CN102712675A - 拟肽大环化合物 - Google Patents

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CN102712675A CN2010800479181A CN201080047918A CN102712675A CN 102712675 A CN102712675 A CN 102712675A CN 2010800479181 A CN2010800479181 A CN 2010800479181A CN 201080047918 A CN201080047918 A CN 201080047918A CN 102712675 A CN102712675 A CN 102712675A
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R·卡佩勒-利伯曼
J-w·韩
T·K·萨维尔
J·诺伊雷
河畑纪之
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Abstract

本发明公开了包含螺旋如α-螺旋的拟肽大环化合物，以及使用这类大环化合物治疗疾病诸如癌症的方法。在其他方面，该拟肽大环化合物包含α，α-二取代的氨基酸，或者可以包含连接至少两个氨基酸的α-位的交联体，或者所述两个氨基酸中的至少一个可以是α，α-二取代的氨基酸。本发明还包括靶向Wnt信号传导途径的成分，如Tcf4-β-连环蛋白复合体。

Description

拟肽大环化合物
交叉引用
本申请要求2009年9月22日提交的美国临时申请61/244,819的优先权，该美国临时申请通过引用整体并入本文。
发明背景
β-连环蛋白是钙粘着蛋白复合体的亚单位。β-连环蛋白是细胞粘附所必需的，并且作为Wnt途径的细胞内介质。Wnt信号传导途径在胚胎发育和肿瘤发生中起关键作用。细胞核和细胞质中的较少部分β-连环蛋白由Wnt信号调节。Wnt信号传导通过在Tcf/LEF家族的DNA-结合高速泳动族(HMG)-盒蛋白与β-连环蛋白之间形成复合体来激活基因转录。在未受刺激的细胞中，胞质β-连环蛋白被泛素连接酶-蛋白体系统组成性降解。Wnt信号传导抑制这一过程，使β-连环蛋白累积，并且随后转移到细胞核，在细胞核中它与TCF/LEF-1转录因子家族的成员形成转录激活复合体。Tcf/LEF-1蛋白本身没有固有的转录活性，它们通过向启动子募集协阻抑物来抑制Wnt靶基因的转录。当β-连环蛋白结合Tcf/LEF-1因子并且向启动子募集转录因子诸如p300/CBP和TATA结合蛋白时，发生靶基因的转录激活(Hecht，A.等人.J.Biol.Chem.274(1999)，第18017-18025页)。遗传学和生物化学研究表明，Wnt信号传导途径控制脊椎动物和无脊椎动物的胚胎发育中的多个过程。Wnt细胞内途径的不当激活与多种人类癌症有关，特别是与结肠癌有关(K.W.Kinzler和B.Vogelstein，Cell 87(1996)，第159-170页)。结直肠癌、肝细胞癌(HCC)和其他癌症中的关键分子损伤是由例如c-myc、细胞周期蛋白D1、VEGF等T细胞因子(TCF)依赖性基因的β-连环蛋白依赖型转录激活引起的。对于肿瘤发生，β-连环蛋白与TCF之间复合体的形成是Wnt靶基因激活的关键步骤(M.Bienz和H.Clevers Cell 103(2000)，第311-320页)。在大多数结直肠癌中发现了腺瘤性结肠息肉(APC)基因—细胞β-连环蛋白水平的一种重要调节物—中的突变。靶向Wnt途径中APC下游的元件，如Tcf4-β-连环蛋白复合体的形成和活性，代表了一种可能有效的治疗常见人类癌症的手段，并且亟需靶向Wnt信号传导途径成分如Tcf4-β-连环蛋白复合体的治疗方法。
发明内容
在一个方面，本发明提供了一种拟肽大环化合物，其包含与选自表1中氨基酸序列的氨基酸序列至少约60％、80％、90％或95％相同的氨基酸序列。或者，所述拟肽大环化合物的氨基酸序列选自表1中的氨基酸序列。在某些实施方案中，拟肽大环化合物包含螺旋，如α-螺旋。在其他实施方案中，拟肽大环化合物包含α，α-二取代的氨基酸。本发明的拟肽大环化合物可包含连接至少两个氨基酸的α-位的交联体(crosslinker)。所述两个氨基酸中的至少一个可以是α，α-二取代的氨基酸。
在某些实施方案中，拟肽大环化合物具有下式：
Figure BPA00001545839400021
其中：
A、C、D和E各自独立地为天然或非天然氨基酸；
B为天然或非天然氨基酸、氨基酸类似物、
Figure BPA00001545839400022
[-NH-L3-CO-]、[-NH-L3-SO2-]或[-NH-L3-]；
R1和R2独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，它们是未取代的或被卤素取代的；
R3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代；
L为式-L1-L2-的大环形成连接体；
L1和L2独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚环芳基、杂亚环芳基或[-R4-K-R4-]n，它们各自任选地被R5取代；
各个R4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基或杂亚芳基；
各个K为O、S、SO、SO2、CO、CO2或CONR3；
各个R5独立地为卤素、烷基、-OR6、-N(R6)2、-SR6、-SOR6、-SO2R6、-CO2R6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
各个R6独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
R7为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代，或是具有D残基的环状结构的一部分；
R8为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代，或是具有E残基的环状结构的一部分；
v和w独立地为1-1000的整数；
u、x、y和z独立地为0-10的整数；且
n为1-5的整数。
在其他实施方案中，拟肽大环化合物可包含连接该拟肽大环化合物内的第一氨基酸的骨架氨基与第二氨基酸的交联体。例如，本发明提供式(IV)或(IVa)的拟肽大环化合物：
Figure BPA00001545839400031
其中：
A、C、D和E各自独立地为天然或非天然氨基酸；
B为天然或非天然氨基酸、氨基酸类似物、
Figure BPA00001545839400042
[-NH-L3-CO-]、[-NH-L3-SO2-]或[-NH-L3-]；
R1和R2独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，它们是未取代的或被卤素取代的，或是具有E残基的环状结构的一部分；
R3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代；
L1和L2独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚环芳基、杂亚环芳基或[-R4-K-R4-]n，它们各自任选地被R5取代；
各个R4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基或杂亚芳基；
各个K为O、S、SO、SO2、CO、CO2或CONR3；
各个R5独立地为卤素、烷基、-OR6、-N(R6)2、-SR6、-SOR6、-SO2R6、-CO2R6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
各个R6独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
R7为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代；
v和w独立地为1-1000的整数；
u、x、y和z独立地为0-10的整数；且
n为1-5的整数。
另外，本发明提供一种治疗个体癌症的方法，包括向该个体施用本发明的拟肽大环化合物。本发明还提供了一种调节个体中的β-连环蛋白活性的方法，包括向该个体施用本发明的拟肽大环化合物，或者一种拮抗个体中β-连环蛋白与TCF/LEF蛋白之间的相互作用的方法，包括向该个体施用这种拟肽大环化合物。
参考引入
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用方式并入本文，就如同各个单独的出版物、专利或专利申请明确地和单个地通过引用并入本文一样。
附图说明
在所附的权利要求书中详细地阐明了本发明的新特征。通过参考以下阐述了利用本发明原理的说明性实施方案的详细描述和附图，将会更好地理解本发明的特征和优点。在这些附图中：
图1说明本发明的TCF拟肽大环化合物前体与β-连环蛋白的可能的结合模式。
图2说明本发明的TCF拟肽大环化合物前体与β-连环蛋白的可能的结合模式。
图3说明本发明的TCF拟肽大环化合物前体与β-连环蛋白的可能的结合模式。
图4a-c显示示例性的本发明拟肽大环化合物。
发明详述
如本文所用，术语“大环化合物”是指这样一种分子，该分子具有包含由至少9个共价键合的原子形成的环或环形的化学结构。
如本文所用，术语“拟肽大环化合物”或“交联的多肽”是指包含通过多个肽键连接的多个氨基酸残基和至少一个大环形成连接体的化合物，所述大环形成连接体在第一天然存在的或非天然存在的氨基酸残基(或类似物)与同一分子内的第二天然存在的或非天然存在的氨基酸残基(或类似物)之间形成大环。拟肽大环化合物包括其中大环形成连接体连接第一氨基酸残基(或类似物)的α碳和第二氨基酸残基(或类似物)的α碳的实施方案。拟肽大环化合物任选地包含位于一个或多个氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基之间的一个或多个非肽键，且除了形成大环化合物的任意残基外，任选地还包含一个或多个非天然存在的氨基酸残基或氨基酸类似物残基。当在拟肽大环化合物的上下文中提及时，“相应的非交联的多肽”理解为涉及与大环化合物长度相同的多肽，并且该多肽包含对应于大环化合物的野生型序列的等同天然氨基酸。
除非另外说明，本文提及的化合物和结构也意在包括仅在是否存在一个或多个同位素富集原子上不同的化合物。例如，本发明包括具有本发明结构但其中氢被氘或氚替代或者其中碳原子被13C-或14C-富集的碳替代或者其中碳原子被硅替代的化合物。本发明的化合物也可以在构成这些化合物的一个或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。例如，该化合物可以用诸如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)的放射性同位素放射性标记。本发明化合物的所有同位素变化，无论是否是放射性的，均包含在本发明的范围内。
如本文所用，术语“稳定性”是指如通过圆二色光谱、NMR或另一种生物物理测量法测定的，本发明拟肽大环化合物在溶液中保持特定的二级结构，或在体外或体内不会被蛋白水解作用降解。本发明所预期的二级结构的非限制性例子是α-螺旋、β-转角和β-折叠。
如本文所用，术语“螺旋稳定性”是指如通过圆二色光谱或NMR测量的，本发明的拟肽大环化合物保持α-螺旋结构。例如，在某些实施方案中，与相应的非交联的大环化合物相比，如通过圆二色光谱测定的，本发明的拟肽大环化合物在α-螺旋度上表现出至少1.25、1.5、1.75或2倍的增加。
术语“α-氨基酸”或简称为“氨基酸”是指含有的氨基和羧基都结合到被称为α-碳的碳上的分子。合适的氨基酸包括但不限于天然存在的氨基酸的D-异构体和L-异构体，以及通过有机合成或其他代谢途径制备的非天然存在的氨基酸。除非上下文另外特别指出，本文所用的术语氨基酸旨在包括氨基酸类似物。
术语“天然存在的氨基酸”是指在自然界合成的肽中通常发现的20种氨基酸中的任一种，已知其单字母缩写为A、R、N、C、D、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y和V。
术语“氨基酸类似物”或“非天然氨基酸”是指在结构上类似于氨基酸并且在形成拟肽大环化合物中可代替氨基酸的分子。氨基酸类似物包括但不限于除了在氨基和羧基(例如，α-氨基β-羧酸)之间包含一个或多个额外的亚甲基基团以外，或除了用相似反应性基团替代氨基或羧基(例如，用仲胺或叔胺替代伯胺，或用酯替代羧基)以外，在结构上与本文定义的氨基酸相同的化合物。
“非必需”氨基酸残基是可以基于多肽的野生型序列发生改变但不消除或根本改变多肽的基本生物学或生物化学活性(例如，受体结合或激活)的残基。“必需”氨基酸残基是当基于多肽的野生型序列发生改变时导致多肽的基本生物学或生物化学活性消除或基本消除的残基。
“保守氨基酸置换”是氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基所替代的氨基酸置换。本领域中已定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，K、R、H)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，D、E)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如，G、N、Q、S、T、Y、C)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，A、V、L、I、P、F、M、W)、具有β分支的侧链的氨基酸(例如，T、V、I)和具有芳香族侧链的氨基酸(例如，Y、F、W、H)。因此，多肽中预测的非必需氨基酸残基例如优选地被来自同一侧链家族的另一种氨基酸残基所替代。可接受的置换的其他例子是基于电子等排考虑(例如，正亮氨酸取代甲硫氨酸)或其他性质(如2-噻吩丙氨酸取代苯丙氨酸)的置换。
在本文中与大环化合物或大环形成连接体一起使用的术语“元”是指形成或可以形成大环的原子，并且不包括取代基或侧链原子。以此类推，环癸烷、1，2-二氟-癸烷和1，3-二甲基-环癸烷都被认为是十元大环化合物，因为氢或氟取代基或甲基侧链都没有参与形成大环。
当用作分子结构的一部分时，符号
Figure BPA00001545839400081
是指单键或者反式或顺式双键。
术语“氨基酸侧链”是指连接到氨基酸中的α-碳上的部分。例如，丙氨酸的氨基酸侧链是甲基，苯丙氨酸的氨基酸侧链是苯甲基，半胱氨酸的氨基酸侧链是硫甲基，天冬氨酸的氨基酸侧链是羧甲基，酪氨酸的氨基酸侧链是4-羟基苯甲基，等等。也包括其他非天然存在的氨基酸侧链，例如，天然产生的氨基酸侧链(例如，氨基酸代谢物)或合成制备的氨基酸侧链(例如，α，α-二取代的氨基酸)。
术语“α，α-二取代的氨基酸”是指包含的氨基和羧基都结合到碳(α-碳)上而该碳(α-碳)连接到两个天然或非天然氨基酸侧链上的分子或部分。
术语“多肽”包括通过共价键(例如，酰胺键)连接的两个或多个天然或非天然存在的氨基酸。本文所述的多肽包括全长蛋白质(例如，完全加工的蛋白质)以及较短的氨基酸序列(例如，天然存在的蛋白质的片段或合成的多肽片段)。
本文所用的术语“大环化试剂”或“大环形成试剂”是指任何可以用来通过介导两个反应性基团之间的反应而制备本发明的拟肽大环化合物的试剂。该反应性基团可以是，例如，叠氮和炔，在这种情况下，大环化试剂包括但不限于Cu试剂，如提供反应性Cu(I)物质的试剂，如CuBr、CuI或CuOTf，以及通过加入还原剂诸如抗坏血酸或抗坏血酸钠可以原位转化为活性Cu(I)试剂的Cu(II)盐，如Cu(CO2CH3)2、CuSO4和CuCl2。大环化试剂另外可以包括，例如，本领域已知的Ru试剂，如Cp*RuCl(PPh3)2、[Cp*RuCl]4，或其他可以提供反应性Ru(II)物质的Ru试剂。在其他情况下，反应性基团为末端烯类。在这样的实施方案中，大环化试剂或大环形成试剂为复分解催化剂，包括但不限于稳定的后过渡金属卡宾络合物催化剂，如VIII族过渡金属卡宾催化剂。例如，这样的催化剂为具有+2氧化态、电子计数为16且五配位的Ru和Os金属中心。其他催化剂在Grubbs等人，″Ring ClosingMetathesis and Related Processes in Organic Synthesis″Acc.Chem.Res.1995，28，446-452和美国专利5,811,515中公开。在另外其他情况下，反应性基团为巯基。在这样的实施方案中，大环化试剂为，例如，用两个巯基反应性基团如卤素基团官能化的连接体。
术语“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘或其基团。
术语“烷基”是指含有指定数目的碳原子的直链或支链烃链。例如，C1-C10表示该基团中具有1-10(含端值)个碳原子。在没有指定任何数值时，“烷基”是其中具有1-20(含端值)个碳原子的链(直链或支链)。
术语“亚烷基”是指二价烷基(即，-R-)。
术语“烯基”是指具有一个或多个碳-碳双键的直链或支链烃链。烯基部分含有指定数目的碳原子。例如，C2-C10表示该基团中具有2-10(含端值)个碳原子。术语“低级烯基”是指C2-C6烯基链。在没有指定任何数值时，“烯基”是其中具有2-20(含端值)个碳原子的链(直链或支链)。
术语“炔基”是指具有一个或多个碳-碳叁键的直链或支链烃链。炔基部分含有指定数目的碳原子。例如，C2-C10表示该基团中具有2-10(含端值)个碳原子。术语“低级炔基”是指C2-C6炔基链。在没有指定任何数值时，“炔基”是其中具有2-20(含端值)个碳原子的链(直链或支链)。
术语“芳基”是指6碳单环或10碳双环的芳香环系统，其中各环的0、1、2、3或4个原子被取代基取代。芳基的例子包括苯基、萘基等。术语“芳基烷基”或术语“芳烷基”是指被芳基取代的烷基。术语“芳基烷氧基”是指被芳基取代的烷氧基。
“烷基芳基(arylalkyl)”是指如上定义的芳基，其中芳基的氢原子中的一个被如上定义的C1-C5烷基取代。烷基芳基的代表性例子包括但不限于：2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、2-乙基苯基、3-乙基苯基、4-乙基苯基、2-丙基苯基、3-丙基苯基、4-丙基苯基、2-丁基苯基、3-丁基苯基、4-丁基苯基、2-戊基苯基、3-戊基苯基、4-戊基苯基、2-异丙基苯基、3-异丙基苯基、4-异丙基苯基、2-异丁基苯基、3-异丁基苯基、4-异丁基苯基、2-仲丁基苯基、3-仲丁基苯基、4-仲丁基苯基、2-叔丁基苯基、3-叔丁基苯基和4-叔丁基苯基。
“酰胺基芳基(arylamido)”是指如上定义的芳基，其中芳基的氢原子中的一个被一个或多个-C(O)NH2基团取代。酰胺基芳基的代表性例子包括：2-C(O)NH2-苯基、3-C(O)NH2-苯基、4-C(O)NH2-苯基、2-C(O)NH2-吡啶基、3-C(O)NH2-吡啶基和4-C(O)NH2-吡啶基。
“杂环基烷基(alkylheterocycle)”是指如上定义的C1-C5烷基其中C1-C5烷基的氢原子中的一个被杂环取代。杂环基烷基的代表性例子包括但不限于：-CH2CH2-吗啉、-CH2CH2-哌啶、-CH2CH2CH2-吗啉和-CH2CH2CH2-咪唑。
“酰胺基烷基(alkylamido)”是指如上定义的C1-C5烷基其中C1-C5烷基的氢原子中的一个被-C(O)NH2基团取代。酰胺基烷基的代表性例子包括但不限于：-CH2-C(O)NH2、-CH2CH2-C(O)NH2、-CH2CH2CH2C(O)NH2、-CH2CH2CH2CH2C(O)NH2、-CH2CH2CH2CH2CH2C(O)NH2、-CH2CH(C(O)NH2)CH3、-CH2CH(C(O)NH2)CH2CH3、-CH(C(O)NH2)CH2CH3、-C(CH3)2CH2C(O)NH2、-CH2-CH2-NH-C(O)-CH3、-CH2-CH2-NH-C(O)-CH3-CH3和-CH2-CH2-NH-C(O)-CH＝CH2。
“羟烷基”是指如上定义的C1-C5烷基其中C1-C5烷基的氢原子中的一个被羟基取代。羟烷基的代表性例子包括但不限于：-CH2OH、-CH2CH2OH、-CH2CH2CH2OH、-CH2CH2CH2CH2OH、-CH2CH2CH2CH2CH2OH、-CH2CH(OH)CH3、-CH2CH(OH)CH2CH3、-CH(OH)CH3和-C(CH3)2CH2OH。
“羧基烷基(alkylcarboxy)”是指如上定义的C1-C5烷基其中C1-C5烷基的氢原子中的一个被-COOH基团取代。羧基烷基的代表性例子包括但不限于：-CH2COOH、-CH2CH2COOH、-CH2CH2CH2COOH、-CH2CH2CH2CH2COOH、-CH2CH(COOH)CH3、-CH2CH2CH2CH2CH2COOH、-CH2CH(COOH)CH2CH3、-CH(COOH)CH2CH3和-C(CH3)2CH2COOH。
本文使用的术语“环烷基”包括具有3-12个碳、优选3-8个碳、更优选3-6个碳的饱和的和部分不饱和的环烃基，其中环烷基另外任选地被取代。一些环烷基包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基和环辛基。
术语“杂芳基”是指芳香族的5-8元单环、8-12元双环或11-14元三环的环系统，其如果是单环则具有1-3个杂原子，如果是双环则具有1-6个杂原子，或者如果是三环则具有1-9个杂原子，所述杂原子选自O、N或S(例如，如果是单环、双环或三环，分别为碳原子和1-3、1-6或1-9个O、N或S杂原子)，其中各个环的0、1、2、3或4个原子被取代基取代。杂芳基的例子包括吡啶基、呋喃基(furyl或furanyl)、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、噻吩基(thiophenyl或thienyl)、喹啉基、吲哚基、噻唑基等。
术语“杂芳基烷基”或术语“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基。术语“杂芳基烷氧基”是指被杂芳基取代的烷氧基。
术语“杂芳基烷基”或术语“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基。术语“杂芳基烷氧基”是指被杂芳基取代的烷氧基。
术语“杂环基”是指非芳香族的5-8元单环、8-12元双环或11-14元三环的环系统，其如果是单环则具有1-3个杂原子，如果是双环则具有1-6个杂原子，或者如果是三环则具有1-9个杂原子，所述杂原子选自O、N或S(例如，如果是单环、双环或三环，分别为碳原子和1-3、1-6或1-9个O、N或S杂原子)，其中各个环的0、1、2或3个原子被取代基取代。杂环基的例子包括哌嗪基、吡咯烷基、二氧杂环己基、吗啉基、四氢呋喃基等。
术语“取代基”是指取代任何分子、化合物或部分上的第二原子或基团如氢原子的基团。合适的取代基包括但不限于卤素、羟基、巯基、氧代、硝基、卤代烷基、烷基、烷芳基、芳基、芳烷基、烷氧基、硫代烷氧基、芳氧基、氨基、烷氧羰基、酰胺基、羧基、链烷磺酰基、烷基羰基和氰基。
在某些实施方案中，本发明的化合物包含一个或多个不对称中心，因而作为外消旋体或外消旋混合物、单一对映异构体、单独的非对映异构体和非对映体混合物存在。除非另外明确地指出，本发明包括这些化合物的所有这些异构体形式。在某些实施方案中，本发明的化合物也表现为多种互变异构形式，在这些情况下，本发明包括本文所述化合物的所有互变异构形式(例如，如果环系统的烷基化作用导致在多个位置发生烷基化，那么本发明包括所有这些反应产物)。除非另外明确地指出，本发明包括这些化合物的所有这些异构体形式。除非另外明确地指出，本发明包括本文所述化合物的所有晶形。
如本文所用，术语“增加”和“减少”分别意味着导致至少5％的统计学显著的(即，p＜0.1)增加或减少。
如本文所用，提及变量的数值范围意味着表示本发明可以采用等于该范围内的任意值的该变量实施。因此，对于本身不连续的变量，该变量等于该数值范围内的任意整数值，包括该范围的端点。类似地，对于本身连续的变量，该变量等于该数值范围内的任意实值，包括该范围的端点。作为例子，而不是限制，如果变量本身是不连续的，描述为具有0-2之间的值的变量取0、1或2的值；而如果变量本身是连续的，则取0.0、0.1、0.01、0.001的值或≥0且≤2的其他任何实值。
如本文所用，除非另外特别指出，单词“或”以“和/或”的包含性含义使用，而非“或/或”的排它性的含义。
术语“平均”表示对于每个数据点通过进行至少3次独立的重复而获得的平均值。
术语“生物活性”包括本发明的大环化合物的结构和功能特性。生物活性是，例如，结构稳定性、α-螺旋性、对靶标的亲和性、对蛋白水解降解的抗性、细胞渗透性，细胞内稳定性、体内稳定性或它们的任意组合。
在下面的附图和描述中阐述了本发明的一种或多种具体实施方案的细节。从说明书、附图和权利要求书中可以清楚地看出本发明的其他特征、目的和优势。
在某些实施方案中，肽序列来源于含有β-连环蛋白结合域(CBD)的蛋白质。
β-连环蛋白的一级结构包括其磷酸化依赖性降解所需的约130个残基的N-末端区，募集转录辅激活物的C-末端约100个残基的区段，和跨越残基134-668的12个犰狳蛋白重复的中心结构域(Peifer M.等人，Cell 76，789-791，1994)。该核心犰狳蛋白重复区与钙粘着蛋白、APC和Tcf家族转录因子相互作用。该区的晶体结构显示每个犰狳蛋白重复由三个螺旋组成；12个重复堆积形成螺旋的超螺旋。得到的杆状结构具有带正电荷的长表面，推测该表面是结合相互作用蛋白质中的酸性序列的结合位点。这些结合配偶体既使用相似的序列又使用差异的序列来结合β-连环蛋白表面上的不同区域。
Tcf/LEF家族有四个成员。Tcf/LEF-1家族成员与β-连环蛋白在该蛋白质的大中心核心结合，该中心核心包含12个犰狳蛋白重复。每个犰狳蛋白重复由三个α螺旋组成，12个重复一起形成以带正电荷的长沟为特征的超螺旋(A.H.Huber，W.J.Nelson和W.I.Weis，Cell 90(1997)，第871-882页)。包括TCF1、TCF3和TCF4在内的Tcf/LEF-1家族成员的CBD对应于位于该蛋白质的N末端的大约60个氨基酸(J.Behrens等人，Nature 382(1996)，第638-642页)。例如，Tcf4/β-连环蛋白复合体的结构显示两个明显的蛋白质间相互作用位点：结合β-连环蛋白犰狳蛋白重复4-9的延伸区(Tcf4的残基13-25)和结合犰狳蛋白重复3-5的C-末端螺旋(残基40-50)(Poy F等人.Nat Structural Biol.，vol.8 no 12，2001)。Tcf4(残基13-25)肽的延伸部分在连续犰狳蛋白重复之间的扭转产生的带正电荷的沟中结合。Asp 16和Glu 17分别与β-连环蛋白Lys435和Lys 508形成盐桥氢键，Lys 435和Lys 508位于识别沟任一侧上的结合肽的侧翼。延伸区的C-末端也通过静电相互作用锚定，该相互作用是Tcf4中的Glu 24与β-连环蛋白中的Lys 312之间的盐桥。许多居间接触在性质上是疏水性的；Tcf4残基Ile 19和Phe 21的侧链一起装入由β-连环蛋白残基Cys 466、Pro 463和Arg 386的脂肪族部分围成的缝隙中。量热研究已经确定了Tcf4中的Asp 16是高亲和力结合的关键残基。β-连环蛋白中Lys 435或Lys 312的突变消除了爪蟾(Xenopus)Tcf3(XTcf3)的共沉淀(Graham，T.A.，Weaver，C.，Mao，F.，Kimelman，D.&Xu，W.Cell 103，885-896 2000)。Tcf4中的残基40-50构成两亲性螺旋，该螺旋位于在由β-连环蛋白中的犰狳蛋白重复3、4和5形成的浅沟中。Tcf4螺旋的一面上的疏水性残基嵌入该沟的底部。Tcf4残基Asp40、Lys 45和Ser 47沿着该沟的边缘形成极性和静电相互作用，有助于螺旋的识别。Asp 40的侧链在β-连环蛋白的Arg 376和Lys 335之间延伸，Lys 45与His 260和Asn 261氢键键合，并且Ser 47与Lys 292氢键键合。这些相互作用也存在于XTcf3-β-连环蛋白复合体中，http://www.nature.com/nsmb/journal/v8/n12/full/nsb720.html-B19#B19(Graham，T.A.，Weaver，C.，Mao，F.，Kimelman，D.&Xu，W.Cell 103，885-896(2000))。
Tcf/LEF-1家族的所有成员也具有位于该蛋白质的C末端一半内的高度保守的HMG DNA结合域。特别是，来自爪蟾的XTcf3-CBD从N末端到C末端由β发夹模块、含有β链的延伸区和α螺旋组成。XTcf3-CBD沿超螺旋的长轴以反平行方式围绕β-连环蛋白的犰狳蛋白重复区缠绕(Graham TA等人.Cell，Vol103 issue 6，2000)。XTcf3-CBD的螺旋区由残基Asp-40至Glu-51组成。XTcf3-CBD的螺旋与β-连环蛋白中犰狳蛋白重复3和4的第三螺旋接近反平行。XTcf3-CBD螺旋由Tcf/LEF-1家族共有序列N′-DLAKSSLV-C′组成。XTcf3-CBD的Asp-40和Lys-45的侧链分别与β-连环蛋白的Lys-335和Asn-261的侧链配位。这两个相互作用可以作为系链起作用，以稳定螺旋的相对定位。xTcf3的α-螺旋结合区靠着β-连环蛋白的臂重复3和4的H3螺旋包裹。XTcf3-CBD螺旋中的四个疏水性残基——Leu-41、Val-44、Leu-48和Val-49，构成与β-连环蛋白沟互补的表面(Graham TA等人.Cell，Vol103 issue 6，2000)。由于阻断β-连环蛋白和TCF之间相互作用的化合物可能是用于治疗由Wnt途径不当激活引起的癌症的有用的药物制剂，通过本发明的方法产生的CBD肽的任何新结构可用于预防和/或治疗众多类型的其中Wnt途径起作用的癌症。这样的癌症包括结直肠肿瘤、肝细胞癌、黑色素瘤和其他在Wnt途径成分中具有突变的肿瘤。
靶向β-连环蛋白/TCF的相互作用使得可以通过抑制β-连环蛋白/TCF复合体而选择性针对多种类型的癌症，包括但不限于结直肠肿瘤、肝细胞癌、黑色素瘤和其他在Wnt途径成分中具有突变的肿瘤。目前还没有β-连环蛋白/TCF相互作用的小分子抑制剂。其他Tcf家族成员、钙粘着蛋白及可能APC本身所使用的结合表面的明显重叠代表了药物开发中的复杂因素，因为破坏β-连环蛋白/TCF相互作用的抑制剂可能会破坏β-连环蛋白/钙粘着蛋白相互作用或β-连环蛋白/APC或轴蛋白相互作用。这些复合体中的任一个的去稳定化可导致毒性，或者在APC的情况下，引起正常细胞中Tcf4的恶性激活。尽管在E-钙粘着蛋白和xTcf3结合机制中发现有相似性，具有热力学差异的β-连环蛋白配体之间结合的局部区域使得可能设计出β-连环蛋白-Tcf相互作用的特异性抑制剂。突变研究提示α-螺旋区对于钙粘着蛋白结合β-连环蛋白的重要性较低，因此对于β-连环蛋白/TCF相互作用更加特异。因此，本发明还提供一种治疗包括但不限于癌症和过度增生疾病的疾病的方法，包括向β-连环蛋白施用本发明的TCF拟肽大环化合物。
下面给出了用于本发明的合适的β-连环蛋白/TCF肽的非限制性示例列表：
表1
Figure BPA00001545839400161
Figure BPA00001545839400171
表1显示适合合成拟肽大环化合物的β-连环蛋白/TCF序列。“间隔区”表示非肽连接体链如PEGn。
本发明的拟肽大环化合物
在某些实施方案中，本发明的拟肽大环化合物具有式(I)：
Figure BPA00001545839400172
其中：
A、C、D和E各自独立地为天然或非天然氨基酸；
B为天然或非天然氨基酸、氨基酸类似物、
Figure BPA00001545839400173
[-NH-L3-CO-]、[-NH-L3-SO2-]或[-NH-L3-]；
R1和R2独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，它们是未取代的或被卤素取代的；
R3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代；
L为式-L1-L2-的大环形成连接体；
L1和L2独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚环芳基、杂亚环芳基或[-R4-K-R4-]n，它们各自任选地被R5取代；
各个R4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基或杂亚芳基；
各个K为O、S、SO、SO2、CO、CO2或CONR3；
各个R5独立地为卤素、烷基、-OR6、-N(R6)2、-SR6、-SOR6、-SO2R6、-CO2R6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
各个R6独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
R7为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代，或是具有D残基的环状结构的一部分；
R8为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代，或是具有E残基的环状结构的一部分；
v和w独立地为1-1000的整数；
u、x、y和z独立地为0-10的整数；且
n为1-5的整数。
在一个实施例中，R1和R2中的至少一个是未取代的或被卤素取代的烷基。在另一个实施例中，R1和R2均独立地为未取代的或被卤素取代的烷基。在某些实施方案中，R1和R2中的至少一个为甲基。在其他实施方案中，R1和R2为甲基。
在本发明的某些实施方案中，x+y+z至少为3。在本发明的其他实施方案中，x+y+z为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。本发明的大环化合物或大环化合物前体中每次出现的A、B、C、D或E独立地选择。例如，由式[A]x表示的序列，当x为3时，包括其中氨基酸不相同的实施方案，例如Gln-Asp-Ala，以及其中氨基酸相同的实施方案，例如Gln-Gln-Gln。这适用于指定范围内x、y或z的任意值。类似地，当u大于1时，本发明的各个化合物可包含相同或不同的拟肽大环化合物。例如，本发明的化合物可以包含含有不同连接体长度或化学组成的拟肽大环化合物。
在某些实施方案中，本发明的拟肽大环化合物包含α-螺旋二级结构且R8为-H，其允许螺旋内氢键键合。在某些实施方案中，A、B、C、D或E中的至少一个为α，α-二取代的氨基酸。在一个实施例中，B为α，α-二取代的氨基酸。例如，A、B、C、D或E中的至少一个为2-氨基异丁酸。在其他实施方案中，A、B、C、D或E中的至少一个为
Figure BPA00001545839400191
在其他实施方案中，选择从第一Cα到第二Cα测量的大环形成连接体L的长度，以稳定希望的二级肽结构，例如由拟肽大环化合物的残基(包括但不是必须限于第一Cα到第二Cα之间的残基)形成的α-螺旋。
在一个实施方案中，式(I)的拟肽大环化合物为：
Figure BPA00001545839400192
其中各个R1和R2独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，它们是未取代的或被卤素取代的。
在相关实施方案中，式(I)的拟肽大环化合物为：
Figure BPA00001545839400193
在其他实施方案中，式(I)的拟肽大环化合物是以下所示通式中的任一个的化合物：
Figure BPA00001545839400194
Figure BPA00001545839400201
Figure BPA00001545839400211
其中“AA”表示任何天然或非天然氨基酸侧链，且为如上定义的[D]v、[E]w，且n为0至20、50、100、200、300、400或500的整数。在某些实施方案中，n为0。在其他实施方案中，n小于50。
大环形成连接体L的示例性实施方案如下所示。
Figure BPA00001545839400213
在某些实施方案中，本发明的拟肽大环化合物具有式(II)：
Figure BPA00001545839400214
其中：
A、C、D和E各自独立地为天然或非天然氨基酸；
B为天然或非天然氨基酸、氨基酸类似物、
Figure BPA00001545839400221
[-NH-L3-CO-]、[-NH-L3-SO2-]或[-NH-L3-]；
R1和R2独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，它们是未取代的或被卤素取代的；
R3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代；
L为下式的大环形成连接体：
Figure BPA00001545839400222
L1、L2和L3独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚环芳基、杂亚环芳基或[-R4-K-R4-]n，它们各自任选地被R5取代；
各个R4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基或杂亚芳基；
各个K为O、S、SO、SO2、CO、CO2或CONR3；
各个R5独立地为卤素、烷基、-OR6、-N(R6)2、-SR6、-SOR6、-SO2R6、-CO2R6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
各个R6独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
R7为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代，或是具有D残基的环状结构的一部分；
R8为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代，或是具有E残基的环状结构的一部分
v和w独立地为1-1000的整数；
u、x、y和z独立地为0-10的整数；且
n为1-5的整数。
在一个实施例中，R1和R2中的至少一个是未取代的或被卤素取代的烷基。在另一个实施例中，R1和R2均独立地为未取代的或被卤素取代的烷基。在某些实施方案中，R1和R2中的至少一个为甲基。在其他实施方案中，R1和R2为甲基。
在本发明的某些实施方案中，x+y+z至少为3。在本发明的其他实施方案中，x+y+z为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。本发明的大环化合物或大环化合物前体中每次出现的A、B、C、D或E独立地选择。例如，由式[A]x表示的序列，当x为3时，包括其中氨基酸不相同的实施方案，例如Gln-Asp-Ala，以及其中氨基酸相同的实施方案，例如Gln-Gln-Gln。这适用于指定范围内x、y或z的任意值。
在某些实施方案中，本发明的拟肽大环化合物包含α-螺旋二级结构且R8为-H，其允许螺旋内氢键键合。在某些实施方案中，A、B、C、D或E中的至少一个为α，α-二取代的氨基酸。在一个实施例中，B为α，α-二取代的氨基酸。例如，A、B、C、D或E中的至少一个为2-氨基异丁酸。在其他实施方案中，A、B、C、D或E中的至少一个为
Figure BPA00001545839400231
在其他实施方案中，选择从第一Cα到第二Cα测量的大环形成连接体L的长度，以稳定希望的肽二级结构，例如由拟肽大环化合物的残基(包括但不是必须限于第一Cα到第二Cα之间的残基)形成的α-螺旋。
大环形成连接体L的示例性实施方案如下所示。
Figure BPA00001545839400241
Figure BPA00001545839400251
在其他实施方案中，本发明提供式(III)的拟肽大环化合物：
Figure BPA00001545839400252
其中：
A、C、D和E各自独立地为天然或非天然氨基酸；
B为天然或非天然氨基酸、氨基酸类似物、
Figure BPA00001545839400261
[-NH-L4-CO-]、[-NH-L4-SO2-]或[-NH-L4-]；
R1和R2独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，它们是未取代的或被卤素取代的；
R3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，它们是未取代的或被R5取代的；
L1、L2、L3和L4独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚环芳基、杂亚环芳基或[-R4-K-R4-]n，它们各自是未取代的或被R5取代的；
K为O、S、SO、SO2、CO、CO2或CONR3；
各个R4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基或杂亚芳基；
各个R5独立地为卤素、烷基、-OR6、-N(R6)2、-SR6、-SOR6、-SO2R6、-CO2R6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
各个R6独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
R7为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，它们是未取代的或被R5取代的，或是具有D残基的环状结构的一部分；
R8为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，它们是未取代的或被R5取代的，或是具有E残基的环状结构的一部分；
v和w独立地为1-1000的整数；
u、x、y和z独立地为0-10的整数；且
n为1-5的整数。
在一个实施例中，R1和R2中的至少一个是未取代的或被卤素取代的烷基。在另一个实例中，R1和R2均独立地为未取代的或被卤素取代的烷基。在某些实施方案中，R1和R2中的至少一个为甲基。在其他实施方案中，R1和R2为甲基。
在本发明的某些实施方案中，x+y+z至少为3。在本发明的其他实施方案中，x+y+z为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。本发明的大环化合物或大环化合物前体中每次出现的A、B、C、D或E独立地选择。例如，由式[A]x表示的序列，当x为3时，包括其中氨基酸不相同的实施方案，例如Gln-Asp-Ala，以及其中氨基酸相同的实施方案，例如Gln-Gln-Gln。这适用于指定范围内x、y或z的任意值。
在某些实施方案中，本发明的拟肽大环化合物包含α-螺旋二级结构且R8为-H，其允许螺旋内氢键键合。在某些实施方案中，A、B、C、D或E中的至少一个为α，α-二取代的氨基酸。在一个实施例中，B为α，α-二取代的氨基酸。例如，A、B、C、D或E中的至少一个为2-氨基异丁酸。在其他实施方案中，A、B、C、D或E中的至少一个为
Figure BPA00001545839400271
在其他实施方案中，选择从第一Cα到第二Cα测量的大环形成连接体[-L1-S-L2-S-L3-]的长度，以稳定希望的二级肽结构，例如由拟肽大环化合物的残基(包括但不是必须限于第一Cα到第二Cα之间的残基)形成的α-螺旋。
例如，大环化合物或大环化合物前体通过溶液相或固相方法合成，并且可以包含天然存在的和非天然存在的氨基酸。参见，例如，Hunt，″The Non-Protein Amino Acids，Chemistry and Biochemistry of  the Amino Acids，G.C.Barrett编著，Chapman and Hall，1985。在某些实施方案中，巯基部分是氨基酸残基L-半胱氨酸、D-半胱氨酸、α-甲基-L-半胱氨酸、α-甲基-D-半胱氨酸、L-高半胱氨酸、D-高半胱氨酸、α-甲基-L-高半胱氨酸或α-甲基-D-高半胱氨酸的侧链。双烷基化试剂具有通式X-L2-Y，其中L2是连接体部分，且X和Y是被-SH部分替代以与L2形成键的离去基团。在某些实施方案中，X和Y是诸如I、Br或Cl的卤素。
在其他实施方案中，为了促进细胞摄取，进一步修饰式I、II或III化合物中的D和/或E。在某些实施方案中，将拟肽大环化合物脂质化(lipidating)或PEG化有利于细胞摄取、提高生物利用度、增强血液循环、改变药代动力学、降低免疫原性和/或降低所需的给药频率。
在其他实施方案中，式I、II或III化合物中的[D]和[E]中的至少一个代表包含另外的大环形成连接体的部分，从而使拟肽大环化合物包含至少两个大环形成连接体。在特定实施方案中，拟肽大环化合物包含两个大环形成连接体。
在本发明的拟肽大环化合物中，本文所述的任何大环形成连接体可以与表1-4中所示的任何序列任意组合使用，也可以与本文所述的任何R-取代基任意组合使用。
在某些实施方案中，拟肽大环化合物包含至少一个α-螺旋基序。例如，式I、II或III化合物中的A、B和/或C包含一个或多个α-螺旋。一般来说，α-螺旋每圈包含3至4个氨基酸残基。在某些实施方案中，拟肽大环化合物的α-螺旋包括1至5圈，因此包含3至20个氨基酸残基。在特定实施方案中，α-螺旋包括1圈、2圈、3圈、4圈或5圈。在某些实施方案中，大环形成连接体稳定拟肽大环化合物内包含的α-螺旋基序。因此，在某些实施方案中，选择大环形成连接体L从第一Cα到第二Cα的长度，以提高α-螺旋的稳定性。在某些实施方案中，大环形成连接体跨越α-螺旋的1圈至5圈。在某些实施方案中，大环形成连接体跨越α-螺旋的大约1圈、2圈、3圈、4圈或5圈。在某些实施方案中，大环形成连接体的长度为每圈α-螺旋大约
Figure BPA00001545839400281
至
Figure BPA00001545839400282
或每圈α-螺旋大约至
Figure BPA00001545839400284
当大环形成连接体跨越大约1圈α-螺旋时，长度等于大约5个碳-碳键至13个碳-碳键、大约7个碳-碳键至11个碳-碳键、或大约9个碳-碳键。当大环形成连接体跨越大约2圈α-螺旋时，长度等于大约8个碳-碳键至16个碳-碳键、大约10个碳-碳键至14个碳-碳键、或大约12个碳-碳键。当大环形成连接体跨越大约3圈α-螺旋时，长度等于大约14个碳-碳键至22个碳-碳键、大约16个碳-碳键至20个碳-碳键、或大约18个碳-碳键。当大环形成连接体跨越大约4圈α-螺旋时，长度等于大约20个碳-碳键至28个碳-碳键、大约22个碳-碳键至26个碳-碳键、或大约24个碳-碳键。当大环形成连接体跨越大约5圈α-螺旋时，长度等于大约26个碳-碳键至34个碳-碳键、大约28个碳-碳键至32个碳-碳键、或大约30个碳-碳键。当大环形成连接体跨越大约1圈α-螺旋时，连接含有大约4个原子至12个原子、大约6个原子至10个原子、或大约8个原子。当大环形成连接体跨越大约2圈α-螺旋时，连接含有大约7个原子至15个原子、大约9个原子至13个原子、或大约11个原子。当大环形成连接体跨越大约3圈α-螺旋时，连接含有大约13个原子至21个原子、大约15个原子至19个原子、或大约17个原子。当大环形成连接体跨越大约4圈α-螺旋时，连接含有大约19个原子至27个原子、大约21个原子至25个原子、或大约23个原子。当大环形成连接体跨越大约5圈α-螺旋时，连接含有大约25个原子至33个原子、大约27个原子至31个原子、或大约29个原子。当大环形成连接体跨越大约1圈α-螺旋时，得到的大环化合物形成含有大约17元至25元、大约19元至23元或大约21元的环。当大环形成连接体跨越大约2圈α-螺旋时，得到的大环化合物形成含有大约29元至37元、大约31元至35元或大约33元的环。当大环形成连接体跨越大约3圈α-螺旋时，得到的大环化合物形成含有大约44元至52元、大约46元至50元或大约48元的环。当大环形成连接体跨越大约4圈α-螺旋时，得到的大环化合物形成含有大约59元至67元、大约61元至65元或大约63元的环。当大环形成连接体跨越大约5圈α-螺旋时，得到的大环化合物形成含有大约74元至82元、大约76元至80元或大约78元的环。
在其他实施方案中，本发明提供式(IV)或式(IVa)的拟肽大环化合物：
其中：
A、C、D和E各自独立地为天然或非天然氨基酸；
B为天然或非天然氨基酸、氨基酸类似物、[-NH-L3-CO-]、[-NH-L3-SO2-]或[-NH-L3-]；
R1和R2独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，它们是未取代的或被卤素取代的，或是具有E残基的环状结构的一部分；
R3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代；
L为式-L1-L2-的大环形成连接体；
L1和L2独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚环芳基、杂亚环芳基或[-R4-K-R4-]n，它们各自任选地被R5取代；
各个R4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基或杂亚芳基；
各个K为O、S、SO、SO2、CO、CO2或CONR3；
各个R5独立地为卤素、烷基、-OR6、-N(R6)2、-SR6、-SOR6、-SO2R6、-CO2R6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
各个R6独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光基团、放射性同位素或治疗剂；
R7为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代；
v和w独立地为1-1000的整数；
u、x、y和z独立地为0-10的整数；且
n为1-5的整数。
在一个实例中，R1和R2中的至少一个是未取代的或被卤素取代的烷基。在另一个实例中，R1和R2均独立地为未取代的或被卤素取代的烷基。在某些实施方案中，R1和R2中的至少一个为甲基。在其他实施方案中，R1和R2为甲基。
在本发明的某些实施方案中，x+y+z至少为1。在本发明的其他实施方案中，x+y+z至少为2。在本发明的其他实施方案中，x+y+z为3、4、5、6、7、8、9或10。本发明的大环化合物或大环化合物前体中每次出现的A、B、C、D或E独立地选择。例如，由式[A]x表示的序列，当x为3时，包括其中氨基酸不相同的实施方案，例如Gln-Asp-Ala，以及其中氨基酸相同的实施方案，例如Gln-Gln-Gln。这适用于指定范围内x、y或z的任意值。
在某些实施方案中，本发明的拟肽大环化合物包含α-螺旋二级结构且R8为-H，其允许螺旋内氢键键合。在某些实施方案中，A、B、C、D或E中的至少一个为α，α-二取代的氨基酸。在一个实施例中，B为α，α-二取代的氨基酸。例如，A、B、C、D或E中的至少一个为2-氨基异丁酸。在其他实施方案中，A、B、C、D或E中的至少一个为
Figure BPA00001545839400311
在其他实施方案中，选择从第一Cα到第二Cα测量的大环形成连接体L的长度，以稳定希望的二级肽结构，例如由拟肽大环化合物的残基(包括但不是必须限于第一Cα到第二Cα之间的残基)形成的α-螺旋。
大环形成连接体-L1-L2-的示例性实施方案如下所示。
Figure BPA00001545839400321
拟肽大环化合物的制备
本发明的拟肽大环化合物可以通过本领域已知的众多方法中的任何一种来制备。例如，表1、2、3或4中由“X”表示的任何残基可以被能够与同一分子中的第二残基或这样的残基的前体形成交联体的残基。
各种实现拟肽大环化合物制备的方法是本领域已知的。例如，Schafmeister等人，J.Am.Chem.Soc.122：5891-5892(2000)；Schafmeister&Verdine，J.Am.Chem.Soc.122：5891(2005)；Walensky等人，Science305：1466-1470(2004)和美国专利7,192,713中描述了式I的拟肽大环化合物的制备。在所引用的参考文献中公开的α，α-二取代的氨基酸和氨基酸前体可以用于拟肽大环化合物前体多肽的合成。例如，“S5-烯氨基酸”是(S)-α-(2’-戊烯基)丙氨酸，且“R8-烯氨基酸”是(R)-α-(2’-辛烯基)丙氨酸。在将这样的氨基酸掺入前体多肽中之后，末端烯烃与复分解反应催化剂反应，从而导致拟肽大环化合物的形成。
在其他实施方案中，本发明的拟肽大环化合物具有式IV或IVa。制备这样的大环化合物的方法例如在美国专利7,202,332中描述。
在某些实施方案中，这些拟肽大环化合物的合成包括多步骤的过程，该过程的特征在于：合成含有叠氮部分和炔部分的拟肽前体；然后将拟肽前体与大环化试剂接触以产生三唑连接的拟肽大环化合物。这样的方法例如在2008年2月25日提交的美国申请12/037,041中描述。大环化合物或大环化合物前体例如通过溶液相或固相方法合成，并且可以包含天然存在的和非天然存在的氨基酸。参见，例如，Hunt，″The Non-Protein Amino Acids″，Chemistry and Biochemistry of the  Amino Acids，G.C.Barrett编著，Chapman and Hall，1985。
在某些实施方案中，叠氮连接到残基的α-碳上，炔连接到另一个残基的α-碳上。在某些实施方案中，叠氮部分是氨基酸L-赖氨酸、D-赖氨酸、α-甲基-L-赖氨酸、α-甲基-D-赖氨酸、L-鸟氨酸、D-鸟氨酸、α-甲基-L-鸟氨酸或α-甲基-D-鸟氨酸的叠氮基类似物。在另一个实施方案中，炔部分是L-炔丙基甘氨酸。在另外其他的实施方案中，炔部分是选自下组的氨基酸：L-炔丙基甘氨酸、D-炔丙基甘氨酸、(S)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(R)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(S)-2-氨基-2-甲基-5-己炔酸、(R)-2-氨基-2-甲基-5-己炔酸、(S)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、(R)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、(S)-2-氨基-2-甲基-7-辛炔酸、(R)-2-氨基-2-甲基-7-辛炔酸、(S)-2-氨基-2-甲基-8-壬炔酸和(R)-2-氨基-2-甲基-8-壬炔酸。
在某些实施方案中，本发明提供一种合成拟肽大环化合物的方法，该方法包括将式V或式VI的拟肽前体与大环化试剂接触的步骤：
Figure BPA00001545839400331
Figure BPA00001545839400341
其中，v、w、x、y、z、A、B、C、D、E、R1、R2、R7、R8、L1和L2如式(II)中所定义；当大环化试剂是Cu试剂时，R12为-H，当大环化试剂是Ru试剂时，R12为-H或烷基；而且进一步地，其中所述接触步骤导致在式III或式IV中的炔部分和叠氮部分之间形成共价连接。例如，当大环化试剂是Ru试剂时，R12可以是甲基。
在本发明的拟肽大环化合物中，R1和R2中的至少一个为烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，它们是未取代的或被卤素取代的。在某些实施方案中，R1和R2均独立地为烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，它们是未取代的或被卤素取代的。在某些实施方案中，A、B、C、D或E中的至少一个是α，α-二取代的氨基酸。在一个实例中，B是α，α-二取代的氨基酸。例如，A、B、C、D或E中的至少一个是2-氨基异丁酸。
例如，R1和R2中的至少一个是未取代的或被卤素-取代的烷基。在另一个实例中，R1和R2均独立地是未取代的或被卤素-取代的烷基。在某些实施方案中，R1和R2中的至少一个是甲基。在其他实施方案中，R1和R2是甲基。大环化试剂可以是Cu试剂或Ru试剂。
在某些实施方案中，拟肽前体在接触步骤之前纯化。在其他实施方案中，拟肽大环化合物在接触步骤之后纯化。在另外其他的实施方案中，拟肽大环化合物在接触步骤之后重折叠。该方法可以在溶液中进行，或者，可选择地，该方法可以在固体载体上进行。
本发明也涉及在结合拟肽前体或拟肽大环化合物的靶大分子的存在下，在有利于所述结合的条件下进行本发明的方法。在某些实施方案中，在优先结合拟肽前体或拟肽大环化合物的靶大分子的存在下，在有利于所述结合的条件下进行本发明的方法。该方法也可应用于合成拟肽大环化合物的文库。
在某些实施方案中，式V或式VI的拟肽前体的炔部分是选自下组的氨基酸的侧链：L-炔丙基甘氨酸、D-炔丙基甘氨酸、(S)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(R)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(S)-2-氨基-2-甲基-5-己炔酸、(R)-2-氨基-2-甲基-5-己炔酸、(S)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、(R)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、(S)-2-氨基-2-甲基-7-辛炔酸、(R)-2-氨基-2-甲基-7-辛炔酸、(S)-2-氨基-2-甲基-8-壬炔酸和(R)-2-氨基-2-甲基-8-壬炔酸。在其他实施方案中，式V或式VI的拟肽前体的叠氮部分是选自下组的氨基酸的侧链：ε-叠氮基-L-赖氨酸、ε-叠氮基-D-赖氨酸、ε-叠氮基-α-甲基-L-赖氨酸、ε-叠氮基-α-甲基-D-赖氨酸、δ-叠氮基-α-甲基-L-鸟氨酸和δ-叠氮基-α-甲基-D-鸟氨酸。
在某些实施方案中，x+y+z为3，并且A、B和C独立地是天然或非天然氨基酸。在其他实施方案中，x+y+z为6，且A、B和C独立地是天然或非天然氨基酸。
在某些实施方案中，接触步骤在选自质子溶剂、水性溶剂、有机溶剂及其混合物的溶剂中进行。例如，溶剂可以选自H2O、THF、THF/H2O、tBuOH/H2O、DMF、DIPEA、CH3CN或CH2Cl2、ClCH2CH2Cl或其混合物。溶剂可以是有利于螺旋形成的溶剂。
将可替代的但等效的保护基团、离去基团或试剂替换，并按照可选择的序列或顺序进行某些合成步骤，以产生希望的化合物。用于合成本文所述的化合物的合成化学转化和保护基团方法(保护和脱保护)包括，例如，如以下文献中所述的方法：Larock，Comprehensive Organic  Transformations，VCH Publishers(1989)；Greene和Wuts，Protective  Groups in Organic Synthesis，第2版，John Wiley and Sons(1991)；Fieser和Fieser，Fieser and Fieser′s Reagents for Organic Synthesis，John Wileyand Sons(1994)；和Paquette编著，Encyclopedia of Reagents for Organic  Synthesis，John Wiley and Sons(1995)及其后续版本。
本发明的拟肽大环化合物例如通过化学合成方法制备，如Fields等人，Synthetic Peptides：A User′s Guide中的第3章，Grant，W.H.编著，Freeman&Co.，New York，N.Y.，1992，第77页中所述的方法。因此，例如，采用具有被tBoc或Fmoc化学保护的胺的自动化Merrifield固相合成技术，在例如自动化肽合成仪(例如，Applied Biosystems(FosterCity，CA)，430A、431或433型)上使用侧链保护的氨基酸合成肽。
一种产生本文所述的拟肽前体和拟肽大环化合物的方式使用固相肽合成法(SPPS)。将C-末端氨基酸经由与连接体分子的酸不稳定的键连接到交联的聚苯乙烯树脂上。这种树脂不溶于用于合成的溶剂，从而使得洗去过量的试剂和副产物相对简单和快速。N-末端用在酸中稳定、但可用碱去除的Fmoc基团保护。必要时，用碱稳定的、酸不稳定的基团保护侧链官能团。
例如，通过使用天然的化学连接结合单个的合成肽来产生较长的拟肽前体。或者，通过公知的重组DNA和蛋白质表达技术生物合成较长的合成肽。在公知的标准手册中提供了这些技术的详细方案。为了构建编码本发明的拟肽前体的基因，逆向翻译氨基酸序列以获得编码该氨基酸序列的核酸序列，优选地使用对于将表达该基因的生物体为最佳的密码子。然后，通常通过合成编码该肽的寡核苷酸和在必要时合成任何调节元件来制备合成的基因。将合成的基因插入合适的克隆载体中，并转染到宿主细胞内。然后在适合所选择的表达系统和宿主的合适条件下表达该肽。通过标准方法纯化并表征该肽。
例如，使用例如高通量多通道组合合成仪(例如，来自CreoSalus，Louisville，KY的Thuramed TETRAS多通道肽合成仪或来自AAPPTEC，Inc.，Louisville，KY的Apex 396型多通道肽合成仪)以高通量的组合方式制备拟肽前体。
提供以下合成方案只是为了说明本发明，而并非意在限制如本文所述的本发明的范围。该图可以概要描述为以下内容：该说明性的方案显示了叠氮基氨基酸类似物ε-叠氮基-α-甲基-L-赖氨酸和ε-叠氮基-α-甲基-D-赖氨酸，以及炔氨基酸类似物L-炔丙基甘氨酸、(S)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸和(S)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸。因此，在下面的合成方案中，R1、R2、R7和R8各自为-H；各个L1为-(CH2)4-；且各个L2为-(CH2)-。但是，如以上整个发明详述部分所指出的，可以采用许多其他的氨基酸类似物，其中R1、R2、R7、R8、L1和L2可以独立地选自本文公开的各种结构。
合成方案1：
Figure BPA00001545839400371
合成方案1描述了本发明的几种化合物的制备。如Belokon等人(1998)，Tetrahedron Asymm.9：4249-4252所述制备由手性辅剂(S)-2-[N-(N’-苄基脯氨酰)氨基]苯甲酮(BPB)衍生的席夫碱和诸如甘氨酸或丙氨酸的氨基酸的Ni(II)络合物。产生的络合物随后与包含叠氮部分或炔部分的烷基化试剂反应，以产生对映体富集的本发明的化合物。如需要，产生的化合物可以进行保护以用于肽合成。
合成方案2：
Figure BPA00001545839400381
在如合成方案2所示的用于合成拟肽大环化合物的一般方法中，拟肽前体包含叠氮部分和炔部分，并且通过溶液相或固相肽合成法(SPPS)，使用可商购的氨基酸N-α-Fmoc-L-炔丙基甘氨酸以及以下氨基酸的N-α-Fmoc保护的形式合成：(S)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(S)-2-氨基-6-庚炔酸、(S)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、N-甲基-ε-叠氮基-L-赖氨酸和N-甲基-ε-叠氮基-D-赖氨酸。然后通过标准条件(例如，强酸如95％TFA)将拟肽前体脱保护并从固相树脂上切下。拟肽前体作为粗制混合物与大环化试剂如Cu(I)在有机溶液或水性溶液中进行反应，或者在反应之前进行纯化(Rostovtsev等人(2002)，Angew.Chem.Int.Ed.41：2596-2599；Tornoe等人(2002)，J.Org.Chem.67：3057-3064；Deiters等人(2003)，J.Am.Chem.Soc.125：11782-11783；Punna等人(2005)，Angew.Chem.Int.Ed.44：2215-2220)。在一个实施方案中，在有利于α-螺旋形成的条件下进行三唑形成反应。在一个实施方案中，在选自H2O、THF、CH3CN、DMF、DIPEA、tBuOH或其混合物的溶剂中进行大环化步骤。在另一个实施方案中，在DMF中进行大环化步骤。在某些实施方案中，在经缓冲的水性溶剂或部分水性溶剂中进行大环化步骤。
合成方案3：
Figure BPA00001545839400401
在如合成方案3所示的用于合成拟肽大环化合物的一般方法中，拟肽前体包含叠氮部分和炔部分，并且通过固相肽合成法(SPPS)，使用可商购的氨基酸N-α-Fmoc-L-炔丙基甘氨酸以及以下氨基酸的N-α-Fmoc保护的形式合成：(S)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(S)-2-氨基-6-庚炔酸、(S)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、N-甲基-ε-叠氮基-L-赖氨酸和N-甲基-ε-叠氮基-D-赖氨酸。拟肽前体作为粗制混合物与大环化试剂如Cu(I)试剂在树脂上反应(Rostovtsev等人(2002)，Angew.Chem.Int.Ed.41：2596-2599；Tornoe等人(2002)，J.Org.Chem.67：3057-3064；Deiters等人(2003)，J.Am.Chem.Soc.125：11782-11783；Punna等人(2005)，Angew.Chem.Int.Ed.44：2215-2220)。然后通过标准条件(例如，强酸如95％TFA)将得到的含三唑的拟肽大环化合物脱保护并从固相树脂上切下。在某些实施方案中，在选自CH2Cl2、ClCH2CH2Cl、DMF、THF、NMP、DIPEA、2，6-二甲基吡啶、吡啶、DMSO、H2O或其混合物的溶剂中进行大环化步骤。在某些实施方案中，在经缓冲的水性溶剂或部分水性溶剂中进行大环化步骤。
合成方案4：
Figure BPA00001545839400411
在如合成方案4所示的用于合成拟肽大环化合物的一般方法中，拟肽前体包含叠氮部分和炔部分，并且通过溶液相或固相肽合成法(SPPS)，使用可商购的氨基酸N-α-Fmoc-L-炔丙基甘氨酸以及以下氨基酸的N-α-Fmoc保护的形式合成：(S)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(S)-2-氨基-6-庚炔酸、(S)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、N-甲基-ε-叠氮基-L-赖氨酸和N-甲基-ε-叠氮基-D-赖氨酸。然后通过标准条件(例如，强酸如95％TFA)将拟肽前体脱保护并从固相树脂上切下。拟肽前体作为粗制混合物与大环化试剂如Cu(II)试剂例如Cp*RuCl(PPh3)2或[Cp*RuCl]4进行反应，或者在反应之前进行纯化(Rasmussen等人(2007)，Org.Lett.9：5337-5339；Zhang等人(2005)，J.Am.Chem.Soc.127：15998-15999)。在某些实施方案中，在选自DMF、CH3CN和THF的溶剂中进行大环化步骤。
合成方案5：
Figure BPA00001545839400431
在如合成方案5所示的用于合成拟肽大环化合物的一般方法中，拟肽前体包含叠氮部分和炔部分，并且通过固相肽合成法(SPPS)，使用可商购的氨基酸N-α-Fmoc-L-炔丙基甘氨酸以及以下氨基酸的N-α-Fmoc保护的形式合成：(S)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(S)-2-氨基-6-庚炔酸、(S)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、N-甲基-ε-叠氮基-L-赖氨酸和N-甲基-ε-叠氮基-D-赖氨酸。拟肽前体作为粗制混合物与大环化试剂如Ru(II)试剂在树脂上反应。例如，该试剂可以是Cp*RuCl(PPh3)2或[Cp*RuCl]4(Rasmussen等人(2007)，Org.Lett.9：5337-5339；Zhang等人(2005)，J.Am.Chem.Soc.127：15998-15999)。在某些实施方案中，在选自CH2Cl2、ClCH2CH2Cl、CH3CN、DMF和THF的溶剂中进行大环化步骤。
本发明涉及在本文所述的拟肽大环化合物的合成中使用非天然存在的氨基酸和氨基酸类似物。任何适合于用来合成稳定的含三唑拟肽大环化合物的合成方法的氨基酸或氨基酸类似物都可以用于本发明。例如，认为L-炔丙基甘氨酸是本发明中有用的氨基酸。但是，含有不同氨基酸侧链的其他含炔的氨基酸也可用于本发明。例如，L-炔丙基甘氨酸在氨基酸的α-碳和氨基酸侧链的炔之间含有一个亚甲基单元。本发明也涉及使用在α-碳和炔之间具有多个亚甲基单元的氨基酸。另外，还认为氨基酸L-赖氨酸、D-赖氨酸、α-甲基-L-赖氨酸和α-甲基-D-赖氨酸的叠氮类似物是本发明的有用的氨基酸。但是，含有不同的氨基酸侧链的其他末端叠氮氨基酸也可以用于本发明。例如，L-赖氨酸的叠氮类似物在氨基酸的α-碳和氨基酸侧链的末端叠氮基之间含有4个亚甲基单元。本发明也涉及使用在α-碳和末端叠氮基之间具有少于或多于4个亚甲基单元的氨基酸。表2显示一些可用于制备本发明的拟肽大环化合物的氨基酸。
表2
Figure BPA00001545839400451
表2显示用于制备本发明的拟肽大环化合物的示例性氨基酸。
在某些实施方案中，氨基酸和氨基酸类似物是D-构型。在其他实施方案中，它们是L-构型。在某些实施方案中，拟肽中包含的某些氨基酸和氨基酸类似物是D-构型，而某些氨基酸和氨基酸类似物是L-构型。在某些实施方案中，氨基酸类似物是α，α-二取代的，如α-甲基-L-炔丙基甘氨酸、α-甲基-D-炔丙基甘氨酸、ε-叠氮基-α-甲基-L-赖氨酸和ε-叠氮基-α-甲基-D-赖氨酸。在某些实施方案中，氨基酸类似物是N-烷基化的，例如，N-甲基-L-炔丙基甘氨酸、N-甲基-D-炔丙基甘氨酸、N-甲基-ε-叠氮基-L-赖氨酸和N-甲基-ε-叠氮基-D-赖氨酸。
在某些实施方案中，使用包括但不限于-Fmoc和-Boc的保护基团保护氨基酸的-NH部分。在其他实施方案中，在合成拟肽大环化合物之前不保护氨基酸。
在其他实施方案中，合成式III的拟肽大环化合物。这类大环化合物的制备在例如2007年12月17日提交的美国申请11/957,325中有描述。下面的合成方案描述了这类化合物的制备。该图可以概要描述为以下内容：该说明性的方案显示了由L-半胱氨酸或D-半胱氨酸衍生的氨基酸类似物，其中L1和L3都是-(CH2)-。但是，如以上整个发明详述部分所指出的，可以采用许多其他的氨基酸类似物，其中L1和L3可以独立地选自本文公开的各种结构。符号“[AA]m”、“[AA]n”、“[AA]o”表示酰胺键连接的部分如天然或非天然氨基酸的序列。如前面所述，每个出现的“AA”与任何其他出现的“AA”无关，而且诸如“[AA]m”的通式包括，例如，不相同氨基酸的序列以及相同氨基酸的序列。
合成方案6：
Figure BPA00001545839400471
在合成方案6中，拟肽前体含有2个-SH部分，而且使用可商购的N-α-Fmoc氨基酸如N-α-Fmoc-S-三苯甲基-L-半胱氨酸或N-α-Fmoc-S-三苯甲基-D-半胱氨酸通过固相肽合成法(SPPS)来合成。通过已知方法(Seebach等人(1996)，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.35：2708-2748以及其中的参考文献)产生D-半胱氨酸或L-半胱氨酸的α-甲基化形式，然后通过已知方法(″Bioorganic Chemistry：Peptides and  Proteins″，Oxford University Press，New York：1998，本文通过引用引入其完整内容)将其转化为适当保护的N-α-Fmoc-S-三苯甲基单体。接着通过标准条件(例如，强酸如95％TFA)对前体拟肽脱保护并从固相树脂上切下。前体拟肽作为粗制混合物与X-L2-Y在有机溶液或水性溶液中进行反应，或者在反应前进行纯化。在某些实施方案中，在稀释条件(即，0.15mmol/L)下进行烷基化反应，以有利于大环化并避免聚合。在某些实施方案中，在有机溶液如液体NH3中(Mosberg等人(1985)，J.Am.Chem.Soc.107：2986-2987；Szewczuk等人(1992)，Int.J.Peptide Protein Res.40：233-242)、NH3/MeOH中或NH3/DMF中(Or等人(1991)，J.Org.Chem.56：3146-3149)进行烷基化反应。在其他实施方案中，在水性溶液如pH 8的6M盐酸胍中进行烷基化反应(Brunel等人(2005)，Chem.Commun.(20)：2552-2554)。在其他实施方案中，用于烷基化反应的溶剂是DMF或二氯乙烷。
合成方案7：
Figure BPA00001545839400491
在合成方案7中，前体拟肽含有2个或更多个-SH部分，其中的2个特别地进行保护以允许其选择性地脱保护及随后烷基化以形成大环。通过固相肽合成法(SPPS)，使用可商购的N-α-Fmoc氨基酸如N-α-Fmoc-S-对甲氧基三苯甲基-L-半胱氨酸或N-α-Fmoc-S-对甲氧基三苯甲基-D-半胱氨酸合成前体拟肽。通过已知方法(Seebach等人(1996)，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.35：2708-2748以及其中的参考文献)产生D-半胱氨酸或L-半胱氨酸的α-甲基化形式，然后通过已知方法(Bioorganic Chemistry：Peptides and Proteins，Oxford University Press，New York：1998，其完整内容通过引用并入本文)将其转化为适当保护的N-α-Fmoc-S-对甲氧基三苯甲基单体。然后通过标准条件(例如，弱酸，如DCM中的1％TFA)选择性地切下拟肽前体的Mmt保护基团。然后前体拟肽在树脂上与有机溶液中的X-L2-Y反应。例如，该反应在位阻碱如二异丙基乙胺的存在下发生。在某些实施方案中，烷基化反应在有机溶液如液体NH3中(Mosberg等人(1985)，J.Am.Chem.Soc.107：2986-2987；Szewczuk等人(1992)，Int.J.Peptide Protein Res.40：233-242)、NH3/MeOH中或NH3/DMF(Or等人(1991)，J.Org.Chem.56：3146-3149)中进行。在其他实施方案中，烷基化反应在DMF或二氯乙烷中进行。然后通过标准条件(例如，强酸，如95％TFA)将拟肽大环化合物脱保护并从固相树脂上切下。
合成方案8：
Figure BPA00001545839400501
在合成方案8中，拟肽前体含有2个或更多个-SH部分，其中的2个进行特别保护以允许其选择性地脱保护和随后烷基化以形成大环。通过固相肽合成法(SPPS)，使用可商购的N-α-Fmoc氨基酸如N-α-Fmoc-S-对甲氧基三苯甲基-L-半胱氨酸、N-α-Fmoc-S-对甲氧基三苯甲基-D-半胱氨酸、N-α-Fmoc-S-S-叔丁基-L-半胱氨酸和N-α-Fmoc-S-S-叔丁基-D-半胱氨酸合成拟肽前体。通过已知方法(Seebach等人(1996)，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.35：2708-2748以及其中的参考文献)产生D-半胱氨酸或L-半胱氨酸的α-甲基化形式，然后通过已知方法(Bioorganic  Chemistry：Peptides and Proteins，Oxford University Press，New York：1998，其完整内容通过引用并入本文)将其转化为适当保护的N-α-Fmoc-S-对甲氧基三苯甲基或N-α-Fmoc-S-S-叔丁基单体。然后通过已知条件(例如，DMF中的20％的2-巯基乙醇，参考文献：Galande等人(2005)，J.Comb.Chem.7：174-177)选择性地切下拟肽前体的S-S-叔丁基保护基团。然后前体拟肽在树脂上与有机溶液中的摩尔过量的X-L2-Y反应。例如，反应在位阻碱如二异丙基乙胺的存在下发生。然后通过标准条件(例如，弱酸，如DCM中的1％TFA)选择性地切下拟肽前体的Mmt保护基团。拟肽前体然后通过用有机溶液中的位阻碱处理而在树脂上环化。在某些实施方案中，在诸如NH3/MeOH或NH3/DMF(Or等人(1991)，J.Org.Chem.56：3146-3149)的有机溶液中进行烷基化反应。然后通过标准条件(例如，强酸，如95％TFA)将拟肽大环化合物脱保护并从固相树脂上切下。
合成方案9：
Figure BPA00001545839400511
在合成方案9中，拟肽前体含有2个L-半胱氨酸部分。通过已知的活细胞中的生物表达系统或通过已知的体外无细胞表达方法合成拟肽前体。前体拟肽作为粗制混合物与X-L2-Y在有机溶液或水性溶液中进行反应，或者在反应之前进行纯化。在某些实施方案中，在稀释条件(即，0.15mmol/L)下进行烷基化反应，以利于大环化并避免聚合。在某些实施方案中，在有机溶液如液体NH3中(Mosberg等人(1985)，J.Am.Chem.Soc.107：2986-2987；Szewczuk等人(1992)，Int.J.Peptide Protein Res.40：233-242)、NH3/MeOH中或NH3/DMF中(Or等人(1991)，J.Org.Chem.56：3146-3149)进行烷基化反应。在其他实施方案中，在水溶液如pH 8的6M盐酸胍中进行烷基化反应(Brunel等人(2005)，Chem.Commun.(20)：2552-2554)。在其他实施方案中，在DMF或二氯乙烷中进行烷基化反应。在另一实施方案中，在非变性水溶液中进行烷基化，在再另一个实施方案中，在有利于α-螺旋结构形成的条件下进行烷基化。在再另一个实施方案中，在有利于前体拟肽与另一种蛋白质结合的条件下进行烷基化，从而在烷基化过程中诱导结合的α-螺旋构象的形成。
本发明设想了适合与巯基反应的X和Y的各种实施方案。通常，X或Y各自独立地选自表5所示的一般性类别。例如，X和Y是诸如-Cl、-Br或-I的卤素。本文所述的任何大环形成连接体可以与表1-4所示的任何序列任意组合使用，也可以与本文表明的任何R-取代基任意组合使用。
表3：能够与巯基反应的反应性基团和形成的连接的例子
  X或Y   形成的共价连接
  丙烯酰胺   硫醚
  卤化物(例如，烷基卤化物或芳基卤化物)   硫醚
  磺酸盐   硫醚
  氮丙啶   硫醚
  环氧化物   硫醚
  卤代乙酰胺   硫醚
  马来酰亚胺   硫醚
  磺酸酯   硫醚
本发明涉及在式(III)的拟肽大环化合物的合成中使用天然存在的和非天然存在的氨基酸和氨基酸类似物。任何适合用来合成稳定的含双巯基的拟肽大环化合物的合成方法的氨基酸或氨基酸类似物都可以用于本发明。例如，认为半胱氨酸是本发明中有用的氨基酸。但是，除半胱氨酸之外的含有不同氨基酸侧链的含硫氨基酸也是有用的。例如，半胱氨酸在氨基酸的α-碳和氨基酸侧链的末端-SH之间含有一个亚甲基单元。本发明也涉及使用在α-碳和末端-SH之间具有多个亚甲基单元的氨基酸。非限制的例子包括α-甲基-L-高半胱氨酸和α-甲基-D-高半胱氨酸。在某些实施方案中，氨基酸和氨基酸类似物是D-构型。在其他实施方案中，它们是L-构型。在某些实施方案中，拟肽中包含的某些氨基酸和氨基酸类似物是D-构型，而某些氨基酸和氨基酸类似物是L-构型。在某些实施方案中，氨基酸类似物是α，α-二取代的，如α-甲基-L-半胱氨酸和α-甲基-D-半胱氨酸。
本发明包括这样的大环化合物，其中大环形成连接体用来连接拟肽前体中的两个或多个-SH部分以形成本发明的拟肽大环化合物。如上所述，大环形成连接体赋予构象刚性、提高代谢稳定性和/或提高细胞渗透性。另外，在某些实施方案中，形成大环的连接稳定拟肽大环化合物的α-螺旋二级结构。大环形成连接体具有式X-L2-Y，其中X和Y都是如上定义的相同或不同的部分。X和Y都具有这样的化学特性，其允许一个大环形成连接体-L2-使含有双巯基的拟肽前体被双烷基化。如上定义，连接体-L2-包括亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚环芳基或杂亚环芳基或-R4-K-R4-，它们都可以任选地被如上定义的R5基团取代。另外，除了连接含巯基氨基酸的-SH的碳之外，大环形成连接体-L2-中的1-3个碳原子任选地被杂原子如N、S或O替代。
大环形成连接体X-L2-Y的L2部分在长度上可以变化，除了其他原因，这主要取决于根据用来形成拟肽大环化合物的两个氨基酸类似物的位置之间的距离。另外，随着大环形成连接体的L1和/或L3部分的长度发生变化，L2的长度也可以变化，以产生具有合适总长度的连接体以形成稳定的拟肽大环化合物。例如，如果通过向每个L1和L3再添加一个亚甲基单元来改变所使用的氨基酸类似物，那么L2在长度上减少等同于大约两个亚甲基单元的长度，以抵消L1和L3的长度增加。
在某些实施方案中，L2是式-(CH2)n-的亚烷基基团，其中，n为大约1至大约15之间的整数。例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在其他实施方案中，L2为亚烯基基团。在另外其他的实施方案中，L2为芳基。
表4显示X-L2-Y基团的另外的实施方案。
Figure BPA00001545839400551
认为适用于进行本发明的形成拟肽大环化合物的另外的方法包括以下文献中公开的方法：Mustapa，M.Firouz Mohd等人，J.Org.Chem(2003)，68，第8193-8198页；Yang，Bin等人Bioorg Med.Chem.Lett.(2004)，14，第1403-1406页；美国专利5,364,851；美国专利5,446,128；美国专利5,824,483；美国专利6,713,280和美国专利7,202,332。在这样的实施方案中，使用在α-位含有另外的取代基R-的氨基酸前体。这样的氨基酸在希望的位置被并入大环化合物前体中，其可以处于交联连接体被取代的位置，或者，可选择地，在大环化合物前体序列中的其他位置。然后根据指定的方法实现前体的环化。
试验
例如，本发明的拟肽大环化合物的性质通过例如使用下面所述的方法进行测定。在某些实施方案中，相对于缺乏本文所述的取代基的相应多肽，本发明的拟肽大环化合具有改善的生物学特性。
测定α-螺旋度的试验
在溶液中，具有α-螺旋结构域的多肽的二级结构在随机卷曲结构和α-螺旋结构之间达到动态平衡，这通常被称为“百分螺旋度”。因此，例如，未修饰的α-螺旋结构域在溶液中主要是随机卷曲，α-螺旋含量通常低于25％。另一方面，相比相应的非交联多肽，具有优化的连接体的拟肽大环化合物具有例如至少是其2倍的α-螺旋度。在某些实施方案中，本发明的大环化合物具有高于50％的α-螺旋度。为了测定本发明的拟肽大环化合物的螺旋度，将化合物溶解于水溶液(例如，pH 7的50mM磷酸钾溶液或蒸馏水，达到25-50μM的浓度)。使用标准测量参数(例如，温度，20℃；波长，190-260nm；步分辨率(step resolution)，0.5nm；速度，20nm/sec；累积，10；响应，1秒；带宽，1nm；路径长度，0.1cm)在分光偏振计(例如，Jasco J-710)上获得圆二色性(CD)谱。通过将平均残基椭圆率(例如，[Φ]222obs)除以模型螺旋十肽的报道值(Yang等人(1986)，Methods Enzymol.130：208)来计算各个肽的α-螺旋含量。
测量解链温度(Tm)的试验
含有二级结构如α-螺旋的本发明的拟肽大环化合物显示出例如比相应的非交联多肽更高的解链温度。通常，本发明的拟肽大环化合物显示＞60℃的Tm，表明在水溶液中高度稳定的结构。为了测定大环形成对解链温度的效应，将拟肽大环化合物或未修饰的肽溶于蒸馏水中(例如，以50μM的终浓度)，并且通过使用标准参数(例如，波长，222nm；步分辨率，0.5nm；速度，20nm/sec；累积，10；响应，1秒；带宽，1nm；温度上升速度，1℃/分钟；路径长度，0.1cm)在分光偏振计(例如，Jasco J-710)上，通过测量椭圆率在一定温度范围(例如，4-95℃)内的变化来测量Tm。
蛋白酶抗性试验
肽骨架的酰胺键易受到蛋白酶的水解，因而致使肽化合物在体内易于快速降解。但是，肽螺旋的形成通常包埋酰胺骨架，从而可以保护其免于蛋白水解裂解。本发明的拟肽大环化合物可以用体外胰蛋白酶的蛋白水解处理，以评价与相应的非交联多肽相比其降解速度的任何变化。例如，拟肽大环化合物和相应的非交联多肽与胰蛋白酶琼脂糖一起温育，并在不同时间点通过离心猝灭反应，随后进行HPLC注射以根据280nm处的紫外吸收对残留的底物进行定量。简单来说，拟肽大环化合物和拟肽前体(5mcg)与胰蛋白酶琼脂糖(Pierce)(S/E～125)温育0、10、20、90和180分钟。通过台式离心机高速离心猝灭反应；基于HPLC在280nm处的峰检测对分离的上清液中残余的底物进行定量。蛋白水解反应显示出一级动力学，且速率常数k由ln[S]相对于时间的曲线确定(k＝-1X斜率)。
体外稳定性试验
具有优化的连接体的拟肽大环化合物的体外半衰期例如至少为相应的非交联多肽的2倍高，且具有12小时或更长的体外半衰期。对于体外血清稳定性研究，可以使用多种测定方法。例如，将拟肽大环化合物和相应的非交联多肽(2mcg)与新鲜的小鼠、大鼠和/或人血清(2mL)一起在37℃下温育0、1、2、4、8和24小时。为了测定完整化合物的水平，可以使用下面的程序：通过将100μl的血清转移到2ml离心管中，接着加入10μL的50％甲酸和500μL乙腈并在4±2℃下以14,000RPM离心10分钟来提取样品。然后将上清液转移到新的2ml管中，并在N2＜10psi、37℃下在Turbovap上蒸发。样品在100μL的50∶50乙腈∶水中重建，并进行LC-MS/MS分析。
体外结合试验
为了评价拟肽大环化合物和拟肽前体与受体蛋白的结合和亲和力，例如使用荧光偏振测定(FPA)。FPA技术使用偏振光和荧光示踪剂测量分子取向和分子迁移率。当用偏振光激发时，由于附着在高表观分子量的分子(例如，与大蛋白质结合的FITC标记的肽)上的荧光示踪剂(例如，FITC)与附着在较小分子(例如，在溶液中游离的FITC标记的肽)上的荧光示踪剂相比具有较慢的旋转速度，附着在高表观分子量的分子上的荧光示踪剂发射较高水平的偏振荧光。
例如，荧光标记的拟肽大环化合物(25nM)与接受体蛋白(25-1000nM)在结合缓冲液(140mM NaCl、50mM Tris-HCL，pH 7.4)中在室温下温育30分钟。例如，用发光分光光度计(例如，Perkin-ElmerLS50B)通过荧光偏振测定结合活性。可以使用例如Graphpad Prism软件(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)通过非线性回归分析来确定Kd值。在某些情况下，本发明的拟肽大环化合物显示出与相应的非交联多肽类似的或更低的Kd。
表征肽-蛋白质相互作用拮抗剂的体外置换试验
为了评价拮抗肽与接受体蛋白之间相互作用的化合物的结合和亲和力，例如，使用利用来源于拟肽前体序列的荧光标记的拟肽大环化合物的荧光偏振试验(FPA)。FPA技术使用偏振光和荧光示踪剂测量分子取向和分子迁移率。当用偏振光激发时，由于附着在高表观分子量的分子(例如，与大蛋白质结合的FITC标记的肽)上的荧光示踪剂(例如，FITC)与附着在较小分子(例如，在溶液中游离的FITC标记的肽)上的荧光示踪剂相比具有较低的旋转速度，附着在高表观分子量的分子上的荧光示踪剂发射较高水平的偏振荧光。拮抗荧光标记的拟肽大环化合物与接受体蛋白之间相互作用的化合物将在竞争性结合FPA实验中被检测到。
例如，假定的拮抗剂化合物(1nM至1mM)和荧光标记的拟肽大环化合物(25nM)与接受体蛋白(50nM)一起在结合缓冲液(140mMNaCl、50mM Tris-HCL，pH 7.4)中在室温下温育30分钟。例如，用发光分光光度计(例如，Perkin-Elmer LS50B)通过荧光偏振测定拮抗剂的结合活性。可以使用例如Graphpad Prism软件(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)通过非线性回归分析来确定Kd值。
任一类型的分子如有机小分子、肽、寡核苷酸或蛋白质可以在该试验中作为假定的拮抗剂进行检测。
通过亲和选择-质谱法对蛋白质-配体结合的测定
为了评估测试化合物对蛋白质的结合和亲和力，例如采用亲和选择-质谱分析试验。按照以下对于全系统对照实验概述的代表性程序，使用1μM拟肽大环化合物加5μM靶蛋白进行蛋白质-配体结合实验。将40μM拟肽大环化合物储备溶液的1μL DMSO等份溶解在19μLPBS(磷酸盐缓冲盐水：含有150mM NaCl的50mM，pH 7.5磷酸盐缓冲液)中。得到的溶液通过反复吸液进行混合并通过在10,000g下离心10分钟进行澄清。向4μL等份得到的上清液中加入4μL 10μM靶蛋白的PBS溶液。每个8.0μL实验样品因此含有在PBS中的浓度为5.0μM的40pmol(1.5μg)蛋白质，以及1μM拟肽大环化合物和2.5％DMSO。对每个浓度点如此制备的双份样品在室温下温育60分钟，然后冷却至4℃，之后进行5.0μL注入液的大小排阻层析-LC-MS分析。将含有靶蛋白、蛋白质-配体复合体和未结合的化合物的样品注入到SEC柱上，通过快速SEC步骤将复合体与未结合的成分在该柱上分离。采用UV检测器监测SEC柱洗脱液，以证实早期洗脱的蛋白质级分(在SEC柱的外水体积中洗脱的)从未结合的成分中(保留在柱上)良好地析出。含有蛋白质和蛋白质-配体复合体的峰从主UV检测器洗脱后，进入样品环路，在其中它被从SEC阶段的液流中截下，并通过阀门机构直接转移到LC-MS。通过ESI-MS以预期的m/z观察拟肽大环化合物的(M+3H)3+离子，证实检测到蛋白质-配体复合体。
蛋白质-配体Kd滴定实验的测定
为了评估测试化合物对蛋白质的结合和亲和力，例如，进行蛋白质-配体Kd滴定实验。蛋白质-配体Kd滴定实验如下进行：将滴定剂拟肽大环化合物储备溶液(5，2.5，...，0.098mM)连续稀释，制备多个2μLDMSO等份，然后溶解在38μL PBS中。得到的溶液通过反复吸液进行混合并通过在10,000g下离心10分钟进行澄清。向4.0μL等份得到的上清液中加入4.0μL 10μM靶蛋白的PBS溶液。每个8.0μL实验样品因此含有在PBS中的浓度为5.0μM的40pmol(1.5μg)蛋白质，不同浓度(125，62.5，...，0.24μM)的滴定肽和2.5％DMSO。对每个浓度点如此制备的双份样品在室温下温育30分钟，然后冷却至4℃，之后进行2.0μL注入液的SEC-LC-MS分析。通过ESI-MS观察(M+H)1+、(M+2H)2+、(M+3H)3+和/或(M+Na)1+离子；对提取的离子色谱图进行定量，然后代入方程，以推导出结合亲和力Kd，如以下文献所述：“AGeneral Technique to Rank Protein-Ligand Binding Affinities and DetermineAllosteric vs.Direct Binding Site Competition in Compound Mixtures.”Annis，D.A.；Nazef，N.；Chuang，C.C.；Scott，M.P.；Nash，H.M.J.Am.Chem.Soc.2004，126，15495-15503，以及“ALIS：An Affinity Selection-Mass Spectrometry System for the Discovery and Characterization ofProtein-Ligand Interactions”D.A.Annis，C.-C.Chuang，and N.Nazef.InMass Spectrometry in Medicinal Chemistry.Wanner K，G：Wiley-VCH编著；2007：121-184.Mannhold R，Kubinyi H，Folkers G(系列编者)：Methods and Principles in Medicinal Chemistry。
通过亲和选择-质谱法的竞争性结合实验的测定
为了确定测试化合物竞争性结合蛋白质的能力，例如，进行亲和选择-质谱分析试验。通过将三种化合物中每一种的2μL等份400μM储备液与14μL DMSO混合制备每种成分的40μM配体混合物。然后，将1μL等份的每种成分的40μM混合物与滴定剂拟肽大环化合物的连续稀释储备溶液(10，5，2.5，...，0.078mM)的1μL DMSO等份混合。将这些2μL样品溶解在38μL PBS中。得到的溶液通过反复吸液进行混合，并在10,000g下离心10分钟进行澄清。向4.0μL等份得到的上清液中加入4.0μL 10μM靶蛋白的PBS溶液。每个8.0μL实验样品因此含有在PBS中的浓度为5.0μM的40pmol(1.5μg)蛋白质，以及0.5μM配体、2.5％DMSO和不同浓度(125，62.5，...，0.98μM)的滴定剂拟肽大环化合物。对每个浓度点如此制备的双份样品在室温下温育60分钟，然后冷却至4℃，之后进行2.0μL注入液的SEC-LC-MS分析。这些和其他方法的另外细节在以下文献中提供：“A General Technique to RankProtein-Ligand Binding Affinities and Determine Allosteric vs.DirectBinding Site Competition in Compound Mixtures.”Annis，D.A.；Nazef，N.；Chuang，C.C.；Scott，M.P.；Nash，H.M.J.Am.Chem.Soc.2004，126，15495-15503；以及“ALIS：An Affinity Selection-Mass Spectrometry Systemfor the Discovery and Characterization of Protein-Ligand Interactions”D.A.Annis，C.-C.Chuang，and N.Nazef.In Mass Spectrometry in MedicinalChemistry.Wanner K，
Figure BPA00001545839400611
G：Wiley-VCH编著；2007：121-184.Mannhold R，Kubinyi H，Folkers G(系列编者)：Methods and Principles inMedicinal Chemistry。
完整细胞中的结合测定
有可能通过免疫沉淀实验测定肽或拟肽大环化合物与其天然接受体在完整细胞中的结合。例如，完整的细胞与荧光标记的(FITC-标记的)化合物在无血清的情况下温育4小时，接着进行血清置换并进一步温育4-18小时。然后使细胞沉淀，并在4℃下在裂解缓冲液(50mMTris[pH 7.6]、150mM NaCl、1％的CHAPS和蛋白酶抑制剂混合物)中温育10分钟。以14,000rpm离心提取物15分钟，收集上清液，并与10μl山羊抗-FITC抗体一起温育2小时，在4℃下旋转，接着进一步在4℃下与蛋白A/G Sepharose(50μl的50％微珠浆)温育2小时。快速离心之后，将沉淀物在含有渐增的盐浓度(例如，150、300、500mM)的裂解缓冲液中洗涤。随后以150mM NaCl再平衡微珠，之后加入含有SDS的样品缓冲液并煮沸。离心之后，任选地使用4％-12％梯度的Bis-Tris凝胶对上清液进行电泳，接着转移到Immobilon-P膜上。封闭后，任选地将印迹与检测FITC的抗体一起温育，也与一种或多种检测与拟肽大环化合物结合的蛋白质的抗体一起温育。
细胞渗透性测定
与相应的非交联大环化合物相比，拟肽大环化合物例如具有更高的细胞渗透性。具有优化的连接体的拟肽大环化合物的细胞渗透性例如是相应的非交联大环化合物的至少2倍，并且常常观察到20％或更多的应用的拟肽大环化合物在4小时后已渗透入细胞。为了测定拟肽大环化合物和相应的非交联大环化合物的细胞渗透性，将完整的细胞与荧光标记的拟肽大环化合物或相应的非交联大环化合物(10μM)一起在不含血清的培养基中37℃温育4小时，用培养基洗涤2次，并与胰蛋白酶(0.25％)在37℃下温育10分钟。再次洗涤细胞并将其重悬浮于PBS中。例如，通过使用FACSCalibur流式细胞仪或Cellomics’KineticScan
Figure BPA00001545839400621
HCS读数仪分析细胞荧光。
细胞效力测定
例如，在基于细胞的杀伤试验中，使用多种致瘤和非致瘤的细胞系及源自人类或小鼠细胞群体的原代细胞测定某些拟肽大环化合物的效力。例如，在与拟肽大环化合物(0.5-50μM)一起温育的24-96小时期间监测细胞的生存力，以鉴定那些以EC50＜10μM杀死细胞的化合物。检测细胞生存力的几种标准测定是可以通过商业途径得到的，并且任选地用来评价拟肽大环化合物的效力。另外，测定膜联蛋白V和胱天蛋白酶激活的试验任选地用来评价拟肽大环化合物是否通过激活凋亡机制杀死细胞。例如，采用Cell Titer-glo试验，该试验测定作为细胞内ATP浓度函数的细胞生存力。
体内稳定性试验
为了研究拟肽大环化合物的体内稳定性，例如，通过静脉内、腹膜内、口服或吸入途径以0.1-50mg/kg的浓度向小鼠和/或大鼠施用化合物，并在注射后0′、5′、15′、30′、1小时、4小时、8小时和24小时抽取血样。然后如上所述通过LC-MS/MS测定25μL新鲜血清中的完整化合物的水平。
动物模型中的体内效力
为了确定本发明的拟肽大环化合物在体内的抗致癌活性，例如，化合物单独给予(静脉内、腹膜内、口服、通过吸入或鼻途径)或与亚最佳剂量的相关化疗剂(例如，环磷酰胺、阿霉素、依托泊苷)联合给予。在一个实施例中，在NOD-SCID小鼠遭受全身辐射3小时后，通过尾静脉注射稳定表达萤光素酶的5×106RS4；11细胞(来自急性淋巴细胞白血病患者的骨髓的细胞系)。如果不予处理，在该模型中这种形式的白血病在3周内是致命的。例如，通过对小鼠注射D-萤光素(60mg/kg)并对麻醉的动物进行成像(例如，Xenogen In Vivo ImagingSystem，Caliper Life Sciences，Hopkinton，MA)可容易地监测该白血病。通过Living Image Software(Caliper Life Sciences，Hopkinton，MA)进行光子通量(photonic flux)(光子/秒)的积分(integration)来对全身生物发光进行定量。例如，拟肽大环化合物单独地或与亚最佳剂量的相关化学治疗剂联合地通过尾静脉或静脉内途径以0.1mg/kg-50mg/kg的剂量向白血病小鼠施用(注射后10天/实验第1天，生物发光范围为14-16)7-21天。任选地，在整个实验过程中每隔一天对小鼠成像，并在实验期间每天监测其存活。在实验结束时任选地对死亡的小鼠进行尸体检查。另一种动物模型是将稳定表达萤光素酶的DoHH2(源自人类滤泡性淋巴瘤的细胞系)植入到NOD-SCID小鼠中。这些体内试验任选地产生初步的药代动力学、药效学和毒理学数据。
临床试验
为了确定本发明的拟肽大环化合物对于人类治疗的适用性，进行了临床试验。例如，选择出诊断为患有癌症并需要治疗的患者并将他们分成治疗组和一个或多个对照组，其中，对治疗组施用本发明的拟肽大环化合物，而对照组接受安慰剂或已知的抗癌药物。这样，可以通过对患者组就如生存率和生活质量的因素进行比较来评价本发明的拟肽大环化合物的治疗安全性和有效性。在这个实施例中，相比于用安慰剂治疗的患者对照组，用拟肽大环化合物治疗的患者组显示提高的长期生存率。
药物组合物和给药途径
本发明的拟肽大环化合物也包括其药学上可接受的衍生物或前药。“药学上可接受的衍生物”指本发明化合物的任何药学上可接受的盐、酯、酯的盐、前药或其他衍生物，其在向接受者施用后能够提供(直接或间接地)本发明的化合物。尤其有利的药学上可接受的衍生物是当向哺乳动物施用时可以提高本发明的化合物的生物利用度(例如，通过提高口服施用的化合物进入血液的吸收)，或相对于母体物质增加活性化合物向生物区室(例如，脑或淋巴系统)的递送的那些衍生物。一些药学上可接受的衍生物包含提高水溶性或跨过胃肠粘膜的主动转运的化学基团。
在某些实施方案中，本发明的拟肽大环化合物通过共价或非共价地连接的合适的官能团修饰，以提高选择性的生物学性质。这样的修饰包括那些提高进入特定生物区室(例如，血液、淋巴系统、中枢神经系统)的生物学渗透性、提高口服利用度、增加溶解性以允许注射施用、改变代谢以及改变排泄率的修饰。
本发明的化合物的药学上可接受的盐包括那些由药学上可接受的无机和有机的酸和碱衍生的盐。合适的酸式盐的例子包括乙酸盐、己二酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、棕榈酸盐(palmoate)、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐。由合适的碱衍生的盐包括碱金属盐(例如，钠盐)、碱土金属盐(例如，镁盐)、铵盐和N-(烷基)4 +盐。
为了由本发明的化合物制备药物组合物，药学上可接受的载体包括固体或液体载体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和分散颗粒剂。固体载体可以是一种或多种物质，其也可以作为稀释剂、调味剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料发挥作用。在科学文献和专利文献中详细描述了配制和给药技术的细节，参见，例如，最新版本的Remington′s PharmaceuticalSciences，Maack Publishing Co，Easton PA。
在粉剂中，载体是细碎的固体，其与细碎的活性成分混合。在片剂中，活性成分与具有必要粘合性质的载体按照适当的比例混合，并压制成需要的形状和大小。
合适的固体赋形剂是碳水化合物或蛋白质填料，包括但不限于：糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；来自玉米、小麦、水稻、马铃薯或其他植物的淀粉；纤维素，如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素钠；和树胶，包括阿拉伯树胶和黄蓍胶；以及蛋白质，如明胶和胶原蛋白。如果需要的话，加入崩解剂或增溶剂，如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其盐如海藻酸钠。
液体形式的制剂包括溶液、悬浮液和乳液，例如，水或水/丙二醇溶液。对于肠胃外注射，液体制剂可以在聚乙二醇水溶液中配制成溶液。
药物制剂优选为单位剂型。在这样的形式中，制剂细分为含有适量活性成分的单位剂量。单位剂型可以是包装制剂，该包装包含不连续量的制剂，如包装的片剂、胶囊和小瓶或安瓿中的粉末。另外，单位剂型也可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者可以是包装形式的适当数目的这些剂型中的任一种。
当本发明的组合物包含拟肽大环化合物和一种或多种另外的治疗剂或预防剂的组合时，该化合物和另外的药剂都应该以通常在单一治疗方案中施用的剂量的大约1-100％的剂量水平，更优选大约5-95％的剂量水平存在。在某些实施方案中，另外的药剂作为多剂量方案的一部分与本发明的化合物分开施用。或者，这些药剂是单一剂型的一部分，在单一组合物中与本发明的化合物混合在一起。
使用方法
在一个方面，本发明提供了新的拟肽大环化合物，其可在竞争性结合试验中用于鉴别与拟肽大环化合物所模拟的蛋白质或肽的天然配体结合的物质。例如，在TCF/β-连环蛋白系统中，基于TCF的CBD肽的标记的拟肽大环化合物可以与竞争结合β-连环蛋白的小分子一起用于β-连环蛋白结合试验中。竞争结合研究允许在体外快速评价并确定对于TCF/β-连环蛋白系统特异性的药物候选物。可以使用本文公开的任何拟肽大环化合物及其结合配偶体进行这种结合研究。
本发明进一步提供了抗拟肽大环化合物的抗体的生成。在某些实施方案中，这些抗体特异性地结合拟肽大环化合物和拟肽大环化合物相关的前体肽诸如TCF-CBD。例如，这样的抗体破坏天然的蛋白质-蛋白质相互作用，例如TCF与β-连环蛋白之间的结合。
在其他方面，本发明提供了对具有患与分子(包括β-连环蛋白)异常(例如，不足或过量)表达或活性有关的疾病的危险(或易患所述疾病)或患有所述疾病的个体的预防方法和治疗方法。
在另一实施方案中，疾病至少部分地是由β-连环蛋白的异常水平(例如，过度表达或不足表达)引起，或由显示异常活性的β-连环蛋白的存在引起。这样，源自含CBD蛋白质如TCF的拟肽大环化合物通过使β-连环蛋白水平和/或活性降低或者使β-连环蛋白水平和/或活性升高，来例如缓解或减轻疾病的负面症状。
另一方面，本发明提供了通过干扰结合配偶体之间(例如，TCF和β-连环蛋白之间)的相互作用或结合来治疗或预防疾病(包括过度增殖性疾病和炎性病症)的方法。这些方法包括向包括人类的温血动物施用有效量的本发明的化合物。在某些实施方案中，本发明的化合物的施用诱导细胞生长停止或凋亡。
如本文所用，术语“治疗”被定义为向患者应用或施用治疗剂，或者向从患者分离的组织或细胞系应用或施用治疗剂，所述患者患有疾病、疾病症状或具有患病倾向，目的是治愈、恢复、减轻、解除、改变、矫正、缓解、改善或影响疾病、疾病症状或患病倾向。
在某些实施方案中，本发明的拟肽大环化合物用来治疗、预防和/或诊断癌症和肿瘤性病症。如本文所用，术语“癌症”、“过度增殖的”和“肿瘤性的”指具有自主生长能力的细胞，即，以快速增殖的细胞生长为特征的异常状态或疾病。过度增殖性的和肿瘤性的疾病状态可以分类为病理性的，即，表现或构成疾病状态；或者可以分类为非病理性的，即，偏离正常但与疾病状态无关。该术语意味着包括所有类型的癌性生长或致癌过程、转移性组织或恶性转化的细胞、组织或器官，而与组织病理类型或侵袭阶段无关。转移性肿瘤可以由许多原发性肿瘤类型产生，包括但不限于：乳腺、肺、肝、结肠和卵巢来源的肿瘤。“病理性过度增殖”细胞出现于以恶性肿瘤生长为特征的疾病状态中。非病理性过度增殖细胞的例子包括与创伤修复有关的细胞增殖。细胞增殖和/或分化疾病的例子包括癌症，例如，癌瘤、肉瘤或转移性疾病。在某些实施方案中，拟肽大环化合物是用于控制乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、肺癌、这些癌症的转移等的新的治疗剂。
癌症或肿瘤病症的例子包括但不限于：纤维肉瘤、肌肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、胃癌、食道癌、直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫癌、头颈癌、皮肤癌、脑癌、鳞状细胞癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管原癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆氏肿瘤、子宫颈癌、睾丸癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑脊膜瘤、黑素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、白血病、淋巴瘤或卡波西肉瘤。
增殖性疾病的例子包括造血系统肿瘤性疾病。如本文所用，术语“造血系统肿瘤性疾病”包括涉及造血系统起源的(例如，源自骨髓、淋巴或红细胞谱系的)增生性/肿瘤性细胞或其前体细胞的疾病。优选地，疾病起因于分化不良的急性白血病，例如，成红细胞白血病和急性巨核母细胞性白血病。另外的示例性的骨髓疾病包括但不限于：急性早幼粒细胞白血病(APML)、急性髓性白血病(AML)和慢性髓性白血病(CML)(综述见Vaickus(1991)，Crit Rev.Oncol./Hemotol.11：267-97)；淋巴样恶性肿瘤包括但不限于急性淋巴母细胞性白血病(ALL)，包括B-谱系ALL和T-谱系ALL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、幼淋巴细胞性白血病(PLL)、多毛细胞白血病(HLL)和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)。其他形式的恶性淋巴瘤包括但不限于：非何杰金氏淋巴瘤及其变体、外周T细胞淋巴瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATL)、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、巨粒淋巴细胞白血病(LGF)、何杰金氏病和里德-斯特恩伯格病。
乳腺的细胞增殖和/或分化疾病的例子包括但不限于：增生性乳腺疾病，包括，例如，上皮细胞增生、硬化性腺病和小导管乳头状瘤；肿瘤，例如，如纤维腺瘤、叶状瘤和肉瘤的间质肿瘤，和如大导管乳头状瘤的上皮肿瘤；乳腺癌，包括原位(非侵袭性)癌(包括原位导管癌(包括佩吉特病)和原位小叶癌)和侵袭性(浸润性)癌(包括但不限于，浸润性导管癌、浸润性小叶癌、髓样癌、胶体(粘液)癌、小管癌和侵袭性乳头状癌)；和混杂性的恶性肿瘤。男性乳房疾病包括但不限于男性乳腺发育症和癌。
肺的细胞增殖和/或分化疾病的例子包括但不限于：支气管源性癌，包括类肿瘤综合征、细支气管肺泡癌、神经内分泌肿瘤，例如，支气管类癌瘤、混杂性肿瘤和转移性肿瘤；胸膜的病状包括炎性胸腔积液、非炎性胸腔积液、气胸和胸膜肿瘤(包括孤立性纤维瘤(胸膜纤维瘤)和恶性间皮瘤)。
结肠的细胞增殖和/或分化疾病的例子包括但不限于：非肿瘤性息肉、腺瘤、家族性综合征、结肠直肠癌形成、结肠直肠癌和类癌肿瘤。
肝的细胞增殖和/或分化疾病的例子包括但不限于：结节性增生、腺瘤和恶性肿瘤，包括原发肝癌和转移性肿瘤。
卵巢的细胞增殖和/或分化疾病的例子包括但不限于：卵巢肿瘤，例如，体腔上皮肿瘤、浆液性肿瘤、粘液瘤、子宫内膜样瘤、透明细胞腺癌、囊腺纤维瘤、布伦纳瘤、表面上皮肿瘤；生殖细胞瘤，例如，成熟(良性)畸胎瘤、单胚层畸胎瘤、不成熟的恶性畸胎瘤、无性细胞瘤、内胚层窦瘤、绒毛膜癌；性索-间质肿瘤(sex cord-stomal rumors)，例如，粒层-卵泡膜细胞瘤、泡膜细胞瘤纤维瘤(thecomafibromas)、男性母细胞瘤、希尔细胞瘤(hill cell tumors)和性腺母细胞瘤；和诸如克鲁肯贝格瘤的转移性肿瘤。
在其他或进一步的实施方案中，本文所述的拟肽大环化合物用于治疗、预防或诊断以过度活跃的细胞死亡或由于生理损害导致的细胞死亡等为特征的病症。特征为过早的或不希望的细胞死亡或者不需要的或过度的细胞增殖的病症的一些例子包括但不限于细胞减少的/细胞减生的、无细胞的/再生障碍的或细胞过多的/增生性的病症。一些例子包括血液系统疾病，包括但不限于范可尼贫血、再生障碍性贫血、地中海贫血、先天性中性白细胞减少症和脊髓发育不良。
在其他或进一步的实施方案中，本发明的拟肽大环化合物减少细胞凋亡，用于治疗与不需要的细胞死亡水平有关的病症。因此，在某些实施方案中，本发明的抗凋亡的拟肽大环化合物用来治疗诸如那些导致与病毒感染(例如，与人类免疫缺陷病毒(HIV)感染有关的感染)有关的细胞死亡的病症。许多种神经系统疾病的特征在于特定集合的神经元的逐渐损失。一个例子是阿尔茨海默病(AD)。阿尔茨海默病的特征在于大脑皮层和某些皮层下区域中的神经元和突触的损失。这种损失导致受影响区域的整体萎缩。淀粉质斑块和神经原纤维缠结在患有AD的患者的大脑中可见。阿尔茨海默病已被确定为蛋白质错误折叠的疾病，这是由于异常折叠的A-β和τ蛋白质在大脑中的积累。斑块由β-淀粉样蛋白组成。β-淀粉样蛋白是来自称为淀粉样前体蛋白(APP)的更大蛋白质的片段。APP对于神经生长、生存和伤后修复是关键的。在AD中，未知的过程导致APP被酶通过蛋白质水解裂解成较小的片段。这些片段中的一个是β-淀粉样蛋白的原纤维，其形成团块，这些团块在神经元之外以质密方式沉积(称为老年斑)。老年斑在神经细胞内继续生长成不溶性扭曲纤维，通常被称为缠结。因此，破坏β-淀粉样蛋白和其原始受体之间的相互作用对治疗AD是重要的。在某些实施方案中，在AD以及与细胞凋亡相关的其他神经疾病的治疗中，使用本发明的抗凋亡拟肽大环化合物。这些神经性病症包括阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化(ALS)、视网膜色素变性、脊髓性肌萎缩和各种形式的小脑变性。这些疾病中的细胞损失不引发炎症反应，且细胞凋亡似乎是细胞死亡的机制。
此外，许多血液病与血细胞生成的减少有关。这些病症包括与慢性疾病有关的贫血、再生障碍性贫血、慢性中性粒细胞减少和骨髓增生异常综合征。与血细胞生成有关的病症(如骨髓增生异常综合征和某些形式的再生障碍性贫血)与骨髓内的凋亡性细胞死亡的增加有关。这些病症可能由促进细胞凋亡的基因活化、间质细胞或造血存活因子的获得性缺陷、或毒素和免疫应答介质的直接作用引起。与细胞死亡有关的两种常见的病症是心肌梗死和中风。在这两种病症中，缺血(血流急性丧失事件中产生的)中心区域中的细胞似乎由于组织坏死而迅速死亡。然而，在缺血中心区域以外，细胞在更长的时期内死亡，且形态学上显示似乎由于细胞凋亡而死亡。在其他或进一步的实施方案中，本发明的抗凋亡拟肽大环化合物用于治疗所有这些与不希望的细胞死亡有关的病症。
用本文所述的拟肽大环化合物治疗的神经病症的一些例子包括但不限于阿尔茨海默病、唐氏综合征、荷兰型遗传性脑出血淀粉样变性、反应性淀粉样变性、家族性淀粉样肾病伴荨麻疹和耳聋、穆-韦二氏综合征、特发性骨髓瘤；巨球蛋白血症相关的骨髓瘤、家族性淀粉样多发性神经病、家族性淀粉样心肌病、孤立性心脏淀粉样变性(Isolated CardiacAmyloid)、全身性老年性淀粉样变性、成人发病型糖尿病、胰岛素瘤、孤立性心房淀粉样变性、甲状腺髓样癌、家族性淀粉样变性、遗传性脑出血伴淀粉样变性、家族性淀粉样变性多发性神经病、瘙痒病、克-雅氏病、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克(Gerstmann Straussler-Scheinker)综合征、牛海绵状脑炎、朊病毒介导的疾病和亨廷顿病。
在另一实施方案中，本文所述的拟肽大环化合物用于治疗、预防或诊断炎性病症。存在多种类型的炎性病症。某些炎症性疾病与免疫系统有关，例如自身免疫疾病。自身免疫疾病源自身体对于通常在体内存在的物质和组织(即，自身抗原)的过度活跃的免疫应答。换句话说，免疫系统攻击其自身的细胞。自身免疫疾病是免疫介导的疾病的主要原因。类风湿关节炎是自身免疫疾病的一个例子，其中免疫系统攻击关节，在关节处导致炎症(即关节炎)和破坏。它还可以损害一些器官如肺和皮肤。类风湿关节炎可能导致机能和活动性的显著损失。类风湿关节炎通过血液检查尤其是类风湿因子检验来诊断。采用本文所述的拟肽大环化合物治疗的自身免疫疾病的一些例子包括但不限于：急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、阿狄森氏病、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征(APS)、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病、白塞病、大疱性类天疱疮、乳糜泄、查加斯氏病、Churg-Strauss综合征、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、克罗恩病、皮肌炎、1型糖尿病、子宫内膜异位症、古德帕斯丘综合征、格雷夫斯病、格林巴利综合征(GBS)、桥本氏病、化脓性汗腺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎症肠病(IBD)、间质性膀胱炎、红斑狼疮、硬斑病、多发性硬化、重症肌无力、发作性睡病、神经性肌强直、寻常型天疱疮、恶性贫血、多发性肌炎、风湿性多肌痛、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、类风湿性关节炎、精神分裂症、硬皮病、干燥综合征、颞动脉炎(也称为“巨细胞动脉炎”)、高安氏动脉炎、血管炎、白癜风和韦格纳肉芽肿。
采用本文所述的拟肽大环化合物治疗的其他类型炎性病症的一些例子包括但不限于：变态反应，包括变应性鼻炎/鼻窦炎、皮肤变态反应(风疹/荨麻疹、血管性水肿、特应性皮炎)、食物过敏、药物过敏、昆虫过敏；和罕见的变应性病症，如肥大细胞增多症、哮喘，包括骨关节炎、类风湿性关节炎和脊柱关节病在内的关节炎，中枢神经系统的原发性脉管炎、结节病、器官移植排斥反应、纤维肌痛、纤维化、胰腺炎和盆腔炎性疾病。
用本文所述的拟肽大环化合物治疗或预防的心血管病症(例如，炎性病症)的一些例子包括但不限于主动脉瓣狭窄、动脉粥样硬化、心肌梗死、中风、血栓形成、动脉瘤、心力衰竭、缺血性心脏病、心绞痛、心源性猝死、高血压性心脏病；非冠状血管疾病如小动脉硬化、小血管疾病、肾病、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、高脂血症、黄瘤症、哮喘、高血压、肺气肿和慢性肺疾病；或与介入操作(“操作性血管创伤”)相关的心血管病症，如血管成形术和置入分流管、支架、合成或天然的切除移植物，留置导管、阀或其他可植入装置之后的再狭窄。优选的心血管疾病包括动脉粥样硬化、心肌梗死、动脉瘤和中风。
实施例
实施例1
例如，由序列RDLADVKSSLVNES开始，通过将第4和第8氨基酸替换为α，α-二取代的氨基酸(例如S5烯氨基酸)，来制备本发明的拟肽大环化合物。进行烯烃复分解反应，产生包含i至i+4交联的拟肽大环化合物。如前所述(Schafmeister等人(2000)，J.Am.Chem.Soc.122：5891-5892；Walensky等人(2004)Science 305：1466-70；Walensky等人(2006)Mol Cell 24：199-210)合成、纯化并分析α-螺旋交联的多肽。在引用的参考文献中公开的α，α-二取代的氨基酸和氨基酸前体可以用于拟肽大环化合物前体多肽的合成。根据Williams等人(1991)J.Am.Chem.Soc.113：9276和Schafmeister等人(2000)J.Am.Chem Soc.122：5891所述合成含有烯侧链的α，α-二取代的非天然氨基酸。通过将两个天然存在的氨基酸(见上)替换为相应的合成氨基酸来设计交联的多肽。在i和i+4位以及在i和i+7位进行置换。另外的拟肽大环化合物如图4a-c所示合成。
在图4a-c和其他地方所示的序列中，Nle表示正亮氨酸，Ac表示N-末端乙酰基，NH2表示C-末端酰胺，PEG3表示NH-(PEG)3-COOH(16个原子)连接体(Novabiochem cat#01-63-0199)，PEG4表示NH-(PEG)4-COOH(19个原子)连接体(Novabiochem cat#01-63-0200)，PEG5表示NH-(PEG)5-COOH(22个原子)连接体(Novabiochem cat#01-63-0204)。表示为$的氨基酸是通过包含一个双键的全碳交联体连接的(S)-α-(2’-戊烯基)丙氨酸(“S5-烯氨基酸”)。表示为$r8的氨基酸是由包含一个双键的全碳交联体连接的(R)-α-(2’-辛烯基)丙氨酸(“R8烯氨基酸”)。
非天然氨基酸(5-碳烯氨基酸的R和S对映异构体和8-碳烯氨基酸的S对映异构体)通过核磁共振(NMR)光谱法(Varian Mercury 400)和质谱法(Micromass LCT)进行表征。肽的合成使用固相条件、rink amideAM树脂(Novabiochem)和Fmoc主链保护基化学作用手动地或在自动肽合成仪(Applied Biosystems，model 433A)上进行。对于天然的Fmoc保护的氨基酸(Novabiochem)的偶联，使用10当量的氨基酸和1∶1∶2摩尔比的偶联试剂HBTU/HOBt(Novabiochem)/DIEA。非天然的氨基酸(4当量)利用1∶1∶2摩尔比的HATU(Applied Biosystems)/HOBt/DIEA进行偶联。在固相中，使用溶于脱气二氯甲烷中的10mM的Grubbs催化剂(Blackewell等人1994，同上)(Materia)进行烯烃复分解反应，并在室温下反应2小时。通过三氟乙酸介导的脱保护和切割实现复分解的化合物的分离，通过醚沉淀产生粗产物，在反相C18柱(Varian)上进行高效液相(HPLC)(Varian ProStar)以产生纯化合物。通过LC/MS质谱(Micromass LCT，与Agilent 1100 HPLC系统连接)和氨基酸分析(Applied Biosystems，420A型)确认纯产物的化学组成。
实施例2.TCF/β-连环蛋白竞争性荧光偏振试验
除非另外说明，以下实验在室温下进行。首先，制备包含25mMTris-Hcl pH 7.5、200mM氯化钠和5mM CHAPS的测定缓冲液。然后，向测定缓冲液中加入1M DTT至终浓度为2mM。将一份C-末端6X组氨酸标记的β-连环蛋白(aa 134-668，59KD，参见Poy F.等人，Nature Structure Bio.，8，1053(2001))(50.8μM储备液)在冰上融化，并在测定缓冲液中稀释至终浓度为125nM。将40μl该蛋白质储备液加至96孔板上除6个孔之外的所有孔中(这6个孔用作游离肽和空白)。用测定缓冲液将测试竞争肽由1mM DMSO储备液稀释为2×工作储备液。在测定缓冲液-DMSO中进行进一步稀释，以在所有孔中保持恒定DMSO浓度。进行稀释，使得肽具有40μM-0.7μM(2×)的工作浓度范围。作为基准，如上所述制备线性、非交联的肽竞争剂，但是其工作浓度范围为13-0.7μM。将50μl竞争剂2×储备液加至先前转移到96孔测定板中的40μl蛋白质溶液中。然后，制备10×荧光探针储备液。除了FAM荧光团与β-丙氨酸间隔区的n-末端偶联以外，该探针与线性基准肽相同。将该探针的1mM DMSO储备液连续稀释至终浓度为25nM(10×)，将10μl该储备液加到除用作空白孔以外的所有孔中。将测定板在暗处保存，使反应在室温下进行3小时。然后在Biotek Synergy 2上使用以下设置读取反应：100ms延迟，每孔40次测量，使用485/20nM的激发滤光片和528/20nM的发射滤光片。然后用Graphpad Prism分析数据。
测试拟肽大环化合物结合β-连环蛋白的能力，如表5所示。
表5
Figure BPA00001545839400741
Figure BPA00001545839400751
Figure BPA00001545839400761
实施例3.TCf4/β-连环蛋白活性的HEK293T-3XTCF瞬时报道子试 验
在补充有1％抗霉菌-抗生素悬浮液的DMEM/10％FBS培养基中培养的HEK-293T细胞在转染前一天以每个100mm培养皿400万个细胞的密度接种。使细胞在37℃、5％CO2的孵箱中达到大约60％汇合过夜。在转染当天，洗涤细胞，并按照厂商的瞬时转染说明，使用Fugene 6转染试剂(Roche目录#11814443001)，用3XTCF-luc报道子(Millipore，目录#21-170)(14.25μg)和pRL-TK(renilla-Luc)报道子(Promega Inc，目录#E224A)(0.75μg)的组合以3∶1(Fugene∶DNA)的比例瞬时转染。简言之，将45μl Fugene在OptiMem中稀释，并加入总共15μg DNA。在无血清条件下在室温形成复合体30分钟，将其加至于DMEM-10％FBS培养基(不合抗生素或选择剂)中的细胞中。将培养板放回孵箱中放置24小时。不使用DNA进行转染的假转染板作为阴性对照保持。在转染后24小时，收获细胞，洗涤并计数。然后将细胞在OptiMem(不含血清)或加有特定％的FBS的OptiMem中以20,000个细胞/60μl/孔的密度接种在96孔板中。用无菌水将拟肽大环化合物由10mM DMSO储备液稀释为8×工作储备液。在DMSO-水溶剂中进行进一步稀释，以使DMSO的终浓度在所有孔中保持恒定。向各孔中加入10μl稀释的大环化合物(10×希望的浓度)。作为基准分子，使用浓度范围为20μM-0.4μM的NO-阿司匹林。使用2μM终浓度的GSK-3b-抑制剂IV(BIO，CalBiochem目录#.361550))激活β-连环蛋白信号转录途径。在大环化合物处理24小时和/或48小时后，使用Dual-Glo萤光素酶测定系统(Promega，目录#E2940)，按照厂商说明，用SynergyMultiplate读数仪测定TCF活性报道子。针对用Bio刺激的DMSO处理的细胞计算对报道子活性的抑制。
虽然本文已显示和描述了本发明的优选实施方案，但是对于本领域的技术人员显而易见的是，这些实施方案只是以举例的方式提供。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员可以想到许多变化、改变和替换。应当理解，在实施本发明时，可以采用本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案。旨在用下列权利要求限定本发明的范围，并且这些权利要求范围内的方法和结构及其等效形式也涵盖在本发明内。

Claims (21)

1.一种拟肽大环化合物，其包含与选自表1中氨基酸序列的氨基酸序列至少约60％相同的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的拟肽大环化合物，其中所述拟肽大环化合物的氨基酸序列与选自表1中氨基酸序列的氨基酸序列至少约80％相同。
3.如权利要求1所述的拟肽大环化合物，其中所述拟肽大环化合物的氨基酸序列与选自表1中氨基酸序列的氨基酸序列至少约90％相同。
4.如权利要求1所述的拟肽大环化合物，其中所述拟肽大环化合物的氨基酸序列选自表1中的氨基酸序列。
5.如权利要求1所述的拟肽大环化合物，其中所述拟肽大环化合物包含螺旋。
6.如权利要求1所述的拟肽大环化合物，其中所述拟肽大环化合物包含α-螺旋。
7.如权利要求1所述的拟肽大环化合物，其中所述拟肽大环化合物包含α，α-二取代的氨基酸。
8.如权利要求1所述的拟肽大环化合物，其中所述拟肽大环化合物包含连接至少两个氨基酸的α-位的交联体。
9.如权利要求8所述的拟肽大环化合物，其中所述两个氨基酸中的至少一个是α，α-二取代的氨基酸。
10.如权利要求8所述的拟肽大环化合物，其中所述拟肽大环化合物具有下式：
式(I)
其中：
A、C、D和E各自独立地为天然或非天然氨基酸；
B为天然或非天然氨基酸、氨基酸类似物、
Figure FPA00001545839300021
[-NH-L3-CO-]、[-NH-L3-SO2-]或[-NH-L3-]；
R1和R2独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，它们是未取代的或被卤素取代的；
R3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代；
L为式-L1-L2-的大环形成连接体；
L1和L2独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚环芳基、杂亚环芳基或[-R4-K-R4-]n，它们各自任选地被R5取代；
各个R4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基或杂亚芳基；
各个K为O、S、SO、SO2、CO、CO2或CONR3；
各个R5独立地为卤素、烷基、-OR6、-N(R6)2、-SR6、-SOR6、-SO2R6、-CO2R6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
各个R6独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
R7为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代，或是具有D残基的环状结构的一部分；
R8为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代，或是具有E残基的环状结构的一部分；
v和w独立地为1-1000的整数；
u、x、y和z独立地为0-10的整数；且
n为1-5的整数。
11.如权利要求1所述的拟肽大环化合物，其中所述拟肽大环化合物包含连接该拟肽大环化合物内的第一氨基酸的骨架氨基与第二氨基酸的交联体。
12.如权利要求11所述的拟肽大环化合物，其中所述拟肽大环化合物具有式(IV)或(IVa)：
Figure FPA00001545839300031
其中：
A、C、D和E各自独立地为天然或非天然氨基酸；
B为天然或非天然氨基酸、氨基酸类似物、[-NH-L3-CO-]、[-NH-L3-SO2-]或[-NH-L3-]；
R1和R2独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，它们是未取代的或被卤素取代的，或是具有E残基的环状结构的一部分；
R3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代；
L1和L2独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚环芳基、杂亚环芳基或[-R4-K-R4-]n，它们各自任选地被R5取代；
各个R4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、杂亚烷基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基或杂亚芳基；
各个K为O、S、SO、SO2、CO、CO2或CONR3；
各个R5独立地为卤素、烷基、-OR6、-N(R6)2、-SR6、-SOR6、-SO2R6、-CO2R6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
各个R6独立地为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；
R7为-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，它们任选地被R5取代；
v和w独立地为1-1000的整数；
u、x、y和z独立地为0-10的整数；且
n为1-5的整数。
13.一种治疗个体癌症的方法，该方法包括向该个体施用权利要求1的拟肽大环化合物。
14.一种调节个体中β-连环蛋白活性的方法，该方法包括向该个体施用权利要求1的拟肽大环化合物。
15.一种拮抗个体中β-连环蛋白与TCF/LEF蛋白之间的相互作用的方法，该方法包括向该个体施用权利要求1的拟肽大环化合物。
16.如权利要求10所述的拟肽大环化合物，其中L1和L2独立地为亚烷基、亚烯基或亚炔基。
17.如权利要求10所述的拟肽大环化合物，其中L1和L2独立地为C3-C10亚烷基或亚烯基。
18.如权利要求16所述的拟肽大环化合物，其中L1和L2独立地为C3-C6亚烷基或亚烯基。
19.如权利要求10所述的拟肽大环化合物，其中R1和R2为H。
20.如权利要求10所述的拟肽大环化合物，其中R1和R2独立地为烷基。
21.如权利要求10所述的拟肽大环化合物，其中R1和R2为甲基。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107106642A (zh) * 2014-09-24 2017-08-29 艾瑞朗医疗公司 拟肽大环化合物及其制剂
CN113557030A (zh) * 2018-11-21 2021-10-26 恩多梅特生物科学公司 用于治疗子宫内膜异位症的组合物和方法

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7960506B2 (en) 2006-12-14 2011-06-14 Aileron Therapeutics, Inc. Bis-sulfhydryl macrocyclization systems
CA2677045C (en) 2007-01-31 2016-10-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized p53 peptides and uses thereof
ES2648687T3 (es) 2007-02-23 2018-01-05 Aileron Therapeutics, Inc. Péptidos macrocíclicos unidos a triazol
CA2682174C (en) 2007-03-28 2021-04-06 President And Fellows Of Harvard College Stitched polypeptides
CN102482336B (zh) 2008-09-22 2015-05-06 爱勒让治疗公司 拟肽大环化合物
BRPI0920899A2 (pt) 2008-11-24 2016-04-26 Aileron Therapeutics Inc macrociclos peptidomiméticos com propriedades melhoradas
AU2010204648B2 (en) 2009-01-14 2016-09-01 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
CN102712675A (zh) * 2009-09-22 2012-10-03 爱勒让治疗公司 拟肽大环化合物
WO2012021876A2 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
US9428845B1 (en) 2010-12-28 2016-08-30 Warp Drive Bio, Inc. Identifying new therapeutic agents
CN108929375A (zh) 2011-10-18 2018-12-04 爱勒让治疗公司 拟肽大环化合物
US20140275295A1 (en) * 2011-10-19 2014-09-18 Hiroyuki Kouji Method for treating type i and type ii diabetes
WO2013123267A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Aileron Therapeutics, Inc. Triazole-crosslinked and thioether-crosslinked peptidomimetic macrocycles
ES2817877T3 (es) 2012-02-15 2021-04-08 Aileron Therapeutics Inc Macrociclos peptidomiméticos
EP2817023A4 (en) * 2012-02-22 2015-11-25 Univ New York HYDROGEN-LINKED (HBS) SUBSTITUTED MACROCYCLES, HÉLICOÏDAUX, REVERSIBLE CROSS-LINKED
JP6526563B2 (ja) 2012-11-01 2019-06-05 エイルロン セラピューティクス，インコーポレイテッド 二置換アミノ酸ならびにその調製および使用の方法
WO2014138429A2 (en) 2013-03-06 2014-09-12 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles and use thereof in regulating hif1alpha
CN106604928A (zh) * 2014-04-02 2017-04-26 罗契斯特大学 用于α‑螺旋拟态的大环肽模拟物
SG10201902594QA (en) 2014-09-24 2019-04-29 Aileron Therapeutics Inc Peptidomimetic macrocycles and uses thereof
EP3247378B8 (en) 2015-01-09 2023-08-23 Revolution Medicines, Inc. Macrocyclic compounds that participate in cooperative binding and medical uses thereof
TW201629069A (zh) 2015-01-09 2016-08-16 霍普驅動生物科技股份有限公司 參與協同結合之化合物及其用途
CA2979847A1 (en) 2015-03-20 2016-09-29 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles and uses thereof
WO2017004548A1 (en) * 2015-07-01 2017-01-05 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
CN108368161A (zh) 2015-09-10 2018-08-03 艾瑞朗医疗公司 作为mcl-1调节剂的拟肽大环化合物
EP3355930A4 (en) 2015-10-01 2019-03-06 Warp Drive Bio, Inc. METHOD AND REAGENTS FOR THE ANALYSIS OF PROTEIN-PROTEIN INTERFACES
JP7187318B2 (ja) 2016-04-12 2022-12-12 ギンゴー バイオワークス， インコーポレイテッド 組換え異種ｌａｌを発現する宿主細胞、及び化合物の生産のための方法
KR20190099396A (ko) 2016-10-28 2019-08-27 징코 바이오웍스, 인크. 화합물의 생산을 위한 조성물 및 방법
US11091522B2 (en) 2018-07-23 2021-08-17 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles and uses thereof
CN110833549B (zh) * 2018-08-15 2023-05-02 广西梧州制药（集团）股份有限公司 吡唑并嘧啶衍生物在治疗慢性盆腔炎的用途
CN114867735A (zh) 2019-11-04 2022-08-05 锐新医药公司 Ras抑制剂
EP4054719A1 (en) 2019-11-04 2022-09-14 Revolution Medicines, Inc. Ras inhibitors
CN115873020A (zh) 2019-11-04 2023-03-31 锐新医药公司 Ras抑制剂
PE20231207A1 (es) 2020-09-15 2023-08-17 Revolution Medicines Inc Derivados indolicos como inhibidores de ras en el tratamiento del cancer

Family Cites Families (204)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4000259A (en) 1975-06-16 1976-12-28 American Home Products Corporation Cyclic dodecapeptide analogs of somatostatin and intermediates
US4191754A (en) 1979-02-28 1980-03-04 Merck & Co., Inc. Bicyclic somatostatin analogs
US4270537A (en) 1979-11-19 1981-06-02 Romaine Richard A Automatic hypodermic syringe
AU550730B2 (en) 1982-03-09 1986-04-10 Commonwealth Of Australia, The Automated metal detection
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US4730006A (en) 1986-01-27 1988-03-08 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Derivatives of 2,6-diamino-3-haloheptanedioic acid
CA1283827C (en) 1986-12-18 1991-05-07 Giorgio Cirelli Appliance for injection of liquid formulations
GB8704027D0 (en) 1987-02-20 1987-03-25 Owen Mumford Ltd Syringe needle combination
US4940460A (en) 1987-06-19 1990-07-10 Bioject, Inc. Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US5339163A (en) 1988-03-16 1994-08-16 Canon Kabushiki Kaisha Automatic exposure control device using plural image plane detection areas
AU3439589A (en) 1988-03-24 1989-10-16 Terrapin Diagnostics, Inc. Molecular sticks for controlling protein conformation
FR2638359A1 (fr) 1988-11-03 1990-05-04 Tino Dalto Guide de seringue avec reglage de la profondeur de penetration de l'aiguille dans la peau
US5120859A (en) 1989-09-22 1992-06-09 Genentech, Inc. Chimeric amino acid analogues
US5712418A (en) 1989-10-23 1998-01-27 Research Corporation Technologies, Inc. Synthesis and use of amino acid fluorides as peptide coupling reagents
US5650133A (en) 1990-01-19 1997-07-22 Nycomed Salutar Macrocyclic polyaza dichelates linked through ring nitrogens via an amide or ester functionality
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5245009A (en) 1990-03-23 1993-09-14 The Salk Institute For Biological Studies CRF antagonists
CA2047042A1 (en) 1990-07-19 1992-01-20 John Hannah Cyclic hiv principal neutralizing determinant peptides
US5190521A (en) 1990-08-22 1993-03-02 Tecnol Medical Products, Inc. Apparatus and method for raising a skin wheal and anesthetizing skin
EP0488258B1 (en) 1990-11-27 1996-04-17 Fuji Photo Film Co., Ltd. Propenamide derivatives, polymers, copolymers and use thereof
US5527288A (en) 1990-12-13 1996-06-18 Elan Medical Technologies Limited Intradermal drug delivery device and method for intradermal delivery of drugs
US5364851A (en) 1991-06-14 1994-11-15 International Synthecon, Llc Conformationally restricted biologically active peptides, methods for their production and uses thereof
CA2072249C (en) 1991-06-28 2003-06-17 Saiko Hosokawa Human monoclonal antibody specifically binding to surface antigen of cancer cell membrane
GB9114949D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
GB9118204D0 (en) 1991-08-23 1991-10-09 Weston Terence E Needle-less injector
SE9102652D0 (sv) 1991-09-13 1991-09-13 Kabi Pharmacia Ab Injection needle arrangement
US5328483A (en) 1992-02-27 1994-07-12 Jacoby Richard M Intradermal injection device with medication and needle guard
EP1251135A3 (en) 1992-04-03 2004-01-02 California Institute Of Technology High activity ruthenium or osmium metal carbene complexes for olefin metathesis reactions and synthesis thereof
US5411860A (en) 1992-04-07 1995-05-02 The Johns Hopkins University Amplification of human MDM2 gene in human tumors
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5569189A (en) 1992-09-28 1996-10-29 Equidyne Systems, Inc. hypodermic jet injector
US5334144A (en) 1992-10-30 1994-08-02 Becton, Dickinson And Company Single use disposable needleless injector
AU6770794A (en) 1993-04-23 1994-11-21 Herbert J. Evans Polypeptides that include conformation-constraining groups which flank a protein-protein interaction site
US5446128A (en) 1993-06-18 1995-08-29 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Alpha-helix mimetics and methods relating thereto
US5622852A (en) 1994-10-31 1997-04-22 Washington University Bcl-x/Bcl-2 associated cell death regulator
US5536814A (en) 1993-09-27 1996-07-16 La Jolla Cancer Research Foundation Integrin-binding peptides
US6287787B1 (en) 1993-11-24 2001-09-11 Torrey Pines Institute For Molecular Studies Dimeric oligopeptide mixture sets
WO1995024176A1 (en) 1994-03-07 1995-09-14 Bioject, Inc. Ampule filling device
US5466220A (en) 1994-03-08 1995-11-14 Bioject, Inc. Drug vial mixing and transfer device
US5824483A (en) 1994-05-18 1998-10-20 Pence Inc. Conformationally-restricted combinatiorial library composition and method
IL109943A (en) 1994-06-08 2006-08-01 Develogen Israel Ltd Conformationally constrained backbone cyclized peptide analogs
US6407059B1 (en) 1994-06-08 2002-06-18 Peptor Limited Conformationally constrained backbone cyclized peptide analogs
US7553929B2 (en) 1994-06-13 2009-06-30 Vanderbilt University Cell permeable peptides for inhibition of inflammatory reactions and methods of use
US5807746A (en) 1994-06-13 1998-09-15 Vanderbilt University Method for importing biologically active molecules into cells
US5770377A (en) 1994-07-20 1998-06-23 University Of Dundee Interruption of binding of MDM2 and P53 protein and therapeutic application thereof
ATE449342T1 (de) 1994-09-19 2009-12-15 Ricardo J Moro Nachweis von krebs
US5599302A (en) 1995-01-09 1997-02-04 Medi-Ject Corporation Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring
US6169073B1 (en) 1995-02-16 2001-01-02 Bayer Corporation Peptides and peptidomimetics with structural similarity to human p53 that activate p53 function
EP0729972A1 (de) 1995-02-28 1996-09-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Tetrahydronaphthalin-Peptidderivate
US5675001A (en) 1995-03-14 1997-10-07 Hoffman/Barrett, L.L.C. Heteroatom-functionalized porphyrazines and multimetallic complexes and polymers derived therefrom
US5731408A (en) 1995-04-10 1998-03-24 Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Peptides having potent antagonist and agonist bioactivities at melanocortin receptors
US6054556A (en) 1995-04-10 2000-04-25 The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Melanocortin receptor antagonists and agonists
US5672584A (en) 1995-04-25 1997-09-30 The University Of Kansas Cyclic prodrugs of peptides and peptide nucleic acids having improved metabolic stability and cell membrane permeability
EP0832096B1 (en) 1995-05-04 2001-07-18 The Scripps Research Institute Synthesis of proteins by native chemical ligation
US6184344B1 (en) 1995-05-04 2001-02-06 The Scripps Research Institute Synthesis of proteins by native chemical ligation
US5730723A (en) 1995-10-10 1998-03-24 Visionary Medical Products Corporation, Inc. Gas pressured needle-less injection device and method
US5817789A (en) 1995-06-06 1998-10-06 Transkaryotic Therapies, Inc. Chimeric proteins for use in transport of a selected substance into cells
US6051554A (en) 1995-06-07 2000-04-18 Peptor Limited Conformationally constrained backbone cyclized somatostatin analogs
US5811515A (en) 1995-06-12 1998-09-22 California Institute Of Technology Synthesis of conformationally restricted amino acids, peptides, and peptidomimetics by catalytic ring closing metathesis
US5840833A (en) 1995-10-27 1998-11-24 Molecumetics, Ltd Alpha-helix mimetics and methods relating thereto
US5849954A (en) 1996-01-18 1998-12-15 Research Corporation Technologies, Inc. Method of peptide synthesis
US5849691A (en) 1996-02-20 1998-12-15 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Peptidomimetic inhibitors of cathepsin D and plasmepsins I and II
GB9607549D0 (en) 1996-04-11 1996-06-12 Weston Medical Ltd Spring-powered dispensing device
US5817752A (en) 1996-06-06 1998-10-06 La Jolla Pharmaceutical Company Cyclic polypeptides comprising a thioether linkage and methods for their preparation
US5663316A (en) 1996-06-18 1997-09-02 Clontech Laboratories, Inc. BBC6 gene for regulation of cell death
US7083983B2 (en) 1996-07-05 2006-08-01 Cancer Research Campaign Technology Limited Inhibitors of the interaction between P53 and MDM2
DE69738754D1 (de) 1996-07-05 2008-07-17 Cancer Rec Tech Ltd Hemmer der interaktion zwischen p53 und mdm2
JP2001500475A (ja) * 1996-07-12 2001-01-16 マクギル ユニバーシティ 細胞接着を調節するための化合物および方法
US5955593A (en) 1996-09-09 1999-09-21 Washington University BH3 interacting domain death agonist
US20020064546A1 (en) 1996-09-13 2002-05-30 J. Milton Harris Degradable poly(ethylene glycol) hydrogels with controlled half-life and precursors therefor
US5965703A (en) 1996-09-20 1999-10-12 Idun Pharmaceuticals Human bad polypeptides, encoding nucleic acids and methods of use
US5856445A (en) 1996-10-18 1999-01-05 Washington University Serine substituted mutants of BCL-XL /BCL-2 associated cell death regulator
US6271198B1 (en) 1996-11-06 2001-08-07 Genentech, Inc. Constrained helical peptides and methods of making same
DE69735241T2 (de) 1996-11-21 2006-11-02 Promega Corp., Madison Alkyl peptidamide für topische verwendung
US7001983B1 (en) 1997-02-20 2006-02-21 Yeda Research And Development Co., Ltd. Antipathogenic synthetic peptides and compositions comprising them
US6849428B1 (en) 1997-03-05 2005-02-01 New England Biolabs, Inc. Intein-mediated protein ligation of expressed proteins
US5851775A (en) * 1997-03-20 1998-12-22 Johns Hopkins University β-catenin, Tcf-4, and APC interact to prevent cancer
EP1015479A4 (en) 1997-04-11 2002-07-24 Lilly Co Eli COMBINATIVE SUBSTANCE LIBRARIES OF PEPTIDOMIMETIC MACROCYCLES AND THE RELATED METHODS
US5993412A (en) 1997-05-19 1999-11-30 Bioject, Inc. Injection apparatus
WO1999014321A1 (en) 1997-09-17 1999-03-25 The Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Research Novel therapeutic molecules
US6165732A (en) 1997-10-14 2000-12-26 Washington University Method for identifying apoptosis modulating compounds
US6875594B2 (en) 1997-11-13 2005-04-05 The Rockefeller University Methods of ligating expressed proteins
CA2316834C (en) 1998-01-07 2006-01-03 Shearwater Polymers, Inc. Degradable heterobifunctional poly(ethylene glycol) acrylates and gels and conjugates derived therefrom
IT1298087B1 (it) 1998-01-08 1999-12-20 Fiderm S R L Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni
US6030997A (en) 1998-01-21 2000-02-29 Eilat; Eran Acid labile prodrugs
EP1054899A2 (de) * 1998-02-21 2000-11-29 Max-Delbrück-Centrum Für Molekulare Medizin Mittel zur therapie von menschlichen erkrankungen, ausgehend von beta-catenin, seine herstellung und seine verwendung
AU767185B2 (en) 1998-03-23 2003-11-06 President And Fellows Of Harvard College Synthesis of compounds and libraries of compounds
EP1093458A4 (en) 1998-04-15 2001-07-18 Aventis Pharm Prod Inc METHOD FOR THE PRODUCTION OF RESIN-TIED CYCLIC PEPTIDES
US6277824B1 (en) * 1998-07-10 2001-08-21 Adherex Technologies Compounds and methods for modulating adhesion molecule function
US6326354B1 (en) 1998-08-19 2001-12-04 Washington University Modulation of apoptosis with bid
US7173005B2 (en) 1998-09-02 2007-02-06 Antyra Inc. Insulin and IGF-1 receptor agonists and antagonists
US6572856B1 (en) 1998-09-10 2003-06-03 The University Of Virginia Patent Foundation Methods for the prevention and treatment of cancer using anti-C3b(i) antibodies
EP1216309A2 (en) 1999-03-01 2002-06-26 Variagenics, Inc. Methods for targeting rna molecules
HUP0202203A3 (en) 1999-03-29 2003-09-29 Procter & Gamble Melanocortin receptor ligands, pharmaceutical compositions comprising thereof and method for their preparation
US6713280B1 (en) 1999-04-07 2004-03-30 Thomas Jefferson University Enhancement of peptide cellular uptake
US7192713B1 (en) 1999-05-18 2007-03-20 President And Fellows Of Harvard College Stabilized compounds having secondary structure motifs
CA2284459C (en) * 1999-10-04 2012-12-11 Neokimia Inc. Combinatorial synthesis of libraries of macrocyclic compounds useful in drug discovery
US6348558B1 (en) 1999-12-10 2002-02-19 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom
AU2001231154A1 (en) * 2000-01-24 2001-07-31 Adherex Technologies Inc. Peptidomimetic modulators of cell adhesion
DE10009341A1 (de) 2000-02-22 2001-09-06 Florian Kern Verfahren zur antigen-spezifischen Stimulation von T-Lymphozyten
US6495674B1 (en) 2000-02-25 2002-12-17 The Salk Institute For Biological Studies Evectins and their use
US7049290B2 (en) 2000-07-28 2006-05-23 Universität Zürich Essential downstream component of the wingless signaling pathway and therapeutic and diagnostic applications based thereon
US6703382B2 (en) 2000-08-16 2004-03-09 Georgetown University Medical Center Small molecule inhibitors targeted at Bcl-2
AU2002217970A1 (en) * 2000-11-28 2002-06-11 Curis, Inc. Wnt signalling assay, methods and uses thereof
JP2004530422A (ja) 2000-12-19 2004-10-07 ザ ジョンズ ホプキンス ユニバーシティ 急速なアポトーシスを誘導するｊｆｙ１蛋白質
WO2002072597A2 (en) 2001-03-09 2002-09-19 University Of Louisville Helicomimetics and stabilized lxxll peptidomimetics
US20040106548A1 (en) 2001-09-07 2004-06-03 Schmidt Michelle A Conformationally constrained labeled peptides for imaging and therapy
CA2471719A1 (en) 2001-12-31 2003-07-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Method of treating apoptosis and compositions thereof
EP1468013A4 (en) 2002-01-03 2005-03-16 Yissum Res Dev Co CYCLIC PEPTIDES WITH CARBON SKELETON HAVING RESTRICTED CONFORMATION
US7432242B2 (en) 2002-02-15 2008-10-07 The Regents Of The University Of Michigan Inhibitors of RGS proteins
US20030166138A1 (en) 2002-02-21 2003-09-04 Todd Kinsella Cyclic peptides and analogs useful to treat allergies
CN100419426C (zh) 2002-04-22 2008-09-17 佛罗里达州立大学 功能化纳米微粒及其使用方法
ES2346646T5 (es) 2002-05-30 2018-02-15 The Scripps Research Institute Ligación catalizada con cobre de azidas y acetilenos
SE0201863D0 (en) 2002-06-18 2002-06-18 Cepep Ab Cell penetrating peptides
EP1541692A1 (en) 2002-09-06 2005-06-15 Kaneka Corporation PROCESS FOR PRODUCING L-a-METHYLCYSTEINE DERIVATIVE
AU2003267124A1 (en) 2002-09-09 2004-03-29 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bh3 peptides and method of use thereof
EP2135867B1 (en) 2002-11-07 2013-09-25 Kosan Biosciences Incorporated Trans-9, 10-dehydroepothilone C and trans-9, 10-dehydroepothilone D, analogs thereof and methods of making the same
CN1711084B (zh) 2002-11-08 2010-04-28 霍夫曼-拉罗奇有限公司 作为ppar激动剂的取代4-烷氧基噁唑衍生物
US7166575B2 (en) 2002-12-17 2007-01-23 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of peptide YY and methods for treating and preventing obesity
WO2004058804A1 (en) 2002-12-24 2004-07-15 Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Research Peptides and therapeutic uses thereof
EP1452868A2 (en) 2003-02-27 2004-09-01 Pepscan Systems B.V. Method for selecting a candidate drug compound
AU2003902743A0 (en) 2003-06-02 2003-06-19 Promics Pty Limited Process for the preparation of cyclic peptides
WO2005007675A2 (en) 2003-07-09 2005-01-27 The Scripps Research Institute TRIAZOLE ϵ-AMINO ACIDS
GB0317815D0 (en) 2003-07-30 2003-09-03 Amersham Health As Imaging agents
JP4649413B2 (ja) 2003-10-03 2011-03-09 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション アルツハイマー病の治療用のベンジルエーテル及びベンジルアミノβ−セクレターゼ阻害薬
EP1673386A2 (en) 2003-10-16 2006-06-28 AplaGen GmbH Stabilized alpha-helical peptides
CN107090025A (zh) * 2003-11-05 2017-08-25 达纳-法伯癌症研究所股份有限公司 稳定的α螺旋肽及其用途
GB0404731D0 (en) 2004-03-03 2004-04-07 Indp Administrative Inst Nims Method and products for the selective degradation of proteins
WO2005090388A1 (en) 2004-03-19 2005-09-29 The University Of Queensland Alpha helical mimics, their uses and methods for their production
WO2005118620A2 (en) 2004-05-27 2005-12-15 New York University Methods for preparing internally constraied peptides and peptidomimetics
CN100335467C (zh) 2004-06-04 2007-09-05 中国科学院上海有机化学研究所 一锅法区域选择性合成5－碘代－1，4－二取代－1，2，3－三氮唑化合物
WO2005118634A2 (en) 2004-06-04 2005-12-15 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Helical peptidomimetics with enhanced activity against beta-amyloid production
EP1602663A1 (en) 2004-06-04 2005-12-07 Chiralix B.V. Triazole-linked glycoamino acids and glycopeptides
ATE432922T1 (de) 2004-10-29 2009-06-15 Schering Corp Substituierte 5-carboxyamidpyrazoles und ä1,2, 4ütriazole als viruzide
WO2006069001A2 (en) 2004-12-20 2006-06-29 Baylor College Of Medicine Structural requirements for stat3 binding and recruitment to phosphototyrosine ligands
PT1844337E (pt) 2005-01-24 2014-04-03 Pepscan Systems Bv Compostos ligantes, compostos imunogénicos e peptidomiméticos
WO2006103666A2 (en) 2005-03-28 2006-10-05 Yeda Research And Development Co. Ltd. Isolated bid polypeptides, polynucleotides encoding same and antibodies directed thereagainst and methods of using same for inducing cell cycle arrest or apoptosis
US20070020620A1 (en) 2005-07-14 2007-01-25 Finn M G Compositions and methods for coupling a plurality of compounds to a scaffold
US20070161544A1 (en) 2006-01-06 2007-07-12 Peter Wipf Selective targeting agents for mitcochondria
US7745573B2 (en) 2006-02-17 2010-06-29 Polychip Pharmaceuticals Pty Ltd. Conotoxin analogues and methods for synthesis of intramolecular dicarba bridge-containing peptides
US7538190B2 (en) 2006-02-17 2009-05-26 Polychip Pharmaceuticals Pty Ltd Methods for the synthesis of two or more dicarba bridges in organic compounds
GB0611405D0 (en) 2006-06-09 2006-07-19 Univ Belfast FKBP-L: A novel inhibitor of angiogenesis
US20080213175A1 (en) 2006-09-15 2008-09-04 Kolb Hartmuth C Click chemistry-derived cyclic peptidomimetics as integrin markers
US7897394B2 (en) 2006-09-21 2011-03-01 Intrexon Corporation Endoplasmic reticulum localization signals
CA2669696A1 (en) 2006-11-15 2008-05-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized maml peptides and uses thereof
US7960506B2 (en) 2006-12-14 2011-06-14 Aileron Therapeutics, Inc. Bis-sulfhydryl macrocyclization systems
US7981998B2 (en) 2006-12-14 2011-07-19 Aileron Therapeutics, Inc. Bis-sulfhydryl macrocyclization systems
CA2677045C (en) 2007-01-31 2016-10-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized p53 peptides and uses thereof
ES2648687T3 (es) 2007-02-23 2018-01-05 Aileron Therapeutics, Inc. Péptidos macrocíclicos unidos a triazol
CA2682174C (en) 2007-03-28 2021-04-06 President And Fellows Of Harvard College Stitched polypeptides
AU2008247606A1 (en) 2007-05-02 2008-11-13 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods of modulating cellular homeostatic pathways and cellular survival
US8921323B2 (en) 2007-09-26 2014-12-30 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Methods and compositions for modulating BCL-2 family polypeptides
JP5653219B2 (ja) 2007-12-31 2015-01-14 ニューヨーク ユニバーシティ 水素結合サロゲートをベースとする人工ヘリックスによるウイルス宿主膜融合の制御
SI2235064T1 (sl) 2008-01-07 2016-04-29 Amgen Inc. Metoda za izdelavo heterodimernih molekul - protitelesa fc z uporabo elektrostatičnih usmerjevalnih učinkov
KR20100126361A (ko) * 2008-02-08 2010-12-01 에일러론 테라퓨틱스 인코포레이티드 치료용 펩티드유사 거대고리
EP2310407A4 (en) 2008-04-08 2011-09-14 Aileron Therapeutics Inc BIOLOGIC EFFECTIVE PEPTIDOMIMETIC MACROCYCLES
US20110144303A1 (en) 2008-04-08 2011-06-16 Aileron Therapeutics, Inc. Biologically Active Peptidomimetic Macrocycles
WO2009149214A2 (en) 2008-06-03 2009-12-10 Aileron Therapeutics, Inc. Compositions and methods for enhancing cellular transport of biomolecules
WO2010011313A2 (en) 2008-07-23 2010-01-28 President And Fellows Of Harvard College Ligation of stapled polypeptides
BRPI0919414A2 (pt) 2008-09-18 2017-07-11 Univ New York Inibição da interação entre hif-1alfa e p300/cbp com hélices à base de substituintes de ligação de hidrogênio
WO2010034029A1 (en) 2008-09-22 2010-03-25 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
CN104961795A (zh) 2008-09-22 2015-10-07 爱勒让治疗公司 用于制备纯化的多肽组合物的方法
AU2009294874A1 (en) 2008-09-22 2010-03-25 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
CN102482336B (zh) 2008-09-22 2015-05-06 爱勒让治疗公司 拟肽大环化合物
CN102197046A (zh) 2008-09-22 2011-09-21 爱勒让治疗公司 拟肽大环化合物
WO2010034026A1 (en) 2008-09-22 2010-03-25 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
BRPI0920899A2 (pt) 2008-11-24 2016-04-26 Aileron Therapeutics Inc macrociclos peptidomiméticos com propriedades melhoradas
WO2010068684A2 (en) 2008-12-09 2010-06-17 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Methods and compositions for specific modulation of mcl-1
AU2010204648B2 (en) 2009-01-14 2016-09-01 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
WO2011008260A2 (en) 2009-07-13 2011-01-20 President And Fellows Of Harvard College Bifunctional stapled polypeptides and uses thereof
CN102712675A (zh) 2009-09-22 2012-10-03 爱勒让治疗公司 拟肽大环化合物
CN102655875A (zh) 2009-10-14 2012-09-05 爱勒让治疗公司 改善的拟肽大环化合物
WO2011163423A2 (en) 2010-06-22 2011-12-29 University Of Central Florida Research Foundation, Inc. Methods and compositions for cell permeable stat3 inhibitor
WO2012021876A2 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
WO2012040459A2 (en) 2010-09-22 2012-03-29 President And Fellows Of Harvard College Beta-catenin targeting peptides and uses thereof
US8987412B2 (en) 2011-03-04 2015-03-24 New York University Hydrogen bond surrogate macrocycles as modulators of Ras
WO2012173846A2 (en) 2011-06-06 2012-12-20 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
WO2012174423A1 (en) 2011-06-17 2012-12-20 President And Fellows Of Harvard College Stabilized polypeptides as regulators of rab gtpase function
US20140256912A1 (en) 2011-06-17 2014-09-11 President And Fellows Of Harvard College Stabilized Variant MAML Peptides and Uses Thereof
EP3041491A1 (en) 2011-08-31 2016-07-13 New York University Thioether-,ether-, and alkylamine-linked hydrogen bond surrogate pertidomimentics
CN108929375A (zh) 2011-10-18 2018-12-04 爱勒让治疗公司 拟肽大环化合物
WO2013059530A2 (en) 2011-10-18 2013-04-25 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
US8796257B2 (en) 2011-12-02 2014-08-05 Naeja Pharmaceutical Inc. Bicyclic compounds and their use as antibacterial agents and β-lactamase inhibitors
ES2817877T3 (es) 2012-02-15 2021-04-08 Aileron Therapeutics Inc Macrociclos peptidomiméticos
WO2013123267A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Aileron Therapeutics, Inc. Triazole-crosslinked and thioether-crosslinked peptidomimetic macrocycles
EP2920197B1 (en) 2012-09-26 2021-03-17 President and Fellows of Harvard College Proline-locked stapled peptides and uses thereof
WO2014055564A1 (en) 2012-10-01 2014-04-10 President And Fellows Of Harvard College Stabilized polypeptide insulin receptor modulators
JP6526563B2 (ja) 2012-11-01 2019-06-05 エイルロン セラピューティクス，インコーポレイテッド 二置換アミノ酸ならびにその調製および使用の方法
WO2014138429A2 (en) 2013-03-06 2014-09-12 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles and use thereof in regulating hif1alpha
US20170037086A1 (en) 2014-04-09 2017-02-09 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles with pth activity
SG10201902594QA (en) 2014-09-24 2019-04-29 Aileron Therapeutics Inc Peptidomimetic macrocycles and uses thereof
BR112017005736A2 (pt) 2014-09-24 2017-12-12 Aileron Therapeutics Inc macrociclos peptidomiméticos e formulações dos mesmos
CA2979847A1 (en) 2015-03-20 2016-09-29 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles and uses thereof
WO2017004548A1 (en) 2015-07-01 2017-01-05 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
US10464975B2 (en) 2015-07-02 2019-11-05 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized anti-microbial peptides
US20170037105A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
JP6971970B2 (ja) 2015-09-03 2021-11-24 エルロン・セラピューティクス・インコーポレイテッドAileron Therapeutics, Inc. ペプチド模倣大環状分子およびその使用
CN108368161A (zh) 2015-09-10 2018-08-03 艾瑞朗医疗公司 作为mcl-1调节剂的拟肽大环化合物
US20170349638A1 (en) 2016-03-21 2017-12-07 Aileron Therapeutics, Inc. Companion diagnostic tool for peptidomimetic macrocycles
WO2017205786A1 (en) 2016-05-27 2017-11-30 Aileron Therapeutics, Inc. Cell permeable peptidomimetic macrocycles
WO2017218949A2 (en) 2016-06-17 2017-12-21 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles and uses thereof

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107106642A (zh) * 2014-09-24 2017-08-29 艾瑞朗医疗公司 拟肽大环化合物及其制剂
CN107106642B (zh) * 2014-09-24 2021-02-26 艾瑞朗医疗公司 拟肽大环化合物及其制剂
CN113557030A (zh) * 2018-11-21 2021-10-26 恩多梅特生物科学公司 用于治疗子宫内膜异位症的组合物和方法

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