JP3226178B2 - パップ分析方法および装置 - Google Patents

パップ分析方法および装置

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JP3226178B2 JP27178991A JP27178991A JP3226178B2 JP 3226178 B2 JP3226178 B2 JP 3226178B2 JP 27178991 A JP27178991 A JP 27178991A JP 27178991 A JP27178991 A JP 27178991A JP 3226178 B2 JP3226178 B2 JP 3226178B2
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ジョン・エイ・アンドレセン
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    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/30Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
    • G01N1/31Apparatus therefor

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、自動パップ試験方法に
関する。
【0002】
【従来の技術】現在行なわれている、子宮癌検査法の1
つであるパップ試験(Pap Test)は、婦人科医が、へら(s
patula) または綿棒(swab)を使用して、子宮頚管(cervi
x)から粘液(smear) をかき集め、この物質をスライドに
擦りつけることにより検体(specimen)を得る必要があ
る。スライドに固定液を噴霧して検体を保護し、次に実
験室へ運ぶ。次いで、検体を、別の多数の患者からの2
0以上の数多くの他のスライドとともにスライドホルダ
の中へ入れ、次に、手によりまたは自動浸漬機により、
それぞれ独自の容器に入れた種々のパップ試験溶液(約
18)に浸漬する。使用される容器は、小形であり、通
常はガラスであり、しかも通常は矩形の容器である。
【0003】
【発明が解決しようとする課題】この方法においては、
細胞は、各患者のスライドから落下しあるいは浮き上が
るとともに、容器の底に沈積しおよび/または別の患者
のスライドに付着するという問題がある。また、幾つか
の組のスライドを容器に浸漬すると、細胞をはじめとす
る検体物質の層が、容器の底に見受けられるようにな
る。更にまた、浸漬を行なうたびに、各容器の容液は、
先行する容器から持ち込まれる溶液と、スライドから分
離した物質とにより、組成が変化を受ける。
【0004】また、この方法は、全体として時間を要す
るものとなり、しかも上記した工程により、汚れたスラ
イドに起因する出力の変動を来す数多くの誤差を生ずる
とともに、各組のスライド間でも汚れの程度が互いに相
違したものとなる。
【0005】米国再発行特許第29,061号には、例
えば、女性の場合には膣とすることができる人の膣部(c
avity)に、該膣部に存在する血液を受けて保持すること
ができる内部を有する装置を導入することにより、血液
を集めて分析する方法が開示されている。例えば、この
装置は、月経の際に血液を溜めるために女性が膣に挿入
するタンポンとすることができる。このようにして集め
られた血液は、分析、例えば、パップ試験分析に供する
ことができる。
【0006】米国再発行特許第29,061号に記載の
ような血液を集める方法および装置は、通常のパップ粘
液またはかき集め試験と比べ、分析において一層の正確
度を発揮することができる。しかしながら、米国再発行
特許第29,061号に記載の方法および装置は極めて
簡便であるため、婦人科医を必要とすることなく一層迅
速な、自動化することができる分析が必要となる、とい
った問題が生ずるとともに、実験室は、分析を必要とす
る血液収集物で一杯となるおそれがある。更にまた、分
析用に集められた血液サンプルは著しい数に昇るので、
一層正確な分析が必要となる。
【0007】従って、本発明の目的は、血液、特に、月
経の際にタンポンなどにより集められた血液を迅速かつ
正確に分析する方法を提供することにある。
【0008】本発明の他の目的と利点は、明細書の説明
および特許請求の範囲の記載から明らかになるものであ
る。
【0009】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、パップ
分析方法が提供されている。この方法は、集められた月
経血液検体を固定溶液と接触させ、固定溶液と月経血液
とを振とうしまたは音波処理することにより血液検体か
らの細胞を固定溶液に懸濁させ、このようにして得られ
た懸濁細胞を含む固定溶液を、5−12ミクロンの孔サ
イズを有するフィルタが配設された容器に導入し、この
ようにして集められた検体を前記フィルタを介して洗浄
することにより、血液、粘液および臨床上関心のない他
の物質を容器から除去するとともに、臨床上関心のある
細胞をフィルタに保持し、フィルタに集められた細胞を
パップ溶液で処理するとともに、このようにパップ溶液
で処理された細胞をスライド上で細胞学者によりまたは
コンピュータ分析により分析することを特徴とする構成
に係る。
【0010】
【作用】上記構成の本発明においては、臨床上関心のあ
る細胞を含む月経血液はタンポンなどで集められ、フィ
ルタを備えた容器に入れられる。このフィルタは、血液
検体中の臨床上関心のある細胞は全てフィルタを通過す
ることができないが、臨床上関心のない細胞、例えば、
赤血球および白血球はフィルタを通ることができるよう
な孔サイズ有している。容器内の月経血液は、例えば、
食塩水溶液または平衡塩類溶液、例えば、リンガー溶液
(Ringer's solution) を用いて洗浄および逆流洗浄(bac
k washing)を行なうとともに、懸濁細胞(suspended cel
ls) を約18のパップ溶液で処理し、その後、容器内に
残っている細胞をガラススライドに載せ、細胞学者によ
る分析に供される。分析は、標準的なスライド試験によ
りまたはコンピュータを利用して行なうことができる。
【0011】本発明の容器において使用されるフィルタ
は、12ミクロンの孔サイズのフィルタであるのが好ま
しい。臨床上関心のある細胞は、25ミクロンよりも実
質上大きく、このフィルタの孔を通過することができな
い。これに対して、臨床上関心のない細胞、例えば、約
7ミクロンの大きさを有する赤血球および白血球は小さ
くて十分にフィルタを通ることができ、血漿とともに検
体から除去される。これは、洗浄と逆流洗浄を繰り返す
ことにより行なうことができる。
【0012】12ミクロンの孔のフィルタが好ましい
が、5乃至12ミクロンの範囲のフィルタも使用するこ
とができる。5−8ミクロンのサイズのフィルタを使用
する場合には、7ミクロンの赤血球と12ミクロンの白
血球は、加圧によりフィルタに強制的に通すことができ
る。
【0013】臨床上関心のある細胞だけを含むように処
理されたこの容器は、次に、容器を充填する量をもって
容器に連続して導入され、次いで除去される18のパッ
プ溶液で処理され、最終細胞をパップ工程に従って染色
剤処理する(stain) 。次に、細胞を、フィルタととも
に、あるいはフィルタなしにガラススライドに均質に被
着する。
【0014】本発明に従って処理を行なうことにより、
検体中の臨床上関心のある細胞は、外から入ってきたり
あるいは外へ出たりすることができないので、有効に捕
捉され、かくして、臨床上関心のある細胞の損失あるい
は利得が生じることはない。他の全ての細胞と流体は洗
い出され、最後に、臨床上関心のある細胞の清澄な懸濁
体(suspension)だけが得られ、この細胞は懸濁体におい
てパップ溶液を介して処理される。かくして、全体の時
間を短縮することができるとともに、分析の精度を高め
ることができ、しかも分析のばらつきをなくすことがで
きる。また、工程全体を通じて、労力、材料および時間
を節約することができ、従って、コストを節約すること
ができる。
【0015】本発明の方法に従って処理する場合の、試
験結果の精度の向上とばらつきの解消は、本発明の方法
に従って処理することにより多くの利点が得られる結果
として、達成されるものである。
【0016】かくして、本発明に従って洗浄が行なわ
れ、かつ、パップ溶液が使用されても、臨床上関心のあ
る細胞の損失や、他の患者の細胞による容器内の細胞の
汚染が生ずることはない。従って、臨床上関心のある細
胞が外から容器内へ入り込んだり、外へ出たりすること
はなく、しかも他の細胞が容器内に入り込むことはでき
ない。
【0017】本発明においては、細胞はスライド上で平
坦な形態をとっているのではなく、懸濁体の形態をとっ
ているので、種々のパップ溶液と細胞との接触に要する
時間は、通常のパップ手順に従って処理する場合に比べ
て、著しく短縮することができる。更にまた、容器を満
たすのにわずか数mlの溶液が必要となるだけであるの
で、溶液の量を有意に少なくすることできる。
【0018】本発明の方法によれば、新鮮な溶液が各回
ごとに使用され、しかもこの溶液は各使用後に排出され
るので、各検体は首尾一貫した態様で染色剤処理するこ
とができる。更にまた、パップ処理の最後に、細胞はフ
ィルタとともにあるいはフィルタなしにガラススライド
に均一に被着される。
【0019】かくして、本発明の作用を全体的に説明す
ると、次の通りである。
【0020】月経の際に使用されるタンポンを、女性か
ら取り出し、固定溶液を含むバイアル(vial)に入れる。
バイアルをシールし、実験室に運ぶ。実験室では、バイ
アルを振とうし、倒置し、渦巻き攪拌しあるいは穏やか
に音波処理して(sonicate)、細胞をタンポンから固定溶
液に移すとともに、固定溶液中で細胞の懸濁体を形成す
る。タンポンは除去して廃棄する。
【0021】細胞の懸濁体を、5−12ミクロンの孔を
有するフィルタ、好ましくは、12ミクロンの孔を有す
るフィルタを保持するフィルタホルダを備えた使い捨て
プラスチック注入器に注入する。血液および粘液(mucou
s)が除去されるまで溶液をフィルタに通すことにより、
細胞の洗浄と逆洗浄とを行なう。最後の洗浄が終ってか
ら、細胞を標準パップ溶液で処理し、フィルタ上に残
し、次いで、フィルタをガラススライドに留め、細胞学
者による分析に供される。
【0022】次に、大規模分析の手順を説明する。
【0023】各タンポンを、固定溶液を入れた別々のバ
イアルに挿入し、バイアルを穏やかに音波処理する機器
に入れて細胞をタンポンから固定溶液へ移すとともに、
固定溶液中に細胞懸濁体を形成する。細胞懸濁体を、機
器により、12ミクロンのフィルタを保持するフィルタ
ホルダを備えた、改良した使い捨てプラスチック注入器
に吸引する。機器によりバイアルとタンポンを除去し、
廃棄する。
【0024】機器は、血液と粘液とが除去されるまで細
胞の洗浄と逆洗浄とを行なうように、改良された使い捨
てプラスチック注入器を自動的に操作する。次に、機器
が改良された使い捨てプラスチック注入器を動かし、細
胞を標準パップ処理において使用される溶液の全てに順
次暴露される。この操作は、注入器を各溶液に順次移動
させるか、あるいは各溶液を順次注入器へ移動させるこ
とにより行なうことができる。いずれの場合にも、溶液
は1回使用され、次に排出される。
【0025】標準的なパップ法による処理が完了してか
ら、機器により、フィルタをガラススライドに載せ、あ
るいは細胞をガラススライド上へ遠心分離させる。いず
れの場合にも、細胞学者は、一度も手で触れることな
く、完全に自動的に、細胞の読み取りを容易に行なうこ
とができる。
【0026】本発明の別の実施例においては、標準パッ
プ試験の終了後に、細胞懸濁体は、細胞を読み取り、正
常ではない疑わしい細胞を分離し、細胞学者による分析
に供するために該細胞をスライドに載せるように構成さ
れた、現在商業的に入手することができる細胞カウンタ
/ソータ(counter/sorter)(レーザーマイクロスコー
プ)に導入される。通常のパップ粘液試験は懸濁液中の
十分な数の細胞を得ることができないので、かかる操作
は、通常のパップ粘液試験では行なうことができない。
これは、本発明のようにして、タンポンなどを利用しか
つ上記したように処理することにより月経血液を集める
ようにして、はじめて可能となるものである。
【0027】
【実施例】図1は、処理液を同じフィルタを介して導入
しかつ排出することができるように、一端にフィルタ2
を備えたシリンダ1を示す。フィルタ2は、フィルタ保
持リング3に保持されている。シリンダ1に対する処理
液の導入と排出は、ソレノイドバルブ4による制御のも
とで圧力/真空ポンプ5により、フィルタ2を介して交
互に行なわれる。
【0028】図2の実施例においては、シリンダ1′に
は2つのフィルタ2′が配設されており、各フィルタ
は、シリンダの各端部にフィルタ保持リング3′により
保持されている。ポンプ5′は、フィルタ2′を介して
処理液を一方の方向へ引き入れるように吸引し、バルブ
4′の開放と閉止が必要に応じて行なわれる。
【0029】図3に示すように、検体8を入れた収集容
器6を音波処理器7により音波処理し(sonicate)、細胞
を処理液に懸濁させる。懸濁された細胞を含む液8は、
アスピレータ9とポンプ10とにより、フィルタ保持リ
ング13に保持されているフィルタ12が設けられてい
るシリンダ11に吸引される。このようにして吸引され
た懸濁検体は、次に、パップ溶液による処理を受ける。
【0030】図4の実施例に示すように、パップ方法に
おいて使用される異なるパップ溶液をそれぞれ入れた溜
め14、14a、14bなどが、その中に含まれる細胞
を処理するために制御バルブ15および16によりシリ
ンダに交互に供給される。液、アルコール、染色剤(sta
in) などがそれぞれシリンダに通され、次いでシリンダ
から取り出される。種々の処理液を異なる入り口から系
に導入することができるように、供給路17が設けられ
ている。
【0031】本発明を実施する場合には、タンポンを女
性から取り出し、固定溶液を入れたバイアルの中へ入れ
る。固定剤は、細胞の現在の形態と構造、特に、核細部
(nuclear detail)を保持するために細胞学の分野におい
て使用されている。固定溶液は、例えば、10%の緩衝
ホルマリンまたは希釈したメチルもしくはエチルアルコ
ールとすることができ、あるいは固定溶液は、細胞が細
胞実験において処理されるまで、細胞の表面に薄い保護
被覆を形成して細胞を保護する、アルコールとワックス
の混合物とすることができる。
【0032】実験室においては、固定溶液にタンポンを
含むバイアルを振とうしかつ音波処理して、溶液中に細
胞懸濁体を形成する。タンポンを除去し、廃棄する。
【0033】細胞懸濁体を、5−12ミクロンのフィル
タ、好ましくは12ミクロンのフィルタを保持するフィ
ルタホルダを備えた使い捨てプラスチック注入器に入れ
る。血液と粘液が除去されて臨床上関心のある細胞だけ
がフィルタに残るまで、細胞の洗浄と逆流洗浄とを行な
う。次に、これらの細胞をパップ染色剤溶液(Pap stain
solution)で処理し、細胞変化を視認化する。染色剤
は、基本的には、青の核染色剤(nucleus stain) と、オ
レンジ、赤および緑の細胞質対比染色剤(counterstain)
とからなる。核染色剤は、正常細胞と異常細胞とに関
連のあるクロマチン(chromatin) パターンを示し、細胞
質染色剤は細胞の起源を指示する作用を行なう。細胞
は、一般に、18以上の異なる染色剤溶液に供され、そ
の後、フィルタをガラススライドに、上にして置くか、
あるいは細胞をガラススライド上で遠心分離処理し、そ
の後、細胞学者がスライドを読み取ることができる。
【0034】
【発明の効果】本発明は、以上のように構成されている
ので、血液、特に、月経の際にタンポンなどにより集め
られた血液を迅速かつ正確に分析することができる。例
えば、通常のパップ試験では、精度はわずか約90パー
セントに過ぎないが、上記のように構成されている本発
明によれば、100パーセントに近い精度を得ることが
できる。
【図面の簡単な説明】
【図1】バイアルまたはシリンダに1つのフィルタが設
けられている、本発明に係る方法を実施する装置を示す
概略部分断面図である。
【図2】バイアルまたはシリンダに2つのフィルタが設
けられている本発明の方法を実施する装置の別の例を示
す概略部分断面図である。
【図3】元の収集容器の検体を音波処理する方法を実施
する装置を示す概略部分断面図である。
【図4】細胞を処理するのに使用される液体をバルブに
より制御する方法を実施する装置を示す概略図である。
【符号の説明】
1、1′ シリンダ 2、2′ フィルタ 3、3′ フィルタ保持リング 4、4′ ソレノイドバルブ 5、5′ 圧力/真空ポンプ 6 収集容器 7 音波処理器 8 検体 9 アスピレータ 10 ポンプ 11 シリンダ 12 フィルタ 13 フィルタ保持リング 14、14a、14b 溜め 15、16 制御バルブ
フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭58−165785(JP,A) 特開 昭50−41378(JP,A) 米国特許4066359(US,A) (58)調査した分野(Int.Cl.7,DB名) G01N 33/50 G01N 33/48

Claims (6)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】集められた月経血液検体を固定溶液と接触
    させ、 固定溶液と月経血液とを振とうしまたは音波処理するこ
    とにより血液検体からの細胞を固定溶液に懸濁させ、 このようにして得られた懸濁細胞を含む固定溶液を、5
    −12ミクロンの孔サイズを有するフィルタが配設され
    た容器に導入し、 このようにして集められた検体を前記フィルタを介して
    洗浄することにより、血液、粘液および臨床上関心のな
    い他の物質を容器から除去するとともに、臨床上関心の
    ある細胞をフィルタに保持し、 フィルタに集められた細胞をパップ溶液で処理するとと
    もに、このようにパップ溶液で処理された細胞をスライ
    ド上で細胞学者によりまたはコンピュータ分析により分
    析することを特徴とするパップ分析方法。
  2. 【請求項2】月経血液をタンポンを用いて集めるととも
    に該タンポンを固定溶液に導入し、更に振とうまたは音
    波処理により細胞を固定溶液に懸濁させてからタンポン
    を除去して廃棄することを特徴とする請求項1に記載の
    方法。
  3. 【請求項3】フィルタは約12ミクロンの孔サイズを有
    することを特徴とする請求項2に記載の方法。
  4. 【請求項4】容器には1つのフィルタが配設され、検体
    は同じフィルタを介して洗浄および逆流洗浄されること
    を特徴とする請求項2に記載の方法。
  5. 【請求項5】容器には各端部にフィルタが配設され、洗
    浄はフィルタを介して一方通行により行なわれることを
    特徴とする請求項2に記載の方法。
  6. 【請求項6】前記細胞検体を担持するフィルタを備える
    容器を、細胞学的検査を行なうことができるように細胞
    を染色剤処理する各パップ溶液で連続して充填しかつ空
    にすることを特徴とする請求項2に記載の方法。
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