JPH08508395A - 細胞学検査用単層採取のための方法と装置 - Google Patents

細胞学検査用単層採取のための方法と装置

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Abstract

(57)【要約】 本発明は細胞学検査用検体採取装置(10)、および細胞の均一な単層を容易する方法に関するものである。本発明装置よれば、従来の装置に比較し、重なり合う細胞が非常に少なく、汚染されることも少なく、細胞学検査用検体の単層を体液から迅速に用意することができる。本発明装置は開放できる細胞採取用容器(10)の形状であり、体液がこの細胞採取用容器を通過する時に細胞を採取するためのフィルター(46)をこの細胞採取用容器に収容している。

Description

【発明の詳細な説明】 細胞学検査用単層採取のための方法と装置関連出願のクロス・リファレンス 本出願は、1991年4月8日出願(特許査定済み)の米国特許出願第07/ 680,896号(1)の一部継続出願である。ただし(1)は1990年7月 18日出願の米国特許出願第07/553,585号(現在の米国特許第5,0 42,502号)(2)の一部継続出願であり、(2)は1989年9月22日 出願の米国特許出願第07/411,041号(現在の米国特許第4,953, 561号)および1989年9月18日出願の米国特許出願第07/408,5 47号(現在の米国特許第5,024,238号)(3)の一部継続出願であり 、(3)は1989年1月10日出願の米国特許出願第07/308,763号 (現在の米国特許第4,961,432号)の一部継続出願である。また本出願 は、1991年4月18日出願の米国特許出願第07/686,934号の一部 継続出願である。発明の技術分野 本発明は、細胞学検査用プロトコールでの使用に適した、均質な細胞層を体液 から採取するための装置および方法に関するものである。発明の背景 診断用細胞学検査、特に臨床病理の分野においては、診断の基礎は、細胞およ びその他の生物学的検体の顕微鏡検査にある。診断精度、および最適な解釈の可 能な検体スライドの調製は、患者からの十分な検体採取、および培養手順ないし スライド調製手順、の双方に左右され得る。 定量的培養結果、尿検査、および顕微鏡検査の精度を確保するために、新鮮細 胞から採取された尿の迅速処理が従来から推奨されてきた。新鮮細胞は、保存尿 から採取した細胞よりもスライドガラスに付着する傾向が強いので、ガラス体へ の細胞の拡散がより円滑となる。処理の遅れ、入院あるいは外来環境のいずれか での注意の欠如、または冷蔵を怠った場合は、スライド調製が最適なものとなら ない可能性がある。処理の遅れの問題を解消する既知の方法の1つは、尿に化学 的保存剤を使用することである。しかし、尿検体中に液体保存剤が存在すること は、検体の比重を測定不能なレベルまで上げることとなり、スライドの顕微鏡検 査など、従来からの各種定量的分析法においての尿の有用可能性を制限してしま う可能性がある。 これまでに、尿またはその他の体液検体用容器の蓋を取り外さずに、体液検体 を検査できるいくつかの容器が開発されてきた。 米国特許第2,953,132号では、内側に突出した管とゴム栓の付いた点 滴用ボトル、および薬剤を点滴用ボトルに導入するよう改作した関連排出用ボト ルが開示されている。 米国特許第3,066,671号では、シャフト・ガイド・スリーブ付きカバ ーを持つ、添加剤用使い捨て容器が開示されている。シャフト・ガイド・スリー ブは、点滴バッグ・ホールダーおよび添加剤用容器を受ける。 米国特許第3,608,550号では、液体採取源から液体採取用容器に液体 を移すための液体移動用ニードル・アセンブリが開示されている。ニードル・ア センブリには、液体採取容器に接続され、液体採取源に前端で接続し、かつ液体 採取用容器に後端で接続するよう改作された支持手段に取り付けられた第1カニ ューレが含まれる。第2カニューレは、支持手段に取り付けられ、液体採取源に 前端で接続し、かつ大気に後端で接するよう改作されている。これによって、液 体採取用容器内の容積が十分増加した時には、大気圧によって、液体が液体採取 源から液体採取用容器へ移る。 米国特許第3,904,482号では、体液から採取される微生物の採取、培 養、固定のための装置と方法が開示されている。装置には、培地、不活ガス、通 気穴覆いアセンブリを含む真空排気管が含まれる。培地を含む管には、カニュー レを用いて、体液を導入するための栓が装着されており、微生物が生育した後、 二次培養手順または固定手順のための培地の移動が完了する。 米国特許第4,024,857では、生物またはその他の採血源からの血液を 採血用カップに採取するための微小な装置が開示されている。カップの内壁直近 にあるカップ上部は取り外し可能、通気穴付きで、円錐台型をしており、この上 部にけいたウェルを通過する毛細管を持つ。これにより、血液が直接、採血源か らカップに移される。 米国特許第4,116,066号では、尿などの液体採取用装置が開示されて いる。この装置は液体採取用容器から構成されており、同容器は末端が開放され 、底部に中空のカニューレが取り付けられている。カニューレの底近くに隙間が 作られており、そこを通って液体が液体採取用容器から真空排気管に移される導 管の役割を果たす。真空排気管の栓がカニューレで開通されると、圧力差のため に、液体採取用容器にあった液体が、隙間を通って中空のカニューレおよび管へ と導入される。 米国特許第4,300,404号では、スナップ式蓋を持つ容器が開示されて いる。蓋には、容器の下端に入り、上端で蓋を貫通して突出するカニューレが付 いている。これにより、カニューレは、真空排気管状の容器の栓を貫通すること ができる。また容器の底部は陥没しており、最大量の液体採取を確保する。蓋に は真空排気管を通すくぼみが付いている。 しかし、上記特許のいずれも、細胞を採取した液体を保存すると同時に、検査 のため、均質な層の細胞をスライドへ移すという問題を解決しない。 細胞をスライドまたは膜へ移したり、集めたりする過程は一般に、体液、分泌 物、またはスミア内の細胞学検査用検体の保存または固定によって行われる。 現在、細胞学検査用の体液検体は、特殊な容器を用いて採取されている。これ らの容器は通常、採取場所から細胞学検査施設への輸送中に細胞学検査用検体を 保存するための保存液を含有している。さらに、綿棒、スミア、急速洗浄液、ま たはブラシを用いて体腔から採取した細胞学検査用検体は、染色または検査のた めに細胞をスライドまたは膜に移す前に、固定剤を入れた特殊容器で保存されて もいるが、望ましい固定剤はアルコールまたはアセトン系の固定剤である。 新鮮な体液検体から調製した細胞学検査用検体の回収率(分留まり)および質 は、保存剤の使用を必要とするルーチンの調製済み細胞学検査用検体よりも優れ ている。その理由は、新鮮細胞は、アルコールまたはその他の保存剤で保存され た細胞よりも、ガラスおよび/または膜によりよく付着するためと思われる。発明の概要 本発明は、細胞学検査用検体採取装置またはアッセイ・モジュールの中の尿ま たはその他の体液検体から均質な細胞層を採取するための装置および方法に終わ り、この装置は、スライドへの滴下のため、検体採取容器から取り外せる。液体 採取用容器によって、細胞の一次採取とともに、体液検体の二次採取も可能であ る。細胞学検査用検体採取装置の中の細胞を採取した後、液体採取用容器の蓋を 、同容器を密封する別の蓋に取り替えることができ、また細胞を採取した体液を 別の容器(例:貯蔵用または追加アッセイ用)に入れることもできる。別の容器 は、患者または検体採取担当医療従事者によって密閉できる。細胞学検査用検体 採取装置の中の細胞の採取によって、保存剤、作業者、または外部の物質による 細胞の汚染を起こさすに、均質な細胞スライドを得ることができる。液体採取用 容器から細胞学検査用検体採取装置への検体の移動は、検体を注入したり、ピペ ットで滴下せずに行える。 本発明は細胞採取・配分装置に関するものであり、同装置は分解可能なため、 同装置から顕微鏡検査用スライドへの細胞の直接移動を可能とする。 本発明の1つの目的は、スライドへ移して、細胞学検査に使用できる細胞単層 を採取する方法を提供することである。 また本発明のもう1つの目的は、診断と検査で使用するために、遠沈せずに、 細胞を採取してくるための尿またはその他の体液を個別に採取することである。 さらに本発明のもう1つの目的は、体液と細胞単層を外部からの汚染から保護す るとともに、細胞の容易な保存と輸送を可能にすることである。 本発明は、パパニコラウ・スミアのための細胞採取に特に有用である。 本発明は、また細胞学検査用検体採取キットにも関連する。同キットは、体液 採取用カップに取り外し可能な状態で取り付けられている前述の細胞学検査用検 体採取装置を含む。同キットまたは、細に卯検査用検体採取装置、またはより望 ましくは、細胞学検査用検体採取装置に取り外し可能な状態で取り付けられてい るシリンジを通して体液の流れを誘発するための手段をも含むことができる。 本発明のもう1つの側面によれば、細胞学検査用検体採取キットはさらに、細 胞学検査用検体採取装置に取り外し可能な状態で取り付けられている異物ろ過器 からも構成されている場合がある。異物ろ過器は異物を除去し、細胞を保持し、 次に細胞は細胞学検査用検体採取装置を通って排出れ、細胞単層を採取できる。 免疫細胞化学検査や画像分析などの新しい方法は、再現性があり、迅速で、バ イオハザードのない安価な調製物を必要とする。本発明の各種細胞調製手法は、 不均質な細胞濃度や不均等な細胞分布、空気の乾燥によるアーチファクトの問題 点を解決する。本発明の調製物はこれまで、より優れた形態学的結果をもたらす 均質な細胞分布を生み出し、そのため、顕微鏡による観察を改善し、またイメー ジ・サイトメトリー機器の使用を可能としてきた。 ろ過器からスライドへの単層細胞の移動はこれまで、細胞損失では従来の方法 と違いがなく、非常に効果が高いことが証明されてきた。顕微鏡検査では、細胞 分布がスライド上とろ過器上で同じであることが示されている。 本発明のこの方法は従来の細胞学検査にとって多くの利点を持つ。細胞は事前 に定めた部分に存在するため、スライドのスクリーニングでは大幅な時間の節約 ができる。また、カバースリップの外に細胞が出たり、カバースリップの急速冷 凍した端に存在したりするといった問題はなくなる。細胞が単層内に存在するの で、10倍の対物レンズ(スライドの低倍率レンズによるスクリーニングで非常 に頻繁に使用される対物レンズ)を使用した時にほぼ常に1つの焦点面に細胞が 位置する。たとえ40倍の対物レンズを使用しても、大半の細胞には焦点が合う 。このため、頻繁に焦点合わせをやり直さなくてすみ、時間の節約となる。 このプロセスでは細胞の重なりが最小限に抑えられるため、すべての細胞と細 胞群は、重なり合う細胞の塊や異物によって診断用細胞が覆い隠される可能性が ほとんどなく、容易な検査が確実に可能となる。さらに、このプロセスは細胞学 検査施設で行われるため、スライド調製と固定は、施設の人員によって管理され るので、品質保証が容易に実行できる。 添付の図面では、本発明の実施態様が示されており、そこから、前述の目的や その他の目的、新規な特徴、利点が直ちに明白となる。図面の説明 図1は、本発明による細胞学検査用検体採取装置の透視図である。 図2は、本発明による細胞学検査用検体採取装置の分解透視図である。 図3は、本発明による第1および第2多孔性媒体を含む多孔性装置の透視図で ある。 図4は、細胞が細胞学検査用検体採取装置の第2の取り外し可能部分の中に取 り付けられたラミネート・フィルター上で採取される際の図1と図2の細胞学検 査用検体採取装置の第2の取り外し可能部分の断面図である。 図5は、体液が異物除去器を通して吸引されて、異物が除去され、細胞が異物 除去器の中の細胞フィルターで採取される際の検体採取用カップに取り外し可能 な状態で取り付けられている異物除去器の断面図である。 図6は、図1の細胞学検査用検体採取装置に取り付けられた図5の異物除去器 の断面図で、異物除去器を通して、体液が細胞学検査用検体採取装置に排出され 、そこのラミネート膜上で細胞単層が採取される。 図7は、本発明による細胞学検査用検体採取装置の模式的分解断面図である。 図8は、検体採取用カップに取り付けられたシリンジと細胞学検査用検体採取 装置の模式的断面図である。 図9は、吸引生検用ニードル部材、および図1,図2の細胞学検査用検体採取 装置に取り付けられたシリンジの模式的分解断面図である。 図10は、細胞学検査用検体採取装置から取り外した後の第2の取り外し可能 部分の模式的断面図で、細胞単層の多孔性膜から顕微鏡スライドへの移動を示す 。 図11は、体液採取用カップを取り外した状態の細胞学検査用検体採取装置の 模式的断面図で、細菌学検体を顕微鏡培養用トレーに排出する状態を示す。 図12は、図8の細胞学検査用検体採取装置の第2の取り外し可能部分の模式 的断面図で、第2の多孔性膜の側面を通過し、第1の多孔性膜を迂回して流れる 体液を示す。発明の詳細説明 図7に示されている実施態様にある本発明には、アッセイ・モジュールまたは 細胞学検査用検体採取装置10が含まれ、これは第1および第2の取り外し可能 部分44,42から横成され、各々第1および第2ポート54,41を持つ。第 1および第2の取り外し可能部分44,42は、チャンバ50を規定し、第1お よび第2ポート54,41はチャンバ50を通る液体の流路を規定する。多孔性 装置46は、細胞採取のために改作された検体採取部分45を持ち、液体の流路 を横断する位置にあり、検体採取部分45は第1ポート54と相互に連絡する。 細胞学検査用検体採取装置10の中にある多孔性装置46は、第1および第2の 分岐を持つ流路を規定し、第1の分岐60が検体採取部分45を貫通しており、 第2の分岐61が検体採取部分45を迂回するよう改作されることが望ましい。 1つの望ましい実施態様において、本発明には、第1の多孔性媒体46bを貫通 する細胞の通過を妨げるのに適切な第1の多孔性媒体46bを持ち、液体から粒 子状物質を除去するのに適切な第2の多孔性媒体46aを各々持つ多孔性装置4 6が含まれる。別の望ましい実施態様において、多孔性装置46には、第1の多 孔性媒体46aおよび第2の多孔性媒体46bが含まれるが、多孔性媒体46b とデプス・フィルター46aがあって、その中で多孔性媒体を通って第1ポート 54とデプス・フィルターが相互に連絡する方がより望ましい。さらに別の実施 態様において、デプス・フィルター46aは、多孔性媒体46bを通る流路の第 1の分岐を通じて、第1ポート54がデプス・フィルター46aと相互に連絡し 、また流路の第2の分岐を通じて、第1ポート54と直接相互に連絡する。 第1ポート54をコネクターとして構成し、容器に接続するために改作するこ とも可能であり、または、ニードル、カニューレ74あるいは同類のものとして 構成することも可能である。また、第2ポート41をコネクターとして構成し、 シリンジまたは同類のものに接続するために改作することも可能である。多孔性 装置46には、細胞の通過を防ぐのに適切な密度・孔径の第1ゾーン、および液 体の通過に適切な密度・孔径の第2ゾーンを持つ一体構造を含むことができる。 第2ゾーンはまた、液体から粒子状物質を除去できる。細胞学検査用検体採取装 置40はいずれの体液に使用することもできるが、パパニコラウ・スミアのため に、尿およびその関連細胞から採取した検体を調製するのに特に有用である。 各種の多孔性膜を本実施態様の多孔性膜と互換的に使用できることに注目すべ きである。ポリカーボネート膜は、本発明の細胞学検査用検体採取装置での使用 に特に適切であるが、その他の多孔性膜も適切である。液体スクリーニングに使 用できる1つの膜は、ポール・コーポレーションのポール・バイオサポート部門 が製造する白血球保持媒体であるLEUCOSORB(商標名)である。ポール ・コーポレーションが製造・販売しているその他の膜には、BIODYNEA( 商標名)(非修飾ナイロンで、界面化学的にはアミン50%、カルボキシル基5 0%で、等電点がpH6.5)、BIODYNEB(商標名)(表面修飾ナイロ ンで、界面化学的特徴は高密度の強力なカチオン四次基。ゼータ電位はpH>1 0でプラス。)、BIODYNEC(商標名)(表面修飾ナイロンで、界面化学 的特徴は高密度の強力なアニオン・カルボキシル基。ゼータ電位はpH>3でマ イナス。)、およびLOPRODYNE(商標名)(低蛋白結合ナイロン66膜 で、液体の高速かつ効率のよい通過のために空隙容積の高い、緊密にコントロー ルされた微小多孔性構造を持ち、また細胞分離および細菌細胞インムノアッセイ のための微小粒子の絶対的保持能力を持つ)がある。 1つの望ましい実施態様において、多孔性装置には、細胞の通過を防ぐのに適 切な多孔性ポリカーボネート膜46bが含まれる。多孔性装置にはさらに、多孔 性ポリカーボネート膜46bにラミネートされたデプス・フィルター46aを含 むことも可能である。デプス・フィルター46aは、ポリプロピレンまたは高密 図8に示されているとおり、本発明の1つの望ましい実施態様には、尿、ある いは血液、髄液(CSF)、気管支洗浄物、喀痰、または微小ニードル吸引物な どその他の体液を採取できる検体採取用カップ11に取り付け可能なアッセイ・ モジュールまたは細胞学検査用検体採取装置10が含まれる。検体採取用カップ 11は、体液採取に適切ないずれの容器でもよい。体液採取の後、患者または監 督を行う医療従事者がカップ・ハウジング16に蓋14をかぶせる。カップ・ハ ウジング16は、ネジ山のある外部表面12を持つことが望ましい。蓋14には 、オプションで、取り外し可能な通気穴覆い13bの付いた通気穴13aを含む ことも可能である。通気穴13aはまた、細胞学検査用検体を採取するために体 の部位をブラシまたはスパーテルでこすった後、生理食塩水または保存剤を含有 するカップの中へブラシまたはスパーテルを入れるために用いることも可能であ る。蓋には、ボディ20があり、ボディ20は、カップ・ハウジング16のネジ 山付き外部表面12にねじ込むために、内部表面23にネジ山の付いた、円筒状 に下向きに広がったスカートまたはフランジ状に成形されていることが望ましい 。蓋のボディ20はまた、ネジ山付きニップス28をその中に一体成形したウェ ル26を規定する。ニップル28には、中空の管30につながる流路29または それと同類のものが付いている。ニップル28の流路29と軸面でそろったルー メン31を持つ環状面座33中で蓋のボディの他方の側に別個に中空の管30が 固定されていることが望ましい。管30には、検体採取用カップ11の底近くに 一連の穴32と開放された末端34を持たせることも可能である。これにより、 尿またはその他の体液がカップから排出された時、異なる液層ならびに尿の沈殿 物を同時に検査できる。 細胞学検査用検体採取装置10は、多孔性装置46にアクセスできるハウジン グであればいずれのハウジングでもよいが、図1,2,7に示されるとおり、細 胞学検査用検体採取装置10は、第1の取り外し可能部分44および第2の取り 外し可能部分42を持つ2つの部から構成れるハウジングであることが望ましい 。第1の多孔性媒体46bは第2の多孔性媒体46aに取り付けられて、多孔性 装置46を形成することが望ましい。また、多孔性ポリカーボネート膜46bが フィルター部材46aにラミネートされて、多孔性装置46を形成する方がさら に望ましい。多孔性装置46は、第2の取り外し可能部分42の内空50に形成 された環状ステップまたはシート43に取り付けることも可能である。 多孔性ポリカーボネート膜46bの孔径は約0.22ミクロンから約8ミクロ ンが望ましいが、約1ミクロンから約6ミクロンがさらに望ましく、約2ミクロ ンであれば最も望ましい。これにより、3ミクロンを超過する径の細胞を捕捉す ることができる。ポリカーボネート膜46bは第2の多孔性媒体46aに取り付 けが可能で、これにより、細胞60の通過を妨げる一方、液がそこを通過して流 れることができるのに適している。第2の多孔性媒体46aは、液の通過に適し ており、また液から粒子状物質を除去する能力を持つことができる。第2の多孔 性媒体46aの孔径は約5ミクロンから約60ミクロンの範囲でもよいが、約1 5ミクロンから約45ミクロンが望ましく、約35ミクロンであれば最も望まし い。 前述のとおり、第2ポート42は、シリンジ64または同類の物と接続するよ う改作することが可能である。接続例としては、ルーアー・ロック(luer olck )、ネジ山付きルーアー・ロック、摩擦継手、テーパ消火ホース継手、ネジ山付 き 継手があるが、これらに限定されるものではない。 細胞学検査用検体採取装置を通って検体採取源用容器から液体の流出を誘発す るのに適した手段であればいずれでも、本発明の一部として使用できる。液体流 出誘発手段の例には、シリンジまたはポンプ式装置があるが、これらに限定され るものではない。シリンジ64には、バレル66、およびアソールト・ピストン ・ヘッド付きピストン(図には示されていない)が含まれる。またシリンジ64 の代わりに、ジェネックス・コーポレーション製のオートバイアル・スパンガラ ス・フィルターのように、適切ないずれのポンプ式装置をも使用することができ る。また、本発明の範囲には、検体採取源用容器を通して液をシリンジへ圧出す るために圧搾される、検体用容器のような柔軟で、折り畳み可能な容器の使用も 含まれる。 細胞学検査用検体採取装置10は、図1,2,7,8により明確に示されると おり、シリンジのルーアー・ロック62および検体採取用カップ11のニップル 28に取り付けることも可能である。細胞学検査用検体採取装置10には、簡単 に開けられるハウジングが含まれることが望ましく、第1の取り外し可能部分4 4および第2の取り外し可能部分42を含む簡単な二部構造から構成することが 可能である。細胞学検査用検体採取装置10は、雌の取り外し可能部分44が雄 の取り外し可能部分42にねじ込まれる構成であることが望ましい。スカート部 材48は台47から外側へ広がり、空隙50、およびオーリング53を保持する フランジ51を規定する。空隙50は、ポート41の穴52と相互に連絡する。 スカート48には、多孔性装置46のシートを形成する環状ステップ43が含ま れる。スカート48の内面80にネジ山を付けることも可能である。多孔性装置 46はポリカーボネート膜46bから構成することが可能で、ポリカーボネート 膜46bは円盤型の第2の多孔性媒体46aにラミネートされるが、これはデプ ス・フィルターであることが望ましい。第2の多孔性媒体46aには、円筒状外 壁81を持たせることも可能である。この円筒状外壁81が望ましい場合は、円 筒状外壁81には、ステップ・チャンネル・カットの中の第2の取り外し可能部 分42のスカート部材48にねじ込むために、ネジ山付き外部表面がある。多孔 性装置46の円筒状外壁81は、スカート部材48の壁端49を越えて伸びる。 スカートの壁端49を越えて伸びる多孔性装置46の部分は、多孔性膜46bの 表面45上に細胞が積み上がるのを防ぐ通気孔(液の流れに対する抵抗が低い) として機能することが可能である。 前述のとおり、第2の取り外し可能部分42には、貫通する穴52を持つネジ 山付きニップル41を持たせることも可能である。第2の取り外し可能部分42 のボディ(平面ベース47およびスカート48)によって、截頭円錐状チャンバ または空隙50が規定される。截頭円錐状チャンバまたは空隙50の中には、多 孔性装置46のシートとして機能するステップ43が形成される。前述のとおり 、細胞学検査用検体採取装置10のポート41がネジ山付き突起物であることも 可能で、この突起物は、ベクトン・ディッキンソン・アンド・カンパニー製のも ののように、シリンジ64のルーアー・ロック62にはまるように改作されてい る。 第1の取り外し可能部分44は、チャンバ50と相互に連絡する貫通する穴5 5を持つネジ山付きルーアー・ロック54を持つことも可能である。ネジ山付き ルーアー・ロック54は、検体採取用カップ11から液を除去するために、検体 採取用カップ11のニップル28にねじ込むことも可能であり、またそうでなけ れば、図9に示されるとおり、ニードル・アセンブリ70に取り付けることも可 能である。ニードル・アセンブリ70は、貫通口73を規定する支持部材72で 構成され、その中にはルーメン75付きの微小な吸引ニードルが取り付けられて いる。ネジ山付きニップル部材76は支持部材72の壁面に固定され、それによ って、第1の取り外し可能部分44ポート54に取り付けられるニードル・アセ ンブリ70の取り付け手段を提供する。したがって、ニードル・アセンブリ70 は、シリンジまたはポンプ66の中に取り込まれた体液を吸引するために使用で きる。 本発明にはまた、細胞を顕微鏡スライドへ移す方法が含まれる。現在利用でき る方法とは対照的に、膜ろ過法の使用によって、重なりを最小限に抑えて細胞を スライド上に均等に置く方法が得られる。これにより、明確な観察と最適な診断 精度を得られる。図10に示されるとおり、ポリカーボネート膜46bの表面上 の検体採取部分45から得た細胞60をスライドガラス120の上に置いて、細 胞を移し、次に細胞学的判断のための染色ができる。本発明が、染色や検出プロ トコールの種類によって限定されてはならないことが意図されている。 第1の取り外し可能部分44の管30およびポート54を通って、検体採取用 カップ11から体液を引き出すと、図5に示されるとおり、多孔性膜46bとデ プス・フィルター46aを通って、体液が流れるので、多孔性膜46bの表面4 5上に細胞の単層が形成される。一旦細胞の単層が形成されると、図4に示され るとおり、膜46bの中心では体液の流速が減り、膜46bの端に向かって体液 の流速が増す。この原因は、採取された細胞が膜46bの表面45上に形成され るにつれ、体液の流れが止められるためと思われる。図12に示されるとおり、 単層が膜46bの表面45の大半を覆ったら、体液の流れは膜表面45を迂回し て、第2の多孔性媒体46aの広がった側面部分を通り抜ける。したがって、第 2の取り外し可能部分42のスカート48の末端壁49を越えて広がる第2の多 孔性媒体46aの部分が、通気孔(体液の流れに対する抵抗が低い)として機能 し、細胞が積み上がるのを防ぐ。すると、細胞学検査用検体採取装置10が検体 採取用カップ11、またオプションとしてはシリンジ64のいずれかから離れる ことができる。すると、細胞学検査用検体採取装置10のネジが外れて、2つの 部分に分かれ、第2の取り外し可能部分42と付随する細胞コーティングされた 膜46aが、図10に示されるとおり、スライド120の上に置かれるので、表 面45上の単層を伴う膜46bの移動が起きる。次に、組織拭き取り用品を用い ると、膜46bがスライド上に押し付けられ、細胞60がスライド120上に単 層を形成することができる。膜46bはスライドから除去できるので、スライド 上には細胞60が残る。このため、膜の孔による障害や処理要件による遅れを経 験せずに、実務者が細胞に関する細胞学検査を行うことができる。 前述の細胞学検査用検体採取装置10は、その他の適切なろ過または処理装置 と組み合わせて用いることもできる。図5と6では、異物ろ過器100と組み合 わせて細胞学検査用検体採取装置10が使用されていることが示されている。De bris Shuttleのようないずれの適切な異物ろ過器100をも使用できる。異物ろ 過器100は細胞フィルター101を含むことが望ましく、入り口102と出口 103があり、また細胞学検査用検体採取装置10に取り外し可能な状態で接続 されている。 体液はシリンジで吸引されることが望ましいが、図5に示されるとおり、体液 は異物ろ過器100を最初に通過する。体液が異物ろ過器100を通り抜けるに つれ、異物ろ過器内に取り付けられた細胞フィルター101上に体液内の細胞が 蓄積する。細胞フィルター101の孔径は、細胞フィルターの表面にある望まし い細胞を保持する一方、異物が通り抜ける程度の大きさであるべきである。細胞 フィルター101の孔径は約3ミクロンから約35ミクロンが望ましいが、約5 ミクロンがさらに望ましい。フィルター上の細胞塊の蓄積で流れが止められるま で、細胞フィルター101を通して、体液が吸引され続ける。 体液の流れが止まった後、細胞学検査用検体採取装置10の第1ポート54に 異物ろ過器100が接続可能である。異物ろ過器100と細胞学検査用検体採取 装置10を通して、体液が排出できる。この結果、異物ろ過器100の細胞フィ ルター101から、細胞学検査用検体採取装置10内にある多孔性装置46の検 体採取部分45へ単層の形態で細胞塊が移動する。 処理用装置を細胞学検査用検体採取装置10と組み合わせて使用することもで きる。また、いずれの適切な診断または検出用アセンブリでも、細胞学検査用検 体採取装置10と組み合わせて使用することもできる。しかし望ましい装置は、 サンドイッチ・アッセイを用いて癌の存在を検査する装置である。たとえば、こ の装置は、(1)入り口と出口の間の流路を規定する入り口と出口ポートを含む ハウジング、(2)流路を横切る位置にあるフィルター、(3)表面に結合され た一次抗体をもつ基質ビーズで、米国特許第4,953,561号に開示されて いるとおり、出口の内側にビーズが含まれるもの、から構成される。 本発明の細胞学検査用検体採取装置10はまた、一旦細胞が適切な緩衝液によ って溶血されたら、体液から採取した新鮮細胞および/または微生物の分離と採 取によって、DNAプローブおよび染色体分析を可能にする。 細胞学検査における細胞変化の観察のために最も広く使われる染色はパパニコ ラウ染色手順である。婦人科および非婦人科領域の両用途に使用されるこの染色 は、青色核比色染色、オレンジ比色染色、および赤色・緑色細胞質比色染色から 基本的に構成される。核染色は、正常および異常な細胞に関連する染色パターン を示す一方、細胞質染色は細胞の由来を示すのに役立つ。この手順の成功した理 由は、核の詳細および細胞分化の定義を含めて、いくつかの要素を観察できる能 力によると思われる。またこの染色手順は、目に非常に快い多色調製物を生み出 すので、眼精疲労を減らす可能性も持つ。 細胞の詳細は固定に依存するので、細胞がスライドに置かれた直後に固定され ることが望ましい。調製と固定の間にあまり大きな遅れがあると、細胞が乾燥状 態に暴露され、それが細胞構造に有害となる可能性がある。さらに、空気乾燥に よるアーチファクトがそれ以後の染色結果に悪影響を与えることもある。この1 つの例外は、空気乾燥が固定ステップとして使われるライト・ギームザ染色で細 胞を染色する場合である。 本発明の別の実施態様では、細胞の単層を検体採取部分に直接固定できる。こ のやり方は、最初に、前述のとおり、細胞学検査用検体採取装置の検体採取部分 の上に細胞の単層を置き、次に、アルコールまたはアセトンのような固定剤を含 む溶液が細胞学検査用検体採取装置を通過するようにして、実行できる。 患者からの1採取物から複数の検体を作ることも本発明の範囲の中に含まれる 。他の染色用途のための追加スライドは容易に調製できる。たとえば、免疫細胞 化学法やin situハイブリダイゼーション法などの新しい方法によるヒトの乳頭 腫ウィルス検査は、追加スライド上で行うことができる。腫瘍遺伝子産物検査ま たはその他の免疫細胞化学検査が発達するにつれ、より多くのスライドが必要と なる可能性がある。本調製法では、唯一の方法のみでスライド固定を行うことを 求めていないので、これらの検査が必要とする各種固定法を手順の中に容易に組 み込むことができる。 この同じスライド調製手順を事実上、すべての形態の細胞学検査に用いること ができる。さらに、完全に封じ込められた使い捨てコンポーネントの使用により 、バイオハザードの心配に対処する。究極的には、細胞の発色が改善されれば、 細胞学的解釈が改善されるので、より一貫性と信頼性のある患者診断を提供する ことによって、細胞学検査の役割が拡大する可能性がある。 また、捕捉された微生物は、図11に示されるとおり、標準ペトリ皿90のよ うな培地の中で培養できる。細胞の単層が細胞学検査用検体採取装置10の中で 採取された後、液は検体採取部分45を通って、第1ポート54へ移動するので 、微生物がペトリ皿90へ移動する。 細菌検査においては、膜45はQualtureという装置(図には示されていない) で培養するのに使用でき、特定の細菌コロニーの存在を判断できる。Qualtureと いう装置はプラスチックのカプセル状で、フィルター膜1個と脱水した選択的培 地の栄養素パッド4個を含む。 Qualture法は、寒天プレート法よりも感度が高く、また、確定診断を行う速度 もより速い。この装置を用いると、1つのステップで、大半の場合4〜6時間以 内に細菌のスクリーニング、分離、および分離菌の仮診断を行う。テストでは、 50mlの液からの回収は優秀で、感度も高いことが実証された。 これまで本発明は、特定の望ましい実施態様に関して説明されてきたが、本発 明の利用はそうした実施態様に限られるものではない。特に前述の知識に鑑みて 、前述の実施態様とは異なるが、本発明によってなお包含される実施態様、実施 例、変更態様が、技術に優れた人々によって実行に移される可能性がある。した がって、以下に述べられる特許請求の範囲は、特許請求の範囲で定義されるとお り、本発明の精神と範囲の中に含まれると思われるいかなる代替的実施態様、実 施例、変更態様、同等物をもカバーすることを意図している。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 FI G01N 33/48 8310−2J G01N 33/48 S (81)指定国 EP(AT,BE,CH,DE, DK,ES,FR,GB,GR,IE,IT,LU,M C,NL,PT,SE),OA(BF,BJ,CF,CG ,CI,CM,GA,GN,ML,MR,NE,SN, TD,TG),AT,AU,BB,BG,BR,BY, CA,CH,CZ,DE,DK,ES,FI,GB,H U,JP,KP,KR,KZ,LK,LU,MG,MN ,MW,NL,NO,NZ,PL,PT,RO,RU, SD,SE,SK,UA,VN

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1.(1)チャンバを画成する第1および第2の取り外し可能部分と、(2)前 記チャンバを通過する流路を画成する第1および第2ポートと、(3)流体の流 路を横断する位置にある細胞を採取するよう構成された検体採取用部分および前 記第1ポートと相互に連通する検体採取用部分をそれぞれ持つ多孔性装置とから 構成されたことを特徴とする細胞学検査用検体採取装置。 2.前記多孔性装置は第1および第2分岐を持つ流路を画成するよう構成されて おり、前記第1分岐は前記検体採取用部分を貫通し、前記第2分岐は前記検体採 取用部分を迂回している請求項1に記載の細胞学検査用検体採取装置。 3.前記多孔性装置は、細胞の通過を防ぐ能力を持つ第1の多孔性媒体、および 流体から粒子状物質を除去する能力を持つ第2の多孔性媒体を含む請求項2に記 載の細胞学検査用検体採取装置 4.前記第1の多孔性媒体は多孔性膜であり、前記第2の多孔性媒体はデプス・ フィルターである請求項3に記載の細胞学検査用検体採取装置。 5.前記多孔性膜は、多孔性ポリカーボネート膜、非修飾ナイロン膜、修飾ナイ ロン膜から構成されるグループから選択された請求項3に記載の細胞学検査用検 体採取装置。 6.前記多孔性膜は多孔性ポリカーボネート膜である請求項5に記載の細胞学検 査用検体採取装置。 7.前記第1の多孔性媒体は前記第2の多孔性媒体にラミネートされている請求 項3に記載の細胞学検査用検体採取装置。 8.前記多孔性膜の孔径は約1ミクロンから約5ミクロンである請求項4に記載 の細胞学検査用検体採取装置 9.前記多孔性膜の孔径は約5ミクロンである請求項7に記載の細胞学検査用検 体採取装置。 10.前記第1の多孔性媒体は多孔性膜で、前記検体採取部分は多孔性膜の表面 である請求項3に記載の細胞学検査用検体採取装置。 11.前記第2分岐は前記第2の多孔性媒体を貫通している請求項10に記載の 細胞学検査用検体採取装置。 12.前記第1および第2ポートのうち少なくとも1つは接続手段を具える請求 項1に記載の細胞学検査用検体採取装置。 13.前記接続手段はルーアー・ロック、摩擦継手、テーパ消火ホース継手、ま たはネジ山継手で構成されている請求項12に記載の細胞学検査用検体採取装置 。 14.前記第1ポートは、ルーメンを持つニードルとして形成されている請求項 1に記載の細胞学検査用検体採取装置。 15.(1)流路を画成する入り口および出口ポートから構成されるハウジング 、と(2)流路を横断する位置にあるフィルターと、(3)表面に結合した抗体 を有し、出口チャンバ内に含まれる複数個の基質ビーズとを具える処理装置を更 に設けた請求項1に記載の細胞学検査用検体採取装置。 16.(1)チャンバを画成する第1および第2の取り外し可能部分と、(2) 前記チャンバを通る流路を画成する第1および第2ポートと、(3)流体流路 を横断する位置にあり細胞採取用に構成された検体採取用部分、および前記第1 ポートと相互に連通する検体採取用部分を持つ多孔性装置とを含む細胞学検査用 検体採取装置と、この細胞学検査用検体採取装置の前記第1ポートに取り外し可 能な状態で接続されている液体採取用カップとを具えることを特徴とする細胞学 検査用検体採取キット。 17.前記細胞学検査用検体採取装置の前記第2ポートに取り外し可能な状態で 接続されている流体排出手段を更に具える請求項16に記載の細胞学検査用検体 採取キット。 18.異物除去装置、細胞学検査用検体採取装置、および液体流通誘発手段から 構成され、細胞学検査用検体採取キットであって、異物除去装置は、細胞フィル ターを貫通して伸びる流路を画成する第1および第2ポートを含むハウジングか ら構成され、細胞学検査用検体採取装置は、前記異物除去装置の第1ポートに取 り外し可能な状態で接続されており、細胞学検査用検体採取装置には、(1)チ ャンバを画成する第1および第2の取り外し可能部分と、(2)前記チャンバを 通る流路を画成する第1および第2ポートと、(3)流体流路を横断する位置に あり、細胞を採取するように構成された検体採取用部分、および前記第1ポート と相互に連通する検体採取用部分を持つ多孔性装置とを具え、前記第1ポートは 前記異物除去装置の前記第1ポートと相互に連通しておりまた前記液体流通誘発 手段は、前記異物除去装置の前記第2ポートに取り外し可能な状態で接続されて いることを特徴とする細胞学検査用検体採取キット。 19.前記細胞フィルターの孔径は約0.3ミクロンから約35ミクロンである 請求項18に記載の細胞学検査用検体採取キット。 20.a)流体流路を横断する位置にあり、細胞採取用に構成された検体採取用 部分を持つ多孔性装置を含む細胞学検査用検体採取装置に細胞を含む体液を通過 させ、 b)細胞単層を検体採取用部分に置く工程からなることを特徴とする細胞学検 査用検体採取方法。 21.前記細胞学検査用検体採取装置は(1)チャンバを画成する第1および第 2の取り外し可能部分と、(2)チャンバを通る流路を画成する第1および第2 ポートと、(3)前記第1ポートと相互に連通する流体流路を横断する位置にあ る検体採取用部分とを具えた請求項20に記載の細胞学検査用検体採取方法。 22.c)前記検体採取用部分を細胞単層で飽和させ、それにより、検体採取用 部分を貫通して伸びる流路の第1分岐を通る体液の流れを妨げて、前記検体採取 用部分にこの流れを迂回させて前記流路の第2分岐に流し、 d)体液の流れが細胞学検査用検体採取装置に通ることを妨げる工程を更に有 する請求項21に記載の細胞学検査用検体採取方法。 23.e)前記細胞学検査用検体採取装置を開けて、前記多孔性装置の前記検体 採取用部分を暴露し、 f)前記検体採取用部分をスライド表面に相対して向けて、前記多孔性装置の 前記検体採取用部分から細胞をスライド表面に移動させる工程を更に有する請求 項22に記載の細胞学検査用細胞採取方法。 24.e)流体が前記第2ポートから前記細胞学検査用検体採取装置を通って前 記第1ポートに流れるようにし、それによって、前記検体採取用部分から培地に 細胞を移動させる工程を更に有する請求項22に記載の細胞学検査用検体採取方 法。 25.e)前記細胞学検査用検体採取装置に固定剤を通す工程を更に有する請求 項22に記載の細胞学検査用検体採取方法。 26.a)前記異物除去装置を通る(細胞を含む)体液が、細胞フィルター上の 細胞塊の蓄積によってその流れが妨げられるまで、入り口および出口ポートを持 ち、細胞フィルターを含む異物除去装置に前記体液を通し、 b)前記異物除去装置の入り口ポートに細胞学検査用検体採取装置を取り付け 、 c)工程a)で採用される方向と反対の方向に、前記異物質除去装置に体液を 通し、それによって、前記細胞フィルターから前記細胞学検査用検体採取装置の 検体採取用部分に細胞塊を移動させ、 d)前記検体採取用部分を細胞単層で飽和させ、それにより、前記検体採取用 部分を貫通して伸びる流路の第1分岐を通る体液の流れを妨げて、前記検体採取 用部分をこの体液によって迂回させ前記流路の第2分岐にこの体液を流し、 e)前記細胞学検査用検体採取装置に通る前記体液の流れを妨げる工程からな ることを特徴とする細胞採取方法。 27.f)前記細胞学検査用検体採取装置を開けて、多孔性装置の検体採取用部 分を暴露し、 g)検体採取用部分をスライド表面に相対して向けて、この検体採取用部分か ら少なくとも細胞単層の一部を前記スライド表面に移動させる工程を更に有する 請求項26に記載の細胞採取方法。
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