂-或-CH=CH-。然后根据常规方法，例如通过色谱或通过制备型HPLC，将这两种衍生物从反应混合物中拆分。

根据该方法的转化（conv.c），用适合的亲核试剂（例如式R4R6NH的仲胺）处理式（I）的磺酰基衍生物，从而得到式（I）的化合物（其中R1为R4R6N-）。所述的反应利用过量的相同的胺完成，或可替代地在适合的溶剂（例如乙腈、Ν,Ν-二甲基甲酰胺、二甲亚砜）中，并且在室温至约100°C的温度下操作2小时至24小时来完成。

根据该方法的转化（conv.d），在20°C至回流的温度下在适合的溶剂（例如乙腈、Ν,Ν-二甲基甲酰胺、或它们的混合物）中，例如利用氰化钠可以完成式（I）的磺酰基衍生物转化成式（I）化合物（其中R1为-CN），持续2小时至24小时。

根据该方法的转化（conv.e），可以利用式R2-Y'（V）的化合物（其中Y'为OH）来完成式（I）化合物转化成另一种式（I）化合物，在这种情况下，可以采用Mitsunobu条件，或Y为可选地当激活时可用作离去基团（例如卤原子、甲苯磺酸根、甲磺酸根、或三氟甲磺酸根）的基团。

在前一种情况下，即，当采用Mitsunobu实验方案时，可以在三烷基膦或三芳基膦，优选三苯基膦存在下，在适合的溶剂（例如四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙腈）中，利用偶氮二甲酸二烷基酯（例如偶氮二甲酸二乙酯（DEAD）、偶氮二甲酸二异丙酯（DIAD）等）完成反应。当Y为卤素或例如甲苯磺酸根、甲磺酸根、或三氟甲磺酸根等的基团时，可以在适合的溶剂（例如四氢呋喃、乙腈、Ν,Ν-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺等）中，利用适合的碱（例如NaH、K₂CO₃、Cs₂CO₃、DBU、KO-i-Bu等）完成转化。可在0°C至回流的温度下进行所述反应，并且持续30分钟至约48小时的时间。

根据该方法的转化（conv.f），在20°C至80°C的温度下，用碱，优选1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一-7-烯（DBU）处理式（I）的化合物（其中R2为卤代乙基，优选氯乙基），从而获得相应的式（I）的化合物（其中R2为乙烯基）。

根据该方法的转化（conv.g），在50°C至100°C的温度下，在碱（例如碳酸钾、碳酸铯、三乙胺、DBU）存在下，在适合的溶剂（例如四氢呋喃、乙腈、Ν,Ν-二甲基甲酰胺和它们的混合物）中，将式（I）的化合物（其中R2为式L-CH₂C1的基团）与适合的亲和试剂（例如式（XII）NHR'R"的伯胺或仲胺）混合，并且持续适合的时间，例如2小时至24小时。

根据该方法的转化（conv.h），可以通过本领域技术人员良好建立的多种方法和操作条件来完成式（I）化合物（其中R2为基团L-CH₂OH）转化为式（I）化合物（其中R2为基团L-CH₂NR'R"）。举例而言，本文中报道了两步顺序，包括首先形成式（I）的醛（其中R2为基团L-CHO），随后在还原性胺化条件下与式（XII）NHR'R"的胺反应。因此，首先通过在50°C至回流的温度下在适合的溶剂（例如乙酸乙酯、四氢呋喃等）中用氧化剂（例如2-碘酰基苯甲酸（IBX））处理适合的时间（例如30分钟至4小时），将具有基团L-CH₂OH的式（I）化合物转化为相应的醛。之后，在0°C至室温的温度下在还原剂（例如氰硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化四甲基铵）存在下，在适合的溶剂（例如四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺或它们的混合物）中，使所获得的醛与式（XII）NHR'R"的适合的胺反应30分钟至6小时。

根据该方法的转化（conv.i），在0°C至室温的温度下，在适合的溶剂（例如四氢呋喃、二乙醚、甲苯、乙醇等）中，通过利用适合的还原剂（例如氢化铝锂、硼氢化锂、硼氢化钠等）实现将羧酸酯还原为相应的伯醇，持续适当的时间（在30分钟至24小时之间）。

根据该方法的转化（conv.j），在0°C至室温的温度下，在适合的溶剂（例如四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、Ν,Ν-二甲基甲酰胺或它们的混合物）中，在还原性胺化条件下，优选使用还原剂（例如氰硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、或三乙酰氧基硼氢化四甲基铵，通过使醛衍生物与上文中所定义的式（XII）的胺反应30分钟至6小时来获得醛残基转化成相应的烷基胺衍生物-CH2NR'R"（其中R'和R"为上文中所定义）。

根据该方法的转化（conv.k），在50°C至回流的温度下，在适合的溶剂（例如四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、乙醇和水，或它们的混合物）中，在氯化铵存在下，在还原条件下，优选利用还原剂（例如锌粉），将具有硝基基团的式（I）化合物转化为具有氨基基团的式（I）化合物，持续30分钟至6小时。

根据该方法的转化（conv.l），通过与适合的有机金属试剂（例如式R1-B(OH)₂的有机硼酸）反应实现式（I）化合物（其中R1为Me-S-）转化成式（I）化合物（其中R1为例如芳基或杂芳基）。该反应是Pd-催化的Cu-介导的脱磺C-C交联（Pd-catalyzed Cu-mediated desulfitative C-C crosscoupling），通常被称为“Liebeskind-Srogl反应”。在回流温度下,在适合的溶剂（例如，四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺）中，在适当的钯源（例如四(三苯基膦基)合钯[Pd(PPh₃)₄]等），作为金属辅助因子的羧酸铜^（I）（铜^（I）-羧酸盐）（例如噻吩-2-羧酸铜）存在下，进行所述反应持续30分钟至6小时。

根据该方法的转化（conv.m），在强碱性条件下（例如处于THF中1N的双-三甲基甲硅烷基酰胺锂），利用氯化铵或适合的伯胺或仲胺，可将式（I）化合物（其中R5为氢）转化为式（I）化合物（其中R5为R'R"N-）；优选地，在0°C至回流的温度下在四氢呋喃中进行该反应。

根据该方法的转化（conv.n），将其中存在伯胺基或仲胺基（例如L-N(H)R'）的式（I）化合物转化为相应的仲胺基或叔胺基衍生物。优选地，在0°C至室温的温度下，在适合的溶剂（例如四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、Ν,Ν-二甲基甲酰胺、或它们的混合物）中，在还原性胺化条件下，优选利用还原剂，例如氰硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、或三乙酰氧基硼氢化四甲基铵，利用式R"CHO（XIX）的醛来进行该反应，持续30分钟至6小时。

根据该方法的转化（conv.o），通过与式R7-COW（XX）化合物反应将其中存在伯胺基或仲胺基（例如L-N(H)R'）的式（I）化合物转化为相应的甲酰胺衍生物。本领域技术人员应当清楚的是能够以制备甲酰胺的领域中广泛公知的多种方法和操作条件来完成该反应。举例而言，当W为卤素（例如氯）时，在约-10°C至回流的温度下，在适合的溶剂（例如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、乙腈、Ν,Ν-二甲基甲酰胺等）中，进行该反应，并且持续适合的时间，例如约30分钟至约96小时。该反应在适合的质子清除剂（例如三乙胺、Ν,Ν-二异丙基乙胺或吡啶）存在下进行。当W为羟基时，在约-10°C至回流的温度下，在适合的溶剂（例如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、乙腈、Ν,Ν-二甲基甲酰胺）中，在偶联剂（例如2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐（TBTU）、1,3-二环己基碳二亚胺、1,3-二异丙基碳二亚胺、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-环己基碳二亚胺-N'-丙基甲基聚苯乙烯或N-环己基碳二亚胺-N'-甲基聚苯乙烯）存在下，进行该反应，并且持续适合的时间（例如约30分钟至约48小时）。所述反应可选地在适合的催化剂（例如4-二甲基氨基吡啶）存在下，或者在其他偶联剂（例如N-羟基苯并三唑）存在下进行。

根据该方法的步骤（conv.p），通过与适当的式R8-N=C=O（XXI）的异氰酸酯反应以产生相应的脲，将其中存在伯胺基或仲胺基（例如L-N(H)R'）的式（I）化合物转化为相应的脲衍生物。该反应优选在约20°C至回流的温度下在适合的溶剂（例如二氯甲烷、四氢呋喃等）中进行并且持续约30分钟至约48小时的时间。

根据该方法的转化（conv.q），通过与式R8NHC(NH)-G化合物（其中G为适合的离去基团，例如-S-Me、N-S(O)₂CF₃或1H-吡唑基）的反应，将其中存在伯胺基或仲胺基（例如L-N(H)R'）的式（I）化合物转化为相应的胍衍生物。举例而言，该反应可在碱性条件下（例如在三乙胺或碳酸钾存在下），在适合溶剂（例如甲醇、乙醇、Ν,Ν-二甲基甲酰胺和它们的混合物）中进行。优选地，该反应在室温至约80°C的温度下进行并且持续约30分钟至约24小时的时间。

根据该方法的转化（conv.r），通过在90°C至回流的温度下在适合的溶剂（例如甲苯、1,4-二氧杂环己烷、氯苯、二氯苯）中操作2小时至8小时的时间，在存在可选地负载的钯或铂或2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌（DDQ）的条件下可使式（I）化合物（其中A为-(CH₂)₂-）经历脱氢，从而获得相应的式（I）的芳香族衍生物。

无需多言，通过以类似于上文中所述转化反应中任何一种的方式进行操作，如果想要并且必要的话，还可将上述方法中所述的任何中间体转化成不同的中间体。

从所有上述内容可知，本领域技术人员应当清楚的是带有通过根据本领域公知的方法进行操作使其能够进一步衍生为其他官能团的官能团由此生成其他式（I）化合物的任何式（I）化合物，都旨在包括在本发明的范围内。

本领域技术人员还应当清楚的是，根据文献中公知的方法何时可以将必要的反应性基团（例如有机合成中的保护基）保护并且之后将其除去。

根据用于制备式（I）化合物方法的任何变体，起始材料和任何其他反应物是已知的或根据已知方法容易制备。

式（II）的化合物能够如WO2004/104007中所述进行制备。

式（XIII）和式（XVIII）的化合物能够如WO2008/074788中上述进行制备。

式（III）、式（VIIa）、式（VIIb）、式（IX）、式（X）、式（XII）、式（XV）、式（XVII）、式（XIX）、式（XX）、式（XXI）和式（XXII）的化合物可商购获得或能够利用公知方法制备。

式（V）和式（XVI）的化合物可商购获得或能够利用公知方法制备，或能够如以下实验部分所述进行制备（制备O至制备R）。

由上述所有内容，本领域技术人员应当清楚的是，当根据前述方法变体中的任何一种制备式（I）化合物时，需要根据常规技术适当地保护可能引起不需要的副反应的起始材料或其中间体中的可选官能团。同样，可根据已知步骤将后者（这些官能团或其中间体）转化成游离的脱保护的化合物。

正如容易地理解的，如果根据上述方法制备的式（I）的化合物作为异构体的混合物获得，则利用常规技术将其分离为式（I）的单一异构体也在本发明的范围内。

外消旋体拆分的常规技术包括，例如非对应异构体盐衍生物的分配结晶（partitioned crystallization）或制备型手性HPLC。

本发明的化合物能够作为单独的药剂给药，或可替代地，与已知的抗癌治疗联用，例如放射治疗或化疗方案（与细胞生长抑制剂或细胞毒性剂、抗生素型药剂、烷化剂、抗代谢剂、激素类药剂、免疫药剂、干扰素型药剂、环氧合酶抑制剂（例如COX-2抑制剂）、间质金属蛋白酶抑制剂、端粒末端转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗生长因子受体药剂、抗-HER剂、抗-EGFR剂、抗-血管发生剂（例如血管发生抑制剂）、法呢基转移酶抑制剂、ras-raf信号转导通路抑制剂、细胞周期抑制剂、其他cdk抑制剂、微管蛋白结合剂、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂等联用）。

如果配制为固定剂量，这样的组合产品在下文所述的剂量范围内使用本发明的化合物并在经批准的剂量范围内使用其他药物活性剂。

当不适合组合配制时，式（I）化合物可与已知的抗癌剂顺序地使用。

适合用于向哺乳动物（例如人）给药的本发明的式（I）化合物，可通过通常途径给药并且剂量水平取决于年龄、体重、患者的身体情况和给药途径。

例如，适合用于口服给予式（I）化合物的适合剂量范围为约10至约500mg/剂量，每天1至5次。本发明的化合物能够以多种剂量形式给药，例如口服给药，以片剂、胶囊剂、糖衣片或薄膜包衣片、液体溶液或混悬剂形式给药；直肠给药，以栓剂形式；肠胃外给药，例如肌内给药，或通过静脉内和/或鞘内和/或脊柱内注射或灌注。

本发明还包括包含式（I）化合物或其可药用盐以及可药用赋形剂（其可以是载体或稀释剂）的药物组合物。

含有本发明化合物的药物组合物通常根据常规方法制备并以适合的药物形式给药。例如，固体口服形式可以与活性化合物一起含有稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖（saccharose）、蔗糖（sucrose）、纤维素、玉米淀粉或土豆淀粉；润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁或硬脂酸钙、和/或聚乙二醇；粘结剂，例如淀粉、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解剂，例如淀粉、褐藻酸、藻酸盐或甘醇酸淀粉钠；泡腾混合物；染料；甜味剂；润湿剂，例如卵磷脂、聚山梨醇酯、硫酸月桂醇酯；以及通常在药物制剂中使用的无毒且无药理学活性的物质。能够以已知方式（例如，通过混合、造粒、制片、包糖衣、或薄膜包衣过程）制备这些药物制剂。

用于口服给药的液体分散液可以是例如糖浆剂、乳液和混悬剂。例如，糖浆剂可以含有作为载体的蔗糖或蔗糖和甘油和/或甘露醇和山梨醇。

混悬剂和乳液可以含有例如载体、天然树胶、琼脂、藻酸钠、胶质、甲基纤维素、羧甲基纤维素、或聚乙烯醇。用于肌内注射的混悬剂或溶液可以连同活性化合物一起含有可药用载体，例如无菌水、橄榄油、油酸乙酯、二醇（例如丙二醇），以及（根据需要）适合量的盐酸利多卡因。

用于静脉内注射或灌注的溶液可以含有作为载体的无菌水，或优选地其可以为无菌的、含水的、等渗的盐水溶液形式或其可以含有作为载体的丙二醇。

栓剂可以连同活性化合物一起含有可药用载体，例如可可脂、聚乙二醇、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯表面活性剂或卵磷脂。

为了更好地说明本发明，而不是为了对其进行任何限制，现给出以下实施例。

实验部分

药理学

式（I）的化合物作为蛋白激酶抑制剂起作用，并因此可用于，例如限制肿瘤细胞的不受控制的增殖。

在治疗中，它们可用于治疗各种肿瘤，例如前文中所定义的那些，以及用于治疗其他细胞增生性病症和免疫细胞相关疾病和病症。

通过下文中描述的实验来确定PIM-1和PIM-2抑制剂的抑制活性以及所选化合物的效力。

关于本发明式（I）的任何特定化合物，可选地为可药用盐形式，参见实验部分和权利要求书。参照以下实施例，利用本文中描述的方法或本领域公知的其他方法来合成本发明的化合物。

本文中使用的简称和缩写具有如下含义：

BSA 胎牛血清

Tris 2-氨基-2-(羟基甲基)-1,3-丙二醇

Hepes N-(2-羟基乙基)哌嗪-N'-(2-乙磺酸)

THF 四氢呋喃

MTBE 甲基叔丁基醚

DIPEA N,N-二异丙基乙基胺

PyBOP 苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐

EDC 1-乙基-3-(3’-二甲基氨基丙基)碳二亚胺

DHBT 3,4-二氢-3-羟基-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪

HBTU 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐

TFA 三氟乙酸 TMOF 原甲酸三甲基酯

DCE 二氯乙烷 DCM 二氯甲烷

DMF N,N-二甲基甲酰胺 DMA N,N-二甲基乙酰胺

DMSO 二甲基亚砜 KDa 千道尔顿

mg 毫克 μg 微克

ng 纳克 L 升

ml 毫升 μL 微升

M 摩尔 mM 毫摩尔

μΜ 微摩尔 nM 纳摩尔

MHz(兆赫) Hz(赫兹)

min(分钟) mol(摩尔)

TLC(薄层色谱) r.t.(室温)

TEA(三乙胺) Hex(己烷)

MeOH(甲醇) bs(宽单峰)

Ac(乙酰基) BOC(叔丁氧基羰基)

Ac₂O乙酸酐 ESI=电喷射离子化

NaH=氢化钠,60%,在矿物油中 NMP=N-甲基-吡咯烷酮

RP-HPLC(反相高效液相色谱)

为了更好地说明本发明，而不对其造成任何限制，现给出以下实施例。

如本文中所使用的，在方法、方案和实施例中使用的符号和惯例与当代科技文献中使用的相一致，例如，Journal of the American ChemicalSociety或Journal of Biological Chemistry。

除非另外说明，否则所有物质均获自供应商，这些物质为最优等级并且无需进一步纯化而使用。无水溶剂（例如DMF、THF、CH₂Cl₂和甲苯）获自Aldrich Chemical Company。所有涉及对空气-或对湿度敏感的化合物的反应均在氮气或氩气氛下进行。

PIM-1激酶抑制剂活性的生物化学实验

利用反式-磷酸化（trans-phosphorylation）实验来确定假定的激酶抑制剂的抑制活性和所选化合物的效力。

在用³³Ρ-γ-ΑΤΡ示踪的ATP存在下并且在其自身最佳缓冲剂和辅助因子（cofactor）存在下通过其特异性ser-thr或tyr激酶来反式磷酸化特定的肽或蛋白底物。

在磷酸化反应结束时，通过过量的离子交换树脂捕获超过98%未标记的ATP和放射性ATP；然后通过重力使该树脂沉降到反应板底部。

随后取出上清并转移至计数板中，然后通过β-计数进行评价。

试剂/实验条件

称取500g的湿树脂（SIGMA，常规制备的树脂1x8200-400目，2.5Kg）并在150mM甲酸钠中将其稀释为21，pH3.00。

使树脂沉降（几小时），然后弃去上清。

在几天内如上所述清洗三次，使树脂沉降并加入两体积（wrt树脂体积）的150mM甲酸钠缓冲液。

然后测量pH，其应为3.00左右。

经洗涤的树脂是稳定的持续超过一周；将储存树脂保持在4°C备用。

激酶缓冲液（KB）：

用于PIM-1实验的缓冲液由HEPES50mM（pH7.5）与10mM MgCl₂、1mM DTT、3μΜNaVO₃和0.2mg/ml BSA组成。

如在Bullock AN,et al,J.Biol.Chem.2005,280,41675-82中所述表达并纯化全长人PIM-1。

通过在以下条件下的自身磷酸化在预活化步骤之后酶显示了线性动力学：

在28°C下（RT）在125μΜATP存在下将1.7μΜPIM1孵育1小时。

实验条件：

ATP浓度：200μΜ

³³Ρ-γ-ΑΤΡ：6nM

酶浓度：1nM

底物浓度Aktide（化学文摘服务登记号（Chemical Abstract ServiceRegistry Number）324029-01-8）：25μΜ

测试混合物由以下物质组成：

1）3x酶混合物（在激酶缓冲液3X中进行)，5μL/孔

2）3x底物和ATP混合物（在ddH2O中进行），连同³³Ρ-γ-ΑΤΡ一起，5μL/孔

3）3x测试化合物（稀释至ddH₂O-3%DMSO中）-5μL/孔

关于化合物稀释和实验方案参见下文

化合物的稀释

为了确定IC₅₀，将测试化合物接收为处于100%DMSO中的1mM溶液并分配到96-孔板中：然后将化合物铺板于新96孔板的第一列中（A1至G1），100μL/孔。

对于该列中的所有化合物，使用自动化操作台（Biomek

,Beckman）来进行连续稀释，得到处于100%DMSO中的1:3稀释液（从行A1至A10）。此外，通过将5μL的该第一组100%DMSO稀释板重新配制到384-深孔板中来制备4-5个拷贝的子板（daughter plate）：在研究当天将具有测试化合物的一个拷贝的这些连续稀释板融化，用162μL/孔的水在工作浓度下重新配制（3倍最终浓度）并用于IC₅₀确定实验。在标准试验中，化合物的最高浓度（3X）通常为30μΜ，而最低浓度通常为1.5nM。

每个384-孔板产生标准抑制剂星状孢子素和参照孔的至少一个曲线（总酶活性相对于无酶活性）以用于评价Z'和信号相对于背景（S/B）的比率。

实验方案：

用如前文所述稀释的5μL化合物（3X）来制备V形底部的384-孔板（测试板），然后将其与一个酶混合物贮器（3X）和一个ATP混合物贮器（3X）一起置于

12自动化操作台（Perkin Elmer；机械臂具有一个用于实验开始的384-尖端移液管头，加上一个用于分配树脂的96-尖端头）上。

通过内部定制版本的

SW软件包来分析数据，其在第二次实验/命中验证路径（hit confirmation routine）中提供了用于确定IC₅₀的十条稀释曲线的S拟合（sigmoidal fitting）。

PIM-2激酶抑制试验的方法：Dowex技术

激酶缓冲液（KB）：

用于PIM-2实验的缓冲液由HEPES50mM（pH7.5）以及1mMMgCl₂、1mM DTT、3μΜNa₃VO₄和0.2mg/ml BSA组成。

如在Fedorov O等人(2007)PNAS104,51,20523-28中所述表达并纯化全长人PIM-2。

实验条件（最终浓度）：

酶浓度=1.5nM

Aktide底物（化学文摘服务登记号（Chemical Abstract Service RegistryNumber）324029-01-8）=5μΜ

ATP=4μΜ

³³Ρ-γ-ΑΤΡ=1nM

自动化Dowex实验：

参见上文：与对于PIM-1所述的程序相同。

体外细胞增殖实验：

在完全培养基（RPMI1640或EMEM+10%胎牛血清）中在白色384-孔板中接种MV-4-11（双表型B粒单核细胞白血病）细胞（1250细胞/孔）并在接种后24小时用稀释在0.1%DMSO中的化合物进行处理。细胞在37°C和5%CO₂下孵育并在72小时后根据制造商的指导利用

（Promega）处理这些板。

是基于对存在的ATP（一种代谢活性细胞的指征）进行量化的同源方法。利用基于会导致产生光的荧光素酶和D-荧光素的系统来量化ATP。发光信号与培养物中存在的细胞数目成正比。

简言之，向每个孔中加入25μL/孔试剂溶液并在5分钟后利用

（PerkinElmer）照度计使振摇的微孔板变红。发光信号与培养物中存在的细胞数目成正比。

利用Assay Explorer（MDL）程序比较经处理的数据和对照数据来评价抑制活性。利用S内插曲线（sigmoidal interpolation curve）来计算IC₅₀。

根据上述抑制实验，本发明的式（I）化合物导致产生了良好的PIM-1抑制活性（通常具有低于1μΜ的优异IC50）和良好的PIM-2抑制活性（通常具有低于10μΜ的IC50）。此外，本发明的式（I）化合物显示出良好的细胞增殖抑制活性，在MV-4-11细胞中其IC₅₀范围通常为0.010μΜ至2μΜ。

下面表A记载了在上述特异性体外激酶实验中针对PIM-1和PIM-2酶测试的本发明式（I）的一些代表性化合物的实验数据（IC₅₀μΜ）。

下面表A还记载了针对现有技术中一些最接近化合物的PIM-1和PIM-2的抑制活性。

参考化合物1为1-甲基-8-(哌啶-1-基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，该化合物编号为B76-X06-M00(C01)-D03；并且参考化合物2为1-甲基-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，该化合物在上文中所引用的专利申请WO2004/104007中编号为B67-X04-M00(C01-D03)。参考化合物1和2分别为本发明具体放弃的第一和第二化合物。

下面表A还记载了本发明的一些代表性化合物针对粒单核细胞白血病MV-4-11细胞的抗增殖活性。

表A

出人意料的是，本发明化合物的PIM-1和PIM-2抑制活性显著高于参考化合物。

本发明的新型化合物出人意料地带来了显著高于前述WO2004/104007的结构最接近的现有技术化合物的PIM-1和PIM-2抑制活性，并因此在针对与激酶活性改变的增生性疾病的治疗中是尤其有利的。

为了进一步确定由PIM激酶的抑制引起的本发明化合物的细胞毒性，我们检验了在存在或不存在PIM抑制剂的情况下在MV-4-11白血病细胞系中通过PIM激酶磷酸化促凋亡蛋白BAD。

BAD（一种PIM激酶的下游靶标），已证明其Ser112处被PIM-1、PIM-2和PIM-3直接磷酸化（Pogacic V.等人(2007)Cancer Research,67(14);6916-24）。

发现本发明的化合物在MV-4-11中有效地且剂量依赖性地抑制在Ser112处BAD的磷酸化，从而证实了这些化合物为PIM抑制剂，图2中示出了结果。

以1.5×10⁶细胞/ml将MV-4-11细胞铺于6个孔板中并用不同浓度的PIM-抑制剂处理3小时。收获细胞，用PBS缓冲液洗涤并用裂解缓冲液（2%SDS,100mM Tris ph7.5,1:100磷酸酶抑制剂混合物1（SIGMA）和1:100磷酸酶抑制剂混合物2（SIGMA）以及完全蛋白酶抑制剂（Roche））裂解。利用BCA Protein Assay Kit（Pierce）量化裂解产物中的蛋白浓度。将等量的蛋白上样于4-12%梯度Tri-甘氨酸凝胶上以用于SDS-PAGE分析。然后将蛋白转移至PVDF膜（Millipore）以用于蛋白质印迹分析。用磷酸-Bad（Ser112）（Cell Signaling Technologies）抗体对膜进行探查。

实施例

在以下实施例中描述了本发明一些式（I）化合物的合成制备。

如根据以下实施例制备的本发明的化合物，还通过¹H NMR或通过HPLC/MS分析数据进行表征；根据方法1、2、3和4中的任何一种采集HPLC/MS数据。

HPLC MS分析方法1

HPLC装置由装配有2996Waters PDA检测器的Waters Acquity^TMUPLC系统和装配有电喷射（ESI）离子源的Micromass mod.ZQ单重四极杆质谱仪组成。仪器控制、数据获得和数据处理由

4.0软件提供。

在45°C下以0.8mL/min的流速利用BEH C181.7μm Waters

UPLC（2.1×50mm）柱进行HPLC。流动相A为具有乙腈（98:2）的甲酸0.1%pH=3.3缓冲液，而流动相B为H₂O/乙腈（5:95）；梯度为在2分钟内从5%至95%B，然后保持95%B0.1分钟。注射体积为2μL。以正离子模式和负离子模式操作质谱仪，将毛细管电压设置为3.5KV（ES⁺）和28V（ES^-）；源温度为120°C；椎体（cone）为14V（ES⁺）和2.8KV（ES^-）；建立全扫描，质量范围为100至800amu。

HPLC/MS分析方法2

在装配有ESI（电喷射）离子源的Finnigan MAT mod.质谱仪上进行HPLC-MS分析，将质谱仪直接连接于装配有自动取样器LcPal（CTC Analytics）和UV6000LP PDA检测器的HPLC SSP4000（ThermoSeparation）上。

在40°C下以1.0mL/min的流速利用Phenomenex Gemini C18，3μm，50×4.6mm柱进行HPLC。流动相A为乙酸盐缓冲液5mM pH4.5:乙腈95:5（v:v），而流动相B为乙酸盐缓冲液5mM pH4.5:乙腈5:95（v:v），梯度为在7分钟内从0至100%B，然后在平衡之前保持100%B持续2分钟。总LC时间为10分钟。注射体积为10μl。

MS条件：以正离子模式和负离子模式用电喷射离子化（ESI）界面操作LCQ质谱仪。ESI喷射器电压为4.0kV，加热的毛细管温度为255°C，鞘氮气压力为5.0巴。使用全扫描检测模式（50至1000amu）。

通过

软件自动地在每次扫描的最强离子上进行MS/MS试验。将45%的碰撞能量用于破碎前体离子（先驱离子，precursor ion）。

HPLC/MS分析方法3

HPLC装置由装配有2996Waters PDA检测器的Waters2795AllianceHT系统和装配有电喷射（ESI）离子源的Micromass mod.ZQ单重四极杆质谱仪组成。仪器控制、数据获得和数据处理由

和

4.0软件提供。

在30°C下以1.0mL/min的流速利用C18，3μm Phenomenex（4.6×50mm）柱进行HPLC。流动相A为具有乙腈（95:5）的乙酸铵5mM pH=5.2缓冲液，而流动相B为H₂O/乙腈（5:95）；梯度为在8分钟内从10%至90%B，然后在1.0分钟内升高至100%B。注射体积为10μL。以正离子模式和负离子模式操作质谱仪，将毛细管电压设置为3.5KV（ES⁺）和28V（ES^-）；源温度为120°C；椎体（cone）为14V（ES⁺）和2.8KV（ES^-）；进行全扫描，质量范围为100至800amu。

HPLC/MS分析方法4

HPLC装置由装配有996Waters PDA检测器的Waters2790HPLC系统和装配有电喷射（ESI）离子源的Micromass mod.ZQ单重四极杆质谱仪组成。仪器控制、数据获得和数据处理由

4.0软件提供。

在25°C下以1mL/min的流速利用RP18Waters X Terra（3.0×20mm）柱进行HPLC。流动相A为具有乙腈（95:5）的氢氧化铵0.05%pH=10缓冲液，而流动相B为H₂O/乙腈（5:95）；梯度为在4分钟内从10%至90%B，然后保持90%B1分钟。注射体积为10μL。以正离子模式和负离子模式操作质谱仪，将毛细管电压设置为2.5KV；源温度为120°C；椎体（cone）为10V；进行全扫描，质量范围为100至800amu。

通过制备型HPLC纯化如根据以下实施例制备的数种本发明的式（I）化合物。

操作条件定义如下：

HPLC/MS制备方法1

和4.0软件提供。

在25°C下以20mL/min的流速利用RP18Waters X Terra10μm（19×250mm）柱进行HPLC。流动相A为具有乙腈（95:5）的氢氧化铵0.05%pH=10缓冲液，而流动相B为乙腈；梯度为在15分钟内从10%至90%B，然后保持90%B3分钟。注射体积为10μL。

以正离子模式和负离子模式操作质谱仪，将毛细管电压设置为2.5KV；源温度为120°C；椎体（cone）为10V；进行全扫描，质量范围为100至800amu。

HPLC/MS制备方法2

HPLC装置由装配有996Waters PDA检测器的Waters2790HPLC系统和装配有电喷射（ESI）离子源的Micromass mod.ZQ单重四极杆质谱仪组成。仪器控制、数据获得和数据处理由和

4.0软件提供。

在25°C下以20ml/min的流速利用RP18Waters X Terra10μm（19×250mm）柱进行HPLC。流动相A为处于水溶液/乙腈（95:5）中的0.1%三氟乙酸，而流动相B为乙腈；梯度为在15分钟内从10%至90%B，然后保持90%B3分钟。注射体积为10μl。

精确MS

如上文所述在直接连接于微HPLC1100Agilent的Waters Q-Tof

上获得精确质谱数据ESI(⁺)（M.Colombo,F.Riccardi-Sirtori,V.Rizzo,Rapid Commun.Mass Spectrom.2004,18,511-517）。

在

单机架装置（single bay instrument）上以梯度进行¹H-NMR光谱。其装配有QNP探针（可互换的4核探针-¹H、¹³C、¹⁹F和³¹P）（NMR方法1）或在装配有5mm双共振探针[1H(15N-31P)ID_PFG Varian]，在400.45MHz下操作的Mercury VX400上。

制备A

1-叔丁基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯[(IV)，R2=叔丁基，A=-(CH₂)₂-]

st.1

在室温下向处于无水乙醇（150ml）中的10g(3-乙氧基-2-氧代环己-3-烯-1-基)(氧代)乙酸乙酯（42.6mmol）和5ml乙酸的溶液中加入6g叔丁基肼盐酸盐（48mmol）。在60°C下搅拌混合物3小时。在真空下除去挥发物，用DCM稀释残余物并用NaHCO₃饱和水溶液洗涤，然后用盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱纯化粗物质，用乙酸乙酯和己烷（1:2）洗脱，从而得到1-叔丁基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯，产率为90%。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt6.08分钟。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm4.18(q,J=6.83Hz,2H)2.93-2.30(3m,6H)1.58(s,9H),1.16(t,J=6.83Hz,3H)。C14H20N2O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为287.1366，实测值为287.1356。

根据相同的方法，但采用肼，制备以下化合物：

7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯[(IV),R2=H,A=-(CH₂)₂-]。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm14.39(s,1H),4.27(q,J=7.11Hz,2H),2.87(t,J=6.10Hz,2H),2.51(m,2H),2.04(m,2H),1.28(t,J=7.07Hz,3H)。

制备B

1-(4-甲氧基苄基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯[(IVa)，R2=对甲氧基苄基，A=-(CH₂)₂-]和2-(4-甲氧基苄基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-2H-吲唑-3-羧酸乙酯[(IVb)，R2=对甲氧基苄基，A=-(CH₂)₂-]。

st.1a

将50mg的7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯和120mg的碳酸铯（0.37mmol）溶解于1ml无水DMF中，加入42μl的对甲氧基苄基溴化物（0.288mmol）并在室温下搅拌过夜。将混合物分配于H₂O和DCM之间。用盐水洗涤有机层并在Na₂SO₄上干燥，过滤并减压浓缩。用快速柱色谱（DCM/丙酮95/5）纯化残余物从而得到两种区域异构体：

1-(4-甲氧基苄基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯，产率为20%。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm7.10-7.30(m,2H),6.75-6.96(m,2H),5.64(s,2H),4.29(q,J=7.16Hz,2H),3.71(s,3H),2.93(t,J=6.10Hz,2H),2.55(dd,J=5.55,7.26Hz,2H),1.90-2.15(m,2H),1.30(t,J=7.14Hz,3H)。

2-(4-甲氧基苄基)-7-氧代-4,5,6,7-四氢-2H-吲唑-3-羧酸乙酯，产率为25%。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ7.12-7.32(m,2H),6.76-6.97(m,2H),5.70(s,2H),4.32(q,J=7.12Hz,2H),3.71(s,3H),2.91(t,J=6.10Hz,2H),2.52-2.57(m,2H),1.97-2.09(m,2H),1.30(t,J=7.08Hz,3H)。

制备C

(6E)-1-叔丁基-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯[(VI)，R2=叔丁基，A=-(CH₂)₂-]

st.2

将10g中间体1-叔丁基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯（37.8mmol）溶解于50ml的Ν,Ν-二甲基甲酰胺二甲基缩醛中并在110°C下搅拌。在室温下搅拌反应16小时。浓缩反应混合物，然后将其分配于H₂O和DCM之间。用盐水洗涤有机层并在Na₂SO₄上干燥，过滤并减压浓缩，从而以定量产率得到标题化合物。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.85分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ7.55(s,1H),4.22-4.33(m,2H),3.11(s,6H),2.82(s,4H),1.66(s,9H),1.25-1.32(m,3H)。

制备D

1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=Me-S-，R2=叔丁基，A=-(CH₂)₂-]

st.3a

向处于50ml无水DMF中的9g(6E)-1-叔丁基-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯（28.17mmol）的溶液中加入9.2g无水乙酸钾（112mmol）和23.52g甲基异硫脲硫酸盐（84.51mmol）。在100°C下搅拌反应8小时。用乙酸乙酯稀释混合物，用H₂O洗涤，在Na₂SO₄上干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱纯化粗产物（乙酸乙酯:己烷1:3）从而得到标题化合物（50%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt7.46分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.58(s,1H),4.22-4.38(m,2H),2.95-3.01(m,2H),2.80-2.86(m,2H),2.57(s,2H),1.76-1.83(m,9H)。C17H22N4O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为347.1536，实测值为347.1523。

利用相同的方法制备以下化合物：

8-(甲基硫烷基)-1-三苯甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=Me-S-，R2=三苯甲基，A=-(CH₂)₂-]。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ7.19-7.35(m,10H),6.92-7.01(m,6H),4.22-4.31(m,2H),3.04(t,J=6.59Hz,1H),2.55-2.60(m,2H),2.41(s,3H),1.22-1.30(m,4H)。

1-甲基-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=Me-S-，R2=甲基，A=-(CH₂)₂-]。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.55(s,1H),4.33(s,3H),4.29(q,J=7.08Hz,2H),2.97-3.04(m,J=1.10,6.84Hz,2H),2.88-2.95(m,2H),2.56(s,3H),1.31(t,J=7.08Hz,3H)。

1-(2-羟基乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=Me-S-，R2=2-羟基乙基，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.27分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.55(s,1H),4.87(br.s.,1H),4.83(t,J=6.04Hz,2H),4.30(q,J=7.08Hz,2H),3.82(t,J=5.80Hz,2H),2.97-3.06(m,2H),2.85-2.95(m,2H),2.55(s,3H),1.32(t,J=7.08Hz,3H)。C15H18N4O3S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为335.1172，实测值为335.1175。

制备E

1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=H，R2=Me，A=-(CH₂)₂-]

st.3c

向处于20ml无水DMF中的0.5g(6E)-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-1-甲基-7-氧-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯（1.80mmol）的溶液中加入746mg碳酸钾（5.4mmol）和510mg乙酸甲脒（5.4mmol）。在100°C下搅拌反应8小时。用乙酸乙酯稀释混合物并用H₂O洗涤，在Na₂SO₄上干燥，过滤并蒸发。用二乙醚研磨残余物，从而得到450mg标题化合物（95%）。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.09(s,1H),8.74(s,1H),4.35(s,3H),4.31(q,J=7.08Hz,2H),2.98-3.05(m,4H),1.33(t,J=7.08Hz,3H)。

利用相同的方法制备以下化合物：

1-叔丁基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=H，R2=叔丁基，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(m/z):301.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法2Rt5.89分钟。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.13(s,1H),8.75(s,1H),4.31(q,J=7.14Hz,2H),2.95-3.06(m,2H),1.81(s,9H),2.85-2.95(m,2H),1.31(t,J=7.14Hz,3H)。C16H20N4O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为301.1659，实测值为301.1663

利用乙脒代替甲脒如制备E所述进行制备：

1,8-二甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=Me，R2=Me，A=-(CH₂)₂-]。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.62(s,1H),4.36(s,3H),4.30(q,J=7.08Hz,2H),2.91-3.05(m,4H),2.65(s,3H),1.32(t,J=7.08Hz,3H)。

1-叔丁基-8-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=Me，R2=叔丁基，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(m/z):315.3[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt6.52分钟。

制备F

1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=Me-S-，R2=叔丁基，A=-CH=CH-]

将处于氯苯中的1.5g1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（4.35mmol）和1.97g DDQ（8.7mmol）的溶液加热回流4小时。在真空中除去挥发物，用乙酸乙酯溶解残余物，并用饱和NaHCO₃水溶液洗涤。用Na₂SO₄干燥有机相，过滤并浓缩。用硅胶柱色谱纯化粗物质，用乙酸乙酯和己烷（1:4）洗脱，得到1.19g标题化合物（80%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt7.78分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.52(s,1H),8.18-8.43(m,1H),7.89(d,J=8.79Hz,1H),4.24-4.61(m,2H),2.74(s,3H),2.00(s,9H),1.40(t,J=7.08Hz,3H)。C17H20N4O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)测量值为345.1380，实测值为345.1371。

利用与上述实施例中所述相同的方法还合成了以下类似物：

1-甲基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=Me-S-，R2=甲基，A=-CH=CH-]。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)偏移9.49(s,1H),8.15(d,J=8.79Hz,1H),7.82(d,J=8.79Hz,1H),4.74(s,3H),4.44(q,J=7.20Hz,2H),2.73(s,3H),1.40(t,J=7.14Hz,3H)

1-(2-羟基乙基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=Me-S-，R2=2-羟基乙基，A=-CH=CH-]。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.49分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.49(s,1H),8.17(d,J=8.67Hz,1H),7.83(d,J=8.79Hz,1H),5.24(t,J=5.92Hz,2H),4.39-4.49(m,2H),3.98(t,J=5.80Hz,2H),2.70(s,3H),1.41(t,J=7.14Hz,3H)。C15H16N4O3S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为333.1016，实测值为333.1017。

1-叔丁基-8-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=Me-，R2=叔丁基，A=-CH=CH-]。LC/MS(m/z):313.2[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法2Rt6.79。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.62(s,1H),8.33(d,J=8.67Hz,1H),7.92(d,J=8.79Hz,1H),4.39-4.50(m,2H),2.92(s,3H),2.02(s,9H),1.41(t,J=7.08Hz,3H)。C17H20N4O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为313.1659，实测值为313.1653.

1-叔丁基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=H，R2=叔丁基，A=-CH=CH-]。LC/MS(m/z):299.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法2Rt6.36分钟。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.75(s,1H),9.56(s,1H),8.44(d,J=8.79Hz,1H),7.98(d,J=8.79Hz,1H),4.46(q,J=7.14Hz,2H),2.01(s,9H),1.41(t,J=7.00Hz,3H)。C16H18N4O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为299.1503，实测值为299.1502。

实施例11-(2-羟基乙基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=2-羟基乙基，R3=NH₂，A=-CH=CH-]（cpd1）

st.6a

在120°C下使处于甲醇中10ml7N NH₃中的1.2g的1-(2-羟基乙基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（3.61mmol）的悬浮液经历微波辐照4小时。在真空下除去挥发物，用二乙醚稀释残余物并过滤固体，从而得到0.6g标题化合物（55%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.29分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.46(s,1H),8.28(d,J=8.67Hz,1H),7.84(s,1H),7.73(d,J=8.79Hz,1H),7.52(br.s.,1H),5.21(t,J=5.98Hz,2H),4.82-4.96(m,J=0.61Hz,1H),3.94-4.07(m,2H),2.70(s,3H)。C13H13N5O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为304.0863，实测值为304.0857。

利用与上文所述实施例相同的方法还合成了以下类似物：

1-叔丁基-8-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-，R2=叔丁基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd5)LC/MS(m/z):284.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt5.95分钟。

1-叔丁基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R2=叔丁基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd3)LC/MS(m/z):270.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt4.55分钟。

实施例21-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=H，R2=Me，R3=NH₂，A=-（CH₂)₂-]

st.6b1和st.6b2

步骤a.将处于乙醇（30ml）中的440mg的1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（1.74mmol）和300mg氢氧化钾（5.2mmol）的悬浮液加热回流2小时。在真空下除去挥发物，用乙醇（3ml）稀释残余物并过滤固体，从而得到374mg的1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸钾（80%）。

步骤b.向处于DMF（10ml）中的200mg的1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸钾（0.74mmol）的悬浮液中加入286mg的EDCI（1.49mmol）、1ml的DIPEA（10mmol）、300mg的HOBt-NH₄（1.98mmol）。将混合物在室温下搅拌18小时，之后用DCM稀释溶液并用饱和NaHCO₃水溶液洗涤。在Na₂SO₄上干燥有机层并蒸发。通过快速色谱纯化粗产物并用环己烷/EtOAc4/1洗脱，从而得到118mg标题化合物（70%），为白色固体。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.08(s,1H),8.73(s,1H),7.51(bs,2H),4.33(s,3H),3.05(m,2H),2.97(m,2H)。

利用与上文所述的实施例相同的方法还合成了以下类似物：

1-叔丁基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Η，R2=叔丁基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd2)LC/MS(m/z):272[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法2Rt4.28分钟。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)9.10(s,1H),8.73(s,1H),7.41(br.s.,1H),7.31(br.s.,1H),2.97-3.03(m,2H),2.83-2.91(m,2H),1.81(s,9H)。C14H17N5O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为272.1506，实测值为272.1514。

实施例3

1-(2-羟基乙基)-8-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=R4=Me，X=O，R2=2-羟基乙基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd6)

st.3b,st.4,st.6a

1-(2-羟基乙基)-8-甲氧基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯的制备（St.3b）

向处于50ml无水DMF中的15g的(6E)-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-1-(2-羟基乙基)-7-氧-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯（49mmol）的溶液中加入14.4g无水乙酸钾（147mmol）和12.60g甲基异脲硫酸盐（73.0mmol）。在100°C下搅拌反应16小时。用乙酸乙酯稀释混合物，用H₂O洗涤，在Na₂SO₄上干燥，过滤并蒸发。通过柱（乙酸乙酯:己烷1:3）纯化粗产物，从而得到1.2g标题化合物（10%)。C15H18N4O4[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为319.3278，实测值为319.3256。

1-(2-羟基乙基)-8-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯的制备（St.4)

向处于甲苯（20ml）中的1.2g的1-(2-羟基乙基)-8-甲氧基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（3.76mmol）的悬浮液中加入500mg的4,5-二氯-3,6-二氧环己-1,4-二烯-1,2-二腈（2.2mmol）。使混合物在密封瓶中在100°C下接受微波辐照3小时。蒸发掉挥发物，用乙酸乙酯溶解粗产物并用饱和NaHCO₃分配（portion），浓缩有机层至干燥。通过色谱（乙酸乙酯/己烷7/3）纯化残余物，从而得到520mg期望的化合物（46%)。C15H16N4O4[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为317.3119，实测值为317.3126。

1-(2-羟基乙基)-8-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯的制备。将250mg（0.79mmol）溶解于处于甲醇（8ml）中7M NH₃中。使混合物在密封瓶中在120°C下经历微波辐照4小时。蒸发掉挥发物并通过色谱洗脱液（DCM/MeOH95/5）纯化粗产物，从而得到136mg期望的化合物（60%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.75分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.51(s,1H),8.20(d,J=8.67Hz,1H),7.82(br.s.,1H),7.74(d,J=8.79Hz,1H),7.51(br.s.,1H),5.19(t,J=5.92Hz,1H),4.90(t,J=6.29Hz,3H),4.12(s,3H),3.97-4.07(m,J=5.00Hz,2H)。C13H13N5O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为288.1091，实测值为288.1086。

制备G

st.6b1

1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸钾[(XI)，R1=Me-S-，R2=叔丁基，A=-CH=CH-]

将1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（300mg，0.87mmol）悬浮于2ml无水乙醇中，并用在室温下用处于乙醇（5ml，7.5mmol）中的1.5M氢氧化钾溶液处理2小时。通过过滤收集所得的沉淀物，从而得到215mg标题化合物（70%），为灰白色固体。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.79分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.38(s,1H),8.61(d,J=8.54Hz,1H),7.58(d,J=8.67Hz,1H),2.72(s,3H),1.95(s,9H)。C15H16N4O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为317.1067，实测值为317.1052。

实施例4

1-叔丁基-N-甲基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=叔丁基，R'=Me，A=-CH=CH-](cpd7)

st.6b2

在N,Ν-二异丙基乙基胺（100μl，0.71mmol）存在下，用2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐（HBTU）（82mg，0.255mmol）和盐酸甲胺（15mg0.213mmol）处理处于无水N,N-二甲基甲酰胺（2ml）中的1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸钾（50mg0.142mmol）的悬浮液。在室温下搅拌反应3小时。将反应混合物分配于乙酸乙酯和水之间，并在Na₂SO₄上干燥有机层，过滤并浓缩。通过柱色谱（EtOAc/己烷7/3）纯化粗产物，从而得到20mg标题化合物（45%），为灰白色固体。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt6.89分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.49(s,1H),8.42(d,J=8.67Hz,1H),8.32(d,J=4.52Hz,1H),7.80(d,J=8.67Hz,1H),2.87(d,J=4.76Hz,3H),2.74(s,3H),1.98-2.04(m,9H)。C16H19N5OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为330.1383，实测值为330.1383。

以类似的方式进行操作，制备以下的化合物：

1-叔丁基-N-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=叔丁基，R'=2-(二甲基氨基)乙基，A=CH=CH-](cpd8)LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.28分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ9.49(s,1H),8.43(d,J=8.67Hz,1H),8.22(t,J=5.86Hz,1H),7.81(d,J=8.67Hz,1H),3.44(q,J=6.59Hz,2H),2.74(s,3H),2.46(t,J=6.77Hz,2H),2.21(s,6H),2.01(s,9H)。C19H26N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为387.1962，实测值为387.1974。

1-叔丁基-N-(2-羟基乙基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=叔丁基，R'=2-羟基乙基，A=-CH=CH-](cpd9)LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt6.07分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.49(s,1H),8.43(d,J=8.54Hz,1H),8.22(t,J=5.92Hz,1H),7.81(d,J=8.67Hz,1H),4.80(t,J=5.43Hz,1H),3.58(q,J=6.02Hz,2H),3.43(q,J=6.27Hz,2H),2.74(s,3H),2.01(s,9H)。C17H21N5O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为360.1489，实测值为360.1495。

1-叔丁基-N-(1-甲基哌啶-4-基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[R1=[(I)，R1=Me-S-，R2=叔丁基，R'=1-甲基哌啶-4-基，A=-CH=CH-](cpd10)LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.09分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.48(s,1H),8.40(d,J=8.67Hz,1H),8.06(d,J=8.06Hz,1H),7.80(d,J=8.79Hz,1H),3.84(dd,J=3.30,7.57Hz,1H),2.74-2.83(m,2H),2.73(s,3H),2.18(s,3H),2.01(s,9H),1.94-1.99(m,2H),1.63-1.84(m,4H)。C21H28N60S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为413.2118，实测值为413.2112。

1-叔丁基-N-[2-(1H-咪唑-5-基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[R1[(I)，R1=Me-S-，R2=叔丁基，R'=2-(1H-咪唑-5-基)乙基，A=-CH=CH-](cpd11)LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.49分钟。¹HNMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.49(s,1H),8.55(d,J=2.93Hz,1H),8.43(d,J=8.67Hz,1H),7.81(d,J=8.67Hz,1H),7.57(d,J=0.98Hz,1H),6.89(s,1H),3.51-3.64(m,2H),2.82(t,J=7.38Hz,2H),2.70-2.76(m,3H),2.01(s,9H)。C20H23N7OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为410.1758，实测值为410.1751。

制备H

8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=Me-S-，R2=H，A=-CH=CH-]

st.5

用三氟乙酸（5ml）处理1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（800mg,2.32mmol）。在70°C下加热所得混合物并搅拌4小时。当真空中除去挥发物时，用DCM溶解残余物，用饱和NaHCO₃洗涤，在Na₂SO₄上干燥，过滤并浓缩，从而得到标题化合物（670mg，>99%），为浅黄色固体。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.66分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.50(s,1H),8.14(d,J=8.67Hz,1H),7.80(d,J=8.79Hz,1H),4.41-4.47(m,2H),2.75(s,3H),1.41(t,J=7.14Hz,3H)。C13H12N4O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为289.0754，实测值为289.0752。

制备I

1-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIIIa)，R1=Me-S-，R2=2-(二甲基氨基)乙基，A=-CH=CH-]

和

2-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIIIb)，R1=Me-S-，R2=2-(二甲基氨基)乙基，A=-CH=CH-]

st.5

向处于干燥的二甲基甲酰胺（4ml）中的8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（150mg,0.52mmol）的溶液中加入碳酸铯（339mg1.04mmol），之后加入2-溴-N,N-二甲基乙胺（135mg0.88mmol）。在室温下搅拌该非均质混合物24小时。用水处理该混合物并用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，在Na₂SO₄上干燥并浓缩。通过硅胶色谱（用EtOAc/乙醇85/15洗脱）纯化粗产物，从而得到1-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯，为主要异构体（60mg，32%）¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),8.16(d,J=8.67Hz,1H),7.83(d,J=8.79Hz,1H),5.29(t,J=6.59Hz,1H),4.32-4.49(m,2H),2.94(br.s.,2H),2.71(s,3H),2.24(br.s.,6H),1.41(t,J=7.08Hz,3H)；和

2-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯，为次要异构体（20mg，10%）。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.39(s,1H),8.26(d,J=8.78Hz,1H),7.87(d,J=8.78Hz,1H),4.66(t,J=6.57Hz,1H),4.45(q,J=7.06Hz,2H),2.71(br.s.,3H),2.67(s,2H),2.37(br.s.,6H),1.46(t,J=7.08Hz,3H)。

实施例5

1-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=2-(二甲基氨基)乙基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd12)

st.6c

将1-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（46mg，0.128mmol）悬浮于2ml四氢呋喃中。加入氯化铵（20mg，0.384mmol）和处于THF溶液中的1N LiN(TMS)₂（0.8ml，0.8mmol）。在室温下搅拌混合物1小时。然后蒸发溶剂至干燥，通过在硅胶上进行快速色谱（洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH95/5/0.1）来纯化残余物，从而得到18mg标题化合物（42%）和2mg次要产物（secondary product）6-氨基-1-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.75分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ9.48(s,1H),8.27(d,J=8.67Hz,1H),7.84(br.s.,1H),7.74(d,J=8.67Hz,1H),7.54(br.s.,1H),5.25(t,J=6.71Hz,2H),2.93(br.s.,2H),2.71(s,3H),2.23(br.s.,6H)。C15H18N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为331.1336，实测值为331.1334。

6-氨基-1-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[R1=[(I)，R1=Me-S-，R2=2-(二甲基氨基)乙基，R3=NH₂，R5=NH₂，A=-CH=CH-](cpd13)

LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.97分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ8.01(d,J=8.79Hz,1H),7.88(br.s.,1H),7.84(d,J=8.91Hz,1H),7.74(br.s.,1H),7.45(br.s.,1H),5.22(t,J=5.61Hz,2H),2.88(br.s.,2H),2.58(s,3H),2.15-2.29(m,J=6.47Hz,6H)。C15H19N7OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为346.1445，实测值为346.1439。

实施例62-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=2-(二甲基氨基)乙基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd14)

st.6a

使处于甲醇中4ml7N NH₃中的20mg的2-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（0.055mmol）的悬浮液在120°C下经历微波辐照4小时。在真空下除去挥发物，并通过硅胶色谱（洗脱液：DCM/MeOH/NH₃97/3/1）纯化残余物，从而获得2.6mg标题化合物（15%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.13。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.34(s,1H),8.34(br.S.,1H),8.04(br.S.,1H),7.80(d,J=8.91Hz,1H),7.59(d,J=9.03Hz,1H),4.89(t,J=6.47Hz,2H),2.80(t,J=6.41Hz,2H),2.69(s,3H),2.18(s,6H)。C15H18N60S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为331.1336，实测值为331.1331。

实施例7{2-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]乙基}氨基甲酸叔丁酯[(I)，R1=Me-S-，R2=N₁-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙基，R3=NH₂，A=-CH=CH-]

和

{2-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-2-基]乙基}氨基甲酸叔丁酯[(I),R1=Me-S-，R2=N₂-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙基，R3=NH₂，A=-CH=CH-]

向处于干燥二甲基甲酰胺（4ml）中的8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（200mg,0.69mmol）的溶液中加入碳酸铯（337mg1.03mmol），之后加入(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯（186mg0.83mmol）。在室温下搅拌该非均质混合物48小时。用水处理该混合物并用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，在Na₂SO₄上干燥并浓缩。通过硅胶色谱（用EtOAc/乙醇85/15洗脱）纯化粗产物，从而得到两种未拆分的区域异构体1-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙基}-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯和2-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙基}-8-(甲基硫烷基)-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯的混合物（282mg，95%）。

将所获得的两种区域异构体的混合物悬浮于处于甲醇中的10ml7NNH₃中并使其在120°C下经历微波辐照5小时。在真空下除去挥发物，通过硅胶色谱（洗脱液：DCM/MeOH/NH₃97/3/1）纯化残余物，从而得到145mg{2-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]乙基}氨基甲酸叔丁酯（55%），为主要异构体。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.53分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.46(s,1H),8.27(d,J=8.79Hz,1H),7.74(s,2H),7.54(br.S.,1H),6.91(t,J=6.29Hz,1H),5.21(t,J=5.86Hz,2H),3.58(q,J=6.14Hz,2H),2.71(s,3H),1.23(s,9H)。C18H22N6O3S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为403.1547，实测值为403.1534;和

18mg{2-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-2-基]乙基}氨基甲酸叔丁酯（7%），为次要异构体。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.08分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.33(s,1H),8.08(d,J=15.01Hz,2H),7.84(d,J=8.91Hz,1H),7.60(d,J=8.91Hz,1H),6.95(t,J=6.71Hz,1H),4.82(t,J=6.29Hz,2H),3.49(q,J=6.51Hz,2H),2.69(s,3H),1.28(s,9H)。C18H22N6O3S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为403.1547，实测值为403.1552。

通过根据该方法进行操作，制备了以下的化合物：

4-{[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯[(I)，R1=Me-S-，R2=4-甲基哌啶-1-羧酸N₁-叔丁酯，R3=NH₂，A=-CH=CH-]LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt6.56分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.47(s,1H),8.28(d,J=8.79Hz,1H),7.81(s,1H),7.74(d,J=8.67Hz,1H),7.55(s,1H),5.07(d,J=7.57Hz,2H),3.90(d,J=12.08Hz,2H),2.69-2.70(m,3H),2.59-2.68(m,J=2.01,3.72Hz,2H),2.22-2.41(m,1H),1.41-1.51(m,J=6.10Hz,2H),1.38(s,9H),1.22(dq,J=4.33,12.31Hz,2H)。C22H28N6O3S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为479.1836，实测值为479.1849。

实施例81-(2-氨基乙基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=Me-S-，R2=N₁-2-氨基乙基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd15)

用处于1,4-二氧杂环己烷中的1ml4M HCl处理{2-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]乙基}氨基甲酸叔丁酯（40mg0.1mmol）。在室温下搅拌所得混合物1小时。在真空中除去挥发物，用二乙醚研磨所得的残余物，过滤并用Et₂O洗涤并在真空中干燥，从而得到32mg标题化合物（97%），为白色固体。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.59分钟。HCl盐，¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.50(s,1H),8.29(d,J=8.67Hz,1H),8.12(br.s.,2H),8.04(br.s.,1H),7.78(d,J=8.67Hz,1H),7.65(s,1H),5.32-5.58(m,2H),3.57-3.72(m,2H),2.72(s,3H)。C13H14N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为303.1023，实测值为303.1021。

根据该方法进行操作制备了以下化合物：

2-(2-氨基乙基)-8-(甲基硫烷基)-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=Me-S-，R2=N₂-2-氨基乙基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd16)LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.33分钟。HCl盐,¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.34-9.40(m,1H),7.93-8.29(m,5H),7.85-7.91(m,1H),7.66(d,J=9.03Hz,1H),5.01(t,J=6.16Hz,2H),3.43-3.53(m,2H),2.67-2.71(m,3H)。C13H14N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为303.1023，实测值为303.1017；

8-(甲基硫烷基)-1-(哌啶-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I),R1=Me-S-，N₁R2=哌啶-4-基甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd17)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.94分钟。HCl盐，¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.49(s,1H),8.62(br.s.,1H),8.47(d,J=10.25Hz,1H),8.29(d,J=8.67Hz,1H),7.81(s,1H),7.76(d,J=8.67Hz,1H),7.59(s,1H),5.13(d,J=7.32Hz,2H),3.23(d,J=12.21Hz,2H),2.81(q,J=11.76Hz,2H),2.74(s,3H),2.36-2.48(m,1H),1.43-1.68(m,4H)。C17H20N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为357.1492，实测值为357.149;和

8-(甲基硫烷基)-2-(哌啶-4-基甲基)-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I),R1=Me-S-，N₂R2=哌啶-4-基甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd18)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.7分钟。HCl盐,¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.36(s,1H),8.64(d,J=10.37Hz,1H),7.94-8.39(m,3H),7.83(d,J=9.03Hz,1H),7.62(d,J=9.03Hz,1H),4.67-4.90(m,2H),2.78-2.94(m,2H),2.69(s,3H),2.34-2.43(m,1H),1.58-1.71(m,J=12.45Hz,2H),1.41-1.56(m,2H)。C17H20N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为357.1492，实测值为357.1481。

实施例91-甲基-8-[4-(哌嗪-1-基)苯氧基]-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=4-(哌嗪-1-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd19)

Conv.b

在70°C下在Cs₂CO₃（0.487g，1.5mmol）存在下在5ml无水DMF中使154mg的1-甲基-8-(甲基磺酰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（如在WO2004/104007A1中所述制备的）（0.5mmol）和107mg的4-(哌嗪-1-基)苯酚（0.6mmol）反应2小时。冷却后，在真空下干燥反应，与一匙二氧化硅混合并通过快速色谱（处于MeOH中7N的DCM/MeOH/NH₃9/1/0.4%）洗脱，从而得到期望的产物。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.73分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.68(br.s.,2H),8.49(s,1H),7.44(s,1H),7.29(s,1H),7.12-7.19(m,2H),7.03-7.08(m,2H),4.06(s,3H),3.20-3.39(m,8H),2.97-3.04(m,2H),2.85-2.92(m,2H)。C21H23N7O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为406.1986，实测值为406.19825。

以类似的方式操作，制备了以下化合物：

1-甲基-8-苯氧基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd20)LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.23分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.53(s,1H),7.42-7.49(m,3H),7.22-7.30(m,4H),3.99(s,3H),2.98-3.04(m,2H),2.85-2.93(m,2H)。C17H15N5O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为322.1299，实测值为322.1293;

8-(3-氨基苯氧基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=3-氨基苯氧基，R2=甲基，R3=NH2,A=-(CH2)2-](cpd21)LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.43分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.51(s,1H),7.45-7.51(m,1H),7.26(br.s.,1H),7.04(t,J=7.99Hz,1H),6.43(ddd,J=0.85,2.08,8.06Hz,1H),6.38(t,J=2.14Hz,1H),6.32(ddd,J=0.79,2.23,7.96Hz,1H),5.21(br.s.,2H),4.06(s,3H),2.98-3.04(m,2H),2.85-2.92(m,2H)。C17H16N6O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为337.1408，实测值为337.1411；

8-(4-氨基苯氧基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=4-氨基苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd22)LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.23分钟。¹ΗNMR(401MHz,DMSO-d₆)位移8.48(s,1H),7.47(s,1H),7.25(br.s.,1H),6.84-6.94(m,2H),6.54-6.63(m,2H),4.99(s,2H),4.04(s,3H),2.95-3.04(m,2H),2.83-2.91(m,2H)。C17H16N6O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为337.1408，实测值为337.1405；

1-甲基-8-(吡啶-4-基氧基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=吡啶-4-基氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd23)LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.68分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.81-8.86(m,2H),8.79(s,1H),7.53(s,1H),7.32(br.s.,1H),6.30-6.36(m,2H),4.36(s,3H),3.04-3.11(m,2H),3.00(br.s.,2H)。C16H14N6O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为323.1251，实测值为323.1238；

8-乙氧基-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=乙基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-]LC/MS(254)HPLC方法2Rt4.47分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.48(s,1H),7.45-7.48(m,1H),7.26(br.s.,1H),4.39(q,J=7.04Hz,2H),4.29(s,3H),2.95-3.03(m,2H),2.81-2.90(m,2H),1.36(t,J=7.02Hz,3H)。C13H15N5O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为274.1299，实测值为274.1296；

1-甲基-8-(丙烷-2-基氧基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=丙烷-2-基氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-]LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.84分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.47(s,1H),7.47(br.s.,1H),7.26(br.s.,1H),5.21(quin,J=6.16Hz,1H),4.28(s,3H),2.96-3.03(m,2H),2.80-2.89(m,2H),1.35(d,J=6.10Hz,6H)。C14H17N5O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为288.1455，实测值为288.144；

1-甲基-8-(2-氧代丙氧基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=2-氧代丙氧基，R2=甲基，R3=NH2，A=-(CH₂)₂-]LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.81分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.42-8.50(m,1H),7.49(s,1H),7.27(br.s.,1H),5.07(s,2H),4.22(s,3H),2.96-3.04(m,2H),2.81-2.89(m,2H),2.14(s,3H)。C14H15N5O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为302.1248，实测值为302.1249；和

8-(2-氟乙氧基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=2-氟乙氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd24)LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.23分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.51(s,1H),7.41-7.59(m,1H),7.28(br.s.,1H),4.80-4.88(m,1H),4.69-4.76(m,1H),4.61-4.67(m,1H),4.53-4.59(m,1H),4.29(s,3H),2.95-3.05(m,2H),2.83-2.92(m,2H)。C13H14FN5O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为292.1205，实测值为292.1209。

实施例101-甲基-8-[4-(4-甲基哌嗪-l-基)苯氧基]-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH2)2-](cpd25)

和

1-甲基-8-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH2，A=-CH=CH-](cpd26)

Conv.b

在70°C下在717mg K₂CO₃（5.2mmol）存在下在25ml无水DMF中使400mg1-甲基-8-(甲基磺酰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（1.3mmol）和360mg的4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯酚（1.43mmol）反应4小时。冷却后，在真空下干燥反应，与一匙二氧化硅混合并通过快速色谱（处于MeOH中的7N DCM/MeOH/NH₃9/1/0.4%）洗脱，从而得到两种化合物的1:1混合物。然后通过制备型HPLC方法2分离每种产物：

1-甲基-8-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.88分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.46(s,1H),7.44(s,1H),7.24(s,1H),7.01-7.09(m,2H),6.91-6.98(m,2H),4.02(s,3H),3.06-3.11(m,4H),2.94-3.01(m,2H),2.81-2.88(m,2H),2.42-2.45(m,4H),2.20(s,3H)。C22H25N7O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为420.2143，实测值为420.2148；和

1-甲基-8-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.03分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.56(s,1H),8.21(d,J=8.67Hz,1H),7.83(s,1H),7.76(d,J=8.91Hz,1H),7.49(s,1H),7.18-7.24(m,1H),6.99-7.07(m,2H),4.35(s,3H),3.12-3.19(m,4H),2.45-2.49(m,4H),2.22-2.26(m,3H)。C22H23N7O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为418.1986，实测值为418.1985。

根据相同的方法，但是采用适合的起始材料，制备了以下的化合物：

1-甲基-8-[4-(哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd27)LC/MS(254)HPLC方法2Rt3.91分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.57(s,1H),8.70(br.s.,2H),8.23(d,J=8.67Hz,1H),7.79(br.s.,1H),7.77(d,J=8.79Hz,2H),7.52(s,1H),7.25-7.31(m,2H),7.09-7.14(m,2H),4.36(s,3H),3.25-3.40(m,8H)。C21H21N7O4[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为404.183，实测值为404.1836；

8-[2-溴-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=2-溴-4-(4-甲基哌嗪-l-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd28)LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.35分钟。TFA盐，¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.52(s,1H),7.57(d,J=2.07Hz,1H),7.47(s,1H),7.28(br.s.,1H),7.20-7.27(m,2H),4.06(s,3H),2.94-3.04(m,6H),2.84-2.94(m,2H),2.54(br.s.,4H),2.26(s,3H)。C22H24BrN7O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为498.1248，实测值为498.1239；

8-[2-溴-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=2-溴-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd29)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.55分钟。TFA盐，¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.59(s,1H),8.24(d,J=8.67Hz,1H),7.83(s,1H),7.78(d,J=8.91Hz,1H),7.73(d,J=2.69Hz,1H),7.51(s,1H),7.35-7.42(m,1H),7.26-7.32(m,1H),4.36(s,2H),2.95-3.08(m,2H),2.54-2.61(m,2H),2.29(br.s.,2H)。C22H22BrN7O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为496.1091实测值为496.1082；

1-甲基-8-[3-(哌嗪-1-基)苯氧基]-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=3-(哌嗪-1-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd30)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.9分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.51(s,1H),7.47(br.s.,1H),7.26-7.28(m,1H),7.17-7.28(m,1H),6.77-6.83(m,J=1.22,1.22,8.42Hz,1H),6.75(t,J=2.26Hz,1H),6.55-6.63(m,1H),4.03(s,3H),3.05(dd,J=4.09,5.92Hz,4H),2.97-3.03(m,2H),2.89(s,1H),2.86-2.93(m,2H),2.77-2.84(m,J=4.09,5.92Hz,4H)。C21H23N7O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为406.1986，实测值为406.1980；

1-甲基-8-[3-(哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=3-(哌嗪-1-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd31)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.1分钟。TFA盐，¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.59(s,1H),8.65(br.s.,2H),8.24(d,J=8.67Hz,1H),7.79(d,J=8.79Hz,2H),7.51-7.54(m,1H),7.38(t,J=8.12Hz,1H),7.01(t,J=2.20Hz,1H),6.96(d,J=2.44Hz,1H),6.86(dd,J=1.59,7.93Hz,1H),4.34(s,3H),3.36-3.41(m,4H),3.22(br.s.,4H)。C21H21N7O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为404.183，实测值为404.1835；

8-[3-(二甲基氨基)苯氧基]-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=3-(二甲基氨基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.53分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.51(s,1H),7.47(br.s.,1H),7.26(br.s.,1H),7.22(t,J=8.18Hz,1H),6.62(dd,J=2.08,8.30Hz,1H),6.57(t,J=2.20Hz,1H),6.51(dd,J=1.77,7.87Hz,1H),4.05(s,3H),2.98-3.04(m,2H),2.85-2.94(m,8H)。C19H20N6O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为365.1721，实测值为365.171;

8-[3-(二甲基氨基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=3-(二甲基氨基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd32)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.8分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.57(s,1H),8.22(d,J=8.79Hz,1H),7.83(br.s.,1H),7.77(d,J=8.91Hz,1H),7.45-7.52(m,1H),7.25-7.30(m,1H),6.60-6.74(m,3H),4.35(s,3H),2.92(s,6H)。C19H18N6O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为363.1564，实测值为363.1574；

8-(2-氯苯氧基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=2-氯苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.55。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.55(s,1H),7.62(dd,J=0.92,7.99Hz,1H),7.48(d,J=2.81Hz,1H),7.40-7.46(m,2H),7.33(ddd,J=2.75,6.26,7.96Hz,1H),7.27(br.s.,1H),3.95(s,3H),2.98-3.07(m,2H),2.86-2.94(m,J=7.93Hz,2H)。C17H14C1N5O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为356.0909，实测值为356.0898；

8-(2-氯苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=2-氯苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd33)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.81分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.63(s,1H),8.25(d,J=8.79Hz,1H),7.85(br.s.,1H),7.80(d,J=8.79Hz,1H),7.68(dd,J=1.46,7.93Hz,1H),7.55(dt,J=1.53,8.15Hz,1H),7.46-7.53(m,2H),7.34-7.43(m,1H),4.23(s,3H)。C17H12C1N5O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为354.0753，实测值为354.0746；

8-(2-氟苯氧基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=2-氟苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.33分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.55(s,1H),7.48(br.s.,1H),7.28-7.46(m,4H),7.26-7.28(m,1H),3.97(s,3H),2.97-3.05(m,2H),2.87-2.94(m,2H)。C17H14FN5O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为340.1205，实测值为340.1208；

8-(2-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=2-氟苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd34)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.58分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.63(s,1H),8.26(d,J=8.79Hz,1H),7.85(s,1H),7.80(d,J=8.79Hz,1H),7.55(dt,J=1.89,7.90Hz,1H),7.50(br.s.,1H),7.447.49(m,1H),7.38-7.44(m,J=2.14,4.64,6.68,6.68Hz,1H),7.31-7.38(m,1H),4.26(s,3H)。C17H12FN5O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为338.1048，实测值为338.1037；

8-[2-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=2-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd35)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.06分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.65(br.s.,1H),8.50(s,1H),7.45(s,1H),7.23-7.34(m,J=9.09,9.09Hz,2H),7.07(dd,J=2.81,13.79Hz,1H),6.87(dd,J=2.08,9.03Hz,1H),4.07(s,3H),3.78-3.98(m,J=13.79Hz,2H),3.46-3.59(m,2H),3.08-3.23(m,2H),2.94-3.07(m,4H),2.84-2.94(m,5H)。C22H24FN7O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为438.2049，实测值为438.2039；

8-[2-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=2-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd36)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.25分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.68(br.s.,1H),9.56-9.61(m,1H),8.25(d,J=8.67Hz,1H),7.79(d,J=8.91Hz,2H),7.53(s,1H),7.41(t,J=9.09Hz,1H),7.14(dd,J=2.81,13.79Hz,1H),6.93(dd,J=2.26,8.97Hz,1H),4.37(s,3H),3.79-4.05(m,J=8.79Hz,2H),3.47-3.61(m,2H),3.17(br.s.,2H),3.03(br.s.,2H),2.88(s,3H)。C22H22FN7O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为436.1892，实测值为436.1875；

8-[2-乙酰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I),R1=2-乙酰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.83分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.57(br.s.,1H),8.48(s,1H),7.44(s,1H),7.36(d,J=2.93Hz,1H),7.27-7.32(m,2H),7.23-7.27(m,1H),4.03(s,3H),3.84-3.96(m,J=12.45Hz,2H),3.48-3.61(m,J=11.23Hz,2H),2.98-3.06(m,J=7.32Hz,4H),2.85-2.92(m,5H),2.45(s,3H)。C24H27N7O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为462.2248，实测值为462.2229；

8-[2-乙酰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=2-乙酰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd37)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.99分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.60(br.s.,1H),9.57(s,1H),8.24(d,J=8.79Hz,1H),7.78(d,J=8.79Hz,2H),7.53(s,1H),7.42(d,J=2.93Hz,1H),7.36-7.40(m,2H),4.32(s,3H),3.88-4.04(m,J=15.01Hz,2H),3.47-3.65(m,J=11.47Hz,2H),2.96-3.12(m,2H),2.90(br.s.,3H),2.46(s,3H)。C24H25N7O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为460.2092，实测值为460.207；

8-[2-乙酰基-4-(哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=2-乙酰基-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.75分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.72(d,J=5.37Hz,2H),8.49(s,1H),7.44(s,1H),7.35(d,J=2.93Hz,1H),7.26-7.32(m,2H),7.22-7.26(m,1H),4.02(s,3H),3.37-3.42(m,4H),3.28(br.s.,4H),2.98-3.04(m,2H),2.85-2.92(m,2H),2.41-2.46(m,3H)。C23H25N7O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为448.2092，实测值为448.2071；

8-[2-乙酰基-4-(哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=2-乙酰基-4-(哌嗪-1-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd38)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.9分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.57(s,1H),8.74(br.s.,2H),8.23(d,J=8.67Hz,1H),7.78(d,J=8.91Hz,2H),7.51-7.54(m,1H),7.42(d,J=2.69Hz,1H),7.37-7.40(m,1H),7.32-7.37(m,1H),4.31(s,3H),3.41-3.45(m,4H),3.30(d,J=5.13Hz,4H),2.45-2.47(m,3H)。C23H23N7O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为446.1935，实测值为446.1927；

8-[2-氰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=2-氰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.7分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ9.69(br.s.,1H),8.54(s,1H),7.53-7.56(m,1H),7.47(br.s.,1H),7.42-7.44(m,1H),7.31(s,1H),4.08(s,3H),3.00-3.05(m,2H),2.89-2.95(m,J=7.81Hz,2H),2.87(s,3H)。C23H24N8O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为445.2095，实测值为445.2090；和

8-[2-氰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=2-氰基-4-(4-甲基哌嗪)-1-基，R2=甲基，R3=NH2,A=-CH=CH-](cpd39)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.1分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)位移9.71(br.s.,1H),9.63(s,1H),8.29(d,J=8.79Hz,1H),7.75-7.87(m,2H),7.60(d,J=2.93Hz,1H),7.55-7.59(m,1H),7.54(br.s.,1H),7.45-7.52(m,1H),4.37(s,3H),3.89-4.05(m,J=13.79Hz,2H),3.50-3.61(m,J=14.28Hz,2H),3.19(br.s.,2H),3.03-3.13(m,J=13.43Hz,2H),2.88(s,3H)。C23H22N8O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为443.1939，实测值为443.1938。

实施例118-(2-乙酰基苯氧基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺

和

8-[2-(2-羟基苯基)-2-氧代乙基]-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺。

Conv.b

在95°C下将处于约15ml NMP中的307mg的1-甲基-8-(甲基磺酰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h-喹唑啉]-3-甲酰胺（1mmol）、322mg的2-羟基苯乙酮（1.5mol）、975mg碳酸铯（3.0mmol）的溶液加热1小时。在起始材料（s.m.）消失后，冷却反应并用水和乙酸乙酯萃取。通过过滤分离所形成的沉淀物并通过制备型反相HPLC回收，从而得到两种化合物：

8-(2-乙酰基苯氧基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=2-乙酰基苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.0分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.52(s,1H),7.87(dd,J=1.71,7.81Hz,1H),7.67(ddd,J=1.71,7.45,8.06Hz,1H),7.48(br.s.,1H),7.41(dt,J=1.10,7.57Hz,1H),7.35(dd,J=0.85,8.18Hz,1H),7.26(br.s.,1H),3.94(s,3H),2.96-3.06(m,2H),2.89(t,J=7.90Hz,2H),2.46(s,3H)。C19H17N5O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为364.1404，实测值为364.1406；和

8-[2-(2-羟基苯基)-2-氧代乙基]-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=2-乙酰基苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.12分钟。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ11.62(s,1H),8.66(s,1H),7.92-7.97(m,1H),7.52(s,1H),7.48(br.s.,1H),7.27(br.s.,1H),6.98(d,J=7.48Hz,1H),6.94-6.97(m,1H),4.70(s,2H),4.11(s,3H),2.97-3.06(m,2H),2.89-2.95(m,2H)。C19H17N5O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为363.3770，实测值为363.3774。

实施例128-氰基-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=CN，R2=Me，R3=NH₂，A=-(CH2)₂-](cpd40)

Conv.d

将136mg的1-甲基-8-(甲基磺酰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]-喹唑啉-3-甲酰胺（0.44mmol）溶解于约8ml的DMF中并在70°C下在116mg氰化钾（1.77mmol）存在下加热。30分钟后，起始材料（s.m.）消失，冷却反应并用水和乙酸乙酯萃取。在Na₂SO₄上干燥有机相并蒸发，悬浮于无水乙醇中并在65°C下搅拌2小时。通过过滤分离产物，为35mg淡黄色粉末（31%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.67分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.89(s,1H),7.56(br.s.,1H),7.33(br.s.,1H),4.28(s,3H),3.06(s,4H)。C12H10N6O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为255.0989，实测值为255.0978。

实施例131-甲基-8-(1H-吡唑-1-基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=1H-吡唑-1-基，R2=Me，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd41)

Conv.c

向处于DMSO（3ml）中的100mg的1-甲基-8-(甲基磺酰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h-喹唑啉]-3-甲酰胺（0.32mmol）的溶液中加入44mg吡唑（0.65mmol）和134.9mg的K₂CO₃（0.976mmol）。在70°C下搅拌混合物4小时。通过加入水对反应进行后处理（work up），过滤沉淀物并用水洗涤。用热的乙醇洗涤固体并过滤，从而得到65mg标题化合物（67%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.38分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.74(s,1H),8.69(d,J=2.44Hz,1H),7.88(d,J=0.85Hz,1H),7.51(br.s.,1H),7.31(br.s.,1H),6.62(dd,J=1.59,2.56Hz,1H),4.40(s,3H),3.06(d,J=6.96Hz,2H),2.97-3.02(m,2H)。C14H13N7O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为296.1255，实测值为296.1261。

1-甲基-8-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基，R2=Me，R3=NH2，A=-(CH₂)₂-](cpd42)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.7分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.91(dd,J=0.98,2.69Hz,1H),8.82(s,1H),7.54(br.s.,1H),7.32(br.s.,1H),7.10(d,J=2.56Hz,1H),4.38-4.40(m,3H),2.96-3.15(m,4H)。C15H12F3N7O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为364.1128，实测值为364.1134；

8-(1H-咪唑-1-基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=1H-咪唑-1-基，R2=Me,，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd43)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.33分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),8.64(t,J=0.98Hz,1H),7.99(t,J=1.34Hz,1H),7.52(br.s.,1H),7.31(br.s.,1H),7.10-7.21(m,1H),4.34-4.38(m,3H),3.03-3.10(m,2H),2.94-3.02(m,2H)。C14H13N7O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为296.1255，实测值为296.1249；和

1-甲基-8-(4-硝基-1H-咪唑-1-基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=4-硝基-1H-咪唑-1-基，R2=Me，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd44)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.82分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.93(d,J=1.46Hz,1H),8.84(s,1H),8.81(d,J=1.46Hz,1H),7.51-7.61(m,1H),7.20-7.41(m,1H),4.39(s,3H),3.06(dd,J=6.23,12.94Hz,4H)。C14H12N8O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为341.1105，实测值为341.1103。

实施例141-甲基-8-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R4=Me，X=SO₂-，R2=Me，R3=NH₂，A=-CH=CH-]

Conv.a

将0.2g的1-甲基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.74mmol）悬浮于10ml DCM中，并与0.52g的MCPBA（3.04mmol）反应3小时。加入水和NaHCO₃并分离固体，过滤并用NaHCO₃饱和水溶液洗涤，从而得到180mg白色化合物（80）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.72分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.97(s,1H),8.60(d,J=8.67Hz,1H),7.99(d,J=8.79Hz,2H),7.63(br.s.,1H),4.72(s,3H),3.61(s,3H)。C12H11N5O3S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为306.0656，实测值为306.0645，

以类似的方式操作，制备了以下的化合物：

1-(2-羟基乙基)-8-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R4=Me，X=SO₂-，R2=2-羟基乙基，R3=NH₂，A=-CH=CH-]。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.39。C13H13N5O4S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为336.0761，实测值为336.0776；

1-叔丁基-8-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I),R4=Me，X=SO₂-，R2=叔丁基，R3=NH₂，A=-CH=CH-]。LC/MS(m/z):348.2[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt4.59;和

8-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R4=Me，X=SO₂-，R2=H，R3=NH₂，A=-CH=CH-]。LC/MS(m/z):292.2[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt2.21。

实施例151-(2-羟基乙基)-8-苯氧基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=苯氧基，R2=2-羟基乙基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd45)

Conv.b

向处于N,N-二甲基甲酰胺（5ml）中的100mg1-(2-羟基乙基)-8-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.298mmol）的溶液中加入碳酸钾（160mg，1.2mmol）和35mg苯酚（0.36mmol）。在70°C下搅拌混合物3小时，之后将其分配在EtOAc和H₂O之间。在Na₂SO₄上干燥合并的有机层并在真空中浓缩。通过色谱（DCM/MeOH9/1）纯化粗产物，从而得到期望的产物（40mg，40%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.79分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.61(s,1H),8.25(d,J=8.79Hz,1H),7.75-7.84(m,J=8.79Hz,1H),7.45-7.57(m,3H),7.31-7.40(m,3H),4.69-4.75(m,2H),4.55-4.63(m,1H),3.59(q,J=5.61Hz,2H)。C18H15N5O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为350.1248，实测值为350.1247。

利用类似于以上实施例中描述的方法还合成了以下的类似物：

1-(2-羟基乙基)-8-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基，R2=2-羟基乙基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd46)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.78分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.57(s,1H),8.23(d,J=8.79Hz,1H),7.77(d,J=8.91Hz,2H),7.46-7.53(m,1H),7.16-7.27(m,2H),6.98-7.10(m,2H),4.77(t,J=5.19Hz,2H),4.55-4.63(m,1H),3.64(q,J=5.53Hz,2H),3.13-3.21(m,4H),2.52(br.s.,4H),2.26(s,3H)。C23H25N7O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为448.2092，实测值为448.2082；

1-(2-羟基乙基)-8-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基，R2=2-羟基乙基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd47)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.92分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.59(s,1H),8.24(d,J=8.79Hz,1H),7.79(s,1H),7.77(s,2H),7.48-7.50(m,1H),7.28-7.36(m,1H),6.84-6.93(m,2H),6.68-6.77(m,1H),4.70-4.78(m,2H),4.57(t,J=5.68Hz,1H),3.62(q,J=5.53Hz,2H),3.15-3.22(m,4H),2.39-2.47(m,4H),2.21(s,3H)。C23H25N7O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为448.2092，实测值为448.2086；

1-(2-羟基乙基)-8-(3-硝基苯氧基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=3-硝基苯氧基，R2=2-羟基乙基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd48)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.9分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.66(s,1H),8.30(t,J=2.14Hz,1H),8.28(d,J=8.79Hz,1H),8.20-8.24(m,1H),7.89-7.93(m,1H),7.80-7.86(m,2H),7.50-7.52(m,1H),4.69(t,J=5.74Hz,1H),4.61-4.65(m,1H),3.57(q,J=5.45Hz,1H)。C18H14N6O5[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为395.1099，实测值为395.1098；

1-甲基-8-(3-硝基苯氧基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=3-硝基苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd49)。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ9.65(s,1H),8.34(t,J=2.14Hz,1H),8.27(d,J=8.67Hz,1H),8.21(ddd,J=0.98,2.20,8.18Hz,2H),7.91-7.95(m,2H),7.86(br.s.,1H),7.78-7.85(m,4H),7.51(br.s.,3H),4.29(s,3H)。C17H12N6O4[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为365.0993，实测值为365.0997；

1-甲基-8-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基，R2=甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd50)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.24分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.58(s,1H),8.22(d,J=8.67Hz,1H),7.83(s,1H),7.77(d,J=8.79Hz,1H),7.49(s,1H),7.31(t,J=8.18Hz,1H),6.90-6.93(m,1H),6.87(dd,J=1.77,8.36Hz,1H),6.71-6.77(m,1H),4.31-4.35(m,3H),3.12-3.20(m,4H),2.44(d,J=9.28Hz,4H),2.21(s,3H)。C22H23N7O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为418.1986，实测值为418.1983；和

1-叔丁基-8-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基，R2=叔丁基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd51)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.63分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.60(s,1H),8.34(d,J=8.54Hz,1H),7.82(d,J=8.79Hz,1H),7.67(s,1H),7.43-7.57(m,1H),7.12-7.20(m,2H),6.99-7.09(m,2H),3.09-3.21(m,4H),2.25(s,3H),1.55(s,9H)。C25H29N7O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为460.2456，实测值为460.2448。

实施例161-叔丁基-8-(二甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=R4且R6=Me，X=N，R2=叔丁基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd52)

Conv.c

向处于N,N-二甲基甲酰胺（2ml）中的10mg1-叔丁基-8-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.028mmol）的溶液中加入碳酸钾（160mg,0.112mmol）和10μl mg40%二甲胺水溶液（0.36mmol）。在室温下搅拌混合物18小时，之后用H₂O稀释。过滤沉淀物并用水洗涤，在真空中干燥，从而得到5mg所需产物（65%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt6.44分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.23(s,1H),8.05(d,J=8.54Hz,1H),7.61(br.s.,1H),7.56(d,J=8.67Hz,1H),7.41(br.s.,1H),2.00(s,9H)。C16H20N6O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为313.1772，实测值为313.1777。

实施例178-甲氧基-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R4=Me，X=O，R2=甲基，A=-CH=CH-](cpd53)

Conv.b

将1-甲基-8-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（30mg0.1mmol）溶解于3ml甲醇中，并加入碳酸钾（27mg,0.2mmol）。在室温下搅拌混合物1小时。在减压下除去溶剂并用二乙醚研磨残余物，过滤并干燥，从而得到20mg总产物（80%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.28分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.51(s,1H),8.18(d,J=8.67Hz,1H),7.83(br.s.,1H),7.73(d,J=8.67Hz,1H),7.47-7.57(m,1H),4.70(s,3H),4.14(s,3H)。C12H11N5O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为258.0986，实测值为258.0987。

以类似的方式进行操作制备了以下的化合物：

8-乙氧基-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R4=Et，X=O，R2=甲基，A=-CH=CH-](cpd54)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.71分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.46-9.55(m,1H),8.17(d,J=8.79Hz,1H),7.79-7.89(m,1H),7.72(d,J=8.79Hz,1H),7.50(br.s.,1H),4.68(s,3H),4.55-4.63(m,2H),1.46(t,J=7.08Hz,3H)。C13H13N5O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为272.1142，实测值为272.1149；和

8-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R4=Me，X=O，R2=H，A=-CH=CH-](cpd55)。LC/MS(m/z):244.2[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt2.89分钟。

实施例188-(3-甲酰基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺_[(I)，R4=3-甲酰基苯基，X=O，R2=甲基，A=-CH=CH-](cpd56)

Conv.b

向处于N,N-二甲基甲酰胺（3ml）中的120mg的1-甲基-8-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.39mmol）的溶液中加入碳酸钾（108mg,0.78mmol）和间羟基苯甲醛（70mg,0.58mmol）。在70°C下搅拌混合物4小时，然后将其分配在EtOAc和H₂O之间。在Na₂SO₄上干燥合并的有机层并在真空中浓缩，从而得到所期望的产物（100mg，74%）。LC/MS(m/z):348.0[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt5.05分钟。

实施例191-甲基-8-{3-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯氧基}-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R4=3-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基，X=O，R2=甲基，A=-CH=CH-](cpd57)

和

8-[3-(羟基甲基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R4=3-羟基甲基苯基，X=O，R2=甲基，A=-CH=CH-](cpd58)

Conv.

向处于N,N-二甲基甲酰胺（2ml）和乙酸（50μl）中的30mg8-(3-甲酰基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.086mmol）的溶液中加入N-甲基哌嗪（13μl,0.13mmol）和氰硼氢化钠（6mg，0.26mmol）。在室温下搅拌溶液3小时，通过TLC和LC/MS监控（方法1）。用乙酸乙酯稀释反应，用水和盐水洗涤，在Na₂SO₄上干燥，过滤并浓缩。通过柱（DCM/MeOH/NH₄OH95/5/0.1）纯化残余物，从而得到1-甲基-8-{3-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯氧基}-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（15mg40%），为主要产物。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.14分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.60(s,1H),8.23(d,J=8.79Hz,1H),7.83(s,1H),7.78(d,J=8.79Hz,1H),7.49-7.50(m,1H),7.46(t,J=7.81Hz,1H),7.26(dt,J=1.71,7.69Hz,3H),4.27(s,3H),3.53(s,2H),2.30-2.47(m,8H),2.17(br.s.,3H)。C23H25N7O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为432.2143，实测值为432.2141；和

8-[3-(羟基甲基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（10mg33%），为次要产物。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.54分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ9.60(s,1H),8.23(d,J=8.79Hz,1H),7.83(s,1H),7.78(d,J=8.79Hz,1H),7.49(s,1H),7.42-7.48(m,1H),7.30-7.33(m,J=1.83Hz,1H),7.20-7.28(m,2H),5.27(t,J=5.80Hz,1H),4.56(d,J=5.74Hz,2H),4.30(s,3H)。C18H15N5O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为350.1248，实测值为350.1253。

根据相同的方法操作制备了以下的化合物：

8-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯氧基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R4=3-[(二甲基氨基)甲基]苯基，X=O，R2=甲基，A=-CH=CH-](cpd59)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.89分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ9.61(s,1H),8.23(d,J=8.79Hz,1H),7.82(s,1H),7.78(d,J=8.91Hz,1H),7.49-7.50(m,1H),7.46(t,J=7.81Hz,1H),7.29(d,J=1.46Hz,1H),7.21-7.28(m,2H),4.27(s,3H),3.46(s,2H),2.18(s,6H)。C20H20N6O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为377.1721，实测值为377.1719；和

1-甲基-8-[3-(吗啉-4-基甲基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R4=3-(吗啉-4-基甲基)苯基，X=O，R2=甲基，A=-CH=CH-](cpd60)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.72分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.60(s,1H),8.23(d,J=8.67Hz,1H),7.83(s,1H),7.78(d,J=8.79Hz,1H),7.49-7.50(m,1H),7.46(t,J=7.87Hz,1H),7.29-7.32(m,1H),7.23-7.29(m,2H),4.27(s,3H),3.55-3.60(m,4H),3.53(s,2H),2.36-2.41(m,4H)。C22H22N6O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为419.1826，实测值为419.1815。

实施例208-(3-氨基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺_[(I)，R4=3-氨基苯基，X=O，R2=甲基，A=-CH=CH-](cpd61)

Conv.k

将55mg1-甲基-8-(3-硝基苯氧基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.15mmol）悬浮于1,4-二氧杂环己烷（5ml）和水（1ml）中，加入43mg锌粉（0.6mmol）和88mg氯化铵（1.5mmol）。在100°C下搅拌混合物2小时。在真空中除去挥发物，用乙酸乙酯和水溶解残余物，萃取有机层并用盐水洗涤，在Na₂SO₄上干燥并浓缩。通过在硅胶（二氯甲烷/甲醇95/5）上快速色谱来纯化粗产物固体，从而得到10mg标题化合物（产率为20%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.7分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.57(s,1H),8.22(d,J=8.79Hz,1H),7.84(s,1H),7.77(d,J=8.79Hz,1H),7.49(s,1H),7.11(t,J=7.99Hz,1H),6.50-6.53(m,1H),6.41-6.50(m,J=0.92,2.23,8.68,8.68Hz,2H),5.26(s,2H),4.38(s,3H)。C17H14N6O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为335.1251，实测值为335.1258。

根据相同的方法进行处理，制备了以下的化合物：

8-(3-氨基苯氧基)-1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R4=3-氨基苯基，X=O，R2=2-羟基乙基，A=-CH=CH-](cpd62)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.26分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.58(s,1H),8.23(d,J=8.79Hz,1H),7.74-7.83(m,J=8.79Hz,1H),7.49(s,1H),7.12(t,J=8.12Hz,1H),6.47-6.55(m,2H),6.40-6.47(m,1H),5.27(s,2H),4.81(t,J=5.19Hz,2H),4.61(t,J=5.68Hz,1H),3.69(q,J=5.57Hz,2H)。C18H16N6O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为365.1357，实测值为365.1363。

制备J8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=Me-S-，R2=H]

st.5

用三氟乙酸（5ml）处理处于DCM（20ml）中的8-(甲基硫烷基)-1-三苯甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（1.0g,1.99mmol)。在室温下搅拌所得的混合物1小时并在真空中除去溶剂。用二乙醚研磨残余物，过滤和干燥，从而得到500mg标题化合物（96%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.62分钟。

实施例218-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=H，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd63)

st.6a

在60°C下将处于甲醇中5ml7N NH₃中的0.5g8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（1.91mmol）的悬浮液加热72小时。在真空下除去挥发物，用二乙醚研磨残余物并过滤固体，从而得到0.4g标题化合物（80%）。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ14.13(br.s.,1H),8.52(s,1H),7.53(br.s.,1H),7.26(br.s.,1H),2.96-3.08(m,J=7.45Hz,2H),2.83-2.94(m,2H),2.56(s,3H)。C11H11N5OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为262.0757，实测值为262.07575。

实施例221-(2-氟乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=2-氟代乙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd64)

Conv.e

向处于乙腈中的8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（50mg，0.191mmol）的溶液中加入2-氟-1-碘乙烷（66.7mg0.38mmol）和碳酸铯（124mg0.38mmol）。在60°C下加热所得的混合物4小时。冷却至室温后，将反应混合物分配于乙酸乙酯和水之间。用盐水洗涤有机层，在Na₂SO₄上干燥并浓缩。通过硅胶色谱（DCM/EtOH9/1）纯化粗产物，从而得到标题化合物。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.82分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.52-8.58(m,1H),7.50(br.s.,1H),7.33(br.s.,1H),5.07-5.15(m,J=4.88Hz,1H),5.03(t,J=4.94Hz,1H),4.93-4.99(m,1H),4.85(t,J=4.88Hz,1H),3.00-3.06(m,J=7.69Hz,2H),2.85-2.93(m,J=8.06Hz,2H),2.53(s,3H)。C13H14FN5OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为308.0976，实测值为308.0976。

根据相同的方法进行操作，制备了以下的化合物：

1-(2-氯乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=2-氯代乙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd65)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.25分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.55(s,1H),7.53(br.s.,1H),7.35(br.s.,1H),5.09(t,J=6.23Hz,2H),4.11(t,J=6.29Hz,2H),2.98-3.06(m,2H),2.86-2.92(m,2H),2.56(s,3H)。C13H14C1N5OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为324.0681，实测值为324.0676；

1-(2-羟基乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=2-羟基乙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd66)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.1分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.53(s,1H),7.35-7.60(m,1H),7.28(br.s.,1H),4.84-4.90(m,1H),4.79(t,J=6.16Hz,2H),3.79-3.90(m,2H),2.95-3.08(m,2H),2.82-2.94(m,2H),2.55(s,3H)。C13H15N5O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为306.1019，实测值为306.1023；

1-(2-甲氧基乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=2-甲氧基乙基，R3=NH2，A=-(CH₂)₂-](cpd67)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.76分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.54(s,1H),7.47(br.s.,1H),7.30(br.s.,1H),4.90(t,J=5.86Hz,2H),3.76-3.89(m,2H),3.23(s,3H),2.98-3.06(m,2H),2.84-2.91(m,2H),2.54(s,3H)。C14H17N5O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为320.1176，实测值为320.1187；

1-[3-(二甲基氨基)丙基]-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=3-(二甲基氨基)丙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd68)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.69分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),7.46(br.s.,1H),7.29(br.s.,1H),4.70-4.77(m,2H),2.97-3.05(m,2H),2.83-2.91(m,2H),2.54-2.58(m,3H),2.22-2.31(m,2H),2.11(s,6H),1.92-2.03(m,2H)。C16H22N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为347.1649，实测值为347.1638；和

1-(1-氨基-2-甲基-1-氧基丙烷-2-基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，,R1=Me-S-，R2=1-氨基-2-甲基-1-氧基丙烷-2-基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd69)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.13分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.49(s,1H),7.42(s,1H),7.29(s,1H),6.96-7.14(m,1H),2.94-3.05(m,2H),2.75-2.85(m,2H),2.55(s,3H),1.90(s,6H)。C15H18N6O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为347.1285，实测值为347.1282。

实施例238-(甲基硫烷基)-1-(哌啶-4-基甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=Me-S-，R2=哌啶-4-基甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd70)

向处于乙腈中的8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（50mg，0.191mmol）的溶液中加入叔丁基-哌啶-4-基甲基溴代氨基甲酸酯（105.71mg，0.38mmol）和碳酸铯（124mg，0.38mmol）。在60°C下加热所得的混合物4小时。冷却至室温后，将反应混合物分配于乙酸乙酯和水之间。用盐水洗涤有机层，在Na₂SO₄上干燥并浓缩。通过硅胶色谱（DCM/EtOH9/1）纯化粗产物，从而得到4-{[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯（30mg0.65mmol）。然后用处于1,4-二氧杂环己烷中的2ml4M HC1处理该化合物。在室温下搅拌所得的混合物1小时。在真空中除去挥发物，用二乙醚研磨所得的残余物，过滤，用Et₂O洗涤并在真空中干燥，从而得到32mg标题化合物（97%），为白色固体。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.83分钟。1H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.62(d,J=10.01Hz,1H),8.55(s,1H),8.27-8.49(m,J=8.42Hz,1H),7.44(s,1H),7.35(s,1H),4.63-4.78(m,2H),3.18-3.28(m,J=6.10Hz,2H),2.99-3.07(m,2H),2.85-2.92(m,J=7.93Hz,2H),2.74-2.85(m,J=10.38Hz,2H),2.57(s,3H),2.18-2.31(m,1H),1.56-1.70(m,2H),1.37-1.51(m,J=3.72,13.98Hz,2H)。C17H22N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为359.1649，实测值为359.1634。

根据相同的方法进行操作，制备了以下的化合物：

1-(3-氨基丙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=Me-S-，R2=3-氨基丙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd71)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.58分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ8.56(s,1H),7.79(br.s.,3H),7.477.50(m,1H),7.38(br.s.,1H),4.77(t,J=6.53Hz,2H),2.99-3.06(m,2H),2.86-2.93(m,2H),2.76-2.83(m,2H),2.54-2.59(m,3H),2.17(br.s.,2H)。C14H18N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为319.1336，实测值为319.1344；

8-(甲基硫烷基)-1-(哌啶-4-基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=Me-S-，R2=哌啶-4-基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd72)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.65分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ8.58-8.65(m,1H),8.56(s,1H),8.46(br.s.,1H),7.41(br.s.,1H),7.38(br.s.,1H),5.52-5.73(m,J=6.84,6.84Hz,1H),3.46-3.62(m,2H),3.04-3.13(m,J=6.84Hz,2H),2.97-3.04(m,2H),2.82-2.91(m,J=8.18Hz,2H),2.58(s,3H),2.19-2.32(m,J=7.32Hz,4H)。C16H20N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为345.1492，实测值为345；和

1-(2-氨基乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I),R1=Me-S-，R2=2-氨基乙基，R3=NH2，A=-(CH2)2-](cpd73)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.46分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.58(s,1H),7.92(br.s.,3H),7.74(s,1H),7.43(s,1H),4.85-5.09(m,2H),3.42-3.57(m,J=5.98Hz,2H),2.96-3.09(m,2H),2.80-2.94(m,2H),2.56(s,3H)。C13H16N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为305.1179，实测值为305.1191。

实施例241-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd74)

和

1-乙烯基-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=乙烯基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd75)

Conv.f和g

向处于甲醇（3ml)中的1-(2-氯乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（50mg0.15mmol）的溶液中加入N-甲基哌嗪（62μl,0.61mmol）和碳酸铯（97mg,0.3mmol）。在60°C下加热所得的混合物48小时。在真空下除去挥发物，用乙酸乙酯和水溶解粗产物固体，用盐水洗涤有机层，在Na₂SO₄上干燥并浓缩。通过硅胶色谱（DCM/EtOAc8/2）纯化粗产物，从而得到化合物1-乙烯基-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，为黄色固体（15mg，产率为35%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.34分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.58(s,1H),8.35(dd,J=8.73,15.44Hz,1H),7.71(s,1H),7.46(br.s.,1H),5.96(d,J=15.38Hz,1H),5.15(d,J=8.67Hz,1H),3.00-3.09(m,2H),2.86-2.94(m,2H),2.56(s,3H)。C13H13N5OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为288.0914，实测值为288.0913。

改变洗脱液，例如DCM/MeOH/NH₄OH9/1/0.1，收集极性化合物1-(2-[N-甲基哌嗪]乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，为黄色固体（17mg，产率为30%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.79分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.35(s,1H),7.46(s,1H),7.28(s,1H),4.82(t,J=6.84Hz,2H),2.98-3.04(m,2H),2.88(d,J=7.93Hz,2H),2.55(s,3H)。C18H25N7OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为388.1914，实测值为388.1909。

实施例251-{2-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]乙基}-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=2-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]乙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd76)

Conv.h

向处于乙酸乙酯（2ml）中的1-(2-羟基乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（20mg，0.077mmol）的溶液中加入IBX（64mg，0.23mmol）。在80°C下加热所得的混合物4小时。在冷却至室温后，过滤反应混合物并在真空中除去挥发物，作为粗产物的乙醛用于下一步反应。用THF/DMF（3/1ml）溶解乙醛，加入三乙氧基硼氢化钠（49mg,0.233mmol）和4-二甲基氨基哌啶（20μl,0.156mmol）。在室温下搅拌反应混合物72小时。蒸发溶剂并利用色谱（DCM/MeOH/NH₄OH8/2/0.2）纯化所获得的粗产物，从而得到15mg标题化合物（48%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.93分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.55(s,1H),7.46(s,1H),7.29(s,1H),4.81(t,J=6.90Hz,2H),2.96-3.04(m,2H),2.79-2.93(m,J=8.18Hz,5H),2.71(t,J=6.59Hz,2H),2.56(s,3H),2.14(s,6H),1.93-2.06(m,J=16.11Hz,3H),1.53-1.68(m,J=14.16Hz,2H),1.04-1.20(m,J=3.17Hz,2H)。C20H29N7OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为416.2227，实测值为416.2234。

实施例268-乙氧基-1-(哌啶-4-基甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R4=Et，X=O，R2=2-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]乙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd77)

Conv.e

向处于DMF（3ml）中的8-乙氧基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（40mg,0.154mmol）的溶液中加入叔丁基-哌啶-4-基甲基溴代氨基甲酸酯（85mg,0.308mmol）和Cs₂CO₃（121mg,0.370mmol）。在70°C下加热混合物并搅拌4小时。用水（10ml）处理冷却的混合物并用乙酸乙酯萃取。用水和盐水洗涤合并的有机相，在Na₂SO₄上干燥并浓缩。通过快速色谱用DCM/EtOAc/EtOH7/2/1洗脱来纯化粗物质，从而得到50mg期望的产物4-{[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]甲基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯（70%），为白色固体。将后一种产物溶解于DCM(2ml)中，并加入处于1,4-二氧杂环己烷（2ml）中的4M HC1。在室温下搅拌溶液1小时，并蒸发至干燥。用二乙醚研磨该固体，过滤并在真空中干燥，从而得到40mg期望的产物（95%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.65分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.65(d,J=11.60Hz,1H),8.51(s,1H),8.31-8.46(m,J=15.38Hz,1H),7.42(br.s.,1H),7.34(s,1H),4.69(d,J=7.20Hz,1H),4.39(q,J=6.96Hz,1H),3.18-3.27(m,2H),2.97-3.04(m,2H),2.74-2.90(m,J=7.93Hz,4H),2.18-2.32(m,J=5.98Hz,1H),1.59-1.70(m,J=11.84Hz,2H),1.40-1.53(m,J=4.03Hz,2H),1.38(t,J=7.02Hz,3H)。C18H24N6O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为357.2033，实测值为357.2041。

根据相同的方法进行操作制备了以下的化合物：

1-[3-(二甲基氨基)丙基]-8-乙氧基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R4=Et，X=O，R2=3-(二甲基氨基)丙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd78)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.63分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.49(s,1H),7.44(s,1H),7.29(br.s.,1H),4.67-4.78(m,2H),4.39(q,J=7.08Hz,2H),2.93-3.05(m,2H),2.81-2.93(m,2H),2.32-2.42(m,J=1.92,1.92,3.72Hz,2H),2.19(br.s.,6H),1.902.07(m,2H),1.36(t,J=7.02Hz,3H)。C17H24N6O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为345.2033，实测值为345.203；和

8-乙氧基-1-(哌啶-4-基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R4=Et，X=O，R2=哌啶-4-基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd79)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.59分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.57-8.95(m,2H),8.52(s,1H),7.39(br.s.,2H),5.58(quin,J=7.23Hz,1H),4.36-4.45(m,2H),2.96-3.02(m,3H),2.82-2.89(m,J=8.18Hz,2H),1.37(t,J=7.02Hz,3H)。C17H22N6O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为343.1877，实测值为343.1876。

实施例278-乙氧基-1-[(1-甲基哌啶-4-基)甲基]-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R4=Et，X=O，R2=(1-甲基哌啶-4-基)甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd80)

Conv.n

向处于DMF（3ml）中的8-乙氧基-1-(哌啶-4-基甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐（30mg，0.084mmol）的溶液中加入1ml甲醛（37%，处于水中，12.3mmol）和三乙氧基硼氢化钠（71mg,0.33mmol）。在室温下搅拌反应混合物4小时。用水稀释该混合物并用乙酸乙酯萃取，用水和盐水洗涤有机层，在Na₂SO₄上干燥，过滤并浓缩至干燥。在二氧化硅上层析粗产物混合物（用DCM/EtOAc/EtOH7/2/1洗脱），从而得到20mg期望的产物（64%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.7分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.49(s,1H),7.43(s,1H),7.30(br.s.,1H),4.65(d,J=7.45Hz,1H),4.38(q,J=7.08Hz,2H),2.97-3.04(m,2H),2.83-2.90(m,2H),2.79(br.s.,1H),2.18(br.s.,2H),1.86-2.03(m,2H),1.44-1.53(m,2H),1.34-1.39(m,3H),1.29(d,J=4.03Hz,2H)。C19H26N6O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为371.219，实测值为371.2191。

制备K：4-[(3-氨甲酰基-8-碘-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯[(XIV)]

st.7

向处于DMF（3ml）中的50mg8-碘-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（根据WO2008074788A1中记载的方法制备）（0.146mmol）的溶液中加入61mg的4-(溴甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（0.219mmol）和95mg的Cs₂CO₃（0.293mmol）。在70°C下加热混合物并搅拌4小时。用水（10ml）处理冷却的混合物并用乙酸乙酯萃取。用水和盐水洗涤有机相，在Na₂SO₄上干燥并浓缩。通过快速色谱用DCM/EtOH9/1洗脱来纯化粗物质，从而得到63mg期望的标题产物（80%），为白色固体。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt6.51分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.46(s,1H),7.47(s,1H),7.32(s,1H),4.50-4.55(m,2H),3.84-3.96(m,2H),2.99-3.07(m,2H),2.84-2.95(m,2H),2.59-2.75(m,2H),2.07(s,1H),1.56(br.s.,2H),1.39(s,9H),1.08-1.22(m,2H)。C21H27IN6O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为539.1262，实测值为539.1274。

以类似于上文所述的方式进行操作，制备了以下的化合物：

1-{3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙基}-8-碘-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯和2-{3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙基}-8-碘-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯。LC/MS(m/z):528.0[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt6.43分钟。

实施例288-(2,6-二氟苯基)-1-(哌啶-4-基甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=2,6-二氟苯基，R2=哌啶-4-基甲基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd81)

st.8

在氩气氛下，向处于3ml的1,4-二氧杂环己烷和1ml水中的4-[(3-氨甲酰基-8-碘-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯（30mg，0.036mmol）的溶液中顺序地加入17.6mg的2,6-二氟苯基硼酸（0.11mmol）、13.7mg的1,1'-双(二苯基膦)二茂铁钯与二氯甲烷的络合物（0.017mmol）和54mg的碳酸铯（0.167mmol）。使混合物在密封瓶中在80°C下经历微波辐照1小时。通过赛利特硅藻土垫过滤反应并蒸发溶剂至干燥。然后将粗产物分配在乙酸乙酯和水之间，在硫酸钠上干燥有机层并在真空中除去溶剂。在通过快速色谱在硅胶柱（DCM/EtOAc7/3）上纯化之后，得到20mg的4-{[3-氨甲酰基-8-(2,6-二氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯（70%）。将产物溶解于DCM（2ml）中并加入处于1,4-二氧杂环己烷（2ml）中的4M HCl。在室温下搅拌反应1小时，蒸发溶剂至干燥。用乙酸乙酯处理固体并通过过滤收集沉淀物，从而得到17mg标题化合物（85%），为浅黄色固体。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.14分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.89(s,1H),8.57(d,J=9.76Hz,1H),8.30(d,J=10.01Hz,1H),7.55-7.69(m,1H),7.45(s,1H),7.37(s,1H),7.23-7.33(m,2H),4.57-4.66(m,2H),3.16-3.26(m,2H),3.01-3.14(m,4H),2.69-2.85(m,J=10.74Hz,2H),2.09-2.29(m,J=7.20Hz,1H),1.56-1.70(m,J=12.94Hz,2H),1.32-1.48(m,2H)。C21H27IN6O3[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为425.1896，实测值为425.1896。

以类似于上文所述的方式进行操作，制备了以下的化合物：

8-(2,6-二氟苯基)-1-(2-氟乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=2,6-二氟苯基，R2=2-氟乙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.31分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.89(s,1H),7.61(tt,J=6.44,8.45Hz,1H),7.53(br.S.,1H),7.35(s,1H),7.19-7.32(m,2H),4.96-5.11(m,2H),4.74-4.96(m,2H),2.98-3.18(m,4H)。C18H14F3N5O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为374.1223，实测值为374.1225.

制备L：8-(4-氟苯基)-1-三苯甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=4-氟苯基，R2=三苯甲基，A=-(CH₂)₂-]

向处于甲苯（10ml）中的500mg8-碘-1-三苯甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（0.82mmol）（根据WO2008074788A1中记载的方法制备）的溶液中加入溶解于水（0.5ml）中的228mg的4-氟苯硼酸（1.63mmol）、103mg氯化锂（2.46mmol）、339.8mg碳酸钾（2.46mmol）。用氩气将反应脱气，然后加入22mg双(三苯基膦)合钯(II)二氯化物（0.041mmol，5%mol），并在100°C下加热反应60分钟。LC/MS分析表明起始材料完全转化为产物。将反应冷却至室温，然后在真空中浓缩并与硅胶融合。通过快速色谱用DCM/EtOH10/0.5洗脱来纯化粗产物，从而得到380mg期望的产物（80%）。LC/MS(m/z):581.2[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt9.02。

以类似于上文所述的方式进行操作，制备了以下的化合物：

8-(4-甲氧基苯基)-1-三苯甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=4-甲氧基苯基，R2=三苯甲基，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(m/z):593.2[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt8.91分钟。

1-{3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙基}-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=4-氟苯基，R2=3-(叔丁氧基羰基)氨基丙基，A=-(CH₂)₂-]

和

2-{3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙基}-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯[(VIII)，R1=4-氟苯基，R2=3-(叔丁氧基羰基)氨基丙基，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(m/z):496.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt7.87分钟。

制备M：8-(4-氟苯基)-1-三苯甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸[(XI)，R1=4-氟苯基，R2=三苯甲基，A=-(CH₂)₂-]

向处于乙醇（20ml）中的380mg8-(4-氟苯基)-1-三苯甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（0.65mmol）的溶液中加入3ml2NNaOH水溶液（6mmol）。将混合物加热至80°C，持续30分钟。当冷却至室温时，在真空中除去挥发物。用水和乙酸pH=4稀释残余物，然后过滤所形成的沉淀物并用乙醇洗涤。在烘箱（40°C，真空）中干燥固体2小时。360mg（99%）。LC/MS(m/z):553.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt5.84。

以类似于上文所述的方式进行操作，制备了以下的化合物：

8-(4-甲氧基苯基)-1-三苯甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸[(XI)，R1=4-甲氧基苯基，R2=三苯甲基，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(m/z):565.2[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt6.03；

1-{3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙基}-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸[(XI)，R1=4-氟苯基，R2=3-(叔丁氧基羰基)氨基丙基，A=-(CH₂)₂-]；和

2-{3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙基}-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸[(XI),XI R1=4-氟苯基，R2=3-(叔丁氧基羰基)氨基丙基，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(m/z):468.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt4.27分钟（主要产物）和4.55分钟（次要产物）。

实施例298-(4-氟苯基)-N-(3-羟基丙基)-1-三苯甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=4-氟苯基，R2=三苯甲基，R'=3-羟基丙基，A=-(CH₂)₂-]

在室温下，在干燥DMF中使358mg的8-(4-氟苯基)-1-三苯甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸（0.65mmol）与0.060ml丙醇胺（0.78mmol）、250mg的TBTU（0.78mmol）和0.268ml的DIPEA（1.5mmol）反应3小时。用水、饱和NaHCO₃对反应进行后处理（work up），并用乙酸乙酯萃取。在Na₂SO₄上干燥有机相，过滤并蒸发，在二氧化硅上用乙酸乙酯/己烷7/3纯化，从而得到300mg澄清（clean）产物（75%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt8.08分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.52(s,1H),7.34(t,J=5.73Hz,1H),6.93-6.99(m,2H),4.52(t,J=5.00Hz,1H),3.43-3.50(m,2H),3.25-3.32(m,2H),3.10(d,J=8.05Hz,2H),2.78(t,J=7.44Hz,2H),1.61(quin,J=6.40Hz,2H)。C38H32FN5O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为610.2613，实测值为610.262。

以类似于上文所述的方式进行操作，制备了以下的化合物：

N-(3-羟基丙基)-8-(4-甲氧基苯基)-1-三苯甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=4-甲氧基苯基，R2=三苯甲基，R'=3-羟基丙基，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(m/z):622.2[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt7.07分钟。

实施例308-(4-氟苯基)-N-(3-羟基丙基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=4-氟苯基，R2=H，R'=3-羟基丙基，A=-(CH₂)₂-]

将300mg的8-(4-氟苯基)-N-(3-羟基丙基)-1-三苯甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.5mmol）溶解于DCM中，并在室温下与2ml三氟乙酸反应。将反应蒸发至干燥，并用MeOH和饱和NaHCO₃处理30分钟。之后，蒸发掉MeOH，用NaH₂PO₃将水相酸化至pH=5.0，并用DCM萃取。在硅胶上用乙酸乙酯纯化干燥的粗产物。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.29分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ14.20(s,1H),8.77(s,1H),8.52-8.59(m,2H),8.23(t,J=5.74Hz,1H),7.35-7.43(m,2H),4.51(t,J=5.25Hz,2H),3.48(q,J=6.18Hz,2H),3.06-3.11(m,2H),3.00-3.06(m,2H),1.60-1.76(m,2H)。C19H18FN5O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为368.1518，实测值为368.153。

以类似于上文所述的方式进行操作，制备了以下的化合物：

N-(3-羟基丙基)-8-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I),R1=4-甲氧基苯基，R2=三苯甲基，R'=3-羟基丙基，A=-(CH₂)₂-]。LC/MS(m/z):380.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt4.41分钟。

实施例31{3-[3-氨甲酰基-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]丙基}氨基甲酸叔丁酯[(I)，R1=4-氟苯基，N₁R2=叔丁基3-氨甲酰基丙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-]

和

{3-[3-氨甲酰基-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-2-基]丙基}氨基甲酸叔丁酯[(I)，R1=4-氟苯基，N₂R2=叔丁基3-氨甲酰基丙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-]

在室温下，在干燥DMF（5ml）中使358mg1-{3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙基}-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸和2-{3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙基}-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸（0.65mmol）与147mg HOBt*NH₄（0.975mmol）、250mgTBTU（0.78mmol）和0.268ml DIPEA（1.5mmol）反应3小时。用水和饱和NaHCO₃对反应进行后处理（work up），并用乙酸乙酯萃取。在Na₂SO₄上干燥有机相，过滤并蒸发，用乙酸乙酯/己烷7/3在二氧化硅上纯化，从而得到212mg区域异构体的纯净混合物（70%）。LC/MS(m/z):467.2[M+H]⁺和467.2[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt5.62和6.12分钟。

实施例321-(3-氨基丙基)-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=4-氟苯基，N₁R2=3-氨基丙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd82)

和

2-(3-氨基丙基)-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-2H吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=4-氟代苯基，N₂R2=3-氨基丙基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd83)

将{3-[3-氨甲酰基-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]丙基}氨基甲酸叔丁酯和{3-[3-氨甲酰基-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-2-基]丙基}氨基甲酸叔丁酯悬浮于DCM中并在60°C下与2ml的TFA反应。反应在90分钟内完成，蒸发。通过制备型-HPLC方法2纯化粗产物并拆分两种区域异构体：

1-(3-氨基丙基)-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯（主要产物）LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.32分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.83(s,1H),8.43(dd,J=5.68,8.97Hz,2H),7.64(br.s.,3H),7.48(br.s.,1H),7.40(br.s.,1H),7.38(t,J=8.85Hz,2H),4.93(t,J=6.47Hz,2H),3.05-3.13(m,2H),3.01(t,J=7.20Hz,2H),2.82-2.91(m,2H),2.25(quin,J=7.20Hz,2H)。C19H19FN6O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为367.1677，实测值为367.16785；和

2-(3-氨基丙基)-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-2H吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯（次要产物）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.14分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.78(s,1H),8.46(dd,J=5.68,8.97Hz,2H),7.92(br.s.,1H),7.78(br.s.,1H),7.74(br.s.,3H),7.37(t,J=8.91Hz,2H),4.53(t,J=6.84Hz,2H),2.93-3.05(m,4H),2.81-2.92(m,2H),2.16(quin,J=7.26Hz,2H)。C19H19FN6O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为367.1677，实测值为367.16784。

根据这种相同的方法，但是采用适合的取代衍生物，制备了以下的化合物：

1-(3-氨基丙基)-N-(3-羟基丙基)-8-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I),R1=4-甲氧基苯基，R2=3-氨基丙基，R'=3-羟基丙基，A=-(CH₂)₂-](cpd84)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt=3.52分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.79(s,1H),8.32-8.37(m,2H),8.11(t,J=5.86Hz,1H),7.67(br.s.,3H),7.06-7.14(m,2H),4.94(t,J=6.53Hz,2H),3.86(s,3H),3.49(t,J=6.23Hz,2H),3.31(br.s.,2H),3.03-3.13(m,2H),3.00(d,J=7.81Hz,2H),2.81-2.92(m,2H),2.26(d,J=2.56Hz,2H),1.69(quin,J=6.56Hz,2H)。质量计算值：437.2296，质量实测值：437.2291。

制备N：1-(3-氨基丙基)-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸三氟乙酸酯和2-(3-氨基丙基)-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸三氟乙酸酯

将165mg1-{3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙基}-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸和2-{3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙基}-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸（0.35mmol）的混合物悬浮于DCM中，并在60°C下与2ml的TFA反应。反应在90分钟内完成，蒸发。通过制备型-HPLC方法2纯化粗产物并以两种区域异构体的混合物形式递送。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.2分钟，两种区域异构体的保留时间相同。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.83(s,1H,次要产物),8.71(s,1H,主要产物),8.41-8.51(m,2H),8.34(br.s.,3H),7.26-7.42(m,2H),4.96(m,2H,次要产物),4.70-4.77(m,2H,主要产物),2.96-3.02(m,2H),2.88-2.95(m,2H),2.61(t,J=5.92Hz,2H),2.11-2.21(m,2H)。C19H18FN5O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为368.1518，实测值为368.153。

实施例331-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=叔丁基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd85)

和

6-氨基-1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=叔丁基，R3=NH₂，R5=NH₂，A=-CH=CH-](cpd86)

将1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（170mg，0.494mmol）悬浮于4ml无水THF中，并加入氯化铵（80mg，1.48mmol）。将反应混合物冷却至0°C并加入处于THF（3ml,3mmol）中的1M LiN(TMS)₂；搅拌反应2小时。然后蒸发溶剂至干燥，将残余物悬浮于水中并过滤。经由硅胶柱色谱用DCM/MeOH97/3洗脱来纯化粗产物，从而得到100mg的1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺,（产率为65%），和10mg的6-氨基-1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（6%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt6.07分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ9.49(s,1H),8.42(d,J=8.54Hz,1H),7.80(d,J=8.79Hz,1H),7.75(br.s.,1H),7.53(br.s.,1H),2.74(s,3H),2.00(s,9H)。C15H17N5OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为316.1227，实测值为316.1224。

6-氨基-1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[R1=Me-S-，R2=叔丁基，R3=NH₂，R5=NH₂，A=-CH=CH-]。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.08分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.16(d,J=8.79Hz,1H),7.91(d,J=8.79Hz,1H),7.84(br.s.,2H),7.62(br.s.,1H),7.42(br.s.,1H),2.61(s,3H),1.98(s,9H)。C15H18N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为331.1336，实测值为331.1340

以类似方式进行操作，制备了以下的化合物：

1-甲基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I),R1=Me-S-，R2=Me，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd87)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.96分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.46(s,1H),8.26(d,J=8.67Hz,1H),7.85(br.s.,1H),7.73(d,J=8.79Hz,1H),7.52(br.s.,1H),4.71(s,3H),2.73(s,3H)。C12H11N5OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为274.0757，实测值为274.0757；

6-氨基-1-甲基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I),R1=Me-S-，R2=Me，R3=NH₂，R5=NH₂，A=-CH=CH-](cpd88)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.59。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.00(d,J=8.91Hz,1H),7.85(br.s.,1H),7.83(d,J=8.91Hz,1H),7.74(br.s.,1H),7.42(br.s.,1H),4.65(s,3H),2.59(s,3H)。C12H12N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为289.0866，实测值为289.0859；

1-叔丁基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Η，R2=叔丁基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd3)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.63分钟。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.71(s,1H),9.53(s,1H),8.55(d,J=8.79Hz,1H),7.89(d,J=8.78Hz,1H),7.80(br.s.,1H),7.58(br.s.,1H),2.01(s,9H)。C14H15N5O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为270.1350，实测值为270.1357；和

6-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Η，R2=叔丁基，R3=NH₂，R5=NH₂，A CH=CH-](cpd122)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.29分钟。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.65(s,1H),8.30(d,J=9.06Hz,1H),8.12(br.s.,1H),8.02(d,J=8.79Hz,1H),7.70(br.s.,1H),7.46-7.52(m,1H),1.98(s,9H)。C14H16N6O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为285.1459，实测值为285.1466。

实施例341-叔丁基-N-羟基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=叔丁基，R3=N(H)OH，A=-CH=CH-](cpd89)

在室温下，在干燥DMF（2ml）中使40mg1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸（0.112mmol）与25mg O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟胺（0.21mmol）、70mg TBTU（0.21mmol）和0.110ml DIPEA（1.19mmol）反应3小时。用水和饱和NaHCO₃对反应进行后处理（workup），并用乙酸乙酯萃取。在Na₂SO₄上干燥有机相，过滤并蒸发，在二氧化硅上用DCM/EtOAc7/3纯化，从而得到23mg的1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（50%）。LC/MS(m/z):416.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt6.94分钟。

将1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺溶解于甲醇（2ml）中，并加入处于二氧杂环己烷（2ml）中的4M HC1。在室温下搅拌溶液2小时，之后在真空中除去挥发物。首先通过硅胶用DCM/MeOH6/1洗脱来纯化粗产物，从而获得期望才产物，使其经历制备型HPLC纯化方法1，从而得到5mg标题产物（30%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.95分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ11.16(s,1H),9.49(s,1H),9.15(br.s.,1H),8.33(d,J=8.67Hz,1H),7.80(d,J=8.67Hz,1H),2.73(s,3H),1.99(s,9H)。C15H17N5O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为332.1176，实测值为332.1185。

实施例358-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=H，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd90)

将8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-羧酸乙酯（210mg，0.76mmol）悬浮于4ml无水THF中，并加入氯化铵（120mg，2.28mmol）。将反应混合物冷却至0°C，并向该反应中加入处于THF（8ml,8.0mmol）中的1M LiN(TMS)₂并搅拌2小时。然后蒸发除去溶剂至干燥，用DCM提取（take up）残余物并用水和盐水洗涤。在Na₂SO₄上干燥有机层，过滤并在真空下蒸发。经由硅胶柱色谱用DCM/MeOH9/1洗脱来纯化粗产物，从而得到180mg标题化合物（产率为86%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.46分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.48(s,1H),8.24(d,J=8.79Hz,1H),7.91(br.s.,1H),7.71(d,J=8.67Hz,1H),7.49(s,1H),2.75(s,3H)。C11H9N5OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为260.0601，实测值为260.0598

实施例364-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯[(I)，R1=Me-S-，R2=4-哌啶羧酸叔丁酯，R3=NH₂，A=-CH=CH-]

在80°C下使处于DMF（5ml）中的150mg8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.58mmol）的溶液、205mg4-溴代哌啶-1-羧酸叔丁酯（1.16mmol）和377mg碳酸铯（1.16mmol）反应18小时。在室温下冷却混合物并将其分配在乙酸乙酯和水之间。用盐水洗涤有机相，在Na₂SO₄上干燥并蒸发。通过柱色谱用DCM/EtOAc/EtOH6/4/0.5洗脱来纯化粗产物，从而得到200mg期望的化合物（78%），为白色固体。LC/MS(m/z):443.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法4Rt2.53。

以类似方式进行操作，制备了以下的化合物：

4-(3-氨甲酰基-8-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。LC/MS(m/z):427.2[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt5.61。

实施例378-(甲基硫烷基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐_[(I)，R1=Me-S-，R2=哌啶-4-基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd91)

将4-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯溶解于1,4-二氧杂环己烷（2ml）中，并加入处于1,4-二氧杂环己烷（3ml）中的4M HC1。在室温下搅拌溶液1小时。在真空中除去挥发物并用二乙醚研磨残余物，过滤并在真空下在烘箱（40°C）中干燥2小时，从而获得25mg标题化合物（99%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.73分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.50(s,1H),8.85(br.s.,1H),8.64-8.78(m,1H),8.29(d,J=8.67Hz,1H),7.73-7.82(m,2H),7.64(s,1H),6.16(quin,J=7.05Hz,1H),3.52-3.61(m,J=13.06Hz,2H),3.08-3.21(m,2H),2.75(s,3H),2.37-2.47(m,4H)。C16H18N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为343.1336，实测值为343.1326。

8-(甲基硫烷基)-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=Me-S-，R2=哌啶-3-基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd92)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.86分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.41-9.59(m,1H),9.27(br.s.,1H),8.43(br.s.,1H),8.20-8.38(m,2H),7.75-7.84(m,1H),7.69(s,1H),6.30(t,J=4.88Hz,1H),3.90(d,J=12.33Hz,2H),3.78(d,J=4.52Hz,2H),2.74(br.s.,3H),2.27-2.42(m,3H),2.14(dd,J=5.61,14.16Hz,2H),1.78(d,J=5.37Hz,2H)。C16H18N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为343.1336，实测值为343.1329；

1-(4-氨基环己基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=Me-S-，R2=4-氨基环己基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd93)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.05分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.48(s,1H),8.28(d,J=8.67Hz,1H),8.00(br.s.,3H),7.76(d,J=8.79Hz,1H),7.72(s,1H),7.64(s,1H),6.18(br.s.,1H),2.69(s,3H),2.25-2.37(m,2H),2.06-2.19(m,4H),1.79-1.95(m,2H)。C17H20N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为357.1492，实测值为357.1491；

8-(甲基硫烷基)-1-(哌啶-3-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=-S-，R2=哌啶-3-基甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd94)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.94分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ1H9.50(s,1H),8.63(d,J=10.99Hz,1H),8.34-8.40(m,1H),8.30(d,J=8.67Hz,1H),7.80(s,1H),7.78(d,J=8.79Hz,1H),7.63(s,1H),5.01-5.19(m,2H),3.20(d,J=13.79Hz,2H),3.02(d,J=12.45Hz,1H),2.76-2.88(m,2H),2.74(s,3H),2.55-2.66(m,1H),1.67-1.85(m,2H),1.31-1.64(m,2H)。C17H20N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为357.1492，实测值为357.1489；

1-(氮杂环庚烷-4-基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=Me-S-，R2=氮杂环庚烷-4-基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd95)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.94分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ9.49(m,1H),8.87(br.s.,2H),8.28(d,J=8.79Hz,1H),7.83(s,1H),7.76(d,J=8.79Hz,1H),7.63(s,1H),6.05-6.59(m,1H),3.46-3.66(m,2H),3.10-3.24(m,1H),2.72(s,3H),2.53-2.59(m,2H),2.39-2.46(m,1H),2.25-2.35(m,1H),2.04-2.17(m,1H),1.75-1.95(m,1H)。C17H20N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为357.1492，实测值为357.1509；

1-(3-氨基-2,2-二甲基丙基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I),R1=Me-S-，R2=3-氨基-2,2-二甲基丙基，R3=NH₂,A=-CH=CH-](cpd96)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.08分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.50(s,1H),8.32(d,J=8.67Hz,1H),7.99(br.s.,3H),7.94(s,1H),7.78(d,J=8.79Hz,1H),7.71(s,1H),5.29(s,2H),2.89(q,J=6.43Hz,1H),2.75(s,3H),1.02(s,6H)。C16H20N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为345.1492，实测值为345.1502；

8-甲氧基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=Me-O-，R2=哌啶-4-基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd97)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.43分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.55(s,1H),8.65-8.79(m,1H),8.68(br.s.,1H),8.45-8.58(m,1H),8.53(br.s.,1H),8.22(d,J=8.67Hz,1H),7.79(d,J=8.79Hz,1H),7.75(s,1H),7.62(s,1H),6.10(quind,J=4.66,9.67Hz,1H),4.16(s,3H),3.51-3.65(m,J=12.45Hz,1H),3.18-3.26(m,2H),2.37-2.46(m,4H)。C16H18N6O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为327.1564，实测值为327.15575；和

8-甲氧基-1-(哌啶-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=Me-O-，R2=哌啶-4-基甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd98)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.54分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.53(s,1H),8.72-8.89(m,1H),8.57-8.70(m,J=9.52Hz,1H),8.21(d,J=8.67Hz,1H),7.80(br.s.,1H),7.77(d,J=8.79Hz,1H),7.57(s,1H),5.09(d,J=7.32Hz,2H),4.16(s,3H),3.18-3.26(m,J=12.69Hz,2H),2.72-2.89(m,2H),2.40-2.47(m,1H),1.50-1.68(m,4H)。C17H20N6O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为341.1721，实测值为341.1721。

实施例381-[(3-外型（exo）)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I),R1=Me-S-，R2=8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd99)

在90°C下使处于DMF(8ml)中的50mg8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.193mmol）与200mg3-[(甲基磺酰基)氧基]-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-羧酸2,2,2-三氯乙基酯（0.52mmol）和140mg碳酸铯（0.43mmol）反应4小时。在室温下冷却混合物并将其分配于乙酸乙酯和水之间。用盐水洗涤有机相，在Na₂SO₄上干燥并蒸发。通过柱色谱用DCM/EtOH9/1洗脱来纯化粗产物，从而得到73mg的3-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-羧酸2,2,2-三氯乙基酯（70%），为灰白色固体。将该化合物（134mmol）溶解于THF（5ml）中，并加入乙酸（5ml）和锌粉35mg（0.536mmol）。将混合物加热至50°C并搅拌18小时。在真空中除去挥发物，并通过色谱用DCM/MeOH95/5洗脱来纯化残余物。需要进行进一步纯化并通过制备型HPLC1方法1来进行，从而获得25mg标题化合物（50%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.08分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.50(s,1H),8.25(d,J=8.67Hz,1H),7.62-7.79(m,3H),7.52-7.60(m,1H),6.21-6.54(m,OH),3.68(br.s.,2H),2.76(s,2H),2.22-2.36(m,2H),2.02(br.s.,2H),1.78-1.98(m,5H)。C18H20N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为369.1492，实测值为369.15。

以类似的方式进行操作，获得了以下的化合物：

1-[(3-内型（endo）)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=Me-S-，R2=8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd100)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.0分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.49(s,1H),8.66(br.s.,1H),8.32(d,J=8.79Hz,1H),7.85(s,1H),7.79(d,J=8.79Hz,1H),7.63(s,1H),6.07(t,J=8.12Hz,1H),4.07(br.s.,2H),2.81(ddd,J=4.09,8.03,16.20Hz,2H),2.72(s,3H),2.63(d,J=16.36Hz,2H),2.05-2.19(m,2H),1.79-1.94(m,2H)。C18H20N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为369.1492，实测值为369.1484。

实施例391-[4-(1,3-二氧-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)丁-2-基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=4-(1,3-二氧-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)丁-2-基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd101)

在80°C下使处于DMF（3ml）中的50mg8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.193mmol）与108mg2-(4-溴-3-甲基丁基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮（0.38mmol）和132mg碳酸铯（0.38mmol）反应3小时。在室温下冷却混合物并将其分配于乙酸乙酯和水之间。用盐水洗涤有机相，在Na₂SO₄上干燥并蒸发。通过柱色谱用DCM/EtOH9/1洗脱来纯化粗产物，从而得到57mg期望的化合物（65%），为浅黄色固体。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt6.01分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.38(s,1H),8.21(d,J=8.67Hz,1H),7.71-7.76(m,2H),7.69(d,J=8.79Hz,1H),7.53-7.60(m,2H),6.29-6.45(m,1H),3.41-3.58(m,2H),2.72(dt,J=5.25,9.70Hz,1H),2.45(d,J=7.57Hz,1H),2.41(s,3H),1.59(d,J=6.59Hz,3H)。C23H20N6O3S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为461.1391，实测值为461.1412。

实施例401-(4-氨基丁烷-2-基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=4-氨基丁烷-2-基，R3=NH₂，A=-CH=C-](cpd102)

向处于THF（5ml）中的45mg1-[4-(1,3-二氧-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)丁烷-2-基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.097mmol）的溶液中加入处于THF（5ml）中的1M肼。在50°C下搅拌该混合物3小时。将混合物冷却至室温并过滤，在真空下除去挥发物，使粗产物经历制备型HPLC方法1，从而得到20mg标题产物（60%）。LC/MS(254nm)HPLC方法x Rt3.9分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.50(s,1H),8.29(d,J=8.67Hz,1H),7.81(s,1H),7.77(d,J=8.79Hz,1H),7.62(d,J=10.25Hz,2H),6.23(br.s.,1H),2.87(td,J=5.66,11.50Hz,1H),2.71(s,3H),2.61(dt,J=6.41,11.81Hz,1H),2.14-2.30(m,1H),1.66(d,J=6.59Hz,3H)。C15H18N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为331.1336，实测值为331.134。

实施例411-(1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺_[(I)，R1=Me-S-，R2=氮杂二环[2.2.2]辛-3-基，R3=NH₂，A=-CH=C-](cpd103)

向处于DMF（3ml）中的64mg的8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.247mmol）的溶液中加入300mg的1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基-4-甲基苯磺酸酯（根据Tetrahedron.Lett.200041271-274中所述的方法制备）（1.06mmol）和55mg叔丁醇钾（0.494mmol）。将混合物加热至100°C并搅拌4小时。在室温下冷却该反应混合物并将其分配于乙酸乙酯和水之间。用盐水洗涤有机相，在Na₂SO₄上干燥并蒸发。通过柱色谱用DCM/MeOH/NH₄OH9/1/0.5洗脱来纯化粗产物，从而得到14mg期望产物（15%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.73分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.46(s,1H),8.17-8.41(m,1H),7.87-8.00(m,1H),7.68-7.80(m,1H),7.54(s,1H),5.94-6.38(m,1H),4.01(dd,J=4.09,13.98Hz,1H),3.37-3.48(m,1H),2.75-2.95(m,3H),2.73(s,3H),2.20-2.29(m,1H),1.80-1.95(m,1H),1.75(ddd,J=4.76,8.48,13.12Hz,1H),1.34-1.47(m,1H),1.20-1.35(m,1H)。C18H20N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为369.1492，实测值为369.1508。

实施例428-(甲基硫烷基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺_[(I)，R1=Me-S-，R2=四氢-2H-吡喃-4-基，R3=NH₂，A=-CH=-](cpd104)

向处于DMF（3ml）中的30mg的8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.247mmol）的溶液中加入62mg四氢-2H-吡喃-4-基甲磺酸酯（根据US2003/6653489制备）（0.34mmol）和87mg碳酸铯（0.266mmol）。将混合物加热至80°C并搅拌4小时。将该反应混合物冷却至室温并将其分配于乙酸乙酯和水之间。用盐水洗涤有机相，在Na₂SO₄上干燥并蒸发。通过柱色谱用DCM/MeOH/NH₄OH9/1/0.5洗脱来纯化粗产物，从而得到32mg期望的产物（38%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.41分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.47(s,1H),8.28(d,J=8.67Hz,1H),7.84(br.s.,1H),7.75(d,J=8.79Hz,1H),7.54(s,1H),6.25(tt,J=4.32,11.37Hz,1H),4.11(dd,J=4.15,11.47Hz,1H),3.48-3.65(m,1H),2.75(s,3H),2.23-2.40(m,2H),2.13(dd,J=2.38,12.39Hz,2H)。C16H17N5O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为344.1176，实测值为344.1166。

实施例433-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]环丁烷羧酸甲酯[(I)，R1=Me-S-，R2=3-环丁烷羧酸甲酯，R3=NH₂，A=-C=CH-]

向处于DMF（5ml）中的100mg的8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.38mmol）的溶液中加入200mg2-甲基-4-[(甲基磺酰基)氧基]戊酸甲酯（根据WO2009/71509A1中描述的方法制备）（0.89mmol）和191mg碳酸铯（0.55mmol）。在90°C下加热混合物18小时。在室温下冷却混合物并将其分配于乙酸乙酯和水之间。用盐水洗涤有机相，在Na₂SO₄上干燥并蒸发，通过柱色谱用DCM/EtOH9/1洗脱来纯化粗产物，从而得到100mg的期望化合物（70%），为白色固体。产物含有顺式和反式异构体的混合物。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.55分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.44-9.51(m,1H),8.26(dd,J=1.89,8.73Hz,1H),7.87-8.02(m,1H),7.72-7.77(m,1H),7.58(br.s.,1H),6.24-6.93(m,1H),3.66-3.76(m,3H),3.29(s,3H),3.04-3.25(m,2H),2.79-3.02(m,3H)。C17H17N503S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为372.1125，实测值为372.1119。

以类似的方式进行操作，获得了以下的化合物：

2-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]-2-甲基丙酸甲酯。LC/MS(m/z):360.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt4.75

实施例44

1-[反式-3-(羟基甲基)环丁基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=反式-3-(羟基甲基)环丁基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd105)

和

1-[顺式-3-(羟基甲基)环丁基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I),R1=Me-S-，R2=顺式-3-(羟基甲基)环丁基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd106)

Conv.i

向处于乙醇（5ml)中的70mg的3-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]环丁烷羧酸甲酯（顺式和反式混合物）（0.188mmol）的溶液中小心地加入30mg硼氢化钠（0.75mmol）。在室温下搅拌混合物18小时。在除去溶剂之后，用乙酸乙酯（20ml）、水（10ml）和饱和NH₄Cl水溶液（10ml）提取（take up）残余物。混合多个层并分离。用盐水洗涤有机提取物并在Na₂SO₄上干燥，然后过滤并浓缩。通过柱色谱（DCM/EtOAc/EtOH7/2/1）纯化粗产物，从而得到产物，为灰白色固体，使得该产物经历制备型HPLC以用于顺式/反式异构体拆分；

1-[顺式-3-(羟基甲基)环丁基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.04分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.46(s,1H),8.26(d,J=8.67Hz,1H),7.84(s,1H),7.73(d,J=8.79Hz,1H),7.57(s,1H),6.39(quin,J=8.33Hz,1H),4.55-4.67(m,1H),3.55(d,J=6.10Hz,2H),2.73(s,3H),2.57-2.65(m,J=6.35Hz,1H),2.51-2.54(m,2H),2.31-2.40(m,1H)。C16H17N5O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为344.1176，实测值为344.1167；和

1-[反式-3-(羟基甲基)环丁基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.91分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.39-9.48(m,1H),8.14-8.34(m,1H),7.82-8.00(m,1H),7.73(d,J=8.79Hz,1H),7.56(s,1H),6.64(quin,J=7.78Hz,1H),4.71-4.97(m,1H),3.53-3.75(m,2H),2.82-2.97(m,2H),2.73-2.78(m,3H),2.37-2.47(m,2H)。C16H17N5O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为344.1176，实测值为344.1174。

以类似的方式进行操作，获得了以下的化合物：

1-(1-羟基-2-甲基丙烷-2-基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=1-羟基-2-甲基丙烷-2-基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd107)。LC/MS(m/z):332.08[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法1Rt1.14；和

1-(1-羟基-2-甲基丙烷-2-基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=1-羟基-2-甲基丙烷-2-基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd108)。LC/MS(m/z):334.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法1Rt0.63。

实施例454-(3-氨甲酰基-8-苯基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯_[(I)，R1=苯基，R2=4-哌啶-1-羧酸叔丁酯，R3=NH₂，A=-CH=CH-]

Conv.1

以30mg的4-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯（0.068mmol）、3ml干燥THF、16.5mg苯基硼酸（0.138mmol）、38.7mg噻吩羧酸铜（0.203mmol）和7.8mg Pd(PPh₃)₄（0.007mmol，10mol%）装填干燥的微波处理瓶。随后在微波反应器中在100°C下加热该混合物60分钟。冷却后，用乙酸乙酯稀释该混合物并用25%氨水溶液洗涤。再次用乙酸乙酯萃取水层，在Na₂SO₄上干燥合并的有机相，并在蒸发后通过柱色谱在硅胶（DCM/EtOAc/EtOH,6/4/0.2）上纯化残余物，从而得到29mg标题产物（90%），为白色固体。LC/MS(m/z):473.0[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法4Rt2.95

实施例468-苯基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐_[(I),R1=苯基，R2=哌啶-4-基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd10)

将4-(3-氨甲酰基-8-苯基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯溶解于1,4-二氧杂环己烷（2ml）中，并加入处于1,4-二氧杂环己烷（3ml）中的4M HCl。在室温下搅拌溶液1小时。在真空中除去挥发物并用二乙醚研磨残余物，过滤并在烘箱（40°C）中在真空下干燥2小时，从而得到27mg标题化合物（99%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.47分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.82(s,1H),8.94(br.s.,1H),8.85(br.s.,1H),8.52-8.66(m,2H),8.41(d,J=8.67Hz,1H),7.89(d,J=8.67Hz,1H),7.84(br.s.,1H),7.57-7.73(m,4H),6.16-6.37(m,1H),3.54-3.67(m,2H)。C21H20N6O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为373.1771，实测值为373.1783。

以类似的方式进行操作，获得了以下的化合物：

1-(哌啶-4-基)-8-(噻吩-3-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I),R1=噻吩-3-基，R2=哌啶-4-基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd110)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.32分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),8.69(br.s.,1H),8.64(dd,J=1.10,3.05Hz,1H),8.59(br.s.,1H),8.37(d,J=8.67Hz,1H),8.03(dd,J=0.98,5.00Hz,1H),7.85(d,J=8.79Hz,1H),7.80(s,1H),7.77(dd,J=3.05,5.00Hz,1H),7.65(s,1H),6.11-6.43(m,1H),3.48-3.73(m,J=12.94Hz,2H),3.35-3.42(m,2H)。C19H18N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为379.1336，实测值为379.1332；

1-(4-氨基环己基)-8-苯基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I),R1=苯基，R2=4-氨基环己基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd111)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.91分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.79(s,1H),8.59(dd,J=1.89,7.75Hz,2H),8.40(d,J=8.67Hz,1H),8.04(br.s.,3H),7.86(d,J=8.79Hz,1H),7.73(br.s.,1H),7.69(br.s.,1H),7.56-7.67(m,3H),6.32(quin,J=4.61Hz,1H),2.10-2.46(m,6H),1.85-2.03(m,J=4.52Hz,2H)。C22H22N6O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为387.1928，实测值为387.1929；和

1-(4-氨基环己基)-8-(噻吩-3-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺三氟乙酸酯[(I)，R1=噻吩-3-基，R2=4-氨基环己基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd112)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.73分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ9.71(s,1H),8.51-8.69(m,1H),8.36(d,J=8.67Hz,1H),7.99(d,J=5.13Hz,1H),7.89(br.s.,2H),7.83(d,J=8.79Hz,1H),7.76(dd,J=3.05,5.00Hz,2H),7.58(s,1H),6.27(quin,J=4.61Hz,1H),3.38-3.46(m,J=4.64Hz,1H),2.31-2.42(m,2H),2.20-2.31(m,2H),2.04-2.18(m,2H),1.96(dd,J=5.00,13.06Hz,1H)。C20H20N6OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为393.1492，实测值为393.1481。

实施例474-[3-氨甲酰基-8-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯[(I)，R4=Me，X=SO₂，R2=4-哌啶-1-羧酸叔丁酯，R3=NH₂，A=-CH=CH-]

将100mg的4-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯（0.225mmol）溶解于10ml DCM中。在室温下加入77.3mg的mCPBA（间氯过苯甲酸）（0.448mmol），并在该温度下搅拌60分钟。加入1ml饱和亚硫酸钠水溶液并搅拌30分钟。用盐水洗涤反应混合物，在Na₂SO₄上干燥并在减压下浓缩，从而得到100mg标题化合物（94%），为黄色固体。LC/MS(m/z):475.0[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法4Rt2.01分钟。

实施例481-(哌啶-4-基)-8-(吡咯烷-1-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐_[(I)，R1=吡咯烷-1-基，R2=哌啶-4-基，R3=NH₂，A=-CH=C-](化合物113)

向处于THF（3ml）中的30mg4-[3-氨甲酰基-8-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯（0.063mmol）的溶液中加入70μl吡咯烷（1mmol）。在室温下搅拌溶液1小时并通过LC/MS监控。将反应混合物冷却至室温；过滤分离的固体并用二乙醚洗涤，从而得到15mg4-[3-氨甲酰基-8-(吡咯烷-1-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯（50%）。LC/MS(m/z):475.0[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法4Rt2.01分钟。

将15mg的4-[3-氨甲酰基-8-(吡咯烷-1-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯（0.032mmol）溶解于1,4-二氧杂环己烷（2ml）中并加入处于3ml1,4-二氧杂环己烷（3mmol）中的4M HCl。在室温下搅拌混合物1小时。在真空中除去挥发物，并用二乙醚研磨所获得的残余物，过滤并干燥，从而得到12mg标题化合物（93%）。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.11分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.11-9.31(m,1H),8.89(br.s.,1H),8.57-8.82(m,1H),7.89(d,J=8.67Hz,1H),7.64(br.s.,1H),7.41-7.58(m,2H),5.80-6.23(m,1H),3.69(br.s.,4H),3.50-3.62(m,2H),3.07-3.27(m,2H),2.35-2.45(m,4H),1.94-2.15(m,4H)。C19H23N7O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为366.2037，实测值为366.2047。

以类似的方式进行操作，获得了以下的化合物：

8-(吗啉-4-基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=吡咯烷-1-基，R2=哌啶-4-基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd114)。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.92分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.31(s,1H),8.82(br.s.,1H),8.73(br.s.,1H),7.98(d,J=8.67Hz,1H),7.64-7.73(m,1H),7.51-7.62(m,2H),5.87-6.09(m,1H),3.85-3.91(m,4H),3.72-3.80(m,4H),3.54(d,J=13.43Hz,2H),3.18(d,J=5.86Hz,3H),2.35-2.44(m,4H)。C19H23N7O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为382.1986，实测值为382.2004。

实施例491-{[1-(2-氨基乙基)哌啶-4-基]甲基}-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐_[(I)，R1=Me-S-，R2=1-(2-氨基乙基)哌啶-4-基]甲基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd115)

Conv.n

向处于甲醇（1.5ml）和DMF（1ml）中的26mg的8-(甲基硫烷基)-1-(哌啶-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.073mmol）的溶液中加入13μl乙酸（0.219mmol）、69.6mg(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯（0.438mmol）和28mg NaCNBH₃（0.438mmol）。在室温下搅拌混合物18小时，随后在真空中除去挥发物。用乙酸乙酯溶解残余物并用水分配（portion）；用盐水洗涤有机层，在Na₂SO₄上干燥并浓缩。通过快速色谱（DCM/MeOH95/5）纯化粗产物，从而得到27mg的[2-(4-{[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]甲基}哌啶-1-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯（75%），为白色固体。LC/MS(254)HPLC方法2Rt3.86分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.47(s,1H),8.28(d,J=8.67Hz,1H),7.81(s,1H),7.74(d,J=8.79Hz,1H),7.54(br.s.,1H),6.56(br.s.,1H),5.08(d,J=7.32Hz,2H),2.93-3.05(m,2H),2.76-2.84(m,J=10.25Hz,2H),2.71(s,3H),2.27(br.s.,1H),2.14(br.s.,1H),1.75-1.94(m,2H),1.12-1.49(m,17H)。C24H33N7O3S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为500.2439，实测值为500.2436。

将所获得的[2-(4-{[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]甲基}哌啶-1-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯溶解于处于2ml1,4-二氧杂环己烷中的4M HC1中，在室温下搅拌2小时。之后，在真空下除去挥发物，用二乙醚悬浮残余物并过滤，从而得到14mg期望的产物（90%），为浅黄色固体。LC/MS(254)HPLC方法2Rt3.29分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d6)δ10.78(br.s.,1H),9.49(s,1H),8.30(d,J=8.67Hz,1H),8.12-8.24(m,2H),7.86(s,1H),7.77(d,J=8.79Hz,1H),7.58(s,1H),5.12(d,J=7.32Hz,1H),3.47-3.54(m,2H),3.16-3.28(m,3H),2.85-3.01(m,1H),2.76(s,2H),1.73-1.88(m,2H),1.60-1.71(m,2H)。C19H25N7OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为400.1914，实测值为400.1918。

以类似的方式进行操作，获得了以下的化合物：

1-{4-[(2-氨基乙基)氨基]环己基}-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=Me-S-，R2=4-(2-氨基乙基)氨基环己基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd116)。C19H25N7OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为400.1914，实测值为400.1908；和

1-{4-[(2-氨基乙基)氨基]环己基}-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=Me-S-，R2=4-(2-氨基乙基)氨基环己基，R3=NH₂，A=-(CH₂)₂-](cpd117)。C19H27N7OS[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为402.2071，实测值为402.2074。

实施例501-[4-(甘氨酰基氨基)环己基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐_[(I)，R1=Me-S-，R2=4-(甘氨酰基氨基)环己基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd118)

Conv.o

将30mg的1-(4-氨基环己基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐（0.084mmol）溶解于2ml二甲基乙酰胺中。向所获得的溶液中加入21mg的N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸（0.126mmol）、60μl的DIPEA（0.336mmol）、40mg的TBTU（0.126mmol）。在室温下搅拌该混合物18小时，将溶液分配于乙酸乙酯和饱和NaHCO₃水溶液之间，用盐水洗涤有机层，在Na₂SO₄上干燥并在真空下蒸发。通过硅胶色谱（DCM/MeOH/NH₄OH95/5/0.1）纯化粗产物，从而得到35mg的[2-({4-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]环己基}氨基)-2-氧乙基]氨基甲酸叔丁酯（81%），为白色固体。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.47(s,1H),8.27(d,J=8.67Hz,1H),7.78(d,J=6.35Hz,1H),7.74(d,J=8.67Hz,1H),7.64(br.s.,1H),7.55(br.s.,1H),6.86(t,J=5.86Hz,1H),6.00(br.s.,1H),3.96(d,J=2.56Hz,1H),3.62(d,J=5.61Hz,2H),2.72(s,3H),2.23-2.36(m,2H),1.91-2.11(m,4H),1.68-1.82(m,2H),1.38(s,9H)。

向处于1,4-二氧杂环己烷（1ml）中的20mg[2-({4-[3-氨甲酰基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-1-基]环己基}氨基)-2-氧乙基]氨基甲酸叔丁酯（0.039mmol）的溶液中加入处于1,4-二氧杂环己烷（2ml，8mmol）中的4M HCl。在室温下搅拌混合物2小时。在减压下除去溶剂并用二乙醚稀释粗产物并过滤，从而得到15mg最终的盐酸盐（88%），为黄色固体。LC/MS(254)HPLC方法2Rt3.3分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.48(s,1H),8.46(d,J=6.96Hz,1H),8.27(d,J=8.67Hz,1H),7.93-8.11(m,3H),7.75(d,J=8.79Hz,1H),7.67(br.s.,1H),7.51(br.s.,1H),5.83-6.10(m,1H),3.96-4.12(m,1H),3.56-3.71(m,2H),2.73(s,3H),2.25-2.39(m,2H),2.04-2.15(m,2H),1.89-2.04(m,3H),1.75-1.88(m,2H)。C19H23N7O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为414.1707，实测值为414.1721。

实施例511-{4-[(乙基氨甲酰基)氨基]环己基}-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=乙基氨甲酰基)氨基]环己基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd119)

Conv.p

将30mg的1-(4-氨基环己基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐（0.084mmol）溶解于2ml二甲基甲酰胺中。向所得的溶液中加入32μl的异氰酸乙酯(0.42mmol)、60μl的DIPEA（0.336mmol）。在100°C下搅拌混合物18小时，将溶液分配于乙酸乙酯和饱和NaHCO₃水溶液之间，并用盐水洗涤有机层，在Na₂SO₄上干燥并在真空下蒸发。通过硅胶色谱(DCM/MeOH/NH₄OH95/5/1)纯化粗产物，从而得到4mg的1-{4-[(乙基氨甲酰基)氨基]环己基}-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（11%），为白色固体。LC/MS(254)HPLC方法2Rt4.38分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.47(s,1H),8.27(d,J=8.67Hz,1H),7.74(d,J=8.67Hz,1H),7.59(s,2H),6.06(d,J=7.08Hz,1H),5.89-6.02(m,1H),5.81(t,J=5.49Hz,1H),3.78-3.88(m,1H),3.00-3.07(m,2H),2.71-2.74(m,3H),2.15-2.29(m,2H),1.99-2.11(m,3H),1.90(dd,J=3.54,13.67Hz,2H),1.65-1.79(m,2H),1.01(t,J=7.20Hz,3H)。C20H25N7O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为428.1863，实测值为428.1852。

实施例521-(4-氨基甲酰亚胺酰氨基（carbamimidamidocyclohexyl）环己基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=4-氨基甲酰亚胺酰氨基环己基，R3=NH₂，A=-CH=CH-](cpd120)

Conv.q

将30mg的1-(4-氨基环己基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐（0.084mmol）溶解于2ml二甲基甲酰胺中。向所获得的溶液中加入70mg的3,5-二甲基-1H-吡唑-1-羧基酰亚胺酰胺（carbamimidamide）（0.34mmol）、93μl的TEA（0.67mmol）。在100°C下搅拌混合物48小时，将溶液分配于乙酸乙酯和饱和NaHCO₃水溶液之间，用盐水洗涤有机层，在Na₂SO₄上干燥并在真空下蒸发。通过硅胶色谱（DCM/MeOH/NH₄OH95/5/1）纯化粗产物，从而得到6mg的1-(4-氨基甲酰亚胺酰氨基环己基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（11%），为黄色固体。LC/MS(m/z):399.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt4.1分钟。

实施例531-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-6-(吗啉-4-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺[(I)，R1=Me-S-，R2=叔丁基，R3=NH₂，R5=吗啉-4-基，A=-CH=CH-](cpd121)

向处于无水THF（2ml）中的50mg的1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺（0.158mmol）的溶液中加入137μl吗啉（1.26mmol）、处于THF（4ml,4mmol)中的1M LiN(TMS)₂。在室温下搅拌混合物48小时，然后用冷水稀释并过滤所获得的沉淀物。使粗产物经历HPLC/MS纯化方法1，从而获得5mg期望的产物（8%）。LC/MS(m/z):401.0[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法2Rt6.39分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.20(d,J=8.91Hz,1H),7.67(d,J=8.91Hz,2H),7.44(s,1H),3.75-3.82(m,4H),3.63-3.69(m,4H),2.64(s,3H),1.97(s,9H)。C19H25N6O2S[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为401.1754，实测值为428.1757。

制备O：1-[2-羟基-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]乙酮

在氩气氛中，在带盖的小瓶中混合处于THF（10ml）中的1.0g1-(5-溴-2-羟基苯基)乙酮（4.65mmol）、0.83ml的N-甲基哌嗪（7.45mmol）、16.2ml LiHMDSA（16.2mmol）、68mg Pd₂(dba)₃（0.074mmol）和29.3mg2-二环己基膦-2'-N,N-二甲基氨基二苯基（0.074mmol），并在70°C下搅拌40分钟。在真空中除去挥发物，用水和1N HCl（pH=6）溶解所获得的残余物并用DCM分配。用盐水洗涤有机相，在Na₂SO₄上干燥，过滤并在减压下浓缩。通过快速柱色谱（DCM梯度至10%MeOH/DCM）纯化残余物，从而得到532mg期望产物（51%），为棕色固体。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.34分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ11.45(s,1H),7.21-7.28(m,2H),6.80-6.93(m,1H),2.98-3.10(m,4H),2.63(s,3H),2.44-2.48(m,4H),2.23(s,3H)。C13H18N2O2[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为235.1441，实测值为235.1448。

4-(3-乙酰基-4-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt6.61分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ11.49(s,1H),7.32(d,J=2.93Hz,1H),7.25-7.30(m,1H),6.88(d,J=8.91Hz,1H),3.41-3.52(m,4H),2.95-3.05(m,4H),2.64(s,3H),1.42(s,9H)。C17H24N2O4[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为321.1809，实测值为321.1805；

2-羟基-5-(4-甲基哌嗪-l-基)苄腈。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ10.38(br.s.,1H),7.18(dd,J=3.11,9.09Hz,1H),7.08(d,J=2.93Hz,1H),6.90(d,J=9.15Hz,1H)。C12H15N3O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为218.1288，实测值为218.1287；和

2-氟-4-(4-甲基哌嗪-l-基)苯酚。LC/MS(m/z):211.1[M+H]⁺HPLC(254nm)方法3Rt4.00分钟。

制备P：4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯酚

将2g的4-(哌嗪-l-基)苯酚（11.24mmol）和4.5ml甲醛（37%，处于水中，56mmol）悬浮于THF/AcOH5/1混合物中并在室温下搅拌。30分钟后，分批加入4.7g三乙酰氧基硼氢化钠（22.5mmol）。搅拌反应数小时并蒸发。在硅胶上用处于甲醇中7N的乙酸乙酯/乙醇/NH₃（8/2/0.2）来纯化粗产物，从而得到2.3g粉色固体，为游离碱。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt2.4分钟。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ8.78(s,1H),6.71-6.84(m,2H),6.56-6.69(m,2H),2.85-3.03(m,4H),2.46(br.s.,4H),2.23(s,3H)。C11H16N2O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为193.1336，实测值为193.1328。

以类似的方式操作，制备了以下的化合物：

3-(4-甲基哌嗪-l-基)苯酚。LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt分钟。¹HNMR(401MHz,DMSO-d₆)δ9.07(s,1H),6.96(t,J=8.12Hz,1H),6.34-6.38(m,1H),6.28(t,J=2.32Hz,1H),6.19(ddd,J=0.73,2.20,7.93Hz,1H),3.02-3.09(m,4H),2.41-2.46(m,4H),2.22(s,3H)。C11H16N2O[M+H]⁺的HRMS(ESI)计算值为193.1336，实测值为193.1329。

制备Q

步骤a.乙酸4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基酯的制备

在冰浴中冷却处于DCM中的1.080mg的4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯酚（5.59mmol）和1.72ml TEA（12.3mmol）的混合物，并逐滴加入0.44ml乙酰氯（6.15mmol）。完成后，过滤反应，用水快速萃取有机相，在Na₂SO₄上干燥并蒸发，从而得到浅粉色固体。LC/MS(m/z):235.4[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt1.89分钟。

步骤b.乙酸2-溴-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基酯的制备

在冰浴中冷却处于乙腈中的247mg乙酸4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基酯（1.05mmol）和209mg对甲苯磺酸（1.1mmol）的溶液，并逐滴加入0.056ml溴（1.1mmol）。在室温下搅拌反应直至反应完成（3-4小时），用乙酸乙酯稀释并用水和饱和NaHCO₃萃取。在Na₂SO₄上干燥有机相并蒸发，通过快速色谱（DCM/MeOH85/15）纯化，从而得到产物，为深棕色油。HPLC(254nm)方法2Rt4.05分钟。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm2.25(s,3H)2.36(s,3H)2.39(m,4H)3.44(m,4H)6.50(dd.J=2.1,8.3Hz,1H)7.03(d,J=8.3Hz,l H)7.21(d,J=2.1Hz,l H)。质量计算值：313.0546，质量测量值：313.0538

步骤c.2-溴-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯酚的制备

将280mg乙酸2-溴-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基酯（1.03mmol）溶解于甲醇中，并与2ml的1N NaOH反应。2小时后，用冰醋酸酸化反应，蒸发并在二氧化硅上用处于MeOH中的0.4%7M NH₃中的DCM/MeOH9/1纯化。LC/MS(m/z):273.2[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt2.96分钟。

制备R：3-[(甲基磺酰基)氧基]氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯

步骤a.3-羟基氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯的制备。将处于50ml MeOH中的1.07g的3-氧代氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯（5mmol）的溶液冷却至0°C并加入213mg硼氢化钠（6.1mmol)。将溶液缓慢升温至室温并搅拌2小时。在真空下除去挥发物，用乙酸乙酯溶解残余物并用水分配（portion）。用盐水洗涤有机层，用Na₂SO₄干燥并蒸发。通过快速色谱（EtOAc/己烷3/7）纯化粗产物，从而得到0.75g的3-羟基氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯，为白色固体（75%）。¹H NMR(401MHz,DMSO-d₆)δ4.34-4.65(m,1H),3.52-3.80(m,1H),3.05-3.25(m,2H),1.70-1.89(m,2H),1.58-1.69(m,1H),1.43-1.56(m,3H),1.39(s,9H)。

步骤b.3-[(甲基磺酰基)氧基]氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯的制备。向冷却至0°C的处于DCM(10ml)中的200mg的3-羟基氮杂环庚烷-l-羧酸叔丁酯（0.93mmol）的溶液中加入190μl TEA（1.4mmol）和114μl甲磺酰氯（1.4mmol）。将溶液升温至室温并搅拌2小时。用饱和NaHCO₃水溶液稀释该混合物，分离有机层并用盐水洗涤，在Na₂SO₄上干燥并在减压下浓缩，将获得的浓稠的浅黄色油直接用于下一步骤。LC/MS(m/z)：294.0[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt5.65分钟。

根据相同的方法，但是利用适合的起始材料，制备了以下的化合物：

(3-外型（exo）)-3-[(甲基磺酰基)氧基]-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-羧酸2,2,2-三氯乙基酯。LC/MS(m/z):381.1[M+H]⁺,HPLC(254nm)方法3Rt5.56分钟。

实施例901Pirn激酶结合活性

PIM-1、PIM-2和PIM-3酶作为在细菌中表达的融合蛋白而产生，并通过IMAC柱色谱进行纯化（Sun,X.,Chiu,J.F.,和He,Q.Y.(2005)ExpertRev.Proteomics,2:649-657）。通过American Peptide Company（Sunnyvale,CA）常规合成荧光标记的Pim-特异性的肽底物。反应缓冲液含有10mMHEPES,pH7.2，10mM MgCl₂，0.01%Tween20，2mM DTT。终止缓冲液含有190mM HEPES,pH7.2，0.015%Brij-35，0.2%涂层试剂3（CaliperLife Sciences,Hopkinton,MA），20mM EDTA。分离缓冲液含有100mMHEPES,pH7.2，0.015%Brij-35，0.1%涂层试剂3，1:200涂层试剂8（CaliperLife Sciences,Hopkinton,MA），10mM EDTA和5%DMSO。

在384孔板中在10/孔的最终体积中进行PIM反应。通过将5μL2XATP和测试化合物加入5μL的2X酶和FAM-肽中来启动标准酶反应，在反应缓冲液中含有20pM PIM1、50pM PIM2或55pM PIM3、1μΜFAM-肽和10μΜATP。在室温下孵育90分钟后，通过加入10μL终止缓冲液来终止磷酸化反应。在

（Caliper Life Sciences,Hopkinton,MA）上运行的12-吸管微流体芯片（12-sipper microfluidic chip）（CaliperLife Sciences,Hopkinton,MA）上分离每个单独反应中的产物和底物。通过利用Caliper's Optimizer软件（Hopkinton,MA）选择电压和压力来优化产物和底物的分离。分离条件使用-500V的下游电压、-2150V的上游电压以及-1.2psi的筛选压力（screening pressure）。在488nm处激发并在530nm处检测产物和底物荧光团。利用HTS Well Analyzer软件（Caliper LifeSciences,Hopkinton,MA）由电泳图（electropherogram）计算底物转化。计算测试化合物的Ki值。示例性化合物的代表性PIM1LC3K Ki微摩尔值参见表1。

实施例902体外细胞增殖力实验

BaF3是一种鼠白细胞介素-3依赖性pro-B细胞系，其被用作用于评价激酶致癌基因的效力和下游信号传导的模型系统（“Ba/F3cells and theiruse in kinase drug discovery”,Warmuth,M等人(2007年1月)CurrentOpinion in Oncology,Vol19(l):55-60）。BaF3亲代细胞系获自DSMZ保藏机构。产生由PIM1或PIM2转染的BaF3细胞系。小鼠IL-3购自R&DSystems。G418购自Clontech。BaF3亲代细胞系的培养基含有RPMI、10%FBS、2mM L-谷氨酰胺、2ng/mL mIL-3。BaF3PIM1&2细胞系的培养基含有RPMI、10%FBS、2mM L-谷氨酰胺、250μg/mL。MM1.S（多发性骨髓瘤细胞）细胞系的培养基含有RPMI、10%FBS、2mM L-谷氨酰胺。

分别以2k/孔、5k/孔、5k/孔和10k/孔在384-孔板中以45μL/孔接种亲代细胞、BaF3PIM1细胞、BaF3PIM2细胞、和MM1.S（多发性骨髓瘤）细胞。以5μL/孔加入测试化合物。BaF3细胞（亲代和经转染的）孵育过夜，而MM1.S细胞在37°C，5%CO₂下孵育72小时。以5μL/孔加入CELL

Reagent（Promega），将孔板孵育30分钟，并在HT Analyst上读取它们的发光读数。计算测试化合物的IC₅₀/EC₅₀值。

如上文所述测试了本发明的代表性化合物，并发现它们显示如下表2中所示的Ki/IC₅₀/EC₅₀。

表2

Claims

1.式（I）的化合物：

其中

X为选自O、S、SO、SO₂和NR6的二价基团，其中

R6为可选取代的直链或支链C₁-C₆烷基或者，连同它们连接到其上的氮原子一起，R6和R4可以形成可选地含有选自N、O和S的一个另外的杂原子的5至6元杂芳基或杂环基；

R2为氢或选自直链或支链C₁-C₆烷基、直链或支链C₂-C₆烯基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团；

R3为选自NR'R"和N(OH)R'的基团，其中

R'和R"各自独立地为氢，或选自直链或支链C₁-C₆烷基、C_3-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团；

R5为氢或NR'R"，其中

R'和R"各自独立地为氢，或选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或者连同它们连接到其上的氮原子一起，R'和R"可以形成可选地含有选自N、O和S的一个另外的杂原子的5至6元杂芳基或杂环基；

A为选自-(CH₂)₂-和-CH=CH-的二价基团；以及

其可药用盐

不包括以下化合物：

2.根据权利要求1所定义的式（I）的化合物，其中：

R1为CN，选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基,、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团XR4，其中

X为选自O、S、SO、SO₂和NR6的二价基团，其中

R6为可选取代的直链或支链C₁-C₆烷基或者，连同它们连接到其上的氮原子一起，R6和R4可以形成可选地含有选自N、O和S的一个另外的杂原子的5至6元杂芳基或杂环基，

R2为选自直链或支链C₁-C₆烷基、直链或支链C₂-C₆烯基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团；以及

R5为氢或NR'R"，其中

R'和R"为氢。

3.根据权利要求1或2中所定义的式（I）的化合物，其中：

X为选自O、S、SO、SO₂和NR⁶的二价基团，其中

R2为选自直链或支链C₁-C₆烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团；以及

R3为选自NR'R"和N(OH)R'的基团，其中

R'和R"为氢。

4.根据权利要求1至3中所定义的式（I）的化合物，其中：

R1为选自直链或支链C_1-C₆烷基、芳基和杂环基的可选取代的基团，或基团XR4，其中

X为选自O、S和NR6的二价基团，其中

R3为NR'R"，其中

R'和R"为氢；

R4为选自可选取代的直链或支链C₁-C₆烷基、芳基、芳基烷基和杂环基的基团；以及

R5为氢。

5.根据权利要求1至4中所定义的式（I）的化合物，其中：

X为选自O、S和NR6的二价基团，其中

R4为选自可选取代的直链或支链C₁-C₆烷基、芳基和杂环基的基团，以及

A为二价基团-CH=CH-。

6.根据权利要求1中所定义的式（I）的化合物或其可药用盐，其选自由以下组成的组：

1-(2-羟基乙基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-叔丁基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-叔丁基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-叔丁基-8-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-叔丁基-8-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(2-羟基乙基)-8-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-叔丁基-N-甲基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-叔丁基-N-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-叔丁基-N-(2-羟基乙基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-叔丁基-N-(1-甲基哌啶-4-基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-叔丁基-N-[2-(1H-咪唑-5-基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

6-氨基-1-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

2-[2-(二甲基氨基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(2-氨基乙基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

2-(2-氨基乙基)-8-(甲基硫烷基)-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(甲基硫烷基)-1-(哌啶-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(甲基硫烷基)-2-(哌啶-4-基甲基)-2H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺

1-甲基-8-[4-(哌嗪-1-基)苯氧基]-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-苯氧基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(3-氨基苯氧基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(4-氨基苯氧基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-(吡啶-4-基氧基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(2-氟乙氧基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-[4-(哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-[2-溴-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-[2-溴-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-[3-(哌嗪-1-基)苯氧基]-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-[3-(哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-[3-(二甲基氨基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(2-氯苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(2-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-[2-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-[2-氟-4-(4-甲基哌嗪-1基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-[2-乙酰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-[2-乙酰基-4-(哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-[2-氰基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-氰基-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-(1H-吡唑-1-基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(1H-咪唑-1-基)-1-甲基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-(4-硝基-1H-咪唑-1-基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-甲酰胺，

1-(2-羟基乙基)-8-苯氧基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(2-羟基乙基)-8-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(2-羟基乙基)-8-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(2-羟基乙基)-8-(3-硝基苯氧基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-(3-硝基苯氧基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-叔丁基-8-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3甲酰胺，

1-叔丁基-8-(二甲基氨基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-甲氧基-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-乙氧基-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(3-甲酰基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-{3-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯氧基}-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-[3-(羟基甲基)苯氧基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯氧基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-[3-(吗啉-4-基甲基)苯氧基]-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(3-氨基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(3-氨基苯氧基)-1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(2-氟乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(2-氯乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(2-羟基乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(2-甲氧基乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-[3-(二甲基氨基)丙基]-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(1-氨基-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(甲基硫烷基)-1-(哌啶-4-基甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(3-氨基丙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(甲基硫烷基)-1-(哌啶-4-基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(2-氨基乙基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-乙烯基-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-{2-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]乙基}-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-乙氧基-1-(哌啶-4-基甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-[3-(二甲基氨基)丙基]-8-乙氧基-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-乙氧基-1-(哌啶-4-基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-乙氧基-1-[(1-甲基哌啶-4-基)甲基]-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(2,6-二氟苯基)-1-(哌啶-4-基甲基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(3-氨基丙基)-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

2-(3-氨基丙基)-8-(4-氟苯基)-4,5-二氢-2H吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(3-氨基丙基)-N-(3-羟基丙基)-8-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

6-氨基-1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-甲基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

6-氨基-1-甲基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-叔丁基-N-羟基-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(甲基硫烷基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(甲基硫烷基)-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(4-氨基环己基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(甲基硫烷基)-1-(哌啶-3-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(氮杂环庚烷-4-基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(3-氨基-2,2-二甲基丙基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-甲氧基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-甲氧基-1-(哌啶-4-基甲基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-[(3-外型)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-[(3-内型)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-[4-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)丁-2-基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(4-氨基丁-2-基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(甲基硫烷基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-[反式-3-(羟甲基)环丁基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-[顺式-3-(羟甲基)环丁基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-苯基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(哌啶-4-基)-8-(噻吩-3-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(4-氨基环己基)-8-苯基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(4-氨基环己基)-8-(噻吩-3-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(哌啶-4-基)-8-(吡咯烷-1-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

8-(吗啉-4-基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-{[1-(2-氨基乙基)哌啶-4-基]甲基}-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-{4-[(2-氨基乙基)氨基]环己基}-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-{4-[(2-氨基乙基)氨基]环己基}-8-(甲基硫烷基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-[4-(甘氨酰基氨基)环己基]-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-{4-[(乙基氨甲酰基)氨基]环己基}-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-(4-氨基甲酰亚胺酰氨基环己基（carbamimidamiocyclohexyl）)-8-(甲基硫烷基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，

1-叔丁基-8-(甲基硫烷基)-6-(吗啉-4-基)-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺，和

6-氨基-1-叔丁基-1H-吡唑并[4,3-h]喹唑啉-3-甲酰胺。

7.一种用于制备根据权利要求1中所定义的式（I）的化合物或其可药用盐的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

st.6）使式（VIII）的化合物：

其中，R1为SR4，OR4，氢，或选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团；且R2、R4和A如权利要求1中所定义，根据可替代步骤st.6a）、st.6b）或st.6c）中的任一个：

st.6a）与氢氧化铵或式（XII）的胺反应：

R'R"-NH(XII)：

其中，R'和R"如权利要求1中所定义，从而获得式（I）的化合物：

其中，R1为氢，选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团SR4或OR4，R3为NR'R"，R5为氢，且R2、R4,、A、R'和R"如权利要求1中所定义；

st.6b1）在酸性或碱性水解条件下反应，从而得到式（XI）的化合物或其盐：

其中，R1为氢，选自直链或支链C₁-C₆烷基，C₃-C₇环烷基，环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团SR4或OR4，并且R2、R4和A如权利要求1中所定义；

st.6b2）在碱性条件下并且在适合的缩合剂存在下，将所得到的式（XI）化合物或其盐与如上述定义的式（XII）的铵盐或衍生物或式（X）的衍生物混合：

R'NHOH(X)：

其中，R'如权利要求1中所定义，从而得到式（I）的化合物：

其中，R1为氢，选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团SR4或OR4，R5为氢，且R2、R3、R4和A如权利要求1中所定义；

st.6c）在强碱存在下，与如上述定义的式（XII）的铵盐或合适的胺反应，从而得到式（I）的化合物：

其中，R1为氢，选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的可选取代的基团，或基团SR4或OR4，R3为NR'R"，且R2、R4、R5、A、R'和R"如权利要求1中所定义；

可选地，将所述式（I）的化合物转化为所述式（I）的其他不同的化合物，并且，如果需要，将所述式（I）的化合物转化为其可药用盐或将盐转化为游离化合物（I）。

8.一种用于制备如权利要求1中所定义的式（I）的化合物或其可药用盐的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

st.7）使式（XIII）的化合物：

其中，R3和A如权利要求1中定义，与式（V）的化合物反应：

R2-Y(V)

其中，Y为适合的离去基团，例如碘、溴、氯或磺酸酯基团（例如，-OS(O)₂CF₃、-OS(O)₂CH₃或-OS(O)₂PhMe），而R2如权利要求1中所定义且不为氢；

st.8）使所得到的式（XIV）的化合物：

其中，R2如权利要求1中所定义且不为氢，R3和A如权利要求1中所定义，与式（XV）的化合物反应：

R1-Q(XV)：

其中，R1为选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、芳基、和杂环基的可选取代的基团，且Q为适合的基团，如-B(OH)₂、-B(OAlk)₂、-Sn(Alk)₄、-Al(Alk)₃、ZnHal、MgHal或ZrCp₂Hal，其能够经受钯介导的碳键形成，从而得到式（I）的化合物：

其中，R1为选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、芳基和杂环基的可选取代的基团，R2如权利要求1中所定义且不为氢，R3和A如权利要求1中所定义，且R5为氢；

可选地，将所述式（I）的化合物转化为所述式（I）的其他不同的化合物，并且，如果需要，将所述式（I）的化合物转化为其可药用盐或将盐转化为所述游离化合物（I）。

9.一种用于制备如权利要求1中所定义的式（I）的化合物或其可药用盐的方法，其特征在于，利用以下方法之一将所述式（I）的化合物转化为所述式（I）的其他不同的化合物：

Conv.e）通过与式（V）的化合物反应，将其中R1、R3和A如权利要求1中所定义且R2为氢的式（I）的化合物转化为其中R2如权利要求1中所定义且不为氢的所述式（I）的化合物：

R2-Y'(V)

其中，Y'为OH或可选地当活化时可以作为适合的离去基团起作用的基团，例如碘、溴、氯或磺酸酯基团（例如，-OS(O)₂CF₃、-OS(O)₂CH₃或-OS(O)₂PhMe），且R2如权利要求1中所定义且不为氢；

Conv.r）通过用氧化剂处理，或在脱氢操作条件下在Pd或Pt催化剂存在下，将其中R1、R2和R3如权利要求1中所定义且A为二价基团如-CH₂-CH₂-的式（I）的化合物转化为其中A为-CH=CH-基团的所述式（I）的化合物。

10.一种用于治疗由蛋白激酶活性失调引起和/或与其相关的疾病的方法，包括向对其有需要的哺乳动物给予有效量的如权利要求1中所定义的式（I）的化合物。

11.根据权利要求10所述的方法，用于治疗由PIM-1、PIM-2、PIM-3激酶活性失调引起和/或与其相关的疾病。

12.根据权利要求10所述的方法，其中，所述疾病选自由癌症、细胞增生性病症和免疫细胞相关疾病和病症组成的组。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述癌症选自由以下组成的组：癌，如膀胱癌、乳癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌，包括小细胞肺癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、和皮肤癌，包括鳞状细胞癌；淋巴细胞系的造血细胞肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞白血病、急性淋巴母细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞-淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤；髓细胞系的造血细胞肿瘤，包括急性和慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞性白血病；间充质细胞来源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢神经系统和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；其他肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病、角化黄瘤、甲状腺滤泡癌、和卡波西肉瘤以及间皮瘤。

14.根据权利要求12所述的方法，其中，所述细胞增生性病症选自由以下组成的组中：良性前列腺增生、家族性腺瘤病、息肉病、神经纤维瘤病、银屑病、与动脉粥样硬化相关的血管平滑细胞增生、肺纤维化、关节炎、肾小球肾炎以及术后狭窄和再狭窄。

15.根据权利要求12所述的方法，其中，所述炎性疾病和自身免疫性疾病选自多发性硬化症、系统性红斑狼疮、炎症性肠病（IBD）、克罗恩病、肠易激综合征、胰腺炎、溃疡性结肠炎、憩室病、重症肌无力、血管炎、银屑病、硬皮病、哮喘、过敏、系统性硬化症、白癜风、关节炎，如骨关节炎、幼年型类风湿关节炎、强直性脊柱炎。

16.根据权利要求10所述的方法，进一步包括使所述对其有需要的哺乳动物经历放射治疗或与至少一种细胞生长抑制剂或细胞毒性剂联用的化疗方案。

17.根据权利要求10所述的方法，其中，所述对其有需要的哺乳动物为人。

18.一种用于抑制PIM-1、PIM-2、PIM-3激酶蛋白活性的体外方法，包括使所述蛋白与有效量的如权利要求1中所定义的所述式（I）的化合物接触。

19.根据权利要求10所述的方法，其提供了肿瘤血管发生和转移抑制。

20.一种药物组合物，包含治疗有效量的如权利要求1中所定义的式（I）的化合物或其可药用盐，以及至少一种可药用赋形剂、载体和/或稀释剂。

21.根据权利要求20所述的药物组合物，进一步包含一种或多种化疗剂。

22.一种产品或试剂盒，包含如权利要求1中所定义的所述式（I）的化合物或其可药用盐，或如权利要求20中所定义的其药物组合物以及一种或多种化疗剂，作为同时地、单独地或依次地用于抗癌治疗的组合制剂。

23.如权利要求1中所定义的所述式（I）的化合物或其可药用盐，作为药物使用。

24.如权利要求1中所定义的所述式（I）的化合物或其可药用盐，在治疗癌症的方法中使用。

25.如权利要求1中所定义的所述式（I）的化合物或其可药用盐在制造具有抗癌活性的药物中的应用。