ES2311532T3

ES2311532T3 - 2-(4-pirdil)amino-6-dialcoxifenil-pirido(2.3-d)pirimidin-7-onas.

Info

Publication number: ES2311532T3
Application number: ES01954811T
Authority: ES
Inventors: James Marino Hamby; Sylvester Klutchko; James Bernard Kramer
Original assignee: Warner Lambert Co LLC
Current assignee: Warner Lambert Co LLC
Priority date: 2000-08-04
Filing date: 2001-07-20
Publication date: 2009-02-16
Anticipated expiration: 2021-07-20
Also published as: EP1307450B1; AU2001277032A1; DE60135854D1; CA2417942C; BR0112857A; MXPA02011263A; GT200100158A; WO2002012238A3; DOP2001000227A; ATE408613T1; WO2002012238A2; US20030220345A1; AP1333A; US7022711B2; AP2001002230A0; HN2001000171A; EP1307450A2; TNSN01118A1; UY26867A1; JP2004519422A

Abstract

Un compuesto de fórmula I (Ver fórmula) en la que: R 1 , R 2 , R 5 y R 6 son independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, tio, tioalquilo, hidroxi, alcanoílo C1-C6, -CN, -NO2, alcanoiloxi C1-C6, COOR 8 , -CF3, NR 8 R 9 , o (X)m-(CH2)n-NR 8 R 9 , en los que R 8 y R 9 son independientemente hidrógeno, alquilo C1-C6, alcanoílo C1-C6, o R 8 y R 9 tomados conjuntamente con el nitrógeno al cual están unidos pueden completar un anillo de 3 a 7 átomos de carbono y que opcionalmente contiene 1, 2 ó 3 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en nitrógeno, nitrógeno sustituido, oxígeno y azufre; X es NH u O; m es 0 ó 1; n es de 0 a 6; con la condición de que m y n no sean ambos 0; R 3 y R 4 son independientemente alquilo C1-C6, o alquilo C1-C6 sustituido con halógeno; R 7 es hidrógeno, alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, o cicloalquilo C3-C6; y sus solvatos y sales farmacéuticamente aceptables.

Description

2-(4-piridil)amino-6-dialcoxifenil-pirido(2,3-d)pirimidin-7-onas.

Campo de la invención

Esta invención proporciona 2-(4-piridil)amino-6-dialcoxifenil-pirido[2,3-d]pirimidin-7-onas antiangiogénicas que son útiles para tratar el cáncer, la aterosclerosis, la artritis reumatoide, la reestenosis, la psoriasis, la retinopatía diabética, la degeneración macular y otras enfermedades asociadas con la proliferación aberrante de vasos sanguíneos.

Antecedentes de la invención

La angiogénesis es la formación de capilares a partir de vasos preexistentes, que se produce, en general, en el embrión y en organismos adultos de mamífero como parte del crecimiento y reparación normales, tal como en la curación de heridas. Sin embargo, la angiogénesis descontrolada también está asociada con trastornos proliferativos celulares, tales como cáncer, retinopatía diabética, degeneración macular, psoriasis, artritis reumatoide, ateroma, sarcoma de Kaposi, y hemangioma. El crecimiento e invasión de tumores sólidos depende de un suministro adecuado de sangre que proporciona factores del crecimiento celulares, nutrientes y que elimina los subproductos metabólicos procedentes de la división celular activa.

La angiogénesis tumoral implica una serie de procesos secuenciales y complejos que comienzan con la producción y liberación de factores angiogénicos por parte de las células tumorales o su matriz circundante, y culminan en el desarrollo de la vasculatura del tumor. Esta cascada de múltiples etapas incluyen la activación, la proliferación y la migración de células endoteliales (CE), seguidas de la formación y maduración de tubos. Los factores del crecimiento angiogénico, tales como el factor del crecimiento de fibroblastos básico (FGF) y el factor del crecimiento endotelial vascular (VEGF), que se expresan durante el crecimiento del tumor, son moduladores clave de la función de las CE y del proceso neovascular completo. Por consiguiente, los compuestos de peso molecular pequeño que sean inhibidores específicos y selectivos de tirosina quinasas de receptores de FGF y VEGF que se encuentran sobre las CE son útiles como terapias antiangiogénicas para tratar el cáncer y otras enfermedades provocadas por la proliferación celular descontrolada.

La patente de EEUU nº 5.733.914, incorporada en la presente como referencia, describe una clase amplia de pirido[2,3-d]pirimidinas que se indican como útiles para tratar el cáncer y otras enfermedades celulares proliferativas debido a su capacidad para inhibir una amplia variedad de tirosina quinasas de receptores de factores del crecimiento, tales como factor del crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), factor del crecimiento epidérmico (EGF), así como VEGF y FGF. Los compuestos están sustituidos en la posición 6 con grupos arilo y heteroarilo, pudiendo estar dichos grupos sustituidos con diversos restos que incluyen halógenos, alquilo, alcoxi, tio, tioalquilo, hidroxi, amino y alcanoílo. La descripción indica que el dihalofenilo es un sustituyente preferido sobre el núcleo de pirido[2,3-d]pirimidina y, específicamente, el más preferido es el 2,6-diclorofenilo. La patente también describe una diversidad de posibles grupos sustituyentes en la posición 2 del núcleo de pirido[2,3-d]piridimina, incluyendo arilamino, siendo el más preferido fenilamino. Estos compuestos sufren de falta de biodisponibilidad, estabilidad metabólica, y selectividad enzimática.

Los inventores ahora han descubierto una serie de pirido[2,3-d]pirimidinas que, sorprendentemente, son más potentes y selectivas como inhibidores de VEGF y FGF que los compuestos descritos en la patente de EEUU nº 5.733.914, y que son biodisponibles y estables en mamíferos. Los presentes compuestos se caracterizan como 2-[(4-piridil)amino]-6-(3,5-dialcoxifenil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-onas. Un objeto de esta invención es proporcionar inhibidores potentes, selectivos y metabólicamente estables de VEGF y FGF, y un procedimiento para tratar enfermedades que resultan de la proliferación celular descontrolada utilizando dichos compuestos.

Sumario de la invención

Esta invención proporciona compuestos caracterizados como 2-[(4-piridil)amino]-6-(3,5-dialcoxifenil)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-onas que son inhibidores potentes, selectivos y metabólicamente estables de las tirosina quinasas de receptores de factores del crecimiento conocidos, tales como VEGF y FGF. La invención proporciona, más particularmente, compuestos de fórmula I

1

en la que:

R^{1}, R^{2}, R^{5} y R^{6} son independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, tio, tioalquilo, hidroxi, alcanoílo C_{1}-C_{6}, -CN, -NO_{2}, alcanoiloxi C_{1}-C_{6}, COOR^{8}, -CF_{3}, NR^{8}R^{9}, o (X)_{m}-(CH_{2})_{n}-NR^{8}R^{9}, en los que R^{8} y R^{9} son independientemente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcanoílo C_{1}-C_{6}, o R^{8} y R^{9} tomados conjuntamente con el nitrógeno al cual están unidos completan un anillo de 5 a 7 miembros;

X es NH u O;

m es 0 ó 1;

n es de 0 a 6; con la condición de que m y n no sean ambos 0;

R^{3} y R^{4} son independientemente alquilo C_{1}-C_{6}, y alquilo C_{1}-C_{6} sustituido con halógeno;

R^{7} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquinilo C_{2}-C_{6}, o cicloalquilo C_{3}-C_{6};

y sus solvatos y sales farmacéuticamente aceptables.

Como alternativa, R^{1}, R^{2}, R^{5} y R^{6} son independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, tio, tioalquilo, hidroxi, alcanoílo C_{1}-C_{6}, -CN, -NO_{2}, alcanoiloxi C_{1}-C_{6}, COOR^{8}, -CF_{3}, NR^{8}R^{9}, o (X)_{m}-(CH_{2})_{n}-NR^{8}R^{9}, en los que R^{8} y R^{9} son independientemente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcanoílo C_{1}-C_{6}, o R^{8} y R^{9} tomados conjuntamente con el nitrógeno al cual están unidos pueden completar un anillo que tiene de 3 a 7 átomos de carbono y que contiene opcionalmente 1, 2 ó 3 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en nitrógeno, nitrógeno sustituido, oxígeno y azufre.

Los compuestos preferidos tienen la fórmula I, en la que R^{1}, R^{2}, R^{5} y R^{6} son hidrógeno, y R^{7} es alquilo C_{1}-C_{6}.

Otro grupo preferido de compuestos tiene la fórmula I, en la que R^{3} y R^{4} son ambos metilo.

El compuesto más preferido de fórmula I es la 6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-(piridin-4-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona.

La invención también proporciona un procedimiento para tratar enfermedades provocadas por una proliferación celular descontrolada en un mamífero, que comprende administrar al mamífero una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I. Las enfermedades típicas son cánceres, tales como leucemia y cáncer de mama.

Por consiguiente, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar la angiogénesis descontrolada en un mamífero, que comprende administrar al mamífero que necesita tratamiento una cantidad antiangiogénica eficaz de un compuesto de fórmula I.

La presente invención también proporciona un procedimiento para tratar el cáncer en un mamífero que tiene cáncer y que necesita tratamiento, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I.

Además, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, para la fabricación de un medicamento para tratar cualquiera de las enfermedades o estados de enfermedad mencionados anteriormente.

Además, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, para tratar cualquiera de las enfermedades o estados de enfermedad mencionados anteriormente.

Otra realización de esta invención es una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I mezclado con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable para éste.

Descripción detallada de la invención

Los compuestos de la presente invención pueden existir en forma no solvatada así como en formas solvatadas, incluyendo las formas hidratadas. En general, las formas solvatadas, incluyendo las formas hidratadas, son equivalentes a las formas no solvatadas y se pretende que se incluyan en el alcance de la presente invención.

En los compuestos de fórmula I, la expresión "alquilo C_{1}-C_{6}" significa un radical hidrocarbonado lineal o ramificado que tiene de 1 a 6 átomos de carbono e incluye, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, terc-butilo, n-pentilo, n-hexilo y similares. La expresión "alquilo C_{1}-C_{6}" incluye dentro de su definición la expresión "alquilo C_{1}-C_{3}".

Los términos "halógeno" y "halo" incluyen flúor, cloro, bromo y yodo.

Los grupos "alquilo C_{1}-C_{6} sustituidos con halógeno" son los anteriores grupos alquilo que tienen uno o más sustituyentes halógeno. Los ejemplos incluyen trifluorometilo, perfluoropentilo, 1,2,3-tricloropentilo, 2-cloro-4-fluorohexilo y similares.

El término "alquenilo" y la expresión "alquenilo C_{2}-C_{6}" significan radicales hidrocarbonados lineales o ramificados que tienen de 2 a 6 átomos de carbono y un doble enlace, e incluyen etenilo, 3-buten-1-ilo, 2-etenilbutilo, 2-hexen-1-ilo y similares.

El término "alquinilo" y la expresión "alquinilo C_{2}-C_{6}" significan un radical hidrocarbonado lineal o ramificado que tiene de 2 a 6 átomos de carbono y al menos un triple enlace. Los grupos alquinilo C_{2}-C_{6} típicos incluyen propionilo, 2-butin-1-ilo, 3-pentin-1-ilo y similares.

Un "cicloalquilo C_{3}-C_{6}" significa un grupo hidrocarbilo cíclico, tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclohexilo y ciclopentilo.

Un "alcoxi C_{1}-C_{6}" se refiere a los grupos alquilo mencionados anteriormente unidos a través de oxígeno, cuyos ejemplos incluyen metoxi, etoxi, isopropoxi, terc-butoxi y similares.

Un "alcanoílo C_{1}-C_{6}" se refiere a un grupo alquilo, tal como se definió anteriormente, unido a través de un carbonilo, es decir,

2

Estos grupos incluyen formilo, acetilo, propionilo, butirilo e isobutirilo.

Un "alcanoiloxi C_{1}-C_{6}" se refiere a los grupos alcanoílo mencionados anteriormente unidos a través de oxígeno.

Los grupos alquilo, alquenilo, alcoxi y alquinilo descritos anteriormente pueden estar sustituidos. Los grupos sustituyentes que pueden ser parte de los grupos alquilo, alquenilo, alcoxi y alquinilo son NR^{8}R^{9}, fenilo, fenilo sustituido, tio(alquilo C_{1}-C_{6}), alcoxi C_{1}-C_{6}, hidroxi, carboxi, (alcoxi C_{1}-C_{6})carbonilo, halógeno, cicloalquilo, y un anillo carbocíclico o heterocíclico de 5 ó 6 miembros que tiene 1 ó 2 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, nitrógeno sustituido, oxígeno y azufre. Un "nitrógeno sustituido" significa un nitrógeno que porta un alquilo C_{1}-C_{6} o (CH_{2})_{n}Ph.

Los ejemplos de "R^{8} y R^{9} tomados conjuntamente con el nitrógeno al cual están unidos pueden completar un anillo que tiene de 3 a 7 átomos de carbono y que contiene opcionalmente 1, 2 ó 3 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en nitrógeno, nitrógeno sustituido, oxígeno y azufre" incluyen, pero no se limitan a pirrolidina, piperidina y piperazina. El anillo de 5 a 7 miembros puede estar opcionalmente sustituido con alquilo C_{1}-C_{6}.

Los ejemplos de grupos alquilo sustituidos, por tanto, incluyen 2-aminoetilio, 2-dietilaminoetilo, 2-dimetilaminopropilo, etoxicarbonilmetilo, 2-piperidinoetilo, 3-fenilbutilo, metilsulfanilmetilo, metoximetilo, 3-hidroxipentilo, 2-carboxibutilo, 4-clorobutilo, 3-ciclopropilpropilo, 3-morfolinopropilo, piperazinilmetil, y 2-(4-metilpiperazinil)etilo.

Los ejemplos de grupos alquenilo sustituidos, por tanto, incluyen 2-dietilaminoetenilo, 3-amino-2-butenilo, 3-(1-piperazinil)-1-propenilo, 3-hidroxi-1-propenilo, 2-(1-s-triazinil)etenilo, 3-fenil-3-pentenilo y similares.

Los ejemplos de grupos alquinilo sustituidos incluyen 2-metoxietinilo, 2-etilsulfaniletinilo, 4-(1-piperazinil)-3-(butinilo), 3-fenil-5-hexinilo, 3-dietilamino-3-butinilo, 4-cloro-3-butinilo, 4-ciclobutil-4-hexinilo y similares.

Los grupos alcoxi sustituidos típicos incluyen aminometoxi, trifluorometoxi, 2-dietilaminoetoxi, 2-etoxicarboniletoxi, 3-pirrolidinopropoxi, 3-hidroxipropoxi, 6-carboxihexiloxi y similares.

Otros ejemplos de grupos alquilo, alquenilo y alquinilo sustituidos incluyen dimetilaminometilo, carboximetilo, 4-dietilamino-3-buten-1-ilo, 5-etilmetilamino-3-pentin-1-ilo, 4-morfolinobutilo, 4-tetrahidropiridinilbutil-3-imidazolidin-1-ilpropilo, 4-tetrahidrotiazol-3-ilbutilo, fenilmetilo, 3-clorofenilmetilo y similares.

Los compuestos de fórmula I son capaces de formar también sales farmacéuticamente aceptables, incluyendo sales de adición de ácidos y/o bases farmacéuticamente aceptables. Todas estas formas están dentro del alcance de la presente invención.

Las sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula I incluyen sales derivadas de ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, nítrico, fosfórico, sulfúrico, bromhídrico, yodhídrico, fosforoso y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos, tales como ácidos alifáticos mono- y dicarboxílicos, ácidos alcanoicos sustituidos con fenilo, ácidos hidroxialcanoicos, ácido alcanodioicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos y aromáticos, etc. Estas sales incluyen, por tanto, las sales sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito, nitrato, fosfato, monobifosfato, dibifosfato, metafosfato, pirofosfato, cloruro, bromuro, yoduro, acetato, propionato, caprilato, isobutirato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, mandelato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, ftalato, bencensulfonato, toluensulfonato, fenilacetato, citrato, lactato, maleato, tartrato, metansulfonato y similares. También se contemplas las sales de aminoácidos, tales como sales arginato y similares, y gluconato y galacturonato (véase, por ejemplo, Berge S.M., et al., "Pharmaceutical Salts", J. of Pharmaceutical Science, 1977, 66:1-19).

Las sales de adición de ácidos de los compuestos básicos se preparan poniendo en contacto la forma de base libre con una cantidad suficiente del ácido deseado para producir la sal de una manera convencional. La forma de base libre puede regenerarse poniendo en contacto la forma salina con la base y aislando la base libre de una manera convencional. Las formas de base libre se diferencian un poco de sus respectivas formas salinas en ciertas propiedades físicas, tales como la solubilidad en disolvente polares, pero en lo demás las sales son equivalentes a su respectiva base libre para los fines de la presente invención.

Las sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables se forman con metales o aminas, tales como metales alcalinos o alcalino-térreos o aminas orgánicas. Los ejemplos de metales utilizados como cationes son sodio, potasio, magnesio, calcio y similares. Los ejemplos de aminas adecuadas son N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, N-metilglucamina, y procaína (véase, por ejemplo, Berge, S.M., supra, 1977).

Las sales de adición de bases de compuestos ácidos (por ejemplo, cuando R^{3} es un grupo carboxialquilo, tal como carboximetilo o 3-carboxibutilo) se preparan poniendo en contacto la forma de ácido libre con una cantidad suficiente de la base adecuada para producir la sal de una manera convencional. La forma de ácido libre puede regenerarse poniendo en contacto la forma salina con un ácido y aislando el ácido libre de una manera convencional. Las formas de ácido libre se diferencian un poco de sus respectivas formas salinas en ciertas propiedades físicas, tales como la solubilidad en disolvente polares, pero en lo demás las sales son equivalentes a su respectivo ácido libre para los fines de la presente invención.

Aunque las formas de la presente invención constituyen realizaciones preferidas en la presente, muchas otras son posibles. En la presente no se pretende mencionar todas las posibles formas equivalentes o ramificaciones de la invención. Se entiende que los términos utilizados en la presente son simplemente descriptivos y no limitantes, y que pueden realizarse diversos cambiso sin apartarse del espíritu o alcance de la presente invención.

Los compuestos de fórmula I pueden prepararse según las síntesis indicadas en los esquemas 1-7. Aunque estos esquemas a menudo muestran estructuras exactas, los procedimientos se aplican ampliamente a compuestos análogos de fórmula I, considerando cuando resulte oportuno la protección y desprotección de grupos funcionales reactivos mediante procedimientos convencionales en la técnica de la química orgánica. Por ejemplo, los grupos hidroxi, para evitar reacciones secundarias no deseadas, en general necesitan convertirse en éteres o ésteres durante las reacciones químicas producidas en otros sitios de la molécula. El grupo protector de hidroxi se elimina con facilidad para proporcionar el grupo hidroxi libre. Los grupos amino y los grupos ácido carboxílico se derivatizan de forma similar para protegerlos frente a reacciones secundarias no deseadas. Los grupos protectores típicos y los procedimientos para unirlos y cortarlos se describen en profundidad en Greene y Wuts en Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Nueva York (2ª edición, 1991), y McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, Nueva York, 1973.

El esquema 1 describe un procedimiento típico para preparar pirido[2,3-d]pirimidinas de fórmula I. La síntesis comienza haciendo reaccionar el 4-(amino sustituido)-2-metilsulfanilpirimidin-5-carboxaldehído apropiado (J. Med. Chem., 1998, 41(22):4365-4377, o J. Med. Chem., 1998, 41(17):3276-3292) con un reactivo de acetonitrilo en presencia de una base y un disolvente adecuado para producir el producto condensado de 6-(aril)-8-(sustituido)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ilidenamina. La reacción se lleva a cabo, de forma típica, en un disolvente no reactivo, tal como dioxano, 2-etoxietanol, dimetilformamida, tetrahidrofurano y similares. Las bases típicas que pueden utilizarse en la reacción incluyen metóxido de sodio, hexametildisilano de potasio, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno, hidruro de sodio, terc-butóxido de potasio, dietilamida de litio y similares. Los arilacetonitrilos típicos que pueden emplearse incluyen 3,5-dimetoxifenilacetonitrilo, 2,6-dimetil-3,5-dimetoxifenilacetonitrilo, 2-metil-3,5-dimetoxifenilacetonitrilo, 2,6-dicloro-3,5-dimetoxifenilacetonitrilo, 2-cloro-3,5-dimetoxifenilacetonitrilo, 2-fluoro-3,5-dimetoxifenilacetonitrilo, 2,6-difluoro-3,5-dimetoxifenilo, 3,5-trifluorometoxifenilacetonitrilo y similares. La reacción se lleva a cabo, de forma típica, a elevadas temperaturas de aproximadamente 50ºC a aproximadamente 200ºC, y termina en general sustancialmente en aproximadamente 2 a 24 horas. El producto, una 6-(aril)-8-(sustituido)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ilidenamina, puede aislarse con facilidad mediante la adición de agua a la mezcla de reacción, que provoca, en general, la precipitación del producto. El producto de imina puede purificarse aún más si resulta necesario mediante la recristalización en disolventes, tales como acetato de etilo, acetona, isopropanol y similares, o mediante cromatografía sobre soportes sólidos, tales como gel de sílice.

Las 6-(aril)-8-(sustituido)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ilidenaminas son agentes terapéuticos útiles, así como intermedios, y pueden convertirse con facilidad en el correspondiente derivado 7-cetónico mediante acilación con un reactivo acilante adecuado, tal como anhídrido acético, seguido de una hidrólisis catalizada con ácido del grupo acilimino resultante. La hidrólisis del grupo acilimino termina en general sustancialmente después de un calentamiento con un ácido mineral acuoso, tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico o similares, durante aproximadamente 5 a aproximadamente 24 horas de aproximadamente 60ºC a aproximadamente 200ºC. El producto, una 6-(aril)-8-(sustituido)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, se aisla con facilidad mediante la eliminación del disolvente de reacción mediante evaporación bajo presión reducida, y la cristalización en disolventes habituales, tales como acetato de etilo, etanol, dimetilformamida y similares.

El grupo metiltio de la 6-(aril)-8-(sustituido)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona se oxida con facilidad para producir el respectivo sulfóxido o sulfona con reactivos de oxidación, tales como ácido m-cloroperbenzoico, peróxido de hidrógeno, ácido peracético, 3-fenil-2-(fenilsulfonil)oxaziridina o similares. En el esquema 1, el grupo 2-metiltio del intermedio de pirimidona se oxida para producir el correspondiente sulfóxido utilizando 3-fenil-2-(fenilsulfonil)oxaziridina en un disolvente adecuado, tal como diclorometano, a temperatura ambiente.

El desplazamiento del grupo sulfóxido del penúltimo intermedio con 4-aminopiridina o un derivado de 4-aminopiridina sustituido proporciona compuestos de fórmula I. En el procedimiento A del esquema 1, el desplazamiento se realiza haciendo reaccionar el anión del reactivo de 4-aminopiridina con el intermedio de sulfóxido. El anión se genera de -78ºC a -40ºC en un disolvente adecuado, tal como tetrahidrofurano, dioxano o similares, utilizando una base fuerte, tal como butil-litio o similares. El sulfóxido se añade como un sólido o en un disolvente, tal como dimetilformamida, al anión y se hace reaccionar durante 1 a 24 horas a una temperatura de -78ºC a 30ºC. Como alternativa, tal como se describe en el procedimiento B del esquema 1, el intermedio de sulfóxido y el reactivo de 4-aminopiridina se condensan directamente entre sí a temperaturas de 80ºC a 200ºC. Además, la reacción puede realizarse como una mezcla concentrada del intermedio de sulfóxido y un exceso de reactivo de 4-aminopiridina en un disolvente, tal como DMSO, a temperaturas de 80ºC a 180ºC. El producto puede purificarse mediante cristalización en disolventes, tales como acetato de etilo, dimetilformamida, isopropanol y similares, o mediante cromatografía sobre soportes sólidos, tales como gel de sílice.

El esquema 2 muestra una vía alternativa al esquema 1 para la condensación del 4-(amino sustituido)-2-metilsulfanilpirimidin-5-carboxaldehído con un reactivo de acetonitrilo. En el esquema 2, el aldehído se condensa directamente con un éster de ácido fenilacético sustituido en presencia de una base adecuada, tal como 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno. La reacción puede realizarse pura o en un disolvente, tal como dimetilformamida o sulfóxido de dimetilo, para producir el producto condensado de 6-(aril)-8-(amino sustituido)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. La pirimidinona entonces puede elaborarse para producir los compuestos de fórmula I como se describe en el esquema 1.

El esquema 3 describe otro procedimiento para preparar compuestos de fórmula I que comienza a partir del 2-metiltio-4-cloropiridin-5-carboxilato de etilo disponible en el mercado. El grupo 4-cloro de la pirimidina de partida es desplazado por una amina primaria (NHR^{7}) en un disolvente adecuado, tal como dimetilformamida, para producir el correspondiente 2-metiltio-4-(amino sustituido)-piridin-5-carboxilato de etilo. El exceso de la amina en la reacción puede emplearse para captar el subproducto de HCl producido en la reacción. La temperatura para el desplazamiento depende de la naturaleza de la amina que se está haciendo reaccionar. En general, las aminas alifáticas reaccionan a temperatura ambiente, mientras que las aminas menos nucleófilas, tales como las aminas aromáticas, requieren temperaturas mayores. La posterior oxidación del grupo metiltio con un oxidante, tal como 3-fenil-2-(fenilsulfonil)oxaziridina, en un disolvente, tal como diclorometano, a temperatura ambiente, proporciona el correspondiente intermedio de sulfóxido. Tal como se describe en el esquema 1, el sulfóxido es desplazado por 4-aminopiridina o un derivado de 4-aminopiridina sustituido relacionado mediante un desplazamiento directo con la amina a temperaturas mayores. Como alternativa, el sulfóxido puede hacerse reaccionar con el anión del reactivo de 4-aminopiridina que se genera a partir de la reacción de la amina con una base fuerte, tal como butil-litio, para producir el 2-(4-piridilamino)-4-(sustituido)-piridin-5-carboxilato. La posterior reducción del grupo éster con un agente reductor habitual, tal como LAH, proporciona el correspondiente alcohol. La oxidación del alcohol con MnO_{2} u otro oxidante adecuado produce el penúltimo aldehído. La ciclación para producir compuestos de fórmula I se realiza como se describió en el esquema 2 mediante una reacción con un éster de ácido fenilacético sustituido de forma apropiada bajo condiciones
básicas.

Comenzando a partir del intermedio de 6-(aril)-8-(sustituido)-2-metansulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona descrito en los esquemas 1 y 2, pueden preparse compuestos de fórmula I según el esquema 4. La reacción del sulfóxido con amoniaco gaseoso disuelto en un disolvente adecuado, tal como metanol, dioxano y similares, o con hidróxido de amonio acuoso a temperaturas de 0ºC a 100ºC produce el intermedio de 6-(aril)-8-(sustituido)-2-amino-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. La desprotonación del grupo 2-amino con una base fuerte, tal como butil-litio, hidruro de sodio o similares, produce el correspondiente anión in situ, que posteriormente se hace reaccionar con un derivado de 4-halopiridina para producir los compuestos de fórmula I. El grupo saliente de halógeno representado por X en el esquema 4 del derivado de 4-halopiridina puede ser cloro, bromo, yodo o flúor.

El esquema 5 describe otra variación de la síntesis química de los compuestos de fórmula I. El grupo 4-cloro de la pirimidina de partida, el 2-metiltio-4-cloropiridin-5-carboxilato de etilo disponible en el mercado, es desplazado utilizando amoniaco gaseoso en un disolvente adecuado, tal como metanol, o con hidróxido de amonio acuoso, para producir 2-metiltio-4-aminopiridin-5-carboxilato de etilo. El exceso de la amina en la reacción puede emplearse para captar el subproducto de HCl producido en la reacción. La reducción del éster utilizando LAH u otro agente reductor adecuado, tal como diborano, NaBH_{4}-NiCl_{2} o similares, produce el correspondiente alcohol. Una oxidación con MnO_{2} u otro oxidante adecuado produce el intermedio de aldehído, 4-amino-2-metilsulfanilpirimidin-5-carboxaldehído. La condensación del aldehído con el derivado de acetato de fenilo sustituido de forma apropiada produce el producto ciclado. La alquilación en la posición 8 con X-R7 se realiza formando, en primer lugar, el anión del intermedio ciclado con una base, tal como NaH, Cs_{2}CO_{3}, DBU y similares. El posterior tratamiento del anión con el reactivo alquilante X-R7, en el que X representa un grupo saliente, tal como Cl, Br, I, CH_{3}SO_{3} o similares, produce el intermedio de 6-(aril)-8-(sustituido)-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona deseado. La elaboración hasta obtener los compuestos de fórmula I se realiza oxidando el grupo metiltio hasta el sulfóxido y realizando un desplazamiento nucleófilo del sulfóxido con un derivado de 4-aminopiridina, como se describió previamente en el esquema 1.

El esquema 6 muestra un proceso preferido para preparar los compuestos de la invención de fórmula I, que comprende hacer reaccionar una 4-aminopiridina con una 2-(4-imino-4H-piridin-1-il)-6-(aril)-8-(sustituido)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. La reacción se lleva a cabo, de forma típica, mezclando la 4-aminopiridina y el reactivo de imino-4H-piridin-1-ilo en un disolvente orgánico no reactivo, tal como dimetilsulfóxido o acetonitrilo, en presencia de una base, tal como carbonato de potasio, y a una temperatura elevada de aproximadamente 80ºC a 100ºC. La reacción avanza a través de un intermedio dímero, es decir, una 2-{4-[(6-aril-7-oxo-8-(sustituido)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-2-il)imina]-4H-piridin-1-il}-6-aril-8-(sustituido)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. Este intermedio puede aislarse si se desea o utilizarse in situ, y una posterior reacción con más 4-aminopiridina produce el compuesto de la invención de fórmula I deseado. El material de partida de 2-(4-imina-4H-piridin-1-ilo) se prepara haciendo reaccionar una 2-alquilsulfinilpiridopirimidina con una una sal de adición de ácidos de 4-aminopiridina a aproximadamente la temperatura ambiente.

El proceso más preferido para preparar los compuestos de la invención comprende hacer reaccionar una 4-aminopiridina con una 2-alquilsulfanilpiridopirimidina en presencia de un hidruro, tal como hidruro de litio o hidruro de sodio, o una amida de metal alcalino, tal como amida de litio. Este reacción se ilustra en el esquema 7. La 4-aminopiridina y la base de metal alcalino en general se mezclan entre sí en un disolvente orgánico no reactivo, tal como tetrahidrofurano, y se calientan a aproximadamente 50ºC durante 1 a 2 horas. Entonces se añade la alquilsulfanilpiridopirimidina y la mezcla en general se calienta a reflujo durante aproximadamente 24 horas. El producto se aisla con facilidad con un elevado rendimiento y una pureza excelente.

Como se indicó anteriormente, los compuestos de la invención tienen una naturaleza básica en virtud del grupo piridilo y otros átomos de nitrógeno en los anillos, así como los grupos sustituyentes que son básicos, tales como los grupos amino, por ejemplo. Estos compuestos básicos forman con facilidad sales farmacéuticamente aceptables con cualquier ácido inorgánico u orgánico. Las sales, de forma típica, son cristalinas y, en general, solubles en agua y, por tanto, resultan muy adecuadas para la administración oral y similares. Las sales típicas se forman con ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico y sulfónico, así como con ácidos orgánicos, tales como ácido acético y ácido metansulfónico.

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Esquema 1

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3

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Esquema 2

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Esquema 3

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Esquema 4

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Esquema 5

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7

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Esquema 6

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Esquema 7

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9

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Los compuestos preferidos de fórmula I son aquellos en los que R^{1} y R^{2} son independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, o alcoxi C_{1}-C_{6}; y, más preferiblemente, R^{1} y R^{2} son independientemente hidrógeno; R^{5} y R^{6} son independientemente hidrógeno, halógeno, o alquilo C_{1}-C_{6}; y R^{7} es alquilo C_{1}-C_{6}, o cicloalquilo C_{3}-C_{6}. Para R^{1} y R^{2}, se prefiere que el halógeno sea cloro, el alquilo C_{1}-C_{6} sea metilo o etilo, y el alcoxi C_{1}-C_{6} sea metoxi. Para R^{5} y R^{6}, se prefiere que el halógeno sea cloro, y el alquilo C_{1}-C_{6} sea metilo. Para R^{7}, se prefiere que el alquilo C_{1}-C_{6} sea metilo o etilo, y más preferiblemente etilo; y el cicloalquilo C_{3}-C_{6} sea ciclopentilo.

Los siguientes ejemplos detallados ilustran más a fondo la síntesis de los compuestos de esta invención. Los ejemplos son sólo ilustrativos y no deben considerarse limitantes de la invención en modo alguno.

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Ejemplo 1

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10

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Éster etílico del ácido 4-etilamino-2-metilsulfanilpirimidin-5-carboxílico

Un matraz de fondo redondo de 4 cuellos de 22 l se equipó con un agitador mecánico, un embudo de adición y un termómetro. El matraz se cargó con 4-cloro-2-(metiltio)-5-pirimidincarboxilato de etilo (1,53 kg, 6,56 mol), trietilamina (2,74 l, 19,7 mol, 3 eq.) y 7,5 l de tetrahidrofurano para producir una disolución. Se añadió etilamina acuosa (0,53 l, 6,56 mol, 1 eq.) mediante el embudo de adición a lo largo de 20 minutos. La temperatura de la reacción aumentó hasta 35ºC durante la adición. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se comprobó para ver si se había completado utilizando TLC (SiO_{2}; heptano:acetato de etilo 7:3). El precipitado (hidrocloruro de trietilamina) se retiró mediante filtración y se lavó 2 veces con tetrahidrofurano, reuniendo los lavados con el filtrado original. El tetrahidrofurano se extrajo hasta casi la sequedad en un evaporador rotatorio. El residuo se repartió entre bicarbonato de sodio acuoso saturado (500 ml) y acetato de etilo (1 l). Nótese de que existe emisión de dióxido de carbono gaseoso desde el bicarbonato durante el reparto y los posteriores lavados. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó 2 veces con bicarbonato de sodio acuoso saturado y una vez con salmuera. La disolución se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se extrajo para producir el compuesto del título como un sólido blancuzco. Rendimiento: 95%.

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Ejemplo 2

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11

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4-etilamino-2-metilsulfanilpirimidin-5-ilmetanol

Un reactor integrado de 50 l se purgó con argón 3 veces, y después se mantuvo una presión de argón positiva a lo largo del proceso. El reactor se cargó con 4 l de tetrahidrofurano, seguido de hidruro de litio y aluminio (1 M en tetrahidrofurano, 6,77 kg, 7,48 l, 7,48 mol, 1,2 eq.). El enfriador/calentador se ajustó a 18ºC y se activó. El producto del ejemplo 1, éster etílico del ácido 4-etilamino-2-metilsulfanilpirimidin-5-carboxílico (1,5 kg, 6,23 mol, 1 eq.) se disolvió en 11 l de tetrahidrofurano (0,58 M) y se añadió al recipiente de reacción utilizando una bomba a lo largo de aproximadamente 2 horas. Se empleó una TLC (SiO_{2}; heptano:acetato de etilo 7:3) para controlar la reacción para determinar que se había completado. Cuando la reacción se completó el enfriador/calentador se ajustó a 10ºC. El exceso de hidruro se extinguió añadiendo sucesivamente 1,25 l de agua, 1,25 l de hidróxido de sodio al 15% en peso, y después 4,1 l de agua. La primera porción de agua se añadió con bastante lentitud y con agitación vigorosa para que no se produjera mucha formación de espuma y para mantener la temperatura por debajo de 30ºC. A medida que continuaba la extinción, la velocidad de adición aumentó gradualmente hasta que la porción final de agua pudo añadirse en una corriente constante. La mezcla de reacción entonces se agitó durante 1 hora antes de filtrar a través de un lecho corto de 2,54 cm de Celite en un embudo de vidrio poroso de grano grueso de 2 l. Las sales se lavaron una vez con tetrahidrofurano en el embudo. El tetrahidrofurano se extrajo, después el residuo se evaporó azeotrópicamente 2 veces con porciones de 1 l de tolueno. El sólido resultante se lavó del matraz utilizando heptano, después se secó en una estufa de vacío a 40ºC para producir el compuesto del título, que se utilizó en la siguiente etapa sin mayor purificación.

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Ejemplo 3

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12

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4-etilamino-2-metilsulfanilpirimidin-5-carboxaldehído

Un matraz de fondo redondo de 50 l equipado con un agitador mecánico se cargó con 565 g (2,84 mol) del producto del ejemplo 2, 4-etilamino-2-metilsulfanilpirimidin-5-ilmetanol, 1,23 kg (14,2 mol, 5 eq.) de óxido de manganeso(IV), y 19 l de cloroformo. La mezcla se agitó durante 24 horas a temperatura ambiente, después se comprobó mediante TLC (SiO_{2}; heptano:acetato de etilo 7:3) para determinar si la reacción se había completado. La reacción se filtró a través de un lecho corto de Celite y el cloroformo se extrajo para producir el compuesto del título con un rendimiento de 90%.

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Ejemplo 4

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13

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6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ilidenamina

A una disolución del producto del ejemplo 3, 4-etilamino-2-metilsulfanilpirimidin-5-carboxaldehído (37,0 g, 0,19 mol) y 3,5-dimetoxifenilacetonitrilo (37,0 g, 0,21 mol) en DMF (300 ml) se le añadio de forma discontinua K_{2}CO_{3} (130 g) con agitación. La mezcla de reacción se calentó durante la noche a 105-110ºC y se filtró en caliente. Las sales insolubles se lavaron con DMF (100 ml) y se añadió agua al filtrado tibio hasta que la disolución se hizo turbia. Se desarrollaron cristales tras una siembra o inducción (raspado con una varilla de vidrio). El producto se recogió mediante filtración, se lavó con 100 ml de DMF/H_{2}O (25:75), se lavó con agua y se secó al vacío para producir 50,5 g (76%) del compuesto del título. P.f. 93-95ºC.

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Ejemplo 5

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14

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N-[6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-iliden]acetamida

Una mezcla del producto del ejemplo 4, 6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ilidenamina (50,0 g, 0,145 mol) y anhídrido acético (150 ml) se calentó con agitación hasta el reflujo, en cuyo momento todo el material de partida se disolvió. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 5 minutos, se enfrió en un baño de hielo, y se añadió t-butil metil éter. El producto se recogió mediante filtración, se lavó con anhídrido acético (50 ml) y éter (100 ml) para producir 43,7 g (rendimiento 78%) del compuesto del título. P.f. 145-150ºC.

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Ejemplo 6

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15

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6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

Una mezcla del producto del ejemplo 5, N-[6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-iliden]acetamida (43,5 g, 0,11 mol) y dioxano (200 ml) se calentó con agitación hasta el punto de ebullición, en cuyo momento el sólido se disolvió. En el punto de ebullición se añadieron 100 ml de H_{2}SO_{4} acuoso al 15%, y la mezcla se sometió a reflujo durante 2 minutos. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se añadió agua (aproximadamente 200 ml). Se formaron cristales que se recogieron mediante filtración y se lavaron con agua. El sólido se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (400 ml), se secó sobre K_{2}CO_{3}, se añadió carbón, y la mezcla se filtró a través de Celite. El filtrado se evaporó a presión reducida para producir 33,0 g del compuesto del título. P.f. 120-122ºC.

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Ejemplo 7

6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-metansulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

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A una disolución del producto del ejemplo 6, 6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (17,0 g, 0,048 mol) en CHCl_{3} (150 ml) se le añadió trans-2-fenilsulfonil-3-feniloxaziridina (15,2 g, 0,058 mol; Organic Synthesis, 1987, 66:203-210). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. El producto se purificó filtrándolo a través de un embudo de vidrio sinterizado grande relleno con gel de sílice humedecido con CHCl_{3}. El producto se eluyó del gel de sílice con el siguiente orden de disolventes: CHCl_{3}, EtOAc, MeOH/CHCl_{3} (1:20) y MeOH/CHCl_{3} (1:10). El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo se suspendió en EtOAc caliente (40 ml), se filtró y se concentró hasta 20 ml a presión reducida. El producto se separó y se recogió mediante filtración para producir 13,77 g del compuesto del título. P.f. 114-116ºC.

Como alternativa, a una disolución del producto del ejemplo 1 o 1A, 2-metilsulfanil-6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (536,2 g, 1,50 mol) en CHCl_{3} (3,4 l) se le añadió trans-2-fenilsulfonil-3-feniloxaziridina (431 g, 1,65 mol; Organic Synthesis, 1987, 66:203-210). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se añadió metil t-butil éter (MTBE) a la disolución hasta que se formó un precipitado (aproximadamente 7 l). El sólido se recogió mediante filtración, se lavó una vez con MTBE y se secó en una estufa de vacío a temperatura ambiente. Una RMN de protón (DMSO) resultó coherente con la estructura.

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Ejemplo 8

17

6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-(piridin-4-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

Una mezcla del producto del ejemplo 7, 6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-metansulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (0,280 g, 10,75 mmol) y 4-aminopiridina (0,5 g, 15,3 mmol) se colocó en un matraz de fondo redondo pequeño y se sumergió en un baño de aceite a 180ºC durante 5 minutos con agitación. La mezcla de reacción se enfrió hasta 20ºC y la mezcla se trituró con agua (10 ml). El producto insoluble se filtró y se secó al aire sobre el filtro. El producto bruto se purificó mediante una cromatografía en columna eluyendo con un gradiente de disolvente comenzando con cloroformo puro y terminando con metanol/cloroformo (1:20). El producto se cristalizó suspendiéndolo en metanol (10 ml) y añadiendo cloruro de metileno (30 ml) hasta que se produjo una disolución. La disolución se concentró en un baño de vapor hasta aproximadamente 8 ml de volumen. El producto precipitado se filtró y se lavó con metanol (0,5 ml) para producir 112 mg del compuesto del título. P.f. 305-307ºC.

Espectro de masas (APCI) (m+)/z 403,9.

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Ejemplo 9

18

6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-(2-metilpiridin-4-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

A una disolución a -78ºC de 2,6 g (24,1 mmol) de 4-amino-2-metilpiridina en 80 ml de tetrahidrofurano recién destilado se le añadieron 14,0 ml (22,5 mmol) de n-butil-litio a lo largo de 5 minutos. La mezcla de reacción se agitó durante 15 minutos más, en cuyo momento se añadieron 3,0 g (8,0 mmol) de 6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-metilsulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. Se dejó que la mezcla se calentase hasta -10ºC a lo largo de varias horas y se conservó a -10ºC durante la noche. Se realizó una extracción acuosa vertiendo la mezcla de reacción en un embudo de separación que contenía acetato de etilo, agua, y 3,75 ml de HCl 6 N. La fase orgánica se lavó dos veces con agua y una vez con una disolución saturada de cloruro de sodio, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró. El residuo se trituró con metanol/acetato de etilo/diclorometano 5:50:50, después con metanol/cloroformo 1:9 y se filtró para producir 0,79 g (23%) de un polvo de color amarillo pálido del compuesto del título. P.f. = >300ºC.

Espectro de masas (CI) (m+1)/z 418.

Análisis calculado para C_{23}H_{23}N_{5}O_{3}\cdot0,25 H_{2}O: C, 65,47; H, 5,61; N, 16,60. Encontrado: C, 65,14; H, 5,49; N, 16,28.

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Ejemplo 10

19

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-(2,6-dimetilpiridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

A una disolución a -78ºC de 3,9 g (32,1 mmol) de 4-amino-2,6-dimetilpiridina en 120 ml de THF se le añadieron gota a gota 17,5 ml (30,5 mmol) de n-butil-litio 1,6 M en hexanos. La disolución de reacción se agitó durante 15 minutos, en cuyo momento se añadieron 3,0 g (8,0 mmol) del producto del ejemplo 7, 6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-metansulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, en pequeñas porciones como un sólido. Se dejó que la mezcla de reacción se calentase lentamente hasta -10ºC y después se mantuvo a -10ºC durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo/agua/5 ml de HCl 6 N. La mezcla se agitó y se separó. La fase orgánica se lavó con una disolución saturada de bicarbonato de sodio, dos veces con agua, y salmuera, después se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró hasta un residuo sólido. El residuo se eluyó con metanol/acetato de etilo/diclorometano 5:50:50 para producir un material cristalino naranja. Este material se disolvió en 150 ml de metanol/cloroformo 1:9 caliente y se filtró. La adición de 60 ml de hexano produjo la precipitación de 0,99 g (28%) del compuesto del título como un sólido de color amarillo pálido.

Análisis calculado para C_{24}H_{25}N_{5}O_{3}\cdot0,25 H_{2}O: C, 66,12; H, 5,90; N, 16,06. Encontrado: C, 66,14; H, 5,90; N, 15,92.

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Ejemplo 11

20

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-(2-cloropiridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

A una disolución a -78ºC de 4,1 g (32,1 mmol) de 4-amino-2-cloropiridina en 120 ml de THF se le añadieron gota a gota 17,5 ml (30,5 mmol) de n-butil-litio 1,6 M en hexanos. La disolución de reacción se agitó durante 15 minutos, en cuyo momento se añadieron 3,0 g (8,0 mmol) del producto del ejemplo 7, 6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-metansulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, en pequeñas porciones como un sólido. Se dejó que la mezcla de reacción se calentase lentamente hasta -10ºC y después se mantuvo a -10ºC durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo/agua/5 ml de HCl 6 N. La mezcla se agitó y se separó. La fase orgánica se lavó con una disolución saturada de bicarbonato de sodio, dos veces con agua, y salmuera, después se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró hasta un volumen de aproximadamente 200 ml. La suspensión se agitó durante la noche y se filtró para producir un sólido amarillo. El sólido se trituró con 20 ml de metanol/cloroformo 1:9, se filtró y se secó para producir 1,89 g (54%) del compuesto del título.

Análisis calculado para C_{22}H_{20}N_{5}O_{3}Cl\cdot0,03 C_{4}H_{8}O_{2}\cdot0,03 CHCl_{3}\cdot0,03 CH_{3}OH: C, 59,86; H, 4,62; N, 15,74. Encontrado: C, 59,83; H, 4,43; N, 15,69.

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Ejemplo 12

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21

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6-(3,5-dimetoxifenil)-2-(2,6-dimetoxipiridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

A una disolución a -78ºC de 3,0 g (19,5 mmol) de 4-amino-2,6-dimetoxipiridina en 75 ml de THF se le añadieron gota a gota 10,6 ml (17,0 mmol) de n-butil-litio 1,6 M en hexanos. La disolución de reacción se agitó durante 15 minutos, en cuyo momento se añadieron 1,8 g (4,9 mmol) de 6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-metilsulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, en pequeñas porciones como un sólido. Se dejó que la mezcla de reacción se calentase lentamente hasta -10ºC y después se mantuvo a -10ºC durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo/agua/3,5 ml de HCl 6 N. La mezcla se agitó y se separó. La fase orgánica se lavó con una disolución saturada de bicarbonato de sodio, dos veces con agua, y salmuera, después se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró hasta un residuo sólido amarillo. El sólido se trituró con 25 ml de metanol/cloroformo/acetato de etilo 1:15:10, y se filtró para producir un sólido amarillo que cristalizó en 300 ml de acetonitrilo para producir 1,15 g (51%) del compuesto del título.

Análisis calculado para C_{24}H_{25}N_{5}O_{5}: C, 62,19; H, 5,44; N, 15,11. Encontrado: C, 62,10; H, 5,35; N, 15,10.

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Ejemplo 13

Hidrocloruro de 2-(piridin-4-ilamino)-6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (mediante el esquema 7)

A una disolución de 88 g (0,93 mol) de 4-aminopiridina en 1 l de tetrahidrofurano se le añadieron 21,2 g (2,67 mol) de hidruro de litio. La mezcla de reacción se calentó hasta 50ºC durante 1 hora. A la mezcla de reacción agitada se le añadió una disolución de 318 g (0,89 mol) de 2-(metilsulfanil)-6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona en 1,8 l de tetrahidrofurano. La disolución de reacción se calentó a reflujo durante 24 horas, y después se enfrió hata 50ºC. La mezcla de reacción se diluyó mediante la adición lenta de una mezcla de 500 ml de agua y 1 l de ácido clorhídrico 6 N. La mezcla de reacción se enfrió hasta 24ºC y se agitó durante 16 horas. La mezcla de reacicón se diluyó aún más mediante la adición de 250 ml de acetonitrilo y 200 ml de agua, y se continuó la agitación durante 2 horas más. Entonces la mezcla se filtró y la torta del filtro se secó a 45ºC al vacío durante 12 horas para proporcionar 360 g (92%) del hidrocloruro de 2-(piridin-4-ilamino)-6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, p.f. 295-300ºC (desc.). Una HPLC estableció la pureza a 98%.

Espectro de masas (APCI) 439,89 m/z.

Siguiendo el procedimiento general descrito anteriormente se prepararon los siguientes otros compuestos de la invención:

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Ejemplo 14

6-(2-cloro-3,5-dimetoxifenil)-2-(piridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

P.f. 264-272ºC.

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Ejemplo 15

6-(2,6-dicloro-3,5-dimetoxifenil)-2-(piridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

P.f. 295,5-297,0ºC.

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Ejemplo 16

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-(piridin-4-ilamino)-8-ciclopentil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

P.f. 283-285ºC.

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Ejemplo 17

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-(piridin-4-ilamino)-8-metil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

P.f. 245-247ºC.

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Ejemplo 18

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-[2-(4-metilpiperizinil)piridin-4-ilamino]-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

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Ejemplo 19

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-[2-(2-dimetilaminoetoxi)piridin-4-ilamino]-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

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Ejemplo 20

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-[2-(2-dietilaminoetilamino)piridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

Como se indicó anteriormente, los compuestos de fórmula I son útiles para tratar enfermedades o estados de enfermedad, tales como cáncer y otras enfermedades proliferativas que incluyen, pero no se limitan a psoriasis, reestenosis y aterosclerosis. Los compuestos de la invención son especialmente útiles para tratar la reestenosis después de una angioplastia de balón de arterias ocluidas. La reestenosis se produce en aproximadamente 40% de los individuos que se someten a angioplastia de arterias calcificadas y es un problema muy importante asociado con esta forma de tratamiento de pacientes que sufren esta afección cardíaca.

El término "tratamiento" para los objetivos de la presente invención se referiere a la profilaxis o prevención, mejora o eliminación de la afección nombrada una vez que se ha establecido la afección.

El término "mamífero" para los objetivos de la presente invención incluye seres humanos, vacas, perros, gatos, cabras, ovejas y cerdos. Preferiblemente, el mamífero es un ser humano.

Los compuestos de la presente invención pueden formularse y administrarse en una amplia variedad de formas de dosificación oral y parenteral, incluyendo la administración transdérmica y rectal. Los expertos en la técnica reconocerán que las siguientes formas de dosificación pueden comprender, como principio activo, un compuesto de fórmula I o un correspondiente solvato o sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I.

Otra realización de esta invención es una composición o formulación farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I junto con un vehículo, diluyente o excipiente para éste, tal como un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. Para preparar composiciones farmacéuticas con los compuestos de la presente invención, los vehículos farmacéuticamente aceptables pueden ser sólidos o líquidos. Las preparaciones en forma sólida incluyen polvos, comprimidos, píldoras, cápsulas, sellos, supositorios, y gránulos dispersables. Un vehículo sólido puede ser una o más sustancias, que también pueden actuar como diluyentes, agentes aromatizantes, ligantes, conservantes, agentes disgregantes de comprimidos o un material encapsulante.

En los polvos, el vehículo es un sólido finamente dividido, tal como talco o almidón, que está mezclado con el principio activo finamente dividido.

En los comprimidos, el principio activo se mezcla con un vehículo que tenga las propiedades de unión necesarias en proporciones adecuadas y se compacta en la forma y el tamaño deseados.

Las formulaciones o composiciones de esta invención contienen preferiblemente de aproximadamente 5% a aproximadamente 70% o más de principio activo. Los vehículos adecuados incluyen carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azúcar, lactosa, pectina, dextrina, almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, una cera de bajo punto de fusión, mantequilla de cacao y similares. Una forma preferida para el uso oral son las cápsulas, que incluyen la formulación del compuesto activo con un material encapsulante como vehículo, para proporcionar una cápsula en la que el principio activo, con o sin otros vehículos, está rodeado por un vehículo que, por tanto, se encuentra en asociación con él. De forma similar, se incluyen sellos y pastillas para chupar. Pueden emplearse comprimidos, polvos, cápsulas, píldoras, sellos y pastillas para chupar como formas de dosificación sólidas adecuadas para la administración oral.

Para preparar supositorios, en primer lugar se funde una cera de bajo punto de fusión, tal como una mezcla de glicéridos de ácidos grasos o mantequilla de cacao, y el principio activo se dispersa de forma homogénea en su interior, tal como mediante agitación. La mezcla homogénea fundida entonces se vierte en moldes con un tamaño conveniente, se deja enfriar y, por tanto, solidificar.

Las preparaciones en forma líquida incluyen disoluciones, suspensiones y emulsiones, por ejemplo, disoluciones de agua o de agua-propilenglicol. Para la inyección parenteral, las preparaciones líquidas pueden formularse en disolución en una disolución acuosa de polietilenglicol, disolución salina isotónica, glucosa acuosa al 5% y similares.

Las disoluciones acuosas adecuadas para un uso oral pueden prepararse disolviendo el componente activo en agua y añadiendo agentes colorantes, aromatizantes, estabilizantes y espesantes adecuados, según se desee.

Las suspensiones acuosas adecuadas para un uso oral pueden prepararse dispersando el principio activo finamente dividido en agua con un material viscoso, tal como gomas naturales o sintéticas, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y otros agentes suspensores muy conocidos.

También se incluyen las preparaciones en forma sólida, previstas para convertirse, un poco antes de su uso, en preparaciones en forma líquida para la administración oral. Estas formas líquidas incluyen disoluciones, suspensiones y emulsiones. Estas preparaciones pueden contener, además del principio activo, colorantes, aromas, estabilizantes, tampones, edulcorantes artificiales y naturales, dispersantes, espesantes, agentes solubilizantes y similares. Pueden utilizarse ceras, polímeros, micropartículas y similares para preparar formas de dosificación de liberación sostenida. Además pueden emplearse bombas osmóticas para administrar el compuesto activo de forma uniforme a lo largo de un periodo prolongado.

Las preparaciones farmacéuticas de la invención están preferiblemente en una forma de dosificación unitaria. En esta forma, la preparación se subdivide en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas del principio activo. La forma de dosificación unitaria puede ser una preparación envasada, conteniendo el envase cantidades discretas de la preparación, tales como comprimidos, cápsulas y polvos en viales o ampollas envasados. Además, la forma de dosificación unitaria puede ser una cápsula, comprimido, sello o pastilla para chupar en sí mismos, o puede ser un número apropiado de cualquiera de éstos en una forma envasada.

Una "cantidad eficaz" es una cantidad de un compuesto de la presente invención que cuando se administra a un paciente trata un estado de enfermedad, tal como reestenosis, cáncer, aterosclerosis o angiogénesis. Una "cantidad antiangiogénica eficaz" es una cantidad de un compuesto de la presente invención que cuando se administra a un paciente trata la angiogénesis.

La dosis terapéuticamente eficaz o cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I será, en general, de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal diarios. Las dosis típicas para adultos serán de aproximadamente 50 a aproximadamente 800 mg diarios. La cantidad de componente activo en una preparación de dosis unitaria puede variarse o ajustarse de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 500 mg, preferiblemente de aproximadamente 0,5 mg a 100 mg, según la aplicación particular y la potencia del principio activo. Si se desea, la composición también puede contener otros agentes terapéuticos compatibles. A un sujeto que necesite un tratamiento con un compuesto de fórmula I se le administrará una dosificación de aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg diarios, en una dosis o en dosis múltiples, a lo largo de un periodo de 24 horas.

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Ejemplo 21

Se prepara una formulación farmacéutica en forma de cápsulas de gelatina dura para la administración oral utilizando los siguientes ingredientes:

22

Los anteriores ingredientes se mezclan y se introducen en cápsulas de gelatina dura en cantidades de 460 mg. Un principio activo típico es la 6-(3,5-dimetoxifenil)-2-(2,6-dimetilpiridin-4-ilamino)-8-ciclopropil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. La composición se administra de 2 a 4 veces diarias para el tratamiento de la reestenosis postquirúrgica.

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Ejemplo 22

Formulación para una suspensión oral

23

La disolución de sorbitol se añade a 40 ml de agua destilada, y se suspende la piridopirimidina en su interior. Se añaden la sacarina, el benzoato de sodio y el aromatizante y se disuelven. El volumen se ajusta hasta 100 ml con agua destilada. Cada mililitro de jarabe contiene 5 mg de principio activo.

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Ejemplo 23

Se preparan comprimidos que contienen cada uno 60 mg del principio activo.

24

Los principios activos, el almidón y la celulosa se hacen pasar a través de un tamiz de EEUU de malla nº 45 y se mezclan a fondo. La disolución de polivinilpirrolidona se mezcla con los polvos resultantes y después se hace pasar a través de un tamiz de EEUU de malla nº 14. Los gránulos se secan de 50ºC a 60ºC, y se hacen pasar a través de un tamiz de EEUU de malla nº 18. El carboximetilalmidón de sodio, el estearato de magnesio y el talco, que previamente se habían hecho pasar a través de un tamiz de EEUU de malla nº 60, entonces se añaden a los gránulos que, después de mezclar, se comprimen en una máquina de fabricación de comprimidos para producir comprimidos que pesan cada uno 150 mg.

Un principio activo típico que se utiliza en la anterior preparación es el compuesto del ejemplo 12.

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Ejemplo 24

Se prepara una composición parenteral adecuada para la administración mediante inyección disolviendo 100 mg de 2-(piridin-4-ilamino)-6-(3,5-diisopropoxifenil)-8-isobutil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona en 250 ml de una disolución acuosa de cloruro de sodio al 0,9% y se ajusta el pH de la disolución a aproximadamente 7,0. Esta formulación resulta adecuada para el tratamiento del cáncer de mama.

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Ejemplo 25

Preparación de supositorios

Una mezcla de 500 mg de 2-(piridin-4-ilamino)-6-(3,5-dimetoxifenil)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona y 1500 mg de aceite de teobroma se mezcla hasta la uniformidad a 60ºC. La mezcla se enfría hasta 24ºC en moldes ahusados. Cada supositorio pesará aproximadamente 2 g y puede administrarse de 1 a 2 veces diarias para el tratamiento de infecciones bacterianas.

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Ejemplo 26

Preparación de liberación lenta

Se colocan 500 miligramos de hidrocloruro de 6-(3,5-dietoxifenil)-2-(2,6-dietilpiridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona en un comprimido de bomba osmótica y se administra por vía oral para el tratamiento y prevención de la reestenosis.

Los compuestos de la invención se han evaluado en los ensayos biológicos in vitro descritos en la patente de EEUU nº 5.733.914. Se han comparado con compuestos representativos de la patente 5.733.914 y han mostrado mayor selectividad para inhibir VEGF y FGF, sin inhibir las quinasas de la familia Src, c-Src y Lck. Por ejemplo, los datos en la tabla 1 a continuación muestran una comparación del ejemplo 8 de la presente invención con dos compuestos incluidos en la patente 5.733.914. El compuesto de referencia A tiene un grupo 2,6-diclorofenilo en la posición 6. El compuesto de referencia B tiene un grupo 3,5-dimetoxifenilo en la posición 6 y un fenilamino sustituido en la posición 2. El compuesto de la invención del ejemplo 8 tiene el 3,5-dimetoxifenilo requerido en la posición 6, y el (4-piridil)amino requerido en la posición 2. Las estructuras se muestran en la tabla 1, junto con sus respectivas actividades inhibidoras frente a diversas tirosina quinasas, cuando se evalúan en los módelos descritos en la patente 5.733.914.

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Ensayos de inhibición de quinasas TABLA 1 Estructuras de los compuestos de referencia A y B y del compuesto de la invención del ejemplo 8, y actividades de inhibición de quinasas comparativas

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26

27

Los datos de inhibición de quinasas en la tabla 1 establecen que el compuesto del ejemplo 8 es más selectivo en su actividad por VEGFR-2 y FGFR-1 (valores nM de CI_{50}) comparado con PDGFR, Lck y c-Src (valores \muM de CI_{50}) que los compuestos de referencia A y B. Los compuestos de referencia inhiben con gran potencia las cinco tirosina quinasas en un grado similar, lo cual puede producir una mayor incidencia de efectos secundarios no deseados tras una terapia con los compuestos más selectivos. El perfil de selectividad de quinasas preferido del compuesto del ejemplo 8 es compartido por los otros compuestos representativos de la invención que aparecen en la tabla 2. La actividad de inhibición de los compuestos de los ejemplos 8, 9, 10, 11 y 12 y los compuestos de referencia A y B se evaluó utilizando el fluoroinmunoensayo de lantánidos potenciado disociado ("Dissociated Enhanced Lanthanide Fluoroimmuno Assay", DELFIA) (Frank Loganzo y Carolyn Hardy, A sensitive, time-resolved fluorometric assay for the detection of inhibitors of phosphotyrosine kinases. American Biotechnology Laboratory, diciembre 1998). Se revistieron placas DELFIA (EG&G Wallac, Gaithersburg, MD) durante la noche con poli-Glu-Tyr (4:1) (Sigma, St. Louis, MO) a temperatura ambiente, se lavaron (reactivo de lavado DELFIA, EG&G Wallac), y se rociaron con 1 \mul de dilución de inhibidor o vehículo control de DMSO por pocillo. En algunos casos, la quinasa se autofosforiló antes del análisis mediante una incubación durante 45 minutos a 4ºC en presencia de ATP 4 mM y MgCl_{2} 25 mM. Un ensayo de reacción de quinasas de 100 \mul típico contiene Tris 20 mM (pH 7,5), MgCl_{2} 20 mM, NaCl 50 mM, DTT 5 mM e inhibidores de proteasas (minicomprimidos de cóctel de inhibidores de proteasas exentos de EDTA, Boehringer Mannheim, Indianápolis, IN), ATP 40 \muM, y una concentración apropiada de inhibidor. Se dejó que la reacción continuase durante 30 minutos a temperatura ambiente. La placas se lavaron, se bloquearon durante 30 minutos a temperatura ambiente (albúmina de suero bovina al 0,5% en tampón de ensayo DELFIA, EG&G Wallac) y se lavaron. Se añadieron 100 microlitros de anticuerpo antifosfotirosina conjugado con europio en tampón de ensayo DELFIA a cada pocillo. La placas se incubaron durante 1 hora y se decantaron. Se añadieron 100 microlitros de disolución de potenciación DELFIA (EG&G Wallac) y se determinó la fluorescencia resuelta en el tiempo de las reacciones utilizando un contador de múltiples marcadores VICTOR2 1420 (EG&G Wallac). Los compuestos se ensayaron desde 10 hasta 0,0001 \muM. Se empleó c-Src (Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY) a 3 unidades por reacción. Los dominios de quinasa de FGFR-1, VEGFR-2, Lck y PDGF se purificaron a partir de sistemas de expresión de vectores de baculovirus, y se utilizaron en los ensayos a 20 nM.

TABLA 2 Datos de inhibición de quinasas

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Ensayos de proliferación celular

Células endoteliales de vena umbilical humanas (HUVEC) (Clonetics, Palo Alto, CA) se sembraron a 2000 células por pocillo en medio de crecimiento que contenía suero al 2% (EGM, Clonetics) y se dejó que prendieran durante la noche (37ºC, CO_{2} al 5%, humedad al 100%). Células de glioma de rata C6 (ATCC) se sembraron a 600 células por pocillo y se incubaron en medio F10 (GIBCO, Gaithersburg, MD) suplementado con suero de caballo al 15%, suero bovino fetal al 2,5%, y glutamina 1 mM. Células de ovario humano A90 (doctor Kent Crickard, SUNY/AB Medical School) se sembraron a 600 células por pocillo en RPMI1640 (GIBCO) más suero bovino fetal al 10%. La placas se incubaron durante la noche (37ºC, CO_{2} al 5%, humedad al 100%) para dejar que las células prendieran. Se añadieron diluciones del compuesto de ensayo a los pocillos apropiados y se continuó la incubación durante 4 días más. Las monocapas se fijaron en ácido tricloroacético al 10% (30 minutos a 4ºC), se lavaron con agua destilada y se tiñeron con sulforrodamina B (al 0,075% en ácido acético al 1%) (Sigma). Las placas se lavaron en ácido acético al 1%, y el tinte unido se solubilizó en 100 \mul de base Tris sin tamponar. Se midió la absorbancia a 540 nm utilizando una longitud de onda de filtro de referencia de 630 nm. Se determinó la potencia del inhibidor (CI_{50}) frente a la proliferación celular, y se evaluó la selectividad por las células endoteliales comparando la inhibición de la proliferación de HUVEC frente a la proliferación de las células tumorales A90 y C6 (tabla 3). Los compuestos de los ejemplos 8, 9, 10, 11 y 12 fueron inhibidores selectivos de la proliferación de células endoteliales estimulada por suero en un cultivo célular.

TABLA 3 Inhibición de la proliferación de células HUVEC estimulada por suero

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Estudios de permeabilidad

Se realizaron estudios de transporte celular con células Caco-2 cultivadas en pocillos Snapwells^{TM} entre 22 y 28 días tras la siembra. De forma típica, se empleó tampón MES 10 mM (pH 6,5) con KCl 5 mM, NaCl 135 mM, y CaCl_{2} 1,8 mM para el lado apical, y MOPS 10 mM (pH 7,4) con KCl 5 M, NaCl 132 mM, y CaCl_{2} 1,8 mM con D-glucosa 5 mM para el lado basolateral. En el día del experimento, el medio de crecimiento se aspiró y las monocapas celulares se preequilibraron con tampones apropiados a 37ºC, y se realizaron medidas TEER para confirmar la integridad de las monocapas. Se realizaron medidas de flujo transepitelial montando las monocapas celulares en un sistema de cámaras de difusión unas junto a otras (Precision Instrument Design, Tahoe City, California). Se mantuvo la temperatura a 37ºC con una camisa de agua en circulación. Las disoluciones se mezclaron con circulación de extracción de gases con oxígeno al 95%/dióxido de carbono al 5%. Las disoluciones donantes se mezclaron con los compuestos de ensayo. Se añadió ^{14}C-manitol (marcador de filtración) y ^{3}H-metoprolol (compuesto de referencia) a la cámara apical. Las muestras de donantes y receptores se recogieron a intervalos de tiempo seleccionados durante hasta 3 horas. El manitol y el metoprolol marcados radiactivamente se analizaron utilizando un contador de centelleo (Top Count, Packard Instruments, Downers Grove, Illinois). Los compuestos de ensayo se analizaron utilizando procedimientos de LC-MS/MS. Se calcularon los coeficientes de permeabilidad aparente utilizando la siguiente ecuación:

Pap = (V\cdotdC/dt)/(A\cdotC_{0})

en la que V = volumen de la disolución de receptor en ml; A = superficie específica de la monocapa en cm^{2}; C_{0} = concentración inicial de donante en mM; y dC/dt = cambio en la concentración de fármaco en la cámara del receptor a lo largo del tiempo.

Se considera que los compuestos con permeabilidades similares o mayores que el metoprolol (aproximadamente 30\cdot10-6 cm/seg; absorción 90%) tienen el potencial para completar esencialmente la absorción.

Estudios de estabilidad metabólica

Los compuestos se incubaron individualmente (5 \muM en DMSO) con fracciones S9 de hígado humano y de ratón en tampón KHPO_{4} 50 mM a 37ºC en presencia de NADPH 1,0 mM y otros cofactores. En los minutos 0, 10, 20 y 40 se retiraron partes alícuotas de 100 \mul y se añadieron a 300 \mul de acetonitrilo. Se prepararon curvas patrón de una manera similar con cada compuesto. Las muestras se analizaron para la concentración de origen mediante LC-MS/MS. Se determinó la semivida metabólica in vitro a partir de las gráficas de concentración-tiempo utilizando WinNonlin. Estos datos in vitro representan la velocidad del metabolismo oxidativo, hidrolítico y conjugativo. Se consideró que los compuestos que demostraron una semivida mayor que 50 minutos tenían el potencial de ser metabólicamente estables in vivo.

Los resultados de los anteriores estudios de permeabilidad y metabólicos para los compuestos de referencia A y B, y para el compuesto de la invención del ejemplo 8, se presentan a continuación en la tabla 4.

TABLA 4 Transporte y estabilidad metabólica in vitro

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Actividad antitumoral in vivo

Se evaluó la eficacia anticáncer del compuesto del ejemplo 8 utilizando un modelo de tumor de adenosarcoma mamario murino, M16/C. Este tumor muy vascularizado es muy agresivo con un tiempo de duplicación de 1,5 días. Se implantaron fragmentos de tumor mediante fragmento de trócar en la axila derecha de ratones C3H en el día 0. Se evaluó la eficacia del tratamiento también en un modelo de estado avanzado (tratamiento con el compuesto de ensayo durante nueve días consecutivos después de que los tumores alcanzasen 100 mg). El compuesto del ejemplo 8 se dosificó una vez diaria a lo largo del periodo de tratamiento mediante sonda oral en tampón lactato de sodio 0,005 M, pH 4. Se dejó a los animales sin terapia hasta que los tumores alcanzaron el tamaño evaluable (750 mg). Se determinó el peso de los animales a lo largo del estudio para proporcionar una estimación de la toxicidad del compuesto de ensayo. Una pérdida media de peso >10% (3-4 g) para cualquier grupo de tratamiento es una indicación de la toxicidad para el hospedante. Se evaluó la actividad anticáncer utilizando dos procedimientos. El primero era T/C%, en el que T = masa media de los tumores tratados 3 días después del final de la terapia, y C = masa media del grupo control en ese mismo momento. El mayor grado de actividad antitumoral utilizando esta evaluación se produjo cuando T = 0, y T/C% = 0%. Un valor menor que 40% describe una actividad anticáncer significativa. El segundo procedimiento utiliza el retraso en el crecimiento tumoral (T-C), en el que T = días hasta que la mediana del tumor tratado alcanzó un tamaño evaluable (750 mg), y C = días hasta que los tumores control alcanzaron ese mismo tamaño. Como se muestra en la tabla 5, el compuesto del ejemplo 8 fue bien tolerado y demostró una significativa actividad anticáncer en las cuatro dosis ensayadas (T/C%). El retraso en el crecimiento tumoral (T-C) fue mayor que la duración de la terapia en los niveles de dosis de 40 y 20 mg/kg, y el tratamiento con estas dosis produjo regresiones completas (regresión de los tumores por debajo del nivel de palpamiento) en este modelo.

TABLA 5 Eficacia in vivo del ejemplo 8 contra el adenocarcinoma mamario M16/C

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Claims

1. Un compuesto de fórmula I

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en la que:

R^{1}, R^{2}, R^{5} y R^{6} son independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, tio, tioalquilo, hidroxi, alcanoílo C_{1}-C_{6}, -CN, -NO_{2}, alcanoiloxi C_{1}-C_{6}, COOR^{8}, -CF_{3}, NR^{8}R^{9}, o (X)_{m}-(CH_{2})_{n}-NR^{8}R^{9}, en los que R^{8} y R^{9} son independientemente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcanoílo C_{1}-C_{6}, o R^{8} y R^{9} tomados conjuntamente con el nitrógeno al cual están unidos pueden completar un anillo de 3 a 7 átomos de carbono y que opcionalmente contiene 1, 2 ó 3 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en nitrógeno, nitrógeno sustituido, oxígeno y azufre;

X es NH u O;

m es 0 ó 1;

n es de 0 a 6; con la condición de que m y n no sean ambos 0;

R^{3} y R^{4} son independientemente alquilo C_{1}-C_{6}, o alquilo C_{1}-C_{6} sustituido con halógeno;

y sus solvatos y sales farmacéuticamente aceptables.

2. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{1} y R^{2} son independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, o alcoxi C_{1}-C_{6}.

3. Un compuesto de la reivindicación 2, en el que el halógeno es cloro.

4. Un compuesto de la reivindicación 2, en el que el alquilo C_{1}-C_{6} es metilo o etilo.

5. Un compuesto de la reivindicación 2, en el que el alcoxi C_{1}-C_{6} es metoxi.

6. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{1} y R^{2} son hidrógeno.

7. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{5} y R^{6} son independientemente hidrógeno, halógeno o alquilo C_{1}-C_{6}.

8. Un compuesto de la reivindicación 7, en el que el halógeno es cloro.

9. Un compuesto de la reivindicación 7, en el que el alquilo C_{1}-C_{6} es metilo.

10. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{7} es alquilo C_{1}-C_{6}, o cicloalquilo C_{3}-C_{6}.

11. Un compuesto de la reivindicación 10, en el que el alquilo C_{1}-C_{6} es etilo.

12. Un compuesto de la reivindicación 10, en el que el cicloalquilo C_{3}-C_{6} es ciclopentilo.

13. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{1}, R^{2}, R^{5} y R^{6} son todos hidrógeno.

14. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{3} y R^{4} son ambos metilo.

15. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{7} es alquilo C_{1}-C_{6}.

16. Un compuesto de la reivindicación 1 que es la 6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-(piridin-4-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona.

17. Un compuesto de la reivindicación 1 que es:

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-(2-metilpiridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-(2,6-dimetilpiridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-(2-cloropiridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-(2,6-dimetoxipiridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-(piridin-4-ilamino)-8-metil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

6-(2-cloro-3,5-dimetoxifenil)-2-(piridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

6-(2,6-dicloro-3,5-dimetoxifenil)-2-(piridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-(piridin-4-ilamino)-8-ciclopentil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-[2-(4-metilpiperizinil)piridin-4-ilamino]-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-[2-(2-dimetilaminoetoxi)piridin-4-ilamino]-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona; y

6-(3,5-dimetoxifenil)-2-[2-(2-dietilaminoetilamino)piridin-4-ilamino)-8-etil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona.

18. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1, junto con un excipiente, vehículo o diluyente para éste.

19. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1 que es la 6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-(piridin-4-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, junto con un excipiente, vehículo o diluyente para ésta.

20. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 para la fabricación de un producto farmacéutico para el tratamiento de la angiogénesis descontrolada.

21. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 para la fabricación de un producto farmacéutico para el tratamiento del cáncer.

22. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 que es la 6-(3,5-dimetoxifenil)-8-etil-2-(piridin-4-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, para la fabricación de un producto farmacéutico para el tratamiento del cáncer.