CN101088998A - 反式－9,10－脱氢埃坡霉素c和d,其类似物以及制备这些化合物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供新的由反式－9，10－脱氢埃坡霉素C和反式－9，10－脱氢埃坡霉素D为基础衍生的化合物、组合物和体外抑制细胞超增殖和/或稳定微管的方法，以及体内治疗超增殖疾病的方法。还公开了这些化合物的制备方法。

Description

反式-9，10-脱氢埃坡霉素C和D，其类似物以及制备这些化合物的方法

本发明是申请日为2003年11月7日的中国专利申请200380103451.8分案申请，原申请的发明名称为“反式-9，10-脱氢埃坡霉素C和D，其类似物以及制备这些化合物的方法”。

发明领域

本发明涉及反式-9，10-脱氢埃坡霉素(epothilone)C和D，其类似物，并且涉及所述方法制备的化合物，含有所述化合物的组合物，以及超增殖疾病的治疗方法。

发明背景

已知是埃坡霉素(注：埃坡霉素是一种大环内酯类抗肿瘤药物)的聚酮化合物类已经显示是具有与紫杉醇相似作用模式的有效的治疗性化合物的来源(Bollag，等，Cancer Res.55：2325-2333(1995)；Service，Science 274(5295)：2009(1996)；Cowden和Paterson，Nature 387(6630)：238-9(1997))。对埃坡霉素和埃坡霉素类似物的兴趣随着发现一些埃坡霉素对抗对紫杉醇产生抗药性的肿瘤有活性并且有减小的发生不期望的副作用的可能性而增长(Muhlradt和Sasse，Cancer Res.57(16)：3344-6(1997))。对治疗功效进行研究的埃坡霉素和埃坡霉素类似物中有埃坡霉素B1和半合成埃坡霉素B类似物，BMS-247550 2，又已知为″氮杂埃坡霉素B″(Colevas，等，Oncology(Huntingt).15(9)：1168-9，1172-5(2001)；Lee，等，ClinCancer Res.7(5)：1429-37(2001)；McDaid，等，Clin Cancer Res.8(7)：2035-43(2002)；Yamaguchi，等，Cancer Res.62(2)：466-71(2002))，和BMS-310705 3.

脱氧埃坡霉素B4，又已知为″埃坡霉素D″，是对治疗功效进行研究中具有有希望的抗肿瘤性质即紫杉醇性质的另一种埃坡霉素衍生物。还证明了这种化合物具有比12，13-环氧化物、例如埃坡霉素B或BMS-247550更小的毒性，这大概是由于缺少高反应性环氧化物部分。

最近，2001年11月8日公开的国际PCT申请公开No.WO 01/83800中公开了利用化学和生物技术途径制备9-氧代-埃坡霉素类似物，包括9-氧-埃坡霉素D及其类似物。

最近，报道了反式-9，10-脱氢埃坡霉素D(5)和26-三氟-反式-9，10-脱氢埃坡霉素D(6)的合成和初步评估(Rivkin等，J.Am.Chem.Soc.2003，125：2899-2901)。发现较早报道的5的制备存在差错(White等，J.Am.Chem.Soc.2001，123：5407-13；White等，J.Am.Chem.Soc.2003，125：3190)。虽然这些化合物表现出有希望的活性，但是通过全化学合成进行制备时间长而且费用高，因此需要一种用于它们制备的改进方法。

尽管现有技术已经公开各种埃坡霉素类似物具有抗-肿瘤活性，但是对表现出比紫杉醇或埃坡霉素A和B更小的副作用的具有微管稳定活性的新的类似物仍然有着持续不断的兴趣。

发明概述

一方面，本发明提供具有微管稳定活性并且在癌症和特征在于细胞超增殖的其他疾病的治疗中有用的下式(I)的新化合物：

其中R是H，取代的或未取代的低级烷基；

R₁是H，或者是取代的或未取代的低级烷基，低级链烯基或低级炔基；

Ar是取代的或未取代的杂芳基；和其药学可接受盐或药物前体；

前提是当R是甲基或三氟甲基并且Ar是

时，则R₁不是H。

在本发明的一些实施方案中，Ar是

形成下面结构(II)的化合物：

其中X是S或O，并且R₂是H或取代的或未取代的低级烷基。在其他实施方案中，Ar可以是其他取代的或未取代的部分，例如取代的或未取代的噻唑基，_唑基，咪唑基，异噻唑基，异_唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，哒嗪基，中氮茚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，喹啉基，喹嗪基，2，3-二氮杂萘基，萘啶基，喹喔啉基，喹唑啉基，苯并噻唑基，_二唑基，噻二唑基，苯并三唑基等。本发明特别优选的新的化合物是式(I)的化合物，其中R是甲基或三氟甲基并且Ar是2-吡啶基，4-甲氧基-2-吡啶基，5-(羟甲基)-2-吡啶基，或5-甲基-3-异_唑基。

另一方面，本发明进一步提供含有当施用给人或动物对象时抑制人或动物对象细胞超增殖和/或干扰微管蛋白活性的有效量的本发明的化合物与药学可接受载体的组合物，提供对人或动物对象抑制细胞超增殖和/或干扰微管蛋白活性的方法，包括对人或动物对象施用细胞超增殖抑制或微管蛋白活性干扰量的本发明化合物或组合物。

另一方面，本发明提供从9-氧代-埃坡霉素C或D合成本发明化合物的方法。本发明还包括用如上所述本发明化合物或组合物包被的支架(stent)，和使用这样的包被的支架治疗心血管疾病的方法。

优选实施方案的详细描述

现在令人惊奇地发现一些以反式-9，10-脱氢埃坡霉素C和反式-9，10-脱氢埃坡霉素D为基础的衍生物在体外或体内能干扰微管蛋白活性。因此，本发明提供体外抑制细胞超增殖和/或稳定微管的以及体内治疗超增殖疾病的新的化合物、组合物和方法。

一方面，本发明提供下式(I)的新的化合物：

其中R是H，或者是取代的或未取代的低级烷基；

R₁是H，或者是取代的或未取代的低级烷基，低级链烯基或低级炔基；

Ar是取代的或未取代的杂芳基；

前提是当R是甲基或三氟甲基并且Ar是

时，则R₁不是H；

和其药学可接受盐或药物前体。

在本发明的一些实施方案中，Ar是

形成下面结构(II)的化合物：

其中X是S或O，并且R₂是H，或者是取代的或未取代的低级烷基，前提是，当R是甲基或三氟甲基，X是S，并且R₂是甲基时，则R₁不是氢。在一些实施方案中，R₂是取代的甲基。在特定实施方案中，R₂是羟甲基，氨基甲基，烷基氨基甲基，二烷基氨基甲基，叠氮基甲基或氟代甲基。

除了上面描述的噻唑基和_唑基之外，Ar可以是噻唑基或_唑基之外的取代的或未取代的杂芳基部分，例如取代的或未取代的咪唑基，异噻唑基，异_唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，哒嗪基，中氮茚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，喹啉基，喹嗪基，2，3-二氮杂萘基，萘啶基，喹喔啉基，喹唑啉基，苯并噻唑基，_二唑基，噻二唑基，苯并三唑基等。

在本发明的一个实施方案中，提供式(I)的化合物，其中Ar是取代的或未取代的2-吡啶基。

在本发明的一个实施方案中，提供式(I)的化合物，其中Ar是取代的或未取代的3-异_唑基。

在本发明的一个实施方案中，提供式(I)的化合物，其中Ar是取代的或未取代的2-喹啉基。

在本发明的一个实施方案中，提供式(I)的化合物，其中Ar是取代的或未取代的2-苯并_唑基。

在本发明的一个实施方案中，提供式(I)或式(II)的化合物，其中R是H，并且R₁是H或C₁-C₄烷基。

在本发明的另一个实施方案中，提供式(I)或式(II)的化合物，其中R是CH₃，并且R₁是H或C₁-C₄烷基。

在本发明的另一个实施方案中，提供式(I)或式(II)的化合物，其中R是H，并且R₁是H或C₂-C₄链烯基。

在本发明的另一个实施方案中，提供式(I)或式(II)的化合物，其中R是CH₃，并且R₁是H或C₂-C₄链烯基。

在本发明的另一个实施方案中，提供式(I)或式(II)的化合物，其中R是H，并且R₁是H或C₂-C₄炔基。

在本发明的另一个实施方案中，提供式(I)或式(II)的化合物，其中R是CH₃，并且R₁是H或C₂-C₄炔基。

在其他实施方案中，本发明提供具有下面结构的式(I)的化合物：

在本发明的另一个实施方案中，提供结构(III)所示的反式-9，10-脱氢埃坡霉素C(其中X是S，R是H，并且R₁是H的结构(II)的化合物)和结构(IV)所示的反式-9，10-脱氢埃坡霉素D(其中X是S，R是甲基，并且R₁是H的结构(II)的化合物)：

另一方面，本发明提供含有当施用给人或动物对象时抑制人或动物对象细胞超增殖和/或干扰微管蛋白活性的有效量的式(I)，(II)，(III)或(IV)的化合物与药学可接受载体的组合物。

在其他实施方案中，本发明提供抑制人或动物对象细胞超增殖和/或干扰微管蛋白活性的方法，包括对人或动物对象施用微管蛋白活性干扰量的式(I)，(II)，(III)或(IV)的化合物。

本发明进一步提供治疗患有超增殖疾病例如癌症的人或动物对象的方法，包括对人或动物对象单独或者与其他治疗有效活性药物联合施用上述治疗有效量的式(I)，(II)，(III)或(IV)的化合物。

本发明的其他实施方案包括用本发明的化合物包被的支架和使用这样包被的支架治疗心血管疾病的方法。

在其他实施方案中，本发明提供如上所述的用作药物的式(I)，(II)，(III)或(IV)的化合物，以及使用这些化合物在制备用于治疗超增殖疾病的药物的方法。

本发明的其他实施方案包括用本发明的化合物或组合物包被的支架，和使用这样的包被的支架治疗心血管疾病的方法。

在其他实施方案中，本发明提供制备式(I)，(II)，(III)或(IV)的化合物的新的方法，这将在下文中详细描述。

上下文中使用的下面的术语具有下面的定义：

这里使用的″低级烷基″指包括1-10个、优选1-6个、更优选1-4个碳原子(C₁-C₄烷基)的支链或直链烷基。

″低级链烯基″在这里指具有一个或多个双键和2-10个碳原于、优选2-6个碳原子、更优选2-4个碳原子(C₂-C₄链烯基)的直链、支链或环状原子团。

″低级炔基″在这里指具有一个或多个三键和2-10个碳原子、优选2-6个碳原子、更优选2-4个碳原子(C₂-C₄炔基)的直链、支链或环状原子团。

这里定义的低级烷基、低级链烯基、或低级炔基可以是取代或未取代的。因此，根据这里定义的短语″取代或未取代的低级烷基、低级链烯基或低级炔基″意思是这些部分的任何一个可以是未取代的或者可以被例如一个或几个卤原子，羟基，氨基，叠氮基或其他基团，包括，例如，甲基，乙基，丙基，异丙基，正丁基，叔丁基，新戊基，三氟甲基，羟甲基，氨基甲基，叠氮基甲基，五氟乙基等取代。

这里使用的″杂芳基″指含有1-3个选自氮，氧，或硫的杂原子的任何5-或6-元环；其中5-元环有0-2个双键，而6-元环有0-3个双键；其中氮和硫原子任选地可以被氧化；其中氮和硫杂原子任选地可以被季化(quarternized)；和包括其中任何上述杂环与苯环或另一个5-或6-元饱和的或不饱和的杂环稠合的任何双环基团。

代表性杂芳基基团包括，例如，噻唑基，_唑基，咪唑基，异噻唑基，异_唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，哒嗪基，中氮茚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，喹啉基，喹嗪基，2，3-二氮杂萘基，萘啶基，喹喔啉基，喹唑啉基，苯并噻唑基，_二唑基，噻二唑基，苯并三唑基等，它们可以是未被取代的或者被独立地选自羟基，卤原子，氰基，氧(C＝O)，烷基亚氨基(RN＝，其中R是低级烷基或低级烷氧基)，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，酰基氨基烷基，烷氧基，硫代烷氧基，多硫氧基，低级烷基，环烷基或卤代烷基的各种取代基一取代或二取代。

本发明实施中有用的″药学可接受盐″能以从无机酸或有机酸衍生的盐的形式使用。这些盐包括但不限于如下：乙酸盐，己二酸盐，藻酸盐，柠檬酸盐，天冬氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，硫酸氢盐，丁酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，二葡糖酸盐，环戊烷丙酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，延胡索酸盐，盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟基乙磺酸盐，乳酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐，烟酸盐，2-萘磺酸盐，草酸盐，扑酸盐，果胶酯酸盐，硫酸盐，3-苯基丙酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，丙酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，硫代氰酸盐，对-甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。还有，含有碱性氮的基团能用如低级烷基卤化物这样的试剂季铵化，例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯，如硫酸二甲酯，二乙酯，二丁酯和二戊基酯，长链卤化物，例如癸基，十二烷基，十四烷基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物，芳烷基卤化物，如苄基溴化物和苯乙基溴化物及其他。从而获得水或油可溶性或可分散产品。

可以用来形成药学可接受酸加成盐的酸的例子包括如盐酸、硫酸和磷酸这样的无机酸和如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸这样的有机酸。碱加成盐能在式(I)的化合物的最后分离和纯化期间就地制备，或者通过使羧酸部分与合适的碱，例如，药学可接受金属阳离子的氢氧化物，碳酸盐或碳酸氢盐，或者与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺反应而分开制备。药学可接受盐包括但不限于，以碱金属和碱土金属为基础的阳离子，例如钠，钾，锂，钙，镁，铝盐等等，以及无毒铵，季铵，和胺阳离子，包括但不限于铵，四甲基铵，四乙基铵，甲胺，二甲胺，三甲胺，三乙胺，乙胺等。用于形成碱加成盐的其他代表性有机胺包括二乙胺，乙二胺，乙醇胺，二乙醇胺，哌嗪等。

这里使用的术语″药学可接受药物前体″指合理医疗判断范围内，适合以低毒性、刺激、变应性反应等，相称以合理的利益/风险比，对想要的应用有效的以及可能情况下是本发明化合物的两性离子形式的与人和低级动物的组织接触使用的本发明化合物的药物前体。术语″药物前体″指在体内快速转化得到上述母体化合物的化合物，例如通过在血液中水解。T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as NovelDelivefy Systems，Vol.14，A.C.S.专题论文集，和Edward B.Roche，编著，Bioreversible Carriers in Drug Design，AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press，1987，中提供了充分的讨论，这两篇文献在此引作参考。

一方面，本发明涉及从9-氧代-埃坡霉素C或D合成其中X是S的结构(II)，(III)或(IV)的化合物的方法。根据2001年11月8日公开的国际PCT申请公开No.WO 01/83800中所公开的，可以容易地获得9-氧代-埃坡霉素C或D，这篇专利文献在此引作参考。一般情况下，通过包含编码聚酮化合物合酶(PKS)基因的重组表达载体的孢囊杆菌(Cystobacterineae)亚目的重组宿主细胞产生9-氧代-埃坡霉素D。如WO 01/83800中公开的，埃坡霉素PKS的伸展组件(extendermodule)6的KR结构域的失活导致能产生9-氧代-埃坡霉素的PKS。其中伸展组件6的KR结构域灭活的菌株被指定为K39-164，并且于2000年11月21日，根据布达佩斯条约，保藏在美国典型培养物保藏中心，Manassas，Virginia 20110-2209，USA，保藏登记号是No.PTA-2716。菌株K39-164产生主要产物9-氧-埃坡霉素D和次要产物9-氧代-埃坡霉素C。另一方面，本发明涉及从9-氧代-埃坡霉素H₁或H₂，9-氧代-埃坡霉素C或D的_唑相应物(counterpart)，合成其中X是O的结构(II)的化合物的方法。还是根据WO 01/83800所述，通过对宿主细胞补充过量丝氨酸，以有利于_唑相应物产生的方式调节宿主细胞正常产生噻唑埃坡霉素化合物。用这种方式，能制备主要产生9-氧代-埃坡霉素C或D的细胞，以有利于9-氧代-埃坡霉素H₁或H₂，相应的_唑相应物的产生。

参照下面的反应图解1，通过酮基消除和还原可以获得本发明的化合物，例如通过用合适的基团，例如三乙基甲硅烷基，丁基二甲基甲硅烷基，2，2，2-三氯乙氧羰基等等，保护游离羟基；还原9-氧代基获得相应的9-羟基中间体化合物，活化9-羟基化合物，例如使用三氟乙酸酐，甲磺酰氯或三氟甲磺酸酐，在合适的碱的存在下，例如双(三甲基甲硅烷基)氨化钠或者胺碱，例如吡啶或4-(二甲基氨基吡啶)，在四氢呋喃(″THF″)或其他合适的溶剂中，获得相应的三氟乙酰基、甲磺酸酯或三氟甲磺酸酯中间体化合物；通过与合适的碱，例如双(三甲基甲硅烷基氨化)钠，二异丙基氨化锂，或4-(二甲基氨基吡啶)反应，消除活化基团，获得相应的保护的9，10-脱氢埃坡霉素；然后将被保护中间体去保护，获得期望的9，10-脱氢-埃坡霉素。下面实施例1-21中给出利用这种合成途径的代表性实施例。

合成途径1：酮还原和消除(X＝S或O)

参照下面的反应图解2，通过热解消除也可以获得本发明的化合物，例如通过使用碱，例如双(三甲基甲硅烷基)氨化钠，二硫化碳和碘甲烷，活化双(保护的)9-氧代-埃坡霉素形成黄原酸甲酯，或者使用二甲基硫代氨基甲酰氯形成硫代氨基甲酸酯，然后在足够的温度下，例如大约170℃下，将活化的中间体加热足够的时间，以消除活化基团并且获得相应的保护的9，10-脱氢埃坡霉素化合物，然后将保护的中间体去保护，获得期望的9，10-脱氢埃坡霉素。应用有机化学领域技术人员常规方法能确定合适的温度和时间。下面实施例1-4和22-25中给出利用这种合成途径的代表性实施例。

合成途径2：热解消除(X＝S或O)

参照下面的反应图解3，通过三氟甲磺酸乙烯酯(vinyl triflate)还原也可以获得本发明的化合物，例如通过使保护的9-氧-埃坡霉素与三氟甲磺酰化试剂，例如三氟甲磺酸酐，N-(2-吡啶基)三氟甲磺酰亚胺(triflimide)，或N-(5-氯-2-吡啶基)三氟甲磺酰亚胺，和碱，例如2，4-二叔丁基-4-甲基吡啶，或双(三甲基甲硅烷基)氨化钠反应，获得相应的9，10-脱氢-9-三氟甲磺酰氧中间体化合物。然后可以将9-三氟-甲磺酰氧基团还原，例如使用氢化物源，例如三烷基铵甲酸盐或三  烷基锡氢化物，在钯催化剂例如四(三苯基膦)钯(0)的存在下，形成得到的保护的9，10-脱氢-埃坡霉素，并且将该化合物去保护，获得期望的9，10-脱氢埃坡霉素10。或者，通过加入烷基可以进一步取代9，10-脱氢-9-三氟甲烷-磺酰氧基中间体化合物，使用，例如，三氟甲磺酸乙烯酯偶联技术，例如在如四(三苯基膦)钯(0)和氯化锂这样的催化剂的存在下三氟甲磺酰氧基烯醇(8)与烯丙基三丁基锡的反应，获得烯丙基-取代的保护的9，10-脱氢埃坡霉素化合物9a(R₁＝CH₂CHCH₂)；然后将保护的9-取代的中间体去保护，获得期望的9-取代的9，10-脱氢埃坡霉素10a。用相似方法，中间体在如四(三苯基膦)钯(0)这样的催化剂存在下与低级烷基锌试剂反应，得到其中R₁是低级烷基的式(9a)的化合物。下面的实施例1-4和26-30中给出利用这些合成途径的代表性实施例。

合成途径3：三氟甲磺酸乙烯酯还原(X＝S或O)

参照下面的反应图解4，利用开环中间体也可以从9-氧埃坡霉素制备本发明的化合物。在本发明的一个实施方案中，埃坡霉素的3，7-保护形式(2)在其中内酯羰基被选择性还原的条件下与还原剂，例如二(异丁基)氢化铝(DiBAl-H)反应。例如，通过在如咪唑或2，6-二甲基吡啶这样的碱的存在下，使用氯代三烷基甲硅烷或三烷基甲硅烷基三氟甲磺酸进行硅烷基化，来保护得到的开环中间体(11)上的醇基，得到中间体(12)。在本发明的另一个实施方案中，在其中内酯羰基和9-氧基两者都被还原以提供中间体的条件下，埃坡霉素的3，7-保护形式与还原剂反应，例如二(异丁基)氢化铝(DiBAl-H)。1-和15-OH基团选择性被保护，例如，通过与叔丁基二甲基甲硅烷基氯和咪唑反应，保护成它们的叔丁基二甲基甲硅烷基醚，得到中间体(13)。利用例如在二氯甲烷中的Dess-Martin高碘烷，可以将9-OH氧化回酮，得到中间体(12)。

利用任何上述方法，能将中间体(12)的酮基转化为反式-9，10-烯烃。在一个实施方案中，中间体(12)与三氟甲磺酸化试剂，例如三氟甲磺酸酐或N-(2-吡啶基)三氟甲磺酰亚胺，和碱，例如双(三甲基甲硅烷基)氨化钠或二异丙基氨化锂反应，形成三氟甲磺酸乙烯酯(14)。在催化剂例如四(三苯基膦)钯(0)的存在下，使用氢化物源，例如三烷基甲酸铵盐或三烷基锡氢化物，将三氟甲磺酸乙烯酯还原，得到中间体(15)。

在本发明的另一个实施方案中，中间体(13)与一种试剂反应，活化要消除的9-基团。例如，在合适的碱的存在下，例如吡啶或4-(二甲基氨基吡啶)的存在下，(13)与三氟乙酸酐，甲磺酸酐，或三氟甲磺酸酐反应，分别得到9-O-三氟乙酸酯，9-O-甲磺酸酯，或9-O-三氟甲磺酸酯。接着用位阻大的碱处理，例如用双(三甲基甲硅烷基)氨化钠或二异丙基氨化锂处理，产生反式-9，10-烯烃中间体(15)。

在另一个实施方案中，通过与碱，例如双(三甲基甲硅烷基)氨化钠，二硫化碳，碘甲烷反应，中间体(13)被转化为黄原酸甲酯。如上所述将中间体黄原酸酯热解，制备中间体(15)。

合成途径4(X＝S或O)：

图解4

中间体(15)能被转化为反式-9，10-脱氢埃坡霉素。使用，例如，樟脑磺酸，去除原来的甲硅烷基保护基团，并且将得到的1-醇氧化为羧酸，例如，使用两步法，其中首先使用氧化胺和催化四丙基铵过钌酸盐将醇氧化，然后通过与亚氯酸钠(NaClO₂)反应进一步氧化成酸。通过在0℃下用THF中的四丁基铵氟化物处理而将15-OH基团去保护，将大环闭合，例如，使用Yamaguchi(0℃下THF中的1，3，5-三氯苯甲酰氯和三乙胺，接着向75℃4-(二甲基氨基)吡啶的甲苯溶液中加入混合酸酐)条件，得到保护的中间体(13)。去保护得到反式-9，10-脱氢埃坡霉素。

参照合成图解5，使用通过皂化作用制备的开环埃坡霉素中间体能制备本发明的化合物。在一个实施方案中，例如通过用氢氧化物或酯酶处理，将保护的埃坡霉素(2)转化为保护的断-酸(seco-acid)。例如，使用叔丁基醇，碳化二亚胺，例如，二环己基碳化二亚胺，和4-(二甲基氨基)吡啶作为催化剂，将酸转化为叔丁酯。例如通过硅烷化作用保护15-OH，并且如上所述将9-酮基转化为三氟甲磺酸乙烯酯。如上所述将三氟甲磺酸乙烯酯还原，使用樟脑磺酸将中间体部分去保护，得到3，7-保护的-断-9，10-脱氢埃坡霉素。根据Yamaguchi的方法进行内酯化作用，接着进行去保护，得到反式-9，10-脱氢埃坡霉素。

合成途径5(X＝S或O)：

埃坡霉素的3，7-保护形式(2)能被转化为反式-9，10-脱氢埃坡霉素。合成途径包括埃坡霉素衍生物(2)的最初的皂化作用，得到开环埃坡霉素中间体，其被修饰使得包括9，10-反式烯烃基团，然后最后内酯化，得到反式-9，10-脱氢埃坡霉素。合成途径6中详细说明了代表性合成图解。

参照合成途径6，在甲醇水溶液中用氢氧化钠皂化3，7-保护的埃坡霉素(2)，得到相应的羟基酸(16)。

通过与三甲基甲硅烷基重氮甲烷反应，将羟基酸(16)转化为它的甲基酯(17)。通过用三甲基甲硅烷基氯/三甲基甲硅烷基咪唑处理来保护甲基酯(17)的羟基，得到三甲基甲硅烷基醚(18)。通过与N-(2-吡啶基)三氟甲磺酰亚胺和双(三甲基甲硅烷基)氨化钠反应生成三氟甲磺酸乙烯酯(19)，将三甲基甲硅烷基醚(18)的9-酮基转化为反式-9，10-烯烃。用乙酸钯(II)，三苯基膦，三丁基胺，和甲酸还原三氟甲磺酸乙烯酯(19)，得到反式-9，10-烯烃(20)。通过用氢氧化钠处理之后用乙酸处理，去除中间体(20)的三甲基甲硅烷基保护基团和甲基酯基团，得到羟基酸(21)，然后将其内酯化，得到3，7-保护的埃坡霉素(9)。去保护，得到反式-9，10-脱氢埃坡霉素。

合成途径6(X＝S或O)：

如上所述和如合成途径6所示制备的开环三甲基甲硅烷基醚(18)可以是反式-9，10-脱氢埃坡霉素的另一个途径的起始点。合成途径包括将中间体(18)的9-酮基还原，接着消除，得到反式-9，10-烯烃基团，然后最后内酯化，得到反式-9，10-脱氢埃坡霉素。合成途径7中详细说明代表性合成图解。

参照合成途径7，用氢硼化钠还原三甲基甲硅烷基醚(18)，得到9-羟基衍生物(22)。然后，通过在合适的碱，例如吡啶或4-(二甲基氨基吡啶)的存在下，用活化剂，例如三氟乙酸酐，甲磺酸酐，或者三氟甲磺酸酐处理，将羟基衍生物(22)活化用于消除，分别制备9-O-三氟乙酸酯，9-O-甲磺酸酯，或9-O-三氟甲磺酸酯，活化的中间体(23)。接着用位阻大的碱，例如，双(三甲基甲硅烷基)氨化钠或二异丙基氨化锂处理活化的中间体(23)，制备反式-9，10-烯烃中间体(24)。通过用氢氧化钠处理之后用乙酸处理，去除中间体(24)的三甲基甲硅烷基保护基团和甲基酯基团，得到羟基酸(21)。羟基酸(21)的内酯化作用提供3，7-保护的埃坡霉素(9)，将其去保护，得到反式-9，10-脱氢埃坡霉素。

合成途径7：

在本发明的其他实施方案中，根据合成途径8中的详细描述的总合成可以制备化合物。例如，在A.Rivkin等，J.Am.Chem.Soc.2003125：2899-2901中描述了其中P₁和P₂是羟基保护基的酮(25)。典型的羟基保护基包括甲硅烷基醚，例如三甲基甲硅烷基(TMS)，三乙基甲硅烷基(TES)，和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)；酯，例如乙酸酯，氯代乙酸酯，三氟乙酸酯，或苯甲酸酯；碳酸酯，例如碳酸甲酯，碳酸三氯乙酯(troc)，或碳酸烯丙酯(alloc)；和乙缩醛，例如甲氧基甲基(MOM)或苄基氧基甲基(BOM)。在特定实施方案中，P₁和P₂是甲硅烷基醚。(25)与合适的维蒂希内_盐的反应得到保护的化合物(26)。接着如下面实施例所述去保护，得到式(I)的化合物。

通过相应的磷_盐与强碱反应可以制备维蒂希内_盐，所述强碱例如是双(三甲基甲硅烷基)氨化钠(NaHMDS)，双(三甲基甲硅烷基)氨化钠(KHMDS)，二异丙基氨化锂(LDA)，丁基锂，氢化钠，或类似物。通过烷基卤化物与三芳基-或三烷基-膦的反应可以制备磷_盐，所述三芳基-或三烷基-膦例如是三苯基膦或三丁基膦。在本发明特定实施方案中，通过烷基氯化物与三丁基膦的反应制备磷_盐。或者，可以根据本领域公知的其他方法制备维蒂希内_盐，例如通过用强碱处理烷基二苯基膦氧化物。下面的实施例中提供适合在制备式(I)的化合物中使用的各种磷_盐的制备的例子。

利用本领域公知的方法可以进行去保护(去除P₁和/或P₂)，例如，根据Greene和Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第三版(Wiley，New York)，1999中所述。在具体实施方案中，当P₁和P₂是甲硅烷基醚，例如TMS，TES，或TBS时，通过使用酸，例如二氯甲烷中的HF·吡啶或三氟乙酸处理进行去保护。

合成途径8：

利用本领域技术人员公知的常规分析方法可以筛选本发明的化合物。例如，根据Skehan等，J.Natl.Cancer Inst.82：1107-1112(1990)中所公开的通过SRB分析可以测定化合物的细胞毒性，该篇文献在此引作参考。在SRB分析中，使下面的培养细胞受胰蛋白酶作用，计数并且稀释至下面的浓度，以每100微升生长培养基计：MCF-7，5000；NCI/ADR-Res，7500；NCI-H460，5000；A549，5000；Skov3，7500；和SF-268，7500。以100微升/孔在96-孔微量滴定板中接种细胞。24小时之后，向各孔中加入100微升本发明试验埃坡霉素化合物(在生长培养基中稀释的浓度范围是1000nM至0.001nM)。温育之后，加入化合物一段时间，在4℃下用100微升10％三氯乙酸(″TCA″)固定细胞1小时，并且用0.2％硫罗丹明B(sulforhodamine B)(SRB)/1％乙酸染色，然后用200微升的10mM Tris碱提取结合的SRB。通过OD 515nm测定结合的染料的量，相应于总的细胞蛋白质含量。利用标准统计学方法分析数据(例如Synergy Software of Reading，PA以KALEIDAGRAPH出售的那些软件)并且计算IC₅₀。

下面的表1和2给出式(I)的化合物致腐烂的细胞毒性结果。可以看到，本发明的化合物出人意料地表现出和反式-9，10-脱氢埃坡霉素D一样好或者超过它的细胞毒性活性。

利用本领域技术人员公知的常规分析方法也可以对本发明的化合物筛选微管蛋白聚合作用。例如，利用Giannakakou等，J.Biol.Chem.271：17118-17125(1997)和/或Intl.J.Cancer 75：57-63(1998)的方法可以对化合物筛选微管蛋白聚合作用，这两篇文献在此引作参考。在这种方法中，MCF-7细胞在35mm培养皿中生长至汇合，并且在35℃下用1nM本发明的化合物处理0，1或2小时。用没有钙或镁的2毫升磷酸盐缓冲盐水(PBS)将细胞洗涤两次之后，用300微升的溶解缓冲液(20mM Tris，PH6.8，1mM MgCl₂，2mM EDTA，1％TritonX-100，加蛋白酶抑制剂)在室温下溶解细胞5-10分钟。刮下细胞并且将溶解产物转移到1.5ml Eppendorf试管。然后在室温下将溶解产物以18000g离心12分钟。分离含有不溶的或聚合的(细胞骨架)微管蛋白的沉淀物和含有可溶的或未聚合的(胞质)微管蛋白的上清液，并且将上清液转移到新的试管中。将沉淀物重新悬浮于300微升的溶解缓冲液。通过用SDS-PAGE分析相同体积等份的各个样品，接着使用抗-微管蛋白抗体(Sigma)进行免疫印迹，测定细胞中微管蛋白聚合作用的变化。在其他方面，本发明涉及含有本发明的化合物和药学可接受载体的组合物。本发明的化合物可以是游离形式，或者适当时，作为药学可接受衍生物，例如本发明的化合物的药物前体，盐和酯。

本发明的组合物可以是任何合适形式，例如固体，半固体，液体或气溶胶形式。参见Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems，第五版，Lippicott Williams & Wilkins(1991)，该篇文献在此引作参考。一般情况下，药物含有一种或几种本发明的化合物作为活性成分，和适合外部，肠道，或肠胃外施用的有机或无机载体或赋形剂混合。活性成分可以是复方的，例如，与常规无毒药学可接受载体制成片剂，小药丸，胶囊，栓剂，阴道栓，溶液，乳液，混悬液，和适合使用的其他形式。在组合物中使用的药学可接受载体包括，例如，水，葡萄糖，乳糖，阿拉伯胶，明胶，甘露糖醇，淀粉糊，三硅酸镁，滑石，玉米淀粉，角蛋白，胶态二氧化硅，马铃薯淀粉，脲，和适合在制备固体，半固体，液体或气溶胶形式的制剂中使用的其他载体。组合物可以另外含有辅助稳定剂，增稠剂，和/或着色剂和香料。

在一个实施方案中，含有本发明的化合物的组合物是没有Cremophor^_的。Cremophor^_(BASF Aktiengesellschaft)是聚乙氧基化蓖麻油，其一般用作制备低溶解性药物中的表面活性剂。然而，因为Cremophor^_能掩盖对象的变应性反应，所以Cremophor^_最少化或除去的组合物是优选的。消除Cremophor^_的埃坡霉素A或B制剂例如描述于PCT公开WO 99/39694，这篇文献在此引作参考，并且可以修改使适合与本发明的化合物使用。例如，组合物可以含有本发明的化合物和药学可接受载体，例如醇类(例如，乙醇)，乙二醇(例如，丙二醇)，聚氧乙烯化合物，例如聚氧乙二醇(PEG)，Tween^_)(聚氧乙烯脱水山梨糖醇单酯；ICI America)，和Solutol^_(聚乙二醇660 12-羟基硬脂酸盐；BASF Aktiengesellschaft)，或者中等链甘油三酯(Miglyol^_，HulsAktiengesellschaft)。在本发明的一些实施方案中，提供含有式(I)的化合物和乙醇，丙二醇，和Tween-80的组合物。在本发明的其他一些实施方案中，提供含有式(I)的化合物和乙醇，丙二醇，和SolutolHS-15^_的组合物。或者，本发明的无Cremophor^_组合物可以含有至少一种环糊精，并且，在一个具体实施方案中，环糊精可以是羟烷基-β-环糊精或磺烷基-β-环糊精，并且，在另一个具体实施方案中，是羟丙基-β-环糊精或磺丁基-β-环糊精。其中载体包括羟丙基-β-环糊精的具体实施方案包括其中羟丙基-β-环糊精具有至少大约4.6％的取代度，更特别地，至少大约6.5％的取代度的那些。本发明组合物更特定的实施方案是其中载体包括具有大约4.6％和大约6.5％之间的取代度的羟丙基-β-环糊精的那些。

在本发明的一个实施方案中，组合物含有式(I)的化合物，醇，乙二醇，和环糊精。在一些实施方案中，组合物含有式(I)的化合物，乙醇，丙二醇，和环糊精。在一个实施方案中，组合物含有式(I)的化合物，和大约5％至大约20％乙醇，大约1％至大约10％丙二醇，和大约5％至大约20％的β-环糊精。在一具体实施方案中，组合物含有式(I)的化合物，和大约7％乙醇，大约3％丙二醇，和大约12％的β-环糊精。

应用时，本发明的化合物可以配制成微胶囊和/或纳米颗粒。一般方法描述于，例如，Microcapsules and Nanoparticles in Medicineand Pharmacy，Max Donbrow，编著，CRC Press(1992)，和美国专利Nos.5,510,118；5,534,270；和5,662,883，其全部在此引作参考。对于用别的方式不能口服送递的化合物，通过提高表面积与体积之比，这些制剂允许口服送递化合物。

利用先前对于低溶解性药物使用的其他方法也可以配制本发明的组合物。例如，根据WO 98/30205和WO 00/71163所述，本发明的化合物可以与维生素E或其PEG化衍生物配制成乳液，上述两篇专利文献在此引作参考。典型地，化合物溶解于含有乙醇(优选少于1％w/v)的水溶液中，然后加入维生素E或PEG化维生素E。然后去除乙醇，形成前-乳液，其能配制成用于静脉内或口服途径给药。或者，本发明的化合物可以在脂质体中制成胶囊。生成药物送递赋形剂的脂质体的方法是本领域公知的。合适的方法包括下面文献中描述的那些：美国专利Nos.5,683,715；5,415,869，和5,424,073，这些专利文献在此引作参考，涉及另一种相对低溶解性癌症药物紫杉醇，和PCT公开WO01/10412，该专利文献在此引作参考，涉及埃坡霉素B。各种脂质中，可以使用的用于制备埃坡霉素包囊脂质体的特别优选的脂质包括，例如，磷脂酰胆碱和聚乙二醇-衍生化的二硬脂酰基磷酯酰-乙醇胺。

在其他实施方案中，本发明的组合物可以含有聚合物，例如生物聚合物或生物相容(合成的或天然存在的)聚合物。生物相容聚合物可以分类为可生物降解的和不可生物降解的。可生物降解聚合物在体内降解，是化学组合物，制备方法，和/或植入物结构的函数。合成聚合物的详细说明的例子包括，例如，聚酐类，聚羟基酸类，例如聚乳酸，聚乙醇酸及其共聚物，聚酯类，聚酰胺类、聚原酯类和一些聚磷腈类。天然存在的聚合物的详细说明的例子包括蛋白质和多糖，例如胶原，透明质酸，白蛋白和明胶。

在其他实施方案中，本发明的化合物可以与增强水溶性的聚合物偶联。适合的这个目的的聚合物的代表性例子包括聚乙二醇，聚-(d-谷氨酸)，聚-(l-谷氨酸)，聚-(d-天冬氨酸)，聚-(l-天冬氨酸)，和它们的共聚物。

具有大约5,000至大约100,000之间的分子量的聚谷氨酸是优选的，具有大约20,000至80,000之间的分子量的聚谷氨酸是更优选的，具有大约30,000至60,000之间的分子量的聚谷氨酸是最优选的。利用基本上如美国专利No.5,977,163所述的方法，聚合物通过酯键与本发明的埃坡霉素的一个或多个羟基偶联，该篇专利文献在此引作参考。优选的偶联位点包括3-羟基和7-羟基。

在其他实施方案中，本发明的化合物可以与单克隆抗体偶联。这个方法使得化合物靶向特定靶物。偶联抗体的一般设计和使用方法描述于Monoclonal Antibody-Based Therapy of Cancer，Michael L.Grossbard，编著(1998)，这篇文献在此引作参考。

制备单一剂量形式的本发明的组合物中掺入的活性成分的量根据接受治疗的患者和特定的给药方式而不同。本发明的化合物的治疗剂量的大小随着要治疗的病症的性质和严重度以及特定化合物和给药途径而不同。一般来说，抗癌活性的日剂量范围对于哺乳动物是0.001至100mg/kg体重，优选0.01至80mg/kg，最优选0.1至70mg/kg，一次或多次给药。在非常规情况下，给药剂量必需高于100mg/kg。

其他方面，本发明包括超增殖疾病，例如癌症，的治疗方法，典型地，但是不是必需地，对哺乳动物治疗。在一个实施方案中，本发明的化合物被用来治疗头颈部癌症，包括头，颈，鼻腔，鼻窦，鼻咽，口腔，口咽，喉，咽下部，唾液腺和神经节细胞瘤。在另一个实施方案中，本发明的化合物被用来治疗肝胆癌症，特别是肝细胞癌。在另一个实施方案中，本发明的化合物被用来治疗肠癌，特别是结肠癌。在另一个实施方案中，本发明的化合物被用来治疗卵巢癌。在另一个实施方案中，本发明的化合物被用来治疗小细胞和非小细胞肺癌。在另一个实施方案中，本发明的化合物被用来治疗乳腺癌。在另一个实施方案中，本发明的化合物被用来治疗肉瘤，例如纤维肉瘤，恶性纤维组织细胞瘤，胚胎横纹肌肉瘤，平滑肌肉瘤，神经纤维肉瘤，骨肉瘤，滑膜肉瘤，脂肉瘤，和软组织腺泡状肉瘤。在另一个实施方案中，本发明的化合物用来治疗中枢神经系统肿瘤，特别是脑癌。在另一个实施方案中，本发明的化合物用来治疗淋巴瘤，包括何杰金氏淋巴瘤，淋巴浆细胞样淋巴瘤，滤泡淋巴瘤，与粘膜相关的淋巴样组织淋巴瘤，外套细胞淋巴瘤，B-直系大细胞淋巴瘤，Burkitt′s淋巴瘤，和T-细胞退行发育大细胞淋巴瘤。

在一些方面，本发明方法包括对需要这样治疗的对象施用治疗有效量的至少一种本发明的化合物或组合物。根据控制(即防止进一步生长)或消除癌症的需要可以反复对对象给药。临床上，该方法的实施导致癌生长的大小和数目的减小和/或相关症状的减轻(应用的情况下)。病理学上来说，该方法的实施将产生下面至少一种情况：抑制癌细胞增殖，减小癌或肿瘤的大小，防止进一步转移，和抑制肿瘤血管生成。

本发明的化合物和组合物能在联合治疗中，与一种或几种其他期望的治疗或医疗程序同时，在其之前，或者在其之后施用。联合治疗方案中疗法和操作的特定组合要考虑疗法和/或操作的相容性和要实现的期望的治疗效果。合适的联合的例子包括本发明的化合物和一种或几种阿扎胞苷，克拉屈滨，阿糖胞苷，氟尿苷，磷酸氟达拉滨，吉西他滨，喷司他丁，脲嘧啶介子，或者核苷类似物，例如5氟尿嘧啶(″5 FU″)或者其药物前体，例如5α-脱氧-5-氟-N-[(戊基氧)羰基]-胞啶(以商品名XELODA_出售(Roche，Basel Switzerland))，它是体内转化为5-氟尿嘧啶的5′-脱氧-5-氟尿苷(5′-DFUR)的口服给药的全身前体药物。

在一个实施方案中，本发明的化合物和组合物与另一种抗癌药物或操作联合使用。其他抗癌药物的详细例子包括但不限于：(i)烷基化药物，例如氮芥，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，美法仑，异环磷酰胺；(ii)抗代谢物，例如甲氨喋呤；(iii)微管稳定剂，例如长春碱，紫杉醇，多西紫杉，和discodermolide；(iv)血管生成抑制剂；和(v)细胞毒性抗生素，例如多柔比星(阿霉素)(adriamycin)，博莱霉素，和丝裂霉素。其他抗癌操作的详细例子包括：(i)手术；(ii)放射疗法；和(iii)光动力学疗法。

在其他实施方案中，本发明的化合物和/或组合物可以与减轻化合物或组合物潜在的副作用的药物或操作联合使用，所述副作用是例如腹泻，恶心和呕吐。腹泻可以用止泻剂治疗，例如阿片样物质(例如可卡因，苯乙哌啶，地芬诺辛，和loeramide)，次水杨酸铋，和善得定。使用止吐剂可以治疗恶心和呕吐，例如地塞米松，胃复安，盐酸苯海拉明，劳拉西泮，奥坦西隆，普鲁氯嗪，硫乙拉嗪和屈大麻酚。对于包括聚乙氧基化蓖麻油例如Cremophor^_的那些组合物，用皮质类固醇，例如地塞米松和甲基强的松龙和/或H1拮抗剂例如二苯基羟胺HCl和/或H₂拮抗剂处理，可以用来减轻过敏症。

在本发明的另一方面，本发明的化合物和/或组合物被用来治疗特征在于细胞超增殖的非癌病症。在一个实施方案中，本发明的化合物可以用来治疗牛皮癣，一种特征在于在皮肤上建立起来形成提高的鳞状损害的角质化细胞的细胞超增殖的病症。这种方法包括对牛皮癣患者施用治疗有效量的本发明的化合物或组合物。根据减少损伤的数量或严重度或者消除损伤的需要可以反复给药。临床上，该方法的实施会导致皮肤损伤的大小或数量，减小皮肤症状(受伤皮肤的疼痛，发烧和流血)和/或相关症状的减轻(例如，关节红，热，肿胀，腹泻，腹部疼痛)。病理学上，该方法的实施将导致下面的至少一项：角质化细胞的抑制，皮肤炎症的减轻(例如，通过影响：吸引和生长因子，抗原呈递，反应性氧类和基质金属蛋白酶的产生)，和皮肤血管生成的抑制。

其他实施方案中，本发明的化合物可以用来治疗多发性硬化，一种特征在于脑部进行性脱髓鞘作用的病症。虽然髓磷脂损失中涉及的精确机理还不清楚，但是星形胶质细胞增殖增加并且在髓磷脂损伤区域积累。在这些位点，有巨噬细胞-样活性和提高的蛋白酶活性，其至少部分负责髓磷脂鞘的劣化。这种方法包括对多发性硬化患者施用治疗有效量的本发明的化合物或组合物。根据抑制星形胶质细胞增殖和/或减小运动功能损失的严重度和/或防止或减轻疾病的慢性进程的需要可以反复给药。临床上，该方法的实施会导致视觉症状(视力减退，复视)、步态障碍(虚弱，中轴不稳定性，感觉损失，痉挛状态，反射亢进，灵巧性损失)、上肢机能障碍(虚弱，痉挛状态，知觉丧失)，膀胱机能障碍(尿失禁，不畅，不完全排放)、抑郁症、情绪不稳定和认知减弱的改善。病理学上，该方法的实施会导致下面一种或几种症状的减轻，例如髓磷脂损失，血脑屏障故障，单核细胞的血管周围渗透，免疫异常，胶质增生瘢痕形成和星形胶质细胞增殖，金属蛋白酶产生，和减小的传导速度。

在其他实施方案中，本发明的化合物和/或组合物被用来治疗类风湿性关节炎，有时导致受影响关节破坏和关节僵硬(ankyiosis)的多系统慢性复发性炎症疾病。类风湿性关节炎特征在于形成触伸到关节隙中的绒毛状突出的滑液膜显著增厚，滑膜细胞层多层化(滑膜细胞增殖)，白细胞(巨噬细胞，淋巴细胞，浆细胞，和淋巴样滤泡；称作″炎症滑膜炎″)渗透滑液膜，伴随滑膜内细胞坏死的纤维蛋白沉积。作为该过程的结果形成的组织称作血管翳，最后血管翳增长填充关节隙。通过血管生成过程，血管翳发展成新血管广泛网，这对于滑膜炎的进展是必需的。血管翳组织细胞释放消化酶(基质金属蛋白酶(例如，胶原酶，基质溶素))和炎症过程的其他调节剂(例如，过氧化氢，过氧化物，溶酶体酶，和花生四烯酸新陈代谢酶的产物)导致软骨组织的进行性破坏。血管翳侵入关节软骨，导致软骨组织糜烂和碎片。最后终于使软骨下骨糜烂，并且伴有纤维性关节僵硬，最后是相关关节骨关节僵硬。在本发明的这个方面，对类风湿性关节炎患者施用治疗有效量的本发明的化合物和/或组合物。根据实现抑制滑膜细胞增殖和/或减轻受影响关节运动损失的严重性和/或防止或减轻疾病的慢性发展的需要，可以反复这样的给药。临床上，本发明的实施将导致：(i)症状严重程度的减轻(受影响关节的疼痛，肿胀和触痛；早晨僵直，虚弱，疲劳，厌食，体重减轻)；(ii)疾病临床症状严重程度的减轻(关节囊增厚，滑液肥大，关节积液，软组织挛缩，运动范围减小，关节僵硬和固定关节畸形)；(iii)疾病关节外表现的减轻(风湿病小结，结节性脉管炎，肺小结，间质纤维化，心包炎，巩膜外层炎，虹膜炎，Felty′s综合征，骨质疏松症)；(iv)疾病减轻/无症状期频率和持续时间延长；(v)阻止固定损伤和劳动能力丧失；和/或(vi)防止/减弱疾病的慢性进程。病理学上，本发明的实施会产生至少下面的一种：(i)炎症反应的减轻；(ii)炎性细胞因子活性的破坏(例如IL-1，1NFa，FGF，VEGF)；(iii)滑液细胞增殖的抑制；(iv)基质金属蛋白酶活性的抑制，和/或(v)血管生成的抑制。

在其他实施方案中，本发明的化合物和/或组合物用来治疗动脉粥样硬化和/或再狭窄，特别是对于使用血管内支架可以治疗其阻断的患者。动脉粥样硬化是一种慢性血管损伤，其中动脉壁中的一些正常血管平滑肌细胞(″VSMC″)，其通常控制血管状况调节血流，改变它们的性质，并且发生″癌样″行为。这些VSMC变得异常增殖，分泌物质(生长因子，组织降解酶和其他蛋白质)，这些物质能使得它们侵入和扩散到内部血管内衬中，阻断血液流动，并且使得血管异常容易完全被局部血液凝块阻断。矫正手术之后的再狭窄、狭窄复发或动脉狭窄是动脉粥样硬化的加速形式。在本发明的这个方面，治疗有效量的本发明的化合物或组合物可以包被在支架上，并且将该支架送递给动脉粥样硬化患者的有病动脉。用化合物包被支架的方法描述于例如美国专利Nos.6,156,373和6,120,847，这两篇专利文献在这里引作参考。临床上，本发明的实施将导致下面的一项或几项：(i)增进动脉血流；(ii)疾病临床症状严重度的减轻；(iii)再狭窄比例的减小；或者(iv)防止/减轻动脉粥样硬化的慢性进程。病理学上，本发明的实施将在支架植入的位点产生下面的至少一种：(i)炎症反应的减轻，(ii)基质金属蛋白酶VSMC分泌的抑制；(iii)平滑肌细胞积聚的抑制；和(iv)VSMC表型去分化的抑制。

在一个实施方案中对癌症或者特征在于细胞超增殖的非癌症疾病患者施用的剂量水平是大约1mg/m²至大约200mg/m²，其可以作为一次性推注(以任何合适的给药途径)或者连续灌注(例如1小时，3小时，6小时，24小时，48小时或72小时)施用，根据需要，每周，每两周，或每三周给药。但是，应该明白，对于任何特定患者的具体剂量水平取决于各种各样的因素。这些因素包括使用的具体化合物的活性，对象的年龄，体重，一般状况，性别，和饮食；给药时间和途径，和药物排泄速度；治疗中是否使用药物联合，要治疗的病症的严重度。

在另一个实施方案中，剂量水平是大约10mg/m²至大约150mg/m²，优选大约10至大约75mg/m²，更优选大约15mg/m²至大约50mg/m²，根据需要和根据耐受，每三周给药一次。在另一个实施方案中，剂量水平是大约1mg/m²至大约150mg/m²，优选大约10至大约75mg/m²，更优选大约25mg/m²至大约50mg/m²，根据需要和根据耐受，每两周给药一次。在另一个实施方案中，剂量水平是大约1mg/m²至大约100mg/m²，优选大约5至大约50mg/m²，更优选大约10mg/m²至大约25mg/m²，根据需要和根据耐受，每周给药一次。在另一个实施方案中，剂量水平是大约0.1mg/m²至大约25mg/m²，优选大约0.5至大约15mg/m²，更优选大约1mg/m²至大约10mg/m²，根据需要和根据耐受，每天给药一次。

上面提供了本发明的详细描述，给出下面的实施例的目的是详细说明本发明，而不应该认为是对本发明或附加的权利要求书范围的限制。

实施例1

3，7-二醇的保护

3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基-9-氧代埃坡霉素D

(化合物(2)：R＝Me；P＝Et₃Si)

室温下，向9-氧代埃坡霉素D和2，6-二甲基吡啶的二氯甲烷溶液加入氯代三乙基甲硅烷并且搅拌，直到根据应用有机合成领域公知的方法测定反应基本上完全(例如，通过薄层色谱(″TLC″)或液相色谱″LC″)监测，典型地，反应过夜。然后用二氯甲烷将产物溶液稀释并且依次用水，饱和的碳酸氢钠水溶液(″饱和NaHCO₃水溶液″)和盐水洗涤，然后用硫酸镁(″MgSO₄″)干燥。通过使用合适的溶剂体系，例如，乙酸乙酯在己烷中的梯度，通过硅胶色谱法纯化期望的产物。

实施例2

3，7-双-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-9-氧代埃坡霉素D(化合物(2)；R＝Me；P＝^tBuMe₂Si)

与上文实施例1提供的详细情况类似，室温下，向9-氧代埃坡霉素D和2，6-二甲基吡啶的二氯甲烷溶液加入三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅烷基酯并且搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释并且依次用是，饱和NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。通过硅胶色谱法使用乙酸乙酯在己烷中的梯度纯化产物。

实施例3

3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-9-氧代埃坡霉素D(化合物(2)；R＝Me；.P＝CO₂CH₂CCl₃)

室温下，用氯甲酸2，2，2-三氯乙酯(134mg)将1.5mL吡啶中的9-氧代埃坡霉素D(80mg)的溶液处理16小时。混合物用乙酸乙酯稀释，依次用饱和的NH₄Cl和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，并蒸发。硅胶色谱法(40％乙酸乙酯/己烷)得到162mg产物。

实施例4

3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-8-表-9-氧代埃坡霉素D

向9-氧代-8-表-埃坡霉素D(0.100g，0.198mmol)的吡啶(2.0ml)溶液中加入氯甲酸2，2，2-三氯乙酯(0.27ml，0.420g，1.980mmol)后加入二甲基氨基吡啶(0.002g，0.020mmol)。得到的溶液在室温下搅拌14小时，然后分配在乙酸乙酯(20ml)和饱和的NaHCO₃水溶液(20ml)中。进一步用饱和的NH₄Cl水溶液(2×20ml)和盐水(20ml)洗涤，然后干燥(Na₂SO₄)，过滤，并减压浓缩。柱色谱法(硅胶，40％乙酸乙酯/己烷)得到无色油状物产物(0.125g，74％)。

实施例5

II.途径1：酮还原和消除

步骤1.酮还原

3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-羟基埃坡霉素D

(化合物(3)；R＝Me；P＝Et₃Si；X＝S)

0℃下向3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-氧代埃坡霉素D的甲醇溶液加入1当量的硼氢化钠。溶液在0℃下搅拌40分钟，然后加入饱和的NH₄Cl水溶液。有机物用乙酸乙酯萃取之后合并，然后干燥(Na₂SO₄)，过滤，并减压浓缩。柱色谱法(二氧化硅，EtOAc-己烷)得到产物。

实施例6

3，7-双-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-9-羟基埃坡霉素D

(化合物(3)；R＝Me；P＝^tBuMe₂Si；X＝S)

0℃下向3，7-双-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-9-氧代埃坡霉素D的甲醇溶液加入1当量的硼氢化钠。溶液在0℃下搅拌40分钟，然后加入饱和的NH₄Cl水溶液。有机物用乙酸乙酯萃取并合并，然后干燥(Na₂SO₄)，过滤，并减压浓缩。柱色谱法(二氧化硅，EtOAc-己烷)得到产物。

实施例7

3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-9-羟基埃坡霉素D

(化合物(3)；R＝Me；P＝CO₂CH₂CCl₃；X＝S)

0℃下向3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-9-氧代埃坡霉素D的甲醇溶液加入1当量的硼氢化钠。溶液在0℃下搅拌40分钟，然后加入饱和的NH₄Cl水溶液。有机物用乙酸乙酯萃取并合并，然后干燥(Na₂SO₄)，过滤，并减压浓缩。柱色谱法(二氧化硅，EtOAc-己烷)得到3，7-双-0-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-9-羟基埃坡霉素D。

实施例8

3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-8-表-9-羟基埃坡霉素D

0℃下向3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-8-表-9-氧埃坡霉素D(0.125g，0.131mmol)的甲醇(2.0ml)溶液加入硼氢化钠(0.005g，0.131mmol)。溶液在0℃下搅拌40分钟，然后加入饱和的NH₄Cl水溶液(15ml)。有机物用乙酸乙酯(3×15ml)萃取并合并，然后干燥(Na₂SO₄)，过滤，并减压浓缩。柱色谱法(二氧化硅，20％EtOAc-己烷)得到3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-8-表-9-羟基埃坡霉素D，为无色油状物。

实施例9

步骤2.活化

3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-(甲磺酰氧基)埃坡霉素D

(化合物(4)：R＝Me；P＝Et₃Si；X＝S；Y＝MeSO₂O)

向3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-羟基-埃坡霉素D和4-(二甲基氨基)吡啶的二氯甲烷溶液加入甲磺酰氯。搅拌12小时之后，混合物用二氯甲烷稀释并且依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并蒸发至干。通过硅胶色谱法，使用乙酸乙酯在己烷中的梯度纯化产物。

实施例10

3，7-双-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-9-(甲磺酰氧基)埃坡霉素D

(化合物(4)：R＝Me；P＝^tBuMe₂Si；X＝S；Y＝MeSO₂O)

向3，7-双-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-9-羟基-埃坡霉素D和4-(二甲基氨基)吡啶的二氯甲烷溶液加入甲磺酰氯。搅拌12小时之后，混合物用二氯甲烷稀释并且依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并蒸发至干。通过硅胶色谱法，使用乙酸乙酯在己烷中的梯度纯化产物。

实施例11

3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-9-(甲磺酰氧基)埃坡霉素D

(化合物(4)：R＝Me；P＝CO₂CH₂CCl₃；X＝S；Y＝MeSO₂O)

向3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-9-羟基埃坡霉素D和4-(二甲基氨基)吡啶的二氯甲烷溶液加入甲磺酰氯。搅拌12小时之后，混合物用二氯甲烷稀释并且依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并蒸发至干。通过硅胶色谱法，使用乙酸乙酯在己烷中的梯度纯化产物。

实施例12

3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-(三氟甲磺酰氧基)埃坡霉素D

(化合物(4)；R＝Me；P＝Et₃Si；X＝S；Y＝CF₃SO₂O)

-78℃下，向3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-羟基埃坡霉素D的THF溶液滴加1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的THF溶液。30分钟后，滴加三氟甲磺酸酐，并且让混合物温热至室温。混合物用乙醚稀释并且依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。产物不用进一步纯化即可使用。

实施例13

3，7-双-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-9-(三氟甲磺酰氧基)埃坡霉素D

(化合物(4)；R＝Me；P＝^tBuMe₂Si；X＝S；Y＝CF₃SO₂O)

-78℃下，向3，7-双-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-9-羟基埃坡霉素D的THF溶液滴加1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的THF溶液。30分钟后，滴加三氟甲磺酸酐，并且让混合物温热至室温。混合物用乙醚稀释并且依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。产物不用进一步纯化即可使用。

实施例14

3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-9-(三氟甲磺酰氧基)埃坡霉素D

(化合物(4)；R＝Me；P＝CO₂CH₂CCl₃；X＝S；Y＝CF₃SO₂O)

-78℃下，向3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-9-羟基埃坡霉素D的THF溶液滴加1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的THF溶液。30分钟后，滴加三氟甲磺酸酐，并且让混合物温热至室温。混合物用乙醚稀释并且依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。产物不用进一步纯化即可使用。

实施例15

步骤3.消除

经过甲磺酰消除的3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9，10-脱氢埃坡霉素D

(化合物(5)；R＝Me；P＝Et₃Si；X＝S)

将3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-(甲磺酰氧基)埃坡霉素D的THF溶液冷却至-78℃，并且用1当量的1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的THF溶液处理。让混合物温热至室温，然后倾入饱和的NH₄Cl水溶液中，并用乙酸乙酯萃取。萃取物依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。通过硅胶色谱法使用乙酸乙酯在己烷中的梯度纯化产物。

实施例16

3，7-双-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-9，10-脱氢埃坡霉素D

(化合物(5)；R＝Me；P＝^tBuMe₂Si；X ＝S)

将3，7-双-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-9-(甲磺酰氧基)埃坡霉素D的THF溶液冷却至-78℃，并且用1当量的1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的THF溶液处理。让混合物温热至室温，然后倾入饱和的NH₄Cl水溶液中，并用乙酸乙酯萃取。萃取物依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。通过硅胶色谱法使用乙酸乙酯在己烷中的梯度纯化产物。

实施例17

3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-9，10-脱氢埃坡霉素D

(化合物(5)；R＝Me；P＝CO₂CH₂CCl₃；X＝S)

将3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-9-(甲磺酰氧基)埃坡霉素D的THF溶液冷却至-78℃，并且用1当量的1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的THF溶液处理。让混合物温热至室温，然后倾入饱和的NH₄Cl水溶液中，并用乙酸乙酯萃取。萃取物依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。通过硅胶色谱法使用乙酸乙酯在己烷中的梯度纯化产物。

实施例18

经过三氟甲磺酸酯消除的3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9，10-脱氢埃坡霉素D

(化合物(5)；R＝Me；P＝Et₃Si；X＝S)

0℃下，将3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-(三氟甲磺酰氧基)埃坡霉素D的THF溶液用2，6-二叔丁基-4-甲基吡啶处理。让混合物温热至室温，然后倾入饱和的NH₄Cl水溶液中，并用乙酸乙酯萃取。萃取物依次用水，冷的1N HCl，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。通过硅胶色谱法使用乙酸乙酯在己烷中的梯度纯化产物。

实施例19

步骤4.去保护

9，10-脱氢埃坡霉素D(通过P＝Et₃Si)

(化合物(6)；R＝ Me；X＝S)

乙腈和水中的3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9，10-脱氢埃坡霉素D的溶液在冰上冷却，并且用48％氢氟酸处理。通过薄层色谱法监测反应。反应完全后，通过加入饱和NaHCO₃水溶液中和反应，并且浓缩成含水的浆状物。用乙酸乙酯萃取该浆状物，萃取物依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。将残余物进行硅胶色谱法(乙酸乙酯-己烷)，分离产物。

实施例20

9，10-脱氢埃坡霉素D(通过P＝^tBuMe₂Si)

(化合物(6)；R＝Me；X＝S)

乙腈和水中的3，7-双-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-9，10-脱氢埃坡霉素D的溶液在冰上冷却，并且用48％氢氟酸处理。通过薄层色谱法监测反应。反应完全后，通过加入饱和NaHCO₃水溶液中和反应，并且浓缩成含水的浆状物。用乙酸乙酯萃取该浆状物，萃取物依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。将残余物进行硅胶色谱法(乙酸乙酯-己烷)，分离产物。

实施例21

9，10-脱氢埃坡霉素D(通过P＝CO₂CH₂CCl₃)

(化合物(6)；R＝Me；X＝S)

室温下，向乙酸和四氢呋喃的混合物中的3，7-双-O-(2，2，2-三氯乙氧羰基)-9，10-脱氢埃坡霉素D的溶液中加入锌粉。将溶液在室温下搅拌1小时，然后加入其他的锌并且在室温下搅拌过夜。溶液分配在乙酸乙酯和水中，并且用乙酸乙酯萃取水相。合并的有机相用盐水洗涤并且干燥(Na₂SO₄)，然后减压浓缩。在硅胶上使用乙酸乙酯在己烷中的梯度进行柱色谱，得到9，10-脱氢埃坡霉素D。

实施例22

III.途径2：热解消除

步骤1.活化

3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-((甲硫基)硫代羰氧基)埃坡霉素D

(化合物(7)；R＝Me；P＝Et₃Si；X＝S；Y＝S-Me)

将3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-羟基埃坡霉素D的THF溶液冷却到-78℃，并且用1当量的1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的THF溶液处理。30分钟之后，加入二硫化碳，并且使混合物温热至室温。1小时之后，加入碘甲烷并且让反应进行12小时，倒入饱和的NH₄Cl水溶液，并用乙酸乙酯萃取。萃取物依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。通过硅胶色谱法使用乙酸乙酯在己烷中的梯度纯化产物。

实施例23

3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-((二甲基氨基)硫代羰氧基)埃坡霉素D

(化合物(7)；R＝Me；P＝Et₃Si；X＝S；Y＝NMe₂)

让3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-羟基埃坡霉素D，二甲基硫代氨基甲酰氯，和吡啶的混合物反应12小时。将混合物倒入水中，并用乙酸乙酯萃取。萃取物依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。通过硅胶色谱法使用乙酸乙酯在己烷中的梯度纯化产物。

实施例24

步骤2.高温分解

通过黄原酸酯的3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9，10-脱氢埃坡霉素D

(化合物(5)：R＝Me；P＝Et₃Si；X＝S)

将3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-((甲硫基)硫代羰氧基)埃坡霉素D置于高真空下(大约0.1托)，并且在170℃下加热，根据薄层色谱法分析监测起始物的消失。将反应冷却到室温，对残余物进行硅胶色谱法(乙酸乙酯-己烷)，分离产物。

实施例25

经过硫代氨基甲酸酯的3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9，10-脱氢埃坡霉素D

(化合物(5)：R＝Me；P＝Et₃Si；X＝S)

将3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-((二甲基氨基)硫代羰氧基)埃坡霉素D置于高真空下(大约0.1托)，并且在170℃下加热，根据薄层色谱法分析监测起始物的消失。将反应冷却到室温，对残余物进行硅胶色谱法(乙酸乙酯-己烷)，分离产物。

实施例26

IV.三氟甲磺酸乙烯酯还原

3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9，10-脱氢-9-(三氟甲磺酰氧基)埃坡霉素D

(化合物(8)；R＝Me；P＝Et₃Si；X＝S)

0℃下，向二氯甲烷中3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-氧代埃坡霉素D和2，6-二叔丁基-4-甲基吡啶的溶液滴加三氟甲磺酸酐。完全加入之后，使混合物缓慢温热至室温并且搅拌过夜。通过薄层色谱法监测反应，加入另外的三氟甲磺酸酐，直到起始物被消耗。蒸发混合物，残余物与乙醚合并。过滤去除沉淀出的盐，醚溶液依次用水，冰冷1NHCl，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。

实施例27

3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9，10-脱氢-9-(三氟甲磺酰氧基)埃坡霉素D

(化合物(8)；R＝Me；P＝Et₃Si；X＝S)

-78℃下，向1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的THF溶液滴加3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9-氧代埃坡霉素D的THF溶液，完全加入之后，混合物在-78℃下保持30分钟，并且滴加N-(5-氯-2-吡啶基)三氟磺酰亚胺(Organic Syntheses74：77-83(1996))。将混合物保持2小时之后缓慢温热至室温。蒸发混合物，残余物与乙醚合并。醚溶液依次用水，冰冷5％NaOH，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。

实施例28

3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9，10-脱氢埃坡霉素D

(化合物(5)；R＝Me；P＝Et₃Si；X＝S)

将二甲基甲酰胺中3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9，10-脱氢-9-(三氟甲磺酰氧基)埃坡霉素D，三丁基胺，乙酸钯，和三苯基膦的混合物置于惰性气氛之下，并且喷雾脱气。通过注射器加入甲酸，并且将混合物在60℃下加热1小时。将混合物冷却至室温，用乙醚稀释，并且依次用水，冰冷1 N HCl，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。将残余物进行硅胶色谱法(乙酸乙酯-己烷)，分离产物。

实施例29

V.与三氟甲磺酸乙烯酯偶联

3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9，10-脱氢-9-烯丙基埃坡霉素D

(化合物(9)；R＝Me；R¹＝CH₂CH＝CH₂；P＝Et₃Si；X＝S)

在惰性气氛下将四(三苯基膦)钯(0)，和氯化锂在干燥THF中的混合物搅拌15分钟，然后加入3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9，10-脱氢-9-(三氟甲磺酰氧基)埃坡霉素D和烯丙基-三丁基锡的THF溶液。在温和回流下将混合物加热48小时。将混合物冷却至室温，用乙醚稀释，并且依次用水，冰冷1N HCl，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。将残余物进行硅胶色谱法(乙酸乙酯-己烷)，分离产物。

实施例30

9，10-脱氢-9-烯丙基埃坡霉素D

(化合物(10)；R＝Me；R₁＝CH₂CH＝CH₂；X＝S)

乙腈和水中的3，7-双-O-(三乙基甲硅烷基)-9，10-脱氢-9-烯丙基埃坡霉素D的溶液在冰上冷却，并且用48％氢氟酸处理。通过薄层色谱法监测反应。反应完全后，通过加入饱和NaHCO₃水溶液中和反应，并且浓缩成含水的浆状物。用乙酸乙酯萃取该浆状物，萃取物依次用水，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。将残余物进行硅胶色谱法(乙酸乙酯-己烷)，分离产物。

实施例31

经过开环中间体的9，10-脱氢埃坡霉素D

(化合物(10)；R＝Me；R¹＝H；X＝S)

步骤1.开环.向冷却到-78℃的3，7-双-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-9-氧代埃坡霉素D的四氢呋喃溶液加入二异丁基氢化铝溶液。通过TLC或LC监测反应，并且通过加入磷酸盐缓冲液并且使温热至室温来终止起始物的消耗。混合物用乙酸乙酯萃取，将萃取物干燥，过滤，并蒸发。通过在硅胶上进行色谱法来纯化产物。

步骤2.保护.搅拌步骤1的产物，叔丁基二甲基甲硅烷基氯，和咪唑在二甲基甲酰胺中的混合物，直到根据TLC分析判断反应完全。将混合物倒入水中并且用乙醚萃取。将萃取物干燥，过滤，并蒸发，通过在硅胶上的色谱法纯化产物。

步骤3.三氟甲磺酸乙烯基酯生成.向冷却到-78℃的双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的溶液滴加步骤2的产物的THF溶液。烯醇式阴离子形成足够时间之后，加入N-(2-吡啶基)三氟甲磺酰亚胺的THF溶液，并且让混合物缓慢温热至室温。将混合物倒入水中并且用乙醚萃取。将萃取物干燥，过滤，并蒸发，产物不用进一步纯化即可使用。

步骤4.三氟甲磺酸酯还原.将步骤3的产物、三丁基胺、乙酸钯和三苯基膦在二甲基甲酰胺中的混合物置于惰性气氛之下，并且喷雾脱气。通过注射器加入甲酸，并且将混合物在60℃下加热1小时。将混合物冷却至室温，用乙醚稀释，并且依次用水，冰冷1N HCl，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发至干。将残余物进行硅胶色谱法(乙酸乙酯-己烷)，分离产物。

步骤5.1-O-TBS基团的去除.0℃下将步骤4的产物和樟脑磺酸在甲醇和二氯甲烷中的溶液搅拌并且通过TLC监测。起始物一旦消失，将反应倒入饱和的NaHCO₃水溶液并且用乙酸乙酯萃取。将萃取物干燥，过滤，并蒸发。将残余物进行硅胶色谱法(乙酸乙酯-己烷)，分离产物。

步骤6.氧化.四丙基铵过钌酸盐小心加给二氯甲烷中步骤5的产物和N-甲基吗啉氧化物的混合物，搅拌混合物并且通过TLC监测。起始物一旦消失，将反应倒入饱和的NaHCO₃水溶液并且用乙酸乙酯萃取。将萃取物干燥，过滤，并蒸发。残余物溶解于叔丁醇和磷酸盐缓冲液的混合物，并且用2-甲基-2-丁烯和次氯酸钠处理。用TLC跟踪反应。起始物一旦消失，将反应倒入乙酸乙酯，通过加入1N HCl调节至pH 4，并且依次用水和盐水洗涤。将有机相干燥，过滤，并蒸发。将残余物进行硅胶色谱法(乙酸乙酯-己烷)，分离产物。

步骤7.15-O-TBS基团的去除.0℃下将四丁基铵氟化物溶液加给步骤6的产物的THF溶液。反应完全后，混合物回到室温，用乙酸乙酯稀释，用水洗涤。将有机相干燥，过滤，并蒸发。将残余物进行硅胶色谱法(乙酸乙酯-己烷)，分离产物。

步骤8.大内酯化作用.室温下，将三乙胺和2，4，6-三氯苯甲酰氯加给步骤7的产物的THF溶液。20分钟后用甲苯稀释混合物并且经几小时滴加给温热甲苯中4-(二甲基氨基)-吡啶的溶液。完成之后，浓缩混合物，通过硅胶色谱法纯化产物。

步骤9.去保护.0℃下，步骤8的产物溶解于1∶1三氟乙酸和二氯甲烷。通过TLC监测反应，完成时真空下浓缩。残余物溶解于乙酸乙酯并且用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，然后干燥，过滤，并蒸发。通过硅胶色谱法纯化产物。

实施例32

经过开环中间体的9，10-脱氢埃坡霉素D，另一种途径

(化合物(10)；R＝Me；R¹＝H；X＝S)

步骤1.开环.室温下，用1N NaOH处理3，7-双-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-9-氧代-埃坡霉素D的甲醇溶液。通过TLC或LC监测反应，并且通过加入pH4的磷酸盐缓冲液终止起始物的消耗。通过真空旋转蒸发去除甲醇，并且用乙酸乙酯萃取含水残余物，将萃取物干燥，过滤，并蒸发。通过在硅胶上进行色谱法来纯化产物。

步骤2.酯化.(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷加给步骤1的产物的乙醚溶液，直到持续黄色。浓缩溶液，通过在硅胶上进行色谱法来纯化产物。

步骤3.15-OH的保护.室温下，氨代三甲基甲硅烷加给步骤2的产物和三甲基甲硅烷基咪唑的二氯甲烷溶液。1小时之后，将混合物倒给饱和的NaHCO₃水溶液并且用二氯甲烷萃取。将萃取物干燥，过滤，并蒸发。通过在硅胶上进行色谱法来纯化产物。

步骤4.三氟甲磺酸乙烯基酯生成.向冷却到-78℃的双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的THF溶液滴加步骤3的产物的无水THF溶液。烯醇式阴离子形成足够时间之后，加入N-(2-吡啶基)三氟甲磺酰亚胺的THF溶液，并且让混合物缓慢温热至室温。将混合物倒入水中并且用乙醚萃取。将萃取物干燥，过滤，并蒸发，通过在硅胶上进行色谱法来纯化产物。

步骤5.三氟甲磺酸酯还原.将步骤4的产物、三丁基胺、乙酸钯和三苯基膦在二甲基甲酰胺中的混合物置于惰性气氛之下，并且喷雾脱气。通过注射器加入甲酸，并且将混合物在60℃下加热1小时。将混合物冷却至室温，用乙醚稀释，并且依次用水，冰冷1N HCl，饱和的NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥乙醚相，过滤，并且蒸发。通过在硅胶上进行色谱法来纯化产物。

步骤6.15-OTMS基团的去除.步骤5的产物溶解干乙腈、水和乙酸的混合物。通过TLC或LC监测反应。起始物一旦消失，真空下将混合物蒸发至干。

步骤7.甲基酯的去除.步骤6的产物溶解干甲醇.并且室温下.用1N NaOH处理。通过TLC或LC监测反应，并且通过加入pH4的磷酸盐缓冲液终止起始物消耗。通过真空旋转蒸发去除甲醇，并且用乙酸乙酯萃取含水残余物，将萃取物干燥，过滤，并蒸发。通过在硅胶上进行色谱法来纯化产物。

步骤8.大内酯化作用.室温下，将三乙胺和2，4，6-三氯苯甲酰氯加给步骤7的产物的THF溶液。20分钟后用甲苯稀释混合物并且经几小时滴加给温热甲苯中4-(二甲基氨基)-吡啶的溶液。加入完成之后，浓缩混合物，通过硅胶色谱法纯化产物。

步骤9.去保护.0℃下，步骤8的产物溶解于1∶1三氟乙酸和二氯甲烷。通过TLC监测反应，起始物消耗完，真空下蒸发至干。残余物溶解于乙酸乙酯并且用饱和NaHCO₃水溶液洗涤后盐水洗涤。将乙酸乙酯相干燥，过滤，并蒸发。通过硅胶色谱法纯化产物。

实施例33

经过开环中间体的9，10-脱氢埃坡霉素H₂

(化合物(10)；R＝Me；R¹＝H；X＝O)

步骤1.保护.室温下，用三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅烷基酯处理9-氧代埃坡霉素H₂和2，6-二甲基吡啶的二氯甲烷溶液。搅拌过夜之后，混合物用二氯甲烷稀释并且依次用水，饱和NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤。将溶液干燥，过滤，并蒸发。通过硅胶色谱法纯化产物。

步骤2.开环.室温下，用1N NaOH处理3，7-双-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-9-氧代-埃坡霉素H₂的甲醇溶液。通过TLC或LC监测反应，并且通过加入pH4的磷酸盐缓冲液终止起始物的消耗。通过真空旋转蒸发去除甲醇，并且用乙酸乙酯萃取含水残余物，将萃取物干燥，过滤，并蒸发。通过在硅胶上进行色谱法来纯化产物。

步骤3.酯化.(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷加给步骤2的产物的乙醚溶液，直到持续黄色出现。浓缩溶液，通过在硅胶上进行色谱法来纯化产物。

步骤4.15-OH的保护.室温下，氯代三甲基甲硅烷加给步骤3的产物和三甲基甲硅烷基咪唑的二氯甲烷溶液。1小时之后，将混合物倾入饱和的NaHCO₃水溶液并且用二氯甲烷萃取。将萃取物干燥，过滤，并蒸发。通过在硅胶上进行色谱法来纯化产物。

步骤5.三氟甲磺酸乙烯基酯生成.向冷却到-78℃的双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的THF溶液滴加步骤4的产物的无水THF溶液。烯醇式阴离子形成足够时间之后，加入N-(2-吡啶基)三氟磺酰亚胺的THF溶液，并且让混合物缓慢温热至室温。将混合物倾入水中并且用乙醚萃取。将萃取物干燥，过滤，并蒸发，通过在硅胶上进行色谱法来纯化产物。

步骤6.三氟甲磺酸酯还原.将步骤5的产物、三丁基胺、乙酸钯、和三苯基膦在二甲基甲酰胺中的混合物置于惰性气氛之下，并且喷雾脱气。通过注射器加入甲酸，并且将混合物在60℃下加热1小时。将混合物冷却至室温，用乙醚稀释，并且依次用水、冰冷1N HCl、饱和的NaHCO₃水溶液和盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥乙醚相，过滤，并且蒸发。通过在硅胶上进行色谱法来纯化产物。

步骤7.15-OTMS基团的去除.步骤6的产物溶解于乙腈、水和乙酸的混合物。通过TLC或LC监测反应。起始物一旦消失，真空下将混合物蒸发至干。

步骤8.甲基酯的去除.步骤7的产物溶解于甲醇，并且室温下，用1N NaOH处理。通过TLC或LC监测反应，并且通过加入pH4的磷酸盐缓冲液终止起始物的消耗。通过真空旋转蒸发去除甲醇，并且用乙酸乙酯萃取含水残余物，将萃取物干燥，过滤，并蒸发。通过在硅胶上进行色谱法来纯化产物。

步骤9.大内酯化作用.室温下，将三乙胺和2，4，6-三氯苯甲酰氯加给步骤8的产物的THF溶液。20分钟后用甲苯稀释混合物并且经几小时滴加给温热甲苯中4-(二甲基氨基)-吡啶的溶液。加入完成之后，浓缩混合物，通过硅胶色谱法纯化产物。

步骤10.去保护.0℃下，步骤9的产物溶解于1∶1三氟乙酸和二氯甲烷。通过TLC或LC监测反应，起始物消耗完，真空下蒸发至干。残余物溶解于乙酸乙酯并且用饱和NaHCO₃水溶液洗涤后盐水洗涤。将乙酸乙酯相干燥，过滤，并蒸发。通过硅胶色谱法纯化产物。

实施例34

(化合物(24)；R＝Me；X＝S)

步骤1.还原.将实施例32步骤3的产物的甲醇溶液冷却至0℃，并且用1当量的硼氢化钠处理。将溶液在0℃下搅拌40分钟，然后加入饱和的NH₄Cl水溶液。有机相用乙酸乙酯萃取，并且将萃取物干燥，过滤，并浓缩至干。通过硅胶色谱法纯化产物。

步骤2.黄原酸酯形成  将步骤1的产物的THF溶液冷却至-78℃，并且用1当量的1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的THF溶液处理。30分钟之后，加入二硫化碳，并且将混合物温热至室温。1小时之后，加入碘甲烷，并且让反应进行12小时，倾入饱和的NH₄Cl水溶液，并且用乙酸乙酯萃取。萃取物依次用水、饱和NaHCO₃水溶液和盐水洗涤，然后干燥，过滤，并蒸发。通过硅胶色谱法纯化产物。

步骤3.热解消除.来自步骤2的产物置干高真空下(大约0.1托)并且在150-200℃下加热，直到根据TLC分析起始物已经消耗。将反应冷却至室温，将残余物进行硅胶色谱法分离产物。

实施例35

(化合物(24)；R＝Me；X＝O)

步骤1.还原.将实施例33步骤4的产物的甲醇溶液冷却至0℃，并且用1当量的硼氢化钠处理。将溶液在0℃下搅拌40分钟，然后加入饱和的NH₄Cl水溶液。有机相用乙酸乙酯萃取，并且将萃取物干燥，过滤，并浓缩至干。通过硅胶色谱法纯化产物。

步骤2.黄原酸酯形成  将步骤1的产物的THF溶液冷却至-78℃，并且用1当量的1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的THF溶液处理。30分钟之后，加入二硫化碳，并且将混合物温热至室温。1小时之后，加入碘甲烷，并且让反应进行12小时，倾入饱和的NH₄Cl水溶液，并且用乙酸乙酯萃取。萃取物依次用水，饱和NaHCO₃水溶液，和盐水洗涤，然后干燥，过滤，并蒸发。通过硅胶色谱法纯化产物。

步骤3.热解消除.来自步骤2的产物置于高真空下(大约0.1托)并且在150-200℃下加热，直到根据TLC分析起始物已经消耗。将反应冷却至室温，将残余物进行硅胶色谱法分离产物。

实施例36

2-(新戊酰氧基甲基)-4-(氯甲基)噻唑

30mmol的1，3-二氯丙酮，和30mmol的2-(新戊酰氧基)-硫代乙酰胺的混合物溶解于21ml的无水乙醇，并且氮气下回流过夜。真空浓缩得到的混合物，并且残余物溶解于100ml水。得到的水溶液中和至pH＝8，然后用乙醚萃取(200ml×3)。合并的有机层依次用饱和的NaHCO₃、水和盐水洗涤。有机相用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发，得到棕色浆液。在硅胶上进行色谱法(梯度是2％至10％丙酮的己烷溶液)得到200mg的2-(新戊酰氧基甲基)-4-氯甲基噻唑，和800毫克的2-(羟甲基)-4-(氯甲基)噻唑。

实施例37

2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧甲基)-4-(氯甲基)噻唑

800mg的(2-羟甲基)-(4-氯甲基)噻唑(4.89mmol)和1.33g的咪唑(18.56mmol)的混合物溶解于10ml的DMF。得到的溶液冷却至0℃，然后分批加入1.47g叔丁基二甲基甲硅烷基氯(9.78mmol)。使得到的溶液温热至室温，反应又继续4小时之后通过加入30ml饱和NaHCO₃水溶液终止反应。得到的混合物用50ml×2乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取物依次用水20ml×3，和盐水洗涤。有机相用MgSO₄干燥，过滤，并且蒸发，得到棕色浆液。在硅胶上进行色谱法(梯度是1％至10％丙酮的己烷溶液)得到800mg的2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧甲基)-4-(氯甲基)-噻唑。

实施例38

[(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧甲基)-4-噻唑)甲基]三丁基_氯化物

氮气下，向3ml苯中的557.0mg的2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧甲基)-4-(氯甲基)-噻唑(2.0mmol)溶液滴加三正丁基膦。得到的溶液在氮气下回流过夜。然后真空浓缩溶液，通过加入1∶1(v/v)乙醚和己烷的混合物结晶残余物。然后过滤固体，用少量己烷洗涤之后真空干燥，得到800mg的_盐，为白色固体。

实施例39

21-羟基-9，10-脱氢-埃坡霉素D的制备

-20℃下，向1mL四氢呋喃(THF)中(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧)甲基噻唑-4-基)甲基]三正丁基_氯化物(0.58g)的溶液加入甲苯(2.4mL)中0.5M双(三甲基甲硅烷基)氨化钾的溶液。让该溶液经30分钟温热至0℃，然后冷却至-78℃，并且加入酮 1(128mg)的溶液(A.Rivkin等，J.Am.Chem.Soc.2003125：2899-2901)。让混合物经1小时温热至-40℃，此时通过薄层色谱分析判断反应完全。通过加入饱和的氯化铵水溶液终止反应并且用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤，硫酸镁干燥，过滤，并蒸发。残余物在硅胶上进行色谱法(20∶1己烷/乙醚)，得到150mg的纯的保护的产物。

将保护的产物(150mg)溶解于3mL的THF并且在0℃下用氟化氢-吡啶(2mL)处理。让反应经1小时温热至室温，并且然后保持4小时。缓慢加入甲氧基三甲基甲硅烷(15mL)，并且将混合物搅拌过夜。将混合物蒸发至干，残余物在硅胶上进行色谱法(3∶1至1∶1己烷/丙酮)得到64mg的纯的21-羟基-9，10-脱氢埃坡霉素D。

实施例40

21-叠氮基-9，10-脱氢-埃坡霉素D

将1.5mL干燥THF中的21-羟基-9，10-脱氢埃坡霉素D(30mg)的溶液冷却至0℃，并且用二苯基磷酰基叠氮化物(15.3微升)处理1分钟以上。5分钟之后，加入1，8-二氮杂[5.4.0]双环十一-7-烯(DBU)(8.8微升)，并且在0℃下将反应搅拌2小时，然后温热至室温。

18小时之后，薄层色谱分析表明残留有21-羟基-9，10-脱氢埃坡霉素D，并且将混合物冷却至0℃，并且加入二苯基磷酰基叠氮化物(2微升)处理。混合物在0℃下又搅拌30分钟，然后在室温下搅拌1.5小时。将溶液倒入30mL的乙酸乙酯，并且用2×10mL水洗涤。合并的水相用乙酸乙酯(2×15mL)萃取，合并萃取物，硫酸镁干燥，过滤，并蒸发。粗产物在硅胶上进行色谱，得到9mg产物。

实施例41

21-氨基-9，10-脱氢-埃坡霉素D的制备

将0.3mL的THF中的21-叠氮基-9，10-脱氢埃坡霉素D(14mg)和三甲基膦(33微升的1M THF溶液)的溶液搅拌5分钟，然后用80微升水处理并且再搅拌3小时。将混合物蒸发至干，残余物在硅胶上进行色谱法(10％甲醇的氯仿溶液)，得到8mg的21-氨基-9，10-脱氢埃坡霉素D。精确质谱：计算值C₂₇H₄₁N₂O₅S(M+H)＝505.2731，实测值＝505.2719。¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz)：δ218.6，172.8，170.5，152.4，138.1，137.3，131.1，129.8，120.3，119.4，116.1，78.2，75.4，71.5，53.2，44.6，43.9，40.0，39.5，34.8，31.8，23.5，22.4，19.2，17.6，15.8，15.0。

实施例42

21-羟基-9，10-脱氢-26-三氟埃坡霉素D的制备

-30℃下，向3mL四氢呋喃(THF)中(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧)甲基噻唑-4-基)甲基三正丁基_氯化物(0.641g)的溶液经10分钟滴加甲苯(1.5mL)中0.5M双(三甲基甲硅烷基)氨化钾的溶液。让该溶液经40分钟温热至0℃，然后冷却至-70℃，并且经10分钟滴加1毫升THF中酮 3(85mg)的溶液(A.Rivkin等，J.Am.Chem.Soc.2003125：2899-2901)。20分钟后，让混合物经1小时温热至-30℃。通过加入饱和的氯化铵水溶液终止反应并且用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤，硫酸镁干燥，过滤，并蒸发。残余物在硅胶上进行色谱法，依次用0，2，4，6和8％的乙醚的庚烷溶液洗脱，得到6 7mg的纯的保护的产物。

将保护的产物(67mg)溶解于1.5mL的THF并且在0℃下用氟化氢-吡啶(0.6mL)处理。20分钟后，让反应温热至室温，保持3.5小时，然后冷却回0℃。缓慢加入甲氧基三甲基甲硅烷(6mL)，并且将混合物升至室温并且蒸发至油状物。该油状物在硅胶上进行色谱法(0，10，20，30，40，50，60，70，80，和90％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到纯的21-羟基-9，10-脱氢-26-三氟埃坡霉素D。LC/MS：m/z 560[M+H]。

实施例43

21-叠氮基-9，10-脱氢-26-三氟埃坡霉素D的制备

将0.5mL干燥THF中的21-羟基-9，10-脱氢-26-三氟埃坡霉素D(20mg)的溶液冷却至0℃，并且用二苯基磷酰基叠氮化物(10微升)处理。5分钟之后，加入1，8-二氮杂[5.4.0]双环十一-7-烯(DBU)(5微升)，反应温热至室温并且搅拌过夜。将反应混合物直接加给硅胶柱，然后用0，10，20，30，40，50，60，70和80％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到产物。MS：对于C₂₇H₃₈N₄O₅S的计算值[M+H]＝530.2563；实测值585.2797。

实施例44

21-氨基-9，10-脱氢-26-三氟埃坡霉素D的制备

将21-叠氮基-9，10-脱氢-26-三氟埃坡霉素D(13mg)的溶液冷却至0℃，并且用三甲基膦(28微升的1M THF溶液)的0.5mL THF溶液处理，搅拌5分钟，然后用100微升的水处理，并且经1.5小时温热至室温。将反应混合物直接加给硅胶柱，然后用含有1％三乙胺的0，2，4，6，8和10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到不纯的产物。在硅胶柱上进行第二次层析，用0，25，50，75和100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，接着用含有1％三乙胺的5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到纯的产物。LC/MS：m/z 559[M+H]。

实施例45

17-去(2-甲基-4-噻唑基)-17-(2-吡啶基)-9，10-脱氢埃坡霉素D(KOSN 1632)

如下所述制备(2-吡啶基)甲基三正丁基_氯化物。氮气下，向15ml苯中10mmol的2-(氯甲基)吡啶溶液滴加10mmol三正丁基膦。将得到的溶液回流18小时后冷却至室温。真空下浓缩溶液；采取所有必要的措施减少与空气接触。通过向残余物加入乙醚生成白色固体。过滤掉母液，氮气下用乙醚将白色固体洗涤几次，然后将固体真空干燥，得到白色粉末终产物。

根据实施例42的方法制备17-去(2-甲基-4-噻唑基)-17-(2-吡啶基)-9，10-脱氢埃坡霉素D，用(2-吡啶基)甲基三正丁基_氯化物代替(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧)-甲基噻唑-4-基)甲基三正丁基_氯化物，在终止之前将反应温热至-10℃。¹³C-NMR(100MHz，CDCl₃)：δ218.6，170.6，155.9，149.0，141.1，137.4，136.3，131.1，129.8，125.2，124.0，121.4，120.4，77.9，75.3，71.4，53.5，44.5，40.0，39.6，34.8，31.9，23.6，22.7，18.6，17.3，15.7，14.8。

实施例46

17-去(2-甲基-4-噻唑基)-17-(2-喹啉基)-9，10-脱氢埃坡霉素D

根据实施例42的方法制备，用(2-喹啉基)甲基三正丁基_氯化物代替(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧)-甲基噻唑-4-基)甲基三正丁基_氯化物，并且在终止之前将反应温热至室温并且保持3小时。¹³C-NMR(100MHz，CDCl₃)：δ218.5，170.7，156.2，147.7，142.9，137.5，136.2，131.2，129.9，129.8，128.7，127.5，126.6，126.3，125.5，122.2，120.5，78.0，75.2，71.5，53.6，44.4，40.0，39.6，34.9，32.0，23.6，23.1，18.5，17.2，16.1，14.6。

实施例47

17-去(2-甲基-4-噻唑基)-17-(2-苯并噻唑基)-9，10-脱氢埃坡霉素D(KOSN 1635)

根据实施例42的方法制备，用(2-苯并噻唑基)甲基三正丁基_氯化物代替(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧)-甲基噻唑-4-基)甲基三正丁基_氯化物，并且在终止之前将反应温热至室温并且保持2天。¹³C-NMR(100MHz，CDCl₃)：δ218.6，170.4，164.6，152.7，145.4，137.9，134.9，131.1，129.7，126.4，125.2，122.8，121.4，119.8，119.5，77.6，75.6，71.8，53.2，44.8，40.1，39.4，34.8，31.6，23.5，22.6，19.3，17.6，16.9，15.1。

实施例48

细胞毒性数据

细胞系和培养条件

从国家癌症研究所获得人乳房癌细胞系MCF-7，多药物抗性乳房癌细胞系NCI/ADR。从美国典型培养物保藏中心(Manassas，VA)获得人非小细胞肺癌细胞系A549和人卵巢癌细胞系SKOV-3。所有的细胞系保持在补充有2mM L-谷氨酰胺，25mM HEPES和10％FBS(Hyclone，Logan，UT)的RPMI-1640培养基(Gibco/BRL，Rockville，MD)中，细胞在37℃ 5％CO₂潮湿培养箱中维持。

细胞毒性测定

在96-孔板的每个孔中以100微升5000(MCF-7)，7500(NCI/ADR)，5000(A549)和7500(SKOV3)个细胞接种肿瘤细胞。让细胞粘连24小时。向两个孔中的加入100微升中0.001至1000nM范围的各种化合物。3天之后，用10％三氯乙酸在4℃下将细胞固定1小时，然后在室温下用0.2％硫罗丹明B(SRB)/1％乙酸染色20分钟。用1％乙酸洗掉没有结合的染料，然后用200微升的10mM Tris碱提取结合的SRB。使用96-微量滴定板读数器(Spectra Max 250，Molecular Devices)在515nm测量吸收度。利用KaleidaGraph程序计算IC₅₀值。实验进行两次。下面的表1给出结果。

表1

类似物	MCF-7	NCI/ADR	A549	SKOV3
					埃坡霉素D	6.8	23	25	39
9，10-脱氢埃坡霉素D	2	6.2	4.7	6.2
					21-OH-9，10-脱氢埃坡霉素D	2.3	14	3.8	5.7
21-NH2-9，10-脱氢埃坡霉素D	3.2	25	5.9	5.7
					26-三氟-9，10-脱氢埃坡霉素D	5.3	33	11	22
21-OH-26-三氟-9，10-脱氢埃坡霉素D	3.6	65	6.1	7.9
					21-NH2-26-三氟-9，10-脱氢埃坡霉素D	9.7	330	35	40
17-去(2-甲基-4-噻唑基)-17-(2-吡啶基)-9，10-脱氢埃坡霉素D	0.87	4.6	3.3	4.4
					17-去(2-甲基-4-噻唑基)-17-(2-喹啉基)-9，10-脱氢埃坡霉素D	8.9	24	25	19
17-去(2-甲基-4-噻唑基)-17-(2-苯并噻唑基)-9，10-脱氢埃坡霉素D	1.1	5.6	4.2	3.4

实施例49

另外的9，10-脱氢埃坡霉素D类似物

根据实施例39(当R＝甲基时)和42(当R＝CF₃)的方法，通过用相应的_氯化物代替(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧)-甲基噻唑-4-基)甲基三正丁基_氯化物，制备表2所示另外的化合物。根据实施例48所述获得细胞毒性数据(表2)。利用抗BFC底物的初始速度方法获得细胞色素P450抑制数据(表3)。

如下所述制备(4-甲氧基吡啶-2-基)甲基三丁基_氯化物。氮气下，向7ml苯中770mg(4.9mmol)的2-(氯甲基)-4-甲氧基吡啶的溶液滴加1.22ml的三正丁基膦(4.9mmol)。将得到的溶液回流18小时后冷却至室温。然后真空浓缩溶液；采取所有必要措施减小与空气的任何接触。通过向残余物中加入乙醚形成微黄色固体。过滤掉母液，氮气下用乙醚将黄色固体洗涤几次，然后将固体真空干燥，得到1.2g黄色粉末_盐。

如下所述制备(5-甲基-异_唑-3-基)甲基三丁基_氯化物：

3-(氯甲基)-5-甲基异_唑(0.30g，2.28mmol，1当量)溶解于100mL烘箱干燥的RBF中的6mL苯中。用注射器加入三丁基膦(0.57mL，2.28mmol，1当量)，并且在氮气下将溶液回流15小时。溶液冷却至室温并且真空浓缩体积。加入Et₂O沉淀出期望的_盐。倾析掉乙醚上清液，并且在真空下将白色固体干燥过夜(0.760g，99％产率)。

下面是表2给出的选择的化合物的¹³C-NMR数据：

KOSN1703 ¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)δ218.6，170.5，154.7，147.3，141.0，137.1，135.5，134.4，130.7，129.8，124.2，123.7，120.5，77.7，75.4，70.8，61.8，53.7，44.6，39.7，39.6，34.8，31.8，23.5，22.8，18.1，17.4，15.9，15.0。

 KOSN 1727 ¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)δ218.6，170.5，168.8，152.3，137.4，131.2，129.8，120.3，119.5，117.1，78.2，75.5，71.7，67.0，59.9，53.7，53.1，44.6，40.1，39.4，34.8，31.9，23.5，22.4，19.4，17.5，15.9，15.0。

KOSN 1756 ¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)δ218.6，170.6，165.9，157.2，150.1，141.2，137.3，131.1，129.8，125.1，120.5，110.2，107.5，77.7，75.2，71.2，55.1，53.6，44.4，39.9，39.6，34.8，31.9，23.5，22.9，18.3，17.3，15.8，14.7

KOSN1674 ¹³CNMR(CDCl₃，100MHz)δ218.3，170.3，144.6，137.8，135.9，132.9，131.0，129.8，127.8，124.3，119.8，119.4，118.8，110.0，75.9，75.4，71.6，53.4，44.7，39.9，39.5，34.9，31.6，23.6，22.7.18.6，17.3，15.0，14.5。

KOSN 1724：¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)δ218.6，170.3，168.9，159.9，142.9，137.6，131.1，129.6，119.9，113.6，102.1，77.7，75.5，71.7，53.0，44.7，40.0，39.4，34.8，31.6，23.4，22.2，19.4，17.5，16.1，15.0，12.1。

KOSN 1673 ¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)δ 218.2，170.0，155.5，149.0，139.4，136.4，132.1，130.2，127.6，125.6，124.1，121.6，76.2，75.0，70.8，53.8，44.7，39.5，39.1，30.8，28.4，22.6，17.6，17.4，15.7，14.8。

表2

实施例50

药理学参数

使用商业上可获得的试剂盒(BD GenTest，Woburn，MA)，使用BFC作为抗CYP3A4的底物进行细胞色素P450抑制测定。表3给出这样获得的微摩尔表示的IC₅₀。

表3

	IC50(nM)
				化合物	CYP3A4	CYP2C9	CYP2C19
Epothilone D	2.4	9-12	1.6-3.4
				反式-9，10-脱氢′epothilone D	1.6	10.8	2
21-OH-26-F3-反式-9，10-脱氢′epothilone D	1	17.3	20.5
				21-NH2-反-9，10-脱氢epothiloneD	0.61	0.83	0.63
26-F3-反式-9，10-脱氢epothilone D	2	14.4	3.2
				21-OH-反式-9，10-脱氢epothilone D	0.8	22	5.6
KOSN 1635	3.12	4.1	3.27
				KOSN 1632	2.52	15	3.05
KOSN 1673	3.5	9	4.7
				KOSN 1703	6	4	10.2
KOSN 1756	4.8	7.1	1.9
				KOSN 1724	7.1	12.9	10.9

如下测定化合物溶解性：向95微升磷酸盐缓冲盐水加入5微升储备溶液(20mg/mL的DMSO溶液)。涡流大约10秒之后，溶液/悬浮液通过0.45微米过滤器过滤，并且通过HPLC定量测得分析物的量。测定的溶解度(mg/mL)如下：埃坡霉素D，＜0.06；反式-9，10-脱氢埃坡霉素D，＜0.06；21-OH-26-F₃-反式-9，10-脱氢埃坡霉素D，0.1；21-氨基-反式-9，10-脱氢埃坡霉素D，＞0.6；21-氨基-26-F₃-反式-9，10-脱氢埃坡霉素D，＞0.6；26-F₃-反式-9，10-脱氢埃坡霉素D，＜0.06；21-OH-反式-9，10-脱氢埃坡霉素D，0.1；KOSN 1635，＜0.02；KOSN1632，0.12。

通过将化合物溶解于DMSO并且向小鼠或人血浆加入等份样品来测定新鲜小鼠和人血浆中化合物的半寿期。在0时间，从各个样品取75微升等份并且加入150微升乙腈。将白色沉淀物以13500rpm离心3分钟。将所有的澄清上清液转移给另一个离心试管，并且重复离心步骤(13500rpm/3min)。小心地将150微升澄清上清液用移液管移至标记的HPLC样品试管中，力争避免移出任何蛋白质沉积物。通过HPLC分析样品，通过与可信标准物相比较，测定各个时间点保留的化合物。测得的在小鼠和人血浆中的半寿期(分钟)分别是：埃坡霉素D：49，＞1440；21-OH-26-F₃-反式-9，10-脱氢埃坡霉素D：379，＞1440；21-氨基-反式-9，10-脱氢埃坡霉素D：59，＞1440；26-F₃-反式-9，10-脱氢埃坡霉素D：163，＞1440；21-OH-反式-9，10-脱氢埃坡霉素D：1059，＞1440；KOSN 1635：58，＞1440；KOSN 1632：28，＞1440。使用冷冻小鼠血浆，反式-9，10-脱氢埃坡霉素D有着47分钟的半寿期。在新鲜人血浆中，反式-9，10-脱氢埃坡霉素D具有＞1440分钟的半寿期。

如下所述进行蛋白质结合研究。化合物溶解于DMSO，然后稀释到新鲜的或解冻的小鼠或人血浆样品中并且在37℃下温育。50微升的时间点与100微升的乙腈混合，并且以大约14000rpm离心3分钟。从上清液取出100微升的等份并且放置一边用于分析，指明总级份中的化合物。将剩余的上清液转移到安装有YM10膜的Microcon超滤装置中并且离心，以分离蛋白质-结合的物质。50微升的没有蛋白质的滤物的等份与100微升的乙腈混合，并且以大约14000rpm离心3分钟。然后收集100微升上清液并分析，测定没有与蛋白质结合的化合物的量。通过相对可信标准物的HPLC分析测定总样品中和没有蛋白质的级份中化合物的量。

这些血浆蛋白质结合研究表明结合蛋白质的化合物的百分比：埃坡霉素D：98.5％；反式-9，10-脱氢埃坡霉素D，96.6％；26-三氟-反式-9，10-脱氢埃坡霉素D，96.5％；21-氨基-反式-9，10-脱氢-埃坡霉素D，89.5％；21-OH-26-F₃-反式-9，10-脱氢埃坡霉素D，92.8％；21-OH-反式-9，10-脱氢埃坡霉素D，94.2％；KOSN 1635，99.7％；KOSN1632，89.4％。

详细描述本发明的优选的实施方案的同时，应理解在不脱离本发明的精神和范围的情况下能进行各种各样的变化。

Claims (5)

1.合成反式-9，10-脱氢埃坡霉素的方法，包括将9-氧代-埃坡霉素转化为反式-9，10-脱氢埃坡霉素。

2.权利要求1的方法，其中通过保护9-氧代-埃坡霉素的游离羟基，将9-氧代-埃坡霉素的9-氧代-基团还原获得9-羟基保护的化合物，用活化基团活化9-羟基保护的化合物，消除活化基团获得保护的9，10-脱氢埃坡霉素，然后将保护的9，10-脱氢埃坡霉素去保护，得到9，10-脱氢埃坡霉素，由此将9-氧代-埃坡霉素转化为反式-9，10-脱氢埃坡霉素。

3.权利要求2的方法，其中活化基团是黄原酸酯或硫代氨基甲酸酯，并且通过热解进行消除活化基团的步骤。

4.权利要求1的方法，其中通过保护9-氧代-埃坡霉素的游离羟基，使保护的9-氧代-埃坡霉素与三氟甲磺酸化试剂和碱反应，获得9，10-脱氢-9-三氟甲磺酰氧基中间体化合物，然后将9，10-脱氢-9-三氟甲磺酰氧基中间体的9-三氟甲磺酰氧基还原，然后将保护的9，10-脱氢埃坡霉素化合物去保护，得到9，10-脱氢埃坡霉素，由此将9-氧代-埃坡霉素转化为反式-9，10-脱氢埃坡霉素。

5.权利要求1的方法，其中通过保护9-氧代-埃坡霉素的游离羟基，使保护的9-氧代-埃坡霉素与三氟甲磺酰化试剂和碱反应，获得9，10-脱氢-9-三氟甲磺酰氧埃坡霉素，使9，10-脱氢-9-三氟甲磺酰氧埃坡霉素与烷基有机金属或链烯基有机金属试剂在其中三氟甲磺酸根被烷基或链烯基置换的条件下反应，并且去保护，得到9-烷基或9-链烯基9，10-脱氢埃坡霉素，由此将9-氧代-埃坡霉素转化为反式-9，10-脱氢埃坡霉素。