JPH0448243A - 培地付きフィルターとその使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野ｊ この発明は、フィルター上で検体を濾過処理し、検体と
共にフィルターをプレパラート内に封入して、顕微鏡に
よる診断に供する培地付きの多孔質シートからなるフィ
ルターと、その使用方法に関するものである。

［従来の技術］ 従来、顕微鏡によりプレパラート上の検体を細胞診断す
る際には、擦過、穿刺などの手法によって採取した細胞
などを集積させ、必要に応じては、これに培養剤を供与
し、酸素と水分量を適切に維持し、老廃物を除去しつつ
細胞の分裂・増殖を図って培養処理を施した後、所望分
量の検体をスライドガラス上に封止してプレパラートを
作成するものであった。

この細胞培養の手法として、代表的なものとしては、次
の方法が挙げられる。

■　インビトロ法（Ｉｎ・ＶＩＴＲＯ＝試験管内）外科
的に切除した組織片をカミソリなどにより１１１１１角
片に細切し、更に壊死組織や脂肪などを除去して細胞を
採取し、例えば試験管などの培養液中にこの細胞を投入
し、約３７℃程度の恒温槽内で培養する。

■　コロニー法 所望の栄養分を配合してなる寒天培地をシャーレ内に設
け、その上に１１１Ｉ１１角程度に細切した細胞を載置
し、培養器内で培養するもので、その期間は、臨床的に
は１〜２週間程度が適切である。

尚、この際利用される培地についてみれば、たとえば、
寒天やステロドホルモンインシュリンその他の栄養分に
適量のビタミン剤を付加し、更には、増殖状態を制御す
るグルココルチコイドなどを添加するなどしてなるもの
であって、ヴイールスなどの不純物が混入されて細胞が
これに感染しないようにした無菌状の培地を用意するこ
とが肝要であることは言うまでもないことであり、また
細胞が損傷されないように配慮しつつ高密度で均−状に
培養処理するものである。

こうして得られた細胞を、たとえば遠心法によって集積
させ、もしくは５±１．２μｍ程度の細孔を具備する薄
膜上で濾過処理し、所望の検体のみを分離・捕捉し、適
宜スライドガラス上に封入剤を利用して封止し、プレパ
ラート状に作成するものであった。

［発明が解決しようとする問題点］ 前記した従来技術のものにあってもプレパラートを作成
することに格別の支障はないものであった。

しかしながら、その処理過程において更に改善を図らな
ければならない点が残されていた。

即ち、検体とされる細胞がプレパラート化処理中に損傷
しないように配慮されることであり、これが事後の確度
の高い鏡検レポートに直結するものである。

この点、前記の従来技術■および■の方法にあっては、
いずれも培養手段で増殖された細胞を移設具によってス
ライドガラス上に塗抹させ洗滌、染色などの一連の処理
を施した後、カバガラスで封入してプレパラートを作成
するものであるため、容器から抽出しスライドガラス上
に移設する際には、たとえば体腔液、髄液。

あるいは尿などの損傷されやすい細胞などにあっては、
特にこれが傷つけられる危険性が高いものであった。

また特に、コロニー法の場合にあっては、細胞を精密検
詑に供するためスライドガラス上に塗抹する際に、付帯
する培地の存在によってスライドガラス上に付着し難く
、塗抹処理を強制するとその加圧力によって細胞核や細
胞質が損傷され、また細胞形態自体も変形され、結果的
にこれが誤診断の重大な要因となる危惧があった。

加えで、この処理の際には、細胞がヴイールスなどに感
染のおそれもあり、更には細胞の種類によっては処置要
員への感染の危惧すらあるものであり、培地から細胞を
移設することなく無菌状で、清潔かつ安全にプレパラー
ト；動作成しつるものの提供が望まれていた。

〔問題点を解決する手段１作用ｊ この発明は、このような要請に応えつるものであって、
その特徴点は、ボアフィルターの表面に酵素などによっ
て可溶性を有する培地を付設したことにあるもので構成
上の特徴点は、その特許請求の範囲に記載するところで
あって、使用にあたっては、フィルター上で細胞を培養
し格別移設することなく、そのままで培地を溶解流出さ
せてこれを濾過処理してプレパラートを作成しつるよう
にしたものであるから、細胞が損傷もしくは細菌などに
よって汚染されることを＠避できて有用であり、又処理
要員にとっても感染などの危険性が少ないという安全性
の高いものが得られるところであり、精度の高い顕微鏡
観察が可能となり、薬剤への感受性の判定、更には、患
者への適切な薬剤の投与に至る誤診のない鏡検が可能と
なるものである。

［実施例〕 以下に、この発明の内容について、その実施例を示す図
面に基づいて説明する。

第４図にスライドガラスＳ上に添設したこの発明のフィ
ルター１の全体外観図を示しており、フィルター上のフ
ィルターシートｌｌ上には濾過処理された細胞Ｗが検体
として残留されており、洗滌、染色などの処理を施した
後、仮想線によって示すカバーガラスＣによって封止す
るものである。

第１図および第２図は、その第１の実施例を示すもので
あって、フィルター１の構成は、ステンレスその他硬質
で変形量の少ない材料からなる支持枠１２の中央部に円
形もしくは多角形などの非円形状の受容孔１３を開設し
、当該受容孔１３を塞ぐようにして、微細孔１１Ａを透
設したフィルターシート１１を連着し、このフィルター
シート１１と前記支持枠１２とによって容器状部１．４
となし、この容器状部１４を略−様に満たすように寒天
、牛胎児血清、その他の栄養成分やビタミン、グルココ
ルチコイドその他の添加物を含んだ固形状の培地体１５
を添設したものである。

なお、第５図に示す濾過治具りは、この発明のフィルタ
ー１を使用する場合に用いられるものであって、支持体
１０１に枢支された一対の係止杆１０２によりフィルタ
ー上を挟持するようにして、注入カップ１０３を着脱自
在に止着できるものであり、中央の濾過孔１０４を開閉
子１０５で開閉自在とし、濾過孔１０４に連結自在の吸
引手段１０６により細胞Ｗを吸引・分離処理しつるよう
にしたものである。

次に、その作用について説明する。

（Ａｌ　コロニー観察ステップ ■　培養工程 第１図に示すように培地体１５上に採取した細胞Ｗを載
置し、無菌雰囲気内で適温状況において放置することに
より、細胞Ｗは分裂・増殖される。

■　肉眼所見工程 所要時日経過後、まず、肉眼により細胞Ｗの増殖状態を
観察し、記録する。

ｆＢｌ鏡検観察ステップ ■　培地体溶解工程 次に、たとえば、第５図に示すような治具りにより細胞
Ｗを分離処理するものであるが、まず、係止杆１０２を
上開き状に開放させ、注入カップ１０３を支持体１０１
から旦取り外し、同図示の如く嵌合溝１０７上にフィル
ター上を載置し、その上に再度カップ１０３を重ね合わ
せて、フィルター上をサンドイッチ状に挾持させ、係止
杆１０２を解放すると、バネ１０８により当該係止杆１
０２が注入カップ１０３と共にフィルター１をも挟着す
ることとなって、恰もフィルター１と注入カップ１０３
とで容器状部１０９が形成されることとなる。

この状況でノズル１１０がらトリプシンあるいはコラゲ
ナーゼ、ペプシン、パパインなどの分解酵素剤を注入す
ると、この酵素剤によってフィルターシート１１上で細
胞Ｗを担持していた残留培地体１５は速やかに溶解され
てゾル状化する。

■　分離工程 開閉子１０５を操作して濾過孔１０４を開放させ吸引手
段１０６を始動させると、ゾル状化した培地体Ｉ５と共
に、タンパク質や線維質などの細胞Ｗに付帯する物質は
フィルタシート１１の微細孔１１Ａを透過して濾過孔１
０４に流下され、適宜の受容器（図示しない）へと導出
され、フィルターシート１１上には第２図に見られるよ
うに、検体となる細胞Ｗのみが滞留されることとなる。

■　プレパラート化工程 係止杆１０２を操作して注入カップ１０３を解放し、フ
ィルター上を取り外す。

フィルターシート１１上に細胞Ｗが滞留された状態のこ
のフィルター１を第４図示の如くにスライドガラスＳ上
に止着させ、適宜、洗滌、染色処理した後カバーガラス
Ｃでこれを被覆させてプレパラートを作成する。

■　鏡検工程 このプレパラートを顕微鏡し察して所見を記録する。

以上の通り、この実施例によれば、多孔膜状のフィルタ
ー上で細胞培養処理し、細胞を移設することな（、これ
を鏡検に供しつるものである。

第３図は、第２の実施例を示すものである。

第１の実施例と共通する構成の説明は割愛するが、この
実施例の特徴点は、フィルターシート１１’の上面に細
胞Ｗを載置し、フィルターシート１１の他面（下面）に
培地を構成する第１の実施例と同様の栄養剤やホルモン
剤を十分含浸させ、酵素などによって可溶性の多孔質シ
ート１５０を添設したものである。

このフィルター１′は、同図示の如くフィルターシート
１１′上に細胞Ｗが載置されると、細胞Ｗの含水骨がフ
ィルターシート１１’の微細孔１１八′から多孔質シー
ト１５０に働きかけ、結果的に毛細管現象によって、当
該シート１５０から栄養分などが微細孔１１八′を透過
してフィルターシート１１′上の細胞Ｗに供給され、細
胞Ｗが効果的に増殖されるものである。

［考案の効果］ この発明は、以上詳細に説明したとおりに、鏡検に供す
る細胞などを、フィルター上の培地で効果的に分裂・増
殖させて培養し、培地を溶解処理して細胞のみをフィル
ター上に滞留するように分離処理できるものであるから
、細胞の取り扱いが容易となり、細胞の移設に伴う損傷
を未然防止しつるものである点で真に有用なものであり
、又、スライドガラス上にも容易に定着できるため、細
胞の変形などの発生もみられず、加えて、濾過処理に当
っても不純物や細菌などによって細胞が汚染されるおそ
れがないものである。なお、移設処理が不要であるため
処理作業員に対する汚損、感染などの危険性も回避でき
る優れたものが得られるものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、この発明に係るフィルターの第１の実施例の
切断正面図、第２図は、第１図の培地が流出した後のフ
ィルターを示す切断正面図、第３図は、第１図の変形例
を示す第２の実施例に係る切断正面図、第４図は、スラ
イドガラス上に付設した状態のフィルターを示す１部斜
視図、第５図は、この発明のフィルターにより濾過処理
を行なう治具の縦断面を示す参考図である。 １−・・フィルター １１．１１’　・・・フィルターシート１１Ａ、ＩＩＡ
’・・・微細孔 １２．１２’・・・支持枠 １３．１３’・・・受容孔 １４．１４’・・・容器状部 １５．１５’・・・培地体 第１図 代理人　弁理士　　岡　１）　和　喜

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、鏡検に適用されるプレパラートに封入されるフィル
   ターにおいて、細胞などの検体を濾過処理する多孔質の
   フィルターの表面上に検体を培養する成分を保有し、酵
   素などの溶剤によつて可溶性を呈する性質の培地を添設
   したことを特徴とする培地付きフィルター。２、鏡検に
   適用されるプレパラートに封入されるフィルターの使用
   方法であって、次の（１）〜（３）工程から構成される
   培地付きフィルターの使用方法、 （１）多孔質のフィルター上に設けた培地上に検体とな
   る細胞を供給してこれを培養させ、 （２）酵素などの溶剤により培地を流出させ、 （３）濾過処理によって細胞をその付帯物から分離させ
   、細胞のみをフィルター上に滞留させるようにする。