ES2283013T3 - Utilizacion de antagonistas de factor de inhibicion de emigracion de macrofagos para terapia anti-cancer. - Google Patents
Utilizacion de antagonistas de factor de inhibicion de emigracion de macrofagos para terapia anti-cancer. Download PDFInfo
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Abstract
SE PRESENTA UN PROCEDIMIENTO PARA TRATAR O EVITAR UNA ENFERMEDAD QUE COMPRENDE LA SUPERPROLIFERACION CELULAR EN UN SUJETO QUE COMPRENDE LA ADMINISTRACION AL SUJETO EN EL CUAL SE DESEA EL TRATAMIENTO O PREVENCION DE UNA CANTIDAD TERAPEUTICAMENTE EFECTIVA DE UN AGENTE ANTAGONISTA DEL MIF (FACTOR INHIBIDOR DE LA MIGRACION DE MACROFAGOS). TAMBIEN SE PRESENTA UN PROCEDIMIENTO PARA TRATAR LA NEOVASCULARIZACION TUMORAL EN UN SUJETO, QUE COMPRENDE LA ADMINISTRACION DE UNA CANTIDAD TERAPEUTICAMENTE EFECTIVA DE UN AGENTE QUE INHIBA O NEUTRALICE LA ACTIVIDAD DEL FACTOR INHIBIDOR DE LA MIGRACION (MIF).
Description
Utilización de antagonistas de factor de
inhibición de emigración de macrófagos para terapia
anti-cáncer.
\global\parskip0.850000\baselineskip
La presente invención se refiere a la
utilización de un agente antagonista MIF ("factor de inhibición de
emigración de macrófagos") seleccionado del grupo que consiste en
anticuerpos monoclonales anti MIF, moléculas RNA antisentido MIF y
una combinación de las mismas para la preparación de un medicamento
para el tratamiento o prevención de cáncer o para el tratamiento de
neovascularización de tumores.
El factor MIF fue identificado originalmente por
su capacidad en prevenir la emigración de macrófagos de cobayas
in vitro (Bloom & Bennett, Science
153:80-82, 1966; y David, Proc. Natl. Acad Sci. USA
56:72-77, 1966). El factor MIF se ha indicado que
está asociado con reacciones de hipersensibilidad de tipo retardado
(Bloom & Bennett, 1966, supra; David, 1966,
supra), producidas por células T activadas por lectina
(Weiser y otros, J. Immunol.126:1958-1962, 1981), y
para incrementar la adherencia de macrófagos, fagocitosis y
actividad tumoricida (Nathan y otros, J. Exp. Med.
137:275-288, 1973; Nathan y otros, J. Exp. Med.
133:1356-1376, 1971; y Churchill y otros, J.
Immunol. 115:781-785, 1975). Desafortunadamente,
muchos de estos estudios utilizaron sobrenadantes de cultivos mixtos
que se creían MIF puro, que se demostró más tarde que contenían
otras citoquinas tales como IFN-\gamma e
IL-4, que tienen también actividad inhibitoria de
emigración (Mclnnes&Rennick, J. Exp. Med.
167:598-611, 1988; Thurman y otros, J. Immunol.
134:305-309, 1985).
El MIF humano recombinante fue clonado en primer
lugar a partir de una biblioteca de células T humanas (Weiser y
otros, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA
86:7522-7526, 1989) y se ha demostrado que el factor
MIF humano recombinante activa los macrófagos derivados de la
sangre para exterminar parásitos intracelulares y células tumorales
in vitro, estimulando la expresión de
IL-1\beta y TNF\alpha, e induciendo síntesis de
óxido nítrico (Weiser y otros, J. Immunol.
147:2006-2011, 1991; Pozzi y otros, Cellular
Immunol. 145:372-379, 1992; Weiser y otros, Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 89:8049-8052, 1992; y Cunha y
otros, J. Immunol 150:1908-1912, 1993). No
obstante, hasta muy recientemente la falta de una fuente fiable de
MIF purificado ha continuado dificultando la investigación del
perfil biológico preciso de esta molécula.
La presente invención da a conocer la
utilización de un agente antagonista de MIF (factor inhibitorio de
la inmigración de macrófagos) seleccionado entre el grupo que
consiste en anticuerpos monoclonales anti-MIF,
moléculas RNA anti sentido MIF y una combinación de las mismas para
la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención
de cáncer.
Según una realización, el cáncer es un tumor
sólido.
En una realización preferente, el cáncer es un
célula B o un linfoma de célula T.
En ciertas realizaciones, el cáncer se previene
por tratamiento de un estado premaligno o un tumor benigno.
En ciertas realizaciones, el cáncer es
seleccionado entre el grupo que consiste en cáncer de esófago,
cáncer de estómago, carcinoma renal, cáncer de vejiga, cáncer de
seno, cáncer de colon, cáncer de pulmón, melanoma, cáncer
nasofaríngeo, osteocarcinoma, cáncer de ovario y cáncer uterino.
En una realización, el agente antagonista de MIF
es un anticuerpo monoclonal anti MIF o un fragmento de unión del
mismo que se une a MIF humano.
La presente invención da a conocer también la
utilización de un agente antagonista de MIF (factor inhibitorio de
la inmigración de macrófagos) seleccionado entre el grupo que
consiste en anticuerpos monoclonales anti MIF, moléculas RNA
antisentido MIF y una combinación de las mismas para la preparación
de un medicamento para el tratamiento de neovascularización de
tumores.
En una realización, el agente es un anticuerpo
monoclonal anti MIF o un fragmento de unión del mismo que se une a
MIF humano.
En una realización preferente, el agente es un
anticuerpo que se une específicamente al factor inhibitorio de
emigración (MIF).
En otra realización, el agente es una molécula
antisentido de factor inhibitorio de emigración (MIF).
La invención se basa en el descubrimiento de que
se requiere MIF para la proliferación de células T in vitro.
La neutralización de anticuerpos monoclonales (mAbs) contra MIF
inhibe directamente la proliferación de células T primarias
inducidas anti-CD3. Estos datos in vitro
predicen que los antagonistas de MIF son terapéuticamente activos
contra poblaciones celulares de tumores en situación de
proliferación de manera general, y contra linfomas en particular.
Además, se han presentado datos in vivo en un modelo de
crecimiento de tumor predictivo de que un antagonista de MIF, en
particular un anticuerpo neutralizante de MIF inhibe el crecimiento
de células tumorales in vivo. Estas observaciones indican
una involucración inesperada de MIF en la regulación del ciclo
celular y el crecimiento celular in vivo a nivel de los
organismos. No obstante, sin limitación a ninguna teoría, parece
que la actividad terapéutica de antagonistas MIF actúa inhibiendo la
vascularización de tejidos de tumores sólidos, y por lo tanto es un
tratamiento universal de tumores sólidos basado en la inhibición de
la nutrición de los tejidos del tumor suprimiendo cualquier
suministro de sangre a los tejidos tumorales en crecimiento.
La figura 1 muestra la inhibición del
crecimiento de linfoma inicial in vivo por tratamiento con
anticuerpos monoclonales neutralizantes anti MIF. La figura 1
muestra la media en siete días de peso tumoral estimado para grupos
tratados anti-MIF y grupos de control isotipo. Se
recogieron células de linfoma de célula B (38C13 células,
proporcionadas por J.D. Kemp, Dept. of Pathology, U. of AI) de la
fase de cultivo de crecimiento exponencial (RPMI/10%FBS) se
centrifugaron 10 minutos a 300 xg, como se lavaron dos veces con
PBS, y se ajustaron a una densidad de 1 x 10^{5} células/ml. Se
inyectó una suspensión de 38C13 (5 x 10^{4} células) por vía
intradérmica utilizando una jeringa de 1 ml dotada de una aguja de
tipo 27. Dentro de 30 minutos, los ratones recibieron una inyección
intraperitoneal de 0,2 ml (0,3 mg) de una igG, anticuerpo de control
isotipo (Pharmingen; San Diego, CA) o un anticuerpo monoclonal anti
MIF XIV.15.5, XIV.14.3 o III.D.9 (facilitado por C Metz, Dept. of
Med. Biochemistry, The Picower Institute). Se repitieron inyecciones
de anticuerpos cada 48 horas durante 6 días. El peso del tumor fue
estimado por mediciones tomadas después de 7 días utilizando galgas
Vernier de acuerdo con la fórmula siguiente: peso tumoral (en
gramos) = (anchura, cm)^{2} x (longitud, cm)/2 (de acuerdo
con Taetle y otros, Cancer Treatment Reports
71:297-304, 1987). Se eutanizaron ratones por
asfixia mediante CO_{2} y se separaron tumores por corte y se
pesaron.
La figura 2 muestra la inhibición del
crecimiento de linfoma inicial in vivo por tratamiento con
anticuerpos monoclonales neutralizantes anti MIF. La figura 2
muestra peso medio en húmedo de masas tumorales diseccionadas de
anti-MF (XIV.15.5) y grupos tratados con control.
Los tumores fueron recogidos de los animales tal, como se describe
en la figura 1.
La figura 3 muestra la inhibición de crecimiento
de linfoma establecido in vivo por tratamiento con
anticuerpos monoclonales neutralizantes anti MIF. En estos
experimentos, el protocolo experimental descrito en la figura 1 fue
seguido excepto que los tumores se dejaron crecer durante 96 horas a
unas dimensiones medias de 0,01 cm^{3} aproximadamente antes de
empezar el tratamiento. Los ratones con tumores fueron distribuidos
a continuación en grupos cuyos tumores mostraron un tamaño de tumor
medio similar. El tratamiento de los ratones y la medición de los
tumores se llevó a cabo de igual manera que en los experimentos de
crecimiento de linfoma inicial descritos en la figura 1. Se
registraron datos sobre tamaños de los tumores cada 48 horas desde
el día 0 (tiempo de inyección del primer anticuerpo (XIV.15,5), 4
días después de la inyección de células 38C13) hasta el día 6.
La figura 4 muestra la inhibición de
proliferación de células de endoteliales humanas in vivo con
anticuerpos monoclonales neutralizantes anti MIF. Las células
endoteliales microvasculares humanas en proliferación (cuarta
pasada)/(Clonetics; San Diego, CA) (5000/pocillo en una placa de 96
pocillos) fueron incubadas con 10-200 \mug/ml de
Control IgG_{1} (Sigma; St. Louis, MO) o anti cuerpo monoclonal
neutralizante anti MIF XIV.15.5 en medio de crecimiento celular
endotelial conteniendo 1% de suero bovino fetal
(ECG-1) durante 3 horas. La actividad proliferativa
de estos cultivos fue medida por la incorporación de [(^{3}H)]
timidina (4 \muCi/ml) en DNA medido por un contador de centelleo
líquido.
La figura 5 muestra la inhibición de la
proliferación de células endoteriales humanas in vivo con
olegonucleótidos antisentido MIF. Células endoteriales
microvasculares humanas proliferantes (4ª pasada; Clonetics),
cultivadas en ECG-1 (5000/pocillo en una placa de
96 pocillos), fueron transfectadas con oligonucleótidos de
fosforotionato (10 \mug/ml; Oligo's Etc,; Wilsonville, OR)
utilizando reactivo de lipofectina según el protocolo del fabricante
(Gibco; Gaithersburg, Md): S-MIF:
5'-GCC-ATC-ATG-CCG-ATG-TTC-AT-3'(sentido,
MIF humano: SEQ ID NO 1); y
AS-MIF-5'-ATG-AAC-ATC-GGC-ATG-ATG-GC-
3'(anti sentido, MIF humano; SEQ ID No 2). Después de 16 horas, la
actividad proliferativa de esos cultivos fue medida durante las
ocho horas siguientes por la incorporación de [(^{3}H)] timidina
(4 \muCi/ml)en DNA con medición por conteo por centelleo
líquido.
La figura 6 muestra la inhibición de la
proliferación de células de leucemia mielogenosa con
oligonucleótidos antisentido de MIF. Se transfectaron cultivos de
células de leucemia mielogenosa crómica de la fase de proliferación
logarítmica K-562 (5000 células/pocillo en una placa
de 96 pocillos;obtenidas de ATCC; Rockville, MD) con los siguientes
oligonucleótidos de fosforotionato (10 \mug/ml; Oligo's etc.)
utilizando reactivo Lipofectina según el protocolo del fabricante
(Gibco); S-MIF:
5'-GCC-ATC-ATG-CCG-ATG-TTC-AT-3'(sentido,
MIF humano: SEQ ID NO 1); y
AS-MIF-5-ATG-AAC-ATC-GGC-ATG-ATG-GC-3'(anti
sentido, MIF humano; SEQ ID No 2). Después de 16 horas de
incubación en condiciones de cultivo celular estándar (37ºC, 5%
CO_{2} en atmósfera de aire humidificado), se midió la actividad
proliferativa de estos cultivos durante las ocho horas siguientes
por incorporación de [(^{3}H)] timidina (4 \muCi/ml; Dupont) en
DNA medido por conteo por centelleo de líquido.
La figura 7 muestra la inhibición de la
vascularización de tumor por tratamiento con anticuerpos anti MIF
in vivo. Se llevó a cabo una comparación del número medio de
perfiles capilares positivos CD31 por secciones con tinción
inmunohistoquímica con un campo de alta potencia (400X) de tumores
recogidos de animales tratados con mAb anti MIF con respecto a
animales de control tratados con Ab. Los resultados demuestran que
los tumores que crecen en animales tratados con anticuerpos anti
MIF, además de ser más pequeños que los que tienen lugar en
animales tratados con anticuerpos de control, se encontraban
significativamente menos vascularizados en base a volumen por
unidad.
La figura 8 muestra un experimento in
vitro que muestra un anticuerpo monoclonal anti MIF inhibiendo
la proliferación de células de fibroblasto NIH3T3.
La presente invención da a conocer la
utilización de un agente antagonista de MIF (factor inhibitorio de
la inmigración de macrófagos) seleccionado entre el grupo que
consiste en anticuerpos monoclonales anti MIF, moléculas RNA
antisentido MIF y una combinación de las mismas para la preparación
de un medicamento para el tratamiento o prevención de alteraciones
relacionadas con tumores. En una realización, el tumor es un tumor
sólido, y más preferentemente un linfoma de células B o de células
T.
Las composiciones de la presente invención
pueden ser utilizadas para tratar estados premalignos, tales como
tumores benignos, alteraciones hiperproliferativas y alteraciones
disproliferativas benignas. Las alteraciones y enfermedades a
tratar por los compuestos de la presente invención incluyen también,
sin que ello sirva de limitación, linfomas de células B y T, cáncer
de piel, tumores cerebrales, cáncer de huesos, cáncer de esófago,
cáncer de estómago, carcinoma renal, cáncer de vejiga, cáncer de
senos, cáncer de colon, cáncer de pulmón, melanoma, cáncer
nasofaríngeo, osteocarcinoma, cáncer de ovario y cáncer uterino.
En una realización de la presente invención, el
agente antagonista es un anticuerpo monoclonal anti MIF o un
fragmento de unión del mismo que se une a MIF humano. En una
realización preferente, el anticuerpo contiene un dominio de unión
que se une inmunoespecíficamente a MIF.
La neutralización o inhibición de MIF puede ser
conseguida en una serie de formas distintas, que puede incluir, sin
que ello sirva de alimentación, la utilización de factores que se
unen a MIF y neutralizan su actividad biológica; la utilización de
antagonistas receptores de MIF; la utilización de factores que
inhiben la actividad enzimática de MIF; la utilización de
compuestos que inhiben la liberación de MIF de fuentes celulares en
el cuerpo; y la utilización de secuencias de nucleótidos derivadas
de la codificación de MIF, secuencias no codificantes y/o
reguladoras para impedir o reducir la expresión de MIF. Cualquiera
de los anteriores puede ser utilizado individualmente o en
combinación para inhibir la actividad de MIF en el tratamiento de
estados relativos a sobreproliferación celular, y además se puede
combinar con cualquier otra terapia antitumoral tal como terapia
farmacológica, quirúrgica, de citoquinas, de esteroides o de genes,
o cualquier combinación de las mismas.
La invención se basa parcialmente en la
hipótesis de que el MIF juega un papel importante en la regulación
de la proliferación celular, y que al neutralizar específicamente la
actividad de MIF, se tendría como resultado la inhibición de la
proliferación celular. Este modelo es soportado por los ejemplos. El
MIF se requiere para la proliferación de células T in vitro.
La neutralización de anticuerpos monoclonales (mAbs) contra MIF ha
inhibido directamente la proliferación de células primarias T
activadas anti-CD3, medida por la incorporación de
[(^{3}H)] timidina. Estos resultados indican que el MIF funciona
regulando el sistema inmune por la activación de células T. La
administración de anticuerpos monoclonales neutralizantes contra MIF
ha inhibido el crecimiento de tumores en un modelo de linfoma de
células B murinas. Además, agentes anti MIF (anticuerpos
monoclonales y moléculas antisentido) han inhibido procesos
dependientes de huésped requeridos para establecimiento de tumor,
tales como el establecimiento de la neovascularización de tumores.
Estos resultados predicen que la neutralización de la producción,
liberación o actividad de MIF tiene una actividad terapéutica
antitumoral significativa, particularmente para tumores sólidos que
requieren vascularización para soportar el crecimiento. Los
factores neutralizantes de MIF comprenden anticuerpos anti MIF,
fragmentos de anticuerpos, receptores de MIF y fragmentos
receptores de MIF.
Se pueden utilizar diferentes procedimientos
conocidos en esta técnica para la producción de anticuerpos para
epítopos de MIF producido de forma recombinante o purificado de
fuentes naturales. Anticuerpos neutralizantes, tales como los que
inhiben actividades biológicas de MIF por competencia de los
epítopos de MIF u obstruyendo estéricamente los mismos,
involucrados en la unión de receptores celulares son especialmente
preferentes para diagnóstico y terapéutica. Estos anticuerpos
incluyen, sin que ello sirva de limitación, policlonales,
monoclonales, quiméricos, de cadera única y fragmentos producidos
por una biblioteca de expresión Fab.
Para la producción de anticuerpos, se pueden
inmunizar varios animales huésped por inyección de MIF y/o una parte
de MIF. Estos animales huésped pueden incluir, sin que ello sirva de
limitación, conejos, ratones y ratas entre otros. Diferentes
coadyuvantes pueden ser utilizados para incrementar la respuesta
inmunológica, dependiendo de la especie del huésped, incluyendo, sin
que ello sirva de limitación, coadyuvante de Freund's (completo o
incompleto), geles minerales tales como hidróxido de aluminio,
sustancias con tensión artificial tales como lisolecitina, polioles
plurónicos, polianiones, péptidos, emulsiones de aceite, hemocianina
keyhole limpet, dinitrofenol y adyuvantes humanos potencialmente
útiles, tales como BCG (Bacilo Calmette-Guerin) y
Corynebacterium parvum.
Los anticuerpos monoclonales para MIF se pueden
preparar utilizando cualquier técnica que proporciona la producción
de moléculas de anticuerpos por líneas de células continuas en
cultivo. Estas incluyen, sin que ello sirva de limitación, la
técnica de hibridoma originalmente descrita por Kohler y Milstein
(Nature, 256:495-497, 1975), la técnica de hibridoma
de célula B humana (Kosbor y otros, Immunology Today, 4:72, 1983; y
Cote y otros, Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 80:2026-2030, 1983) y la técnica de hibridoma EBV (Cole y otros, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. pp. 77-96, 1985). Además, se pueden utilizar técnicas desarrolladas para la producción de "anticuerpos quiméricos" (Morrison y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855, 1984; Neuberger y otros, Nature, 312:604-608,1984; y Takeda y otros, Nature, 314:452-454, 1985) al cortar y unir los genes de una molécula de anticuerpo de ratón de especifidad antigénica apropiada junto con genes procedentes de una molécula de anticuerpo humano de una actividad biológica apropiada. De forma alternativa, se pueden adaptar técnicas descritas para la producción de anticuerpos de cadera única (Patente USA 4.946.778) para producir anticuerpos de cadena única específicos de MIF.
Natl. Acad. Sci. USA 80:2026-2030, 1983) y la técnica de hibridoma EBV (Cole y otros, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. pp. 77-96, 1985). Además, se pueden utilizar técnicas desarrolladas para la producción de "anticuerpos quiméricos" (Morrison y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855, 1984; Neuberger y otros, Nature, 312:604-608,1984; y Takeda y otros, Nature, 314:452-454, 1985) al cortar y unir los genes de una molécula de anticuerpo de ratón de especifidad antigénica apropiada junto con genes procedentes de una molécula de anticuerpo humano de una actividad biológica apropiada. De forma alternativa, se pueden adaptar técnicas descritas para la producción de anticuerpos de cadera única (Patente USA 4.946.778) para producir anticuerpos de cadena única específicos de MIF.
La técnica de hibridoma ha sido utilizada para
generar anticuerpos monoclonales anti MIF. Se han aislado hibridomas
que segregan anticuerpos monoclonales IgG dirigidos contra formas
humanas y murinas de MIF y se han caracterizado por su capacidad en
neutralizar actividad biológica de MIF. Los anticuerpos monoclonales
anti MIF se ha demostrado que inhiben la estimulación de eliminación
de macrófagos de parásitos intracelulares. Los anticuerpos
monoclonales anti MIF se han utilizado tambibén para desarrollar un
ensayo de rastreo ELISA específico y sensible para MIF. Se pueden
utilizar tanto anticuerpos monoclonales anti MIF y el ensayo ELISA
en el diagnóstico y/o tratamiento de las respuestas inflamatorias y
shock.
Se pueden generar fragmentos de anticuerpos que
reconocen epítopos de MIF específicos por técnicas conocidas. Por
ejemplo, esos fragmentos incluyen, sin que ello sirva de limitación:
los fragmentos F(ab')_{2} que se pueden producir por
digestión de pepsina de la molécula de anticuerpos y los fragmentos
Fab que se pueden generar por reducción de los puentes de bisulfuro
de los fragmentos de F(ab')_{2}. De manera alternativa, se
pueden construir bibliotecas de expresión Fab (Huse y otros,
Science, 246:1275-1281, 1989) para permitir una
identificación fácil y rápida de fragmentos monoclonales Fab con la
deseada especificidad para MIF.
Se prepararon hibridomas segregando anticuerpos
monoclonales (MAbs) dirigidos contra formas humanas y murinas de MIF
y se aislaron de acuerdo con métodos conocidos en esta técnica.
Brevemente, ratones hembra BALB/c fueron inmunizados
intraperitonealmente (i.p) con MIF recombinante murino o humano (10
\mug/ ratón) en coadyuvante de Ribi (Ribi Immunochem). Durante el
periodo de inmunización y de desarrollo, los ratones fueron
sangrados por la cola y se ensayaron concentraciones de anticuerpos
anti MIF en el suero, así como distribución de isotipos (IgM
vs.IgG), por métodos de ensayo (ELISA) inmunoabsorbentes ligados a
encimas, de tipo directo, basados en placas de microtitulación, en
pocillos con MIF recombinante inmovilizado como antígeno (250 ng/ml;
55 \mul/pocillo). Se facilitaron a los ratones inmunizados
inyecciones de refuerzo de MIF recombinante (10 \mug/ratón) en
coadyuvante de Ribi como mínimo cuatro veces antes de retirar los
bazos para fusión. Tres días antes de la fusión del bazo con células
de mieloma de ratón (P3X63Ag8.653; American Type Culture Collection)
utilizando polietilén glicol (Boerhinger Mannheim) se reforzaron los
ratones intraperitonealmente con MIF murino y humano (10 \mug en
PBS). Se expandieron hibridomas en medio de selección HAT
(hipoxantina, aminopterina y timidina; GIBCO)(DMEM conteniendo HAT,
10% Condimed (Boerhinger Mannheim), 20% FBS (Hyclone)y
antibióticos (penicilina, estreptomicina, GIBCO) durante un periodo
de dos a tres semanas. Se rastrearon los sobrenadantes de cultivo de
crecimiento de hibridomas para anticuerpos anti MIF por métodos
ELISA directos con MIF recombinante inmovilizado.
Se analizó adicionalmente la inmunoreactividad
de anticuerpos procedentes de clones positivos anti MIF por técnicos
de inmunotransferencia Western, y se escogieron hibridomas
productores de altas concentraciones para reclonado por dilución
limitadora. Se isotiparon monoclonales anti MIF utilizando el tipo
de rastreo ELISA (Boehinger
Mannheim). Se cultivaron hibridomas que segregaban los anticuerpos monoclonales deseados (tipo IgG) como ascitos en ratones BALB/c, y se purificaron MAb's utilizando cromatografía de gel T (Pierce). Se identificaron varios anticuerpos monoclonales de tipo IgM anti MIF pero no se caracterizaron adicionalmente. Se aislaron varios hibridomas que segregaban IgG y se caracterizaron (tabla 1).
Mannheim). Se cultivaron hibridomas que segregaban los anticuerpos monoclonales deseados (tipo IgG) como ascitos en ratones BALB/c, y se purificaron MAb's utilizando cromatografía de gel T (Pierce). Se identificaron varios anticuerpos monoclonales de tipo IgM anti MIF pero no se caracterizaron adicionalmente. Se aislaron varios hibridomas que segregaban IgG y se caracterizaron (tabla 1).
Se comprobaron anticuerpos monoclonales anti MIF
purificados para la actividad de neutralización en un ensayo de
eliminación de macrófagos. Se obtuvieron macrófagos peritoneales de
ratón elicitados mediante tioglicolato a partir de ratones BALB/c,
se dejaron adherir durante cuatro horas, y luego se infectaron con
el parásito intracelular Leishmania major con una proporción de
parásito: macrófago de 8:1. Después de lavado, los cultivos de
macrófagos infectados fueron tratados con MIF humano recombinante
(que favorece la eliminación de macrófagos de parásitos
intracelulares en forma dependiente de la dosis en comparación con
controles de medio de cultivo) con o sin anticuerpos anti MIF
monoclonales añadidos VIIG3 o XID5% (25 \mug/ml). Se observó que
ambos anticuerpos neutralizaban la exterminación favorecida por MIF
de L.Major aproximadamente en 50%.
En experimentos separados, se comprobaron
anticuerpos anti MIF monoclonales purificados en cuanto a actividad
neutralizante de MIF en un ensayo de incorporación de [(^{3}H)] -
timidina con células T murinas primarias cultivadas en placas de
cultivo de tejido anti CD3 con recubrimiento IgG (Pharmingen).
Brevemente, este ensayo utilizó células de bazo BALB/c que fueron
aisladas utilizando columnas de enriquecimiento de células T murinas
(R&D) y cultivadas en placas de microtitulación de 96 pocillos
anti CD3 con recubrimiento IgG en RPMI conteniendo 10% de FBS,
antibióticos (penicilina, estreptomicina) y
L-glutamina junto con anticuerpos monoclonales de
ratón anti-MIF o de control. Después de 48 horas, se
pulsaron células T con [^{3}H]-timidina durante 16
a 18 horas, se recogieron y se contaron mediante métodos de conteo
por centelleo beta. Como control positivo, se añadieron anticuerpos
monoclonales anti-IL-2 (Genzime)
para inhibir la proliferación e incorporación de
[^{3}H]-timidina asociada. Tanto los anticuerpos
VIIG3 como XID5 disminuyeron la incorporación de timidina en 20%
aproximadamente; el tratamiento
anti-IL-2 redujo la incorporación de
[^{3}H]-timidina en 75% aproximadamente.
Se desarrolló una técnica ELISA "sándwich"
específica de MIF, basada en la retención de MIF por anticuerpos
VIIG3 inmovilizados seguido de detección con un antisuero
anti-MIF policlonal de conejo. Este ensayo fue
llevado a cabo de la forma siguiente: se recubrieron pocillos de
una placa Immulon II (Dynatech) ELISA con 10-15
\mug/ml Mab (VIIG3) en PBS (65 \mul/pocillo); el MAb había sido
purificado a partir de ascitos utilizando absorbente
gel-T (Pierce). Se estanqueizaron placas y se
incubaron durante una noche a temperatura ambiente. A continuación,
se bloquearon los pocillos con Superblock (Pierce) conteniendo 2% de
suero de cabra (140-150 \mul/pocillo) durante
1-2 horas a temperatura ambiente. Las placas fueron
lavadas utilizando un lavador de placas automatizado ELISA (dos
veces con TBS conteniendo 0,05% Tween20 utilizando 200
\mul/pocillo). Se prepararon muestras de MIF y estándares en tubos
eppendorf de 0,5 ml o de 1,5 ml añadiendo Tween20 a sobrenadantes
de cultivo hasta una concentración final de 0,2%. De manera similar,
se diluyeron lisados de células en tampón TBS con Tween20 a una
concentración final de 0,2%. Se prepararon estándares de manera
similar diluyendo MIF murino o humano recombinante purificado en
DMEM/1% FBS/0,2% Tween20. Se aplicaron muestras y estándares a la
placa (60 \mul/pocillo) y la placa fue estanqueizada e incubada
durante una noche a 4ºC con agitación suave. La placa fue lavada
cinco veces con TBS/0,05% Tween20 y se añadió un segundo anticuerpo
(por ejemplo, suero MIF anti-murino 102 de conejo,
1:220 en TBS/0,2% Tween20/2% de suero de cabra) añadido a 60
\mul/pocillo. La placa fue estanqueizada e incubada 2 horas a
temperatura ambiente con agitación suave. Todos los pocillos fueron
lavados 5 veces con TBS/0,05% Tween20 y se añadió a 60
\mul/pocillo un conjugado terciario
anticuerpo-enzima (IgG
anticonejo-fosfatasa alcalina de cabra disponible
comercialmente con dilución 1:4000 en TBS/0,2% Tween20/2% suero de
cabra, tal como se recomienda por el fabricante, Boehringer
Mannheim). La placa fue recubierta, incubada durante 35 minutos a
temperatura ambiente, y lavada a continuación 5 veces con TBS/0,05%
Tween20. El ensayo fue desarrollado con solución de
p-nitrofenil fosfato (pNPP), tal como se recomienda
por el fabricante (tableta 5 mg Sigma 104 en 5 ml tampón AP: 10 mM
dietanolamina/0,5 mM MgCl_{2}, pH 9.5). El producto de reacción se
dejó revelar en la oscuridad a temperatura ambiente, y se leyó a 405
nm dentro de un periodo de 15-30 minutos. El ensayo
proporciona una gama de sensibilidad aproximada de 100
pg/ml-250 ng/ml. Se debe observar que para la
práctica de esta técnica de "sándwich" se pueden utilizar
varias combinaciones de dos o más anticuerpos específicos MIF para
captar y detectar MIF en una muestra. El anticuerpo inmovilizado no
queda restringido a anticuerpo VIIG3, y el segundo cuerpo no está
limitado a antisuero de conejo.
La presente invención da a conocer la
utilización de anticuerpos monoclonales anti-MIF
para la preparación de un medicamento para el tratamiento o para la
prevención de cáncer.
Los estados malignos que se puede tratar por
anticuerpos monoclonales anti-MIF incluyen, sin que
ello sirva de limitación, los indicados en la Tabla 2.
\global\parskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Preferentemente, se tratan o previenen los
linfomas de células B y T. En otras realizaciones específicas, se
tratan o se previenen estados malignos o cambios disproliferativos o
hiperproliferativos en la cabeza, cuello, cervix, riñón, estómago,
piel, ovarios, vejiga, senos, colon, pulmón o útero. En otras
realizaciones específicas, se trata o se previene sarcoma o
leucemia. En otras realizaciones específicas, se trata o se
previene osteosarcoma o carcinoma de células renales.
\newpage
Los anticuerpos monoclonales MIF de la presente
invención pueden ser administrados también para tratar estados
premalignos y para evitar el avance a estado neoplástico o maligno,
incluyendo, sin que ello sirva de limitación, las enfermedades
indicadas en la Tabla 2. Esta utilización profiláctica o terapéutica
está indicada en estados conocidos o sospechosos de preceder el
avance hacia neoplasia o cáncer, en particular, en los casos en que
ha tenido lugar crecimiento celular no neoplásico consistente en
hiperplasia o displasia. La hiperplasia es una forma de
proliferación celular controlada que comporta un incremento del
número de células en un tejido u órgano, sin alteración
significativa en la estructura o función. La displasia es
frecuentemente un antecedente de cáncer y se observa principalmente
en el epitelio; es la forma más desordenada de crecimiento celular
no neoplásico, comportando la pérdida de uniformidad celular
individual y la orientación de la arquitectura de las células. La
displasia tiene lugar de forma característica cuando existe
irritación crónica o inflamación crónica y se encuentra
frecuentemente en el cervix, conductos respiratorios, cavidad bucal
y vejiga.
De manera alternativa o adicionalmente a la
presencia de crecimiento anormal de células, caracterizado como
hiperplasia o displasia, la presencia de una o varias
características o un fenotipo transformado o de un fenotipo
maligno, que se muestra in vitro o in vivo por una
muestra celular de un paciente, puede indicar que es deseable de
administración profiláctica/terapéutica de anticuerpos monoclonales
anti-MIF. Las características de un fenotipo
transformado incluyen cambios morfológicos, fijación más libre del
sustrato, pérdida de inhibición de contacto, pérdida de dependencia
de anclaje, liberación de proteasa, transporte incrementado de
azúcar, exigencia de suero reducida, expresión de antígenos
fetales, desaparición de la proteína de la superficie celular de
250.000 daltons.
En una realización específica, la leucoplakia,
una lesión de aspecto benigno del epitelio hiperplásica o
displásica, o la enfermedad de Bowen, carcinoma in situ, son
lesiones preneoplásticas que indican que es deseable una
intervención profiláctica.
Se puede administrar a un paciente humano un
compuesto terapéutico, tal como un anticuerpo monoclonal
terapéutico, por sí mismo o en compuestos farmacéuticos, en los que
se mezcla con portadores adecuados o excipientes a dosis para
tratar o mejorar diferentes estados que comportan sobreproliferación
celular. Una dosis efectiva terapéuticamente se refiere
adicionalmente a la cantidad de compuesto suficiente para inhibir el
crecimiento tumoral. Se pueden administrar dósis terapéuticamente
efectivas solas o como terapia adicional en combinación con otros
tratamientos para crecimiento tumoral o enfermedades asociadas. Se
pueden encontrar técnicas para la formulación y administración de
los compuestos de la presente solicitud, por ejemplo, en la última
edición de "Remington's Pharmaceutical Sciences" Mack
Publishing Co., Easton, PA.
Pueden ser rutas apropiadas de administración,
por ejemplo, la ruta oral, rectal, transmucosal, o administración
intestinal; suministro parenteral incluyendo inyecciones
intravasculares, subcutáneas, intremedulares y también
intratecales, intraventriculares directas, intravenosas,
intraperitoneales, intranasales, o intraoculares, y opcionalmente
en una formulación de depósito o de liberación continuada.
Además, se puede administrar el agente de la
presente invención en un sistema de suministro de medicamento
direccionado, por ejemplo, en un liposoma con un recubrimiento de
anticuerpo, anti-CD4 para direccionado a linfomas
de células T. Los liposomas serán una diana específica y se tomarán
selectivamente por células que expresan CD4.
Los compuestos farmacéuticos de la presente
invención pueden ser fabricados de manera que es conocida en sí
misma, por ejemplo, por medio de procesos de mezcla convencional,
disolución, preparación de pastillas, levitación, emulsión,
encapsulado, retención o liofilización. Se pueden formular
compuestos farmacéuticos a utilizar, de acuerdo con la presente
invención, de manera convencional utilizando uno o varios portadores
fisiológicamente aceptables, comprendiendo excipientes y auxiliares
que facilitan el proceso de los compuestos activos en preparados
que pueden ser utilizados farmacéuticamente. La formulación
apropiada depende de la ruta de administración escogida.
A efectos de inyección, los agentes de la
invención se pueden formular en soluciones acuosas, preferentemente
en tampones fisiológicamente compatibles, tales como solución de
Hank, solución de Ringer o una solución fisiológica salina tampón.
Para administración transmucosal, se utilizan en la formulación en
penetrantes apropiados de la barrera para su paso por permeación.
Estos penetrantes son conocidos en esta técnica. Para administración
oral, los compuestos se pudieron formular fácilmente combinando los
compuestos activos con portadores farmacéuticamente aceptables bien
conocidos en la técnica. Estos portadores posibilitan que los
compuestos de la invención puedan ser formulados en forma de
tabletas pastillas, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes,
emulsiones, suspensiones y similares, para ingestión oral por el
paciente a tratar. Los preparados faracéuticos para utilización oral
se pueden obtener mediante excipientes sólidos, moturando
opcionalmente la mezcla resultante, y procesando la mezcla de
gránulos, después de añadir productos auxiliares adecuados, en caso
deseado, para obtener núcleos de tabletas o de grageas. Son
excipientes adecuados, de modo específico, cargas, tales como
azúcares, incluyendo lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol;
preparados de celulosa, tales como, por ejemplo almidón de maíz,
almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina,
goma de tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa,
carboximetilcelulosa sódica, y/o polivinilpirrolidona (PVP). En caso
deseado, se pueden introducir agentes desintegrantes, tales como
polivinil pirrolidona reticulada, agar o ácido algínico o una sal
del mismo, tal como alginato sódico.
\newpage
Los núcleos para grageas se proporcionan con
recubrimientos adecuados. Con este objetivo, se pueden utilizar
soluciones concentradas de azúcar, que opcionalmente pueden contener
goma arábiga, talco, polivinil pirrolidona, gel carbopol,
polietilén glicol, y/o dióxido de titanio, soluciones de laca y
disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes. Se pueden
añadir colorantes o pigmentos a recubrimientos de tabletas o de
grageas para identificación o para caracterizar diferentes
combinaciones de dósis de compuestos activos.
Se incluyen entre los preparados farmacéuticos
que se pueden utilizar oralmente cápsulas de gelatina contenidas en
un panel de expulsión por empuje y también en forma de cápsulas
estancas, blandas, realizadas a base de gelatina y un
plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas que se
pueden administrar por expulsión por empuje pueden contener los
ingredientes activos en mezcla con cargas, tales como lactosa,
aglomerantes, tales como almidones, y/o lubricantes, tales como
talco o estearato magnésico, y opcionalmente estabilizantes. En
cápsulas blandas, los compuestos activos se pueden disolver o
suspender en líquidos adecuados, tales como aceites grasos,
parafina líquida o polietilén glicoles líquidos. Además, se pueden
añadir estabilizantes. Todas las formulaciones por administración
oral deben encontrarse en dósis adecuadas para dicha
administración.
Para administración bucal, los compuestos pueden
adoptar forma de tabletas o pastillas formuladas en forma
convencional.
Para administración por inhalación, los
compuestos a utilizar, de acuerdo con la presente invención, se
suministran convenientemente en forma de un aerosol en recipientes
a presión o un pulverizador con utilización de un propulsor
adecuado, tal como dicloro difluoro metano, tricloro fluorometano,
diclorotetrafluorometano, dióxido de carbono u otro gas adecuado.
En el caso de un aerosol a presión, la unidad de clasificación se
puede determinar disponiendo una válvula para suministrar una
cantidad dosificada. Las cápsulas y cartuchos de gelatina a utilizar
en un inhalador o insuflador se pueden formular conteniendo una
mezcla de polvo del compuesto y un material en polvo adecuado como
base, tal como lactosa o almidón.
Los compuestos se pueden formular para
administración parenteral por inyección, tal como, por ejemplo,
inyección "bolus" o infusión continua. Las formulaciones para
inyección se pueden presentar en formas de dósis unitarias, en
ampollas o en multidósis con un conservante añadido. Los compuestos
pueden adoptar formas, tales como suspensiones, soluciones o
emulsiones en vehículos acuosos o en aceite, y pueden contener
agentes de formulación, tales como agentes de suspensión,
estabilizantes y/o dispersantes.
Las formulaciones farmacéuticas para
administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los
compuestos activos en forma soluble en agua. Adicionalmente, se
pueden preparar suspensiones de los compuestos activos en forma de
suspensiones para inyección en aceite apropiadas. Se incluyen entre
los disolventes o vehículos lipofílicos adecuados aceites grasos
tales como aceite de sésamo, o ésteres de ácidos grasos sintéticos,
tales como etiloleato o triglicéridos, o liposomas. Las
suspensiones para inyección de tipo acuoso pueden contener
sustancias que incrementan la viscosidad de la suspensión, tales
como carboximetil celulosa sódica, sorbitol, o dextrano.
Opcionalmente, la suspensión puede contener también estabilizantes
adecuados o agentes que incrementan la solubilidad de los
compuestos para permitir la preparación de soluciones muy
concentradas.
Los compuestos pueden ser también formulados en
compuestos rectales tales como supositorios o enemas de retención,
conteniendo bases convencionales para supositorios tales como
manteca de cacao u otros glicéridos.
Los compuestos pueden ser también formulados
como preparación de depósito. Estas formulaciones de actuación
prolongada se pueden administrar por implantación (por ejemplo, por
vía subcutánea o intramuscular) o por inyección intramuscular. Por
ejemplo, los compuestos pueden ser formulados con materiales
polímeros o hidrofóbicos adecuados (por ejemplo, en forma de
emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o
derivados poco solubles, por ejemplo, una sal poco soluble.
Los liposomas y las emulsiones son ejemplos
conocidos de vehículos de suministro o portadores para medicamentos
hidrofóbicos. También se pueden utilizar ciertos disolventes
orgánicos tales como dimetilsulfóxido, si bien habitualmente a
costa de una mayor toxicidad. Adicionalmente, los compuestos pueden
ser suministrados utilizando un sistema de liberación a largo
plazo, tal como matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos
sólidos conteniendo el agente terapéutico. Se han determinado
diferentes materiales de liberación continuada y son bien conocidos
por los técnicos en la materia. Las cápsulas de liberación
prolongada pueden liberar los compuestos, dependiendo de su
naturaleza química, durante unas pocas semanas hasta llegar a unos
100 días. Dependiendo de la naturaleza química y de la estabilidad
biológica del agente terapéutico, se pueden utilizar estrategias
adicionales para estabilización de proteínas.
Los compuestos farmacéuticos comprenden también
soportes sólidos o geles o excipientes adecuados. Se incluyen entre
los ejemplos de dichos soportes o excipientes, sin que ello sirva de
limitación, carbonato cálcico, fosfato cálcico, diferentes
azúcares, almidones, derivados de celulosa, gelatina y polímeros
tales como polietilén glicoles.
Muchos de los compuestos de la invención
identificados como neutralizantes de la actividad de MIF pueden ser
dispuestos como sales con contraiones farmacéuticamente compatibles.
Las sales farmacéuticamente compatibles pueden estar formadas con
muchos ácidos, incluyendo, sin que ello sea limitativo, ácido
clorhídrico, sulfúrico, acético, láctico, tartárico, málico,
succínico, etc.; o sus bases. Las sales tienden a ser más solubles
en disolventes acuosos u otros disolventes protónicos que las
correspondientes formas de bases libres. Son bien conocidos en la
técnica ejemplos de sales, portadores o excipientes
farmacéuticamente aceptables, por parte de los técnicos en la
materia, pudiéndose encontrar, por ejemplo, en Remington's
Pharmaceutical Sciences, 18ª Edición, A. R. Gennaro, Ed., Mack
Publishing Co., Easton, PA, 1990. Estas sales comprenden, sin que
ello sea limitativo, sales de: sodio, potasio, litio, calcio,
magnesio, hierro, zinc, cloruros ácidos, bromuros ácidos, yoduros
ácidos, acetato, citrato, tartrato y malatos, y similares.
Una cantidad terapéuticamente efectiva significa
una cantidad efectiva para impedir o para inhibir el desarrollo o
el avance de cáncer o enfermedades hiperproliferativas en el sujeto
sometido a tratamiento. La determinación de las cantidades
efectivas se encuentra sobradamente dentro de la capacidad de los
técnicos en la materia, especialmente en base a la materia que se
ha dado a conocer en esta descripción. Para cualquier compuesto
utilizado en el método de la invención, la dosis terapéuticamente
efectiva se puede estimar inicialmente a partir de ensayos de
cultivo de células. Esta información puede ser utilizada para
determinar de manera más precisa las dosis útiles en humanos.
Una dosis terapéuticamente efectiva se refiere a
la cantidad del compuesto que tiene como resultado una reducción en
el desarrollo del cáncer, tumor o enfermedad hiperproliferativa, o
síntomas de la misma, o que prolonga la supervivencia de un
paciente. La toxicidad y eficacia terapéutica de estos compuestos se
pueden determinar por procesos farmacéuticos, farmacológicos, y
toxicológicos estándar en cultivos de células o animales
experimentales, para determinar el LD_{50} (dosis letal para el
50% de la población) y el ED_{50} (dosis terapéuticamente
efectiva en el 50% de la población). La proporción de dosis entre
los efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico y se
puede expresar como proporción entre LD_{50} y ED_{50}. Son
preferibles los compuestos que muestran elevados índices
terapéuticos. Los datos obtenidos a partir de ensayos de cultivo
celular o estudios con animales pueden ser utilizados en la
formulación de un rango de dosificación para su utilización en
humanos. La dosificación de estos compuestos se encuentra
preferentemente dentro de un rango de concentraciones circulantes
que incluyen el ED_{50} con poca o ninguna toxicidad. La
dosificación puede variar dentro de este rango dependiendo de la
forma de dosificación utilizada y de la ruta de administración
utilizada. La formulación exacta, la ruta de administración y
dosificación se pueden escoger por el médico del individuo teniendo
en cuenta el estado del paciente.
La cantidad de dosificación y el intervalo se
pueden ajustar individualmente para proporcionar niveles en plasma
de la fracción activa, que son suficientes para mantener los efectos
moduladores deseados, o concentración efectiva mínima (MEC). El MEC
variará para cada compuesto pero se puede estimar a partir de datos
in vitro; la concentración necesaria para conseguir una
inhibición 50-90% de las células, o crecimiento
tumoral utilizando los ensayos que se describen. Las dosis
necesarias para conseguir el MEC dependerán de las características
individuales y de la ruta de administración. No obstante, se pueden
utilizar ensayos HPLC, bioensayos o inmunoensayos para determinar
las concentraciones en plasma.
También se pueden determinar los intervalos de
dosificación utilizando el valor MEC. Los compuestos deben ser
administrados utilizando un régimen que mantenga unos niveles en
plasma por encima del MEC durante 10-90% del
tiempo, preferentemente entre 30-90% y más
preferentemente entre 50-90%. En caso de
administración local, por ejemplo, en la introducción directa en un
tumor, o en absorción selectiva, la concentración local efectiva
del medicamento puede no estar relacionada con la concentración en
el plasma. La cantidad de compuesto administrado dependerá del
sujeto a tratar, de su peso, de la gravedad de la enfermedad, de la
forma de administración y de la evaluación del médico que efectúa
la prescripción.
Este ejemplo muestra el tratamiento de ratones
con tumor mediante anticuerpos monoclonales
anti-MIF. Para estos experimentos, se empezó el
tratamiento de ratones C3H-HeN con varios mAbs
anti-MIF el mismo día de la implantación del tumor.
Este procedimiento examina el potencial de mAbs
anti-MIF en la inhibición del crecimiento inicial
del tumor y se considera que es un modelo predictivo de metástasis y
agentes terapéuticos para tratar cáncer metastásico. Se pueden
examinar varios mAbs anti-MIF en cuanto a la
eficacia anti-tumoral en este modelo. El modelo de
linfoma celular 38C13B es un modelo de tumor sólido bien
establecido, que ha sido utilizado para evaluar nuevas terapéuticas
contra el cáncer desde su descripción inicial en 1977 (Kemp y otros,
Cancer Research 55:3817-3824, 1995). El modelo fue
conseguido inyectando intradérmicamente células de linfoma B murino
(i.d.) en la cepa de ratones de la que se derivaron inicialmente
(C3H-HeN). Dentro de 10 días, estos ratones
desarrollaron linfomas sólidos que fueron fácilmente medibles.
Utilizando ensayos de incorporación de
^{3}H-timidina, los inventores comprobaron los
efectos del tratamiento anti-MIF en células 38C13
in vitro. Ninguno de dichos tratamiento de anticuerpos
anti-MIF (con mAbs's IIID.9 o XIV.15.5) ni
tratamiento de oligonucleótidos anti-sentido
anti-MIF (utilizando los oligonucleótidos
anti-sentido que se describen más adelante)
suprimieron significativamente la proliferación de células 38C13
in vitro. Estos datos son indicativos de que dichos métodos y
agentes terapéuticos anti-MIF no eran directamente
anti-proliferativos para este tipo de célula
tumoral.
Se anestesiaron ratones C3H-HeN
y a continuación fueron fijados íntimamente en el flanco superior.
Se inyectaron i.d. células 38C13 en fase 50.000 log (en 0,05 ml
PBS) con una jeringa de 1 ml y una aguja 27 g. Al cabo de 30
minutos, los animales recibieron tratamiento por inyección IP de 500
\mug de mAbs anti-MIF o de mAbs de un isotipo de
control. Las inyecciones de mAb fueron repetidas cada 48 horas
durante 4 días. Se controlaron los animales diariamente en cuanto a
crecimiento tumoral utilizando galgas Vernier. Los animales fueron
eutanizados utilizando asfixia por CO_{2}, los tumores fueron
aislados, pesados, y analizados por histología.
Debido a la variabilidad de crecimiento tumoral
dentro de los grupos (dependiendo del lugar preciso de la
inyección, volumen de la inyección) y para preveer la obtención de
la evaluación estadística de los resultados, cada grupo
experimental comprendía cinco animales y el experimento fue llevado
a cabo tres veces. Adicionalmente a los grupos experimentales:
grupos de control (es decir, tratados con Ab
anti-MIF)fueron estudiados por ejemplo, un
grupo tratado con anticuerpo de control de isótopo de anticuerpo,
dirigido contra un antígeno irrelevante, y un grupo tratado con
vehículo solamente. Se muestran los resultados en las figuras 1 y 2,
demostrando que la interferencia con la actividad biológica de MIF,
en este caso por tratamiento con un anticuerpo monoclonal, inhibía
el desarrollo de tumores sólidos, en este caso linfoma de células B
en animales que, por lo demás, eran normales.
Este ejemplo muestra que la terapia de
antagonistas de MIF es eficaz contra tumores establecidos en un
modelo predictivo in vivo. Se trataron ratones con
inoculación de células tumorales después de dejar un periodo de
tiempo para que los tumores se establecieran. En estos experimentos,
se inyectó el mismo número de células tumorales de la misma manera
que se describe en el ejemplo 1, excepto que los tumores sólidos se
dejaron desarrollar y crecer durante 6 días hasta un diámetro medio
de unos 6 mm. Después de 6 días, el tratamiento de los animales y
la medición de los tumores siguió el mismo esquema anterior. Este
procedimiento destaca la actividad terapéutica de mAbs
anti-MIF en tumores establecidos.
Se anestesiaron ratones C3H-HeN
y a continuación fueron fijados íntimamente en el flanco superior.
Se inyectaron células 38C13 en fase 50.000 log (en 0,05 ml PBS)
i.d. con una jeringa de 1 ml y aguja 27 g. Los animales fueron
controlados diariamente en cuanto al crecimiento tumoral por
mediciones tomadas con galgas Vernier. Al 6º día del experimento,
grupos de animales recibieron tratamiento por inyección IP de 500
\mug de mAbs isotipo, mAbs anti-MIF, o PBS
solamente. Las inyecciones se repitieron cada 48 horas durante 4
días. Los animales fueron controlados diariamente y se estimó el
crecimiento tumoral por mediciones tomadas con galgas Vernier. Los
animales fueron eutanizados utilizando asfixia por CO_{2}, los
tumores fueron aislados, pesados y analizados por histología.
Debido a la variabilidad en tamaño inicial de
los tumores (dependiendo del lugar preciso de la inyección, volumen
de la inyección y otros factores) y para conseguir datos para
evaluación estadística, cada grupo experimental y de control era de
5 animales. Tal como se ha mostrado en la figura 3, los tumores
establecidos crecieron más lentamente en animales tratados
anti-MIF que en animales tratados con anticuerpos de
control.
El procedimiento anteriormente indicado para
valorar los efectos de anti-tumorales de terapias
dirigidas contra MIF se repitió siguiendo un programa de
dosificación distinto, de manera que los animales que tenían tumor
fueron tratados con 0,5 mg de anticuerpos anti-MIF
o anticuerpos de control dos veces al día, en vez de hacerlo un día
sí y un día no, empezando en el día 6 después del injerto de las
células tumorales. El peso tumoral estimado promedio no era
distinto entre los grupos en el día 6, por medición justamente antes
de la primera inyección de anticuerpo (45,6 \pm 4,6 mg para el
grupo de control isotipo con respecto a 46,1 \pm 3,4 mg para el
grupo programado para recibir mAb XIV anti-MIF
(15,5; media \pm sd). No obstante, en el día 7, los tumores en el
grupo tratado de control habían crecido significativamente más que
los tumores en el grupo tratado con anticuerpos
anti-MIF (246,7\pm 41,4 con respecto a 97,2\pm
12,2, respectivamente). Estos datos soportan la conclusión de que
los métodos y agentes dirigidos a la inhibición de MIF, y más
particularmente al tratamiento con anticuerpos
anti-MIF, son eficaces en la inhibición del
crecimiento de tumores establecidos in vivo.
El ejemplo muestra que los antagonistas de MIF
inhiben el crecimiento tumoral al inhibir la vascularización del
tumor. Se incubaron células endoteliales microvasculares humanas
proliferantes (cuarto paso) (Clonetics; San Diego, CA) 5.000/pocillo
en una placa de 96 pocillos) con 10-200 \mug/ml de
IgG_{1} control (Sigma; St. Louis, MO) o anticuerpo monoclonal
neutralizante anti-MIF XIV.15.5 (cortesía del Dr. C.
Metz, Department of Medical Biochemistry, The Picower Institute for
Medical Research; Manhasset, NY) en medio de crecimiento de células
endoteliales conteniendo 1% de suero bovino fetal
(ECG-1; Clonetics) durante 3 horas. La actividad
proliferativa de estos cultivos fue medida a lo largo de las 16
horas siguientes por la incorporación de [(^{3}H)] timidina (4
\muCi/ml) (DuPont; Boston, MA) en DNA medido por conteo de
centelleo líquido (Figura 3). Se transfectaron células
endotel3iales micro vasculares humanas proliferantes (cuarto paso;
Clonetics), cultivadas en ECG-1 (5000/pocillo en una
placa de 96 pocillos), con los siguientes oligonucleótidos de
fosforotionato (10 \mug/ml; Oligo's, etc.; Wilsonville, OR)
utilizando radiactivo Lipofectin para el protocolo de fabricación
(Gibco; Gaithersburg, MD): S-MIF:
5'-GCC-ATC-ATG-CCG-ATG-TTC-AT-3'(sentido,
humano MIF; SEQ ID Nº 1)
AS-MIF:5'-ATG-AAC-ATC-GGC-ATG-ATG-GC-3'
(antisentido, MIF humano ID SEQ Nº 2). Después de 16 horas, la
actividad proliferativa de estos cultivos fue medida a lo largo de
las ocho horas siguientes por incorporación de [(^{3}H)] timidina
(4 \muCi/ml; DuPont) en DNA medido por conteo de centelleo líquido
(figura 5). Los anticuerpos anti-MIF se mostraron
anti-proliferantes para las células endoteliales
microvasculares humanas (figura 4), indicando que los anticuerpos
anti MIF ejercen actividad anti-angiogénica in
vivo.
\newpage
El mRNA de MIF anti-sentido
inhibió la proliferación de células endoteriales humanas in
vitro aproximadamente el 50% (figura 5) con respecto a
constructos de sentido. De este modo el mRNA de MIF
anti-sentido se demostró que era
anti-proliferativo para células endoteliales
humanas, indicando que el mRNA de MIF anti-sentido
ejerce actividad anti-angiogénica. Estos resultados
demuestran que la terapia anti-MIF contra el cáncer
se puede beneficiar de (1) efectos
anti-proliferativos directos de la terapia
anti-MIF en células tumorales; y/o (2) inhibición
de procesos dependientes de huésped tales como angiogénesis,
necesarios para el inicio del tumor, su desarrollo o avance.
Este ejemplo muestra la inhibición de la
proliferación de células de leucemia in vitro. Estos estudios
fueron llevados a cabo para examinar si métodos y agentes
terapéuticos anti-MIF pueden tener efectos
anti-proliferativos directos en las células
tumorales. En este ejemplo células K562 (células de leucemia
mialogenosa humana crónica) fueron expuestas a contructos MIF
antisentido. Cultivos de células de leucemia mialogenosa crónica
K562 en proliferación en fase logarítmica (5000 células/pocillo en
una placa de 96 pocillos; obtenidas de ATCC; Rockville, MD) fueron
transfectadas con los siguientes oligonucleótidos de fosforotionato
(10 \mug/ml; Oligo's, etc) utilizando reactivo de Lipofectina
según el protocolo del fabricante (Gibco): S-MIF:
5'-GCC-ATC-ATG-CCG-ATG-TTC-AT-3'(sentido,
humano MIF; SEQ ID Nº 1);
AS-MIF:5'-ATG-AAC-ATC-GGC-ATG-ATG-GC-3'
(antisentido, MIF humano; ID SEQ Nº 2). Después de 16 horas de
incubación en condiciones estándar de cultivo celular (37ºC, 5% CO
en atmósfera de aire humidificado)la actividad proliferativa
de estos cultivos fue medida a lo largo de las ocho horas
subsiguientes por la incorporación de (^{3}H)timidina (4
\muCi/ml; DuPont) en DNA como medición por conteo por
centelleo.
Con respecto a constructos de MIF sentido, el
mRNA de MIF antisentido inhibió la proliferación de células K562
aproximadamente en 50% (figura 6). Estos resultados demuestran el
efecto anti-proliferativo directo de tratamiento
anti MIF sobre células tumorales, y más específicamente la actividad
de tratamiento anti-sentido específico de
tratamiento anti-sentido específico de MIF contra la
proliferación de las células de leucemia.
Este ejemplo muestra la inhibición de
vascularización de linfoma in vivo por tratamiento con un
anticuerpo neutralizante anti-MIF. La
neovascularización del tumor fue evaluada por tinción
inmunohistoquímica para un marcador de superficie de células
endoteliales expresado constitutivamente (CD31, también conocido
como molécula de de adhesión de plaquetas de célula endotelial o
PECAM-1). El crecimiento del tumor fue iniciado en
ratones normales por transplante de células de linforma singeneico.
Se trataron ratones inoculados con células de tumor desde el
momento de transferencia de las células de tumor con
anti-MIF o anticuerpos de control y vascularización
del tumor, visualizado en muestras histológicas de tumores recogidos
por tinción inmunohistoquímica específica para CD31, efectuando
comparación entre secciones de anti-MIF con respecto
a ratones de control portadores de tumor, tratados con
anticuerpos.
Se recogieron células de linfoma de célula B
(línea celular 38C13; facilitadas por J.D. Kemp, Dept. of Pathology,
U. de IA) del cultivo en fase de crecimiento exponencial
(RPMI/10%FBS), se centrifugaron 10 minutos a 30 x g., se lavaron
dos veces con PBS, y se ajustaron a 1 x 10^{6} células/ml (en
PBS). Siguiendo los métodos de Kemp y otros (más adelante), grupos
de cinco ratones hembra C3H/HeN (20-25 g; Harlan
Labs. NY) fueron afeitados en el flanco superior y se inyectaron
i.d. 0,05 ml de 1 x 10^{6}/ml de suspensión de células 38C13 (5 x
10^{4}células) con una jeringa de 1 ml y una aguja de medida 27.
Dentro de 30 minutos los ratones recibieron una inyección i.p. de
0,2 ml (0,3 mg) de anticuerpo de control isotipo IgG_{1}
(Pharmingen; San Diego, CA) o bien anticuerpo monoclonal
anti-MIF (XIV. 15.5, mAb subclase IgG_{1}
facilitado por C. Metz, Dept. of Med. Biochemistry, Instituto
Picower para Investigación Médica). Se repitieron las inyecciones de
anticuerpo cada 48 horas durante 6 días. Se eutanizaron ratones por
asfixia por CO_{2} y se separaron por corte los tumores, se
fijaron en formalina al 10% neutra, tamponada, se seccionaron y se
procesaron para análisis inmunohistoquímico. Después de anular las
peroxidasas endógenas con H_{2}O_{2}(3%), las secciones
desparafinizadas fueron incubadas secuencialmente con mAb anti CD31
(dilución 1:50; clon MEC 13.3; Pharmingen; San Diego; CA) o un
anticuerpo de control isotipo IgG_{2} (Pharmingen), con
anticuerpo secundario IgG anti-ratón ligado a
fosfatasa alcalina, y se reveló con nueva fucsina (DAKO) como
sustrato. Secciones de control con tinción con control isotipo o
sin anticuerpo primario no mostraron inmunorreactividad.
Tal como se revela por tinción
inmunohistoquímica para el marcador de células endoteliales CD31,
secciones de tejidos de tumor recogidos de ratones tratados con
anticuerpo de control muestran un lecho uniformemente denso de
neovascularización. Secciones de tejidos de tumor de ratones
tratados con anticuerpo monoclonal de ratón
anti-MIF, no obstante, muestran pruebas
inmunohistoquímicas de solamente una vascularización escasa de la
masa del tumor. Los tumores desarrollados en animales tratados con
m-Abs anti MIF fueron significativamente más
pequeños que los tumores desarrollados en los ratones tratados con
Ab de control con respecto a los tumores de ratones tratados con
anticuerpos de control.
Se llevó a cabo una comparación del número medio
de perfiles capilares positivos de CD31 mediante microscopio de
alta potencia (400X) en secciones con tinción inmunohistoquímica de
tumores recogidos de animales dotados con mAb anti MIF con respecto
a animales tratados con Ab de control. El número de perfiles
capilares de CD31+ fue tabulado para cinco campos de alta potencia
de secciones histológicas de muestras de tumores tomadas de dos
animales de cada grupo (tratados con anti-MIF con
respecto tratados con anticuerpos de control). Estos tumores fueron
los recogidos tal como se ha descrito en los experimentos iniciales
de crecimiento de tumores, mostrados en las figuras 1 y 2. Los
resultados de esta comparación del grado de vascularización se
muestra en la figura 7, que muestra que los tumores que crecen en
animales tratados con anticuerpos anti MIF, además de ser más
pequeños que los que tienen lugar en animales tratados con
anticuerpos de control, son significativamente menos vascularizados
en base a unidad de volumen. Por lo tanto, las ventajas
anti-tumorales de los agentes terapéuticos y
métodos dirigidos contra MIF se demuestran que tienen lugar, por lo
menos en parte, por un efecto aparente en procesos dependientes del
huésped, tales como angiogénesis, contribuyendo poderosamente a
determinar el curso del desarrollo del tumor.
Este ejemplo muestra el agotamiento de MIF
segregado utilizando un anti-cuerpo monoclonal
anti-MIF. Se prepararon
anti-cuerpos monoclonales siguiendo un protocolo
establecido. Se utilizó, para inmunizar ratones hembra de BALB/c,
MIF recombinante murino purificado con coadyuvante RIBI (RIBI
ImmunoChem Research Inc. Hamilton, MT). 10 \mug de MIF
recombinante murino expresado en E. Coli a partir de plásmido
inducible IPTG pET 11b (Novagen, Madison, WI), purificado por FPLC
y C8 Sep PAk (Waters Co., Milford, MA), mezclados con 100 \mul de
coadyuvante RIBI e inyectados i.p. Se ensayaron titulaciones de
anticuerpo por ensayo ELISA directo. Cuando las titulaciones fueron
>5 veces, las células no inmunes de suero de bazo fueron
fusionadas con células P3-X63 Ag8 utilizando 50% de
polietilen glicol. Se rastrearon clones individuales por medio de
ELISA y transferencia western y los positivos fueron inyectados
i.p. en ratones BALB/c, recogiendo ascitos cebados en fase primitiva
y conteniendo IgG. Se purificaron anti-MIF e IgG no
inmune procedente de ascistos por cromatografía de afinidad a
proteína G según instrucciones del fabricante (Pharmacia LKB,
Piscataway, NJ). Para la mayor parte de experimentos, se añadieron
10 \mug/ml de IgG no inmune o IgG anti-MIF a
células NIH3T3 (5 x 10^{5} células/ml) y se dejó proliferar
durante una noche en presencia de (3H) timidina (5,0 uCi por
milílitro, 1 Ci=3Gbq) (DuPont NEN, Boston, MA).
Se cultivaron células NIH3T3 en DMEM/10%FBS/2,0
mM glutamina; 37º en 95% aire/5%CO_{2}. Las células fueron
recogidas en filtros de 96 pocillos (Packard Cell Harvester); se
añadió un fluido para centelleo y se contaron los pocillos para
^{3}H incorporada. Los datos que se muestran en la figura 8
indican una relación de respuesta a la dosis para proliferación
como función de la dosis de anticuerpo anti-MIF. El
anticuerpo de control no inhibió la proliferación, pero el
anticuerpo anti-MIF inhibió la proliferación en el
rango de concentración de 600 ng/ml a 6 \mug/ml.
Se depositaron cepas de hibridomas murinos
III.D.9 y XIV.15.5 el 24 de Octubre de 1996, en la American Type
Culture Collection, 1201 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852,
según las disposiciones del tratado de Budapest sobre
reconocimiento internacional de depósito de microorganismos con
objetivo de procedimiento de Patentes y les fue asignado el número
de acceso ATCC HB-12220.
\global\parskip0.000000\baselineskip
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTES: Bucala, Richard J. y Chesney, Jason A.
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: UTILIZACIÓN DE ANTAGONISTAS DE FACTOR DE INHIBICIÓN DE MIGRACIÓN DE MACRÓFAGOS PARA TERAPIA ANTI-CÁNCER.
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 2
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- DIRECCIÓN DE CORRESPONDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- DESTINATARIO: THE PICOWER INSTITUTE FOR MEDICAL RESEARCH
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 350 Community Drive
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Manhasset
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: New York
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: U.S.A
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL: 11030
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE MEDIO: Diskette
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: PC Compatible
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: Windows95
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: Word
\vskip0.800000\baselineskip
- (vi)
- DATOS ACTUALES DE LA SOLICITUD:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE LA SOLICITUD: falta asignar
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE SOLICITUD:
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CLASIFICACIÓN:
\vskip0.800000\baselineskip
- (viii)
- INFORMACIÓN REPRESENTANTE/AGENTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Oster, Jeffrey B.
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- NÚMERO DE REGISTRO: 32.585
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- REFERENCIA/Nº EXPEDIENTE: 0205WO
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- INFORMACIÓN DE TELECOMUNICACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TELÉFONO: 516 562 9404
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TELEFAX: 516 365 7919
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:1
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- HEBRA: Única
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: Desconocida
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO MOLECULAR: hMIF sentido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:1:5'-GCC-ATC-ATG-CCG-ATG-TTC-AT-3'.
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:2
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICA DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- HEBRA: Única
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: Desconocida
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO MOLECULAR: hMIF antisentido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:2:5'-ATG-AAC-ATC-GGC-ATG-ATG-GC-3'20.
Claims (10)
1. Utilización de un agente antagonista de MIF
(factor de inhibición de migración de macrófagos), seleccionado
entre el grupo que consiste en anticuerpos monoclonales anti MIF,
moléculas de RNA anti-sentido de MIF y una
combinación de los mismos para la preparación de un medicamento para
el tratamiento o prevención de cáncer.
2. Utilización, según la reivindicación 1, en la
que el cáncer es un tumor sólido.
3. Utilización, según la reivindicación 2, en la
que el cáncer es un linfoma de células B o de células T.
4. Utilización, según la reivindicación 1, en la
que el cáncer es impedido por tratamiento de una condición
precancerosa o tumor benigno.
5. Utilización, según la reivindicación 1, en la
que el cáncer es seleccionado del grupo que consiste en cáncer de
esófago, cáncer de estómago, carcinoma renal, cáncer de vejiga,
cáncer de seno, cáncer de colon, cáncer de pulmón, melanoma, cáncer
nasofaríngeo, osteocarcinoma, cáncer de ovario y cáncer de
útero.
6. Utilización, según la reivindicación 1, en la
que el agente antagonista de MIF es un anticuerpo monoclonal
anti-MIF o un fragmento de unión del mismo que se
une a MIF humano.
7. Utilización de un agente antagonista de MIF
(factor de inhibición de migración de macrófagos), seleccionado del
grupo que consiste en anticuerpos monoclonales anti MIF, moléculas
de RNA antisentido de MIF y una combinación de los mismos para la
preparación de un medicamento para el tratamiento de la
neovascularización de un tumor.
8. Utilización, según la reivindicación 7, en la
que el agente es un anticuerpo monoclonal anti-MIF o
un fragmento de unión del mismo que se une a MIF humano.
9. Utilización, según la reivindicación 8, en la
que el agente es un anticuerpo que se une específicamente al factor
inhibitorio de migración de macrófagos (MIF).
10. Utilización, según la reivindicación 7, en
la que el agente es una molécula antisentido (MIF) de factor de
inhibición de factor de migración de macrófagos.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US738947 | 1996-10-24 | ||
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| US6030615A (en) * | 1993-05-17 | 2000-02-29 | The Picower Institute For Medical Research | Combination method for treating diseases caused by cytokine-mediated toxicity |
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