JPS62121332A

JPS62121332A - 顕微鏡観察用標本の作成方法

Info

Publication number: JPS62121332A
Application number: JP25990485A
Authority: JP
Inventors: Makoto Aoki; 真青木
Original assignee: JOHOKU IKA KIKI SEISAKUSHO KK
Current assignee: JOHOKU IKA KIKI SEISAKUSHO KK
Priority date: 1985-11-21
Filing date: 1985-11-21
Publication date: 1987-06-02

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、顕微鏡によって観察する細胞等の標本を作成
するための方法に関するもので、特に、細胞等の観察試
料を含む液からその試料を分離するためにフィルタを用
いるようにした。

顕微鏡観察用標本の作成方法に関するものである。

（従来の技術）例えば、がん細胞の有無、成育状態、あるいは試薬に対
する反応等を調べるときには、採取した細胞を顕微鏡下
で検査する細胞診という手法が採られることが多い。こ
のような細胞診を行うときには、一般に、採取した検体
を細分し、薬品を加えて１〜２ｉ！！間培養した後、ス
ライドグラス上に標本を作成して、４００〜６００倍程
度の顕微鏡によっ゛て検鏡する。

このような標本を作成する場合、従来は、培Ａされた細
胞片を培養液とともにスライドグラスにに塗抹して、洗
浄液によって培養液を洗い流した後、染色するようにし
ていた。

しかしながら、このような塗抹法による標本作成では、
スライドグラス上に塗抹するとき、その塗抹作業に伴う
物理的要因によって細胞が破壊されてしまったり、培養
液を洗い流すとき、細胞がともに流されてしまったりし
て、正確な分析ができなくなることが多い。そのために
、この方法による標本作成には、かなりの熟１礫を要す
ることとなり、時間がかかってコストも高いものとなっ
ている。

このようなことから、一部では、培養された細胞片をフ
ィルタによって１８養液から分離させ、フィルタに付着
した細胞片をそのまま染色して、これを標本として検鏡
するという試みも行われている。

（発明が解決しようとする問題点）しかしながら、このように細胞等の試料が付着したフィ
ルタをそのまま標本とするようにしたものでは、検鏡時
に、フィルタの細孔、すなわちフィルタボアが細胞等と
ともに見えることになる。特に、従来は、このようなフ
ィルタとして−・般にセルロース系のフィルタが用いら
れていたが、そのようなセルロース系フィルタのボアは
複雑な形状をしているので、ボア壁面に染料が付着しや
すく、細胞等との区別がつきにくくなるという問題があ
った。また、細胞等がボア内に入り込むと、その正確な
形状を視認することができなくなるという問題もあった
。そのために、このようなフィルタ法による標本作成は
、現実にはほとんど行われていない。

本発明は、このような実情に鑑みてなされたものであっ
て、その目的は、フィルりによって、細胞等の試料が破
壊されることなく分離されるようにしながら、その試料
のみを容易に、かつ正確に判別することができるように
することである。

（問題点を解決するための手段）この目的を達成するために１本発明では、フィルタとし
て、溶剤によって溶解させ得る合成樹脂等の材料からな
るフィルタを用いるようにしている。そして、観察試料
を含む液をそのフィルタによって濾過して、そのフィル
タ上に試料を付着させ、染色した後、そのフィルタをス
ライドグラス上に載せ、溶剤によって溶解させるように
している。

（作用）このような方法を用いることにより、試料はフィルタに
よって確実に捕捉されるようになり、破壊されたり流さ
れてしまったりするようなことはなくなる。そして、そ
のフィルタは、スライドグラス上で溶解されるので、フ
ィルタボアは完全に消滅し、検鏡時にそのボアが支障と
なることはなくなる。また、ボア内に入り込んでいた試
料も、フィルタの溶解によって露出するので、それを視
認することができるようになる。

（実施例）以丁１図面を用いて本発明の詳細な説明する。

図は、本発明による顕微鏡観察用標本の作成方法の一実
施例を示すもので、それぞれ異なる過程における状態を
示す図である。

例えばがん細胞の細胞診を行うときには、まず、採取し
た細胞を培養し、それを細分して、それぞれに異なる試
薬を加え、更に培養する。

こうして、それぞれ異なる観察試料を含む多種類の試料
液を作っておく、そして、その試料液を、第１図（Ａ）
、（Ｂ）に示されているような器具１によって濾過する
。

この器具１は、フィルタ２が貼り付けられたフィルタ座
３を上下から挟み付けるパツキン４．５と、更にそのパ
ツキン４．５を上下から挟み（＝Ｊけるホルダ６．７と
によって構成されている。フィルタ座３には、複数の細
長い透孔８．８．・・・が並列状に形成されている。ま
た、パツキン４．５には、それぞれその透孔８に対応す
る位置に、開口９，１０が設けられている。更に、上側
のホルダ６には、パツキン４の開口９に連通ずる注入口
１１が設けられ、下側のホルダ７には、パツキン５の開
口１０に連通する排出口１２が設けられている。

このような器具１においては、パツキン４゜５間にフィ
ルタ２及びフィルタ座３を挟んで上下のホルダ６．７を
締め付ければ、パツキン４．５がフィルタ２及びフィル
タ座３に圧着され、フィルタ座３の各透孔８の周囲が完
全に密封される。したがって、上側ホルダ６の注入口１
１からパツキン４の開口９、フィルタ座３の透孔８、及
びパツキン５の開口１０を経て下側ホルタ７の排出口１
２に至る各通路は、それぞれが独立したものとなる。そ
こで、各注入口１１．１１．・・・にそれぞれ異なる試
料液を注入すれば、フィルタ座３の各透孔８，８．・・
・に対応する部分のフィルタ２上に、それぞれ異なる試
料が液から分離されて残留することになる。

フィルタ２としては、溶剤によって溶解させ得る材料製
のものであれば、セルロース系のものであってもよいが
、米国のニュークリボア社製ノ［ニュークリボアフィル
タ」　（商品名）を用いることが望ましい。この「ニュ
ークリボアフィルタ」は、薄膜状のポリカーボネートに
原子炉内で中性子を通すことによって多数の細孔を形成
したもので、膜厚が薄くても極めて強度が高く、しかも
、ボア形状が一定径の円形断面となっている。この「ニ
ュークリボアフィルタ」にも種々の寸法のものがあるが
、がん細胞の細胞診のようなときには、ボア径が　１ミ
クロン、厚さが５〜１０ミクロン程度のものとする。

そして、これをスライドグラスとほぼ同程度の大きさに
切断して、フィルタ座３に接着剤により貼り付ける。こ
のような「ニュークリボアフィルタ」を用いれば、細胞
がボア内に入り込むこともなく、すべての細胞が正確な
形状で確実に捕捉されるようになる。

試料液の濾過が完了すると、一旦排出口１２を閉じ、注
入口１１からメタノールを注入して固定し、更にギムザ
等の染色剤を注入して染色を行う、このとき、フィルタ
２が「ニュークリボアフィルタ」であれば、染料がボア
壁面に付着することも少ない。染色完了後、再び排出口
１２を開き、フィルタ２を乾燥させる。

次いで、洗浄液を注入して、洗節を行う。

これらの工程が完了すると、フィルタ座３を器具ｌから
取り外す。そのフィルタ座３に貼り付けられたフィルタ
２には、第２図に示されているように、複数の異なる試
料１３，１３．・・・が並列状に付着している。

そこで、このフィルタ２が貼り付けられたフィルタ座３
を上下反転させ、第３図に示されているように、スライ
ドグラス１４上に載置する。あるいは、フィルタ２をフ
ィルタ座３から剥がし、フィルタ２を単独でスライドグ
ラス１４上に載置するようにしてもよい。そして、その
上方からフィルタ２の溶剤を注ぐ。フィルタ２上にフィ
ルタ座３が位置しているときにも、そのフィルタ座３に
は透孔８が設けられているので、上方から注がれた溶剤
はフィルタ２に伝わることになる。その結果、フィルタ
２は溶解される。

この溶剤は、フィルタ２は溶解するが、試料１３には影
響を及ぼさないものを選ぶ１例えば試料１３ががん細胞
の場合、フィルタ２がポリカーボネート製のものであれ
ば、溶剤としては、ジクロメタン、ジクロエタン、ある
いはクロロホルムが適している。また、フィルタ２の材
料がセルロースアセテートであれば、溶剤として氷酢酸
が適しており、ニトロセルロースあるいはエチルセルロ
ースであれば、酢酸メチルあるいは酢酸エチルを用いる
ことができる。

なお、このとき、スライドグラス１４を３５〜３６°Ｃ
程度に加温しておくことが好ましい、そのようにするこ
とによって、フィルタ２の溶解を早めることができる。

フィルタ２は、溶解すると、溶剤とともに大半が揮発す
る。液状となって残った分は、乾燥して薄い透明な膜と
なる。この場合、フィルタ２がセルロース系のものであ
れば、ボア壁面に付着していた染料が残ることになるが
、フィルタ２の溶解によって広く分散されるので、大き
な影響を及ぼすことはない。

フィルタ２が溶解すると、フィルタ座３を取り除く、そ
して、完全に溶解した後、スライドグラス１４の上面に
封入剤を塗布する。封入剤が固まれば、第４図に示され
ているように、スライドグラス１４上に複数の試料１３
　、１３　。

・・・が配置された標本１５となる。

こうして得られた標本１５は、その試料１３がフィルタ
２によって捕捉されたものであるので、その試料１３に
はほとんど破壊はない、また、セルロース系フィルタの
場合には、そのボア内に細胞等の試料１３の一部が入り
込むことがあるが、そのような細胞等もフィルタ２の溶
解によって露出するので、すべての試料１３が確実に標
本化される。

この標本１５には、複数の試料１３，１３゜・・・が配
置されているので、顕微鏡下でそのスライドグラス１４
をスライドさせるだけで、６試お１１３を順に検鏡する
ことができる。そして、フィルタ２の溶解によってフィ
ルタボアは完全に消滅しているので、そのボアによって
検鏡に支障が及ぼされることもない。

このようにして、細胞等の試料１３のみを、容易に、し
かも正確に判別することのできる顕微鏡観察用標本１５
が得られるようになる。

なお、上記実施例においては、複数の試料１３が配置さ
れた標本１５を作成するものとしているが、本発明は、
これに限らず、単一の試料１３のみを備えた標本１５を
作成する場合にも適用することができる。そのような場
合には、器具１等を用いずに、フィルタｚ上に直接試料
液等を注ぐようにしてもよい。

（発明の効果）以上の説明から明らかなように、本発明によれば、フィ
ルタに試料を付着させた後、そのフィルタをスライドグ
ラス上で溶解させるようにしているので、試料が破壊さ
れることなく確実に捕捉され、その試料のみがスライド
グラス上に配置されるようになる。したがって、試料を
正確、かつ容易に検鏡することのできる顕微鏡観察用標
本を得ることが可能となる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の標本作成方法における濾過及び染色
工程に用いられる器具の一例を示すもので、（Ａ）はそ
の一部縦断側面図、（Ｂ）はそのＢ−Ｂ線による垂直横
断面図、第２図は、フィルタに試料を付着させた状態を示す斜視
図、第３図は、そのフィルタをスライドグラス上に載せた状
態を示す拡大縦断側面図、第４図は、その方法によって得られた顕微鏡観察用標本
を示す斜視図である。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）観察試料を含む液を、溶剤によって溶解させ得る
材料からなるフィルタにより濾過して、そのフィルタ上
に試料を分離残留させ、その試料を染色した後、その試料が付着したフィルタをスライドグラス上に載せ
、次いで、そのフィルタを前記溶剤によって溶解させるこ
とからなる、顕微鏡観察用標本の作成方法。
（２）前記フィルタを溶解させるとき、前記スライドグ
ラスを加温することを特徴とする、特許請求の範囲第１項記載の顕微鏡観察用標本の作成方
法。
（３）前記フィルタが、多数の円形細孔を有するポリカ
ーボネート製フィルタであることを特徴とする、特許請求の範囲第１項記載の顕微鏡観察用標本の作成方
法。