ES2310171T3 - Dispositivo y metodo de recogida de muestras. - Google Patents
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Abstract
Un dispositivo (10) de recogida de muestras para recoger y almacenar una muestra (18) biológica para un análisis subsiguiente, que comprende: una lámina (11) de base dispuesta de modo que la muestra (18) biológica pueda situarse sobre la misma; una lámina (12) de cobertura asegurada articuladamente a dicha lámina (11) de base, estando adaptada dicha lámina (12) de cobertura para el aseguramiento adhesivo sustancialmente irreversible a dicha lámina (11) de base al menos sobre una porción sustancial de sus superficies enfrentadas; y una lámina (13) de soporte asegurada de forma liberable a la superficie de dicha lámina (12) de cobertura enfrentada a dicha lámina (11) de base.
Description
Dispositivo y método de recogida de
muestras.
La presente invención trata de un sistema de
muestreo y, más particularmente, de un sistema de muestreo para el
almacenamiento de muestras biológicas para un análisis
subsiguiente.
Las muestras biológicas se recogen
frecuentemente en el campo para un análisis posterior con una
variedad de propósitos. El análisis que ha de efectuarse a menudo
será un análisis del DNA contenido en la muestra para establecer el
perfil genético de la muestra. Tal análisis puede efectuarse, por
ejemplo, para verificar y/o rastrear líneas genéticas en
existencias, para identificar rasgos deseables en animales
identificando marcadores genéticos para estos rasgos o para
identificar la fuente de material animal o vegetal en un producto
alimenticio. Por ejemplo, la carne y los productos cárnicos pueden
rastrearse usando análisis de DNA para asegurar que no se ha
producido la sustitución por un producto de menor calidad en ninguna
fase del procesamiento del producto cárnico o para identificar la
fuente de carne que se encuentra que está contaminada en el
mercado.
El análisis de DNA con el propósito de
identificar un organismo individual es una técnica bien conocida.
Por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.211.286, la Patente
de Estados Unidos Nº 5.101.970 y la Patente de Estados Unidos Nº
5.856.102 describen sistemas para la identificación de seres humanos
individuales de este modo. En cada caso, la invención trata de un
sistema de identificación personal en el que muestras que contienen
DNA tales como cabello se almacenan en sobres de plástico en el
domicilio de una persona para ayudar a su identificación si la
persona se pierde o desaparece. Sin embargo, cada una de estas
muestras confía en el crédito de los que manejan los materiales que
contienen DNA antes de someterse al análisis para asegurar la
integridad de la muestra, ya que no existen medios de evitar la
manipulación del sistema o la sustitución por muestras
alternativas. De acuerdo con esto, el único uso para tales sistemas
es para que un individuo almacene muestras de su propio material
que contiene DNA en un lugar donde se tiene control de esa muestra,
tal como en el frigorífico familiar.
Se han hecho intentos de asegurar que la
identidad de la carne y los productos cárnicos pueda rastrearse a
través del procedimiento de producción de una variedad de modos. Por
ejemplo, la identidad de ternera, cerdo y pollo sobre la base de
una partida o remesa se registra a veces usando números de
partida/remesa aplicados a la fuente de la partida/remesa desde el
procedimiento de matanza hasta el consumidor. En efecto, en algunos
países, por ejemplo el Reino Unido, las agencias gubernamentales
expiden códigos numéricos o alfanuméricos a los ganaderos que
subsiguientemente colocan tales códigos en cada uno de los animales
criados por ellos. Los códigos colocados se inscriben generalmente
en etiquetas para las orejas aplicadas al animal y se registran
sobre una carta peculiar para el animal para permitir la
identificación única de ese animal. También pueden registrarse
otros datos diversos del animal, tales como los registros de
vacunación del animal. La información puede dirigirse a una agencia
gubernamental progresivamente o en algún momento justo antes del
sacrificio del animal. Sin embargo, este sistema es
administrativamente intensivo y los registros de identificación y
prueba no están fácilmente integrados.
En el procedimiento de matanza un animal a
menudo se divide en una etapa temprana, y entonces se generan
subcódigos que identifican cada mitad del animal y continúan
usándose para identificar las mitades. Sin embargo, se produce una
división adicional más tarde en el procedimiento de
descuartizamiento, en cuyo punto se hace poco práctico continuar
asignando códigos a cada partida de carne. De acuerdo con esto,
aunque se han realizado intentos de continuar identificando la
carne usando etiquetas o membretes a través de todo el
procedimiento, es difícil asegurar que tales etiquetas y membretes
estén aplicados exactamente. Por lo tanto, la información
proporcionada en tales sistemas puede ser inexacta y los sistemas
exigen mucho trabajo y son muy costosos. De acuerdo con esto, la
carne y los productos cárnicos frecuentemente se venden al por menor
sin etiqueta o membrete de identificación capaz de rastrear el
producto desde el procedimiento de matanza hasta el animal desde el
que se origina.
La Solicitud Internacional Nº PCT/IE98/00021
describe un método para identificar al animal del que se deriva un
producto cárnico, que comprende genotipificar la carne, comparar el
genotipo con genotipos animales conocidos y localizar cualquier
genotipo emparejado para identificar el animal del que se deriva el
producto cárnico. La aplicación de este método requiere que se
efectúe análisis de DNA de todos los animales y los datos
almacenados y a continuación se emparejen con cualesquiera
productos cárnicos probados. Alternativamente, las muestras
procedentes de tales animales pueden almacenarse y a continuación
analizarse más tarde si surge la necesidad. En cualquier caso, una
biblioteca de información genética de animales se construye y se
compara con el perfil de DNA de carne analizada, bien con
propósitos de garantía de calidad habituales (para rastrear la
historia del producto para asegurar, por ejemplo, que no se ha
producido la sustitución por una carne de calidad inferior) o bien,
en los casos en los que se ha identificado contaminación de la
carne, de modo que la carne pueda rastrearse de nuevo hasta la
fuente comercial en un esfuerzo por identificar la causa de la
contaminación.
El sistema de muestreo propuesto en
PCT/IE98/00021 consiste en tomar muestras de animales de manera
convencional y a continuación colocarlas en un tubo o celdilla de
identificación que se marca con el código de identificación de la
etiqueta del animal, pero no se asegura de ningún modo. La muestra
se transfiere a continuación a un laboratorio para el análisis por
PCR. El tubo o la celdilla con membrete se coloca en un pocillo de
una placa de microvaloración que tiene una multiplicidad de tales
pocillos, estando provisto cada pocillo de un código que se
empareja con el código de identificación de la etiqueta del animal.
El análisis se efectúa en la placa de microvaloración marcada pero
no existe un modo de asegurar, aparte de emparejar los códigos
manualmente, que el tubo o la celdilla de identificación correctos
estén puestos en el pocillo correcto de la placa de
microvaloración. Así, si solo se usa el código procedente de la
placa de microvaloración para la identificación subsiguiente,
pueden producirse errores. Sin embargo, es un problema aún mayor la
posibilidad de que las muestras puedan cambiarse de un tubo o
celdilla de identificación a otro mucho antes de que tales celdillas
o tubos lleguen al laboratorio en el que se efectúa el análisis, ya
que los tubos o las celdillas no están asegurados. De acuerdo con
esto, si una persona con intención fraudulenta decide sustituir una
muestra por otra en las muestras proporcionadas para el análisis de
DNA, esta sustitución no será detectable. La presente invención
busca proporcionar un modo de asegurar que la identidad de una
muestra biológica sea conocida con certeza cuando se efectúa un
análisis de la muestra.
De acuerdo con un primer aspecto de la presente
invención, se proporciona un dispositivo de recogida de muestras
para recoger y almacenar una muestra biológica para un análisis
subsiguiente, que comprende:
- una lámina de base dispuesta de modo que la muestra biológica pueda situarse sobre la misma;
- una lámina de cobertura asegurada articuladamente a dicha lámina de base, estando adaptada dicha lámina de cobertura para el aseguramiento adhesivo sustancialmente irreversible a dicha lámina de base al menos sobre una porción sustancial de sus superficies enfrentadas; y
- una lámina de soporte asegurada de forma liberable a la superficie de dicha lámina de cobertura enfrentada a dicha lámina de base.
De acuerdo con un segundo aspecto de la presente
invención, se proporciona un sistema para el análisis de una
muestra biológica, que comprende:
- un dispositivo de recogida de muestras de acuerdo con el primer aspecto;
- medios para tomar al menos una porción de dicha muestra para el análisis junto con al menos la parte de dichos medios de almacenamiento en los que está encerrada;
- medios para digerir dicha muestra, o una porción de la misma, junto con al menos dicha parte de dichos medios de almacenamiento; y
- medios para analizar dicha muestra.
De acuerdo con un tercer aspecto de la presente
invención, se proporciona un método para recoger y almacenar una
muestra biológica, que comprende las etapas de:
- aplicar dicha muestra biológica a una lámina de base que tiene una lámina de cobertura asegurada articuladamente a la misma, estando adaptada dicha lámina de cobertura para el aseguramiento adhesivo sustancialmente irreversible a dicha lámina de base sobre al menos una porción sustancial de sus superficies enfrentadas y teniendo una lámina de soporte asegurada de forma liberable a la misma;
- retirar dicha lámina de soporte; y
- dejar que dicha lámina de cobertura se adhiera sustancialmente de forma irreversible a la lámina de base y/o la muestra biológica situada sobre dicha lámina de base.
De acuerdo con un cuarto aspecto de la
invención, se proporciona un método para analizar una muestra
biológica, que comprende las etapas de:
- recoger y almacenar una muestra biológica de acuerdo con el tercer aspecto;
- tomar al menos una porción de dicha muestra junto con al menos la parte de dichos medios de almacenamiento en la que está encerrada;
- digerir dicha muestra, o una porción de la misma, junto con al menos dicha parte de dichos medios de almacenamiento; y
- analizar dicha muestra.
En particular, la lámina de cobertura puede
estar revestida con un adhesivo permanente a través de toda su
superficie, y la porción de la lámina de cobertura a la que no está
asegurada la lámina de soporte constituye la conexión articulada
entre la lámina de cobertura y la lámina de base. Una lámina de
soporte generalmente está asegurada de forma liberable a la
superficie de la lámina de cobertura para evitar que se pegue a la
lámina de base antes de que se utilice para recoger una muestra
biológica.
Ventajosamente, dicha lámina de base está
impresa en su reverso. Un código de barras puede imprimirse en esta
lámina junto con instrucciones para el uso del dispositivo y/o un
área para escribir un código de identificación.
Ventajosamente, la lámina de base es una lámina
de papel, típicamente una lámina de papel cuché satinado. La lámina
de cobertura es típicamente una película de polipropileno
transparente y la lámina de soporte es un papel de liberación.
La muestra biológica puede ser cualquier parte
corporal adecuada, incluyendo pelo, piel, frotis bucales, sangre,
músculo, hueso, costras de animal o los órganos de un animal, o
puede ser material vegetal tal como hojas, tallos o material
leñoso. También pueden muestrearse fluidos corporales, incluyendo
sangre, saliva, semen y orina.
Preferiblemente, la muestra se somete a un
análisis para establecer un perfil de DNA, pero el análisis puede
ser para cualquier material contenido en dicha muestra con tal de
que esté presente en cantidades suficientes para el análisis y que
ninguno de los materiales de dichos medios de almacenamiento
interfiera con el análisis. Por ejemplo, la muestra puede
analizarse con respecto al contenido de proteínas o minerales, o con
respecto al contenido de otros materiales tales como carbohidrato o
lípido. También puede analizarse con respecto a la presencia de
productos químicos tales como contaminantes químicos, por ejemplo
plaguicidas, en la muestra. Típicamente, el análisis comprende la
amplificación del DNA contenido en una muestra, tal como pelo de
animal, usando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) seguida
por secuenciación de DNA para establecer un perfil genético. El
propósito del análisis usado es, por ejemplo, verificar y/o rastrear
líneas genéticas en existencias, identificar rasgos deseables en
animales identificando marcadores genéticos para estos rasgos o
identificar la fuente de material animal o vegetal en un producto
alimenticio. En particular, la carne y los productos cárnicos
pueden rastrearse usando análisis de DNA para asegurar que no se ha
producido la sustitución por un producto de calidad inferior en
ninguna fase del procesamiento del producto cárnico o para
identificar la fuente de carne que se encuentra que está
contaminada en el mercado. Típicamente, la muestra se toma para el
análisis perforando al menos una porción de la muestra que se ha
recogido junto con la parte de dichos medios de almacenamiento en
la que está encerrada, usando un dispositivo de perforación
convencional. Se apreciará que no puede producirse contaminación de
la muestra en este procedimiento, como puede producirse, por
ejemplo, si una muestra se transfiere desde un recipiente a otro
para el análisis. Por otra parte, la integridad de la muestra se
asegura ya que no existe la posibilidad de cambio accidental de la
muestra en esta fase.
La muestra junto con la parte de dichos medios
de almacenamiento se digiere mediante medios convencionales para el
análisis. En el caso de DNA para análisis por PCR, esto puede
producirse mediante una extracción alcalina o extracción con
fenol/cloroformo convencional. En esta etapa, el material que
constituye dichos medios de almacenamiento puede disolverse o
disolverse parcialmente, pero al menos no debe interferir con el
desarrollo del perfil de DNA.
En una realización particularmente preferida de
la invención, el dispositivo también tiene un código correspondiente
a o conectado con el código de identificación de la etiqueta del
animal. Esto significa que la muestra procedente del animal se
identifica en el punto de toma de muestra mediante el mismo
identificador único o un identificador único diferente con tal de
que los dos estén relacionados con el animal, y este identificador
único permanece en yuxtaposición física con la muestra biológica
desde en el momento en el que se toma hasta el momento en el que la
muestra se analiza. Dado que los medios de almacenamiento son
evidentes a la manipulación, cualquier manipulación después de la
recogida, por ejemplo cuando se archiva una muestra, será fácilmente
evidente para una persona que analice la muestra.
Típicamente, dicha lámina de base está adaptada
para que una muestra biológica se sitúe sobre una primera
superficie y tiene una impresión que identifica la muestra sobre una
segunda superficie. Típicamente, la impresión es un código de
barras que codifica el código de identificación de la etiqueta del
animal o el propio código de identificación del animal. En el
último caso, el código puede ser escrito en un espacio apropiado por
la persona que toma la muestra. Típicamente, la segunda superficie
también incluye información acerca de cómo usar el dispositivo de
recogida de muestras.
La lámina de base es típicamente una lámina de
papel rectangular, de ahí que la primera superficie sea el anverso
de dicha lámina de base y la segunda superficie sea su reverso.
Preferiblemente, la lámina de base es un papel cuché satinado para
asegurar una adhesión fuerte, y no debe contener productos químicos
que inhiban o interfieran con el análisis que ha de efectuarse.
Típicamente, es una lámina de papel cuché satinado A2 de 150
g/m^{2}.
Cada lámina de base sustancialmente rectangular
puede estar unida por una línea débil a una lámina sustancialmente
idéntica para conectar una pluralidad de dispositivos de acuerdo con
la presente invención. Esto permite que los dispositivos se le
proporcionen al usuario como un rodillo a partir del cual pueden
cortarse dispositivos de almacenamiento de muestras individuales.
La lámina de cobertura también puede estar unida a láminas de
cobertura adyacentes mediante una línea de separación, en cuyo caso
la separación de la lámina de cobertura de la lámina de cobertura
adyacente también es necesaria para retirar un dispositivo de
almacenamiento de muestras individual. Alternativamente, aunque no
se prefiere, solo la lámina de cobertura pueda estar conectada a
una lámina de cobertura adyacente mediante una línea de
separación.
La lámina de base y la lámina de cobertura
también incluyen un bocado elíptico tomado de las mismas que hace
más fácil que la lámina de soporte se retire de la lámina de
cobertura, y también es útil para alinear rodillos de dispositivos
de almacenamiento de muestras individuales durante la impresión del
rodillo. La lámina de cobertura puede estar asegurada
articuladamente a la lámina de base de cualquier manera conveniente,
pero típicamente está asegurada a la misma a través de un
aseguramiento adhesivo a lo largo de una línea adyacente a un borde
de la lámina de base. El aseguramiento adhesivo puede ser a lo largo
de toda la longitud de dicho primer borde o a lo largo de una
porción de dicho borde.
Típicamente, la lámina de cobertura está
revestida a través de toda su superficie con un adhesivo permanente
y la lámina de soporte se aplica a la porción de la lámina de
cobertura que está destinada a encerrar la muestra biológica. El
resto de la lámina de cobertura se adhiere a continuación a la
lámina de base para asegurarla articuladamente a la misma.
La lámina de cobertura es típicamente una
película polímera, preferiblemente una película de polipropileno
transparente.
El adhesivo puede ser cualquier adhesivo
adecuado, y típicamente es un adhesivo piezosensible. No debe
contener productos animales a fin de no introducir ningún DNA
extraño en el procedimiento de análisis.
La lámina de soporte es típicamente un papel de
liberación. Durante el uso, cuando la lámina de soporte se despega
de la lámina de cobertura, el adhesivo de la lámina de cobertura se
une firmemente y de forma sustancialmente irreversible a dicha
lámina de base. Cualquier esfuerzo para despegar la lámina de
cobertura de la lámina de base típicamente daría como resultado la
destrucción de la lámina de base y/o la lámina de cobertura, o al
menos una mutilación suficiente de las dos para que el intento de
manipular una muestra fuera evidente.
Un material absorbente puede asegurarse a la
superficie frontal de dicha lámina de base. Esto hace a la recogida
de fluidos corporales más fácil a medida que una cantidad de estos
pueden ser absorbidos por la capa absorbente. Típicamente, la capa
absorbente es papel de transferencia.
Los dispositivos de acuerdo con la presente
invención también pueden suministrarse junto con un dispositivo de
muestreo para muestrear tejido animal.
El dispositivo de recogida de muestras puede
suministrarse como parte de un estuche que comprende además un
dispositivo de muestreo. El dispositivo de muestreo recoge una
muestra consistente y reproducible de los animales mientras que
simultáneamente evita cualquier contaminación cruzada de tejido. La
naturaleza del dispositivo de muestreo será bien entendida por un
experto en la técnica, pero típicamente es un fórceps o unos
alicates. El estuche también puede incluir instrucciones para el
uso del dispositivo de recogida de muestras.
Realizaciones preferidas de la presente
invención se describirán ahora, solamente a modo de ejemplo, con
referencia a los dibujos adjuntos, en los que
la Fig. 1 es una vista en planta inferior de un
dispositivo para almacenar una muestra biológica de acuerdo con la
presente invención;
la Fig. 2 es una sección transversal a través de
un dispositivo para almacenar una muestra biológica de acuerdo con
la presente invención;
la Fig. 3a es un diagrama de flujo que ilustra
la manera en la que un dispositivo para el almacenamiento de una
muestra biológica de acuerdo con la presente invención se prepara
para el uso;
la Fig. 3b es un diagrama de flujo que ilustra
la aplicación subsiguiente de una muestra biológica a dicho
dispositivo;
la Fig. 3c es un diagrama de flujo que ilustra
la manera en la que una porción de dicha muestra se toma para el
análisis; y
la Fig. 4 muestra un dispositivo para almacenar
una muestra de un fluido corporal de acuerdo con la presente
invención.
Un dispositivo 10 de almacenamiento de muestras
de acuerdo con la presente invención, según se observa mejor en la
Fig. 2 y la primera estructura de la Fig. 3a, comprende una lámina
11 de base dispuesta de modo que la muestra biológica pueda
situarse sobre la misma, una lámina 12 de cobertura asegurada
articuladamente a la lámina 11 de base y que tiene una lámina 13 de
soporte asegurada de forma liberable a la misma. La lámina 11 de
base está impresa en su reverso 14, que contiene un código de barras
15 y también un espacio para escribir un código de identificación
de la etiqueta del animal cuando el muestreador no tenga equipos
para leer un código de barras. Además, el reverso 14 de la lámina
11 de base contiene instrucciones para el uso del dispositivo, como
se analizará posteriormente con relación a las FIGS.
3a-3c. La lámina 11 de base es una lámina de papel
cuché satinado A1 de 150 g/m^{2} adaptado para recibir una muestra
biológica en su anverso 17, como se observa mejor en la primera
estructura de la Fig. 3b, donde una muestra 18 biológica se ha
depositado sobre el mismo. También se adhiere de forma
sustancialmente irreversible a la lámina 12 de cobertura cuando la
lámina 13 de soporte se retira de la misma y las dos se ponen en
contacto.
Como se observa mejor en la Fig. 3a, la lámina
12 de cobertura está asegurada articuladamente a la lámina 11 de
base. De hecho, la superficie 19 de la lámina 12 de cobertura que se
enfrenta a la lámina 11 de base está completamente cubierta con
adhesivo y la lámina 13 de soporte está asegurada de forma liberable
sobre solo una porción de la lámina 12 de cobertura. Se apreciará
que la lámina 13 de soporte está hecha de un papel de liberación y
así puede despegarse fácilmente de la lámina 12 de cobertura, pero
el adhesivo de la lámina 12 de cobertura se une de forma
sustancialmente irreversible a la lámina 11 de base. Esto significa
que la porción de la lámina 12 de cobertura que no está cubierta
por la lámina 13 de soporte se une fuertemente a la lámina 11 de
base. De acuerdo con esto, dejando una región de la lámina 12 de
cobertura sin cubrir por la lámina 13 de soporte, la lámina 12 de
cobertura puede asegurarse articuladamente a la lámina 11 de base.
En este caso, la lámina 13 de soporte es de conformación
sustancialmente rectangular y se corresponde en tamaño al tamaño de
la lámina 12 de cobertura, que también es de conformación
sustancialmente rectangular, excepto que la longitud de las caras
20-21 es ligeramente menor que la de las caras 22,
23 de la lámina 12 de cobertura. De ahí que una pequeña porción de
la lámina 12 de cobertura adyacente a un borde se deje expuesta, y
así se adhiera a la lámina 11 de base para formar una conexión
articulada a lo largo de la línea 24.
Como se observa mejor en la Fig. 4, un cuadrado
de papel 30 de transferencia puede unirse al anverso 17 de la
lámina 11 de base. Muestras de fluidos corporales tales como sangre,
saliva, semen y orina pueden depositarse sobre el papel de
transferencia y serán absorbidas.
Durante el uso, una persona que toma una muestra
biológica leerá las instrucciones del reverso 14 de la lámina 11 de
base y las seguirá. De acuerdo con esto, a esa persona se le
indicaría que despegara la lámina 13 de soporte de la manera
mostrada en la Fig. 3a y así expusiera el adhesivo sobre la lámina
12 de cobertura. Esta persona colocaría a continuación muestra 18
biológica centralmente sobre el anverso 17 de la lámina 11 de base
y dejaría que la lámina 13 de cobertura cayera sobre la muestra 18
biológica y la lámina 11 de base a fin de adherirse a ellas. Esto
se observa mejor en la Fig. 3b. Habiendo hecho esto, la muestra
biológica puede archivarse o enviarse inmediatamente para el
análisis. En todos los momentos, el código de barras o el código de
identificación de la etiqueta del animal escrito en el soporte está
en yuxtaposición física con la muestra, que está encerrada en el
dispositivo 10 de almacenamiento de muestras. Si alguien intentara
retirar la muestra despegando la lámina 13 de cobertura de la
lámina 11 de base, se produciría daño en una o ambas láminas, y el
intento de manipular la integridad de la muestra sería apreciado por
una persona que efectuara subsiguientemente un análisis de la
muestra.
Cuando va a efectuarse el análisis de la
muestra, se emplea una perforadora 25 para perforar un orificio a
través del centro de la muestra 18 biológica para crear una
submuestra 26. Se apreciará que la perforadora retira la muestra
biológica junto con las porciones tanto de la lámina 11 de base como
de la lámina 13 de cobertura que la encierran. La muestra 18
biológica no necesita retirarse del dispositivo 10 de almacenamiento
de muestras antes del análisis, de ahí que se minimice la
posibilidad de contaminación cruzada y se limite la oportunidad de
manipular la muestra o de sustitución por otra muestra incluso en la
fase de análisis. La submuestra 26 que se perfora se situará
inmediatamente en un recipiente apropiado para la digestión y el
análisis subsiguiente de manera convencional.
Los resultados del análisis pueden emparejarse a
continuación con el código de identificación de la etiqueta del
animal y/o el código de barras para añadirse a la información
recopilada sobre el animal del que procede la muestra. Esto permite
una identificación inequívoca de la identidad genética del animal y
permite así la comparación de un análisis de DNA subsiguiente de
una muestra de carne con estos registros para identificar la fuente
de cualquier pieza de carne individual. A su vez, esto permite que
se establezca una línea de control para asegurar que no se ha
producido la sustitución de carne o productos cárnicos y permite que
se identifique una fuente de contaminación a través del rastreo de
la carne contaminada de nuevo desde el procedimiento de matanza
hasta un animal particular.
Los resultados de los análisis también pueden
usarse para verificar y/o rastrear líneas genéticas en existencias.
Así, la línea sanguínea supuesta de un animal puede verificarse
comparando el perfil de DNA recopilado para el animal con los
registros establecidos para otros animales. Cuando el animal
particular probado tiene un rasgo deseable, los resultados de la
prueba pueden usarse para identificar marcadores genéticos para este
rasgo. Posteriormente, los animales que tienen este marcador
genético pueden seleccionarse cuando se crían en un esfuerzo por
establecer el rasgo deseado ampliamente dentro de una raza.
Alternativamente, el análisis puede ser un
análisis químico para establecer la composición de la muestra
biológica. Por ejemplo, la muestra puede analizarse con respecto al
contenido de proteínas o minerales, o con respecto al contenido de
otros materiales tales como carbohidrato o lípido. El análisis
también puede ser para la presencia de productos químicos tales
como contaminantes químicos. Por ejemplo, la presencia de niveles
traza de plaguicidas en una muestra puede detectarse y a
continuación rastrearse la contaminación de nuevo hasta su
fuente.
Ejemplo
1
Una muestra biológica recogida y almacenada de
acuerdo con la presente invención puede someterse a continuación a
análisis por PCR para obtener un perfil de DNA usando el siguiente
método:
Se perfora un orificio a través del centro de un
dispositivo de almacenamiento de muestras de acuerdo con la
presente invención en la región en la que está situada la muestra
biológica. Así, se crea una submuestra que contiene una porción de
la muestra biológica junto con la parte del dispositivo de
almacenamiento de muestras en la que está encerrada. Este material
se pone a continuación en un tubo de 0,2 \mul o un pocillo de una
placa de microvaloración de 96 pocillos. El tubo o la placa se
centrifuga brevemente de modo que la submuestra se recoja en el
fondo del tubo o un pocillo de la placa. Se añaden 50 \mul de una
solución de hidróxido sódico 200 mM y la mezcla se incuba a 95ºC
durante minutos. El contenido del tubo o el pocillo se mezcla de
dos a tres veces durante la incubación retirando rápidamente el tubo
o la placa del bloque de calentamiento y golpeando varias veces. La
mezcla se centrifuga a continuación brevemente para hacer caer
cualquier condensación de las tapas del tubo o la placa.
Posteriormente, se añaden 50 \mul de una solución que contiene HCl
200 mM, Tris HCl 100 mM, pH 8,5, y la mezcla se mezcla brevemente
antes de centrifugar durante dos minutos a 13000 rpm. En la
siguiente etapa, 80 \mul del sobrenadante se transfieren a un
tubo/placa reciente y se diluyen con 100 \mul de H_{2}O MilliQ
estéril. La solución se almacena a -20ºC para el uso subsiguiente de
1-2 \mul en PCR.
Las técnicas de PCR empleadas son convencionales
y bien conocidas para el experto en la especialidad. Generalmente,
el procedimiento implica una serie repetitiva de ciclos térmicos que
implican desnaturalización de plantillas, reasociación de cebadores
y extensión de los cebadores reasociados mediante DNA polimerasa de
Taq, con el resultado de que existe una acumulación exponencial de
secuencias cortas de DNA específicas. Estas secuencias de DNA son
características del animal del que se tomaba la muestra, y contienen
típicamente una variación de longitud en las repeticiones o
microsatélites de secuencias de DNA que permite la identificación
del animal. En particular, loci de microsatélite peculiares para la
especie de animal que se prueba pueden amplificarse y analizarse
usando el procedimiento de PCR. Los cebadores adecuados son bien
conocidos y, por ejemplo, están contenidos en el estuche de
tipificación por PCR bovina de paternidad de terneros vendido por
Perkin Elmer bajo el nombre STOCK-MARKS. Este
estuche incorpora cebadores etiquetados fluorescentemente
específicos para once loci de microsatélite útiles para identificar
terneros así como cebadores no marcados, polimerasa, DNA bovino de
referencia, dNTPs y tampones necesarios para probar los animales en
estos loci. El estuche describe los procedimientos para efectuar el
análisis que, en cualquier caso, son bien conocidos por el experto
en la especialidad.
El producto amplificado puede someterse a
continuación a un análisis de fragmentos de DNA en un sistema de
análisis de DNA adecuado, del que existen otros similares
comercialmente en el mercado. Los perfiles de DNA así obtenidos son
únicos y están inequívocamente conectados al animal del que se
obtiene la muestra a través de la revisión de control descrita
anteriormente. El perfil genético de una muestra de tejido obtenida
subsiguientemente puede investigarse en una base de datos de estos
perfiles genéticos para situar una pareja. Por lo tanto, el animal
original del que deriva una muestra de tejido puede
identificarse.
A lo largo de esta memoria descriptiva y las
reivindicaciones, las palabras "comprenden", "comprende" y
"que comprende" se usan en un sentido no exclusivo, excepto
cuando el contexto requiera otra cosa.
Variaciones y modificaciones de este dispositivo
serán evidentes para el experto en la especialidad, y esas
variaciones y modificaciones están dentro del alcance de la presente
invención.
La presente invención asegura la integridad de
muestras biológicas tomadas en el campo y analizadas
subsiguientemente en un laboratorio. Así, pueden efectuarse
análisis de las muestras para establecer un perfil genético de la
muestra para determinar su composición con la certeza de que la
muestra no se ha manipulado con o modificado durante el tránsito.
Esto significa que puede realizarse un análisis para verificar y/o
rastrear líneas genéticas en existencias, para identificar rasgos
deseables en animales identificando marcadores genéticos para esos
rasgos o para identificar la fuente de material animal o vegetal en
un producto alimenticio con la certeza de que los resultados son
exactos. Asimismo, las muestras pueden analizarse con respecto a un
contenido de proteínas o minerales o con respecto al contenido de
otros materiales tales como carbohidrato o lípido y los resultados
pueden asegurarse. En particular, puede analizarse con respecto a la
presencia de contaminantes químicos con la certeza de que la
muestra no se ha modificado de ningún modo durante el tránsito.
Claims (27)
1. Un dispositivo (10) de recogida de muestras
para recoger y almacenar una muestra (18) biológica para un
análisis subsiguiente, que comprende:
- una lámina (11) de base dispuesta de modo que la muestra (18) biológica pueda situarse sobre la misma;
- una lámina (12) de cobertura asegurada articuladamente a dicha lámina (11) de base, estando adaptada dicha lámina (12) de cobertura para el aseguramiento adhesivo sustancialmente irreversible a dicha lámina (11) de base al menos sobre una porción sustancial de sus superficies enfrentadas; y
- una lámina (13) de soporte asegurada de forma liberable a la superficie de dicha lámina (12) de cobertura enfrentada a dicha lámina (11) de base.
2. Un dispositivo de acuerdo con la
reivindicación 1, en el que la lámina (12) de cobertura está
revestida con un adhesivo permanente a lo largo de toda su
superficie (14), y la porción de la lámina (12) de cobertura a la
que no está asegurada la lámina (13) de soporte constituye la
conexión (24) articulada entre la lámina (12) de cobertura y la
lámina (11) de base.
3. Un dispositivo de acuerdo con la
reivindicación 2, en el que el adhesivo es un adhesivo
piezosensible.
4. Un dispositivo de acuerdo con una cualquiera
de las reivindicaciones 1, 2 ó 3, en el que hay una impresión sobre
el reverso (14) de dicha lámina (11) de base.
5. Un dispositivo de acuerdo con la
reivindicación 4, en el que un código (15) de barras está impreso
sobre el reverso (14) de dicha lámina (11) de base.
6. Un dispositivo de acuerdo con una cualquiera
de las reivindicaciones 1 ó 2 a 5, en el que la lámina (11) de base
es papel.
7. Un dispositivo de acuerdo con la
reivindicación 6, en el que la lámina (11) de base es papel cuché
satinado.
8. Un dispositivo de acuerdo con una cualquiera
de las reivindicaciones 1 ó 2 a 7, en el que la lámina (12) de
cobertura es una película de polipropileno transparente.
9. Un dispositivo de acuerdo con una cualquiera
de las reivindicaciones 1 ó 2 a 8, en el que la lámina (13) de
soporte es un papel de liberación.
10. Un sistema para el análisis de una muestra
biológica, que comprende:
- un dispositivo de recogida de muestras de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9;
- medios para tomar al menos una porción de dicha muestra para el análisis junto con al menos la parte de dichos medios de almacenamiento en los que está encerrada;
- medios para digerir dicha muestra, o una porción de la misma, junto con al menos dicha parte de dichos medios de almacenamiento; y
- medios para analizar dicha muestra.
11. Un sistema de acuerdo con la reivindicación
10, en el que una perforadora (25) de orificios toma una porción de
dicha muestra para el análisis junto con la parte de los medios de
almacenamiento en la que está encerrada.
12. Un sistema de acuerdo con la reivindicación
10 o la reivindicación 11, en el que dicha muestra se digiere en
una extracción alcalina.
13. Un sistema de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 10 a 12, en el que dicha muestra se somete a
amplificación mediante PCR y a continuación secuenciación de
DNA.
14. Un método para recoger y almacenar una
muestra biológica, que comprende las etapas de:
- aplicar dicha muestra (18) biológica a una lámina (11) de base que tiene una lámina (12) de cobertura asegurada articuladamente a la misma, estando adaptada dicha lámina (12) de cobertura para el aseguramiento adhesivo sustancialmente irreversible a dicha lámina (11) de base sobre al menos una porción sustancial de sus superficies enfrentadas y teniendo una lámina (13) de soporte asegurada de forma liberable a la misma;
- retirar dicha lámina (13) de soporte; y
- dejar que dicha lámina (12) de cobertura se adhiera sustancialmente de forma irreversible a la lámina (11) de base y/o la muestra (18) biológica situada sobre dicha lámina (11) de base.
15. Un método de acuerdo con la reivindicación
14, en el que la lámina (12) de cobertura está revestida con un
adhesivo permanente a lo largo de toda su superficie (14), y la
porción de la lámina (12) de cobertura a la que no está asegurada
la lámina (13) de soporte constituye la conexión (24) articulada
entre la lámina (12) de cobertura y la lámina (11) de base.
16. Un método de acuerdo con la reivindicación
15, en el que el adhesivo es un adhesivo piezosensible.
17. Un método de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 14, 15 ó 16, en el que hay una impresión sobre
el reverso (14) de dicha lámina (11) de base.
18. Un método de acuerdo con la reivindicación
17, en el que un código (15) de barras está impreso sobre el
reverso (14) de dicha lámina (11) de base.
19. Un método de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 14 ó 15 a 18, en el que la lámina (11) de base
es papel.
20. Un método de acuerdo con la reivindicación
19, en el que la lámina (11) de base es papel cuché satinado.
21. Un método de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 14 ó 15 a 20, en el que la lámina (12) de
cobertura es una película de polipropileno transparente.
22. Un método de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 14 ó 15 a 21, en el que la lámina (13) de
soporte es un papel de liberación.
23. Un método de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 14 a 22, en el que dicha muestra biológica se
almacena durante un período de tiempo prolongado.
24. Un método para analizar una muestra
biológica, que comprende las etapas de:
- recoger y almacenar una muestra (18) biológica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 22;
- tomar al menos una porción de dicha muestra (18) junto con al menos la parte de dichos medios de almacenamiento en la que está encerrada;
- digerir dicha muestra, o una porción de la misma, junto con al menos dicha parte de dichos medios de almacenamiento; y
- analizar dicha muestra.
25. Un método de acuerdo con la reivindicación
24, en el que una porción (26) de dicha muestra (18) se perfora del
dispositivo de recogida de muestras con una perforadora (25) de
orificios.
26. Un método de acuerdo con la reivindicación
24 o la reivindicación 25, en el que dicha muestra se digiere en
una extracción alcalina.
27. Un método de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 24 a 26, en el que dicha muestra se somete a
amplificación mediante PCR y a continuación secuenciación de
DNA.
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