JPH05507197A

JPH05507197A - 結合部位を含む可溶性ペプチド類縁体

Info

Publication number: JPH05507197A
Application number: JP91509369A
Authority: JP
Inventors: フェアロン，ダグラス・ティー; ヘベル，トーマス
Original assignee: ザ・ジョーンズ・ホプキンス・ユニバーシティ
Priority date: 1990-04-25
Filing date: 1991-04-25
Publication date: 1993-10-21
Also published as: US6458360B1; DE69129803D1; EP0528926B1; CA2081207A1; EP0528926A1; AU7876691A; WO1991016437A1; ATE168415T1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

結合部位を含む可溶性ペプチド類縁体本発明は、国立衛生研究所助成金１号Ａ１２２８３３及びＡｌ２８１９Ｈ：：より提供された援助を受けて虞された８会衆国政府は、本発明に対し、一定の権利を有している。穴型Ｑ分野本発明は、標的分子に対する認識部位を含む、可溶性組換え融合タンパク質を目的とするものである。従来Ω技術＠■の循環系には、正確な組成成分はそれらの濃度同様に時々変化するものの、多岐にわたる異なる分子が存在している。ｔＬ清組成のこの変化は刺激のスペクトルに応答したものであり、血清組成及び濃度の変化を感知することによって、哺乳類の様々な器官は刺激に反応することができる。生物体の細胞は、循環系の変化を、血清の様々な組成分子に結合する細胞表面レセプターを用いて認識する。Ｎ環系のこれら特定組成成分の、細胞表面レセプターへの結合に影響を及ぼすことで、生物の細胞が刺激へ反応する仕方に変化をもたらすことが可能である補体之入元ム環境刺激に応答して変化し、細胞表面レセプターへの結合によってその変化が感知される血清組成成分システムの一例は、補体システムである。補体システムは、例えば微生物のような外来要素を認識するための機構であり、２つの段階を進行する：第一段階は、Ｃ３及びＣ４という二つの補体タンパク質が、補体活性複合体の一部であるタンパク質及び炭水化物へ共有結合することである。環境刺激に応じて、２つの別個の糸路のうちの一つが、Ｃ３を切断するＣ３コンベルターゼ（転化酵素）と呼ばれる酵素を活性化して、Ｃ３のアルファポリペプチドよりＣ３ａペプチドを放出させ、Ｃ３ｂ断片に主要な立体構造変化を引き起こす。第二段階は、リンパ球及び食細胞といった様々な細胞種による、レセプターを媒介とする複合体への結合である。補体による認識の第二段階では、Ｃ３及びＣ４の共存結合した断片を含む複合体が、これらの断片に特異的なレセプターを持つ細胞に結合される。これらのレセプターは補体レセプター　タイプ１（ＣＲＩ、ＣＤ３５）、タイプ２　（ＣＲ２，ＣＤ２１）、及びタイプ３　（ＣＲ３，ＣＤｌ１　ｂ／１　Ｂ）と名付けられている。レセプターは、免疫及び炎症反応に関与する様々な細胞種の表面に見い出されている。微生物及びその生産物質に対する食細胞及びリンパ球の反応を調節することによって、Ｃ３の活性化が代替系路を通じて起こる場合、この補体システムの認識プログラムカミ主が抵抗するための主要な役割を行う、外来分子に対する抗体により通常の糸路が活性化された場合には、補体断片の結合は増幅の役割を担う。レセプター　イブｌのＳＣＲモチーフＣＲＩは既に広範にわたって研究されており、ショート　コンセンサス　リピート（ＳＣＲ）と名付けられている６０７０アミノ酸の構造モチーフが発見されている。ＳＣＲモチーフは、ＣＲＩのＦ−アロタイプ中では３０回タンデムに繰り返されており、他のアロタイプ中ではさらに何回か繰り返しがある。ＳＣＨの共通配列は全てのＳＣＲで不変である４つのシスティン、１つのグリシン及び１つのトリプトファンを含んでいる。他の３０個のＳＣＨの半分以上において、更に工６残基が同じアミノ酸あるいは他のアミノ酸に保存的に置換されていた形で保存されている（Ｋｌｉｃｋｓｔｅｉｎ、　ｅｔ　ａｌ、、　（１９８７）、ム」任工撫ム、　１６駐１０９５−１１１２積もられている。ＳＣＲ（同じ不変残基を持ち、システィン間の距離が類似しているもの）のタンデムリピートは、補体システムが一つの、さらに１２種のタンパク質中で同定されている（＾ｈｅａｒｎ、　ｅｔ　ａｌ、　（１９８９）、Ａｄｖ、　Ｉｗ＋ｕｎｏ１．．４６：１８３−２１９）、これらのタンパク質は、Ｃ３、Ｃ４、またはＣ５、（すなわち、代替または通常系路の０３−０５コンペルターゼや膜攻撃複合体のサブユニットである相同な補体タンパクｉＦ−＆ＩＩ）と相互作用する能力をそれぞれ分担している。ＳＣＲを含む補体タンパク質は、活性化機能（Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、ファクターＢ及びＣ２）あるいは負のＩ！ｆｆ１Ｔ（Ｄ８Ｎ　（７ｙ　り９　Ｈ，Ｃ４−Ｂ　Ｐ、　ＤＡ　Ｆ、　ＭＣＰ、　及ヒＣＲ１）　’Ｈｅッていたり、食細胞またはリンパ球の８１能を引き出すことができる細胞レセプターとして働いたり（ＣＲ１及びＣＲ２）　、あるいは補体チャンネル型膜攻撃複合体の形成を促進している（Ｃ６及びＣ７）と予想される。従って、ＳＣＲは補体システムの最も特徴的な構造の一つである。インターロイキン−２レセプターアルフア鎖、ベーター２−グリコプロティン（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｔｎ）　ｌ及びファクターＸ１１１のような補体タンパク質以外のものにもＳＣＦ？が存在していることが、必ずしもこれらのタンパク質が補体に関与する役割を持つことを示すとは限らないが、しかし、その可能性は否定されていない。ＣＲＩのＮ末端から数えて２８番目までのＳＣＲは、４つの−続きのグツドブに分けることができ、それぞれ７個のＳＣＲを含み、ロング相同リピート（Ｌ）ＩＲ）と呼ばｔＬＳＡ、　Ｂ、Ｃ，及びＤで示される。ＬＨＲ−Ｄに続いて、残り２つの５ＣＲ１そのうしろにＣＲＩを細胞表面にとどめる役目を持つ２５アミノ酸の膜貫通領域と４３アミノ酸の細胞質領域が続いている。３箇所の補体結合部位はＣＲ１中の以下に位置している：Ｉ箇所はＣ４ｂに特異的なＬＨＲ−Ａ、もう２箇所はＣ３ｂに特異的なＬＨＲ−Ｂ及びＬＨＲ−Ｃ内（ｋｌｉｃｋｓｔｅｉｎ、　ｅｔ　ａｔ、、　１９羽、上記）、各ＬＩ（ＲのＮ端側から２つのＳＣＲが、リガンド特異性に関与している。補体活性化物質はその表面に複数のＣ４ｂ及びＣ３ｂ分子を結合すると予測されるため、この多価ＣＲＩは、−価のレセプターに比して、それらの分子とより効果的に相互作用することが可能である。その　の　レセブ　− 補体レセプター　タイプ２　（ＣＲ２，ＣＤ２１）は、１５あるいは１６のＳＣＲでできた細胞外領域、２４アミノ酸の膜貫通ＳＮ域及び３４アミノ酸の細胞質領域から成る膜貫通型リン酸化タンパク質である（Ｍｏｏｒｅ、　ｅｔ　ａｌ、　（１９８７）、　Ｐｒｏｃ工Ｎａｔ１．＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　８４：９１９４−９１９８；　ｍｉｓ、　ａｔ　ａｌ、　（１９８Ｂ）、ム」狂、加（。１６７　：１０４７−ｉ０６６、本明細書の参考文猷に含まれる）、可溶性組換えＣＲ２を電子顕微鏡で研究した結果、ＣＲＩ同様、ＣＲ２は、計算上長さ３９．６ナノメーターＸ３−　２ナノメーターの外郭を持つ、長い、非常に柔軟性に冨む分子であり、そのなかにＳＣＲは２．４ナノメーターの長さの小環として見えることが示された（−ｒｅ、　ｅｔ　ａｌ、　（１９８９）、　Ｊ、　Ｂｊｏｌ、　Ｃｈｅｗ、、　３４：２０５７６−２０５８２）。ＣＲ２はエプスタイン−バー　ウィルス（ＥＢＶ）のｇ　ｐ　３５０／２２０エンヴエロツプタンパク及び補体Ｃ３ｄｇタンパク断片双方に対するＢａｔ胞レセプターである（Ａｈｅａｒａ、　ａｔ　ａｌ、、　１９８９＋上記）、抗ＣＲ２モノクローナル抗体（ＯＫＢ７）は、Ｃ３ｄｇ及びＥＢＶ双方の結合を阻害し、天然及びウィルス性のりガントがレセプター上の二つの同しあるいは近接の部位に結合することを示唆している（Ｎｃｍｅｒｏｗ、　ｅｔ　ａｌ、　（１９８５）、　Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　５５：３４７−３５１）　、　ＣＲ２の欠失あるいは置換変異体を、Ｃ０５ＩＩ胞中で発現する真植生物発現ベクターを用いた組換えＤＮＡ寛験によって、ＣＲ２のリガンド結合部位が分子のＮ末端側の二つのＳＣＲに位置付けされた（Ｌｏｗｅｌｌ、　ｅＬ　ａｌ、、　（１９８９）　ム」吐、鼓虹、　１７０　：１９３１−１９４６）、細胞結合型ＣＲ２により１Ｃ３ｂ及びＣ３ｄｇのような多価型Ｃ３リガンドが結合することが、ＢＩＩ胞の活性化を引き起こす（Ｍａｔｃｈｅｒｓ、　ｅｃ　ａｌ、　（１９８５ン。ＮａＬｕｒｅ、３１７　：２６４−２６７ＨＢｏｈｎｓａｃｋ、ｅｔ　ａｌ、（１９８８）、　Ｊ−ｉｗｕｎｏｌ、、１４１　：２５６９−２５７６ｉ　Ｃａｒｔｅｒ、　ｅＬ　ａｌ、　（１９８８）　Ｊ、ｉｗｕｎｏｌ、、　１４１　：４５７−４６３及びＣａｒｔｅｒ、　ｅｔ@ａｌ。（１９８９）、　Ｊ、　ｉ翌凹畦ユｉｉ：１７５５−１７６０）。第三の補体レセプターＣＲ３もまた、１Ｃ３ｂを結合する。ＣＲ３への１Ｃ３ｂの結合が、炎症中に補体活性化された内皮細胞への好中性白血球の付着を促進する。ＣＲ３もまた食作用に閲与し、その作用では、ｆｃ３ｂに被われた粒子が、好中性白血球あるいはマクロファージに飲み込まれる（Ｗｅｉｇｈｔ、　ｅｔ　ａｌ、　（１９８２）、　ムＪ狂、」蝉２．臣６　：１１４９；　（１９８３）ム」辞、融（、ル８　：１３３Ｂ　’）。可溶性補体に皇ズｌ二ＣＲＩは補体活性化を効果的に阻害するための候補である。ＣＲＩのみが、Ｃ３ｂ及びＣ４ｂへの特異性に加えて、両系路の０３コンペルターゼの解離能力、及びファクターＩによってＣ３ｂ及びＣ４ｂをタンパク分解して不活化する時の共同因子活性能を合わせ持っている。さらに、恐らく決定的に重要なこととして、ＣＲＩのこれらの１！能が代替系路によって制限されないことが挙げられ、このため非免疫的刺激による活性の抑制に適したレセプターとなっている。可溶性ＣＲＩ　（ｓｃＲｌ）断片を、膜貫通及び細胞＋！領領域欠失したｃＤＮＡを用いて、組換えＤＮＡ技術により作製した（Ｆｅａｒｏｎ、　ｅｔ　ａｌ、、国際特許出願Ｗ０　８９１０９２２０号、　１９８９年１０月５日公開、Ｗｅｉｓａａｎ、　ｅＬ　ａｌ、。Ｃｌ１ｎ、　Ｒｅｓ、　、３Ｂ＝２８７Ａ、　１９９０　）　、Ｆｅａｒｏｎらが１９８９に記載したベクターＰＢＳＣＲ１ｃから生産して精製した５ｃＲ１タンパク（以後、本明細言では５ｃＲＬ／ｐＢＳＣＲ１ｃと呼ぶ）は、二量体１ｚＳｔ−Ｃ３ｂ及びＩ冨’ｌ−Ｃ４ｂにＫｄｓ（平衡解離定数）１ｎＭ及び１２ｎＭで結合し、ファクターによるこれらのタンパク質の切断を媒介し、さらにナノモルの濃度でヒト血清中の通常及び代替系路を阻害したことから、リガンド結合部位は完全であり、強力な試験管内阻害ａ能を持つことが示された（ｈｉｓａａｎ、　ｅｔ　ａｌ、　１９９０＋上記）。５ｃＲ１／ＰＢＳＣＲ１ｃの生体内での補体阻害機能をラットをモデルに研究した（Ｗｅｉｓｍａｎ、　ａｔ　ａｌ−＋　１９９０＋上記）、５ｃＲ１／ｐＢｓｃＲ１ｃは、補体活性化を阻害し、局所貧血によって損傷した心筋内での好中性白血球の蓄積の減少により実証されたように、炎症を低下し、さらに組織の傷害を小さくした０組換え５ｃＲ１／ｐＢｓｃＲ１ｃは、局部貧血に引き続く炎症において、組織の受ける損傷を弱める；従って、免疫複合体によるε腎炎、糸球体腎炎、溶血性貧血、重度の筋無力症、奇形性関節炎及び多発性硬化症のような、補体依存性があるとわかっている、より複雑な自己免疫疾患に対する処置への適用にとって好ましいものである。可溶性ＣＲ２Ｍ縁体の作製が試みられた（ｂｏｒｅ、　ａｔ　ａｌ、　（１９８９）＋　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃ１組換えシステム内で可溶性ＣＲ２を作製した。この組換えＣＲ２はＣ３ｄｇと１：工の割合、Ｋｄ２７．５ミクロモルで結合した。しかしながら、Ｃ３ｄｇに対する結合親和性が低すぎるため、いかなる治療への応用も到底不可能である。ウィルス　としての口゛　レセブ　− 急性のウィルス感染を阻止するために可溶性のウィルスレセプターを用いることには、数多くの利点がある。様々なウィルス変異体も同一の細胞レセプターを認識しなければならないため、ウィルスのエンヴエローブタンパクあるいは種の変型によって生じる抗原の変化や多型という問題を回避できると予想される。さらに、細胞レセプターのウィルス結合領域は、抗原性、毒性または免疫抑制的な性質を持たないようである（Ｎｅｓ＋ｅｒｏｗ、　ｅｔ　ａｌ、　（１９９０）　Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　、　６４：１３４８−１３５２）、可溶性レセプターは免疫原とはならないため、効果を上げるためにアジユバントを使用する必要がなく、さらにまた、効能は完全な免疫系があるかどうかには依存しないと予想される。ＣＲ２はエプスタイン−バー　ウィルスに対する反応の初期決定因子の一つであるが、それは細胞膜にウィルス粒子を特異的に結合するためである。レセプターの細胞外領域は完全に含むが、膜貫通および細胞質領域を持たない発現ベクタウィルスに対する可溶性型の膜結合型レセプタータンパクを投与することによってウィルスの結合を阻止するという試みは、他のウィルス系、特にＡＩＤＳで探究されてきた。ＡＩＤＳウィルス　レセプター　タンパクＣＤ４は、細胞外領域はコードするが膜貫通及び細胞ＭＶ！ｉ域はコードしないＤＮＡを用いて、＆１１換え方法９より一可溶性型で作製された（Ｈｕｓｓｅｙ、　ａｔ　ａｌ＋（１９８８）、Ｎａｔｕｒｅ、　３３１　ニア８−８１）、この組換えタンパクは培養細胞のＡＩＤＳ感染を阻止することに成功したが、しかし、患者に注射した場合、薬剤除去の大部分の段階の半減期である約一時間はどで、組換えタンパクは急速に取り除かれてしまった（Ｋａｈｋ、　ａｔ　ａｔ、　（１９９（１）、Ａｒｕ＋、　ｔｎｔｅｒｎ、Ｍａｄ、、　１１２　：２５４−２５１）。バイブトド　グロブテン　ンバク可溶性ＣＤ４の半減期の短さを克服するために、ネズミの免疫グロブリン分子の可変領域をコードするＤＮＡをＣＤ４の結合領域をコードするＤＮＡに置き換えた組換えＤＮＡ技術により、ハイブリッド分子を作製した（Ｃａｐｏｎ、　ｅＬ　ａｌ、　（１９８９）、シ烈荏、益し：５５−５３汲び国際特許ＷＯ３９１０２９２２）、このことは、ＣＤ４がそれ自体免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーの一員であり、従って、置換された可変領域に類似した構造を持っているために可能である。ネズミ免疫グロブリンを骨格とするＣＤ４ハイブリツドは、可溶性ＣＤ４と比較して、ウサギにおいて血清中での半減期がかなりの増加を示した。Ｂｒｕｕｅｓａｎｎら（１９８７，ム」叩、加東、　１６６　：１３５１−１３６０）もまたハイブリッド抗体を作製して、抗原結合部位を不変の状態で備えている抗体の機能に対して、分子の様々な部分における変化が及ぼす影響を研究した。この研究でもまた、免疫グロブリン分子に挿入したペプチド配列は、それによって置換されたペプチドのものと類似していた。この研究によって、免疫グロブリン構造の領域は、分子全体の構造を損なわずに、類似した構造によって置換できることが示された。生化学的研究に用いるのに十分なＴ細胞レセプタータンパクを得るために、Ｇａｓｃｏｉｇｎｅらは（（１９Ｂ？）、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ＋、　ｔｌｓ＾、　８４：２９３１２９４０）　Ｔ細胞■ セプターと免疫グロブリンのハイブリッドタンパクをコードする発現ベクターを構築した。Ｔａｌ胞レセプターは免疫グロブリンスーパーファミリーの一員であり、レセプタータンパクを最終的にコードする配列を形づくるように再編成する、いくつかの類似の遺伝子部分からなるゲノムＤＮＡにコードされている。最終的に再編成された配列は、免疫グロブリン同様に、可変、多様及び連結領域を持つ参ハイブリッドレセプタータンパクは、免疫グロブリン重鎮の発現ベクターの可変領域をＴ細胞レセプターの再編成可変領域で置換して構築された。そして、このベクターを、軽鎖のみを分泌している細胞系て発現させた。形質転換した細胞系は、免疫グロブリンとＴ細胞レセプター双方の決定因子を持つキメラタンパクを分泌した。上記の先の技術では、免疫グロブリンスーパーファミリー（Ｈｏｏｄ、　ｅｔ　ａｌ、　（１９＆ｉ）、Ｃｅ１１．４Ｑ：２２５−２２９）由来の免疫グロブリンペプチドとの相同性を持った、類似のユニットを有するペプチド領域をコードするＤＮＡ配列のみで置換した。免疫グロブリン鎖の相同ユニットに対応するＤＮＡ配列は、宿主細胞のハイブリッドタンパクを発現する能力を損なうことなく、除去、及び免疫グロブリンスーパーファミリーに属する他のタンパク質由来の、類似相同ユニットをコードするＤＮＡにより置換された。発蛮９砥！本発明の一つの目的は、標的分子に特異的雄結合可能な可溶性タンパク質で、哺乳Ｍ循環系からの除去半減期が長い該タンパク質を提供することである。本発明のもう一つの目的は、標的分子に特異的に結合可能な可溶性タンパク質で、標的分子に対してより高い親和性を持つ該タンパク質を提供することである本発明のさらなる目的は、補体タンパクに対して特異的に多価で結合することのできる可溶性の構築物を提供することである。本発明のまたもう一つの目的は、血管内から組織へよりよ（拡散するであろう小型の構造を持つ可溶性の構築物を贅供することである。本発明のさらにもう一つの目的は、細胞膜結合型のレセプターと競合し、哺乳類の＃環系に保持されると予想される可溶性の構築物を提供することである。本発明のさらなる目的は、循環系に安定に存在する可溶性の構築物を投与して、動物内の補体によっておこる細胞活性化を阻害する方法を提供することである、本発明のさらにもう一つの目的は、循環系に安定に存在する可溶性の構築物を投与することによって、動物内の補体活性化を阻害する方法を提供することである。　その−面として、本発明は、哺乳類の循環系内で安定てあり、標的分子認識部位を含みかつ免疫グロブリン鎖のＮ末端の頭に連結されたポリペプチドから成る、可溶性組換え融合タンパク質について考える。治療にその組換え融合タンパク質を使用することもまた意図されている。関連した一面として、本発明は、発現ベクター、並びに、リーダーペプチドをコードするＤＮＡ配列と免疫グロブリン値のＮ末端の頭をコードするＤＮＡ配列の間に、結合あるいは認識部位をコードするＤＮＡ配列を挿入することによって、免疫グロブリン値の発現ベクターを改変することからなる組換え融合タンパク賀発現ベクターの作製方法について考える。ベクターを含む宿主細胞についても、免疫グロブリン相補鎖を好ましく発現するような細胞を考慮して、少なくとも一つの免疫グロブリン鎖のＮ末端に、融合した結合あるいは認識部位を持つ、完全な免疫グロブリン分子あるいはフラグメントが分泌されるようにする。本発明のこの面の組換え融合タンパク質は、免疫グロブリン分子の安定性及び可溶性によって、可溶性で、水性の培養液、特に哺乳類循環系で比較的安定であると予想される０組換え融合タンパク質が抗体分子の一部として分泌される場合、該分子は、４個の免疫グロブリン鎖のうちの少なくとも２個のＮ末端の頭についたポリペプチド認識部分を持ち、さらにまた、多価性を与える標的分子に対してより高い親和性を示す、免疫グロブリン構造に由来する柔軟さ、特に抗体分子のヒンジ（つがい）によるものであるが、これが、ポリペプチド結合部位の動きが、そのほかの部分に比べて、標的分子上の相補部位の三次元的配置への結合部位の三次元的配置の適応を容易にすることを可能にしている。一方、補体結合部位をもつ多数のショート　コンセンサス　リピートを含む組換え融合免疫グロブリンタンパクの利用は、本発明の好ましい態様であるが、本発明はまた、より広範に、可溶性で生理学的に適合可能な担体に連結した補体結合部位を持つショート　コンセンサス　リピートを含む複数のペプチドから成る構築物や、このような構築物の治療への利用についても考慮する。このような構築物は、複数の結合部位を呈示すること（多価）によって結合の親和性を高めることで、重要な利点を提供する０本発明の構築物が示す高い親和性は、この構築物を治療に利用する上で、重要な利点を提供する。成熟ＣＲ２は低親和性の結合部位を一つしか含まないため、このような利点は、特にＣＲ２由来のショート値リピートを用いる治療にとって重要である。箆Ｉ招項１１η区明第１図、ＣＲ２−１ｇＧ１融合タンパク発現用に構築されたプラスミドの地図、ＣＲ２：補体レセプター　タイプ２ｉ　ＶＨ：可変重鎖；　ガンマ１：不変重鎖、ＣＨ１−１不変重値コード領域、ＮＥＯ：Ｇ４１Ｂ耐性コード遺伝子；Ｓ’／４０：猿ウィルス４０プロモーター。第２図、ＣＲ２−１ｇＣ；１用プラスミド構築時の、ガンマ−１ゲノムＤＮＡに導入したＤＮＡ配列の改変の詳細。第３Ａ完全なＣＲ２−１ｇＧ１の概念モデル、５ＣＲ１，２：ＣＲ２分子のショート　コンセンサス　リビー）；　Ｖｈ、Ｃｈｉ、ｈ２．ｈ３：重鎖の可変及び不変領域、Ｖｌ、Ｃｌニラムダ軽題の可変及び不変領域。第４図　Ｉｔｓ　ｌ−標ＷＡｐ　Ｇ３　ｄ　ｇ（７）Ｋ５６２細胞上のＣＲ２への結合（７）ＣＲ２−１ｇＧ１による阻害。第５図、３０倍過剰モル量の非［１１ｆｉ合物質存在下または非存在下における、”’　Ｉ−ａｌＪ！ｐＣＲ２−１ｇＧ１のＢ９５／８１１胞ヘノ結合。第６図、ＣＲ２−１ｇＧ１による末梢血Ｂリンパ球のＥＢＶ感染の阻害。第７図、マウスをＣＲ２−１ｇＧ１で処理した場合のフルオレセイン特異的１５Ｍレベルの低下。第８図、ＣＲ２−１ｇＧ１による、フルオレセイン−フィコールによって生じた、フルオレセイン特異的プラーク形成細胞数の減少。第９図、ｐｓＮＲｃＲ２及びｐｓＮＲＯ２１”プラスミドをそれぞれ安定に発現するＪ５５８Ｌ細胞から分泌された、精製組換えＣＲ２−１ｇＧ１　（左レーン）及びｒｇＧｌ　（右レーン）の５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル。第１０図、ヒトまたはネズミのＧ３断片を担うチモサン粒子に対する［Ｉｔｓ　（］　ｐＣＲ２−ｒｇに１の結合、（Ａ）Ｃａ”及びＭｇＸｏが存在して代替系路の活性化がおこりうる条件下（白四角）、あるいはＥＤＴＡを加えてその活性化を阻害した条件下（黒四角）で、ヒト血清と反応させておいた１、３ｘ１０’ のチモサン粒子に［”５１］　ｐｃＲ２ｉ［Ｇ１を段階的に増加した様々な濃度で加えて、３０分、０℃でインキュベートした。１０％ＢＳＡに通して粒子を遠心して結合したりガントと解雇しているりガントを分層した０粒子に付着したＧ３断片に対する［”　ｒ］ｐＣＲ２−ｒｇＧｌの特異的結合（白丸）は、それぞ娠陽イオン存在あるいは非存在下の血清と反応させておいた粒子への結合量の差として算出した１日付は二面測定したという意味を示している＊　（Ｂ）　［” ’　ＩＦ　ＰＣＲｌｒｇＧｌの、二価陽イオン存在下（白四角）またははＥＤＴＡ存在下（に調べ、特異的結合（白丸）を（Ａ）で述べた実験と同様に算出した。第１１図、ヒツジ赤血球（Ｅ）で免疫したマウスにおける、ＣＲ２−１ｇＧ１とコブラ毒因子（ＣＶＦ）の免疫抑制効果の比悦６から８週齢のＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスメス８匹を含むｌグループから、４ｘｌＯ’または４ｘｌＯ’のヒツジＥで静脈内免疫する２４時間前の内にＣＶＦ（トイ・入ゲッチンゲンのＯ，ＧｏＬｚｅ博士より供与していただいた）５ミクロダラムを４回投与する処置によって０３を除去した。２グループのマウスには、１ｅ１８００ミクロダラムのＣＲ２−１ｇＧ１またはＩ［Ｇ１を、４回に等分して、免疫後２４時聞取内に、静脈注射して投与した。４番目のグループのマウスにはＰＢＳのみを投与し、免疫を行わなかった。５日目に、肺臓の抗ヒツジＥプラーク形成細胞数をアッセイし、さらに５種の同型での特異的抗ヒツジＥ抗体の血清濃度をＥＬＩＳＡ′？：！測定した。データは、各決定に用いられたマウス４匹の平均値＋／−標準偏差（ＳＥＭ）で示す。第１２図、ＢＡＬＢ／ｃ及びＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスにおけるヒツジ已に対する抗体反応のＣＲ２−１ｇＧ１による抑制の延長、ＢＡＬＢ／ｃ及びＣ３Ｈ／ＨｅＪマウス６匹からなる２つのグループに、それぞ九総量８００ミクログラムのＣＲ２１ｇＧ１　（黒四角）またはＩｇＧ１　（白四角）を、分割して、４ｘ１０１ヒツジＥで免疫する直前、免疫中及び免疫後１７時間以内に投与した。３番目のグループのマウスにはＰＢＳのみを投与し、免疫を行わなかった（白丸）、５日ごとに、特異的抗体濃度をＥＬＩＳＡで測定した。データは、反応の最も高い個体と低い個体を除いて残ったマウス４匹の結果の平均値十／−標準偏差（ＳＥＭ）で示す。第１３図、　Ｉ”Ｓ　Ｉｔｓ換えＩｇＧ１．ＣＲ２−１ｇＧｌ、及びＣＲ２−（Ｆａｂ’）、のマウス血しょう内における半稠講瓜第１４図、５ｃＲ１／ｐＢｓｃＲ１ｃ、及び５ＣＲ−８から１１が免疫グロブリン重鎮に連結しているＣＲ２（Ｆａ　ｂ’　）ｚによる、′！５Ｉ−Ｃ３ｂ−二量体のヒ）Ｈに対する結合の阻害。第１５図、５ｃＲ１／ｐＢｓｃＲ１ｃ及びＣＲ２（Ｆａｂ’　）ｔによる、抗体に感知されるヒツジＥのヒト血清中における溶解の阻害。第１６図、５ｃＲ１／ｐＢｓｃＲ１ｃ及びＣＲ２−（Ｆａｂ’　）ｚ　による、チモサン処理したヒト血清中におけるＣ３ａ−ｄｅｓＡｒｇの生産阻害第１７図、５ｃＲ１／ｐＢｓｃＲ１ｃ及びＣＲ２−（Ｆａｂ’）ｚによる、チモサン処理したヒト血清中におけるＣ５　ａ−ｄ　ｅ　ｓＡｒ　ｇの生産阻害図１８．ＣＲＩ−Ｆ　（ａｂ−）アコンストラクトの配列が表されている。Ｐｓｔｒが示されている。ＳＣＲの８番目から１１番目までを含むＣＲＩのヌクレオチド１５０１から２２６２までを本ベクターのＰｓｔＩ部位にクローン化した。ＩＶＳ＝ＩｇＣ，リーグ−介ｔＥＥｇトヌクレオチドは、ＣＲＩリーダー−ヌクレオチド２８−１５０、そしてＣＲＩのＮ＠−ヌクレオチド１５１となるように番号をつけである。２５色猜１町り良男本発明の一つの様相は、標的部に対する認識部位を持ったポリペプチドが免疫グロブリン額のＮ端部分に付けられている融合タンパク質を企図している０本融合タンパク質は遺伝子組み換えシステムにおいて産生される。目的とするポリペプチドのアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列を免疫グロブリン饋のための発現ベクター内に挿入し、改変された本発現ベクターの翻訳が、認識部位に相当するポリペプチドの前に分泌を促すリーダー配列を含むポリペプチド、およびそれから実質的に完全な免疫グロブリン鎖を生じるようにする。この改変された発現ベクターを、他の補体免疫グロブリン鎮を生産する能力を好適に有する宿主細胞に導入し、本ベクターが翻訳されると、本宿主細胞が、あるタイプの免疫グロブリン額のＮＥｉに繋げられた認識部位に相当する外来性のペプチド配列を持つ完全な免疫グロブリン分子に相当する分子を分泌するようにする。′免疫グロブリン分子”および”抗体”という用語はＦａｂおよび（Ｆａｂ”）ｇなどの、完全な抗体タンパク質のフラグメントを含んでいることが理解される。ポリペプチド本発明のこの様相により企図されるポリペプチドは、疎水性環境において維持される固有の３次元構造をとり、標的分子を認識する部位を含んでいるポリペプチドのいづれも広く包括しており、本ポリペプチドのアミノ末端およびカルボキシ末端は水性溶媒に比較的利用しやすいものである。好適なポリペプチドは、認識機能に不要な領域を除いたり利用しゃすいアミノおよびカルボキシ末端を残したりするために任意に切断されるＣＲＩおよびＣＲ２などの種々の受容体の認識ドメインに相当するものである０本ポリペプチドの便利な末端により、結合部位の３次元構造を乱すことなく、そのアミノ末端にリーダー配列をつけたりカルボキシ末端に免疫グロブリン鎖の残りの部分をつけたりすることが可能となる。本発明の融合タンパク質を作るために付加される認識ポリペプチド部分は免疫グロブリン配列の末端に付加されるので、免疫グロブリンの構造に寄与する要素は置き換えられない、それ故、本来の構造を破壊することにはならない、その結果、特異的な認識能力を持ついかなるポリペプチドも、本ポリペプチドが個別の構造を形成し疎水性溶液中で安定でアミノ末端およびカルボキシ末端が利用しやすいならば、タンパク質に取り込まれる認識領域または結合領域の基本として使用することができる。本発明は、認識部位の基本として使われるタンパク質が１価で、その認識部位に結合する標的分子が複数の結合部位を持っている場合に特に適している。■価ノ結合反応のＫｄが１マイクロモルまたはそれより高い場合、本発明の抗体（本抗体の各腕の少なくとも１つの鎖は付加された結合部位を含む融合タンパク質である）はより大きな親和性（つまりＫｄ＜１マイクロモル）で結合する多価の結合タンパク質である０例えば、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインなしで調製されたＣＲ２の可溶体はＣ３ｄｇにＫｄ＝２７．５マイクロモルで結合する（ムーア（Ｍｏｏｒｅ）ら、１９８９．上記）が、一方、ＣＲ２を基本とした本発明による可溶性融合タンパク質はＫｄ＝５ｎＭで結合する（実施例２．下記）。本ポリペプチドが１つまたは複数の個別の構造を形成し、その結果生じる融合されたタンパク質が発現され可溶性であるならば、ポリペプチド自体が複数の結合部位または認１四立を任意に含むことができる。ポリペプチドの大きさは、大きすぎて動物組織への拡散が過度に制限されるような融合タンパク質を作らない程度であることが好適である。ポリペプチドの別の好適なグツドブは、短い繰り返し共通配列（ＳＣＲ；５ｈｏｒｔ　ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ　ｒｅｐｅａｔ＝その多くは様々な補体フラグメントの認識に関与している）から成るものである。これらの分子の認識ドメインまたは結合ドメインは、少数のＳＣＲから成る。その配列が隣接したＳＣＲの間に位置する残基で始まりそして終わるポリペプチドを使用すると、その結果得られるポリペプチドは、個別の３次元構造および利用しやすい末端というめる特性を持つであろう０以上のことから請求める結合部位を持つが、認識機能に関与しない他のペプチド配列が実質的に無いポリペプチドを産生ずることが可能である、短い繰り返し共通配列（ＳＣＲ）からなるタンパク質のグループは、Ｃ１ｒ。Ｃ１ｓ、　フｙり９−Ｂ、Ｃ２，フｙり９−Ｈ，Ｃ４ＢＰ、ＤＡＦ、ＭＣＰ、Ｃ６、Ｃ７，インターロイキン２受容体アルファ摂、ベーター２−グリコプロティンＩ、およびファクターＸ■同様、補体受容体ＣＲ１：ＢよびＣＲ２を含む。本発明のこの様相により企図されるポリペプチドはＳＣＲからなるポリペプチドに限定されるものではない、それらは請求めるエピトープ、ＣＤ４．ＣＤｌ９、　Ｔａ１ｌ胞受容体などを含むいかなる種類の受容体、またはＣ３ｄｇ認識部位などの、受容体に相補的な分子構造を含むペプチドを含んだ（しかしそれだけに限定されてはいない請求める３次元ペプチドのいづれであってもよい。九校り四ソＱＬＫ値本発明の融合タンパク質は本ペプチドをいづれかの免疫グロブリン鎖に連結させたものであってもよい、インタクトな抗体分子は循環系において安定であり、融合タンパク質の長期的な安定性が重要となる場合には、それを融合タンパク質の抗体部分によって供給することもできる。多くの状況において、通常、動物内に存在しないエピトープに特異的な抗体を利用することもめることがてきよう、本発明は、しかしながら、通常、動物内に存在するエピトープに特異的な抗体を使用することも企図している。その抗体の抗原結合部位の特異性：よ、融合タンパク質の精製を容易にするために選ばれてもよい。異なるアイソタイプの免疫グロブリン類を使用することもできる。好適なアイソタイプは本組み換え融合タンパク質の最終用途に依存するであろう、ガンマ鎖はＦｅ受容体に結合する可溶性融合タンパク質の産生を指示するものであり；アルファ鎮は腸壁に結合する融合タンパク質の産生を指示するものであり；そしてイプシロン核は肥満細胞に結合する融合タンパク質の産生を指示するものである、ポリペプチド認識配列はＮ端（免疫グロブリン分子の可変部の一部）についてトも、可変部が存在する限りにおいては本発明によって企図される。Ｆａｂもしくは（Ｆａｂ’）ｚ分子は、重鎮ヒンジ部の後ろでのタンノでり質分解性の切断あるいは終止コドンの導入によってＦｃｑ域を欠失させることにより産生ずることができる０本数合タンパク質の最終的な治療用途に依存して、Ｆｃ受容体を介した補体活性化複合体の除去を提供するため、本数合タンパク質の免疫グロブリン部分において非補体活性化アイソタイプのＦｃｉ！域を維持することが好適な場合もある。発現基改変された免疫グロブリン発現ベクターは、プロモーター、リーダー配列、およびめるポリペプチド結合領域に相当する配列を組み合わせることによって、新たに構築することができる。これらの配列に相当するＤＮＡ配列は、核酸合成、ポリメラーゼ連ａおよびゲノムまたはｃＤＮへの分子クローニングを含めた、良く知られた種々の方法によって得ることもできる。プロモーターおよびリーダー配列は、免疫グロブリン摂を含め、種々のタンパク質を発現させる技術においては非常に有用である。その有用なプロモーターおよびリーダーに￥ｉ世、本プロモーターが発現を、そして本リーダー配列が発現用に選ばれた宿主系において正しく折り畳まれた組み換えタンパク質の分泌を指示するものであれば、いかなる組み合わせによっても利用することができる。適当な免疫グロブリン鎖配列も本分野ではよく知られている。免疫グロブリン頷をコードする配列は、発現を指示するプロモーターと分泌を指示するリーダー配列を含む発現ベクターにおいて好適に提供される０発現のためのエンハンサーも本ベクターに含まれていることが最も好適である。そのような発現ベクターは本分野においては非常に有用である１例えば、一つもしくは複数の免疫グロブリン鎖をコードする発現ベクターの多くはアメリカン　タイプ　カルチャー　コレクシボン、Ｒｏｃｋｖｉ　Ｉ　ｌｅ、メリーランドより入手可能である。特に好適なベクターはＰＳＮＲＯ２１と名付けられた、マウスガンマ−１ゲノムクローンであり、これば、分泌を指示するネイティブなリーダー配列の後ろに免疫グロブリンプロモーターの制御下にある、ハブテン、４−０Ｈ−３ニトロフエノアセチル（ＮＰ）に特異的なマウスガンマ−１！鎖の配列および発現エンノλ ンサーを含んでいる（バラード（Ｂａｌｌａｒｄ）ら、（１９８６）、Ｐｒｏｃ、Ｎａｃ　Ｉ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、８３　：９６２６−９６３０、本明細書中では参考文献に取り入れられている）、免疫グロブリン鎖のしづれか一つの発現および分泌を供する他のベクターも本発明において働くものである０発現ベクターの選択は、この２つの事項を両立させなければならないので、改変ベクターの発現に使用される宿主細胞に更に依存するものである。求めるポリペプチドおよび免疫グロブリン鎖のためのＤＮＡ配列を得るための存効な方法が本分野の技巧の内にあることは容易にわかり、免疫グロブリン配列およびめる認識部位に相当する配列の両方を含む改変ベクターは、本分野でよく知られたいづれの方法を用いても調製することができる０例えば、ある改変べフターは、免疫グロブリン額の５゛端近くの発現ベクターの配列中に制限部位を見出だし、その１ｌｌｌｉ部位を挿入部位の構築に利用することによってＡ製することができる０次に、挿入部位のための配列を本発現ベクター中に挿入する。その挿入部位は、分泌を指示するリーダー配列の３′側になければならない。求める融合タンパク質の発現を容易にするために、短いオリゴヌクレオチドをセグメントの一端もしくは両端につけることもできる０例えば、制限部位がコドンに一致しない場合は、本ポリペプチドと本免疫グロブリン鎖の両方の読み枠を保持するために、付加的なヌクレオチドを幾つか要してもよい、改変ベクターの配列はリーダーペプチドの切断シグナルをコードしていなければならない、好適な様式では、免疫グロブリン配列の最初の１−１０アミノ酸のコドンは、リーダーペプチドを切断する酵素が切断部位を確実に認識できるよう、挿入した配列の５ ′側に保持される。完成した分子の免疫グロブリン部分が正しく折り畳まれるように、これらと同じアミノ酸のコドンを挿入した配列の３′側に繰り返してもよい。２つの個別な構造の間にブリッジを形成するために、ポリペプチド配列の３′端と免疫グロブリンをコードする配列の５′端との間に、付加的なアミノ酸をコードする配列が含まれていてもよい、このようなブリッジは、２つの個別な構造が互いに干渉することなく、発現したタンパク質が正しく折り畳まれるよう、付加的な柔軟性を提供し得る６本ブリッジは、抗体の２つの腕にあるポリペプチド配列の結合領域が標的分子上の多数の結合部位の３次元的関係に対し空間的に適応できるための柔軟性にも寄与することができる。本ブリッジペプチドは、水溶液中でのその機能を促進し、哺乳動物の循環系に見出だされるプロテアーゼに耐性な、疎水性および親水性アミノ酸の混合物から構成されるべきである１本ブリッジはＩＯまたはそれより少ない数のアミノ酸を含むことが好適である。特に好適なブリッジはアミノ酸、バリンおよびセリンから成るジペプチドである。ブリッジは様々な利益をもたらし得るが、正しい読み枠力（持さワヘ融合タンパク質の他の部分によってポリペプチドまたは免疫グロブリンの部分のフォールディングが影響されない限りは、その存在は必要ではない。本ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を本ベクターに挿入し、本組み換え融合タンパク質が発現されたときに、ポリペプチドが免疫グロブリン談のＮ末端についているようにする。最も好適な場合は、本ポリペプチドがブリッジの有無に拘らず免疫グロブリン配列の最初のアミノ酸に融合されているものである。より広く言えば、免疫グロブリン値の３次元構造が発現の際に壊れなければ、本ポリペプチドはＮ端のいづれのアミノ酸に融合されてもよい。え　Ａ　ンパク　の本改変発現ベクターを発現させるための細胞系列の選択は重大ではない、一般的に、正しく折り畳まれた免疫グロブリン分子を発現し、ｉｎ　ｖｉｖｏで起こるいづれの翻訳後修飾も完了させることから、哺乳動物の細胞系列が使用されるだろう０本発明のベクターを発現させることのできる細胞系列は容易に入手できる（例、アメリカン　タイプ　カルチャー　コレクシ町ン参照）、好適な細胞系列は、本発明の改変発現ベクターにコードされる鎖に相補的な鎖を分泌するミエローマである。そのような細胞を産生ずる方法はシエネー（Ｓｃｈｎｅｅ）ら。（１９８７）、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、８４：６９０４−６９０８　（本明細書中では参考文献に取り入れられている）において説かれている。特に有用な細胞系列はＪ５５８Ｌと命名されたマウスミエローマ細胞であり、これは本分野の多くの異なる研究者によって利用されている（バラードら、（１９８６）　；ブルッゲマン（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ）ら、（１９Ｂ？）　：ガスコー＝ｚ（Ｇａｓｃｏｉｇｎｅ）ら、（１９８７）；オア（Ｏｌ）ら、（１９８３）、Ｐｒｏｃ、Ｎａむ１．Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、８０：８２５− ８２９；トララネツカ−（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ）ら、（１９８６）、Ｅｕｒ、Ｊ−１ｍｍｕｎｏ　１．．１６　：　８５１−８５４　；ツアンら、（１９８Ｂ）、Ｊ、ｒｍｍｕｎｏＬ、１４１：３０８−３１４；ウィリアムら、（１９８６）、ＩＣｅｎｅ、４３：３１９−３２４）、この細胞系列は免疫グロブリン軽（ラムダ）Ｉ！［を生産するが、重鎮を生産する能力を失っている。異なる免疫グロブリン配列を持つ発現ベクターとともに、もしくは、あるいは異なる種からの異なるタンパク質のプロモーターおよび／またはリーダー配列とともに使用するのに適した他の細胞系列は、通常、本分野に熟達したものには容易に明かとなるであろう、原核生物の宿主細胞を、例えば本免疫グロブリン配列が、Ｆｃ部を含まずそれ故翻訳後のグリコジル化を要しないＦａｂフラグメントに相当する場合に、本融合タンパク質の発現に使用してもよい（ペター（ＢｅｔＬｅｒ）ら、（１９８７）、５ｃｉｅｎｃｅ、２４０：１０３Ｂ−１０４１を参照）。組み換え融合タンパク質をコードする配列を含む改変発現ベクターは、エレクトトポレージぢン、リボフエクシジンなどの本分野で広く使われている技術のいづれかによって宿主細胞に導入することができる。細庭を増殖させ融合タンパク質を発現させるための条件は、使用される特定の宿主細胞およびプロモーターに特有のもので本分野ではよく知られているものである。改変ベクターを含み相補的な免疫グロブリン鎖を発現する宿主細胞は、正しく折り畳

【臥重鎮の一方のＮ末端に融合された結合領域を含むポリペプチドをもった抗体分子を分泌することであろう、宿主細胞がいづれの免疫グロブリン鎖も発現しない場合、２つのタイプの免疫グロブリン鎖（重鎮および軽Ｗｉ）に相当し、異なる結合領域をコードするポリペプチド配列を各りが持つ２つの改変ベクターを本細胞に導入することもできる。そのような細胞は、各腕が２つのＮ端にそれぞれ付けられた２つの異なるポリペプチド結合領域を持つ抗体分子を分泌するであろう。本組み換え融合タンパク質は、改変された本宿主細胞を標準的技法を用いて増殖させる発酵または培養ブロースから回収できる。宿主である細胞は濾過などのいづれの簡便な手段によっても除くことができる０本融合タンパク質は、標準的な生化学的分離手段によって回収できる。特に有用な方法はアフィニティクロマトグラフィーである０本組み換え融合タンパク質は多くの独特な認識部位を有している：元の免疫グロブリンの抗原結合部位、Ｎ端に挿入された認識部位、およびＦｃ部位などの免疫グロブリン分子に特徴的な他の部位である。これらのいづれかと相補的なものを含むアフィニティクロマトグラフィー系は普通の研究者によく知られた操作によって本融合タンパク質を精製するのに利用することができる（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌｕ＋ｎｅ　３４．ジャコピ（Ｊａｋｏｂｙ）ら編、Ａｃａｄｅｍｊｃ　Ｐｒｅｓｓ　Ｎ、Ｙ、、１９７４）、好適な様式においては、選択されたベクターは４−ヒドロキシ、３−ニトロフェノアセチルに特異的な免疫グロブリンモイエティを有しており、本融合タンパク質の抗原結合部位を結合するであろうアフィニティマトリクスはプルッゲマンら、（１９８７）（本明細書中では参考文献として取り入れられている）により記載されたようにして調製することができる。媚弁りＩμしへれジグ好適な態様においては、本発明の組み換え融合タンパク質は、補体結合部位をもつＳＣＲを基礎とした多数のポリペプチド認識部位を含んでいる。このような結合領域は一般には１マイクロモルかあるいはそれ以下のＫｄを持っており、このことは後述の治療手段における利用にとって十分低すぎるものである。ポリペプチドが免疫グロブリン鎖についていれば、本発明の細胞によって産生される抗体分子は少なくとも２つの結合部位を持っている。なぜなら抗体の各腕はポリペプチドＷ部位をコードする改変ベクターからの鎖を一つ含んでいるからである、また、本細胞は、それぞれが免疫グロブリン軽鎖および重鎮をコードし各々の鎖がＮ末端につけられた認識ポリペプチドを持つ２つの改変ベクターを含んでもよい、これらのベクターにコードされるポリペプチドは同じ（この場合、抗体は標的分子に対し４つの結合部位を持つことになる）にすることも異なる（この場合、抗体は２つの異なる標的分子に対し各々２つの部位を持つことになる）ようにすることも可能である。多数の補体結合部位を含み本免疫グロブリン融合タンパク質と同じ機能特性を持つ巨大分子コンストラクトも、本発明により企図される。巨大分子コンストラクトは、可溶性の生理学的に許容し得る巨大分子担体に付けられた補体結合部位をもつＳＣＲを含む複数のペプチドを含んでいる。本担体は循環系に可溶で生理学的に許容し得る巨大分子である。ここで往還学的許容とは、本分野に熟達したものが食事療法の一環として患者に上記担体を注射することを認めるであろうという意味である０本抗体は好適には循環系で比較的安定であり、除去に関しては許容し得る血漿半減期を持つ、適した担体は、血清アルブミン、ヘパリン、または免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリエチレングリコールまたはポリオキシエチルポリオールなどのポリマー、あるいは例えばポリエチレングリコールで誘導することにより抗原性をｆＩＩｉしるよう改変されたタンパク質を含むが、それだけに割限されるものではない、適した担体が本分野では知られており、例えば米国特許４，７４５，１８０および４．　８４７．　３２５およびその参考文献に記載されている。補体結合部位を持つＳＣＲは、巨大分子担体への化学的結合が使われる場合にＳＣＲペプチドの末端の便利性が要求されなくてもよいということを除けば、免疫グロブリン融合タンパク質に間して上述したものと同じである。本コンストラクトは多くの手法により［できる、担体がタンパク質の場合、担体につけられた多コピーのポリペプチドを含む融合タンパク質が発現されるように、担体用の発現ベクターに本ポリペプチド配列をコードするＤＮＡを挿入する、組み換えＤＮＡ法によって本ペプチドをつけることもできる。免疫グロブリンのＮ：￥Ｗｔｌｌ域以外の部分に繋がれたＳＣＲペプチドは本態様の範囲内にある０本ＳＣＲは、ＣＲ１誘導体またはＣ１ｒ、Ｃ１ｓ、ファクターＢ、Ｃ２，ファクターＨ，Ｃ４ＢＰ、ＤＡＦ、ＭＣＰ、Ｃ６，Ｃ７，ｒＬ−２受容体アルファ、ベーター２−グリコプロティン１およびファクターＸ■を含むタンパク貢誘導体を含む他の補体ＳＣＲなど、特有の性質を持った別のポリペプチドに融合される可能性もある。また、本ポリペプチドは、例えばポリペプチドのみあるいはポリペプチドと結合配列の配列をコードする発現ベクターからの発現により、独立に産生ずることができる（例えば、米国特許４，８９４，４４３記載）、また、本ポリペプチドは受容体タンパク質のタンパク質分解性の切断によって得てもよい、これによりポリペプチドは本発明により企図された個別の構造と補体結合部位という特性を持ったままとなる。ポリペプチドを独立して得る場合、次にそれを、本分野ではよく知られた化学的結合技術によって担体である巨大分子に結合させる以下の論述を通じて本発明が、記載されている治療において本発明の組み換え融合タンパク質に適していることから、補体結語部位を持つＳＣＲを含む複数のポリペプチドを有す巨大分子コンストラクトを企図していることが理解される。治療用途ＣＲＩまたはＣＲ２またはその両方に見られる結合部位に相当する、補体フラグメントに対する結合部位を有すコンストラクトを調製することができる。ＣＲ２に相当するコンストラクトはＣ３ｄｇおよび１Ｃ３ｂなどの０３フラグメントに、またはＥＢＶおよびＥＢＶ誘導タンパク質ｇｐ３５０／２２０に結合する。１価のＣＲ２分子は好適な治療薬ではない、Ｃ３ｄｇコートされたｇｐ３５０／２２０に対するａ相性が極めて低いからである。リガンドに対する親和性は結合価によって高くなるので、多価ＣＲ２分子は好適な治Ｍ薬である。下記の実施例２において、抗体を基本とし、Ｃ３ｄｇおよびＥＢＶに対する２価受容体を含む２腕コンストラクトであるＣＲ２−１ｇの親和性は１価の受容体に比べそれぞれ４０００倍（対Ｃ３ｄｇ）および１０倍（対ＥＢＶ）高くなっている。ＣＲＩの補体結合部位はＣ３ｂ　（ＬＨＲ−ＢまたはＬＨＲ−ＣのＮ端ＳＣＲの結合部位を使用する）、Ｃ４ｂ　（ＬＨＲ−ＡのＮ端ＳＣＲの結合部位を使用する）あるいはその両方に結合するコンストラクトの基礎を形成することができる。２つの改変発現ベクター（一方は片方の付けられた補体受容体部位の結合領域を持つ免疫グロブリン軽鎖を基本とする融合タンパク質をコードし、もう一方はもう片方の付けられた補体受容体部位の結合領域を持つ免疫グロブリン重鎮を基本とする融合タンパク質をコードする）が使われる場合、Ｃ３ｂとＣ４ｂの両方に結合するコンストラクトを得ることができる。これらの両ベクターの他には抗体を分泌しないミエローマ細胞をトランスフェクトすることによりＣ３ｂに対して２つＣ４ｂに対して２つの部位を持つ抗体が分泌されるであろう、また、Ｃ３ｂおよびＣ４ｂ結合部位を含むＳＣＲを免疫グロブリン鎖のＮ端にタンデムに付け、Ｃ３ｂに対して２つＣ４ｂに対して２つの部位を持ちＣ３ｂとＣ４ｂの両方に結合するはずの抗体を産生ずることができる。ＣＲＩを基本とした可溶性補体結合タンパク質力ｇｉ製されている〔フィアロン（Ｆｅａｒｏｎ）ら、１９８９）が、本発明にしたがって調製されるコンストラクトは、本コンストラクトの担体部分の安定性に基づき哺乳動物のＷ１環系において高い安定性を持つであろう、いづれかの補体受容体からの部位を含む免疫グロブリン融合タンパク質の半減期は元の免疫グロブリンの半減期（６−８日とされている（ビエイラ（Ｖｉｅｉｒａ）ら、（１９８８）、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｉｒｎｍｕｎｏｌ、、１８：３Ｌ３−３１６）によるであろう６本コンストラクトの治療用途が補体活性化の阻害である場合、本コンストラクトの血清半減期は少なくとも約１時間であることが望ましい０本コンストラクトが抗ウィルスまたは抗免疫両方に使用される場合は、本コンストラクトの血清半減期は少なくとも約１０時間、好適には少なくとも約１日であることが望ましい、半減期は本分野で知られている薬物動力学的ルーチン技法により容易に測定することができる。本発明のＣＲＩ免疫グロブリンキメラは、ＣＲＩ配列の５ＣＲ８から１１まで（Ｃ３ｂ結合ドメインに相当する）を含み、これが免疫グロブリン重鎮のＮＨ２末端領誠に付けられるように構築された。このコンストラクトはＣ３ｂ結合を介した５ｃＲ１／ｐＢｓｃＲ１ｃの別の経路のａ能活性を維持し、キメラの免疫グロブリン部分に特徴的なｉｎ　ｖｉｖｏでの安定性を保持していた。免疫グロブリンにより与えられるｉｎ　ｖｉｖｏでの特徴は、このようなコンストラクトをＣＲＩが関与する疾病および障害の治療のための好適な治療分子にする。そのような疾病および障害は、不適当なまたは望まれざる補体活性化の関与する疾病（良液透析障害、超急性同種移植および異種移植拒絶反応、インターロイキン２（Ｉ　Ｌ−２）治療の際のＩＬ−２誘導性毒性、ＡＩＤＳなどの血液学的悪性疾患など）：感染症（ＩＩ病、ＡＩＤＳ、および腐敗症など）炎症、障害（自己免疫疾患、成人呼吸困難症候群、クローン病、熱損傷、火傷および凍傷などに現れるような）；免疫複合体障害（自己免疫疾患、リューマチ様関節炎、全身性エリテマトーデス、増殖性腎炎、糸球体腎炎、溶血性貧血、および重症筋無力症など）；神経学的障害（多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、卒中、外傷性脳損傷およびパーキンソン病など）；および後虚血再潅流状ＩＩ（心筋梗塞、風船血管形成、および心肺バイパス形成手術における後ポンプ症候群など）を含むがこれだけに限られるものではない。免疫応答におけるＣＲ２の生物学的役割の知識は、そのポテンシャルがポジティブ　フィードバック　ループ（免疫複合体による過剰な補体活性化がＢ細胞のさらなる活性化をもたらしより多くの免疫複合体を形成する自己抗体のさらなる生産をもたらす）のために存在してることを示すのに十分である。Ｃ３ｄｇを含む複合体に対する細胞性受容体と競合する可溶性ＣＲ２は、この補体によるＢ細胞活性化へのポジティブ　フィードバック　ノトブをブロックできた。補体結合部位を有した可溶性コンストラクトは、上記コンストラクトの投与が補体の活性化および細胞の補体依存性活性化を阻害するような場合には、補体依存性細胞活性化に関する多くの疾病状態の治療に使用することもできる。このよトーデス、重症筋無力症、関節炎、自己免疫性溶血、糸球体腎炎、多発性硬化症、天庖庶、クリオグロブリン血症、およびＡＩＤＳなど）、ニブシュタイン・バールウィルス関連疾病（ショグレン（Ｓｊｏｇｒｅｎ）症候群、リューマチ様関節炎、バーキットリンパ腫、ホジキン病、ウィルス（ＡＩＤＳまたはＥＢＶ）関連性Ｂ細胞リンパ腫、慢性疲労症候群、リーシユマニアなどの寄生病および免疫抑制された疾病ｖ、ｎｃ同種移植片移Ｍ後またはＡ、ＩＤＳにおけるウィルス感染など）を含むがこれに限定されるものではない。ＥＢＶは、ウィルス感染における重要なステップとしてＢ細胞上のＣＲ２に結合する。Ｃ３ｄｇは抗原と複合体を形成し、ＢＩ［抱土のＣＲ２受容体と結合して抗体生産を活性化する。好中球およびマクロファージ上のＣＲ３と結合した１Ｃ３ｂにより食作用が引き起こされる。炎症の間、１ｃ３ｂは好中球上のＣＲ３に結合し内皮細胞への接着を促進する。炎症の間、Ｃ３ｂとＣ４ｂは細胞に結合したＣＲＩを介して様々なタイプの細胞と結合する。ＣＲ２−１ｇなどの、ＣＲ２を含むコンストラクトはＥＢＶに対して細胞に結合したＣＲ２と競合し、ＥＢＶの細胞への結合を減少させＥＢＶの感染を阻害す性化を阻害するであろう、この作用は、リューマチ様関節炎および全身性エリテマトーデスなどの自己免疫疾患において特に重要である。１Ｃ３ｂへの結合により、本コンストラクトは好中級およびマクロファージによる食作用を阻害することができる０本コンストラクトは炎症を抑えるはたらきをすることもできる。本発明において、免疫グロブリン重鎮のＮｙａに付けられたＣＲ２の５ＣＲＩおよび２を含むＣＲ２免疫グロブリンキメラが構築された。このキメラ分子は１旦抑制を示し、Ｃ３への受容力を介して免疫応答を高める補体受容体としてのＣＲ２を同定した。この発見は、ユｎｖｉｔｒｏでのＢ細胞活性化におけるＣＲ２の役割を示唆する多くの研究にたいするｉｎ　ｖｉｖｏでの相関現象を提供し、ＣＲ２と交差反応するマウスＣＲＩに対するモノクローナル抗体がマウスにおける抗体反応を阻害したという以前の観察結果を明確にするものである。ＣＲ２がＣＤ１９／ＣＲ２複合体のりガント結合サブユニットであることが示されたことと相俟って、ＣＲ２−１ｇＧ１の免疫抑制作用は、ＣＤ１９／ＣＲ２複合体の情報伝達機能が抗原に対するＢｉｔ胞のｉｎ　ｖｉｖｏでの応答を増加させるという生物学的意義を持つことの最初の証拠を提供するものである。可溶性ＣＲ２−ＩｇＧ１キメラは、抗原に対するＢｌｌ胞のｉｎ　ｖｉｖｏでの応答を阻害できることから、治療面において不適当なあるいは望ましくないＢ細胞活性化を示す疾病または障害を治療するのに有用なはずである。上に挙げた疾病および障害に加え、このようなキメラは、（例えば、同種移植片移植後の）免疫抑制または癌の治療に使用される異種移植片モノクローナル抗体などの免疫抑制剤に対する、望ましくない１次抗体反応を防ぐのに存用なはずである。ＣＲＩ配列を基本とする結合領域を持つコンストラクトは、重症筋無力症における虚血に関連した組織損傷および望ましくない補体活性による他の障害を抑えることを含め、可溶性ＣＲＩに匹敵する補体阻害機能を持つであろう、しかし本コンストラクトは可溶性ＣＲＩよりもｉｎ　ｖｉｖｏで長い半減期を持ち、ＭＬＩＩの炎症部により広く拡散する能力を好適に持つことであろう。補体を活性化する寄生生物、細菌および酵母（即ち、リーシュマニア、好血虫）はＣＲ３を用いて細胞に入り込み増殖サイクルを開始する。補体受容体認識配列を持つコンストラクトば寄生生物上の受容体結合部位をマスクし、融合タンパク質のガンマ−ＩＭのＦｃドメインを介してその複合体をＦｃ受容体へと送り込むであろう、このようにして寄生生物は、ＣＲ３媒介性食作用によって好中球内（ここでは寄生生物は動物の防御機構から保護される）に取り込まれるのではなく、Ｆｃ受容体誘起性酸化的バーストにさらされることになる。種々の補体依存性現象を阻害するような動物の治療は、本発明により提供される組み換え融合タンパク質またはコンストラクトの投与により達成することができる。補体以外の標的分子に結合する認識ペプチドを持つ組み換え免疫グロブリン融合タンパクＷＬ個々の標的分子の細胞への結合による細胞現象を阻害するために治療面において利用される。上記の方法において、本化合物は、例えば点滴または巨丸薬などの簡便な経路のいづれによっても投与されることができる０種々の服用系が知られており、これらは融合タンパク質およびコンストラクトの服用に使用することができる。これにはリポソームによるカプセル化、顆粒、またはマイクロカプセルが含まれる、他の導入方法には皮肉投与、筋肉投与、腹膜内投与、静脈投与、皮下投与、鼻腔内投与、および経口投与が含まれるがこれだけに限定されない。本発明はまた、医薬組成物を提供する。そのような組成物は治療上有効量の融合タンパク質または構築物および、治療上許容される媒体を含んでいる。このような媒体は、生理食塩水、平衡化された生理食塩水、デキストロース、および水を含んでいるがこれらのみに限定はされない。典型的には静脈注射による投与用の組成物は、滅菌された等張水溶性緩衝液に溶解されている。必要であれば、組成物は溶解促進剤および注入部位の痛みをやわらげるためにリグノカインのような局所麻酔剤を含んでもよい、一般に、各成分は単位服用量毎に別々に、または混合されてアンプルまたは少量入りの袋といった密閉した容器に、活性単位で換算した活性のある製剤量を明示して供給される。構成物が注入によって投与される場合は、滅菌した医薬剖級の゛注射用水。または生理食塩水を含む注入瓶で調剤されることも可能である。構成物が注射によって投与される場合は、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルは、各成分が投与前に混合されるために、提供してもよい。医薬組成物の一つまたはそれ以上の成分て満たされた、一つまたはそれ以上の容器を含む製剤のバンクもまた、本発明の範囲に含まれる。組成物はタンパク質の血漿レベルが約１から１００μｇ／ｍｌの範囲を維持するように投与されるが、これは融合タンパク質または構築物の特異的結合反応に必要なＫｄに基づいている。以下に示す実施例は説明のためにのみ含まれており、本発明の範囲を限定することは意図しない。憲施例１ヒトタイプ２補体受容体（ＣＲ２，ＣＤ２１）は、ヒトＣ３ｄｇおよびニブシュタイン−バール−ウィルス（ＥＢＶ）のりガントである。これら二つのりガントに対する結合サイトは二つのアミノ末端の短い共通繰り返し配列（ＳＣＲ）に位置している（Ｌｏｗｌｌ、ａｔ　ａｌ、＋　（１９８０）、ムムＬ撫（、１７０：４９３１１９４６）、これら５ＣＲｓはガンマ−１鎖をコードするネズミのゲノミツク重［ＤＮＡの５゛末端にクローン化された。得られた融合タンパク質はネズミのミエローマ細胞系でうまく発現さａ、　ＣＲ２−１ｇＧ１と名付られた。ネズミのゲノミック　ガンマ−Ｉ　ＤＮＡへのＣＩ＋２のクローニングＢａ１ｌａｒｄ、ｅｔ　ａｌ、　（１９８６）、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、［ｊＳＡ、　８３：９６２６−９６３０に従ってｐｓＮＲＯ２１と名付けられたネズミ　ガンマ−１ゲノミツククローン（参考文献の変異体１）はアミノ酸５番目と６番目の間にＰｓｔｒサイトを含んでおり、安定した重接への組み込みによって、０４１８１を性を与える。Ｃ詑の最初の二つの５ＣＲｓを含んでいるＥａｅｌ−Ｘｈｏｌ断片はｅＤＮＡクローン（ｌｌｅｉｓ、ｅＬ　ａｌ、（１９８８）、ムムｈ−耐ｄ、、１６７　：１０４７−１０６６　に基づく）から単離された。二つの短いオリゴヌクレオチドは、ガンマ−Ｉ　ＤＮＡのＰｓｔｌさいとにＣＲ２断片を挿入することが出来るように作成された。５“オリゴヌクレオチドはイムノグロブリンの読み枠を保持するために付加された。３゛オリゴヌクレオチドはＣＲ２とｖｌ頷の間の柔軟な連結のためにヴアリンとセリンをコードしていた（図２の配列参照）、こうして得られたクローン（ｐｓＮＲｃｌ＋２）はアミノ酸１−５で再び開始するネズミガンマー１１ｔをコードする（図１．２．３参照）。舌？クトロボレーシゴンとＪ５５ａミエローマ細胞系はＳ、Ｌ、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ博士の厚意で提供された。それは９χ（ｖ、’ｖ）の仔ウシ血清（ＢＣ３）を添加したＲＰＭ１１６４Ｃ１＠地（′＾ＴＣＣＣａｔａｌｏｇ　ｏｆＣｅｌｌ　Ｈｎｅｓ　ａｎｄ　Ｆｌｙｂｒｊｄｏａａｓ、”　６ｔｈ　Ｅｄ、、１９８８Ｓｐｐ、３５３−４）で培養された。Ｊ５５８Ｌはラムダ軽鎖を合成するＪ５３Ｂ　（ＡＴＣＣアクセツションナンバー＃ＴＴＢ６）の重鎮を失った変異株である。　ｐｓＮＲｃＲ２および修飾されていないガンマ−ＩＤＮ＾（ｐｓＩｉｌ！０２１　）はＰｖｕｒを用いて直線化された。ミエローマ細胞はエレクトロボレーシランでトランスフェクシヨンさ瓢２４時間後にＧ４１８（１ｍｇ／−１）の添加により選択さね、マイクロタイタープレートにクローン化される。得られたクローンは選択され〜上清はＥＬｒＳＡによってＩｇＧ１活性を測定された。これは、以下のようにして行なわれた：ネズミ■ｇＧのＦｃ−断片に対する抗体は組織培養上清中に存在するいかなるＩｇＧ１をとらえるようにマイクロタイタープレートのウェルに固定化された。ネズミのイムノグロブリンのラムダ軽鎖に特異的な、ペルオキシダーゼでラベルされた二次抗体は、結合の後、プラスミドと親株のミエローマ細胞からのラムダ値由来のガンマ−ＩＩＩを含む完全なＩｇＧの存在をシグナルで示す。タヱバえ宣Ω精製発現されたタンパク質ＣＲ２−１ｇＧ１＆ＩｇＧ世記述された方法にしたがって（ＢｒｕｇｅＩＩｌａｎｎ、　ｅｔ　ａｔ、　（１９８７）、ム」狂、撫九、　１６６　：１３５１−１３６１）　ＮＩＰ−セファロース上のアフィニティークロマトグラフィーによって培養液上清から精製された。　５０５−ＰＡＧＥによる解析によって精製されたタンパク質は、軽鎖はそのサイズが等しく、ＣＲ２− １ｇＧ１キメラの重鎖はＩｇＧ１の場合よりも１９ｋ［ｌ大きいことが明らかになったが、これはＮグリコシレージョン化され得るふたつのサイトを持つ５ＣＲｓが二つ存在することと、整合性を示していた０図９参照。２　ヒトＣ３ｄの　ムしたＣＲ２に・　る　のＡ　るムに５６２１ｉ１胞（ＡＴＣＣアクセツションナンバーＣＬＬ２４３）はＬｏｗｅｌｌ、　ｃｔ　ａｌ、　（１９８９）に従って調製されたヒトＣＲ２の配列を含む発現ベクターで、リボフエクシ町ン、（Ｂｅｔｈａｓｄａ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｉｎｃ、）によってトランスフェクシヨンされた、グルタルアルデヒド重合されたＣ３ｄｇはｔｔｓ　ｌでラベルされた＜ｐＣ３ｄｇ）　（Ｃａｒｔｅｒ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１４３：１７５５−１７６０　）、細胞はｌμｇ／−１のｐＣ３ｄｇとともに、増大する濃度のｒｇＧｌまたば実施例１のＣＲ２−ＩｇＧＬの存在下あるいは非存在下で、氷上で３０分培養されたのち、等量のジブチル−およびジノニルフタレートの混合物中で遠心操作された。沈澱中および上清中の放射活性はガンマ−カウンターで決定された。ＫＳ６２１ｉ！胞に於ける重合Ｃ３ｄｇのＣＲ′２との相互作用番だｎＭの濃度の組換え可溶性ＣＲ２−１ｇＧ１によって５０％阻害される（図４）、可溶性で、切断された形の、膜貫通領域及び細胞内領域を欠いたｃｎに対するＣ３ｄｇの単価の結合は、Ｘｄが２７．５μＭで生じる（Ｍｏｏｒｓ、　ｅｔ　ａｌ−＋　（１９８９）　）　ａ従って、キメラタンパク質の二つの腕の中にある二つのＣＩ？２結合領域はｐＣ３ｄｇと相互作用し、２僅の結合反応を引き起こし、アフィニティーを実質的に強める。ムシタＥＢＶ　７ハクニＺｓＣＲ；ｌ’　ｒ　Ｇｌ（Ｄ　”８９５／８細胞（ＡＴＣＣアクセッシッンナンバー　＃ＣＲＬ　１６１２）は４０℃ｇ／ｍｌのＰＭＡ（フォルボール　ミリステート　アセテート）が、Ｄｏｌｙｎｉｕｋ、　ｅｔ　ａｌ、　（１９７６）　Ｊ。Ｖｊｒｏ！、　、　１７：９３５−９４９において記述されているように、　ＥＢＶの発現と分泌を誘導するために、添加されていることを除けば、実施例１で用いられたのと同じ培地で培養された。１、Ｇ１およびＣＲ２−１ｇＧ１は２．６７ｘ１０’／ｍｇおよび２．３７！１０″７ｍｇという特異的活性で１２Ｓ１でラベルされた（Ｆｒａｋｅｒ、　ｅｔ　ａｌ−＋　（１９７８）　Ｂｊｏｃｈｅｔ　Ｂｉｏ　ｈ　ｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｗ。、地：８４９−８５７）、誘導されたＢ９５／８の生育可能な細胞はフィコール −バック（Ｐｂａｒｓａｃｉａ　）上に集束した。ＩＩ胞はりガントと共に氷上で３組間培養さネヘ等量のジブチル−およびジノニルフタレートの混合物中で遠心操作された。沈澱中および上清中の放射活性はガンマ−カウンターで決定された。放射標識されたＣＲ２−１ｇＧ１はＢ９５／８細胞で発現しているＥＢＶタンパク質に、０．５ｎ阿のアフィニティーで結合した（図５）、これは、単価の結合のにｄが３．２ＨＭであったように、ＣＲ２のＥＢＶへの２価の相互作用を再び示唆している（Ｍｏｏｒｅ、　ｅｔ　ａｌのザイモサン粒子への取り込みの測定によって比較された。このザイモサン粒子は、それぞれマウスまたはヒト血清中で、その他の経路の活性化を許容す１ｇ２÷およびＣａ２＋の存在下で、あるいは、相補する活性化を阻害するＥＤＴＡの存在下で、保温されたものである。これらの相補する活性化粒子は、主としてＣ３のＣ３ｂおよびｉｃ３ｗＩ片で被膜されており、１Ｃ３ｂはＣ３ｄｘｉ域を含み、ＣＲ２においてＣ３ｄｇと同じアフィニティーで同じサイトに結合する。ＣＲ２−ＩｇＧ１は、ヒトおよびマウス０断片で、それぞれ、キメラはへテロなりガントに対する方が、ホモロガスなリガンドに対するよりも、高いアフィニティーを持つことを示す、１０．０＋／−３，７ＨＭ（ｎ＝５．平均上／−ＳＤ）および３．２＋／−１，６ＨＭ（ｎ＝４）のＫｄで被膜されたザイモサン粒子に結合する。（図１０参照、）従って、ＣＲ２−ＩｇＧ１キメラは細胞内ＣＲ′２のマウス内の相補活性化複合体の結合に対して競合するために用いることが可能である。３　ＥＢＶ−インフェクシッンのＥＢＶは実施例２に従って培養された細胞から精製された。　ＥＢＶは１２０００ｇａｖｖで９０分間遠心することによって沈澱化さねへもとの体積の工χに再懸濁さね、０．８μ請膜フイルターを通じて濾過し、１００Ｘ　ＥｆｌＶとした。対数増殖期にある、５ｘｌＯ’　ＲＡＭＯ５細胞ＣＡＴＣＣアクセッシ＊　７ナンハー　４１５９６）は、１０ｔｌｌ　（７＞１００ＸＥＢＶおよび様々な濃度のＣＲ２−［ｇＧｌまたば実施例１におけるＩｇＧ１コントロールを含む頒μ ｌの実施例２のｍｍ培養培地中で培養された。３′７℃で二日間培養後、細胞は洗浄さり、、顕微鏡スライド上に載せらり、空気乾燥されてメタノールで固定された。それらは、ニブシュタイン−バール核抗原（ＥＢＮＡ）に対する抗体を含むことが示されている１０％のヒト血清と、ヤギ抗ヒト　Ｃ３−ＦＩＴＣとともに、３７℃で３０分間連続的に保温さ也、染められた＊　（Ｇｅｒｂｅｒ（１９８０）、　’Ｈｅｒｐｅａｖｉｒｕｓ＋’　ｉｎ　Ｌｅｎｎｅｔｔｅ、ｅｔ　ａｌ、、ｅｄ＆、＋　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｃｌ１ｎｉｃａｌ　ｌ’ｌｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　３ｒп@ｅｄ、、Ａｓ、Ｓｏｃ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、＋　ｌｌａｓｈｉｎｇｔｏ口、ｐｐ−８０７− ８０９）。ＥＢＶによるＩＩＡ？ｌＯ５Ｇ１胞のインフェクションはＣＲ２−ＴｇＧｌの添加によって、量に依存して、阻害され得た。０．４μｇ／ｍｌの濃度では、ＥＲＮＡ発現は、バックグラウンドのレベルにまで低下した。コントロールのＩｇＧ１は非添加と同様の作用を示した；どちらの場合もｌＯｌのＲＡＩ’）ＯＳ細胞がインフェクトされた。実施　４　ＰＢＬによるＥＢＶ悸；■−チミジンの　゛みの　。ＣＲ２−１ｇＧ１の、ＰＢＬｓのＥＢＶ−誘導性増殖に対する阻害能力はＴ−リンパ球の増殖を阻害するシクロスポリン存在下で評価されｆ４ＥＢＶウィルスは実施例２の記述に従って８日間増殖させた培養細胞の上清から精製した。ａｌ胞は３５００　ｇｍｖ＊で１５分間の遠心によって除去された。上清は０．４μ− の膜フィルターを通した後、末梢血白血球（ＰＢＬ）のインフェクシランに用いられた。単核リンパ球は末梢血からフィコール−バックによって、遠心して単離された。　５０Ｊｌｌ　ＲＰＭＩ　１６４０　．２０χ　ＢＯ中の１０’　ＰＢＬは、５０μ】のＥＢＶ　２濁液および様々な濃度のＣＲ２−ＩｇＧ１または実施例１におけるコントロールのＩｇＧ１とともに、３７℃で一晩培養された。Ｔ細胞による干渉を防ぐために、シクロスポリン（２μｇ／ｍｌ）、’）＜、ＲＰＭＩ　１６４０．１αエタノール、２ＺＴ鴫ｅｎ８０に溶解された、ｌａｇ／ｍｌ保存溶液から添加された　（！？１ｃｋｉ＋１ｓｏｎ、　ｅｔ　ａｌ、、Ｃｅ１ｌ　ｒ＠ｍｕｎｏ１．　（１９８４ン、ｖｏｌ、８７．　ｐｐ、８４６−６５８　пB ４８時間後に１μＣｉの２Ｈ−チミジンが添加された。１２時間後に細胞は集められ、取り込まれた放射活性は液体シンチレーシッンカウンターで測定された。 ′バーチミジンの取り込みによって発現したＥＢＶインフェクトされたＢ−リンパ球の副産物は、ＣＲ２−ＩｇＧ１によって量依存的に阻害さり、　５０ｇｇ／ｍＩで完全に阻害される（図６）。ｒ　５　ＣＲ２−ＩＧＩの、に・　るー　・の補体依存的な、Ｔ依存的またはＴ非依存的抗体反応に対する抗体反応のネズミのモデルは確立されている（？ｔａＬｓｕｄａ、　ａｔ　ａｌ−＋　（１９７８）、Ｊ、Ｉ−ｕｎＯｌ、　旦：　２０４８およびＭａｒｔｉｎｅｌｌｉ、　ｅｔ　ａｌ、　（１９７８）　Ｊ、　Ｉｍｕｎｏｌ、１２１：　２［）４３）　、　ＢＡ［、Ｉｌ／ｃ}ウスはＮＣＩ飼育施設から得た。それらは、到着後１週間休まされた。補体の枯渇のために、マウスは加μｇのコブラ毒因子（ＣＶＦ）を腹膜内に、免疫化の前に２４時間に渡って等量ずつ４回注入された。　Ｃ１ｉＣ１１２−ｆおよびコントロール（無関係な！ｇＧｌ）は免疫源である蛍光フィコールとともに、免疫化する時点に投与された。このＴ非依存的な抗原は、担体分子につき９１分子の蛍光を含んでいる。マウスは少１！（８μ８）および多１ｉ（１００μ８）の蛍光− フィコールによって免疫化された。５日目にマウスはＢ嬢唄血液サンプルは吸引され、肺臓細胞は、ＰＦＣ分ｓ、　ｅｔ　ａｌ、、Ｊ、　Ｉｍｕｎｏｌ、　（１９８９）、　ｖｏｌ、、　１４３．９９．１２３９−１２４４　）　、　１ｇＭ値は用い■ れたＥＬＩＳ＾−システムにおいて測定された１ＩＯＤ／ｓｉｎと比例していた。免疫化と同時に投与された、１１００ｐのＣＲ２−１ｇＧ１はＩ−レベルを６７　ａ＋ＯＤ／ｓｉｎから４０に低下させた。　ＣＶＦは１５　ｓＯＤ／ｗｉｎ　まで大幅に低下した：００日目決定されたバックグラウンドは５　ｍＯＤ／■ｉｎ　であった（図７　）　、　ＣＲ２−１ｇＧ１で処理したネズミの肺臓におけるＰＦＣｓの数もまた約５０χ低下していた：コントロールのＩｇＧ１で処理したマウスは１０−に対して、３５００の特異的プラーク、ＣＶＦ処理した一ｒｉｘは１０００．　ＣＦｒ２−１ｇＧ１処理したマウスは２２００となった。ＣＶＦはコブラ毒から得られたタンパク質で、ωに対するコンペルターゼの活性を持つ、この酵素は注入されたマウスの活性のあるＣ３を枯渇させ、したがって、少量の免疫源に対する免疫反応を低下させる。　ｃｖｐはこれらの実験に於てポジティブコントロールとして用いられている。　ＣＢ２−ＩｇＧＵｍ合タンパク１ｔＳよ産性された特異的ｒｇＨのレベルを低下させ、８μｇの蛍光フィコールによって免疫化された後の肺臓当りのＰＰＣの敗をＣＶＦと比較して５０１まで低下させる。　１００　ｔｔｇ蛍光フィコールに対する反応はＣＶＦで観察されるほど顕著には低下しない（Ｍａｒｔｊａｅｌｌｉ、ｅｔ　ａｌ、、（１９７８）、Ｊ、Ｉｍｕｎｏｌ、、、５　：２Ｑ５２−２０５５）。ＣＲ２−１ｇＧ１は細胞内ＣＲ２と、Ｃ３ｄｇにたいして、効果的に競合するが、これはおそらく、抗体−抗原複合体を生むさせ、ここに免疫化の間に結合し、したがって、ａｌｌ胞に対するＣＲ２の共に刺激する役割を減少させるのであろう、　ＣｌＩ２−１ｍ１はＢ細胞の活性化をｉｎ　ｖＬμで抑えることが出来るため、扱いにくい抗原特異的Ｂ細胞活性化を含む病状においても臨床学的に有用であろう。ＣＲ２−１ｇＧ１構築物の、Ｔ−依存的抗原、ヒツジ赤血球に対するマウスの反応における効果もまた、測定された。３つのグループのＢＡＬ［ｉ／ｃマウスはヒツジ赤血球に対する免疫反応を評価された（Ｅ）：！初のグループのマウスは全量８００μｇとなる組換えＩｇＧ１を４回に分けて、免疫化０時間に静脈内に、そして、免疫化０．５時間、３時間、および１７℃寺間後に腹膜内にそれぞわ、４ｘｌＯ’および４ｘｌＯ’　Ｅ与えられた；２番目のグツドブのマウスにはＩｇＧ１の代わりにＣＲ２−ＩｇＧ１が投与された；そして、３番目のグループのマウスは免疫化に先立つ２４時間の間にコブラ毒因子処理によってＣ３を枯渇させられた。４番目のグループのマウスにはＰＢＳのみが与えられ〜ヒツジＥによる免疫化はされなかった。ＣＲ２−１ｇＧ１およびＩｇＧ１の注入の方法はＣＲ２，１ｇＧ１の最初の半減期を記述する基本的な代謝の研究の後に明示された。免疫化の後、５日目にマウスはヒツジ已に特異的な肺臓直接的プラーク形成細胞（ＰＦＣ）の数と、抗−Ｅ　ＩｇＭ、　１ｇＧ１．１ｇＧ２ａ、　ＩｇＧ２ｂおよび１ｇＧ３の血清レベルを評価された０組換えＩｇＧ１を与えられたコントロールのマウスはヒツジＥに対して、量に比例して反応し、牌１１ＰＦｃの敗と、ＩｇＧ１を除いた計測した全てのアイソタイプのなかで特異的抗体の血清濃度が増加した（図１１）。既に報告されているように、特異的抗体反応はマウスＣ３の枯渇によって消滅するが、このことは、この実験で用いられている抗原の濃度では、Ｂｌｌ胞の反応はこの補体タンパク質の活性化に依存していることを示唆している。ＣＲ２４８Ｇ１を与えられたマウスはω−消失マウスと同様に免疫抑制されており、このことは、細胞内のｃｒ２はこのＴＲ１胞依存的Ｂ細胞反応の補体依存生を調製していること、そして、Ｃｎ−１ｇＧ１は丁−依存的抗原に対する抗体反応の効果的な抑制剤であることを意味している。ｇ　のアイソ　イブスイーチのさらに、ＣＲ２４ｇＧＬキメラの、■−以外のアイソタイプのうちで抗４抗体の発現に対する効果を検討するために、マウスは４ｘｌＯ”　Ｈの免疫化後３から５週間に渡って評価された。二つのグループのＢＡＬＢ／ｃマウスは、全量８００ｕｇとなるＩｇＧ１およびＣｎ−１ｇＧ１をそれぞ籾等量となるように５回に分けて、免疫前１時間に腹膜内に、免疫化と同時に静脈内に、そして、免疫化０．５時間、３時間、およびＨ時間後に腹膜内に投与された；３番目のグループはＰＢＳを投与され、Ｅによる免疫化は受けなかった。　（ｉ−１ｇＧｌは抗ＥＩｇＭを５日目に完全に抑制し、それ以後はこの特異性を有するＩｇＭはいかなるグツドブに於いても検出できなかった（図１２）。後期に最高値を持ち、ＩｇＧ１処理されたマウスでは４０日にわたって持続する、様々なＩｇＧアイソタイプの中で、抗Ｅの出現もまた、ＣＲ２−ＩｇＧ１で処理されたマウスでは５ｏｚから７０ズ消失していた。従って、可溶性ＣＲ２は、 −次反応およびそれに続く、Ｔ、依存性抗原、ヒツジＥへのアイソタイプスイッチングを阻害する。この実験は、Ｍｉ換えタンパク質中に混入している可能性のあるリボポリサンカライド（ＬＰＳ）の影響を除（ためにＬＰＳ耐性である、Ｃ３Ｈ／ｌ１ｅＪ株でもおこなわれたが、Ｏ，Ｉ６ｎｇ／ｍｇタンパク質以上の感度に於いて行なわれた、Ｌｆｍｕｌａｓ上清分析に於いて、何も検出されなかった。　ＣＲ２−１ｇＧ１は、ＢＡＬＢ／ｃマウスの場合と同様、Ｃ３Ｈ／ＨＥＪマウスに於いて、ヒツジＥに対するＩｇＭおよびＩｇＧ反応を抑制する働きを見せた（図１１）、このことはＣＲ２−ＩｇＧ１分子が、抗原に対する１次Ｂ細胞応答を阻害する、ｉｎ　ｖｉｖｏにおける効果的な免疫抑制剤であることを示している。６　れたＣＲ２の　貢の組換えＩｇＧ１、ＣｌＦ３−１ｇＧ１およびＣＲ２−Ｆ　（ａｂ’）　！はＩｔＳｌで標識さ名、マウスに注入された。様々な時間に血液は採取ざ臥放射活性が測定された。標識された種類の濃度は既知の特異的放射活性を用いて計算された。得られた結果は図１３に示されている。減衰は各種に対して、２相的であっｔ＝　Ｃｎ−Ｅｇｃｌの半減期は最初！ｇＧｌよりも短かったが、１０から加持間にかけてはそれらの半減期は類似していた。ＣＲ２−Ｆ（ａｂ’）ｔはＩｇＧ１またはＣ２２〜１ｇＧ１の両方の場合よりも明らかにより早く減衰した。従って、Ｃｎの５ＣＲｓの！ｍｌの各重鎮への融合はイムノグロブリンのｉｎ　ｖｊｖ。における特徴的な安定性の大部分を維持している分子を産生していることになる７　ＣＲ２−Ｆ（ａｈ’）　は　入　るＣ１１１は３０の５ＣＲｓ　（短い共通繰り返し配列）をＦ−アロタイプ中に含んでいる。５ＣＲｓ　は最初の２８のうち、７つの５ＣＲｓの４グループとなるように並べられている。これらのグループのうちのびとつ（長い相同繰り返し構造）はＣ４ｂの結合サイトをもち、ふたつはＣ３ｂに対する結合サイトを持っている。　８−１１と番号が打たれた５ＣＲｓ（Ｃ３ｂ　結合活性があると予想されている）は本発明に従った、組換えＤＮＡ技術によってイムノグロブリン重１ｊＦ（ａｂ”）に付着している。　ＣＲＩの５ＣＲｓ８−１１に対応する配列は末端のＰｓｔｌ認識配列を含む特異的プライマーを用いて、ＣＲＩの全長ＤＮＡクローンの重合連鎖反応増幅によって産生された。　（２７マーの５′プライマー配列は、５’ＣＴＧＣＡＧＣＴＧＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＡＡＧＣＣ３’；　４２マーの３°プライマ（列はｓ”ｃａｃｃｔｃｃＡＧｒｙｃｃＡｃｃｒｃｃｃｒｃａｃｃｃｒｃ　、　）増幅されたＤＮＡはＰｓ　ｔＩで切断されへ得られたＣＲＩ断片はＦ（ａｂ’）ｚベクター（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ　ｅｔ　ａｌ＋ｓ　１９８４．　Ｎａｔｕｒｅ　３１２：６０４−６０８）のＰｓｔｌサイトにクローニングされた。ハイブリッドのＣＲＩ−Ｆ（ａｂ’）ｚは、組換えプラスミドをＪ５５８Ｌ細胞にトランフフェクトし、得られた細胞をＲＰＭＩ培地にＧ４１８とＩＯ！仔ウシ血清を加えた培地内で培養するこ七によって、タンパク質として発現される。タンパク質の発現はＮＩＰ被膜ＥＬＩＳＡ分析によって決定される１発現されたＣＲＩ−Ｆ（ａｂ’）ｘばＮＩＰ−セファロースアフィニティークロマトグラフィーによって精製さａ、　ＰＢＳ中で透析され、−１００℃で保存される。得られたタンパク質は、ヒト赤血球に対する０ｂの結合に対する阻害能に関して評価される（Ｅ）、比較するために、可溶性ＣＲＩ（ｓｃＲｌ）を用いて同様の阻害実験が行なわれた。Ｃ３ｂ　２回体はＩｔＳｌによって放射性標識さね、ヒト赤血球とともに培養される、様々な量の５ｃＲ１／ｐＢｓｃＲ１ｃ、またはＦ（ａｂ’）ｚ　−ＣＲＩが添加さ損券血球に結合した、”’　ｌ−Ｃ３ｂの量が決定される６図１４に示したように、５ｃＲ１／ｐＢ５ｃＲ１およびＦ（ａｂ’）ｇ　−ＣＲＩの両方がＣ３ｂ　２回体の結合を＠様に阻害する。このことば、５ＣＲｓ８．１１はＣＲＩの完全なＯｂ結合領域を含んでいることを示している。従って、３０ＳＣＲｓを持つ５ｃＲ１／ｐ８５ｃＲ１の完全な２価のＯｂ結合機能は、これら５ＣＲｓのたった４つを、各Ｆ（ａｂ’）ｚ構造物の重鎮に付加するだけで、獲得可能である。８　Ｃｌ２ｌ−Ｆ（ａｂ’）　は　ｇな　（７）　を　ＬＪい抗体感受性ヒツジ赤血球（Ｅ＾）はヒト補体の古典的経路の活性化によって溶解される。ヒ）　ＣＲＩの可溶性断片は〜結合し、ヒト補体のＣ４ｂおよび０ｂを不活性化する事によって、この溶解を阻害する。　５ｃＲ１／ｐａｓｃｌ１１命よびＦ（ａｂ’）ｚ　−ＣＲＩが、この溶解を阻害する能力も解析された０図１５に示したように、５ｃＲ１／ｐＢ５ｃＲ１は、この溶解をほとんど完全に阻害する。　Ｆ（ａｂ “）ｚ　−ＣＲＩ　（ＳＣＲｓ　８−１１のみを含む）は、かなり弱い程度に阻害する。おそら（、これは、構築物中にＣ４ｂ結合サイトが欠落しているためであろうと考えられる。　Ｃ４ｂ結合機能およびＣ４ｂ不活性化機能を（Ｒ１−Ｆ（ａｂ’）ｚに与えるような５ＣＲｓの付加によって、同様な古典的経路阻害機能が供与されることが期待される。９　ＣＲＩ−Ｆ（ａｂ’　は　の　るザイモサンは酵母の細胞壁の調製物であるが、ヒト血清中の代替経路を活性化する。活性化は、０ａまたはＣ５ａに対する放射免疫分析（ＲＩＡ＞によって測定することが可能である。　５ｃＲ１／祁父Ｒ１ｃはこの活性化を阻害することが知られている。Ｆ（ａｂ”）ｔ　−ＣＲＩ構築物による、ザイモサンによる代替経路の活性化の阻害は、測定さね、５ｃＲ１／ｐＲｓｃＲ１ｃの場合と比較された０図１６及び１７に示したように、Ｆ（ａｂ’）ｚ　−ＣＲＩは５ｃＲ１／ｐＢｓｃＲ１ｃと同様にＣ５ａの形成を阻害し、５ｃＲ１／ｐＢｓｃＲ１とほとんど同様にＣ３ａを阻害する。これらの結果は、５ＣＲＩ／ｐＢｓｃＲ１の代替経路阻害機能の全ては５ＣＲｓ　８４１のみをＦ（ａｂ’）ｓ　ｔＲ構築物中各重鎮に転移することによって再現されることを示唆している。これらの研究は、また、これらの５ＣＲｓが代替経路阻害の全８１能に充分であっても、Ｃ４ｂ−結合機能およびｃ４ｂ不活性化機能を存するＣＲＩの最初の長い相同繰り返し配列の５ＣＲｓの付加は、古典的経路阻害機能に必要であることを示唆している。Ｆｌｏ、　／浄書（内容に変更なし）ＦＩＧ、　９浄１ｉｌ）（内容に変更なし）ＰＢＳ　４ｘｌＯＥ　４ｘｌＯＥ浄書（内容に変更なし）ＦＩＧ、１２Ａ時間（日）ＦＩＧ、１２ＢＢＡＬＢ／Ｃ時間（日）ＦＩＧ、１２Ｃ浄書、１・′り容に変更なし）ＦＩＧ、１２０ＢＡＬＢ／ｃＦＩＧ、１２Ｅ時間（日）浄１１（内容に変更なし）時間（日）ＦＩＧ、１２ＧＣ３Ｈ／）ＩｅＪＩＩＷＪ（日）ＦＩＧ、１２Ｈ０３ル乍ｅＪ浄書（内容に変更なしｙＦＩＧ、　１２１Ｃ３）ｔ／ＨｅＪ時間（日）ＦＩＧ、　１２ＪＣ３）１／）ｌｅＪＳＩＦ（内容に変更なし）ＦＩＧ、１３時間（ｈ）平成　５年　６月ｑ日

Claims

【特許請求の範囲】

１．哺乳動物の循環系において安定で、標的分子に対する認識部位を含み免疫グロブリン鎖のＮ末端に緊がれたポリペプチドからなる、可溶性組み換え融合タンパク質。
２．少なくとも１つの鎖が請求項１記載のの可溶性組み換え融合タンパク質である抗体分子からなるタンパク質。
３．上記ポリペプチドが補体結合部位またはウイルス結合部位の配列に相当する配列を含む、請求項１記載のタンパク質。
４．上記ポリペプチドが１つまたは複数の短い共通繰返し配列を含んでいる、請求項１記載のタンパク質。
５．上記抗体分子が、軽鎖または重鎖の一方がＣＲ１のＣ４ｂ結合部位を含む認識部位を含み、他方がＣＲ１のＣ３ｂ結合部位を含む認識部位を含むようなものである、請求項２記載のタンパク質。
６．上記抗体分子がＣＲ１のＣ４ｂ結合部位とＣＲ１のＣ３ｂ結合部位の両方を含む重鎖からなる請求項２記載のタンパク質。
７．ＣＲ２の補体結合部位、ＣＲ２のウイルス結合部位、およびＳＣＲ１からＳＣＲ２までを含むＣＲ２の補体結合部位からなるグループから選択される認識部位を含む、請求項３記載のタンパク質。
８．ＣＲ１の補体結合部位、ＳＣＲ８からＳＣＲ１１までを含むＣＲ１の補体結合部位、Ｃ３ｂ結合部位を含むＣＲ１の補体結合部位、およびＣ４ｂ結合部位を含むＣＲ１の補体結合部位からなるグループから選択される補体結合部位を含む、請求項３記載のタンパク質。
９．リーダーペプチドをコードするＤＮＡ配列と免疫グロブリン鎖のＮ末端をコードするＤＮＡ配列との間に、標的分子に対する認識部位を含むポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を挿入することにより、免疫グロブリン鎖用の発現ベクターを改変する：ことを含む、請求項１−８記載のタソパク質をコードする発現ベクターの産生法。
１０．請求項１−８記載のタンパク質をコードするＤＮＡ配列を含む発現ベクター。
１１．上記タンパク質を発現する請求項１０記載のベクターをもつ細胞。
１２．免疫グロブリン鎖のＮ末端に緊がれたポリペプチド（該ポリペプチドは標的分子の認識部位を含む）が少なくとも一方の鎖に含まれる抗体分子もしくはフラグメントからなるタンパク質を分泌する、請求項１１記載の細胞。
１３．請求項１１または１２記載の細胞を培養してタンパク質を回収することからなる、該タンパク質の生産方法。
１４．補体結合部位またはウイルス結合部位を含む認識部位を少なくとも１つ持つペプチドを含み、そして更に生理学的に適合可能な可溶性担体巨大分子を更に含む可溶性構築物（コンストラクト）。
１５．上記ペプチドが短い共通繰り返し配列を含む、請求項１４記載の可溶性コンストラクト。
１６．担体巨大分子が免疫グロブリン鎖または抗体分子である、請求項１４または１５記載の可溶性コンストラクト。
１７．上記ペプチドがＣＲ１の補体結合部位およびＣＲ２の補体結合部位を含む、請求項１４記載の可溶性コンストラクト。
１８．ＣＲ２の補体結合部位、ＣＲ２のウイルス結合部位、およびＳＣＲ１の初めから終りまでを含むＣＲ２の補体結合部位からなるグループから選択される認識部位を含む、請求項１４記載の可溶性コンストラクト。
１９．ＣＲ１の補体結合部位、ＳＣＲ８からＳＣＲ１１までを含むＣＲ１の補体結合部位、Ｃ３ｂ結合部位を含むＣＲ１の補体結合部位、およびＣ４ｂ結合部位を含むＣＲ１の補体結合部位からなるグループから選択される補体結合部位を含む、請求項１４記載の可溶性コンストラクト。
２０．請求項１−８記載のタンパク質または請求項１４−１９記載の可溶性コンストラクトを補乳動物へ投与することからなる、該補乳動物における補体依存性の細胞活性化を阻止する方法。
２１．請求項１４−１９記載の可溶性コンストラクトまたは請求項１−８記載のタンパク質を、製薬上許容し得るビークル中に含む治療用組成物。
２２．疾病または免疫障害を持った患者に請求項２１記載の治療用組成物を投与することよりなる、該患者の治療方法。
２３．上記タンパク質がＣＲ２の補体結合部位またはＣＲ２のウイルス結合部位を含み、上記疾病または免疫障が、不都合なＢリンバ球活性化障害、自己抗体／免疫複合体関連疾病、エプシェタイン・バールウイルス関連疾病、および免疫治療剤に対する不都合な抗体反応が関与する免疫抑制障害からなるグループから選択される、請求項２２記載の方法。
２４．上記タンパク質がＣＲ１の補体結合部位を含み、上記疾病または免疫障害が、血栓症状態、重症筋無力症、望ましくないまたは不都合な補体活性化が関与する免疫障害、炎症による障害、免疫複合体関連疾病、および神経学的障害からなるグループから選択される、請求項２２記載の方法。