JPH07289265A

JPH07289265A - アドレナリン受容体遺伝子

Info

Publication number: JPH07289265A
Application number: JP6091041A
Authority: JP
Inventors: Junichi Yano; 純一矢野; Teruo Tanaka; 輝夫田中
Original assignee: Nippon Shinyaku Co Ltd
Current assignee: Nippon Shinyaku Co Ltd
Priority date: 1994-04-28
Filing date: 1994-04-28
Publication date: 1995-11-07

Abstract

(57)【要約】【構成】ヒトα_1A/Dアドレナリン受容体及びそれをを
コードするＤＮＡである。【効果】組換えＤＮＡ技術により十分な量の精製され
たヒトα_1A/Dアドレナリン受容体を得る事ができ、ヒト
α_1A/Dアドレナリン受容体の機能解明に向けての研究が
容易になる。また本受容体に選択的なアゴニスト、アン
タゴニストの検索を行うことができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ヒトα_1A/Dアドレナリ
ン受容体及びそれをコードするＤＮＡに関する。従っ
て、ヒトα_1A/Dアドレナリン受容体に選択的な薬剤のス
クリーニングに有用である。

【０００２】

【従来の技術】アドレナリン受容体は神経系をはじめ、
循環器、内分泌系において、重要な役割を果たしている
ことが知られている。この受容体は機能や薬剤に対する
感受性の違い、組織内分布などによりサブクラスα₁、
α₂、β₁、β₂及びβ₃に分類されている（Bylund,D.B.
ら FASEB J. 6, 832-839 (1992)）。これらのうち、α₁
アドレナリン受容体はカテコールアミンと結合すること
によって、フォスファチジルイノシトール代謝亢進、細
胞内Ｃａ2+の上昇を誘導し、その結果身体各部位の平滑
筋の収縮を引き起こすことが知られている（Puceat,M.
ら TiPS 13, 263-265 (1992)）。このα₁は、薬理学的
及び遺伝子的にさらにα_1A/D、α_1B及びα_1Cに分類され
る（Cotecchia,S.ら Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85, 7159
-7163(1988)、Lomasney,J.W.ら J.Biol.Chem. 266, 6365
-6369 (1991)、 Schwinn,D.A. J.Biol.Chem.265, 8183-
8189 (1990)、Perez,D.M.ら Mol.Pharmacol. 40, 876-8
83 (1991)）。

【０００３】α₁アドレナリン受容体のアンタゴニスト
は、血管平滑筋弛緩作用により降圧剤として、又は前立
腺或いは尿道の平滑筋に対する弛緩効果により泌尿器系
の治療剤として用いられている。しかし現存するα₁ア
ドレナリン受容体のアンタゴニストのほとんどは、α
_1A/D、α_1B、α_1C という受容体に対する選択性がない
ため、例えば泌尿器系で用いる際、過度の血圧低下が生
じるというような、副作用をもたらすことが問題となっ
ている。

【０００４】個々の受容体に対する選択性の高い薬剤を
開発するには、これらの受容体をクローニングし、適当
な細胞に発現させ、薬剤のスクリーニング系を作製する
ことが重要な手段となる。ヒトα_1B 及びα_1Cアドレナ
リン受容体遺伝子はすでにクローニングされている（Ra
marao,C.S ら J.Biol/Chem. 267, 21936-21945 (199
2)、Hirasawa, A. らBiochem.Biophys.Res.Commun. 19
5, 902-909 (1993)）。α_1A/Dアドレナリン受容体遺伝
子についてはラットのものがクローニングされている
（Lomasney,J.W.ら J.Biol.Chem. 266, 6365-6369 (199
1)、Perez,D.M.らMol.Pharmacol. 40, 876-883 (199
1)）。しかしながら同じ受容体サブタイプでも、種によ
って例えばラットとヒトで薬物に対する作用が異なる場
合が知られている（Oksenberg,D.ら Nature 360, 161-1
63(1992)）。従って、ヒトに作用する薬剤を開発するに
は、ヒト型の受容体を使用してその薬剤の作用をみる必
要性がある。

【０００５】また、ヒトα_1A/Dアドレナリン受容体遺伝
子の脳からのクローニングが報告されたことがある（Br
uno,J.F ら Biochem.Biophys.Res.Commun. 179, 1485-
1490(1991)）が、この遺伝子は、Ｎ末端領域（約 180 b
p）が他のアドレナリン受容体遺伝子と著しく異なり、
遺伝子の組み替え及び反転を生じた偽遺伝子と認識され
ている。また、この遺伝子を宿主細胞に発現させ、機能
を確認したという報告もない。よって、機能を持つ全長
のヒトα_1A/Dアドレナリン受容体遺伝子のクローニング
は未だなされていなかった。従って、ヒトα_1A/Dアドレ
ナリン受容体を大量に高純度で得て、その機能を詳細に
解明することや、本受容体を発現する形質転換細胞を作
り、有用なアンタゴニスト、又はアゴニストの開発を行
うことはできなかった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】上述のようにヒトα
_1A/Dアドレナリン受容体を十分量、高純度で得ること及
び当受容体を発現している形質転換細胞を得ることは非
常に困難であったため、有効なアゴニスト又はアンタゴ
ニストの開発は遅れていた。従って、今後、ヒトα_1A/D
アドレナリン受容体に対する有効なアゴニスト又はアン
タゴニストを開発し、また循環器系疾患や泌尿器系疾患
におけるこの受容体の役割を解明していくには、ヒトα
_1A/Dアドレナリン受容体の遺伝子をクローニングし、ヒ
トα_1A/Dアドレナリン受容体を発現する形質転換細胞を
形成することが非常に有効な手段となる。本発明の目的
は、ヒトα_1A/Dアドレナリン受容体をコードする遺伝子
を提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記事情に
鑑み、鋭意研究を重ねた結果、ヒトα_1A/Dアドレナリン
受容体の全アミノ酸配列を初めて決定し、これをコード
する遺伝子を調製することができた。本発明の遺伝子Ｈ
ＭＡ１Ａ／Ｄは、このヒトα_1A/Dアドレナリン受容体遺
伝子を含むものであり、全長 2094 bp のＤＮＡよりな
っていた。その配列は配列番号２に示した。そのヌクレ
オチド配列は以下の特徴を有する。

【０００８】１）ラットα_1A/Dアドレナリン受容体遺伝
子（Lomasney,J.W.ら J.Biol.Chem.266, 6365-6369 (19
91)、Perez,D.M.ら Mol.Pharmacol. 40, 876-883 (199
1)）と共通する部分全体の塩基配列は、７５％と高い相
同性を示した。また、翻訳可能領域の塩基配列のラット
α_1A/Dアドレナリン受容体との相同性は８１％とさらに
高かった。この塩基配列より導かれるアミノ酸配列は配
列番号１に示した。そのアミノ酸配列は以下の特徴を有
する。１）アミノ酸残基数は５７２で、ラットα_1A/Dアドレナ
リン受容体の予想されるアミノ酸残基数５６０より１２
個長かった。ラットα_1A/Dアドレナリン受容体とアミノ
酸配列の相同性は、全体で７８％であった。２）７個の膜貫通領域を有しており、他のアドレナリン
受容体と同じく、Ｇ蛋白共役受容体のファミリーである
ことが示唆されていた。３）その膜貫通領域のラットα_1A/Dアドレナリン受容体
とのアミノ酸配列の相同性は９６％であった。以上の結果より、このＨＭＡ１Ａ／Ｄは、ヒトα_1A/Dア
ドレナリン受容体遺伝子をコードしたものであることが
判明した。

【０００９】本発明のｃＤＮＡはヒト前立腺のｃＤＮＡ
ライブラリーから、たとえばプラークハイブリダイゼー
ション法を利用して得ることができる。この方法によれ
ば、既に塩基配列がわかっている、α₁アドレナリン受
容体ファミリーに共通すると思われる相同性の高い配列
又はヒトα_1A/Dアドレナリン受容体遺伝子の一部をプロ
ーブとして用い、ｃＤＮＡライブラリーからプローブ
と相補的な塩基配列を持つＤＮＡを得ることができる。
また、ゲノムＤＮＡを鋳型にしてＰＣＲ（Polymerase C
hain Reaction）法でＤＮＡを得ることができる。一度
に全長が得られなくても、たとえばＮ末端寄りの部分、
Ｃ末端寄りの部分を、塩基配列の相同性により同一の遺
伝子由来のものと確認できれば、適当な制限酵素切断部
位でつなぎ換えて、全長を得てもよい。このようにして
ヒトα_1A/Dアドレナリン受容体を形成するために必要な
すべての遺伝情報を有するこの発明のＤＮＡが得られ
る。

【００１０】こうして得られたＤＮＡは、適当なベクタ
ー、例えばプラスミドまたはファージに挿入し、これを
宿主となるバクテリア中で大量に生産させることができ
る。また、こうして得られたＤＮＡは、適当なベクタ
ー、例えばプラスミドまたはウィルスに挿入し、これを
宿主となる動物細胞で大量に発現させることができる。
このようにヒトα_1A/Dアドレナリン受容体を発現させた
細胞は、例えば当受容体のアゴニスト又はアンタゴニス
トのスクリーニングの研究に用いることができる。

【００１１】

【実施例】以下に実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説
明するが、これらの実施例は本発明を制限するものでは
ない。なお、下記実施例において、各操作は特に明示が
ない限り、サムブルック等のマニュアル（Sambrook,J.
ら Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd E
d.,Vol.1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Sp
ring Harbor,NY (1989)）に記載されている方法により
行った。また、制限酵素は市販のものを用い、その具体
的使用方法は市販品の指示書に従った。ＰＣＲ法による
遺伝子の増幅は、（株）アステック製プログラム恒温槽
ＰＣ−７００型を用い、実験医学第８巻（榊佳之ら
編、１９９０年）３４ー３７頁に記載されている方法に
従った。

【００１２】（Ａ）ヒトα_1A/Dアドレナリン受容体遺伝
子のｃＤＮＡライブラリーからのスクリーニングヒト前立腺のｃＤＮＡライブラリー（λgt11、1x10⁶ pf
u クローンテック社）からまずα₁アドレナリン受容体
ファミリーに相同性の高い部分である７回の膜貫通領域
の２回目から３回目の膜貫通領域を含む断片（プローブ
１：180 bp 塩基番号 290-470 :Cotecchia,S.ら Proc.N
atl.Acad.Sci.USA 85, 7159-7163(1988)）をＰＣＲ法で
作製し、プローブにしてスクリーニングした。プローブ
の標識はジゴキシゲニンＤＮＡ−ラベリングキット（ベ
ーリンガーマンハイム社）を用いて行なった。

【００１３】ヒト前立腺ｃＤＮＡライブラリー 4x10⁵ p
fu を大腸菌 Y1090 株に吸収させて寒天プレート上にま
き、３７℃で９時間培養した。その寒天上にナイロンフ
ィルター（Schleicher & Schuell 社）を置き１−２分
間放置してファージをフィルターに吸着させた後、アル
カリ液（0.5N NaOH, 1.5M NaCl）に５分間浸し、変性処
理を行った。中和液（0.5M Tris-HCl pH7.5, 1.5M NaC
l）で５分間中和した後、さらに 2 × SSC で５分間洗
浄した。その後、８０℃、２時間のベーキングか又はＵ
Ｖストラタリンカー２４００（Stratagene 社）でＤＮ
Ａをフィルターに固定した。ハイブリダイズおよび発色
の条件はＤＮＡラベリングキット（ベーリンガーマンハ
イム社）に従った。ポジティブプラークをパスツールピ
ペットの頭部を使用して掻き取り、1 mlのＳＭ緩衝液
（50mM Tris-HCl pH7.5, 0.1M NaCl, 8mM MgSO₄, 0.01%
(W/V) gelatin）中で３７℃で１時間放置し、クロロホ
ルムを１滴加え、ファージ液とした。このファージ液
を、大腸菌Y1090を宿主に培養し、QIAGEN LAMBDA KIT
（QIAGEN社）を使用してラムダファージＤＮＡを精製し
た。このＤＮＡの一部を制限酵素EcoRI で切断した後、
１％低温溶解性アガロースゲルを用いた電気泳動でEcoR
I断片を分離した。ゲルから回収したＤＮＡ断片は ELUT
IP-d（Schleicher & Schuell 社）で精製した。

【００１４】（Ｂ）ヒトα_1A/Dアドレナリン受容体遺伝
子のプラスミドベクターへのサブクローニングプラスミドベクター（ｐＵＣ１８又はｐＵＣ１１９）を
EcoRI で切断後、大腸菌アルカリフォスファターゼ処
理した。このベクター 0.1μg とファージＤＮＡ断片と
をライゲーションした後、大腸菌ＴＢ１へ導入し、100n
g/ml のアンピシリンおよび 40 g/ml のＸ−Ｇａｌを含
むＬＢプレート上で選択を行なった。１６時間、３７℃
で培養後、白いコロニーのみ、数個選び、 1.5 mlのＬ
Ｂ培地で培養後、アルカリ抽出法（Sambrook,J.ら Mole
cular Cloning: A LaboratoryManual, 2nd Ed.,Vol.1-
3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harb
or,NY (1989)）でプラスミドＤＮＡを抽出した。得られ
たプラスミドＤＮＡを EcoRI で切断した後、１％アガ
ロースゲルで電気泳動を行った。このゲルをアルカリ液
（0.5N NaOH、0.5M NaCl）で０.５−１時間処理し、Vac
ugene 2016（ＬＫＢ社）を使って、ナイロンフィルター
（Schleicher & Schuell 社）にアルカリ条件下でＤＮ
Ａをトランスファーした（３０分−１時間）。このフィ
ルターを 2 × SSC で洗浄後、ＵＶストラタリンカー２
４００を使って固定し、ハイブリダイゼーションを行な
った。プローブ１をプ用いて検出した。ハイブリダイズ
および発色の条件はＤＮＡラベリングキット（ベーリン
ガーマンハイム社）に従った。プローブで発色したＤＮ
Ａの位置が、ファージより切り出されたｃＤＮＡと同じ
ものであることが確認されたプラスミドを持つ大腸菌
を、サブクローニングに成功したものとし、インサート
の塩基配列の決定を行った。

【００１５】（Ｃ）Ｎ末端領域のＰＣＲ法によるクロー
ニングラットα_1A/Dアドレナリン受容体遺伝子の開始コドンを
含む位置（塩基番号466-485:Lomasney,J.W.ら J.Biol.C
hem. 266, 6365-6369 (1991)）とヒトα_1A/Dアドレナリ
ン受容体の第二膜貫通（塩基番号 386-405:Bruno,J.F
ら Biochem.Biophys.Res.Commun. 179, 1485-1490 (199
1)）の位置のプライマーを作製し、ヒトゲノムＤＮＡ
（クロンテック社）を鋳型にしてＰＣＲ法を行い約４７
０ｂｐの断片を得た。この断片に EcoRI リンカーを付
け、pUC119 の EcoRI サイトでプラスミドに組み込み、
（Ｂ）に示した方法でサブクローニングを行った。

【００１６】（Ｄ）ＤＮＡインサートの全塩基配列の決
定 pUC18 又は pUC119 に組み込まれたＤＮＡが、ファージ
より切り出したｃＤＮＡ又はＰＣＲ断片と同じものであ
ることが確認された大腸菌を、ＬＢ培地で一晩培養し、
ＤＮＡの調製に用いた。培養液より、常法に従い、アル
カリ抽出法でＤＮＡを抽出後、塩化セシウム密度勾配超
遠心分離をベックマン L8-70 を用いて68,000 rpm で１
６時間、更にベックマン TL-100 を用いて 100,000 rpm
で、５時間と都合二回行いＤＮＡを精製した。ＤＮＡ
はエタノール沈殿した後、乾燥させ、ＴＥ緩衝液（10mM
Tris-HCl pH7.5, 1mM EDTA）に溶解した。260nmの吸光
度を測定することによりＤＮＡの濃度を算定した。

【００１７】ＤＮＡの塩基配列の決定はＡＢＩ３７３
ＡＤＮＡシーケンサー（アプライドバイオシステム
社）を用いて行った。シーケンスに用いたプラスミドＤ
ＮＡ量は１−２μｇであり、プライマーは New England
Bio Labs 社の M13/pUC Sequencing Primer #1224、M1
3/pUC Sequencing Primer #1211、M13/pUC reverse seq
uencing Primer #1233、M13/pUC reversesequencing Pr
imer #1201を用いた。シーケンスのデータ解析には Gen
eWorks（Intelligenetic 社）を、ホモロジー検索には
ピアソンの fast A （Pearson,W.R.ら Proc.Natl.Acad.
Sci.USA 85, 2444-2448 (1988)）を用いた。

【００１８】以上のようにして塩基配列を決定し、ラッ
トα_1A/Dアドレナリン受容体遺伝子とホモロジー検索を
した結果、非常に相同性の高いｃＤＮＡ由来のクローン
Ｐα1A（1480 bp）、クローンＰ３（1500 bp）及びクロ
ーンＰ１１（2060 bp）が得られた。また、ゲノムＤＮ
Ａ由来のＰＣＲ産物のＤＮＡ（470 bp）は、独立した３
クローンの塩基配列を読んで、ＰＣＲ法由来のポイント
ミューテーションのないクローンを選んだ。これらの遺
伝子配列を比較検討した結果、これらの遺伝子の全てが
同一の遺伝子由来であり、Ｎ末端よりＣ末端に向けて、
ゲノムＤＮＡ由来のＰＣＲ産物のＤＮＡ、クローンＰα
_1A、クローンＰ３の順にならび、隣接する遺伝子同士は
互いに配列が重なり合っていることがわかった。更に重
なり合う配列中に適当な制限酵素切断位置があることが
確認できたので、このＮ末端領域を含むゲノム由来のＤ
ＮＡとｃＤＮＡ由来のクローンＰα_1Aを PstI 切断部位
で、Ｐα_1AとＰ３は XhoI 切断部位でつなぎ換え、ヒト
α_1A/Dアドレナリン受容体遺伝子の全長を含むＤＮＡ、
ＨＭＡ１Ａ／Ｄを構築した。この遺伝子をプラスミド p
UC119 の EcoRI部位に挿入し、大腸菌ＴＢ−１に導入し
た。

【００１９】（Ｅ）ヒトα_1A/Dアドレナリン受容体遺伝
子の塩基配列とアミノ酸配列の解析ＨＭＡ１Ａ／Ｄの全長は 2094 bp で、翻訳可能領域は
1716 bp、５'側非翻訳領域は 21 bp、３'側非翻訳領域
は 357 bp であった。ラットα_1A/Dアドレナリン受容体
との共通する部分全体の塩基配列は、７５％と高い相同
性を示した。また、翻訳可能領域の塩基配列のラットα
_1A/Dアドレナリン受容体との相同性は８１％とさらに高
かった。この塩基配列より予想されるアミノ酸残基数は
５７２で、ラットα_1A/Dアドレナリン受容体の予想され
るアミノ酸残基数より１２個多かった。このクローンと
ラットα_1A/Dアドレナリン受容体とのアミノ酸配列の相
同性は、全体で７８％であった。さらに、膜貫通領域は
９６％であった。一方、ヒトα_1Cアドレナリン受容体と
のアミノ酸配列の相同性は、全体で４１％、膜貫通領域
は６７％、また、ヒトα_1Bアドレナリン受容体とのアミ
ノ酸配列の相同性は、全体で４５％、膜貫通領域は７４
％であった。また、Kyte-Doolittle のハイドロパシー
解析から（Kyte,J.ら J.Mol.Biol.157, 105-132 (198
2)）、Ｈ１Ａ／Ｄに、Ｇ−蛋白共役受容体ファミリーで
報告されている７つの疎水性の高い領域（Trumpp-Kallm
eyer,S.ら J.Med.Chem. 35,3448-3462 (1992)）が認め
られた。以上の結果より、このＨＭＡ１Ａ／Ｄはヒトα
_1A/Dアドレナリン受容体遺伝子をコードしたものである
ことが判明した。

【００２０】

【配列表】

【００２１】配列番号：１配列の長さ：５７２配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質起源生物名：ヒト組織の種類：前立腺直接の起源ライブラリー名：ヒト前立腺ｃＤＮＡライブラリーとヒ
トゲノムＤＮＡライブラリー配列 Met Thr Phe Arg Asp Leu Leu Ser Val Ser Phe Glu Gly Pro Arg Pro 1 5 10 15 Asp Ser Ser Ala Gly Gly Ser Ser Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ala 20 25 30 Gly Gly Ala Ala Pro Ser Glu Gly Pro Ala Val Gly Gly Val Pro Gly 35 40 45 Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Val Val Gly Ala Gly Ser Gly Glu Asp 50 55 60 Asn Arg Ser Ser Ala Gly Glu Pro Gly Ser Ala Gly Ala Gly Gly Asp 65 70 75 80 Val Asn Gly Thr Ala Ala Val Gly Gly Leu Val Val Ser Ala Gln Gly 85 90 95 Val Gly Val Gly Val Phe Leu Ala Ala Phe Ile Leu Met Ala Val Ala 100 105 110 Gly Asn Leu Leu Val Ile Leu Ser Val Ala Cys Asn Arg His Leu Gln 115 120 125 Thr Val Thr Asn Tyr Phe Ile Val Asn Leu Ala Val Ala Asp Leu Leu 130 135 140 Leu Ser Ala Thr Val Leu Pro Phe Ser Ala Thr Met Glu Val Leu Gly 145 150 155 160 Phe Trp Ala Phe Gly Arg Ala Phe Cys Asp Val Trp Ala Ala Val Asp 165 170 175 Val Leu Cys Cys Thr Ala Ser Ile Leu Ser Leu Cys Thr Ile Ser Val 180 185 190 Asp Arg Tyr Val Gly Val Arg His Ser Leu Lys Tyr Pro Ala Ile Met 195 200 205 Thr Glu Arg Lys Ala Ala Ala Ile Leu Ala Leu Leu Trp Val Val Ala 210 215 220 Leu Val Val Ser Val Gly Pro Leu Leu Gly Trp Lys Glu Pro Val Pro 225 230 235 240 Pro Asp Glu Arg Phe Cys Gly Ile Thr Glu Glu Ala Gly Tyr Ala Val 245 250 255 Phe Ser Ser Val Cys Ser Phe Tyr Leu Pro Met Ala Val Ile Val Val 260 265 270 Met Tyr Cys Arg Val Tyr Val Val Ala Arg Ser Thr Thr Arg Ser Leu 275 280 285 Glu Ala Gly Val Lys Arg Glu Arg Gly Lys Ala Ser Glu Val Val Leu 290 295 300 Arg Ile His Cys Arg Gly Ala Ala Thr Gly Ala Asp Gly Ala His Gly 305 310 315 320 Met Arg Ser Ala Lys Gly His Thr Phe Arg Ser Ser Leu Ser Val Arg 325 330 335 Leu Leu Lys Phe Ser Arg Glu Lys Lys Ala Ala Lys Thr Leu Ala Ile 340 345 350 Val Val Gly Val Phe Val Leu Cys Trp Phe Pro Phe Phe Phe Val Leu 355 360 365 Pro Leu Gly Ser Leu Phe Pro Gln Leu Lys Pro Ser Glu Gly Val Phe 370 375 380 Lys Val Ile Phe Trp Leu Gly Tyr Phe Asn Ser Cys Val Asn Pro Leu 385 390 395 400 Ile Tyr Pro Cys Ser Ser Arg Glu Phe Lys Arg Ala Phe Leu Arg Leu 405 410 415 Leu Arg Cys Gln Cys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Leu Trp Arg 420 425 430 Val Tyr Gly His His Trp Arg Ala Ser Thr Ser Gly Leu Arg Gln Asp 435 440 445 Cys Ala Pro Ser Ser Gly Asp Ala Pro Pro Gly Ala Pro Leu Ala Leu 450 455 460 Thr Ala Leu Pro Asp Pro Asp Pro Glu Pro Pro Gly Thr Pro Glu Met 465 470 475 480 Gln Ala Pro Val Ala Ser Arg Arg Lys Pro Pro Ser Ala Phe Arg Glu 485 490 495 Trp Arg Leu Leu Gly Pro Phe Arg Arg Pro Thr Thr Gln Leu Arg Ala 500 505 510 Lys Val Ser Ser Leu Ser His Lys Ile Ala Ala Gly Gly Ala Gln Arg 515 520 525 Ala Glu Ala Ala Cys Ala Gln Arg Ser Glu Val Glu Ala Val Ser Leu 530 535 540 Gly Val Pro His Glu Val Ala Glu Gly Ala Thr Cys Gln Ala Tyr Glu 545 550 555 560 Leu Ala Asp Tyr Ser Asn Leu Arg Glu Thr Asp Ile 565 570

【００２２】配列番号：２配列の長さ：２０９４配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ｃＤＮＡ to ｍＲＮＡ起源生物名：ヒト組織の種類：前立腺直接の起源ライブラリー名：ヒト前立腺ｃＤＮＡライブラリーとヒ
トゲノムＤＮＡライブラリー配列の特徴特徴を表す記号：ＣＤＳ存在位置：２２．．１７３７特徴を決定した方法：Ｐ配列ＧＡＡＴＴＣＣＡＣＣＴＧＣＧＣＣＧＴＧＡＧＡＴＧＡＣＴＴＴＣ
ＣＧＣＧＡＴＣＴＣＣＴＧＡＧＣＧＴＣＡＧＴ５１ＭｅｔＴｈｒＰｈｅ
ＡｒｇＡｓｐＬｅｕＬｅｕＳｅｒＶａｌＳｅｒ１
５１０ＴＴＣＧＡＧＧＧＡＣＣＣＣＧＣＣＣＧＧＡＣＡＧＣＡＧＣ
ＧＣＡＧＧＧＧＧＣＴＣＣＡＧＣＧＣＧＧＧＣ９９ＰｈｅＧｌｕＧｌｙＰｒｏＡｒｇＰｒｏＡｓｐＳｅｒＳｅｒ
ＡｌａＧｌｙＧｌｙＳｅｒＳｅｒＡｌａＧｌｙ１５
２０２５ＧＧＣＧＧＣＧＧＧＧＧＣＡＧＣＧＣＧＧＧＣＧＧＣＧＣＧ
ＧＣＣＣＣＣＴＣＧＧＡＧＧＧＣＣＣＧＧＣＧ１４７ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒＡｌａＧｌｙＧｌｙＡｌａ
ＡｌａＰｒｏＳｅｒＧｌｕＧｌｙＰｒｏＡｌａ３０３５
４０ＧＴＧＧＧＣＧＧＣＧＴＴＣＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＧＧＣ
ＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＴＧＧＴＧＧＧＣ１９５ＶａｌＧｌｙＧｌｙＶａｌＰｒｏＧｌｙＧｌｙＡｌａＧｌｙ
ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＶａｌＶａｌＧｌｙ４５５０
５５ＧＣＡＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＡＧＧＡＣＡＡＣＣＧＧＡＧＣ
ＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＡＧＣＣＧＧＧＧＡＧＣ２４３ＡｌａＧｌｙＳｅｒＧｌｙＧｌｕＡｓｐＡｓｎＡｒｇＳｅｒ
ＳｅｒＡｌａＧｌｙＧｌｕＰｒｏＧｌｙＳｅｒ６０６５
７０ＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＣＧＧＣＧＡＣＧＴＧＡＡＴＧＧＣ
ＡＣＧＧＣＧＧＣＣＧＴＣＧＧＧＧＧＡＣＴＧ２９１ＡｌａＧｌｙＡｌａＧｌｙＧｌｙＡｓｐＶａｌＡｓｎＧｌｙ
ＴｈｒＡｌａＡｌａＶａｌＧｌｙＧｌｙＬｅｕ７５８０
８５９０ＧＴＧＧＴＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＧＧＣＧＴＧＧＧＣＧＴＧ
ＧＧＣＧＴＣＴＴＣＣＴＧＧＣＡＧＣＣＴＴＣ３３９ＶａｌＶａｌＳｅｒＡｌａＧｌｎＧｌｙＶａｌＧｌｙＶａｌ
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ＡＧＡＣＡＧＣＣＣＣＡＡＧＣＡＴＧＧＣＣＡＧＧＡＡＧＧ２０８７ＣＣＴＧＣＣＣ
２０９４

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｎ 5/10 // Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ヒトα_1A/Dアドレナリン受容体をコード
するＤＮＡ。
【請求項２】ヒトα_1A/Dアドレナリン受容体が配列番
号１のアミノ酸配列によって示されるものである請求項
１のＤＮＡ。
【請求項３】配列番号１のアミノ酸配列によって示さ
れるヒトα_1A/Dアドレナリン受容体。
【請求項４】請求項１記載のヒトα_1A/Dアドレナリン
受容体をコードする遺伝子を含むＤＮＡで形質転換した
微生物。
【請求項５】請求項１記載のヒトα_1A/Dアドレナリン
受容体をコードする遺伝子を含むＤＮＡで形質転換した
動物細胞。