JPH08126491A - アドレナリン受容体遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 ヒトα_1C2アドレナリン受容体をコードする
ＤＮＡ及びヒトα_1C3アドレナリン受容体をコードする
ＤＮＡ並びに該ＤＮＡによりそれぞれコードされるポリ
ペプチドである。 【効果】 組換えＤＮＡ技術により十分な量の精製され
たヒトα_1C2アドレナリン受容体又はヒトα_1C3アドレナ
リン受容体を得る事ができ、ヒトα₁アドレナリン受容
体サブファミリーの機能解明に向けての研究が容易にな
る。また本受容体に選択的なアゴニスト、アンタゴニス
トの検索を行うときに用いることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ヒトα_1C2アドレナリ
ン受容体又はヒトα_1C3アドレナリン受容体をコードす
るＤＮＡ及びそのＤＮＡにコードされている受容体に関
する。

【０００２】

【従来の技術】アドレナリン受容体は神経系をはじめ、
循環器、内分泌系において、重要な役割を果たしている
ことが知られている。この受容体は機能の違いや薬剤に
対する感受性の相違及び組織内分布の違い等によりサブ
クラス α₁、α₂、β₁、β₂及びβ₃に分類されている
（Bylund,D.B.ら、FASEB J. 6, pp832-839 (1992)）。
これらのうち、α₁アドレナリン受容体は、カテコール
アミンと結合することによって、フォスファチジルイノ
シトール代謝亢進、細胞内Ｃａ²⁺の上昇を誘導し、その
結果身体各部位の平滑筋の収縮を引き起こすことが知ら
れている（Puceat,M.ら、TIPS 13, pp263-265 (199
2)）。つまり、血管平滑筋に存在するα₁アドレナリン
受容体は、血圧の調節や鼻腔充血に関与し、また、前立
腺や尿道の平滑筋にあるα₁受容体は、排尿調節を司る
など、様々の生理機能が知られている。その他、肝臓の
α₁受容体は糖代謝に（Tujimoto,G.ら、Mol.Phramacol.
36, pp166-176(1989)）、心臓のα₁受容体は心筋細胞
の増殖に（Terzic,A.ら、Pharmacol. Rev. 45, pp147-1
75 (1993)）それぞれ関与し、脳の中枢神経系に存在す
るα₁受容体は、睡眠を調節する等の作用があることが
報告されている（Mignot,E.ら、Brain Research 490, p
p186-191 (1989)）。

【０００３】このα₁受容体は、まずα₁受容体のアンタ
ゴニストであるＣＥＣ（Chloroethylclonidine）、ＷＢ
−４１０１及び５−メチルウラピジルの各薬剤に対する
感受性の違いによりα_1A、α_1Bのサブクラスに分類され
た（Battaglia,G.ら、J.Neurochem. 41, pp538-544 (19
83)、Johnson,R.D.ら、Mol.Pharmacol. 31, pp239-246
(1987)）。これらの受容体遺伝子の遺伝子レベルでの解
析が進み、まずハムスターの輸精管の細胞からα₁受容
体ファミリーの遺伝子がクローニングされ（Cottecchi
a,S、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85, pp7159-7163 (198
8)）、この遺伝子を発現した細胞のＣＥＣ、ＷＢ−４１
０１及び５−メチルウラピジルに対する感受性の違いに
よりα_1B受容体と同定された。次いでヒトのα_1B受容体
遺伝子もクローニングされた（Ramarao,C.S.ら、J.Bio
l.Chem. 267, pp21936-21945 (1992)）。

【０００４】α_1Aの遺伝子については Lomasney らによ
り、ラット脳からクローニングした（Lomasney,J.W.
ら、J.Biol.Chem. 265, pp8183-8189 (1991)）と報告さ
れているが、発現産物の薬剤に対する感受性は組織に存
在するα_1A受容体と同じ性質を示してはおらず、他のサ
ブファミリーの遺伝子である可能性は否定できない。更
に、同じラット脳からこのα_1A受容体と非常に似かよっ
た遺伝子がクローニングされたが、やはり各種薬剤に対
する感受性は組織に存在するα_1A受容体とは異なってい
たため、α_1D遺伝子と名付けられた（Perez,D.M. らMo
l.Pharmacol.40,876-883(1991)）。その後、この遺伝子
は、先のα_1Aの遺伝子と同等の物であると認識され、α
_1A/Dと呼ばれるようになった。このα_1A/D遺伝子はヒト
からも単離された（Forray,C.ら、Mol.Pharmacol. 45,
pp703-708 (1994)）。

【０００５】これらの受容体に加え、ウシ脳からクロー
ニングされたα₁受容体のファミリーの遺伝子は、α_1A
やα_1B受容体とは類似点は多いものの異なる配列を示
し、更にその発現産物の薬剤に対する感受性が、α_1A受
容体又はα_1B受容体とは異なることから、α_1C と名付
けられた（Schwinn,D.A.、J.Biol.Chem. 265, pp8183-8
189 (1990)）。ヒトのα_1C受容体遺伝子も確認されてい
る（平沢ら、Biochem.Biophys.Res.Commun. 195, pp902
-909 (1993)）。

【０００６】以上、これまでに複数のα₁受容体ファミ
リーの遺伝子がクローニングされているが、組織に存在
するα_1A受容体と同一の薬剤感受性を示す受容体をコー
ドしている遺伝子は単離されておらず、また、これらの
既知遺伝子だけではα₁受容体ファミリーの多様な生理
作用や組織特異性を説明することはできないため、α₁
受容体ファミリーの遺伝子はまだ他にもあると考えられ
ている。これらα₁受容体ファミリーの未だ知られてい
ない遺伝子を同定できれば、その受容体の構造を決定
し、生体内分布を調べることにより、受容体の機能を解
明するうえでの情報を得ることができる。更に、これら
の受容体を発現する形質転換細胞を作り、有用なアンタ
ゴニスト又はアゴニストの開発を行うためのアッセイ系
を確立することができる。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、新規
なヒトα₁アドレナリン受容体遺伝子の提供にある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意研究
を重ねた結果、２種の新たなヒトα₁アドレナリン受容
体ファミリーのアミノ酸配列を初めて決定し、これをコ
ードする遺伝子を調製することができた。一つ目の本発
明の遺伝子Ｐ２Ｃ６（ｃＤＮＡ）は、ヒトα_1Cアドレナ
リン受容体サブファミリーの遺伝子を含むものであり、
全長２３０６bpのＤＮＡよりなっている。その配列は配
列番号２に示されている。この塩基配列はヒトα_1Cアド
レナリン受容体（Hirasawa,A. Biochem.Biophys.Res.Co
mmun.195,902-909(1993)）と１７０５番目まで同一であ
り、それ以降相同性が認められない。この相同性が認め
られない部分のはＡｌｕ配列を持っている。全体の塩基
配列のヒトα_1Cアドレナリン受容体遺伝子との相同性は
８２％である。この塩基配列より導かれるアミノ酸配列
を配列番号１に示している。そのアミノ酸配列は以下の
特徴を有する。 １）アミノ酸残基数は４９９である。最も相同性の高い
ヒトα_1Cアドレナリンのアミノ酸残基が４６６個である
のに対して３３アミノ酸残基が多い。このＰ２Ｃ６はヒ
トα_1Cアドレナリン受容体とアミノ酸配列を比較する
と、４２３番目までは同一であるが、それ以降残り７６
個のアミノ酸には相同性は認められない。全体の相同性
は８７％である。 ３）その膜貫通領域のヒトα_1Cアドレナリン受容体とア
ミノ酸配列は同一で、７回膜貫通領域以降のテールの部
分の相同性は６２％である。 ４）ヒトα１_A/Dとの相同性は４０％、ヒトα_1Bとは４
３％である。 以上により本発明の遺伝子はα_1Cアドレナリン受容体の
サブファミリーであるということができ、α_1C2アドレ
ナリン受容体遺伝子と命名した。

【０００９】もう一つの本発明の遺伝子Ｐ２Ｃ１Ａ（ｃ
ＤＮＡ）は、ヒトα_1Cアドレナリン受容体サブファミリ
ーの遺伝子を含むものであり、全長２０８９bp のＤＮ
Ａよりなっている。その塩基配列は配列番号４に示され
ている。この塩基配列はヒトα_1Cアドレナリン受容体と
１７０６番目まで塩基が同一であり、それ以降は相同性
が認められない。全体の塩基配列の相同性は８３％であ
る。

【００１０】この塩基配列より導かれるアミノ酸配列は
配列番号３に示されている。そのアミノ酸配列は以下の
特徴を有する。 １）アミノ酸残基数は４２９である。最も相同性の高い
ヒトα_1Cアドレナリン受容体のアミノ酸残基数が４６６
個であるのに対して３７個少ない。このＰ２Ｃ１Ａはヒ
トα_1Cアドレナリン受容体とアミノ酸配列を比較すると
ん末端から４２３番目までは同一であるが、それ以降、
残り６個の配列は全く異なっている。全体の相同性は９
１％である。 ３）その膜貫通領域はヒトα_1Cアドレナリン受容体とア
ミノ酸配列は同一で、７回膜貫通領域以降のテールの部
分の相同性は７０％である。 ４）ヒトα１_A/Dとの相同性は４１％、ヒトα_1Bとは４
６％である。 以上により本発明の遺伝子はα_1Cアドレナリン受容体の
サブファミリーであるということができ、α_1C2アドレ
ナリン受容体遺伝子と異なることから、α_1C3アドレナ
リン受容体遺伝子と命名した。

【００１１】本発明のｃＤＮＡはヒト前立腺のｃＤＮＡ
ライブラリーから、たとえばプラークハイブリダイゼー
ション法を利用して得ることができる。この方法によれ
ば、既に塩基配列がわかっている、ヒトα_1A、α_1B又は
α_1Cアドレナリン受容体のα₁アドレナリン受容体ファ
ミリーに共通する相同性の高い配列のプローブを用い、
ｃＤＮＡライブラリーからプローブと相補的な塩基配列
を持つＤＮＡを得ることができる。常法に従い塩基配列
を解読し、α₁受容体ファミリーに共通な７回膜貫通領
域構造を有し、かつ既知のα_1A/D、α_1B又はα_1Cアドレ
ナリン受容体とは異なるが特にα_1Cアドレナリン受容体
に相同性の高いものを選び出せばよい。一度に全長が得
られなくても、たとえばＮ末端寄りの部分、Ｃ末端寄り
の部分を得て、それらが塩基配列の相同性により同一の
ｍＲＮＡ由来のものと確認できれば、適当な制限酵素切
断部位でつなぎ換えて、全長を得てもよい。このように
して新規なヒトα₁アドレナリン受容体を形成するため
に必要な、全ての遺伝情報を有する、本発明のｃＤＮＡ
が得られる。

【００１２】こうして得られたｃＤＮＡは、適当なベク
ター、例えばプラスミド又はファージに挿入し、これを
宿主となるバクテリア中で大量に生産させることができ
る。宿主は酵母を用いることもできる。また、こうして
得られたｃＤＮＡは、適当なベクター、例えばプラスミ
ドまたはウィルスに挿入し、これを宿主となる動物細胞
で大量に発現させることができる。宿主は酵母を用いる
こともできる。このようにして得たヒトα₁アドレナリ
ン受容体ファミリーを発現させた細胞は、例えば本受容
体のアゴニスト又はアンタゴニストのスクリーニングの
研究用試薬として用いることができる。

【００１３】

【実施例】以下に実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説
明するが、これらの実施例は本発明を制限するものでは
ない。なお、下記実施例において、各操作は特に明示が
ない限り、サムブルック等のマニュアル（Sambrook,J.
ら、Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd E
d.,Vol.1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Sp
ring Harbor,NY (1989)）に記載されている方法により
行った。また、制限酵素は市販のものを用い、その具体
的使用方法は市販品のプロトコールに従った。

【００１４】（Ａ）ヒトα_1cアドレナリン受容体サブフ
ァミリーの遺伝子のｃＤＮＡライブラリーからのスクリ
ーニング ヒト前立腺のｃＤＮＡライブラリー（λgt11、1×10⁶ p
fu クローンテック社）からまずヒト脳α_1Aアドレナリ
ン受容体の遺伝子中のヒトα₁アドレナリン受容体ファ
ミリーに相同性の高い部分である PstI-XhoI 断片（480
bp）（Bruno,J.F ら Biochem.Biophys.Res.Commun. 17
9, 1485-1490 (1991)）及びヒトα_1Cの SmaI断片（1233
-1704番目:471bp）（平沢ら、Biochem.Biophys.Res.Com
mun. 195, pp902-909 (1993)）をプローブにしてスク
リーニングした。プローブの標識はジゴキシゲニンＤＮ
Ａ−ラベリングキット（ベーリンガーマンハイム社）を
用いて行なった。

【００１５】ヒト前立腺ｃＤＮＡライブラリー 4×10⁵
pfu を大腸菌 Y1090 株に吸収させて寒天プレート上に
まき、３７℃で９時間培養した。その寒天上にナイロン
フィルター（Schleicher & Schuell 社）を置き１−２
分間放置してファージをフィルターに吸着させた後、ア
ルカリ液（0.5N NaOH, 1.5M NaCl）に５分間浸し、変性
処理を行った。中和液（0.5M Tris-HCl pH7.5, 1.5M Na
Cl）で５分間中和した後、さらに 2 × SSC で５分間洗
浄した。その後、８０℃で２時間のベーキング又はＵＶ
ストラタリンカー２４００（Stratagene 社）で処理
し、ＤＮＡをフィルターに固定した。ハイブリダイズお
よび発色の条件はＤＮＡラベリングキット（ベーリンガ
ーマンハイム社）のマニュアルに従った。ポジティブプ
ラークをパスツールピペットの頭部を使用して掻き取
り、1 mlのＳＭバッファー（50mM Tris-HCl pH7.5, 0.1
M NaCl, 8mM MgSO₄, 0.01%(W/V)ゼラチン）中で３７℃
で１時間放置し、クロロホルムを１滴加え、ファージ液
とした。このファージ液を、大腸菌 Y1090株を宿主とし
て培養し、培養上清からQIAGENLAMBDA KIT（QIAGEN社）
を使用してラムダファージＤＮＡを精製した。このＤＮ
Ａの一部を制限酵素 EcoRI で切断した後、１％低温溶
解性アガロースゲルを用いた電気泳動により EcoRI 断
片を分離した。ゲルから回収したＤＮＡ断片はELUTIP-d
（Schleicher & Schuell 社）で精製した。

【００１６】（Ｂ）ヒトα_1cアドレナリン受容体サブフ
ァミリーの遺伝子のプラスミドベクターへのサブクロー
ニング プラスミドベクター（ｐＵＣ１８及び１１９）を EcoRI
で切断後、大腸菌のアルカリフォスファターゼで処理
し、５’末端を脱リン酸化した。このベクター0.1μg
とファージＤＮＡ断片とをライゲーションした後、大腸
菌ＴＢ１を形質転換し、アンピシリンおよびＸ−Ｇａｌ
を含むＬＢプレート（40 g/ml の X-gal 及び 100ng/ml
の アンヒ゜シリン を含む）上で選択を行なった。３７℃で１
６時間培養後、白いコロニーのみ数個選び、 1.5 ml の
ＬＢ培地で培養後、常法に従いアルカリ抽出法でプラス
ミドＤＮＡを抽出した。得られたプラスミドＤＮＡを E
coRI で切断した後、１％アガロースゲルで電気泳動を
行った。このゲルをアルカリ液（0.5N NaOH、0.5M NaC
l）で０.５−１時間処理し、バキュジーン 2016（ＬＫ
Ｂ社）を使って、ナイロンフィルター（Schleicher & S
chuell社）にアルカリ条件下で３０分 −１時間かけ、
ＤＮＡをトランスファーした。このフィルターを 2 x S
SC で洗浄後、ＵＶストラタリンカー 2400を使って紫外
線照射による固定を行い、ハイブリダイゼーションを行
なった。ヒト脳α_1Aアドレナリン受容体の PstI-XhoI
断片（480bp）及びウシα_1Cアドレナリン受容体のＰＣ
Ｒ産物（715bp）をプローブにして検出した。ハイブリ
ダイズおよび発色の条件はＤＮＡラベリングキット（ベ
ーリンガーマンハイム社）のマニュアルに従った。プロ
ーブで発色し検出したＤＮＡの位置が、ファージより切
り出されたｃＤＮＡと同じものであることが確認された
プラスミドを持つ大腸菌を選び出し、サブクローニング
されたインサートの塩基配列の決定を行った。

【００１７】（Ｃ）ｃＤＮＡインサートの全塩基配列の
決定 上記の方法で、ｐＵＣ１８又はｐＵＣ１１９に組み込ま
れたＤＮＡが、ファージより切り出したｃＤＮＡと同じ
ものであることが確認された大腸菌を、ＬＢ培地で一晩
培養し、ＤＮＡの調製に用いた。培養液は、常法に従
い、アルカリ抽出法でＤＮＡを抽出後、塩化セシウム密
度勾配超遠心分離を２回行いＤＮＡを精製した。超遠心
機としてベックマン L8-70 を用いて、68,000 rpm で１
６時間、更にベックマン TL-100 を用いて 100,000 rpm
で５時間遠心を行なった。精製したＤＮＡの濃度は 26
0nm の吸光度より算定した。

【００１８】ＤＮＡの塩基配列の決定はＡＢＩ ３７３
Ａ ＤＮＡシーケンサー（アプライドバイオシステム
社）を用いて行った。1-2μg のプラスミドＤＮＡを塩
基配列の決定に用いた。プライマーは New England Bio
Labs 社の M13/pUC シーケンシングプライマー #122
4、M13/pUC シーケンシングプライマー #1211、M13/pUC
リバースシーケンシングプライマー #1233、M13/pUC
リバースシーケンシングプライマー #1201を用いた。塩
基配列のデータ解析には GeneWorks（Intelligenetic
社）を、ホモロジー検索プログラムはピアソンの fast
A （Pearson,W.R.ら Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85, 2444
-2448(1988)）を用いた。

【００１９】以上のようにして塩基配列を決定し、ウシ
又はヒトα_1Cアドレナリン受容体の遺伝子とホモロジー
検索をした結果、非常に相同性の高いクローンＰ２（１
６８７bp）、クローンＣ１Ａ（８８９bp）及びクローン
Ｃ６（１４９２bp）の３種のクローンが得られた。クロ
ーンＰ２は翻訳可能領域１２５１bpを含んでおり、開始
コドンより４３６bp上流から７回目の膜貫通領域までを
含んでいたが、Ｃ末端の部分は欠けていた。クローンＣ
１Ａは配列番号３に示した１２００から１７０６まで、
クローンＣ６は配列番号４に示した８１４から１７０５
番目まではヒトα_1Cアドレナリン受容体と同一の配列を
示したが、それ以降は異なるものであった。Ｐ２とＣ１
Ａ又はＰ２とＣ６は同一の塩基配列の部分がそれぞれ４
８７bp、８７３bpあった。

【００２０】Ｐ２とＣ６、Ｐ２とＣ１Ａのそれぞれのク
ローンの配列の重なり合う部分の塩基配列は一致したこ
とから、それぞれのクローンの組み合わせは同じｍＲＮ
Ａ由来のものであることが判明した。つまりＰ２遺伝子
にコードされるＮ末端よりのアミノ酸配列が共通し、Ｃ
末端側のアミノ酸配列が異なる、２種類のｍＲＮＡが存
在することが示された。Ｐ２Ｃ６とＰ２Ｃ１Ａの違いは
遺伝子多型によるものか又はオルタネーティブスプライ
シングによると考えられる。Ｐ２とＣ６、Ｐ２とＣ１Ａ
のそれぞれ共通する領域に存在する PvuII の制限酵素
サイト（１３９３番目）で、常法に従いそれぞれのクロ
ーンを組換えることにより、全長を含むヒトα₁アドレ
ナリン受容体ファミリーの遺伝子、Ｐ２Ｃ６及びＰ２Ｃ
１Ａを作製した。

【００２１】（Ｄ）ヒトα_1C2アドレナリン受容体遺伝
子の塩基配列とアミノ酸配列の解析 Ｐ２Ｃ６の全長は２３０６bpで（配列番号２）、翻訳領
域は１４９７bp、５'ー非翻訳領域は４３６bp、３'ー 非
翻訳領域は３７３bpであった。この塩基配列より予想さ
れるアミノ酸残基数は４９９で、ヒトα_1Cアドレナリン
受容体のアミノ酸残基数（４６６残基）より３３アミノ
酸長かった。Ｐ２Ｃ６にコードされている遺伝子は、下
記に示すようにα_1Cアドレナリン受容体遺伝子と非常に
相同性が高いことから、このサブファミリーであること
が判明した。よって本発明の受容体をα_1C2アドレナリ
ン受容体と命名した。このα_1C2アドレナリン受容体と
ヒトα_1Cアドレナリン受容体とのアミノ酸配列の相同性
は、全体で８７％であった。さらに、膜貫通領域では１
００％、７回膜貫通領域以降のテールの部分では６２％
であった。その他、ヒトα_1A/Dとは４０％、ヒトα_1Bと
は４３％であった。また、１７０６−２００６番目の領
域はＡｌｕ配列を示していた。

【００２２】（Ｅ）ヒトα_1C3アドレナリン受容体遺伝
子の塩基配列とアミノ酸配列の解析 Ｐ２Ｃ１Ａの全長は２０８９bp で（配列番号４）、翻
訳可能領域は １２８７bp、５'- 非翻訳領域は４３６b
p、３'- 非翻訳領域は ３６６bp であった。ポリＡテー
ルは認められなかった。この塩基配列より予想されるア
ミノ酸残基数は４２９で、ヒトα_1Cアドレナリン受容体
の予想されるアミノ酸残基数（４６６残基）より３７残
基少なかった。Ｐ２Ｃ１Ａにコードされている遺伝子
は、下記に示すようにα_1Cアドレナリン受容体遺伝子と
非常に相同性が高く、やはりこのサブファミリーである
ことが判明した。さらに先のα_1C2アドレナリン受容体
とは異なることから、本発明の受容体をα_1C3アドレナ
リン受容体と命名した。このα_1C3アドレナリン受容体
とヒトα_1Cアドレナリン受容体とのアミノ酸配列の相同
性は、全体で９１％であった。さらに、膜貫通領域では
１００％、７回膜貫通領域のテールの部分では７０％で
あった。その他、ヒトα_1A/Dとは４１％、ヒトα_1Bとは
４６％であった。

【００２３】（Ｆ）Ｐ２Ｃ６及びＰ２ＣＡ１遺伝子のＰ
ＣＲ法による確認 Ｐ２Ｃ６及びＰ２ＣＡ１遺伝子は、両遺伝子とも一度に
全長をクローニングしたのではなく、Ｎ末端側、Ｃ末端
側の遺伝子のそれぞれの塩基配列の重なり合う部分でつ
なぎ換えているため、人為的に創作した遺伝子であり実
際には存在しないという懸念がある。そこで、ＰＣＲ法
によって、これらの遺伝子のｍＲＮＡとしての存在を確
認した。

【００２４】Ｐ２Ｃ６及びＰ２ＣＡ１遺伝子のＮ末端の
プライマーとして、お互いに配列が共通する部分で、そ
れぞれをつなぎ換えた位置より上流の部分から、配列番
号４の５６６−５８８番目の配列を選び、プライマー１
とした。つなぎ換えた位置より下流の部分から、Ｐ２Ｃ
１Ａ遺伝子では配列番号４の１８７４−１８９３番目の
配列を選びプライマー２とし、Ｐ２Ｃ６遺伝子では配列
番号２の１７７７−１７９９番目の配列を選びプライマ
ー３とした。それぞれのプライマーをＤＮＡ合成機（ア
プライドバイトシステム社製モデル３８０Ｂ）を用いて
合成した。

【００２５】ヒト前立腺のｃＤＮＡライブラリー（クロ
ンテック社）を鋳型にして、タックポリメラーゼＰＣＲ
キット（宝酒造）を用いて反応を行った。反応液はキッ
ト付属のプロトコールに従って調製した。ＰＣＲ反応は
以下の条件で行った。まず９４℃で５分間処理した後、
９４℃で１分間、５５℃で１分間次いで７２℃で２分間
の反応を３５サイクル行った。反応産物をアガロースゲ
ル電気泳動で分析した結果を図１に示す。Ｐ２Ｃ１Ａ遺
伝子又は前立腺のｃＤＮＡを鋳型として用い、プライマ
ー１及び２を用いた反応では、両者とも１．３kbp の長
さの顕著なバンドが現れ、Ｐ２Ｃ６遺伝子又は前立腺の
ｃＤＮＡを鋳型として用い、プライマー１及び３を用い
た反応では、両者とも１．２kbp のバンドが確認され
た。このバンドはヒトα_1C遺伝子をプローブに用いたサ
ザンハイブリダイゼーションにより検出されることも確
認された。これらのことは、Ｐ２Ｃ６及びＰ２ＣＡ１遺
伝子は、ｍＲＮＡの情報として生体内に存在している事
を示している。

【００２６】（Ｇ）ヒト組織における組織分布 α_1C、α_1C2及びα_1C3の各アドレナリン受容体の組織分
布を調べるため、心臓、脳、肝臓、脾臓のｃＤＮＡ（ク
ロンテック社）を鋳型にし、ＰＣＲ法により各ｍＲＮＡ
の検出を行った。プライマーとして、Ｎ末端側は、ヒト
α_1C遺伝子、Ｐ２Ｃ１Ａ及びＰ２Ｃ６遺伝子の配列が共
通する部分、即ち配列番号４の１４１７−１４３６番目
の配列（プライマー４）をＤＮＡ合成機（アプライドバ
イトシステム社製モデル３８０Ｂ）を用いて合成した。
Ｃ末端側のプライマーは、α_1C2受容体ｍＲＮＡ検出用
には配列番号４に示した１９０５−１９２４の配列（プ
ライマー５）を、α_1C3受容体ｍＲＮＡ検出用には配列
番号４の１８７４−１８９３番目の配列（プライマー
２）を、そしてα１Ｃ受容体ｍＲＮＡ検出用には１９０
８−１９１７番目（プライマー６：平沢ら、Biochem.Bi
ophys.Res.Commun. 195, pp902-909 (1993)）の配列を
選び、それぞれのＤＮＡをＤＮＡ合成機（アプライドバ
イトシステム社製モデル３８０Ｂ）を用いて合成した。
タックポリメラーゼＰＣＲキット（宝酒造）を用いてＰ
ＣＲ反応を行った。反応液はキット付属のプロトコール
に従って調製した。ＰＣＲ反応は以下の条件で行った。
まず９４℃で５分間処理した後、９４℃で１分間、５５
℃で１分間次いで７２℃で２分間の反応を３５サイクル
行った。その結果を表１に示す。

【００２７】

【表１】 心臓、脳には３種の受容体のｍＲＮＡがすべて認められ
たが、肝臓にはα_1C2受容体ｍＲＮＡは認められなかっ
た。また、脾臓ではα_1C2及びα_1C受容体ｍＲＮＡが認
められたがα_1C3のものは認められなかった。以上によ
り、α_1C2、α_1C3及びα_1Cはそれぞれ異なる受容体とし
て、ヒト組織で発現していることが明らかとなった。

【００２８】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：４９９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 起源 生物名：ヒト 組織の種類：前立腺 直接の起源 ライブラリー名：ヒト前立腺ｃＤＮＡライブラリー 配列 Met Val Phe Leu Ser Gly Asn Ala Ser Asp Ser Ser Asn Cys Thr Gln 1 5 10 15 Pro Pro Ala Pro Val Asn Ile Ser Lys Ala Ile Leu Leu Gly Val Ile 20 25 30 Leu Gly Gly Leu Ile Leu Phe Gly Val Leu Gly Asn Ile Leu Val Ile 35 40 45 Leu Ser Val Ala Cys His Arg His Leu His Ser Val Thr His Tyr Tyr 50 55 60 Ile Val Asn Leu Ala Val Ala Asp Leu Leu Leu Thr Ser Thr Val Leu 65 70 75 80 Pro Phe Ser Ala Ile Phe Glu Val Leu Gly Tyr Trp Ala Phe Gly Arg 85 90 95 Val Phe Cys Asn Ile Trp Ala Ala Val Asp Val Leu Cys Cys Thr Ala 100 105 110 Ser Ile Met Gly Leu Cys Ile Ile Ser Ile Asp Arg Tyr Ile Gly Val 115 120 125 Ser Tyr Pro Leu Arg Tyr Pro Thr Ile Val Thr Gln Arg Arg Gly Leu 130 135 140 Met Ala Leu Leu Cys Val Trp Ala Leu Ser Leu Val Ile Ser Ile Gly 145 150 155 160 Pro Leu Phe Gly Trp Arg Gln Pro Ala Pro Glu Asp Glu Thr Ile Cys 165 170 175 Gln Ile Asn Glu Glu Pro Gly Tyr Val Leu Phe Ser Ala Leu Gly Ser 180 185 190 Phe Tyr Leu Pro Leu Ala Ile Ile Leu Val Met Tyr Cys Arg Val Tyr 195 200 205 Val Val Ala Lys Arg Glu Ser Arg Gly Leu Lys Ser Gly Leu Lys Thr 210 215 220 Asp Lys Ser Asp Ser Glu Gln Val Thr Leu Arg Ile His Arg Lys Asn 225 230 235 240 Ala Pro Ala Gly Gly Ser Gly Met Ala Ser Ala Lys Thr Lys Thr His 245 250 255 Phe Ser Val Arg Leu Leu Lys Phe Ser Arg Glu Lys Lys Ala Ala Lys 260 265 270 Thr Leu Gly Ile Val Val Gly Cys Phe Val Leu Cys Trp Leu Pro Phe 275 280 285 Phe Leu Val Met Pro Ile Gly Ser Phe Phe Pro Asp Phe Lys Pro Ser 290 295 300 Glu Thr Val Phe Lys Ile Val Phe Trp Leu Gly Tyr Leu Asn Ser Cys 305 310 315 320 Ile Asn Pro Ile Ile Tyr Pro Cys Ser Ser Gln Glu Phe Lys Lys Ala 325 330 335 Phe Gln Asn Val Leu Arg Ile Gln Cys Leu Arg Arg Lys Gln Ser Ser 340 345 350 Lys His Ala Leu Gly Tyr Thr Leu His Pro Pro Ser Gln Ala Val Glu 355 360 365 Gly Gln His Lys Asp Met Val Arg Ile Pro Val Gly Ser Arg Glu Thr 370 375 380 Phe Tyr Arg Ile Ser Lys Thr Asp Gly Val Cys Glu Trp Lys Phe Phe 385 390 395 400 Ser Ser Met Pro Arg Gly Ser Ala Arg Ile Thr Val Ser Lys Asp Gln 405 410 415 Ser Ser Cys Thr Thr Ala Arg Thr Lys Ser Arg Ser Val Thr Arg Leu 420 425 430 Glu Cys Ser Gly Met Ile Leu Ala His Cys Asn Leu Arg Leu Pro Gly 435 440 445 Ser Arg Asp Ser Pro Ala Ser Ala Ser Gln Ala Ala Gly Thr Thr Gly 450 455 460 Asp Val Pro Pro Gly Arg Arg His Gln Ala Gln Leu Ile Phe Val Phe 465 470 475 480 Leu Val Glu Thr Gly Phe His His Val Gly Gln Asp Asp Leu Asp Leu 485 490 495 Leu Thr Ser

【００２９】配列番号：２ 配列の長さ：２３０６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ to ｍＲＮＡ 起源 生物名：ヒト 組織の種類：前立腺 直接の起源 ライブラリー名：ヒト前立腺ｃＤＮＡライブラリー 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：４３７．．１９３３ 特徴を決定した方法：Ｐ 配列 GAATTCCGAA TCATGTGCAG AATGCTGAAT CTTCCCCCAG CCAGGACGAA TAAGACAGCG 60 CGGAAAAGCA GATTCTCGTA ATTCTGGAAT TGCATGTTGC AAGGAGTCTC CTGGATCTTC 120 GCACCCAGCT TCGGGTAGGG AGGGAGTCCG GGTCCCGGGC TAGGCCAGCC CGGCAGGTGG 180 AGAGGGTCCC CGGCAGCCCC GCGCGCCCCT GGCCATGTCT TTAATGCCCT GCCCCTTCAT 240 GTGGCCTTCT GAGGGTTCCC AGGGCTGGCC AGGGTTGTTT CCCACCCGCG CGCGCGCTCT 300 CACCCCCAGC CAAACCCACC TGGCAGGGCT CCCTCCAGCC GAGACCTTTT GATTCCCGGC 360 TCCCGCGCTC CCGCCTCCGC GCCAGCCCGG GAGGTGGCCC TGGACAGCCG GACCTCGCCC 420 GGCCCCGGCT GGGACC ATG GTG TTT CTC TCG GGA AAT GCT TCC GAC AGC TCC 472 Met Val Phe Leu Ser Gly Asn Ala Ser Asp Ser Ser 1 5 10 AAC TGC ACC CAA CCG CCG GCA CCG GTG AAC ATT TCC AAG GCC ATT CTG 520 Asn Cys Thr Gln Pro Pro Ala Pro Val Asn Ile Ser Lys Ala Ile Leu 15 20 25 CTC GGG GTG ATC TTG GGG GGC CTC ATT CTT TTC GGG GTG CTG GGT AAC 568 Leu Gly Val Ile Leu Gly Gly Leu Ile Leu Phe Gly Val Leu Gly Asn 30 35 40 ATC CTA GTG ATC CTC TCC GTA GCC TGT CAC CGA CAC CTG CAC TCA GTC 616 Ile Leu Val Ile Leu Ser Val Ala Cys His Arg His Leu His Ser Val 45 50 55 60 ACG CAC TAC TAC ATC GTC AAC CTG GCG GTG GCC GAC CTC CTG CTC ACC 664 Thr His Tyr Tyr Ile Val Asn Leu Ala Val Ala Asp Leu Leu Leu Thr 65 70 75 TCC ACG GTG CTG CCC TTC TCC GCC ATC TTC GAG GTC CTA GGC TAC TGG 712 Ser Thr Val Leu Pro Phe Ser Ala Ile Phe Glu Val Leu Gly Tyr Trp 80 85 90 GCC TTC GGC AGG GTC TTC TGC AAC ATC TGG GCG GCA GTG GAT GTG CTG 760 Ala Phe Gly Arg Val Phe Cys Asn Ile Trp Ala Ala Val Asp Val Leu 95 100 105 TGC TGC ACC GCG TCC ATC ATG GGC CTC TGC ATC ATC TCC ATC GAC CGC 808 Cys Cys Thr Ala Ser Ile Met Gly Leu Cys Ile Ile Ser Ile Asp Arg 110 115 120 TAC ATC GGC GTG AGC TAC CCG CTG CGC TAC CCA ACC ATC GTC ACC CAG 856 Tyr Ile Gly Val Ser Tyr Pro Leu Arg Tyr Pro Thr Ile Val Thr Gln 125 130 135 140 AGG AGG GGT CTC ATG GCT CTG CTC TGC GTC TGG GCA CTC TCC CTG GTC 904 Arg Arg Gly Leu Met Ala Leu Leu Cys Val Trp Ala Leu Ser Leu Val 145 150 155 ATA TCC ATT GGA CCC CTG TTC GGC TGG AGG CAG CCG GCC CCC GAG GAC 952 Ile Ser Ile Gly Pro Leu Phe Gly Trp Arg Gln Pro Ala Pro Glu Asp 160 165 170 GAG ACC ATC TGC CAG ATC AAC GAG GAG CCG GGC TAC GTG CTC TTC TCA 1000 Glu Thr Ile Cys Gln Ile Asn Glu Glu Pro Gly Tyr Val Leu Phe Ser 175 180 185 GCG CTG GGC TCC TTC TAC CTG CCT CTG GCC ATC ATC CTG GTC ATG TAC 1048 Ala Leu Gly Ser Phe Tyr Leu Pro Leu Ala Ile Ile Leu Val Met Tyr 190 195 200 TGC CGC GTC TAC GTG GTG GCC AAG AGG GAG AGC CGG GGC CTC AAG TCT 1096 Cys Arg Val Tyr Val Val Ala Lys Arg Glu Ser Arg Gly Leu Lys Ser 205 210 215 220 GGC CTC AAG ACC GAC AAG TCG GAC TCG GAG CAA GTG ACG CTC CGC ATC 1144 Gly Leu Lys Thr Asp Lys Ser Asp Ser Glu Gln Val Thr Leu Arg Ile 225 230 235 CAT CGG AAA AAC GCC CCG GCA GGA GGC AGC GGG ATG GCC AGC GCC AAG 1192 His Arg Lys Asn Ala Pro Ala Gly Gly Ser Gly Met Ala Ser Ala Lys 240 245 250 ACC AAG AGC CAC TTC TCA GTG AGG CTC CTC AAG TTC TCC CGG GAG AAG 1240 Thr Lys Thr His Phe Ser Val Arg Leu Leu Lys Phe Ser Arg Glu Lys 255 260 265 AAA GCG GCC AAA ACG CTG GGC ATC GTG GTC GGC TGC TTC GTC CTC TGC 1288 Lys Ala Ala Lys Thr Leu Gly Ile Val Val Gly Cys Phe Val Leu Cys 270 275 280 TGG CTG CCT TTT TTC TTA GTC ATG CCC ATT GGG TCT TTC TTC CCT GAT 1336 Trp Leu Pro Phe Phe Leu Val Met Pro Ile Gly Ser Phe Phe Pro Asp 285 290 295 300 TTC AAG CCC TCT GAA ACA GTT TTT AAA ATA GTA TTT TGG CTC GGA TAT 1384 Phe Lys Pro Ser Glu Thr Val Phe Lys Ile Val Phe Trp Leu Gly Tyr 305 310 315 CTA AAC AGC TGC ATC AAC CCC ATC ATA TAC CCA TGC TCC AGC CAA GAG 1432 Leu Asn Ser Cys Ile Asn Pro Ile Ile Tyr Pro Cys Ser Ser Gln Glu 320 325 330 TTC AAA AAG GCC TTT CAG AAT GTC TTG AGA ATC CAG TGT CTC CGC AGA 1480 Phe Lys Lys Ala Phe Gln Asn Val Leu Arg Ile Gln Cys Leu Arg Arg 335 340 345 AAG CAG TCT TCC AAA CAT GCC CTG GGC TAC ACC CTG CAC CCG CCC AGC 1528 Lys Gln Ser Ser Lys His Ala Leu Gly Tyr Thr Leu His Pro Pro Ser 350 355 360 CAG GCC GTG GAA GGG CAA CAC AAG GAC ATG GTG CGC ATC CCC GTG GGA 1576 Gln Ala Val Glu Gly Gln His Lys Asp Met Val Arg Ile Pro Val Gly 365 370 375 380 TCA AGA GAG ACC TTC TAC AGG ATC TCC AAG ACG GAT GGC GTT TGT GAA 1624 Ser Arg Glu Thr Phe Tyr Arg Ile Ser Lys Thr Asp Gly Val Cys Glu 385 390 395 TGG AAA TTT TTC TCT TCC ATG CCC CGT GGA TCT GCC AGG ATT ACA GTG 1672 Trp Lys Phe Phe Ser Ser Met Pro Arg Gly Ser Ala Arg Ile Thr Val 400 405 410 TCC AAA GAC CAA TCC TCC TGT ACC ACA GCC CGG ACG AAG TCT CGC TCT 1720 Ser Lys Asp Gln Ser Ser Cys Thr Thr Ala Arg Thr Lys Ser Arg Ser 415 420 425 GTC ACC AGG CTG GAG TGC AGT GGC ATG ATC TTG GCT CAC TGC AAC CTC 1768 Val Thr Arg Leu Glu Cys Ser Gly Met Ile Leu Ala His Cys Asn Leu 430 435 440 CGC CTC CCG GGT TCA AGA GAT TCT CCT GCC TCA GCC TCC CAA GCA GCT 1816 Arg Leu Pro Gly Ser Arg Asp Ser Pro Ala Ser Ala Ser Gln Ala Ala 445 450 455 460 GGG ACT ACA GGG GAT GTG CCA CCA GGC CGA CGC CAC CAG GCC CAG CTA 1864 Gly Thr Thr Gly Asp Val Pro Pro Gly Arg Arg His Gln Ala Gln Leu 465 470 475 ATT TTT GTA TTT TTA GTA GAG ACG GGG TTT CAC CAT GTT GGC CAG GAT 1912 Ile Phe Val Phe Leu Val Glu Thr Gly Phe His His Val Gly Gln Asp 480 485 490 GAT CTC GAT CTC TTG ACC TCA TGATCTGCCT GCCTCAGCCT CCCAAAGTGC 1963 Asp Leu Asp Leu Leu Thr Ser 495 499 TGGGATTACA GGCGTGAGCC ACCGTGCCCG GCCCAACTAT TTTTTTTTTT TATCTTTTTT 2023 AACAGTGCAA TCCTTTCTGT GGATGAAATC TTGCTCAGAA GCTCAATATG CAAAAGAAAG 2083 AAAAACAGCA GGGCTGGACG GATGTTGGGA GTGGGGTAAG ACCCCAACCA CTCAGAGCCC 2143 ACCCCCCCAA CACACACACA CATTCTCTCC ATGGTGACTG GTGAGGGGCC TCTAGAGGGT 2203 ACATAGTACA CCATGGAGCA CGGTTTAAGC ACCACTGGAC TACACATTCT TCTGTGGCAG 2263 TTATCTTACC TTCCCATAGA CACCCAGCCC ATAGCCATTG GTT 2306

【００３０】配列番号：３ 配列の長さ：４２９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 起源 生物名：ヒト 組織の種類：前立腺 直接の起源 ライブラリー名：ヒト前立腺ｃＤＮＡライブラリー 配列 Met Val Phe Leu Ser Gly Asn Ala Ser Asp Ser Ser Asn Cys Thr Gln 1 5 10 15 Pro Pro Ala Pro Val Asn Ile Ser Lys Ala Ile Leu Leu Gly Val Ile 20 25 30 Leu Gly Gly Leu Ile Leu Phe Gly Val Leu Gly Asn Ile Leu Val Ile 35 40 45 Leu Ser Val Ala Cys His Arg His Leu His Ser Val Thr His Tyr Tyr 50 55 60 Ile Val Asn Leu Ala Val Ala Asp Leu Leu Leu Thr Ser Thr Val Leu 65 70 75 80 Pro Phe Ser Ala Ile Phe Glu Val Leu Gly Tyr Trp Ala Phe Gly Arg 85 90 95 Val Phe Cys Asn Ile Trp Ala Ala Val Asp Val Leu Cys Cys Thr Ala 100 105 110 Ser Ile Met Gly Leu Cys Ile Ile Ser Ile Asp Arg Tyr Ile Gly Val 115 120 125 Ser Tyr Pro Leu Arg Tyr Pro Thr Ile Val Thr Gln Arg Arg Gly Leu 130 135 140 Met Ala Leu Leu Cys Val Trp Ala Leu Ser Leu Val Ile Ser Ile Gly 145 150 155 160 Pro Leu Phe Gly Trp Arg Gln Pro Ala Pro Glu Asp Glu Thr Ile Cys 165 170 175 Gln Ile Asn Glu Glu Pro Gly Tyr Val Leu Phe Ser Ala Leu Gly Ser 180 185 190 Phe Tyr Leu Pro Leu Ala Ile Ile Leu Val Met Tyr Cys Arg Val Tyr 195 200 205 Val Val Ala Lys Arg Glu Ser Arg Gly Leu Lys Ser Gly Leu Lys Thr 210 215 220 Asp Lys Ser Asp Ser Glu Gln Val Thr Leu Arg Ile His Arg Lys Asn 225 230 235 240 Ala Pro Ala Gly Gly Ser Gly Met Ala Ser Ala Lys Thr Lys Thr His 245 250 255 Phe Ser Val Arg Leu Leu Lys Phe Ser Arg Glu Lys Lys Ala Ala Lys 260 265 270 Thr Leu Gly Ile Val Val Gly Cys Phe Val Leu Cys Trp Leu Pro Phe 275 280 285 Phe Leu Val Met Pro Ile Gly Ser Phe Phe Pro Asp Phe Lys Pro Ser 290 295 300 Glu Thr Val Phe Lys Ile Val Phe Trp Leu Gly Tyr Leu Asn Ser Cys 305 310 315 320 Ile Asn Pro Ile Ile Tyr Pro Cys Ser Ser Gln Glu Phe Lys Lys Ala 325 330 335 Phe Gln Asn Val Leu Arg Ile Gln Cys Leu Arg Arg Lys Gln Ser Ser 340 345 350 Lys His Ala Leu Gly Tyr Thr Leu His Pro Pro Ser Gln Ala Val Glu 355 360 365 Gly Gln His Lys Asp Met Val Arg Ile Pro Val Gly Ser Arg Glu Thr 370 375 380 Phe Tyr Arg Ile Ser Lys Thr Asp Gly Val Cys Glu Trp Lys Phe Phe 385 390 395 400 Ser Ser Met Pro Arg Gly Ser Ala Arg Ile Thr Val Ser Lys Asp Gln 405 410 415 Ser Ser Cys Thr Thr Ala Arg Gly His Thr Pro Met Thr 420 425

【００３１】配列番号：４ 配列の長さ：２０８９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ to ｍＲＮＡ 起源 生物名：ヒト 組織の種類：前立腺 直接の起源 ライブラリー名：ヒト前立腺ｃＤＮＡライブラリー 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：４３７．．１７２３ 特徴を決定した方法：Ｐ 配列 GAATTCCGAA TCATGTGCAG AATGCTGAAT CTTCCCCCAG CCAGGACGAA TAAGACAGCG 60 CGGAAAAGCA GATTCTCGTA ATTCTGGAAT TGCATGTTGC AAGGAGTCTC CTGGATCTTC 120 GCACCCAGCT TCGGGTAGGG AGGGAGTCCG GGTCCCGGGC TAGGCCAGCC CGGCAGGTGG 180 AGAGGGTCCC CGGCAGCCCC GCGCGCCCCT GGCCATGTCT TTAATGCCCT GCCCCTTCAT 240 GTGGCCTTCT GAGGGTTCCC AGGGCTGGCC AGGGTTGTTT CCCACCCGCG CGCGCGCTCT 300 CACCCCCAGC CAAACCCACC TGGCAGGGCT CCCTCCAGCC GAGACCTTTT GATTCCCGGC 360 TCCCGCGCTC CCGCCTCCGC GCCAGCCCGG GAGGTGGCCC TGGACAGCCG GACCTCGCCC 420 GGCCCCGGCT GGGACC ATG GTG TTT CTC TCG GGA AAT GCT TCC GAC AGC TCC 472 Met Val Phe Leu Ser Gly Asn Ala Ser Asp Ser Ser 1 5 10 AAC TGC ACC CAA CCG CCG GCA CCG GTG AAC ATT TCC AAG GCC ATT CTG 520 Asn Cys Thr Gln Pro Pro Ala Pro Val Asn Ile Ser Lys Ala Ile Leu 15 20 25 CTC GGG GTG ATC TTG GGG GGC CTC ATT CTT TTC GGG GTG CTG GGT AAC 568 Leu Gly Val Ile Leu Gly Gly Leu Ile Leu Phe Gly Val Leu Gly Asn 30 35 40 ATC CTA GTG ATC CTC TCC GTA GCC TGT CAC CGA CAC CTG CAC TCA GTC 616 Ile Leu Val Ile Leu Ser Val Ala Cys His Arg His Leu His Ser Val 45 50 55 60 ACG CAC TAC TAC ATC GTC AAC CTG GCG GTG GCC GAC CTC CTG CTC ACC 664 Thr His Tyr Tyr Ile Val Asn Leu Ala Val Ala Asp Leu Leu Leu Thr 65 70 75 TCC ACG GTG CTG CCC TTC TCC GCC ATC TTC GAG GTC CTA GGC TAC TGG 712 Ser Thr Val Leu Pro Phe Ser Ala Ile Phe Glu Val Leu Gly Tyr Trp 80 85 90 GCC TTC GGC AGG GTC TTC TGC AAC ATC TGG GCG GCA GTG GAT GTG CTG 760 Ala Phe Gly Arg Val Phe Cys Asn Ile Trp Ala Ala Val Asp Val Leu 95 100 105 TGC TGC ACC GCG TCC ATC ATG GGC CTC TGC ATC ATC TCC ATC GAC CGC 808 Cys Cys Thr Ala Ser Ile Met Gly Leu Cys Ile Ile Ser Ile Asp Arg 110 115 120 TAC ATC GGC GTG AGC TAC CCG CTG CGC TAC CCA ACC ATC GTC ACC CAG 856 Tyr Ile Gly Val Ser Tyr Pro Leu Arg Tyr Pro Thr Ile Val Thr Gln 125 130 135 140 AGG AGG GGT CTC ATG GCT CTG CTC TGC GTC TGG GCA CTC TCC CTG GTC 904 Arg Arg Gly Leu Met Ala Leu Leu Cys Val Trp Ala Leu Ser Leu Val 145 150 155 ATA TCC ATT GGA CCC CTG TTC GGC TGG AGG CAG CCG GCC CCC GAG GAC 952 Ile Ser Ile Gly Pro Leu Phe Gly Trp Arg Gln Pro Ala Pro Glu Asp 160 165 170 GAG ACC ATC TGC CAG ATC AAC GAG GAG CCG GGC TAC GTG CTC TTC TCA 1000 Glu Thr Ile Cys Gln Ile Asn Glu Glu Pro Gly Tyr Val Leu Phe Ser 175 180 185 GCG CTG GGC TCC TTC TAC CTG CCT CTG GCC ATC ATC CTG GTC ATG TAC 1048 Ala Leu Gly Ser Phe Tyr Leu Pro Leu Ala Ile Ile Leu Val Met Tyr 190 195 200 TGC CGC GTC TAC GTG GTG GCC AAG AGG GAG AGC CGG GGC CTC AAG TCT 1096 Cys Arg Val Tyr Val Val Ala Lys Arg Glu Ser Arg Gly Leu Lys Ser 205 210 215 220 GGC CTC AAG ACC GAC AAG TCG GAC TCG GAG CAA GTG ACG CTC CGC ATC 1144 Gly Leu Lys Thr Asp Lys Ser Asp Ser Glu Gln Val Thr Leu Arg Ile 225 230 235 CAT CGG AAA AAC GCC CCG GCA GGA GGC AGC GGG ATG GCC AGC GCC AAG 1192 His Arg Lys Asn Ala Pro Ala Gly Gly Ser Gly Met Ala Ser Ala Lys 240 245 250 ACC AAG AGC CAC TTC TCA GTG AGG CTC CTC AAG TTC TCC CGG GAG AAG 1240 Thr Lys Thr His Phe Ser Val Arg Leu Leu Lys Phe Ser Arg Glu Lys 255 260 265 AAA GCG GCC AAA ACG CTG GGC ATC GTG GTC GGC TGC TTC GTC CTC TGC 1288 Lys Ala Ala Lys Thr Leu Gly Ile Val Val Gly Cys Phe Val Leu Cys 270 275 280 TGG CTG CCT TTT TTC TTA GTC ATG CCC ATT GGG TCT TTC TTC CCT GAT 1336 Trp Leu Pro Phe Phe Leu Val Met Pro Ile Gly Ser Phe Phe Pro Asp 285 290 295 300 TTC AAG CCC TCT GAA ACA GTT TTT AAA ATA GTA TTT TGG CTC GGA TAT 1384 Phe Lys Pro Ser Glu Thr Val Phe Lys Ile Val Phe Trp Leu Gly Tyr 305 310 315 CTA AAC AGC TGC ATC AAC CCC ATC ATA TAC CCA TGC TCC AGC CAA GAG 1432 Leu Asn Ser Cys Ile Asn Pro Ile Ile Tyr Pro Cys Ser Ser Gln Glu 320 325 330 TTC AAA AAG GCC TTT CAG AAT GTC TTG AGA ATC CAG TGT CTC CGC AGA 1480 Phe Lys Lys Ala Phe Gln Asn Val Leu Arg Ile Gln Cys Leu Arg Arg 335 340 345 AAG CAG TCT TCC AAA CAT GCC CTG GGC TAC ACC CTG CAC CCG CCC AGC 1528 Lys Gln Ser Ser Lys His Ala Leu Gly Tyr Thr Leu His Pro Pro Ser 350 355 360 CAG GCC GTG GAA GGG CAA CAC AAG GAC ATG GTG CGC ATC CCC GTG GGA 1576 Gln Ala Val Glu Gly Gln His Lys Asp Met Val Arg Ile Pro Val Gly 365 370 375 380 TCA AGA GAG ACC TTC TAC AGG ATC TCC AAG ACG GAT GGC GTT TGT GAA 1624 Ser Arg Glu Thr Phe Tyr Arg Ile Ser Lys Thr Asp Gly Val Cys Glu 385 390 395 TGG AAA TTT TTC TCT TCC ATG CCC CGT GGA TCT GCC AGG ATT ACA GTG 1672 Trp Lys Phe Phe Ser Ser Met Pro Arg Gly Ser Ala Arg Ile Thr Val 400 405 410 TCC AAA GAC CAA TCC TCC TGT ACC ACA GCC CGG GGA CAC ACA CCC ATG 1720 Ser Lys Asp Gln Ser Ser Cys Thr Thr Ala Arg Gly His Thr Pro Met 415 420 425 ACA TGAAGCCAGC TTCCCGTCCA CGACTGTTGT CCTTACTGCC CAAGGAAGGG 1773 Thr 429 GAGCATGAAA CCCACCACTG GTCCTGCGAC CCACTGTCTT TGGAATCCAC CCCAGGAGCC 1833 CAGGAGCCTT GCCTGACACT TGGATTTACT TCTTTATCAA GCATCCATCT GACTAAGGCA 1893 CAAATCCAAC ATGTTACTGT TACTGATACA GGAAAAACAG TAACTTAAGG AATGATCATG 1953 AATGCAAAGG GAAAGAGGAA AAGAGCCTTC AGGGACAAAT AGCTCGATTT TTTGTAAATC 2013 AGTTTCATAC AACCTCCCTC CCCCATTTCA TTCTTAAAAG TTAATTGAGA ATCATCAGCC 2073 ACGTGTAGGG TGTGAG 2089

【発明の効果】組換えＤＮＡ技術により十分な量の精製
されたヒトα_1C2アドレナリン受容体又はヒトα_1C3アド
レナリン受容体を得る事ができ、ヒトα₁アドレナリン
受容体サブファミリーの機能解明に向けての研究が容易
になる。また本受容体に選択的なアゴニスト、アンタゴ
ニストの検索を行うときに用いることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】前立腺ｃＤＮＡを鋳型に用いたＰＣＲ反応産物
の１％アガロースゲル電気泳動を表す。 レーン１：Ｐ２Ｃ１Ａ遺伝子を鋳型に、プライマー１及
び２を用いた場合 レーン２：前立腺ｃＤＮＡを鋳型に、プライマー１及び
２を用いた場合 レーン３：Ｐ２Ｃ６遺伝子を鋳型に、プライマー１及び
３を用いた場合 レーン４：前立腺ｃＤＮＡを鋳型に、プライマー１及び
３を用いた場合 Ｍ：分子量マーカー をそれぞれ表す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 9282−4Ｂ

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号１のアミノ酸配列によって示さ
   れるヒトα_1c2アドレナリン受容体をコードするＤＮ
   Ａ。
2. 【請求項２】 配列番号２の塩基配列によって示される
   ヒトα_1c2アドレナリン受容体をコードするＤＮＡ。
3. 【請求項３】 配列番号１のアミノ酸配列によって示さ
   れるヒトα_1c2アドレナリン受容体。
4. 【請求項４】 配列番号３のアミノ酸配列によって示さ
   れるヒトα_1c3アドレナリン受容体をコードするＤＮ
   Ａ。
5. 【請求項５】 配列番号４の塩基配列によって示される
   ヒトα_1c3アドレナリン受容体をコードするＤＮＡ。
6. 【請求項６】 配列番号３のアミノ酸配列によって示さ
   れるヒトα_1c3アドレナリン受容体。
7. 【請求項７】 請求項１記載のヒトα_1c2アドレナリン
   受容体をコードする遺伝子を含むＤＮＡで形質転換した
   微生物。
8. 【請求項８】 請求項４記載のヒトα_1c3アドレナリン
   受容体をコードする遺伝子を含むＤＮＡで形質転換した
   微生物。
9. 【請求項９】 請求項１記載のヒトα_1c2アドレナリン
   受容体をコードする遺伝子を含むＤＮＡで形質転換した
   動物細胞。
10. 【請求項１０】 請求項４記載のヒトα_1c3アドレナリ
    ン受容体をコードする遺伝子を含むＤＮＡで形質転換し
    た動物細胞。