JP3517988B2 - ヒトマッカード−ジョセフ病関連蛋白質、その蛋白質をコードするｃＤＮＡおよび遺伝子、そのＤＮＡまたは遺伝子を含むベクター、その発現ベクターで形質転換された宿主細胞、マッカード−ジョセフ病の診断方法および治療剤 - Google Patents
ヒトマッカード−ジョセフ病関連蛋白質、その蛋白質をコードするｃＤＮＡおよび遺伝子、そのＤＮＡまたは遺伝子を含むベクター、その発現ベクターで形質転換された宿主細胞、マッカード−ジョセフ病の診断方法および治療剤Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヒトマッカード−ジョ
セフ病関連蛋白質、その蛋白質をコードするｃＤＮＡお
よび遺伝子、そのＤＮＡまたは遺伝子を含むベクター、
その発現ベクターで形質転換された宿主細胞、マッカー
ド−ジョセフ病の診断方法および治療剤に関する。
セフ病関連蛋白質、その蛋白質をコードするｃＤＮＡお
よび遺伝子、そのＤＮＡまたは遺伝子を含むベクター、
その発現ベクターで形質転換された宿主細胞、マッカー
ド−ジョセフ病の診断方法および治療剤に関する。
【０００２】
【発明の背景】原因不明の神経変性疾患のひとつにマッ
カード−ジョセフ病（Machado-JosephDisease、以下Ｍ
ＪＤと略記する。）がある。最初、いくつかの国の臨床
医により別々の病名で呼ばれていたが、1976年、主に同
一の遺伝子異常に基づく臨床亜型であることが証明され
た。後になって、この遺伝子異常は常染色体の優性遺伝
の形式をとることが判明した。わが国でも1983年に初め
てＭＪＤが報告され、それ以降、報告は年々増加してい
る。
カード−ジョセフ病（Machado-JosephDisease、以下Ｍ
ＪＤと略記する。）がある。最初、いくつかの国の臨床
医により別々の病名で呼ばれていたが、1976年、主に同
一の遺伝子異常に基づく臨床亜型であることが証明され
た。後になって、この遺伝子異常は常染色体の優性遺伝
の形式をとることが判明した。わが国でも1983年に初め
てＭＪＤが報告され、それ以降、報告は年々増加してい
る。
【０００３】ＭＪＤは、発病年齢が１０才前後から５０
才前後と幅広く、初発症状としては運動失調による歩行
障害を示すものが多く、次第に、平衡障害、協調運動障
害、構音障害、眼振、眼球運動障害、筋萎縮などの症状
が現われ、発病後約１０年を経過した晩期には、自律神
経障害、神経知能障害などの症状が現われ、これが元で
最終的には自殺などにより死に至る場合が多い。本症は
世代が進むにつれて発病年齢が若くなる傾向がみられ
る。
才前後と幅広く、初発症状としては運動失調による歩行
障害を示すものが多く、次第に、平衡障害、協調運動障
害、構音障害、眼振、眼球運動障害、筋萎縮などの症状
が現われ、発病後約１０年を経過した晩期には、自律神
経障害、神経知能障害などの症状が現われ、これが元で
最終的には自殺などにより死に至る場合が多い。本症は
世代が進むにつれて発病年齢が若くなる傾向がみられ
る。
【０００４】
【従来の技術】最近、ＭＪＤが一つの変異遺伝子に基づ
く疾患であると考えられるようになり、ＭＪＤの遺伝子
座に関して盛んに研究されている。1993年、ツジらのグ
ループは、連鎖の分析よりＭＪＤ遺伝子はヒト染色体１
４ｑ24.3−32.1にマップされていることを突き止めた
（Nature Genetics, 4, 300 (1993)参照のこと）。しか
しながら、ＭＪＤ遺伝子の同定には至っていない。
く疾患であると考えられるようになり、ＭＪＤの遺伝子
座に関して盛んに研究されている。1993年、ツジらのグ
ループは、連鎖の分析よりＭＪＤ遺伝子はヒト染色体１
４ｑ24.3−32.1にマップされていることを突き止めた
（Nature Genetics, 4, 300 (1993)参照のこと）。しか
しながら、ＭＪＤ遺伝子の同定には至っていない。
【０００５】
【発明の目的】本発明者らは、ＭＪＤ遺伝子を同定する
ために鋭意検討を重ねた。すなわち、ＭＪＤと同様に常
染色体優性遺伝の形式をとる神経変性疾患であるハンチ
ントン舞踏病、ケネデイー病、ＳＣＡ１に着目した。最
近、これらの関連遺伝子が相次いで同定され、患者の遺
伝子では、塩基配列「ＣＡＧ」の繰り返し数が正常人に
比べ異常に多いことが判明した。また、興味深いこと
に、患者間での比較において、「ＣＡＧ」の繰り返し数
が多いほど発症年齢が下がり、臨床的重症度が増すとい
うことが明らかになった。ＭＪＤは、これらの遺伝性神
経変性疾患と同様な遺伝形式および臨床経過をとること
から、ＭＪＤでも関連遺伝子内での「ＣＡＧ」リピート
の異常な増幅によって発病しているのではないかと想定
し、独自の方法で検討を重ねた。
ために鋭意検討を重ねた。すなわち、ＭＪＤと同様に常
染色体優性遺伝の形式をとる神経変性疾患であるハンチ
ントン舞踏病、ケネデイー病、ＳＣＡ１に着目した。最
近、これらの関連遺伝子が相次いで同定され、患者の遺
伝子では、塩基配列「ＣＡＧ」の繰り返し数が正常人に
比べ異常に多いことが判明した。また、興味深いこと
に、患者間での比較において、「ＣＡＧ」の繰り返し数
が多いほど発症年齢が下がり、臨床的重症度が増すとい
うことが明らかになった。ＭＪＤは、これらの遺伝性神
経変性疾患と同様な遺伝形式および臨床経過をとること
から、ＭＪＤでも関連遺伝子内での「ＣＡＧ」リピート
の異常な増幅によって発病しているのではないかと想定
し、独自の方法で検討を重ねた。
【０００６】本発明者らは、まず、ＣＡＧリピートに相
補的であるＣＴＧリピートを有するプローブを用いて、
正常人の脳皮質より調製したｃＤＮＡライブラリーをス
クリーニングした結果、明確なＣＡＧリピート構造を有
し、３５９アミノ酸をコードするｃＤＮＡクローン（Ｃ
ＡＧ−２７）を得た。
補的であるＣＴＧリピートを有するプローブを用いて、
正常人の脳皮質より調製したｃＤＮＡライブラリーをス
クリーニングした結果、明確なＣＡＧリピート構造を有
し、３５９アミノ酸をコードするｃＤＮＡクローン（Ｃ
ＡＧ−２７）を得た。
【０００７】そこで、ＣＡＧ−２７の断片をプローブと
して、ヒトジェノミックライブラリーのスクリーニング
を行った結果、陽性クローンを得、さらにこれらのクロ
ーンはヒト染色体の１４ｑ.32.1 にマップされているこ
とが判明した。これによってＣＡＧ−２７がまさしくＭ
ＪＤ関連遺伝子である可能性が高まった。ＣＡＧ−２７
の断片を用いて、ヒト脳ｃＤＮＡライブラリーを再度ス
クリーニングしたところ、新たに２種類のクローンが得
られた。それらを比較したところ、ＣＡＧリピートの直
前にスプライシングサイトが存在することが分かった。
そこでＣＡＧリピートより３′側のＤＮＡ断片をプロー
ブとしてヒトジェノミックライブラリーを再度スクリー
ニングした結果、陽性クローンよりＣＡＧリピートの直
前のイントロンの構造が判明した。
して、ヒトジェノミックライブラリーのスクリーニング
を行った結果、陽性クローンを得、さらにこれらのクロ
ーンはヒト染色体の１４ｑ.32.1 にマップされているこ
とが判明した。これによってＣＡＧ−２７がまさしくＭ
ＪＤ関連遺伝子である可能性が高まった。ＣＡＧ−２７
の断片を用いて、ヒト脳ｃＤＮＡライブラリーを再度ス
クリーニングしたところ、新たに２種類のクローンが得
られた。それらを比較したところ、ＣＡＧリピートの直
前にスプライシングサイトが存在することが分かった。
そこでＣＡＧリピートより３′側のＤＮＡ断片をプロー
ブとしてヒトジェノミックライブラリーを再度スクリー
ニングした結果、陽性クローンよりＣＡＧリピートの直
前のイントロンの構造が判明した。
【０００８】最後にイントロンの３′側とＣＡＧリピー
トの３′側をコードするプライマーを用いてＰＣＲ（ P
olymerase chain reaction）を行ったところ成功し、Ｐ
ＣＲ生成物のアガロース電気泳動の結果より、正常人で
は１３から３６回のＣＡＧリピート部分を有していたの
に対し、ＭＪＤ患者ではいずれも７０回前後のリピート
が認められた。ここに、本発明者らはＭＪＤ関連蛋白
質、およびその蛋白質をコードする遺伝子を見出して、
本発明を完成するに至った。さらに、ＭＪＤ関連遺伝子
の一部をＰＣＲプライマーとするＭＪＤの診断方法をも
確立した。
トの３′側をコードするプライマーを用いてＰＣＲ（ P
olymerase chain reaction）を行ったところ成功し、Ｐ
ＣＲ生成物のアガロース電気泳動の結果より、正常人で
は１３から３６回のＣＡＧリピート部分を有していたの
に対し、ＭＪＤ患者ではいずれも７０回前後のリピート
が認められた。ここに、本発明者らはＭＪＤ関連蛋白
質、およびその蛋白質をコードする遺伝子を見出して、
本発明を完成するに至った。さらに、ＭＪＤ関連遺伝子
の一部をＰＣＲプライマーとするＭＪＤの診断方法をも
確立した。
【０００９】スイスプロット（Swiss Prot Release 2.
0）に登録されている既知のポリペプチドのアミノ酸配
列を調査したが、本発明のポリペプチドと同一の配列を
有しているものはまったく無かった。さらに、ジーンバ
ンク（GenBank Release 70.0）に登録されているヌクレ
オチド配列も調査したが、本発明のポリペプチドをコー
ドするｃＤＮＡと同一の配列は見つからなかった。従っ
て、本発明のポリペプチドはまったく新規なものである
ことが確認された。
0）に登録されている既知のポリペプチドのアミノ酸配
列を調査したが、本発明のポリペプチドと同一の配列を
有しているものはまったく無かった。さらに、ジーンバ
ンク（GenBank Release 70.0）に登録されているヌクレ
オチド配列も調査したが、本発明のポリペプチドをコー
ドするｃＤＮＡと同一の配列は見つからなかった。従っ
て、本発明のポリペプチドはまったく新規なものである
ことが確認された。
【００１０】
【発明の開示】本発明は、（１）ＭＪＤ関連蛋白質、
（２）その蛋白質をコードするｃＤＮＡ、（３）その蛋
白質をコードする遺伝子、（４）上記（２）で示される
ｃＤＮＡまたは上記（３）で示される遺伝子を含む複製
または発現ベクター、（５）上記（４）で示される発現
ベクターで形質転換された宿主細胞、（６）上記（３）
で示される遺伝子を用いることを特徴とするＭＪＤの診
断方法、および（７）上記（４）で示されるベクターを
有効成分として含有するＭＪＤ治療剤、に関する。
（２）その蛋白質をコードするｃＤＮＡ、（３）その蛋
白質をコードする遺伝子、（４）上記（２）で示される
ｃＤＮＡまたは上記（３）で示される遺伝子を含む複製
または発現ベクター、（５）上記（４）で示される発現
ベクターで形質転換された宿主細胞、（６）上記（３）
で示される遺伝子を用いることを特徴とするＭＪＤの診
断方法、および（７）上記（４）で示されるベクターを
有効成分として含有するＭＪＤ治療剤、に関する。
【００１１】以下、具体的に説明する。
（１）ＭＪＤ関連蛋白質には、実質的に純粋な形であ
る、配列番号１で示されるアミノ酸配列のＬｙｓ部が
（Ｇｌｎ）ｎ（式中、ｎは１５０以下の整数を表わし、
（Ｇｌｎ）ｎはその配列の途中に少なくともひとつのＬ
ｙｓを含んでいてもよい。）を介して配列番号２で示さ
れるアミノ酸配列のＡｒｇ部と結合したアミノ酸配列
（以下、アミノ酸配列Ａという。）を含むポリペプチ
ド、そのホモローグ、その配列のフラグメント、および
そのホモローグが含まれる。
る、配列番号１で示されるアミノ酸配列のＬｙｓ部が
（Ｇｌｎ）ｎ（式中、ｎは１５０以下の整数を表わし、
（Ｇｌｎ）ｎはその配列の途中に少なくともひとつのＬ
ｙｓを含んでいてもよい。）を介して配列番号２で示さ
れるアミノ酸配列のＡｒｇ部と結合したアミノ酸配列
（以下、アミノ酸配列Ａという。）を含むポリペプチ
ド、そのホモローグ、その配列のフラグメント、および
そのホモローグが含まれる。
【００１２】「実質的に純粋な形である」アミノ酸配列
Ａを含むポリペプチドとは、一般に、生産時のポリペプ
チドの９０％以上、例えば、９５、９８または９９％が
アミノ酸配列Ａで示されるアミノ酸配列を含むポリペプ
チドであることを意味する。
Ａを含むポリペプチドとは、一般に、生産時のポリペプ
チドの９０％以上、例えば、９５、９８または９９％が
アミノ酸配列Ａで示されるアミノ酸配列を含むポリペプ
チドであることを意味する。
【００１３】「アミノ酸配列Ａを含むポリペプチド」と
は、アミノ酸配列Ａからなるポリペプチドだけでなく、
そのポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に、ア
ミノ酸配列Ａのアミノ酸数の２０％、より好ましくは５
％以内の別個のポリペプチドを付加したポリペプチドを
意味する。
は、アミノ酸配列Ａからなるポリペプチドだけでなく、
そのポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に、ア
ミノ酸配列Ａのアミノ酸数の２０％、より好ましくは５
％以内の別個のポリペプチドを付加したポリペプチドを
意味する。
【００１４】アミノ酸配列Ａを含むポリペプチドのホモ
ローグとは、一般に少なくとも１００個、好ましくは少
なくとも１５０個、例えば２００、２５０または３００
個の連続したアミノ酸領域で、少なくとも７０％、好ま
しくは少なくとも８０または９０％、より好ましくは９
５％以上相同性のあるものであり、そのようなホモロー
グは、以下本発明のポリペプチドとして記載される。
ローグとは、一般に少なくとも１００個、好ましくは少
なくとも１５０個、例えば２００、２５０または３００
個の連続したアミノ酸領域で、少なくとも７０％、好ま
しくは少なくとも８０または９０％、より好ましくは９
５％以上相同性のあるものであり、そのようなホモロー
グは、以下本発明のポリペプチドとして記載される。
【００１５】さらに、アミノ酸配列Ａを含むポリペプチ
ドのフラグメント、またはそれらのホモローグのフラグ
メントとは、アミノ酸配列Ａを含むポリペプチドまたは
それらのホモローグのうち、少なくとも１０アミノ酸、
好ましくは少なくとも１５アミノ酸、例えば２０、２
５、３０、４０、５０または６０アミノ酸部分を意味す
る。
ドのフラグメント、またはそれらのホモローグのフラグ
メントとは、アミノ酸配列Ａを含むポリペプチドまたは
それらのホモローグのうち、少なくとも１０アミノ酸、
好ましくは少なくとも１５アミノ酸、例えば２０、２
５、３０、４０、５０または６０アミノ酸部分を意味す
る。
【００１６】アミノ酸配列Ａを含むポリペプチドのホモ
ローグ、その配列のフラグメント、およびそのホモロー
グを別の観点から説明すると、配列番号１で示されるア
ミノ酸配列のＬｙｓ部が（Ｇｌｎ）ｎ（式中、ｎは１５
０以下の整数を表わし、（Ｇｌｎ）ｎはその配列の途中
に少なくともひとつのＬｙｓを含んでいてもよい。）を
介して配列番号２で示されるアミノ酸配列のＡｒｇ部と
結合しているアミノ酸配列Ａを有するもの以外に、その
アミノ酸配列の一部が欠損したもの（例えば、蛋白全長
中、生物活性の発現に必須な部分だけからなるポリペプ
チド）、その一部が他のアミノ酸と置換したもの（例え
ば、物性の類似したアミノ酸に置換したもの）、および
その一部に他のアミノ酸が付加または挿入されたものも
含まれる。
ローグ、その配列のフラグメント、およびそのホモロー
グを別の観点から説明すると、配列番号１で示されるア
ミノ酸配列のＬｙｓ部が（Ｇｌｎ）ｎ（式中、ｎは１５
０以下の整数を表わし、（Ｇｌｎ）ｎはその配列の途中
に少なくともひとつのＬｙｓを含んでいてもよい。）を
介して配列番号２で示されるアミノ酸配列のＡｒｇ部と
結合しているアミノ酸配列Ａを有するもの以外に、その
アミノ酸配列の一部が欠損したもの（例えば、蛋白全長
中、生物活性の発現に必須な部分だけからなるポリペプ
チド）、その一部が他のアミノ酸と置換したもの（例え
ば、物性の類似したアミノ酸に置換したもの）、および
その一部に他のアミノ酸が付加または挿入されたものも
含まれる。
【００１７】ＣＡＧリピートには、「ＣＡＧ」そのも
の、および「ＣＡＧ」の亜型である「ＣＡＡ」および
「ＡＡＧ」も含めて数えることが合理的である。本発明
によれば、ＣＡＧリピートは正常人で数回から３０回、
ＭＪＤ患者で約７０回であることが判明している。ま
た、疾患の重症度によっては１００を越えることも予測
される。従って、アミノ酸配列Ａ中、Ｇｌｎリピート
数、すなわちｎは１５０以下である。さらに（Ｇｌｎ）
ｎは、その配列の途中に少なくともひとつ、例えば１か
ら５個のＬｙｓ（すなわち、塩基配列「ＡＡＧ」に相当
する）を含んでいてもよい。
の、および「ＣＡＧ」の亜型である「ＣＡＡ」および
「ＡＡＧ」も含めて数えることが合理的である。本発明
によれば、ＣＡＧリピートは正常人で数回から３０回、
ＭＪＤ患者で約７０回であることが判明している。ま
た、疾患の重症度によっては１００を越えることも予測
される。従って、アミノ酸配列Ａ中、Ｇｌｎリピート
数、すなわちｎは１５０以下である。さらに（Ｇｌｎ）
ｎは、その配列の途中に少なくともひとつ、例えば１か
ら５個のＬｙｓ（すなわち、塩基配列「ＡＡＧ」に相当
する）を含んでいてもよい。
【００１８】（２）ＭＪＤ関連蛋白質をコードするｃＤ
ＮＡとは、（ｉ）前記アミノ酸配列Ａを含むポリペプチ
ドをコードするｃＤＮＡ、（ii）配列番号３で示される
塩基配列のＡＡＡ部が（ＣＸＸ）ｍ（式中、ＣＸＸは、
塩基配列「ＣＡＧ」、「ＣＡＡ」または「ＡＡＧ」を表
わし、ｍは１５０以下の整数を表わす。ただし、「ＣＡ
Ａ」および「ＡＡＧ」の数は各々０から５個である。）
を介して配列番号４で示される塩基配列のＣＧＧ部と結
合した塩基配列（以下、塩基配列Ｂという。）を有する
ｃＤＮＡ、(iii) 配列番号５で示される塩基配列のＡＡ
Ａ部が（ＣＸＸ）ｍ（式中、ＣＸＸおよびｍは前記と同
じ意味を表わす。）を介して配列番号６で示される塩基
配列のＣＧＧ部と結合した塩基配列（以下、塩基配列Ｃ
という。）を有するｃＤＮＡ、および（iv）前記塩基配
列ＢまたはＣで示される塩基配列に選択的にハイブリダ
イズする塩基配列を有するｃＤＮＡ、およびそれらのフ
ラグメントが含まれる。
ＮＡとは、（ｉ）前記アミノ酸配列Ａを含むポリペプチ
ドをコードするｃＤＮＡ、（ii）配列番号３で示される
塩基配列のＡＡＡ部が（ＣＸＸ）ｍ（式中、ＣＸＸは、
塩基配列「ＣＡＧ」、「ＣＡＡ」または「ＡＡＧ」を表
わし、ｍは１５０以下の整数を表わす。ただし、「ＣＡ
Ａ」および「ＡＡＧ」の数は各々０から５個である。）
を介して配列番号４で示される塩基配列のＣＧＧ部と結
合した塩基配列（以下、塩基配列Ｂという。）を有する
ｃＤＮＡ、(iii) 配列番号５で示される塩基配列のＡＡ
Ａ部が（ＣＸＸ）ｍ（式中、ＣＸＸおよびｍは前記と同
じ意味を表わす。）を介して配列番号６で示される塩基
配列のＣＧＧ部と結合した塩基配列（以下、塩基配列Ｃ
という。）を有するｃＤＮＡ、および（iv）前記塩基配
列ＢまたはＣで示される塩基配列に選択的にハイブリダ
イズする塩基配列を有するｃＤＮＡ、およびそれらのフ
ラグメントが含まれる。
【００１９】塩基配列ＢまたはＣで示される塩基配列に
選択的にハイブリダイズするｃＤＮＡとは、一般に、少
なくとも３００個、好ましくは、少なくとも４５０個、
例えば６００、７５０または９００個の連続した塩基配
列領域で、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８
０または９０％、より好ましくは９５％以上の相同性の
あるものであり、そのようなｃＤＮＡは、以後本発明の
ｃＤＮＡとして記載される。
選択的にハイブリダイズするｃＤＮＡとは、一般に、少
なくとも３００個、好ましくは、少なくとも４５０個、
例えば６００、７５０または９００個の連続した塩基配
列領域で、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８
０または９０％、より好ましくは９５％以上の相同性の
あるものであり、そのようなｃＤＮＡは、以後本発明の
ｃＤＮＡとして記載される。
【００２０】塩基配列ＢまたはＣで示される塩基配列を
有するｃＤＮＡおよびその塩基配列に選択的にハイブリ
ダイズする塩基配列を有するｃＤＮＡのフラグメントと
は少なくとも１０塩基、好ましくは少なくとも４５塩
基、例えば６０、７５、９０、１２０または１５０塩基
部分を意味し、そのようなフラグメントも本発明のｃＤ
ＮＡに含まれる。
有するｃＤＮＡおよびその塩基配列に選択的にハイブリ
ダイズする塩基配列を有するｃＤＮＡのフラグメントと
は少なくとも１０塩基、好ましくは少なくとも４５塩
基、例えば６０、７５、９０、１２０または１５０塩基
部分を意味し、そのようなフラグメントも本発明のｃＤ
ＮＡに含まれる。
【００２１】よく知られているように、ひとつのアミノ
酸をコードするコドンは１〜６種類（例えば、メチオニ
ン（Ｍｅｔ）は１種類、ロイシン（Ｌｅｕ）は６種類）
知られている。従って、ポリペプチドのアミノ酸配列を
変えることなくｃＤＮＡの塩基配列を変えることができ
る。従って、 （ｉ）で特定される本発明のｃＤＮＡには、それぞれ前
記アミノ酸配列Ａで示されるポリペプチドをコードする
すべての塩基配列群（但し、（Ｇｌｎ）ｎ部分は（ＣＸ
Ｘ）ｍによってコードされているものとする。）が含ま
れる。塩基配列を変えることによってポリペプチドの生
産性が向上することがある。 （ii）で特定されるＤＮＡは、（ｉ）で示されるＤＮＡ
の一態様であり、 (iii) に示されるＤＮＡは、（ii）で特定されるＤＮＡ
に天然の非翻訳部分を加えた配列を示す。
酸をコードするコドンは１〜６種類（例えば、メチオニ
ン（Ｍｅｔ）は１種類、ロイシン（Ｌｅｕ）は６種類）
知られている。従って、ポリペプチドのアミノ酸配列を
変えることなくｃＤＮＡの塩基配列を変えることができ
る。従って、 （ｉ）で特定される本発明のｃＤＮＡには、それぞれ前
記アミノ酸配列Ａで示されるポリペプチドをコードする
すべての塩基配列群（但し、（Ｇｌｎ）ｎ部分は（ＣＸ
Ｘ）ｍによってコードされているものとする。）が含ま
れる。塩基配列を変えることによってポリペプチドの生
産性が向上することがある。 （ii）で特定されるＤＮＡは、（ｉ）で示されるＤＮＡ
の一態様であり、 (iii) に示されるＤＮＡは、（ii）で特定されるＤＮＡ
に天然の非翻訳部分を加えた配列を示す。
【００２２】ＣＡＧリピートは正常人で数回から３０
回、ＭＪＤ患者で約７０回であることが判明している。
従って、塩基配列ＢまたはＣで示される塩基配列中、Ｃ
ＡＧリピートの数、すなわち、ｍは１５０以下である。
塩基配列Ｂ、Ｃおよび後記のＤで示される塩基配列中、
「ＣＸＸ」は「ＣＡＧ」、「ＣＡＡ」または「ＡＡＧ」
を表わすが、「ＣＡＡ」および「ＡＡＧ」の数は各々０
から５個である。
回、ＭＪＤ患者で約７０回であることが判明している。
従って、塩基配列ＢまたはＣで示される塩基配列中、Ｃ
ＡＧリピートの数、すなわち、ｍは１５０以下である。
塩基配列Ｂ、Ｃおよび後記のＤで示される塩基配列中、
「ＣＸＸ」は「ＣＡＧ」、「ＣＡＡ」または「ＡＡＧ」
を表わすが、「ＣＡＡ」および「ＡＡＧ」の数は各々０
から５個である。
【００２３】（３） ＭＪＤ関連遺伝子とは、ヒト遺伝
子、１４ｑ24.3−32.1にマップされている少なくとも５
つのエクソンからなる遺伝子のことである。本発明で
は、その全エクソンとイントロンの一部をシークエンス
することに成功した。より具体的には、配列番号７で示
される塩基配列のＡＧＡ部が（ＣＸＸ）ｍ（式中、ＣＸ
Ｘおよびｍは前記と同じ意味を表わす。）を介して配列
番号８で示される塩基配列（以下、塩基配列Ｄとい
う。）を有する染色体ＤＮＡである。塩基配列Ｄには、
ＣＡＧリピートを含むエクソン部分（本発明では第４エ
クソンと呼ぶことにする。）とその上流に位置するイン
トロン部分の塩基配列が明らかにされている。
子、１４ｑ24.3−32.1にマップされている少なくとも５
つのエクソンからなる遺伝子のことである。本発明で
は、その全エクソンとイントロンの一部をシークエンス
することに成功した。より具体的には、配列番号７で示
される塩基配列のＡＧＡ部が（ＣＸＸ）ｍ（式中、ＣＸ
Ｘおよびｍは前記と同じ意味を表わす。）を介して配列
番号８で示される塩基配列（以下、塩基配列Ｄとい
う。）を有する染色体ＤＮＡである。塩基配列Ｄには、
ＣＡＧリピートを含むエクソン部分（本発明では第４エ
クソンと呼ぶことにする。）とその上流に位置するイン
トロン部分の塩基配列が明らかにされている。
【００２４】ＣＡＧリピートは正常人で数回から３０
回、ＭＪＤ患者では約７０回であることがわかった。従
って、塩基配列Ｄにおいて、ｍは１５０以下と定義され
る。ＣＡＧリピートの数は、発症年齢や臨床的重症度と
密接な関係があることが予測される。従って、ＣＡＧリ
ピートの数を調べることは、ＭＪＤの診断法の一つとし
て利用することができる。本発明のｃＤＮＡおよび遺伝
子は、遺伝子組み換え法、合成法あるいは当業者に公知
の方法によって取得することができる。
回、ＭＪＤ患者では約７０回であることがわかった。従
って、塩基配列Ｄにおいて、ｍは１５０以下と定義され
る。ＣＡＧリピートの数は、発症年齢や臨床的重症度と
密接な関係があることが予測される。従って、ＣＡＧリ
ピートの数を調べることは、ＭＪＤの診断法の一つとし
て利用することができる。本発明のｃＤＮＡおよび遺伝
子は、遺伝子組み換え法、合成法あるいは当業者に公知
の方法によって取得することができる。
【００２５】塩基配列ＢまたはＣで示される塩基配列を
有するｃＤＮＡ、または塩基配列Ｄで示される塩基配列
を有する遺伝子は、以下の方法に従って調製される。す
なわち、（ｉ）ＣＡＧリピートまたはそれに相補的なＣ
ＴＧリピートを有するプローブを調製し、（ii）（ｉ）
で調製したプローブを用いて、ヒトｃＤＮＡライブラリ
ーをスクリーニングし、(iii) （ii）で得られた陽性ク
ローンをプローブとして、ヒトジェノミックライブラリ
ーをスクリーニングし、（iv） 得られた陽性クローン
を遺伝子マッピングし、（ｖ）１４ｑ24.3−32.1にマッ
ピングされているものを検索することによって行なわれ
る。
有するｃＤＮＡ、または塩基配列Ｄで示される塩基配列
を有する遺伝子は、以下の方法に従って調製される。す
なわち、（ｉ）ＣＡＧリピートまたはそれに相補的なＣ
ＴＧリピートを有するプローブを調製し、（ii）（ｉ）
で調製したプローブを用いて、ヒトｃＤＮＡライブラリ
ーをスクリーニングし、(iii) （ii）で得られた陽性ク
ローンをプローブとして、ヒトジェノミックライブラリ
ーをスクリーニングし、（iv） 得られた陽性クローン
を遺伝子マッピングし、（ｖ）１４ｑ24.3−32.1にマッ
ピングされているものを検索することによって行なわれ
る。
【００２６】各ステップの詳細な方法は、後記の実施例
に記載した方法に従って行なわれる。 塩基配列Ｂ、Ｃ
またはＤで示される塩基配列が一旦確定されると、その
後は、化学合成によって、またはＰＣＲ法によって、あ
るいはその塩基配列の断片をプローブとしたハイブリダ
イズ法によって、本発明のＤＮＡを得ることができる。
さらに、本ＤＮＡを含有するベクターＤＮＡを適当な宿
主に導入し、これを増殖させることによって、目的とす
る本発明ＤＮＡを必要量得ることができる。
に記載した方法に従って行なわれる。 塩基配列Ｂ、Ｃ
またはＤで示される塩基配列が一旦確定されると、その
後は、化学合成によって、またはＰＣＲ法によって、あ
るいはその塩基配列の断片をプローブとしたハイブリダ
イズ法によって、本発明のＤＮＡを得ることができる。
さらに、本ＤＮＡを含有するベクターＤＮＡを適当な宿
主に導入し、これを増殖させることによって、目的とす
る本発明ＤＮＡを必要量得ることができる。
【００２７】本発明のポリペプチド（例えば、アミノ酸
配列Ａを含むポリペプチド）を取得する方法としては、
（ａ）生体または培養細胞から精製単離する方法、
（ｂ）ペプチド合成する方法、または（ｃ）遺伝子組み
換え技術を用いて生産する方法、などが挙げられるが、
工業的には（ｃ）に記載した方法が好ましい。
配列Ａを含むポリペプチド）を取得する方法としては、
（ａ）生体または培養細胞から精製単離する方法、
（ｂ）ペプチド合成する方法、または（ｃ）遺伝子組み
換え技術を用いて生産する方法、などが挙げられるが、
工業的には（ｃ）に記載した方法が好ましい。
【００２８】遺伝子組み換え技術を用いてポリペプチド
を生産するための発現系（宿主−ベクター系）として
は、例えば、細菌、酵母、昆虫細胞および哺乳動物細胞
の発現系が挙げられる。例えば、大腸菌で発現させる場
合には、蛋白部分をコードするＤＮＡ（例えば、塩基配
列Ｂで示される塩基配列をコードするＤＮＡ）を、適当
なプロモーター（例えば、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃ
プロモーター、λＰＬプロモーター、Ｔ７プロモーター
等）の下流に接続し、大腸菌内で機能するベクター（例
えば、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９等）に挿
入して発現ベクターを作製する。次に、この発現ベクタ
ーで形質転換した大腸菌（例えば、E. coli ＤＨ１、E.
coli ＪＭ１０９、E. coli ＨＢ１０１株等）を適当な
培地で培養して、その菌体より目的とするポリペプチド
を得ることができる。また、バクテリアのシグナルペプ
チド（例えば、ｐｅｌＢのシグナルペプチド）を利用す
れば、ペリプラズム中に目的とするポリペプチドを分泌
することもできる。さらに、他のポリペプチドとのフュ
ージョン・プロテイン(fusion protein)を生産すること
もできる。
を生産するための発現系（宿主−ベクター系）として
は、例えば、細菌、酵母、昆虫細胞および哺乳動物細胞
の発現系が挙げられる。例えば、大腸菌で発現させる場
合には、蛋白部分をコードするＤＮＡ（例えば、塩基配
列Ｂで示される塩基配列をコードするＤＮＡ）を、適当
なプロモーター（例えば、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃ
プロモーター、λＰＬプロモーター、Ｔ７プロモーター
等）の下流に接続し、大腸菌内で機能するベクター（例
えば、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９等）に挿
入して発現ベクターを作製する。次に、この発現ベクタ
ーで形質転換した大腸菌（例えば、E. coli ＤＨ１、E.
coli ＪＭ１０９、E. coli ＨＢ１０１株等）を適当な
培地で培養して、その菌体より目的とするポリペプチド
を得ることができる。また、バクテリアのシグナルペプ
チド（例えば、ｐｅｌＢのシグナルペプチド）を利用す
れば、ペリプラズム中に目的とするポリペプチドを分泌
することもできる。さらに、他のポリペプチドとのフュ
ージョン・プロテイン(fusion protein)を生産すること
もできる。
【００２９】また、哺乳動物細胞で発現させる場合に
は、例えば、塩基配列Ｃで示される塩基配列をコードす
るＤＮＡを適当なベクター（例えば、レトロウイルスベ
クター、パピローマウイルスベクター、ワクシニアウイ
ルスベクター、ＳＶ４０系ベクター等）中の適当なプロ
モーター（例えば、ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロ
モーター、メタロチオネインプロモーター等）の下流に
挿入して発現ベクターを作製する。次に、得られた発現
ベクターで適当な哺乳動物細胞（例えば、サルＣＯＳ−
７細胞、チャイニーズハムスターＣＨＯ細胞、マウスＬ
細胞等）を形質転換し、形質転換体を適当な培地で培養
することによって、その培養液中に目的とするポリペプ
チドが分泌される。以上のようにして得られたポリペプ
チドは、一般的な生化学的方法によって単離精製するこ
とができる。
は、例えば、塩基配列Ｃで示される塩基配列をコードす
るＤＮＡを適当なベクター（例えば、レトロウイルスベ
クター、パピローマウイルスベクター、ワクシニアウイ
ルスベクター、ＳＶ４０系ベクター等）中の適当なプロ
モーター（例えば、ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロ
モーター、メタロチオネインプロモーター等）の下流に
挿入して発現ベクターを作製する。次に、得られた発現
ベクターで適当な哺乳動物細胞（例えば、サルＣＯＳ−
７細胞、チャイニーズハムスターＣＨＯ細胞、マウスＬ
細胞等）を形質転換し、形質転換体を適当な培地で培養
することによって、その培養液中に目的とするポリペプ
チドが分泌される。以上のようにして得られたポリペプ
チドは、一般的な生化学的方法によって単離精製するこ
とができる。
【００３０】（４） 本発明には、本発明のｃＤＮＡま
たは遺伝子を含む複製または発現ベクターが含まれる。
ベクターとしては、例えば、ｏｒｉ領域と、必要により
上記ＤＮＡまたは遺伝子の発現のためのプロモーター、
プロモーターの制御因子などからなるプラスミド、ウィ
ルスまたはファージベクターが挙げられる。ベクターは
ひとつまたはそれ以上の選択的マーカー遺伝子、例えば
アンピシリン耐性遺伝子を含んでいてもよい。
たは遺伝子を含む複製または発現ベクターが含まれる。
ベクターとしては、例えば、ｏｒｉ領域と、必要により
上記ＤＮＡまたは遺伝子の発現のためのプロモーター、
プロモーターの制御因子などからなるプラスミド、ウィ
ルスまたはファージベクターが挙げられる。ベクターは
ひとつまたはそれ以上の選択的マーカー遺伝子、例えば
アンピシリン耐性遺伝子を含んでいてもよい。
【００３１】（５） さらに、本発明には、上記（４）
に示される複製または発現ベクターで形質転換された宿
主細胞も含まれる。細胞としては、例えば細菌、酵母、
昆虫細胞または哺乳動物細胞が挙げられる。
に示される複製または発現ベクターで形質転換された宿
主細胞も含まれる。細胞としては、例えば細菌、酵母、
昆虫細胞または哺乳動物細胞が挙げられる。
【００３２】
【発明の効果】こうして得られた本発明のＭＪＤ関連蛋
白質は、ＭＪＤ治療剤として用いることができる。すな
わち、本発明の蛋白質（ＣＡＧリピートが正常範囲であ
るもの）をコードするＤＮＡを含む発現ベクターを全身
的あるいは局所的（好ましくは、公知のターゲティング
法による局所投与により）に投与する。該ベクターは脳
細胞内に侵入し、遺伝子に入り込んで正常範囲のＣＡＧ
リピートを有するＭＪＤ関連蛋白質を継続的に発現す
る。正常であるＭＪＤ蛋白質が異常であるＭＪＤ蛋白質
に対して大過剰に発現されると、異常である蛋白質はも
はや表現されなくなる。
白質は、ＭＪＤ治療剤として用いることができる。すな
わち、本発明の蛋白質（ＣＡＧリピートが正常範囲であ
るもの）をコードするＤＮＡを含む発現ベクターを全身
的あるいは局所的（好ましくは、公知のターゲティング
法による局所投与により）に投与する。該ベクターは脳
細胞内に侵入し、遺伝子に入り込んで正常範囲のＣＡＧ
リピートを有するＭＪＤ関連蛋白質を継続的に発現す
る。正常であるＭＪＤ蛋白質が異常であるＭＪＤ蛋白質
に対して大過剰に発現されると、異常である蛋白質はも
はや表現されなくなる。
【００３３】本発明のＭＪＤ関連蛋白質は、そのポリク
ローナル抗体またはモノクローナル抗体を用いて、生体
におけるその蛋白質の定量を行なうことができる。これ
によってその蛋白質（遺伝子）と疾患の関係の研究ある
いは疾患の診断等に利用することができる。本発明の蛋
白質および遺伝子は現在のところＭＪＤとの関連でしか
論じられていないが、ＭＪＤ以外の小脳変性疾患あるい
はまったく別個の疾患に関連している可能性およびまっ
たく新しい生理活性を有する蛋白質である可能性は否定
できない。そのような理由から、重要な意味を持ってく
ると考えられる。ポリクローナル抗体およびモノクロー
ナル抗体は、その蛋白質あるいはその断片を抗原として
用いて常法により作製することができる。
ローナル抗体またはモノクローナル抗体を用いて、生体
におけるその蛋白質の定量を行なうことができる。これ
によってその蛋白質（遺伝子）と疾患の関係の研究ある
いは疾患の診断等に利用することができる。本発明の蛋
白質および遺伝子は現在のところＭＪＤとの関連でしか
論じられていないが、ＭＪＤ以外の小脳変性疾患あるい
はまったく別個の疾患に関連している可能性およびまっ
たく新しい生理活性を有する蛋白質である可能性は否定
できない。そのような理由から、重要な意味を持ってく
ると考えられる。ポリクローナル抗体およびモノクロー
ナル抗体は、その蛋白質あるいはその断片を抗原として
用いて常法により作製することができる。
【００３４】本発明のｃＤＮＡは、本発明の蛋白質を生
産する際の重要かつ必須の鋳型となるだけでなく、ＭＪ
Ｄの治療に用いることができる。すなわち、アンチセン
スＤＮＡを含む発現ベクターを投与することによって、
異常であるＭＪＤ蛋白質の発現を停止させることができ
る。また、本発明のｃＤＮＡをプローブとしてジェノミ
ックＤＮＡの分離に利用できる。さらに、ＭＪＤ関連遺
伝子と相同性の高い遺伝子配列を有すると考えられる、
ＭＪＤ以外の小脳変性疾患の遺伝子を分離することも可
能である。
産する際の重要かつ必須の鋳型となるだけでなく、ＭＪ
Ｄの治療に用いることができる。すなわち、アンチセン
スＤＮＡを含む発現ベクターを投与することによって、
異常であるＭＪＤ蛋白質の発現を停止させることができ
る。また、本発明のｃＤＮＡをプローブとしてジェノミ
ックＤＮＡの分離に利用できる。さらに、ＭＪＤ関連遺
伝子と相同性の高い遺伝子配列を有すると考えられる、
ＭＪＤ以外の小脳変性疾患の遺伝子を分離することも可
能である。
【００３５】本発明の遺伝子は、ＭＪＤの診断に利用す
ることができる。ＣＡＧリピートの数は発症年齢や臨床
的重症度と密接な関係があると考えられる。従って、Ｃ
ＡＧリピートの数を調べることによって、発症年齢を予
測したり、発症した場合の症状をある程度予測したりす
ることができる。
ることができる。ＣＡＧリピートの数は発症年齢や臨床
的重症度と密接な関係があると考えられる。従って、Ｃ
ＡＧリピートの数を調べることによって、発症年齢を予
測したり、発症した場合の症状をある程度予測したりす
ることができる。
【００３６】ＣＡＧリピートの数を調べるには、ＣＡＧ
リピート部分の両端の数塩基をプライマーとするＰＣＲ
法が用いられる。より具体的には、ＣＡＧリピートの
５′末端に位置するイントロン部分（配列番号９で示
す。）のうち、任意の１０から３０塩基と、第４エクソ
ン中のＣＡＧリピート部分の３′末端側に位置する部分
（配列番号１０で示す。）のうち、任意の１０から３０
塩基をプライマーとして、対象とするヒトの遺伝子また
はｍＲＮＡをＰＣＲ法によって増幅した後、常法に従
い、アガロース電気泳動に付すことにより行なわれる。
より好適には、配列番号１１で示される塩基配列
リピート部分の両端の数塩基をプライマーとするＰＣＲ
法が用いられる。より具体的には、ＣＡＧリピートの
５′末端に位置するイントロン部分（配列番号９で示
す。）のうち、任意の１０から３０塩基と、第４エクソ
ン中のＣＡＧリピート部分の３′末端側に位置する部分
（配列番号１０で示す。）のうち、任意の１０から３０
塩基をプライマーとして、対象とするヒトの遺伝子また
はｍＲＮＡをＰＣＲ法によって増幅した後、常法に従
い、アガロース電気泳動に付すことにより行なわれる。
より好適には、配列番号１１で示される塩基配列
【００３７】５′−CCAGTGACTACTTTGATTCG−３′および
【００３８】配列番号１２で示される塩基配列
【００３９】５′−TGGCCTTTCACATGGATGTGAA−３′、ま
たは配列番号１１で示される塩基配列
たは配列番号１１で示される塩基配列
【００４０】５′−CCAGTGACTACTTTGATTCG−３′および
配列番号１３で示される塩基配列
配列番号１３で示される塩基配列
【００４１】５′−CTTACCTAGATCACTCCCAA−３′で示さ
れる塩基配列がプライマーとして用いられる。ＰＣＲの
条件は常法によって設定できるが、例えば、サンプルＤ
ＮＡ（遺伝子）２００ｎｇ、プライマーをそれぞれ２０
０ｎｇ、５０ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ トリス塩酸緩衝
液（ｐＨ8.8 ）、1.5 ｍＭ ＭｇＣｌ２、0.1 ％トリト
ン（Ｔｒｉｔｏｎ）×１００、１０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳ
Ｏ、５ユニットＴａｑポリメラーゼ（和光純薬（株）
製）を、総量２０μｌとする系、９５℃、５分間→（９
５℃、１分間→５７℃、１分間→７２℃、１分間）×２
５サイクル→７２℃、１０分間の条件で行われる。サン
プルＤＮＡは健常人またはＭＪＤ患者の組織（例えば、
血液）より調製されたＤＮＡまたはＲＮＡが用いられ
る。ＣＡＧリピートの数は電気泳動によりＰＣＲ産物の
長さを判定し、計算することによって判定されるが、よ
り好ましくは、ＰＣＲ産物をベクターＤＮＡ（pBluescr
ipt ＳＫ（−）等）にサブクローニングした後、シーク
エンスを行なうことにより、正確に判定することができ
る。
れる塩基配列がプライマーとして用いられる。ＰＣＲの
条件は常法によって設定できるが、例えば、サンプルＤ
ＮＡ（遺伝子）２００ｎｇ、プライマーをそれぞれ２０
０ｎｇ、５０ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ トリス塩酸緩衝
液（ｐＨ8.8 ）、1.5 ｍＭ ＭｇＣｌ２、0.1 ％トリト
ン（Ｔｒｉｔｏｎ）×１００、１０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳ
Ｏ、５ユニットＴａｑポリメラーゼ（和光純薬（株）
製）を、総量２０μｌとする系、９５℃、５分間→（９
５℃、１分間→５７℃、１分間→７２℃、１分間）×２
５サイクル→７２℃、１０分間の条件で行われる。サン
プルＤＮＡは健常人またはＭＪＤ患者の組織（例えば、
血液）より調製されたＤＮＡまたはＲＮＡが用いられ
る。ＣＡＧリピートの数は電気泳動によりＰＣＲ産物の
長さを判定し、計算することによって判定されるが、よ
り好ましくは、ＰＣＲ産物をベクターＤＮＡ（pBluescr
ipt ＳＫ（−）等）にサブクローニングした後、シーク
エンスを行なうことにより、正確に判定することができ
る。
【００４２】
【実施例】以下に、本発明を実施例によって、より詳細
に、かつより具体的に説明するが、もちろんこれによっ
て本発明が制限されるものではない。
に、かつより具体的に説明するが、もちろんこれによっ
て本発明が制限されるものではない。
【００４３】実施例１：ＣＡＧに相補的であるＣＴＧが
１２回連続した構造を持つプローブ （１）（配列番号１４）
１２回連続した構造を持つプローブ （１）（配列番号１４）
【００４４】
５′−ＧＡＴＣＴ（ＣＴＧ）12Ｇ−３′ （１）
【００４５】を合成し、ヒト脳側頭葉皮質のｍＲＮＡよ
り調製したｃＤＮＡライブラリー（京都大学医学部、中
西重忠教授より供与された（ J. Biol. Chem., 268, 37
28 (1993))に記載されている。）をスクリーニングし
た。
り調製したｃＤＮＡライブラリー（京都大学医学部、中
西重忠教授より供与された（ J. Biol. Chem., 268, 37
28 (1993))に記載されている。）をスクリーニングし
た。
【００４６】プローブ（１）をポリヌクレオチドキナー
ゼ（ＰＮＫ１０３（商品名）、東洋紡績（株）製）を用
いたエンドラベル法でラベルし、ライブラリーより得ら
れた50,000 プラークをスクリーニングしたところ、３
０個の陽性クローンが得られた（１Ｍ ＮａＣｌ、５０
０ｍＭ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ7.5 ）、１％ＳＤＳ、
２００μｇ／ｍｌ酵母ＲＮＡ中で５５℃、１６時間ハイ
ブリダイゼーションを行ない、２×ＳＳＣ、0.1 ％ＳＤ
Ｓ、５５℃、３０分で４回洗浄した後、オートラジオグ
ラフィーを行った。）。
ゼ（ＰＮＫ１０３（商品名）、東洋紡績（株）製）を用
いたエンドラベル法でラベルし、ライブラリーより得ら
れた50,000 プラークをスクリーニングしたところ、３
０個の陽性クローンが得られた（１Ｍ ＮａＣｌ、５０
０ｍＭ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ7.5 ）、１％ＳＤＳ、
２００μｇ／ｍｌ酵母ＲＮＡ中で５５℃、１６時間ハイ
ブリダイゼーションを行ない、２×ＳＳＣ、0.1 ％ＳＤ
Ｓ、５５℃、３０分で４回洗浄した後、オートラジオグ
ラフィーを行った。）。
【００４７】制限酵素ＲｓａＩで切断し、サザンブロッ
ティング分析をしたところ、そのうちの２１個に明確な
陽性バンドが認められた。これらのバンドのうち、濃度
の濃い（すなわち、ハイブリダイズの程度が高いと予想
される）クローン８個を選択し、pBluescript ＳＫ
（＋）（Stratagene社製）のＥｃｏＲＩサイトにリンカ
ーをつけてサブクローンした後、シークエンスしたとこ
ろ、明確なＣＡＧリピート構造を含むｃＤＮＡクローン
（ＣＡＧ−２７、図１参照のこと）が得られた。ＣＡＧ
−２７は全体で1807ｂｐを含み、その中に３５９アミノ
酸からなるオープンリーディングフレームが認められ
た。ホモロジー検索の結果、Genbank. HUMSW×784. hum
an×chromosome STSとのホモロジーを認めた。
ティング分析をしたところ、そのうちの２１個に明確な
陽性バンドが認められた。これらのバンドのうち、濃度
の濃い（すなわち、ハイブリダイズの程度が高いと予想
される）クローン８個を選択し、pBluescript ＳＫ
（＋）（Stratagene社製）のＥｃｏＲＩサイトにリンカ
ーをつけてサブクローンした後、シークエンスしたとこ
ろ、明確なＣＡＧリピート構造を含むｃＤＮＡクローン
（ＣＡＧ−２７、図１参照のこと）が得られた。ＣＡＧ
−２７は全体で1807ｂｐを含み、その中に３５９アミノ
酸からなるオープンリーディングフレームが認められ
た。ホモロジー検索の結果、Genbank. HUMSW×784. hum
an×chromosome STSとのホモロジーを認めた。
【００４８】実施例２
ＳＤ系雄性ラット（１４週令）の脳、脊髄、心臓、肺、
胃、肝臓、小腸、大腸、膵臓、脾臓、腎臓、筋肉、精巣
からＲＮＡを抽出しそれぞれポリＡ ＲＮＡを精製し
た。おのおの１０μｇのポリＡ ＲＮＡを、常法に従
い、アガロース電気泳動で分離したのち、ナイロンメン
ブラン（Hybond Plus （商品名）、Amersham社製）に転
写し、ＣＡＧ−２７のＢａｍＨＩ／ＢｇｌＩＩ断片をプ
ローブとしてノザンブロッティング分析を行った。その
結果、膵臓および精巣を除く全ての臓器に２８Ｓより高
分子側に陽性バンドが認められた（精巣では１８Ｓ付近
のバンド）。
胃、肝臓、小腸、大腸、膵臓、脾臓、腎臓、筋肉、精巣
からＲＮＡを抽出しそれぞれポリＡ ＲＮＡを精製し
た。おのおの１０μｇのポリＡ ＲＮＡを、常法に従
い、アガロース電気泳動で分離したのち、ナイロンメン
ブラン（Hybond Plus （商品名）、Amersham社製）に転
写し、ＣＡＧ−２７のＢａｍＨＩ／ＢｇｌＩＩ断片をプ
ローブとしてノザンブロッティング分析を行った。その
結果、膵臓および精巣を除く全ての臓器に２８Ｓより高
分子側に陽性バンドが認められた（精巣では１８Ｓ付近
のバンド）。
【００４９】ＣＡＧリピートのサイズをＰＣＲにより検
出するため、この部分を囲む形の２組のプライマー（下
記プライマー（２）（配列番号１５）と（３）（配列番
号１６）を組み合わせたものと、同（４）（配列番号１
７）と（５）（配列番号１８）を組み合わせたもの）を
作製した。
出するため、この部分を囲む形の２組のプライマー（下
記プライマー（２）（配列番号１５）と（３）（配列番
号１６）を組み合わせたものと、同（４）（配列番号１
７）と（５）（配列番号１８）を組み合わせたもの）を
作製した。
【００５０】
877−TCTTACTTCAGAAGAGCTTCGGAAG −901 （２）
1047−GCTGGCCTTTCACATGGATGTGAAC −1023 （３）
904−ACGAGAAGCCTACTTTGA−921 （４）
1025−AACTCTGTCCTGATAGGT−1008 （５）
【００５１】この２組のプライマーの組合せは、健常人
白血球より得られたＤＮＡを用いて、種々の条件下に検
討した結果、ＰＣＲによる増幅が不可能であり、ＣＡＧ
リピート構造内またはその前後にイントロンの存在する
可能性が示唆された。
白血球より得られたＤＮＡを用いて、種々の条件下に検
討した結果、ＰＣＲによる増幅が不可能であり、ＣＡＧ
リピート構造内またはその前後にイントロンの存在する
可能性が示唆された。
【００５２】一方、連鎖解析により、例えば、ＭＪＤ遺
伝子はヒト染色体１４ｑ24.3−32.1にマップされている
ことが判明している（ツジ（ Tsuji）ら，Nature Genet
ics,4, 300 (1993)参照のこと）。そこで、得られたク
ローン、ＣＡＧ−２７がＭＪＤに関係するか否かを確認
するため、フィッシュ（Fish）法によるクロモゾームマ
ッピングを試みたが、非特異性像が多く、明確な結果が
得られなかった。
伝子はヒト染色体１４ｑ24.3−32.1にマップされている
ことが判明している（ツジ（ Tsuji）ら，Nature Genet
ics,4, 300 (1993)参照のこと）。そこで、得られたク
ローン、ＣＡＧ−２７がＭＪＤに関係するか否かを確認
するため、フィッシュ（Fish）法によるクロモゾームマ
ッピングを試みたが、非特異性像が多く、明確な結果が
得られなかった。
【００５３】以上の結果より、次のステップとしてこの
クローンの遺伝子クローニングを行った。ＣＡＧ−２７
のＢａｍＨＩ／ＢｇｌＩＩ断片をプローブに用い、ヒト
ジェノミックライブラリー（ＨＬ １０６７ｊおよびＨ
Ｌ １１１１ｊ，いずれもClontech社製））より 500,0
00クローンをスクリーニングし（スクリーニングは、温
度が６５℃であることを除いて、実施例１のハイブリダ
イゼーションの条件と同様にして行った。）、１２個の
陽性クローンを得た。これらのクローンのそれぞれをＸ
ｈｏＩ／ＰｓｔＩで切断しサザンブロッティング分析を
行い、最強シグナルを与える２クローン（それぞれ、Ｃ
ＡＧ−２７−６およびＣＡＧ−２７−１１と命名し
た。）をフィッシュ法によるクロモゾームマッピングに
供した。
クローンの遺伝子クローニングを行った。ＣＡＧ−２７
のＢａｍＨＩ／ＢｇｌＩＩ断片をプローブに用い、ヒト
ジェノミックライブラリー（ＨＬ １０６７ｊおよびＨ
Ｌ １１１１ｊ，いずれもClontech社製））より 500,0
00クローンをスクリーニングし（スクリーニングは、温
度が６５℃であることを除いて、実施例１のハイブリダ
イゼーションの条件と同様にして行った。）、１２個の
陽性クローンを得た。これらのクローンのそれぞれをＸ
ｈｏＩ／ＰｓｔＩで切断しサザンブロッティング分析を
行い、最強シグナルを与える２クローン（それぞれ、Ｃ
ＡＧ−２７−６およびＣＡＧ−２７−１１と命名し
た。）をフィッシュ法によるクロモゾームマッピングに
供した。
【００５４】その結果、ＣＡＧ−２７−６およびＣＡＧ
−２７−１１はともに１４ｑ24.3−32.1にマップされて
いることが判明した。ふたつのクローンをＰｓｔＩで切
断し、pBluescript ＳＫ（＋）にサブクローニングし、
ハイブリダイゼーションの陽性だったクローンをシーク
エンスしたところ、いずれもＣＡＧ−２７の２８７から
３７２ｂｐに相当する部分を含んでいた。一方、さらに
790,000個のヒト脳ｃＤＮＡライブラリーを、ＣＡＧ−
２７のＢａｍＨＩ−Ｂｇｌ II をプローブとして検索し
たところ、ＣＡＧ−２７以外に異なる２種類のｃＤＮＡ
（ｃＤＮＡ−３およびｃＤＮＡ−６）が得られた。
−２７−１１はともに１４ｑ24.3−32.1にマップされて
いることが判明した。ふたつのクローンをＰｓｔＩで切
断し、pBluescript ＳＫ（＋）にサブクローニングし、
ハイブリダイゼーションの陽性だったクローンをシーク
エンスしたところ、いずれもＣＡＧ−２７の２８７から
３７２ｂｐに相当する部分を含んでいた。一方、さらに
790,000個のヒト脳ｃＤＮＡライブラリーを、ＣＡＧ−
２７のＢａｍＨＩ−Ｂｇｌ II をプローブとして検索し
たところ、ＣＡＧ−２７以外に異なる２種類のｃＤＮＡ
（ｃＤＮＡ−３およびｃＤＮＡ−６）が得られた。
【００５５】シークエンスの結果、ｃＤＮＡ−６はＣＡ
Ｇ−２７の塩基、１〜２８７および３７３〜９２４の部
分と一致し、ｃＤＮＡ−３はＣＡＧ−２７の塩基、１〜
２８７の部分と一致した。従って、この三者はそれぞれ
同一遺伝子からのスプライシングスにより生み出され
る、３つのｍＲＮＡアイソフォームと考えられた。特
に、塩基９２４位のスプライシングはＣＡＧリピートの
直前であり、ＰＣＲにはイントロンの３′−側を用いな
ければならないことが明確に示された。図２にクロー
ン、ＣＡＧ−２７、ＣＡＧ−２７−６、ＣＡＧ−２７−
１１、ｃＤＮＡ−３およびｃＤＮＡ−６の構造を示す。
Ｇ−２７の塩基、１〜２８７および３７３〜９２４の部
分と一致し、ｃＤＮＡ−３はＣＡＧ−２７の塩基、１〜
２８７の部分と一致した。従って、この三者はそれぞれ
同一遺伝子からのスプライシングスにより生み出され
る、３つのｍＲＮＡアイソフォームと考えられた。特
に、塩基９２４位のスプライシングはＣＡＧリピートの
直前であり、ＰＣＲにはイントロンの３′−側を用いな
ければならないことが明確に示された。図２にクロー
ン、ＣＡＧ−２７、ＣＡＧ−２７−６、ＣＡＧ−２７−
１１、ｃＤＮＡ−３およびｃＤＮＡ−６の構造を示す。
【００５６】ＣＡＧ−２７のＤｒａＩＩ／ＳａｃＩ断片
（ＣＡＧリピートの最終部分からコードされている蛋白
質のカルボキシル末端に相当）をプローブとしてヒトジ
ェノミックライブラリーをスクリーニングし、 800,000
個から４個の陽性クローンを得た（それぞれをＣＡＧ−
２７−２１、ＣＡＧ−２７−２２、ＣＡＧ−２７−２
３、ＣＡＧ−２７−２４と命名した。スクリーニング
は、温度が６５℃であることを除いて、実施例１のハイ
ブリダイゼーションの条件と同様にして行った。）。こ
のうち、ＣＡＧ−２７−２３をシークエンスすることに
より、ＣＡＧ−２７の９２４位の塩基（ＣＡＧリピート
の直前の塩基）のイントロン構造が判明した（配列番号
９参照）。ここでヒトジェノミッククローン中に得られ
たＣＡＧリピートは２７回であり、ｃＤＮＡ（ＣＡＧ−
２７）の２６回とは異なっていることがわかった。
（ＣＡＧリピートの最終部分からコードされている蛋白
質のカルボキシル末端に相当）をプローブとしてヒトジ
ェノミックライブラリーをスクリーニングし、 800,000
個から４個の陽性クローンを得た（それぞれをＣＡＧ−
２７−２１、ＣＡＧ−２７−２２、ＣＡＧ−２７−２
３、ＣＡＧ−２７−２４と命名した。スクリーニング
は、温度が６５℃であることを除いて、実施例１のハイ
ブリダイゼーションの条件と同様にして行った。）。こ
のうち、ＣＡＧ−２７−２３をシークエンスすることに
より、ＣＡＧ−２７の９２４位の塩基（ＣＡＧリピート
の直前の塩基）のイントロン構造が判明した（配列番号
９参照）。ここでヒトジェノミッククローン中に得られ
たＣＡＧリピートは２７回であり、ｃＤＮＡ（ＣＡＧ−
２７）の２６回とは異なっていることがわかった。
【００５７】ここで新たなＰＣＲプライマー（６）（配
列番号１１）、（７）（配列番号１２）および（８）
（配列番号１３）を作製した。
列番号１１）、（７）（配列番号１２）および（８）
（配列番号１３）を作製した。
【００５８】５′−CCAGTGACTACTTTGATTCG−３′
（６）（ＣＡＧリピートの５′側、イントロン部分に存
在）
（６）（ＣＡＧリピートの５′側、イントロン部分に存
在）
【００５９】
５′−TGGCCTTTCACATGGATGTGAA−３′ （７）（ＣＡＧリピートの３′側）
【００６０】
５′−CTTACCTAGATCACTCCCAA−３′ （８）（ＣＡＧリピートの３′側）
【００６１】プライマー（６）とプライマー（７）を組
み合わせた場合にも、ＰＣＲされる検体とされない検体
がでたが、プライマー（６）とプライマー（８）を組み
合わせた場合には全例成功した。サンプルＤＮＡ（遺伝
子）２００ｎｇ、プライマー（６）およびプライマー
（８）をそれぞれ２００ｎｇ、５０ｍＭ ＫＣｌ、１０
ｍＭ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ8.8 ）、1.5 ｍＭ Ｍｇ
Ｃｌ２、0.1 ％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）×１００、１
０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ、５ユニットＴａｑポリメラー
ゼ（和光純薬（株）製）を、総量２０μｌの系でＰＣＲ
を行った（ＰＣＲは９５℃、５分間→（９５℃、１分間
→５７℃、１分間→７２℃、１分間）×２５サイクル→
７２℃、１０分間の条件で行った。）。反応後、常法に
従い、アガロース電気泳動をしたところ、正常人では１
３回から３６回のＣＡＧリピートに相当するバンドが検
出されたのに対し、ＭＪＤの患者（１１例）において
は、いずれも７０回前後（６８回から７９回）のＣＡＧ
リピートが認められた。従って、この条件はＭＪＤの遺
伝子診断に十分使用できることがわかった。
み合わせた場合にも、ＰＣＲされる検体とされない検体
がでたが、プライマー（６）とプライマー（８）を組み
合わせた場合には全例成功した。サンプルＤＮＡ（遺伝
子）２００ｎｇ、プライマー（６）およびプライマー
（８）をそれぞれ２００ｎｇ、５０ｍＭ ＫＣｌ、１０
ｍＭ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ8.8 ）、1.5 ｍＭ Ｍｇ
Ｃｌ２、0.1 ％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）×１００、１
０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ、５ユニットＴａｑポリメラー
ゼ（和光純薬（株）製）を、総量２０μｌの系でＰＣＲ
を行った（ＰＣＲは９５℃、５分間→（９５℃、１分間
→５７℃、１分間→７２℃、１分間）×２５サイクル→
７２℃、１０分間の条件で行った。）。反応後、常法に
従い、アガロース電気泳動をしたところ、正常人では１
３回から３６回のＣＡＧリピートに相当するバンドが検
出されたのに対し、ＭＪＤの患者（１１例）において
は、いずれも７０回前後（６８回から７９回）のＣＡＧ
リピートが認められた。従って、この条件はＭＪＤの遺
伝子診断に十分使用できることがわかった。
【００６２】
【配列表】
配列番号：１
配列の長さ：２９１
配列の型：アミノ酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：蛋白質
配列
Met Glu Ser Ile Phe His Glu Lys Gln Glu Gly Ser Leu Cys Ala Gln
1 5 10 15
His Cys Leu Asn Asn Leu Leu Gln Gly Glu Tyr Phe Ser Pro Val Glu
20 25 30
Leu Ser Ser Ile Ala His Gln Leu Asp Glu Glu Glu Arg Met Arg Met
35 40 45
Ala Glu Gly Gly Val Thr Ser Glu Asp Tyr Arg Thr Phe Leu Gln Gln
50 55 60
Pro Ser Gly Asn Met Asp Asp Ser Gly Phe Phe Ser Ile Gln Val Ile
65 70 75 80
Ser Asn Ala Leu Lys Val Trp Gly Leu Glu Leu Ile Leu Phe Asn Ser
85 90 95
Pro Glu Tyr Gln Arg Leu Arg Ile Asp Pro Ile Asn Glu Arg Ser Phe
100 105 110
Ile Cys Asn Tyr Lys Glu His Trp Phe Thr Val Arg Lys Leu Gly Lys
115 120 125
Gln Trp Phe Asn Leu Asn Ser Leu Leu Thr Gly Pro Glu Leu Ile Ser
130 135 140
Asp Thr Tyr Leu Ala Leu Phe Leu Ala Gln Leu Gln Gln Glu Gly Tyr
145 150 155 160
Ser Ile Phe Val Val Lys Gly Asp Leu Pro Asp Cys Glu Ala Asp Gln
165 170 175
Leu Leu Gln Met Ile Arg Val Gln Gln Met His Arg Pro Lys Leu Ile
180 185 190
Gly Glu Glu Leu Ala Gln Leu Lys Glu Gln Arg Val His Lys Thr Asp
195 200 205
Leu Glu Arg Met Leu Glu Ala Asn Asp Gly Ser Gly Met Leu Asp Glu
210 215 220
Asp Glu Glu Asp Leu Gln Arg Ala Leu Ala Leu Ser Arg Gln Glu Ile
225 230 235 240
Asp Met Glu Asp Glu Glu Ala Asp Leu Arg Arg Ala Ile Gln Leu Ser
245 250 255
Met Gln Gly Ser Ser Arg Asn Ile Ser Gln Asp Met Thr Gln Thr Ser
260 265 270
Gly Thr Asn Leu Thr Ser Glu Glu Leu Arg Lys Arg Arg Glu Ala Tyr
275 280 285
Phe Glu Lys
290
【００６３】配列番号：２
配列の長さ：４３
配列の型：アミノ酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：蛋白質
配列
Arg Asp Leu Ser Gly Gln Ser Ser His Pro Cys Glu Arg Pro Ala Thr
1 5 10 15
Ser Ser Gly Ala Leu Gly Ser Asp Leu Gly Lys Ala Cys Ser Pro Phe
20 25 30
Ile Met Phe Ala Thr Phe Thr Leu Tyr Leu Thr
35 40
【００６４】配列番号：３
配列の長さ：８７３
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：Genomic DNA
配列
ATGGAGTCCA TCTTCCACGA GAAACAAGAA GGCTCACTTT GTGCTCAACA TTGCCTGAAT 60
AACTTATTGC AAGGAGAATA TTTTAGCCCT GTGGAATTAT CCTCAATTGC ACATCAGCTG 120
GATGAGGAGG AGAGGATGAG AATGGCAGAA GGAGGAGTTA CTAGTGAAGA TTATCGCACG 180
TTTTTACAGC AGCCTTCTGG AAATATGGAT GACAGTGGTT TTTTCTCTAT TCAGGTTATA 240
AGCAATGCCT TGAAAGTTTG GGGTTTAGAA CTAATCCTGT TCAACAGTCC AGAGTATCAG 300
AGGCTCAGGA TCGATCCTAT AAATGAAAGA TCATTTATAT GCAATTATAA GGAACACTGG 360
TTTACAGTTA GAAAATTAGG AAAACAGTGG TTTAACTTGA ATTCTCTCTT GACGGGTCCA 420
GAATTAATAT CAGATACATA TCTTGCACTT TTCTTGGCTC AATTACAACA GGAAGGTTAT 480
TCTATATTTG TTGTTAAGGG TGATCTGCCA GATTGCGAAG CTGACCAACT CCTGCAGATG 540
ATTAGGGTCC AACAGATGCA TCGACCAAAA CTTATTGGAG AAGAATTAGC ACAACTAAAA 600
GAGCAAAGAG TCCATAAAAC AGACCTGGAA CGAATGTTAG AAGCAAATGA TGGCTCAGGA 660
ATGTTAGACG AAGATGAGGA GGATTTGCAG AGGGCTCTGG CACTAAGTCG CCAAGAAATT 720
GACATGGAAG ATGAGGAAGC AGATCTCCGC AGGGCTATTC AGCTAAGTAT GCAAGGTAGT 780
TCCAGAAACA TATCTCAAGA TATGACACAG ACATCAGGTA CAAATCTTAC TTCAGAAGAG 840
CTTCGGAAGA GACGAGAAGC CTACTTTGAA AAA 873
【００６５】配列番号：４
配列の長さ：１２９
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：Genomic DNA
配列
CGGGACCTAT CAGGACAGAG TTCACATCCA TGTGAAAGGC CAGCCACCAG TTCAGGAGCA 60
CTTGGGAGTG ATCTAGGTAA GGCCTGCTCA CCATTCATCA TGTTCGCTAC CTTCACACTT 120
TATCTGACA 129
【００６６】配列番号：５
配列の長さ：９２５
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：Genomic DNA
配列
GAATTCCGTT GCTGTCGTCG GCGTGGGGGC CGTTGGCTCC AGACAAATAA ACATGGAGTC 60
CATCTTCCAC GAGAAACAAG AAGGCTCACT TTGTGCTCAA CATTGCCTGA ATAACTTATT 120
GCAAGGAGAA TATTTTAGCC CTGTGGAATT ATCCTCAATT GCACATCAGC TGGATGAGGA 180
GGAGAGGATG AGAATGGCAG AAGGAGGAGT TACTAGTGAA GATTATCGCA CGTTTTTACA 240
GCAGCCTTCT GGAAATATGG ATGACAGTGG TTTTTTCTCT ATTCAGGTTA TAAGCAATGC 300
CTTGAAAGTT TGGGGTTTAG AACTAATCCT GTTCAACAGT CCAGAGTATC AGAGGCTCAG 360
GATCGATCCT ATAAATGAAA GATCATTTAT ATGCAATTAT AAGGAACACT GGTTTACAGT 420
TAGAAAATTA GGAAAACAGT GGTTTAACTT GAATTCTCTC TTGACGGGTC CAGAATTAAT 480
ATCAGATACA TATCTTGCAC TTTTCTTGGC TCAATTACAA CAGGAAGGTT ATTCTATATT 540
TGTTGTTAAG GGTGATCTGC CAGATTGCGA AGCTGACCAA CTCCTGCAGA TGATTAGGGT 600
CCAACAGATG CATCGACCAA AACTTATTGG AGAAGAATTA GCACAACTAA AAGAGCAAAG 660
AGTCCATAAA ACAGACCTGG AACGAATGTT AGAAGCAAAT GATGGCTCAG GAATGTTAGA 720
CGAAGATGAG GAGGATTTGC AGAGGGCTCT GGCACTAAGT CGCCAAGAAA TTGACATGGA 780
AGATGAGGAA GCAGATCTCC GCAGGGCTAT TCAGCTAAGT ATGCAAGGTA GTTCCAGAAA 840
CATATCTCAA GATATGACAC AGACATCAGG TACAAATCTT ACTTCAGAAG AGCTTCGGAA 900
GAGACGAGAA GCCTACTTTG AAAAA 925
【００６７】配列番号：６
配列の長さ：８０７
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：Genomic DNA
配列
CGGGACCTAT CAGGACAGAG TTCACATCCA TGTGAAAGGC CAGCCACCAG TTCAGGAGCA 60
CTTGGGAGTG ATCTAGGTAA GGCCTGCTCA CCATTCATCA TGTTCGCTAC CTTCACACTT 120
TATCTGACAT AAGAGCTCCA TGTGATTTTT GCTTTACATT ATTCTTCATT CCCTCTTTAA 180
TCATATTAAG ACTCTTAAGT AAATTTGTAA TCTACTAAAT TTCCCTGGAT TAAGGAGCAA 240
GGTTACCAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAG CTAGATGTGG TGGCTCACAT CTGTAATCCC 300
AGCACTTTGG GAAACCAAGG CAGGAGAGGA TTGCTAGAAC ATTTAATGAA TACTTTAACA 360
TAATAATTTA AACTTCACAG TAATTTGTAC AGTCTCCAGA AATTCCTTAG ACATCATGAA 420
TATTTTTCTT TTTTTGGGGT GACAGGGCAA AACTCTGTCT CAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 480
AAAGGGCTGG ACACGGTGGC TTACGCCTGT TATCCCGGCA CTTTGGGAGG CCAAGGCCGA 540
TGGATCACCT GAGGTCAGGA GTTCAAGACC AGCCTGGCCA ACATGGTGAA ACCCCATCTC 600
TACTAAAAAT ACAAAAATTT GCTGGGCATG GTGGTGGGCA CCTGTAATCC CAGGAGGCTG 660
AGGCAGGAGA ATCACTTGAA CCTGGGAGCG GAGATTGCAG TGAGCCAAGA TTGTGCCATT 720
GAACTCCAGC CTGGGTGACA AGACCAAAAC TCCATCTCAA AAAAAAAAAA AAAAAAAGCG 780
ACAGCAACGG CGACAGCAAC GGAATTC 807
【００６８】配列番号：７
配列の長さ：１２９
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：Genomic DNA
配列
CTTTTAATAC CAGTGACTAC TTTGATTCGT GAAACAATGT ATTTTCCTTA TGAATAGTTT 60
TTCTCCATGG TGTATTTATT CTTTTAAGTT TTGTTTTTTA AATATACTTC ACCTTTTGAA 120
TGTTTCAGA 129
【００６９】配列番号：８
配列の長さ：７６
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：Genomic DNA
配列
CGGGACCTAT CAGGACAGAG TTCACATCCA TGTGAAAGGC CAGCCACCAG TTCAGGAGCA 60
CTTGGGAGTG ATCTAG 76
【００７０】配列番号：９
配列の長さ：１２８
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列
CTTTTAATAC CAGTGACTAC TTTGATTCGT GAAACAATGT ATTTTCCTTA TGAATAGTTT 60
TTCTCCATGG TGTATTTATT CTTTTAAGTT TTGTTTTTTA AATATACTTC ACCTTTTGAA 120
TGTTTCAG 128
【００７１】配列番号：１０
配列の長さ：１２９
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：Genomic DNA
配列
CGGGACCTAT CAGGACAGAG TTCACATCCA TGTGAAAGGC CAGCCACCAG TTCAGGAGCA 60
CTTGGGAGTG ATCTAGGTAA GGCCTGCTCA CCATTCATCA TGTTCGCTAC CTTCACACTT 120
TATCTGACA 129
【００７２】配列番号：１１
配列の長さ：２０
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列
CCAGTGACTA CTTTGATTCG
【００７３】配列番号：１２
配列の長さ：２２
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列
TGGCCTTTCA CATGGATGTG AA
【００７４】配列番号：１３
配列の長さ：２０
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列
CTTACCTAGA TCACTCCCAA
【００７５】配列番号：１４
配列の長さ：４４
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列
GATCTCTGCT GCTGCTGCTG CTGCTGCTG CTGCTGCTG CTGG
【００７６】配列番号：１５
配列の長さ：２５
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列
TCTTACTTCA GAAGAGCTTC GGAAG
【００７７】配列番号：１６
配列の長さ：２５
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列
GCTGGCCTTT CACATGGATG TGAAC
【００７８】配列番号：１７
配列の長さ：１８
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列
ACGAGAAGCC TACTTTGA
【００７９】配列番号：１８
配列の長さ：１８
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列
AACTCTGTCC TGATAGGT
【図１】 ＣＡＧ２７のシークエンス解析図を表わす。
【図２】 クローン、ＣＡＧ−２７、ＣＡＧ−２７−
６、ＣＡＧ−２７−１１、ｃＤＮＡ−３およびｃＤＮＡ
−６の構造を比較したものである。
６、ＣＡＧ−２７−１１、ｃＤＮＡ−３およびｃＤＮＡ
−６の構造を比較したものである。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C12N 15/00 - 15/09
C07K 14/47
ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＰＩＲ／ＧｅｎｅＳ
ｅｑ
ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／Ｇ
ｅｎｅＳｅｑ
(54)【発明の名称】 ヒトマッカード−ジョセフ病関連蛋白質、その蛋白質をコードするｃＤＮＡおよび遺伝子、その
ＤＮＡまたは遺伝子を含むベクター、その発現ベクターで形質転換された宿主細胞、マッカード
−ジョセフ病の診断方法および治療剤
Claims (17)
- 【請求項１】 配列番号１で示されるアミノ酸配列のＣ
末端のＬｙｓが（Ｇｌｎ）ｎ（式中、ｎは１３〜３６の
整数を表わし、（Ｇｌｎ）ｎはその配列の途中に少なく
とも一つのＬｙｓを含んでいてもよい。）を介して配列
番号２で示されるアミノ酸配列のＮ末端のＡｒｇと結合
したアミノ酸配列であるポリペプチド。 - 【請求項２】 配列番号１で示されるアミノ酸配列のＣ
末端のＬｙｓが（Ｇｌｎ）ｎ（式中、ｎは１３〜３６の
整数を表わし、（Ｇｌｎ）ｎはその配列の途中に少なく
とも一つのＬｙｓを含んでいてもよい。）を介して配列
番号２で示されるアミノ酸配列のＮ末端のＡｒｇと結合
したアミノ酸配列であるポリペプチドをコードするｃＤ
ＮＡ。 - 【請求項３】 配列番号３で示される塩基配列の３’末
端が（ＣＸＸ）ｍ（式中、ＣＸＸは、塩基配列「ＣＡ
Ｇ」、「ＣＡＡ」または「ＡＡＧ」を表わし、ｍは１３
〜３６の整数を表わす。ただし、「ＣＡＡ」および「Ａ
ＡＧ」の数は各々０から５個である。）を介して配列番
号４で示される塩基配列の５’末端と結合した塩基配列
を有するｃＤＮＡ。 - 【請求項４】 配列番号５で示される塩基配列の３’末
端が（ＣＸＸ）ｍ（式中、ＣＸＸおよびｍは請求項３の
記載と同じ意味を表わす。）を介して配列番号６で示さ
れる塩基配列の５’末端と結合した塩基配列を有するｃ
ＤＮＡ。 - 【請求項５】 配列番号７で示される塩基配列の３’末
端が（ＣＸＸ）ｍ（式中、ＣＸＸおよびｍは請求項３の
記載と同じ意味を表わす。）を介して配列番号８で示さ
れる塩基配列の５’末端と結合した塩基配列を有する遺
伝子。 - 【請求項６】 請求項２乃至５のいずれかの項に記載の
ｃＤＮＡまたは遺伝子を含む複製または発現ベクター。 - 【請求項７】 請求項６に記載された複製または発現ベ
クターで形質転換された宿主細胞。 - 【請求項８】 配列番号１１および配列番号１３で示さ
れる塩基配列の組み合わせであるプライマーセット。 - 【請求項９】 請求項８記載のプライマーセットをＰＣ
Ｒのプライマーとして用いることを特徴とするマッカー
ドジョセフ病特有蛋白中のグルタミンの繰り返し回数を
測定する方法。 - 【請求項１０】 配列番号１で示されるアミノ酸配列の
Ｃ末端のＬｙｓが（Ｇｌｎ）ｎ（式中、ｎは６８〜７９
の整数を表わし、（Ｇｌｎ）ｎはその配列の途中に少な
くとも一つのＬｙｓを含んでいてもよい。）を介して配
列番号２で示されるアミノ酸配列のＮ末端のＡｒｇと結
合したアミノ酸配列であるポリペプチド。 - 【請求項１１】 配列番号１で示されるアミノ酸配列の
Ｃ末端のＬｙｓが（Ｇｌｎ）ｎ（式中、ｎは６８〜７９
の整数を表わし、（Ｇｌｎ）ｎはその配列の途中に少な
くとも一つのＬｙｓを含んでいてもよい。）を介して配
列番号２で示されるアミノ酸配列のＮ末端のＡｒｇと結
合したアミノ酸配列であるポリペプチドをコードするｃ
ＤＮＡ。 - 【請求項１２】 配列番号３で示される塩基配列の３’
末端が（ＣＸＸ）ｍ（式中、ＣＸＸは、塩基配列「ＣＡ
Ｇ」、「ＣＡＡ」または「ＡＡＧ」を表わし、ｍは６８
〜７９の整数を表わす。ただし、「ＣＡＡ」および「Ａ
ＡＧ」の数は各々０から５個である。）を介して配列番
号４で示される塩基配列の５’末端と結合した塩基配列
を有するｃＤＮＡ。 - 【請求項１３】 配列番号５で示される塩基配列の３’
末端が（ＣＸＸ）ｍ（式中、ＣＸＸおよびｍは請求項１
２の記載と同じ意味を表わす。）を介して配列番号６で
示される塩基配列の５’末端と結合した塩基配列を有す
るｃＤＮＡ。 - 【請求項１４】 配列番号７で示される塩基配列の３’
末端が（ＣＸＸ）ｍ（式中、ＣＸＸおよびｍは請求項１
２の記載と同じ意味を表わす。）を介して配列番号８で
示される塩基配列の５’末端と結合した塩基配列を有す
る遺伝子。 - 【請求項１５】 マッカード−ジョセフ病関連蛋白のＮ
末端部の２９１個のアミノ酸である配列番号１で示され
る配列であるアミノ酸配列。 - 【請求項１６】 請求項１５で示されるアミノ酸配列を
コードするｃＤＮＡ。 - 【請求項１７】 請求項１６で示されるｃＤＮＡが、配
列番号３で示される配列であるｃＤＮＡ。
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|---|---|---|---|
| JP25160094A JP3517988B2 (ja) | 1994-09-21 | 1994-09-21 | ヒトマッカード−ジョセフ病関連蛋白質、その蛋白質をコードするｃＤＮＡおよび遺伝子、そのＤＮＡまたは遺伝子を含むベクター、その発現ベクターで形質転換された宿主細胞、マッカード−ジョセフ病の診断方法および治療剤 |
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