ES2309238T3 - Composicion farmaceutica que contiene el receptor fc gamma iib soluble. - Google Patents

Abstract

Composición farmacéutica en forma de una solución acuosa, caracterizada porque contiene el FcgammaR IIb soluble, producido por vía recombinante, a partir de sistemas de expresión eucarióticos o en particular procarióticos, en una cantidad de 40 a 4.000 mg, de manera preferida de 100 a 1.000 mg y en una concentración hasta de 50 mg/ml y eventualmente otras sustancias coadyuvantes y/o de vehículo farmacéuticamente aceptables.

Description

Composición farmacéutica que contiene el receptor Fc \gamma IIb soluble.

El presente invento se refiere a composiciones farmacéuticas, que contienen el receptor Fc\gammaR IIb en una forma soluble, producida por vía recombinante.

Los receptores Fc (FcR's) desempeñan un importante cometido en el caso de reacciones de defensa del sistema inmunitario. Después de que unos agentes patógenos han encontrado acceso a la circulación sanguínea, son fijados por inmunoglobulinas, los anticuerpos. Los complejos inmunológicos resultantes a partir de esto, a causa de su multivalencia con los fragmentos Fc de los anticuerpos, se fijan con alta avidez a fagocitos que presentan a receptores Fc, los cuales destruyen y eliminan a los agentes patógenos. También unas células accesorias, tales como células asesinas naturales, eosinófilos y células cebadas, llevan en su superficie receptores Fc, que después de la fijación de complejos inmunológicos ponen en libertad mediadores almacenados, tales como factores de crecimiento o toxinas, que apoyan a la respuesta inmunitaria.

Los receptores Fc de las células accesorias son por lo tanto moléculas de señal y, al realizar la respuesta inmunitaria humoral, fijan específicamente inmunoglobulinas de diferentes isotipos. Además, los receptores Fc pueden activar para esto a células asesinas naturales, con el fin de destruir células dianas afectadas por anticuerpos ("Antibody Dependent Cell-mediated Citotoxicity", ADCC, citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos).

Junto a los efectos positivos de los FcRs, que defienden de agentes patógenos, no obstante, pueden aparecer también reacciones excesivas, que en el caso de personas sanas producen una estimulación indeseada del sistema inmunitario, las cuales se exteriorizan en particular en alergias o enfermedades autoinmunitarias. Tales reacciones inmunitarias, dirigidas contra sustancias propias del cuerpo, siguen siendo un gran problema médico, para el cual existen ciertamente enfoques de tratamiento, que sin embargo no actúan igual de bien en cualquier paciente.

También con la presencia de concentraciones aumentadas de células asesinas naturales (células NK = Natural Killer cells), que asimismo se forman a causa de reacciones inmunitarias excesivas, van aparejados problemas médicos. Así, se ha observado que en el caso de mujeres embarazadas con un nivel aumentado de células NK se presentan con frecuencia abortos, puesto que se impiden tanto la nidación como también el crecimiento intrauterino del feto. Para el tratamiento de mujeres embarazadas con niveles aumentados de células NK, se administran hasta ahora inmunoglobulinas en una alta dosificación por una vía intravenosa. Mediante esta inmunoglobulina G (IVIg) administrada por vía intravenosa, deben de ser neutralizadas las células NK, y se debe amortiguar la respuesta inmunitaria excesiva. También el caso en el caso de enfermedades autoinmunitarias (p.ej. la esclerosis múltiple) se administraron ya unas IVIg. No obstante, la administración de IVIg en las altas dosificaciones necesarias, causa considerables problemas. Con el fin de conseguir una concentración suficiente de IVIg en el suero, se deben de infundir grandes cantidades de esta proteína (25 - 150 g), lo cual se realiza a través de un volumen relativamente grande (250 - 1.500 ml). Esta gran cantidad de líquido debe de ser infundida a lo largo de 2 a 4 horas; una administración más rápida refuerza los efectos colaterales observados así y todo, tales como dolores de cabeza, fiebre, malestar general y similares. La administración es necesaria en 1 a 3 días consecutivos; este tratamiento ha de llevarse en cada caso una vez por mes.

Junto al considerable consumo de tiempo y los efectos colaterales de un tal tratamiento con IVIg, existe la desventaja adicional de que es muy caro el tratamiento, que en el caso de una única mujer embarazada cuesta aproximadamente 10.000 \textdollarUSA. Los costos del tratamiento deben ser además soportados por regla general por la propia paciente. Las mismas desventajas las tiene un tratamiento con IVIg con una dosificación correspondiente en el caso p.ej. de una esclerosis múltiple o de otras enfermedades neurológicas [Achiron y colaboradores, Neurology (1998) 50(2): 398-402; Dalakas, Ann Intern Med. (1977), 126(9): 721-30; Brannagan y colaboradores, Virology (1996), 47(3): 674-7). El documento de solicitud de patente internacional WO 00/32767 describe receptores Fc solubles, que solamente se componen de la parte extracelular del receptor y no están glicosilados. A causa de la falta del dominio transmembranal y del péptido de señal, estas proteínas se presentan en una forma soluble y no fijada a células. Los receptores Fc que allí se describen pueden además ser producidos por vía recombinante y han sido propuestos para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias, puesto que ellos pueden fijar anticuerpos, pero no ejercen ninguna acción de efector sobre otros componentes del sistema inmunitario. Ellos tienen de esta manera la capacidad de neutralizar anticuerpos en el torrente sanguíneo, lo cual repercute en particular sobre procesos autoinmunológicos en el sentido de amortiguarlos. El documento WO 00/32767 describe además la estructura cristalina de determinados receptores Fc, así como la posibilidad del descubrimiento de ciertas sustancias que inhiban la interacción de una IgG con receptores Fc, con ayuda de estructuras cristalinas. La explicación de la estructura cristalina permite descubrir correspondientes agentes inhibidores por medio del escrutinio de los bancos de datos existentes con ayuda de programas de ordenador.

El presente invento se estableció la misión de desarrollar y perfeccionar aún más los reconocimientos hechos en el WO 00/32767 y en particular para las indicaciones de esclerosis múltiples (MS), lupus eritematoso sistémico (SLE) y artritis reumatoide (RA), pero también, en el caso de enfermedades con un nivel aumentado de células NK, de poner a disposición unas posibilidades de tratamiento, que eviten las desventajas de los procedimientos actuales de tratamiento, sean fáciles de aplicar y se puedan llevar a cabo a un precio barato.

El problema planteado por esta misión se resolvió, dentro del marco del presente invento, mediante unas composiciones farmacéuticas en forma de soluciones acuosas, que contienen el Fc\gammaR IIb soluble, producido por vía recombinante, en una cantidad de 40 a 4.000 mg, preferiblemente de 100 a 1.000 mg, y en una concentración de hasta 50 mg/ml (preferiblemente p.ej. de 8 ml por cada inyección). En el marco del presente invento, se comprobó que los receptores mencionados, que se habían producido por vía recombinante en procariotas y que por lo tanto están sin glicosilar, es decir deberían ser peor solubles, sorprendentemente a pesar de todo también se pueden purificar con métodos conocidos, de tal manera que se puede obtener una concentración relativamente alta de los sFcR en forma disuelta. Además se comprobó que estos receptores, ya en una dosificación relativamente pequeña y en particular en la dosificación de 0,5 mg/kg a 50 mg/kg de peso corporal, muestran unos efectos extraordinariamente fuertes al realizar la represión de reacciones inmunitarias excesivas.

Mediante la posibilidad de obtención en una forma soluble altamente concentrada, se hace posible inyectar la composición farmacéutica conforme al invento; unas inyecciones largas y tediosas a lo largo del período de tiempo de varias horas, tal como son usuales en el caso de los tratamientos con IVIC, se pueden evitar en el caso de la utilización de la composición farmacéutica conforme al invento. La composición farmacéutica conforme al invento tiene, además de esto, por lo general sustancias de vehículo y/o coadyuvantes, que son aceptables farmacéuticamente, y que apoyan o facilitan farmacológicamente la administración de la composición farmacéutica.

La composición farmacéutica contiene de manera preferida el receptor Fc\gammaR IIb, que comprende por lo menos la secuencia de aminoácidos que se indica en SEQ ID NO. 1. Esta secuencia constituye una secuencia mínima, que puede ser prolongada en principio con apropiadas secuencias de la proteína de tipo salvaje en los extremos terminales. De manera preferida, en el caso de una prolongación de los extremos terminales de N y/o C de las secuencias indicadas, no se introduce ninguna mutación en las construcciones artificiales, con el fin de prevenir una antigenicidad. Teóricamente, sin embargo, también se pueden introducir mutaciones o deleciones (supresiones) en las secuencias prolongadas, siempre y cuando que con esto no se provoque ninguna antigenicidad indeseada.

Un ejemplo de una secuencia prolongada en los extremos terminales con porciones de secuencias de señal y/o engarzadoras, que ciertamente pertenecen al gen, pero que no son indispensablemente necesarias para una proteína terapéutica, es la SEQ ID NO. 3 para el Fc\gammaR IIb.

El receptor Fc\gammaR IIb con la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO. 1 o respectivamente 3, se ha manifestado como extraordinariamente eficaz en el caso de su aplicación a las enfermedades SLE, MS y RA. La Figura 1 muestra que en el caso de una MS en comparación con muestras testigos, al realizar una administración del Fc\gammaR IIb el "índice de enfermedad" [en inglés "disease index"] (un valor, que reproduce el grado de la enfermedad y para el cual se pueden usar varios parámetros clínicos definidos con el fin de clasificarlo) está situado manifiestamente más bajo que en el caso de testigos. En el caso del tratamiento de ratones, que presentan síntomas de una enfermedad de lupus, asimismo en el caso de la administración del Fc\gammaR IIb de acuerdo con el presente invento se pudo aumentar manifiestamente la tasa de supervivencia en comparación con un grupo testigo (Figura 2). También el aumento de la proteinuria, que se puede valorar como una medida del empeoramiento del estado de los ratones, se pudo decelerar manifiestamente en el caso de la administración del Fc\gammaR IIb (Figura 3). Otros ejemplos de la administración del Fc\gammaR IIb soluble son la artritis reumatoide (Figura 4) así como unas enfermedades, que van acompañadas por una alta carga de complejos inmunológicos, como se muestra aquí en el ejemplo de la alveolitis inducida por un complejo inmunológico (Figura 5). En conjunto, el Fc\gammaR IIb puede influir positivamente de manera inequívoca sobre la evolución de enfermedades con una participación de complejos inmunológicos y en particular de enfermedades autoinmunitarias, tales como la esclerosis múltiple, el SLE o la artritis reumatoide, y esto ya en el caso de una administración de cantidades extremadamente pequeñas del receptor soluble. Por lo tanto, se debe partir del hecho de que se había descubierto un nuevo mecanismo de acción, que se podía explicar por el hecho de que no todos los anticuerpos son eliminados mediante una fijación a receptores Fc, sino que ataca preferentemente a los autoanticuerpos fijados en complejos inmunológicos, o también mediante un nuevo mecanismo regulador, hasta ahora desconocido, en el transcurso de la enfermedad.

Los costos de las composiciones farmacéuticas conformes al invento están situados en este contexto además muy bajos, puesto que es sencilla la producción mediante una expresión recombinante en procariotas, y conduce a unas formulaciones proteínicas altamente purificados y altamente concentradas. Por lo tanto, las composiciones farmacéuticas del presente invento se pueden producir con una fracción de los costos en los que se debe de incurrir para formulaciones de IVIg.

Un objeto adicional del presente invento es la utilización de composiciones farmacéuticas conformes al invento para el tratamiento de reacciones inmunitarias excesivas, y en particular para el tratamiento de la esclerosis múltiple, del SLE, de la RA, o de pacientes que tienen un número elevado de células asesinas naturales en el torrente sanguíneo.

En este caso, tal como arriba ya se ha descrito, se prefiere especialmente utilizar el medicamento conforme al invento en una forma inyectable, puesto que la composición farmacéutica conforme al invento, con su dosificación y su concentración especiales, permite también de esta manera administrar cantidades suficientes de receptores Fc solubles. En este caso, a su vez es especialmente preferido utilizar el correspondiente FcR de la SEQ ID NO. 1 o proteínas prolongadas mediante secuencias de tipo salvaje en los extremos terminales de N y/o de C, en particular las que son conformes a la SEQ ID NO. 3. Los FcRs propiamente dichos, de acuerdo con la descripción del documento WO 00/32767, se pueden expresar en procariotas y después de esto purificar y retroplegar. Ambos receptores tienen la ventaja de que son altamente concentrables, por lo que solamente son necesarios unos pequeños volúmenes, con el fin de administrar unas cantidades suficientemente eficaces. Además, en el marco del presente invento, tal como arriba ya se ha señalado, se comprobó que ambos receptores, manifiestamente no actúan de una manera competitiva, sino que transcurre un nuevo mecanismo de efecto, que da lugar a que ya en el caso de la administración de pequeñas cantidades de los receptores se alcancen unos efectos positivos. Las composiciones farmacéuticas conformes al invento y su utilización para el tratamiento de unas enfermedades, que se basan en reacciones inmunitarias excesivas, son por lo tanto ventajosas especialmente a causa de su dosificación y su capacidad de administración, y son especialmente bien apropiadas para el tratamiento continuado también a causa de sus pequeños costos de producción.

Las siguientes Figuras explican el invento:

Fig. 1

Evolución de la enfermedad de una EAE inducida en ratones DBA/1

La encefalomielitis alérgica experimental (EAE) en ratones DBA/1 constituye un modelo en animales para la esclerosis múltiple (MS). Los síntomas del tipo de una MS en esta raza de ratón (p.ej. fenómenos de parálisis, lesiones en el cerebro) son observados después de inmunización con una glicoproteína de oligolidendrocitos de mielina [de Myelin Oligodendrozyten Glykoprotein] (MOG). En cada caso 10 ratones DBA/1 inmunizados de esta manera se trataron en un ritmo de 48 horas con una PBS [solución salina tamponada con fosfato] (testigo 1), con 100 \mug de una Trp sintasa procedente de E. coli (testigo 2) o con 100 \mug de un receptor Fc soluble (sFc\gammaR IIb). Los síntomas de la EAE fueron valorados individualmente y registrados como un valor promedio de grupos. El "índice de enfermedad" (según: Abdul-Majid, K. B., Jirholt, J. Stadelmann, C., Stefferl, A., Kjellen, P., Wallstrom, E., Holmdahl, R., Lassmann, H., Olsson, T., Harris, R.A. (2000), Screening of several H-2 congenic mouse strains identified H-2(q) mice as highly susceptible to MOG-induced EAE with minimal adjuvant requirement. [Escrutinio de varios ratones de razas de ratones congénicos H-2, identificados con H-2 (q), como altamente susceptibles a una AEA inducida por una MOG con un requerimiento mínimo de adyuvantes] J. Neuroimmunol. 111: 23-33) se valora de la siguiente manera: 0, ningún signo de EAE, 1. parálisis de la cola; 2. relajación de las patas traseras; 3. parálisis de las patas traseras; 4. parálisis completa de las patas delanteras y traseras; 5. mueren.

Fig. 2

Tasa de supervivencia de ratones NZBW/F_{1}

Los ratones NZBW/F_{1} constituyen un modelo reconocido en animales para la enfermedad del lupus eritematoso sistémico [de Systemischer Lupus Erythematosus] (SLE) (Theofilipoulos, a. N., Dixon, F. J. 1985), Murine models of systemic lupus erythematosus [Modelo murino (en roedores) del lupus eritematoso sistémico] Adv. Immunol. 37: 269-390). En cada caso 10 ratones NZBW/F_{1} se trataron por vía subcutánea semanalmente o bien con un PBS (grupo testigo) o con 100 \mug de un receptor Fc soluble (sFc\gammaR IIb). Mientras que de los ratones tratados con el receptor Fc también después de 40 semanas vivían todos los ratones, del grupo testigo había sucumbido después de este período de tiempo un 70%.

Fig. 3

Proteinuria acumulada de ratones NZBW/F_{1}

La proteinuria en el caso de ratones NZBW/F_{1} enfermos, como secuela de una glomerulonefritis que se está desarrollando, es un importante criterio para la progresión de la enfermedad SLE. De los ratones tratados tal como se ha descrito, en la leyenda acerca de la Fig. 1a, se determinó la proteinuria (> 0,3 g/l de orina) y se registró de una manera acumulada.

Fig. 4

Evolución de la enfermedad de artritis inducida por adyuvantes (AIA) en ratones

La AIA constituye un modelo reconocido en animales para la artritis reumatoide. La reacción inflamatoria es provocada por administración de un antígeno en una articulación. El tratamiento se efectúa semanalmente con 100 \mug del Fc\gammaR IIb soluble por vía intraperitoneal (IP). Según: Waksman, B.H., Immune regulation in adjuvant disease and other arthritis models: relevance to pathogenesis of chronic arthritis [Regulación inmunitaria en una enfermedad inducida por adyuvantes y otros modelos de artritis: relevancia para la patogénesis de una artritis crónica], 2002, Scand, J. Immunol. 56(1): 12-34; Holmdahl, R., Lorentzen, J.C., Lu, S., Olofsson, P., Wester, L., Holmberg, J. & Pattersson, U., 2001, Arthritis induced in rats with nonimmunogenic adjuvants as model for rtheumatoid arthritis [Artritis inducida en ratas con adyuvantes no inmunógenos como modelos para una artritis reumatoide], Immunol. Rev. 184: 184-202).

Fig. 5

Alveolitis inducida por un complejo inmunológico (IK), mediada por IgG

La alveolitis IK es un modelo reconocido en animales para enfermedades inflamatorias, que van acompañadas con una alta carga de IK. Para realizar la inducción se inyecta a ratones por vía intraperitoneal (IP) un antígeno y se administra por vía intratraqueal (IT) un anticuerpo dirigido contra este antígeno. Como secuela de ésta, se forman en los pulmones unos complejos inmunológicos, los cuales dan como resultado reacciones inflamatorias. Se valoran la infiltración de neutrófilos (PMN) y la hemorragia. La reacción en este modelo en animales se puede reforzar todavía más cuando se aplican complejos inmunológicos previamente formados a base de un antígeno y de un anticuerpo IT. Una administración simultánea de 100 \mug del Fc\gammaR IIb por vía IP reprime las reacciones inflamatorias de un modo casi completo (según: Tanoue, M., Yoshizawa, Y., Sato, F., Yano, H., Kimula, Y & Miyamoto, K., 1993, The role of complement-derived chemotactic factors in lung injury induced by preformed immune complexes [El cometido de factores quimiotácticos derivados del complemento en una lesión pulmonar inducida por complejos inmunológicos previamente formados]. Int. Arch. Allergy Immunol. 101(1): 47-51; Yoshizawa, Y., Tanoue, M., Yano, H., Sato, T., Ohtsuka, M., Hasegawa, S. & Kimula, Y. 1991, Sequential changes in lung injury induced by preformed immune complexes [Cambios secuenciales en una lesión pulmonar inducida por complejos inmunológicos previamente formados]. Clin. Immunol. Immunopathol. 61(3): 376-386).

SEQ ID NO. 1

muestra la secuencia mínima preferida de aminoácidos del Fc\gammaR IIb, que puede ser prolongada eventualmente en los extremos terminales.

SEQ ID NO. 2

muestra la secuencia mínima preferida de aminoácidos del Fc\gammaR IIIb, que asimismo puede ser prolongada en los extremos terminales.

SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4

\\[2.1mm]{}\hskip0,2cm muestran tales secuencias de receptores, que han sido prolongadas en los extremos terminales.

1

2

Claims (6)

1. Composición farmacéutica en forma de una solución acuosa, caracterizada porque contiene el Fc\gammaR IIb soluble, producido por vía recombinante, a partir de sistemas de expresión eucarióticos o en particular procarióticos, en una cantidad de 40 a 4.000 mg, de manera preferida de 100 a 1.000 mg y en una concentración hasta de 50 mg/ml y eventualmente otras sustancias coadyuvantes y/o de vehículo farmacéuticamente aceptables.

2. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada porque se presenta en forma de una solución inyectable.

3. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque contiene el Fc\gammaR IIb según la SEQ ID NO. 1 o una forma prolongada en los extremos terminales de N y/o C con apropiadas secuencias de la proteína de tipo salvaje, de manera preferida según la SEQ ID NO. 3, siendo apropiada una secuencia de la proteína de tipo salvaje para una forma prolongada, cuando la secuencia no provoca ninguna antigenicidad.

4. Utilización de una composición farmacéutica de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, para la producción de un medicamento destinado al tratamiento de enfermedades o de estados, que son causadas/os por reacciones inmunitarias excesivas y formación multiplicada enfermizamente de anticuerpos, en particular de autoanticuerpos.

5. Utilización de una composición farmacéutica para la producción de un medicamento de acuerdo con la reivindicación 4, caracterizada porque la enfermedad es una esclerosis múltiple, un lupus eritematoso sistémico, una artritis reumatoide, o una enfermedad que va acompañada con un número aumentado de células NK.

6. Utilización de una composición farmacéutica para la producción de un medicamento de acuerdo con la reivindicación 4 ó 5, caracterizada porque el medicamento es inyectado.