ES2314100T3 - Derivados de piruvato. - Google Patents

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ES2314100T3 ES02769325T ES02769325T ES2314100T3 ES 2314100 T3 ES2314100 T3 ES 2314100T3 ES 02769325 T ES02769325 T ES 02769325T ES 02769325 T ES02769325 T ES 02769325T ES 2314100 T3 ES2314100 T3 ES 2314100T3
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Bing Wang
Guy Miller
Stephen F. Flaim
Ughetta Del Balzo
Wei Zhang
Satyanarayana Janagani
Jingao Song
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Abstract

Un compuesto de Fórmula I: (Ver fórmula) en la que: A es: alquilo., cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, nucleósido, aminoácido, di-, tri- o tetra-péptido, -CH2-C(O)-C(O)-O-R'' o -CH=C(OH)-C(O)-O-R''; X es: -N(R'')-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S-Y-S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo; Y es: arilo, heteroarilo, nucleósido, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido; W es: =O, =N-OR a , =N-NR b R c , o -N(OH) -R d ; Z es: -OR, -SR, o -NR b R c ; R'' es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o arilo; R es: hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo o heterocicloalquilo; R a es: hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, o alquenilo; R b se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo o cicloalquilo; R c es: independientemente seleccionado entre hidrógeno o alquilo; y R d es: hidrógeno, acilo o alquilo; o R b y R c junto con el nitrógeno al que están unidos pueden formar un anillo de 5- a 7-miembros, opcionalmente incorporando uno o dos heteroátomos adicionales al anillo elegidos entre N, S, u O, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por =O, =S, acilo, alquenilo, alquilo, (alcoxi)carbonilo, y (amino)carbonilo; incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables, con la condición de que cuando X es -S-, W es =O, y Z es OH, A no es 6-amino-3,5-diciano-4-fenil-piridin-2-ilo. para uso en el tratamiento de un mamífero que tiene una dolencia caracterizada por estrés oxidativo, en el que el compuesto se usa en una cantidad terapéuticamente eficaz.

Description

Derivados de piruvato.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a derivados de piruvato, concretamente a derivados que tienen actividad citoprotectora, y específicamente a una serie de piruvatos aromáticos y de peptidilo. La invención se dirige también a formulaciones y su uso para la fabricación de un medicamento para tratar apoplejía, infarto de miocardio e insuficiencia cardiaca congestiva, así como otras dolencias relacionadas con estrés oxidativo y/o inflamación que responden habitualmente a la modulación enzimática celular.
Antecedentes de la invención
Piruvato es un cetoácido de tres carbonos (triosa) que se produce en los sistemas biológicos en las etapas finales de la glicólisis, un producto del metabolismo de los azúcares. También es un producto de rotura de algunos aminoácidos (alanina, glicina, cisteína, serina). Piruvato puede reducirse a lactato en el citoplasma, un episodio fermentativo en células de mamíferos, o decarboxilarse oxidativamente a acetil CoA en la mitocondria.
Se conocen en la técnica numerosos derivados de piruvato. Se ha sugerido que el piruvato y algunos derivados de piruvato pueden ser de utilidad en el tratamiento de ciertos trastornos y potenciar la salud. Por ejemplo, piruvato se comercializa como suplemento dietético para uso en el estímulo de la pérdida de peso y estimular energía. Se ha sugerido también como intervención terapéutica para el tratamiento clínico de la insuficiencia miocardial (Mallet, R.T., 2000, Proc. Soc. Exp. Biol Med. 223(2): 136-148) y para evitar los efectos secundarios de la isquemia miocardial (Patente de los Estados Unidos 5.294.641). Las Patentes de los Estados Unidos 5.075.210 y 4.988.245 describen el uso de piruvato o sales de piruvato como un componente de una solución cardioplégica y en soluciones de conservación (fluidos de perfusión) para aloinjertos cardiacos antes del trasplante. La Patente de los Estados Unidos 5.395.822 describe el uso de algunas sales de piruvato para protección contra la degeneración neuronal como consecuencia de una isquemia.
La Patente de los Estados Unidos 6.086.789 describe algunos derivados de piruvato como útiles en indicaciones dermatológicas así como para tratar la cetosis diabética, isquemia miocardial, órganos lesionados e hipercolesterolemia. Específicamente, adscribe estas actividades a varios ésteres de piruvato, incluyendo ésteres de poliol-piruvato, tioésteres de piruvato, ésteres de glicerol-piruvato, y éster de dihidroxiacetona-piruvato. La Patente de los Estados Unidos Nº 5.968.727 relacionada describe el uso de tiolésteres de piruvato tales como cisteína, metionina y homocisteína, y ésteres de glicerol piruvato y ésteres de dihidroxiacetona-piruvato en soluciones para la conservación de órganos y en el tratamiento de isquemia. De manera similar, se ha sugerido el uso de algunos conjugados de piruvato y el aminoácido piruvilo para uso en la diabetes (por ejemplo, Patentes de los Estados Unidos 5.047.427 y 5.256.697).
El documento EP 1.006.112 desvela compuestos que contienen funcionalidades tanto orto-hidroxipiridinona como arilo oxigenado (incluyendo heteroarilo), que tiene la doble capacidad de quelar hierro y secuestrar especies reactivas de oxígeno (ERO). En particular, el documento EP 1.006.112 se refiere unos compuestos específicos que contienen 3-hidroxi-4(1H)-piridinona o un resto 3-hidroxi-2(1H)-piridinona quelante de hierro así como un resto antioxidante fenólico o indólico oxisustituido. Dichos compuestos se pueden usar en el tratamiento y profilaxis de dolencias asociadas con estrés oxidativo, concretamente daño oxidativo al sistema nervioso central.
Sin embargo, sigue siendo deseable proporcionar nuevas terapias para dolencias caracterizadas por estrés oxidativo, y particularmente para proporcionar neuroprotección en el caso de isquemia cerebral; se desean especialmente agentes que sean eficaces incluso si se administran por vez primera tras un periodo de tiempo (por ejemplo, aproximadamente 5 o más horas) tras un episodio isquémico.
Resumen de la invención
La presente invención se define en las reivindicaciones y se refiere a algunos derivados de piruvato conocidos y nuevos que son particularmente activos para restaurar o preservar la integridad metabólica de células oxidativamente competentes que han estado sometidas a privación de oxígeno. Estos compuestos derivados de piruvato incluyen, por ejemplo, pero no se limitan a oximas, amidas, análogos de piruvato, análogos de piruvato modificados, ésteres de piruvato (por ejemplo, ésteres de poliol-piruvato, tioésteres de piruvato, ésteres de glicerol-piruvato, y ésteres de dihidroxiacetona-piruvato). Dichos derivados de piruvato son útiles en la fabricación de composiciones farmacéuticas para tratar numerosas dolencias caracterizadas por el estrés oxidativo, y concretamente, para proporcionar neuroprotección en el caso de isquemia cerebral, incluso cuando se administra un intervalo de tiempo significativo tras un episodio isquémico. En particular, las composiciones de la presente invención son útiles en el tratamiento de la apoplejía, tal como se demuestra proporcionando neuroprotección en un modelo experimental de isquemia cerebral focal. Son también útiles en el tratamiento de isquemia miocardial (infarto de miocardio), así como en otras indicaciones caracterizadas por estrés oxidativo y/o inflamación, incluyendo, pero sin limitarse a, trastornos neurodegenerativos tal como Alzheimer, demencia, y enfermedad de Parkinson; diabetes; enfermedad renal; síndrome premenstrual; asma, trastornos inflamatorios cardiopulmonares; insuficiencia cardiaca congestiva; artritis reumatoide; fatiga muscular, cojera intermitente; y para la conservación de tejido de aloinjerto para trasplante.
Un aspecto de la presente invención se refiere a usos médicos secundarios, es decir, el uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según se describe para la fabricación de un medicamento para tratar un mamífero que tenga una dolencia caracterizada por estrés oxidativo empleando los compuestos representados por la Fórmula I:
1
en la que:
la línea de puntos es un enlace doble en una de las posiciones indicadas y un enlace simple en la otra, o (cuando W es -N(OH)-C(O)-R^{d}) es un enlace simple en ambas posiciones:
A es:
alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, nucleósido, un aminoácido, a di-, tri- o tetra-péptido, -CH_{2}-C(O)-C(O)-O-R' o -CH=C(OH)-C(O)-C-R';
X es:
-N(R')-, -S-, -S(O)-, -S(O)r, -S-Y-S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o al átomo de nitrógeno del heterociclilo;
Y es:
arilo, heteroarilo, nucleósido, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido;
W es:
=O, =N-OR^{a}, =N-NR^{b}R^{c}, o -N(OH)-R^{d};
Z es:
-OR, -SR, o -NR^{b}R^{c}
R' es:
independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o arilo;
R es:
hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo o heterocicloalquilo;
R^{a} es:
hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, o alquenilo;
R^{b} es:
independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo o cicloalquilo;
R^{c} es:
independientemente seleccionado entre hidrógeno o alquilo; y
R^{d} es:
hidrógeno, acilo o alquilo; o
R^{b} y R^{c}
junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de 5 a 7 miembros, incorporando opcionalmente uno o dos heteroátomos de anillo adicionales elegidos entre N, S, u O, y dicho anillo estando opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por =O, =S, acilo, alquenilo, alquilo, (alcoxi)carbonilo, y (amino)carbonilo;
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables, con la condición de que cuando X es -S-, W es =O, y Z es OH, A no es 6-amino-3,5-diciano4-(fenil)-piridin-2-ilo.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a los compuestos representados mediante la Fórmula Ia:
2
en la que:
A es:
alquilo sustituido seleccionado entre: -CH_{2}-CH(OH)-CH_{2}-OH, -CH(CH_{3})-CH(OH)-CH_{2}-OH, -CH(CH_{3})-C(O)-N (H)-CH_{2}-COOH, -CH_{2}-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH, -CH_{2}-CH_{2}-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH, -CH(CH_{3})-CH_{2}-C(O)-N (H)-CH_{2}-COOH, -CH_{2}-CH(CH_{3})-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH, heteroarilo sustituido seleccionado entre: 5-cloro-1H-benzoimidazol-2-ilo, 5-metoxi-1H-benzoimidazol-2-ilo, 4-oxo-3,4-dihidro-quinazolin-2-ilo, benzoselenazol-2-ilo, y 5-sustituido-benzotiazol-2-ilo, heterociclilo seleccionado entre: tiazol, 2-tioxo-imidazolidin-1-ilo y morfolino, o un di-, tri- o tetra-péptido;
R es:
hidrógeno, alquilo, o cicloalquilo;
X es:
-S-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o al átomo de nitrógeno del heterociclilo; e
Y es:
arilo, heteroarilo, un nucleósido, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido; y
Z es:
-OR;
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables. A la invención también pertenecen formulaciones farmacéuticas y usos médicos secundarios que usan los compuestos de Fórmula Ia.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a los compuestos representados mediante la Fórmula Ib:
\vskip1.000000\baselineskip
3
en la que:
A es:
alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, nucleósido, un aminoácido, di-, tri- o tetra-péptido, -CH_{2}C(O)-C(O)-O-R' o -CH=C(OH)-C(O)-O-R';
R es:
hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo o heterocicloalquilo;
R^{a} es:
hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, o alquenilo;
R' es:
independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o arilo;
X es:
-S-, -S(O)-, -S-Y-S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o al átomo de nitrógeno del heterociclilo;
Y es:
arilo, heteroarilo, un nucleósido, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido; y
Z es:
-OR o -SR;
\vskip1.000000\baselineskip
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables; con la condición de que:
\bullet cuando X es -S-, A no es alquilo, bencilo o un fenilo N-arilpirrolina-2,5-diona-fenilo sustituido,
\vskip1.000000\baselineskip
y con la condición adicional de que el compuesto de Fórmula 1b no es:
éster etílico del ácido 2-hidroxiimino-3-p-tolilsulfanil-propiónico.
A la invención también pertenecen formulaciones farmacéuticas y usos médicos secundarios que usan los compuestos de Fórmula Ib.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a los compuestos representados mediante la Fórmula Ic:
\vskip1.000000\baselineskip
4 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que:
es:
alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, a nucleósido, un aminoácido, un di-, tri- o tetra-péptido, CH_{2}-C(O)-C(O)-O-R' o -CH=C(OH)-C(O)-O-R';
W es:
=O, =N-OR^{a}, o -N (OH)-R^{d};
X es:
-S-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, -S-Y-S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o al átomo de nitrógeno del heterociclilo;
Y es:
arilo, heteroarilo, a nucleósido, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido;
R' es:
independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o arilo;
R^{a} es:
hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, o alquenilo;
R^{d} es:
hidrógeno, acilo o alquilo; o R^{b} y R^{c} son etilo:
R^{b} es:
fenilo, bencilo, 1-metoxicarbonil-2-fenetilo o ciclohexilo, y R^{c} es hidrógeno; o
R^{b} y R^{c}
junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de 6 miembros seleccionado entre piperidin-1-ilo, 4-metil-piperidin-1-ilo y morfolin-4-ilo;
\vskip1.000000\baselineskip
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables, con la condición de que:
\bullet cuando X es -S-, A no es metilo, etilo, bencilo, o trifenilmetilo, y
\bullet cuando W es =N-OR^{a} y X es un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys, A es un di-, tri- o tetra-péptido.
\vskip1.000000\baselineskip
La invención también se refiere a formulaciones farmacéuticas y usos médicos secundarios que usan los compuestos de Fórmula Ic.
En una forma de realización preferida de las Fórmulas I, Ia, Ib y Ic, en las que A es un aminoácido o péptido natural o sustituido, A se selecciona entre el grupo: Ala, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Lys, Met, Ser y Thr, especialmente Ala, Asp, Cys, Glu y Gly. Se prefieren más aquellos compuestos en los que A es un di-o tri-péptido natural o sustituido, especialmente péptidos naturales y lo más preferible el tri-péptido Glu-Cys-Gly.
En otra de dichas formas de realización; A es un grupo heteroarilo, especialmente un heteroarilo que contiene nitrógeno, y concretamente, cuando A se selecciona entre el grupo: imidazol, triazol, tiadiazol, oxadiazol, benzoselenazol, benzoimidazol y benzotiazol.
Más preferidos en cada una de las formas de realización anteriores se encuentran aquellos compuestos en los que X es -S- o un enlace covalente.
\newpage
Otra forma de realización preferida de la invención se refiere a los compuestos, representados mediante la Fórmula II:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
5 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que:
R^{1} es:
hidrógeno, alquilo, arilo, -C(O)-O-R', -CH_{2}-SH, -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z'
R^{2} es:
hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, acilo;
R^{3} es:
independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo inferior, aralquilo, -CH_{2}-SH, -CH_{2}S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-SCH= C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z;
R^{4} es:
hidrógeno, alquilo inferior, aralquilo, heteroararalquilo, -CH_{2}-SH, -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z;
R^{5} es:
hidrógeno, alquilo, o arilo;
R' es:
independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, o arilo;
W es:
=O, =N-OR^{a}, =N-NR^{b}R^{c}; o -N(OH)-R^{d} Z es: -OR, -SR, o -NR^{b}R^{c}
R es:
hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo o heterocicloalquilo
R^{a} es:
hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, o alquenilo
R^{b} es:
independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo o cicloalquilo,
R^{c} es:
independientemente seleccionado entre hidrógeno o alquilo; y
R^{d} es:
hidrógeno, acilo o alquilo; o
R^{b} y R^{c}
junto con el nitrógeno al que están unidos pueden formar un anillo de 5 a 7 miembros, que incorpora opcionalmente uno o dos heteroátomos de anillo opcionales elegidos entre N, S, u O, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por =O, =S, acilo, alquenilo, alquilo, (alcoxi)carbonilo, y (amino)carbonilo;
k es:
0, 1 ó 2;
m es:
0, 1 ó 2; y
n es:
0, 1, 2 ó 3;
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables, con la condición de que al menos uno de R^{1}, R^{3} o R^{4} es -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C(OH)C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z. A la invención también pertenecen formulaciones farmacéuticas y la fabricación de medicamentos que usan los compuestos de Fórmulas II.
\newpage
De los compuestos de acuerdo con la Fórmula II, se prefieren aquellos compuestos cuyos sustituyentes se seleccionan entre los siguientes grupos:
R^{1} es:
-C(O)-O-R' cuando R' es hidrógeno o alquilo inferior;
R^{2} es:
hidrógeno;
R^{3} es:
-CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z;
R^{4} es:
hidrógeno;
R^{5} es:
hidrógeno o alquilo inferior;
W es:
=O o =N-OR^{a};
Z es:
-OR o -NR^{b}R^{c};
R es:
hidrógeno, alquilo, cicloaquilo, arilo, o aralquilo;
R^{a} es:
hidrógeno o alquilo;
R^{b} es:
alquilo C_{1} a C_{4}, fenilo o bencilo;
R^{c} es:
hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{4}, o
R^{b} y R^{c}
junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de 6 miembros seleccionado entre 4-opcionalmente sustituido-piperidin-1-ilo y morfolin-4-ilo;
y k, m y n son respectivamente: 0, 2, 1; 1, 0, 1; ó 2, 0, 1.
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Otro aspecto de la invención abarca compuestos fabricados a partir de los compuestos de Fórmula Ia, por ejemplo, cuando A es cisteína, por ciclación para dar un aducto de dihidrotiazina-3,5-dicarboxílico o derivados similares, como los representados mediante la Fórmula III:
\vskip1.000000\baselineskip
6 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que:
la línea punteada representa un enlace doble en una u otra de las posiciones indicadas correspondientes a una 3,4dihidro-2H[1,4]tiazina o una 3,6-dihidro-2H[1,4]tiazina (o 5,6-dihidro-2H-[1,4]tiazina en la nomenclatura de los compuestos en los que R^{3.5} es H);
R^{3.1} es:
H cuando la Fórmula III es una 3,4-dihidro-2H-[1,4]tiazina, y está ausente cuando la Fórmula III es una 3,6-dihidro-2H-[1,4]tiazina;
R^{3.2} es:
H o alquilo C_{1} a C_{4};
R^{3.3} y R^{3.4} son ambos H o son ambos alquilo C_{1} a C_{4}; y
R^{3.5} es:
H, COOH, o -C(O)O-alquilo C_{1} a C_{4};
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables. A la invención también pertenecen usos médicos secundarios, formulaciones farmacéuticas y la fabricación de medicamentos que usan los compuestos de Fórmula III.
En otro aspecto, la invención se refiere a una composición farmacéutica que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de las Fórmulas I, Ia, Ib. Ic, II o III o una de sus sales farmacéuticamente aceptables mezclada con al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable. Se prefieren particularmente aquellas composiciones farmacéuticas en las que el compuesto de las Fórmulas I, Ia, Ib, Ic, II o III se selecciona entre las formas de realización preferidas descritas en el presente documento.
En otro aspecto adicional, la invención se refiere al uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de las Fórmulas I, Ia, Ib, Ic, II o III o una de sus sales farmacéuticamente aceptable para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la isquemia incluyendo apoplejía, isquemia cerebral, isquemia retinal, isquemia miocardial, infarto de miocardio y disfunción cognitiva post-quirúrgica; trastornos neurodegenerativos incluyendo Alzheimer, demencia y enfermedad de Parkinson; neuropatía periférica, incluyendo lesión de la espina dorsal, lesión en la cabeza y trauma quirúrgico; trastornos inflamatotorios incluyendo diabetes, enfermedad renal, síndrome pre-menstrual, asma, trastornos inflamatorios cardiopulmonares, insuficiencia cardiaca, artritis reumatoide, osteoartritis, fatiga muscular, cojera intermitente, y para la conservación de tejido para aloinjerto y órganos para trasplante. Se prefieren particularmente aquellos usos en la fabricación de composiciones farmacéuticas anteriores en las que el compuesto de las Fórmulas I, Ia, Ib, Ic, II o III se selecciona entre las formas de realización preferidas descritas en el presente documento.
Descripción detallada de la invención Definiciones
Tal como se usa en la presente memoria, se pretende en general que las siguientes palabras y frases tengan los significados definidos a continuación, excepto en la extensión en el que el contexto en el que se usen indique otra cosa.
Algunas abreviaturas de compuestos, reactivos, o parámetros de reacción se definen como sigue:
"DCM" se refiere a diclorometano o cloruro de metileno
"DIC" se refiere a N,N-diisopropilcarbodiimida
"DIPEA" se refiere a diisopropil etilamina
"DMAP" se refiere a 4-N,N-dimetilamino piridina
"DMF" se refiere a N,N-dimetil formamida
"DTT" se refiere a ditiotreitol
"EDT" se refiere a etanoditiol
"Eq." se refiere a equivalente
"Fmoc" se refiere a 9-fluorenilmetoxicarbonilo
"GlyOH" se refiere a glicina
"HOBt" se refiere a N-hidroxibenzotriazol
"MeOH" se refiere a metanol
"t-Bu" se refiere a t-butilo
"TBTU" se refiere a tetrafluoroborato 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1.1,3,3-tetrametiluronio
"TIS" se refiere a triisopropilsilano
"TFA" se refiere a ácido trifluoroacético.
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El término "acilo" se refiere a los grupos -C(O)-H, -C(O)-(alquilo opcionalmente sustituido), -C(O)-(cicloalquilo opcionalmente sustituido), -C(O)-(alquenilo opcionalmente sustituido), -C(O)-(cicloalquenilo opcionalmente sustituido), -C(O)-(arilo opcionalmente sustituido), -C(O)-(aralquilo opcionalmente sustituido), -C(O)-(heteroarilo opcionalmente sustituido), -C(O)-(heteroaralquilo opcionalmente sustituido), -C(O)-(heterociclilo opcionalmente sustituido) y -C(O)-(heterocicloalquilo opcionalmente sustituido).
El término "aciloxi" se refiere al resto -O-acilo, incluyendo, por ejemplo, -O-C(O)-alquilo.
El término "alquenilo" se refiere a la cadena de hidrocarburo monoradical ramificada o no ramificada, insaturada o poliinsaturada, que tiene aproximadamente de 2 a 20 átomos de carbono, más preferiblemente aproximadamente de 2 a 10 átomos de carbono. Este término se ejemplifica mediante grupos como etenilo, but-2-enilo, y similares.
El término "alcoxi" se refiere a los grupos -O-alquilo, -O-alquenilo, -O-cicloalquilo, -O-cicloalquenilo, y -O-alquinilo. Los grupos alcoxi preferidos son -O-alquilo e incluyen, a modo de ejemplo, metoxi, etoxi, n-propoxi, iso-propoxi, n-butoxi, terc-butoxi, sec-butoxi, n-pentoxi, n-hexoxi, 1,2-dimetilbutoxi, y similares.
El término "alcoxi sustituido" se refiere a los grupos -O-(alquilo sustituido), -O-(alquenilo sustituido), -O-(cicloalquilo sustituido), -O-(cicloalquenilo sustituido), -O-(alquinilo sustituido) y-O-(alquileno opcionalmente sustituido)-alcoxi.
El término "alquilo" se refiere a una cadena de hidrocarburo saturado monoradical ramificada o no ramificada que tiene preferiblemente aproximadamente de 1 a 20 átomos de carbono, más preferiblemente aproximadamente de 1 a 10 átomos de carbono, e incluso más preferiblemente aproximadamente de 1 a 6 átomos de carbono. Este término se ejemplifica por grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, n-hexilo, n-decilo, tetradecilo, y similares.
El término "alquilo sustituido" se refiere a un grupo alquilo en el que 1 o más (hasta aproximadamente 5, preferiblemente hasta aproximadamente 3) átomos de hidrógeno se han sustituido por un sustituyente independientemente seleccionado entre el grupo: =O, =S, acilo, aciloxi, alcoxi opcionalmente sustituido, amino opcionalmente sustituido, azido, carboxilo, (alcoxi opcionalmente sustituido)carbonilo, (amino opcionalmente sustituido)carbonilo, ciano, cicloalquilo opcionalmente sustituido, cicloalquenilo opcionalmente sustituido, halógeno, hidroxilo, nitro, sulfanilo, sulfinilo, y sulfonilo. Uno de los sustituyentes opcionalmente preferidos para alquilo es hidroxi, ejemplificado por grupos hidroxialquilo, tales como 2-hidroxietilo, 3-hidroxipropilo, 3-hidroxibutilo, 4-hidroxibutilo, y similares; grupos dihidroxialquilo (glicoles), tales como 2,3-dihidroxipropilo, 3,4-dihidroxibutilo, 2,4-dihidroxibutilo, y similares; y aquellos compuestos conocidos como as polietilenglicoles, polipropilenglicoles y polibutilenglicoles, y similares. Otro sustituyente preferido para alquilo es alcoxicarbonilo opcionalmente sustituido, tal como 1-metoxicarbonil-etilo.
El término "alquileno" se refiere a un diradical derivado del monoradical alquilo anteriormente definido. Este término se ejemplifica por grupos tales como metileno (-CH_{2}-), etileno (-CH_{2}CH_{2}-), los isómeros de propileno [por ejemplo, -CH_{2}CH_{2}CH_{2}- y -CH(CH_{3})CH_{2}-] y similares.
El término "alquileno sustituido" se refiere a un diradical derivado del monoradical alquilo sustituido definido anteriormente. Ejemplos de alquilenos sustituidos son clorometileno (-CH(Cl)-), aminoetileno (-CH(NH_{2})CH_{2})-, metilaminoetileno (-CH(NHMe)CH_{2}-), isómeros de 2-carboxipropileno (-CH_{2}CH(CO_{2}H)CH_{2}-), etoxietileno (-CH_{2}CH_{2}OCH_{2}CH_{2}-), etil(N-metil)aminoetileno (-CH_{2}CH_{2}N(CH_{3})CH_{2}CH_{2}-), 1-etoxi-2-(2-etoxi-etoxi)etileno (CH_{2}CH_{2}O-CH_{2}CH_{2}-OCH_{2}CH_{2}-OCH_{2}CH_{2}-), y similares.
El término "amino" se refiere al grupo -NH_{2}.
El término "amino sustituido" se refiere al grupo -NHR o -NRR cuando cada R se selecciona independientemente entre el grupo: alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, cicloalquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, acilo, alcoxi opcionalmente sustituido, carboxilo y alcoxicarbonilo.
El término "aminoácido" o "aminoácido natural" se refiere a cualquiera de los veinte (20) aminoácidos comunes tal como se acepta en general en la técnica de péptidos, y representa L-aminoácidos a no ser que se indique otra cosa (con la excepción de aminoácidos aquirales como la glicina).
El término "aminoácido sustituido" se refiere a un aminoácido que tiene uno o más restos químicos adicionales que normalmente no son parte del aminoácido. Dichas sustituciones se pueden introducir mediante un agente derivatizante dirigido capaz de reaccionar con cadenas secundarias o restos terminales elegidos, y mediante otros procedimientos aceptados en la técnica. Por ejemplo, los restos cisteinilo muy habitualmente se hacer reaccionar con alfa-haloacetatos (y correspondientes aminas), tales como ácido cloroacético o cloroacetamida, para dar derivados de carboximetilo o carboxiamidometilo. Los restos cisteinilo también se pueden derivatizar por reacción con bromotrifluoroacetona, ácido \alpha-bromo-\beta-(5-imidozoil)propiónico, fosfato de cloroacetilo, N-alquilmaleimidas, disulfuro de 3-nitro-2-piridilo, disulfuro de metil-2-piridilo, p-cloromercuribenzoato, 2-cloromercuri-4-nitrofenol, o cloro-7-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol. Los grupos carboxilo laterales (aspartilo o glutamilo) se modifican selectivamente por reacción con carbodiimidas (R' - -N-C - -N - -R') tales como 1-ciclohexil-3-(2-morfolinil-(4-etil) carbodiimida o 1-etil-3-(4-azonia-4,4-dimetilpentil)carbodiimida. Además, los restos aspartilo y glutamilo se convierten a asparaginilo y glutaminilo por reacción con iones amonio. Los restos glutaminilo y asparaginilo se desamidan con frecuencia a los correspondientes restos glutamilo y aspartilo. Alternativamente, estos residuos se desaminan en condiciones ácidas suaves. Otras modificaciones incluyen la hidroxilación de prolina y lisina, fosforilación de grupos hidroxilo de restos serilo o teonilo, metilación de los alfa-amino grupos de las cadenas laterales de lisina, arginina, e histidina (véase, por ejemplo, T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecule Properties, W. H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)), acetilación de la amina N-terminal, y, en algunos casos, amidación de los grupos carboxilo C-terminal.
El término "aromático" se refiere a un resto cíclico o policíclico con un sistema electrónico \pi conjugado insaturado (4n + 2) (donde n es un número entero positivo), denominado a veces sistema de electrones \pi deslocalizado.
El término "arilo" se refiere a un grupo de hidrocarburo aromático cíclico de 6 a 20 átomos de carbono con un anillo simple (por ejemplo, fenilo) o condensados múltiples (fusionados) (por ejemplo, naftilo o antrilo). Los arilos preferidos incluyen fenilo, naftilo y similares.
El término "arilo sustituido" se refiere a un grupo arilo tal como se ha definido anteriormente, sin que por otra parte quede restringido por la definición del sustituyente arilo, está sustituido con de 1 a 5 sustituyentes, y preferiblemente de 1 a 3 sustituyentes, independientemente seleccionados entre el grupo constituido por: =O, =S, acilo, aciloxi, alquenilo opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, alquilo opcionalmente sustituido (tales como tri-halometilo), alquinilo opcionalmente sustituido, amino opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, azido, carboxilo, (alcoxi opcionalmente sustituido)carbonilo, amino(opcionalmente sustituido) carbonilo, ciano, cicloalquilo opcionalmente sustituido, cicloalquenilo opcionalmente sustituido, halógeno, heteroarilo opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, heterocicloxi opcionalmente sustituido, hidroxilo, nitro, sulfanilo, sulfinilo, y sulfonilo. Los sustituyentes arilo preferidos incluyen alquilo, alcoxi, halo, ciano, nitro, trihalometilo, y sulfinilo.
El término "ariloxi" se refiere al grupo -O-arilo.
El término "ariloxi sustituido" se refiere al grupo -O-(arilo sustituido).
El término "aralquilo" se refiere al resto "-alquileno-arilo" teniendo cada uno el significado definido en el presente documento. Dichos grupos aralquilo se ejemplifican por bencilo, fenetilo, 3-naftilpropilo y similares.
El término "aralquilo sustituido" se refiere al resto "-(alquileno opcionalmente sustituido)-(arilo opcionalmente sustituido)", teniendo cada uno el significado definido en el presente documento, en el que al menos uno de los grupos arilo o alquileno está sustituido, por ejemplo, 4-(N-metil-pirrolil)pentileno, 4-nitrobencilo o 1-metoxicarbonil-2-fenil-etilo.
El término "carbonilo" se refiere al di-radical "-C(=O)-", que se ilustra también como "-C(O)-".
El término "(alcoxi opcionalmente sustituido)carbonilo" se refiere a los grupos: -C(O)O-(alquilo opcionalmente sustituido), -C(O)O-(cicloalquilo opcionalmente sustituido), -C(O)O-(alquenilo opcionalmente sustituido), y -C(O)O-(alquinilo opcionalmente sustituido). Estos restos se denominan también como ésteres.
El término "(amino opcionalmente sustituido)carbonilo" se refiere al grupo -C(O)-(amino opcionalmente sustituido). Este resto se denomina también como carboxamida primaria, secundaria o terciaria.
El término "(amino opcionalmente sustituido)carboniloxi" se refiere al grupo -O-C(O)-(amino opcionalmente sustituido).
El término "carboxi" o "carboxilo" se refiere al resto "-C(O)OH", que también se ilustra como "-COOH".
Se pretende que el término "compuesto de Fórmula I" abarque los derivados de piruvato de la invención tal como se han descrito, y/o las sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos. Además, los compuestos de esta invención incluyen los tautómero ceto y enol piruvato, isómeros éstereoquímicos individuales (que proceden de la selección de grupos sustituyentes) y mezclas de tautómeros e/o isómeros.
El término "cicloalquilo" se refiere a grupos de hidrocarburo cíclico no aromático que tienen aproximadamente 3 a 40 (preferiblemente aproximadamente 4 a 15) átomos de carbono con un anillo simple o múltiples anillos condensados. Dichos grupos cicloalquilo incluyen, a modo de ejemplo, estructuras de anillo simple tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclooctilo, y similares, o estructuras de anillos múltiples tales como adamantanilo, ciclopentafenantreno y similares.
El término "cicloalquilo sustituido" se refiere a un grupo cicloalquilo sustituido con de 1 a 5 sustituyentes, y preferiblemente de 1 a 3 sustituyentes, independientemente seleccionados entre el grupo constituido por: =O, =S, acilo, aciloxi, alquenilo opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, alquilo opcionalmente sustituido (tales como tri-halometilo), alquinilo opcionalmente sustituido, amino opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, azido, carboxilo, (alcoxi opcionalmente sustituido)carbonilo, (amino opcionalmente sustituido)carbonilo, ciano, cicloalquilo opcionalmente sustituido, cicloalquenilo opcionalmente sustituido, halógeno, heteroarilo opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, heterocicloxi opcionalmente sustituido, hidroxilo; nitro, sulfanilo, sulfinilo, y sulfonilo.
El término "halo" o "halógeno" se refiere a fluoro, cloro, bromo y yodo.
El término "heteroarilo" se refiere a un grupo hidrocarburo aromático cíclico que tiene aproximadamente de 1 a 40 (preferiblemente de aproximadamente 3 a 15) átomos de carbono y aproximadamente de 1 a 10 heteroátomos (preferiblemente aproximadamente de 1 a 4 heteroátomos, seleccionados entre nitrógeno, azufre, fósforo, selenio y/o oxígeno) en al menos un anillo. Dichos grupos heteroarilo pueden tener un anillo simple (por ejemplo, piridilo o furilo) o múltiples anillos condensados (por ejemplo, indolizinilo o benzotienilo). Los heteroarilos preferidos incluyen piridilo, pirrolilo, furilo, benzoimidazol, benzotiazol y benzoselenazol.
El término "heteroarilo sustituido" se refiere a un grupo heteroarilo tal como se ha definido anteriormente, salvo que quede restringido por la definición del sustituyendo del heteroarilo, sustituido con de 1 a 5 sustituyentes, y preferiblemente de 1 a 3 sustituyentes, independientemente seleccionados entre el grupo constituido por: =O, =S, acilo, aciloxi, alquenilo opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, alquilo opcionalmente sustituido (tal como tri-halometilo), alquinilo opcionalmente sustituido, amino opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, azido, carboxilo, (alcoxi opcionalmente sustituido)carbonilo, (amino opcionalmente sustituido)carbonilo, ciano, cicloalquilo opcionalmente sustituido, cicloalquenilo opcionalmente sustituido, halógeno, heteroarilo opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, heterocicloxi opcionalmente sustituido, hidroxilo, nitro, sulfanilo, sulfinilo, y sulfonilo.
El término "heteroaralquilo" se refiere al resto "-alquileno-heteroarilo" teniendo cada uno el significado definido en el presente documento.
El término "heteroaralquilo sustituido" se refiere al resto "-(alquileno opcionalmente sustituido)-(heteroarilo opcionalmente sustituido)", teniendo cada uno el significado definido en el presente documento.
El término "heteroariloxi" se refiere al grupo -O-heteroarilo.
El término "heteroarileno" se refiere al grupo dirradicalario derivado de heteroarilo (incluyendo heteroarilo sustituido), tal como se ha definido anteriormente, y se ejemplifica por los grupos 2,6-piridileno, 2,4-piridileno, 1,2-quinolinileno, 1,8-quinolinileno, 1,4-benzofuranileno, 2,5-piridinileno, 2,5-indolenilo y similares.
Los términos "heterociclo", "heterocíclico" y "heterociclilo" se refieren a un grupo de hidrocarburo monoradical, saturado o insaturado, no aromático cíclico que tiene aproximadamente de 1 a 40 (preferiblemente de aproximadamente 3 a 15) átomos de carbono y aproximadamente de 1 a 10 heteroátomos (preferiblemente aproximadamente de 1 a 4 heteroátomos, seleccionado entre nitrógeno, azufre, fósforo, y/o oxígeno) dentro del anillo. Dichos grupos heterocíclicos pueden tener un solo anillo o múltiples anillos condensados. Los heterocíclicos preferidos incluyen morfolino, piperidinilo, y similares.
Los términos "heterociclo sustituido", "heterocíclico sustituido" y "heterociclilo sustituido" se refieren a un grupo heterociclilo tal como se ha definido anteriormente, salvo que quede restringido por la definición del sustituyendo del heterociclo, sustituido con de 1 a 5 sustituyentes, y preferiblemente de 1 a 3 sustituyentes, independientemente seleccionados entre el grupo constituido por: =O, =S, acilo, aciloxi, alquenilo opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, alquilo opcionalmente sustituido (tal como tri-halometilo), alquinilo opcionalmente sustituido, amino opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, azido, carboxilo, (alcoxi opcionalmente sustituido)carbonilo, (amino opcionalmente sustituido) carbonilo, ciano, cicloalquilo opcionalmente sustituido, cicloalquenilo opcionalmente sustituido, halógeno, heteroarilo opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, heterocicloxi opcionalmente sustituido, hidroxilo, nitro, sulfanilo, sulfinilo, y sulfonilo.
El término "heterocicloalquilo" se refiere al resto "-alquileno-heterociclo" teniendo cada uno el significado definido en el presente documento.
El término "heterocicloalquilo sustituido" se refiere al resto "-(alquileno opcionalmente sustituido)-(heterociclo opcionalmente sustituido)", teniendo cada uno el significado definido en el presente documento.
El término "heterocicloxi" se refiere al grupo -O-heterociclo.
Tal como se usa en el presente documento, "vehículo farmacéuticamente aceptable" o "excipiente farmacéuticamente aceptable" incluye todos y cada uno de disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardantes de la absorción y similares. El uso de estos medios y agentes como sustancias farmacéuticamente activas es bien conocido en la técnica. Excepto si cualquier medio o agente convencional es incompatible con el ingrediente activo, se contempla su uso en las composiciones terapéutica. También se pueden incorporar ingredientes activos complementarios a las composiciones.
El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales que retienen la eficacia y propiedades biológicas de los compuestos de esta invención y que no son indeseables desde el punto de vista biológico o de otro. En muchos casos, los compuestos de esta invención son capaces de formar sales de ácido y/o base en virtud de la presencia de grupos amino y/o carboxilo o similares a los anteriores. Las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables se pueden preparar a partir de bases inorgánicas y orgánicas. Las sales derivadas de bases inorgánicas incluyen, a modo de ejemplo solamente, sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio y magnesio. Las sales derivadas de bases orgánicas incluyen, pero no se limitan a, sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, tales como alquilaminas, dialquilaminas, trialquilaminas, alquilaminas sustituidas, di(alquilo sustituido)aminas, tri(alquilo sustituido)aminas, alquenilaminas, dialquenilaminas, trialquenilaminas, alquenilaminas sustituidas, di(alquenilo sustituido)aminas, tri(alquenilo sustituido)aminas, cicloalquilaminas, di(cicloalquil)aminas, tri(cicloalquil)aminas, cicloalquilaminas sustituidas, cicloalquilamina disustituida, cicloalquilaminas trisustituidas, cicloalquenilaminas, di(cicloalquenil)aminas, tri(cicloalquenil)aminas, cicloalquenilaminas sustituidas, cicloalquenilamina disustituida, cicloalquenilamina trisustituida, arilaminas, diarilaminas, triarilaminas, heteroarilaminas, diheteroarilaminas, triheteroarilaminas, aminas heterocíclicas, aminas diheterocíclicas, aminas triheterocíclicas, di y tri-aminas mixtas en las que al menos dos de los sustituyentes de la amina son diferentes y se seleccionan entre el grupo constituido por alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloalquenilo, cicloalquenilo sustituido, arilo, heteroarilo, heterocíclico, y similares. Se incluyen también aminas en las que dos o tres sustituyentes, junto con el nitrógeno del amino, forman un grupo heterocíclico o heteroarilo.
Ejemplos específicos de aminas adecuadas incluyen, a modo de ejemplo sólo, isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, tri(isopropil)amina, tri(n-propil)amina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, trometamina, lisina, arginina, histidina, cafeina, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilendiamina, glucosamina, N-alquilglucaminas, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, morfolina, N-etilpiperidina, y similares.
Sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptable se pueden prepara a partir de ácidos inorgánicos y orgánicos. Las sales derivadas de ácidos inorgánicos incluyen ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y similares. Las sales derivadas de ácidos orgánicos incluyen ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido malónico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido salicílico, y similares
El término "sulfanilo" se refiere a los grupos: -S-(alquilo opcionalmente sustituido), -S-(arilo opcionalmente sustituido), -S-(heteroarilo opcionalmente sustituido), -S-(heterociclilo opcionalmente sustituido). Los grupos sulfanilo preferidos incluyen, a modo de ejemplo, metilsulfaniol (-SCH_{3}), n-(iso-propilsulfanil) (-SCH(CH_{3})_{2}) y similares.
El término "sulfinilo" se refiere a los grupos: -S(O)-(alquilo opcionalmente sustituido), -S(O)-(arilo opcionalmente sustituido), -S(O)-(heteroarilo opcionalmente sustituido), -S(O)-(heterociclilo opcionalmente sustituido).
El término "sulfonilo" se refiere a los grupos: -S(O_{2})-(alquilo opcionalmente sustituido), -S(O_{2})-(arilo opcionalmente sustituido), -S(O_{2})-(heteroarilo opcionalmente sustituido), -S(O_{2})-(heterociclilo opcionalmente sustituido).
La invención se define por el lenguaje de reivindicaciones sobre uso médico secundario.
El término "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad de un compuesto de Fórmula I que es suficiente para realizar un tratamiento, tal como se define más adelante, cuando se administra a un mamífero necesitado de dicho tratamiento. La cantidad terapéuticamente eficaz variará dependiendo del sujeto y estado de enfermedad a tratar, peso y edad del sujeto, la gravedad del estado de la enfermedad, el compuesto de Fórmula I concreto elegido, el régimen de administración a seguir, el calendario de administración, la forma de administración y similares, todo lo cual puede ser rápidamente determinado por una persona normalmente experta en la técnica.
El término "tratamiento" o "tratar" significa cualquier tratamiento de una enfermedad o trastorno en un mamífero, incluyendo:
\bullet
\vtcortauna evitar o proteger frente a la enfermedad o trastorno, esto es, que haga que no se desarrollen síntomas clínicos;
\bullet
\vtcortauna inhibir la enfermedad o trastorno, esto es, detener o suprimir el desarrollo de síntomas clínicos; y/o
\bullet
\vtcortauna aliviar la enfermedad o trastorno, esto es, producir la regresión de los síntomas clínicos.
\vskip1.000000\baselineskip
Los expertos en la técnica entenderán que, en medicina humana, no siempre es posible distinguir entre "evitar" y "suprimir" ya que el evento o eventos inductivo(s) final(es) puede ser desconocido, latente, o el paciente no se percata hasta bien después de la aparición del evento o eventos. Por tanto, tal como se usa en el presente documento el término "profilaxis" se pretende como un elemento del "tratamiento" para abarcar tanto la "prevención" como la "supresión" tal como se define en el presente documento. El término "protección," tal como se usa en el presente documento, se supone incluye "profilaxis."
El término "cantidad eficaz" significa una dosis suficiente para proporcionar tratamiento para el trastorno o estado de enfermedad que se está tratando. Esto variará dependiendo del paciente, la enfermedad y el tratamiento que se está realizando.
El término "trastorno" o "estado de enfermedad" significa cualquier enfermedad, estado, síntoma, o indicación.
\newpage
Compuestos de la invención
Los compuestos empleados en la práctica de la presente invención son los identificados anteriormente con referencia a las Fórmulas I, Ia, Ib, Ic, II y III, y los precursores/intermedios descritos con referencia a los Esquemas de reacción. La Fórmula I se dirige a algunos derivados de piruvato conocidos y nuevos empleados en usos médicos secundarios novedosos, formulaciones farmacéuticas y en la fabricación de medicamentos para dichos procedimientos de tratamiento. Las Fórmulas Ia, Ib, Ic, II y III se dirigen a derivados de piruvato novedosos, sus formulaciones farmacéuticas para usos médicos secundarios y la fabricación de medicamentos para dichos usos médicos secundarios.
Nomenclatura
Los compuestos de la presente invención se nombran y numeran como se describe a continuación, por ejemplo, con referencia a las Fórmulas Id, Ie, If, Ig, Ih, y IIIa.
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La Fórmula Id representa el compuesto de acuerdo con la Fórmula Ia en la que A es 2-tioxo-imidazolidin-1-ilo, R es etilo, X es un enlace covalente, en la que la forma tautomérica del piruvato (representado mediante la linea rayada en Fórmula I) es el tautómero ceto.
En un sistema de nomenclatura, el compuesto de Fórmula Id se denomina: éster etílico del ácido 2-oxo-3-(2-tioxo-imidazolidin-1-il)-propiónico. El compuesto de Fórmula Id se puede denominar también como: (2-tioxo-imidazolidin-1-il)metil-cetopiruvato etil éster.
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8 
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La Fórmula Ie representa el compuesto de Fórmula Ia en la que A es 3-[2-amino-9-(3,4-dihidroxi-5-hidroximetil-tetrahidrofuran-2-il)-9H-purin-6-ilo, R es etilo, y X es S, que se denomina: éster etílico del ácido 3-[2-amino-9-(3,4-dihidroxi-5-hidroximetil-tethahidro-furan-2-il)-9H-purin-6-ilsulfanil]-2-oxo-propiónico.
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9 
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La Fórmula If representa el compuesto de Fórmula Ia en la que A es \gamma-Asp-Gys-Glu, R es etilo, y X es un enlace covalente en el que forma tautomérica del piruvato (representada mediante la línea rayada en la Fórmula I) es el tautómero enol. Es también el compuesto de Fórmula II en la que R^{1} es COOH, R^{2} es H, R^{3} es CH_{2}-S-piruvato etil éster, R^{4} es alquilo en el que el sustituyente es COOH, R^{5} es H, k es 0, m es 1, y n es 1. El compuesto de Fórmula If se puede denominar: ácido 2-[2-(3-amino-3carboxi-propionilamino)-3-(2-etoxicarbonil-2-hidroxi-vinilsulfanil)-proplonilamino]-pentanodioico.
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La Fórmula Ig representa un compuesto de Fórmula Ib en la que A es Glu-Cys-Gly, X es un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys, W es =NOCH_{3}, y Z es O-etilo. Es también un compuesto de Fórmula II en el que R^{1} es COOH, R^{2} es H, R^{3} es CH_{2}-S-C (NOCH_{3})C(O)OC_{2}H_{6} R^{4} y R^{5} son H, k es 0, m es 2, y n es 1. El compuesto de Fórmula Ig se puede denominar ácido 2-amino4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico.
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La Fórmula Ih representa un compuesto de Fórmula Ic en la que A es Glu-Cys-Gly, X es un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys, W es =O, y Z es -NR^{b}R^{c} en la que R^{b} y R^{c} son ambos etilo. Es también un compuesto de Fórmula II en el que R^{1} es COOH, R^{2} es H, R^{3} es CH_{2}-S-C(O)C(O)N(C_{2}H_{6})_{2}, R^{4} y R^{5} son H, k es 0, m es 2, y n es 1. El compuesto de Fórmula Ih se puede denominar ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-dietilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico.
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La Fórmula IIIa representa un compuesto de Fórmula III en la que R^{3.1} es hidrógeno, R^{3.2} es etilo, R^{3.3} y R^{3.4} son ambos metilo, y R^{3.5} es COOH. El compuesto de Fórmula IIIa se puede denominar 5-etil éster del ácido 2,2-dimetil-3,4-dihidro-2H-[1,4]tiazina-3,5-dicarboxílico.
Síntesis de los compuestos de la invención
Los compuestos de Fórmulas I y II se pueden preparar mediante síntesis en fase solución y, concretamente, en el caso de los compuestos de Fórmula II, mediante síntesis soportada en fase sólida. Estas se describen con más detalle más adelante con referencia a los Esquemas de reacción.
Parámetros sintéticos de reacción
Los términos "solvente", "solvente orgánico inerte " o "solvente inerte" significan un solvente inerte en las condiciones de la reacción descritas junto con el anterior. Los solventes empleados en la síntesis de los compuestos de la invención incluyen, por ejemplo, metanol, acetona, agua, acetonitrilo, 1,4-dioxano, dimetilformamida ("DMF"), benceno, tolueno, tetrahidrofurano ("THF"), cloroformo, cloruro de metileno (o diclorometano), dietil éter, piridina y similares, así como mezclas de los mismos. A no ser que se especifique lo contrario, los solventes usados en las reacciones de la presente invención son solventes orgánicos inertes.
El término "c.s." significa añadir una cantidad suficiente para conseguir una función definida, por ejemplo, para llevar una solución hasta el volumen deseado (es decir, 100%).
A no ser que se especifique lo contrario, las reacciones descritas en el presente documento tienen lugar a presión atmosférica en un intervalo de temperaturas de 0ºC a 110ºC (preferiblemente de 0ºC a 25ºC; lo más preferible a temperatura "ambiente", por ejemplo, 20ºC). Además, a no ser que se especifique otra cosa, los tiempos y condiciones de reacción se pretende que se aproximen, teniendo lugar, por ejemplo, a aproximadamente presión atmosférica dentro de un intervalo de temperaturas de aproximadamente 0ºC a aproximadamente 110ºC (preferiblemente de aproximadamente 0ºC a aproximadamente 25ºC; lo más preferible a aproximadamente temperatura "ambiente", por ejemplo, aproximadamente 20ºC) en un periodo de aproximadamente de 1 a aproximadamente 10 horas (preferiblemente aproximadamente 5 horas). Se pretende que los parámetros dados en los ejemplos sean específicos, no aproximados.
El aislamiento y purificación de los compuestos e intermedios descritos en el presente documento se puede realizar, si se desea, con cualquier procedimiento de separación o purificación adecuado tales como, por ejemplo; filtración, extracción, cristalización, cromatografía en columna, cromatografía en capa fina, o cromatografía en capa gruesa, o una combinación de dichos procedimientos. Ilustraciones específicas de procedimientos adecuados de separación y aislamiento se pueden realizar por referencia a los ejemplos siguientes en el presente documento. Sin embargo, se pueden usar también otros procedimientos equivalentes de separación y aislamiento.
Breve Descripción de los Esquemas de reacción
Los Esquemas de reacción 1, 1a, 1b y 1c ilustran la síntesis en fase solución de los compuestos de Fórmulas I y II.
Los Esquemas de reacción 2-6 ilustran la síntesis en fase sólida del conjugado péptido-piruvato de los compuestos de Fórmulas Ia y II
El Esquema de reacción 2 ilustra la síntesis de péptidos precursores de algunos compuestos de Fórmulas I y II, usando grupos protectores Fmoc y ^{t}Boc. La síntesis soportada en fase sólida de un único conjugado aminoácido-piruvato, aunque no se prefiere, se puede realizar como se ilustra y se puede encontrar ventajosa con algunas combinaciones de sustituyentes.
El Esquema de reacción 3 ilustra la síntesis soportada en fase sólida de conjugados de péptido-piruvato a partir de precursores protegidos con Fmoc, su desprotección, escisión del soporte sólido y aislamiento.
El Esquema de reacción 4 ilustra la síntesis soportada en fase sólida de conjugados de péptido-piruvato a partir de precursores protegidos con ^{t}Boc, su desprotección, escisión del soporte sólido y aislamiento.
Los Esquemas de reacción 5 y 6 ilustran el acoplamiento soportado en fase sólida de diferentes restos estructurales sobre el grupo aminoterminal del precursor, seguido por la conjugación con piruvato, desprotección, escisión y aislamiento para dar conjugados de péptido-piruvato de Fórmula II en los que R^{2} es diferente de hidrógeno.
Con respecto a los Esquemas de reacción 3 a 6, debe indicarse (para los compuestos que tengan más de un aminoácido) que el lado de la conjugación con piruvato no necesita realizarse sobre el aminoácido mostrado, sino que puede realizarse sobre cualquiera de las posiciones aminoácido. Así, por ejemplo, aunque la Fórmula 300c ilustra la síntesis de un compuesto que tiene un piruvato conjugado en AA_{2}, se pretende que la Fórmula 300c abarque los compuestos en los que el grupo -CH_{2}-S-L está en AA_{1}, AA_{2} o AA_{3}, es decir, todos los siguientes:
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Únicamente se muestra una única posición representativa de la conjugación con piruvato para cada uno de los compuestos en estos esquemas de reacción, omitiéndose los demás a efectos de brevedad.
El Esquema de reacción 7 ilustra otra hipótesis de fase sólida soportada para la síntesis y derivatización de resina-imina-piruvatos.
Materiales de partida
El compuesto etil-3-bromopiruvato está comercialmente disponible, por ejemplo, de Aldrich Chemical Company, Milwaukee, WI. Los aminoácidos protegidos con N-Fmoc-y N-^{t}Boc-protegido, incluyendo S-t-butiltio- y S-tritil-cisteína, están disponibles, por ejemplo, de Advanced ChemTech, Inc. de Louisville, KY. Otros reactivos, tales como ácido p-toluenosulfónico, 3H-imidazol-4-tiol, y soportes sólidos tales como resina Wang están igualmente comercialmente disponibles o se pueden preparar fácilmente por aquellas personas expertas en la técnica usando metodología habitualmente usada.
Preparación de la Fórmula I
Esquema de reacción 1
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14 
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Haciendo referencia al Esquema de reacción 1, equivalentes aproximadamente equimolares de un compuesto de Fórmula 101 en la que A y X tienen los significados anteriormente definidos, tales como:
\bullet un compuesto arilo, aralquilo, heteroarilo o heteroaralquilo,
\bullet un nucleósido, aminoácido, di-, tri- o tetra-péptido,
\bullet una aril-amida, -tiol, -sulfana, -sulfona, -mercaptopiruvato-tiol,
\bullet una aralquil-amida, -tiol, -sulfana, -sulfona, -mercaptopiruvato-tiol,
\bullet una heteroaril-amida, -tiol, -sulfana, -sulfona, -mercaptopiruvato-tiol, o
\bullet una heteroaralquil-amida, -tiol, -sulfana, -sulfona, -mercaptopiruvato-tiol,
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(cualquiera de dichos compuestos de Fórmula 101 puede estar opcionalmente sustituido) y un compuesto de Fórmula 102 en el que Z tiene el significado anteriormente definido y L es un grupo saliente tal como un haluro (preferiblemente un bromuro) junto con un solvente apropiado (tal como metanol, acetona, agua, acetonitrilo, 1,4-dioxano o DMF) se ponen en contacto en un recipiente de reacción adecuado, opcionalmente en presencia de una base orgánica (tal como una amina terciaria o imidazol). La reacción tiene lugar a una temperatura entre 0ºC y 110ºC (preferiblemente 0ºC a 25ºC) durante 30 minutos a 15 horas (preferiblemente 3-5 horas), seguido por la eliminación del solvente(s), aislamiento y purificación para dar el correspondiente producto de Fórmula I. Se pueden realizar etapas adicionales de aislamiento y purificación bien conocidas de los expertos en la técnica, por ejemplo, para proporcionar isómeros y/o tautómeros únicos.
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Preparación de la Fórmula Ia
Esquema de reacción 1a
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Haciendo referencia al Esquema de reacción 1a, los compuestos de Fórmula Ia se preparan como se ha descrito más arriba con referencia al Esquema de reacción 1, usando un compuesto de Fórmula 102.1 (por ejemplo, un halopiruvato opcionalmente sustituido con alquilo o arilo).
Preparación de la Fórmula Ib
Esquema de reacción 1b
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Haciendo referencia al Esquema de reacción 1b, un compuesto de Fórmula 102.1 se pone en contacto con un compuesto de la formula RaONH_{2} y se convierte en la oxima correspondiente de Fórmula 102.2, que a su vez se pone en contacto con un compuesto de Fórmula 101 como se ha descrito más arriba con referencia al Esquema de reacción 1. Alternativamente, el compuesto de la formula RaONH_{2} se puede usar con un compuesto de Fórmula 1a para dar la correspondiente oxima de Fórmula Ib. Se puede usar alquilación o acilación reductiva de un compuesto de Fórmula 1b para obtener los correspondientes compuestos de Fórmula I en los que W es -N(OH)-R^{d}.
De manera similar, la reacción de un compuesto de Fórmula Ia con un compuesto de formula R^{b}R^{c}NNH_{2} dará los correspondientes compuestos de Fórmula I en los que W es =N-NR^{b}R^{c}.
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Preparación de la Fórmula Ic
Esquema de reacción 1c
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Haciendo referencia al Esquema de reacción 1c, un ácido pirúvico de Fórmula 102.3 se pone en contacto con una amina secundaria de formula HNR^{b}R^{c} para dar el correspondiente compuesto de Fórmula 102.4, que se puede convertir en la correspondiente oxima de Fórmula 102.5 por reacción con un compuesto de Fórmula RaONH_{2}. Los compuestos de Fórmulas 102.4 y 102.5 se pueden convertir en los correspondientes compuestos de Fórmula Ic por reacción con un compuesto de Fórmula 101 (AXH) como se ha descrito más arriba.
De manera similar, partiendo de un compuesto de Fórmula Ic en la que W es O, la reacción con R^{a}ONH_{2} o R^{b}R^{c}NNH_{2} dará los correspondientes compuestos de Fórmula Ic en los que W es =N-O-R^{a} o =N-NR^{b}R^{c}. La alquilación o acilación reductiva de un compuesto de Fórmula 1c se puede usar para obtener los correspondientes compuestos de Fórmula I en los que W es -N(OH)-R^{d}.
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Preparación de la Fórmula II
Los compuestos de Fórmula II, particularmente los polipéptidos, se pueden preparar, con contadas excepciones, usando procedimientos de síntesis soportada en fase sólida. Estos se ilustran con referencia a los Esquemas de reacción 2 a 6.
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Esquena de reacción 2
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Tal como se ilustra en el Esquema de reacción 2, Etapa 2.1, un soporte sólido 201 (tal como una resina Wang) y un anhídrido de aminoácido 202 simétrico protegido con Fmoc se enlazan usando protocolos de acoplamiento/desprotección Fmoc conocidos en la técnica, para dar el correspondiente aminoácido de Fórmula 203 unido a resina protegido con Fmoc. Por ejemplo, a aproximadamente 10 equivalentes molares de GlyOH disueltos en DCM se añadió DIC (5 eq) en pequeñas porciones con agitación. Se continuó agitando durante 1 hora, tras lo cual la solución se añadió a la resina Wang (1 eq, pre-hinchado en DMF) en presencia de 0,1 equivalentes molares de DMAP. La suspensión de resina se agitó durante 1 hora, seguido por un lavado completo con DMF. La resina preparada resultante 201 se acopla con 2 equivalentes molares de anhídrido de aminoácido 202 usando TBTU (2 eq), DIPEA (4 eq), seguido por Lavado con DMF (3 veces). La Fórmula 203 se desprotege (como se muestra en la Etapa 2.2), por ejemplo, usando piperidina al 20% en DMF seguido por lavado con DMF (5 veces), para dar el aminoácido de Fórmula 204 unido a resina, que se puede unir a aminoácidos adicionales (como se muestra en la Etapa 2.3) o conjugarse con piruvato (como se muestra en el Esquema de reacción 3).
Un aminoácido de Fórmula 204 unido a resina se acopla con un aminoácido protegido, tal como 205, para dar el di-péptido de Fórmula 206 unido a resina, protegido con Fmoc, que se desprotege para dar el correspondiente dipéptido de Fórmula 207 unido a resina, que se puede unir a aminoácidos adicionales (como se muestra en la Etapa 2.5) o conjugarse con piruvato (como se muestra en el Esquema de reacción 3). Las reacciones tienen lugar en condiciones similares a las anteriormente descritas en relación con las Etapas 2.1 y 2.2. (La Fórmula 205 se muestra como protegida con Fmoc, pero será evidente para los expertos en la técnica que puede estar opcionalmente protegida con N-^{t}Boc).
Tal como se ilustra en el Etapa 2.5, la unidad N-terminal del aminoácido (por ejemplo, AA_{3}) puede estar protegida tanto con N-Fmoc- como con N-^{t}Boc-. Un di-péptido de Fórmula 207 unido a resina se acopla con un aminoácido protegido, tal como 208, para dar el tri-péptido de Fórmula 209 protegido unido a resina. La reacción tiene lugar bajo condiciones similares a las anteriormente descritas en relación con la Etapa 2.3. Tal como se ilustra en el Etapa 2.6, los tripéptidos de Fórmula 209 N-protegidos con Fmoc se desprotegen en condiciones similares a las anteriormente descritas en relación con la Etapa 2.4, y conjugarse después con piruvato (por ejemplo, como se muestra en el Esquema de reacción 3). Se continua con los péptidos N-'Boc-protegidos unidos a resina (tales como los de Fórmulas 206 o 209) tal como se ilustra en el Esquema de reacción 4.
Esquema de reacción 3
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El Esquema de reacción 3 describe una ruta sintética para los conjugados péptido-piruvato partiendo de los anteriores precursores de péptido NFmoc-protegidos unidos a resina, tales como los de Fórmulas 204, 207 y 210 (correspondientes a los compuestos de partida 300a, 300b y 300c), que se ilustran respectivamente teniendo una Cisteína protegida en AA_{1}, AA_{2} y AA_{2}, respectivamente (denominándose el grupo protector, por ejemplo, t-Butilo o tritilo como "L"). Los grupos protectores se introducen con el correspondiente aminoácido en las Etapas 2.1, 2.3 y/o 2.5. Se apreciará que cualesquiera de los aminoácidos AA_{1}, AA_{2} y AA_{3} (o un cuarto aminoácido, no mostrado) puede ser Cisteína como se usa en los Esquemas de reacción 3, 4, 5 y 6, para dar los correspondientes conjugados péptido-piruvato en AA_{1}, AA_{2} y/o AA_{3}.
La cisteína de un péptido unido a resina, tal como 300a, 300b y 300c, tal como se ilustra en el Etapa 3.1, se desprotege mediante tratamiento con ditiotreitol para dar el correspondiente compuesto de Fórmula 301a, 301b o 301c. Esto va seguido por conjugación del tiogrupo desprotegido con dos equivalentes molares de un halopiruvato de Fórmula 102 por sustitución nucleofílica, tal como se ilustra en la Etapa 3.2. El conjugado péptido-piruvato unido a resina resultante de Fórmula 302a, 302b o 302c se escinde a continuación de la resina en condiciones ácidas, por ejemplo, con TFA al 95% (ac.), se aísla y a continuación se purifica mediante procedimientos convencionales (por ejemplo, lavado con éter frío, filtración y liofilización) para dar el correspondiente conjugado péptido-piruvato libre de Fórmula 303a, 303b o 303c.
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(Esquema pasa a página siguiente)
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Esquema de reacción 4
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El Esquema de reacción 4 describe una ruta sintética para los conjugados péptido-piruvato partiendo de los precursores de péptido N-^{t}Boc-protegidos unidos a resina, tales como los de Fórmulas 206 y 209 (correspondientes a los compuestos de partida 400b y 400c). La síntesis partiendo de un aminoácido N-^{t}Boc-protegido se ilustra con referencia a un compuesto 400a.
Como en el Esquema de reacción 2, la cisteína de un péptido unido a resina, tal como 400a, 400b y 400c, tal como se ilustra en el Etapa 4.1, se desprotege mediante tratamiento con ditiotreitol para dar el correspondiente compuesto de Fórmula 401 a, 401 b o 401 c, seguido por conjugación del tiogrupo desprotegido con dos equivalentes molares de un halopiruvato de Fórmula 102 (Etapa 4.2). El conjugado péptido-piruvato N-^{t}Boc-protegido unido a resina resultante de Fórmula 402a, 402b o 402c se desprotege a continuación y se escinde en condiciones ácidas, por ejemplo, con TFA al 95% (ac.), se aísla y a continuación se purifica mediante procedimientos convencionales (como anteriormente) para dar el correspondiente conjugado péptido-piruvato libre de Fórmula 403a, 403b o 403c.
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(Esquema pasa a página siguiente)
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Esquema de reacción 5
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El Esquema de reacción 5 ilustra el acoplamiento de varios restos estructurales sobre el grupo amino de los conjugados péptido piruvato de la invención, usando síntesis soportada en fase sólida. Estos compuestos se describen adicionalmente con referencia a los Ejemplos 23-27.
Tal como se ilustra en la Etapa 5.1, partiendo de los anteriores precursores de péptido N-protegidos con Fmoc unidos a resina, tales como los de Fórmulas 204, 207 y 210 (correspondientes a los compuestos de partida 500a, 500b y 500c), se realiza el acoplamiento de un difenol ácido 501 al grupo amino del piruvato-péptido usando éster HOBt preactivado (usando DIC como agente deshidratante) para dar los correspondientes compuestos de Fórmulas 502a, 502b, y 502c. El tiogrupo protector se elimina a continuación (Etapa 5.2), seguido por conjugación con piruvato (Etapa 5.3), escisión, aislamiento y purificación (Etapa 5.4) como se ha descrito más arriba con respecto al Esquema de reacción 3 para dar el correspondiente compuestos de la invención identificado como las Fórmulas 505a,
505b y 505c.
Esquema de reacción 6
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El Esquema de reacción 6 ilustra una secuencia alternativa para acoplar restos estructurales sobre el grupo amino del conjugado péptido-piruvato de la invención, comenzando con la escisión de un precursor (aquí un compuesto de Fórmula 503a, 503b o 503c acoplado a difenol ácido) de la resina (Etapa 6.1), seguido por acoplamiento con piruvato, aislamiento y purificación (Etapa 6.2). Estas reacciones se llevan a cabo en condiciones similares a las de las respectivas etapas del Esquema de reacción 5.
Esquema de reacción 7
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Una hipótesis alternativa en soporte sólido para la síntesis de compuestos de Fórmula I se ilustra con respecto al Esquema de reacción 7.
Procedimientos preferidos y etapas finales
Los procedimientos preferidos para generar los compuestos de Fórmula Ia, Ib, Ic y III es la reacción en fase solución, por ejemplo, según se ejemplifica mediante la síntesis del Ejemplo 1-16. Este procedimiento representa una ruta sintética simple y directa en la que A-X del Esquema 1 está fácilmente disponible. Un procedimiento preferido para la preparación de compuestos, concretamente de la Fórmula II, es la solución de síntesis soportada en fase sólida, por ejemplo, según se ejemplifica mediante la síntesis de los Ejemplos 16, y 19 a 27. Permite la síntesis de conjugados de estructura definida y más complejos. Esto permite concretamente la preparación de una gran cantidad de moléculas estructuralmente diferentes usando usa solución paralela, pero que no se preferiría para la síntesis de grandes cantidades de un compuesto concreto.
Así, en un aspecto preferido, un bromopiruvato y un nucleófilo que contiene azufre se ponen en contacto y se someten a condiciones de sustitución nucleófila.
En otro aspecto preferido, un piruvato conjugado soportado en fase sólida se escinde de dicho soporte.
En otro aspecto preferido más, un péptido que contiene cisteína libre de soporte sólido se conjuga con un bromopiruvato.
Un compuesto de Fórmula I se pone en contacto con un ácido farmacéuticamente aceptable para formar la correspondiente sal de adición de ácido.
Una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable ácido de Fórmula I se pone en contacto con una base para formar la correspondiente base libre de Fórmula I.
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Compuestos preferidos
En una forma de realización preferida en la que A es un aminoácido o péptido natural o sustituido, A se selecciona entre el grupo: Ala, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Lys, Met, Ser y Thr, especialmente Ala, Asp, Cys, Glu y Gly. Se prefieren más aquellos compuestos en los que A es un di-o tri-péptido natural o sustituido, especialmente péptidos naturales. Es más preferido el tri-péptido Glu-Cys-Gly.
En otra forma de realización preferida, A es un grupo heteroarilo, especialmente un heteroarilo que contiene nitrógeno, y concretamente en el que A se selecciona entre el grupo: imidazol, triazol, tiadiazol, oxadiazol, benzoselenazol, benzoimidazol y benzotiazol.
Se prefiere adicionalmente en cada una de las formas de realización anteriores aquellos compuestos en los que X es -S- o un enlace covalente.
Al respecto general de las Fórmulas I, Ia, Ib y Ic, se prefieren aquellos compuestos, formulaciones farmacéuticas, usos médicos secundarios y fabricación de medicamentos que tienen las siguientes combinaciones y permutaciones de grupos sustituyentes (subagrupados, respectivamente, en orden creciente de preferencia, entendiéndose que cada subagrupación se puede combinar con otras subagrupaciones):
\bullet
\vtcortauna A es alquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido.
\medcirc
\vtcortauna Concretamente cuando A es: un aminoácido seleccionado entre Ala, Asp, Cys, Glu y Gly, o a di-o tri-péptido, los aminoácidos del cual se seleccionan entre Ala, Asp, Cys, Glu y Gly.
\sqbullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando A es el tri-péptido Glu-Cys-Gly.
\bullet
\vtcortauna Más preferiblemente cuando X es un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys.
\medcirc
\vtcortauna Preferiblemente cuando A es alquilo sustituido seleccionado entre: -CH_{2}-CH(OH)-CH_{2}-OH, y -CH(CH_{3})-C(O)-N (H)-CH_{2}-COOH); heteroarilo seleccionado entre: benzoselenazol-2-il. 5-(cloro o metoxi)-sustituido-1H-benzoimidazol-2-ilo, y 5-(cloro, metoxi o nitro)-sustituido-benzotiazol-2-ilo; heterociclilo seleccionado entre: 4,5dihidro-tiazol-2-ilo, 2-tioxo-imidazolidin-1-ilo y morfolino; o un di-, tri- o tetra-péptido.
\medcirc
\vtcortauna Concretamente cuando X es -S-o o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo.
\medcirc
\vtcortauna Concretamente cuando W es =O ó =N-OR^{a}.
\medcirc
\vtcortauna Concretamente cuando Z es -OR o -NRbRc.
\bullet
\vtcortauna W es =O ó =N-OR^{a}.
\medcirc
\vtcortauna Concretamente cuando Z es -OR o -NR^{b}R^{c}.
\medcirc
\vtcortauna Concretamente cuando W es =O y Z es -OR
\sqbullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R es hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{8}.
\newpage
\bullet
\vtcortauna Más preferiblemente cuando R es hidrógeno, etilo o n-butilo.
\sqbullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando A es alquilo sustituido seleccionado entre: -CH_{2}-CH(OH)-CH_{2}-OH, y -CH(CH_{3})-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH); un heteroarilo seleccionado entre: benzoselenazol-2-ilo, 5-(cloro o metoxi)-sustituido-1H-benzoimidazol-2-ilo, y 5-(cloro, metoxi o nitro)-sustituido-benzotiazol-2-ilo; heterociclilo seleccionado entre: 4,5-dihidro-tiazol-2-ilo, 2-tioxo-imidazolidin-1-ilo y morfolino; o un di-, tri- o tetra-péptido.
\bullet
\vtcortauna Más preferiblemente cuando X es -S-o o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo.
\bullet
\vtcortauna Lo más preferible cuando R es hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{8}.
\sqbullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando X es -S-o o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo.
\medcirc
\vtcortauna Concretamente cuando W es =O y Z es-NR^{b}R^{c}.
\sqbullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R^{b} y R^{c} son alquilo C_{1} a C_{8}.
\sqbullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R^{b} es alquilo C_{1} a C_{8}, arilo, aralquilo o cicloalquilo, y R^{c} es hidrógeno.
\sqbullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman a un anillo de pirrolidina 2-opcionalmente sustituido o un anillo de 6 miembros seleccionado entre 4-opcionalmente sustituido-piperidin-1-ilo y morfolin-4-ilo.
\medcirc
\vtcortauna Concretamente cuando W es =N-OR^{a}.
\sqbullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R^{8} es hidrógeno, alquilo C_{1} a C_{8}, o alquenilo, fenilo o bencilo.
\sqbullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando Z es -OR o -NR^{b}R^{c}.
\bullet
\vtcortauna Más preferiblemente cuando R es hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{8}.
\bullet
\vtcortauna Lo más preferible cuando R es hidrógeno, etilo o n-butilo.
\bullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando Z es -NR^{b}R^{c}.
\bullet
\vtcortauna Más preferiblemente cuando R^{b} y R^{c} son alquilo C_{1} a C_{8}.
\bullet
\vtcortauna Más preferiblemente cuando R^{b} es acilalquilo C_{1} a C_{8} sustituido, arilo, aralquilo o cicloalquilo, y R^{c} es hidrógeno.
\bullet
\vtcortauna Más preferiblemente cuando R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman a un anillo de 2-pirrolidina o un anillo de 6 miembros seleccionado entre 4-piperidin-1-ilo y morfolin-4-ilo.
\bullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando A es alquilo sustituido seleccionado entre: -CH_{2}-CH(OH)-CH_{2}-OH, y -CH(CH_{3})-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH); heteroarilo seleccionado entre: 5-(cloro o metoxi)-sustituido-1H-benzoimidazol-2-ilo, y 5-(cloro, metoxi o nitro)-sustituido-benzotiazol-2-ilo; heterociclilo seleccionado entre: 4,5-dihidro-tiazol-2-ilo, 2-tioxo-imidazolidin-1-ilo y morfolino.
\quad
o un di-, tri- o tetra-péptido.
\bullet
\vtcortauna Más preferiblemente cuando X es -S- o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo.
\vskip1.000000\baselineskip
\medcirc
\vtcortauna Z es -OR o -NR^{b}R^{c}.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R es hidrógeno alquilo C_{1} a C_{8}.
\sqbullet
\vtcortauna Concretamente cuando R es hidrógeno, etilo o n-butilo.
\newpage
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R^{b} y R^{c} son alquilo C_{1} a C_{8}.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R^{b} es acilalquilo C_{1} a C_{8} sustituido, arilo, aralquilo o cicloalquilo, y R^{c} es hidrógeno.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo 2-pirrolidina o un anillo de 6 miembros seleccionado entre 4-piperidin-1-ilo y morfolin4-ilo.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando W es =N-OR^{a}.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando Z es -NR^{b}R^{c}.
\sqbullet
\vtcortauna Concretamente cuando W es =N-OR^{a}.
\bullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R^{b} es: alquilo C_{1} a C_{8}, arilo, aralquilo o cicloalquilo; y
\bullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R^{c} es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{8}; o
\bullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de pirrolidina un anillo de 6 miembros, opcionalmente O ó N como un heteroátomo adicional y siendo dicho anillo un sustituyente seleccionado entre el grupo constituido por acilo y alquilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Con respecto a la Fórmula II, se prefieren aquellos compuestos, formulaciones farmacéuticas, usos médicos secundarios y la fabricación de medicamentos que tienen las siguientes combinaciones y permutaciones de grupos sustituyentes (subagrupados, respectivamente, en orden creciente de preferencia, entendiéndose que cada subagrupación se puede combinar con otras subagrupaciones):
\bullet
R^{1} es: -C(O)-O-R'
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R' es hidrógeno o alquilo inferior.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R^{2} es hidrógeno.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R^{3} es -CH_{2}S-CH_{2}C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}S-CH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z.
\sqbullet
\vtcortauna Concretamente cuando W es =O ó =N-OR^{a}.
\bullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R^{8} es hidrógeno o alquilo.
\sqbullet
\vtcortauna Concretamente cuando Z es -OR o -NR^{b}R^{c}.
\bullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, o aralquilo.
\bullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R^{b} es alquilo C_{1} a C_{8}, fenilo o bencilo;
\bullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R^{c} es hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{8}.
\bullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de 6 miembros seleccionado entre 4-piperidin-1-ilo y morfolin-4-ilo.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R^{4} es hidrógeno.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R^{5} es hidrógeno o alquilo inferior.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando k, m y n son respectivamente: 0,2,1; 1,0,1; o 2,0,1.
\vskip1.000000\baselineskip
Con respecto a la Fórmula III, se prefieren aquellos compuestos, formulaciones farmacéuticas, usos médicos secundarios y la fabricación de medicamentos que tienen las siguientes combinaciones y permutaciones de grupos sustituyentes (subagrupados, respectivamente, en orden creciente de preferencia, entendiéndose que cada subagrupación se puede combinar con otras subagrupaciones):
\newpage
\bullet
\vtcortauna R^{3.1} es hidrógeno
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R^{3.2} es hidrógeno o etil.
\sqbullet
\vtcortauna Concretamente cuando R^{3.3} y R^{3,4} son ambos H o son ambos metilo.
\bullet
\vtcortauna Preferiblemente cuando R^{3.5} es: COOH.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R^{3.3} y R^{3,4} son ambos H o son ambos metilo.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R^{3.5} es: COOH.
\bullet
\vtcortauna R^{3.2} es hidrógeno o etilo.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R^{3}.3 y R^{3},4 son ambos H o son ambos metilo.
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R^{3}.5 es: COOH.
\bullet
\vtcortauna R^{3.3} y R^{3,4} son ambos H o son ambos metilo
\medcirc
\vtcortauna Especialmente cuando R^{3.6} es: COOH.
\bullet
\vtcortauna R^{3.5} es: COOH.
\vskip1.000000\baselineskip
En los usos médicos secundarios y la fabricación de medicamentos usando compuestos de acuerdo con la Fórmula I, se prefieren aquellos compuestos cuyos sustituyentes se han seleccionado entre los siguientes grupos:
A es:
alquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido.
X es:
-N(H)-, -S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo; heterociclilo.
W es:
=O ó =N-OR^{a}.
Z es:
-OR, o -NR^{b}R^{c}.
R es:
hidrógeno, alquilo, cicloalquilo sustituido, o aralquilo.
R^{a} es:
hidrógeno, alquilo, arilo, o aralquilo.
R^{b} es:
hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo o cicloalquilo.
R^{c} es:
hidrógeno o alquilo; y R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos pueden formar un anillo de 5 ó 6 miembros, opcionalmente incorporando N u O como heteroátomo adicional del anillo, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre el grupo constituido por acilo y alquilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Más preferiblemente, los anteriores sustituyentes de Fórmula I se seleccionan adicionalmente entre los siguientes grupos:
A es:
el tri-péptido Glu-Cys-Gly; y
X es:
un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys.
R es:
hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{8}.
R^{a} es:
hidrógeno, alquilo C_{1} a C_{8} o alquenilo, fenilo o aralquilo.
R^{b} es:
acilalquilo C_{1} a C_{8} sustituido, aralquilo o cicloalquilo; y
R^{c} es:
hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{4}; o
\newpage
\global\parskip0.970000\baselineskip
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de 5 miembros, o un anillo de 6 miembros opcionalmente incorporando O como heteroátomo adicional del anillo, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre el grupo constituido por acilo y alquilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Con respecto a la Fórmula Ia, se prefieren aquellos compuestos cuyos sustituyentes se han seleccionado entre los siguientes grupos:
A es:
alquilo sustituido seleccionado entre: -CH_{2}-CH(OH)-CH_{2}-OH, -CH(CH_{3})-CH(OH)-CH_{2}-OH, -CH(CH_{3})-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH, -CH_{2}-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH, -CH_{2}-CH_{2}-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH, -CH(CH_{3})-CH_{2}-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH, y -CH_{2}-CH(CH_{3})-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH, heteroarilo sustituido seleccionado entre: 5-cloro-1H-benzoimidazol-2-ilo, 5-metoxi-1H-benzoimidazol-2-ilo, 4-oxo-3,4-dihidro-quinazolin-2-ilo, benzoselenazol-2ilo, y 5-sustituido-benzotiazol-2-ilo, heterociclilo seleccionado entre: tiazol, 2-tioxo-imidazolidin-1-ilo y morfolino, o un di-, tri- o tetra-péptido opcionalmente sustituido;
R es:
hidrógeno, alquilo, o cicloalquilo;
X es:
-S-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo; y
Z es:
-OR.
\vskip1.000000\baselineskip
Más preferiblemente, los anteriores sustituyentes de Fórmula Ia se seleccionan adicionalmente entre los siguientes grupos:
A es:
un di-o tri-péptido, las aminoadiciones del cual se seleccionan entre Ala, Asp, Cys, Glu y Gly; lo más preferible el tri-péptido Glu-Cys-Gly;
X es:
-S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo; y
R es:
hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{8}.
\vskip1.000000\baselineskip
Con respecto a la Fórmula Ib, se prefieren aquellos compuestos cuyos sustituyentes se seleccionan entre los siguientes grupos:
A es:
arilo, heteroarilo, heterociclilo, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido;
R es:
hidrógeno, alquilo, cicloalquilo sustituido, o aralquilo;
Ra es:
hidrógeno, alquilo, arilo, o aralquilo;
X es:
-S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo; y
Z es:
-OR;
\vskip1.000000\baselineskip
Más preferiblemente, los anteriores sustituyentes de Fórmula Ib se seleccionan adicionalmente entre los siguientes grupos:
A es:
fenilo o heteroarilo seleccionado entre: benzotiazol-2-il y benzoimidazol-2-ilo, o un di- o tri-péptido opcionalmente sustituido cuyos aminoácidos se seleccionan entre Ala, Asp, Cys, Glu y Gly; lo más preferible el tri-péptido Glu-Cys-Gly:
R^{a} es:
hidrógeno, alquilo o alquenilo C_{1} a C_{4}, fenilo o bencilo; y
R es:
hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{8}.
\vskip1.000000\baselineskip
Con respecto a la Fórmula Ic, se prefieren aquellos compuestos cuyos sustituyentes se seleccionan entre los siguientes grupos:
A es:
alquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido;
\global\parskip1.000000\baselineskip
X es:
-S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys;
W es:
=O ó =N-OR^{a};
R^{a} es:
hidrógeno, alquilo, arilo, o aralquilo;
R^{b} es:
hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo o cicloalquilo;
R^{c} es:
hidrógeno o alquilo;
y R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos pueden formar un anillo de 5 ó 6 miembros, opcionalmente incorporando N u O como heteroátomo adicional del anillo, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre el grupo constituido por acilo y alquilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Más preferiblemente, los anteriores sustituyentes de Fórmula Ic se seleccionan adicionalmente entre los siguientes grupos:
A es:
arilo seleccionado entre: fenilo y p-tolilo; o heteroarilo seleccionado entre: -benzotiazol-2-ilo y benzoimidazol-2-ilo, o un di-o tri-péptido cuyos aminoácidos se seleccionan entre Ala, Asp, Cys, Glu y Gly; lo más preferible el tri-péptido Glu-Cys-Gly.
W es:
=O, =N-OH, o =N-O-CH_{3}; y
R^{b} y R^{c} son alquilo C_{1} a C_{8}.
R^{b} es alquilo C_{1} a C_{8}.sustituido, arilo, aralquilo o cicloalquilo, y R^{c} es hidrógeno; o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de pirrolidina o un anillo de 6 miembros seleccionado entre 4-opcionalmente sustituido-piperidin-1-ilo y morfolin-4-ilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Con respecto a la Fórmula II, se prefieren aquellos compuestos cuyos sustituyentes se seleccionan entre los siguientes grupos:
R^{1} es:
-C(O)-O-R' en la que R' es hidrógeno o alquilo inferior:
R^{2} es:
hidrógeno;
R^{3} es:
-CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S (O)-CH=C(OH)-C(O)-Z
R^{4} es:
hidrógeno;
R^{5} es:
hidrógeno o alquilo inferior;
W es:
=O ó =N-OR^{a};
Z es:
-OR o -NR^{b}R^{c};
R es:
hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, o aralquilo;
Ra es:
hidrógeno o alquilo;
R^{b} es:
alquilo C_{1} a C_{4}, fenilo o bencilo;
R^{c} es:
hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{4}, o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de 6 miembros seleccionado entre piperidin-1-ilo y morfolin-4-ilo; y
k, m y n son respectivamente: 0,2,1; 1,0,1; o 2,0,1.
\newpage
Más preferiblemente, los anteriores sustituyentes de Fórmula II se seleccionan adicionalmente entre los siguientes grupos:
R^{1} es:
-COOH;
R^{5} es:
hidrógeno; y
k, m y n son respectivamente: 0,2,1; o 2,0,1.
\vskip1.000000\baselineskip
Con respecto a la Fórmula III, se prefieren aquellos compuestos cuyos sustituyentes se seleccionan entre los siguientes grupos:
R^{3.1} es:
hidrógeno;
R^{3.2} es:
hidrógeno o etilo;
R^{3.3} y R^{3,4} son ambos H o son ambos metilo; y
R^{3.5} es:
COOH.
\vskip1.000000\baselineskip
Más preferiblemente, los anteriores sustituyentes de Fórmula III se seleccionan adicionalmente cuando R^{3.2} es etilo.
Una serie de compuestos preferidos incluye los siguientes, así como sus esteroisómeros, tautómeros, sales y mezclas:
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(5-metil-1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(5-metoxi-1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
5-Etil éster del ácido 3,4-dihidro-2H-[1,4]tiazina-3,5-dicarboxílico
\bullet
1-(2-carboxi-2-oxo-etil)-4-[2-(3,4-dihidroxi-fenil)-vinil]-piridinio; bromuro de
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
Dietil éster del ácido 2-hidroxi-3-(1H-imidazol-2-ilsulfanil)-5-oxo-hex-2-enedioico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-[2-amino-9-(3,4-dihidroxi-5-hidroximetil-tetrahidro-furan-2-il)-9H-purin-6-ilsulfanil-2-oxo-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 2-oxo-3-(5-sulfo-1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(5-amino-2H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(5-amino-[1,3,4]tiadiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(5-nitro-1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 2-oxo-3-(5-fenil-[1,3,4]oxadiazol-2-ilsulfanil)-propiónico
\bullet
Ácido 3,4-dihidro-2H-[1,4]tiazina-3,5-dicarboxílico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-carboxi-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-n-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etil]-succinámico
\bullet
Ácido 3-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-hidroxi-acrílico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-hidroxi-acrílico
\newpage
\bullet
Metil éster del ácido 2-amino-4-[2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-1-(metoxicarbonilmetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-decicloxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-[2-(3-amino-3-carboxi-propionilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil] 2-hidroxi-acrílico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-{2-amino-2-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxi-vinilsulfanil)-etilcarbamoil]-etilsulfanil}-2-hidroxi-acrílico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-[2-(2-amino-3-mercapto-propionilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-hidroxi-acrílico
\bullet
Ácido 4-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-2-{4-[2-(3,4-dihidroxifenil)-vinil]-benzoilamino}-butírico
\bullet
Ácido 4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-mercapto-etilcarbamoil]-2-{4-[2-(3,4-dihidroxifenil)-vinil]-benzoilamino}-butírico
\bullet
Ácido 4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-2-[3-(6-hidroxi-2,7,8trimetil-croman-2-il)-propionilamino]-butírico
\bullet
Ácido 4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-mercapto-etilcarbamoil]-2-[3-(6-hidroxi-2,7,8-trimetil-chroman-2-il)-propionilamino]-butírico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(5-metil-[1,3,4]tiadiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(5-cloro-benzotiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(4,5-dihidro-tiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
Dietil éster del ácido 2-hidroxi-4-(1-metil-1H-imidazol-2-ilsulfanil)-2,3-dihidro-furan-2,5-dicarboxílico
\bullet
Ácido 2,2-dimetil-3,4-dihidro-2H-[1,4]tiazina-3,5-dicarboxílico
\bullet
Ácido 4-[2-[2-(adamantan-1-ilmetoxicarbonil)-2-oxo-etilsulfanil]-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-2amino-butírico
\bullet
Ácido 1-[3-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-2-metil-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico
\bullet
Ácido 2-amino-3-[1-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etil)-1H-imidazol-4-il]-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-[5-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-[1,3,4]tiadiazol-2-ilsulfanil]-2-oxo-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 2-oxo-3-(3-fenil-[1,2,4]oxadiazol-5-ilsulfanil)-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(6-etoxi-benzotiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 2-oxo-3-(9H-purin-6-yisulfanil)-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-[9-(3,4-dihidroxi-5-hidroximetil-tetrahidro-furan-2-il)-9H-purin-6-ilsulfanil]-2-oxo-propiónico
\bullet
Ácido 2-acetilamino-3-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-propiónico
\bullet
Ácido 3-amino-n-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etil]-succinámico
\bullet
Ácido 2-[2-amino-3-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-propionilamino]-3-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-propiónico
\bullet
Ácido 2-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-3-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-propionilamino]-4-metilsulfanil-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-[1-carboxi-2-(1H-imidazol-4-il)-etilcarbamoil]-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-octadeciloxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-[1-carboxi-2-(1H-indol-2-il)-etilcarbamoil]-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-[1-carboxi-2-(4-hidroxi-fenil)-etilcarbamoil]-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-3-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-propionilamino]-3-metil-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(1-carboxi-etilcarbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-3-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-propionilamino]-pentanodioico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(1-carboxi-2-hidroxi-etilcarbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-[1-carboxi-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-2-(2-etoxicarbonil-2-oxoetilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Àcido 2-amino-4-[1-carboxi-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(etoxicarbonilmetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Éster etílico del ácido propiónico éster etílico del ácido 3-[2-amino-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-2-oxo-3-(2-tioxo-imidazolidin-1-il)-propiónico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(3-morfolin-4-il-2,3-dioxo-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-pirrolidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-octilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Metil éster del ácido 1-{3-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propionil)-pirrolidina-2-carboxílico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-ciclohexilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-(1-metoxicarbonil-2-fenil-etilcarbamoil)-2-oxo-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[2-(2-bencilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hexilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Metil éster del ácido 2-{3-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propionilaminol-3metil-pentanoico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-dimetilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-(1-(carboximetil-carbamoil)-2-{2-[2-(4-hidroxi-fenil)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-2-oxoetilsulfanil}-etilcarbamoil)-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-dietilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-(4-metil-ciclohexilcarbamoil)-2-oxo-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-etoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[2-(2-terc-butoxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 4-[2-(2-aliloxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-2-amino-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-etoxicarbonil-2-(4-nitro-benciloxiimino)-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-fenoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\vskip1.000000\baselineskip
Otra serie más preferida de compuestos incluye los siguientes, así como sus esteroisómeros, tautómeros, sales y mezclas;
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
5-Etil éster del ácido 3,4-dihidro-2H-[1,4]tiazina-3,5-dicarboxílico
\bullet
Etílico del ácido 3-(5-cloro-benzotiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico éster
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(5-nitro-1 H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 2-oxo-3-(2-tioxo-imidazolidin-1-il)-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(5-metoxi-1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(4,5-dihidro-tiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-carboxi-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-n-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etil]-succinámico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-(1-metoxicarbonil-2-fenil-etilcarbamoil)-2-oxo-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(3-morfolin-4-il-2,3-dioxo-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-butoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico
\vskip1.000000\baselineskip
Actualmente, lo más preferido (concretamente para llevar a cabo los procedimientos de la invención) es la siguiente serie de compuestos incluyendo sus esteroisómeros, tautómeros, sales y mezclas:
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-oxo-2-pentiloxicarbonil-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hexiloxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-carboxi-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]butírico,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]butírico,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-butoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,.
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet
Ácido 2-amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-etoxicarbonil-2-(4-nitro-benciloxiimino)-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-fenoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-etoxiimino-Etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de di-HCl,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[2-(2-terc-butoxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de di-HCl,
\bullet
Ácido 4-[2-(2-aliloxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-2-amino-butírico o su sal de di-HCl,
\newpage
\bullet
Ácido 2-Amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[3-(4-metil-piperidin-1-il)-2,3-dioxo-propilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico,
\bullet
Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hidroxiimino-3-oxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2.(2-dietilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Ácido 2-Amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-(1-metoxicarbonil-2-fenil-etilcarbamoil)-2-oxo-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico,
\bullet
Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-ciclohexilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Ácido 2-Amino-4-[2-(2-bencilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(3-morfolin-4-il-2,3-dioxo-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-pirrolidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-octilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Metil éster del ácido 1-{3-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propionil}-pirrolidina-2-carboxílico,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hexilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Metil éster del ácido 2-{3-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propionilamino}-3metil-pentanoico,
\bullet
Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-dimetilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet
Ácido 2-amino-4-(1-(carboximetil-carbamoil)-2-{2-[2-(4-hidroxi-fenil)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-2-oxoetilsulfanil}-etilcarbamoil)-butírico,
\bullet
Ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet
Éster etílico del ácido 2-oxo-3-(4-oxo-3,4-dihidro-quinazolin-2-ilsulfanil)-propiónico,
\bullet
Éster etílico del ácido 3-[1-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-hidroxi-acrílico,
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(benzoselenazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(5-cloro-benzotiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(5-nitro-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(5-metoxi-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(4,5-dihidro-tiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet
Metil éster del ácido 2-hidroxiimino-3-p-tolilsulfanil-propiónico,
\bullet
Ácido 2-hidroxiimino-3-p-tolilsulfanil-propiónico,.
\bullet
Éster etílico del ácido 2-hidroxiimino-3-p-tolilsulfanil-propiónico,
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(5-cloro-benzotiazol-2-ilsulfanil)-2-hidroxiimino-propiónico,
\bullet
Éster etílico del ácido 2-hidroxiimino-3-(5-metoxi-1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-propiónico,
\bullet
Éster etílico del ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-hidroxiimino-propiónico,
\bullet
2-Hidroxiimino-N-fenil-3-p-tolilsulfanil-propionamida, y
\bullet
1-Piperidin-1-il-3-p-tolilsulfanil-propano-1,2-diona 2-oxima
\vskip1.000000\baselineskip
Utilidad, ensayo y administración Utilidad general
Los usos médicos secundarios de los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento de numerosos trastornos, concretamente aquellos caracterizados por estrés oxidativo y/o inflamación. En concreto, se pueden usar los compuestos de la presente invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la isquemia, que incluye apoplejía, isquemia cerebral, isquemia miocardial, isquemia retinal, infarto de miocardio y disfunción postquirúrgica; trastornos neurodegenerativos que incluyen Alzheimer, demencia y enfermedad de Parkinson; neuropatía periférica, que incluye lesión de médula espinal, lesión de cabeza y trauma quirúrgico; trastornos inflamatorios que incluyen diabetes, enfermedad renal, síndrome premenstrual, asma, trastornos inflamatorios cardiopulmonares, insuficiencia cardiaca (que incluye insuficiencia cardiaca crónica y congestiva), artritis reumatoide, osteoartritis, fatiga muscular y cojera intermitente; y para la preservación de tejido de aloinjerto y órganos para trasplante.
Algunas de las dolencias caracterizadas por estrés oxidativo caen dentro del grupo; isquemia miocardial, infarto de miocardio, trastornos inflamatorios cardiopulmonares; e insuficiencia cardiaca (que incluye insuficiencia cardiaca crónica y congestiva); éstas se tratan concretamente con compuestos de Fórmula I en los que W es =O y en los que Z es -OR. Otro grupo de dolencias caracterizadas por estrés oxidativo incluyen: apoplejía, isquemia cerebral, isquemia retinal, disfunciones cognitivas postquirúrgicas (por ejemplo, tras cirugía de bypass) neuropatía periférica, lesión de medula espinal, lesión de cabeza y trauma quirúrgico, y trastornos neurodegenerativos que incluyen Alzheimer, demencia y enfermedad de Parkinson; éstas se tratan concretamente con compuestos de Fórmula I en los que W es =O o =NOR^{a} y en los que Z es -OR o NR^{b}R^{c}. Otro agrupamiento de enfermedades caracterizadas por estrés oxidativo y que implican componentes inflamatorios y/o autoinmunes incluyen: diabetes; enfermedad renal; síndrome premenstrual; asma, artritis reumatoide; osteoartritis, fatiga muscular; y cojera intermitente.
La invención se define en las reivindicaciones. Las reivindicaciones se dirigen a los usos médicos secundarios de los compuestos.
Ensayo
Esta sección describe cómo se seleccionan las composiciones que incorporan las composiciones de la presente invención, usando modelos animales in vitro y/o in vivo, por ejemplo, y usados como intervenciones terapéuticas en tres indicaciones a modo de ejemplo, es decir, apoplejía, insuficiencia cardiaca crónica e infarto de miocardio.
Lesiones en el cerebro que interrumpen su suministro de sangre, como en la isquemia, o su suministro de oxígeno, como en la hipoxia (oxígeno bajo) o la anoxia (sin oxígeno), producen rápidamente un desequilibrio neuronal que conduce a la muerte celular (Flynn, C. J., y col., 1989 en G. Siegel y col., (Eds), Basic Neurochemistry, Raven Press, NY). Se pueden llevar a cabo investigaciones sobre los mecanismos celulares y moleculares que conducen a daño neuronal e inflamación asociada con diversos tipos de isquemia cerebral usando sistemas de modelos in vitro, tales como cultivos celulares primarios, que retienen las características metabólicas de las neuronas in vivo. El uso de dichos modelos basados en células ha llevado a avances en la identificación de los mecanismos bioquímicos que conducen a la muerte celular en dolencias tales como anoxia, hipoglicemia, excitotoxicidad, y exposición a especies de oxígeno reactivo. Líneas celulares neuronales tales como la línea celular feocromocitoma, PC-12, son también útiles modelos para estudiar los efectos del estrés oxidativo sobre la estructura y función de las proteínas específicas de neuronas que se expresan en líneas celulares. Como muchas líneas celulares neuronales no expresan todas las propiedades de las neuronas genuinas, actualmente se usan cultivos neuronales primarios como modelos in vitro en los cuales discernir los procesos que se producen en el cerebro intacto.
Los modelos in vitro de isquemia que se aproximan a la privación de oxígeno y glucosa mimetizan las dolencias in vivo, por ejemplo, poniendo cultivos celulares en cámaras con fuerte anaerobia o hipoxia y que intercambian el medio de cultivo con medios desoxigenados y de composición iónica definida. La sobreestimulación tóxica de los receptores neuronales de glutamato, especialmente los receptores de N-metil-D-aspartato (NMDA), contribuye a la lesión neuronal hipóxica-isquémica (Choi, D. M., 1988, Neuron 1: 623-634), especies de oxígeno reactivo de inducción isquémica (ROS) (Watson, B. D., y col., 1988, Ann NY Acad Sci., 59: 269-281, influjo excesivo del calcio (Grotta, J: C., 1988, Stroke 19: 447-454), aumento del ácido araquidónico (Siesjo, B. K., 1981, J. Cereb. Blood Flow Metab. 1: 155-186) y daño en el ADN (MacManus, J. P., y col., 1993, Neurosci. Lett., 164: 89-92), produciendo cada uno una cascada de neurodegeneración.
Las células neuronales hipocámpicas embriónicas primarias se reconocen ampliamente como útiles en los modelos de función neuronal. El hipocampo es una fuente de población de neuronas relativamente homogénea con propiedades típicas bien caracterizadas de las neuronas del sistema nervioso central (SNC) en general. Se ha estimado que las neuronas piramidales, el tipo celular principal en el hipocampo, suponen del 85% al 90% de la población neuronal total (Banker y Goslin, 1998, Culturing Nerve Cells, 2ª edición. The MIT Press, Cambridge, Massachusetts). El hipocampo presenta también una marcada capacidad de cambios dependientes de la actividad en la función sináptica, tal como la potenciación a largo plazo (Hawkins RD, Kandel ER, Siegelbaum SA (1993). Learning to modulate transmitter release: themes and variations in synaptic plasticicity [revisión], Ann. Rev Neurosci 16:625-665).
En experimentos llevados a cabo en apoyo de la presente invención de acuerdo con los procedimientos detallados en los Ejemplos, se indujo la anoxia/isquemia en cultivos primarios de células neuronales hipocámpicas, y se ensayaron los compuestos respecto de su capacidad para evitar la muerte celular. Adicionalmente se ensayaron a los compuestos que presentaban actividad en dichos ensayos in vitro en uno o más modelos animales de isquemia cerebral ("apoplejía"), tal como el modelo de oclusión de la arteria cerebral media (MCAO) en ratas.
De manera breve, se usaron los cultivos primarios de células hipocámpicas en los compuestos de ensayo para la actividad en la protección neuronal. Los cultivos hipocámpicos se prepararon normalmente a partir de fetos de ratas de 18 a 19 días. En ese momento, la generación de neuronas piramidales, que comienza en la rata a aproximadamente a E15, está esencialmente completa. El tejido cerebral en esta etapa es relativamente fácil de disociar, las meninges se retiran fácilmente, y el número de células gliales todavía es relativamente pequeño (Park LC, Calingasan NY, Uchida K, Zhang H, Gibson GE. (2000) Metabolic impairment elicits brain cell type-selective changes in oxidative stress and cell death in culture. J Neurochem 74(1):114-124).
Con el fin de evaluar la actividad de los compuestos de la presente invención, se evaluó un compuesto de ensayo para su capacidad de proteger células frente a uno o más estresantes estándar, incluyendo hipoxia, tal como se detalla en los Ejemplos. En general, los compuestos terapéuticos deseables candidatos son efectivos en este modelo a concentraciones inferiores a aproximadamente 10 mM, más preferiblemente a concentraciones inferiores a aproximadamente 1 mM e incluso más preferiblemente, inferiores a aproximadamente 100 \muM. Por eficaz, se entiende que dichos compuestos protegen al menos un 20%, preferiblemente un 30%, más preferiblemente un 40% e incluso más preferiblemente un 50% o más de las células de la muerte inducida por el estresante. A modo de ejemplo, los compuestos que son efectivos para proporcionar protección sobre un intervalo de concentración de aproximadamente 1 a 1000 \muM podría esperarse que proporcionen neuroprotección in vivo. Debido a que los valores precisos pueden variar dependiendo de las condiciones específicas bajo las que se lleva a cabo el ensayo de célula neuroprotectora, es la intención de la presente descripción proporcionar los criterios anteriores como directriz en forma de referencia frente a la que comparar posteriormente los compuestos ensayados, más bien que proporcionar concentraciones absolutas a las cuales los compuestos de la presente invención se consideran por ser efectivos. Normalmente, los compuestos que son efectivos en dicho sistema celular in vitro se ensayaron a continuación además en un modelo animal in vivo de neuroprotección, tal como el modelo de oclusión de la arteria cerebral media de la rata, u otros modelos apropiados según se conocen bien en la técnica.
Las lesiones isquémicas cerebrales se modelan en animales ocluyendo vasos en, o dentro, del cráneo (Molinari, G. F., 1986, en H. J. M. Barnett, y col., (Eds) Stroke: Pathophysiology, Diagnosis and Management, Vol 1, Churchill Livingstone, NY). El modelo de oclusión de la arteria cerebral media de la rata (MCAO) es una de las técnicas más ampliamente usadas para inducir la isquemia cerebral focal transitoria, que se aproxima al daño isquémico cerebral en seres humanos, por ejemplo, aquellos que padecen de apoplejía. La arteria cerebral media usada como estimulador isquémico en este modelo es el vaso más afectado en la apoplejía humana. El modelo supone también un período de reperfusión, que se produce normalmente en las víctimas humanas de apoplejía. MCAO, que implica una oclusión de dos horas, se ha encontrado que produce el tamaño máximo de infarto cortical obtenible sin aumento de la mortalidad a las veinticuatro horas.
De manera breve, se implantó un filamento de nylon en la arteria carótida derecha de la rata. Para efectuar la oclusión, se anestesió la rata, y se adelantó el filamento en la arteria carótida interna 18-20 mm desde el punto de bifurcación de las arterias interna y externa y la sutura se ligó firmemente alrededor del filamento durante un período de dos horas. Dos horas después de la oclusión, se volvieron a anestesiar los animales, y se retiró el filamento, para permitir la perfusión durante el resto del experimento. Se pueden administrar los fármacos de ensayo en cualquier momento durante este procedimiento - antes, durante o después de la oclusión, y se pueden administrar por una o más de una variedad de medios, que incluyen pero no se limitan a infusión intracerebroventricular (ICV), infusión intravenosa (IV), administración intraperitoneal (IP), así como administración entérica (por ejemplo, alimentación por sonda). Los animales se mantuvieron normotérmicos durante el experimento, tal como se describe en los Ejemplos. En un momento predeterminado tras la oclusión y la reperfusión, los animales se sacrificaron y sus cerebros se extirparon y se procesaron para evaluar el daño en forma de medida del volumen del infarto. En general, se considera que los compuestos tienen actividad en este modelo si proporcionan una reducción significativa en el volumen de infarto total en una dosis que es inferior a aproximadamente 10 mg/kg, preferiblemente inferior a 1 mg/kg, más preferiblemente inferior a 100 \mug/kg e incluso más preferiblemente, inferior a aproximadamente 1 \mug/kg, cuando se administran ICV o IV. Por reducción significativa del volumen de infarto total se entiende una reducción de al menos un 20%, preferiblemente al menos un 30%, más preferiblemente al menos un 40%, e incluso más preferiblemente aproximadamente un 50%, en comparación con los valores control.
Se puede evaluar la validación adicional de la eficacia en la neuroprotección en ensayos funcionales, tal como el ensayo de fuerza de prensión o el ensayo rotorod. Los animales tratados con compuestos que muestran neuroprotección mantienen sus valores de fuerza de prensión pre-MCAO después de MCAO, en comparación con los animales no tratados, que mostraron una reducción significativa en la fuerza de prensión, indicando pérdida de función sensorimotora. Asimismo, los animales tratados con compuestos que muestran neuroprotección mantuvieron también sus resultados de actividad rotorod pre-MCAO después de MCAO, en comparación con los animales no tratados, que mostraron una reducción significativa en los resultados rotorod, indicando una pérdida de función sensorimotora en niveles del cerebro superior.
Similarmente, se pueden usar cultivos primarios de micocitos para ensayar los compuestos respecto de su capacidad para proporcionar protección contra el daño cardíaco, resultante por ejemplo de isquemia miocardial o insuficiencia cardiaca congestiva. Se describe en los Ejemplos la preparación de miocardiocitos a partir de ratas neonatas. Dichas células se usan normalmente para estudiar modelos moleculares de isquemia miocardial (Webster, KA, Discher, DJ y Bishopric, NH 1995. J. Mol. Cell Cardiol. 27: 453-458; Camilleri, L, Moins, N, Papon, J, Maublant, J. Nailly, P, de Riberolles, C y Veyre A. 1997. Cell Biol & Toxicol. 13: 435-444; Bielawska, AE, Shapiro, JP, Jiang, L, Melkonyan, HS, Piot, C, Wolfe, CL, Tomei, LD, Hannun, YA y Umansky, SR, 1997. Am. J. Pathol. 151: 1257-1263) y se aceptan por tanto como indicativos de actividad mioprotectora. En los Ejemplos se proporcionan los ensayos de estresantes a modo de ejemplo para este objetivo. Por ejemplo, los cardiomiocitos en cultivo presentan actividad contráctil ("latido"); cada contracción de cardiomiocito está asociada con un aumento en el calcio intracelular denominado "calcio transitorio". Se puede medir este calcio transitorio usando Fluo-4, un tinte fluorescente que presenta un gran aumento en la intensidad de la fluorescencia tras la unión del calcio. Este ensayo está basado en célula y ensaya la capacidad de guarda de las moléculas citopenetrantes potenciales frente al daño isquémico y permite a las células mantener su función contráctil.
Se puede llevar a cabo la validación adicional de los compuestos en un ensayo de órgano completo, tal como el modelo de función cardiaca en corazón aislado. Similarmente, se pueden validar adicionalmente los compuestos en modelos animales adicionales de la enfermedad (por ejemplo, diabetes, insuficiencia renal, asma, fatiga muscular, inflamación), tal como se conoce bien en la técnica.
Administración
Las reivindicaciones se dirigen a los usos médicos secundarios de los compuestos.
Los compuestos de Fórmula I se administran en una dosificación terapéuticamente eficaz, por ejemplo, una dosificación suficiente para proporcionar tratamiento para los estados de enfermedad anteriormente descritos. La administración de los compuestos de la invención o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos puede ser mediante cualquiera de los modos aceptados de administración de los agentes que prestan utilidades similares.
Aunque tienen que optimizarse todavía los niveles de dosificación humana de los compuestos de la invención, generalmente, una dosis diaria está entre aproximadamente 0,01 a 2,0 mg/kg de peso corporal, preferiblemente aproximadamente 0,1 a 1,5 mg/kg de peso corporal, y más preferiblemente aproximadamente 0,3 a 1,0 mg/kg de peso corporal. De esta manera, para la administración a una persona de 70 kg, el intervalo de dosificación sería de aproximadamente 0,7 a 140 mg por día, preferiblemente aproximadamente 7,0 a 105 mg por día, y lo más preferible aproximadamente 21 a 70 mg por día. La administración puede ser como una dosis única (por ejemplo, como un bolo) o como un bolo inicial seguido por infusión continua de la porción restante de una dosis completa durante el tiempo, por ejemplo, 1 a 7 días. La cantidad de compuesto activo administrado será, por supuesto, dependiente del sujeto y estado de enfermedad que se está tratando, la gravedad de la dolencia, la manera y el calendario de administración y el juicio del médico prescriptor.
En el uso de los compuestos de esta invención para el tratamiento de las dolencias anteriores, se puede usar cualquier modo de administración farmacéuticamente aceptable, que incluye formas de dosificación sólidas, semisólidas, líquidas o en aerosol, tales como, por ejemplo, comprimidos, cápsulas, polvos, líquidos, suspensiones, supositorios, aerosoles o similares. Se pueden administrar también los compuestos de Fórmula I en formas de dosificación mantenidas o controladas, que incluyen inyecciones de depósito, bombas osmóticas, píldoras, parches transdérmicos (que incluyen electrotransporte), y similares, para la administración prolongada del compuesto a una velocidad predeterminada, preferiblemente en formas de dosificación unitarias adecuadas para la administración única de dosificaciones precisas. Las composiciones incluirán normalmente un vehículo o excipiente farmacéutico convencional y un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Adicionalmente, estas composiciones pueden incluir otros agentes medicinales, agentes farmacéuticos, vehículos adyuvantes, y similares, que incluyen, pero no se limitan a anticoagulantes, disolventes de coágulos sanguíneos, potenciadores de la permeabilidad y formulaciones de liberación lenta.
Generalmente, dependiendo del modo pretendido de administración, la composición farmacéuticamente aceptable contendrá aproximadamente un 0,1 a un 90%, preferiblemente aproximadamente un 0,5% a un 50%, en peso de un compuesto o sal de Fórmula 1, siendo el resto excipientes, vehículos, etc, farmacéuticamente adecuados.
Una manera preferida de administración para las dolencias detalladas anteriormente es la oral, usando un régimen de dosificación diaria conveniente, que se puede ajustar de acuerdo con el grado de dolencia. Para dicha administración oral se forma una composición no tóxica farmacéuticamente aceptable mediante la incorporación de cualquiera de los excipientes normalmente empleados, tales como, por ejemplo, manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, talco, celulosa, croscarmelosa de sodio, glucosa, gelatina, sacarosa, carbonato de magnesio, y similares. Dichas composiciones toman la forma de soluciones, suspensiones, comprimidos, comprimidos dispersables, píldoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación mantenida y similares.
Preferiblemente, las composiciones tomarán la forma de una píldora o comprimido y de esta manera la composición contendrá, junto con el ingrediente activo, un diluyente tal como lactosa, sacarosa, fosfato dicálcico, o similar; un lubricante tal como estearato de magnesio o similar; y un ligante tal como almidón, goma acacia, polivinilpirrolidina, gelatina, celulosa y sus derivados, y similares.
Las composiciones líquidas farmacéuticamente administrables pueden, por ejemplo, prepararse disolviendo, dispersando, etc, un compuesto activo tal como se define anteriormente y adyuvantes farmacéuticos opcionales en un vehículo, tal como por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa acuosa, glicerol, glicoles, etanol, y similares, para formar por tanto una solución o suspensión. Si se desea, la composición farmacéutica que se va a administrar puede contener también cantidades pequeñas de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes, agentes emulsificantes, o agentes solubilizantes, agentes tamponantes del pH y similares, por ejemplo, acetato de sodio, citrato de sodio, derivados de ciclodextrina, monolaurato de sorbitán, acetato de trietanolamina, oleato de trietanolamina, etc. Los procedimientos actuales de preparación de dichas formas de dosificación se conocen, o serán aparentes, para aquellas personas expertas en esta técnica; por ejemplo, véase Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 15ª Edición, 1975. La composición o formulación que se va a administrar contendrá, en cualquier caso, una cantidad del compuesto activo en una cantidad efectiva para aliviar los síntomas del sujeto que se está tratando.
Se pueden preparar formas de dosificación o composiciones que contengan ingrediente activo en el intervalo de 0,005% a 95% siendo el resto un vehículo no tóxico.
Para la administración oral, se forma una composición no tóxica farmacéuticamente aceptable mediante la incorporación de cualquiera de los excipientes normalmente empleados, tales como, por ejemplo, calidades farmacéuticas de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, talco, derivados de celulosa, croscarmelosa de sodio, glucosa, sacarosa, carbonato de magnesio, sacarina sódica, talco y similares. Dichas composiciones toman la forma de soluciones, suspensiones, comprimidos, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación mantenida y similares. Dichas composiciones pueden contener 0,01%-95% de ingrediente activo, preferiblemente 0,1-50%.
Para una forma de dosificación sólida, la solución o suspensión, en por ejemplo carbonato de propileno, aceites vegetales o triglicéridos, se encapsula preferiblemente en una cápsula de gelatina. Dichas soluciones de diéster, y la preparación y encapsulación de las mismas, se describen en las Patentes de los Estados Unidos N^{os} 4.328.245; 4.409.239; y 4.410.545. Para una forma de dosificación líquida, se puede diluir la solución, por ejemplo, en un Polietilén glicol, con una cantidad suficiente de un vehículo líquido farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, agua, para medirse fácilmente para la administración.
Alternativamente, se pueden preparar formulaciones orales líquidas o semisólidas disolviendo o dispersando el compuesto activo o la sal en aceites vegetales, glicoles, triglicéridos, ésteres de propilenglicol (por ejemplo, carbonato de propileno) y similares, y encapsular estas soluciones o suspensiones en láminas de cápsula de gelatina dura o blanda.
Otras formulaciones útiles incluyen aquellas que se muestran en las Patentes de los Estados Unidos N^{os} Re. 28.819 y 4.358.603.
Se puede administrar la formulación en una forma de dosificación unitaria para tratamiento continuo o en una forma de dosificación unitaria única a voluntad cuando se requiere específicamente el alivio de los síntomas. Por ejemplo, se puede administrar la formulación como un bolo o como una infusión intravenosa continua tras el inicio de los síntomas de apoplejía, infarto de miocardio o insuficiencia cardiaca crónica.
La administración parenteral se caracteriza generalmente por inyección, cualquiera de subcutánea, intramuscular o intravenosa. Se pueden preparar inyectables en formas convencionales, tanto en soluciones líquidas como en suspensiones, formas sólidas adecuadas para solución o suspensión en líquido antes de la inyección, o como emulsiones. Los excipientes adecuados son, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa, glicerol, etanol o similares. Adicionalmente, si se desea, las composiciones farmacéuticas que se van a administrar pueden contener también cantidades pequeñas de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes o emulsificantes, agentes tamponantes del pH, potenciadores de la solubilidad, y similares, tales como por ejemplo, acetato de sodio, monolaurato de sorbitán, oleato de trietanolamina, ciclodextrinas, etc.
Una solución concebida más recientemente para la administración parenteral emplea el implante de un sistema de liberación lenta o liberación mantenida, de manera que se mantiene un nivel constante de dosificación. Véase, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos Nº 3.710.795. El porcentaje de compuesto activo contenido en dichas composiciones parenterales es muy dependiente de la naturaleza específica del mismo, así como de la actividad del compuesto y las necesidades del sujeto. Sin embargo, son empleables porcentajes del ingrediente activo de 0,01% a 10% en solución, y serán mayores si la composición es un sólido, que se diluirá posteriormente en los porcentajes anteriores. Preferiblemente la composición comprenderá 0,2-2% del agente activo en solución.
Se pueden administrar también soluciones nasales del compuesto activo solas o en combinación con otros excipientes farmacéuticamente aceptables.
Se pueden administrar también formulaciones del compuesto activo o una sal en el tracto respiratorio como un aerosol o solución para un nebulizador, o como un polvo microfino para insuflar, solo o en combinación con un vehículo inerte tal como lactosa. En dicho caso, las partículas de la formulación tienen diámetros de menos de 50 micrómetros, preferiblemente menos de 10 micrómetros.
Ejemplos
Las siguientes preparaciones y ejemplos se proporcionan para permitir a los expertos en la técnica comprender más claramente y llevar a la práctica la presente invención. No deberían considerase como limitantes del alcance de la invención, sino meramente como ilustrativos y representativos de la misma.
Procedimientos de caracterización general
Como se informa en la mayor parte de los siguientes ejemplos, los espectros de resonancia magnética nuclear (RMN) se realizaron con un espectrómetro Bruker Avance 300 usando tetrametil silano (TMS) como referencia interna; los espectros de mases se obtuvieron en un instrumento Agilent 110 LC/MSD usando tanto ionización por electropulverización (modo positivo o negativo) (ESI) o ionización química a presión atmosférica (modo positivo o negativo) (APCI).
Ejemplo 1 Fórmula Ia en la que A es 1H-Bencimidazol-2-ilo, R es Etilo, y X es S
Una solución de 2-mercaptobencimidazol (200 mg, 1.33 mmol) y 3-bromopiruvato de etilo (0,20 ml, 1,43 mmol) en metanol (2,5 ml) y acetona (2 ml) se agitó a 20ºC durante 4 horas. Los solventes se eliminaron bajo presión reducida en un evaporador rotatorio. El residuo se trituró con acetato de etilo. El solvente se decantó y el residuo se disolvió en cloruro de metileno. La solución se lavó con solución acuosa diluida de bicarbonato de sodio y agua, y a continuación se secó con sulfato de sodio. La eliminación del solvente proporcionó el producto esperado, 3-(1H-Benzoimidazol2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico éster etílico del ácido (326 mg, 93%). ^{1}H-RMN (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta (ppm): 7,31 (br.s, 1H), 7,24 (br.s, 1H), 7,15-7,05 (m, 2H), 4,32 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,29 (br.s, 1H), 3,90 (br. s. 1H), 1,24 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
MS (ESI): m/z 265 (M+1, 100).
Ejemplo 2 Fórmula Ia en la que A es 5-Metoxi-1H-bencimidazol-2-il; R es Etilo, y X es S
Una solución de 2-mercapto-5-metilbencimidazol (200 mg, 1,22 mmol) y 3-bromopiruvato de etilo (0,20 ml, 1,43 mmol) en metanol (2 ml) y acetona (3 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Los solventes se eliminaron bajo presión reducida en un evaporador rotatorio. El residuo se trituró con acetato de etilo. El solvente se decantó y el residuo se disolvió en cloruro de metileno. La solución se lavó con solución acuosa diluida de bicarbonato de sodio y agua, y a continuación se secó con sulfato de sodio. La eliminación del solvente proporcionó el producto esperado, 3-(5-metoxi-1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico éster etílico del ácido (300 mg, 88%). ^{1}H-RMN (D_{3}COD, 300 MHz) \delta (ppm): 7,19 (br.s, 1H), 7,10 y 7,04 (br. 2 s, 1H), 6,94 (\delta, J = 8,2 Hz, 1H), 4,34 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,31 (br.s, 1H), 3,91 (br.s, 1H), 2,37 (br.s, 3H), 1,26 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
MS (ESI): m/z 279 (M+1, 100).
Ejemplo 3 Fórmula Ia en la que A es 5-Metil-1H-bencimidazol-2-ilo, R es Etilo, y X es S
Una solución de 5-metoxi-2-bencimidazoltiol (200 mg, 1,11 mmol) y 3-bromopiruvato de etilo (0,20 ml, 1,43 mmol) en metanol (5 ml) y acetona (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Los solventes se eliminaron bajo presión reducida en un evaporador rotatorio. El residuo se trituró con acetato de etilo. El solvente se decantó y el residuo se disolvió en cloruro de metileno. La solución se lavó con solución acuosa diluida de bicarbonato de sodio y agua, y a continuación se secó con sulfato de sodio. La eliminación del solvente proporcionó el producto esperado, éster etílico del ácido 3-(5-Metil-1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico (300 mg, 92%). ^{1}H-RMN (D_{3}COD, 300 MHz) \delta (ppm): 7,19 (br.s, 1H), 6,75 (br.s, 1H), 6,69 (dd, J = 2,3 Hz, J = 8,8 Hz, 1H), 4,30 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 4,29 (br.s, 1 H), 3,93 (br.s, 1 H), 3,69 (s, 3H), 1,24 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
MS (ESI): m/z 295 (M+1 100) =
Ejemplo 4 Preparación de 3,4-dihidro-2H-[1,4]tiazina-3,5-dicarboxílico ácido
A una solución de I-cisteína (1,00 g, 8,25 mmol) en agua (20 ml) se añadió 3-bromopiruvato de etilo (1,61 g, 8,25 mmol). El pH de la solución se ajustó a aproximadamente 4 con solución acuosa de bicarbonato de sodio. Tras agitación a temperatura ambiente durante 30 minutos, la mezcla se lavó con cloruro de metileno. Se separó la fase acuosa y a continuación se evaporó a sequedad en condiciones de liofilización. La solución metanólica del residuo obtenido se hizo pasar a través de un tapón de gel de sílice, dando como resultado 470 mg de producto puro (32%). ^{1}H-RMN (D_{3}COD, 300 MHz) \delta (ppm): 6,16 (\delta, J = 1,2 Hz, 1H), 4,23 (\delta, J = 7,1 Hz, 2H), 3,86 (dd, J = 2,7 Hz, J = 8,2 Hz, 2H), 3,25-3,15 (m, 1H), 2,78 (dd, J = 8,2 Hz, J = 12,2 Hz, 1H), 1,30 (t, J = 7,1 Hz, 3H). 13CNMR (75 Hz, D_{3}COD): \delta (ppm): 177,4, 164,6, 129,9, 103,0, 62,3, 56,7, 28,8, 14,7.
Ejemplo 5 Fórmula Ia en la que A es bromuro de 4-[2-(3,4-Dihidroxi-fenil)-vinil]-piridinio, R es H, y X es un enlace covalente
4-Bromometil-1,2-bis-metoximetoxi-benceno. Una suspensión de trifenil fosfina (262 mg) en acetonitrilo (20 ml) se enfrió en un baño de agua-hielo. Se añadió bromo (160 mg) a esta suspensión mediante jeringuilla con agitación. El color del bromo desapareció pronto. La solución se agitó a 0ºC durante 10 minutos más y a continuación N, N-diisopropil etilamina (2,2 eq. ca 360 \mul) y (3,4-bis-metoximetoxi-fenil)-metanol (228 mg, 1 eq. casi puro o en solución de CH_{3}CN) se introdujeron a 0ºC. La solución resultante fue ligeramente básica. Se agitó a 0ºC durante 30 min antes de diluirse con etil éter. Tras lavado con solución saturada de NaH_{2}PO_{4}, se secó con MgSO_{4}, y se evaporó a sequedad, dio lugar a un residuo sólido. La purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con acetato de etilo:hexano 3:7) produjo 180 mg de un aceite espeso (rendimiento 62%).
Bromuro de (3,4-Bis-metoximetoxi-bencil)-trifenil-fosfonio. Una solución de 4-bromometil-1, 2-bis-metoximetoxi-benceno (1eq) y PP_{3} (1,02 eq) en tolueno se mantuvo a reflujo (baño de aceite 100-130ºC) durante toda la noche. El precipitado blanco se recogió y se lavó con tolueno frío. El sólido se secó a vacío y el rendimiento fue aproximadamente del 90%.
4-[2-(3,4-Bis-metoximetoxi-fenil)-vinil]piridina. A una mezcla de bromuro de (3,4-Bis-metoximetoxi-bencil)-trifenil-fosfonio (800 mg) y 4-formilpiridina (130 mg) en etanol se añadió solución de etóxido de litio (1,5 ml, 1,0 M en etanol) durante un periodo de 130 minutos. Tras 30 minutos más de agitación, el solvente se eliminó por arrastre en un evaporador rotatorio bajo presión reducida. El residuo se disolvió en agua y se extrajo con acetato de etilo. Tras lavado con agua, la solución orgánica se secó con sulfato de sodio y se concentró en un evaporador rotatorio. La purificación se llevó a cabo en una columna de gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo en diclorometano (5-20%). Esto llevó a una mezcla semisólida de los isómeros E- y Z con un rendimiento ca 80% rendimiento.
4[2-(3,4-Dihidroxi-fenil)-vinil]-1-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etil)-piridinio; bromuro. Una solución de 4-[2-(3,4-bis-metoximetoxi-fenil)-vinil]-piridina (70 mg) y 3-bromopiruvato de etilo (200 \mul) en 1, 4-dioxano (10 ml) se agitó a 90-110ºC durante toda la noche. La solución incolora inicial se volvió marrón y apareció algo de precipitado color naranja. El solvente dioxano se eliminó por arrastre en un evaporador rotatorio y el sólido resultante se lavó extensamente con etil éter. Sin más purificación, se disolvió en metanol (20 ml) y se introdujo HBr concentrado (solución acuosa al 48%, 10 gotas). Tras agitación a temperatura ambiente durante toda la noche, seguido por la eliminación del solvente en un evaporador rotatorio, el residuo se lavó con éxito con etil éter, acetato de etilo, diclorometano, y a continuación se secó a vacío. Esto proporcionó el producto esperado, 4-[2-(3,4-dihidroxi-fenil)-vinil]-1-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etil)-piridinio; bromuro, como un sólido color naranja (83 mg, 87%). ^{1}H-RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta (ppm): 8,83 (dd, J = 1,8, 7,1 Hz), 8,76 -8,55 (m), 8,22 (dd, J = 1,5, 7,0 Hz), 8,10 -8,00 (m), 7,80 (dd, J = 6,2, 16,1 Hz), 7,75 -7,5 (m), 7,31 -7,10 (m), 6,87 (\delta, J = 8,2 Hz), 4,72 (q, J = 13,5 Hz), 4,34 -4,26 (m), 3,86-3,53 (m), 1,52 -1,15 (m). 13C-NMR (75 MHz, DMSO-d_{6}) \delta (ppm): 167,3, 155,7, 154,8, 148,4, 148,2, 145,3, 145,2, 144,9, 142,5, 141,8, 139,9, 131,3. 131,2, 128,3, 128,1, 126,8, 126,7, 122,1, 122,0, 121,7, 121,6, 119,0, 118,6, 115,0, 114,9, 114,0, 113,7, 113,6, 94,4, 63,5, 62,0, 61,7, 12,6, y 12,4.
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Ejemplo 6 Éster etílico del ácido 3-(4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico 6A. Fórmula Ia en la que A es 4,5-Dihidro-1H-imidazol-2-ilo, R es Etilo, y X es S
Una mezcla de 2-imidazolidinetiona (1,02 g, 10 mmol), 3-bromopiruvato de etilo (1,95 g, 10 mmol), carbonato de potasio (1,38 g, 10 mmol), yoduro de sodio (10 mg), Adogen (200 mg) en N,N-dimetil formamida (15 ml) se agitó a 20ºC durante 15 horas bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se diluyó con agua y a continuación se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó con sulfato de sodio, se evaporó, y se sometió a cromatografía (gel de sílice, diclorometano-metanol 9:1), dando el producto esperado, éster etílico del ácido 3-(4,5-dihidro-1H-imidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico, como un sólido marrón (1,8 g, 83%). ^{1}H-RMN (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta (ppm): 4,36 (\delta, J = 7,1 Hz, 2H), 4,25-4,00 (m, 3H), 3,57 (\delta, J = 11,2 Hz, 1H), 3,50-3,35 (m, 1H), 3,25-3,10 (m, 1H), 1,37 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
6B. Otros compuestos de Fórmula Ia
Similarmente, siguiendo los procedimientos del Ejemplo 6A y sustituyendo 2-imidazolidinetiona con ácido 2-amino3-(1H-imidazol-4-il)propiónico, se obtiene ácido 2-amino-3-[1-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etil)-1H-imidazol-4-il]-propiónico.
Ejemplo 7 Dietil éster del ácido 2-hidroxi-3-(1H-imidazol-2-ilsulfanil)-5-oxo-hex-2-enedioico
Una solución de 3H-Imidazol-4-tiol (0,1 g, 1,0 mmol), 3-bromopiruvato de etilo (0,31 g, 1,6 mmol), y trietilamina (0,2 ml) en MeOH/CH_{2}Cl2 (1,5 ml/1,5 ml) en un vial tapado se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. Tras la eliminación de volátiles, los residuos se disolvieron en cloruro de metileno y se cargaron en la parte superior de una columna de gel de sílice. La elución con acetato de etilo en cloruro de metileno (10%) dio el producto (un di-piruvato conjugado) como un semisólido (87 mg, 35%). ^{1}H-RMN (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta (ppm): 1,19 (t, 3H), 1,37 (t, 3H), 4,12 (q, 2H), 4,37 (q, 2H), 4,59 (\delta, 1H), 4,68 (\delta, 1 H), 7,06 (ss, 2H).
Ejemplo 8 Éster etílico del ácido 3-[2-Amino-9-(3,4-dihidroxi-5-hidroximetil-tetrahidro-furan-2-il)-9H-purin-6-ilsulfanil]-2-oxo-propiónico 8A. Fórmula la en la que A es 3-12-Amino-9-(3,4-dihidroxi-5-hidroximetil-tetrahidrofuran-2-il)-9H-purin-6-ilo, R es Etilo, y X es S
A una solución de (-)-2-amino-6-mercaptopurina ribósido (100 mg, 0,33 mmol) en N,N-dimetil formamida (2 ml) se añadió 3-bromopiruvato de etilo (0,050 ml, 0,37 mmol) bajo nitrógeno. Tras agitación a 20ºC durante 1 hora, la mezcla de reacción se diluyó con agua y a continuación se concentró en un evaporador rotatorio bajo vacío. El residuo se trituró con acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se concentró y se sometió a cromatografía (gel de sílice, cloruro de metilenometanol 100:5 a 100:10), dando 21 mg del producto esperado. éster etílico del ácido 3-[2-amino-9-(3,4-dihidroxi-5-hidroximetiltetrahidro-furan-2il)-9H-piridin-6-ilsulfanil]-2-oxo-propiónico. ^{1}H-RMN (D_{3}COD, 300 MHz) \delta (ppm): 8,13 (s, 1H), 5,87 (\delta, J = 6,1 Hz, 1 H), 4,70-4,60 (m, 1H), 4,35-4,30 (m, 2H), 4,20-4,05 (m, 4H), 3,90-3,70 (m, 2H), 1,20 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
MS (ESI) m/z: 414 (M+1, 100), 432 (M + H_{2}O + 1,84), 446 (M + Na, 45).
8B. Otros compuestos de Fórmula Ia
Similarmente, siguiendo los procedimientos del Ejemplo 8A y sustituyendo ribósido de (-)-2-amino-6-mercaptopurina con lo siguiente:
\bullet (-)-6-mercaptopurina, y
\bullet (-)-6-mercaptopurina ribósido
\vskip1.000000\baselineskip
se obtuvieron los siguientes:
\bullet éster etílico del ácido 2-oxo-3-(9H-purin-6-ilsulfanil)-propiónico, y
\bullet éster etílico del ácido 3-[9-(3,4-Dihidroxi-5-hidroximetil-tetrahidro-furan-2-il)-9H-purin-6-ilsulfanil]-2-oxo-propiónico.
Ejemplo 9 Éster etílico del ácido 2-Oxo-3-(5-sulfo-1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-propiónico, sal sódica 9A. Fórmula Ia en la que A es 5-sulfo-1H-benzoimidazol-2-il sal sódica, R es Etilo, y X es S
A una solución de ácido 2-mercapto-5-bencimidazol-sulfónico, sal sódica, (252 mg, 1,0 mmol) en agua (3 ml) se añadió 3-bromopiruvato de etilo (0,150 ml, 1,19 mmol) bajo nitrógeno. La solución resultante se agitó a 20ºC durante 1 hora. El agua se eliminó bajo vacío y el residuo se lavó con acetato de etilo. Seca con sulfato de sodio, la solución orgánica se evaporó a sequedad bajo vacío. Esto proporcionó 300 mg (82%) de producto, éster etílico del ácido 2-oxo-3-(5-sulfo-1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-propiónico, sal sódica, que fue lo suficientemente pura para usarse sin más purificación. ^{1}H-RMN (D_{3}COD, 300 MHz) \delta (ppm): 8,70 (dd, J = 0,6 Hz, J = 1,5 Hz, 1H), 7,95 (dd, J = 1,5 Hz, J = 8,6 Hz, 1H), 7,74 (dd, J = 0,6 Hz, J = 1,5 Hz, 1H), 4,27 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 3,93 (\delta, J = 14,2 Hz, 1 H), 3,81 (\delta, J = 14,2 Hz, 1 H), 1,30 (t, J = 7,1 Hz, 3H). MS (ESI), 367 (M+1, 28), 345 (M-Na+1, 100).
9B. Otros compuestos de Fórmula Ia
Similarmente, siguiendo los procedimientos del Ejemplo 9A y sustituyendo el ácido 2-mercapto-5-bencimidazol-sulfónico, sal sódica, con 6-etoxi-2-mercaptobencimidazol, se obtiene éster etílico del ácido 3-(6-etoxi-benzotiazol-2-ilsulfanil]-2oxo-propiónico.
Ejemplo 10 Fórmula la en la que A es 5-Amino-2H-[1,2,4] triazol-3-ilo, R es Etilo, y X es S
A una suspensión de 3-amino-5-mercapto-1,2,4-triazol (116 mg, 1,0 mmol) en metanol (3 ml) se añadió 3-bromopiruvato de etilo (0,150 ml, 1,19 mmol) bajo nitrógeno. La solución resultante se agitó a 20ºC durante 1 hora. Se formó una solución transparente tras aproximadamente 30 min. El metanol se eliminó bajo vacío, llevando a 227 mg de sólido (99% de rendimiento).
La RMN de protón indicó que el éster etílico del ácido 3-(5-amino-2H-[1,2,4] triazol-3-ilsulfanil)-2-oxo-propioico era uno de los productos principales. ^{1}H-RMN (D_{3}COD, 300 MHz) \delta (ppm): 4,30-4,20 (m, 2 H), 3,51 (br.s, 2H), 1,30 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
Ejemplo 11 11A. Fórmula Ia en la que A es 5-Amino-[1,3,4] tiadiazol-2-ilo, R es Etilo, y X es S
A una suspensión de 5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-tiol (133 mg, 1,0 mmol) en metanol (3 ml) se añadió 3-bromopiruvato de etilo (0,150 ml, 1,19 mmol) bajo nitrógeno. La solución resultante se agitó a 20ºC durante 1 hora. Se formó una solución transparente tras aproximadamente 45 min. El metanol se eliminó bajo vacío, dando 200 mg de sólido (rendimiento del 81% ).
La RMN de protón indicó que el éster etílico del ácido 3-(5-amino-[1,3,4] tiadiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico fue uno de los productos principales. ^{1}H-RMN (D_{3}COD, 300 MHz) \delta (ppm): 4,35-4,20 (m, 2 H), 3,58 (dd, sistema AB, 2H), 1,31 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
11B. Otros compuestos de Fórmula Ia
Similarmente, siguiendo los procedimientos del Ejemplo 11A y sustituyendo 5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-tiol con 5-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-[1,3,4] tiadiazol-2-tiol, se obtiene éster etílico del ácido 3-[5-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-[1,3,4]tiadiazol-2-ilsulfanil]-2-oxo-propiónico.
Ejemplo 12 12A. Fórmula la en la que A es 5-Nitro-1H-benzoimidazol-2-ilo, R es Etilo, y X es S
A una solución de 2-mercapto-5-nitrobenzimidazol (195 mg, 1,0 mmol) y 3-bromopiruvato de etilo (0,150 ml, 1,19 mmol) en metanol (2,5 ml) y acetona (2 ml) se añadió imidazol (68 mg, 1,0 mmol). La solución resultante se agitó a 20ºC durante 4 horas. Tras el imidazol (68 mg, 1,0 mmol). La solución resultante se agitó a 20ºC durante 4 horas. Tras la eliminación de los solventes bajo vacío, el residuo se trituró con etil éter. Se descartó la fase éter. El residuo se trató con solución acuosa de bicarbonato de sodio y etil éter. La fase éter se lavó sucesivamente con solución acuosa de bicarbonato de sodio, agua, y se secó con sulfato de sodio. La evaporación hasta sequedad bajo vacío proporcionó 200 mg (65% de rendimiento) del producto esperado, éster etílico del ácido 3-(5-nitro-1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)_{2}-oxo-propiónico. La RMN de protón mostró que el producto era suficientemente puro para usarse sin más purificación. ^{1}H-RMN (D_{3}COD, 300 MHz) \delta (ppm): 8,35 y 8,08 (2 br.s, 1H), 8,12 (\delta. J = 8,7 Hz, 1H), 7,50 y 7,28 (2 br.s, 1H), 4,42 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 4,41 (br.s, 1H), 4,06 (br.s, 1H), 1,30 (t, J = 7,1 Hz, 3H). MS (ESI) m/z: 310 (M +1, 100).
12B. Otros compuestos de Fórmula Ia
Similarmente, siguiendo los procedimientos del Ejemplo 12A y sustituyendo 2-mercapto-5-nitrobenzimidazol con lo siguiente:
\bullet ácido 2-amino-3-mercapto propiónico
\bullet ácido 2-amino-3-sulfinil propiónico,
\bullet ácido 2-amino-3-sulfonil propiónico, y
\bullet ácido 2-acetilamino-3-mercapto propiónico
\vskip1.000000\baselineskip
se obtuvieron los siguientes:
\bullet ácido 2-amino-3-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-propiónico y éster etílico del ácido 3-(2-amino-2-carboxi-etilsulfanil)-2-hidroxi-acrílico,
\bullet éster etílico del ácido carboxi-etilsulfanil)-2-hidroxi-acrílico,
\bullet ácido 2-amino-3-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etanesulfinil)-propiónico
\bullet ácido 2-amino-3-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etanesulfonil)-propiónico, y
\bullet ácido 2-acetilamino-3-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-propiónico.
Ejemplo 13 13A. Fórmula Ia en la que A es 5-Fenil-[1,3,4]oxadiazol-2-ilo, R es Etilo, y X es S
A una solución de 5-fenil-1,3,4-oxadiazol-2-tiol (178 mg, 1,0 mmol) y 3-bromopiruvato de etilo (0,150 ml, 1,19 mmol) en metanol (2 ml) y acetona (2 ml) se añadió imidazol (68 mg, 1,0 mmol). La solución resultante se agitó a 20ºC durante 4 horas. Tras la eliminación de solventes bajo vacío, el residuo se trituró con etil éter. Se descartó la fase éter. El residuo se trató con solución acuosa de bicarbonato de sodio y etil éter. La fase éter se lavó sucesivamente con solución acuosa de bicarbonato de sodio, agua, y se secó con sulfato de sodio. La evaporación hasta sequedad bajo vacío proporcionó 209 mg (72% de rendimiento) del producto esperado, éster etílico del ácido 2-oxo-3-(5-fenil-[1,3,4]oxadiazol-2-ilsulfanil)-propiónico. La RMN de protón mostró que el producto era suficientemente puro para usarse sin más purificación. ^{1}H-RMN (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta (ppm): 7,90-7,80 (m, 2H), 7,60-7,35 (m, 3H), 4,41 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 3,44 (br.s, 2H), 1,26 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
13B. Otros compuestos de Fórmula Ia
Similarmente, siguiendo los procedimientos del Ejemplo 13A y sustituyendo 5-fenil-1,3,4-oxadiazol-2-tiol con 3-fenil-1,2,4-oxadiazol-2-tiol, se obtiene éster etílico del ácido 2-oxo-3-(3-fenil-[1,2,4]oxadiazol-5-ilsulfanil)-propiónico.
Ejemplo 14 Fórmula III en la que R^{3.1} a R^{3.4} son H, y R^{3.5} es COOH
A una solución de L-cisteína (2,42 g, 20 mmol) en agua (70 ml) se añadió ácido 3-bromopirúvico (3,34 g, 20 mmol) a temperatura ambiente con agitación. La solución transparente se volvió gradualmente turbia. Tras agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, los precipitados de color blanco se filtraron, se lavaron con agua, y se secaron a vacío. Esto proporcionó un compuesto de Fórmula la en la que A es cisteína, que cicla con el enol del piruvato para dar como resultado el compuesto del título de Fórmula III, ácido 3,4-dihidro-2H-[1,4] tiazina-3, 5-dicarboxílico, como un producto en polvo de color gris (2,42 g, 58%). ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta (ppm): 6,00 (s, 1H), 5,17 (br., s, 1H), 4,25 (t, 1H), 2,94 -3,05 (m, 2H). 13C-NMR (DMSO-d_{6}. 75 MHz) \delta (ppm): 25,8, 52,3, 98,0, 128,8, 163,6, y 172,0, MS (ESI) m/z: 190 (M + H, 100).
Ejemplo 15 Fórmula Ia en la que A es.-Glu-Cys-Gly, R es H, y X es un enlace covalente y la Fórmula II en la que R^{1} es COOH, R^{2} es H, R^{3} es CH_{2}-S-Piruvato, R^{4} es H, R^{5} es H, k es 0, m es 2, y n es 1
15A. A una solución de glutationa (ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-mercapto-etilcarbamoil]-butírico) (3,0 g, 9,76 mmol) en agua (34 ml) y metanol (4 ml) (desgasificaado y purgado con nitrógeno) se añadió ácido 3-bromopirúvico (1,63 g, 9,76 mmol) a temperatura ambiente. Tras agitar durante 3 horas a temperatura ambiente, la mezcla se concentró en un evaporador rotatorio bajo presión reducida. La solución se lavó a continuación con cloruro de metileno minuciosamente. Se descartó la capa orgánica. La capa acuosa se evaporó a sequedad bajo presión reducida. Tras secar bajo vacío elevado durante 48 horas, se dio como resultado el producto esperado como un sólido amarillento en rendimiento cuantitativo. Los datos de RMN indican que existen dos isómeros tautoméricos en el producto, concretamente, la forma ceto, ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-carboxi-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico, y la forma enol, ácido 3-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-hidroxi-acrílico. ^{1}H-NMR (D_{3}COD, 300 MHz) \delta (ppm): 6,45 (s, 0, 4H), 6,43-6,48 (m, 1H), 4,06-4,10 (m, 1H), 3,95 (s, 2H), 2,80-2,93 (m, 2,6H), 2,60-2,65 (m, 2H), y 2,14-2,27 (m, 2H).
\global\parskip0.900000\baselineskip
15B. Otros compuestos de Fórmula Ia
Similarmente, siguiendo los procedimientos del Ejemplo 15A y sustituyendo glutationa con cisteína, se obtiene ácido 3-(2-amino-2-carboxi-etilsulfanil)-2-oxo-propiónico y ácido 3-(2-amino-2-carboxi-etilsulfanil)-2-hidroxiacrílico.
Ejemplo 16 Fórmula Ia en la que A es.-Glu-Cys-Gly, R es Etilo, y X es un enlace covalente y la Fórmula II en la que R^{1} es COOH, R^{2} es H, R^{3} es CH_{2}-S-Piruvato Etil Éster, R^{4} es H, R^{5} es H, k es 0, m es 2, y n es 1
A una solución de glutationa (ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-mercapto-etilcarbamoil]-butírico) (8,14 g, 26,5 mmol) en agua (50 ml) y metanol (10 ml) (desgasificado y purgado con nitrógeno) se añadió bromo-3-etilpiruvato (5,17 g, 26,5 mmol) a temperatura ambiente. Tras la adición de bromo-3-etilpiruvato, la suspensión turbia se volvió amarillenta translúcida casi instantáneamente. Tras agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, la mezcla se concentró en un evaporador rotatorio bajo presión reducida. La solución se lavó a continuación con cloruro de metileno minuciosamente. Se descartó la capa orgánica. La capa acuosa se evaporó a sequedad bajo presión reducida. Tras secar bajo vacío elevado durante 48 horas, se obtuvo un sólido de color blanco como el producto (g,%). Los datos de RMN indican que existen dos formas tautoméricas del producto, concretamente la forma ceto, éster etílico del ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-carboxi-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico, y la forma enol, éster etílico del ácido 3-[2-(4-amino-4carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-hidroxi-acrílico. ^{1}H-RMN (D_{3}COD, 300 MHz) \delta (ppm): 1,17 (t, 3H), 1,93 (m, 2H), 2,11 (m, 2H), 2,75 -3,28 (m, 2H), 2,29 (ss, 1,6H), 3,93 (s, 2H), 4,09 (m, 1H), 4,25 (q. 2H), 4,83 (m, 1H), 6,43 (s, 0,4H), 13C-NMR (D_{3}COD, 1,6H), 3,93 (s, 2H), 4,09 (m, 1H), 4,25 (q, 2H), 4,83 (m, 1H), 6,43 (s, 0,4H). 13C-NMR (D_{3}COD, 75 MHz) \delta (ppm): 14,1, 26,6, 32,1, 35,6, 40,0, 41,4, 53,2, 54,6, 62,1, 62,7, 100,0, 113,4, 139,7, 163,4, 170,8, 172,3, 174,1. MS (ESI) m/z: 422 (M + H, 100), 440 (M + H + H_{2}O, 42).
Ejemplo 17 Fórmula II en la que R^{1} es COOCH_{3},R^{2} es H, R^{3} es CH_{2}-S-ceto-Piruvato Etil Éster, R^{4} es H, R^{5} es CH_{3}, k es 0, m es 2, y n es 1
Una mezcla de ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico (200 mg) y ácido p-toluenosulfónico (30 mg) en metanol (100 ml) se calentó a reflujo durante
72 h.
El solvente se evaporó a continuación y el residuo se secó bajo vacío elevado para dar como resultado el producto deseado, metil éster del ácido 2-amino-4-[2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-1-(metoxicarbonilmetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico, como un sólido pegajoso de color amarillento. ^{1}H-RMN (D_{3}COD, 300 MHz) \delta (ppm): 6,24 (\delta, J = 10,5 Hz, 0,22 H), 4,49-4,4,33 (m, 1 H), 4,15-3,91 (m, 3 H), 3,76 (s, 3 H), 3,65-3,57 (m, 2H), 3,51 (s, 3 H), 3,21-2,73 (m, 2,8 H), 2,45-2,43 (m, 2 H), 2,10-1,92 (m, 2 H), 1,13-1,03 (m, 3 H).
Ejemplo 18 18A. Fórmula II en la que R^{1} es COOH, R^{2} es H, R^{3} es CH_{2}-S-ceto-Piruvato Decil Éster, R^{4} es H, R^{5} es H, k es 0, m es 2, y n es 1
Una mezcla de ácido 3-bromopirúvico (200 mg), alcohol decílico (300 mg), y ácido p-toluenosulfónico (20 mg) en benceno (80 ml) se calentó a reflujo durante 8 h en la oscuridad. Tras la eliminación del solvente, el residuo se sometió a cromatografía para dar como resultado 320 mg de aceite transparente. La RMN indicó que el producto contenía el compuesto deseado y una pequeña cantidad de alcohol en exceso. A este intermedio obtenido (320 mg) en metanol (desgasificado, 50 ml) se añadió una solución acuosa de glutationa (250 mg en 5 ml de agua). La solución turbia resultante se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. El solvente se evaporó a continuación y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice con cloruro de metileno/metanol (7:1 y a continuación 1:1) para dar como resultado 198 mg del producto esperado, ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-deciloxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico, como un sólido pegajoso de color blanco.
^{1}H-RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta (ppm): 6,50 (s, 0,50 H), 4,53-4,47 (m, 1 H), 4,12 (t, 2 H), 3,77 (s, 2 H), 3,75-3,65 (m, 2 H), 3,19-2,83 (m, 2,5 H), 2,53 (s, 2 H), 2,40-2,33 (m, 2 H), 2,02-1,97 (m, 2 H), 1,65-1,59 (m, 2 H), 1,26 (s, 14 H), 0,87 (t, J = 6 Hz, 3 H). MS (ESI) m/z: (M + H+) 534.
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18B. Otros compuestos de Fórmula Ia
Similarmente, siguiendo los procedimientos del Ejemplo 18A y sustituyendo el alcohol decílico con:
\bullet alcohol octadecílico,
\bullet 2-isopropil-5-metil-ciclohexanol
\bullet ciclopentanol,
\bullet pentanol,
\bullet butanol
\bullet isopropanol
\bullet hexanol
\bullet sec-butanol
\bullet 1-etilpropanol, y
\bullet 10-(1,5-dimetil-hexil)-10a,11a-dimetil-2,3,4,6,6a,7,7a,8,9,10,10a,11,11a,11b-tetradecahidro-1H-ciclopenta[b]fenantren-3-ol
\vskip1.000000\baselineskip
se obtuvieron los siguientes compuestos, respectivamente:
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-octadeciloxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-(2-isopropil-5-metilciclohexiloxicarbonil)-2-oxo-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico, MS (ESI) m/z: 532 (M^{+}+H, 100)
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-ciclopentiloxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico, MS (ESI) m/z: 662 (M^{+} +H, 100)
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-oxo-2-pentiloxicarbonil-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico, MS (ESI) m/z: 464 (M^{+} +H, 100),
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico, ^{1}H RMN (D_{2}O): 0,83-0,91 (m, 3H), 1,29-1,39 (m, 2H), 1,60-1,67 (m, 2H), 2,12-2,18 (m, 2H), 4,47-2,60 (m, 2H), 2,80-3,0 (m, 1,5H), 3,04-3,20 (m, 1H), 3,21-3,33 (m, 0,5H), 3,82-3,98 (m, 3H) 4,14-4,28 (m, 2H), 4,46-4,70 (m, 1H),
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-isopropoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico, MS (ESI) m/z: 436 (M^{+} +H, 100),
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hexiloxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico, MS (ESI) m/z: 478 (M^{+} +H, 100),
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-sec-butoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico, MS (ESI) m/z: 450 (M+ +H, 100),
\bullet ácido 2-amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil[2-[2-(1-etil-propoxicarbonil)-2-oxo-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico, y
\bullet ácido 2-amino-4-(1-(carboximetil-carbamoil)-2-{2-[10-(1,5-dimetil-hexil)-10a,11a-dimetil-2,3,4,6,6a,7,
7a,8,9,10,10a,11,11a,11b-tetradecahidro-1H-ciclopenta[b]phenanthren-3-iloxicarbonil]-2-oxo-etilsulfanil}-etilcarbamoil)-butírico.
Ejemplo 19 19A. Fórmula Ia en la que A es \gamma-Glu-CysX-Gly, R es H, y X es un enlace covalente; y Fórmula II en la que R^{1} es COOH, R^{2} es H, R^{3} es CH_{2}-S-Ceto-piruvato Etil Éster, R^{4} es H, R^{5} es H, k es 0, m es 2, y n es 1
Fórmula 203 en la que AA_{1} es Gly. Siguiendo con los procedimientos reconocidos por la técnica, GlyOH NH-protegido con Fmoc (1 eq) se disolvió en DCM y se puso en contacto con DCC (0,6 eq) en presencia de una cantidad catalítica de DMAP para dar el anhídrido protegido con F-moc correspondiente a la Fórmula 202 en la que AA_{1} es glicina, es decir, O-(Gly-NHFmoc)_{2.} El anhídrido preparado de esta manera (10 eq) se disolvió en DCM, al cual se añadió DIC (5 eq) en pequeñas porciones, con agitación. La mezcla resultante se agitó durante 1 h para dar una solución transparente que se añadió a continuación a la resina Wang (1 eq, pre-hinchado en DMF) en presencia de DMAP (0,1 eq). La suspensión de resina resultante se agitó durante 1 h, y a continuación se lavó minuciosamente con DMF para dar como resultado la glicina, NH-protegida con Fmoc unida a resina correspondiente a la Fórmula 203, con la que se continuó sin más purificación.
Fórmula 204 en la que AA_{1} es Gly. La glicina protegida con Fmoc unida a resina de Fórmula 203 se desprotegió usando piperidina al 20% en DMF seguido por lavado con DMF (5 veces) para dar la correspondiente glicina unida a resina de Fórmula 204, con la que se continuó sin más purificación.
Fórmula 206 en la que AA_{1} es Gly, y AA_{2} es Cys. La glicina unida a resina de Fórmula 204 (1 eq) se puso en contacto con TBTU (2 eq), DIPEA (4 eq) y NH-protegido con Fmoc, S-t-butiltio-cisteína (2 eq) (Fórmula 205), seguido por lavado con DMF (3 veces) para dar como resultado el correspondiente dipéptido NH-protegido con Fmoc unido a resina, de Fórmula 206, con la que se continuó sin más purificación.
Fórmula 207 en la que AA_{1} es Gly, y AA_{2} es Cys. El dipéptido Fmoc protegido unido a resina de Fórmula 206 se desprotege usando piperidina al 20% en DMF seguido por lavado con DMF (5 veces) para dar el correspondiente dipéptido unido a resina de Fórmula 207, con el que se continuó sin más purificación.
Fórmula 209 en la que AA_{1} es Gly, AA_{2} es Cys, y AA3 es \gamma-Glu. El dipéptido unido a resina de Fórmula 207 (1 eq) se puso en contacto con TBTU (2 eq), DIPEA (4 eq) y glutamina NH-protegida con Fmoc (2 eq) (Fórmula 208), seguido por lavado con DMF (3 veces) para dar como resultado el correspondiente tripéptido unido a resina NH protegido con Fmoc, de Fórmula 209, con la que se continuó sin más purificación.
Fórmula 210 en la que AA_{1} es Gly, AA_{2} es Cys, y AA_{3} es \gamma-Glu. El tripéptido protegido con Fmoc unido a resina de Fórmula 209 se desprotege usando piperidina al 20% en DMF seguido por lavado con DMF (5 veces) para dar el correspondiente tri-péptido unido a resina de Fórmula 210, con la que se continuó sin más purificación.
Fórmula 301c en la que AA_{1} es Gly, AA_{2} es Cys, L es t-Butiltio, y AA_{3} es \gamma-Glu. El tripéptido unido a resina de Fórmula 210 (correspondiente a la Fórmula 300c en la que AA2 es cisteína protegida con t-butiltio) se trató con mercaptoetanol al 50% (en DMF) durante 5 horas, seguido por DTT al 10% durante 1 hora para eliminar el grupo protector de t-butiltio, dando el correspondiente tripéptido unido a resina de Fórmula 301 c, tras filtración y lavado con DMF (3 veces) y DCM (5 veces).
Fórmula 302c en la que AA_{1} es Gly, AA_{2} es Cys, AA_{3} es \gamma-Glu, y R es Etilo. Al tripéptido unido a resina de Fórmula 301c, disuelto en DMF, se añadió lentamente 3-bromopiruvato de etilo (Fórmula 102 en la que Halo es Bromo y R es Etilo) (2 eq). La sustitución nucleofílica se detuvo mediante filtración después de 1 hora para dar como resultado el tripéptido conjugado unido a resina de Fórmula 302c, que se lavó con DMF (3 veces), DCM (10 veces), y MeOH (2 veces), y se secó bajo vacío elevado durante 10 horas.
Fórmula 303c en la que AA_{1} es Gly, AA_{2} es Cys, AA_{3} es \gamma-Glu, y R es Etilo. El tripéptido conjugado unido a resina de Fórmula 302c se escindió de la resina mediante tratamiento durante 3 horas usando a cocktail que contenía TFA al 95% (5% agua). El solvente se eliminó parcialmente y se añadieron a la mezcla 50 veces de éter frío. Se eliminó el sobrenadante transparente y el precipitado se lavó con éter frío (2 veces). El sólido resultante se disolvió en agua, se filtró mediante una columna C18 corta preempaquetada, y se liofilizó para dar como resultado el compuesto del título de Fórmulas I y II, es decir, ácido 2-amino-N-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etil]-succinámico, como un sólido plumoso de color blanco. ^{1}H-RMN (300 MHz, D_{2}O \delta (ppm): 4,63-4,47 (m, 1 H), 4,27-4,17 (m, 2 H), 3,96 (s, 2 H), 3,26-2,91 (m, 6 H), 1,30-1,23 (m, 3H). MS (ESI) m/z: 408 (M + H^{+}).
19B. Otros compuestos de Fórmulas Ia y II
Siguiendo los procedimientos del Ejemplo 19A y sustituyendo las Fórmulas 202, 205, 208, y/o 102 para introducir los restos correspondientes deseados en AA_{1}, AA_{2}, AA_{3} y R, se obtuvieron los siguientes:
\bullet Éster etílico del ácido 3-[2-[2-Amino-3-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-propionilamino]-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propiónico. ^{1}H-NMR (300 MHz, D_{2}O) \delta (ppm): 4,70-4,15 (m, 6H), 3,96-3,92 (m, 4H), 3,19-2,86 (m 6H), 1,36-1,26 (m, 6H). MS (ESI) m/z: 510 (M + H^{+}).
\bullet Éster etílico del ácido 3-[2-(2-Amino-3-mercapto-propionilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propiónico. ^{1}H-RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta (ppm): 4,69-4,55 (m, 1H), 4,42-4,22 (m, 3H), 3,94 (s, 2H), 3,45-2,83 (m, 5H), 1,35-1,1,20 (m, 3H). MS (ESI) m/z: 39 (M + H^{+}).
\bullet Ácido 4-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico. ^{1}H-RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta (ppm): 4,68-4,38 (m, 1H), 4,23-4,19(m, 2 H), 4,07-4,01 (m, 1 H), 3,97-3,94 (m, 2 H), 3,20-3,12 (m, 1H), 3,00-2,87 (m, 2H), 2,53-2,59 (m, 2H), 2,21-2,10 (m, 2 H), 1,28 (t, J = 7,2 Hz, 3 H). MS (ESI) m/z: 422 (M + H^{+}).
\bullet Éster etílico del ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-carboxi-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico. ^{1}H-RMN (300 MHz, D_{2}O) \delta (ppm): 6,80 (s, 0,13 H), 4,73-4,51 (m, 1 H), 4,26-4,18 (m, 2 H), 4,09-4,02 (m, 1 H), 3,96 (s, 2 H), 3,29-83 (m, 2,5 H), 2,56-2,49 (m, 2 H), 2,21-2,12 (m, 2 H), 1,24 (t, J = 7,5 Hz, 3 H). MS (ESI) m/z: 422 (M+H^{+}, 100).
\bullet Ácido 4-[1-(Carboximetil-carbamoil)-2-mercapto-etilcarbamoil]-4-(2-oxo-propionilamino)-butírico.
\bullet Éster etílico del ácido 3-[2-(2-Amino-3-carboxi-propionilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-hidroxi-acrílico.
\bullet Éster etílico del ácido 3-{2-Amino-2-[1-carboxi-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxi-vinilsulfanil)-etilcarbamoil]-etilsulfanil}-2-hidroxiacrílico.
\bullet Ácido 2-Acetilamino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico. ^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz) \delta (ppm): 6,41 (s, 0,3 H), 4,56-4,38 (m, 1 H), 4,20-4,05 (m, 3 H), 3,83 (s, 2 H), 3,19-2,72 (m, 3 H), 2,27 (m, 2 H), 2,12-1,77 (m, 2 H), 1,85 (s, 3 H), 1,13 (m, 3 H). MS(ESI) m/z: 465 (M+H^{+}, 100).
Ejemplo 20 20A. Fórmula II en la que R^{1} es COOH, R^{2} es 3-(6-Hidroxi-2,7,8-trimetil-croman-2-il)-Propionilo, R^{3} es CH_{2}-S-Cetopiruvato Etil Éster, R^{4} es H. R^{5} es H, k es 0, m es 2, y n es 1
Fórmula 502c en la que AA_{1} es Gly, AA_{2} es Cys, y AA_{3} es \gamma-Glu, y R^{2} es 3-(6-Hidroxi-2,7,8-trimetil-croman2-il)-propionilo. Un tripéptido unido a resina de Fórmula 500c (preparado, por ejemplo, como se ha descrito más arriba con respecto a la Fórmula 210 en el Ejemplo 19) se acopló, usando éster HOBt preactivado (DIC como agente deshidratante), con ácido 3-(6-hidroxi-2,7,8-trimetilcroman-2-il)-propiónico (un difenol ácido de Fórmula 501) para dar el correspondiente tripéptido unido a resina amino-sustituido de Fórmula 502c.
Fórmula 503c en la que AA_{1} es Gly, AA_{2} es Cys, AA_{3} es.-Glu, y R^{2} es 3-(6-Hidroxi-2,7,8-trimetil-croman2-il)-propionilo. El tripéptido unido a resina de Fórmula 502c se trató con mercaptoetanol al 50% (en DMF) durante 5 horas, seguido por DTT al 10% durante 1 hora para eliminar el grupo protector de t-butiltio, dando el correspondiente tripéptido unido a resina de Fórmula 503c, tras filtración y lavado con DMF (3 veces) y DCM (5 veces).
Fórmula 504c en la que AA_{1} es Gly, AA_{2} es Cys, AA_{3} es \gamma-Glu, R^{2} es 3-(6-Hidroxi-2,7,8-trimetil-croman-2il)-propionilo, y R es Etilo Al tripéptido unido a resina de Fórmula 503c, disuelto en DMF, se añadió lentamente etil-3-bromopiruvato (Fórmula 102 en la que Halo es Bromo y R es Etilo) (2 eq). La sustitución nucleofílica se detuvo mediante filtración después de 1 hora para dar como resultado el tripéptido conjugado unido a resina de Fórmula 504c, que se lavó con DMF (3 veces), DCM (10 veces), y MeOH (2 veces), y se secó bajo vacío elevado durante 10 horas.
Fórmula 505c en la que AA_{1} es Gly, AA_{2} es Cys, AA_{3} es \gamma-Glu, R^{2} es 3-(6-Hidroxi-2,7,8-trimetil-croman-2il)-propionilo y R es Etilo. El tripéptido conjugado unido a resina de Fórmula 504c se escindió de la resina mediante tratamiento durante 3 horas usando un cocktail que contenía TFA al 95% (5% agua). El solvente se eliminó parcialmente y se añadieron 50 veces de éter frío a la mezcla. El sobrenadante transparente se eliminó y el precipitado se lavó con éter frío (2 veces). El sólido resultante se disolvió en agua, se filtró mediante una columna corta C18 preempaquetada, y se liofilizó para dar como resultado el compuesto esperado de Fórmulas I y II, es decir, ácido 4-[1-(Carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-2-[3-(6-hidroxi-2,7,8-trimetil-croman-2-il)-propionilamino]-butírico. ^{1}H-RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta (ppm): 6,33 (s, 1 H), 4,43-4,35 (m, 2H), 4,20-4,14(m, 2 H), 3,93 (s, 2H), 3,35-3,05 (m, 2H), 2,98-2,83 (m, 2H), 2,71-2,65 (m, 2H), 2,45-2,37 (m, 5H), 2,25-1,73 (m, 11H), 1,30-1,19 (m, 6 H). MS (ESI) m/z: 668 (M + H^{+}).
20B. Otros compuestos de Fórmulas Ia y II
Siguiendo los procedimientos del Ejemplo 20A y sustituyendo las Fórmulas 500, 501 y/o 102 para introducir los restos correspondientes deseados en AA_{1}, AA_{2}, AA_{3}, R^{2} y R, se obtiene lo siguiente:
\bullet Ácido 4-[1-(Carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-2-{4-[2-(3,4-dihidroxi-fenil)-vinil]-benzoilamino)-butírico. ^{1}H-RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta (ppm): 7,71-7,69 (m, 2 H), 7,20-7,09 (m, 2 H), 6,62-6,49 (m, 5 H), 4,61-4,53(m, 2 H), 4,25-4,18 (m, 2 H), 3,88 (\delta, J = 4,2 Hz, 2 H), 3,17-2,84 (m, 4H), 2,51-2,43 (m, 2H), 2,38-2,10 (m, 2H), 1,33-1,16 (m, 3H). MS (ESI) m/z: 660 (M + H^{+}).
\newpage
Ejemplo 21 21A. Fórmula II en la que R^{1} es COOH, R^{2} es 4-[2-(3,4-dihidroxi-fenil)-etil-benzoilo, R^{3} es CH_{2}-S-Ceto-piruvato Etil Éster, R^{4} es H, R^{5} es H, k es 0, m es 2, y n es 1
Fórmula 601c en la que AA_{1} es Gly, AA_{2} es Cys, y AA_{3} es \gamma-Glu, y R^{2} es 4-[2-(3,4-dihidroxi-fenil)-etil]-benzoílo. Un tripéptido unido a resina de Fórmula 503c (preparado, por ejemplo, tal como se describe en el Ejemplo 25A) se escindió de la resina mediante tratamiento durante 3 horas usando a cocktail de TFA (TFA 93,5%, Tis 1,5%, EDT 2,5%, agua 2,5%). El solvente se eliminó parcialmente y se añadieron 50 veces de éter frío a la mezcla. Se eliminó el sobrenadante transparente y el precipitado se lavó con éter frío (2 veces). El sólido resultante se disolvió en agua en agua, se filtró mediante una columna corta C18 preempaquetada, y se liofilizó para dar como resultado el compuesto del título de Fórmula 601 c, es decir, ácido 4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-mercaptoetilcarbamoil]-2-{4-[2-(3,4-dihidroxi-fenil)-etil]-benzoilamino}-butírico. ^{1}H-RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta (ppm): 7,77-7,68 (m, 2 H), 7,24-7,15 (m, 2 H), 6,85-6,43 (m, 3 H), 4,62-4,56 (m, 2 H), 3,95 (\delta, J = 4 Hz, 2 H), 2,90-2,86 (m, 2H), 2,78-2,73 (m, 2H), 2,53-2,45 (m, 2H). MS (ESI) m/z: 548 (M + H^{+}).
Fórmula 602c en la que AA_{1} es Gly, AA_{2} es Cys, y AA_{3} es.-Glu, R^{2} es 4-[2-(3,4-dihidroxi-fenil)-etil]-benzoílo, y R es Etilo. Al tripéptido de Fórmula 601c, disuelto en DMF, se le añadió 3-bromopiruvato de etilo (Fórmula 102 en la que Halo es Bromo y R es Etilo) (2 eq). La sustitución nucleofílica se detuvo mediante filtración después de 1 hora para dar como resultado el tripéptido conjugado unido a resina de Fórmula 302c, que se lavó con DMF (3 veces), DCM (10 veces), y MeOH (2 veces), y se secó bajo vacío elevado durante 10 horas, para dar como resultado el compuesto del título, ácido 4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-2-{4-[2-(3,4-dihidroxi-fenil)-etil]-benzoilamino}-butírico.
21B. Otros compuestos de Fórmula 601c y Fórmulas Ia y II
Siguiendo los procedimientos del Ejemplo 21A y sustituyendo las Fórmulas 500, 501 y/o 102 para introducir los restos correspondientes deseados en AA_{1}, AA_{2}, AA_{3}, R^{2} y R, se obtuvieron los siguientes:
\bullet Ácido 4-[1-(Carboximetil-carbamoil)-2-mercapto-etilcarbamoil]-2-[3-(6-hidroxi-2,7,8-trimetil-croman-2-il)-propionilamino]-butírico. ^{1}H-RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta (ppm): 6,34 (s, 1 H), 4,54-4,3 (m, 2H), 3,92(\delta, J = 3,9 Hz, 2 H), 2,91-2,80 (m, 2H), 2,71-2,75 (m, 2H), 2,45-2,35 (m, 4H), 2,25-1,68 (m, 9H), 1,23-1,16 (m, 6 H). MS (ESI) m/z: 554 (M + H+).
\bullet Ácido 4-[1-(Carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-2-[3-(6-hidroxi-2,7,8 trimetil-croman-2-il)-propionilamino]-butírico.
\bullet Ácido 4-[1-(Carboximetil-carbamoil)-2-mercapto-etilcarbamoil]-2-{4-[2-(3,4-dihidroxifenil)-vinil]-benzoilamino)-butírico. ^{1}H-RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta (ppm): 7,40-7,08 (m, 4 H), 6,79-6,46 (m, 3 H), 4,64-4,55 (m, 2 H), 3,97 (s, 2 H), 3,22-2,86 (m, 2H), 2,52-2,42 (m, 2H), 2,40-2,02 (m, 2H). MS (ESI) m/z: 546 (M + H^{+}).
\bullet Ácido 4-[1-(Carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-2-{4-[2-(3,4-dihidroxi-fenil)-vinil]-benzoilamino}-butírico.
Ejemplo 22 Fórmula Ia en la que A es 5-Metil-[1,3,4] tiadiazol-2-ilo, R es Etilo, y X es S
Una solución de 5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-tiol (264 mg, 2 mmol) y bromopiruvato de etilo (0,264 ml, 2,1 mmol) en cloruro de metileno (10 ml) y acetonitrilo (10 ml) se agitó a 20ºC durante 3 horas bajo nitrógeno. Los precipitados se filtraron, se lavaron con cloruro de metileno, y se secaron a vacío. Esto proporcionó el producto esperado, éster etílico del ácido 3-(5-metil-[1,3,4] tiadiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico (450 mg, rendimiento 69%) como un sólido. ^{1}H-RMN (300 Hz, D_{3}COD y d_{6}-DMSO) \delta (ppm): 4,22 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,78 (\delta, J = 14,1 Hz, 1 H), 3,71 (\delta, J = 14,1 Hz, 1H), 2,74 (s, 3H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
Ejemplo 23 Fórmula Ia en la que A es 5-Cloro-benzotiazol-2-ilo, R es Etilo, y X es S
Una solución de 5-cloro-2-mercaptobenzotiozol (403 mg, 2 mmol) y etil bromopiruvato (0,264 ml, 2,1 mmol) en cloruro de metileno (10 ml) y acetonitrilo (30 ml) se agitó a 20ºC durante 3 horas bajo nitrógeno. El sólido obtenido se filtró, se lavó con cloruro de metileno, y se secó a vacío. Esto proporcionó el producto esperado, éster etílico del ácido 3-(5-cloro-benzotiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico (425 mg, rendimiento 54%) como un sólido. ^{1}H-RMN (300 Hz, D_{3}COD y d_{6}-DMSO) \delta (ppm): 7,92 (\delta, J = 8,6 Hz, 1H), 7,90 (\delta, J = 2,1 Hz, 1H), 7,40 (dd, J = 2,1 Hz, J = 8,6 Hz, 1H), 4,20 (\delta, q, J = 2,1 Hz, J = 7,1 Hz, 2H), 3,96 (\delta, J = 13,1 Hz, 1H), 3,86 (\delta, J = 13,1 Hz, 1H), 1,23 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
Ejemplo 24 Fórmula Ia en la que A es 4,5-Dihidro-tiazol-2-ilo, R es Etilo, y X es S
Una solución de 2-mercaptotiazol (238 mg, 2 mmol) y etil bromopiruvato (0,264 ml, 2,1 mmol) en cloruro de metileno (7 ml) se agitó a 20ºC durante 3 horas bajo nitrógeno. El sólido obtenido se filtró, se lavó con cloruro de metileno, y se secó a vacío. Esto proporcionó el producto esperado, éster etílico del ácido 3-(4,5-dihidro-tiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico (440 mg, rendimiento 71%) como un sólido. ^{1}H-RMN (300 Hz, D_{3}COD) \delta (ppm): 4,63 (\delta, J = 13,1 Hz, 1H), 4,30-4,15 (m, 6H), 4,10 (\delta, J = 13,1 Hz, 1 H), 1,34 (t, J = 7,1 Hz, 3H). MS (ESI) m/z: 234 (M+H, 100).
Ejemplo 25 Preparación de dietil éster del ácido 2-hidroxi-4-(1-metil-1H-imidazol-2-ilsulfanil)-2,3-dihidro-furan-2,5-dicarboxílico
Una solución de 2-mercapto-1-metilimidazol (228 mg, 2 mmol), bromopiruvato de etilo (0,266 ml, 2,1 mmol), e imidazol (150 mg, 2,2 mmol) en cloruro de metileno (6 ml) y acetona (2 ml) se agitó a 20ºC bajo nitrógeno durante 4 horas. Los solventes se evaporaron bajo vacío. El residuo se trató con acetato de etilo y se descartó la capa líquida. El residuo se disolvió a continuación en cloruro de metileno. La solución se lavó con solución acuosa de bicarbonato de sodio y agua antes de secarse con sulfato de sodio. La evaporación y la cromatografía (gel de sílice, cloruro de metileno-metanol 100:3 a 100:10 como eluyentes) proporcionó 20 mg de producto. ^{1}HNMR (300 Hz, Cl_{3}CD) \delta (ppm): 8,13 (br.s, 1H), 7,01 (\delta, J = 1,3 Hz, 1H), 6,91 (\delta, J = 1,3 Hz, 1H), 4,65 (\delta, J = 10,4 Hz, 1H), 4,57 (\delta, J = 10,4 Hz, 1H), 4,35 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,09 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,69 (s, 3H), 1,38 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3H). 13CNMR (75 Hz, Cl3CD) \delta (ppm): 171,2, 159,6, 147,5, 138,9, 128,8, 122,8, 117,2, 85,8, 80,3, 62,2, 62,1, 34,0, 14,2, 14,1. MS (ESI) m/z 343 (M+1, 100), 365 (M+Na, 7).
Ejemplo 26 Preparación de ácido 2,2-Dimetil-3,4-dihidro-2H-[1,4]tiazina-3,5-dicarboxílico
A una solución de L-penicilamina (298 mg, 2,0 mmol) en agua (5 ml) y acetonitrilo (5 ml) se añadió 3-bromopiruvato de etilo (0,25 ml, 390 mg, 2,0 mmol) lentamente. A la mezcla resultante se añadió solución acuosa de bicarbonato de sodio hasta que el pH fue de aproximadamente 5. Se eliminó el acetonitrilo bajo vacío y se añadió algo más de agua. La solución se extrajo con cloruro de metileno. Se separó la fase agua y se criocongeló bajo vacío elevado. El residuo se sometió a cromatografía (gel de sílice, cloruro de metileno-metanol-ácido acético 100:5:0,3 a 100:10:0,3) para dar 150 mg de producto (rendimiento 31%). ^{1}HNMR (300 Hz, D_{3}COD) \delta (ppm) 6,17 (s, 1H), 4,23 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,79 (s, 1H), 1,48 (s, 3H), 1,31 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,29 (s, 3H). ^{13}CNMR (75 Hz, D_{3}COD) \delta (ppm) 173,8, 164,0, 128,0, 102,4, 64,1, 62,2, 41,2, 28,3, 25,2, 14,7 ppm. MS (ESI) m/z 268 (M+Na, 100), 246 (M+1, 5).
Ejemplo 27 Preparación de ácido 4-[2-[2-(Adamantan-1-ilmetoxicarbonil)-2-oxo-etilsulfanil]-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-2-amino-butírico
Una solución de 10 mmol de 1-admantan-1-il-metanol, 5 mmol de ácido bromopirúvico, 20 mg de TsOH en 80 ml de benceno se calentó a reflujo bajo condición azeotrópica durante 6 a 12 h bajo atmósfera de nitrógeno. Tras enfriar, el solvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía para dar como resultado el intermedio de éster de bromopiruvato.
El anterior intermedio preparado de éster de piruvato (1 mmol) se disolvió en 5-10 ml of acetonitrilo. Esta solución se añadió a continuación lentamente a una solución de 1 mmol de glutationa en 10 ml of agua desionizada bajo agitación vigorosa. Tras la finalización de la adición, se agitó la mezcla resultante durante 3-8 h. La reacción se detuvo rápidamente añadiendo 50 ml agua y se lavó con éter (3 x 20 ml). Se filtró la capa acuosa a través de un parche C18 y se criocongeló. El producto bruto se sometió a cromatografía usando una columna en fase inversa usando un gradiente manual del 100% de agua a 70/30 agua/acetonitrilo para dar como resultado un sólido pegajoso de color blanco. MS (ESI) m/z 542 (M+H, 100), 560 (M+H_{2}O, 40).
Ejemplo 28 Preparación de ácido 1-[3-(2-Etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-2-metil-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico
Este compuesto se preparó usando un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 4. ^{1}H-RMN (300 Hz, D_{3}COD) \delta (ppm) 6,37 (s, 0,35H), 4,43 (dd, 1H), 4,21 (q, 2H), 3,73 (m, 3H), 2,75 -3,16 (m, 3H), 2,21 (m, 1 H), 2,03 (m, 3H), 1,31 (t, 3H), 1,16 (dd, 3H). MS (ESI) m/z 332 (M + H, 100).
Ejemplo 29 29A. Preparación de ácido 2-Amino-4-[1-carboxi-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
A una solución de 1-carboxi-3-(1-carboxi-2-mercapto-etilcarbamoil)-propilamonio desgasificado y purgado con nitrógeno, trifluoro-acetato (50 mg 85%, 0,12 mmol) en 1:1 acetonitrilo y agua (2 ml) se añadió etil bromo piruvato (14,6 \mul). Se dejó agitar la reacción durante 1 hora antes de que se detuviera y se extrajo con éter. La fase acuosa se filtró a continuación a través de una columna corta en fase sólida y se colocó en liofilizador durante toda la noche para dar como resultado cristales de color blanco (55 mg, rendimiento del 95%). ^{1}HNMR (300 Hz, D_{3}COD) \delta (ppm) 6,37 (s, 0,15H), 4,62 (m, 1H), 4,23 (q, 2H), 3,92 (m, 1H), 2,83 - 3,30 (m, 2,4H), 2,56 (m, 2H), 2,17 (m, 2H), 1,31 (t, 3H).
29B. Otros compuestos de Fórmulas Ia y II
Siguiendo los procedimientos del Ejemplo 29A y sustituyendo 1-carboxi-3-(1-carboxi-2-mercapto-etilcarbamoil)-propil-amonio; trifluoro-acetato con ácido (2-amino-3-mercapto-propionilamino)-acético y ácido 2-amino-4-[1-(etoxicarbonilmetil-carbamoil)-2-mercapto-etilcarbamoil]-butírico, respectivamente, se obtuvieron los siguientes:
\bullet Éster etílico del ácido 3-[2-Amino-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propiónico Cristales de color blanco (rendimiento del 97%). ^{1}HNMR (300 MHz, D_{3}COD) \delta (ppm): 6,42 (s, 0,36H), 4,61 (m, 1H), 4,14-4,27 (m, 4H), 4,01 (m, 1H), 3,95 (s, 2H), 2,80 -3,20 (m, 2,56H), 2,60 (m, 2H), 2,20 (m, 2H), 1,26 (tt, 6H).
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(etoxicarbonilmetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico Sólido de color blanco (rendimiento del 41%). ^{1}HNMR (300 MHz, D_{3}COD) \delta (ppm): 6,42 (s, 0,36H), 4,38 (dd, 1 H), 4,28 (q, 2H), 2,95 - 3,54 (m, 2H), 1,27 (t, 3H). MS (ESI) m/z 293 (M + H, 100).
Ejemplo 30 Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico 30A. Fórmula Ib en la que A es.-Glu-CysX-Gly, W = NOR^{a} en la que R^{a} es H, y Z = OR en la que R es Etilo
Se disolvió ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico (1,0 mmol) en 10 ml de agua, al cual se añadió, a temperatura ambiente, una solución de (1,2 mmol, 1,2 eq) de clorhidrato de hidroxilamina. La mezcla se agitó durante 24 h. La LC/MS de la alícuota de la reacción indicó la finalización de la reacción. La mezcla se introdujo a continuación sobre una columna C18 de fase inversa y se eluyó con acetonitrilo y agua, conteniendo cada uno TFA al 0,2% (0 a 10 min, acetonitrilo al 5%; 10 a 50 min, acetonitrilo al 60%; 60 a 70 min, acetonitrilo al 100%). Los restos que contenían el compuesto puro se vertieron, se destilaron a vacío a 30ºC hasta un cuarto del volumen y se liofilizaron para obtener la oxima correspondiente como su sal de TFAt.
La oxima de sal de TFA (1,0 mmol) en 20 ml de agua se trató con 1,2 mmol de HCl diluido (1,0 M) a 0ºC y la solución transparente resultante se criocongeló para obtener el compuesto del título deseado, ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico, as como un sólido de color blanco. ^{1}H NMR (D_{2}O): \delta 1,28 (t, J = 6,0 Hz, 3H), 2,10-2,27 (m, 2H), 2,50-2,59 (m, 2H), 2,82-3,06 (m, 2H), 3,64 (q, J = 15,0 Hz, 2H), 3,97 (s, 2H), 4,06 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,29 (q, J = 6,0 Hz), 4,58-4,64 (m, 1 H).MS(ESI) m/z: 437 (M+H, 100%).
30B. Fórmula Ib en la que A es \gamma-Glu-CysX-Gly, W = NOR^{a} en la que R^{a} es H, y Z = OR en la que R es n-Butilo
Similarmente, siguiendo el procedimiento del Ejemplo 30A y sustituyendo el ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico con ácido 2-amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2oxo-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico se obtiene el siguiente compuesto: ácido 2-Amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico; compuesto con HCl; ^{1}H NMR (D_{2}O): \delta 0,60-0,75 (m, 3H), 1,05-1,22 (m, 2H), 1,40-1,55 (m, 2H), 1,92-2,15 (m, 2H), 2,35-2,55 (m, 2H), 2,26-2,27 (m, 1 H), 2,80-2,92 (m, 1H), 3,43 (q, J = 12 Hz, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,85-3,99 (m, 1H), 4,01-4,15 (m, 2H), 4,40-4,55 (m, 1H). MS(ESI) m/z: 465 (M+H, 100%), 466 (M+2H, 25%).
30B. Fórmula Ib Variante R^{a}
Similarmente, siguiendo el procedimiento del Ejemplo 30A y sustituyendo hidroxilamina HCl con otra hidroxilamina sustituida se obtuvieron los siguientes compuestos:
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico; ^{1}H NMR (D_{2}O): \delta 1,28 (t, J = 9,0 Hz, 3H), 2,10-2,23 (m, 2H), 2,51-2,59 (m, 2H), 2,70-2,89 (m, 1H), 2,95-3,05 (m, 1H), 3,57-3,64 (m, 2H), 3,84 (s, 1H), 3,88-4,16 (m, 6H), 4,32 (q, J = 9,0 Hz, 2H), 4,54-4,0 (m, 1H).
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-phenoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico; compuesto con HCl; ^{1}H NMR (D_{2}O): \delta 1,15 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 2,0-2,14 (m, 2H), 2,21-2,50 (m, 2H), 2,65-2,80 (m, 2H), 2,81-2,98 (m, 2H), 3,6 (brs, 2H), 3,65-3,99 (m, 3H), 4,10-4,21 (m, 2H), 4,45-4,60 (m, 1H), 6,84-7,30 (m, 5H). MS(ESI) m/z: 513 (M+H, 100%), 514 (M+2H, 30%).
\bullet Ácido 2-Amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico; compuesto con HCl; ^{1}H NMR (D_{2}O): \delta 1,05 (t, J = 9,0 Hz, 3H), 1,99-2,20 (m, 2H), 2,31-2,50 (m, 2H), 2,52-2,71 (m, 2H), 2,73-2,97 (m, 2H), 3,20-3,48 (m, 2H), 3,60-4,15 (m, 5H), 4,31-4,50 (m, 1H), 5,03 (s, 2H), 6,95-7,20 (m, 5H). MS(ESI) m/z: 527 (M+H, 100%), 528 (M+2H, 30%).
\bullet Ácido 2-Amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-etoxicarbonil-2-(4-nitro-benciloxiimino)-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico; ^{1}H NMR (D_{2}O): \delta 1,08 (t, J = 6 Hz, 3H), 2,0-2,20 (m, 2H), 2,35-2,60 (m, 2H), 2,62-2,76 (m, 1H), 2,80-3,10 (m, 1H), 3,40-3,61 (m, 2H), 3,70-4,21 (m, 5H), 4,50 (brs, 1H), 5,16 (s, 2H), 7,27 (\delta, J = 9,0 Hz, 2H), 7,80 (\delta, J = 9,0 Hz, 2H). MS(ESI) m/z: 572 (M+H, 100%), 573 (M+2H, 30%).
\bullet Ácido 4-[2-(2-Alliloxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-2-amino-butírico; compuesto con di-HCl; ^{1}H NMR (D_{2}O): \delta 1,20 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 2,08-2,20 (m, 2H), 2,45-2,60 (m, 2H), 2,65-2,80 (m,1H), 2,90-3,06 (m, 1H), 3,50-3,64 (m, 2H), 3,90 (s, 2H), 4,10 (t, J = 6,9 Hz, 1 H), 4,22 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 4,49-4,54 (m, 1H), 4,70 (\delta, J = 7,0 Hz, 2H), 5,15-5,30 (m, 2H), 5,80-6,10 (m, 1H). MS(ESI) m/z: 477 (M+H, 100%), 478 (M+2H, 30%).
\bullet Ácido 2-Amino-4-[2-(2-terc-butoxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico; compuesto con di-HCl; ^{1}H NMR (D_{2}O): d1,10-1,20 (m, 12H), 2,03-2,25 (m, 2H), 2,40-2,56 (m, 2H), 2,63-2,75 (m, 1H), 2,90-3,16 (m, 1H),3,56-3,78 (m, 2H), 3,88 (s, 2H), 4,20 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 4,30 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 4,40-4,56 (m, 1H). MS(ESI) m/z: 493 (M+H, 100%). 494 (M+2H, 30%).
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-etoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico; compuesto con di-HCl; 1H NMR (D_{2}O): \delta 1,15 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,19 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,10-1,30 (m, 2H), 1,50-1,62 (m, 2H), 1,72-1,87 (m, 1H), 2,0-2,10 (m, 1H), 2,61 (\delta, J = 6 Hz, 2H), 2,96 (s, 2H), 3,10 (t, J = 9,0, 1 H), 3,21-3,34 (m, 4H), 3,55-3,26 (m, 1H). MS(ESI) m/z: 465 (M+H, 100%), 466 (M+2H, 30%).
30C. Fórmula Ib Variante R y R^{a}
Similarmente, siguiendo el procedimiento del Ejemplo 30A y sustituyendo el ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico con ácido 2-amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2oxo-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico e hidroxilamina HCl con otra hidroxilamina sustituida se obtuvieron los siguientes compuestos:
\bullet Ácido 2-Amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico; ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 0,90 (t, J = 6,0 Hz, 3H), 1,25-1,42 (m, 2H), 1,5-1,72 (m, 2H), 1,95-2,14 (m, 2H), 2,20-2,80 (m, 4H), 2,82-3,03 (m, 1H), 3,4-3,69 (m, 3H), 3,7-3,82 (m, 2H), 3,85-4,0 (m, 4H), 4,12-4,25 (m, 2H), 4,46-4,65 (m, 1H). MS(ESI) m/z: 479 (M+H, 100%), 480 (M+2H, 30%).
\bullet Ácido 2-Amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-butoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico; ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 0,90 (t, J = 6,0 Hz, 3H), 1,30-1,45 (m, 2H), 1,52-1,70 (m, 2H), 2,10 (brs, 2H), 2,30-2,55 (m, 2H), 2,66-2,81 (m, 1 H), 2,90-3,05 (m, 1H), 3,50-3,75 (m, 2H), 3,77-3,81 (m, 2H), 3,87 (brs, 1H), 4,10-4,23 (m, 2H), 4,45-4,68 (m, 1H), 5,28 (s, 3H), 7,30 (brs, 5H). MS(ESI) m/z: 555 (M+H, 100%), 556 (M+2H, 30%).
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Ejemplo 31 Síntesis alternativa de ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
Una mezcla de éster etílico del ácido bromopirúvico (390 mg) y clorhidrato de hidroxiamina (1,05 eq) se agitó durante 3 h a temperatura ambiente. El sólido de color blanco se filtró y se lavó con agua y se secó (420 mg). A la glutationa (307 mg) en agua desgasificada (10 ml) se añadió la oxima preparada anteriormente, éster etílico del ácido 3-bromo-2-hidroxiimino-propiónico (1 eq) en pequeñas porciones. Tras 3 h, la reacción se lavó con EtOAc (10 mL) y se criocongeló para dar como resultado el ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico como un sólido plumoso de color blanco (179-6, 410mg). ^{1}H RMN (D_{2}O): \delta 1,28 (t, J = 6,0 Hz, 3H), 2,10-2,27 (m, 2H), 2,50-2,59 (m, 2H), 2,82-3,06 (m, 2H), 3,64 (q, J = 15,0 Hz, 2H), 3,97 (s, 2H), 4,06 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,29 (q, J = 6,0 Hz), 4,58-4,64 (m, 1H).
Ejemplo 32 Metil éster del ácido 1-{3-[2-(4-Amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propionil}-pirrolidina-2-carboxílico 32A. Fórmula Ic en la que A es.-Glu-CysX-Gly, W es = O, y Z es NR^{b}R^{c} formando un anillo acilo sustituido de 5 miembros
A una solución de sal de prolina HCl (452 mg, 3,5 mmol) en una mezcla solvente de 3 ml de acetonitrilo y 5 ml de DCM en un baño de hielo se añadió gota a gota una solución enfriada de trietilamina (353 mg, 3,5 mmol) con agitación. Tras la finalización de la trietilamina, se dejó agitar la suspensión resultante durante 5 min y se almacenó en un baño de hielo.
A 740 mg (4 mmol) de ácido bromopirúvico disueltos en 5 ml de acetonitrilo en un baño de hielo se añadió lentamente el aminoácido anteriormente preparado. Tras la finalización de la adición del aminoácido, se añadió EDC (clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida) (806 mg, 4,2 mmol) a la mezcla en pequeñas porciones con agitación vigorosa. El baño de hielo se eliminó y la mezcla se dejó agitar durante 20 min a temperatura ambiente. La reacción se detuvo rápidamente añadiendo 40 ml de agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml). Las capas orgánicas se secaron con Na_{2}SO_{4} seguido por la eliminación del solvente bajo presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía usando hexanos/acetato de etilo (2:1) para dar como resultado un aceite espeso de color amarillo (473 mg, 46%).
Una solución de glutationa (ácido 2-amino-4[1-(carboximetil-carbamoil)-2-mercapto-etilcarbamoil]-butírico) (368 mg, 1,2 mmol) en 5 ml de agua se desgasificó a través de vacío elevado y purga con argón. A esta solución, se añadió la amida anteriormente preparada en 1,5 ml de acetonitrilo con agitación vigorosa. Se vigiló la reacción con comprobación periódica de MS hasta que la glutationa se consumió completamente (3 h). La reacción se detuvo rápidamente añadiendo 40 ml de agua y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2 x 30 ml) y hexanos (2 x 20 ml). A continuación se filtró la solución acuosa a través de un parche de algodón y se criocongeló para dar como resultado metil éster del ácido 1-{3-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propionil)-pirrolidina-2-carboxílico; compuesto con HBr; como un sólido pegajoso de color amarillo (642 mg, 91%). ^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz) \delta (ppm): 4,85-4,70 (m, 0,5 H), 4,47-4,38 (m, 1,5 H), 3,93 (t, J = 6,5 Hz, 1 H), 3,85 (s, 2 H), 3,66-3,43 (m, 5,7 H), 2,91-2,63 (m, 2 H), 2,44 (m, 2 H), 2,20-1,80 (m, 6 H; MS(ESI) m/z: 505 (M+H^{+}, 100).
32B. Fórmula lc Variante NR^{b}R^{c}
Similarmente, siguiendo el procedimiento del Ejemplo 32A y sustituyendo la prolina con otra amina heterocíclica se obtienen los siguientes compuestos:
\bullet Ácido 2-Amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[3-(4-metil-piperidin-1-il)-2,3-dioxo-propilsulfanil]-etilcarbamoil)-butírico. ^{1}H-RMN (D_{2}0, 300 MHz) \delta (ppm): 4,51 (m, 1 H), 4,17-4,13 (m, 1 H), 3,95-3,91 (m, 3 H), 3,71-3,60 (m, 1,6 H), 3,55-3,42 (m, 1 H), 3,09 (m, 1 H), 2,98-2,90 (m, 1 H), 2,85-2,72 (m, 2 H), 2,48 (m, 2 H), 2,13 (m, 2 H), 1,70-1,57 (m, 3 H), 1,06 (m, 2 H), 0,85-0,83 (m, 3 H). MS(ESI) m/z: 475 (M+H^{+}, 100).
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-pyrrolidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico; ^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz) \delta (ppm): 4,56 (dd, J = 8,2, 5,1 Hz, 1 H), 4,04(t, J = 6,6 Hz, 1 H), 3,98 (s, 2 H), 3,79 (s, 1 H), 3,61 (t, J = 5,6 Hz, 2 H), 3,46 (t, J = 5,6 Hz, 2 H), 3,00 (dd, J = 14,0, 5,1 Hz, 1 H), 2,87 (dd, J = 14,0, 8,7 Hz, 1 H), 2,56 (m, 2 H), 2,19 (m, 2 H). 1,89 (m, 4 H). MS(ESI) m/z: 447 (M+H^{+}, 100).
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(3-morfolin-4-il-2,3-dioxo-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico; MS(ESI) m/z: 463 (M+H^{+}, 100).
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico; ^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz) \delta (ppm): 4,49 (dd, J = 8,3, 5,0 Hz, 1 H), 3,69-3,61 (m, 3,5 H), 3,41 (t, J = 5,7 Hz, 2 H), 3,28 (t, J = 5,5 Hz, 2 H), 2,92 (dd, J = 14,0, 5,0 Hz, 1 H), 2,77 (dd, J = 14,0, 8,6 Hz, 1 H), 2,39 (m, 2 H), 2,01 (q, J = 7,3 Hz, 2 H), 1,57-1,43 (m, 6 H). MS(ESI) m/z: 461 (M+H^{+}, 100).
Ejemplo 33 Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-dimetilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico 33A. Fórmula Ic en la que A es \gamma-Glu-CysX-Gly, W es = O y Z es NR^{b}R^{c} en la que R^{b} y R^{c} son Metilo
A 185 mg (1 mmol) de ácido bromopirúvico disueltos en 2 ml de DMF enfriado en un baño de hielo, se añadió lentamente una solución de N,N-dimetilamina en DCM (43 mg en 2 ml). El baño de hielo se eliminó y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente. A esta mezcla se añadió simultáneamente Bop-Cl (cloruro Bis(2-oxo-3-oxasolidinil)fosfónico) (279 mg, 1,1 mmol) y trietilamina (106 mg, 1,05 mmol) con adición ligeramente anticipada de trietilamina durante un periodo de 15 min. Tras la finalización de la adición de reactivo, se dejó agitar la reacción durante otros 25 min deteniéndose antes rápidamente mediante la adición de 40 ml agua y 40 ml de acetato de etilo. Tras agitar durante 2 min, se separaron las capas, se lavó la capa orgánica con agua (2 x 20 ml), y las capas acuosas combinadas se extrajeron con acetato de etilo (40 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na_{2}SO_{4} y se concentraron. El producto bruto se sometió a cromatografía con EtOAc/Hexanos para dar como resultado un aceite de color amarillo pálido (88 mg, 48%).
\global\parskip0.900000\baselineskip
Una solución de glutationa (170 mg, 0,55 mmol) en 2 ml de agua se desgasificó a través de vacío elevado y purga con argón. A esta solución, se añadió amida (128 mg, 0,66 mmol, preparada como anteriormente) en 1 ml de acetonitrilo con agitación vigorosa. Se vigiló la reacción con comprobación periódica de MS hasta que GSH se consumió completamente (1,5). La reacción se detuvo rápidamente añadiendo 30 ml de agua y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 ml) y hexanos (2 x 15 ml). A continuación se filtró la solución acuosa a través de un parche de algodón y se criocongeló para dar como resultado un sólido pegajoso de color amarillo pálido de la sal de bromhidrato del ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-dimetilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico (262 mg, rendimiento del 95%, 179-91). Se purificó el producto anterior mediante RP-LC y se convirtió en la sal de HCl usando una solución 0,1 M de HCl. Se obtuvo el producto purificado como un sólido pegajoso de color amarillo pálido. ^{1}HRMN (D_{2}O, 300 MHz) \delta (ppm): 4,45 (dd, J = 8,3, 5,2 Hz, 1 H), 3,94 (t, J = 6,6 Hz, 1 H), 3,86 (s, 2 H), 3,66-3,64 (m, 1,6 H), 2,92-2,71 (m, 2 H), 2,90 (s, 3 H), 2,84 (s, 3 H); 2,53-2,36 (m, 2 H), 2,18 -1,99 (m, 2 H).), MS(ESI) m/z: 421 (M+H^{+}, 100).
33B. Fórmula Ic Variante NR^{b}R^{c}
Similarmente, siguiendo el procedimiento del Ejemplo 33A y sustituyendo N,N-dimetilamina con otra amina se obtuvieron los siguientes compuestos:
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-dietilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico ^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz) \delta (ppm): 4,45 (dd, J = 8,4, 5,2 Hz, 1 H), 3,92 (t, J = 6,5 Hz, 1 H), 3,85 (s, 2 H), 3,66-3,64 (m, 1,7 H), 3,27 (q, J = 7,2 Hz, 2 H), 3,19 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 2,92-2,71 (m, 2 H), 2,44 (m, 2 H), 2,08 (m, 2 H), 1,07-0,97 (m, 6 H). MS(ESl) m/z: 449 (M+H^{+}, 100).
\bullet Ácido 2-Amino-4-(1-(carboximetil-carbamoil)-2-{2-[2-(4-hidroxi-fenil)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-2-oxoetilsulfanil)-etilcarbamoil)-butírico; ^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz) \delta (ppm):7,13-7,07 (m, 5 H), 6,81-6,76 (m, 2 H), 6,29 (s, 0,1 H), 4,67 (dd, J = 8,8, 5,4 Hz, 1), 4,52-4,46 (m, 1 H), 4,03 (t, J = 6,3 Hz, 1 H), 3,97 (s, 2 H), 3,72-3,66 (m, 3,4 H), 3,17 (dd, J = 14,4, 5,0 Hz, 1 H), 3,00-2,90 (m, 2 H), 2,78-2,66 (m, 2 H), 2,56-2,49 (m, 2 H), 2,18 (m, 2 H); MS(ESI) m/z: 571 (M^{+}H^{+}, 100), 589 (M+H_{2}O+H^{+}, 45), 601 (M^{+}MeOH+H^{+}, 32).
\bullet Metil éster del ácido 2-{3-[2-(4-Amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propionilamino}-3metil-pentanoico ^{1}H-RMN (D20, 300 MHz) \delta (ppm): 4,56 (dd, J = 8,5, 5,1 Hz, 1 H), 4,28-4,20(m, 1 H), 3,85-3,82 (m, 3 H), 3,66-3,61 (m, 3,4 H), 2,99-2,71 (m, 3,1 H), 2,46-2,39 (m, 2 H), 2,09-2,03 (m, 2 H), 1,90-1,84 (m, 1 H), 1,35-1,25 (m, 1 H), 1,15-1,02 (m, 1 H), 0,79-0,71 (m, 6 H). MS(ESI) m/z: 535 (M+H^{+}, 100), (M+H_{2}O+H^{+}, 20), (M+MeOH+H^{+}, 40).
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-octilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico; ^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz) \delta (ppm): 6,20 (s, 0,02 H), 4,47-4,39 (m, 1 H), 3,78-3,64 (m, 3 H), 3,38 (m, 0,8 H), 3,15-3,05 (m, 2 H), 2,90-2,82 (m, 1 H), 2,65-2,55 (m, 1 H), 2,49 (m, 1 H), 2,32-2,25 (m, 2 H), 1,95-1,84 (m, 2 H), 1,46-1,37 (m, 2 H), 1,28-1,15 (m, 10 H), 0,83 (t, J = 13 Hz, 3 H). MS(ESI) m/z: 505 (M+H^{+}, 100), 523 (M+H_{2}O+H^{+}, 45), 537 (M+MeOH+H^{+}, 38).
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico; MS(ESI) m/z: 421 (M+H^{+}, 100).
\bullet Ácido 2-Amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-(1-metoxicarbonil-2-fenil-etilcarbamoil)-2-oxo-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico; ^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz) \delta (ppm): 7,23-7,09 (m, 5 H), 6,15 (s, 0,05 H), 4,63-4,58 (m, 1 H), 4,48-4,33 (m, 1 H), 3,93-3,89 (m, 1 H), 3,86-3,80 (m, 2 H), 3,61-3,43 (m, 3 H), 3,21-3,12 (m, 1 H), 2,97-2,87 (m, 1 H), 2,84-2,55 (m, 3 H), 2,44-2,36 (m, 2 H), 2,1-2,02 (m, 2 H); MS(ESI) m/z: 555 (M+H^{+}, 100), 573 (M+H_{2}O+H^{+}, 36), 587 (M+MeOH+H^{+}, 85).
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-ciclohexilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico;^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz) \delta (ppm): 6,18 (s, 0,05 H), 4,44-4,39 (m, 1 H), 3,94 (t, J = 6,5 Hz, 1 H), 3,85 (s, 2 H), 3,65 (s, 0,6 H), 3,54-3,41 (m, 1 H), 2,97-2,71 (m, 3 H), 2,47-2,41 (m, 2 H), 2,12-2,03 (m, 2 H), 1,66-1,1,42 (m, 5 H), 1,22-0,97 (m, 5 H); MS(ESI) m/z: 475 (M+H^{+}, 100), 493 (M+H_{2}O+H^{+}, 52), 507 (M+MeOH+H^{+}, 15).
\bullet Ácido 2-Amino-4-[2-(2-bencilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico;^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz) \delta (ppm):7,26-7,16 (m, 5 H), 4,69-4,36 (m, 1 H), 4,30-4,27 (m, 2 H), 3,91 (t, J = 13,2 Hz, 1 H), 3,81 (s, 2 H), 3,64 (s, 0,5 H), 2,86-2,80 (m, 2 H), 2,70-2,64 (m, 1 H), 2,06 (m, 2 H); MS(ESI) m/z: 483 (M+H^{+}, 100), 501 (M+H_{2}O+H^{+}. 64), 515 (M+MeOH+H^{+}, 52).
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\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hexilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico; ^{1}H-RMN (D_{2}O, 300 MHz) \delta (ppm): 6,19 (s, 0,02 H), 4,47-4,40 (m, 1 H), 3,90-3,85 (m, 3 H), 3,65 (\delta, J = 2,5 Hz, 0,6 H), 3,15-3,05 (m, 2 H), 2,97-2,71 (m, 3 H), 2,46-2,40 (m, 2 H), 2,11-2,01 (m, 2 H), 1,39-1,32 (m,2 H), 1,18-1,08 (m, 6 H), 0,72-0,68 (m, 3 H). MS(ESI) m/z: 477 (M+H^{+}, 100), 495 (M+H_{2}O+H^{+}, 68), 509 (M+MeOH+H^{+}, 70).
Ejemplo 34 Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hidroxiimino-3-oxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
A una solución enfriada (0ºC) de ácido 3-bromopirúvico (0,835 g, 0,005 mol) en acetonitrilo (8 ml) se añadió una solución preenfriada (0ºC) de piperidina (0,341 g, 0,004 mol) en CH_{2}Cl_{2} (3 ml) lentamente gota a gota durante 5 min. A continuación se añadieron pellizcos grandes de EDC durante 5 min. y se agitó la mezcla a la misma temperatura durante 10 min. y se calentó la mezcla lentamente a temperatura ambiente. La detención rápida de la reacción con 10 ml de agua fría, extracción con acetato de etilo (2 x 25 ml) seguido por la concentración y la cromatografía instantánea sobre gel de sílice dio como resultado el producto deseado, 3-bromo-1-piperidin1-il-propano-1,2-diona como un aceite de color marrón. El producto se pasó a la siguiente en la siguiente etapa sin evaluar el rendimiento y la pureza.
A una solución enfriada de glutationa (0ºC) (500 mg, 1,595 mmol) en agua (15 ml) se añadió la amida del ácido bromopirúvico (obtenida de la reacción anterior) en acetonitrilo (10 ml) lentamente gota a gota durante 5 min. y la mezcla y la mezcla se agitó a la misma temperatura durante 1 h y se calentó lentamente a temperatura ambiente y se continuó agitando durante toda la noche. La LC/MS indicó la formación del producto deseado, ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-piperidin-1-ilpropilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico. La mezcla se purificó mediante MPLC para obtener un sólido de color amarillo pálido como 400 mg de su sal de TFA, (43,7%).
Se disolvió ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico como su sal de TFA (400 mg, 0,696 mol) en 8 ml de agua al cual se añadió 1,3 eq. de NH_{2}OH.HCl sólido a 0ºC y la solución homogénea se dejó reposar durante la noche. La LC/MS indicó que la reacción fue incompleta. Se añadió 1 eq. adicional de NH_{2}OH.HCl a temperatura ambiente y la solución homogénea se dejó reposar durante toda la noche. La LC/MS indicó la conversión completa de la amida de partida en la correspondiente oxima. A continuación se pasó la fase acuosa a través de una columna C18 en fase inversa usando mezcla de agua y acetonitrilo como gradiente del eluyente. Se vertieron los restos puros, se concentraron bajo vacío a temperatura ambiente hasta un cuarto del volumen y finalmente se criocongelaron para obtener el ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hidroxiimino-3-oxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico como su sal de TFA (390 mg, 95,1%).
A una solución enfriada (0ºC) de la sal de TFA anterior (390 mg, 0,662 mmol) en 10 ml de agua se añadió una solución acuosa preenfriada de HCl 1 N (0,662 mol) y la solución homogénea se criocongeló para obtener la sal de HCl del producto como un sólido de color blanco (380 mg, cuantitativo). La estructura estuvo de acuerdo con su LC/MS y los datos de ^{1}H RMN. ^{1}H RMN (D_{2}O) \delta 4,57-4,40 (m, 1 H), 3,59 (t, 6,6 Hz, 1 H), 3,58 (s, 2H), 3,52-3,25 (m, 5H), 3,15 (brs, 1 H), 2,59-2,51 (m, 2H), 2,45-2,32 (m, 2H), 2,10-1,59 (m, 2H), 1,45 (brs, 6H).
Ejemplo 35 Éster etílico del ácido 3-[1-(Carboximetilcarbamoil)etilsulfanil]-2-hidroxiacrílico 35A. Fórmula Ia en la que A es N-(propionil)glicina, X es S, y Z es -O-Etilo
Una solución de N-(2-mercaptopropionil)glicina (1,17 g, 7,17 mmol) y etil bromopiruvato (1 ml, 7,17 mmol, 90% de pureza) en acetonitrilo (30 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Tras la eliminación del solvente, el residuo se disolvió en una mezcla solvente de etanol (15 ml) y agua (15 ml). Después que se ajustó el pH a 7-8 con solución satd. De NaHCO_{3}, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla se acidificó a pH 1-2 con ácido clorhídrico se concentró y a continuación se evaporó rotatoriamente a sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna eluída con EtOAc dando el éster etílico del ácido 3-[1-(carboximetilcarbamoil)etilsulfanil]-2-hidroxiacrílico como un sólido de color amarillo (1,06 g, rendimiento 53,3%). ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300,16 MHz) \delta (ppm): 9,10 (s amplio, 1H). 7,22 (\delta, J = 0,9 Hz, 1H), 4,62 (\delta, J = 17,7 Hz, 1 H), 4,53 (\delta, J = 17,7 Hz, 1H), 4,28 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,47 (qd, J = 6,2 & 0,9 Hz, 1H), 1,48 (\delta, J = 6,2 Hz, 3H) y 1,30 (t, J = 7,1 Hz, 3H). ^{13}C RMN (CDCl_{3}, 75,48 MHz) \delta (ppm): 174,02, 165,84, 160,57, 130,27, 120,20, 62,04, 46,76, 37,11, 14,45 y 14,09. MS (ESI) m/z: 260 (M+ - OH, 100).
35B. Fórmula la en la que A es 2,3-Dihidroxi-propilo, X es S, y Z es -O-Etilo
Similarmente, siguiendo el procedimiento del Ejemplo 35A y sustituyendo N-(2-mercaptopropionil)glicina con 3-mercapto-1,2-propanodiol, se obtiene el siguiente compuesto:
\bullet Éster etílico del ácido 3-(2,3-dihidroxipropilsulfanil)-2-hidroxiacrílico. ^{1}H RMN (CDCl_{3}, 300,16 MHz) \delta (ppm): 6,70 (\delta, J = 1,1 Hz, 1H), 4,23 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,17-4,11 (m, 1H), 3,82 (\delta, J = 5,1 Hz, 2H), 2,99-2,88 (m, 2H) y 1,30 (t, J = 7,1 Hz, 3H). MS (ESI) m/z: 205 (M^{+}- OH, 100), 227 (M^{+} - H_{2}O + Na, 51) y 431 [2(M^{+} - H_{2}O) + Na, 29].
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Ejemplo 36 Éster etílico del ácido 2-Oxo-3-(4-oxo-3,4-dihidro-quinazolin-2-ilsulfanil)-propiónico
Una solución homogénea de 2-mercapto-3H-quinazolin-4-ona (1,30 g, 7,17 mmol) y bromopiruvato de etilo (1 ml, 7,17 mmol, 90% de pureza) en DMF (30 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. Se añadió trietilamina (5 ml) a la solución y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 36 h. La mezcla se acidificó a pH 1-2 con ácido clorhídrico concentrado y a continuación se evaporó rotatoriamente a sequedad. El residuo se separó mediante cromatografía en columna eluída con EtOAc dando el compuesto del título como un sólido de color amarillo (0,231 g, rendimiento del 11,0%). ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300,16 MHz) \delta (ppm): 8,05 (dd, J = 7,9 & 1,4 Hz, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,81 (td, J = 8,3 & 1,5 Hz, 1H), 7,53 (\delta, J = 8,2 Hz, 1H), 7,46 (td, J = 7,5 & 1,4Hz, 1H), 4,21 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,82 (\delta, J = 12,2 Hz, 1H), 3,46 (\delta, J = 12,2 Hz, 1H) y 1,18 (t, J = 7,1 Hz, 3H). 13C RMN (DMSO-d_{6}, 75,48 MHz) \delta (ppm): 168,06, 159,54, 159,26, 149,07, 135,98, 126,85, 126,74, 126,36, 119,09, 91,33, 62,79, 37,92 y 14,31. MS (ESI) m/z: 293 (M^{+} + H, 100).
Ejemplo 37 Éster etílico del ácido 3-(Benzoselenazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico
A una suspensión de 2-mercaptobenzselenazol (418 mg, 2 mmol) en 4 ml de MeCN y 4 ml de diclorometano con agitación vigorosa se añadió gota a gota, bromopiruvato de etilo (290 mg, 2 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 5 h. Se dejó sedimentar ésta durante 30 min y a continuación se filtró. El sólido se lavó con EtOAc/hexanos (1:1, 2 x 8 ml) y se secó en vacío elevado para dar como resultado éster etílico del ácido 3-(benzoselenazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico como un polvo de color blanco (582 mg, 89%). ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz) \delta (ppm): 8,14-8,10 (m, 1 H), 7,95-7,92 (m, 0,7 H), 7,75-7,73 (m, 0,3 H), 7,52-7,45 (m, 1 H), 7,36-7,30 (m, 1 H), 7,07 (s, 0,7 H), 4,69 (s, 0,6), 4,37-4,27 (m, 2 H), 1,32 (t, J = 7 Hz, 3 H). MS(ESI) m/z: 330(M+H^{+} 55), 348 M^{+}+H_{2}O, 58), 362 (M^{+}+MeOH, 100).
Ejemplo 38 Determinación de la actividad utilizando el Ensayo de estrés de células neuronales A. Aislamiento y cultivo de células neuronales hipocámpicas primarias
Se emplearon los siguientes materiales:
\bullet Neurobasal/B27i: medio neurobasal (disponible de lnvitrogen, San Diego, CA) con 1x suplemento B27 (Invitrogen), L-glutamina 0,5 mM, ácido L-glutamico 25 mM, y 1 x Penicilina/Estreptomicina.
\bullet Se prepararon Solución de Salt Básica de Hank (HBSS, libre de Ca/Mg) preparando 1X Hanks CMF (Gibco) suplementado con HEPES (10 mM, pH 7,3), bicarbonato de sodio (0,35%), 1X penicilina/Estreptomicina, y piruvato de sodio MEM 1 mM.
\bullet Poli-D-lisina (Sigma, San. Luis, MO), solución de 50 mg/ml.
\bullet Sigmacote (Sigma, San. Luis, MO).
\bullet Matraces de cultivo de plástico (T75 cm^{2}) o placas de cultivo celular de 24-pocillos tratadas con Poli-D-Lisina (Sigma, San. Luis, MO).
\vskip1.000000\baselineskip
Una hembra de ratón embarazada (E18-E19) se eutanizó con CO_{2} seguido por la eliminación del útero, que se colocó a continuación en una placa petri estéril. Se eliminaron los embriones del saco, y se retiraron los cerebros embriónicos y se sumergieron en Solución de Sal Tamponada fría (4ºC) (HBSS; libre de Ca/Mg; Life Technologies) en una placa petri pequeñas. A continuación se retiraron los hipocampos de los cerebros en un microscopio de disección y se colocaron en una placa cubierta con parafina. Las meninges se eliminaron por arrastre y los hipocampos diseccionados se recogieron en una placa petri pequeña en HBSS. Los hipocampos se transfirieron a un tubo de centrífuga de 15 ml (normalmente 10-12 cerebros) relleno con HBSS. El tubo que contenía los cerebros se centrifugó a 1000 rpm durante 2 min en la bandeja superior de la centrífuga. Se eliminó el sobrenadante, se añadieron 2 ml de HBSS a los hipocampos en el tubo, y la suspensión resultante se trituró 2 veces cada una con pipetas de vidrio siliconado de punta larga que tenían aperturas progresivamente más pequeñas, comenzando con una pipeta con una apertura de tamaño estándar (aproximadamente 1,0 mm de diámetro), seguido con una que tenía una apertura de tamaño medio estándar (aproximadamente 0,5 mm de diámetro), a continuación con una que tenía una apertura aproximadamente de tamaño medio (0,25 mm de diámetro). La suspensión se centrifugó a continuación de nuevo a 1000 rpm durante 2 min en la bandeja superior de la centrífuga, se descartó el sobrenadante, y se añadieron 2 ml de Neurobasal/B27i (con antibióticos) al tubo. A continuación se repitió el procedimiento de trituración descrito anteriormente en esta suspensión.
Se determine la densidad de células en una alícuota pequeña de células usando procedimientos estándar de recuento y corrigiendo para la viabilidad celular mediante tinción de exclusión con azul tripan. Usando este procedimiento, el rendimiento esperado es 3 x 10^{5}-6 x 10^{5} células/cerebro. A continuación se añadieron las células a placas de 24 pocillos recubiertas de PDL, matraces o placas MetTek en Neurobasal/B27I a una densidad de aproximadamente 1,5 x 10^{6} células (matraz T75) o aproximadamente 100.000 células/pocillo de una placa de 24 pocillos. Las células plaqueadas se incubaron a 37ºC en una atmósfera de CO_{2} al 5%/O_{2} al 95%. El medio se renovó tras 3-4 días sustituyendo la mitad de éste con medio Neurobasal/B27 m nuevo, que contenía ctosin arabinosido 5 \muM (Ara-C). Siete a ocho días desde el cultivo inicial, se renovó el medio de nuevo, eliminando una mitad y sustituyéndolo con una cantidad igual de medio Neurobasal/B27 m nuevo (sin Ara-C).
B. Ensayo de muerte celular mediante anoxia-reoxigenación del hipocampo
Se usó este Ensayo para inducir isquemia mediante anoxia-reoxigenación en células neuronales hipocámpicas cultivadas. Se añadieron los compuestos de ensayo para evaluar la potencia y eficacia frente a la lesión celular neuronal inducida por isquemia y la muerte celular.
Se emplearon los siguientes materiales:
\bullet
Medios neurobasales, medios neurobasales NoG, suplemento B27 y suplemento B27 menos AO (Invitrogen).
\bullet
Se preparó medio Neurobasal/B27 con 2X B27 menos suplemento AO, L-glutamina 0,5 mM y 0,25X penicilina/estreptomicina.
\bullet
Se obtuvo Cell Tracker Green de Molecular Probes y se preparó una solución 5 \muM nueva a partir de un stock10 mM justo antes del uso.
\bullet
NoG-Neurobasal contiene medio NoG neurobasal más glucosa 0,5 mM, L-glutamina 0,1 mM y 0,25X Penicilina/Estreptomicina.
\bullet
Se prepararon células neuronales hipocámpicas primarias de acuerdo con los procedimientos descritos anteriormente y se cultivaron en placas de 24 pocillos recubiertas con poli-D-lisina durante 10-11 días antes del uso.
\vskip1.000000\baselineskip
Se preparó medio LoG-Neurobasal desoxigenado (100 ml) preequilibrando el medio en un matraz de T150 cm^{2} en una cámara hipóxica durante toda la noche. Tras la preincubación bajo condiciones hipóxicas, los medios LoG-Neurobasales se burbujearon ligeramente con N_{2} al 100% durante 30 min para desoxigenar completamente los medios. Se preequilibraron 20 ml más de medios LoG-Neurobasales en un matraz de T75 cm^{2} y se incubaron 100 ml de Neurobasal/B27AO en un incubador normal (CO_{2} al 5%) durante toda la noche. Se preparó medio reoxigenado colocando medio durante toda la noche en la estufa de cultivo (CO_{2} al 5%/O_{2} al 95%) antes del uso.
Se retiró el medio de cultivo existente (Neurobasal/B27 m) de las células mediante aspiración. Se lavaron las células una vez con 2 ml/pocillo (placas de cultivo de 24 pocillos) de BSS libre de glucosa. Se dejaron reposar las neuronas 10-11 días tras el cultivo inicial con LoG-Neurobasal desoxigenado (1 ml por pocillo por cada pocillo de una placa de 24 pocillos). Se añadieron los compuestos de ensayo directamente a cada pocillo (3 concentraciones del compuesto más el control positivo, cada uno por triplicado). La mayor parte de los compuestos de ensayo se disolvieron en DMSO al 100%; se ajustaron las concentraciones de tal manera que la concentración final de DMSO en los medios celulares no excedió nunca el 0,5%. Las places que contenían las células con los compuestos de ensayo se colocaron en una cámara hipóxica durante 5 h con placas con la tapa entreabierta. Para los controles de normoxia, se añadió medio LoG-Neurobasal normóxico preequilibrado a cada pocillo de células, y se sustituyó la placa en la estufa de cultivo normal durante 5 h. Tras 5 h de hipoxia, los medios existentes se retiraron cuidadosamente mediante aspiración, y se añadieron 2 mL de Neurobasal/B27AO nuevo reoxigenado (preequilibrado) a cada pocillo. Se volvieron a añadir los mismos compuestos de ensayo (en las mismas concentraciones) en los pocillos correspondientes. Se colocaron las placas en la estufa de cultivo celular (CO_{2} al 5%/O_{2} al 95%) y se reoxigenaron durante 20-24 h. Tras la reoxigenación durante 20-24 h, se cuantificaron las neuronas vivas usando el procedimiento de fluorescencia cell tracker green, descrito a continuación.
Para ensayar la viabilidad celular, se aspire el medio de cultivo existente de cada pocillo de las placas de 24 pocillos, y se lavaron las neuronas una vez con 2 ml de HBSS (pH 7,4, precalentado a 30-37ºC). Se añadió a cada pocillo un milímetro de tinte fluorescente Cell Tracker Green 5 mM disuelto en HBSS. Se colocaron las placas en la oscuridad a temperatura ambiente durante 15 minutos, y a continuación se lavaron don dos mililitros de HBSS. A continuación se añadió un mililitro de HBSS a cada pocillo, y se recontaron las células fluorescentes usando un microscopio fluorescente. La viabilidad celular significativamente aumentada en comparación con las células control es indicativa de un compuesto protector.
Resultados
Cuando se ensayan como se ha descrito más arriba, los compuestos de la presente invención, incluyendo:
\bullet Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hexiloxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-carboxi-2-oxo-etilsulfalil)-etilcarbamoil]butírico,
\bullet Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]butírico,
\bullet Ácido 2-amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-1-(carboximetilo, carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet Ácido 2-amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-butoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet Ácido 2-amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet Ácido 2-amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-etoxicarbonil-2-(4-nitro-benciloxiimino)-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico,
\bullet Ácido 2-Amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[3-(4-metil-piperidin-1-il)-2,3-dioxo-propilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico,
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hidroxiimino-3-oxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-dietilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet Ácido 2-Amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-(1-metoxicarbonil-2-fenil-etilcarbamoil)-2-oxo-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico,
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-ciclohexilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet Ácido 2-Amino-4-[2-(2-bencilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(3-morfolin-4-il-2,3-dioxo-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet Éster etílico del ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet Éster etílico del ácido 3-(5-nitro-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico, y
\bullet Éster etílico del ácido 3-(5-metoxi-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\vskip1.000000\baselineskip
Proporcionando protección frente a la muerte celular producida por estresante en al menos aproximadamente un 30% hasta aproximadamente un 85% de las células ensayadas, a concentraciones que oscilan desde aproximadamente 1 a aproximadamente 350 \muM.
Ejemplo 39 Ensayo de contractilidad miocítica con calcio A. Aislamiento y cultivo de micocitos neonatos primarios
Se emplearon los siguientes materiales:
\bullet
10X Solución de Disección de Corazón (HDS) contiene los siguientes componentes (g/l) en agua calidad tejido: NaCl, 68; HEPES, 47,6; NaH_{2}PO_{4}, 2; Glucosa, 10; KCI, 4; MgSO_{4}, 1, pH ajustado a 7,4. Antes de la esterilización del filtro de la solución diluida (1XHDS), se añadieron 10 mg de rojo fenol a cada 500 mililitros de medio.
\bullet
Se volvieron a suspender Transferrina y Insulina Bovina (disponible de Life Technologies) a una concentración de 4 mg/ml en agua calidad cultivo de tejido.
\bullet
DMEM-F12-DMEM/F12, polvo, 1:1 conteniendo glutamina y clorhidrato de piridoxina (disponible de Life Technologies). A un equivalente litro del polvo se añadieron 2,43 g de bicarbonato de sodio y 10 ml de 100X Penicilina/Estreptomicina en 950 ml agua calidad cultivo de tejido con agitación. Se ajustó el pH a 7,2 con HCl 1 M y se ajustó el volumen hasta 1 litro. La solución se esterilizó por filtración, seguido por la adición de 2,5 ml de 4 mg/ml de Transferrina, 250 ml 4 mg/ml de Insulina y 30,7 mg de bromodeoxiuridina.
\bullet
Se preparó también DMEM-F12-FBS al 5% para prerecubrir las placas de cultivo de tejido y la suspensión inicial del aglomerado de cardiomiocitos.
\bullet
Solución de colagenasa-57,1 mg de colagenasa se volvieron a suspender en 140 ml 1xHDS.
\vskip1.000000\baselineskip
Se prerecubrió el cultivo de tejido con DMEM-F12-FBS al 5% incubando 50 ml por pocillo de una placa de 96 pocillos y 0,5 ml por placa de 24 pocillos a 37ºC.
Se retiraron crías de rata de dos días de sus madres y se colocaron en un contenedor estéril. Las crías se sumergieron rápidamente en alcohol al 70%, a continuación se decapitaron y el cuerpo se colocó en una placa de cultivo de tejido estéril vacía. Se realizó una incisión comenzando en el cuello y progresando hacia el vientre, cortando a través del esternón. Se retiró el corazón y se colocó en placas de cultivo de tejido que contenían 1 x HDS. Se recortaron los atrios y los ventrículos restantes se colocaron en una placa de cultivo de tejido diferente que contenía 1 x HDS, en la que se seccionaron en 3-4 piezas cada uno. A continuación se transfirieron los ventrículos a un matraz de vidrio estéril de 250 ml y se retiró el 1 x HDS. Se añadieron veinte mililitros de solución de colagenasa precalentada a los ventrículos, seguido por incubación a 37ºC con agitación. Tras 20 minutos, se retiró la solución de colagenasa y se volvió a colocar con 20 ml de colagenasa nueva precalentada. Se continuó la incubación durante 20 minutos más.
Al final de la incubación, se dejó sedimentar cualquier resto de tejido antes de retirar la colagenasa (que contenía los cardiomiocitos aislados) de las piezas de tejido rotas. Se añadieron los micocitos aislados a un tubo Falcon de 50 ml que contenía 2 ml de Suero Bovino Fetal (FBS). Las piezas restantes de tejido se sometieron a una segunda digestión añadiendo 20 ml de colagenasa nueva precalentada e incubando como anteriormente durante 20 minutos. A continuación se centrifugó este Segundo digerido a 1000 rpm durante 5 minutos (bandeja superior de la centrífuga). Se descartó el sobrenadante resultante, y el aglomerado de células se suspendió con 4 ml de FBS. La suspensión celular resultante se colocó en la estufa a 37ºC. Se repitió esta etapa algunas veces más para cosechar el material adicional.
Se prepararon gradientes de Percoll añadiendo 2,5 ml de 10 x HDS a 22,5 ml de Percoll (Life Technologies) con mezcla (Percoll Stock). Se prepararon la solución de Gradiente Superior (11 ml de Percoll Stock y 14 ml 1 x HDS) y solución de Gradiente Inferior (13 ml Percoll Stock y 7 ml 1 x HDS). Se transfirieron cuatro mililitros de solución de Gradiente Superior a tubos Falcon estériles de 6 x 15 ml. Se colocaron tres mililitros de solución de Gradiente Inferior en cada tubo insertando una pipeta serológica en la parte inferior del tubo y añadiendo lentamente el líquido.
Se vertieron todos los digeridos (6) en un tubo Falcon de 50 ml y se centrifugaron en la bandeja superior de la centrífuga a 1000 rpm durante 10 minutos. Se descartó el sobrenadante, y se volvió a suspender el aglomerado celular en 12ml de 1xHDS. Se añadieron dos mililitros de la suspensión celular a la parte superior de cada gradiente. A continuación se centrifugaron los tubos de gradiente a 3000 rpm durante 30 minutos sin frenar en una centrífuga Beckman Allegra 6 (rotor GH de 3,8A). Tras la centrifugación, se segregaron las células en dos bandas estrechas en las dos interfases. La banda inferior de las dos bandas se enriqueció en cardiomiocitos; hay también un aglomerado de cardiomiocitos en la parte inferior del tubo. La banda superior se enriqueció en fibroblastos y diferentes no cardiomiocitos.
La porción superior del gradiente se aspire hasta justo por encima de la capa de cardiomiocitos. A continuación se retiró cuidadosamente la capa de cardiomiocitos junto con el aglomerado, y se combinaron las dos fracciones en un tubo Falcon estéril de 50 ml, junto con las fracciones con las fracciones correspondientes del tubo de gradiente adicional; a continuación se añadió 1xHDS se añadió hasta un volumen total de aproximadamente 50 ml. Se centrifugó el tubo a 1000 rpm durante 10 minutos. Se descartó el sobrenadante y se volvió a suspender en 10 ml de 1 x HDS. Se añadieron 40 ml más de 1 x HDS y se repitió la etapa de centrifugación. Se volvió a suspender el aglomerado celular cuidadosa pero completamente en 50 ml de DMEMF12-FB Sal al 5%.
Se recontó una alícuota pequeña de suspensión celular en un hemocitómetro. El medio de recubrimiento DMEM/F12-FBS se aspire de las places de cultivo de tejido. Se añadieron los cardiomiocitos a las placas a una densidad de plaqueado de 7,5 x 104/pocillo por 96 pocillos en 200 \muL y 6 x 10^{4}/pocillo por 24 pocillos en 1 ml. Se incubaron los cultivos a 37ºC con CO_{2} al 5% durante toda la noche. Se retiró el medio original y se añadió DMEM/F12-FBS al 5% nuevo a cada cultivo, antes de la incubación a 37ºC con CO_{2} al 5% durante 48 horas más antes del uso.
B. Ensayo de contractilidad
Se emplearon los siguientes materiales
\bullet DMEM-F12 Completo: DMEM/F12, polvo, 1:1 conteniendo glutamina y clorhidrato de piridoxina (disponible de Life Technologies-Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA). Se mezcló suficiente polvo para preparar un litro de tampón y 2,43 g de bicarbonato de sodio en 950 ml de agua calidad cultivo de tejido. Se ajustó el pH a 7,2 con HCl 1 M y se añadió el agua restante para preparar 1 litro. Tras la esterilización del filtro, se añadieron 10 ml de 100X Penicilina/Estreptomicina, 2,5 ml de 4 mg/ml de Transferrina, 250 \mul de 4 mg/ml de Insulina y 30,7 mg of bromodeoxiuridina, y se incubó la mezcla a 37ºC Antes del uso.
\bullet se prepara glucosa 1 mM en DMEM a partir de DMEM sin L-glutamina, sin glucosa, sin piruvato de sodio (disponible de Life Technologies).
\bullet 20 \muM de Fluo-4: Éster AM Celular permanente de Fluo-4 (disponible como un polvo seco que se va a almacenar a -20ºC, de Molecular Probes-Eugene, OR). Este tinte fluorescente es sensible a la luz y deberá mantenerse reciente en DMSO 1 mM antes del uso para evitar la degradación por la luz.
\vskip1.000000\baselineskip
Se aislaron cardiomiocitos neonatales como se ha descrito más arriba. Se plaquearon los cardiomiocitos en formato de 96 pocillos (places de fondo transparente negro) a una densidad de 7,5 x 10^{4} por pocillo y crecieron durante 2 días en presencia de FBS al 5% antes del uso en el ensayo.
Se simuló la isquemia fisiológica colocando los cardiomiocitos colocando los cardiomiocitos en una cámara anaerobia (O_{2} al 0%, N_{2} al 85%, CO_{2} al 5% y H_{2} al 10%) en DMEM que contenía glucosa 1 mM. Se trataron las células control positivas con DMEM-F12 que contenía Glucosa 25 mM, que protege de la anoxia.
Se prepararon los compuestos de ensayo en DMEM-glucosa 1 mM en placas madre de 96 pocillos profundos y se diluyeron apropiadamente para el uso en el ensayo. Se retiraron los medio de las células y se sustituyeron con 200 \mul de cualquier de DMEM-F12 o DMEM 1 mM con o sin compuestos de ensayo. A continuación se colocaron las placasen el interior de una incubadora a 37ºC en la cámara anaerobia y se incubaron durante 16 horas. A continuación se retiraron las places y se reoxigenaron mediante la adición de DMEM-F12 precalentado que contenía FBS al 5%. Debido a que el tratamiento anóxico puede dañar y/o matar las células, produciendo su desalojo de la parte inferior de los pocillos, se necesita la aspiración suave de los medios en esta etapa. A continuación se colocaron las células en una estufa normal a 37ºC y se incubaron durante dos horas para permitir la reoxigenación de las células.
Se añadió una solución de trabajo de Fluo-4 20 \muM a 1xHBSS precalentado. Las células se cargaron con Fluo-4 retirando en primer lugar los medios de las células y sustituyendo con 100 \mul de Fluo-4 20 \muM. Se trataron células control sin cargar en paralelo con 1xHBSS solo. A continuación se incubaron todas las células a 37ºC durante 30 minutos. Antes de realizar las medidas de fluorescencia, se lavaron las células en medio libre de indicador (HBSS) para eliminar cualquier tinte que no se asocia específicamente con la superficie celular. A continuación se incubaron las células durante 20 minutos más a temperatura ambiente. Se midió la fluorescencia basal de Fluo-4 usando un par de filtros de emisión a 485 nm y excitación a 538 nm sobre un fluorómetro de microplaca (Fluorskan^{TM}, Thermo Labsystems Oy, Helsinki, Finlandia). Se leyó cada pocillo durante 60 ms para obtener una lectura inicial, a continuación se retiró del fluorímetro y se estimuló hasta la contracción añadiendo 1xHBSS (que contiene CaCl_{2} 1,3 mM), seguido por incubación a 37ºC durante 90 minutos. A continuación se toma una segunda lectura de fluorescencia. La diferencia en las lecturas de fluorescencia de pre frente a postestimulación es indicativa de la actividad.
Resultados
Cuando se ensaya como se ha descrito más arriba, los compuestos de la presente invención, administrados a concentraciones de aproximadamente 100 \muM hasta aproximadamente 1000 \muM, incluyendo:
\bullet Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-oxo-2-pentiloxicarbonil-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet Ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet Ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(3-morfolin-4-il-2,3-dioxo-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet Éster etílico del ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet Éster etílico del ácido 3-(5-cloro-benzotiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet Éster etílico del ácido 3-(5-nitro-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico, y
\bullet Éster etílico del ácido 3-(5-metoxi-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
mostró la presencia de transitorios de calcio en aproximadamente 25 a aproximadamente 90% de las células, con cantidades indicativas de mantener la capacidad frente al daño isquémico y permitir a las células mantener su función contráctil.
Ejemplo 40 Modelo de isquemia cerebral mediante oclusión de la arteria cerebral media (MCAO) en ratas A. Preparación del animal
En estas pruebas se usan habitualmente ratas macho Wistar (Harlan, EN) pesando 300-350 g. Se dejó que los animales tuvieran acceso libre a agua y pienso comercial para roedores en condiciones de laboratorio estándar. La temperatura ambiente se mantuvo a 20-23ºC y la iluminación ambiental estuvo encendida en un ciclo de luz/oscuridad 12/12 horas. Los animales se aclimataron al entorno del laboratorio de 5 a 7 días antes del estudio, y ayunaron durante la noche anterior a la cirugía.
B. Oclusión de la arteria cerebral media (MCAO)
Se mantuvo anestesia por inhalación de isoflurano al 3,0% (Aerrane, Front Dodge, IA) en oxígeno 0 al 0,8%. Se afeitó el cuello del animal y se esterilizó antes de la operación. La temperatura corporal se controló y mantuvo a 37,5ºC +/- 1 grado mediante dispositivos externos de calentamiento y enfriamiento. Para disminuir la temperatura corporal, los animales se colocaron en una habitación refrigerada que usa hielo para enfriar el aire circulante. Durante todo el estudio se registró la temperatura corporal usando un transpondedor de temperatura (BMDS Inc., Seaford, DL) implantado subcutáneamente en el momento de la MCAO entre las escápulas de la rata, lo que permite al usuario leer la temperatura corporal mediante un escáner de bolsillo (BMDS Inc., Seaford, DL). La temperatura corporal se puede tomar también insertando la sonda de temperatura en el recto del animal. La temperatura corporal se registra cada hora durante 6 horas tras la oclusión, pero la temperatura se mide más frecuentemente para facilitar el mantenimiento de la temperatura normotérmica de los animales.
Los animales se sometieron a una MCAO de dos horas usando una técnica intraluminal modificada, como sigue. Se realizó una incisión en la línea central de la parte ventral del cuello para exponer las arterias carótidas externa e interna. Las arterias carótida derecha externa y común se ligaron con una sutura (seda 5/0, Carlisle Laboratories, Farmers Branch, TX) y la arteria interna derecha se liga temporalmente usando un clip microvascular (Fine Science Tool Inc., Foster City, CA). Se realizó una pequeña incisión en la arteria carótida común. Un filamento de nylon, con su punta redondeada por calor, se prepara a partir de hilo de pescar (Stren Fishing Lines, Wilmington, DE) y se inserta desde la arteria carótida común derecha. Se hace avanzar el filamento en la arteria carótida interna unos 18-20 mm desde el punto de bifurcación de las arterias interna y externas, y se ata fueretemente una sutura alrededor del filamento. Dos horas después de la oclusión, los animales se volvieron a anestesiar para permitir la reperfusion durante el resto del experimento eliminando el del filamento.
C. Administración del fármaco
Los compuestos de ensayo se pueden administrar por cualquiera de numerosas rutas, tal como se describe más abajo. Los compuestos se pueden administrar antes, durante o tras la oclusión, según sea apropiado para el protocolo.
a) Infusion Intracerebroventricular (ICV). El animal anestesiado se colocó en un aparato estereotáxico (Harvard Apparatus, S. Natick, MA). Se mantuvo anestesia por inhalación de isoflurano al 3,0% (Aerrane, Front Dodge, IA) en oxígeno al 0,8% durante todo el procedimiento. El escalpelo se limpió y esterilizó antes de la cirugía. Se realizó una incisión sagital en la línea central de aproximadamente 3 cm de longitud ligeramente tras los ojos para exponer el cráneo. El cráneo se rascó con una espátula roma para eliminar el tejido conectivo periostio. Se taladró un orificio colocado 1,5 mm lateral, 1 mm posterior a la izquierda del hueso temporal para marcar el ventrículo lateral izquierdo. Se insertó una cánula de infusion cerebral (ALZET-Alza, Palo Alto, CA) 4 mm dentro del orificio. Se ajustó la profundidad deseada uniendo separadores a la cánula. La cánula, unida a un catéter silástico de 4 cm (Helix Medical Inc., Carpinteria, CA), se mantiene en su sitio con cemento dental (Ketac-cement, Norristown, PA). El cateter se une tanto a una bomba osmótica de cebador colocada subcutáneamente entre las escápulas para infusión permanente o a una jeringuilla para una infusión corta.
b) Intravenosa (IV) Implantación de bomba osmótica son en la vena yugular. Se mantuvo anestesia por inhalación de isoflurano al 3,0% (Aerrane, Front Dodge, IA) en oxígeno al 0,8% durante todo el procedimiento. El cuello del animal se afeitó y esterilizó antes de la operación. Se realizó una incisión en la línea central de la parte ventral del cuello para exponer la vena yugular. La vena se aisla y ata con una sutura (seda 5/0, Carlisle Laboratories, Farmers Branch, TX) rostral respecto del punto de incisión, y se coloca un clip microvascular (Fine Science Tool Inc., Foster City, CA) cerca del corazón. Se realiza una pequeña incisión entre ambas ligaduras. Se introduce un catéter silástico de 2 cm (Helix Medical Inc.) unido a un tubo PE-60(Becton. Dickinson y Co. Sparks, MD) conectado a una bomba ALZET (Alza, Palo Alto, CA), y se hace avanzar 2 mm dentro de la vena yugular hacia el corazón. Se retiró el clip microvascular, y el catéter se asegura en su sitio con una sutura. (seda/0, Carlisle Laboratories, Farmers Branch, TX). La bomba se ubica en una bolsita hecha subcutáneamente entre las escápulas, permitiendo que el catéter alcance por el cuello la vena yugular con espacio suficiente para permitir el movimiento libre de cuello y cabeza.
c) Infusion IV vía vena femoral. Se mantuvo anestesia por inhalación de isoflurano al 3,0% (Aerrane, Front Dodge, IA) en oxígeno al 0,8% durante todo el procedimiento. La parte exterior de la vena femoral derecha se afeitó u esterilizó antes de la cirugía. Se practicó una incisión de 3 cm en la región inguinal derecha y se aisló la vena femoral. Se practicó una pequeña incisión en la vena femoral, temporalmente ligada con un clip microvascular, para introducir y hacer avanzar un catéter de polietileno (PE50) (Becton Dickinson y Co. Sparks, MD). El catéter se asegura en su sitio con una sutura (seda 5/0, Carlisle Laboratories, Farmers Branch, TX). El otro extremo del catéter se une a una jeringa llena con solución sarina heparinizada como bolo de inyección. Usando un hemostato, se fabrica un bolsillo subcutáneamente en la espalda del animal de forma que el catéter PE catheter se pueda llevar hasta el punto de externalizacion en el nacimiento del cuello tanto para una inyección en bolo o inyección continua mediante una bomba osmótica.
d) Inyección intraperitoneal (IP). Se mantiene una rata despierta en una posición estándar sujeta con la mano, se inyecta una aguja 23 3/4G en el cuarto derecho inferior del abdomen atravesando el peritoneo, ligeramente desplazado de la línea central. Para evitar la inyección en un órgano, el émbolo de la jeringa se retira ligeramente. Si no se retira fluido, el contenido de la jeringa se vacía en la cavidad abdominal.
e) Sonda nasogástrica. Se unió una sonda nasogástrica estándar para rata (Popper & Sons Inc, NY) a una jeringuilla hipodérmica de 3 cc. El animal se sujetó por el hombro en posición vertical. El tubo de alimentación se colocó en la boca, y a continuación se hizo avanzar hasta alcanzar el estómago (la longitud aproximada de inserción se midió antes de la alimentación). El contenido de la jeringa se suministró lentamente, y a continuación se retiró el tubo.
D. Evaluación del comportamiento
Una hora tras MCAO, el animal se sujetó suavemente por la cola y se observó la flexión de la pata delantera. A continuación, el animal se pone en el suelo para observar la forma de caminar, sólo los animales que alcanzan una puntuación de 3 en el sistema de gradación de Bederson (Tabla 1) se incluyeron en el estudio.
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TABLA 1
30
E. Evaluación del daño isquémico
Veinticuatro horas tras MCAO, o más en algunos experimentos, los animales se sacrificaron mediante asfixia con CO_{2} (hielo seco). El cerebro se extrae rápidamente del cráneo, usando procedimientos convencionales, se aclara con solución salina muy fría, y se coloca en un microtomo para tejido cerebral de rata (ASI instrument, MI). Se cortaron siete láminas de 2 mm de espesor de la corona de cada cerebro usando cuchillas. Las láminas se sumergieron en solución salina al 0,9% conteniendo cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolumo (TTC) al 1,0% (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) y se incubaron en un baño de agua a 37ºC durante 30 minutos.
Tras la tinción, cada lámina de 2 mm se fotografió con una cámara TMC-7 (JH Technologies, Ca) que estaba directamente conectada a un ordenador personal para capturar y guardar la imagen de cada lámina de cerebro. Esta imagen se usó para las medidas de las regiones de interés usando un sistema de procesamiento de imagen por ordenador (Metamorph).
Para medir cada área, se selecciona la región de interés con una herramienta de selección de manual, el área se calcula automáticamente seleccionando el comando de medir. Las medidas de las regiones de interés son hemisferio derecho, hemisferio izquierdo, infarto total, infarto subcortical, penumbra total y penumbra subcortical. Tras medir todas las regiones de interés de las siete láminas del cerebro, se ordenan por número de lámina y las correspondientes regiones de interés usando una macro de Excell denominada estadística final. Esta macro calcula también la penumbra cortical, el infarto cortical y el daño total isquémico para cada lámina, las correspondientes áreas de cada cerebro de rata se suman para producir una medida única para cada área. Puesto que el hemisferio ipsilateral se hincha tras la MCAO, se calcula el volumen del edema y se recoge como diferencia volumétrica entre los hemisferios derecho e izquierdo de cada lámina de cerebro. Usando el % de hinchado hemisférico se corrigen todos los volúmenes respecto del edema.
El volumen del daño se determina usando los cálculos siguientes para el cerebro de cada rata.
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31 
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F. Análisis estadístico
Se escoge el tamaño de la muestra para conseguir una probabilidad del 90% de resultados significativos. Las medias que representan la misma región de interés en siete láminas de cada cerebro de rata se suman entre sí para obtener una única medida del infarto total, infarto subcortical, infarto cortical, penumbra total, penumbra subcortical, penumbra cortical, daño isquémico total y edema en cada animal. Los grupos de datos se presentan como promedio +/-SEM. Las diferencias en niveles de p<0,05 se consideran estadísticamente significativas. Entre grupos, las comparaciones de cada región de interés se realizan mediante prueba de la t de Student no emparejada (entre dos grupos) o ANOVA monovariante seguido por comparaciones múltiples post hoc de Bonferroni o mediante la prueba no paramétrica de Dunnett (entre los grupos de control y tratado con fármaco).
Resultados
Cuando se ensayaron como se ha descrito más arriba, los compuestos de la presente invención, incluyendo:
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hexiloxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-carboxi-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-butoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoill-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hidroxiimino-3-oxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-(1-metoxicarbonil-2-fenil-etilcarbamoil)-2-oxo-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(1 H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(5-nitro-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(5-metoxi-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico, y
\bullet éster etílico del ácido 3-(4,5-dihidro-tiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
proporcionaron una reducción del volumen total del infarto de al menos aproximadamente 20% hasta aproximadamente 80% a dosis en el intervalo de menos de aproximadamente 1 mg/kg a menos de aproximadamente 10 mg/kg.
Ejemplo 41 Modelo del Infarto de miocardio: ligadura de la coronaria izquierda (Rata)
Se dejó que ratas macho Sprague-Dawley pesando 250-320 g tuvieran acceso libre a agua y pienso comercial para roedores en condiciones de laboratorio estándar. La temperatura ambiente se mantuvo a 20-23ºC y la iluminación ambiental estuvo encendida en un ciclo de luz/oscuridad 12/12 horas. Los animales se aclimataron al entorno del laboratorio de 5 a 7 días antes del estudio, y ayunaron durante la noche anterior a la cirugía.
Procedimiento quirúrgico para estudios de agudo: las ratas se anestesiaron con uretano (1,2-1,5 g/kg). Se mantuvo la temperatura central del cuerpo a 37ºC mediante una manta térmica. Se afeitó el área quirúrgica, y se realizó una incisión en la línea central ventral para exponer las zonas de la tráquea y yugular. Se colocó un catéter (PE50) en la yugular para administración del compuesto y anestesia de mantenimiento. Se perforó la tráquea, y se insertó un catéter intravenoso modificado calibre 14-16-gauge y se mantuvo en su sitio como tubo endotraqueal. El animal se colocó en decúbito lateral derecho, y se colocó inicialmente en un ventilador Harvard con un volumen corriente de
5-10 ml/kg. Se suministró un 100% de O_{2} a los animales mediante el ventilador. Se colocaron los electrodos de ECG para registran un ECG estándar Lead II. El emplazamiento quirúrgico se lavó con un hisopo con alcohol swab, y se realizó una incisión en la piel en el costillar a la altura del 4º-5º espacio intercostal. Los músculos subyacentes se resecaron con cuidado para evitar la vena torácica lateral para exponer los músculos intercostales. Se penetró en la cavidad del pecho a través del 4º-5º espacio intercostal, y se abrió la incisión para permitir la visualización del corazón. Se abrió el pericardio para exponer el corazón. Una sutura de seda 6-0 con aguja roma se pasó alrededor de la arteria coronaria izquierda cerca de su origen, que queda en contacto con el margen izquierdo del cono pulmonar, a aproximadamente 1 mm desde la inserción del apéndice auricular izquierdo. Se colocó una pieza de tubuladura sobre la sutura para formar un oclusor. Se obturó la arteria coronaria durante 30 minutos deslizando la tubuladura hacia el corazón hasta encontrar resistencia, y manteniéndola en su sitio con una pinza vascular. Se controló el ECG buscando cambios S-T indicativos de isquemia. Tras 30 minutos se retiró el oclusor, dejando la sutura en su sitió. Se controló el ECG durante los primeros 10 minutos de reperfusión. La rata se movió al ventilador de control de presión para el resto del protocolo. Las ratas se ventilaron con un pequeño ventilador animal con una presión punta en la inspiración de 10-15 cm H_{2}O y tasa de ventilación de 60-110 respiraciones/min. Se dejó reperfundir el corazón durante 90 minutos.
Procedimiento quirúrgico para el estudio de 24 horas. Las ratas se anestesiaron con Ketamina/Xilazine IP (95 y 5 mg/kg) y se intubaron con un catéter intravenoso modificado calibre 14-16. Se controló el nivel de anestesia cada 15 minutos por pinchazo en un dedo. Se mantuvo la temperatura central del cuerpo a 37ºC mediante una manta térmica. El área quirúrgica se afeitó y lavó. Se realizó una incisión en la línea central ventral para exponer las zonas de la tráquea y yugular. Se colocó un catéter (PE50) en la yugular para administración del compuesto y anestesia de mantenimiento. Se perforó la tráquea, y se insertó un catéter intravenoso modificado calibre 14-16-gauge y se mantuvo en su sitio como tubo endotraqueal. El animal se colocó en decúbito lateral derecho, y se colocó inicialmente en un ventilador Harvard con un volumen corriente de 5-10 ml/kg o un ventilador de presión controlada con una presión inspiratoria punta de 8-15 cm H_{2}O y tasa respiratoria de 60-110 respiraciones/min. Se suministró un 100% de O_{2} a los animales mediante el ventilador. Se colocaron los electrodos de ECG para registrar un ECG estándar Lead II. El emplazamiento quirúrgico se lavó con un hisopo con alcohol, y se realizó una incisión en la piel en el costillar a la altura del 4º-5º espacio intercostal. Los músculos subyacentes se resecaron con cuidado para evitar la vena torácica lateral para exponer los músculos intercostales. Se penetró en la cavidad del pecho a través del 4º-5º espacio intercostal, y se abrió la incisión para permitir la visualización del corazón. Se abrió el pericardio para exponer el corazón. Una sutura de seda 6-0 con aguja roma se pasó alrededor de la arteria coronaria izquierda cerca de su origen, que queda en contacto con el margen izquierdo del cono pulmonar, a aproximadamente 1 mm desde la inserción del apéndice auricular izquierdo. Se colocó una pieza de tubuladura sobre la sutura para formar un oclusor. Se obturó la arteria coronaria durante 30 minutos deslizando la tubuladura hacia el corazón hasta encontrar resistencia, y manteniéndola en su sitio con una pinza vascular. Se controló el ECG buscando cambios S-T indicativos de isquemia. Tras 30 minutos se retiró el oclusor, dejando la sutura en su sitió. Se controló el ECG durante los primeros 10 minutos de reperfusión. La incisión se cerró en tres capas. El catéter IV se retiró o tuneló a través de la piel y se saco al exterior entre las escápulas para permitir la extracción de sangre o terapia adicional con fármacos. La rata se ventiló hasta que fue capaz de hacerlo por sí misma. Las ratas se extubaron y recuperaron en una almohada térmica. Tras despertarse, se devolvieron a su(s) jaula(s).
Los animales podían recibir Buprenorfina (0,01-0,05 mg/kg SQ) como analgesia posquirúrgica. Tras el tiempo de reperfusión determinado (24 horas) los animales se anestesiaron y se extrajeron los corazones bajo anestesia profunda.
Protocolos de tratamiento
Dieta. Los animales se alimentaron con pienso normalizado hasta o después de la ligadura coronaria. La extensión del tratamiento varió con el estudio. Las dosis se calcularon en función de un consumo medio de 15 g de alimento por día para una rata de 300 g. Se controlaron los pesos de las ratas durante el estudio. Se pesó el alimento no consumido para estimas los índices de ingesta.
Sonda nasogástrica. Los animales se dosificaron oralmente mediante sonda nasogástrica. La longitud y frecuencia del tratamiento varían con el estudio. Se unió una sonda nasogástrica estándar para rata (Popper & Sons Inc, NY) a una jeringuilla hipodérmica de 3 cc. El animal se sujetó por el hombro en posición vertical. El tubo de alimentación se colocó en la boca, y a continuación se hizo avanzar hasta alcanzar el estómago (la longitud aproximada de inserción se midió antes de la alimentación). El contenido de la jeringa se suministró lentamente, y a continuación se retiró el tubo.
Tratamiento IV. Se realizó una incisión en la línea ventral para exponer la zona de la yugular. Se colocó un catéter (PE50) en la yugular para administración del compuesto Los animales se dosificaron mediante inyección de bolo y/o infusión continua. El tiempo y duración del tratamiento variaron con el protocolo.
Procesado del tejido
Tras reperfusión, cada animal recibió 200 unidades de heparina IV bajo anestesia general y se extrajo el corazón y se colocó en solución salina fría. Tras la retirada, se ligó la arteria con la sutura que ya estaba en su sitió. El corazón se colocó en un equipo de perfusión y se infundió tinte Evans Blue delineando la zona en riesgo. A continuación, el corazón se cortó en cinco láminas transversales de 2 mm de espesor del apex a la base. Las láminas se incubaron en cloruro de trifeniltetrazolio al 1% (TTC) en solución salina al 0,9% durante 20 minutos a 37ºC. El tetrazolio reacciona con NADH en presencia de enzimas dehidrogenasa haciendo que los tejidos viables se tiñan con un color rojo oscuro y que se distingan fácilmente del tejido necrosado infartado pálido-no teñido. Las láminas se colocan con el apex boca abajo en la tapa de una placa petri pequeña para el procedimiento de tinción. La parte baja de la placa se colocó sobre las láminas para mantenerlas planas. Las láminas se fotografiaron en orden desde el apex a la base, con la base en la parte de arriba. Las zonas del tejido infartado, zona de riesgo y el ventrículo izquierdo completo se determinaron usando un sistema informático de análisis de imagen. Se sumaron las áreas totales de cada región para dar un total para el corazón completo. El tamaño del infarto se expresa tanto en porcentaje del ventrículo y como área en riesgo.
Análisis estadístico
Se representaron los grupos de datos como promedio +/- SEM. Se realizaron comparaciones entre grupos de tratamiento usando ANOVA considerándose significativo un p < 0,05 considered. Se hicieron comparaciones post hoc usando tanto la prueba de Dunnett como la prueba de Tukey.
Resultados
Cuando se ensayaron como se ha descrito más arriba, los compuestos de la presente invención, incluyendo:
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-butoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bulletácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico, y
\bullet éster etílico del ácido 3-(5-cloro-benzotiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
mostraron actividad en un intervalo de aproximadamente 15% a aproximadamente 55% de reducción en el tamaño del infarto.
Ejemplo 42 Evaluaciones del comportamiento sensorimotor A. Test de fuerza de prensión en la pata delantera y posterior en ratas
Animales con infarto cerebral inducido mediante oclusión unilateral transitoria o permanente de la arteria media cerebral (MCA) y ratas del grupo quirúrgico de referencia se ensayaron para fuerza de prensión, un modelo normalizado de función neuromuscular e integration sensorimotora, usando un medidor informatizado de fuerza de prensión para tatas (Dual Stand Model, Columbus Instruments, Columbus, OH).
Los animales se llevaron a la sala de pruebas durante 30 minutos antes de la misma. Antes de la prueba, cada medidor se calibró con un conjunto de pesas conocido y el aparato se ajustó para el tamaño del animal, de acuerdo con las introducciones del fabricante. Las medidas de la pata delantera se realizaron con el medido en modo tensión punta para congelar la lectura a medida que el sujeto se empuja con la barra de prensión. Las mediciones en la pata trasera se realizaron con el medidor en modo punta de compresión para congelar la lectura a medida que las patas traseras del suelo empujan sobre la barra hacia el medidor. Cada animal es sujeto por la mano del investigador a medida que empuja sobre las barras de prensión. usando una técnica consistente, dejando las patas delanteras y traseras libres para agarrarse a las barras de prensión.
Las pruebas se realizaron el día posquirúrgico 2 y se repitieron, en modo aleatorio ciego, dos veces a la semana en un intervalo definido. Normalmente, se toman tres lecturas sucesivas para cada animal, con un intervalo entre intentos lo suficientemente largo para registrar los datos y poner ambos medidores a cero para el siguiente intento.
B. Prueba Rota-Rod en ratas
Aparato: Cinta sin fin Rota-Rod para ratas (7750 Accelerating Model, de UGO BASILE, COMERIO-ITALIA).
Procedimiento: Animales con infarto cerebral inducido mediante oclusion unilateral transitoria o permanente de la arteria media cerebral (MCA) y ratas del grupo quirúrgico de referencia se ensayaron en este estudio usando una cinta sin fin Rota-Rod para ratas (7750 Accelerating Model, UGO Basile, Comerio, Italia). Los animales se llevaron a la sala de pruebas durante 30 minutos antes de la misma. Cada rata realizó 2-3 carreras de aprendizaje en intervalos de 1-2 minutos antes de la prueba.
El cilindro del aparato sepuso en movimiento antes de colocar las ratas en posición. El motor se ajustó a velocidad constante ajustada a 7700 en modo RESET, y las ratas se colocaron, una por una, en sus secciones.
Las pruebas se realizaron el día posquirúrgico 2 y se repitieron, en modo aleatorio ciego, dos veces a la semana en un intervalo definido. Normalmente, se toman tres lecturas sucesivas para cada animal, con un intervalo entre intentos lo suficientemente largo para registrar los datos y poner ambos medidores a cero para el siguiente intento.
Los compuestos de la presente invención mostraron actividad cuando se ensayaron mediante este procedimiento.
Ejemplo 43 Modelo de Insuficiencia cardiaca congestiva Preparación experimental
Se usaron en este experimento ratas macho Sprague-Dawley CD (Charles River) de 225-275 g. Se dejó que los animales tuvieran acceso libre a agua y pienso comercial para roedores en condiciones de laboratorio estándar. La temperatura ambiente se mantuvo a 20-23ºC y la iluminación ambiental estuvo encendida en un ciclo de luz/oscuridad 12/12 horas. Los animales se aclimataron al entorno del laboratorio de 5 a 7 días antes del estudio. Los animales ayunaron durante la noche anterior a la cirugía.
Los animales se anestesiaron con ketamina/xilazine IP (95 y 5 mg/kg) y se intubaron con un catéter intravenoso modificado calibre 14-16. Se controló el nivel de anestesia por pinchazo en un dedo. Se mantuvo la temperatura central del cuerpo a 37ºC mediante una manta térmica. El área quirúrgica se pinzó y lavó. El animal se colocó en decúbito lateral derecho, y se colocó inicialmente en un ventilador con una presión inspiratoria punta de 8-15 cm H_{2}O y tasa respiratoria de 60-110 respiraciones/min. Se suministró un 100% de O_{2} a los animales mediante el ventilador. Se colocaron los electrodos de ECG para registrar un ECG estándar Lead II. El emplazamiento quirúrgico se lavó con un lavador quirúrgico y alcohol. Se realizó una incisón en la piel en el costillar a la altura del 4º-5º espacio intercostal. Los músculos subyacentes se resecaron con cuidado para evitar la vena torácica lateral para exponer los músculos intercostales. Se penetró en la cavidad del pecho a través del 4º-5º espacio intercostal, y se abrió la incisión para permitir la visualización del corazón. Se abrió el pericardio para exponer el corazón. Una sutura de seda 6-0 con aguja roma se pasó alrededor de la arteria coronaria izquierda cerca de su origen, que queda en contacto con el margen izquierdo del cono pulmonar, a aproximadamente 1 mm desde la inserción del apéndice auricular izquierdo. La arteria coronaria se ocluyó atando la sutura alrededor de la arteria. Se controló el ECG buscando cambios S-T indicativos de isquemia. Si el animal desarrolla fibrilación ventricular, se usó un suave masaje cardiaco para llevar al animal a un ritmo normal. La incisión se cerró en tres capas. La rata se ventiló hasta que fue capaz de hacerlo por sí misma. Las ratas se extubaron y recuperaron en una almohada térmica. Tras despertarse, se devolvieron a su(s) jaula(s).
Los animales recibieron recibir buprenorfina (0,01-0,05 mg/kg SQ) como analgesia posquirúrgica. Tras despertar, volvieron a su jaula. Los animales se vigilaron diariamente para signos de infección o dolor. Los animales infectados o moribundos fueron sacrificados. Los animales se pesaron una vez a la semana.
Protocolos de tratamiento
Dieta. Los animales se alimentaron con pienso normalizado hasta o después de la ligadura coronaria. La extensión del tratamiento varió con el estudio. Las dosis se calcularon en función de un consumo medio alimento por día. Se controlaron los pesos de las ratas durante el estudio. Se pesó el alimento no consumido para estimas los índices de ingesta.
Sonda nasogástrica. Los animales se dosificaron oralmente mediante sonda nasogástrica. La longitud y frecuencia del tratamiento varían con el estudio. Se unió una sonda nasogástrica estándar para rata (Popper & Sons Inc, NY) a una jeringuilla hipodérmica de 3 cc. El animal se sujetó por el hombro en posición vertical. El tubo de alimentación se colocó en la boca, y a continuación se hizo avanzar hasta alcanzar el estómago (la longitud aproximada de inserción se midió antes de la alimentación). El contenido de la jeringa se suministró lentamente, y a continuación se retiró el tubo.
Agua de bebida. El compuesto se puede disolver también en el agua de bebida. Se controló el consumo de agua. En el caso de un compuesto de gusto amargo, se pueden añadir agentes aromatizantes al agua tanto del grupo placebo como del grupo de tratamiento. En el caso de compuestos insolubles, se pueden usar agentes solubilizantes (es decir, 0,015% cremofr,0,015% alcohol).
Bombas Alzet. Se pueden implantar bombas Alzet usando técnicas asépticas en el peritoneo o subcutáneamente tras las escápulas. Las bombas se implantan usando lsoflurano como anestesia. Se puede usar implante en serie para estudios extenso.
Medidas que no forman parte de las reivindicaciones
In vivo. Tras 6-12 semanas, los weeks animales se anestesiaron con Ketamina/Xilazine (95 mg/kg y 5 mg/kg), y se colocó un catéter en la arteria carótida derecha y se hizo avanzar hasta el ventrículo derecho para medidas hemodinámicas. El catéter se unió a un transductor de presión calibrado contra un manómetro de mercurio inmediatamente antes de usar. Las lecturas se realizaron mediante un sistema de análisis de datos DATAQ. Se registraron trazas de datos, y se analizaron para el ritmo cardiaco, presión sistólica y diastólica del ventrículo izquierdo, presión desarrollada por el ventrículo izquierdo y y dP/dt max y min. Se usó un promedio de al menos cinco picos para determinar los valores de presión sistólica y diastólica final del ventrículo izquierdo. La presión desarrollada por el ventrículo izquierdo se determinó restando la presión diastólica final de la presión sistólica del ventrículo izquierdo. El ritmo cardiaco se determinó a partir del espectro de frecuencias de una muestra de 5 segundos. Tras tomar las medidas, se extrajeron 2 ml de sangre y se colocaron en tubos de suero y plasma para posible análisis.
Ex vivo. Tras extirpación, el corazón se colocó en solución salina fría para detener el latido, y a continuación se recortaron y pesaron. El peso del corazón se muestra como peso total y como porcentaje del peso corporal total. Tras la extirpación, corazón, pulmones e hígado se pesaron y secaron durante la noche para determinar la relación de húmedo a seco.
El corazón se laminó, y la lámina nº 3 se incubó en cloruro de trifeniltetrazolio al 1% (TTC) en solución salina al 0,9% durante 20 minutos a 37ºC. El tetrazolio reacciona con NADH en presencia de enzimas dehidrogenasa haciendo que los tejidos viables se tiñan con un color rojo oscuro y que se distingan fácilmente del tejido necrosado infartado pálido-no teñido. La lámina se colocó con el apex boca abajo en la tapa de una placa petri pequeña para el procedimiento de tinción. La parte inferior de la placa se colocó sobre las láminas para mantenerlas planas. La lámina se fotografió. Las zonas del tejido infartado, ventrículo izquierdo y derecho se determinaron usando un sistema informático de análisis de imagen. Se sumaron las áreas totales de cada región para dar un total para el corazón completo. El tamaño del infarto se expresa tanto en porcentaje del ventrículo y como área en riesgo. El resto de las secciones se dividieron en ventrículo izquierdo y derecho y se congelaron para pruebas de TBARS y glutationa.
Análisis estadístico
Se mostraron los grupos de datos como promedio +/-SEM. Las comparaciones entre grupos de tratamiento se realizaron usando ANOVA considerándose significativo p < 0,05. Las comparaciones post hoc se realizaron mediante la prueba de Dunnett o la prueba de Tukey. Se generaron curvas de supervivencia usando Graph Pad Prism. Para cada valor de X (tiempo) Prism muestra la fracción que sigue viva. Muestra también el error estándar. Prism calcula fracciones de supervivencia usando el límite del producto o el procedimiento de Kaplan-Meier.
Los compuestos de la presente invención, administrados en el agua de bebida con concentraciones en un intervalo de 10 a 1000 mg/l con tratamiento iniciado 1 semana después de la ligadura mostraron actividad cuando se ensayaron mediante este procedimiento.

Claims (71)

1. Un compuesto de Fórmula I:
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en la que:
A es: alquilo., cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, nucleósido, aminoácido, di-, tri- o tetra-péptido, -CH_{2}-C(O)-C(O)-O-R' o -CH=C(OH)-C(O)-O-R';
X es: -N(R')-, -S-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, -S-Y-S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo;
Y es: arilo, heteroarilo, nucleósido, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido;
W es: =O, =N-OR^{a}, =N-NR^{b}R^{c}, o -N(OH) -R^{d};
Z es: -OR, -SR, o -NR^{b}R^{c};
R' es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o arilo;
R es: hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo o heterocicloalquilo;
R^{a} es: hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, o alquenilo;
R^{b} se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo o cicloalquilo;
R^{c} es: independientemente seleccionado entre hidrógeno o alquilo; y
R^{d} es: hidrógeno, acilo o alquilo; o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos pueden formar un anillo de 5- a 7-miembros, opcionalmente incorporando uno o dos heteroátomos adicionales al anillo elegidos entre N, S, u O, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por =O, =S, acilo, alquenilo, alquilo, (alcoxi)carbonilo, y (amino)carbonilo;
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables, con la condición de que cuando X es -S-, W es =O, y Z es OH, A no es 6-amino-3,5-diciano-4-fenil-piridin-2-ilo.
para uso en el tratamiento de un mamífero que tiene una dolencia caracterizada por estrés oxidativo, en el que el compuesto se usa en una cantidad terapéuticamente eficaz.
2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que:
A es: alquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, un aminoácido, o di-, tri- o tetra-péptido;
X es: -N(H)-, -S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo;
w es: =O u =N-OR^{a};
Z es: -OR, o -NR^{b}R^{c};
R es: hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, o aralquilo;
R^{a} es: hidrógeno, alquilo, arilo, o aralquilo;
R^{b} es: hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo o cicloalquilo;
R^{c} es: hidrógeno o alquilo; y
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos pueden formar un anillo de 5 ó 6 miembros, opcionalmente incorporando N u O como heteroátomo adicional del anillo, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre el grupo constituido por acilo y alquilo.
3. El compuesto de la reivindicación 2, en el que:
A es: un aminoácido seleccionado entre Ala, Asp, Cys, Glu y Gly, o un di-o tri-péptido, los aminoácidos del cual se seleccionan entre Ala, Asp, Cys, Glu y Gly.
4. El compuesto de la reivindicación 3, en el que:
A es: el tri-péptido Glu-Cys-Gly; y
X es: un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys.
5. El compuesto de la reivindicación 4, en el que:
R es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{8}; y
R^{a} es: hidrógeno, alquilo o alquenilo C_{1} a C_{8}, fenilo o aralquilo.
R^{b} es: alquilo C_{1} a C_{8}, aralquilo o cicloalquilo; y
R^{c} es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{4}; o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de 5 miembros, o un anillo de 6 miembros opcionalmente incorporando O como heteroátomo adicional del anillo, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre el grupo constituido por acilo y alquilo.
6. El compuesto de la reivindicación 5, en el que el compuesto de Fórmula I se selecciona entre:
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-oxo-2-pentiloxicarbonil-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-(1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hexiloxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-carboxi-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-butoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-etoxicarbonil-2-(4-nitro-benciloxiimino)-etilsulfanil]etilcarbamoil}-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-fenoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-etoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de di-HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-terc-butoxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de di-HCl,
\bullet ácido 4-[2-(2-aliloxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-2-aminobutírico o su sal de di-HCl,
\bullet 2-amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[3-(4-metil-piperidin-1-il)-2,3-dioxo-propilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico ácido,
\bullet ácido 2-amino-4-[,1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hidroxiimino-3-oxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-dietilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-(1-metoxicarbonil-2-fenil-etilcarbamoil)-2-oxo-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-ciclohexilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-bencilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(3-morfolin-4-il-2,3-dioxo-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-pirrolidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-octilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet metil éster del ácido 1-(3-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propionil}-pirrolidina-2-carboxílico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hexilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet metil éster del ácido 2-{3-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propionilamino}-3-metil-pentanoico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-dimetilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico, y
\bullet ácido 2-amino-4-(1-(carboximetil-carbamoil)-2-{2-[2-(4-hidroxi-fenil)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-2oxo-etilsulfanil}-etilcarbamoil)-butírico.
7. El compuesto de la reivindicación 2, en el que:
A es: alquilo sustituido, arilo sustituido, heteroarilo, heterociclilo, o heterocicloalquilo sustituido.
8. El compuesto de la reivindicación 7, en el que:
R es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{8}.
R^{a} es: hidrógeno, alquilo C_{1} a C_{8}, o aralquilo.
R^{b} es: alquilo C_{1} a C_{8}, aralquilo o cicloalquilo; y
R^{c} es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{4}; o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de 6 miembros, opcionalmente incorporando O como heteroátomo adicional del anillo, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre el grupo constituido por acilo y alquilo.
9. El compuesto de la reivindicación 8, en el que el compuesto de Fórmula I es seleccionado entre:
\bullet ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 2-oxo-3-(4-oxo-3,4-dihidro-quinazolin-2-ilsulfanil)-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-[1-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil)-2-hidroxi-acrílico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(benzoselenazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(5-cloro-benzotiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(5-nitro-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(5-metoxi-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(4,5-dihidro-tiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet metil éster del ácido 2-hidroxiimino-3-p-tolilsulfanil-propiónico,
\bullet ácido 2-hidroxiimino-3-p-tolilsulfanil-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 2-hidroxiimino-3-p-tolilsulfanil-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(5-cloro-benzotiazol-2-ilsulfanil)-2-hidroxiimino-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 2-hidroxiimino-3-(5-metoxi-1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-hidroxiimino-propiónico,
\bullet 2-hidroxiimino-N-fenil-3-p-tolilsulfanil-propionamida, y
\bullet 1-piperidin-1-il-3-p-tolilsulfanil-propane-1,2-diona 2-oxima.
10. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el estrés oxidativo se selecciona entre: isquemia incluyendo apoplejía, isquemia cerebral, isquemia retinal, isquemia miocardial, infarto de miocardio y disfunción cognitiva postquirúrgica; trastornos neurodegenerativos incluyendo Alzheimer, demencia y enfermedad de Parkinson; neuropatía periférica, incluyendo lesión de la espina dorsal, lesión en la cabeza y trauma quirúrgico; trastornos inflamatorios incluyendo diabetes, enfermedad renal, síndrome premenstrual, asma, trastornos inflamatorios cardiopulmonares, insuficiencia cardiaca, artritis reumatoide, osteoartritis, fatiga muscular y cojera intermitente, y para la conservación de tejido de aloinjerto y órganos para el transplante.
11. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el estrés oxidativo se selecciona entre: isquemia miocardial, infarto de miocardio, trastornos inflamatorios cardiopulmonares; insuficiencia cardiaca.
12. El compuesto de la reivindicación 11, en el que:
W es: =O;
y Z es: -OR.
13. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el estrés oxidativo se selecciona entre: apoplejía, isquemia cerebral, isquemia retinal, neuropatía periférica, incluyendo lesión de la espina dorsal, lesión en la cabeza y trauma quirúrgico; y trastornos neurodegenerativos incluyendo Alzheimer, demencia y enfermedad de Parkinson.
14. El compuesto de la reivindicación 13, en el que:
W es: =O ó =N-OR^{a}; y
Z es: -OR, o -NR^{b}R^{c}.
15. El compuesto de la reivindicación 14, en el que:
W es: =N-OR^{a} ; y
Z es: -NR^{b}R^{c}.
16. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el estrés oxidativo se selecciona entre: diabetes; enfermedad renal; síndrome premenstrual; asma, artritis reumatoide; fatiga muscular; y cojera intermitente; y para la conservación de tejido de aloinjerto y órganos para el transplante.
17. un compuesto de Fórmula II:
\vskip1.000000\baselineskip
33
en la que:
R^{1} es: hidrógeno, alquilo, arilo, -C(O)-O-R', -CH_{2}-SH, -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o-CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z';
R^{2} es: hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, acilo
R^{3} es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo inferior, aralquilo, -CH_{2}-SH, -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z;
R^{4} es hidrógeno, alquilo inferior, aralquilo, heteroararalquilo, -CH_{2}-SH, -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z;
R^{5} es: hidrógeno, alquilo, o arilo;
R' es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, o arilo;
W es: =O, =N-OR^{a}, =N-NR^{b}R^{c}; o -N(OH)-R^{d};
Z es: -OR, -SR, o -NR^{b}R^{c}, R es: hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo o heterocicloalquilo;
R^{a} es: hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, o alquenilo;
R^{b} es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo o cicloalquilo;
R^{c} es: independientemente seleccionado entre hidrógeno o alquilo; y
R^{d} es: hidrógeno acilo o alquilo; o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos pueden formar una anillo de 5- a 7- miembros, opcionalmente incorporando uno o dos heteroátomos adicionales al anillo elegidos entre N, S, u O, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por =O, =S, acilo, alquenilo, alquilo, (alcoxi)carbonilo, y (amino)carbonilo;
k es 0, 1 ó 2;
m es: 0, 1 ó 2; y
n es: 0, 1, 2 ó 3.
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables, con la condición de que al menos uno de R^{1}, R^{3} o R^{4} es -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-SCH=C (OH)-C(O)-Z,-CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z, para uso en el tratamiento de un mamífero con una dolencia caracterizada por estrés oxidativo, en el que el compuesto se usa en una cantidad terapéuticamente eficaz.
18. El compuesto de la reivindicación 17, en el que:
R^{1} es: -C(O)-O-R' en la que R' es hidrógeno, o -CH_{2}-S-CH_{2}-C(O)-C(O)-O-R' o -CH_{2}-S-CH=C(OH)-C(O)-O-R' en la que R' es hidrógeno o alquilo inferior;
R^{2} es: hidrógeno;
R^{3} es -CH_{2}-SH, -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o
-CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z
R^{4} es: hidrógeno;
R^{5} es: hidrógeno o alquilo inferior;
W es: =O ó =N-OR^{a};
Z es: -OR o -NR^{b}R^{c};
R es: hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, o aralquilo;
R^{a} es hidrógeno o alquilo;
R^{b} es: alquilo C_{1} a C_{4}, fenilo o bencilo;
R^{c} es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{4}, o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de 6 miembros seleccionado entre 4opcionalmente sustituido-piperidin-1-ilo y morfolin-4-ilo;
k, m y n son respectivamente: 0,2,1; 1,0,1; o 2,0,1.
19. El compuesto de la reivindicación 18, en el que:
R^{1} es: -COOH;
R^{5} es: hidrógeno; y
k, m y n son respectivamente: 0,2,1; o 2,0,1.
20. El compuesto de la reivindicación 17, en el que el estrés oxidativo se selecciona entre: isquemia incluyendo apoplejía, isquemia cerebral, isquemia retinal, isquemia miocardial, infarto de miocardio y disfunción cognitiva postquirúrgica; trastornos neurodegenerativos incluyendo Alzheimer, demencia y enfermedad de Parkinson; neuropatía periférica, incluyendo lesión de la espina dorsal, lesión en la cabeza y trauma quirúrgico; trastornos inflamatorios incluyendo diabetes, enfermedad renal, síndrome premenstrual, asma, trastornos inflamatorios cardiopulmonares, insuficiencia cardiaca, artritis reumatoide, osteoartritis, fatiga muscular y cojera intermitente; y para la conservación de tejido de aloinjerto y órganos para el transplante.
21. El compuesto de la reivindicación 19, en el que el estrés oxidativo se selecciona entre: isquemia incluyendo apoplejía, isquemia cerebral, isquemia retinal, isquemia miocardial, infarto de miocardio y disfunción cognitiva postquirúrgica; trastornos neurodegenerativos incluyendo Alzheimer, demencia y enfermedad de Parkinson; neuropatía periférica, incluyendo lesión de la espina dorsal, lesión en la cabeza y trauma quirúrgico; trastornos inflamatorios incluyendo diabetes, enfermedad renal, síndrome premenstrual, asma, trastornos inflamatorios cardiopulmonares, insuficiencia cardiaca, artritis reumatoide, osteoartritis, fatiga muscular y cojera intermitente; y para la conservación de tejido de aloinjerto y órganos para el transplante.
\newpage
22. un compuesto de Fórmula III:
34
en la que:
R^{3.1} es: H o está ausente.
R^{3.2} es H o alquilo C_{1} a C_{4}
R^{3.3} y R^{3.4} son ambos H o son ambos alquilo C_{1} a C_{4}; y
R^{3.5} es: H, COOH, o -C(O)O-(alquilo C_{1} a C_{4}).
Incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en el tratamiento de un mamífero que tiene una dolencia caracterizada por estrés oxidativo, en el que el compuesto se usa en una cantidad terapéuticamente eficaz.
23. El compuesto de la reivindicación 22, en el que:
R^{3.2} es: H o etilo;
R^{3.3} y R^{3.4} son ambos H o son ambos metilo; y
R^{3.5} es: COOH.
24. El compuesto de la reivindicación 22, en el que:
R^{3.3} y R^{3.4} son ambos H o son ambos metilo, y
R^{3.5} es: COOH.
25. El compuesto de la reivindicación 24, en el que:
R^{3.1} es: hidrógeno; y
R^{3.2} es: hidrógeno o etilo.
26. El compuesto de la reivindicación 22, en el que el estrés oxidativo se selecciona entre: isquemia incluyendo apoplejía, isquemia cerebral, isquemia retinal, isquemia miocardial, infarto de miocardio y disfunción cognitiva postquirúrgica; trastornos neurodegenerativos incluyendo Alzheimer, demencia y enfermedad de Parkinson; neuropatía periférica, incluyendo lesión de la espina dorsal, lesión en la cabeza y trauma quirúrgico; trastornos inflamatorios incluyendo diabetes, renal enfermedad, síndrome premenstrual, asma, trastornos inflamatorios cardiopulmonares, insuficiencia cardiaca, artritis reumatoide, osteoartritis, fatiga muscular y cojera intermitente; y para la conservación de tejido de aloinjerto y órganos para el transplante.
27. un compuesto de Fórmula Ia:
35
en la que:
A es: alquilo sustituido seleccionado entre: -CH_{2}-CH(OH)-CH_{2}-OH, -CH(CH_{3})-CH(OH)-CH_{2}-OH, -CH(CH_{3})-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH, -CH_{2}-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH, -CH_{2}-CH_{2}-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH, -CH(CH_{3})-CH_{2}-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH, y -CH_{2}-CH(CH_{3})-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH, heteroarilo sustituido seleccionado entre: 5-cloro-1H-benzoimidazol-2-ilo, 5-metoxi-1H-benzoimidazol-2-ilo, 4-oxo-3,4-dihidro-quinazolin-2-ilo, benzoselenazol2-ilo, y 5-sustituido-benzotiazol-2-ilo, heterociclilo seleccionado entre: tiazol, 2-tioxo-imidazolidin-1-il y morfolino, o un di-, tri- o tetra-péptido.
R es: hidrógeno, alquilo, o cicloalquilo.
X es: -S-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo; e
Y es arilo, heteroarilo, un nucleósido, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido; y
Z es -OR,
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables.
28. El compuesto de la reivindicación 27, en el que:
A es: un di-, tri- o tetra-péptido; y
X es: un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys.
29. El compuesto de la reivindicación 28, en el que:
A es: un di- o tri-péptido los aminoácidos del cual se seleccionan entre Ala, Asp, Cys, Glu y Gly.
30, El compuesto de la reivindicación 29, en el que:
A es: el tri-péptido Glu-Cys-Gly.
31. El compuesto de la reivindicación 30, en el que:
R es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{8}.
32. El compuesto de la reivindicación 31, seleccionado entre:
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-oxo-2-pentiloxicarbonil-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hexiloxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil-)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-carboxi-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]butírico, y
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]butírico.
\vskip1.000000\baselineskip
33. El compuesto de la reivindicación 27, en el que:
A es: alquilo sustituido, heteroarilo sustituido, o heterociclilo; y
X es: -S-.
34. El compuesto de la reivindicación 27, en el que A es:
alquilo sustituido seleccionado entre: -CH_{2}-CH(OH)-CH_{2}-OH, y -CH(CH_{3})-C(O)-N(H)-CH_{2}-COOH;
heteroarilo opcionalmente sustituido seleccionado entre: benzoselenazol-2-ilo, 5-(cloro o metoxi)-sustituido-1H-benzoimidazol-2-ilo, y 5-(cloro, metoxi o nitro)-sustituido-benzotiazol-2-ilo; o
heterociclilo seleccionado entre: 4,5-dihidro-tiazol-2-ilo, 2-tioxo-imidazolidin-1-ilo y morfolino.
\newpage
35. El compuesto de la reivindicación 33, en el que:
R es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{8}.
36. El compuesto de la reivindicación 34, en el que:
R es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{8}.
37. El compuesto de la reivindicación 34, seleccionado entre:
\bullet ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 2-oxo-3-(4-oxo-3,4-dihidro-quinazolin-2-ilsulfanil)-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-[1-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-hidroxi-acrílico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(benzoselenazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(5-cloro-benzotiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 3-(5-metoxi-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico, y
\bullet éster etílico del ácido 3-(4,5-dihidro-tiazol-2-ilsulfanil)-2-oxo-propiónico.
\vskip1.000000\baselineskip
38. Un compuesto de Fórmula Ib:
\vskip1.000000\baselineskip
36
en la que:
A es: alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, un nucleósido, un aminoácido, un di-, tri- o tetra-péptido, -CH_{2}-C(O)-C(O)-O-R' o -CH=C(OH)-C(O)-O-R';
R es: hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo o heterocicloalquilo;
R^{a} es: hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, o alquenilo;
R' es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o arilo;
X es: -S-, -S(O)-, -S-Y-S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo;
Y es: arilo, heteroarilo, a nucleósido, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido; y
Z es: -OR o -SR;
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables; con la condición de que:
\bullet cuando X es -S-, A no es alquilo, bencilo o un fenilo sustituido con N-arilpirrolina-2,5-diona-sustituido; y con la condición adicional de que el compuesto de Fórmula 1b no es:
\bullet éster etílico del ácido 2-hidroxiimino-3-p-tolilsulfanil-propiónico.
39. El compuesto de la reivindicación 38, en el que:
A es: arilo, heteroarilo, heterociclilo, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido;
R es: hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, o aralquilo;
X es: -S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo; y
Z es: -OR.
40. El compuesto de la reivindicación 39, en el que:
A es: un aminoácido seleccionado entre Ala, Asp, Cys, Glu y Gly, o un di-o tri-péptido los aminoácidos del cual se seleccionan entre Ala, Asp, Cys, Glu y Gly.
41. El compuesto de la reivindicación 40, en el que:
A es: el tri-péptido Glu-Cys-Gly; y
X es: un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys.
42. El compuesto de la reivindicación 39, en el que:
R es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{6}; y Ra es: hidrógeno, alquilo o alquenilo C_{1} a C_{4}, fenilo o bencilo.
43. El compuesto de la reivindicación 41, en el que:
R es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{6}; y
R^{a} es: hidrógeno, alquilo C_{1} a C_{4}, o bencilo.
44. El compuesto de la reivindicación 42, seleccionado entre:
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-butoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-(1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-butoxicarbonil-2-hidroxiimino-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-[i-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-benciloxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-etoxicarbonil-2-(4-nitro-benciloxiimino)-etilsulfanil]etilcarbamoil}-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-fenoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-etoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de di-HCl,
\bullet ácido 2-amino-4-[2-(2-terc-butoxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico o su sal de di-HCl, y
\bullet ácido 4-[2-(2-aliloxiimino-2-etoxicarbonil-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-2-aminobutírico o su sal de di-HCl.
\newpage
45. El compuesto de la reivindicación 39,
en el que: A es: arilo o heteroarilo;
y X es: -S-.
46. El compuesto de la reivindicación 45, en el que
A es: fenilo; o
heteroarilo seleccionado entre: benzotiazol-2-ilo y benzo-imidazol-2-ilo.
47. El compuesto de la reivindicación 39 o 45, en el que:
R es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{6}; y
R^{a} es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{4}.
48. El compuesto de la reivindicación 47, seleccionado entre:
\bullet éster etílico del ácido 3-(5-cloro-benzotiazol-2-ilsulfanil)-2-hidroxiimino-propiónico,
\bullet éster etílico del ácido 2-hidroxiimino-3-(5-metoxi-1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-propiónico, y
\bullet éster etílico del ácido 3-(1H-benzoimidazol-2-ilsulfanil)-2-hidroxiimino-propiónico.
\vskip1.000000\baselineskip
49. Un compuesto de Fórmula Ic:
\vskip1.000000\baselineskip
37
en la que:
A es: alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, un nucleósido, un aminoácido, un di-, tri- o tetra-péptido, CH_{2}-C(O)-C(O)-O-R' o -CH=C(OH)-C(O)-O-R';
W es: =O, =N-OR^{a}, o -N (OH)-R^{d};
X es: -S-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, -S-Y-S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo;
Y es: arilo, heteroarilo, un nucleósido un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido;
R' es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o arilo;
R^{a} es: hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, o alquenilo.
R^{a} es: hidrógeno, acilo o alquilo; o
R^{b} y R^{c} son etilo;
R^{b} es fenilo, bencilo, 1-metoxicarbonil-2-fenetilo o ciclohexilo, y
R^{c} es hidrógeno; o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de 6 miembros seleccionado entre piperidin1-ilo, 4-metilpiperidin-1-ilo y morfolin-4-ilo, incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables, con la condición de que:
\bullet cuando X es -S-, A no es metilo, etilo, bencilo, o trifenilmetilo, y
\bullet cuando W es =N-OR^{a} y X es un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys, A es un di-, tri- o tetra-péptido.
50. El compuesto de la reivindicación 49, en el que:
A es: un aminoácido
seleccionado entre Ala, Asp, Cys, Glu y Gly, o un di-o tri-péptido los aminoácidos del cual se seleccionan entre Ala, Asp, Cys, Glu y Gly.
51. El compuesto de la reivindicación 50, en el que:
A es: el tri-péptido Glu-Cys-Gly; y
X es: un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys.
52. El compuesto de la reivindicación 51, en el que:
R^{b} y R^{c} con alquilo C_{1} a C_{4}.
R^{b} es alquilo C_{1} a C_{8}, arilo, aralquilo o cicloalquilo, y
R^{c} es hidrógeno; o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo pirrolidina o un anillo de 6 miembros seleccionado entre piperidin-1-ilo y morfolin-4-ilo.
53. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 49 a 52, en el que:
W es =O, =N-OH, o =N-O-CH_{3}.
54. El compuesto de la reivindicación 53, seleccionado entre:
\bullet ácido 2-Amino-4-{1-(carboximetil-carbamoil)-2-[3-(4-metil-piperidin-1-il)-2,3-dioxo-propilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico,
\bullet ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hidroxiimino-3-oxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-dietilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-piperidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-Amino-4-(1-(carboximetil-carbamoil)-2-[2-(1-metoxicarbonil-2-fenil-etilcarbamoil)-2-oxo-etilsulfanil]-etilcarbamoil}-butírico,
\bullet ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-ciclohexilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-Amino-4-[2-(2-bencilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-1-(carboximetil-carbamoil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-Amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(3-morfolin-4-il-2,3-dioxo-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-etoxicarbonil-2-metoxiimino-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2,3-dioxo-3-pirrolidin-1-il-propilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-octilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet metil éster del ácido 1-{3-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propionil}-pirrolidina-2-carboxílico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-hexilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico,
\bullet metil éster del ácido 2-{3-[2-(4-amino-4-carboxi-butirilamino)-2-(carboximetil-carbamoil)-etilsulfanil]-2-oxo-propionilamino}-3-metil-pentanoico,
\bullet ácido 2-amino-4-[1-(carboximetil-carbamoil)-2-(2-dimetilcarbamoil-2-oxo-etilsulfanil)-etilcarbamoil]-butírico, y
\bullet ácido 2-amino-4-(1-(carboximetil-carbamoil)-2-{2-[2-(4-hidroxi-fenil)-1-metoxicarbonil-etilcarbamoil]-2oxo-etilsulfanil}-etilcarbamoil)-butírico.
\vskip1.000000\baselineskip
55. El compuesto de la reivindicación 49, en el que:
A es: arilo
o heteroarilo;
y
X es: -S-.
56. El compuesto de la reivindicación 49, en el que:
A es: arilo o
Heteroarilo;
y
X es: -S-.
57. El compuesto de la reivindicación 56, en el que A es:
arilo seleccionado entre: fenilo y p-tolilo; o heteroarilo seleccionado entre: benzotiazol-2-ilo y benzoimidazol-2-ilo.
58. El compuesto de la reivindicación 56, en el que: W es =O, =N-OH, o =N-O-CH_{3}.
59. El compuesto de la reivindicación 58, seleccionado entre:
\bullet 2-hidroxiimino-N-fenil-3-p-tolilsulfanil-propionamida, y
\bullet 1-piperidin-1-il-3-p-tolilsulfanil-propano-1,2-diona 2-oxima.
\vskip1.000000\baselineskip
60. El compuesto de la reivindicación 49, en el que: W es =N-OR^{a}.
61. El compuesto de la reivindicación 60, en el que:
R^{a} es hidrógeno o alquilo;
R^{b} es: alquilo C_{1} a C_{4}, arilo, aralquilo o cicloalquilo; y
R^{c} es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{4}; o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo pirrolidina o un anillo de 6 miembros, opcionalmente incorporando O ó N como heteroátomo adicional del anillo, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado entre el grupo constituido por acilo y alquilo.
\newpage
62. Un compuesto de Fórmula II:
38
en la que:
R^{1} es: hidrógeno, alquilo, arilo, -C(O)-O-R', -CH_{2}-SH, -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z';
R^{2} es: hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, acilo;
R^{3} es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo inferior, aralquilo, -CH_{2}-SH, -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-SCH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z;
R^{4} es: hidrógeno, alquilo inferior, aralquilo, heteroararalquilo, -CH_{2}-SH,-CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C (OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z;
R^{5} es: hidrógeno, alquilo, o arilo;
R' es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, o arilo;
W es: =O, =N-OR^{a}, =N-NR^{b}R^{c}; o-N(OH)-R^{d} Z es: -OR, -SR, o -NR^{b}R^{c};
R es: hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo o heterocicloalquilo.
R^{a} es: hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, o alquenilo.
R^{b} es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo o cicloalquilo,
R^{c} es: independientemente seleccionado entre hidrógeno o alquilo; y
R^{d} es: hidrógeno, acilo o alquilo; o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos pueden formar un anillo de 5- a 7- miembros, opcionalmente incorporando uno o dos heteroátomos adicionales al anillo elegidos entre N, S, u O, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes independientemente seleccionado entre el grupo constituido por =O, =S, acilo, alquenilo, alquilo, (alcoxi)carbonilo, y (amino)carbonil.
k es: 0,1 ó 2.
m es: 0, 1 ó 2; y n es: 0, 1, 2 ó 3.
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables, con la condición de que al menos uno de R^{1},R^{3} o R^{4} es -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-SCH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z.
63. El compuesto de la reivindicación 62, en el que:
R^{1} es: -C(O)-O-R' en la que R' es hidrógeno o alquilo inferior;
R^{2} y R^{4} son hidrógeno;
R^{3} es: -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z;
R^{5} es: hidrógeno o alquilo inferior;
W es: =O ó =N-OR^{a};
Z es: -OR o -NR^{b}R^{c};
R es: hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, o aralquilo;
Ra es: hidrógeno o alquilo;
R^{b} es: alquilo C_{1} a C_{4}, fenilo o bencilo;
R^{c} es: hidrógeno o alquilo C_{1} a C_{4}, o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de 6 miembros seleccionado entre piperidin-1-ilo y morfolin-4-ilo; y
k, m y n son respectivamente: 0,2,1; 1,0,1; o 2,0,1.
64. El compuesto de la reivindicación 63, en el que:
R^{1} es: -COOH.
R^{5} es: hidrógeno; y
k, m y n son respectivamente: 0, 2, 1; o 2, 0, 1.
65. Una formulación farmaceuta que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 27 a 64 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
66. Los compuestos de las reivindicaciones 27-64 para uso como medicamento.
67. La formulación farmacéutica de la reivindicación 65 para uso como medicamento.
68. Los compuestos de las reivindicaciones 27-64 para uso en el tratamiento de un mamífero que tiene una dolencia caracterizada por estrés oxidativo, en el que el compuesto se usa en una en cantidad terapéuticamente eficaz.
69. La formulación farmacéutica de la reivindicación 65 para uso en el tratamiento de un mamífero que tiene una dolencia caracterizada por estrés oxidativo, en el que el compuesto se usa en una en cantidad terapéuticamente eficaz.
70. El uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula I:
39
en la que:
A es: alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, nucleósido, aminoácido, di-, tri- o tetra-péptido, -CH_{2}-C(O)-C(O)-O-R' o -CH=C(OH)-C(O)-O-R';
X es: -N(R')-, -S-; -S(O)-, -S(O)_{2}-, -S-Y-S-, o un enlace covalente con el átomo de azufre de Cys o con el átomo de nitrógeno del heterociclilo;
Y es: arilo, heteroarilo, nucleósido, un aminoácido, o un di-, tri- o tetra-péptido;
W es: =O, =N-OR^{a}, =N-NR^{b}R^{c}, o -N(OH)-R^{d};
Z es: -OR, -SR, o -NR^{b}R^{c};
R' es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o arilo;
\newpage
R es: hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo o heterocicloalquilo;
R^{a} es: hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, o alquenilo;
R^{b} es independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo o cicloalquilo.
R^{c} es: independientemente seleccionado entre hidrógeno o alquilo; y
R^{d} es: hidrógeno, acilo o alquilo; o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos pueden formar un anillo de 5- a 7- miembros, opcionalmente incorporando uno o dos heteroátomos adicionales al anillo elegidos entre N, S, u O, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por =O, =S, acilo, alquenilo, alquilo, (alcoxi) carbonilo, y (amino)carbonilo.
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables, con la condición de que cuando X es -S-, W es =O, y Z es OH, A no es 6-amino-3,5-diciano4-fenil-piridin-2-il;
para la fabricación de un medicamento para tratar un mamífero que tiene una dolencia caracterizada estrés oxidativo.
71. El uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula II:
40
en la que:
R^{1} es: hidrógeno, alquilo, arilo, -C(O)-O-R', -CH_{2}-SH, -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z';
R^{2} es: hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, acilo;
R^{3} es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo inferior, aralquilo, -CH_{2}-SH, -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-SCH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z:
R^{4} es hidrógeno, alquilo inferior, aralquilo, heteroararalquilo, -CH_{2}-SH, -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-S-CH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH=C(OH)-C(O)-Z;
R^{5} es: hidrógeno, alquilo, o arilo;
R' es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, o arilo;
W es: =O, =N-OR^{a}, =N-NR^{b}R^{c}; o -N(OH)-R^{d};
Z es: -OR, -SR, o -NR^{b}R^{c};
R es: hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo o heterocicloalquilo;
R^{a} es: hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, o alquenilo;
R^{b} es: independientemente seleccionado entre hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo o cicloalquilo;
R^{c} es: independientemente seleccionado entre hidrógeno o alquilo; y
R^{d} es: hidrógeno, acilo o alquilo; o
R^{b} y R^{c} junto con el nitrógeno al que están unidos pueden formar un anillo de 5- a 7- miembros, opcionalmente incorporando uno o dos heteroátomos adicionales al anillo elegidos entre N, S, u O, y estando dicho anillo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por =O, =S, acilo, alquenilo, alquilo, (alcoxi) carbonilo, y (amino)carbonilo;
k es 0, 1 ó 2.
m es: 0, 1 ó 2; y n es: 0, 1, 2 ó 3.
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables, con la condición de que al menos uno de R^{1},R^{3} o R^{4} es -CH_{2}-S-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, -CH_{2}-SCH=C(OH)-C(O)-Z, -CH_{2}-S(O)-CH_{2}-C(W)-C(O)-Z, o -CH_{2}-S(O)-CH-C(OH)-C(O)-Z, para la fabricación de un medicamento para tratar un mamífero con una dolencia caracterizada por estrés oxidativo.
72. El uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula III:
41
en la que:
R^{3.1} es: H o está ausente;
R^{3.2} es H o alquilo C_{1} a C_{4}
R^{3.3} y R^{3.4} son ambos H o son ambos alquilo C_{1} a C_{4}; y
R^{3.5} es: H, COOH, o -C(O)O-(alquilo C_{1} a C_{4}).
incluyendo tautómeros simples, esteroisómeros simples, y mezclas de tautómeros y/o esteroisómeros, y sus sales farmacéuticamente aceptables, para la fabricación de un medicamento para tratar un mamífero con una dolencia caracterizada por estrés oxidativo.
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