ES2336206T9 - Piranonas útiles como inhibidoras de la atm. - Google Patents

Description

Piranonas útiles como inhibidoras de la ATM.

La presente invención se refiere a compuestos que actúan como inhibidores de la ATM, su utilización y su síntesis.

El ADN humano está constantemente bajo el ataque de intermedios reactivos del oxígeno principalmente a partir de subproductos del metabolismo oxidativo. Especies reactivas de oxígeno son capaces de hacer que ADN de cadenas simples se fragmente y, cuando dos de éstas se generan próximas entre sí, se rompa el ADN de doble cadena (DSBs). Además, se pueden inducir roturas en la cadena única y doble cuando un horquilla de replicación del ADN se encuentra con un patrón dañado, y son generadas por agentes exógenos como las radiaciones ionizantes (IR) y ciertos medicamentos contra el cáncer (por ejemplo, bleomicina, etopósido, camptotecina). También se presentan DSBs como intermedios en recombinación del sitio específico-V(D)J, un proceso que es fundamental para la generación de un sistema inmune funcional de los vertebrados. Si se dejan DSBs de ADN no reparados o reparados erróneamente, se inducen mutaciones y/o aberraciones cromosómicas, que a su vez pueden conducir a la muerte celular. Para luchar contra las graves amenazas que plantea la DSBs de ADN, las células eucariotas han desarrollado varios mecanismos para mediar en su reparación. Es fundamental para el proceso de reparación del ADN la ralentización de la proliferación celular para dar tiempo a la célula para reparar el daño. Una proteína clave en la detección de DSBs de ADN y en la señalización de esta información a la maquinaria del ciclo celular es la ATM quinasa (ataxia telangiectasia mutada) (Durocher y Jackson (2001) DNA-PK, ATM and ATR as sensors of DNA damage: variations on a theme? Curr Opin Cell Biol., 13: 225-31, Abraham (2001) Cell cycle checkpoint signaling through the ATM and ATR kinases. Genes Dev., 15; 2177-96).

La proteína ATM es un polipéptido -350 kDa que es un miembro de la familia de proteínas de la fosfatidilinositol (PI) 3-quinasa en virtud de un supuesto dominio de la quinasa en su región carboxilo-terminal (Savitsky et al (1995) A single ataxia telangiectasia gene with a product similar to PI-3 kinase. Science, 268: 1749-53). PI 3-quinasas clásicas, como la PI 3-quinasa en sí, están implicadas en la transducción de señales y fosforilan los lípidos de inositol, que actúan como segundos mensajeros intracelulares (revisado en Toker y Cantley (1997) Signalling through the lipid products of phosphoinositide-3-OH kinase, Nature, 387: 673-6). Sin embargo, la ATM tiene más similitud de secuencia con un subconjunto de la familia de la PI 3-quinasa que comprende proteínas que, como ATM, intervienen en el control del ciclo celular y/o en la detección y señalización de los daños en el ADN (Keith y Schreiber (1995) PIK-related kinases: DNA repair, recombination, and cell cycle checkpoints, Science, 270; 50-1, Zakian (1995) ATM-related genes: what do they tell us about functions of the human gene? Cell, 82; 685-7). En particular, no hay evidencia hasta la fecha que todos los miembros de este subconjunto de la familia de la PI 3-quinasa sean capaces de fosforilar los lípidos. Sin embargo, todos los miembros de esta familia han demostrado poseer la actividad serina/treonina quinasa. ATM fosforila proteínas clave que participan en una variedad de vías de señalización del puesto de control del ciclo de las células que se inició en respuesta a la producción de DSBs de ADN (véase más abajo). Estas proteínas efectoras posteriores incluyen p53, Chk2, NBS1/nibrina, BRCA1 y Rad 17 (Abraham, 2001).

ATM es el producto del gen mutado en la ataxia-telangiectasia (A-T) (Savitski et al (1995)). A-T es un desorden recesivo autosómico humano presente con una incidencia de alrededor de 1 en 100.000 en la población. A-T se caracteriza por una serie de síntomas debilitantes, como la degeneración cerebelosa progresiva, telangiectasias oculocutáneas, retraso del crecimiento, deficiencias inmunológicas, predisposición al cáncer y ciertas características de envejecimiento prematuro (Lavín y Shiloh (1997), The genetic defect in ataxia-telangiectasia. Annu. Rev. Immunol., 15: 177-202; Shiloh (2001), ATM and ATR: networking cellular responses to DNA damage, Curr. Opin. Genet. Dev., 11: 71-7). A nivel celular, A-T se caracteriza por un alto grado de inestabilidad cromosómica, síntesis radio-resistente de ADN, e hipersensibilidad a la radiación ionizante (IR) y las drogas radiomiméticas. Además, las células A-T son defectuosas en los puntos de control del ciclo celular G_{1}-S, S, y G_{2}-M inducidos por radiación que se cree que detienen el ciclo celular en respuesta al daño del ADN a fin de permitir la reparación del genoma antes de la replicación del ADN o la mitosis (Lavín y Shiloh, 1997). Esto puede reflejar en parte el hecho de que las células A-T exhiben deficiente o grave retraso de la inducción de p53 en respuesta a la IR. De hecho, acontecimientos posteriores mediados por p53 son también defectuosos en las células A-T después de la exposición a IR. ATM por lo tanto actúa antes de p53 en una trayectoria de señalización de daño inducido en el ADN por IR. También se ha demostrado que las células A-T acumulan roturas de doble cadena de ADN (DSBs) después de la radiación ionizante, lo que sugiere un defecto en la reparación del DSB.

Es evidente que la ATM es un regulador clave de la respuesta celular al DSBs del ADN. Por lo tanto, la inhibición de esta quinasa a través de moléculas pequeñas sensibilizará las células tanto a la radiación ionizante como a quimioterápicos que inducen DSBs del ADN ya sea directa o indirectamente. Los inhibidores de la ATM por lo tanto pueden ser utilizados como complemento de la radioterapia y la quimioterapia del cáncer. Hasta la fecha los únicos inhibidores de la ATM informados (cafeína y wortmanina; Sarkaria, et al., (1999) Inhibition of ATM and ATR kinase activities by the radiosensitizing agent, caffeine. Cancer Res., 59: 4375-82; Banin, et al., (1998) Enhanced phosphorylation of p53 by ATM in response to DNA damage. Science, 281: 1674-1677) causan radiosensibilización, pero no está claro si este mecanismo de acción está mediado por la inhibición de ATM ya que estas pequeñas moléculas son muy inespecíficas en su acción como inhibidores de la quinasa.

Se ha demostrado que la función de ATM en respuesta a la radiación ionizante inducía daño en el ADN es específica del tejido. Por ejemplo, mientras que los fibroblastos procedentes de ratones Atm nulos son neuronas nulas ATM sensibles a la radiación son radiorresistentes por la falta de apoptosis inducida por IR (Herzog et al., (1998) Requirement for Atm in ionizing radiation-induced cell death in the developing central nervous system. Science, 280: 1089-91). Por lo tanto, los inhibidores de la ATM tienen el potencial de ser radio-protectores en contextos celulares específicos.

Los inhibidores de la ATM también pueden resultar útiles en el tratamiento de enfermedades mediadas por retrovirales. Se ha demostrado que la función de ATM es necesario para permitir la transducción de ADN retroviral estable bajo ciertas condiciones (Daniel et al. (2001) Wortmannin potentiates integrase-mediated killing of lymphocytes and reduces the efficiency of stable transduction by retroviruses. Mol. Cell Biol., 21: 1169-72). Por lo tanto, los inhibidores de la ATM tienen el potencial de bloquear la integración de ADN retroviral.

Se sabe que el ATM juega un papel crucial en el control de la longitud de los extremos cromosómicos telómeros (Metcalfe et al. (1996) Accelerated telomere shortening in ataxia telangiectasia. Nat Genet., 13: 350-3). Los extremos teloméricos en la mayoría de tipos de células normales se acortan en cada división celular. Las células con telómeros excesivamente acortados son incapaces de dividirse. Los inhibidores de la ATM pueden, por lo tanto, ser de utilidad en la prevención de la progresión del cáncer, limitando el potencial de crecimiento de células cancerosas o pre-cancerosas. Además, la ATM no parece ser parte de la enzima telomerasa en sí (Metcalfe et al. (1996)) Por lo tanto, es probable que los inhibidores de la ATM trabajen sinérgicamente con los medicamentos contra la telomerasa.

Las células derivadas de pacientes A-T o de ratones nulos para ATM crecen más lentamente en cultivo que células positivas ATM genéticamente emparejadas. Por lo tanto, un inhibidor de la ATM puede tener propiedades inhibidoras/antiproliferativas de crecimiento en su propio derecho. Por lo tanto, un inhibidor de la ATM puede ser usado como un agente citostático en el tratamiento del cáncer.

Los pacientes A-T manifiestan inmuno-deficiencias, lo que demuestra que la ATM es necesaria para la generación de un sistema inmune completamente funcional. Los inhibidores de la ATM pueden, por tanto, ser utilizados en la modulación del sistema inmune.

En resumen, los inhibidores de la ATM tienen el potencial para sensibilizar las células tumorales a la radiación ionizante o quimioterapéuticos que inducen ADN DSB, para modular los mecanismos de control la longitud de los telómeros, para bloquear la integración retroviral, modular el sistema inmune y para proteger a ciertos tipos de células de la apoptosis inducida por daño en el ADN. El documento WO 92/00290 describe algunas 2-amino-6-fenil-4H-pirono-4-onas, que son agentes ontioteroscleróticos y antitrombitícos.

Los presentes inventores han descubierto compuestos que exhiben inhibición de ATM.

En consecuencia, el primer aspecto de la invención proporciona un compuesto de fórmula I:

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y sus isómeros, sales y solvatos del mismo, en donde:

uno de P y Q es O, y el otro de P y Q es CH, donde hay un doble enlace entre cualquiera de Q y P es CH y el átomo de carbono que tiene el grupo R^{3};

Y es o O o S;

R^{1} y R^{2} juntos forman, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, un anillo heterocíclico de 4 a 8 átomos en el anillo;

R^{3} es un grupo fenilo o piridil, unidos por un primer grupo de puente seleccionado a partir de -S-, -S(=O)-,
-S(= O)_{2}-, -O-, -NR^{N}- y CR^{C1}R^{C2}- a un anillo benceno opcionalmente sustituido por acilamido, sulfonamino, éter, éster, amido, amino y acilo;

el grupo fenilo o piridil y el anillo de benceno opcionalmente sustituido estando opcionalmente además unidos por un segundo grupo puente, que está unido adyacente al primer grupo puente en ambos grupos para formar un anillo C_{5-7} opcionalmente sustituido fusionado tanto al grupo fenilo o piridil como al anillo de benceno, estando el grupo fenilo o piridil además opcionalmente sustituido por un grupo seleccionado de halógeno, hidroxi, C_{1-7} alquilo, C_{1-7} alcoxi, acilo, aciloxi, amino, nitro, ciano, tiol, C_{1-7} alquiltio, acilamido, sulfonamino, éter, éster y amido;

donde R^{N} es hidrógeno;

y R^{C1} y R^{C2} son ambos hidrógeno.

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Por lo tanto, cuando P es O y Q es CH, el compuesto es de fórmula (Ia):

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y cuando P es CH y Q es O, el compuesto es de fórmula (Ib):

3

Un segundo aspecto de la invención proporciona una composición que comprende un compuesto del primer aspecto y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

Un tercer aspecto de la invención proporciona un compuesto del primer aspecto para su uso en un procedimiento de terapia.

Un cuarto aspecto de la invención proporciona el uso de un compuesto del primer aspecto en la preparación de un medicamento para inhibir la actividad de la ATM.

Un quinto aspecto de la invención prevé la utilización de un compuesto según se define en el primer aspecto de la invención en la preparación de un medicamento para su uso como coadyuvante en la terapia del cáncer o para potenciar las células tumorales para el tratamiento con radiaciones ionizantes o agentes quimioterápicos.

Un sexto aspecto de la invención prevé la utilización de un compuesto según se define en el primer aspecto de la invención en la preparación de un medicamento para el tratamiento de las enfermedades mediadas por retrovirales o enfermedad mejoradas por la inhibición de la ATM, que incluyen el síndrome de inmunodeficiencia adquirida.

Otro aspecto de la invención proporciona un compuesto activo como se describe en este documento para su uso en un procedimiento de tratamiento del cuerpo humano o animal, preferentemente en forma de una composición farmacéutica.

Otro aspecto de la invención proporciona un procedimiento de inhibición de ATM in vitro, que comprende poner en contacto con una célula con una cantidad efectiva de un compuesto activo como se describe en este documento.

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Definiciones

C_{1-7} alquilo: El término "C_{1-7} alquilo", como aquí se utiliza, se refiere a una porción monovalente que se obtiene eliminando un átomo de hidrógeno de un compuesto de hidrocarburo C_{1-7} que tiene de 1 a 7 átomos de carbono, que pueden ser alifáticos o alicíclicos, o una combinación de ambos, y que pueden ser saturados, parcialmente insaturados, o completamente saturados.

Ejemplos de grupos alquilo C_{1-7} saturados lineales incluyen, pero no están limitados a, metilo, etilo, n-propilo, n-butilo y n-pentilo (amilo).

Ejemplos de grupos alquilo C_{1-7} saturados ramificados incluyen, pero no están limitados a, iso-propilo, iso-butilo, sec-butilo y tert-butilo, y neo-pentilo.

Ejemplos de grupos alquilo C_{1-7} alicíclicos saturados (también conocidos como grupos "C_{3-7} cicloalquilo") incluyen, pero no están limitados a, grupos como ciclopropil, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo, así como los grupos sustituidos (los grupos que integran tales grupos), como metilciclopropilo, dimetilciclopropilo, metilciclobutilo, dimetilciclobutilo, metilciclopentilo, ciclopropilmetilo, dimetilciclopentilo, metil-, dimetilciclohexilo, y ciclohexilmetilo.

Ejemplos de grupos alquilo C_{1-7} insaturados, que tienen uno o más enlaces dobles carbono-carbono (también conocidos como grupos "C_{2-7} alquenilo") incluyen, pero no están limitados a, etenilo (vinilo, -CH=CH_{2}), 2-propenilo (alilo, -CH-CH=CH_{2}), isopropenil (-C(CH_{3})=CH_{2}), butenilo, pentenilo, y hexenilo.

Ejemplos de grupos alquilo C_{1-7} insaturados, que tienen uno o más enlaces triple carbono-carbono (también conocido como grupos "C_{2-7} alquinilo") incluyen, pero no están limitados a, etinilo (etinilo) y 2-propinilo (propargilo).

Ejemplos de grupos alquilo C_{1-7} alicíclicos insaturados (carbocíclicos), que tienen uno o más enlaces dobles carbono-carbono (también conocidos como grupos "C_{3-7} cicloalquenil") incluyen, pero no están limitados a, grupos no sustituidos como ciclopropenilo, ciclobutenil, ciclopentenilo y ciclohexenil, así como los grupos sustituidos (por ejemplo, los grupos que integran tales grupos) como ciclopropenilmetil y ciclohexenilmetil.

C_{3-20} heterociclilo: El término "C_{3-20} heterociclilo", como aquí se utiliza, se refiere a una porción monovalente que se obtiene eliminando un átomo de hidrógeno de un compuesto heterocíclico de C_{3-20} átomos en el anillo, teniendo dicho compuesto un anillo, o dos o más anillos (por ejemplo, en espiral, fusionado, puente), y con 3 a 20 átomos en el anillo, de los cuales 1 a 10 son heteroátomos en el anillo, y donde al menos uno de dicho anillo(s) es un anillo heterocíclico. Preferiblemente, cada anillo tiene de 3 a 7 átomos en el anillo, de los cuales 1 a 4 son heteroátomos en el anillo. "C_{3-20}" indica átomos en el anillo, ya sean sean átomos de carbono o heteroátomos.

Ejemplos de grupos heterociclilos C_{3-20} que tienen un átomo de nitrógeno del ciclo incluyen, pero no están limitados a, los derivados de aciridina, acetidina, pirrolidinas (tetrahidropirrol), pirrolina (por ejemplo, 3-pirrolina, 2,5-dihidropirrol), 2H-pirrol o 3H-pirrol (isopirrol, isoazol), piperidina, dihidropiridina, tetrahidropiridina, y acepina.

Ejemplos de grupos heterociclilo C_{3-20} que tienen un átomo de oxígeno del anillo incluyen, pero no están limitados a, los derivados de oxirano, oxetano, oxolano (tetrahidrofurano), oxole (dihidrofurano), oxano (tetrahidropirano), dihidropirano, pirano (C_{6}), y oxepina. Ejemplos de grupos heterociclilo C_{3-20} sustituidos incluyen los azúcares, en forma cíclica, por ejemplo, furanosas y piranosas, incluyendo, por ejemplo, ribosa, lixosa, xilosa, galactosa, sacarosa, fructosa, y arabinosa.

Ejemplos de grupos heterociclilo C_{3-20} que tienen un átomo de anillo de azufre incluyen, pero no están limitados a, los derivados de tiirano, tietano, tiolano (tetrahidrotiofeno), tiano (tetrahidrotiopirano), y tiepano.

Ejemplos de grupos heterociclilo C_{3-20} con dos átomos de oxígeno en el anillo incluyen, pero no están limitados a, los derivados de dioxolano, dioxano, y dioxepano.

Ejemplos de grupos heterociclilo C_{3-20} con dos átomos de nitrógeno en el anillo incluyen, pero no están limitados a, los derivados de imidazolidina, pirazolidina (diazolidina), imidazolina, pirazolina (dihidropirazola), y piperacina.

Ejemplos de grupos heterociclilo C_{3-20} que tienen un átomo de nitrógeno en el anillo y un átomo de oxígeno en el anillo incluyen, pero no están limitados a, los derivados de tetrahidrooxazola, dihidrooxazola, tetrahidroisoxazola, dihidroisoxazola, morfolina, tetrahidrooxacina, dihidrooxacina, y oxacina.

Ejemplos de grupos heterociclilo C_{3-20} que tienen un átomo de oxígeno en el anillo y un átomo de azufre en el anillo incluyen, pero no están limitados a, los derivados de oxatiolano y oxatiano (tioxano).

Ejemplos de grupos heterociclilo C_{3-20} que tienen un átomo de anillo de nitrógeno y un átomo de anillo de azufre incluyen, pero no están limitados a, los derivados de tiazolina, tiazolidina, y tiomorfolina.

Otros ejemplos de grupos heterociclilo C_{3-20} incluyen, pero no están limitados a, oxadiacina y oxatiacina.

Algunos ejemplos de grupos heterociclilo que, además, llevan uno o varios grupos oxo (=0), incluyen, pero no están limitados a, los derivados de:

C_{5} heterocíclicos, tales como furanona, pirona, pirrolidona (pirrolidinona), pirazolona (pirazolinona), imidazolidona, tiazolona, y isotiazolona;

C_{6} heterocíclicos, tales como piperidinona (piperidona), piperidinediona, piperacinona, piperacinediona, piridacinona, y pirimidinona (por ejemplo, citosina, timina, uracilo), y ácido barbitúrico;

heterocíclicos fusionados, como la oxindol, purinona (por ejemplo, guanina), benzoxazolinona, benzopirona (por ejemplo, cumarina);

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anhídridos cíclicos (-C(=O)-OC(=O)- en un anillo), incluidos pero no estando limitados a anhídrido maleico, anhídrido succínico, y el anhídrido glutárico;

carbonatos cíclicos (-OC(=O)-O- en un anillo), como el carbonato de etileno y 1,2-carbonato de propileno;

imidas (-C(=O)-NR-C(=O)- en un anillo), incluyendo pero no estando limitados a, succinimida, maleimida, ftalimida, y glutarimida;

lactonas (ésteres cíclicos, -OC(=O)- en un anillo), incluyendo pero no estando limitados a, \beta-propiolactona, \gamma-butirolactona, 5-valerolactona (2-piperidona), y \varepsilon-caprolactona;

lactámicos (amidas cíclicas, -NR-C(=O)- en un anillo), incluyendo pero no estando limitados a, \beta-propiolactama, y-butirolactama (2-pirrolidona), 5-valerolactama, y \varepsilon-caprolactama;

carbamatos cíclicos (-OC(=O)-NR- en un anillo), tales como 2-oxazolidona;

ureas cíclicas (-NR-C(=O)-NR- en un anillo), tales como 2-imidazolidona y pirimidina-2,4-diona (por ejemplo, timina, uracilo).

C_{5-20} arilo: El término "C_{5-20} arilo", como aquí se utiliza, se refiere a una porción monovalente que se obtiene eliminando un átomo de hidrógeno de un átomo en el anillo aromático de compuesto aromático C_{5-20}, dicho compuesto tiene un anillo, o dos o más anillos (por ejemplo, fusionados), y tener de 5 a 20 átomos en el anillo, y en donde al menos uno de dichos anillo(s) es un anillo aromático. Preferiblemente, cada anillo tiene de 5 a 7 átomos en el
anillo.

Los átomos en el anillo pueden ser todos átomos de carbono, como en "grupos carboaril", en cuyo caso el grupo puede ser convenientemente denominado grupo "C_{5-20} carboaril".

Ejemplos de grupos arilo C_{5-20} que no tienen heteroátomos en el anillo (es decir, grupos carboarilo C_{5-20}) incluyen, pero no están limitados a, los derivados de benceno (es decir, fenilo) (C_{6}), naftaleno (C_{10}), antraceno (C_{14}), fenantreno (C_{14}), naftaceno (C_{18}), y pireno (C_{16}).

Ejemplos de grupos arilo que comprenden anillos fusionados, uno de los cuales no es un anillo aromático, incluyen, pero no están limitados a, los grupos derivados de indeno y fluoreno.

Alternativamente, los átomos pueden incluir uno o más heteroátomos, incluyendo pero no estando limitados a, oxígeno, nitrógeno y azufre, como en "grupos heteroarilo". En este caso, el grupo puede ser convenientemente denominado grupo "heteroarilo C_{5-20}", en donde "C_{5-20}" denota átomos en el anillo, ya sean átomos de carbono o heteroátomos. Preferentemente, cada anillo tiene de 5 a 7 átomos en el anillo, de los cuales 0 a 4 son heteroátomos anillo.

Ejemplos de grupos heteroarilo C_{5-20} incluyen, pero no están limitados a, grupos heteroarilo C_{5} derivados del furano (oxole), tiofeno (tiol), pirrol (azol), imidazol (1,3-diazol), pirazol (1,2-diazol), triazol, oxazol, isoxazol, tiazol, isotiazol, oxadiazol, y oxatriazol, y grupos heteroarilo C_{6} derivados de isoxacina, piridina (acina), piridacina (1,2-diacina), pirimidina (1,3-diacina, por ejemplo, citosina, timina, uracilo), piracina (1,4-diacina), triacina, tetrazol, y oxadiazol (furazan).

Ejemplos de grupos heteroarilo C_{5-20} que comprenden anillos fusionados incluyen, pero no están limitados a, grupos heterocíclicos C_{9} derivados de benzofurano, isobenzofurano, indol, isoindol, purina (por ejemplo, adenina, guanina), benzotiofeno, benzimidazol; grupos heterocíclicos C_{10} derivados de quinolina, isoquinolina, benzodiacina, piridopiridina, quinoxalina; grupos heterocíclicos C_{13} derivados de carbazol, dibenzotiofeno, dibenzofurano; grupos heterocíclicos C_{14} derivados de la acridina, xanteno, fenoxatiina, fenacina, fenoxacina, fenotiacina.

Los grupos anteriores C_{1-7} alquilo, C_{3-20} heterociclilo, y C_{5-20} arilo, ya sea solos o como parte de otro sustituyente, sí pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más grupos seleccionados de sí mismos y de los sustituyentes adicionales que figuran a continuación.

Halógeno: -F, -Cl, -Br, y -I.

Hidroxi: -OH.

Éter: -O, donde R es un sustituyente éter, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7} (también conocido como C_{1-7} grupo alcoxi, discutido más adelante), un grupo heterociclilo C_{3-20} (también conocido como grupo heterocicliloxi C_{3-20}), o un grupo arilo C_{5-20} (también conocido como grupo ariloxi C_{5-20}), de preferencia un grupo alquilo C_{1-7}.

C_{1-7} alcoxi: -O, donde R es un grupo alquilo C_{1-7}. Ejemplos de grupos alcoxi C_{1-7} incluyen, pero no están limitados a, -OCH_{3} (metoxi), -OCH_{2}CH_{3} (etoxi) y -OC (CH_{3})_{3} (terc-butoxi).

C_{1-2} alcdioxileno: El término "C_{1-2} alcdioxileno", como aquí se utiliza, se refiere a una porción bidentada obtenida por la eliminación de dos átomos de hidrógeno de cada uno de dos grupos diferentes de alcohol de un compuesto diol de hidrocarburo C_{1-2} a partir del 1 o 2 átomos de carbono, es decir, CH_{2}(OH)_{2} y HO-CH_{2}-CH_{2}-OH, para formar -O-CH_{2}-O- y -O-CH_{2}-CH_{2}-O. Esta fracción bidentada puede ser el grupo sustituyente de un solo átomo o de dos átomos adyacentes.

Oxo (ceto, -ona):=O. Ejemplos de compuestos cíclicos y/o grupos que tienen, como sustituyente, un grupo oxo (=O) incluyen, pero no están limitados a, carbocíclicos como ciclopentanona y ciclohexanona; heterocíclicos, como pirona, pirrolidona, pirazolona, pirazolinona, piperidona, piperidinediona, piperazinediona e imidazolidona; anhídridos cíclicos, incluyendo pero no limitados a, anhídrido maleico y anhídrido succínico; carbonatos cíclicos, como carbonato de propileno; imidas, incluyendo pero no limitados a, succinimida y maleimida, lactonas (ésteres cíclicos, -OC(=O)- en un anillo), incluyendo pero no limitados a, \beta-propiolactona, \gamma-butirolactona, 5-valerolactona, y \varepsilon-caprolactona y lactámicos (amidas cíclicas, -NH-C(=O)- en un anillo), incluyendo pero no limitados a, \beta-propiolactama, \gamma-butirolactama (2-pirrolidona), 5-valerolactama, y \varepsilon-caprolactama.

Imino (imina): =NR, en donde R es un sustituyente imino, por ejemplo, hidrógeno, grupo alquilo C_{1-7}, heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferentemente de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1-7}. Algunos ejemplos de grupos éster incluyen, pero no están limitados a, =NH, =NMe, =NEt, y =NPh.

Formil (carbaldehído, carboxaldehído): -C(=O)H.

Acilo (Keto): -C (=O)_{R}, donde R es un sustituyente de acilo, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7} (también conocido como C_{1-7} alquilacil o C_{1-7} alcanoil), un heterociclilo C_{3-20} (también conocido como C_{3-20} heterociclilacil), o un grupo arilo C_{5-20} (también conocido como C_{5-20} arilacil), de preferencia un grupo alquilo C_{1-7}. Ejemplos de grupos acilo incluyen, pero no están limitados a, -C(=O)CH_{3} (acetil), -C(=O)CH_{2}CH_{3} (propionil), -C(=O)C (CH3)_{3} (butiril), y -C(=O)Ph (de benzoilo, fenona).

Carboxílicos (ácido carboxílico): -COOH.

Éster (carboxilato, ésteres de ácido carboxílico, oxicarbonil): -C(=O)O, en el que R es un sustituyente éster, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferiblemente un grupo alquilo C_{1-7}. Algunos ejemplos de grupos éster incluyen, pero no están limitados a, -C(=O)OCH_{3}, -C(=O)OCH_{2}CH_{3}, -C(=O) OC(CH_{3})_{3}, y -C(=O)OPh.

Aciloxi (éster inverso): -OC(=O)R, donde R es un sustituyente aciloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferiblemente un grupo alquilo C_{1-7}. Ejemplos de grupos de aciloxi incluyen, pero no están limitados a, -OC(=O)CH_{3} (acetoxi), -OC(=O) CH_{2C}H_{3}, -OC(=O)C(CH_{3})_{3}, -OC(=O)Ph, y
-OC((=O)CH_{2}Ph.

Amido (carbamoil, carbamil, aminocarbonil, carboxamida): -C(=O)NR^{1}R^{2}, donde R^{1} y R^{2} son independientemente sustituyentes aminoácidos, tal como se define a los grupos amino. Algunos ejemplos de grupos amido incluyen, pero no están limitados a, -C(=O)NH_{2}, -C(=O) NHCH_{3}, -C(=O)N(CH3)_{2,} -C(=O)NHCH_{2}CH_{3}, y -C(=)N(CH_{2}CH_{3})_{2}, así como los grupos amido en los que que R^{1} y R^{2}, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman una estructura heterocíclica como, por ejemplo, piperidinocarbonil, morfolinocarbonil, tiomorfolinocarbonil, y piperacinocarbonil.

Acilamido (acilamino): -NR^{1}C(=O)R^{2}, donde R^{1} es un sustituyente amida, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-7}, un heterociclilo Z_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferentemente de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1-7}, y R^{2} es un sustituyente de acilo, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo C_{1-7}. Ejemplos de grupos de acilamida incluyen, pero no están limitados a, -NHC(=O)CH_{3}, -NHC(=O)CH_{2}CH_{3}, y -NHC(=O)Ph. R^{1} y R^{2} pueden formar juntos una estructura cíclica, como en, por ejemplo, succinimidil, maleimidil y ftalimidil:

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Tioamido (tiocarbamil): -C(=S)NR^{1}R^{2}, donde R^{1} y R^{2} son independientemente sustituyentes aminoácidos, tal como se define a los grupos amino. Algunos ejemplos de grupos amido incluyen, pero no están limitados a, -C(=S)NH_{2}, -C(=S)NHCH_{3}, -C(=S)N(CH_{3})_{2}, y -C(=S)NHCH_{2}CH_{3}.

Tetrazolil: un anillo aromático de cinco miembros con cuatro átomos de nitrógeno y un átomo de carbono,

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Amino: -NR^{1}R^{2}, donde R^{1} y R^{2} son independientemente sustituyentes amino, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-7} (también conocido como C_{1-7} alquilamino o di-C_{1-7} alquilamino), un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferentemente H o un grupo alquilo C_{1-7}, o, en el caso de un "grupo amino cíclico", R^{1} y R^{2}, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo heterocíclico de 4 a 8 átomos en el anillo. Ejemplos de grupos amino incluyen, pero no están limitados a, -NH_{2}, -NHCH_{3}, -NHC(CH_{3})_{2}, -N(CH_{3})_{2}, -N(CH_{2}CH_{3})_{2}, y -NHPh. Algunos ejemplos de grupos amino cíclico incluyen, pero no están limitados a, aciridino, acetidino, pirrolidino, piperidino, piperacino, morfolino, y tiomorfolino.

Imino: = NR, en donde R es un sustituyente imino, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferentemente H o un grupo alquilo C_{1-7}.

Amidina: -C(=NR)NR_{2}, en donde cada R es un sustituyente amidina, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferentemente H o un grupo alquilo C_{1-7}. Un ejemplo de un grupo de amidina es -C(=NH)NH_{2}.

Nitro: -NO_{2}.

Nitroso: -NO.

Azido: -N_{3}.

Ciano (nitrilo, carbonitrilo): -CN.

Isociano: -NC.

Cianato: -OCN.

Isocianato: -NCO.

Tiociano (tiocianato): -SCN.

Isotiociano (isotiocianato): -NCS.

Sulfhidrilo (tiol, mercapto): -SH.

Tioéter (sulfuro): -SR, donde R es un sustituyente tioéter, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7} (también conocido como grupo alquiltio C_{1-7}), un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferiblemente un grupo alquilo C_{1-7}. Ejemplos de grupos alquiltio C_{1-7} incluyen, pero no están limitados a, -SCH_{3} y -SCH_{2}CH_{3}.

Disulfuro: -SS-R, donde R es un sustituyente disulfuro, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferiblemente un grupo alquilo C_{1-7} (también denominado en C_{1-7} disulfuro de alquilo). Ejemplos de grupos alquilo disulfuro C_{1-7} incluyen, pero no están limitados a, -SSCH_{3} y SSCH_{2}CH_{3}.

Sulfona (sulfonil): -S(=O)_{2}R, donde R es un sustituyente sulfona, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferiblemente un grupo alquilo C_{1-7}. Ejemplos de grupos sulfona incluyen, pero no están limitados a, -S(=O)_{2}CH_{3} (metanosulfonilo, mesil), -S(=O)_{2}CF_{3} (triflil), -S(=O)_{2}CH_{2}CH_{3}, -S(=O)_{2}C_{4}F_{9} (nonaflil), -S(=O)_{2}CH_{2}CF_{3} (tresil), -S(=O)_{2}Ph (fenilsulfonil), 4-metilfenilsulfonil (tosilo), 4-bromofenilsulfonil (brosil), y 4-nitrofenil (nosil).

Sulfina (sulfinil, sulfóxido): -S(=O)R, donde R es un sustituyente sulfina, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferiblemente un grupo alquilo C_{1-7}. Ejemplos de grupos de sulfina incluyen, pero no están limitados a, -S(=O)CH_{3} y -S (=O)CH_{2}CH_{3}.

Sulfoniloxi: -OS(=O)_{2}R, donde R es un sustituyente sulfoniloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferiblemente un grupo alquilo C_{1-7}. Ejemplos de grupos de sulfoniloxi incluyen, pero no están limitados a, -OS(=O)_{2}CH_{3} y -OS(=O)_{2}CH_{2}CH_{3}.

Sulfiniloxi: -OS(=O)R, donde R es un sustituyente sulfiniloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7}, un C_{3-20} heterociclilo, o un grupo arilo C_{5-20}, preferiblemente un grupo alquilo C_{1-7}. Ejemplos de grupos de sulfiniloxi incluyen, pero no están limitados a, -OS(=O)CH_{3} y -OS(=O) CH_{2}CH_{3}.

Sulfamino: -NR^{1}S(=O)_{2}OH, donde R^{1} es un sustituyente amino, tal como se define a los grupos amino. Ejemplos de grupos de sulfamino incluyen, pero no están limitados a, -NHS(=O)_{2}OH y -N(CH_{3})S(=O)_{2}OH.

Sulfonamino: -NR^{1}S(=O)_{2}R, donde R^{1} es un sustituyente amino, tal como se define a los grupos amino, y R es un sustituyente sulfonamino, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferiblemente un grupo alquilo C_{1-7}. Ejemplos de grupos de sulfonamino incluyen, pero no están limitados a, -NHS(=O)_{2}CH_{3} y
-N(CH_{3})S(=O)_{2}C_{6}H_{5}.

Sulfinamino: -NR^{1}S(=O)R, donde R^{1} es un sustituyente amino, tal como se define a los grupos amino, y R es un sustituyente sulfinamino, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5}-_{20}, preferiblemente un grupo alquilo C_{1-7}. Ejemplos de grupos sulfinamino incluyen, pero no están limitados a, -NHS(=O) CH_{3} y -N(CH_{3})S(=O)C_{6}H_{5}.

Sulfamil: -S(=O)NR^{1}R^{2}, donde R^{1} y R^{2} son sustituyentes independientemente aminoácidos, tal como se define a los grupos amino. Ejemplos de grupos de sulfamil incluyen, pero no están limitados a, -S(=O)NH_{2}, -S(=O)NH (CH_{3}), -S(=O)N_{(}CH_{3})2, -S(=O)NH(CH_{2}CH_{3}), -S(=O)N(CH_{2}CH_{3})_{2}, y -S(=O)NHPh.

Sulfonamino: -NR^{1}S(=O)_{2}R, donde R^{1} es un sustituyente amino, tal como se define a los grupos amino, y R es un sustituyente sulfonamino, por ejemplo, un grupo alquilo C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferiblemente un grupo alquilo C_{1-7}. Ejemplos de grupos de sulfonamino incluyen, pero no están limitados a,
-NHS(= O)_{2}CH_{3} y -N(CH_{3})S(=O)_{2}C_{6}H_{5}. Una clase especial de los grupos de sulfonamino son los derivados de sultams - en uno de estos grupos de R^{1} y R es un grupo arilo C_{5-20}, preferiblemente fenilo, mientras que el otro de R^{1} y R es un grupo bidentado que enlaza con el grupo arilo C_{5-20}, como un grupo bidentado derivado de un C_{1-7} grupo alquilo. Ejemplos de estos grupos incluyen, pero no están limitados a:

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Fosforamidita: -OP(OR^{1})-NR^{2}_{2'} donde R^{1} y R^{2} son sustituyentes fosforamidita, por ejemplo, -H, un grupo alquilo (opcionalmente sustituido) C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferentemente -H, un grupo alquilo C_{1-7}, o un grupo arilo C_{5-20}. Ejemplos de grupos de fosforamidita incluyen, pero no están limitados a, -OP (OCH_{2}CH_{3})-N(CH_{3})_{2}, -OP(OCH_{2}CH_{3})-N(i-Pr)_{2}, y -OP(OCH_{2}CH_{2}NC)-N(i-Pr)_{2}.

Fosforamidato: -OP(=O)(OR^{1})-NR^{2}_{2}, donde R^{1} y R^{2} son sustituyentes fosforamidato, por ejemplo, -H, un grupo alquilo (opcionalmente sustituido) C_{1-7}, un heterociclilo C_{3-20}, o un grupo arilo C_{5-20}, preferentemente -H, un grupo alquilo C_{1-7}, o un grupo arilo C_{5}-_{20}. Ejemplos de grupos fosforamidato incluyen, pero no están limitados a, -OP(=O) (OCH_{2}CH_{3})-N(CH_{3)2}, -OP(=O)(OCH_{2}CH_{3})-N(i-Pr)_{2}, y -OP(=O) (OCH_{2}CH_{2}NC)-N(i-Pr)_{2}.

En muchos casos, los sustituyentes pueden ser asimismo sustituidos. Por ejemplo, un grupo alcoxi C_{1-7} puede ser sustituido, por ejemplo, por un C_{1-7} alquilo (también conocido como C_{1-7} alquilo-grupo alcoxi C_{1-7}), por ejemplo, ciclohexilmetoxi, un heterociclilo C_{3}-_{20} (también conocido como aril C_{5-20} -grupo alcoxi C_{1-7}), para ftalimidoetoxi ejemplo, o un grupo arilo C_{5-20} (también conocido como aril C_{5-20}- grupo alcoxi C_{1-7}), por ejemplo, benziloxi.

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Anillo C_{5-7}

El anillo C_{5-7} en R^{3} tiene al menos dos enlaces dobles carbono-carbono, en virtud de su fusión en un anillo de benceno o piridina y un anillo de benceno adicional.

El átomo de nitrógeno del anillo del grupo piridil no forma parte del anillo C_{5-7}.

Así, el anillo C_{5-7} puede ser un heterociclo C_{5-7} que contiene azufre, un heterociclo C_{5-7} de oxígeno, un heterociclo C_{5-7} que contiene nitrógeno o un grupo cíclico C_{5-7} que contiene al menos 5 átomos de carbono en el anillo.

El segundo grupo puente normalmente puede ser un enlace simple (que resulta en un anillo C_{5}), o tener 1 o 2 átomos en una cadena (que resulta en anillos C_{6} y C_{7}, respectivamente), dichos átomos siendo seleccionados de C, S, O y N, con la sustitución, según proceda.

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Heterociclo C_{5-7} que contienen azufre

El heterociclo C_{5-7} que contiene azufre en R^{3} tendrá al menos dos enlaces dobles carbono-carbono, en virtud de su fusión en un anillo de benceno o piridina y un anillo de benceno adicional. Ejemplos de azufre C_{5-7} relevantes que contienen heterociclos incluyen, pero no están limitados a:

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7

8

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El heterociclo C_{5-7} que contiene azufre puede ser sustituido (cuando sea posible) por el grupo sustituyente mencionado anteriormente.

Los grupos mostrados anteriormente en particular, pueden ser sustituidos en el átomo de azufre en el primer grupo puente por uno o dos grupos oxo (=O).

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Heterociclo C_{5-7} que contiene oxígeno

El heterociclo C_{5-7} que contiene oxígeno en R^{3} tendrá al menos dos enlaces dobles carbono-carbono, en virtud de su fusión en un anillo de benceno o piridina y un anillo de benceno adicional. Ejemplos de heterociclos C_{5-7} relevantes que contienen oxígeno incluyen, pero no están limitados a:

1000

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El heterociclo C_{5-7} que contiene oxígeno puede ser sustituido (cuando sea posible) por los grupos sustituyentes enumerados anteriormente.

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Heterociclo C_{5-7} que contiene nitrógeno

El heterociclo C_{5-7} que contienen nitrógeno en R^{3} tendrá al menos dos enlaces dobles carbono-carbono, en virtud de su fusión en un anillo de benceno o piridina y un anillo de benceno adicional. Ejemplos de heterociclos C_{5-7} relevantes que contienen nitrógeno incluyen, pero no están limitados a (ilustrado con R^{N} = H);

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11

1100

El heterociclo C_{5-7} que contiene nitrógeno puede ser sustituido (cuando sea posible) por el grupo sustituyente mencionado anteriormente. En particular, el átomo de nitrógeno en el primer grupo puente puede ser sustituida por R^{N}.

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Grupo cíclico C_{5-7} que contiene un mínimo de 5 átomos de carbono en el anillo

El grupo cíclico C_{5}-_{7} que contiene un mínimo de 5 átomos de carbono en el anillo en R^{3} tendrá al menos dos enlaces dobles carbono-carbono, en virtud de ser fusionados en un anillo de benceno o piridina y un anillo de benceno adicional. Ejemplos de grupos cíclicos C_{5-7} relevantes que contiene un mínimo de 5 átomos de carbono en el anillo incluyen, pero no están limitados a:

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El grupo cíclico C_{5-7} que contiene un mínimo de 5 átomos de carbono en el anillo pueden ser sustituidos (cuando sea posible) por el grupo sustituyente mencionado anteriormente.

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Posibles Estructuras R^{3}

En consecuencia, cuando el grupo fenilo o piridilo está unido a un anillo de benceno adicional, R^{3} puede tener la siguiente estructura, donde el grupo fenilo o piridil y el anillo de benceno adicional se muestran como anillos de benceno, sin que esto sea limitativo, y donde X puede ser O, S, S(=O), S(=O)_{2}, NR^{N} y CR^{C1}R^{C2}:

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con la sustitución según sea apropiado, en las estructuras núcleo anteriores.

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Si el primer grupo en I^{3} es un grupo piridil, en lugar del grupo fenilo como se ilustró anteriormente, el átomo de nitrógeno del anillo puede estar en cualquier posición disponible del anillo.

El primer puente puede estar situado en cualquier posición posible del grupo fenilo en R^{3} y el segundo grupo puente opcional puede estar situado junto a cada átomo del grupo fenil (si es posible). Por lo tanto, el grupo R^{3} resultante (en general) puede ser un radical en un número de posiciones posibles en el anillo benceno unido a la porción central, por ejemplo, el siguiente grupo R^{3} posible (xantenil no sustituido):

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puede ser un radical en las posiciones 1, 2, 3 ó 4.

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Otras formas incluidas

Incluidas en lo anterior están las formas iónica, sal, solvato, y protegida conocidas de estos sustituyentes. Por ejemplo, una referencia al ácido carboxílico (-COOH) también incluye la forma aniónica (carboxilato) (-COO^{-}), una sal o solvato de la misma, así como las formas protegidas convencionales. Del mismo modo, una referencia a un grupo amino incluye la forma protonada (-N^{+}HR^{1}R^{2}), una sal o solvato del grupo amino, por ejemplo, una sal de clorhidrato, así como las formas protegidas de un grupo amino. Del mismo modo, una referencia a un grupo hidroxilo también incluye la fórmula de aniónica (-O^{-}), una sal o un solvato de la misma, así como las formas convencionales protegidas de un grupo hidroxilo.

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Isómeros, sales, solvatos, formas protegidas, y profármacos

Ciertos compuestos pueden existir en una o más formas geométricas, ópticas, enantiómeras, diastereomérica, epiméricas, estereoisómeros, tautoméricas, conformacionales, o anoméricas, incluyendo pero no estando limitadas a, cis y trans, formas E y Z, formas c-, t-, y r-; formas endo- y exo-, formas R-, S-, y meso-, formas D- y L-, formas d- y 1-, formas (+) y (-); formas ceto-, enol-, y enolato-; formas sin- y anti-; formas sinclinal y anticlinal, formas \alpha- y \beta-, las formas axiales y ecuatoriales, barco, silla, "twist", sobre, y las formas media silla, y combinaciones de las mismas, en lo sucesivo referidas como "isómeros" (o "formas isoméricas").

Ténganse en cuenta que, excepto como se explica a continuación para formas tautoméricas, se excluyen expresamente del término "isómeros", como se utiliza aquí, los isómeros estructurales (o constitucionales) (es decir, isómeros que difieren en las conexiones entre los átomos y no sólo por la posición de los átomos en el espacio). Por ejemplo, una referencia a un grupo metoxi, -OCH_{3}, no debe interpretarse como una referencia a su isómero estructural, un grupo hidroximetil, -CH_{2}OH. Del mismo modo, una referencia a la orto-clorofenil no debe interpretarse como una referencia a su isómero estructural, meta-clorofenil. Sin embargo, una referencia a una clase de estructuras pueden incluir formas estructuralmente isoméricas que entran dentro de esta clase (por ejemplo, alquilo C_{1-7} incluye n-propilo e iso-propilo; butilo incluye n-, iso-, sec- y terc-butilo; metoxifenil incluye orto-, meta- y para-metoxifenil).

La exclusión anterior no se refiere a formas tautoméricas, por ejemplo, formas ceto-, enol-, y enolato-, como, por ejemplo, los pares tautoméricos siguientes: ceto/enol (ilustrado a continuación), imina/enamina, amida/imino alcohol, amidina/amidina, nitroso/oxima, tiocetona/enetiol, N-nitroso/hiroxiazo, y N-nitroso/aci-nitro.

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Ténganse en cuenta que se incluyen específicamente específicamente en el término "isómero" compuestos con una o más sustituciones isotópicas. Por ejemplo, H puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo ^{1}H, ^{2}H(D), y ^{3}H(T), C puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo ^{12}C, ^{13}C, y ^{14}C; O pueden estar en cualquier forma isotópica, incluyendo ^{16}O y ^{18}O_{;} y similares.

A menos que se especifique lo contrario, una referencia a un compuesto particular incluye todas esas formas isoméricas, incluidas (total o parcialmente) las mezclas racémica y otros de la misma. Procedimientos de preparación (por ejemplo, la síntesis asimétrica) y separación (por ejemplo, la cristalización fraccionada y medios cromatográficos) de las formas isoméricas son conocidos en la técnica o se obtienen fácilmente mediante la adaptación de los procedimientos enseñados en aquí, o los procedimientos ya conocidos, de un modo conocido.

A menos que se especifique lo contrario, una referencia a un compuesto en particular también incluye las formas iónica, sal, solvato, y protegida del mismo, por ejemplo, como se discute a continuación.

Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manejar una sal correspondiente del compuesto activo, por ejemplo, una sal farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se describen en Berge et al., 1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts", J. Pharm. Sci., Vol. 66, pp. 1-19.

Por ejemplo, si el compuesto es aniónico, o tiene un grupo funcional que puede ser aniónico (por ejemplo, -COOH puede ser -COO^{-}), luego puede formarse una sal con un catión adecuado. Ejemplos de cationes inorgánicos adecuados incluyen, pero no están limitados a, los iones de metales alcalinos como el Na^{+} y K^{+}, cationes alcalinos térreos tales como Ca^{2+} y Mg^{2+}, y otros cationes como Al^{3+}. Ejemplos de cationes orgánicos apropiados incluyen, pero no están limitados a, el ión amonio (es decir, NH_{4}^{+}) y los iones de amonio sustituido (por ejemplo, NH_{3}R^{+}, NH_{2}R2^{+}, NHR_{3}^{+}, NR_{4}^{+}). Ejemplos de algunos iones de amonio sustituido adecuados son aquellos derivados de: etilamina, dietilamina, diciclohexilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperacina, bencilamina, fenilbencilamina, colina, meglumina, y trometamina, así como los aminoácidos lisina y arginina. Un ejemplo de ion común de amonio cuaternario es N(CH_{3})_{4}^{+}.

Si el compuesto es catiónico, o tiene un grupo funcional que puede ser catiónico (por ejemplo, -NH_{2} puede ser -NH_{3}^{+}), entonces puede formarse una sal con un anión adecuado. Ejemplos de aniones inorgánicos adecuados incluyen, pero no están limitados a, los derivados de los ácidos inorgánicos siguientes: clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, sulfúrico, sulfuroso, nítrico, nitroso, fosfórico y fosforoso. Ejemplos de aniones orgánicos apropiados incluyen, pero no están limitados a, aquellos derivados de los ácidos orgánicos siguientes: acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, palmítico, láctico, málico, pamoico, tartárico, cítrico, glucónico, ascórbico, málico, hidroximaleico, fenilacético, glutámico, aspártico, benzoico, cinámico, pirúvico, salicílico, sulfanílico, 2-acetioxibenzoico, fumárico, fenilsulfónico, toluensulfónico, metansulfónico, etano sulfónico, etano disulfónico, oxálico, pantoténico, isetiónico, valérico, lactobiónico, y glucónico. Ejemplos de aniones poliméricos adecuados incluyen, pero no están limitados a, los derivados de los siguientes ácidos polímeros: ácido tánico, carboximetil celulosa.

Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manejar un solvato correspondiente del compuesto activo. El término "solvato" se utiliza aquí en el sentido convencional del término para referirse a un complejo de soluto (por ejemplo, compuesto activo, sal de compuesto activo) y el disolvente. Si el disolvente es agua, el solvato puede ser convenientemente contemplado como un hidrato, por ejemplo, un mono-hidrato, un di-hidrato, un tri-hidrato, etc.

Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manejar el compuesto activo en una forma químicamente protegida. El término "forma químicamente protegida", como aquí se utiliza, se refiere a un compuesto en el que uno o más grupos funcionales reactivos están protegidos de las reacciones químicas no deseadas, es decir, están en la forma de un grupo protegido o protector (también conocido como un grupo enmascarado o de enmascaramiento o un grupo bloqueado o de bloqueo). Mediante la protección de un grupo funcional reactivo, pueden realizarse reacciones que implican otros grupos reactivos funcionales no protegidos, sin afectar al grupo protegido; el grupo de protección se puede extraer, por lo general en un paso posterior, sin afectar sustancialmente el resto de la molécula. Véase, por ejemplo, Protective Groups in Organic Synthesis (T. Green y P. Wuts, Wiley, 1999).

Por ejemplo, un grupo hidroxilo puede ser protegido como un éter (-O) o un éster (-OC(=O)R), por ejemplo, como: un t-butil éter, un bencilo, benzhidrilo (difenilmetil), o tritil(trifenilmetilo) éter, un trimetilsilil o t-butildimetilsilil éter, o un éster de acetilo (-OC(=O) CH_{3}, -OAC).

Por ejemplo, un grupo aldehído o cetona puede ser protegido como un acetal o cetal, respectivamente, en el que el grupo carbonilo (>C=O) se convierte en un diéter (>C(O)_{2}), por reacción, por ejemplo un alcohol primario. El grupo aldehído o cetona es fácilmente regenerado por hidrólisis utilizando un gran exceso de agua en presencia de ácido.

Por ejemplo, un grupo amino pueden estar protegido, por ejemplo, como una amida o un uretano, por ejemplo, como: una metilamida (-CH-NHCO_{3}), una benziloxiamida (-NHCO-OCH_{2}C_{6}H_{5}, -NH-CBZ), como una t-butoxiamida (-NHCO-OC (CH_{3})_{3}, -NH-Boc), una 2-bifenil-2-propoxi amida (-NHCO-OC (CH_{3})_{2}C_{6}H_{4}C_{6}H_{5}, -NH-Bpoc), como una 9-fluorenilmetoxi amida (-NH-Fmoc), como 6-nitroveratriloxi amida (-NH-Nvoc), como 2-trimetilsililetiloxi amida (-NH-Teoc), como un 2,2,2-tricloroetiloxi amida (-NH-Troc), como una aliloxi amida (-NH-Alloc), como 2(-fenilsulfonil)etiloxi amida (-NH-Psec), o, en casos apropiados, como N-óxido (>NO\cdot).

Por ejemplo, un grupo de ácidos carboxílicos pueden ser protegido como un éster, por ejemplo, como: un éster de alquilo C_{1-7} (por ejemplo, un éster metílico, un t-butilo), un éster haloalquilo C_{1-7} (por ejemplo, un éster trihaloalquil C_{1-7}), un tric alquilsilil-_{1-7} C_{1-7} éster de alquilo, o un C_{5-20} aril-C_{1-7} éster de alquilo (por ejemplo, un éster de bencilo; un éster de nitrobencil), o como una amida, por ejemplo, como una amida de metilo.

Por ejemplo, un grupo tiol puede ser protegido como un tioéter (-SR), por ejemplo, como: un tioéter de bencilo; acetamidometil éter (-S-CH_{2}NHC(=O)CH_{3}).

Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manejar el compuesto activo en la forma de un profármaco. El término "profármaco", como aquí se utiliza, se refiere a un compuesto que, cuando se metaboliza (por ejemplo, in vivo), produce el compuesto activo deseado. Normalmente, el profármaco está inactivo o menos activo que el compuesto activo, pero puede proporcionar propiedades de manipulación, administración, o metabólicas ventajosas.

Por ejemplo, algunos profármacos son ésteres de la sustancia activa (por ejemplo, un éster metabólicamente lábiles fisiológicamente aceptable). Durante el metabolismo, el grupo éster (-C(=O)OR) se rompe para producir el fármaco activo. Estos ésteres pueden ser formados por esterificación, por ejemplo, de cualquiera de los grupos carboxílicos
(-C(=O)OH) en el compuesto de origen, con, donde sea apropiado, la protección previa de cualquier otro grupo reactivo presente en el compuesto de origen, seguida de desprotección en caso necesario. Ejemplos de tales ésteres metabólicamente lábiles incluyen aquellos en donde R es C_{1-7} alquilo (por ejemplo, -Me, -Et), C_{1-7} aminoalquilo (aminoetil por ejemplo, 2-(N,N-dietilamino)etilo, 2-(4-morfolino)etil), y aciloxi-C_{1-7} alquilo (por ejemplo, aciloximetil; aciloxietil; pivaloiloximetil por ejemplo; acetoximetil.; 1-acetoxietil, 1-1-metoxi-1-metil) etilcarbonxiloxietil, 1-(benzoiloxi) etilo; isopropoxicarboniloximetil; 1-isopropoxi carboniloxietil; ciclohexilcarboniloximetil; 1-ciclohexil-carboniloxietil; ciclohexiloxi-carboniloximetil; 1-ciclohexiloxicarboniloxietil; (4-tetrahidropiraniloxi) carboniloximetil, 1-(4-tetrahidropiraniloxi) carboniloxietil; (4-tetrahidropiranil) carboniloximetil, y 1-(4-tetrahidropiranil)carboniloxietil).

Además, algunos profármacos son activados enzimáticamente para producir el compuesto activo, o un compuesto que, por reacción química adicional, produce el compuesto activo. Por ejemplo, el profármaco puede ser un derivado del azúcar u otro conjugado de glucósido, o puede ser un derivado éster de aminoácido.

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Otras preferencias

Las siguientes preferencias pueden ser diferentes para los diferentes aspectos de la presente invención, y puede ser combinadas juntas.

En los compuestos de fórmula I, es preferible que P es O y Q es CH, es decir, que el compuesto es de fórmula Ia.

Y es preferentemente O.

En la fórmula I R^{1} y R^{2} forman, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, un anillo heterociclo con 4 a 8 átomos. Es preferible que R^{1} y R^{2} formen, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidas, un anillo heterociclo con 5, 6 o 7 átomos, más preferentemente de 6 átomos.

Anillos individuales que tienen un átomo de nitrógeno incluyen azetidina, azetidina, pirrolidina (tetrahidropirrol), pirrolina (por ejemplo, 3-pirrolina, 2,5-dihidropirrol), 2H-pirrol o 3H-pirrol (isopirrol, isoazol), piperidina, dihidropiridina, tetrahidropiridina, y acepina, dos átomos de nitrógeno incluyen imidazolidina, pirazolidina (diazolidina), imidazolina, pirazolina (dihidropirazol), y piperacina, uno de nitrógeno y un oxígeno incluyen tetrahidrooxazol, dihidrooxazol, tetrahidroisoxazol, dihidroisoxazol, morfolina, tetrahidrooxacina, dihidrooxacina y oxacina, uno de nitrógeno y uno de azufre incluyen tiazolina, tiazolidina, y tiomorfolina.

Anillos preferidos son aquellos que contienen un heteroátomo además del nitrógeno, y, en particular, los heteroátomos preferidos son el oxígeno y el azufre. Así, los grupos preferidos incluyen morfolino, tiomorfolino, tiazolinil. Grupos preferidos sin un heteroátomo adicional incluyen pirrolidino.

Los grupos más preferidos son morfolino y tiomorfolino.

Como se mencionó anteriormente, estos mismos grupos heterocíclicos pueden ser sustituidos; una clase preferida de sustituyente es un grupo alquilo C_{1-7}. Cuando el grupo heterocíclico es morfolino, el grupo o grupos sustituyentes son preferentemente metilo o etilo, y más preferentemente metilo. Un sustituyente metilo único es más preferido en la posición 2.

Además de los grupos de un solo anillo antes mencionados, también se contemplan anillos con puentes o enlaces cruzados. Ejemplos de estos tipos de anillo donde el grupo contiene un átomo de nitrógeno y de oxígeno son:

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Estos se denominan 8-oxa-3-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il, 6-oxa-3-aza-biciclo[3.1.0]hex-3-il, 2-oxa-5-aza-biciclo[2.2.1]hept-5-il, y 7-oxa-3-aza-biciclo[4.1.0]hept-3-il, respectivamente.

En R^{3}, el grupo fenil o piridil es preferiblemente un grupo fenil.

Sustituyentes preferidos del anillo de fenil o piridil en R^{3} incluyen, pero no se limitan a, halógeno, hidroxi, C_{1-7} alquilo, C_{1-7} alcoxi, acilo, aciloxi, amino, nitro, ciano, tiol y C_{1-7} alquiltio, siendo los más preferidos halo e hidroxi.

Sustituyentes preferentes del anillo de fenil o piridil o del anillo de benceno en I^{3} también incluyen, pero no están limitados a, acilamido, sulfonamino, éter, éster, amido, amino y acilo.

En el grupo de acilamido, el sustituyente amida es preferentemente hidrógeno, y el sustituyente acilo es preferentemente seleccionados de éster (donde el sustituyente éster es alquilo o arilo), C_{1-7} alquilo (opcionalmente sustituido por éter, éster, C_{5-20} arilo, aciloxi, aminoácidos y heterociclilo), C_{5-20} arilo (opcionalmente sustituido por alcoxi, alquilo, alcoxi, éster y aril C_{5-20}) y heterociclilo C_{3-20} (opcionalmente substituidas por acil).

Un sustituyente acil particularmente preferido en el grupo de acilamido es de fórmula III:

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donde n es de 1 a 4, de preferencia 1 o 2, y R^{3} y R^{4} son independientemente hidrógeno, un grupo alquilo C_{1-7}, heterociclilo C_{3-20}, o grupo arilo C_{5-20} opcionalmente sustituidos, o en conjunto pueden formar, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido que tiene de 4 a 8 átomos en el anillo.

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En el grupo de sulfonamino, el sustituyente amino es preferentemente hidrógeno y el sustituyente sulfonamino es seleccionado a partir de alquilo C_{1-7} y arilo C_{5-20}.

En el grupo éter, el sustituyente del éter es preferentemente alquilo C_{1-7} (opcionalmente sustituido por amino, heterociclilo C_{3-20}, tioéter, y arilo C_{5-20}). Un sustituyente éter particularmente preferido es de fórmula III (definido con anterioridad).

En el grupo amido, los sustituyentes amido son preferentemente de forma independiente seleccionados a partir de hidrógeno y alquilo C_{1-7} (opcionalmente sustituido por heterociclilo C_{3-20}, arilo C_{5-20} y amino). Un sustituyente amido especialmente preferido es de fórmula III (definido con anterioridad).

En el grupo acilo, el sustituyente acilo es preferentemente heterociclilo C_{3-20}.

Estos sustituyentes son preferiblemente para con respecto a la posición del radical en el grupo fenil o piridil, y cuando el primer grupo puente es orto con respecto a la posición del radical en el grupo fenil o piridil, para con respecto al primer grupo puente en el anillo de benceno adicional.

Estructuras preferentes para R^{3} incluyen, pero no se limitan a los siguientes "grupos núcleo", que pueden soportar una sustitución en las posiciones adecuadas, en donde * indica la posición del radical preferida (que suele ser adyacente al primer grupo puente en el grupo fenil):

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siendo las estructuras de núcleos más preferidas:

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Grupos R^{3} especialmente preferidos incluyen:

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en donde R representa el grupo sustituyente apropiado, tal como se definió con anterioridad.

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Siglas

Para mayor comodidad, muchas porciones químicas están representadas utilizando abreviaturas conocidas, incluyendo pero no estando limitadas a, metilo (Me), etil (Et), n-propil (nPr), iso-propilo (iPr), n-butilo (nBu), terc-butilo (tBu), n-hexilo (nHex), ciclohexil (cHex), fenil (Ph), bifenilo (biPh), bencilo (Bn), naftil (Naph), metoxi (MeO), etoxi (EtO), benzoilo (Bz), acetil (Ac), 1,3-bis (difenilfosfino) propano (dppf).

Por conveniencia, muchos compuestos químicos están representados utilizando abreviaturas conocidas, incluyendo pero no estando limitados a, metanol (MeOH), etanol (EtOH), iso-propanol (i-PrOH), metil etil cetona (MEK), éter o dietil éter (Et_{2}O), ácido acético (AcOH), diclorometano (cloruro de metileno, DCM), ácido trifluoroacético (TFA), dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano (THF) y dimetilsulfóxido (DMSO).

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Vías de síntesis

Los compuestos de acuerdo con el primer aspecto de la invención, de fórmula Ia, donde Y=O, pueden ser sintetizados por el acoplamiento de un 2-cloro-6-amino-4-piranona a un ácido arilborónico apropiado o con un éster de boronato de arilo utilizando una reacción de acoplamiento catalizada por paladio, por ejemplo, acoplamiento de Suzuki. Los compuestos donde Y=S se pueden derivar del correspondiente compuesto donde Y=O.

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Síntesis de 2-cloro-6-amino-4-piranonas

Estos pueden ser sintetizados por la siguiente ruta:

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En la etapa (a) se añade CCl_{4} a través del doble enlace carbono-carbono de diceteno por adición de radicales libres para producir 4-cloro-4(2,2,2,-tricloro-etil)-oxetan-2-ona (1). Iniciadores adecuados incluyen peróxido, como BCHPO ((bis-4-t-butilciclohexilo) peroxidicarbonato).

En la etapa (b), la amina R^{1}R^{2}NH abre el anillo de lactona por el ataque nucleofílico al centro carbonilo. El anión oxi entonces generado desplaza el átomo de cloro en el carbono \alpha para dar lugar a una \beta-ceto-amida intermedia. La eliminación adicional de HCl finalmente da la 5,5-dicloro-1-amino-pent-4-eno-1,3-diona. Las condiciones adecuadas para este paso incluyen base inorgánica, tal como el hidrógeno carbonato de sodio y disolventes como diclorometano seco.

En la etapa (c), el cierre del anillo se lleva a cabo por el desplazamiento de uno de los grupos de 5-cloro por el oxígeno del grupo amida para formar el anillo de 4-4-piranona, cuya reacción es catalizada por un ácido de Lewis, como el ácido perclórico.

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Ácidos arilborónicos y ésteres de boronato de arilo

Algunos ácidos apropiados arilborónico y ésteres de boronato de arilo están comercialmente disponibles. Otros ácidos arilborónico apropiados y ésteres de boronato de arilo pueden ser sintetizados usando una de las siguientes rutas, en las que las materias primas están comercialmente disponibles o se sintetizan fácilmente. Por ejemplo, una ruta de síntesis de tioxantenona se describe en Archer, S., et al., J. Med. Chem., 25, 220-227, 1982, y la conversión de tioxantenona a tiotanxeno se describe en el Mlotkowska, BL, et al., J. Heterocyclic Chem., 28, 731-736, 1991. Otras vías se muestran en los ejemplos, e incluyen rutas en las que el anillo central C_{5-7} es sintetizado por el cierre del anillo a partir de un ácido carboxílico, opcionalmente seguido por la reducción de grupo ceto restante.

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Síntesis de ésteres de boronato de arilo

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donde R es el resto del grupo R^{3}.

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Los ésteres de boronato de arilo pueden estar formados por reacción de acoplamiento cruzado catalizada por Pd(0) del triflato de arilo adecuado o de haluro de arilo con tetra (alcoxi)diboro, por ejemplo, diboro pinacol. Las condiciones adecuadas incluyen el uso de un catalizador, como PdCl_{2}dppf, ligandos adicionales, tales como dppf, acetato de potasio como base, en un disolvente como el dioxano, DMF o DMSO.

Ejemplos de este procedimiento se encuentran en Ishiyama T, et al., Tet. Lett., Vol. 38, no. 19, 3447-3450, 1997 y A Giroux, et al., Tet. Lett., Vol. 38, no. 22, 3841-3844, 1997.

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Síntesis de ácidos aril bórico

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donde R es el resto del R^{3} grupo.

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Se pueden generar ácidos borónicos a través de litiación del anillo aromático por tert-butil litio seguido por la reacción del anión formado con borato de alquilo, como borato de trietilo, para producir el ácido arilborónico deseado.

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Acoplamiento catalizado con paladio

El acoplamiento del ácido arilborónico o éster de boronato de arilo a la 2-cloro-6-amino-4-piranona puede llevarse a cabo utilizando las condiciones normales, por ejemplo, un catalizador de paladio (Pd(PPh_{3})_{4}, Pd(dppf)Cl_{2}) y la base (Na_{2}CO_{3}, NaOCH_{2}CH_{3}, TlOH, N(CH_{2}CH_{3})_{3}, K_{3}PO_{4}).

Los compuestos de acuerdo con el primer aspecto de la invención, de fórmula Ib, donde Y=O pueden ser sintetizados de acuerdo con el procedimiento siguiente, donde R representa el resto de R^{3}:

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En la etapa (a), se añade CS_{2} al derivado de acetofenona, en presencia de una base, como el tert-butóxido de potasio, para obtener un ácido 3-aril-3-hidroxi-ditioacrilico.

En la etapa (b), el yodoetano experimenta un ataque nucleofílico por el tioácido activado, para obtener el éster etílico. La activación del tioácido puede lograrse mediante el uso de la base, por ejemplo, una mezcla de hidrogenosulfato de tetrabutilamonio y hidróxido de sodio.

En la etapa (c), una amina desplaza el grupo etilo, que es seguida en la etapa (d) por la reacción del grupo tio restante con yodoetano (a través del compuesto tautomérico).

La etapa final (e) es una condensación con bromoacetato de etilo para producir la 4-amino-6-aril-2-piranona de anillo cerrado.

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Conversión de Y a partir de O a S

Esta conversión se puede lograr con reactivo de Lawesson en un disolvente orgánico, como el tolueno, seguido por las etapas de purificación adecuadas. La protección de los grupos sensibles al reactivo de Lawesson puede llevarse a cabo antes de su uso, seguido de la desprotección una vez que la pirantiona ha sido sintetizada.

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Utilización de los compuestos de la invención

La presente invención proporciona compuestos activos, en concreto, 2-aril-6-amino-4-piranonas, 2-aril-6-amino-4-tiopiranonas, 4-amino-6-aril-2-piranonas y 4-amino-6-aril-2-tiopiranonas activas.

El término "activo", como aquí se utiliza, se refiere a los compuestos que son capaces de inhibir la actividad de ATM y, específicamente, incluye tanto compuestos con actividad intrínseca (fármacos), así como profármacos de dichos compuestos, cuyos profármacos pueden mostrar poca o ninguna actividad intrínseca.

Un ensayo que pueden utilizarse para evaluar la inhibición de ATM ofrecida por un compuesto en particular se describe en los siguientes ejemplos.

La presente invención proporciona además un procedimiento de inhibición de ATM en una célula, comprendiendo contactar dicha célula con una cantidad efectiva de un compuesto activo, preferiblemente en forma de una composición farmacéuticamente aceptable. Este procedimiento puede ser practicado in vitro.

Por ejemplo, una muestra de células (por ejemplo, de un tumor) puede ser cultivadas in vitro y un compuesto activo puesto en contacto con dichas células en conjunción con los agentes que tienen un efecto curativo conocido, y observar el aumento de los efectos curativos de la sustancia en las células.

La presente invención proporciona, además, compuestos activos que inhiben la actividad de ATM, así como los procedimientos de inhibición de la actividad ATM que comprenden contactar una célula con una cantidad efectiva de un compuesto activo, aún in vitro.

La invención también proporciona compuestos activos para su uso en un procedimiento de tratamiento del cuerpo humano o animal. Este procedimiento puede comprender la administración a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto activo, preferiblemente en forma de una composición farmacéutica.

El término "tratamiento" como se usa aquí en el contexto del tratamiento de una enfermedad, generalmente se refiere al tratamiento y la terapia, ya sea de un humano o un animal (por ejemplo, en aplicaciones veterinarias), en los que se logra algún efecto terapéutico deseado, por ejemplo, la inhibición del desarrollo de la condición, e incluye una reducción en la velocidad de progreso, una detención en el ritmo de progreso, mejoramiento de la condición, y la cura de la condición. El tratamiento como medida profiláctica (es decir, profilaxis) también se incluye.

El término "cantidad terapéuticamente efectiva", como aquí se utiliza, se refiere a la cantidad de un compuesto activo, o un material, la composición o la forma de dosificación que comprende un compuesto activo, que es efectiva para producir algún efecto terapéutico deseado, en consonancia con una relación beneficio/riesgo razonable.

Los presentes inventores han encontrado que los compuestos de la presente invención puede reprimir eficazmente la transducción de vectores retrovirales en una etapa, ensayos basados en la integración de células (denominado LUCIA) e inhibir la infección VIH-1 en ensayos de replicación de 4 días en concentraciones sub-micromolares. Además, en contraste con las observaciones de Daniel et al., donde se concluyó que el efecto de la ATM en la integración retroviral sólo se verá en un fondo deficiente DNA-PK, este efecto funciona en presencia de actividad funcional de ADN-PK.

La unión inicial de ADN retroviral lineal con el ADN cromosómico de la célula huésped es catalizada por la integrasa viral (IN) y da lugar a roturas de la cadena de ADN cortas escalonadas en el ADN de la célula huésped en el sitio de inserción (Brown, P.O. (1990) Integration of retroviral DNA. Curr Top Microbiol Immunol, 157, 19-48). Los intermedios de ADN incompleto se muestra que se percibía como lugares de daño en el ADN de la célula huésped y reparado por la vía de ATM para completar el proceso de integración productiva y permitir que ocurra la infección productiva. Compuestos de la invención impiden la reparación de los intermedios de ADN incompleto por la vía de ATM y evitan así la integración completa de ADN retroviral en el genoma del huésped.

Como se describió anteriormente, la invención proporciona un compuesto tal como se define en el primer aspecto de la invención para su uso en el tratamiento de la infección retroviral y el uso de compuestos de este tipo en la fabricación de un medicamento para su uso en el tratamiento de la infección retroviral.

Un compuesto de ejemplo de la invención que se demuestra que es útil en el tratamiento de la infección retroviral es 2-tiantren-1-il-6-morfolin-4-il-4-piranona (4).

Enfermedades con mediación retroviral que pueden ser tratadas como se describe anteriormente incluyen la infección por VIH y el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) y la infección de virus de la leucemia de células T humanas (HTLV), y sus enfermedades asociadas leucemia o linfoma de células T (ATLL) del adulto y la paraparesia espástica tropical/mielopatía asociada a HTLV-1 (TSP/HAM).

Los compuestos de la invención pueden ser utilizados en combinación con otras terapias antirretrovirales para suprimir la replicación del virus, por ejemplo, en una "terapia anti-retroviral altamente activa" o el tratamiento HAART.

La invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se describe aquí y uno o varios otros agentes anti-retrovirales.

La invención también proporciona una composición que comprende un compuesto según se define en el primer aspecto de la invención y uno o varios otros agentes anti-retrovirales para el tratamiento de una infección retroviral y el uso de dicha composición en la fabricación de un medicamento para su uso en el de tratamiento de una infección retroviral.

Agentes anti-retrovirales adecuados que inhiben la replicación retroviral, por ejemplo, retrovirales inhibidores de la proteasa (IP), tales como Sequinavir, Indinavir, Ritonavir y Nelfinavir, nucleósidos inhibidores de la transcriptasa inversa retroviral como 3'-azido-3'deoxitimidina (AZT, Zidovudina), 2',3'-Didesoxicitosina (ddC, Zalcitabina), 2',3'-didesoxiinosina (ddI, didanosina) y 3TC; (Lamivudina), e inhibidores de la transcriptasa inversa retroviral no nucleósidos, como la Nevirapina, Delavirdina y Efavirenz.

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Administración

El compuesto activo o composición farmacéutica que comprende el compuesto activo se puede administrar a un sujeto por cualquier vía adecuada de la administración, ya sea sistémica/periféricamente o en el sitio de la acción deseada, incluyendo pero no estando limitados a, por vía oral (por ejemplo, por ingestión); tópica (incluyendo por ejemplo, transdérmica, intranasal, ocular, bucal y sublingual), pulmonar (por ejemplo por inhalación o mediante terapia de insuflación, por ejemplo, un aerosol, por ejemplo, a través de la boca o la nariz); rectal; vaginal, parenteral, por ejemplo, por inyección, incluyendo subcutánea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intracardíaca, intratecal, intraespinal, intracapsular, subcapsular, intraorbital, intraperitoneal, intratraqueal, subcuticular, intraarticular, subaracnoidea, e intrasternal; por el implante de un depósito, por ejemplo, por vía subcutánea o intramuscularmente.

El sujeto puede ser una célula eucariota, un animal, un animal vertebrado, un mamífero, un roedor (por ejemplo, una cobaya, un hámster, una rata, un ratón), murino (por ejemplo un ratón), canino (por ejemplo, un perro), felino (por ejemplo, un gato), equino (por ejemplo, un caballo), un primate, simio (por ejemplo, un mono o simio), un mono (por ejemplo, mono tití, bauino), un mono (por ejemplo, gorilas, chimpancés, orangutanes, gibones), o un ser humano.

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Formulaciones

Si bien es posible que el compuesto activo sea administrado en solitario, es preferible presentarlo como una composición farmacéutica (formulación, por ejemplo) que comprende al menos un compuesto activo, según lo definido anteriormente, junto con uno o más portadores, adyuvantes, excipientes, diluyentes, rellenos, tampones, estabilizantes, conservantes, lubricantes, u otros materiales farmacéuticamente aceptables bien conocidos por los expertos en la materia y, opcionalmente, otros agentes terapéuticos o profilácticos.

Así, la presente invención dispone, además, de composiciones farmacéuticas, tal como se definen anteriormente, y procedimientos para fabricar una composición farmacéutica que comprende mezclar al menos un compuesto activo, según lo definido anteriormente, junto con uno o más portadores, excipientes, tampones, adyuvantes, estabilizadores, u otros materiales farmacéuticamente aceptables, como se describe en este documento.

El término "farmacéuticamente aceptable" como se usa aquí se refiere a los compuestos, materiales, composiciones, y/o formas de dosificación que, dentro del ámbito de aplicación del criterio médico sensato, apto para el uso en contacto con los tejidos de un sujeto (por ejemplo, humanos), sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica, o cualquier otro problema o complicación, en consonancia con una relación riesgo/beneficio razonable. Cada portador, excipiente, etc. también debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los demás ingredientes de la formulación.

Portadores, excipientes, etc. adecuados se pueden encontrar en los textos farmacéuticos estándar, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª edición, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990.

Las formulaciones pueden ser convenientemente presentadas en forma de dosis unitarias y pueden ser preparadas por cualquier procedimiento bien conocido en el sector de la farmacia. Estos procedimientos incluyen la etapa de la puesta en asociación del compuesto activo con el portador, que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan poniendo en uniforme e íntima asociación el compuesto activo con portadores líquidos o portadores sólidos finamente divididos, o ambos, y luego si es necesario dando forma al producto.

Las formulaciones pueden ser en forma de líquidos, soluciones, suspensiones, emulsiones, elixires, jarabes, comprimidos, pastillas de chupar, gránulos, polvos, cápsulas, píldoras, pastillas, ampollas, supositorios, pesarios, pomadas, geles, pastas, cremas, aerosoles, brumas, espumas, lociones, aceites, bolos, electuarios, o aerosoles.

Formulaciones adecuadas para administración oral (por ejemplo, por ingestión) pueden presentarse como unidades discretas tales como cápsulas, píldoras o comprimidos, conteniendo cada uno una determinada cantidad de la sustancia activa, en forma de polvo o gránulos, como una solución o suspensión en un líquido acuoso o no-acuoso, o en forma de emulsión líquida aceite-en-agua o una emulsión líquida de agua-en-aceite, como un bolo, como un electuario, o como una pasta.

Un comprimido puede hacerse por medios convencionales, por ejemplo, compresión o moldeado, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Los comprimidos pueden prepararse mediante la compresión en una máquina adecuada del compuesto activo en forma de flujo libre tales como polvo o gránulos, opcionalmente mezclada con uno o más aglutinantes (por ejemplo, povidona, gelatina, goma arábiga, sorbitol, tragacanto, hidroxipropilmetilcelulosa); rellenos o diluyentes (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina, hidrógenofosfato de calcio), lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco, sílice); desintegrantes (por ejemplo, almidón glicolato de sodio, povidona reticulada, carboximetilcelulosa de sodio reticulada), agentes de superficie activa o dispersión o humectantes (por ejemplo, lauril sulfato de sodio) y conservantes (por ejemplo, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, ácido sórbico). Los comprimidos moldeados pueden realizarse por moldeo en una máquina adecuada de una mezcla de los compuestos en polvo humedecidos con un disolvente líquido inerte. Los comprimidos opcionalmente pueden ser recubiertos o rayados y pueden formularse con el fin de proporcionar la liberación lenta o controlada del compuesto activo en la misma, utilizando, por ejemplo, hidroxipropilmetil celulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil de liberación deseado. Los comprimidos, opcionalmente, pueden estar provistos de un recubrimiento entérico, para proporcionar la liberación en partes del intestino que no sean el estómago.

Formulaciones adecuadas para la administración tópica (por ejemplo, transdérmica, intranasal, ocular, bucal y sublingual) pueden ser formuladas como una pomada, crema, suspensión, loción, polvo, solución, pasta, spray, gel, aerosol o aceite. Alternativamente, una formulación puede comprender un parche o un vendaje, como un vendaje o esparadrapo impregnados de sustancias activas y, opcionalmente, uno o más excipientes o diluyentes.

Formulaciones adecuadas para la administración tópica en la boca son pastillas de chupar que comprenden el compuesto activo en una base con sabor, usualmente de sacarosa y acacia o goma tragacanto; pastillas que comprenden el compuesto activo en una base inerte, como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia, y enjuagues bucales que comprenden el compuesto activo en un portador líquido adecuado.

Formulaciones adecuadas para la administración tópica en el ojo también incluyen gotas para los ojos en las que el compuesto activo se disuelve o suspende en un portador adecuado, especialmente en un disolvente acuoso para el compuesto activo.

Formulaciones adecuadas para la administración nasal, en la cual el portador es un sólido, incluyen un polvo grueso que tiene un tamaño de partícula, por ejemplo, en el rango de 20 a 500 micras, que se administra en la forma en que se toma el rapé, es decir, por inhalación rápida a través de las fosas nasales desde un recipiente del polvo sostenido cerca de la nariz. Formulaciones adecuadas en las que el portador es un líquido para la administración como, por ejemplo, aerosol nasal, gotas nasales, o por la administración en aerosol por un nebulizador, son soluciones acuosas o aceitosas del compuesto activo.

Formulaciones adecuadas para su administración por inhalación incluyen las que se presentan como un spray aerosol de un envase a presión, con la utilización de un propelente adecuado, como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otros gases adecuados.

Formulaciones adecuadas para la administración tópica a través de la piel incluyen ungüentos, cremas y emulsiones. Al estar formulado en un ungüento, el compuesto activo, opcionalmente, puede ser empleado con una base de ungüento parafínica o miscible en agua. Alternativamente, los compuestos activos se pueden formular en una crema con una base de crema aceite-en-agua. Si lo desea, la fase acuosa de la base de crema pueden incluir, por ejemplo, al menos un 30% en peso de un alcohol polihídrico, es decir, un alcohol que tienen dos o más grupos hidroxilo como el propilenglicol, 1,3-butanodiol, manitol, sorbitol, glicerol y etilenetilenglicol y sus mezclas. Es deseable que las formulaciones tópicas puedan incluir un compuesto que aumenta la absorción o la penetración del compuesto activo a través de la piel o de otras zonas afectadas. Ejemplos de tales potenciadores de penetración cutánea incluyen dimetilsulfóxido y análogos relacionados.

Cuando se formula como una emulsión tópica, la fase oleosa, puede incluir opcionalmente sólo un emulsionante (también conocido como emulgente), o puede comprender una mezcla de al menos un emulsionante con una grasa o un aceite o con ambos una grasa y un aceite. Preferiblemente, un emulsionante hidrofílico se incluye junto con un emulsionante lipofílico que actúa como un estabilizador. También se prefiere incluir tanto un aceite como una grasa. En conjunto, el emulsionante(s) con o sin estabilizador(es) forma la llamada cera de emulsión, y la cera junto con el aceite y/o la grasa constituyen la denominada base de pomada emulsionante, que forma la fase dispersa oleosa de las formulaciones en crema.

Emulgentes y estabilizadores adecuados de emulsión incluyen Tween 60, Span 80, alcohol cetoestearílico, alcohol miristílico, monoestearato de glicerilo y lauril sulfato de sodio. La elección adecuada de los aceites o grasas para la formulación se basa en la consecución de las propiedades estéticas deseadas, ya que la solubilidad del compuesto activo en la mayoría de los aceites susceptibles de ser utilizados en las formulaciones farmacéuticas de emulsión puede ser muy baja. Así, la crema debe ser preferiblemente no grasa, no manchar y ser un producto lavable con una consistencia adecuada para evitar pérdidas de los tubos u otros recipientes. Se pueden utilizar ésteres de alquilo de cadena lineal o ramificada, mono- o dibásicos, como di-isoadipato, estearato de isocetilo, propilenglicol diéster de ácidos grasos de coco, miristato de isopropilo, oleato de decilo, palmitato de isopropilo, estearato de butilo, palmitato de 2-etilhexilo o una mezcla de ésteres de cadena ramificada conocidos como Crodamol CAP, siendo los últimos tres ésteres los preferidos. Estos pueden ser usados solos o en combinación dependiendo de las propiedades requeridas.

Alternativamente, se pueden utilizar lípidos de alto punto de fusión, tales como vaselina blanca y/o parafina líquida u otros aceites minerales.

Las formulaciones adecuadas para la administración rectal pueden presentarse como un supositorio con una base adecuada que comprende, por ejemplo, manteca de cacao o un salicilato.

Las formulaciones adecuadas para la administración por vía vaginal pueden presentarse como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de spray que contienen además de los compuestos activos, los portadores como son conocidos en la técnica por ser apropiados.

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Las formulaciones adecuadas para la administración parenteral (por ejemplo, mediante inyección, incluyendo cutánea, subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica), son soluciones isotónicas acuosas y no acuosas y exentas de pirógenos, de inyección estéril, que podrán contener antioxidantes, tampones, conservantes, estabilizantes, bacteriostáticos y solutos que hacen isotónica la formulación respecto a la sangre de su destinatario propuesto, y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes, y liposomas u otros sistemas de micropartículas que están diseñados para tratar el complejo de los componentes sanguíneos o uno o más órganos. Ejemplos de vehículos isotónicos adecuados para su uso en formulaciones incluyen Inyección de Cloruro de Sodio, solución de Ringer o Inyección de lactato de Ringer. Normalmente, la concentración del compuesto activo en la solución es de alrededor de 1 ng/ml hasta alrededor de 10 mg/ml, por ejemplo, de alrededor de 10 ng/ml hasta alrededor de 1 \mug/ml. Las formulaciones pueden presentarse en contenedores sellados de dosis unitarias o de dosis múltiples, por ejemplo, ampollas y viales, y pueden ser almacenadas en una condición de congelación en seco (liofilizado), requisito que exige únicamente la adición del portador líquido estéril, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Se pueden preparar soluciones de inyección de extemporánea y suspensiones a partir de polvos estériles, gránulos y comprimidos. Las formulaciones pueden ser en forma de liposomas o sistemas de micropartículas que están diseñados para tratar el compuesto activo a los componentes de la sangre o uno o más órganos.

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Dosis

Se entenderá que las dosis apropiadas de los compuestos activos, y las composiciones que comprenden los compuestos activos, pueden variar de paciente a paciente. Determinar la dosis óptima supondrá en general el equilibrio del nivel de beneficio terapéutico contra cualquier riesgo o efectos secundarios nocivos de los tratamientos de la presente invención. El nivel de dosificación seleccionada dependerá de una variedad de factores, incluyendo pero no estando limitados a, la actividad del compuesto en particular, la vía de administración, el tiempo de administración, la tasa de excreción de la sustancia, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales utilizados en combinación, y la edad, sexo, peso, condición general de salud, e historial clínico previa del paciente. La cantidad de compuesto y vía de administración será en última instancia, a discreción del médico, aunque en general la dosis será para lograr concentraciones locales en el lugar de acción que logren el efecto deseado sin causar efectos secundarios nocivos o perjudiciales considerables.

La administración in vivo puede realizarse en una sola dosis, de forma contigua o intermitente (por ejemplo, en dosis divididas a intervalos apropiados) durante toda la evolución del tratamiento. Los procedimientos para determinar los medios de la administración y la dosis más eficaces son bien conocidos por los entendidos en la técnica y pueden variar con la formulación utilizada para la terapia, el objetivo de la terapia, la célula diana que se está tratando, y el sujeto que está siendo tratado. Pueden llevarse a cabo administraciones únicas o múltiples con el nivel de dosis y el patrón siendo seleccionados por el médico tratante.

En general, la dosis adecuada de la sustancia activa se encuentra en el rango de alrededor de 100 \mug hasta alrededor de 250 mg por kilogramo de peso corporal del sujeto por día. Cuando el compuesto activo es una sal, un éster, profármaco, o similar, la cantidad administrada se calcula sobre la base del compuesto original y así el peso real que se utilizará se aumentará proporcionalmente.

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Ejemplos

Los siguientes ejemplos se proporcionan únicamente para ilustrar la presente invención y no están destinados a limitar el alcance de la invención, tal como se describe en este documento.

En estos ejemplos, se hace referencia a las siguientes figuras.

La figura 1 muestra que el compuesto 4 puede sensibilizar las células a la radiación ionizante. El % de supervivencia de las células HeLa se midió con radiaciones ionizantes en aumento, en ausencia del compuesto 4 (\blacksquare), y en dos concentraciones diferentes de compuestos 4, 0,5 \muM (\ding{115}) y 2 \muM (\medbullet).

La figura 2 muestra que el compuesto 4 puede sensibilizar las células a etopósido. El % de supervivencia de las células de LoVo se midió con concentraciones crecientes de etopósido, en ausencia del compuesto 4 (\blacksquare), y en presencia de 10 \muM de compuesto 4 (\medbullet).

La Figura 3 muestra que el compuesto 4 puede sensibilizar las células a la camptotecina. El % de supervivencia de las células de LoVo se midió con concentraciones crecientes de camptotecina, en ausencia del compuesto 4 (\blacksquare), y en presencia de 10 \muM del compuesto 4 (\medbullet).

La Figura 4 muestra que el compuesto 4 puede sensibilizar las células a la doxorrubicina. El % de supervivencia de las células de LoVo se midió con concentraciones crecientes de doxorubicina, en ausencia del compuesto 4 (\blacksquare), y en presencia de 10 \muM del compuesto 4 (\medbullet).

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La figura 5 muestra que el compuesto 4 puede inhibir las infecciones de vector retroviral recombinante. La inhibición de la transducción retroviral por el Compuesto 4 inhibidor de la ATM se evaluó mediante la realización de LUCIA basado en VIH-1 en las células T Jurkat en presencia de mayores concentraciones de compuesto 4 (\boxempty). Los datos se presentan como eficiencia de transducción (señal de la luciferasa) en relación a las células control sin tratar. El IC_{50} de concentración de las infecciones de VIH-1 por el compuesto 4 es de alrededor de 1 \muM. La citotoxicidad de fármacos (\Box) se determinó por ensayos de reducción de colorante MTS formazán y los datos se presentan como el porcentaje de células viables que permanecen después del tratamiento de fármaco. No se observó citotoxicidad significativa en el rango de concentración del Compuesto 4 ensayado.

La Figura 6 muestra que el compuesto 4 no inhibe el VIH-1 RT. La inhibición del VIH-1 RT se evaluó mediante la realización de ensayos quimioluminiscente VIH-1 de la transcriptasa inversa en presencia de cantidades crecientes del compuesto 4 (\boxempty). No se observa actividad significativa anti-TR para el compuesto 4 en el rango de concentración utilizado. También se muestra una inhibición de control RT utilizando nevirapina (\Box).

La Figura 7 muestra que el compuesto 4 actúa sinérgicamente con AZT para inhibir infecciones VIH-1. LUCIA basada VIH-1 fue efectuado en las células HeLa con concentraciones crecientes de compuestos 4 en ausencia (\ding{115}) o la presencia de 0,1 \muM (\Box), 0,4 \muM (*) o 1,2 \muM (0) AZT. Los datos se presentan como la eficiencia de transducción (según lo determinado por la actividad luciferasa) en relación a las células control sin tratar. La presencia combinada de
ambos, compuesto 4 y AZT, muestra una mayor actividad de lucha anti-VIH, en comparación con cada fármaco solo.

La figura 8 muestra que el compuesto 4 inhibe la replicación del VIH-1. Se realizaron ensayos de replicación de 4 días del VIH-1 en células C1866 en presencia de concentraciones crecientes de Compuesto 4 (\boxempty) o AZT (\Box). Se cuantificaron los títulos de VIH-1 mediante ELISA con antígeno p24 y los datos se muestran como el porcentaje de p24 de VIH-1 en sobrenadantes libres de células en relación con las células control sin tratar. (A) ensayos de replicación realizados utilizando cepa de tipo salvaje de VIH-1 (VIH-1_{HXB2} wt). (B) ensayos de replicación realizados utilizando una cepa VIH-1 resistente al AZT (VIH-1_{HXB2} AZTres). El compuesto 4 inhibe la replicación del VIH-1 igualmente bien en ambas cepas de tipo salvaje y VIH-1 resistentes a AZT. (C) Control de citotoxicidad de fármacos (\Delta) se determinó mediante ensayos de reducción de colorante XTT. Los datos se presentan como el porcentaje de células viables que permanecen después del tratamiento con fármacos. No se observó citotoxicidad significativa sobre el rango de concentración de compuesto 4 que muestra inhibición de la replicación del VIH-1.

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A) Ejemplos químicos Procedimientos Experimentales Generales

Se realizó cromatografía en capa fina utilizando placas de base vidrio Merck Kieselgel 60 F_{254}. Las placas se visualizaron mediante el uso de una lámpara UV (254 nm). Se utilizó gel de sílice 60 (tamaño de partícula 40-63 \mu) suministrado por E.M. Merck para cromatografía flash. Se registraron espectros ^{1}H RMN a 300 MHz en un instrumento Bruker DPX-300. Los desplazamientos químicos se refirieron a tetrametilsilano.

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Purificación e identificación de bibliotecas de muestras

Las muestras fueron purificadas en unidades de LC de Gilson.

Fase móvil A - TFA al 0,1%acuoso, Fase móvil B - Acetonitrilo, velocidad de flujo de 6 ml/min., Gradiente - generalmente a partir de 90% A/10% B durante un minuto, llegando a 97% B después de 15 minutos, manteniéndolo durante 2 minutos, luego nuevamente las condiciones de partida. Columna: columna Jones Chromatography Genesis 4p C18, 10 mm x 250 mm. Obtención del pico en base a la detección UV a 254 nm.

Se registraron espectros de masa en un instrumento Finnegan LCQ en el modo de iones positivos.

Fase móvil A - ácido fórmico al 0,1% acuoso, móvil de la fase B - Acetonitrilo, la velocidad de flujo 2 ml/min., Gradiente - a partir de 95% A/B 5% durante un minuto, aumentando a un 98% B después de 5 minutos, manteniéndolo durante 3 minutos, luego nuevamente a las condiciones de partida. Columna - columna Phenomenex 5\mu Luna C18, 4,6 mm x 50 mm detección UV a 254 nm, rastreo para detección PDA 210 a 600 nm.

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Espectros de masas de otros compuestos

Los espectros de masas de los compuestos no de biblioteca y bloques de construcción se registraron en un instrumento Micromass ZQ (cuadripolo único, funcionando en modo de ionización por electropulverización), utilizando una bomba de Waters 600 HPLC y 2700 Autosampler.

Fase Móvil A: ácido fórmico al 0,1% en el agua, Fase móvil B: ácido fórmico al 0,1% en acetonitrilo, Velocidad de flujo: 2,0 ml/min., Gradiente: 5% B a 95% B en 3 minutos, manteniéndolo durante 3 minutos. Columna: Varía, pero siempre C18 50 mm x 4,6 mm (en la actualidad Génesis C18 4 \mu. Jones Chromatography). La detección de PDA: Waters 996, rango de rastreo 210-400 nm.

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Síntesis de 2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (3)

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4-cloro-4-(2,2,2-tricloro-etil)-oxetan-2-uno (1)

Una solución de BCHPO (bis-9-t-butilciclohexilo) peroxidicarbonato (11,8 g) y diceteno (83,5 ml) en CCl_{4} (300 ml) se añade gota a gota durante 120 minutos en una solución de CCl_{4} a reflujo, y se agita durante una hora adicional. La solución de color amarillo pálido resultante se enfrió y se formó un azeótropo con DCM. El residuo resultante se agitó con hexano (3 x 150 ml) durante 10 minutos y el licor se decantó a través de una almohadilla de celite. Los licores filtrados fueron combinados y concentrados al vacío para dar 1 como un aceite amarillo pálido (125,0 g, el 52,9%).

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5,5-dicloro-1-morfolin-4-il-pent-4-eno-1,3-diona (2)

Dos soluciones separadas de 1 (62,5 g, 0,26 mmol) y morfolina (24,0 g, 0,28 mol) en DCM (120 ml) se añadieron simultáneamente a una mezcla de NaHCO_{3} (44,0 g, 0,52 mol) en DCM seco (300 ml). La reacción se mantuvo a 15ºC durante 140 minutos con agitación. La reacción se filtró, se lavó con DCM (3 x 100 ml) y las capas orgánicas combinadas se concentraron al vacío a una emulsión que luego se pasa a través de una almohadilla corta de sílice, y además se lava con DCM (4 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se concentraron al vacío, en suspensión en hexano (400 ml) y se agitó durante 1 hora, se filtró y se secó para dar un sólido en crema. El sólido se suspendió en TBME (100 ml), se agitó durante 15 minutos, se filtró, se lavó y se secó con TBME para dar 2 como un polvo blanco (47,8 g, 72%). m/z (LC-MS, ESP): 252 (M^{+} +1).

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2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (3)

A una suspensión de 2 (11,3 g, 44,9 mmol) en dioxano se añadió ácido perclórico (11,4 ml, 0,14 mol) y la reacción se calentó a 90ºC en N_{2} durante 1 hora. La reacción se enfrió, se neutralizó con NaOH 2M (75 ml) y se filtró. La capa acuosa se extrajo con DCM (4 x 30 ml) y las capas orgánicas se combinaron y se secaron sobre MgSO_{4}. La capa orgánica fue tratada con carbón vegetal y filtrada a través de Celite. El filtrado de color amarillo oscuro se evaporó al vacío, y el sólido resultante se trituró con hexano (50 ml) y se secó para dar 3 (7,3 g, 75%) como un polvo de color amarillo claro. m/z (LC-MS, ESP): 216 (M^{+} +1). ^{1}H-RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): 3,3 (t, 4H), 3,65 (t, 4H), 5,4 (d, 1H), 6,25 (d, 1H).

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Ejemplo 1 Síntesis de 2-Tiantren-1-il-6-morfolin-4-il-4-piranona (4)

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2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (3) (863 mg, 4 mmol), tiantreno-1-ácido borónico (1,145 g, 4,4 mmol), carbonato de potasio pulverizado (1,105 g, 8 mmol) se suspendieron en dioxano ml (10) y se desgasificaron (sonicación durante 5 minutos, luego saturado con N_{2}). Se añadió Pd (PPh_{3})_{4} (231 mg, 0,2 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 90ºC durante 24 horas bajo una agitación vigorosa y una atmósfera de N_{2}. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se suspendió en agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con solución saturada acuosa de cloruro sódico y se secaron sobre sulfato de sodio. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (sílice, acetato de etilo:etanol, 9:1) para dar el compuesto del título como un sólido blanco (70 mg, 9%). ^{1}H-RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \Delta_{H} = 3,44 (4H, t, J 5 Hz), 3,76 (4H, t, J 5 Hz), 5,57 (1H, d, J 2 Hz), 6,30 (1H, d, J 2 Hz), 7.43 (2H, m), 7,53 (1H, t, 8Hz), 7,66 (3H, m), 8,49 (1H, dd, J 8 land Hz). m/z (LC-MS, ESP). 396 (M^{+} +1).

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Ejemplo 2 Síntesis de 2-fenoxatiin-4-il-6-morfolin-4-il-4-piranona (5)

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2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (3) (863 mg, 4 mmol), ácido fenoxatiin-4-borónico (1,07 g, 4,4 mmol), carbonato de potasio pulverizado (1,1 g, 8 mmol) se suspendieron en dioxano (10 ml) y se desgasificaron (sonicación durante 5 minutos, luego saturación con N_{2}). Se añadió Pd (PPh_{3})_{4} (231 mg, 0,2 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 90ºC durante 24 horas bajo una agitación vigorosa y una atmósfera de N_{2}. El disolvente se eliminó al vacío y se suspendió el residuo en el agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con solución saturada acuosa de cloruro sódico y se secaron sobre sulfato de sodio. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (sílice, acetato de etilo:etanol, 9:1) para dar el compuesto del título como un sólido blanco (620 mg, 41%). ^{1}H-RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta = 3,38 (4H, t, J 5 Hz), 3,71 (4H, t, J 5 Hz), 5,49 (1H, d, J 2 Hz), 6,49 (1H, d, J 2 Hz), 7,06 (1H, dd, J 1 y 8Hz), 7,26 (4H, m), 7,46 (1H, dd, J 1,5 y 8Hz), 7,55 (1H, dd, J 1,5 y 8 Hz). m/z (LC-MS, ESP): 380 (M^{+} +1).

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Ejemplo 3 Síntesis de 2-dibenzofuran-1-il-6-morfolin-4-il-4-piranona (6)

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2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (3) (22 mg, 0,1 mmol), ácido 4-dibenzofurano-1-borónico (28 mg, 0,13 mmol), y carbonato de cesio (65 mg, 0,2 mmol) se suspendieron en dioxano ml (0,5) y se desgasificaron (sonicación durante 5 minutos, luego saturado con N_{2}). Se añadió Pd(PPh_{3})_{4} (5 mg, 0,005 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 90ºC durante 24 horas bajo una agitación vigorosa y una atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se purificó por HPLC preparativa para dar el compuesto del título (2,1 mg, 6%). m/z (LC-MS, ESP): 348 (M^{+} +1).

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Ejemplo 4 Síntesis de 2-Dibenzotiofen-1-il-6-morfolin-4-il-4-piranona (7)

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2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (3) (740 mg, 3,43 mmol), ácido dibenzotiofeno-1-borónico (860 mg, 3,77 mmol), carbonato de potasio pulverizado (964 mg, 6,86 mmol) se suspendieron en dioxano (10 ml) y se desgasificaron (sonicación durante 5 minutos, luego saturado con N_{2}). Se añadió Pd (PPh3)_{4} (200 mg, 0,17 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 90ºC durante 24 horas bajo una agitación vigorosa y una atmósfera de N_{2}. El disolvente se eliminó al vacío y se suspendió el residuo en agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con solución saturada acuosa de cloruro sódico y se secaron sobre sulfato de sodio. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (sílice, acetato de etilo: etanol, 9:1) para dar el compuesto del título como un sólido blanco (80 mg, 6%). ^{1}H-RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \Delta_{H} = 3,49 (4H, t, J 5 Hz), 3,76 (4H, t, J 5 Hz), 5,53 (1H, d, J 2 Hz), 6,63 (1H, d, J 2 Hz), 7,59 (2H, m), 7,69 (1H, t, J 8Hz), 7,96 (1H, dd, J 1 y 7.5Hz), 8,11 (1H, m), 8,47 (1H, m), 8,57 (1H, dd, J 1 y 8 Hz). m/z (LC-MS, ESP): 364 (M^{+} +1).

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Ejemplo 5 Síntesis de 2-(2-fenilsulfanil-fenil)-6-morfolin-4-il-4-piranona (9) (a) ácido 2-fenilsulfidobenceno borónico (8)

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Se agitó una solución de sulfuro de difenilo enfriada (-78ºC), (1,66 ml, 10 mmol) en 30 ml de THF anhidro, se añadió gota a gota en una atmósfera de nitrógeno de 7 ml t-BuLi. Tras la adición de t-BuLi la solución se volvió naranja y luego marrón. La mezcla se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y luego se dejó agitando durante 3 horas. La mezcla se enfrió (-78ºC). Se añadió borato de trietilo (2,03 ml, 12 mmol) gota a gota a la solución enfriada de color amarillo volviéndose la solución de color lima. Durante esta adición, se monitorizó la temperatura y no se le permitió elevarse por encima de -75ºC. La solución se dejó hasta temperatura ambiente y se dejó en agitación durante 2 horas. Se añadió agua a la mezcla de reacción y la fase acuosa se extrajo con éter dietílico. La capa acuosa (pH 14) se acidificó hasta pH a 1 con (HCl 1 M) y el producto se extrajo con éter dietílico. Las fases orgánicas se secaron sobre sulfato de magnesio y las fases orgánicas se evaporaron al vacío, obteniendo un residuo aceitoso (690 mg, 30%), que fue utilizado sin purificación adicional.

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(b) 2-(2'-fenilsulfido-fenil)-6-morfolin-4-il-4-piranona (9)

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2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (3) (582 mg, 2,7 mmol), ácido 2-fenilsulfidobenceno borónico (8) (690 g, 3 mmol), carbonato de potasio pulverizado (819 mg, 5,94 mmol) se suspendieron en dioxano (10 ml) y se desgasificaron (sonicación durante 5 minutos, luego saturado con N_{2}). Se añadió Pd (PPh_{3})_{4} (156 mg, 0,13 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 90ºC durante 24 horas bajo una agitación vigorosa y una atmósfera de N_{2}. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó por HPLC preparativa para dar el compuesto del título (27 mg, 3%). ^{1}H-RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \Delta_{H} = 3,37 (4H, t), 3,76 (4H, t) 5,45 (1H, d), 6,31 (1H, d); 7,32-7,55 (9H, m). m/z (LC-MS, ESP): 366 (M^{+} +1).

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Ejemplo 6 Síntesis de 2-(1-fluoro-9-oxo-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (13)

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(a) 1-fluoro-4-hidroxi-tioxanten-9-ona (10)

Se disolvieron ácido Tiosalicílico (46,26 g, 0,3 mol) y 4-fluorofenol (56,05 g, 0,5 mol) en H_{2}SO_{4} conc. (750 ml) y la mezcla se agitó en atmósfera de nitrógeno durante 24 horas. La mezcla de reacción se vertió sobre hielo (1,5 L) y el precipitado amarillo se filtró y se lavó con agua (300 ml). El precipitado se secó a 50ºC durante 24 horas y se utilizó sin purificación adicional (31,4 g, 42,5%). m/z (LC-MS, ESP): 247 (M^{+} +1).

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(b) 1-fluoro-9-oxo-tioxanten-4-il sulfonato trifluorometano (11)

1-fluoro-4-hidroxi-tioxanten-9-ona (4,92 g, 20 mmol) se disolvió en piridina seca (100 ml) y se enfrió a 0ºC en atmósfera de nitrógeno. Se añadió anhídrido tríflico (3,66 ml, 22,3 mmol) gota a gota a la disolución agitada durante 5 minutos. La reacción se dejó durante la noche y se vertió sobre agua (300 ml) y se filtró el precipitado formado. El sólido se purificó mediante un tapón de sílice (acetato de etilo:hexano, 1:9) para dar el compuesto del título como un sólido blanco esponjoso (1,72 g, 22,4%). m/z (LC-MS, ESP): 379 (M^{+} +1).

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(c) 1-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tioxanten-9-ona (12)

Se suspendieron sulfonato de 1-fluoro-9-oxo-tioxanten-4-il trifluorometano (11) (378 mg, 1 mmol), bis(pinacolato) diboro (305 mg, 1,2 mmol), y acetato de potasio pulverizado (294 mg, 3 mmol), en dioxano (5 ml) y se desgasificaron (sonicación durante 5 minutos luego saturado con N_{2}). Se añadió PdCl_{2}dppf (40 mg, 0,050 mmol) y dppf (27,7 mg, 0,05 mmol) entonces y la mezcla de reacción se calentó a 100ºC durante 24 horas bajo una agitación vigorosa y atmósfera de N_{2}. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (sílice, acetato de etilo:etanol, 9:1) para dar un aceite que se utilizó sin purificación adicional (116 mg, 32%). m/z (LC-MS, ESP): 357 (M^{+} +1).

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(d) 2-(1-fluoro-9-oxo-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (13)

2-cloro-6-morfolin-4-il-piran-9-ona (3) (100 mg, 0,46 mmol), 1-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tioxanten-9-ona (12) (110 mg, 0,31 mmol), carbonato de potasio pulverizado (63 mg, 0,62 mmol) se suspendieron en dioxano ml (5) y se desgasificaron (sonicación durante 5 minutos a continuación, saturados con N_{2}). Se añadió Pd(PPh_{3})_{4} (18 mg, 0,016 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 90ºC durante 24 horas bajo una agitación vigorosa y una atmósfera de N_{2}. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo fue suspendido en agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). La materia orgánica se combinó, se lavó con solución saturada acuosa de cloruro sódico y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (sílice, acetato de etilo:etanol, 9:1) para dar el compuesto del título como un sólido blanco (5 mg, 4%). m/z (LC-MS, ESP): 410 (M^{+} +1).

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Ejemplo 7 Síntesis de 2-(1-fluoro-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (17)

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(a) 1-fluoro-4-hidroxi-tioxanten-9-ona (14)

1-fluoro-4-hidroxi-tioxanten-9-ona (4,93 g, 20 mmol) se disolvió en THF (50 ml) y se enfrió a 0ºC bajo una atmósfera N_{2}. Se añadió gota a gota complejo borano-tetrahidrofurano (1M, 60 ml, 60 mmol) a la disolución agitada durante 10 minutos. La reacción se dejó reaccionar durante la noche y se detuvo con acetona (100 ml). La mezcla se evaporó a sequedad y el residuo se colocó en agua (200 ml). El producto fue extraído en acetato de etilo (3 x 100 ml) y la fase orgánica se combinó, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (sílice, hexano:acetato de etilo, 9:1) para dar un sólido blanco que se oxida fácilmente por el aire (2,19 g, 47%). ^{1}H-RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta_{H} = 3,86 (2H, s), 6,73 (1H, m), 6,95 (1H, m), 7,24 (2H, m), 7,47 (2H, m), 10,07 (1H, s).

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(b) 1-fluoro-9H-tioxanten-4-il trifluorometano sulfonato (15)

1-fluoro-4-hidroxi-tioxanten-9-ona (1,66 g, 7,15 mmol) se disolvió en piridina seca (35 ml) y se enfrió a 0ºC en atmósfera de nitrógeno. Se añadió gota a gota anhídrido tríflico (2,22 g, 7,87 mmol) a la disolución agitada durante 5 minutos. La reacción se dejó reaccionar durante 4 horas a temperatura ambiente y luego se vertió en agua (350 ml). La solución lechosa se extrajo con DCM (3 x 200 ml), se combinaron las fases orgánicas y se secaron sobre sulfato de magnesio. El disolvente se eliminó al vacío y el sólido obtenido se purificó mediante un tapón de sílice (acetato de etilo:hexano; 3:97) para dar el compuesto del título como un sólido blanco esponjoso (2,55 g, 98%). ^{1}H-RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H} = 3,86 (2H, s), 7,3-7,6 (6H, m).

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(c) 1-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-9H-tioxanto (16)

1-fluoro-9H-tioxanten-4-il-trifluorometano sulfonato (1 g, 2,75 mmol), bis (pinacolato) diboro (840 mg, 3,30 mmol), acetato de potasio pulverizado (809 mg, 8,25 mmol) se suspendieron en dioxano ml (7) y se desgasificaron (sonicación durante 5 minutos luego saturado con N_{2}). Se añadió PdCl_{2}dppf (0,112 mg, 0,138 mmol) y dppf (77 mg, 0,138 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 100ºC durante 24 horas bajo una agitación vigorosa y atmósfera N_{2}. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (sílice, acetato de etilo:etanol, 9:1) para dar un aceite que se utilizó sin purificación adicional (460 mg, 49%).

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(d) 2-(1-fluoro-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (17)

2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (3) (252 mg, 1,17 mmol), 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3, 2]dioxaborolan-2-il)-9H-tioxante (400 mg, 1,17 mmol), carbonato de potasio pulverizado (239 mg, 2,34 mmol) se suspendieron en dioxano ml (7) y se desgasificaron (sonicación durante 5 minutos luego saturada con N_{2}). Se añadió Pd (PPh_{3})_{4} (67 mg, 0,059 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 90ºC durante 24 horas bajo una agitación vigorosa y una atmósfera N_{2}. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (sílice, acetato de etilo:etanol, 9:1) para dar un sólido blanco roto que se trituró en éter y dio el compuesto del título como un sólido blanco (72,3 mg, 16%). ^{1}H-RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H} = 3,41 (4H, t), 3,71 (4H, t) 5,50 (1H, d), 6,21 (1H, d); 7,25-7,35 (3H, m); 7,52-7,62 (3H, m), m/z (LC-MS, ESP): 396 (M^{+} +1).

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Ejemplo 8 Síntesis de 2-Tiantren-1-il-6-morfolin-4-il-piran-4-tiona (18)

36

2-Tiantren-1-il-6-morfolin-4-il-4-piranona (4) (140 mg, 0,354 mmol) se disolvió en tolueno (5 ml). Se añadió reactivo de Lawesson (215 mg, 0,53 mmol) a la solución y la mezcla se calentó a reflujo en atmósfera de nitrógeno durante la noche con agitación. El tolueno se evaporó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (sílice, diclorometano) para dar el compuesto deseado (18) como un sólido naranja oscuro (27 mg, 18%), ^{1}H-RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H} = 3,56 (4H, t, J 5 Hz), 3,73 (4H, t, J 5 Hz), 7,83 (1H, d, J 2 Hz), 7,76 (1H, d, J 2 Hz); 7,30-7,80 (7H, m). m/z (LC-MS, ESP): 412 (M^{+} +1).

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Ejemplo 9 Derivados N-amida de 2-(7-amino-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona

37

Ácido 2-(2-metoxi-fenilsulfanil)-5-nitro-benzoico

Se añadió 2-Metoxitiofenol (9,9 ml, 81,29 mmol) fue añadido a una solución de KOH (18,24 g, 325,18 mmol) en agua (80 ml) desgasificada durante 15 minutos. Se añadieron ácido 2-Bromo-5-nitrobenzoico (20,0 g, 81,29 mmol) y bronce cobre (258 mg, 4,06 mmol) a la mezcla de reacción, que se dejó a reflujo durante la noche. La reacción se detuvo y la mezcla se filtró a través de una almohadilla de celite y se lavó con NaOH 2M y luego agua (50 ml). El filtrado se acidificó (pH 1) con HCl concentrado. El precipitado formado se filtró y se secó durante la noche en una estufa de vacío (50ºC) para dar el compuesto crudo del título (26,0 g) como un sólido de color amarillo pálido. El producto fue utilizado sin purificación adicional.

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5-metoxi-2-nitro-tioxanteno-9-ona

Se suspendió ácido 2-(2-metoxi-fenilsulfanil)-5-nitro-benzoico (13,00 g, 42,58 mmol) en ácido metanosulfónico (100 ml) y se calentó a 100ºC. La mezcla cruda se vertió lentamente sobre hielo con una agitación enérgica y se neutralizó luego con solución de amoniaco concentrado. El precipitado se filtró y se lavó con agua. El sólido de color amarillo/lima se secó al vacío a 50ºC para dar el compuesto del título crudo que se utilizó sin ningún tipo de purificación adicional (12 g, 98%). m/z (LC-MS, ESP), RT = 4,89 min, (M^{+}1) = 288.

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5-metoxi-2-nitro-9H-tioxanteno

A una suspensión enfriada (0ºC) de 5-metoxi-2-nitro-tioxanteno-9-ona (24,46 g, 85,13 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (40 ml) en atmósfera de nitrógeno, se añadió gota a gota complejo borano THF (170 ml, 1,0 M en THF). La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente con agitación durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió (0ºC) y el exceso de borano se neutralizó con acetona. Se evaporó el disolvente al vacío. El residuo se purificó por cromatografía flash (1:1, diclorometano/hexano) para dar el compuesto del título (11,59 g, 50%) como un sólido amorfo de color amarillo brillante. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H}= 3,86 (3H, s), 4,03 (2H, s), 7,00 (2H, dd), 7,28 (1H, t), 7,73 (1H, d), 8,05 (1H, dd), 8,28 (1H, d).

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5-metoxi-9H-tioxanten-2-ilamina

Se suspendió 5-metoxi-2-nitro 9H-tioxanteno (11,59 g, 42,40 mmol) en acetato de etilo (250 ml). Se añadió SnCl_{2}.2 H_{2}0 (47,84 g, 212 mmol) y la solución de color amarillo claro se agitó a 50ºC durante la noche. La reacción se detuvo con NaOH (2M) y luego se extrajo con acetato de etilo (3 x 300 ml). Las fases orgánicas se lavaron con solución saturada acuosa de cloruro sódico (100 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y los disolventes se eliminaron al vacío para dar el compuesto del título (10,32 g, 100%) como un aceite viscoso de color amarillo. El aceite se utilizó sin mayor purificación. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H}= 3,83 (3H, s), 3,67 (2H, s), 5,14 (2H, bs), 6,43 (1H, dd), 6,61 (1H, d), 6,89 (1H, d), 6,99 (1H, d), 7,06 (1H, d), 7,18 (1H, t), m/z (LC-MS, ESP), RT = 3,88 min, (M^{+} 1) = 244.

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7-amino-9H-tixanten-4-ol

5-metoxi-9H-tioxanten-2-ilamina (10,32 g, 41,09 mmol) y clorhidrato de piridina (49,0 g, 424 mmol) se calentaron a 200ºC en atmósfera de nitrógeno durante 5 horas. La mezcla de reacción negra se dejó enfriar a temperatura ambiente y se añadió agua (50 ml). La mezcla se neutraliza con NaOH (2M) a pH 7, a continuación, extrae con diclorometano (4 x 100 ml). Las fases orgánicas se lavaron con solución saturada acuosa de cloruro sódico, se secaron sobre MgSO_{4}) y se concentraron al vacío para dar un aceite negro. Este aceite se purificó mediante cromatografía flash (diclorometano) para dar el compuesto del título (7,78 g, 80%) como un aceite de color marrón oscuro que se utilizó sin purificación adicional. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H}= 3,61 (2H, s), 5,08 (2H, bs), 6,42 (1H, dd), 6,58 (1H, d), 6,69 (1H, d), 6,81 (1H, d), 6,95-7,06 (2H, m), 9,88 (1H, bs), m/z (LC-MS, ESP), RT = 3,23 min, (M^{+} 1) = 230.

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Éster terc-butílico del ácido (5-hidroxi-9H-tioxanten-2-i1)-carbámico

A una solución de 7-amino-9H-tixanten-4-ol (7,77 g, 81,32 mmol) en THF (14 ml) se añadió gota a gota dicarbonato de di-terc-butilo (17,74 mg, 0,49 mmol) en THF (4 ml). La reacción se agita a temperatura ambiente y en atmósfera de nitrógeno. Al término de la reacción se evaporó el disolvente. El residuo se recogió en metanol (50 ml), y se añadió hidróxido de sodio (4,06 g, 101,16 mmol). La mezcla de color marrón oscuro se puso a reflujo durante 20 minutos. Se evaporó el disolvente al vacío y el aceite se recoge en agua, se extrajo con acetato de etilo, se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó al vacío para dar el producto crudo. El aceite de color marrón oscuro se purificó mediante cromatografía flash (diclorometano) para dar el compuesto del título (4,2 g, 38%), como un sólido amorfo de color crema. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H}= 3,74 (2H, s), 6,74 (1H, d), 6,87 (1H, d), 7,04 (1H, t), 7,23-7,33 (2H, m), 7,57 (1H, bs), 10,03 (1H, bs).

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Éster terc-butílico del ácido (5-trifluorometanesulfonil-9H-tioxanten-2-il)-carbámico

A una solución enfriada (0ºC) de color dorado de éster terc-butílico del ácido (5-hidroxi-9H-tioxanten-2-il)-carbámico (4,0 g, 12,14 mmol) en piridina anhidra (8 ml) bajo atmósfera de nitrógeno se añadió anhídrido trifluorometanesulfónico (2,36 ml, 13,35 mmol) gota a gota. La solución se volvió de color anaranjado profundo con la adición de anhídrido trifluorometanosulfónico. La reacción se dejó calentar a la temperatura ambiente. Después de 10 minutos de agitación a esta temperatura, la solución se vertió en el agua (20 ml). El producto se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas se lavaron con solución saturada acuosa de cloruro sódico, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron al vacío para dar el compuesto del título (5,6 g, 100%) como un sólido de color naranja oscuro.

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Éster terc-butílico del ácido [5-(4,4,5,5-tetrametil-(1,3,2) dioxaborolan-2-il)-9H-tioxanten-2-il]-carbámico

Se desgasificaron el éster terc-butílico del ácido (5-trifluorometanosulfonil-9H-tioxanten-2-il)-carbámico (3,31 g, 7,17 mmol), bis (pinacolato) diboro (2,18 g, 8,6 mmol) y acetato de potasio (2,11 g, 21,5 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) durante 15 minutos. A la suspensión amarilla se añadió luego PdCl_{2}(dppf) (293 mg, 0,36 mmol) y dppf (199 mg, 0,36 mmol). La mezcla de color rojo oscuro se calentó a 90ºC bajo una atmósfera de N_{2} durante 48 horas. La mezcla cruda se purificó mediante cromatografía flash (diclorometano) para dar aceite marrón viscoso (3,15 g), que fue utilizado sin purificación adicional.

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Éster terc-butílico del ácido [5-(6-morfolin-4-il-4-oxo-4H-piran-2-il)-9H-tioxanten-2-il]-carbámico (19)

Se disolvieron el éster terc-butílico del ácido 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-9H-tioxanten-2-il]-carbámico (1,02 g, 2,32 mmol), 2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (3) (0,60 g, 2,78 mmol) y K_{2}CO_{3} (0,64 g, 4,64 mmol) en 1,4-dioxano seco (ml). La mezcla se desgasificó durante 15 minutos y luego se añadió Pd(PPh_{3})_{4} (0,13 g, 0,12 mol). La mezcla de color marrón oscuro se calentó a 90ºC en atmósfera de N_{2} durante 24 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se añadió agua (50 ml). El sólido marrón se filtró y se lavó con agua (1,21 g, 88%). m/z (LC-MS, ESP), RT = 4,6 minutos, (M^{+}1) = 493.

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2-(7-amino-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (20)

A una solución del éster terc-butílico del ácido [5-(6-morfolin-4-il-4-oxo-4H-piran-2-il)-9H-tioxanten-2-il]-carbámico (19) (1,08 g, 2,19 mmol) en diclorometano (10 ml) se añadió ácido trifluoroacético (2 ml) y dejó en agitación a temperatura ambiente durante la noche. El disolvente se secó al vacío revelando un líquido viscoso de color marrón oscuro. Se añadió solución saturada de bicarbonato de sodio (20 ml) a los residuos, que se dejó a agitar durante 20 minutos. El precipitado marrón se filtró, se lavó con agua y se dejó secar en la estufa de vacío durante la noche (0,77 g, 90%). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H}= 3,40 (4H, t), 3,70 (4H, t),/3,77 (2H, s), 5,23 (2H, bs), 5,50 (1H, d), 6,17 (1H, d), 6,44 (1H, dd), 6,65 (1H, d), 7,09 (1H, d), 7,35 (1H, t), 7,47-7,59 (2H, m), m/z (LC-MS, ESP), RT = 3,51 minutos, (M^{+}1) = 392.

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Derivados N-amida de 2-(7-amino-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona

(a) A un tubo de ensayo pequeño se añadió 2-(7-amino-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (20) (20 mg, 0,05 mmol), dimetilacetamida seca (0,5 ml), trietilamina (0,01 ml, 0,08 mmol) y el cloruro de ácido deseado (0,08 mmol) con agitación durante la noche. La reacción se purificó por HPLC preparativa para dar los productos deseados, que se muestran a continuación:

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(Tabla pasa a página siguiente)

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(b) A un tubo de ensayo pequeño se añadió 2-(7-amino-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (20) (20 mg, 0,05 mmol), dimetilacetamida seca (0,5 ml), trietilamina (8 \mul, 0,06 mmol) y cloruro de cloroacetilo (4 \mul, 0,06 mmol) con agitación durante la noche. La amina o tiol apropiado (20 mg o 20 \mul) se añadió a continuación y se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se purificó por HPLC preparativa para dar los productos deseados, que se muestran a continuación:

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(c) A un tubo de ensayo pequeño se añadió 2-(7-amino-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (20) (20 mg, 0,05 mmol), dimetilacetamida seco (0,5 ml), trietilamina (8 \mul, 0,06 mmol) y 3-cloro bromopropionil (5 \mul, 0,05 mmol) con agitación durante la noche. Se añadió a continuación la amina o tiol apropiados (se liberaron 20 mg o 20 \mul, de sales de clorhidrato por la adición de trietilamina) y se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se purificó por HPLC preparativa para dar los productos deseados, que se muestran a continuación:

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Ejemplo 10 Derivados de éter 2-(4-hidroxi-9H-tioxanten-1il)-6-morfolin-4-il-4-piranona

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1-bromo-4-hidroxi-tioxanten-9-ona

Se suspendieron el ácido Tiosalicílico (20,0 g, 129,71 mmol) y 4-bromofenol (35,9 g, 207,53 mmol) en H_{2}SO_{4} concentrado (200 ml) y se agitó durante 48 horas. La solución roja se vertió lentamente sobre el hielo (500 ml) con agitación vigorosa. El precipitado amarillo resultante se filtró y se secó en una estufa de vacío (50ºC) para dar el compuesto del título (24,23 g, 61%) como un sólido amorfo amarillo. m/z (LC-MS, ESP), RT = 4,39 min, (M^{-}-1) = 305-307.

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1-Bromo-9H-tioxanten-4-ol

A una suspensión enfriada (0ºC) de 1-bromo-4-hidroxi-tioxanten-9-ona (24,23 g, 78,88 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (40 ml) en atmósfera de nitrógeno, se añadió gota a gota complejo borano-THF (237 ml, 1M en THF). La mezcla turbia se dejó calentar a temperatura ambiente y se dejó agitando durante la noche. La suspensión se disolvió gradualmente a medida que avanzaba la reacción dando una solución de color amarillo. La mezcla de reacción se enfrió (0ºC) y el exceso de borano se neutralizó con acetona. La solución amarilla se evaporó al vacío. El aceite resultante se purificó por cromatografía flash (4:1, hexano/acetato de etilo) para dar el compuesto del título (11,50 g, 50%). m/z (LC-MS, ESP), RT = 4,84 min, (M^{-}-1) = 291-293.

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Éster terc-butílico y éster 1-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]-dioxaborolan-2-il)-9H-tioxanten-4-ílico del ácido carbónico

A una disolución agitada de 1-bromo-9H-tioxanten-4-ol (11,50 g, 39,22 mmol)) en piridina (7 ml) se añadió trietilamina (8,15 ml, 58,83 mmol). A la solución se añadió gota a gota dicarbonato de di-terc-butilo (9,41 g, 3,14 mmol) en piridina (4 ml). Después de 1 hora de agitación de la mezcla de reacción cruda se vertió en el agua (100 ml) y se extrajo con diclorometano (3 x 100 ml). Las fases orgánicas se lavaron con solución saturada acuosa de cloruro sódico (50 ml), se secaron sobre MgSO_{4} y el disolvente se evaporó al vacío para dar el compuesto del título (10,40 g, el 67%) como un aceite claro viscoso. ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H}= 1,53 (9H, s), 4,09 (2H, s), 7,15-7,65 (6H, m).

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Éster terc-butílico y éster 1-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-9H-tioxanten-4-ílico del ácido carbónico

Se suspendieron el éster terc-butílico y éster 1-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-9H-tioxanten-9-ílico del ácido carbónico (5,00 g, 12,71 mmol), acetato de potasio anhidro (3,74 g, 38,13 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno (352 mg, 0,64 mmol)) y bis (pinacolato) diboro (3,87 g, 15,25 mmol), en dioxano anhidro (8 ml) bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla se desgasificó durante 10 minutos y se añadió aducto de dicloro[1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]paladio (II) diclorometano (514 mg, 0,64 mmol) a la mezcla. La reacción se calentó a 90ºC en atmósfera de nitrógeno durante 24 horas. La mezcla de reacción cruda se purificó mediante cromatografía flash (diclorometano), para dar el compuesto del título (3,02 g) como un aceite crudo de color marrón que se utilizó sin purificación adicional.

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2-(4-hidroxi-9H-tioxanten-1il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (87)

Se suspendieron el éster terc-butílico y éster 1-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-9H-tioxanten-4-ílico del ácido carbónico (3,00 g, 6,81 mmol), 2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (1,22 g, 5,67 mmol) y carbonato de potasio (2,07 g, 14,98 mmol) fueron suspendidos en dioxano anhidro (6 ml) en atmósfera de nitrógeno. La solución fue desgasificada durante 15 minutos. A la solución se añadió tetrakis (trifenilfosfino) paladio (291 mg, 5% eq.). La mezcla se desgasificó durante otros 5 minutos. La reacción se calentó a 90ºC en atmósfera de nitrógeno durante 24 horas. Se evaporó el disolvente al vacío, y la mezcla cruda se purificó mediante cromatografía en columna (9:1, acetato de etilo/etanol), para dar el compuesto del título (421 mg, 16%) como un sólido amorfo amarillo claro. ^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d6): \delta_{H} = 3,33 (4H, t), 3,67 (4H, t), 3,88 (2H, s), 5,45 (1H, d), 6,05 (1H, d), 6,87 (1H, d), 7,24-7,65 (5H, m), 10,62 (1H, bs), m/z (LC-MS, ESP), RT = 3,96 min, (M^{+}1) = 394.

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Derivados éter de 2-(4-hidroxi-9H-tioxanten-1il)-6-morfolin-4-il-4-piranona

(a) A una mezcla de 2-(4-hidroxi-9H-tioxanten-1il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (87) (20 mg, 0,05 mmol) y carbonato de potasio (16 mg, 0,11 mmol) en N,N-dimetilformamida (0,5 ml) se añadió dibromoetano (22 \mul, 0,25 mmol). Después de 4 horas, se añadió la amina o tiol apropiados (0,254 mmol, 5EQ) a la solución, y los compuestos aislados se muestran a continuación:

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(b) Se añadieron 2-(4-hidroxi-9H-tioxanten-1il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (87) (20 mg, 0,0508 mmol), carbonato de potasio (44 mg, 0,315 mmol) y N, N-dimetilformamida (0,5 ml), se añadieron a clorhidrato de cloruro de 2,3,4-picolilo (0,25 mmol), respectivamente. Las reacciones se agitaron a temperatura ambiente durante 2 horas. Las mezclas de reacción crudas se sometieron a purificación por HPLC preparativa sin ningún tratamiento final, y los compuestos producidos se muestra a continuación:

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Ejemplo 11 Derivados de N-Acil 2-(1-amino-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona

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1-fluoro-4-hidroxi-tioxanten-9-ona

A una solución de ácido 2-tiosalicílico (39,32 g, 255 mmol) en ácido sulfúrico concentrado (700 ml) se añadió 4-fluorofenol (32,0 g, 280 mmol). La solución roja se agitó entonces a temperatura ambiente durante 18 horas. Al finalizar, la mezcla se vertió directamente en 4 litros de hielo picado y el sólido rojo resultante se filtró, y luego se suspendió en agua (1 L) y se trató con solución de amoniaco hasta pH 6 con lo cual el precipitado se filtró de nuevo para dar el compuesto del título como un sólido naranja (44,48 g, 70,8%) m/z (LC-MS, ESP): 247 [M + H]^{+}, R/T = 3,99 mins.

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4-Benziloxi-1-fluoro-tioxanten-9-ona

Se añadió K_{2}CO_{3} (21,0 g, 150 mmol) a una suspensión de 1-fluoro-4-hidroxi-tioxanten-9-ona (18,47 g, 75,0 mmol) en metanol (100 ml), seguido por bromuro de bencilo (16 mL, 75,0 mmol), que se añadió en una corriente lenta a través de una jeringa. La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 90 minutos y luego se enfrió a temperatura ambiente antes de verterla sobre hielo picado (0,5 L). El precipitado resultante se filtró y se secó (P_{2}O_{5}) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo (16,7 g, 66,1%) m/z (LC-MS, ESP): 337 [M + H]^{+}, R/T = 5,22 mins.

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4-Benziloxi-1-(4-metoxi-benzilamino)-tioxanten-9-ona

A una solución de 4-metoxibencil amina (1,63 g, 11,89 mmol) en piridina seca (10 ml) se añadió 4-benziloxi-1-fluoro-tioxanten-9-ona (1 g, 2,97 mmol) en una sola porción. La mezcla se calentó a reflujo (140ºC) durante 18 horas. La suspensión naranja caliente resultante se dejó enfriar a temperatura ambiente antes de ser vertida en 100 ml de hielo picado. El precipitado se filtró y se lavó con grandes cantidades de agua para dar el compuesto del título como un sólido rojo/naranja (1,35 g, 89,6%). m/z (LC-MS, ESP): 454 [M + H]^{+} R/T = 6,09 mins.

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(4-Benciloxi-9H-tioxanten-1-il)-(4-metoxi-bencil)-amina

A una suspensión refrigerada (0ºC) de 4-benciloxi-1-(4-metoxibenzilamino)-tioxanten-9-ona (8,16 g, 18,00 mmol) en THF seco (150 ml) se añadió complejo borano-THF (90 mmol, 90 ml 1M en THF) en forma de gota a gota. La reacción se dejó calentar poco a poco hasta temperatura ambiente y se agitó por un período de 16 horas para dar una solución de color amarillo homogéneo. La mezcla se enfrió entonces (0ºC) y se diluyó poco a poco con acetona (150 ml) y luego se agitó durante 60 minutos a temperatura ambiente. El disolvente se eliminó al vacío para dar un residuo crudo que se diluyó en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) y se lavó con una solución saturada de NaHCO_{3}) (100 ml), se secó con MgS04, se filtró y se concentró al vacío para dar el compuesto del título como un aceite de leve color ámbar (7,90 g, 99,8%) m/z (LC-MS, ESP): 438 [M + H]^{+}, R/T = 5,01 mins.

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1-amino-9H-tioxanten-4-ol

(4-Benziloxi-9H-tioxanten-1-il)-(4-metoxi-bencil) -amina (14,51 g, 33,00 mmol) se mezcló perfectamente con clorhidrato de piridina sólido (190 g, 165,00 mmol) antes de ser calentado a 150ºC y se agitó a esta temperatura, por un período de 12 horas. Tras completar la reacción se enfrió ligeramente antes de ser vertida en un vaso de precipitados de hielo/agua. El precipitado marrón se extrajo por filtración y el filtrado, se ajustó a pH 11 con solución NH_{3}OH antes de ser extraído con CH_{2}Cl_{2} (3 x 100 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (1 x 100 ml) y solución saturada acuosa de cloruro sódico (1 x 100 ml) y luego secados con MgSO_{4}, se filtró y se concentró al vacío para dar el compuesto del título como un aceite espeso de color marrón (7,50 g, 99,1%) m/z (LC-MS, ESP): 229 [M + H]^{+}, R/T = 4,15 mins.

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Éster terc-butílico del ácido (4-hidroxi-9H-tioxanten-1-il)-carbámico

A una solución de 1-amino-9H-tioxanten-4-ol (7,57 g, 33,00 mmol) en THF seco (50 ml) se añadió dicarbonato-butílico di-terciario (20 g, 91,64 mmol) en una sola porción. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas antes de la adición de metanol (50 mL) y NaOH sólido (10 g, 250 mmol). La emulsión resultante se agita a temperatura ambiente durante 1 hora antes de la adición de H_{2}O (250 ml) y EtOAc (250 ml). El extracto orgánico fue eliminado y el acuoso restante se extrajo adicionalmente con EtOAc (2 x 50 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron con MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto del título un aceite de color ámbar oscuro (10,87 g, 92%) m/z (LC-MS, ESP): 328 [MH]^{-}, R/T = 4,73 mins.

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Éster 1-terc-butoxicarbonilamino-9H-tioxanten-4-ílico del ácido trifluorometanosulfónico

A una solución de éster terc-butílico del ácido (4-hidroxi-9H-tioxanten-1-il)-carbámico (10,05 g, 30,50 mmol) enfriada (0ºC) en piridina seca (70 ml) se añadió anhídrido trifluorometanesulfónico (8 ml, 48,77 mmol) en una corriente lenta a través de la jeringa durante más de 10 minutos. La mezcla marrón se agitó a 0ºC durante otros 30 minutos antes de la adición de agua de una forma gota a gota. La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml), los extractos orgánicos combinados, secados con MgS04, se filtró y se concentró al vacío para dar un aceite de color marrón pálido. La purificación del residuo crudo se llevó a cabo por cromatografía flash (SiO_{2}) utilizando Hexanos: EtOAc (4:1) para dar un aceite de color ámbar suave que se purificó mediante cromatografía flash (SiO_{2}) (Hexanos, a continuación 3:1 - Hexanos: EtOAc) para dar un aceite de color ámbar suave (9,42 g, 67,0%) m/z (LC-MS, ESP): 460 [MH]^{-}, R/T = 5,52 mins.

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Éster terc-butílico del ácido[4-(4,4,5,5-tetrametil-(1,3,2)dioxaborolan-2-il)-9H-tioxanten-1-il]-carbámico

A una solución de éster 1-terc-butoxicarbonilamino-9H-tioxanten-4-ílico del ácido trifluorometanosulfónico (3,05 g, 6,60 mmol) en dioxano seco (10 ml) se añadió bis (pinacolato) diboro (2,0 g, 7,92 mmol) y acetato de potasio anhidro (1,9 g, 19,80 mmol). La reacción se desgasificó luego (sonicación durante 20 minutos, luego saturado con N_{2}) antes de la adición del aducto dicloro [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]paladio (II) y diclorometano (0,26 g). La mezcla de reacción se desgasificó durante 20 minutos antes que un condensador de reflujo se adjuntara a la vasija de reacción que se calentó a 100ºC y se agitó vigorosamente durante 24 horas. La mezcla de reacción marrón se vertió en una almohadilla de sílice preparado en hexanos y eluyó con CH_{2}Cl_{2}: Hexanos (1:1). El eluyente recogido se concentró al vacío para dar el compuesto del título de crudo como aceite de color marrón oscuro que se utilizó sin purificación adicional (2,90 g).

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Éster terc-butílico del ácido [4-(6-morfolin-4-il-4-oxo-4H-piran-2-il)-9H-tioxanten-1-il]-carbámico

Se introdujo el éster terc-butílico del ácido [4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-9H-tioxanten-1-il]-carbámico (2,90 g, 6,50 mmol) en una solución de 2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (3) (1,4 g, 6,50 mmol) en dioxano anhidro (6 mL). Se añadió K_{2}CO_{3} pulverizado (2,01 g, 14,50 mmol) y la mezcla se desgasificó (sonificación durante 20 minutos luego saturado con N_{2}). A la solución desgasificada se añadió Tetrakis (trifenilfosfina) paladio (0,39 g) antes de desgasificar durante 20 minutos adicionales. Un condensador de reflujo se adjuntó a los recipientes de reacción, que quedó sumergido en un baño de aceite mantenido a 100ºC durante 14 horas después de lo cual la mezcla dorada se enfrió y diluyó con EtOAc (50 ml) y luego se lavó con agua (20 ml) y solución saturada acuosa de cloruro sódico (20 ml). El extracto orgánico se secó usando MgSO4, se filtró y se concentró al vacío para dar el compuesto del título como un aceite de color marrón claro que se utilizó sin purificación adicional. m/z (LC-MS, ESP): 493 [M + H]^{+},
R/T = 4,41 mins.

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2-(1-amino-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (106)

A una solución de éster terc-butílico del ácido [4-(6-morfolin-4-il-4-oxo-4H-piran-2-il)-9H-tioxanten-1-il]-carbámico (3,25 g) en CH_{2}Cl_{2} (25 ml) se añadió ácido trifluoroacético (5 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 18 horas, después se enfrió (0ºC) y se detuvo mediante la adición gota a gota de NaHCO_{3} saturado hasta que se logró pH 9. La mezcla se extrajo luego usando CH_{2}Cl_{2} (3 x 20 ml), los extractos orgánicos combinados fueron desecados (MgSO_{4}), se filtró y se concentró al vacío para dar un semi-sólido cristalino que se aplicó en una almohadilla de sílice fina y se eluyó con EtOAc (100%) a EtOAc: MeOH (9:1). El eluyente se concentró al vacío para dar el compuesto del título como un aceite de color ámbar suave (1,46 g, 56,4% en tres pasos) m/z (LC-MS, ESP): 393
[M + H]^{+}, R/T = 3,79 mins.

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Derivados de N-Acil-2-(1-amino-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona

(a) A una disolución agitada de 2-(1-amino-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (106) (39 mg, 0,1 mmol) en N,N-dimetilformamida anhidra (1 ml), se añadieron N-etildiisopropilamina (0,4 ml, 2,31 mmol) y O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluroniohexafluorofosfato (50 mg, 1,3 mmol). El ácido carboxílico adecuado (0,1 mmol) se añadió entonces y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El compuesto se purificó por HPLC preparativa para dar los compuestos deseados, que se muestran a continuación:

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(Tabla pasa a página siguiente)

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(b) A una solución de 2-(1-amino-9H-tioxanten-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona (106) (25 mg, 0,06 mmol) y piridina (0,5 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (1 mL) se añadió cloruro de sulfonilo adecuado (0,2 mmol) en una sola porción. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción resultante se purificó por HPLC preparativa para dar los compuestos deseados, que se muestran a continuación:

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Ejemplo 12 2-morfolin-4-il-6-(11-oxo-10,11-dihidrodibenzo[b,f]tiepin-4-il)-4-piranona

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Ácido [2-(2-metoxi-fenilsulfanil)-fenil]-acético

Se añadió 2-Metoxitiofenol (2,8 g, 20 mmol) a una solución de hidróxido de potasio (4,6 g, 80 mmol) en agua (50 ml) y la mezcla se desgasificó durante 15 minutos. Se añadió ácido 2-yodofenilacético (5,24 g, 20 mmol) y de bronce cobre (64 mg, 1 mmol) a la mezcla de reacción, que se puso a reflujo durante la noche. La solución se enfrió, se filtró y el precipitado se lavó con agua (50 ml). El filtrado se acidificó con HCl concentrado (pH 1), se extrajo con diclorometano (3 x 100 ml). Las fases orgánicas se combinaron, se extrajeron con solución saturada acuosa de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron al vacío para dar el compuesto del título como un aceite de color marrón pálido, que se solidificó durante la noche. El compuesto se utilizó sin ningún tipo de purificación adicional (5,10 g, 93%).

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6-metoxi-11H-dibenzo[b,f]tiepin-10-ona

Se disolvió ácido [2-(2-metoxi-fenilsulfanil)-fenil]-acético (5,40 g, 20 mmol) fue disuelto en ácido metanosulfónico (50 ml) y la mezcla se calentó durante 2 horas a 90ºC bajo agitación y una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió sobre el hielo con agitación. El precipitado negro se filtró y se secó durante la noche en una estufa de vacío (50ºC). El compuesto se utilizó sin ningún tipo de purificación adicional (4,60 g, 91%).

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6-hidroxi-11H-dibenzo[b,f]tiepin-10-ona

Se calentó 6-metoxi-11H-dibenzo[b,f]tiepin-10-ona (1,54 g, 6 mmol) y clorhidrato de piridina (10 g) durante 2 horas a 200ºC con agitación y atmósfera N_{2}. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y luego se trituró en agua (200 ml). El precipitado de color verde pálido se filtró y se secó durante la noche en una estufa de vacío (50ºC) (1,40 g, 96%). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H}= 4,20 (2H, s), 7,05-7,69 (7H, m), 10,56 (1H, s).

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Éster 11-oxo-10,11-dihidro-dibenzo[b,f]tiepin-4-ílico del ácido trifluorometanosulfónico

6-hidroxi-11H-dibenzo[b,f]tiepin-10-ona (242 mg, 1 mmol) se disolvió en piridina seca (5 ml) y anhídrido trifluorometanesufónico (0,17 ml, 1 mmol) se añadió gota a gota a la disolución agitada a 0ºC en atmósfera N_{2}. La mezcla de reacción se dejó reaccionar durante 4 horas y luego se vertió en agua (50 ml). Las fases orgánicas se extrajeron con diclorometano (3 x 50 ml), se lavaron con HCl 0,2 N, se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío para dar un sólido de color marrón oscuro. Este sólido se purificó mediante cromatografía en columna (diclorometano/hexano, 3:7, Rf = 0,15) para dar el compuesto del título como un sólido marrón pálido (0,37 g, 100%). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H}= 3,70 (2H, s), 7,31-7,8 (7H, m).

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6-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-11H-dibenzo[b,f]tiepin-10-ona

Se disolvieron el éster 11-oxo-10,11-dihidro-dibenzo[b,f]tiepin-4-ílico del ácido trifluorometanosulfónico (0,374 g, 1 mmol), bis (pinacolato) diboro (305 mg, 1,2 mmol) y acetato de potasio (294 mg, 3 mmol) en 1,4-dioxano (5 mL) y la mezcla se desgasificó durante 5 min. Pd (dppf) Cl_{2} (40 mg, 0,05 mmol) y dppf (28 mg, 0,05 mmol) se añadieron al recipiente, y los reactivos se calentaron a 100ºC en atmósfera de nitrógeno con agitación durante 12 horas. La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía flash (diclorometano/hexano, 1:4) y el residuo negro fue utilizado sin purificación adicional (0,35 g).

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2-morfolin-4-il-6-(11-oxo-10,11-dihidro-dibenzo[b,f]tiepin-4-il)-4-piranona (132)

2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (3) (215 mg, 1 mmol), 6-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-11H-dibenzo[b,f]tiepin-10-ona (352 mg, 1 mmol), carbonato de potasio pulverizado (276 mg, 2 mmol), se suspendieron en 1,4-dioxano (10 ml) y se desgasificaron durante 5 minutos. Pd (PPh_{3})_{4} (57 mg, 0,05 mmol) se añadió y la mezcla de reacción se calentó a 90ºC durante 4 horas con agitación vigorosa y una atmósfera N_{2}. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se suspendió en agua (100 ml). Las fases orgánicas se extrajeron con diclorometano (3 x 100 ml), se combinaron, se lavaron con solución saturada acuosa de cloruro sódico y se secaron sobre sulfato de sodio. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (sílice, acetato de etilo:etanol, 9:1) para dar el compuesto del título como un sólido marrón pálido (0,12 g, 29%). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H}= 3,40 (4H, t), 3,70 (4H, t), 4,43 (2H, s), 5,55 (1H, d), 6,29 (1H, d), 7,25-7,55 (5H, m), 7,78-7,81 (1H, m), 8,20-8,22 (1H, m), m/z (LC-MS, ESP), RT = 4,12 min, (M^{+}1) = 406.

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Ejemplo 13 2-(10,11-dihidro-dibenzo[b,f]tiepin-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona

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4-metoxi-10,11-dihidro-dibenzo[b,f]tiepina

Se añadió hidrato de hidrazina (4 ml) e hidróxido de potasio (2,72 g, 48 mmol) a 6-metoxi-11H-dibenzo[b,f]tiepin-10-ona (4,10 g, 16 mmol) en etilenglicol (20 ml) y la mezcla de reacción se calentó a 175ºC durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió agua (100 ml). La solución blanca se extrajo con éter (3 x 200 ml), las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (100 ml), solución saturada acuosa de cloruro sódico (100 ml) y se secaron sobre sulfato de magnesio. Se eliminó el disolvente al vacío para dar un aceite que se solidifica tras reposo para dar un sólido marrón que se utilizó sin ningún tipo de purificación adicional (2,45 g, 63%).

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10,11-dihidro-dibenzo[b,f]tiepin-4-ol

Se calentaron 4-metoxi-10,11-dihidro-dibenzo[b,f]tiepina (2,42 g, 10 mmol) y clorhidrato de piridina (15 g) con agitación a 180ºC durante una hora. Se añadió agua (100 ml) a la mezcla de reacción y las fases orgánicas se extrajeron con acetato de etilo (3 x 100 ml). Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con HCl 2N (50 ml), solución saturada acuosa de cloruro sódico (50 ml), y se secaron sobre sulfato de magnesio. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (1:9, diclorometano:hexano) para dar el compuesto deseado como un sólido blanco (1,55 g, 68%). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H}= 3,13-3,23 (4H, m), 6,70 (2H, t), 6,97-7,15 (4H, m), 7,38 (1H, s) 9,78 (1H, s); m/z (LC-MS, ESP), RT = 4,59 min, (M^{+}1) = 229.

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Éster 10,11-dihidro-dibenzo[b,f]tiepin-4-ílico del ácido trifluorometanosulfónico

10,11-dihidro-dibenzo[b,f]tiepin-4-ol (1,26 g, 5,5 mmol) se disolvió en piridina seca (5 ml) y anhídrido trifluorometanesufonico (1,12 ml, 6,6 mmol) se añadió gota a gota a la disolución agitada a 0ºC en atmósfera N_{2}. La mezcla de reacción se dejó reaccionar durante 4 horas y luego se vertió en agua (100 ml). La fase orgánica se extrajo con diclorometano (3 x 50 ml), se lavó con HCl 0,2 N, se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó al vacío para dar un sólido de color marrón oscuro. Este sólido se purificó mediante cromatografía flash (diclorometano) para dar un aceite (1,1 g, 56%). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H}= 3,25-3,29 (2H, m), 3,37-3,41 (2H, m), 7,12-7,17 (1H, m), 7,21-7,31 (3H, m), 7,38-7,41 (3H, s).

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2-(10,11-dihidro-dibenzo[b,f]tiepin-4-il)-4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolano

Se disolvieron el éster 10,11-dihidro-dibenzo[b,f]tiepin-4-ílico del ácido trifluorometanosulfónico (1,08 g, 3 mmol), bis (pinacolato) diboro (914 mg, 3,6 mmol) y acetato de potasio (883 mg, 9 mmol) en 1,4-dioxano (10 mL) y la mezcla se desgasificó durante 5 minutos. Pd(dppf)Cl_{2} (121 mg, 0,15 mmol) y dppf (83 mg, 0,15 mmol) se añadieron al recipiente, y los reactivos se calentaron a 100ºC en atmósfera de nitrógeno con agitación durante 12 horas. La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía flash (diclorometano) y el residuo negro fue utilizado sin purificación adicional (0,87 g).

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2-(10,11-dihidro-dibenzo[b,f]tiepin-4-il)-6-morfolin-4-il-4-piranona

2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (3) (1,12 g, 5,2 mmol), 2-(10,11-dihidro-dibenzo[b,f]tiepin-4-il)-4,4,5,5-tetra-
metil-[1,3,2]dioxaborolano (880 mg, 2,6 mmol), carbonato de potasio pulverizado (720 mg, 5,2 mmol), se suspendieron en 1,4-dioxano (10 ml) y se desgasificaron durante 5 minutos. Se añadió bis (tri-t-butilfosfina) paladio (66 mg, 0,13 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 90ºC durante 4 horas en una agitación vigorosa y una atmósfera N_{2}. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo fue suspendido en agua (100 ml). La fase orgánica se extrajo con diclorometano (3 x 100 ml), se combinó, se lavó con solución saturada acuosa de cloruro sódico y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (sílice, acetato de etilo:etanol, 9:1) para dar un sólido color marrón claro (50 mg, 5%). ^{1}HRMN (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta_{H}= 3,24-3,32 (6H, m), 3,44 (2H, t), 3,66 (4H, t), 5,50 (1H, d), 6,10 (1H, d), 7,08-7,51 (7H, m), m/z (LC-MS, ESP), RT = 4,48 min, (M^{+}1) = 392.

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Ejemplo 14 2-morfolin-4-il-6-(10H-fenotiazin-4-il)-4-piranona

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10H-fenotiazin-4-ol

A una solución de 3-fenilamino-fenol (5 g, 26,99 mmol) en 1,2-diclorobenceno (50 ml) se añadió azufre S_{8} (1,82 g, 56,76 mmol) en una sola porción y yodo (0,1 g, 0,39 mmol), que fue añadido en tres porciones durante 10 minutos. Un refrigerante de reflujo se adjuntó al recipiente de reacción, que se calentó a 185ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 4 horas y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró para eliminar un precipitado negro y el filtrado se diluyó con Et_{2}O (100 ml) y se lavó con agua (2 x 100 ml). La capa orgánica se separó y los disolventes volátiles se eliminaron para obtener un aceite de color verde oscuro que se purificó mediante cromatografía de columna flash (SiO_{2}) (Hexanosy a continuación 8:1-Hexanos: EtOAc) para dar un sólido amarillo pálido (2,38 g, 40,96%) m/z (LC-MS, ESP) 216 [M + H]^{+}, R/T = 4,12 mins.

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Éster terc-butílico del ácido 4-hidroxi-fenotiazina-10-carboxílico

A una solución de 10H-fenotiazin-4-ol (0,77 g, 3,58 mmol) en piridina anhidra (10 ml) se añadió dicarbonato-butílico di-terciario (3,12 g, 14,31 mmol) en una sola porción. La solución se calentó a 80ºC y se agitó bajo atmósfera de nitrógeno durante 60 minutos antes de dejarlo enfriar a temperatura ambiente y se trató con agua (20 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 30 ml). Las capas orgánicas se lavaron con agua (20 ml), se secaron con MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío para dar un aceite de color ámbar. El residuo crudo fue tratado con MeOH (15 ml) y NaOH sólido (0,65 g, 16,25 mmol). La mezcla se calentó a 80ºC durante 60 minutos, se enfrió a temperatura ambiente y se neutralizó a pH 7 con una solución de HCl 1M. La suspensión resultante se filtró y se secó para dar el compuesto del título como un sólido beige (1,13 g, 100%) que se utilizó sin purificación adicional. m/z (LC-MS, ESP): 315 [M-H]^{-}, R/T de 4,72 mins.

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Éster terc-butílico del ácido 4-Trifluorometanesulfoniloxi-fenotiazina-10-carboxílico

Se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (2,95 ml, 17,09 mmol) gota a gota durante 10 minutos a una disolución agitada refrigerada (0ºC) de éster terc-butílico del ácido 4-hidroxi-fenotiazina-10-carboxílico (3,60 g, 11,41 mmol) en piridina (40 ml). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1 hora antes de la adición de agua (80 ml). La mezcla se extrajo mediante EtOAc (2 x 60 ml). Los extractos orgánicos fueron secados con MgSO_{4}, filtrados y concentrados al vacío para dar un aceite de color marrón oscuro. El residuo crudo se purifica por cromatografía flash (SiO_{2}) (4:1-Hexanos: EtOAc) para obtener un aceite de color amarillo (5,02 g, 98,24%) m/z (LC-MS, ESP): 348 [M + H-BOC]^{+}, R/T = 5,61 mins.

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Éster terc-butílico del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenotiazina-10-carboxílico

A una disolución agitada del éster terc-butílico del ácido 4-trifluorometanosulfoniloxifenotiazina-10-carboxílico (3,0 g, 6,7 mmol) en dioxano anhidro (10 ml) se añadió bis(pinacolato)diboro (2,05 g, 8,06 mmol) y acetato de potasio (1,96 g, 20,01 mmol). La reacción fue luego desgasificada (sonicación durante 20 minutos y luego saturada con N_{2}) antes de la adición de aducto de dicloro [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]paladio (II) y diclorometano (0,27 g, 0,33 mmol). La mezcla de reacción fue desgasificada durante otros 20 minutos antes de adjuntar un condensador de reflujo al recipiente de reacción que se calentó a 90ºC y se agitó vigorosamente durante 72 horas. La mezcla de reacción de color marrón oscuro se dejó enfriar entonces a temperatura ambiente antes de aplicar una plataforma de silicio gruesa preparada en hexanos y eluida con hexanos: CH_{2}Cl_{2}-(2:1). El eluyente se concentró al vacío para dar un aceite de color marrón oscuro (2,85 g, 100%) que se utilizó para la siguiente transformación sin mayor purificación. m/z (LC-MS, ESP): 326 [M + H-BOC]^{+}, R/T = 5,86 mins.

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Éster terc-butílico del ácido 4-(6-morfolin-4-il-4-oxo-4H-piran-2-il)-fenotiazina-10-carboxílico (134)

Se añadieron carbonato potásico en polvo (2,03 g, 14,68 mmol) y 2-cloro-6-morfolin-4-il-4-piranona (1,44 g, 6,70 mmol) a una disolución agitada de éster terc-butílico del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenotiazina-10-carboxílico (2,85 g, 6,70 mmol) en dioxano anhidro (20 ml) y la mezcla se desgasificó (sonicación durante 20 minutos después saturada con N_{2}) a fondo. A continuación se añadió Tetrakis (trifenilfosfina) paladio en una sola porción y la mezcla se desgasificó (sonicación durante 20 minutos y luego saturada con N_{2}) una vez más antes de adjuntar un condensador de reflujo y la mezcla se calentó a 100ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 20 horas. Se añadió agua (30 ml) y se extrajo la mezcla con EtOAc (3 x 30 ml). Los extractos orgánicos fueron secados con MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío para obtener un sólido cristalino color marrón oscuro, (3,21 g, 100%) que se recogió sin mayor purificación. m/z (LC-MS, ESP): 479 [M + H]^{4}, R/T = 4,55 mins.

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2-morfolin-4-il-6-(10H-fenotiazin-4-il)-4-piranona (135)

A una disolución agitada del éster terc-butílico del ácido 4-(6-morfolin-4-il-4-oxo-4H-piran-2-il)-fenotiazina-10-carboxílico (3,65 g, 7,63 mmol), en CH_{2}Cl_{2} (30 ml) se añadió ácido trifluoroacético en una sola porción. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 20 horas después de lo cual la reacción se concentró al vacío para dar un jarabe espeso que se basificó gota a gota con NaHCO_{3} saturado (40 ml). La mezcla de color verde oscuro se agitó entonces a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla se filtró y el filtrante fue retenido, se lavó con agua y se secó para dar el compuesto del título como un sólido de color verde oscuro (2,89 g, 83,74% en 3 pasos) m/z (LC-MS, ESP): 479 [M + H]^{+}, R/T = 4,05 mins.

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Ejemplo 15 4-morfolin-4-il-6-tiantren-1-il-piran-2-ona

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Ácido Tiantren-1-carboxílico

Se añadió gota a gota t-butil litio (1,7 M en hexano, 55,1 ml, 93,6 mmol) a una disolución agitada de tiantreno (16,9 g, 78 mmol) en THF seco (250 ml) a -78ºC durante 30 minutos en atmósfera inerte (N_{2}). La mezcla de reacción se dejó a temperatura ambiente y la solución rojiza resultante se dejó en agitación durante 24 horas. La mezcla se enfrió hasta -78ºC y se burbujeó dióxido de carbono (a partir de gránulos de hielo seco y secado al pasar sobre algunos tamices A4 activados) en la solución durante 1 hora. La reacción se calentó de nuevo hasta temperatura ambiente con CO_{2} todavía burbujeante a través de la misma durante una hora. A continuación se añadió agua (10 ml) con cuidado a la solución y el pH fue ajustado a 1 (papel de pH) con HCl 2N. El disolvente se eliminó al vacío y el sólido amarillo formado se filtró y se secó durante la noche en desecadores de vacío. El sólido fue recristalizado a partir de metanol para dar el producto deseado como un sólido cristalino de color amarillo pálido (11,9 g, 59%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta_{H} = 7,25 (3H, m), 7,50 (4H, m). m/z (LC-MS, ESP): RT = 4,53 min, (M^{-}-1) = 259.

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1-Tiantren-1-il-etanona

Se añadió gota a gota metil litio (1,6 M en éter, 57 ml, 90 mmol) a una disolución agitada de ácido tiantren-1-carboxílico (11,71 g, 45 mmol) en tetrahidrofurano seco (200 ml) a -78ºC durante 30 minutos bajo una atmósfera inerte (N_{2}). La mezcla de reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente y (estaba presente una suspensión blanca muy gruesa) se dejó en agitación durante 4 horas. A continuación se añadió agua (10 ml) con cuidado a la solución y el pH fue ajustado a 1 (papel de pH) con HCl 2N. El disolvente se eliminó al vacío y el sólido amarillo formado se filtró y se secó durante la noche en desecadores de vacío. El sólido se purificó por cromatografía en columna (acetato de etilo/hexano, 1:9) y se recristalizó a partir de etanol para dar el producto deseado (6,58 g, 57%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta_{H} = 2,65 (3H, s), 7,26 (3H, m), 7,47 (2H, m), 7,62 (2H, d). m/z (LC-MS, ESP) RT = 4,95 min; (M^{+} + 1) = 259.

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Ácido 3-oxo-3-tiantren-1-il-ditiopropiónico

Una solución de CS_{2} (1,55 ml, 25,5 mmol) y 1-tiantren-1-il-etanona (6,59 g, 25,5 mmol) en tetrahidrofurano seco (20 ml) se añadió gota a gota a una solución de t-butóxido de potasio (5,73 g, 51 mmol) en tetrahidrofurano seco (50 ml) bajo N_{2} a 0ºC. Se observó una coloración roja y la formación de un precipitado. La mezcla se dejó con agitación vigorosa durante el fin de semana y luego se vertió sobre agua (200 ml) y se extrajo con éter (3 x 100 ml). La parte acuosa se acidificó con H_{2}SO_{4} 2N a un pH de 1 (papel de pH Whatmann) y se extrajo con éter (3 x 100 ml). La parte orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y el disolvente se evaporó al vacío para dar el producto deseado como una resina de color naranja oscuro (5,00 g, 59%). m/z (LC-MS, ESP), RT = 5,11, (M- -1) = 333.

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Éster etílico del ácido 3-oxo-3-tiantren-1-il-ditiopropiónico

Se disolvieron en agua (50 ml) hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (5,1 g, 15 mmol) e hidróxido de sodio (1,2 g, 30 mmol). Una solución de ácido 3-oxo-3-tiantren-1-il-ditiopropiónico (5,02 g, 15 mmol) en diclorometano (50 ml) se añadió a la solución en una parte y se agitó vigorosamente durante 30 minutos. La capa acuosa se retiró y se añadió yodoetano (4 ml) a la solución de diclorometano que se agitó entonces durante 1 hr. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se llevó a agua (200 ml). Las fases orgánicas se extrajeron con éter (3 x 100 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (acetato de etilo:hexano, 1:4) para dar el compuesto deseado como un sólido de color amarillo brillante (4,00 g, 73%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta_{H} = 1,43 (3H, t), 3,33 (3H, q), 6,57 (1H, s), 7,26 (3H, m), 7,51 (3H, m), 7,60 (1H, m), 15,09 (1H, s); m/z (LC-MS, ESP), RT = 6,50 min, (M^{-}-1) = 361.

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3-morfolin-4-il-1-tiantren-1-il-3-tioxo-propan-1-ona

Se añadió morfolina (0,96 ml, 11 mmol) a una solución de éster etílico del ácido 3-oxo-3-tiantren-1-il-ditiopropiónico (3,99 g, 11 mmol) en etanol (20 ml). La reacción se colocó a reflujo durante 8 horas y luego se enfrió a temperatura ambiente. El precipitado formado se filtró y se secó para dar el producto deseado como un sólido de color naranja brillante (3,50 g, 82%). m/z (LC-MS, ESP), RT = 4,81 y 5,33 min mismo (M+1) = 388.

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3-Etilsulfanil-3-morfolin-4-il-1-tiantren-1-il-propenona

3-morfolin-4-il-1-tiantren-1-il-3-tioxo-propan-1-ona (3,49 g, 9 mmol), yodoetano (0,8 ml, 10 mmol), carbonato de potasio pulverizado (1,38 g, 10 mmol), se suspendieron en acetona (20 ml) y la mezcla se calentó a reflujo durante 24 horas. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se llevó a agua (50 ml). Las fases orgánicas se extrajeron con diclorometano (3 x 100 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron al vacío. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (acetato de etilo/hexano) para obtener el producto deseado como un sólido amarillo (2,26 G, 60%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta_{H}= 1,34 (3H, t), 2,96 (2H, q), 3,73 (4H, m), 3,84 (4H, m), 7,21 (3H, m), 7,47 (4H, m), m/z (LC-MS, ESP), RT = 5,01 min, (M^{+}1) = 416.

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4-morfolin-4-il-6-tiantren-1-il-piran-2-ona (136)

Una suspensión de polvo de zinc activado (0,65 g, 10 mmol), bromoacetato de etilo (0,56 ml, 5 mmol) y algunos pocos cristales de yodo en tetrahidrofurano seco (20 ml) se calentó a 50ºC durante una hora con agitación bajo una atmósfera N_{2}. Una solución de 3-etilsulfanil-3-morfolin-4-il-1-tiantren-1-il-propenona (1,04 g, 2,5 mmol) en tetrahidrofurano seco (20 ml) se añadió gota a gota, con agitación y la mezcla se calentó a reflujo durante 12 horas bajo atmósfera N_{2}. La mezcla se vertió sobre H_{2}SO_{4} enfriado en hielo diluido al 3% (50 ml), la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml), los extractos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y el disolvente se evaporó en el vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (acetato de etilo/hexano) para obtener el producto deseado (0,35 g, 35%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta_{H}= 3,45 (4H, t), 3,85 (4H, t), 5,35 (1H, d), 6,29 (1H, d), 7,26 (3H, m), 7,50 (3H, m), 7,61 (1H, m), m/z (LC-MS, ESP), RT = 4,50 min, (M^{+}+1) = 396.

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Ejemplo 16 Derivados amida del ácido 6-(6-morfolin-4-il-4-oxo-4H-piran-2-il)-tiantreno-2-carboxílico

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Ácido 3-Clorosulfonil-4-fluoro-benzoico

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Se añadió ácido clorosulfónico (100 ml, 1,5 mol) al ácido 4-fluorobenzoico (43 g, 0,307 mol) con agitación. La mezcla transparente de color amarillo oscuro se calentó a 150ºC durante 24 horas. La solución amarilla se enfrió de nuevo a temperatura ambiente y se vertió sobre hielo con agitación vigorosa. El precipitado blanco se filtró y se prensó para secarlo. El sólido se secó durante la noche en un desecador al vacío y sobre sílice activado (54,65 g, 75%). MP: 116-117ºC; m/z (LC-MS, ESP), RT = 4,03 min, (M^{-}-1) = 237-239 (relación 1:3).

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Ácido 4-fluoro-3-sulfino-benzoico

Se agregó lentamente sulfito de sodio (130 g, 1,034 mol) a una solución de ácido 3-clorosulfonil-4-fluoro-benzoico (49,39 g, 0,207 mol) en agua (150 ml) a 0ºC con una agitación vigorosa.

Después de completar la adición, la reacción se calentó de nuevo a temperatura ambiente durante 1 hora y el pH de la solución se mantuvo en torno a pH 6-7 con solución de hidróxido sódico 2N. La suspensión de color blanco lechoso se filtró y el sólido se lavó con solución de hidróxido sódico 2N (150 ml) y agua (100 ml). El filtrado se enfrió en un baño de hielo y se añadió HCl concentrado hasta que ya no se formó precipitado (pH<1). El precipitado blanco se filtró, se presionó para secarlo y se dejó en un desecador al vacío durante la noche y sobre sílice activo (27,92 g, 66%). m/z (LC-MS, ESP), RT = 0,98 min, (M^{-}-1) = 203.

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Ácido 4-(2-Bromo-fenilsulfanil)-3-sulfino-benzoico

Se añadió 2-bromobencenotiol (25 g, 132 mmol) a una solución de ácido 4-fluoro-3-sulfino-benzoico (13,5 g, 66 mmol) y gránulos de NaOH (11 g, 264 mmol) en agua (30 ml). La mezcla amarilla entonces se desgasificó durante 10 minutos y luego se calentó a 140ºC durante 48 horas. La reacción se enfrió a 0ºC y se acidificó a pH 4-5 (papel de pH) con HCl concentrado. El precipitado formado se filtró, se lavó con hexano y se secó en un desecador de vacío sobre sílice activada durante la noche (20,69 g, 84%). m/z (LC-MS, ESP), RT = 3,67 min, (M^{-}-1) = 373.

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Ácido 6-bromo-tiantreno-2-carboxílico

Se añadió lentamente ácido 4-(2-bromo-fenilsulfanil)-3-sulfino-benzoico (14 g, 38 mmol) a una disolución agitada de ácido metanosulfónico (160 ml). La solución morada se calentó a 60ºC durante 3 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en hielo (300 ml) donde apareció un precipitado blanco crudo. El sólido se filtró y se lavó con agua (100 ml) y se secó en un desecador de vacío sobre sílice activado (9,48 g, 73%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta_{H}= 7,29 (1H, t), 7,59 (1H, dd), 7,70 (1H, dd), 7,74 (1H, d), 7,87 (1H, dd), 8,03 (1H, d), M/z (LC-MS, ESP), RT = 4,99 min, (M^{-}-1) = 339.

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Éster metílico del ácido 6-bromo-tiantreno-2-carboxílico

Al ácido 6-bromo-tiantreno-2-carboxílico (9 g, 28 mmol) en metanol (180 ml) se añadió lentamente H_{2}SO_{4} concentrado (5 ml). La suspensión de color blanco lechoso se calentó a 80ºC hasta que todos los sólidos pasaron a la solución (2 horas). La suspensión se concentró al vacío. Se añadió agua (100 ml) y las fases orgánicas se extrajeron con diclorometano (3 x 70 ml), se secaron sobre MgSO_{4} y se evaporó al vacío, produciendo un sólido amarillo. (4,48 g, 45%). ^{1}HRMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta_{H}= 3,94 (3H, s), 7,13 (1H, t), 7,44 (1H, dd), 7,54 (1H, dd), 7,61 (1H, d), 7,93 (1H, dd), 8,13 (1H, d).

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Éster metílico del ácido 6-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiantreno-2-carboxílico

Se desgasificaron durante 15 minutos éster metílico del ácido 6-bromo-tiantren-2-carboxílico (1 g, 2,8 mmol), bis (pinacolato) diboro (0,86 g, 3,4 mmol) y acetato de potasio (0,12 g, 0,14 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml),. A la suspensión amarilla se añadió luego PdCl_{2}(dppf) (78 mg, 0,14 mmol) y dppf (0,83 g, 8,5 mmol). La mezcla de color rojo oscuro se calentó a 90ºC bajo una atmósfera de N_{2} durante 48 horas. La mezcla cruda se purificó mediante cromatografía flash (diclorometano) para dar aceite marrón viscoso (1,13 g), que fue utilizado sin purificación adicional.

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Éster metílico del ácido 6-(6-morfolin-4-il-4-oxo-4H-piran-2-il)-tiantren-2-carboxílico (137)

Se disolvieron éster metílico del ácido 6-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiantren-2-carboxílico (1,1 g, 2,83 mmol), 2-cloro-6-morfolina-4-il-4-piranona (0,73 g, 3,4 mmol) y K_{2}CO_{3} (0,8 g, 5,66 mmol) en 1,4-dioxano seco (7 ml). La mezcla se desgasificó durante 15 minutos y Pd(PPh_{3})_{4} (0,16 g, 5% mol) se añadió a continuación. La mezcla de color marrón oscuro se calentó a 90ºC en atmósfera de N_{2} durante 24 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se añadió agua (100 ml). El sólido marrón se filtró y se lavó con agua (1,23 g, 96%). m/z (LC-MS, ESP), RT = 4,49 min, (M^{+}+1) = 454.

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Sal sódica de 6-(6-morfolin-4-il-4-oxo-4H-piran-2-il)-tiantren-2-carboxilato (138)

Se disolvieron en metanol (40 ml) el éster metílico del ácido 6-(6-morfolin-4-il-4-oxo-4H-piran-2-il)-tiantren-2-carboxílico (1,1 g, 2,43 mmol)) y gránulos de NaOH (97 mg, 2,43 mmol). La suspensión marrón se calentó a 80ºC en N_{2} durante 24 horas. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se trituró con éter dietílico. El producto fue recogido por filtración en forma de polvo fino de color marrón oscuro (1,11 g, 99%). m/z (LC-MS, ESP), RT = 3,90 min,
(M^{-}-1) = 438.

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Derivados amida del ácido 6-(6-morfolin-4-il-4-oxo-4H-piran-2-il)-tiantren-2-carboxílico

Sal sódica de 6-(6-morfolin-4-il-4-oxo-4H-piran-2-il)-tiantren-2-carboxilato (138) (20 mg, 0,04 mmol), HB-TU (18 mg, 0,05 mmol), di-isopropiletilamina (9 \mul, 0,05 mmol), la amina apropiada (0,04 mmol), y dimetilacetamida seca (0,5 ml). La mezcla de color marrón oscuro se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se purificó por HPLC preparativa para dar los productos deseados, que se muestran a continuación:

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B) Ejemplos biológicos Materiales y Procedimientos Ensayos de inhibición de ATM in vitro

A fin de evaluar la acción inhibidora de los compuestos contra la ATM in vitro, se utilizó el siguiente ensayo para determinar los valores IC_{50}.

La proteína ATM se inmunoprecipitó a partir de extracto nuclear de células HeLa utilizando anti-suero policlonal de conejo desarrollado en los \approx 500 residuos de aminoácidos C-terminal de la proteína ATM humana. La inmunoprecipitación se realizó según la metodología descrita por Banin, S. et al. (1998). 10 \mul de ATM inmunoprecipitada en Tampón C (50 mM Hepes, pH 7,4, 6 mM MgCl_{2}, 150 mM NaCl, 0,1 mM ortovanadato de sodio, 4 mM MnCl2, 0,1 mM ditiotreitol, 10% de glicerol) se añadió a 32,5 \mul de tampón C que contenía 1 \mug de sustrato ATM GSTp53N66 en placas de polipropileno de 96 pocillos con fondo en forma de V. El sustrato GSTp53N66 es el residuo de aminoácidos 66 amino terminal de la p53 humana de tipo salvaje fusionada a la glutatión S-transferasa. La ATM fosforila p53 en el residuo de serina 15 (Banin, S. et al. (1998)). Diferentes concentraciones de inhibidor se añadieron entonces. Todos los compuestos se diluyeron en DMSO para obtener una concentración final de ensayo de entre 100 \muM y 1 nm, con DMSO estando en una concentración final de 1%. Después de 10 minutos de incubación a 37ºC, las reacciones fueron iniciadas por la adición de 5 \mul de 500 \muM Na-ATP. Después de 1 hora con agitación a 37ºC, 150 \mul de tampón fosfato salino (PBS), se añadieron a la reacción y la placa se centrifugó a 1500 rpm durante 10 minutos. 5 \mul de la reacción se transfirieron entonces a una placa de 96 pocillos blanca y opaca que contiene 45 \mul de PBS para permitir que el sustrato GSTp53N66 se una a los pocillos de la placa. La placa fue cubierta y se incubó a temperatura ambiente durante 1 hora con agitación antes de desechar el contenido. Los pocillos de la placa se lavaron dos veces con la adición de PBS antes de la adición de albúmina sérica bovina (BSA) al 3% (p/v) en PBS. La placa se incubó a temperatura ambiente durante 1 hora con agitación antes de desechar el contenido y lavar dos veces con PBS. Se añadió a los pocillos, 50 \mul de una dilución 1:10.000 de anticuerpo primario de Fosfoserina-15 (tecnología de señalización de la célula, #9284L) en BSA/PBS al 3% se añadió para detectar la producción de la fosforilación del residuo serina 15 de p53 inducida por la ATM quinasa. Después de 1 hora de incubación a temperatura ambiente con agitación, los pocillos fueron lavados cuatro veces con PBS antes de la adición de un anticuerpo secundario conjugado a HRP anti-conejo(Pierce, 31462) con agitación durante 1 hora a temperatura ambiente. Los pocillos fueron lavados cuatro veces con PBS antes de la adición de reactivo quimioluminiscente (NEN Renaissance, NEL 105). La placa fue agitada brevemente a continuación, se cubrió con un sellado para placa transparente y se transfirió a un NXT TopCount para el recuento de quimioluminiscencia. Se registraron para cada reacción los recuentos por segundo, tras un tiempo de recuento de un segundo.

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La actividad de la enzima para cada compuesto se calcula entonces utilizando la siguiente ecuación:

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Sensibilización de las células a las radiaciones ionizantes o quimioterapias de rotura de doble cadena de ADN

Para probar la eficacia del compuesto 4 inhibidor de la ATM de su capacidad para sensibilizar las células a la radiación ionizante o quimioterapia que inducen la ruptura de la cadena doble de ADN, se realizaron ensayos de supervivencia clonogénica utilizando líneas celulares procedentes de HeLa o tumor LoVo humano. La línea de HeLa fue utilizada para estudios de radiación ionizante, mientras que LoVo fue utilizado para los estudios con agentes quimioterapéuticos. Se sembró un número suficiente de células para dar -100 colonias por tratamiento en 6 placas de pocillos 4-6 horas antes de la adición de compuesto 4 en las concentraciones mostradas en los gráficos. Después de 1 hora, se añadió un rango de concentraciones de etopósido (figura 2), camptotecina (figura 3) o doxorubicina (figura 4). Para el tratamiento de las radiaciones ionizantes (figura 1), después de 1 hora de incubación con el compuesto 4, las células fueron irradiadas en 1Gy/min utilizando una cámara de rayos X Faxitron 43855D. Para todos los tratamientos, tras otras 16 horas de incubación, se retiraron los medios que contienen fármacos y se añadieron nuevos medios antes de una incubación adicional de 10 días antes de la tinción de las colonias con Giemsa. Todos los compuestos fueron solubilizados en DMSO, con una concentración final en las células de no más de 0,1%. Las colonias resultantes con >50 células fueron consideradas como positivas.

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Vectores retrovirales recombinantes y preparación de virus

Se diseñaron construcciones de empaquetamiento que expresan gag/pol de VIH-1 deficientes en la replicación \Psi^{-}/LTR^{-}/Vpr^{-} basándose en el vector L\DeltaP2GPH (Haselhorst et al., 1998 Development of cell lines stably expressing human immunodeficiency virus type 1 proteins for studies in encapsidation and gene transfer.J Gen Virol, 79, 231-7.). Se fabricó una construcción de empaquetamiento mutante en la integrasa de VIH-1, que codifica para un cambio de aminoácidos D64V en el gen de la integrasa, mediante mutagénesis dirigida al sitio (sistema de mutagénesis QuikChange, Stratagene). El vector de transferencia de luciferasa de VIH-1, VIH-Luc, se construyó insertando del gen de la luciferasa de luciérnaga entre dos secuencias de LTR de VIH-1 y una secuencia señal de empaquetamiento de ARN de VIH-1 \Psi. El plásmido de expresión de la envoltura G de VSV se ha descrito anteriormente (Naldini et al., (1996) In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector. Science, 272, 263-7). Poblaciones retrovirales recombinantes de VIH-1 fueron producidos utilizando una modificación del sistema de expresión de tres plásmidos descrito por Naldini et al. 1996. 6 x 10^{6} células 293T de riñón humano fueron co-transfectadas con 10 \mug de construcción de empaquetamiento WT o integrasa mutante en D64V, 8 \mug de vector de transferencia VIH-Luc y 5 \mug de plásmidos de expresión de la proteína de envoltura G VSV utilizando el reactivo Lipofectamina-2000 (Gibco-BRL). 48 horas después de la transfección se recogieron los sobrenadantes de cultivo de células que contienen retrovirus, se filtraron a través de membranas de acetato de celulosa 0,45 \muM y se almacenaron a -80ºC. Los títulos virales de VIH-1 recombinante se estimaron utilizando el kit para ELISA del antígeno p24 gag de VIH-1 de Beckman-Coulter, de acuerdo a las instrucciones del fabricante.

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Transducciones retrovirales (LUCIA)

Para los ensayos basados en luciferasa del VIH-1 (LUCIA), se tradujeron células T Jurkat (cultivos en suspensión) con sobrenadantes que contienen virus recombinante VIH-Luc en un MOI de 0,5 en presencia de 8 \mug/ml de polibreno a 37ºC durante 1 hora. Las células se lavaron y se colocaron en placas de pocillos múltiples (3 x 10^{4} células/pocillo) de una placa de cultivo de tejidos de 96 pocillos opaca blanca (Corning) con diferentes concentraciones de inhibidores. Para las células HeLa (células adherentes) se colocaron en placas y se permitió que se unieran durante 24 horas antes de la exposición a sobrenadantes que contienen virus. Las células fueron incubadas a 37ºC durante 48 horas posteriores a la adición del virus y se cuantificó la actividad luciferasa en un contador de centelleo de microplaca Packard-TopCount NXT usando reactivo de ensayo de luciferasa Bright-Glo (Promega Corp.). El error estándar (SE) dado para todos los experimentos de transducción cuantificados se calcula a partir de al menos tres experimentos independientes. La citotoxicidad fue evaluada en paralelo con LUCIA (pero sin virus) utilizando un ensayo de proliferación celular de una solución CellTiter-96 AQ_{ueous} (Promega Corp.), disponible comercialmente de acuerdo a las instrucciones del fabricante.

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Ensayos de replicación de VIH-1 de 4 días

Células T-C8166 fueron lavadas e infectadas con VIH-1 (cepas HXB2_{wt} y HXB2_{AZTres}, cambios de amino ácido en RT, 67N, 70R, 215F, 219Q) a baja multiplicidad de infección durante una hora a temperatura ambiente. Las células se lavaron y distribuyeron (5 x 10^{4} células/pocillo), por triplicado, en los pocillos de placas de cultivo celular de 96 pocillos con diferentes concentraciones de los inhibidores. Las placas fueron incubadas a 37ºC durante 4 días. El fluido de cultivo libre de células fue recogido y estudiado para detectar los niveles de antígeno p24 viral utilizando un kit de ELISA disponible comercialmente (Murex), de acuerdo a las instrucciones del fabricante. La citotoxicidad fue evaluada mediante la distribución (5 x 10^{4} células/pocillo) células T C8166 no infectadas en los pocillos por triplicado, de placas de 96 pocillos de cultivo celular con diferentes concentraciones de inhibidores e incubando las placas a 37ºC. Después de 4 días, se añadieron 25\mul de XTT, que se metaboliza por las células viables pero no por células muertas, y las placas se incubaron por un período de 3 horas a 37ºC. Por último, la absorbancia fue leída en una longitud de onda de 450 nm.

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Resultados En ensayos in vitro de ATM

Compuestos fueron ensayados para la actividad de inhibición de ATM utilizando el procedimiento descrito anteriormente. Algunos resultados se detallan a continuación en la Tabla 1 como valores IC_{50} (la concentración en la que se inhibe el 50% de la actividad de la enzima). Estos se determinan en un rango de concentraciones diferentes, normalmente desde 100 \muM hasta 1 nM. Dichos valores IC_{50} se utilizan como valores comparativos para identificar potencias de compuesto incrementadas.

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TABLA 1

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Los compuestos siguientes tienen valores IC_{50} de menos de 200 nM: 19-43, 44-87, 93, 102, 106-107, 109-113, 115-117, 119, 122-124, 126-131, 133-135, 137-140, 142-182.

Los siguientes compuestos tienen valores IC_{50} de menos de 2\muM, además de los mencionados anteriormente: 88-92, 94-101, 103-105, 108, 114, 118, 120-121, 125, 132, 136 y 141.

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Sensibilización de las células a las radiaciones ionizantes o quimioterapias de rotura dela doble cadena de ADN

Los datos mostrados en las figuras 1-4 muestran claramente que la inhibición de ATM con el compuesto 4 tiene un efecto significativo en la sensibilización de líneas celulares derivadas de tumores a los agentes inductores de rotura de doble cadena de ADN.

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Transducción retroviral (LUCIA)

Se ensayó el compuesto 4 (conocido como Ku0064) por su capacidad para reprimir las infecciones retrovirales utilizando LUCIA basado VIH-1 (Fig. 5).

\newpage

Se encontró que inhibía de manera eficiente el LUCIA de VIH-1 a bajas concentraciones micromolares en las células T Jurkat (Fig. 5), así como todas las demás líneas de células ATM ensayadas. La concentración inhibitoria de 50% (IC_{50}) para el compuesto 4 en LUCIA fue alrededor de 1-2 \muM en células Jurkat (Fig. 5) y en el rango de 1 a 10 \muM para todas las otras líneas celulares analizadas.

El compuesto 4 también fue probado para efectos citotóxicos y de inhibición del crecimiento en paralelo a LUCIA para asegurar que no era éste el motivo de la reducción observada en la eficiencia de transducción. En concentraciones de hasta 10 \muM, la exposición al compuesto 4 no mostró efectos citotóxicos significativos en las células Jurkat en el transcurso del ensayo (fig. 5).

LUCIA basado en VIH-1 se realizó en las células HeLa en presencia de concentraciones crecientes tanto de compuesto 4 como de inhibidor de la transcriptasa inversa análogo de nucleósido, 3'-azido-3'-desoxitimidina (AZT).

La Fig. 7 muestra que la combinación de compuesto 4 y AZT se encontró que actúa con mayor eficacia en la inhibición de la infección por VIH-1 que cualquiera de los fármacos sólo. La Fig. 7 presenta un ejemplo en que concentraciones crecientes de AZT se encontró que mejoran la eficacia de un compuesto de la presente invención en la inhibición de infecciones por VIH-1.

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Inhibición de la replicación del VIH

Una cepa VIH-1 competente en replicación (VIH_{HXB2}) se utilizó para infectar células T C8166 en ausencia o presencia de concentraciones crecientes de compuesto 4 (Figura 8), para demostrar la eficacia de los compuestos de la presente invención en un sistema donde se produce la replicación del VIH. Después de 4 días de la replicación del virus, la cantidad de VIH-1 en los sobrenadantes de cultivo de células se cuantificó mediante ELISA con antígeno p24. Como control, se utilizó el inhibidor AZT de RT en experimentos paralelos. Fig. 8a muestra la inhibición de la replicación del VIH-1 de una cepa tipo salvaje de VIH-1 (VIH_{HXB2} wt) por el compuesto 4 y AZT. La concentración IC_{50} de compuesto 4 para inhibición de la replicación de VIH-1 fue de 0,1 \muM. AZT mostró una IC_{50} de 0,002 \muM.

Ensayos de replicación de 4 días se realizaron usando una cepa del VIH-1 resistente al fármaco AZT (VIH_{HXB2} AZTres) en ausencia o presencia de concentraciones crecientes de compuesto 4 (Fig. 8B, Cuadro 2). La IC_{50} de concentración de compuesto 4 para inhibición de la replicación de VIH-1 de la cepa resistente a AZT fue de 0,06 \muM. AZT mostró una IC_{50} de 0,05 \muM (Tabla 2), demostrando así una resistencia de 25 veces de AZT, cuando se compara con la cepa de tipo salvaje.

El compuesto 4 inhibe la replicación del VIH-1 igual de bien en VIH-1 de tipo salvaje (IC_{50} = 0,1 \muM; la figura. 8A, Tabla 2) en la cepa de VIH-1 resistente a AZT (IC_{50} = 0,06 \muM; la figura 8B, tabla 2). Estos datos proporcionan evidencia de que los compuestos de la presente invención pueden ser efectivos tanto en el tratamiento de infecciones por VIH-1 resistentes AZT de tipo salvaje y adquirido y, por implicación, cepas VIH-1 resistentes a otros fármacos que reconocen proteínas virales.

El compuesto 4 también fue probado para efectos citotóxicos y de inhibición del crecimiento de las células C8166 en paralelo con los ensayos de replicación de VIH-1 para asegurar que ésta no era la razón de los efectos observados del título viral (Fig. 8C). La exposición de las células C8166 al compuesto 4 no mostró efectos citotóxicos significativos en el transcurso de la prueba o en el intervalo de concentración efectiva (inferior a 1 \muM), mostró que inhibe la replicación del VIH-1. La concentración citotóxica 50% (CC_{50}) del compuesto 4 de las células C8166 se estimó en más de 20 \muM. La Tabla 2 resume los experimentos que muestran que la actividad anti-VIH-1 del compuesto 4 en los ensayos de replicación 4 días. De manera destacada, la IC_{50} en LUCIA (1 \muM; Fig. 5) se observó que fue 10 veces mayor que en los ensayos de replicación (0,1 \muM, Fig. 8A). Esta diferencia puede explicarse por el hecho de que en los ensayos de replicación de múltiples rondas de infección y de cada ronda proporciona el potencial para la inhibición del VIH-1. Por lo tanto, el efecto inhibidor del compuesto 4 se compone en los ensayos de replicación VIH-1. Las concentraciones IC_{50} estimadas en los ensayos de replicación, por lo tanto, pueden representar un reflejo más preciso de la magnitud de la inhibición que puede verse en pacientes infectados por VIH-1.

TABLA 2

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Referencias citadas en la descripción

Esta lista de referencias citadas por el solicitante está prevista únicamente para ayudar al lector y no forma parte del documento de patente europea. Aunque se ha puesto el máximo cuidado en su realización, no se pueden excluir errores u omisiones y la OEP declina cualquier responsabilidad al respecto.

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Documentos de patente citados en la descripción

\bullet WO 9200290 A [0011]

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Documentos no procedentes de patentes citados en la descripción

\bulletDurocher; Jackson. DNA-PK, ATM and ATR as sensors of DNA damage: variations on a theme?. Curr Opin Cell Biol., 2001, vol. 13, 225-31 [0002]

\bulletAbraham. Cell cycle checkpoint signaling through the ATM and ATR kinases. Genes Dev., 2001, vol. 15, 2177-96 [0002]

\bulletSavitsky et al. A single ataxia telangiectasia gene with a product similar to PI-3 kinase. Science, 1995, vol. 268, 1749-53 [0003]

\bulletToker; Cantley. Signalling through the lipid products of phosphoinositide-3-OH kinase. Nature, 1997, vol. 387, 673-6 [0003]

\bulletKeith; Schreiber. PIK-related kinases: DNA repair, recombination, and cell cycle checkpoints. Science, 1995, vol. 270, 50-1 [0003]

\bulletZakian. ATM-related genes: what do they tell us about functions of the human gene?. Cell, 1995, vol. 82, 685-7 [0003]

\bulletLavin; Shiloh. The genetic defect in ataxia-telangiectasia. Annu. Rev. Immunol., 1997, vol. 15, 177-202 [0004]

\bulletShiloh. ATM and ATR: networking cellular responses to DNA damage. Curr. Opin. Genet. Dev., 2001, vol. 11, 71-7 [0004]

\bulletSarkaria et al. Inhibition of ATM and ATR kinase activities by the radiosensitizing agent, caffeine. Cancer Res., 1999, vol. 59, 4375-82 [0005]

\bulletBanin et al. Enhanced phosphorylation of p53 by ATM in response to DNA damage. Science, 1998, vol. 281, 1674-1677 [0005]

\bulletHerzog et al. Requirement for Atm in ionizing radiation-induced cell death in the developing central nervous system. Science, 1998, vol. 280, 1089-91 [0006]

\bulletDaniel et al. Wortmannin potentiates integrase-mediated killing of lymphocytes and reduces the efficiency of stable transduction by retroviruses. Mol. Cell Biol., 2001, vol. 21, 1169-72 [0007]

\bulletMetcalfe et al. Accelerated telomere shortening in ataxia telangiectasia. Nat Genet., 1996, vol. 13, 350-3 [0008]

\bulletBerge et al. Pharmaceutically Acceptable Salts. J. Pharm. Sci., 1997, vol. 66, 1-19 [0113]

\bullet T. Green; P. Wuts. Protective Groups in Organic Synthesis. Wiley, 1999 [0117]

\bulletArcher, S. et al. J. Med. Chem., 1982, vol. 25, 220-227 [0155]

\bulletMlotkowska, B.L. et al. J. Heterocyclic Chem., 1991, vol. 28, 731-736 [0155]

\bullet T Ishiyama et al. Tet. Lett., 1997, vol. 38 (19), 3447-3450 [0158]

\bullet A Giroux et al. Tet. Lett., 1997, vol. 38 (22), 3841-3844 [0158]

\bulletBrown, P.O. Integration of retroviral DNA. Curr Top Microbiol Immunol, 1990, vol. 157, 19-48 [0178]

\bullet Remington's Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Company, 1990 [0191]

\newpage

\bulletHaselhorst et al. Development of cell lines stably expressing human immunodeficiency virus type 1 proteins for studies in encapsidation and gene transfer. J Gen Virol, 1998, vol. 79, 231-7 [0328]

\bulletNaldini et al. In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector. Science, 1996, vol. 272, 263-7 [0328]

Claims (17)

1. Compuesto de fórmula I:

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e isómeros, sales y solvatos del mismo, en donde:

uno entre P y Q es O, y el otro de P y Q es CH, donde hay un doble enlace entre cualquiera de Q y P es CH y el átomo de carbono que tiene el grupo R^{3};

Y es O o S;

R^{1} y R^{2} juntos forman, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, un anillo heterocíclico que tiene de 4 a 8 átomos en el anillo;

R^{3} es un grupo fenil o piridil, unidos por un primer grupo puente seleccionado de -S-, -S(=O)-, -S(=O)_{2}-, -O-, -NR^{N}- y CR^{C1}R^{C2}- a un anillo de benceno opcionalmente sustituido por acilamido, sulfonamino, éter, éster, amido, amino y acilo;

el grupo fenil o piridil y el anillo de benceno opcionalmente sustituido estando además opcionalmente unidos por un segundo grupo puente, que está unido adyacente al primer grupo puente en ambos grupos para formar un anillo C_{5-7} opcionalmente sustituido fusionado tanto al grupo fenil o piridil como al anillo de benceno, estando el grupo fenilo o piridil además opcionalmente sustituido por un grupo seleccionado de halógeno, hidroxi, C_{1-7} alquilo, C_{1-7} alcoxi, acilo, aciloxi, amino, nitro, ciano, tiol, C_{1-7} alquiltio, acilamido, sulfonamino, éter, éster y amido;

donde R^{N} es hidrógeno;

y R^{C1} y R^{C2} son ambos hidrógeno.

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2. Compuesto según la reivindicación 1, de fórmula Ia:

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3. Compuesto según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde Y es O.

4. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde R^{1} y R^{2} forman, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, un anillo heterocíclico con 6 átomos en el anillo.

5. Compuesto según la reivindicación 5, donde R^{1} y R^{2} forman, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, un grupo seleccionado de morfolino y tiomorfolino.

6. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde el grupo fenil o piridil es un grupo fenil.

7. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde el anillo de fenilo o piridil o el anillo de benceno en R^{3} llevan un sustituyente seleccionado del grupo consistente en acilamido, sulfonamino, éter, éster, amido y acilo.

\newpage

8. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, donde R^{3} se selecciona a partir de los siguientes grupos opcionalmente sustituidos:

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9. Composición, que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

10. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en un método de terapia.

11. Utilización de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la preparación de un medicamento para inhibir la actividad de la ATM.

12. Utilización de un compuesto según la reivindicación 11, en la preparación de un medicamento para su uso como adyuvante en la terapia del cáncer o para potenciar las células tumorales para el tratamiento con radiación ionizante o agentes quimioterapéuticos.

13. Utilización de un compuesto según la reivindicación 11, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de las enfermedades con mediación retroviral o enfermedad mejorada por la inhibición de la ATM, que incluyen el síndrome de inmunodeficiencia adquirida.

14. Procedimiento de inhibición de ATM in vitro, que comprende contactar una célula con una cantidad efectiva de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

15. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en un método de tratamiento mediante la inhibición de la ATM.

16. Compuesto según la reivindicación 15 para su utilización en un método de tratamiento del cáncer mediante la potenciación de las células tumorales para el tratamiento con radiación ionizante o agentes quimioterapéuticos.

17. Compuesto según la reivindicación 15 para su utilización en un método de tratamiento de las enfermedades con mediación retroviral o enfermedad mejorada por la inhibición de la ATM, que incluyen síndrome de inmunodeficiencia adquirida.