JP4071497B2 - サンプリングシステム - Google Patents
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Description
【発明の属する技術分野】
本発明は、サンプリングシステムに関し、特に、後の分析のための生物サンプルの保管のためのサンプリングシステムに関する。
【0002】
【従来の技術】
生物サンプルは、様々な目的のための後の分析のために、現場において度々収集される。遂行される分析は、大抵はサンプルの遺伝子プロファイルを確立するためのサンプル内に含まれるDNAの分析であろう。そのような分析が、例えば、ストック内の遺伝子の系統を立証及び/又は追跡するために、動物の特徴に対する遺伝子標識を識別することにより動物の望ましい特徴を識別するために、或いは、食料品における動物或いは植物の材料の由来を識別するために、実施されても良い。例えば、肉及び肉製品は、肉製品の加工の如何なる段階においても品質の劣る製品への置換が行われていない事を確認にするために、或いは、汚染されていることが市場において発見された肉の由来を識別するために、DNA分析を用いて追跡されても良い。
【0003】
個々の生物の識別を目的としたDNA分析は良く知られた技術である。例えば、米国特許第5,211,286号、米国特許第5,101,970号及び米国特許第5,856,102号は、この方法による個々の人間の識別のためのシステムを記載している。それぞれの場合において、発明は、行方不明になった人の識別を支援するために、その人の家の中に髪の毛のようなDNAを含むサンプルを封止可能なプラスチック製の封筒の中に保管する個人識別システムに関連する。しかしながら、当該システムの内容物の改変又は他のサンプルへの置換を回避する方法がないので、これらの各サンプルは、サンプルの信憑性を確認する分析の着手以前に、DNAを含んだ材料のそれら取り扱いの善意を当てにしている。従って、そのようなシステムの使用は、家庭用冷凍庫内のようにサンプルを管理できる場合に、個人が自分自身のDNAを含む材料のサンプルを保管するのみである。
【0004】
製造工程を通して肉及び肉製品の同一性を追跡することが可能であることを確認する試みが、様々な方法で行われてきた。例えば、バッチ又は輸送貨物上の牛肉、豚肉、鶏肉の同一性は、食肉処理過程を通じて消費者にバッチ/輸送貨物元が付されたバッチ/輸送貨物番号を用いて、時々記録される。なお、幾つかの国、例えば英国では、政府機関が、数字又はアルファベット−数字コードを農家に配布し、その後、農家は、彼らにより飼育される各動物にそのようなコードを割り当てる。割り付けられたコードは、一般的に、動物に取り付けられた耳タグに刻まれており、及び、その動物の特有の識別のためにその動物に固有のカードに記録されている。さらに、動物のワクチン摂取記録のような動物の様々な他のデータが記録されても良い。情報を段階的に又は動物の食肉処理に先だってある時点で、政府機関へ転送することが可能である。それでもやはり、当該システムは管理的に集中しており、識別及び試験記録は、容易に統合されない。
【0005】
食肉処理工程において、動物が大抵初期の段階で分割され、そして当該動物の各半分を識別するサブコードが生成され、当該半分を識別するために継続して用いられる。しかしながら、肉の各バッチにコードを割り当てる続けることが実行不可能となった時点でも、解体工程において更なる分割が後に行われる。従って、工程を通してずっとタグ又はラベルを用いて肉の識別を継続させる試みが行われたが、そのようなタグ及びラベルが正確に適用されることを確認することは困難である。それ故に、そのようなシステムにおいて提供された情報は不正確であり、当該システムは非常に労働集約的であり、高価なものである。従って、肉及び肉製品は、由来である動物まで遡り食肉処理工程を通して製品を追跡することが可能な如何なる識別用タグ又はラベルを用いないで、頻繁に小売りされるであろう。
【0006】
国際出願PCT/IE98/00021は、肉製品の由来である動物を識別するための方法であって、肉の遺伝子型を調べ、既知の動物の遺伝子型と当該遺伝子型を比較し、肉製品の由来である動物を識別するために対応する如何なる遺伝子型をも位置させる方法を記載している。この方法を適用するには、全ての動物について遂行されたDNA分析、及び蓄積されたデータ及び、そして試験された如何なる肉製品にも対応されたデータが要求される。代わりに、その様な動物からのサンプルを保管し、そして必要となった場合、後に分析することが可能である。いずれの場合も、日常的な品質保証の目的のために(例えば、品質の劣る肉への置換を生じさせないことを保証するために製品の経緯を追跡する)、又は、例えば肉の汚染を識別した場合、のいずれにしても、動物の遺伝子情報のライブラリーが構築され、分析された肉のDNAプロファイルと比較され、その結果として、汚染の原因の識別のために努力して販売元にまで遡って肉を追跡しても良い。
【0007】
国際出願PCT/IE98/00021において提案されたサンプリングシステムは、従来の方法により動物からサンプルを抽出し、そしてそれらを動物のタグの識別用コードを付した識別用チューブ或いは房に入れる必要があるが、如何なる方法によっても安全ではない。そして、サンプルはPCR分析のために研究室に移送される。ラベルを付したチューブ又は房は、各ウェル(縦穴)が動物のタグの識別用コードに対応したコードを具備した多数のウェルを有するマイクロタイタープレートのウェルに置かれる。分析は、当該ラベルを付したマイクロタイタープレートにおいて遂行されるが、手動でコードを対応させる場合は別として、正しい識別用チューブ又は房がマイクロタイタープレートの正しいウェルに置かれたことを確認する方法はない。それ故、マイクロタイタープレートからのコードのみがその後の識別に使用されるならば、間違いが起こり得る。しかしながら、識別用チューブ又は房は安全ではないので、そのような房又はチューブが分析を実施する研究室に到着するずっと前に、サンプルが一つのチューブ又は房から他に移動させられる可能性があることは、さらに大きな懸念である。従って、不正な意図で、人が、DNA分析のために提供されたサンプルのうちの一つのサンプルを他のサンプルに置き換えるようとしたら、当該置換は発見されることはないであろう。本発明は、サンプルの分析が遂行される場合に、確実性をもって、生物サンプルの同一性を知得する方法を提供することを目的とする。
【0008】
【発明の概要】
本発明の第1の観点によれば、後の分析のための生物サンプルの収集及び保管のためのサンプル収集装置であって、内容物が明白に分かる(保管手段の損傷等により内容物の改変が明白に分かる)前記サンプルの保管のための保管手段を有し、前記保管手段が、前記生物サンプルが基礎シートに位置付けられるように配置された基礎シートと、前記基礎シートに対してヒンジ動作で固定され、前記基礎シートとカバーシートとの対向する表面の少なくとも実質的な一部を覆うように、前記基礎シートに対して実質的に不可逆的に接着されて固定されるように適合されたカバーシートと、前記基礎シートに対向する前記カバーシートの表面に取り外し可能に固定された裏貼シートと、を有し、前記保管手段が、前記生物サンプルと共に消化(ダイジェスション(digestion):低分子化合物に分解)されるのに適当であるサンプル収集装置が提供される。
【0009】
本発明の第2の観点によれば、生物サンプルの分析のためのシステムであって、前記生物サンプルと共に消化されるのに適合され、内容物が明白に分かる前記サンプルの保管のための保管手段を具備した生物サンプルの収集及び保管のためのサンプル収集装置と、前記生物サンプルを収納した前記保管手段の少なくとも一部と共に分析のための前記サンプルの少なくとも一部を取得する取得手段と、前記保管手段の少なくとも前記一部と共に前記サンプル又は前記サンプルの一部を消化する消化手段と、前記サンプルを分析するための分析手段と、を有するシステムが提供される。
【0010】
本発明の第3の観点によれば、後の分析のための前記生物サンプルの収集及び保管方法であって、前記生物サンプルの収集及び保管のためのサンプル収集装置が、前記生物サンプルと共に消化されるのに適当であり、内容物が明白に分かる前記サンプルの保管のための保管手段を有し、前記保管手段が、前記生物サンプルが基礎シートに位置付けられるように配置された基礎シートと、前記基礎シートに対してヒンジ動作で固定され、前記基礎シートとカバーシートとの対向する表面の少なくとも実質的な一部を覆うように、前記基礎シートに対して実質的に不可逆的に接着されて固定されるように適合されたカバーシートと、前記基礎シートに対向する前記カバーシートの表面に取り外し可能に固定された裏貼シートと、を有し、前記サンプル収集装置を準備する準備工程と、前記サンプルを、前記保管手段の前記基礎シートに保管する保管工程と、からなる収集及び保管方法が提供される。
【0011】
本発明の第4の観点によれば、生物サンプルの分析方法であって、前記生物サンプルと共に消化されるのに適当であり、内容物が明白に分かる前記サンプルの保管のための保管手段を具備した生物サンプルの保管のためのサンプル収集装置を準備する準備工程と、前記サンプルを収納した前記保管手段の少なくとも一部と共に前記サンプルの少なくとも一部を取得する取得工程と、前記保管手段の少なくとも前記一部とともに、前記サンプル或いは前記サンプルの一部を消化する消化工程と、前記サンプルを分析する分析工程と、を有する分析方法が提供される。
【0012】
本発明の第5の観点によれば、後の分析のための生物サンプルの収集及び保管のためのサンプル収集装置であって、前記生物サンプルが基礎シートに位置付けられるように配置された基礎シートと、前記基礎シートに対してヒンジ動作で固定され、前記基礎シートとカバーシートとの対向する表面の少なくとも実質的な一部を覆うように、前記基礎シートに対して実質的に不可逆的に接着されて固定されるように適合されたカバーシートと、前記基礎シートに対向する前記カバーシートの表面に取り外し可能に固定された裏貼シートと、を有するサンプル収集装置が提供される。
【0013】
本発明の第6の観点によれば、生物サンプルの収集及び保管方法であって、基礎シートが、当該基礎シートに対してヒンジ動作で固定されたカバーシートを有し、前記カバーシートが、前記基礎シートと前記カバーシートとの対向する表面の少なくとも実質的な一部を覆うように、前記基礎シートに対して実質的に不可逆的に接着されて固定されるように適合されており、前記カバーシートに取り外し可能に固定された裏貼シートを支持しており、前記生物サンプルを、基礎シートに付着する付着工程と、前記裏貼シートを取り外す取外工程と、前記カバーシートを、前記基礎シート及び/又は前記基礎シートに位置された前記生物サンプルに、実質的に不可逆的に接着させる接着工程と、を有する収集及び保管方法が提供される。
【0014】
特に、前記カバーシートが、持続的な粘着剤で当該カバーシート全体表面に渡って被膜されても良く、裏貼シートが固定されていない前記カバーシートの一部が、前記カバーシートと前記基礎シートとの間のヒンジ動作可能な接続部を構成する。生物サンプルの収集における利用のための設置以前にそれが基礎シートに付着するのを防止するために、裏貼シートがカバーシートの表面に取り外し可能に広く固定されている。
【0015】
有利なことに、前記基礎シートは、当該基礎シートの裏面に印刷されている。バーコードが、装置の使用の指示と共に当該シートに及び/又は識別用コードを記入する領域に印刷されていても良い。
【0016】
有利なことに、前記基礎シートは、一枚の紙であり、典型的に一枚の光沢アート紙である。前記カバーシートは、典型的に透明なポリプロピレンの膜であり、裏貼シートは剥離紙である。
【0017】
生物サンプルは、動物の毛、皮、口のスワブ、血液、骨、鱗又は動物の臓器等を含む如何なる適当な身体部であっても良く、葉、茎又は木製材料のような植物材料であっても良い。血液、唾液、精液、尿等を含む体液もサンプルとして抽出されても良い。
【0018】
好ましくは、サンプルは、DNAプロファイルを確立するために分析が行われるが、分析は、前記サンプルに含まれた如何なる材料の分析であっても良く、前記サンプルは、分析に十分な量の当該材料が存在し、前記保管手段内に分析を妨害する材料が存在しないように具備されている。例えば、サンプルはタンパク質又は脂質の含有量、或いは、炭水化物又は脂質の様な他の材料の含有量を分析しても良い。さらに、化学汚染物、例えばサンプル内の殺虫剤のような化学薬品の存在を分析しても良い。典型的に、分析は、ポリメラーゼ・チェイン・リアクション(PCR:Polymerase Chain Reaction)を用いて動物の毛のようなサンプルに含まれるDNAの増幅を有し、その後に遺伝子プロファイルを確立するためのDNA配列の決定が続く。使用される分析の目的は、例えば、ストック内の遺伝子の系統を立証及び/又は追跡し、動物の特徴に対する遺伝子標識を識別することにより動物の望ましい特徴を識別し、或いは、食料品の動物又は植物材料の由来を識別することである。特に、肉製品の加工の如何なる段階においても劣る品質の製品の置換が発生していないことを確認するために、又は、市場において汚染が発見された肉の由来を識別するために肉及び肉製品はDNA分析を用いて追跡されても良い。
【0019】
典型的に、従来のパンチ加工装置を用いて、サンプルを収納した前記保管手段の一部と共に、収集されたサンプルの少なくとも一部をパンチ加工することによって、分析のためのサンプルが取得される。例えば、サンプルをある容器から他の容器に移す場合に発生するような汚染が、この過程において発生しないことが理解されるであろう。さらに、この段階でのサンプルの偶発的な交換の可能性はないので、サンプルの信憑性は確実なものとされる。
【0020】
サンプルは、前記保管手段の一部と共に、分析のための従来の手段により消化される。PCR分析のDNAの場合、これは、従来のアルカリ抽出又はフェノール/クロロホルム抽出によってでも良い。このステップにおいて、前記保管手段を構成する材料は、溶解され又は部分的に溶解されても良いが、少なくともDNAプロファイルの展開を妨げてはならない。
【0021】
本発明の特に好ましい実施形態において、さらに装置が、動物のタグの識別用コードに一致する又は関連するコードを有している。この事は、その動物に関連して具備された同一の特有の識別子又は異なる特有の識別子によって、サンプルを取得した時点で動物からのサンプルが識別され、当該特有の識別子が、サンプルが取得された時から、サンプルが分析されるまでサンプルに物理的に並置されたままであることを意味する。内容物が明白に分かる保管手段を与えることにより、収集後の如何なる改変も、例えばサンプルを保管したとき、サンプルを分析する人により容易に明らかになる。
【0022】
典型的に前記基礎シートが、生物サンプルを第1の表面に位置づけるように適合されており、第2の表面にサンプルを識別するための印刷がされている。典型的に、当該印刷は、動物のタグの識別用コードを記号化したバーコード又は動物の識別用コード自体である。後者の場合において、サンプルを取得する人によって、適当な空白にコードが記入されても良い。典型的に、さらに第2の表面がサンプル収集装置の使用方法についての情報を有する。
【0023】
基礎シートは、典型的に実質的に矩形の形状の一枚のシートであり、従って、第1の表面が前記基礎シートの表であり、第2の表面がその裏面である。好ましくは、基礎シートは、強力な接着を確実にする光沢アート紙であり、遂行される分析を阻止し又は妨害する如何なる化学薬品も含むべきではない。典型的に、それは1枚の150g/m2のA2サイズの光沢アート紙である。
【0024】
本発明に従って複数の装置を接続するために、実質的に矩形の形状の各基礎シートが、実質的に同一シートに対して切取線で連結されていても良い。これは、そこから個々のサンプル保管装置をちぎり取るようなロールとして利用者に装置を提供させる。カバーシートもまた、切取線によって隣接するカバーシートで連結されていても良く、この場合において、個々のサンプル保管装置を取り外すために、隣接するカバーシートからのカバーシートの分離もまた必要である。代わりに、好ましくないが、切取線によってカバーシートのみが隣接するカバーシートに連結されていても良い。
【0025】
さらに、基礎シート及びカバーシートはそこから得られる楕円状の切り込みを有しており、カバーシートからの裏貼シートの取り外しを容易にし、さらに、ロールの印刷の間の個々のサンプル保管装置のロールの整列において有用である。カバーシートは、従来の如何なる方法により基礎シートに対してヒンジ動作で固定されていても良いが、典型的に基礎シートの端部の近傍のラインに沿った接着的な固定を介してそこに固定されている。接着的な固定は、前記端部の長手方向に全体に沿って、又は前記エッジの一部に沿って固定されても良い。
【0026】
典型的に、カバーシートが、持続的な粘着剤でその表面全体に渡って被膜され、裏貼シートが、生物サンプルを入れるカバーシートの一部に付けられている。そして、カバーシートを基礎シートに対してヒンジ動作で固定するために、カバーシートの残りの部分は基礎シートに接着されている。
【0027】
カバーシートは、典型的に重合体の膜であり、好ましくは透明なポリプロピレンの膜である。
【0028】
粘着剤は、如何なる適当な粘着剤であっても良く、典型的に感圧型粘着剤である。分析工程内に如何なる異質のDNAも取り入れないように、それには動物製品を含めないべきである。
【0029】
典型的に、裏貼シートは剥離紙である。使用において、裏貼シートがカバーシートから剥がされた時、カバーシート上の粘着剤は、強固に、実質的に不可逆的に前記基礎シートに接合する。基礎シートからカバーシートを剥がす如何なる試みも、典型的に基礎シート及び/又はカバーシートの破壊、或いは、少なくとも二つの十分な損傷を生じさせ、サンプルの改変の試みを明白にする。
【0030】
吸収材が、前記基礎シートの正面の表面に固定されても良い。これは、これらの量を吸収層によって吸収するので、より容易に体液の収集物を作る。典型的に、吸収層は吸取紙である。
【0031】
さらに、本発明に従って装置は、動物の組織の抽出のためのサンプリング装置と共に供給されても良い。
【0032】
サンプル収集装置は、さらにサンプリング装置を有するキットの一部として供給されても良い。好ましくは、サンプリング装置は、動物から不変の複製可能なサンプルを取得すると同時に、組織の如何なるクロスコンタミネーションをも回避する。サンプリング装置の種類は、当業者に良く知られているが、典型的には、ピンセット又はプライヤーである。さらに、キットがサンプル収集装置の使用のための指示を有しても良い。
【0033】
【発明の実施の形態】
添付した図を参照して、単なる実施例により、以下に本発明の好ましい実施形態について説明する。ここにおいて、
【0034】
図1は、本発明による生物サンプルを保管するための装置の下面図である。
図2は、本発明による生物サンプルを保管するための装置の断面図である。
図3aは、本発明による生物サンプルを保管するための装置の使用のための準備の方法を図示したフローチャートである。
図3bは、生物サンプルの前記装置へのその後の適用を図示したフローチャートである。
図3cは、分析のために前記サンプルの一部の取得の方法を図示したフローチャートである。
図4は、本発明による体液のサンプルの保管のための装置を示す図である。
【0035】
図2及び図3aの第1フレームにおいて最もよく分かるように、本発明によるサンプル保管装置10は、基礎シート11と、カバーシート12とを有しており、基礎シート11は生物サンプルがそこに位置付けられるように配置され、カバーシート12は、基礎シート11に対してヒンジ動作で固定され、且つ、裏貼シート13が取り外し可能にそこに固定されている。基礎シート11は、その裏面14に印刷がなされており、当該裏面14には、バーコード15と、さらにサンプルを作る人がバーコードを読み取るための機器を有しない場合に動物のタグの識別用コードを記入するための空間とを有している。さらに、基礎シート11の裏面14は、図3aから図3cに関して以下に説明するような装置の利用のための指示を有している。基礎シート11は、図3bの第1フレームにおいて最も良く分かるように、当該シートの表面17上に生物サンプルを受け取るように適合された一枚の150g/m2のA2サイズの光沢アート紙であり、生物サンプル18がそこに置かれる。さらに、裏貼シート13がそこから取り外され、基礎シート11とカバーシート12との二つが共に合わせられた時、基礎シート11が実質的に不可逆的にカバーシート12に接着される。
【0036】
図3aにおいて最も良く分かるように、カバーシート12は、基礎シート11に対してヒンジ動作で固定されている。実際、基礎シート11に対向するカバーシート12の表面19は、接着剤(粘着剤)で完全に覆われ、裏貼シート13は、カバーシート12の一部だけを覆うように取り外し可能に固定されている。裏貼シート13は、剥離紙で作られており、カバーシート12から容易に剥がすことが可能であり、カバーシート12上の接着剤が基礎シート11を実質的に不可逆的に接着することが理解されるであろう。これにより、裏貼シート13により覆われなくなったカバーシート12の一部が基礎シート11に強力に接着される。従って、裏貼シート13により覆われていないカバーシート12の領域をそのままの状態にしておくことによって、カバーシート12を基礎シート11に対してヒンジ動作で固定することが可能となる。この場合、裏貼シート13は、実質的に矩形形状であり、側部20、21の長さがカバーシート12の側部22、23より若干小さいことを除いて、カバーシート12の寸法に一致する寸法であり、カバーシート12も実質的に矩形の形状である。従って、端部近傍のカバーシート12の小さな一部が露出されたままであり、そして、線24に沿ってヒンジ接続部を形成するために、基礎シート11に接着されている。
【0037】
図4において最も良く分かるように、正方形の吸取紙30が、基礎シート11の表面17に接着されても良い。血液、唾液、精液及び尿のような体液のサンプルが当該吸取紙の上に置かれても良く、それらは吸収されるであろう。
【0038】
使用に際して、生物サンプルを取得する人が、基礎シート11の裏面14にある指示を読み、これらに従うであろう。従って、その人は、図3aに示される方法で裏貼シート13を剥がすことを指示され、カバーシート12の接着剤を露出させる。そして、この人は、生物サンプル18を基礎シート11の表面17の上に正確に置き、カバーシート12を生物サンプル18及び基礎シート11上に折り畳み、それらを接着する。この事は、図3bにおいて最も良く分かる。これが完了したら、生物サンプルは保管され、又は、直ぐに分析のために送られることが可能である。裏に記入されたバーコード又は動物のタグの識別用コードは、サンプル保管装置10に収納されたサンプルに、常に物理的に並置している。仮に、何者かが、基礎シート11からカバーシート12を剥がすことにより、サンプルを取り去ることを試みても、一方或いは両方のシートを損傷し、サンプルの分析を後に行う人によってサンプルの信憑性を損ねるその試みが気付かれるであろう。
【0039】
サンプルの分析を遂行する必要がある場合、生物サンプル18の中央部を貫通した穴をパンチ加工するために、パンチ25が使用され、その結果として、サブサンプル26が作り出される。当該パンチが、生物サンプルを収納した基礎シート11及びカバーシート12の両方の一部と共に当該生物サンプルを取り除くことが理解されるであろう。生物サンプル18は、分析前にサンプル保管装置10から取り除かれる必要はなく、従って、クロスコンタミネーションの可能性は最小化され、サンプルの改変又は他のサンプルでの置換の機会は、分析の段階においてさらに制限される。パンチ加工されたサブサンプル26は、直ぐに消化及び従来方法における後の分析のための適当な容器に入れられる。
【0040】
そして、サンプルの由来である動物について編集された情報に追加するために、分析の結果が動物のタグの識別用コード及び/又はバーコードと対応付けされる。この事は、動物の遺伝子の同一性の識別を明確にし、そして肉の如何なる一つの断片の由来をも識別するために、肉のサンプルの後のDNA分析と、これらの記録との比較を可能とする。さらに、この事は、肉又は肉製品の置換が発生しなかったことを保証するための検査の仕方を確立させ、食肉処理工程を通して特定の動物まで遡った汚染された肉の追跡を通して、汚染の由来を識別させる。
【0041】
さらに、分析の結果は立証に用いられても良く及び/ストック内の遺伝子の系統の追跡に用いられても良い。それ故に、その動物の編集されたDNAプロファイルと、他の動物の確立された記録とを比較することによって、動物の意図された血統が確認されても良い。試験された特定の動物が望ましい特徴を有する場合、試験の結果が、この特徴に対する遺伝子標識を識別するのに用いられても良い。その後、血統の中に広く好ましい特徴を確立するために努力して飼育する場合、この遺伝子標識を持つ動物が選択されても良い。
【0042】
代わりに、分析は、生物サンプルの構造を確立する化学的な分析で合っても良い。例えば、サンプルはタンパク質又はミネラルの含有量、或いは、炭水化物又は脂質のような他の材料の含有量の分析が行われても良い。さらに、分析は、化学的汚染物のような化学物質の存在のためであっても良い。例えば、サンプル内の殺虫剤のレベルの痕跡の存在を発見することが可能であり、そして汚染物はその由来に遡って追跡される。
【0043】
[実施例1]そして、本発明による収集され保管された生物サンプルは、以下の方法を用いてDNAプロファイルを得るために、PCR分析されても良い。
【0044】
アルカリ抽出法:本発明に従って、穴がサンプル保管装置の中央部を貫通して生物サンプルの位置する領域にパンチ加工される。それ故、サブサンプルは、生物サンプルを収納したサンプル保管装置の一部と共に生物サンプルの一部を含んで作り出される。そして、この材料が0.2μlのチューブ又は96穴のマイクロタイタープレートのウェルに置かれる。そのチューブ又はプレートは、簡単に遠心分離され、その結果として、サブサンプルがチューブ又はプレートのウェルの底部に収集される。50μlの200mMの水酸化ナトリウム溶液が加えられ、その混合物が95℃で数分間培養される。チューブ又はウェルの内容物は、培養の間に、加熱ブロックからチューブ又はプレートを素早く取り外し、数回軽くたたくことにより、2〜3回混合される。そして、混合物は、チューブ又はプレートの蓋にある如何なる濃縮物も落とすために、簡単に遠心分離される。その後、200mMのHCLと100mMのトリス−HCLを含む50μl、pH8.5の溶液を加え、13000rpmで2分間の遠心分離する前に、当該混合物を簡単に混合する。次のステップにおいて、80μlの上清を新たなチューブ/プレートに移し、100μlの殺菌した超純水で希釈される。当該溶液は、PCRにおける1〜2μlの後の使用のために−20℃で保管される。
【0045】
増幅と分析:使用されるPCR技術は従来のものであり、当業者によく知られている。一般的に、鋳型熱変性、プライマーのアニーリング、TaqDNAポリメラーゼによるアニーリングされたプライマーの伸長反応を含む繰り返しの一連の熱サイクルを有するプロセスであり、特定の短いDNA配列の指数的な蓄積の結果が得られる。これらのDNA配列は、サンプルが取得された動物の特徴であり、DNA配列で典型的に一定の長さの変化を繰り返し、又は、動物の識別を可能とするマイクロサテライトを有する。特に、試験された動物の種に特有のマイクロサテライトの遺伝子座が、PCR工程を用いて増幅され、分析されることが可能である。適切なプライマーが良く知られており、例えば、ストックマークス(stockmarks)の名の下でパーキンエルマー社(Perkin Elmer)により販売されているキャトル パターニティー ボビン タイピングキット(cattle paternity bovine typing kit)に含まれる。当該キットは、これらの遺伝子座で動物を試験するために必要とする標札を付していないプライマー、ポリメラーゼ、照合する牛のDNA、dNTP溶液及びバッファのみならず、牛の識別に有効な特有の11のマイクロサテライトの遺伝子座に蛍光のプライマーを含んでいる。いずれにしても、キットは、当業者が良く理解出来るよう分析を遂行するための手続きを記載している。
【0046】
そして、増幅された産物は、商業的に入手可能なような適当なDNA分析システムでDNA断片分析が行われても良い。それ故、得られたDNAプロファイルは、特有であり、上述の追跡検査を通して得られたサンプルの由来である動物に一義的に関連している。一致する部分を突き止めるために、後に取得される組織サンプルの遺伝子プロファイルを、これらの遺伝子プロファイルのデータベース上で検索することが可能である。従って、組織サンプルの由来である本来の動物を識別することが可能となる。
【0047】
この明細書及び請求項の全体を通じて、「有する」及び、「有している」の言葉は、内容により要求される場合を除いて、限定的でない意味で用いられている。
【0048】
この装置の変形及び修正は、当業者によって明白であり、それら変形及び修正は本発明の範囲内である。
【0049】
工業的適用可能性:本発明は、現場で抽出され及び研究室で後に分析される生物サンプルの信憑性を確実にした。それ故、サンプルが改変されておらず、又は輸送中に修正されていないという保証の下で、サンプルの遺伝子プロファイルを確立したり、又は、その構成を突き止めるために、サンプルの分析が遂行されても良い。この事は、正確な結果を保証する下で、ストック内の遺伝子の系統を立証及び/又は追跡し、それらの特徴の遺伝子標識を識別することにより動物の望ましい特徴を識別し、又は、食料品の動物又は植物材料の由来を識別するための分析を遂行することを可能とする。同様に、サンプルは、タンパク質又はミネラルの含有量を分析されても良く、或いは、炭水化物又は脂質などのような他の材料の含有量の分析を分析されても良く、その結果が保証されても良い。特に、輸送中にどんな形であれサンプルが修正されていないという保証の下で、化学的な汚染物質の存在の分析が遂行されても良い。
【図面の簡単な説明】
【図1】図1は、本発明による生物サンプルを保管するための装置の下面図である。
【図2】図2は、本発明による生物サンプルを保管するための装置の断面図である。
【図3】図3aは、本発明による生物サンプルを保管するための装置の使用のための準備の方法を図示したフローチャートであり、図3bは、生物サンプルの前記装置へのその後の適用を図示したフローチャートである。また、図3cは、分析のために前記サンプルの一部の取得の方法を図示したフローチャートである。
【図4】図4は、本発明による体液のサンプルの保管のための装置を示す図である。
Claims (18)
- 後の分析のための生物サンプルの収集及び保管のためのサンプル収集装置であって、
内容物が明白に分かる前記サンプルの保管のための保管手段を有し、
前記保管手段が、
前記生物サンプルが基礎シートに位置付けられるように配置された基礎シートと、
前記基礎シートと対向する表面全体が、前記基礎シートに対して実質的に不可逆的に接着されて固定することが可能な持続的な粘着剤で被膜され、当該粘着剤被膜面に対向する前記基礎シートを覆うことが可能なカバーシートと、
前記基礎シートに対向する前記カバーシートの表面に取り外し可能に固定された裏貼シートと、を有し、
前記カバーシートは、前記裏貼シートが固定されていない前記カバーシートの一部が、前記カバーシートと前記基礎シートとの間のヒンジ動作可能な接続部を構成し、
前記生物サンプルが収納された前記保管手段の少なくとも一部は、前記後の分析において前記生物サンプルと共に消化されるサンプル収集装置。 - 前記粘着剤が、感圧型粘着剤である請求項1記載の装置。
- 印刷が、前記基礎シートの裏面にある請求項1または2に記載の装置。
- バーコードが、前記基礎シートの裏面に印刷されている請求項3記載の装置。
- 前記基礎シートが、紙である請求項1から4の何れかに記載の装置。
- 前記基礎シートが、光沢アート紙である請求項5記載の装置。
- 前記カバーシートが、透明なポリプロピレンの膜である請求項1から6の何れかに記載の装置。
- 前記裏貼シートが、剥離紙である請求項1から7の何れかに記載の装置。
- 生物サンプルの分析のためのシステムであって、
請求項1から8の何れかに記載の生物サンプル収集装置と、
前記生物サンプルを収納した前記保管手段の少なくとも一部と共に分析のための前記サンプルの少なくとも一部を取得する取得手段と、
前記保管手段の少なくとも前記一部と共に前記サンプル又は前記サンプルの一部を消化する消化手段と、
前記サンプルを分析するための分析手段と、を有するシステム。 - 穴パンチ加工により、前記サンプルを収納した前記保管手段の一部と共に分析のための前記サンプルの一部を取得する請求項9に記載のシステム。
- 前記サンプルが、アルカリ抽出において消化される請求項9または10に記載のシステム。
- 前記サンプルが、PCRにより増幅処理され、DNAの配列が決定される請求項9から11の何れかに記載のシステム。
- 後の分析のための生物サンプルの収集及び保管方法であって、
請求項1から8の何れかに記載のサンプル収集装置を準備する準備工程と、
前記サンプルを、前記保管手段の前記基礎シートに保管する保管工程と、からなる収集及び保管方法。 - 前記生物サンプルが、所定の延長された期間の間保管される請求項13に記載の方法。
- 生物サンプルの分析方法であって、
請求項1から8の何れかに記載のサンプル収集装置を準備する準備工程と、
前記サンプルを収納した前記保管手段の少なくとも一部と共に前記サンプルの少なくとも一部を取得する取得工程と、
前記保管手段の少なくとも前記一部とともに、前記サンプル或いは前記サンプルの一部を消化する消化工程と、
前記サンプルを分析する分析工程と、を有する分析方法。 - 前記サンプルの一部が、穴パンチにより前記サンプル収集装置から外へパンチ加工される請求項15に記載の方法。
- 前記サンプルが、アルカリ抽出において消化される請求項15または16に記載の方法。
- 前記サンプルが、PCRにより増幅処理され、DNAの配列が決定される請求項15から17の何れかに記載の方法。
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