ES2336911T3 - Trans-9,10-dehidroepotilonas c y d, sus analogos y procedimientos de preparacion. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de fórmula (I) siguiente, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable: **(Ver fórmula)** en la que R es H, alquilo inferior C1-C4 o alquilo inferior C1-C4 sustituido con uno o más grupos seleccionados de forma independiente de halo, hidroxilo, amino y azido; R1 es H, o alquilo inferior C1-C4, alquenilo inferior C2-C4 o alquinilo inferior C2-C4 sustituidos o insustituidos, que pueden estar sustituidos con uno o más grupos seleccionados de forma independiente de halo, hidroxilo, amino y azido; y Ar es 3-isoxazolilo, que puede estar insustituido, monosustituido o disustituido con grupos seleccionados de forma independiente de hidroxi, hidroxialquilo C1-C4, halo, ciano, oxo, alquilimino, amino, alquilamino, dialquilamino, acilaminoalquilo, alcoxi C1-C4, tioalcoxi, alquilo inferior C1-C4, cicloalquilo o haloalquilo C1-C4.
Description
Trans-9,10-dehidroepotilonas
C y D, sus análogos y procedimientos de preparación.
La presente invención atañe a procedimientos
para preparar
trans-9,10-dehidroepotilona C y D y
sus análogos, y a compuestos preparados por los procedimientos,
composiciones que contienen los compuestos y procedimientos para el
tratamiento de enfermedades hiperproliferativas.
La clase de policétidos conocidos como
epotilonas ha surgido como fuente de compuestos potencialmente
terapéuticos que tienen modos de acción similares al paclitaxel
(Bollag, y col., Cancer Res. 55:2325-2333 (1995);
Service, Science 274 (5295):2009 (1996); Cowden y Paterson, Nature
387(6630):238-9 (1997)). El interés en las
epotilonas y análogos de las epotilonas ha crecido con las
observaciones de que ciertas epotilonas son activas contra tumores
que han desarrollado resistencia a paclitaxel, así como menor
potencial para producir efectos indeseados (Muhlradt y Sasse Cancer
Res. 57(16): 3344-6 (1997)). Entre las
epotilonas y análogos de epotilonas en las que se está investigando
su eficacia terapéutica se encuentran la epotilona B 1 y los
análogos semisintéticos de la epotilona B,
BMS-247550 2, también conocida como "azaepotilona
B" (Colevas, y col., Oncology (Huntingt).
15(9):1168-9, 1172-5 (2001);
Lee, y col., Clin Cancer Res. 7(5):1429-37
(2001); McDaid, y col., Clin Cancer Res.
8(7):2035-43 (2002); Yamaguchi, y col.,
Cancer Res. 62(2):466-71 (2002)), y
BMS-310705 3.
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La desoxiepotilona B 4, también conocida como
"epotilona D" es otro derivado de epotilona que tiene
prometedoras propiedades antitumorales frente a paclitaxel en el
que se está investigando su eficacia terapéutica. Este compuesto
también ha demostrado menor toxicidad que las epotilonas que tienen
12,13-epóxidos, tales como epotilona B o
BMS-247550, probablemente debido a la falta del
resto epóxido altamente reactivo.
La producción de análogos de la
9-oxo-epotilona, incluidos la
9-oxo-epotilona D y sus análogos,
usando vías químicas y biotecnológicas, se ha descrito
recientemente en la publicación de solicitud PCT internacional Nº
WO 01/83800, publicada el 8 de noviembre de 2001.
Recientemente se ha comunicado la síntesis y la
evaluación preliminar de la
trans-9,10-dehidroepotilona D (5) y la
26-trifluoro-trans-9,10-dehidroepotilona
D (6) (Rivkin y col., J. Am. Chem. Soc. 2003,125:
2899-2901. Se ha descubierto que un informe anterior
de la preparación de 5 es erróneo (White y col., J. Am. Chem. Soc.
2001, 123:5407-13; White y col., J. Am. Chem. Soc.
2003, 125: 3190). Aunque estos compuestos muestran una prometedora
actividad, su preparación mediante síntesis química total es larga y
cara y se necesitan mejores procedimientos para su preparación.
En los documentos
DE-A-19907480;
DE-A-19954229; J. Am. Chem. Soc.
123, 5407-13 (2001); Tetrahedron Letters, 43,
2895-8 (2002); J. Or. Chem., 64,
684-5 (1999); J. Am. Chem. Soc., 125,
2899-2901 (2003); Angewandte Chemie,
114,1439-41 (2002); y Organic Letters, 4,
995-7 (2002) se describen varios derivados de
9,10-dehidro-epotilona que son
estructuralmente diferentes de los de la presente invención.
Aunque varios análogos de epotilona que tienen
actividad anti-tumorales se han descrito en la
técnica, existe un continuado interés en análogos nuevos que tengan
actividades estabilizantes de microtúbulos que exhiban menos
efectos secundarios que paclitaxel o las epotilonas A y B.
En la presente memoria descriptiva se describen
compuestos que tienen actividades estabilizantes de microtúbulos y
útiles en el tratamiento del cáncer y otras enfermedades
caracterizadas por hiperproliferación celular de la fórmula
siguiente (I):
en la
que
R es H, alquilo inferior sustituido o
insustituido; R_{1} es H o es alquilo inferior, alquenilo
inferior o alquinilo inferior sustituido o insustituido;
Ar es heteroarilo sustituido o insustituido;
\newpage
y las sales o profármacos de los mismos
farmacéuticamente aceptables; con la condición de que cuando R es
metilo o trifluorometilo y Ar es
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\vskip1.000000\baselineskip
R_{1} no es H.
En algunas formas de realización de la
invención, Ar es
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\vskip1.000000\baselineskip
que forma compuestos de la
estructura siguiente
(II):
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\vskip1.000000\baselineskip
en la que X es S u O, y R_{2} es
H o alquilo inferior sustituido o insustituido. En otras formas de
realización, Ar puede ser otros restos sustituidos o insustituidos,
tales como, por ejemplo, tiazolilo, oxazolilo, imidazolilo,
isotiazolilo, isoxazolilo, pirazolilo, piridilo, piracinilo,
pirimidinilo, pirididacinilo, indolicinilo, indolilo, indazolilo,
purinilo, quinolilo, quinolocinilo, pftalcinilo, naftiridinilo,
quinoxalinilo, quinazolinilo, benzotiazolilo, oxadiazolilo,
tiadiazolilo, benzotriazolilo sustituidos o insustituidos, y
similares. Particularmente preferidos actualmente y compuestos
nuevos de la invención son los compuestos de fórmula (I), en la que
R es metilo o trifluorometilo y Ar es
2-piridilo,4-metoxi-2-piridilo,
5-(hidroximetil)-2-piridilo o
5-metil-3-isoxazolilo.
En la presente memoria descriptiva se describen
composiciones que comprenden una cantidad de un compuesto descrito
eficaz en la inhibición de la hiperproliferación celular y/o
alteración de la actividad de la tubulina en un sujeto humano o
animal cuando se administra al mismo, junto con un transportador
farmacéuticamente aceptable y procedimientos para inhibir la
hiperproliferación celular y/o alterar la actividad de la tubulina
en un sujeto humano o animal, que comprende administrar al sujeto
humano o animal una cantidad inhibidora de la hiperproliferación
celular o de alteración de la actividad de la tubulina de un
compuesto o composición de la invención.
Se describen procedimientos de síntesis de los
compuestos de la invención a partir de
9-oxo-epotilona C o D. En la
presente invención, también se incluyen endoprótesis recubiertas con
un compuesto o composición de la invención tal como se ha descrito
en lo que antecede y procedimientos para tratar enfermedades
cardiovasculares usando dichas endoprótesis recubiertas.
En la actualidad, sorprendentemente se ha
descubierto que la actividad de la tubulina se puede alterar in
vitro o in vivo mediante ciertos derivados basados en la
trans - -9,10-dehidroepotilona C y
trans-9,10-dehidro-epotilona
D.
De acuerdo con esto, la presente invención
proporciona compuestos, composiciones y procedimientos nuevos de
inhibir la hiperproliferación celular y/o estabilizar los
microtúbulos in vitro y para el tratamiento de enfermedades
hiperproliferativas in vivo.
\newpage
Un aspecto, la presente invención proporciona
compuestos nuevos de la siguiente fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R es H, alquilo inferior
C_{1}-C_{4} o alquilo inferior
C_{1}-C_{4} sustituido con uno o más grupos
seleccionados de forma independiente de halo, hidroxilo, amino y
azido;
R_{1} es H, o alquilo inferior
C_{1}-C_{4}, alquenilo inferior
C_{2}-C_{4} o alquinilo inferior
C_{2}-C_{4} sustituidos o insustituidos, que
pueden estar sustituidos con uno o más grupos seleccionados de
forma independiente de halo, hidroxilo, amino y azido; y
Ar es 3-isoxazolilo, que puede
estar insustituido, monosustituido o disustituido con grupos
seleccionados de forma independiente de hidroxi, hidroxialquilo
C_{1}-C_{4}, halo, ciano, oxo, alquilimino,
amino, alquilamino, dialquilamino, acilaminoalquilo, alcoxi
C_{1}-C_{4}, tioalcoxi, alquilo inferior
C_{1}-C_{4}, cicloalquilo o haloalquilo
C_{1}-C_{4};
y las sales o profármacos de los mismos
farmacéuticamente aceptables.
En algunas formas de realización de la
invención, los compuestos son de la estructura siguiente (II):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X es O, y R_{2} es H o
alquilo inferior sustituido o insustituido. En ciertas formas de
realización, R_{2} es metilo sustituido. En formas de realización
concretas, R_{2} es hidroximetilo, aminometilo, alquilaminometilo,
dialquilaminometilo, azidometilo o
fluorometilo.
Se proporcionan compuestos de fórmulas (I) o
(II) en las que R es CH_{3} y R_{1} es H o alquilo
C_{1}-C_{4}.
Se proporcionan compuestos de fórmulas (I) o
(II) en las que R es H y R_{1} es H o alquenilo
C_{2}-C_{4}.
Se proporcionan compuestos de fórmulas (I) o
(II) en las que R es CH_{3} y R_{1} es H o alquenilo
C_{2}-C_{4}.
Se proporcionan compuestos de fórmulas (I) o
(II) en las que R es H y R_{1} es H o alquinilo
C_{2}-C_{4}.
Se proporcionan compuestos de fórmulas (I) o
(II) en las que R es CH_{3} y R_{1} es H o alquinilo
C_{2}-C_{4}.
\newpage
En otras formas de realización, la invención
proporciona compuestos de fórmula (I) que tienen las
estructuras:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En otro aspecto, la invención proporciona
composiciones que comprenden una cantidad de un compuesto de fórmula
(II) eficaces en la inhibición de la hiperproliferación celular y/o
alteración de la actividad de la tubulina en un sujeto humano o
animal cuando se administra a los mismos, junto con un transportador
farmacéuticamente aceptables.
En otras formas de realización más, la invención
proporciona procedimientos para inhibir la hiperproliferación
celular y/o alterar la actividad de la tubulina en un sujeto humano
o animal, que comprende administrar al sujeto humano o animal una
cantidad de alteración de la actividad de la tubulina de un
compuesto de fórmula (II).
La presente invención proporciona además el uso
de un compuesto de fórmula (II) en la fabricación de un medicamento
para tratar sujetos humanos o animales que sufren una enfermedad
hiperproliferativa tal como cáncer.
El medicamento puede ser para el sujeto humano o
animal una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de
fórmula (II) anterior, bien sólo o en combinación con otros agentes
terapéuticamente activos.
Se describen endoprótesis recubiertas con un
compuesto de la invención y procedimientos para tratar enfermedades
cardiovasculares usando dichas endoprótesis recubiertas.
La presente invención proporciona compuestos de
fórmula (II) como se ha descrito en lo que antecede, para usar como
producto farmacéutico, así como procedimientos de usar dichos
compuestos en la fabricación de un medicamento para el tratamiento
de las enfermedades hiperproliferativas.
Se describen endoprótesis recubiertas con un
compuesto o composición de la invención y procedimientos para
tratar enfermedades cardiovasculares usando dichas endoprótesis
recubiertas.
En otras formas de realización más, la presente
invención proporciona nuevos procedimientos para fabricar
compuestos de fórmula (II) como se describe con detalle más adelante
en la presente memoria descriptiva.
Como se usa en la presente memoria descriptiva,
los términos siguientes tienen los significados que se definen a
continuación:
Los grupos de alquilo inferior descritos en la
presente memoria descriptiva pueden ser grupos alquilo de cadena
lineal o ramificada que comprenden de uno a cuatro átomos de carbono
(alquilo C_{1}-C_{4}).
Los grupos de alquenilo inferior descritos en la
presente memoria descriptiva pueden ser radicales de cadena lineal,
ramificada o cíclicos que tienen uno o más dobles enlaces y de dos a
cuatro átomos de carbono (alquenilo
C_{2}-C_{4}).
Los grupos de alquinilo inferior descritos en la
presente memoria descriptiva pueden ser de cadena lineal o
ramificada que tienen de dos a cuatro átomos de carbono (alquinilo
C_{2}-C_{4}).
Los restos de alquilo inferior, alquenilo
inferior o alquinilo inferior como se definen en la presente memoria
descriptiva pueden estar sustituidos o insustituidos con, por
ejemplo, uno o más grupos halógeno, hidroxilo, amino, azido u otros
grupos, incluidos, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo,
n-butilo, t-butilo, neopentilo,
trifluorometilo, hidroximetilo, aminometilo, azidometilo,
pentafluoroetilo y similares.
"Sales farmacéuticamente aceptables" útiles
en la práctica de la presente invención se pueden usar en forma de
sales derivadas de ácidos inorgánicos u orgánicos. Estas sales
incluyen, entre otras, las siguientes: acetato, adipato, alginato,
citrato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato,
alcanforato, alcanforsulfonato, digluconato, ciclopentano
propionato, dodecilsulfato, etanosulfonato, glucoheptanoato,
glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato,
clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato,
2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato,
metanosulfonato, nicotinato, 2-naftalenosulfonato,
oxalato, pamoato, pectinato, sulfato,
3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato,
succinato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato
y undecanoato. Asimismo, los grupos básicos que contienen nitrógeno
se puede cuaternizar con agentes tales como haluros de alquilo
inferior, tal como cloruro, bromuros y yoduros de metilo, etilo,
propilo y butilo; sulfatos de dialquilo como sulfatos de dimetilo,
dietilo, dibutilo y diamilo, haluros de cadena larga, tal como
cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y
estearilo, haluros de aralquilo como bromuros de bencilo y fenetilo,
y otros.
De este modo se obtienen productos dispersables
o solubles en agua o en aceite.
Ejemplos de ácidos que se pueden emplear para
formar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables
incluyen ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido
sulfúrico y ácido fosfórico, ácidos orgánicos tales como ácido
oxálico, ácido maleico, ácido succínico y ácido cítrico. Se pueden
preparar in situ sales de adición básicas durante el
aislamiento y la purificación finales de los compuestos de fórmula
(I) o, por separado, haciendo reaccionar restos de ácido
carboxílico con una base adecuada tal como el hidróxido, carbonato
o bicarbonato de un catión metálico farmacéuticamente aceptable o
con amoniaco, o una amina orgánica primaria, secundaria o
terciaria. Entre las sales farmacéuticamente aceptables se incluyen
cationes basados en metales alcalinos y
alcalino-térreos, tales como sales de sodio, litio,
potasio, calcio, magnesio, aluminio y similares, así como cationes
de amonio no tóxico, amonio cuaternario y de amina, incluidos, entre
otros, amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina,
dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina y similares.
Otras aminas orgánicas representativas útiles para la formación de
sales de adición de bases incluyen dietilamina, etilendiamina,
etanolamina, dietanolamina, piperacina y similares.
El término "profármacos farmacéuticamente
aceptables" como se usa en la presente memoria descriptiva se
refiere a los profármacos de los compuestos de la presente
invención que son, dentro del ámbito del firme juicio médico,
adecuados para usar en contacto con tejidos de seres humanos y de
animales inferiores con indebida toxicidad, irritación, respuesta
alérgica y similares, proporcionando un cociente razonable de
beneficios/riesgos y eficaz para su uso previsto, así como las
formas zwiteriónicas, cuando sea posible, de los compuestos de la
invención. El término "profármaco" se refiere a compuestos que
rápidamente se transforman in vivo para dar el compuesto
parental de la fórmula anterior mediante, por ejemplo, hidrólisis en
sangre. En T. Higuchi y V. Stella, Pro-drugs as
Novel Delivery Systems, Vol. 14 de la A.C.S. Symposium Series, y en
Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers en Drug Design,
American Pharmaceutical Association y Pergamon Press, 1987, ambos
incorporados en la presente memoria descriptiva por referencia, se
proporciona una exhaustiva discusión.
Se describen procedimientos para sintetizar los
compuestos de estructuras (II), (III) o (IV), en las que X es S, de
9-oxo-epotilonas C o D. Las
9-oxo-epotilonas C o D pueden
obtenerse fácilmente tal y como se ha descrito en la publicación de
solicitud internacional PCT nº WO 01/83800, publicada el 8 de
noviembre de 2001, cuya descripción se incorpora en la presente
memoria descriptiva por esta referencia. En general, la
9-oxo-epotilona D se produce en
células huésped recombinantes del suborden Cystobacterineae
que contiene un vector de expresión recombinante que codifica el
gen de una policétido sintasa (PKS). Como se ha descrito en el
documento WO 01/83800, la inactivación del dominio KR del módulo
extensor 6 de la PKS epotilona tiene como resultado una PKS capaz
de producid las 9-oxo-epotilonas.
Una cepa en la que el dominio KR del módulo extensor 6 se ha
desactivado se ha denominado K39-164 y se ha
depositado en la colección americana de cultivos tipo, Manassas,
Virginia 20110-2209, EE.UU., el 21 de noviembre de
2000, bajo los términos del tratado de Budapest y está disponible
con el número de registro PTA-2716. La cepa
K39-164 produce
9-oxo-epotilona D como producto
mayoritario y 9-oxo-epotilona C
como producto minoritario. En otro aspecto, la presente invención se
refiere a procedimientos para sintetizar los compuestos de
estructuras (II), en las que X es 0, de las
9-oxo-epotilonas H_{1} o H_{2},
los homólogos de oxazol de las
9-oxo-epotilonas C o D. Como también
se describe en el documento WO 01/83800, suplementando las células
huésped con un exceso de serina, los compuestos de tiazolepotilona
producidos normalmente por las células huésped están modulados de
tal manera que favorecen la producción de los homólogos de oxazol.
De este modo, se puede hacer que las células que producen
fundamentalmente 9-oxo-epotilona C o
D favorezcan la producción de
9-oxo-epotilona H_{1} o H_{2,}
los correspondientes homólogos de oxazol.
En referencia al esquema de reacción 1, más
adelante, los compuestos se pueden obtener mediante cetoreducción y
eliminación, tal como mediante la protección de los grupos hidroxilo
libres con un grupo protector adecuado, tal como, por ejemplo, un
grupo trietilsililo, un grupo butildimetilsililo, un grupo
2,2,2-tricloroetoxicarbonilo o similares; la
reducción del grupo 9-oxo para obtener el
correspondiente compuesto intermedio 9-hidroxilo,
la activación del compuesto 9-hidroxilo tal como con
anhídrido trifluoroacético, cloruro de metanosulfonilo o anhídrido
trifluorometanosulfónico en presencia de una base adecuada, por
ejemplo bis(trimetilsilil)amida sódica o una base de
amina, tal como piridina o 4-(dimetilaminopiridino) en
tetrahidrofurano ("THF") u otro disolvente adecuado para
obtener el correspondiente compuesto intermedio de trifluoroacetilo,
metanosulfonato o trifluorometanosulfonato; la eliminación del
grupo activador para obtener la
9,10-dehidroepotilona protegida correspondiente
mediante reacción con una base adecuada, por ejemplo
bis(trimetilsililamida) sódica, diisopropilamida de litio o
4-(dimetilaminopiridina); y, después, desproteger el intermedio
protegido para obtener la deseada
9,10-dehidroepotilona. Ejemplos representativos que
utilizan esta vía de síntesis se exponen más adelante en la
presente memoria descriptiva en los ejemplos
1-21.
En referencia al esquema de reacción 2, más
adelante, también se pueden obtener los compuestos mediante
eliminación pirolítica, tal como mediante activación de la
9-oxo-epotilona
bis(protegida) con una base, tal como
bis(trimetilsilil)amida sódica, disulfuro de carbono
y yoduro de metilo de modo que se forma el metilxantato éster, o con
cloruro de dimetiltiocarbamoílo de modo que se forma el
tiocarbamato y, después, calentando el intermedio activado a una
temperatura suficiente, tal como a aproximadamente 170ºC, durante
tiempo suficiente para eliminar el grupo activador y obtener el
correspondiente compuesto 9,10-dehidroepotilona
protegida y, después, desproteger el intermedio protegido para
obtener la deseada 9,10-dehidroepotilona.
Temperaturas y tiempos adecuados se pueden determinar usando
procedimientos familiares para los expertos en las técnicas de
química orgánica. Ejemplos representativos que utilizan esta vía de
síntesis se exponen más adelante en la presente memoria descriptiva
en los ejemplos 1-4 y 22-25.
En referencia al esquema de reacción 3, más
adelante, los compuestos también se pueden obtener mediante
reducción con triflato de vinilo, tal como mediante la reacción de
una 9-oxo-epotilona protegida con un
reactivo para triflado, tal como anhídrido
trifluorometanosulfónico,
N-(2-piridil)triflimida o
N-(5-cloro-2-piridil)triflimida,
y una base tal como
2,4-di-terc-butil-4-metilpiridina,
o bis(trimetilsilil)amida sódica para obtener el
correspondiente compuesto intermedio
9,10-dehidro-9-trifluorometanosulfoniloxi.
El grupo 9-trifluorometanosulfoniloxi puede después
reducirse usando, por ejemplo, una fuente de hidruro tal como una
sal de formiato de trialquilamonio o hidruro de trialquilestaño en
presencia de un catalizador de paladio, tal como
tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0) para formar la
9,10-dehidro-epotilona protegida
resultante y el compuesto desprotegido para obtener la deseada
9,10-dehidroepotilona 10. Como alternativa, el
compuesto intermedio
9,10-dehidro-9-trifluorometanosulfoniloxi
puede además sustituirse mediante la adición de grupos alquilo
usando, por ejemplo, técnicas de acoplamiento con triflato de
vinilo, tal como la reacción del trifluorometilsulfoniloxienol (8)
con aliltributilestaño en presencia de un catalizador tal como
tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0) y cloruro de
litio para obtener el compuesto
9,10-dehidroepotilona protegida sustituida con alilo
9a (R_{1} = CH_{2}CHCH_{2}); y, después, desproteger el
intermedio 9-sustituido protegido para obtener la
deseada 9,10-dehidroepotilona
9-sustituida 10a. De un modo similar, la reacción
del intermedio (8) con reactivos de alquilo inferior de cinc en
presencia de un catalizador tal como
tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0) proporciona
compuestos de fórmula (9a) en los que R1 es alquilo inferior.
Ejemplos representativos que utilizan estas vías de síntesis se
exponen más adelante en la presente memoria descriptiva en los
ejemplos 1-4 y 26-30.
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En referencia al esquema de reacción 4, más
adelante, los compuestos también se pueden preparar a partir de
9-oxo-epotilonas usando compuestos
intermedios de anillo abierto. En una forma de realización de la
invención, una forma 3,7-protegida de la epotilona
(2) reacciona con un agente reductor, por ejemplo hidruro de
di(isobutil)aluminio (DiBA1-H) en
condiciones en las que la lactonacarbonilo se reduce de forma
selectiva. Los grupos alcohol en el intermedio (11) de anillo
abierto resultante están protegidos mediante, por ejemplo,
sililación usando un clorotrialquilsilano o triflato de
trialquilsililo en presencia de una base tal como imidazol o
2,6-lutidina, para proporcionar el compuesto
intermedio (12). En otra forma de realización de la invención, una
forma 3,7-protegida de la epotilona (2) reacciona
con un agente reductor, por ejemplo hidruro de
di(isobutil)aluminio (DiBA1-H) en
condiciones en las que la lactonacarbonilo y el grupo
9-oxo se reducen para proporcionar el intermedio.
Los grupos 1- y 15-OH están protegidos de forma
selectiva, por ejemplo como sus éteres de
terc-butildimetilsililo mediante la reacción con su
cloruro de terc-butildimetilsililo e imidazol, para
proporcionar el compuesto intermedio (13). El 9-OH
se puede volver a oxidar a la cetona usando, por ejemplo,
peryodinano de Dess-Martin en diclorometano, para
proporcionar el compuesto intermedio (12).
El grupo cetona del producto intermedio (12) se
puede transformar en un
trans-9,10-alqueno usando cualquiera
de los procedimientos descritos en lo que antecede. En una forma de
realización, el compuesto intermedio (12) se hace reaccionar con un
agente para triflado, tal como anhídrido trifluorometanosulfónico o
una N-(2-piridil)triflimida y una base, tal
como bis(trimetilsilil)amida sódica o diisopropilamida
de litio, para formar el triflato de vinilo (14). El triflato de
vinilo se reduce usando una fuente de hidruros, tal como una sal
formiato de trialquilamonio o hidruro de trialquilestaño en
presencia de un catalizador tal como
tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0) para
proporcionar el compuesto intermedio (15).
El compuesto intermedio (13) se puede hacer
reaccionar con un reactivo para activar el grupo 9 para eliminación.
Por ejemplo, el compuesto (13) se hace reaccionar con anhídrido
trifluoroacético, anhídrido metanosulfónico o anhídrido
trifluorometanosulfónico en presencia de una base adecuada, tal como
piridina o 4-(dimetilaminopiridina), para producir el
9-0-trifluoroacetato,
9-O-metanosulfonato o
9-O-triflato, respectivamente. El
posterior tratamiento con una base impedida, por ejemplo
bis(trimetilsilil)amida sódica o diisopropilamida de
litio produce el compuesto intermedio
trans-9,10-alqueno (15).
El producto intermedio (13) puede convertirse en
el xantato de metilo mediante reacción con una base tal como
bis(trimetilsilil)amida, disulfuro de carbono y yoduro
de metilo. El xantato intermedio se somete a pirólisis tal como se
ha descrito en lo que antecede para producir el compuesto intermedio
(15).
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(Tabla pasa a página
siguiente)
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Esquema
4
El compuesto intermedio (15) se puede convertir
en trans-9,10-dehidroepotilonas. El
grupo protector sililo primario se elimina usando, por ejemplo,
ácido alcanforsulfónico, y el 1-alcohol resultante
se oxida en el ácido carboxílico usando, por ejemplo, un
procedimiento de dos etapas en el que el alcohol se oxida primero
usando un óxido de amina y peruretano de tetrapropilamonio
catalítico y, después, se oxida más hasta el ácido mediante
reacción con clorito sódico (NaClO_{2}). El grupo
15-OH se desprotege mediante tratamiento con
fluoruro de tetrabutilamonio en THF a 0ºC, y el macrociclo se cierra
usando, por ejemplo, las condiciones de Yamaguchi (cloruro de
1,3,5-triclorobenzoílo y trietilamina en THF a 0ºC,
seguido por la adición del anhídrido mixto a una solución de
4-(dimetilamino)piridina en tolueno a 75ºC) para proporcionar
el compuesto intermedio (13) protegido. La desprotección
proporciona la
trans-9,10-dehidroepotilona.
En referencia al esquema de síntesis 5, los
compuestos se pueden preparar usando epotilonas intermedias de
anillo abierto preparadas mediante saponificación. En una forma de
realización, la epotilona protegida (2) se convierte en el
seco-ácido protegido mediante, por ejemplo, tratamiento con
hidróxido o una esterasa. El ácido se convierte en el éster de
terc-butilo usando, por ejemplo, alcohol
terc-butílico, una carbodiimida tal como
diciclohexilcarbodiimida y 4-(dimetilamino)piridina como
catalizador. El 15-OH se protege mediante, por
ejemplo, sililación, y la 9-cetona se convierte en
el triflato de vinilo tal como se ha descrito en lo que antecede.
El triflato de vinilo se reduce como se ha descrito en lo que
antecede y el intermedio está parcialmente desprotegido usando
ácido alcanforsulfónico para proporcionar la
3,7-protegida-seco-9,10-dehidroepotilona.
La lactonización de acuerdo con el procedimiento de Yamaguchi,
seguido por desprotección proporciona la
trans-9,10-dehidroepotilona.
La forma 3,7-protegida de las
epotilonas (2) se puede convertir en
trans-9,10-dehidroepotilonas. La vía
de la síntesis implica la saponificación inicial del derivado de
epotilona (2) para proporcionar un intermedio de epotilona de
anillo abierto, que se modifica para incluir el grupo
9,10-trans-alqueno y, después, se
lactoniza para proporcionar la
trans-9,10-dehidroepotilona. Un
esquema sintético representativo se ilustra en la vía de síntesis
6.
En referencia a la vía de síntesis 6, la
epotilona 3,7-protegida (2) se saponifica con
hidróxido sódico en metanol acuoso para proporcionar el
hidroxiácido correspondiente (16). El hidroxiácido (16) se convierte
en su éster metílico (17) mediante la reacción con diazometano de
trimetilsililo. El grupo hidroxi del éster metílico (17) se protege
mediante tratamiento con cloruro de trimetilsililo/trimetilsilil
imidazol para proporcionar éster de trimetilsililo (18). La
9-cetona del éter de trimetilsililo (18) se
transforma en un trans-9,10-alqueno
mediante la reacción con
N-(2-piridil)triflimida y
bis(trimetilsilil)amida sódica para producir triflato
de vinilo (19). La reducción del triflato de vinilo (19) con
acetato de paladio (II), trifenilfosfina, tributilamina y ácido
fórmico proporciona
trans-9,10-alqueno (20). El grupo
protector trimetilsililo y el grupo éster de metilo del compuesto
intermedio (20) se eliminan mediante tratamiento con hidróxido
sódico, seguido por tratamiento con ácido acético, que da
hidroxiácido (21) que después se lactoniza para proporcionar la
epotilona 3,7-protegida (9). La desprotección
proporciona la
trans-9,10-dehidroepotilona.
El éter de trimetilsililo (18) de anillo abierto
preparado tal como se ha descrito en lo que antecede y como se
muestra en la vía de síntesis 6 puede ser el punto de partida de
otra vía a las
trans-9,10-dehidroepotilonas. La
vía sintética implica la reducción del grupo
9-cetona del compuesto intermedio (18), seguida por
eliminación para proporcionar el grupo
trans-9,10-alqueno y, después, en
última instancia, lactonización para proporcionar la
trans-9,10-dehidroepotilona. Un
esquema sintético representativo se ilustra en la vía de síntesis
7.
En referencia a la vía de síntesis 7, la
reducción del éter de trimetilsililo (18) con borohidruro sódico
proporciona el derivado 9-hidroxi (22). A
continuación, el derivado 9-hidroxi (22) se activa
para la eliminación mediante tratamiento con un agente activador,
tal como anhídrido trifluoroacético, anhídrido metanosulfónico o
anhídrido trifluorometanosulfónico en presencia de una base
adecuada, tal como piridina o 4-(dimetilaminopiridina), para
producir el 9-O-trifluoroacetato,
9-O-metanosulfonato o
9-O-triflato, respectivamente, el
compuesto intermedio activado (23). El posterior tratamiento del
intermedio activado (23) con una base impedida, por ejemplo
bis(trimetilsilil)amida sódica o diisopropilamida de
litio produce el compuesto intermedio
trans-9,10-alqueno (24). El grupo
protector trimetilsililo y el grupo éster de metilo del compuesto
intermedio (24) se eliminan mediante tratamiento con hidróxido
sódico, seguido por tratamiento con ácido acético para dar
hidroxiácido (21). La lactonización del hidroxiácido (21)
proporciona la epotilona 3,7-protegida (9), que,
tras la desprotección da la
trans-9,10-dehidroepotilona.
Los compuestos se pueden preparar mediante
síntesis total tal como se ilustra en la vía de síntesis 8. La
cetona (25), en la que P_{1} y P_{2} son grupos protectores de
hidroxilo, puede prepararse como se ha descrito en, por ejemplo, A.
Rivkin y col., J. Am. Chem. Soc. 2003 125:
2899-2901. Entre los grupos protectores de
hidroxilo típicos se incluyen éteres de sililo, por ejemplo
trimetilsililo (TMS), trietilsililo (TES) y
terc-butildimetilsililo (TBS); ésteres, por ejemplo
acetato, cloroacetato, trifluoroacetato o benzoato; carbonatos, por
ejemplo carbonato de metilo, carbonato de tricloroetilo (troc) o
carbonato de alilo (alloc); y acetales, por ejemplo metoximetilo
(MOM) o benciloximetilo (BOM). En formas de realización concretas,
P_{1} y P_{2} son éteres de sililo. La reacción de (25) con
iluros de Wittig da compuestos protegidos (26). La posterior
desprotección como se describe en los ejemplos siguientes
proporciona los compuestos de fórmula (I). Los iluros de Wittig se
pueden preparar mediante reacción de las correspondientes sales de
fosfonio con una base fuerte, por ejemplo
bis(trimetilsilil)amida sódica (NaHMDS),
bis(trimetilsilil)amida de potasio (KHMDS),
diisopropilamida de litio (LDA), butillitio, hidruro sódico o
similar. Las sales de fosfonio pueden prepararse mediante reacción
de los haluros de alquilo con una triaril- o trialquilfosfina, por
ejemplo trifenilfosfina o tributilfosfina. En formas de realización
concretas de la invención, las sales de fosfonio se preparan
mediante reacción de cloruros de alquilo con tributilfosfina. Como
alternativa, se pueden preparar iluros de Wittig de acuerdo con
otros procedimientos conocidos en la técnica, mediante, por ejemplo,
tratamiento de los óxidos de alquildifenilfosfina con una base
fuerte. Ejemplos de la preparación de varias sales de fosfonio
adecuadas para usar en la preparación de compuestos de fórmula (I)
se proporcionan en los ejemplos siguientes.
La desprotección (eliminación de P_{1} y/o
P_{2}) se puede realizar usando procedimientos conocidos en la
técnica, por ejemplo como se describe en Greene y Wuts, Protective
Groups in Organic Synthesis, 3ª Edition (Wiley, New York), 1999. En
formas de realización concretas, cuando P_{1} y P_{2} son éteres
de sililo, tales como TMS, TES o TBS, la desprotección se realiza
mediante tratamiento con ácido, por ejemplo HF piridina o ácido
trifluoroacético en diclorometano.
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Se puede realizar una detección selectiva de los
compuestos de la invención para determinar la citotoxicidad usando
ensayos convencionales bien conocidos para los expertos en la
técnica. Por ejemplo, la citotoxicidad de los compuestos se puede
determinar mediante el ensayo SRB tal como se ha descrito en Skehan
y col., J. Natl. Cancer Inst. 82:1107-1112 (1990),
que se incorpora en la presente memoria descriptiva por referencia.
En el ensayo SRB, se tripsinizan las siguientes células cultivadas,
se recuentan y se diluyen hasta las concentraciones siguientes por
100 \mul con medio de crecimiento: MCF-7, 5000;
NCI/ADR-Res, 7500; NCI-H460, 5000;
A549, 5000; Skov3, 7500; y SF 268, 7500. Las células se siembran a
100 \mul/pocillo en placas de microtitulación de 96 pocillos.
Veinticuatro horas después, a cada pocillo se añaden 100 \mul de
un compuesto de epotilona problema de la invención (de
concentración variable de 1000 nM a 0,001 nM diluida en medio de
crecimiento). Después de la incubación con el compuesto durante un
periodo de días, las células se fijan con 100 \mul de ácido
trifluoroacético al 10% ("TCA") a 4 grados durante 1 hora y se
tiñen con 0,2% de sulfurhodamina B (SRB)/1% de ácido acético y la
SRB unida se extrae después con 200 \mul de base Tris 10 mM. La
cantidad del pigmento unido se determina mediante DO 515 nm, que se
correlaciona con el contenido total de proteína celular. Los datos
se analizan usando metodologías estadísticas estándar (tales como
las disponibles con el software vendido como KALEIDA GRAPH® de
Synergy Software of Reading, PA) y se calculan las CI_{50}.
Los resultados de citotoxicidad para varios
compuestos de fórmula (I) se indican en las Tablas 1 y 2 más
adelante. Como se puede observar, los compuestos de la invención
pueden mostrar inesperadamente la actividad de citotoxicidad tan
buena o superior a la
trans-9,10-dehidroepotilona D.
También se puede realizar la detección selectiva
de los compuestos de la invención según la polimerización de la
tubulina usando ensayos convencionales bien conocidos para los
expertos en la técnica. Por ejemplo, los compuestos se pueden
analizar según la polimerización de la tubulina usando el
procedimiento de Giannakakou y col., J. Biol. Chem.
271:17118-17125 (1997) y/o Intl. J. Cancer
75:57-63 (1998), que se incorporan en la presente
memoria descriptiva por referencia. En este procedimiento, las
células MCF-7 se cultivan hasta la confluencia en
placas de cultivo de 35 mm y se tratan con 1 nM de un compuesto de
la invención durante 0, 1 ó 2 horas a 35ºC. Después de lavar las
células dos veces con 2 ml de solución salina tamponada con fosfato
(PBS) sin calcio o magnesio, las células se lisan a temperatura
ambiente durante 5-10 minutos con 300 \mul de
tampón de lisis (Tris 20 mM, pH 6,8, MgCl_{2} 1 mM, EDTA 2 mM, 1%
de Triton-X-100, más inhibidores de
la proteasa). Las células se raspan y los lisados se transfieren a
tubos de Eppendorf de 1,5 ml. Después, los lisados se centrifugan a
18000 g durante 12 minutos a temperatura ambiente. El sobrenadante
que contiene la tubulina soluble o sin polimerizar (citosólica) se
separa del precipitado que contiene la tubulina insoluble o
polimerizada (citoesquelética) y se transfiere a tubos nuevos.
Después, los precipitados se resuspenden en 300 \mul de tampón de
lisis. Los cambios en la polimerización de la tubulina en las
células se determinan analizando el mismo volumen de alícuotas de
cada muestra con SDS-PAGE, seguido por
inmunotransferencia usando un anticuerpo
anti-tubulina (Sigma).
\newpage
En otros aspectos, la presente invención se
refiere a composiciones que comprenden un compuesto de la presente
invención y un transportador farmacéuticamente aceptable. El
compuesto de la invención puede estar en forma libre o, cuando sea
adecuado, como derivados farmacéuticamente aceptables tales como
profármacos y sales y ésteres del compuesto de la invención.
Las composiciones de la invención pueden estar
en cualquier forma adecuada, tal como forma sólida, semisólida,
líquida o aerosol. Véase Pharmaceutical Dosage Forms and Drug
Delivery Systems, 5ª edición, Lippicott Williams & Wilkins
(1991), que se incorpora en la presente memoria descriptiva por
referencia. En general, el producto farmacéutico comprende uno o
más de los compuestos de la invención como ingrediente activo
mezclado con un transportador o excipiente orgánico o inorgánico
adecuado para aplicación externa, enteral o parenteral. El
ingrediente activo puede mezclarse con, por ejemplo, transportadores
convencionales farmacéuticamente aceptables no tóxicos para
comprimidos, píldoras, cápsulas, supositorios, pesarios, soluciones,
emulsiones, suspensiones y cualquier otras formas adecuadas para
usar. Transportadores farmacéuticamente aceptables para usar en las
composiciones incluyen, por ejemplo, agua, glucosa, lactosa, goma
arábiga, gelatina, manitol, pasta de almidón, trisilicato de
magnesio, talco, almidón de maíz, queratina, sílice coloidal,
almidón de patata, urea y otros portadores adecuados para usar en
la fabricación de preparaciones en forma sólida, semisólida, licuada
o aerosol. Las composiciones pueden comprender además agentes
auxiliares estabilizantes, espesantes y/o colorantes y
perfumes.
En una forma de realización, las composiciones
que comprenden un compuesto de la invención no tienen
Cremophor®. El Cremophor® (BASF Aktiengesellschaft) es un aceite de ricino polietoxilado que normalmente se usa como tensioactivo en la formulación de fármacos de baja solubilidad. No obstante, dado que Cremophor® puede causar reacciones alérgicas en un sujeto, se prefieren las composiciones que minimizan o eliminan el Cremophor®. Formulaciones de epotilona A o B que eliminan Cremophor® se describen en, por ejemplo, la publicación PCT WO 99/39694, que se incorpora en la presente memoria descriptiva por referencia, y pueden adaptarse para usar con los compuestos de la presente invención. Por ejemplo, las composiciones pueden comprender un compuesto de la invención junto con transportadores farmacéuticamente aceptables tales como alcoholes (por ejemplo, etanol), glicoles (por ejemplo, propilenglicol), compuestos de polioxietileno tales como polietilenglicoles (PEG), Tween® (monoésteres de polioxietilensorbitano; America ICI) y Solutol® (polietilenglicol 660 12-hidroxiestearato; BASF Aktiengesellschaft), o triglicéridos de cadena media (Miglyol®, Huls Aktiengesellschaft). En ciertas formas de realización de la invención, se proporcionan composiciones que comprenden un compuesto de fórmula (I) junto con etanol, propilenglicol y Tween-80®. En ciertas otras formas de realización de la invención, se proporcionan composiciones que comprenden un compuesto de fórmula (I) junto con etanol, propilenglicol y Solutol HS-15®. Como alternativa, las composiciones sin Cremophor® de la invención pueden comprender al menos una ciclodextrina y, en formas de realización más concretas, la ciclodextrina puede ser una hidroxialquil-\beta-ciclodextrina o sulfoalquil-\beta-ciclodextrina, y, en una forma de realización todavía más concreta, una hidroxipropil-\beta-ciclodextrina o sulfobutil-\beta ciclodextrina. Formas de realización todavía más concretas en las que el transportador incluye una hidroxipropil-\beta ciclodextrina incluyen aquéllas para las que la hidroxipropil-\beta ciclodextrina tiene un grado de sustitución de al menos aproximadamente 4,6% y, más específicamente, un grado de sustitución de al menos aproximadamente 6,5%. Formas de realización todavía más específicas de la composición de la invención son aquéllas para las que el transportador comprende una hidroxipropil-\beta-ciclodextrina que tiene un grado de sustitución entre aproximadamente 4,6% y aproximadamente 6,5%.
Cremophor®. El Cremophor® (BASF Aktiengesellschaft) es un aceite de ricino polietoxilado que normalmente se usa como tensioactivo en la formulación de fármacos de baja solubilidad. No obstante, dado que Cremophor® puede causar reacciones alérgicas en un sujeto, se prefieren las composiciones que minimizan o eliminan el Cremophor®. Formulaciones de epotilona A o B que eliminan Cremophor® se describen en, por ejemplo, la publicación PCT WO 99/39694, que se incorpora en la presente memoria descriptiva por referencia, y pueden adaptarse para usar con los compuestos de la presente invención. Por ejemplo, las composiciones pueden comprender un compuesto de la invención junto con transportadores farmacéuticamente aceptables tales como alcoholes (por ejemplo, etanol), glicoles (por ejemplo, propilenglicol), compuestos de polioxietileno tales como polietilenglicoles (PEG), Tween® (monoésteres de polioxietilensorbitano; America ICI) y Solutol® (polietilenglicol 660 12-hidroxiestearato; BASF Aktiengesellschaft), o triglicéridos de cadena media (Miglyol®, Huls Aktiengesellschaft). En ciertas formas de realización de la invención, se proporcionan composiciones que comprenden un compuesto de fórmula (I) junto con etanol, propilenglicol y Tween-80®. En ciertas otras formas de realización de la invención, se proporcionan composiciones que comprenden un compuesto de fórmula (I) junto con etanol, propilenglicol y Solutol HS-15®. Como alternativa, las composiciones sin Cremophor® de la invención pueden comprender al menos una ciclodextrina y, en formas de realización más concretas, la ciclodextrina puede ser una hidroxialquil-\beta-ciclodextrina o sulfoalquil-\beta-ciclodextrina, y, en una forma de realización todavía más concreta, una hidroxipropil-\beta-ciclodextrina o sulfobutil-\beta ciclodextrina. Formas de realización todavía más concretas en las que el transportador incluye una hidroxipropil-\beta ciclodextrina incluyen aquéllas para las que la hidroxipropil-\beta ciclodextrina tiene un grado de sustitución de al menos aproximadamente 4,6% y, más específicamente, un grado de sustitución de al menos aproximadamente 6,5%. Formas de realización todavía más específicas de la composición de la invención son aquéllas para las que el transportador comprende una hidroxipropil-\beta-ciclodextrina que tiene un grado de sustitución entre aproximadamente 4,6% y aproximadamente 6,5%.
En una forma de realización de la invención, la
composición comprende un compuesto de fórmula (I), un alcohol, un
glicol y una ciclodextrina. En ciertas formas de realización, la
composición comprende un compuesto de fórmula (I), etanol,
propilenglicol y una ciclodextrina. En una forma de realización, la
composición comprende un compuesto de fórmula (I), junto con
aproximadamente un 5% a aproximadamente 20% de etanol, de
aproximadamente 1% a aproximadamente 10% de propilenglicol y de
aproximadamente 5% a aproximadamente 20% de una
\beta-ciclodextrina. En una forma de realización
concreta, la composición comprende un compuesto de fórmula (I),
junto con aproximadamente un 7% de etanol, aproximadamente 3% de
propilenglicol y aproximadamente 12% de una
\beta-ciclodextrina.
Cuando sea aplicable, los compuestos de la
invención pueden formularse en forma de microcápsulas y/o
nanopartículas. Protocolos generales se describen en, por ejemplo,
Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy, Max
Donbrow, ed., CRC Press (1992) y las patentes de EE.UU. Nº
5.510.118; 5.534.270; y 5.662.883, todos ellos se incorporan en la
presente memoria descriptiva por referencia. Aumentando la
proporción del área de superficie y el volumen, estas formulaciones
permiten la administración oral de compuestos que, de otro modo, no
podrían administrase por vía oral.
Las composiciones de la invención también pueden
formularse usando otros procedimientos que se han usado
anteriormente para fármacos de baja solubilidad. Por ejemplo, los
compuestos de la invención se pueden formular en emulsiones con
vitamina E o un derivado PEGilado de la misma tal como se describe
en los documentos WO 98/30205 y WO 00/71163, que se incorporan en
la presente memoria descriptiva por referencia. Normalmente, el
compuesto se disuelve en una solución acuosa que contiene etanol
(preferentemente menos del 1% p/v) y, después, se añade la vitamina
E o una vitamina E PEGilada. A continuación, el etanol se elimina
para formar una pre-emulsión que se puede formular
para las vías de administración intravenosa u oral. Como
alternativa, los compuestos de la invención pueden encapsularse en
liposomas. Los procedimientos para formar liposomas como vehículos
de liberación de fármaco son bien conocidos en la técnica.
Protocolos adecuados incluyen los descritos por las patentes de
EE.UU. 5,683,715; 5,415,869, and 5,424,073, que se incorporan en la
presente memoria descriptiva por referencia, en relación con otro
fármaco para el cáncer de relativamente baja solubilidad Taxol y en
la publicación PCT WO 01/10412, que se incorpora en la presente
memoria descriptiva por referencia, en relación con la epotilona B.
De los varios lípidos que se pueden usar, lípidos actualmente
particularmente preferidos para formar liposomas de epotilona
encapsulados incluyen, por ejemplo, fosfatidilcolina y
fosfatidiletanolamina de diestearilo derivadas con
polietilenglicol.
En otras formas de realización más, las
composiciones de la invención pueden comprender polímeros, tales
como biopolímeros o polímeros biocompatibles (sintéticos o
naturales). Los polímeros biocompatibles se pueden clasificar como
biodegradables y no biodegradables. Los polímeros biodegradables se
degradan in vivo como una función de la composición química,
el procedimiento de fabricación y/o la estructura del implante.
Ejemplos ilustrativos de polímeros sintéticos incluyen, por
ejemplo, polianhídridos, polihidroxiácidos tales como ácido
poliláctico, ácidos poliglicólicos y copolímeros de los mismos,
poliésteres, poliamidas, poliortoésteres y algunos polifosfacenos.
Ejemplos ilustrativos de polímeros naturales incluyen proteínas y
polisacáridos tales como colágeno, ácido hialurónico, albúmina y
gelatina.
En otras formas de realización más, los
compuestos de la presente invención pueden conjugarse con un
polímero que potencia la solubilidad acuosa. Ejemplos
representativos de polímeros adecuados para este fin incluyen
polietilenglicol, poli-(ácido d-glutámico), poli
(ácido 1-glutámico), poli-(ácido
d-aspártico), poli-(ácido
1-aspártico) y copolímeros de los mismos. Se
prefieren los ácidos poliglutámicos que tienen pesos moleculares
entre aproximadamente 5.000 a aproximadamente 100.000, siendo más
preferidos los pesos moleculares entre aproximadamente 20.000 y
aproximadamente 80.000 y siendo los más preferidos los pesos
moleculares entre aproximadamente 30.000 y 60.000. El polímero se
conjuga mediante un enlace éster a uno o más hidroxilos de una
epotilona de la invención usando un protocolo como el descrito
esencialmente en la patente de EE.UU.'Nº 5.977.163, que se incorpora
en la presente memoria descriptiva por referencia. Los puntos de
conjugación preferidos incluyen los grupos
3-hidroxilo y 7-hidroxilo.
En todavía otras formas de realización más, los
compuestos de la invención pueden estar conjugados con un
anticuerpo monoclonal. Esta estrategia permite dirigir los
compuestos a dianas específicas. Protocolos generales para el
diseño y uso de anticuerpos conjugados se describen en Monoclonal
Antibody-Based Therapy of Cancer, Michael L.
Grossbard, ed. (1998), que se incorporan en la presente memoria
descriptiva por referencia.
La cantidad de ingrediente activo incorporado en
las composiciones de la invención para producir una única forma de
dosificación variará en función del sujeto tratado y el modo de
administración concreto. La magnitud de la dosis terapéutica de los
compuestos de la invención variará con la naturaleza y gravedad de
la afección que se va a tratar y con el compuesto concreto y su vía
de administración. En general, el intervalo de dosis diario para la
actividad anticancerosa se encuentra en el intervalo de 0,001 a 100
mg/kg de peso corporal en un mamífero, preferentemente de 0,01 a 80
mg/kg y, más preferentemente, de 0,1 a 70 mg/kg, en dosis únicas o
múltiples. En casos poco habituales, puede ser necesario administrar
dosis superiores a 100 mg/kg.
En otros aspectos se describen procedimientos
para tratar enfermedades hiperproliferativas, tales como cáncer,
normalmente, pero no necesariamente, en un mamífero. En una forma de
realización, los compuestos de la presente invención se usan para
tratar cánceres de cabeza y cuello, que incluyen tumores de la
cabeza, el cuello, la cavidad nasal, los senos paranasales, la
nasofaringe, la cavidad oral, la orofaringe, la laringe, la
hipofaringe, las glándulas salivares y los paragangliomas. Los
compuestos de la presente invención se usan para tratar cánceres
del hígado y el árbol biliar, particularmente el carcinoma
hepatocelular. En otra forma de realización, los compuestos de la
presente invención se usan para tratar cánceres intestinales, en
particular el cáncer colorrectal. En otra forma de realización, los
compuestos de la presente invención se usan para tratar el cáncer
de ovarios. Los compuestos de la presente invención se usan para
tratar cáncer pulmonar de células pequeñas y no pequeñas. En otra
forma de realización, los compuestos de la presente invención se
usan para tratar el cáncer de mama. Los compuestos de la presente
invención se usan para tratar sarcomas, tales como fibrosarcoma,
histiocitoma fibroso maligno, rabdomiosarcoma embrionario,
leiomiosarcoma, neurofibrosarcoma, osteosarcoma, sarcoma sinovial,
liposarcoma y sarcoma alveolar de partes blandas. Los compuestos de
la presente invención se usan para tratar neoplasias de los
sistemas nervioso central, particularmente el cáncer de cerebro.
Los compuestos de la presente invención se usan para tratar
linfomas, que incluyen linfoma de Hodgkin, linfoma
linfoplasmacitoide, linfoma folicular, linfoma de tejido linfoide
asociado con la mucosa, linfoma de células del manto, linfoma de
células grandes de linaje B, linfoma de Burkitt y linfoma de células
grandes anaplásicas de células T.
Los compuestos y composiciones de la invención
se pueden administrar a un sujeto que necesite tal tratamiento una
cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un compuesto o
composición de la invención. La administración al sujeto puede
repetirse según sea necesario para contener (es decir, prevenir el
posterior crecimiento) o eliminar el cáncer. Clínicamente, la
práctica del procedimiento tendrá como resultado una reducción del
tamaño o el número de los crecimientos cancerosos y/o una reducción
de los síntomas asociados (cuando sea aplicable). Patológicamente,
la práctica del procedimiento producirá al menos uno de los
siguientes: inhibición de la proliferación de células cancerosas,
reducción del tamaño del cáncer o del tumor, prevención de
metástasis adicionales e inhibición de la angiogénesis tumoral.
Los compuestos y composiciones de la invención
se pueden administrar en terapias de combinación, bien de forma
concurrente, antes o después de uno o más de los otros
procedimientos terapéuticos o médicos deseados. La combinación de
terapias y procedimientos concreta en el régimen de combinación
tendrá en cuenta la compatibilidad de las terapias y/o
procedimientos y el efecto terapéutico que se desea conseguir.
Ejemplos de combinaciones adecuadas incluyen un compuesto de la
invención y uno o más de azacitidina, cladribina, citarabina,
floxuridina, fludarabina fosfato, gemcitabina, pentostatina,
mostaza de uracilo o un análogo nucleosídico, tal como
5-fluorouracilo ("5FU") o un profármaco de los
mismos, tal como
5\alpha-desoxi-5-fluoro-N-[(pentiloxi)carbonil]-citidina
(comercializado con el nombre XELODA® (Roche, Basilea, Suiza)),
que es un profármaco sistémico administrado por vía oral de
5'-desoxi-5-fluorouridina
(5'-DFUR), que in vivo se convierte en
5-fluorouracilo.
En una forma de realización, los compuestos y
composiciones de la presente invención se usan en combinación con
otro agente o procedimiento anti-canceroso. Ejemplos
ilustrativos de otros agentes anti-cancerosos
incluyen, entre otros:
(i) fármacos alquilantes tales como
mecloretamina, clorambucilo, ciclofosfamida, melfalán, ifosfamida;
(ii) antimetabolitos tales como metotrexato; (iii) agentes
estabilizantes de microtúbulos tales como vinblastina, paclitaxel,
docetaxel y discodermolida; (iv) inhibidores de la angiogénesis; y
(v) antibióticos citotóxicos tales como doxorubicon (adriamicina),
bleomicina y mitomicina. Ejemplos ilustrativos de otros
procedimientos anti-cancerosos incluyen: (i)
cirugía; (ii) radioterapia; y (iii) terapia fotodinámica.
En otras formas de realización, los compuestos
y/o composiciones de la invención se pueden usar en combinación con
un agente o procedimiento para mitigar los posibles efectos
secundarios de los compuestos o composiciones, tales como diarrea,
náuseas y vómitos. La diarrea se puede tratar con agentes
antidiarreicos tales como opioides (p. ej., codeína, difenoxilato,
difenoxina y loeramida), subsalicilato de bismuto y octeótrido. Las
náuseas y los vómitos pueden tratarse con agentes antieméticos
tales como dexametasona, metoclopramida, difenhidramina, lorazepam,
ondansetrón, proclorperacina, trietilperacina y dronabinol. Para las
composiciones que incluyen aceite de ricino polietoxilado tal como
Cremophor®, el pretratamiento con corticosteroides tales como
dexametasona y metilprednisolona y/o antagonistas H_{1} tales
como difenilhidramina HCl y/o antagonistas H_{2} pueden usarse
para mitigar la anafilaxia.
Los compuestos y/o composiciones de la invención
pueden usarse para tratar trastornos no cancerosos que se
caracterizan por hiperproliferación celular. Los compuestos de la
presente invención se pueden usar para tratar la psoriasis, un
trastorno que se caracteriza por la hiperproliferación celular de
los queratinocitos que se acumulan en la piel y forman lesiones
escamosas elevadas. Este procedimiento comprende administrar una
cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o composición de la
invención a un sujeto que sufre psoriasis. La administración se
puede repetir según sea necesario para disminuir el número o
gravedad de las lesiones o eliminar las lesiones. Clínicamente, la
práctica del procedimiento tendrá resultado una reducción del tamaño
o el número de las lesiones cutáneas y la disminución de los
síntomas cutáneos (dolor, ardor y hemorragia en la piel afectada)
y/o una reducción de los síntomas asociados (p. ej., enrojecimiento
de las articulaciones, calor, inflamación, diarrea, dolor
abdominal). Patológicamente, la práctica del procedimiento tendrá
como resultado al menos uno de los siguientes: Inhibición de la
proliferación de queratinocitos, reducción de la inflamación de la
piel (mediante, por ejemplo, impacto sobre: factores de atracción y
de crecimiento, presentación antigénica, producción de especies de
oxígeno reactivo y metaloproteinasas de la matriz) e inhibición de
la angiogénesis dérmica.
Los compuestos de la presente invención pueden
usarse para tratar la esclerosis múltiple, una afección que se
caracteriza por una desmielinización progresiva del cerebro. Aunque
los mecanismos exactos implicados en la pérdida de mielina no se
conocen, existe un incremento de la proliferación y acumulación de
astrocitos en las zonas de destrucción de mielina. En estos puntos
existe una actividad similar a la de los macrófagos y un incremento
de la actividad de la proteasa que es, al menos, parcialmente
responsable de la degradación de la vaina de mielina. Este
procedimiento comprende administrar una cantidad terapéuticamente
eficaz de un compuesto o composición de la invención a un sujeto
que sufre esclerosis múltiple. Dicha administración puede repetirse
según sea necesario para inhibir la proliferación de astrocitos y/o
disminuir la gravedad de la pérdida de la función motora y/o
prevenir o atenuar la progresión crónica de la enfermedad.
Clínicamente, la práctica de este procedimiento tendrá como
resultado una mejora de los síntomas visuales (pérdida de visión,
diplopía), trastornos de la marcha (debilidad, inestabilidad axial,
pérdida sensorial, espasticidad, hiperreflexia, pérdida de
destreza), disfunción de las extremidades superiores (debilidad,
espasticidad, pérdida sensora), disfunción de la vejiga urinaria
(urgencia, incontinencia, vacilación, vaciado incompleto),
depresión, labilidad emocional y alteraciones cognitivas.
Patológicamente, la práctica del procedimiento tendrá como resultado
la reducción de uno o más de los siguientes, tales como pérdida de
mielina, degradación de la barrera hematoencefálica, infiltración
perivascular de células mononucleares, anomalías inmunológicas,
formación de cicatriz gliótica y proliferación de astrocitos,
producción de metaloproteinasa y alteración de la velocidad de
conducción.
Los compuestos y/o composiciones de la invención
se usan para tratar la artritis reumatoide, una enfermedad
inflamatoria recidivante crónica de múltiples sistemas que, en
ocasiones, conduce a la destrucción y alquilosis de las
articulaciones afectadas. La artritis reumatoide se caracteriza por
un marcado engrosamiento de la membrana sinovial que forma
proyecciones villosas que se extienden hacia el espacio articular,
multicapas del revestimiento de los sinoviocitos (proliferación de
sinoviocitos), infiltración de la membrana sinovial con glóbulos
blancos (macrófagos, linfocitos, células plasmáticas y folículos
linfoides; que se denomina "sinovitis inflamatoria") y
depósito de fibrina con necrosis celular dentro del sinovio. El
tejido formado como resultado de este proceso se denomina paño y,
en último término, el paño crece para llenar el espacio articular.
El paño desarrolla una extensa red de vasos sanguíneos nuevos a
través del proceso de angiogénesis que es esencial para la
evolución de la sinovitis. La liberación de enzimas digestivas
(metaloproteinasas de la matriz (p. ej., colagenasa,
estromelisina)) y otros mediadores del proceso inflamatorio (p. ej.,
peróxido de hidrógeno, superóxidos, enzimas lisosomales y productos
del metabolismo del ácido araquidónico) de las células del tejido
del paño conduce a la destrucción progresiva del tejido
cartilaginoso. El paño invade el cartílago articular y produce
erosiones y fragmentación del tejido cartilaginoso. En última
instancia se produce la erosión del hueso subcondral con anquilosis
fibrosa y, en último término, anquilosis ósea, de la articulación
implicada. En este aspecto de la invención, se administra a un
sujeto que sufre artritis reumatoide una cantidad terapéuticamente
eficaz de un compuesto y/o composición de la invención. Dicha
administración puede repetirse según sea necesario para conseguir
inhibir la proliferación de los sinoviocitos y/o disminuir la
gravedad de la pérdida de movimiento de las articulaciones
afectadas y/o prevenir o atenuar la progresión crónica de la
enfermedad. Clínicamente, la práctica de la presente invención
tendrá como resultado uno o más de los siguientes: (i) disminución
de la gravedad de los síntomas (dolor, inflamación y tumefacción de
las articulaciones afectadas; rigidez matutina, debilidad, fatiga,
anorexia, pérdida de peso); (ii) disminución de la gravedad de los
signos clínicos de la enfermedad (engrosamiento de la cápsula
articular, hipertrofia sinovial, derrame articular, contracturas de
los tejidos blandos, disminución del rango de movimiento, anquilosis
y deformidad de la articulación fija); (iii) disminución de las
manifestaciones extraarticulares de la enfermedad (nódulos
reumáticos, vasculitis, nódulos pulmonares, fibrosis intersticial,
pericarditis, epiescleritis, iritis, síndrome de Felty,
osteoporosis); (iv) incremento de la frecuencia y la duración de
los periodos de remisión/sin síntomas de la enfermedad; (v)
prevención de la alteración y la discapacidad fijas; y/o (vi)
prevención/atenuación de la progresión crónica de la enfermedad,
Patológicamente, la práctica de la presente invención producirá al
menos uno de los siguientes: (i) disminución de la respuesta
inflamatoria; (ii) alteración de la actividad de las citoquinas
inflamatorias (tales como IL-I, 1NFa, FGF, VEGF);
(iii) inhibición de la proliferación de sinoviocitos; (iv)
inhibición de la actividad de la metaloproteinasa de la matriz y/o
(v) inhibición de la angiogénesis.
Los compuestos y/o composiciones de la presente
invención pueden usarse para tratar la aterosclerosis y/o la
reestenosis, en particular en pacientes cuyos bloqueos pueden
tratarse con una endoprótesis endovascular. La aterosclerosis es
una lesión vascular crónica en la que algunas de las células del
músculo liso vascular normales ("CMLV") de la pared arterial,
que normalmente controlan el tono vascular regulando el flujo
sanguíneo, cambian su naturaleza y desarrollan un comportamiento
"de tipo cáncer". Estas CMLV se convierten en anormalmente
proliferativas, secretan sustancias (factores de crecimiento,
enzimas de degradación tisular y otras proteínas) que les permiten
invadir y diseminarse por el revestimiento interno de los vasos,
bloquean el flujo sanguíneo y hacen que los vasos sean anormalmente
susceptibles a un bloqueo completo mediante coagulación sanguínea
local. La reestenosis, la recurrencia de la estenios o constricción
arterial después de procedimientos correctores, es una forma
acelerada de aterosclerosis. En este aspecto de la invención, una
cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o composición de
la invención puede recubrir una endoprótesis y colocarse la
endoprótesis en la arteria enferma en un sujeto que sufre
aterosclerosis. Procedimientos para recubrir una endoprótesis con
un compuesto se describen en, por ejemplo, las patentes de EE.UU. Nº
6.156.373 y 6.120. 847, que se incorporan en la presente memoria
descriptiva por referencia. Clínicamente, la práctica de la presente
invención tendrá como resultado uno o más de los siguientes: (i)
aumento del flujo sanguíneo arterial; (ii) disminución de la
gravedad de los signos clínicos de la enfermedad; (iii) disminución
del índice de reestenosis; o (iv) prevención/atenuación de la
progresión crónica de la aterosclerosis. Patológicamente, la
práctica de la presente invención producirá al menos uno de los
siguientes en el punto de la implantación de la endoprótesis: (i)
disminución de la respuesta inflamatoria, (ii) inhibición de la
secreción de V5MC de metaloproteinasas de la matriz; (iii)
inhibición de la acumulación en las células de músculo liso; y (iv)
inhibición de la desdiferenciación fenotípica V5MC.
Los niveles de dosificación que se administran a
un sujeto que sufre cáncer o un trastorno no canceroso caracterizado
por hiperproliferación celular son del orden de aproximadamente 1
mg/m^{2} a aproximadamente 200 mg/m^{2}, que se pueden
administrar en forma de bolo (en cualquier vía de administración
adecuada) o de infusión continua (p. ej., 1 hora, 3 horas, 6 horas,
24 horas, 48 horas o 72 horas), cada semana, cada dos semanas o cada
tres semanas, según sea necesario. No obstante, debe entenderse que
el nivel específico de dosis para cualquier paciente concreto
depende de varios factores. Estos factores incluyen la actividad del
compuesto específico empleado; la edad, peso corporal, estado de
salud general, sexo y dieta del sujeto; el momento y la vía de
administración y la tasa de excreción del fármaco; si se emplea una
combinación farmacológica en el tratamiento y la gravedad del
trastorno que se está tratando.
Los niveles de dosificación pueden ser de
aproximadamente 10 mg/m^{2} a aproximadamente 150 mg/m^{2},
preferentemente de aproximadamente 10 mg/m^{2} a aproximadamente
75 mg/m^{2} y, más preferentemente de aproximadamente 15
mg/m^{2} a aproximadamente 50 mg/m^{2}, una vez cada tres
semanas según sea necesario y tolerado. Los niveles de dosificación
pueden ser de aproximadamente 1 mg/m^{2} a aproximadamente 150
mg/m^{2}, preferentemente de aproximadamente 10 mg/m^{2} a
aproximadamente 75 mg/m^{2} y, más preferentemente de
aproximadamente 25 mg/m^{2} a aproximadamente 50 mg/m^{2}, una
vez cada dos semanas según sea necesario y tolerado. Los niveles de
dosificación pueden ser de aproximadamente 1 mg/m^{2} a
aproximadamente 100 mg/m^{2}, preferentemente de aproximadamente
5 mg/m^{2} a aproximadamente 50 mg/m^{2} y, más preferentemente
de aproximadamente 10 mg/m^{2} a aproximadamente 25 mg/m^{2},
una vez a la semana según sea necesario y tolerado. Los niveles de
dosificación pueden ser de aproximadamente 0,1 mg/m^{2} a
aproximadamente 25 mg/m^{2}, preferentemente de aproximadamente
0,5 mg/m^{2} a aproximadamente 15 mg/m^{2} y, más
preferentemente de aproximadamente 1 mg/m^{2} a aproximadamente
10 mg/m^{2}, una vez al día según sea necesario y tolerado.
Habiéndose proporcionado en lo que antecede una
descripción detallada de la invención, se dan los ejemplos
siguientes para el propósito de la ilustración.
\newpage
Ejemplo comparativo
1
(Compuesto 2); R = Me; P =
Et_{3}Si)
A una solución de 9-oxoepotilona
D y 2,6-lutidina en diclorometano a temperatura
ambiente se añade clorotrietilsilano y se agita hasta que la
reacción está sustancialmente completa determinado usando
procedimientos conocidos en las técnicas de síntesis orgánica (p.
ej., monitorización mediante cromatografía de capa fina ("TLC")
o cromatografía de líquidos ("LC"), normalmente durante la
noche. Después, la solución producto se diluye con diclorometano y
se lava secuencialmente con agua, solución de bicarbonato sódico
acuoso saturado ("NaHCO_{3} ac. sat.") y salmuera, y,
después, se seca sobre sulfato de magnesio (("MgSO_{4}"), se
filtra y se evapora hasta sequedad. El producto deseado se purifica
mediante cromatografía en gel de sílice usando un sistema
disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, un gradiente de acetato
de etilo en hexanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
2
(Compuesto (2); R = Me; P =
^{t}BuMe_{2}Si)
Por analogía de los detalles proporcionados en
el ejemplo 1 en lo que antecede, a una solución de
9-oxoepotilona d y 2,6-lutidina en
diclorometano a temperatura ambiente se añade
trifluorometanosulfonato de terc-butildimetilsililo y se
agita durante la noche. La mezcla se diluye con diclorometano y se
lava secuencialmente con agua, NaHCO_{3} ac. sat. y salmuera,
después se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se evapora hasta
sequedad. El producto se purifica mediante cromatografía en gel de
sílice usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
3
(Compuestos (2): R = Me;P =
CO_{2}CH_{2}CCl_{3})
Una solución de 9-oxoepotilona D
(80 mg) en 1,5 ml de piridina se trató con cloroformiato de
2,2,2-tricloroetilo (134 mg) durante 16 horas a
temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con acetato de etilo, se
lavó sucesivamente con NH_{4}Cl saturado y salmuera, se secó
sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se evaporó. La cromatografía en
gel de sílice (40% de acetato de etilo/hexanos) dio 162 mg de
producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de
9-oxo-8-epi-epotilona
D (0,100 g, 0,198 mmol) en piridina (2,0 ml) se añadió cloroformiato
de 2,2,2-tricloroetilo (0,27 ml, 0,420 g, 1,980
mmol), seguido por dimetilaminopiridina (0,002 g, 0,020 mmol). La
solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas
antes de repartir entre acetato de etilo (20 ml) y NaHCO_{3} ac.
(20 ml). Las fases orgánicas se lavaron además con NH_{4}Cl ac.
sat. (2 x 20 ml) y salmuera (20 ml) antes de secar
(Na_{2}SO_{4}), filtrar y concentrar a presión reducida. La
cromatografía en columna (gel de sílice, 40% de acetato de
etilo-hexano) dio el producto en forma de aceite
incoloro (0,125 g, 74%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
5
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Etapa 1.
Cetoreducción
(Compuesto (3); R = Me; P =
Et_{3}Si; X =
S)
A una solución de
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9-oxoepotilona
D en metanol a 0ºC se añade 1 equivalente de borohidruro sódico. La
solución se agita a 0ºC durante 40 minutos antes de añadir
NH_{4}Cl acuoso. Las fases orgánicas se extraen con acetato de
etilo y se combinan antes de secar (Na_{2}SO_{4}) filtrar y
concentrar a presión reducida. La cromatografía en columna (sílice,
EtOAc-hexano) da el producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
6
(Compuesto (3); R = Me; P =
^{t}BuMe_{2}Si;X =
S)
A una solución de
3,7-bis-O-(terc-butilmetilsilil)-9-oxoepotilona
D en metanol a 0ºC se añade 1 equivalente de borohidruro sódico. La
solución se agita a 0ºC durante 40 minutos antes de añadir
NH_{4}Cl acuoso. Las fases orgánicas se extraen con acetato de
etilo y se combinan antes de secar (Na_{2}SO_{4}) filtrar y
concentrar a presión reducida. La cromatografía en columna (sílice,
EtOAc-hexano) da el producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
7
(Compuesto (3); R = Me; P =
CO_{2}CH_{2}CCl_{3};X =
S)
A una solución de
3,7-bis-O-(2,2,2-tricloroetoxicarbonil)-9-oxoepotilona
D en metanol a 0ºC se añade 1 equivalente de borohidruro sódico. La
solución se agita a 0ºC durante 40 minutos antes de añadir
NH_{4}Cl acuoso. Las fases orgánicas se extraen con acetato de
etilo y se combinan antes de secar (Na_{2}SO_{4}) filtrar y
concentrar a presión reducida. La cromatografía en columna (sílice,
EtOAc-hexano) da
3,7-bis-O-(2,2,2-tricloroetoxicarbonil)-9-hidroxiepotilona
D.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
8
A una solución de
3,7-bis-O-(2,2,2-tricloroetoxicarbonil)-8-epi-9-oxoepotilona
D (0,125 g, 0,131 mmol) en metanol (2,0 ml) a 0ºC se añadió
borohidruro sódico (0,005 g, 0,131 mmol). La solución se agitó a 0ºC
durante 40 minutos antes de añadir NH_{4}Cl acuoso (15 ml). Las
fases orgánicas se extrajeron con acetato de etilo (3 x 15 ml) y se
combinaron antes de secar (Na_{2}SO_{4}) filtrar y concentrar a
presión reducida. La cromatografía en columna (sílice, 20% de
EtOAc-hexano) dio
3,7-bis-O-(2,2,2-tricloroetoxicarbonil)-8-epi-9-hidroxiepotilona
D en forma de un aceite incoloro.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
9
Etapa 2.
Activación
(Compuesto (4); R = Me; P =
Et_{3}Si; X = S; Y =
MeSO_{2}O)
A una solución de
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9-hidroxi
epotilona D y 4-(dimetilamino)piridina en diclorometano se
añade cloruro de metanosulfonilo. Después de agitar durante 12
horas, la mezcla se diluye con diclorometano y se lava
secuencialmente con agua, NaHCO_{3} ac. sat. y salmuera, después
se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se evapora hasta sequedad. El
producto se purifica mediante cromatografía en gel de sílice usando
un gradiente de acetato de etilo en hexanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
10
(Compuestos (4); R = Me; P =
^{t}BuMe_{2}Si; X = S; Y
MeSO_{2}O)
A una solución de
3,7-bis-O-(terc-butildimetilsilil)-9-hidroxi
epotilona D y 4-(dimetilamino)piridina en diclorometano se
añade cloruro de metanosulfonilo. Después de agitar durante 12
horas, la mezcla se diluye con diclorometano y se lava
secuencialmente con agua, NaHCO_{3} ac. sat. y salmuera, después
se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se evapora hasta sequedad. El
producto se purifica mediante cromatografía en gel de sílice usando
un gradiente de acetato de etilo en hexanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
11
(Compuesto (4); R = Me; P =
CO_{2}CH_{2}CCl_{2}; X = S; Y =
MeSO_{2}O)
A una solución de
3,7-bis-O-(2,2,2-tricloroetoxicarbonill)-9-hidroxiepotilona
D y 4-(dimetilamino)piridina en diclorometano se añade
cloruro de metanosulfonilo. Después de agitar durante 12 horas, la
mezcla se diluye con diclorometano y se lava secuencialmente con
agua, NaHCO_{3} ac. sat. y salmuera, después se seca sobre
MgSO_{4}, se filtra y se evapora hasta sequedad. El producto se
purifica mediante cromatografía en gel de sílice usando un
gradiente de acetato de etilo en hexanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
12
(Compuesto (4); R = Me; P =
Et_{3}Si:X = S; Y =
CF_{3}SO_{2}O)
A una solución de
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9-hidroxiepotilona
D en THF a -78ºC se añade, gota a gota, una solución 1,0M de
bis(trimetilsilil)amida sódica en THF. Después de 30
minutos, gota a gota se añade anhídrido trifluorometanosulfónico y
se deja calentar la mezcla a temperatura ambiente. La mezcla se
diluye en éter y se lava secuencialmente con agua, NaHCO_{3} ac.
sat. y salmuera, después se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se
evapora hasta sequedad. El producto se usa sin purificación
adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
13
(Compuesto (4); R = Me; P =
^{t}BuMe_{2}Si; X = S; Y =
CF_{3}SO_{2}O)
A una solución de
3,7-bis-O-(terc-butildimetilsilil)-9-hidroxiepotilona
D en THF a -78ºC se añade, gota a gota, una solución 1,0M de
bis(trimetilsilil)amida sódica en THF. Después de 30
minutos, gota a gota se añade anhídrido trifluorometanosulfónico y
se deja calentar la mezcla a temperatura ambiente. La mezcla se
diluye en éter y se lava secuencialmente con agua, NaHCO_{3} ac.
sat. y salmuera, después se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se
evapora hasta sequedad. El producto se usa sin purificación
adicional.
\newpage
Ejemplo comparativo
14
(Compuesto (4); R = Me:P =
CO_{2}CH_{2}CCl_{3}; X = S; Y =
CF_{3}SO_{2}O)
A una solución de
3,7-bis-O-(2,2,2-tricloroetoxicarbonil)-9-hidroxiepotilona
D en THF a -78ºC se añade, gota a gota, una solución 1,0M de
bis(trimetilsilil)amida sódica en THF. Después de 30
minutos, gota a gota se añade anhídrido trifluorometanosulfónico y
se deja calentar la mezcla a temperatura ambiente. La mezcla se
diluye en éter y se lava secuencialmente con agua, NaHCO_{3} ac.
sat. y salmuera, después se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se
evapora hasta sequedad. El producto se usa sin purificación
adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
15
Etapa 3.
Eliminación
(Compuesto (5); R = Me; P =
Et_{3}Si; X =
S)
Una solución de
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9-(metanosulfoniloxi)epotilona
D en THF se enfría hasta -78ºC y se trata con 1 equivalente de una
solución 1,0M de bis(trimetilsilil)amida sódica en
THF. La mezcla se deja calentar hasta la temperatura ambiente y,
después, se vierte en NH_{4}Cl acuoso saturado y se extrae con
acetato de etilo. El extracto se lava secuencialmente con agua,
NaHCO_{3} ac. sat. y salmuera, después se seca sobre MgSO_{4},
se filtra y se evapora hasta sequedad. El producto se purifica
mediante cromatografía en gel de sílice usando un gradiente de
acetato de etilo en hexanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
16
(Compuesto (5):R = Me, P =
^{t}BuMe_{2}2si; X =
S)
Una solución de
3,7-bis-O-(terc-butildimetilsilil)-9-(metanosulfoniloxi)epotilona
D en THF se enfría hasta -78ºC y se trata con 1 equivalente de una
solución 1,0M de bis(trimetilsilil)amida sódica en
THF. La mezcla se deja calentar hasta la temperatura ambiente y,
después, se vierte en NH_{4}Cl acuoso saturado y se extrae con
acetato de etilo. El extracto se lava secuencialmente con agua,
NaHCO_{3} ac. sat. y salmuera, después se seca sobre MgSO_{4},
se filtra y se evapora hasta sequedad. El producto se purifica
mediante cromatografía en gel de sílice usando un gradiente de
acetato de etilo en hexanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
17
(Compuesto (5); R = Me; P =
CO_{2}CH_{2}CCl_{3}; X =
S)
Una solución de
3,7-bis-O-(2,2,2-tricloroetoxicarbonil)-9-(metanosulfoniloxi)epotilona
D en THF se enfría hasta -78ºC y se trata con 1 equivalente de una
solución 1,0M de bis(trimetilsilil)amida sódica en
THF. La mezcla se deja calentar hasta la temperatura ambiente y,
después, se vierte en NH_{4}Cl acuoso saturado y se extrae con
acetato de etilo. El extracto se lava secuencialmente con agua,
NaHCO_{3} ac. sat. y salmuera, después se seca sobre MgSO_{4},
se filtra y se evapora hasta sequedad. El producto se purifica
mediante cromatografía en gel de sílice usando un gradiente de
acetato de etilo en hexanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
18
(Compuesto (5); R = Me; P =
Et_{3}Si; X =
S)
Una solución de
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9-(trifluorometanosulfoniloxi)epotilona
D en THF se trata con
2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina
a 0ºC. La mezcla se deja calentar hasta la temperatura ambiente,
después se vierte en NH_{4}Cl acuoso saturado y se extrae con
acetato de etilo. El extracto se lava secuencialmente con agua, HCl
1N, NaHCO_{3} ac. sat. y salmuera, después se seca sobre
MgSO_{4}, se filtra y se evapora hasta sequedad. El producto se
purifica mediante cromatografía en gel de sílice usando un
gradiente de acetato de etilo en hexanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
19
Etapa 4.
Desprotección
(Compuesto (6); R = Me; X =
S)
Una solución de
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9,10-dehidroepotilona
D en acetonitrilo y agua se enfría en hielo y se trata con ácido
fluorhídrico al 48%. La reacción se monitoriza mediante
cromatografía en capa fina. Tras la finalización, la reacción se
neutraliza mediante la adición de NaHCO_{3} acuoso saturado y se
concentra hasta una pasta acuosa. La pasta se extrae con acetato de
etilo y el extracto se lava secuencialmente con agua, NaHCO_{3}
ac. sat. y salmuera, después se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y
se evapora hasta sequedad. El residuo se somete a cromatografía en
gel de sílice (Acetato de etilo-hexanos) para aislar
el producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
20
(Compuesto (6): R = Me; X =
S)
Una solución de
3,7-bis-O-(terc-butildimetilsilil)-9,10-dehidroepotilona
D en acetonitrilo y agua se enfría en hielo y se trata con ácido
fluorhídrico al 48%. La reacción se monitoriza mediante
cromatografía en capa fina. Tras la finalización, la reacción se
neutraliza mediante la adición de NaHCO_{3} acuoso saturado y se
concentra hasta una pasta acuosa. La pasta se extrae con acetato de
etilo y el extracto se lava secuencialmente con agua, NaHCO_{3}
ac. sat. y salmuera, después se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y
se evapora hasta sequedad. El residuo se somete a cromatografía en
gel de sílice (acetato de etilo-hexanos) para aislar
el producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
21
(Compuesto (6); R = Me; X =
S)
A una solución de
3,7-bis-O-(2,2,2-tricloroetoxicarbonil)-9,10
dehidroepotilona D en una mezcla de ácido acético y
tetrahidrofurano a temperatura ambiente y se añade polvo de cinc. La
solución se agita a temperatura ambiente durante 1 hora antes de
añadir más cinc y se agita a temperatura ambiente durante la noche.
La solución se reparte entre acetato de etilo y agua, y la fase
acuosa se extrae con acetato de etilo. Las fases orgánicas
combinadas se lavan con salmuera y se secan (Na_{2}SO_{4}) antes
de concentrar a presión reducida. La cromatografía en columna en
gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos da
9,10-dehidroepotilona D.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
22
Etapa 1.
Activación
(Compuestos (7); R = Me; P =
Et_{3}Si; X = S; Y =
S-Me)
Una solución de
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9-hidroxiepotilona
D en THF se enfría hasta -78ºC y se trata con 1 equivalente de una
solución 1,0M de bis(trimetilsilil)amida sódica en
THF. Después de 30 minutos se añade disulfuro de carbono y la
mezcla se deja calentar hasta la temperatura ambiente. Después de 1
hora se añade yoduro de metilo y la reacción se deja progresar 12
horas, se vierte en NH_{4}Cl acuoso saturado y se extrae con
acetato de etilo. El extracto se lava secuencialmente con agua,
NaHCO_{3} ac. sat. y salmuera, después se seca sobre MgSO_{4},
se filtra y se evapora hasta sequedad. El producto se purifica
mediante cromatografía en gel de sílice usando un gradiente de
acetato de etilo en hexanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
23
(Compuesto (7); R = Me; P =
Et_{3}Si; X = S; Y =
NMe_{2})
Una mezcla de
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9-hidroxiepotilona
D, cloruro de dimetiltiocarbamoílo y piridina se deja reaccionar
durante 12 horas. La mezcla se vierte en agua y se extrae con
acetato de etilo. El extracto se lava secuencialmente con agua,
NaHCO_{3} ac. sat. y salmuera, después se seca sobre MgSO_{4},
se filtra y se evapora hasta sequedad. El producto se purifica
mediante cromatografía en gel de sílice usando un gradiente de
acetato de etilo en hexanos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
24
Etapa 2.
Pirólisis
(Compuesto (5); R = Me; P =
Et_{3}Si; X =
S)
El compuesto
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9-((metiltio)tiocarboniloxi)epotilona
D se introduce en alto vacío (aprox. 0,01 kPa) y se calienta a
170ºC en el material de partida ha desaparecido determinado mediante
análisis cromatográfico en capa fina. La reacción se enfría hasta
la temperatura ambiente y el residuo se somete a cromatografía en
gel de sílice (acetato de etilo-hexanos) para aislar
el producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
25
(Compuesto (5); R = Me; P =
Et_{3}Si, X =
S)
El compuesto
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9-((dimetilamino)tiocarboniloxi)epotilona
D se introduce en alto vacío (aprox. 0,01 kPa) y se calienta a
170ºC en el material de partida ha desaparecido determinado mediante
análisis cromatográfico en capa fina. La reacción se enfría hasta
la temperatura ambiente y el residuo se somete a cromatografía en
gel de sílice (acetato de etilo-hexanos) para aislar
el producto.
\newpage
Ejemplo comparativo
26
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Compuesto (8); R = Me; P =
Et_{3}Si, X =
S)
A una solución de
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9-oxoepotilona
D y
2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina
en diclorometano a 0ºC se añade, gota a gota, anhídrido
trifluorometanosulfónico. Después de la finalización de la adición,
la mezcla se deja calentar lentamente hasta la temperatura ambiente
y se agita durante la noche. La reacción se monitoriza mediante
cromatografía en capa fina y se añade anhídrido
trifluorometanosulfónico adicional hasta que el material de partida
se ha consumido. La mezcla se evapora y el residuo se combina con
éter etílico. Las sales precipitadas se eliminan mediante
filtración y la solución etérea se lava secuencialmente con agua,
HCl 1N helado, NaHCO_{3} ac. sat. y salmuera, después se seca
sobre MgSO_{4}, se filtra y se evapora hasta sequedad.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
27
(Compuesto (8); R = Me; P =
Et_{3}Si; X =
S)
A una solución de
bis(trimetilsilil)amida sódica 1,0M en THF a -78ºC se
añade, gota a gota, una solución de
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9-oxoepotilona
D en THF. Después de la finalización de la adición, la mezcla se
conserva durante 30 minutos a -78ºC y, gota a gota, se añade una
solución de
N-(5-cloro-2-piridil)triflimida
(Organic Syntheses 74: 77-83 (1996)).La mezcla se
conserva durante 2 horas, después se deja calentar lentamente hasta
la temperatura ambiente. La mezcla se evapora y el residuo se
combina con éter etílico. La solución etérea se lava
secuencialmente con agua, NaOH al 5% helado y salmuera, después se
seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se evapora hasta sequedad.
\newpage
Ejemplo comparativo
28
(Compuesto (5); R = Me; P =
Et_{3}Si; X =
S)
Una mezcla de
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9,10-dehidro-9-(trifluorometanosulfoniloxi)
epotilona D, tributilamina, acetato de paladio y trifenilfosfina en
dimetilformamida se coloca en atmósfera inerte y se desgasifica
mediante rociado. Mediante jeringuilla se añade ácido fórmico y la
mezcla se calienta a 60ºC durante 1 hora. La mezcla se enfría hasta
la temperatura ambiente, se diluye en éter y se lava secuencialmente
con agua, HCl 1N helado, NaHCO_{3} ac. sat. y salmuera, después
se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se evapora hasta sequedad. El
residuo se somete a cromatografía en gel de sílice (acetato de
etilo-hexanos) para aislar el producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
29
(Compuesto (9); R = Me; R^{1}
= CH_{2}CH=CH_{2}; P = Et_{3}Si; X =
S)
Una mezcla de
tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0) y cloruro de
litio en THF seco se agita en atmósfera inerte durante 15 minutos,
después se añade una solución de
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9,10
dehidro-9-(trifluorometanosulfoniloxi)-epotilona
D y aliltributilina en THF. La mezcla se calienta a un reflujo
suave durante 48 horas. La mezcla se enfría hasta la temperatura
ambiente, se diluye en éter y se lava secuencialmente con agua, HCl
1N helado, NaHCO_{3} ac. sat. y salmuera, después se seca sobre
MgSO_{4}, se filtra y se evapora hasta sequedad. El residuo se
somete a cromatografía en gel de sílice (acetato de
etilo-hexanos) para aislar el producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
30
(Compuesto (10); R = Me; R_{1}
= CH_{2}CH = CH_{2}; X =
S)
Una solución de
3,7-bis-O-(trietilsilil)-9,10-dehidro-9-alilepotilona
D en acetonitrilo y agua se enfría en hielo y se trata con ácido
fluorhídrico al 48%. La reacción se monitoriza mediante
cromatografía en capa fina. Tras la finalización, la reacción se
neutraliza mediante la adición de NaHCO_{3} acuoso saturado y se
concentra hasta una pasta acuosa. La pasta se extrae con acetato de
etilo y el extracto se lava secuencialmente con agua, NaHCO_{3}
ac. sat. y salmuera, después se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y
se evapora hasta sequedad. El residuo se somete a cromatografía en
gel de sílice (acetato de etilo-hexanos) para aislar
el producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
31
(Compuesto (10); R = Me; R^{1}
= H; X =
S)
Etapa 1. Apertura del anillo. A una
solución de
3,7-bis-O-(terc-butildimetilsilil)-9-oxoepotilona
D en tetrahidrofurano enfriada hasta -78ºC se añade una solución de
hidruro de diisobutilaluminio. La reacción se monitoriza mediante
TLC o LC y, tras el consumo del material de partida, se inactiva
mediante la adición de tampón fosfato y se deja calentar hasta la
temperatura ambiente. La mezcla se extrae con acetato de etilo y
el extracto se seca, se filtra y se evapora. El producto se purifica
mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 2. Protección. Una mezcla del
producto de la etapa 1, cloruro de terc-butildimetilsililo e
imidazol en dimetilformamida se agita hasta que la reacción se haya
completado según análisis TLC. La mezcla se vierte en agua y se
extrae con acetato de etilo. El extracto se seca se filtra y se
evapora, y el producto se purifica mediante cromatografía en gel de
sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 3. Formación de triflato de vinilo.
Una solución del producto de la etapa 2 en THF se añade, gota a
gota, a una solución de bis(trimetilsilil)amida sódica
enfriada hasta -78ºC. Después de tiempo suficiente para la
formación de enolato se añade una solución de
N-(2-piridil) triflimida en THF y la mezcla se deja
calentar lentamente hasta la temperatura ambiente. La mezcla se
vierte en agua y se extrae con acetato de etilo. El extracto se
seca, se filtra y se evapora, y el producto se usa sin purificación
adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 4. Reducción de triflato. Una
mezcla del producto de la etapa 3, tributilamina, acetato de paladio
y trifenilfosfina en dimetilformamida se coloca en atmósfera inerte
y se desgasifica mediante rociado. Mediante jeringuilla se añade
ácido fórmico y la mezcla se calienta a 60ºC durante 1 hora. La
mezcla se enfría hasta la temperatura ambiente, se diluye en éter y
se lava secuencialmente con agua, HCl 1N helado, NaHCO_{3} ac.
sat. y salmuera, después se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se
evapora hasta sequedad. El residuo se somete a cromatografía en gel
de sílice (acetato de etilo-hexanos) para aislar el
producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 5. Eliminación del grupo
1-O-TBS. Una solución del
producto de la etapa 4 y ácido alcanforsulfónico en metanol y
diclorometano a 0ºC se agita y monitoriza mediante TLC. Tras la
desaparición del material de partida, la reacción se vierte en
NaHCO_{3} acuoso saturado y se extrae con acetato de etilo. El
extracto se seca, se filtra y se evapora. El residuo se somete a
cromatografía en gel de sílice (acetato de
etilo-hexanos) para aislar el producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 6. Oxidación. A una mezcla del
producto de la etapa 5 y óxido de N-metilmorfolina
en diclorometano se añade cuidadosamente peruretano de
tetrapropilamonio y la mezcla se agita y monitoriza mediante TLC.
Tras la desaparición del material de partida, la reacción se vierte
en NaHCO_{3} acuoso saturado y se extrae con acetato de etilo. El
extracto se seca, se filtra y se evapora. El residuo se disuelve en
una mezcla de terc-butanol y tampón fosfato, y se trata con
2-metil-2-buteno y
clorito sódico. Tras la reacción se realiza TLC. Tras la
desaparición del material de partida, la reacción se vierte en
acetato de etilo, se lleva a un pH de 4 mediante la adición de HCl
1N y se lava secuencialmente con agua y salmuera. La fase orgánica
se seca, se filtra y se evapora. El residuo se somete a
cromatografía en gel de sílice (acetato de
etilo-hexanos) para aislar el producto ácido.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 7. Eliminación del grupo
15-O-TBS. A una solución del
producto de la etapa 6 en THF a 0ºC se añade una solución de
fluoruro de tetrabutilamonio. Tras la finalización de la reacción,
la mezcla se lleva a la temperatura ambiente, se diluye con acetato
de etilo y se lava con agua. La fase orgánica se seca, se filtra y
se evapora. El residuo se somete a cromatografía en gel de sílice
(acetato de etilo-hexanos) para aislar el
producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 8. Macrolactonización. A una
solución del producto de la etapa 7 en THF a temperatura ambiente se
añade trietilamina y 2,4,6-triclorobenzoílo. La
mezcla se diluye en tolueno tras 20 minutos y se añade, gota a gota,
a una solución de 4-(dimetilamino)-piridina en
tolueno caliente durante un periodo de varias horas. Tras la
finalización, la mezcla se concentra y el producto se purifica
mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 9. Desprotección. El producto de la
etapa 8 se disuelve en ácido trifluoroacético y diclorometano a 1:1
a 0ºC. La reacción se monitoriza mediante TLC y, cuando se completa,
se concentra al vacío. El residuo se disuelve en acetato de etilo y
se lava con NaHCO_{3} acuoso saturado, después se seca, se filtra
y se evapora. El producto se purifica mediante cromatografía en gel
de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
32
(Compuesto (10); R = Me; R^{1}
= H; X =
S)
Etapa 1. Apertura del anillo. Una
solución de
3,7-bis-O-(terc-butildimetilsilil)-9-oxo-epotilona
D en metanol se trata con NaOH 1N a temperatura ambiente. La
reacción se monitoriza mediante TLC o LC y, tras el consumo del
material de partida, se inactiva mediante la adición de tampón
fosfato, a pH 4. El metanol se elimina mediante evaporación
rotatoria al vacío y el residuo acuoso se extrae con acetato de
etilo. El extracto se seca, se filtra y se evapora. El producto se
purifica mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 2. Esterificación. A una solución
del producto de la Etapa 1 en éter se añade
(trimetilsilil)diazometano hasta que persista un color
amarillo. La solución se concentra y el producto se purifica
mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 3. Protección de
15-OH. A una solución del producto de la Etapa 2
y trimetilsililimidazol en diclorometano a temperatura ambiente se
añade clorotrimetilsilano. Después de 1 hora, la mezcla se vierte en
NaHCO_{3} acuoso saturado y se extrae con diclorometano. El
extracto se seca, se filtra y se evapora. El producto se purifica
mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 4. Formación de triflato de vinilo.
Una solución del producto de la etapa 3 en THF anhidro se añade,
gota a gota, a una solución de bis(trimetilsilil)amida
sódica en THF enfriada hasta -78ºC. Después de tiempo suficiente
para la formación de enolato se añade una solución de
N-(2-piridil) triflimida en THF y la mezcla se deja
calentar lentamente hasta la temperatura ambiente. La mezcla se
vierte en agua y se extrae con acetato de etilo. El extracto se
seca, se filtra y se evapora. El producto se purifica mediante
cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 5. Reducción de triflato. Una
mezcla del producto de la etapa 4, tributilamina, acetato de paladio
y trifenilfosfina en dimetilformamida se coloca en atmósfera inerte
y se desgasifica mediante rociado. Mediante jeringuilla se añade
ácido fórmico y la mezcla se calienta a 60ºC durante 1 hora. La
mezcla se enfría hasta la temperatura ambiente, se diluye en éter y
se lava secuencialmente con agua, HCl 1N helado, NaHCO_{3} ac.
sat. y salmuera. La fase de éter se seca, se filtra y se evapora. El
producto se purifica mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 6. Eliminación del grupo
15-OTMS. El producto de la etapa 5 se disuelve
en una mezcla de acetonitrilo, agua y ácido acético. La reacción se
monitoriza mediante TLC o LC y, tras el consumo del material de
partida, la mezcla se evapora hasta sequedad al vacío.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 7. Eliminación de éster metílico.
El producto de la etapa 6 se disuelve en metanol y se trata con NaOH
1N a temperatura ambiente. La reacción se monitoriza mediante TLC o
LC y, tras el consumo del material de partida, se inactiva mediante
la adición de tampón fosfato, a pH 4. El metanol se elimina mediante
evaporación rotatoria al vacío y el residuo acuoso se extrae con
acetato de etilo. El extracto se seca, se filtra y se evapora. El
producto se purifica mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 8. Macrolactonización. A una
solución del producto de la etapa 7 en THF a temperatura ambiente se
añade trietilamina y 2,4,6-triclorobenzoílo.
Después de 20 minutos, la mezcla se diluye en tolueno y se añade,
gota a gota, a una solución de
4-(dimetilamino)-piridina en tolueno caliente
durante un periodo de varias horas. Tras completar la adición, la
mezcla se concentra. El producto se purifica mediante cromatografía
en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 9. Desprotección. El producto de la
etapa 8 se disuelve en ácido trifluoroacético y diclorometano a 1:1
a 0ºC. La reacción se monitoriza mediante TLC o LC y, tras el
consumo del material de partida, se evapora hasta sequedad al
vacío. El residuo se disuelve en acetato de etilo y se lava con
NaHCO_{3} acuoso saturado seguido por salmuera. La fase de
acetato de etilo se seca, se filtra y se evapora. El producto se
purifica mediante cromatografía en gel de sílice.
\newpage
Ejemplo comparativo
33
(Compuesto (10); R = Me; R^{1}
= H; X =
O)
Etapa 1. Protección. Una solución de
9-oxoepotilona H_{2} y
2,6-lutidina en diclorometano se trata con
terc-butildimetilsilil trifluorometanosulfonato a
temperatura ambiente. Después de agitar durante la noche, la mezcla
se diluye con diclorometano y se lava secuencialmente con agua,
NaHCO_{3} saturado acuoso y salmuera. La solución se seca, se
filtra y se evapora, y el producto se purifica mediante
cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 2. Apertura del anillo. Una
solución de
3,7-bis-O-(terc-butildimetilsilil)-9-oxo-epotilona
H_{2} en metanol se trata con NaOH 1N a temperatura ambiente. La
reacción se monitoriza mediante TLC o LC y, tras el consumo del
material de partida, se inactiva mediante la adición de tampón
fosfato, a pH 4. El metanol se elimina mediante evaporación
rotatoria al vacío y el residuo acuoso se extrae con acetato de
etilo. El extracto se seca, se filtra y se evapora. El producto se
purifica mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 3. Esterificación. A una solución
del producto de la Etapa 2 en éter se añade
(trimetilsilil)diazometano hasta que persista un color
amarillo. La solución se concentra y el producto se purifica
mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 4. Protección de
15-OH. A una solución del producto de la Etapa 3
y trimetilsililimidazol en diclorometano a temperatura ambiente se
añade clorotrimetilsilano. Después de 1 hora, la mezcla se vierte en
NaHCO_{3} acuoso saturado y se extrae con diclorometano. El
extracto se seca, se filtra y se evapora. El producto se purifica
mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 5. Formación de triflato de vinilo.
Una solución del producto de la etapa 4 en THF anhidro se añade,
gota a gota, a una solución de bis(trimetilsilil)amida
sódica en THF enfriada hasta -78ºC. Después de tiempo suficiente
para la formación de enolato se añade una solución de
N-(2-piridil) triflimida en THF y la mezcla se deja
calentar lentamente hasta la temperatura ambiente. La mezcla se
vierte en agua y se extrae con acetato de etilo. El extracto se
seca, se filtra y se evapora. El producto se purifica mediante
cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 6. Reducción de triflato. Una
mezcla del producto de la etapa 5, tributilamina, acetato de paladio
y trifenilfosfina en dimetilformamida se coloca en atmósfera inerte
y se desgasifica mediante rociado. Mediante jeringuilla se añade
ácido fórmico y la mezcla se calienta a 60ºC durante 1 hora. La
mezcla se enfría hasta la temperatura ambiente, se diluye en éter y
se lava secuencialmente con agua, HCl 1N helado, NaHCO_{3} ac.
sat. y salmuera. La fase de éter se seca, se filtra y se evapora. El
producto se purifica mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 7. Eliminación del grupo
15-OTMS. El producto de la etapa 6 se disuelve
en una mezcla de acetonitrilo, agua y ácido acético. La reacción se
monitoriza mediante TLC o LC y, tras el consumo del material de
partida, la mezcla se evapora hasta sequedad al vacío.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 8. Eliminación de éster metílico.
El producto de la etapa 7 se disuelve en metanol y se trata con NaOH
1N a temperatura ambiente. La reacción se monitoriza mediante TLC o
LC y, tras el consumo del material de partida, se inactiva mediante
la adición de tampón fosfato, a pH 4. El metanol se elimina mediante
evaporación rotatoria al vacío y el residuo acuoso se extrae con
acetato de etilo. El extracto se seca, se filtra y se evapora. El
producto se purifica mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 9. Macrolactonización. A una
solución del producto de la etapa 8 en THF a temperatura ambiente se
añade trietilamina y 2,4,6-triclorobenzoílo.
Después de 20 minutos, la mezcla se diluye en tolueno y se añade,
gota a gota, a una solución de
4-(dimetilamino)-piridina en tolueno caliente
durante un periodo de varias horas. Tras completar la adición, la
mezcla se concentra. El producto se purifica mediante cromatografía
en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 10. Desprotección. El producto de
la etapa 9 se disuelve en ácido trifluoroacético y diclorometano a
1:1 a 0ºC. La reacción se monitoriza mediante TLC o LC y, tras el
consumo del material de partida, se evapora hasta sequedad al
vacío. El residuo se disuelve en acetato de etilo y se lava con
NaHCO_{3} acuoso saturado seguido por salmuera. La fase de
acetato de etilo se seca, se filtra y se evapora. El producto se
purifica mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
34
(Compuesto (24); R = Me; X =
S)
Etapa 1. Reducción de cetona. Una
solución del producto del ejemplo 32, etapa 3 en metanol se enfría
hasta 0ºC y se trata con 1 equivalente de borohidruro sódico. La
solución se agita a 0ºC durante 40 minutos antes de añadir
NH_{4}Cl acuoso saturado. Las fases orgánicas se extraen con
acetato de etilo y el extracto se seca, se filtra y se concentra
hasta sequedad. El producto se purifica mediante cromatografía en
gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 2. Formación de xantato. Una
solución del producto de la etapa 1 en THF se enfría hasta -78ºC y
se trata con 1 equivalente de una solución 1,0M de
bis(trimetilsilil)amida sódica en THF. Después de 30
minutos se añade disulfuro de carbono y la mezcla se deja calentar
hasta la temperatura ambiente. Después de 1 hora se añade yoduro de
metilo y la reacción se deja progresar 12 horas, se vierte en
NH_{4}Cl acuoso saturado y se extrae con acetato de etilo. El
extracto se lava secuencialmente con agua, NaHCO_{3} ac. sat. y
salmuera, después se seca, se filtra y se evapora. El producto se
purifica mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 3. Eliminación pirolítica. El
producto de la etapa 2 se coloca en alto vacío (aprox., 0,01 kPa) y
se calienta a 150-200ºC hasta que el material de
partida se ha consumido determinado mediante análisis TLC. La
reacción se enfría hasta la temperatura ambiente y el residuo se
somete a cromatografía en gel de sílice para aislar el
producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
35
(Compuesto (24); R = Me; X =
O)
Etapa 1. Reducción de cetona. Una
solución del producto del ejemplo 33, etapa 4 en metanol se enfría
hasta 0ºC y se trata con 1 equivalente de borohidruro sódico. La
solución se agita a 0ºC durante 40 minutos antes de añadir
NH_{4}Cl acuoso saturado. Las fases orgánicas se extraen con
acetato de etilo y el extracto se seca, se filtra y se concentra
hasta sequedad. El producto se purifica mediante cromatografía en
gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 2. Formación de xantato. Una
solución del producto de la etapa 1 en THF se enfría hasta -78ºC y
se trata con 1 equivalente de una solución 1,0M de
bis(trimetilsilil)amida sódica en THF. Después de 30
minutos se añade disulfuro de carbono y la mezcla se deja calentar
hasta la temperatura ambiente. Después de 1 hora se añade yoduro de
metilo y la reacción se deja progresar 12 horas, se vierte en
NH_{4}Cl acuoso saturado y se extrae con acetato de etilo. El
extracto se lava secuencialmente con agua, NaHCO_{3} ac. sat. y
salmuera, después se seca, se filtra y se evapora. El producto se
purifica mediante cromatografía en gel de sílice.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 3. Eliminación pirolítica. El
producto de la etapa 2 se coloca en alto vacío (aprox., 0,01 kPa) y
se calienta a 150-200ºC hasta que el material de
partida se ha consumido determinado mediante análisis TLC. La
reacción se enfría hasta la temperatura ambiente y el residuo se
somete a cromatografía en gel de sílice para aislar el
producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
36
Una mezcla de 30 mmol de
1,3-dicloroacetona y 30 mmol de
2-(pivaloiloxi)tioacetamida se disolvió en 21 ml de alcohol
absoluto y se sometió a reflujo durante la noche en nitrógeno. La
mezcla resultante se concentró al vacío y el residuo se disolvió en
100 ml de agua. La solución acuosa resultante se neutralizó hasta un
pH = 8 antes de extraer con éter (200 ml X 3). Las capas orgánicas
combinadas se lavaron secuencialmente con NaHCO_{3} saturado,
agua y salmuera. La fase orgánica se secó con MgSO_{4}, se filtró
y se evaporó para dar un jarabe marrón. La cromatografía en gel de
sílice (gradiente del 2% al 10% de acetona en hexano) dio 200 mg de
2-(pivaloiloximetil)-4-clorometiltiazol
y 800 mg de
2-(hidroximetil)-4-(clorometil)tiazol.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
37
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una mezcla de 800 mg de
(2-hidroximetil)-(4-clorometil)tiazol
(4,89 mmol) y 1,33 g de imidazol (18,56 mmol) se disolvió en 10 ml
de DMF. La solución resultante se enfrió hasta 0ºC antes de añadir
1,47 g de cloruro de t-butildimetilsililo (9,78 mmol) en
porciones. La solución resultante se dejó calentar hasta la
temperatura ambiente y la reacción continuó durante otras 4 horas
antes de inactivarla mediante la adición de 30 ml de solución de
NaHCO_{3} acuoso saturada. La mezcla resultante se extrajo con 50
ml X 2 de acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se
lavaron secuencialmente con agua, 20 ml X 3, y salmuera. La fase
orgánica se secó con MgSO_{4}, se filtró y se evaporó para dar un
jarabe marrón. La cromatografía en gel de sílice (gradiente del 1%
al 10% de acetona en hexano) dio 800 mg de
2-(terc-butildimetilsililoximetil)-4-(clorometil)-tiazol.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
38
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 557,0 mg de
2-(terc-butildimetilsililoximetil)-4-(clorometil)tiazol
(2,0 mmol) en 3 ml de benceno se añadió, gota a gota,
tri-n-butilfosfina en atmósfera de
nitrógeno. La solución resultante se sometió a reflujo en nitrógeno
durante la noche. A continuación, la solución se concentró al vacío
y el residuo se cristalizó mediante la adición de una mezcla de 1:1
(v/v) de éter y hexano. Después se filtró el sólido, se lavó con
una cantidad pequeña de hexano antes de secarse sobre vacío para
proporcionar 800 mg de sal de fosfonio en forma de un sólido
blanco.
\newpage
Ejemplo comparativo
39
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de cloruro de
(2-(terc-butildimetilsililoxi)metiltiazol-4-il)metiltri-n-butilfosfonio
(0,58 g) en 1 ml de tetrahidrofurano (THF) a -20ºC se añadió una
solución 0,5M de bis(trimetilsilil)amida potásica en
tolueno (2,4 ml). La solución se dejó calentar hasta 0ºC durante 30
minutos, después se enfrió hasta -78ºC y una solución de la cetona
1 (128 mg). (A. Rivkin y col., J. Am. Chem. Soc. 2003 125:
2899-2901). La mezcla se dejó calentar hasta -40ºC
durante 1 hora, momento en el cual se juzgó que la reacción estaba
completa mediante análisis cromatográfico en capa fina. La reacción
se inactivó mediante la adición de cloruro amónico acuoso saturado
y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera,
se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó. El
residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (20:1
hexanos/éter) para proporcionar 150 mg de producto protegido
puro.
El producto protegido (150 mg) se disolvió en 3
ml de THF y se trató con fluoruro de
hidrógeno-piridina (2 ml) a 0ºC. La reacción se
dejó calentar hasta la temperatura ambiente durante 1 hora y después
se mantuvo durante 4 horas. Lentamente se añadió
metoxitrimetilsilano (15 ml) y la mezcla se agitó durante la noche.
La mezcla se evaporó hasta sequedad y el residuo se sometió a
cromatografía en gel de sílice (de 3:1 a 1:1 De hexanos/acetona)
para proporcionar 64 mg de
21-hidroxi-9,10-dehidroepotilona
A pura.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
40
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una solución de
21-hidroxi-9,10-dehidroepotilona
D (30 mg) en 1,5 ml de THF seco se enfrió hasta 0ºC y se trató con
fosforilazida de difenilo (15,3 \mul) en 1 minuto. Después de 5
minutos, se añadió
1,8-diaza[5.4.0]bicicloundec-7-eno
(DBU) (8,8 \mul) y la reacción se agitó a 0ºC durante 2 horas,
después se calentó hasta la temperatura ambiente. Después de 18
horas, el análisis cromatográfico en capa fina indicó la
21-hidroxi-9,10-dehidroepotilona
D restante y la mezcla se enfrío hasta 0ºC y se trató con la
adición de fosforilazida de difenilo (2 \mul). La mezcla se agitó
30 minutos adicionales a 0ºC y después a temperatura ambiente
durante 1,5 horas. La solución se vertió en 30 ml de acetato de
etilo y se lavó con 2 x 10 ml de agua. Los lavados acuosos
combinados se extrajeron con acetato de etilo (2 x 15 ml) y los
extractos se combinaron, se secaron sobre sulfato de magnesio, se
filtraron y se evaporaron. El material crudo se sometió a
cromatografía en gel de sílice para proporcionar 9 mg de
producto.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
41
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una solución de
21-azido-9,10-dehidroepotilona
D (14 mg) y trimetilfosfina (33 \mul de una solución 1M en THF)
en 0,3 ml de THF se agitó durante 5 minutos, después se trató con 80
\mul de agua y se agitó 3 horas adicionales. La mezcla se evaporó
hasta sequedad y el residuo se sometió a cromatografía en gel de
sílice (10% de metanol en cloroformo) para dar 8 mg de
21-amino-9,10-dehidroepotilona
D. Masa exacta: calc.: Para C_{27}H_{41}N_{2}O_{5}S (M+H) =
505,2731, obs. = 505.2719. RMN-^{13}C (CDCl_{3},
100 MHz): \delta 218,6, 172,8, 170,5, 152,4, 138,1, 137,3, 131,1,
129,8, 120,3, 119,4, 116,1, 78,2, 75,4, 71,5, 53,2, 44,6, 43,9,
40,0, 39,5, 34,8, 31,8, 23,5, 22,4, 19,2, 17,6, 15,8, 15,0.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
42
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de cloruro de
(2-(terc-butildimetilsililoxi)metiltiazol-4-il)metiltri-n-butilfosfonio
(0,641 g) en 3 ml de tetrahidrofurano (THF) a -30ºC se añadió gota
a gota en 10 minutos una solución 0,5M de
bis(trimetilsilil)amida potásica en tolueno (1,5 ml).
La solución se dejó calentar hasta 0ºC durante 40 minutos, después
se enfrió hasta -70ºC y se añadió una solución de la cetona 3 (85
mg). (A. Rivkin y col., J. Am. Chem. Soc. 2003 125:
2899-2901) en 1 ml de THF gota a gota durante 10
minutos. Después de 20 minutos la mezcla se dejó calentar hasta
-30ºC durante 1 hora. La reacción se inactivó mediante la adición de
cloruro amónico acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo.
El extracto se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se
filtró y se evaporó. El residuo se sometió a cromatografía en gel
de sílice, eluyendo secuencialmente con 0, 2, 4, 6 y 8% de éter en
heptanos para proporcionar 67 mg del producto protegido puro.
El producto protegido (67 mg) se disolvió en 1,5
ml de THF y se trató con fluoruro de
hidrógeno-piridina (0,6 ml) a 0ºC. Después de 20
minutos, la reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente,
se mantuvo durante 3,5 horas, después se enfrió de nuevo a 0ºC.
Lentamente se añadió metoxitrimetilsilano (6 ml) y la mezcla se
llevó hasta la temperatura ambiente y se evaporó hasta llegar a un
aceite. El aceite se sometió a cromatografía en gel de sílice (0,
10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 y 90% de acetato de etilo en hexanos)
para proporcionar
21-hidroxi-9,10-dehidro-26-trifluoroepotilona
D pura. CL/EM: m/z = 560 [M+H].
\newpage
Ejemplo comparativo
43
\vskip1.000000\baselineskip
Una solución de
21-hidroxi-9,10-dehidroepotilona
D (20 mg) en 0,5 ml de THF seco se enfrió hasta 0ºC y se trató con
fosforilazida de difenilo (10 \mul). Después de 5 minutos, se
añadió
1,8-diaza[5.4.0]bicicloundec-7-eno
(DBU) (5 \mul) y la reacción se calentó hasta la temperatura
ambiente y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se
aplicó directamente a una columna de gel de sílice, que después se
eluyó con 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 y 80% de acetato de etilo
en hexanos para proporcionar el producto. EM: calc. para
C_{27}H_{38}N_{4}O_{5}S [M+H] = 530,2563; obs.
585,2797.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
44
\vskip1.000000\baselineskip
Una solución de
21-azido-9,10-dehidro-26-trifluoroepotilona
D (13 mg) se enfrió hasta 0ºC y se trató con trimetilfosfina (28
\mul de una solución 1M en THF) en 0,5 ml de THF se agitó durante
5 minutos, después se trató con 100 \mul de agua y se dejó
calentar hasta la temperatura ambiente durante 1,5 horas. La mezcla
de reacción se aplicó directamente a una columna de gel de sílice,
que después se eluyó con 0, 2, 4, 6, 8 y 10% de metanol en
diclorometano que contiene 1% de trietilamina para proporcionar el
producto. Una segunda cromatografía en gel de sílice, eluyendo con
0, 25, 50, 75 y 100% de acetato de etilo en hexanos, seguida por 0,
2 y 5% de metanol en diclorometano que contiene 1% de trietilamina
proporcionó el producto puro. CL/EM: m/z = 559 [M+H].
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
45
\vskip1.000000\baselineskip
El cloruro de
(2-piridil)metiltri-n-butilfosfonio
se preparó del siguiente modo. A una solución de 10 mmol de
2-(clorometil)piridina en 15 ml de benceno se añadieron 10
mmol de tri-n-butilfosfina, gota a
gota en nitrógeno. La solución resultante se sometió a reflujo
durante 18 horas antes de enfriar hasta la temperatura ambiente.
Después, la solución se concentró al vacío; se han tomado todas las
medidas necesarias para reducir todo contacto con el aire. Se formó
un sólido blanco mediante la adición de éter dietílico al residuo.
El licor madre se filtró y el sólido blanco se lavó varias veces
con éter dietílico en nitrógeno, después, el sólido se secó al
vacío para dar un polvo blanco como producto final.
La
17-des(2-metil-4-tiazolil)-17-(2-piridil)-9,10-dehidroepotilona
D se preparó de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 42,
sustituyendo el cloruro de
(2-(terc-butildimetil-sililoxi)-metiltiazol-4-il)metiltri-n-butil-fosfonio
por cloruro de
(2-piridil)metiltri-n-butilfosfonio
y dejando que la reacción se calentara hasta -10ºC antes de
inactivar. RMN ^{13}C (100 MHz, CDCl_{3}): \delta 218,6,
170,6, 155,9, 149,0, 141,1, 137,4, 131,1, 129,8, 136,3, 125,2,
124,0, 121,4, 120,4, 77,9, 75,3, 71,4, 53,5, 44,5, 40,0, 39,6, 34,8,
31,9, 23,6, 22,7, 18,6, 17,3, 15,7, 14,8.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
46
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se preparó de acuerdo con el procedimiento del
ejemplo 42, sustituyendo el cloruro de
(2-(terc-butildimetil-sililoxi)-metiltiazol-4-il)metiltri-n-butil-fosfonio
por cloruro de
(2-quinolil)metiltri-n
butilfosfonio, y dejando que la reacción se calentara hasta la
temperatura ambiente y se mantuvo durante 3 horas antes de
inactivar. RMN-^{13}C (100 MHz, CDCl_{3},):
\delta 218,5, 170,7, 156,2, 147,7, 142,9, 137,5, 131,2, 129,8,
136,2, 129,9, 129,8 128,7, 127,5, 126,6, 126,3, 125,5, 122,2,
120,5, 78,0, 40,0, 39,6, 75,2, 71,5, 23,6, 53,6, 44,4, 40.0, 39,6,
34,9, 32,0, 23,6, 23,1, 18,5, 17,2, 16,1, 14,6.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
47
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se preparó de acuerdo con el procedimiento del
ejemplo 42, sustituyendo el cloruro de
(2-(terc-butildimetil-sililoxi)-metiltiazol-4-il)metiltri-n-butil-fosfonio
por cloruro de
(2-benzotiazolil)metiltri-n
butilfosfonio, y dejando que la reacción se calentara hasta la
temperatura ambiente y se mantuvo durante 2 días antes de inactivar.
RMN-^{13}C (100 MHz, CDCl_{3},): \delta
218,6, 170,4, 164,6, 152,7, 145,4, 137,9, 129,7, 129,8, 134,9,
126,4, 125,2, 122,8, 121,4, 119,8, 119,5, 77,6, 75,6, 71,8, 53,2,
44,8, 34,8, 40,1, 39,4, 34,8, 31,6, 23,5, 22,6, 19,3, 17,6, 16,9,
15,1.
La línea celular de carcinoma de mama humano
MCF-7, la línea celular de carcinoma de mama
resistente a múltiples fármacos NCI/ADR se obtuvieron del National
Cancer Institute. La línea celular de cáncer de pulmón de células
no pequeñas humana A549 y la línea celular de cáncer de ovario
humano SKOV-3 se obtuvieron de la Colección
Americana de Cultivos Tipo (Manassas, VA). Todas las líneas
celulares se mantuvieron en medio RPMI-1640
(Gibco/BRL, Rockville, MD) suplementado con
L-glutamina 2 mM, HEPES 25 mM y FBS al 10% (Hyclone,
Logan, UT). Las células se mantuvieron en un incubador humidificado
a 37ºC en 5% de CO_{2}.
Las células tumorales se sembraron en 100 \mul
a 5000 (MCF-7), 7500 NCI/ADR), 5000 (A549) Y 7500
(SKOV3) células por pocillo en placas de 96 pocillos. Las células
se dejaron adherir durante 24 horas. Cada compuesto de 0,001 a 1000
nM en 100 \mul se añadió a las células en pocillos por duplicado.
Después de 3 días, las células se fijaron a 4ºC durante 1 hora con
10% de ácido tricloroacético y después se tiñeron con 0,2% de
sulforhodamina B (SRB)/1% de ácido acético durante 20 minutos a
temperatura ambiente. El pigmento no unido se eliminó mediante
aclarado con 1% de ácido acético y, después, la SRB unida se extrajo
con 200 \mul de base Tris 10 mM. La absorbancia se midió a 515 nm
usando un lector de placas de microtitulación de 96 pocillos
(Spectra Max 250, Molecular Devices). Los valores de CI_{50} se
calcularon usando un programa KaleidaGraph. Los experimentos se
realizaron dos veces. Los resultados se muestran en la Tabla 1
siguiente.
Siguiendo del procedimiento de los ejemplos 39
(cuando R = metilo) y 42 (cuando R = CF3), los compuestos
adicionales mostrados en la tabla 2 se prepararon sustituyendo el
cloruro de (2-(terc-butildimetil-sililoxi)
metiltiazol-4-il)metiltri-n-butil-fosfonio
por el correspondiente cloruro de fosfonio. Los datos de
citotoxicidad (Tabla 2) se obtuvieron tal como se describe en el
ejemplo 48. Los datos de inhibición del citocromo P450 (Tabla 3) se
obtuvieron usando el método del índice inicial contra el sustrato
BFC.
El cloruro de
(4-metoxipiridin-2-il)metiltributilfosfonio
se preparó del siguiente modo. A una solución de 770 mg (4,9 mmol)
de 2-(clorometil)-4-metoxipiridina
en 7 ml de benceno se añadieron 1,22 ml de
tri-n-butilfosfina (4,9 mmol), gota
a gota en nitrógeno. La solución resultante se sometió a reflujo
durante 18 horas antes de enfriar hasta la temperatura ambiente.
Después, la solución se concentró al vacío; se han tomado todas las
medidas necesarias para reducir todo contacto con el aire. Se formó
un sólido ligeramente amarillo mediante la adición de éter
dietílico al residuo. El licor madre se filtró y el sólido amarillo
se lavó varias veces con éter dietílico en nitrógeno, después, el
sólido se secó al vacío para dar la sal de fosfonio en forma de 1,2
g de polvo amarillo. El cloruro de
(5-metil-isoxazol-3-il)metiltributil
fosfonio se preparó del siguiente modo: El
3-(clorometil)-5-metil isoxazol
(0,30 g, 2,28 mmol, 1 eq.) se disolvió en 6 ml de benceno en 100 ml
de RBF secada en horno. Mediante jeringuilla se añadió
tributilfosfina (0,57 ml, 2,28 mmol, 1 eq.) y la solución se
sometió a reflujo durante 15 horas en una atmósfera de nitrógeno. La
solución se enfrió hasta la temperatura ambiente y el volumen se
redujo al vacío. Se añadió Et_{2}O para precipitar la sal
de fosfonio deseada. El sobrenadante de éter se decantó y el sólido
blanco se secó al vacío durante la noche (0,760 g, rendimiento del
99%).
\vskip1.000000\baselineskip
Los datos de RMN ^{13}C para compuestos
seleccionados mostrados en la tabla 2 son los siguientes:
\vskip1.000000\baselineskip
KOSN 1703 RMN ^{13}C (CDCl_{3}, 100
MHz) \delta 218,6, 170,5, 154,7, 147,3, 141,0, 137,1, 135,5,
134,4, 130,7, 129,8, 124,2, 123,7, 120,5, 77,7, 75,4, 70,8, 61,8,
53,7, 44,6, 39,7, 39,6, 34,8, 31,8, 23,5, 22,8, 18,1, 17,4, 15,9,
15,0.
\vskip1.000000\baselineskip
KOSN 1727 RMN ^{13}C (CDCl_{3}, 100
MHz) \delta 218,6, 170,5, 168,8, 152,3, 137,4, 131,2, 129,8,
120,3, 119,5, 130,7, 117,1, 78,2, 75,5, 71,7, 67,0, 59,9, 53,7,
53,1, 44,6, 40,1, 39,4, 34,8, 31,9, 23,5, 22,4, 19,4, 17,5, 15,9,
15,0.
\vskip1.000000\baselineskip
KOSN 1756 RMN ^{13}C (CDCl_{3}, 100
MHz) \delta 218,6, 170,6, 165,9, 157,2, 150,1, 141,2, 137,3,
131,1, 129,8, 125,1, 120,5, 110,2, 107,5, 77,7, 75,2, 71,2, 55,1,
53,6, 44,4, 39,9, 39,6, 34,8, 31,9, 23,5, 22,9, 18,3, 17,3, 15,8,
14,7.
\vskip1.000000\baselineskip
KOSN 1674 RMN ^{13}C (CDCl_{3}, 100
MHz) \delta 218,3, 170,3, 144,6, 137,8, 135,9, 132,9, 129,8,
131,0, 129,8, 127,8, 124,3, 119,8, 119,4, 118,8, 110,0, 75,9, 75,4,
71,6, 53,4, 44,7, 39,9, 39,5, 34,9, 31,6, 23,6, 22,7. 18,6, 17,3,
15,0, 14,5.
\vskip1.000000\baselineskip
KOSN 1724 RMN ^{13}C (CDCl_{3}, 100
MHz) \delta 218,6, 170,3, 168,9, 159,9, 142,9, 137,6, 129,6,
131,1, 129,8, 119,9, 113,6, 102,1, 77,7, 75,5, 71,7, 53,0, 44,7,
40,0, 39,4, 34,8, 31,6, 23,4, 22,2, 19,4, 17,5, 16,1, 15,0,
12,1.
\vskip1.000000\baselineskip
KOSN 1673 RMN ^{13}C (CDCl_{3}, 100
MHz) \delta 218,2, 170,0, 155,5, 149,0, 139,4, 136,4, 132,1,
130,2, 129,8, 127,6, 125,6, 124,1, 121,6, 76,2, 75,0, 70,8, 53,8,
39,1, 44,7, 39,5, 39,1, 30,8, 28,4, 22,6, 17,6, 17,4, 15,7,
14,8.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Las mediciones de la inhibición del citocromo
P450 se realizaron usando un kit comercialmente disponible (BD
GenTest, Woburn, MA), usando BFC como sustrato contra CYP3A4. Los
valores de CI_{50} en micromoles obtenidos de este modo se
indican en la tabla 3.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La solubilidad del compuesto se determinó del
siguiente modo: A 95 \mul de solución salina tamponada con
fosfato se añadieron 5 \mul de la solución madre (a 20 mg/ml en
DMSO). Después de agitar en vórtex durante aproximadamente 10
segundos, la solución/suspensión se filtró a través de un filtro de
0,45 micrómetros y la cantidad de analito se cuantificó mediante
HPLC. Las solubilidades (mg/ml) determinadas fueron las siguientes:
epotilona D, < 0,06;
trans-9,10-dehidroepotilona D, < 0,06;
21-OH-26-F_{3}-trans-9,10-dehidroepotilona
D, 0,1;
21-amino-trans-9,10-dehidroepotilona
D, > 0,6;
21-amino-26-F_{3}-trans-9,10-dehidroepotilona
D, > 0,6;
26-F_{3}-trans-9,10-dehidroepotilona
D, < 0,06;
21-OH-trans-9,10-dehidroepotilona
D, 0,1; KOSN 1635, < 0,02; KOSN 1632, 0,12.
Las semividas de los compuestos en plasma fresco
humano y de ratón se determinaron mediante disolución de los
compuestos en DMSO y añadiendo alícuotas a las muestras de plasma de
ratón o humano. En el tiempo cero se alicuotaron 75 \mul de cada
muestra y se añadieron 150 \mul de acetonitrilo. El precipitado
blanco se centrifugó a 13500 rpm durante 3 minutos. Todo el
sobrenadante transparente se transfirió a otro tubo de
microcentrífuga y se repitió la etapa de centrifugación (13500 rpm/3
minutos). Se pipeteo cuidadosamente 150 \mul del sobrenadante
transparente en tubos para muestras de HPLC marcados y se intentó
evitar pipetear los precipitados de proteínas. Las muestras se
analizaron mediante HPLC para medir el resto del compuesto en cada
punto de tiempo mediante comparación con patrones auténticos. Se
determinó que las semividas (minutos) en plasma de ratón y humano,
respectivamente, eran: epotilona D: 49, > 1440;
21-OH-26-F_{3}-trans-9,10
dehidroepotilona D: 379, > 1440;
21-amino-trans-9,10-dehidroepotilona
D: 59, > 1440;
26-F3_{-}trans-9,10-dehidroepotilona
D: 163, > 1440;
21-OH-trans-9,10-dehidroepotilona
D: 1059, > 1440; KOSN 1635: 58, > 1440; KOSN 1632: 28, >
1440. Usando plasma congelado de ratón, la trans-9,10
dehidroepotilona D tenía una semivida de 47 minutos. En plasma
fresco humano, la trans-9,10 dehidroepotilona D tenía una
semivida > 1440 min.
Se realizaron estudios de unión de proteína
plasmática del siguiente modo. Los compuestos se disolvieron en
DMSO, después se diluyeron en muestras frescas o descongeladas de
plasma de ratón o humano y se incubaron a 37ºC. En puntos de tiempo
de 50 \mul se mezclaron con 100 \mul de acetonitrilo y se
centrifugaron a \sim 14000 rpm durante 3 minutos. Se extrajo
una alícuota de 100 \mul del sobrenadante y se apartó para
analizar para indicar el compuesto en la fracción total. El
sobrenadante restante se transfirió a un dispositivo de
ultrafiltración Microcon equipado con una membrana YM10 y se
centrifugó para separar el material unido a proteínas. Una alícuota
de 50 \mul del filtrado sin proteínas se mezcló con 100 \mul de
acetonitrilo, se centrifugó a \sim 14000 rpm durante 3 minutos,
después se recogieron 100 \mul del sobrenadante y se analizaron
para determinar la cantidad de compuesto no unido a proteínas. La
cantidad de compuesto en la muestra total y en la fracción sin
proteínas se determinó mediante análisis HPLC contra patrones
auténticos.
Estos estudios de unión a proteínas plasmáticas
indicaron los porcentajes siguientes de compuesto unido a proteína:
epotilona D: 98,5%;
trans-9,10-dehidroepotilona D, 96.6%;
26-trifluoro-trans-9,10-dehidroepotilona
D, 96,5%;
21-amino-trans-9,10-dehidro-epotilona
D, 89,5%;
21-OH-26-F_{3}-trans-9,10-dehidroepotilona
D, 92,8%;
21-OH-trans-9,10-dehidroepotilona
D, 94,2%; KOSN 1635, 99,7%; KOSN 1632, 89,4%.
Aunque se ha ilustrado y descrito la forma de
realización preferida de la invención deberá apreciarse que se
pueden realizar varios cambios a la misma.
Claims (13)
1. Un compuesto de fórmula (I) siguiente, o una
sal del mismo farmacéuticamente aceptable:
en la
que
R es H, alquilo inferior
C_{1}-C_{4} o alquilo inferior
C_{1}-C_{4} sustituido con uno o más grupos
seleccionados de forma independiente de halo, hidroxilo, amino y
azido;
R_{1} es H, o alquilo inferior
C_{1}-C_{4}, alquenilo inferior
C_{2}-C_{4} o alquinilo inferior
C_{2}-C_{4} sustituidos o insustituidos, que
pueden estar sustituidos con uno o más grupos seleccionados de
forma independiente de halo, hidroxilo, amino y azido; y
Ar es 3-isoxazolilo, que puede
estar insustituido, monosustituido o disustituido con grupos
seleccionados de forma independiente de hidroxi, hidroxialquilo
C_{1}-C_{4}, halo, ciano, oxo, alquilimino,
amino, alquilamino, dialquilamino, acilaminoalquilo, alcoxi
C_{1}-C_{4}, tioalcoxi, alquilo inferior
C_{1}-C_{4}, cicloalquilo o haloalquilo
C_{1}-C_{4}.
2. Un compuesto de la reivindicación 1, en el
que R es alquilo inferior C_{1}-C_{4}
insustituido o alquilo inferior C_{1}-C_{4}
sustituido con uno o más grupos seleccionados de forma independiente
de halo, hidroxilo, amino y azido.
3. Un compuesto de la reivindicación 1, en el
que R es metilo o trifluorometilo.
4. Un compuesto de la reivindicación 1, en el
que R_{1} es H, alquilo inferior C_{1}-C_{4} o
alquilo inferior C_{1}-C_{4} sustituido con uno
o más grupos seleccionados de forma independiente de halo,
hidroxilo, amino y azido.
5. Un compuesto de la reivindicación 3, en el
que Ar es
5-metil-3-isoxazoílo.
6. Un compuesto según la reivindicación 1 de la
fórmula:
7. Un compuesto según la reivindicación 1 de la
fórmula:
8. Una composición que comprende una cantidad de
un compuesto de la reivindicación 1 eficaz para reducir la
hiperproliferación celular en un sujeto humano o animal cuando se
administra al mismo, junto con un transportador farmacéuticamente
aceptable.
9. Una composición de la reivindicación 8, que
comprende uno o más agentes activos además del compuesto de la
reivindicación 1.
10. Un compuesto de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7 para usar como producto farmacéutico.
11. El uso de un compuesto de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7 para la fabricación de un medicamento para
el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas.
12. El uso de la reivindicación 11, en el que la
enfermedad hiperproliferativa se selecciona de cáncer, psoriasis,
esclerosis múltiple, artritis reumatoide, aterosclerosis y
reestenosis.
13. El uso de la reivindicación 11, en el que la
enfermedad hiperproliferativa se selecciona del grupo constituido
por cáncer de mama, cáncer colorrectal y cáncer de pulmón de células
no pequeñas.
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