KR20130028050A - 유방암을 치료하는 방법 - Google Patents

Abstract

본 명세서는 항-프로가스트린 항체를 포함하는 조성물로 유방암 또는 유방암의 재발을 치료 및 예방하는 방법에 관한 것이다.

Description

유방암을 치료하는 방법 {METHODS FOR TREATING BREAST CANCER}

1. 관련 출원의 상호 참조

본 출원은 2010년 1월 8일에 출원된 미국 가출원 번호 표적/293,표적2의 35 U.S.C. § 1 19(e)의 이익을 주장하고, 그 내용은 전체로 참조로서 본 명세서에서 통합된다.

2. 서열목록, 표 또는 컴퓨터 프로그램의 참조

서열 목록은 본 명세서와 함께 제출된다.

3. 발명의 분야

본 발명은 무엇보다도 프로가스트린에 특이적인 항체를 포함하는 조성물을 투여하여 유방암 및 유방암의 재발을 치료하고 예방하는 방법에 관한 것이다.

4. 배경기술

남성도 유방암 진단을 받기는 하지만 유방암은 수십년간의 기초적이고 임상적인 연구에도 불구하고 주로 여성에게 영향을 미치는 가장 치명적인 비전염성 질병 중의 하나로 남아있다. 세계보건기구의 국제암연구기관에 따르면, 2008년도에 유방암의 발병률은 140만 명이고 그 해 45만 명 이상의 여성이 유방암으로 사망했다고 추정된다. 유방암이 분자수준에서 어떻게 기능하는지에 관해 최근 많은 연구가 이루어지고 있지만, 임상의들은 한 세대 이전의 암 연구자들에게 익숙했던 외과 수술, 방사선, 호르몬 치료 및 화학 요법과 같은 치료적 방법에 여전히 의존하고 있다. 의료 영상 기술과 분자 진단법의 발전에 의해 가능하게 된 조기 진단은 어떠한 치료의 성공에 큰 요소이다. 이러한 모든 치료법의 효능은 수년 간 향상되어 왔음에도 불구하고, 치유율의 개선과 수명의 증가는 점진적인 증가를 보여오고 있다. 심지어 분자 종양에서의 혁신에 의한 새로운 표적 치료도 보통으로 결과를 향상시켰을 뿐이다. 예를 들어, HER2 수용체를 표적으로 하는 허셉틴은 종양이 HER2 양성인 유방암을 가지는 여성의 20-25%에서만 효과가 있다.

유방암 환자를 다루는 데 있어서 가장 어려운 두 가지 측면은 암의 전이와 재발이다.

전이는 유방암이 최초 종양에서부터 다른 기관으로 옮겨갈 때 발생한다. 종종 최초 종양을 절제하는 것도 가능하지만, 전이는 외과 수술적으로 치료하기 위해 수가 많아지고 건강한 숙주 조직과 뒤엉키게 되어 환자는 자주 사망하게 된다. 미국 암 학회에 따르면, 미국 내 2001년과 2002년의 Stage IIIB 유방암을 최초 진단받은 환자들에 대한 5년 생존률은 41%이고, Stage IV(예를 들어, 전이성 유방암)에서는 15%로 감소하였다.

재발은 유방암이 초기에 치료에 반응하여 명백히 사라진 후, 유방암이 다시 나타나는 현상이다. 환자와 그 가족들에게 가해지는 감정적인 희생은 별개로 하더라도, 재발한 암은 치료법이나 첫 번째 암을 무찌르는 데 효과적이었던 치료법에 덜 반응을 보일 수 있기 때문에 문제가 있다. 다른 환자들에 대하여, 첫 번째 암에 대한 이전의 치료는 심장 손상, 신경 손상과 같은 돌이킬 수 없는 부작용을 일으켜왔다. 그러한 환자에게서 재발 암을 무찌르기 위해 동일한 치료법을 사용하는 것의 위험성은 매우 크다. 이러한 상황에서, 환자는 부수적인 사망의 큰 위험이 있으면서 선택할 수 있는 치료법은 줄어들게 된다.

외과 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 요법의 개선과 표적 치료의 출현이 유방암 환자의 수명을 증가시켜왔지만, 많은 환자들은 계속해서 진단 후 몇 달에서 몇 년 안에 죽고 있다. 따라서, 유방암 및 그 재현에 효과적인 새로운 치료에 대한 시급한 필요가 존재한다.

5. 요약

프로가스트린에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 조성물의 치료학적 유효량을 투여하여, 프로가스트린 민감성 유방암의 치료를 필요로 하는 환자를 치료하기 위한 방법이 제공된다. 일부 구체예에서, 유방암은 전이성이고 뼈, 폐, 간 또는 뇌로 퍼져나간다. 다른 경우에, 유방암은 일차 유방암이다. 다수의 구체예에서, 상기 조성물의 항체는 증식을 감소시키거나 프로가스트린 민감성 유방암 세포의 세포사 속도를 증가시키고, 유방암 전이의 평균 숫자 또는 크기를 감소시키거나 또는 치료 환자에서 프로가스트린의 혈중 농도를 감소시키는 데 효과적이다.

일부 구체예에서, 조성물은 외과 수술 또는 방사선 치료 이전 또는 이후, 또는 유방암을 치료하는 데 효과적인 화학 요법제 또는 호르몬 치료제의 투여 이전, 동시 또는 이후에 투여될 수 있다. 조성물은 프로가스트린에 특이성을 가지는 유방암에 효과적인 척추 강내 투여치료 항체 이전, 동시 또는 이후에 투여될 수 있다. 이들 구체예에서, 제 2 항체는 VEGF 또는 HER2에 특이성을 가지고, 베바시쥬맵, 트라스트쥬맵 및 퍼투쥬맵일 수 있다.

프로가스트린 민감성 유방암의 예방을 필요로 하는 환자에게 프로가스트린에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 조성물의 예방학적 유효량을 투여하여 프로가스트린 민감성 유방암을 예방하는 방법이 제공된다. 유방암은 일차 또는 전이성일 수 있다. 다른 구체예에서, 유방암 세포는 BRCAl 또는 BRCA2 유전자에 돌연변이를 포함한다.

다수의 구체예에서, 일차 유방암은 증식을 감소시키거나 프로가스트린 민감성 유방암 세포의 세포사 속도를 증가시키고, 또는 치료 환자에서 프로가스트린의 혈중 농도를 감소시키는 데 효과적이다.

일부 구체예에서, 조성물은 프로가스트린 민감성 유방암을 예방하는 데 효과적인 화학 요법제 또는 호르몬 치료제의 투여 이전, 동시 또는 이후에 투여될 수 있다. 조성물은 HER2와 같이 프로가스트린에 특이성을 가지는 프로가스트린 민감성 유방암을 예방하는 데 효과적인 제 2의 치료 항체 이전, 동시 또는 이후에 투여될 수 있다.

프로가스트린 민감성 유방암의 재발을 예방할 필요가 있는 환자에게 프로가스트린에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 프로가스트린 민감성 유방암의 재발을 예방하기 위한 유효량으로 투여함으로써 프로가스트린 민감성 유방암의 재발을 예방하기 위한 방법이 제공된다. 이러한 특정 방법에 있어서, 환자들은 유방암이 명백히 사라진 이후에 외과 수술, 방사선 치료, 생물학적 치료, 면역 치료, 호르몬 치료 및 화학 요법과 같은 유방암 치료를 이전에 실시하였다.

다수의 구체예에서, 상기 조성물의 항체는 증식을 감소시키거나 프로가스트린 민감성 유방암 세포의 세포사 속도를 증가시키고, 또는 치료 환자에서 프로가스트린의 혈중 농도를 감소시키는 데 효과적이다. 다른 구체예에서, 조성물은 예를 들어 프로가스트린에 특이성을 가지는 항체를 포함하는 프로가스트린 민감성 유방암을 예방하는 데 효과적인 제 2의 치료제와 동시에 또는 이후에 투여될 수 있다.

프로가스트린 민감성 유방암 줄기세포의 성장을 억제할 필요가 있는 환자에게 프로가스트린에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 프로가스트린 민감성 유방암 줄기세포를 억제하기 위한 유효량으로 투여함으로써 프로가스트린 민감성 유방암 줄기세포의 성장을 억제하는 방법이 제공된다.

다수의 구체예에서, 상기 조성물의 항체는 증식을 감소시키거나 또는 프로가스트린 민감성 유방암 줄기세포의 세포사 속도를 증가시키는 데 효과적이고, 또는 치료 환자 내 프로가스트린의 혈중 농도를 감소시키는 데 효과적이다. 다른 구체예에서, 조성물은 프로가스트린 민감성 유방암 줄기세포의 성장을 억제하는 데 효과적인 제 2의 치료제, 예를 들어, 프로가스트린에 특이성을 가지는 항체와 함께 또는 이후에 투여될 수 있다.

유방암 치료 이후의 환자로부터 수득한 체액 또는 유방암의 생검과 같은 첫번째 시료에서 프로가스트린의 농도를 결정하고; 동일한 환자로부터 수득한 두번째 시료의 프로가스트린 농도와 첫번째 시료 내의 프로가스트린 농도를 비교하여, 이 때 첫번째 시료 내의 농도에 비하여 두번째 시료 내의 프로가스트린의 농도가 감소한 것은 치료가 효과적인 것을 의미하는 것으로, 환자에서 화학요법, 생물학적 치료, 면역 치료 또는 항체 치료와 같은, 프로가스트린 민감성 유방암 치료의 효과를 모니터링하는 방법이 제공된다.

본 방법의 다른 구체예에서, 두번째 시료는 환자가 유방암 치료하기 전에, 또는 치료 후에 수득된다. 그러나 첫번째 시료의 수득 전에 수득된다. 다른 구체예에서, 프로가스트린에 특이적인 항체를 이용하는 RIA 또는 ELISA와 같은 검출법이 첫번째 시료 내 프로가스트린의 농도를 결정하는 데 이용된다.

유방암이 의심되는 환자로부터 수득한 체액과 같은 시료에서 프로가스트린의 농도를 결정하고; 시료 내 프로가스트린의 농도를 미리 결정된 수치와 비교하고, 이 때 시료 내 프로가스트린의 향상된 수준은 환자에서 유방암의 존재를 의미하는 것으로, 환자에서 유방암의 존재를 진단하는 방법이 제공된다. 일부 구체예에서, 미리 결정된 수치는 환자가 유방암이 없는 알려졌을 때 얻어지는 시료 수치의 평균에 기초하고 있고, 달리 미리 결정된 수치는 구성원 평균에 기초하고 있다.

본 방법의 다른 구체예에서, 환자는 이전에 유방암 치료를 하였고 시료가 수득될 당시 병이 가라앉는 상태에 있었다. 다른 구체예에서, 상기 방법은 유방암의 존재를 확인하기 위하여 환자에게 예를 들어, 혈액 검사, 의학 영상 테스트, 또는 유전자 검사를 포함하는 두번째 진단 테스트를 수행하는 단계를 추가적으로 포함한다. 일부 구체예에서, 의학 영상 진단은 유방조영상(mammogram)이고 다른 구체예에서, 유전자 검사는 BRCA1 또는 BRCA2 유전자에서 돌연변이를 검출하는 것이다.. 또 다른 구체예에서, 프로가스트린에 특이적인 항체를 이용하는 RIA 또는 ELISA와 같은 검출법은 시료 내 프로가스트린의 농도를 결정하는 데 이용된다.

상기 방법에서 사용되는 항체 조성물은 비경구적으로, 주입 또는 볼루스(bolus)와 같은 다른 방법과 같이 많은 다양한 경로로 투여될 수 있다. 항체 용량은 치료되는 대상체의 자연상태 및 필요에 의존적으로 넓은 범위에 걸쳐 다양할 수 있다. 복용량은 한 자리에서 여러 공간의 자리에 걸쳐 투여될 수 있다.

예를 들어, 키메라항체, 항체 IgAl , IgA2, IgD, IgE, IgGl , IgG2, IgG3, IgG4, 및 IgM의 아이소타입을 갖는 항체 및 단일사슬항체뿐만 아니라 다중클론항체, 단일클론항체(인간화될 수 있음)를 포함하는 다양한 유형의 항-hPG 항체가 본 방법에 사용될 수 있다. 일부 다른 구체예에서, 항체는 그들의 기능 또는 특성을 유용하게 변경하는, 예를 들어, 반감기를 증가시키기 위해, 모이어티(moiety)와 결합된다. 또 다른 구체예에서, 아미노산 변경은 비슷한 목적, 또는 다른 목적으로 영향을 받을 수 있다. 프로가스트린에 대한 항체 친화도는 치료적 효과가 유지되는 한 광범위하게 다양할 수 있다. 일부 구체예에서, 항체는 프로가스트린의 하나의 에피토프만을 인식한다. 다른 구체예에서, 프로가스트린의 다른 에피토프에 특이적인 항체의 혼합이 이용될 수 있다.

또한, 항-프로가스트린 항체 조성물을 환자에게 투여하게 하는 키트가 제공된다. 일부 구체예에서, 키트는 감압 하의 동결 건조된 형태 또는 수용액의 항-프로가스트린 항체, 약학적 그레이드 워터(grade water)와 같은 희석액, 주사 및 바늘과 같은 항-프로가스트린 항체를 투여하기 위한 기구를 포함한다. 다른 구체예에서, 키트는 이에 한정되는 것은 아니나 본 명세서의 화학 요법제 또는 다른 것들과 같은 제 2의 치료제를 추가적으로 포함할 수 있다.

전이성 대장암을 치료하는 본 방법에 사용된 항체는 프로가스트린에 대한 다양한 결합 친화도, 예를 들어, 약 5000 nM 또는 그 이상의 친화도를 가질 수 있다. 예를 들어, 적어도 약 4000 nM, 3000 nM, 2000 nM, 1000 nM, 900 nM, 800 nM, 700 nM, 600 nM, 500 nM, 400 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM, 90 nM, 80 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 15 nM, 10 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.1 nM, 0.01 nM 또는 0.001 nM일 수 있다.

상기 기재된 방법의 특정 구체예에서, 여기 기재된 단일클론항체는 예를 들어, MAbl , MAb2, MAb3, MAb4, MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAb10, MAb11, MAb12, MAb13, MAb14, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19, MAb20, MAb21, MAb22, MAb23, 또는 다른 것을 포함하여 사용될 수 있다.

상기 기재된 방법의 특정 구체예에서, 여기 기재된 단일클론항체 예를 들어, 첫 번째 CDR은 V_H CDR 1.3, V_H CDR 1.4, V_H CDR 1.8, V_H CDR 1.13, V_H CDR 1.16, V_H CDR 1.19에서 선택되고, 두 번째 CDR은 V_H CDR 2.3, V_H CDR 2.4, V_H CDR 2.8, V_H CDR 2.13, V_H CDR 2.16, V_H CDR 2.19에서 선택되고, 세 번째 CDR은 V_H CDR 3.3, V_H CDR 3.4, V_H CDR 3.8, V_H CDR 3.13, V_H CDR 3.1 6, V_H CDR 3.19에서 선택되는 중사슬가변영역(heavy chain variable region (V_H))을 가지는 단일클론항체를 포함하여 사용될 수 있다. 이들 CDR의 특정 서열은 아래 기재되어있다. 다른 유용한 항체는 첫 번째 CDR은 V_L CDR 1.3, V_L CDR 1.4, V_L CDR 1.8, V_L CDR 1.13, V_L CDR 1.16, V_L CDR 1.19에서 선택되고, 두 번째 CDR은 V_L CDR 2.3, V_L CDR 2.4, V_L CDR 2.8, V_L CDR 2.13, V_L CDR 2.16, V_L CDR 2.19에서 선택되고, 세 번째 CDR은 V_L CDR 3.3, V_L CDR 3.4, V_L CDR 3.8, V_L CDR 3.13, V_L CDR 3.16, V_L CDR 3.19에서 선택되는 경사슬영역(light chain region (V_L))을 가진다. 이들 CDR의 특정 서열은 아래 기재되어있다.

6. 도면의 간단한 설명
도 1은 SW480 세포에 대하여 세 가지 인간 전이성 유방암 세포주에서 가스트린 유전자 발현 정도를 비교한 그래프를 제공한다.
도 2는 다른 환자의 일차 유방 종양에서 상대적인 가스트린 유전자 발현 정도를 비교한 그래프를 제공한다.
도 3은 다른 환자의 전이성 유방 종양에서 상대적인 가스트린 유전자 발현 정도를 비교한 그래프를 제공한다.
도 4는 일차 종양이 정상 대조군에 비하여 절제된 전이성 유방암 환자에서 혈중 프로가스트린 농도를 나타내는 그래프를 제공한다.
도 5는 배양하는 MDA-MB-231 전이성 유방암 세포의 성장에 대한 대조군과 항-hPG 다중클론항체 MAb3 및 MAb8의 효과를 비교한 그래프를 제공한다.
도 6는 배양하는 MDA-MB-231 전이성 유방암 세포의 성장에 대한 대조군과 항-hPG 단일클론항체 MAb3 및 MAb8의 효과를 비교한 그래프를 제공한다.
도 7은 배양하는 MDA-MB-231 전이성 유방암 세포의 성장에 대한 대조군과 항-hPG 단일클론항체MAb8, MA 3, MAb16 및 MAb19의 효과를 비교한 그래프를 제공한다.
도 8은 배양하는 MCF-7 전이성 유방암 세포의 성장에 대한 대조군 및 항-hPG 단일클론항체의 효과를 비교한 그래프를 제공한다.
도 9는 배양하는 T47D 전이성 유방암 세포의 성장에 대한 대조군 및 항-hPG 단일클론항체의 효과를 비교한 그래프를 제공한다.
도 10은 일반적인 조직 배양 조건 및 낮은 부착 배양 조건에서 두 개의 다른 전이성 유방암 세포주의 성장과 연관된 가스트린 유전자 발현의 상대적인 양을 비교한 그래프를 제공한다.
도 11은 낮은 부착 배양 조건에서 MCF-7 전이성 유방암 세포의 구상체로 성장에 대한 대조군 및 항-hPG 단일클론항체 MAb8의 효과를 비교한 그래프를 제공한다.
도 12는 낮은 부착 배양 조건에서 MCF-7 전이성 유방암 세포의 구상체로 성장에 대한 대조군 및 항-hPG 단일클론항체 MAb3의 효과를 비교한 그래프를 제공한다.
도 13은 인간 프리프로가스트린 (SEQ ID NO: 100), 이 때, 신호펩티드 서열은 밑줄 그어져있고, 성숙한 인간 프로가스트린 (SEQ ID NO: 101 ) 및 G34 (SEQ ID NO: 102), G34-Gly (SEQ ID NO: 103), G17 (SEQ ID NO: 104), G17-Gly (SEQ ID NO: 105) 및 CTFP (SEQ ID NO: 106)를 포함하는 프로가스트린 프로세싱의 특정 산물의 아미노산 서열을 제공한다.
도 14는 특정 예시적인 쥐 항-hPG 단일클론항체의 가변 경사슬 및 가변 중사슬의 폴리뉴클레오티드 및 아미노산 서열을 제공한다. 각 경우에, 세 가지 CDR는 볼드-밑줄 그어져있다. 특히:
도 14A는 쥐 항-hPG MAb3 (SEQ ID NO: 12)의 V_H 사슬의 폴리펩타이드 서열 및 그것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 (SEQ ID NO: 16)을 제공한다;
도 14B는 쥐 항-hPGMAb3 (SEQ ID NO: 13) 의 V_L 사슬의 폴리펩타이드 서열 및 그것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 (SEQ ID NO: 17)을 제공한다;
도 14C는 쥐 항-hPGMAb4 (SEQ ID NO: 14) 의 V_H 사슬의 폴리펩타이드 서열 및 그것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 (SEQ ID NO: 18)을 제공한다;
도 14D는 쥐 항-hPGMAb4 (SEQ ID NO: 15) 의 V_L 사슬의 폴리펩타이드 서열 및 그것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 (SEQ ID NO: 19)을 제공한다;
도 14E는 쥐 항-hPGMAb8 (SEQ ID NO:59) 의 V_H 사슬의 폴리펩타이드 서열 및 그것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 (SEQ ID NO:67)을 제공한다;
도 14F는 쥐 항-hPGMAb8 (SEQ ID NO:63) 의 V_L 사슬의 폴리펩타이드 서열 및 그것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 (SEQ ID NO:71)을 제공한다;
도 14G는 쥐 항-hPGMAb13 (SEQ ID NO:60) 의 V_H 사슬의 폴리펩타이드 서열 및 그것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 (SEQ ID NO:68) 을 제공한다;
도 14H는 쥐 항-hPGMAb13 (SEQ ID NO:64) 의 V_L 사슬의 폴리펩타이드 서열 및 그것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 (SEQ ID NO:72) 을 제공한다;
도 14I는 쥐 항-hPGMAbl6 (SEQ ID NO:61) 의 V_H 사슬의 폴리펩타이드 서열 및 그것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 (SEQ ID NO:69) 을 제공한다;
도 14J는 쥐 항-hPGMAb16 (SEQ ID NO:65) 의 V_L 사슬의 폴리펩타이드 서열 및 그것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 (SEQ ID NO:73) 을 제공한다;
도 14K는 쥐 항-hPGMAbl9 (SEQ ID NO:62) 의 V_H 사슬의 폴리펩타이드 서열 및 그것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 (SEQ ID NO:관찰) 을 제공한다; 및
도 14L은 쥐 항-hPGMAbl9 (SEQ ID NO:66) 의 V_L 사슬의 폴리펩타이드 서열 및 그것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 (SEQ ID NO:74) 을 제공한다.
도 15는 본 명세서에 기재된 선택된 항-hPG 단일클론항체의 인간화된 가변 중사슬 및 경사슬의 예상된 폴리펩타이드 서열을 제공한다. 각 경우에, 세 가지 CDR은 세 가지 CDR는 볼드-밑줄 그어져있다. 특히:
도 15A는 인간화된 MAb3의 V_H 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다 (SEQ ID NO:21);
도 15B 인간화된 MAb3의 V_L 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다 (SEQ ID NO:22);
도 15C는 인간화된 MAb4의 V_H 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:23);
도 15D는 인간화된 MAb4의 V_L 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다. (SEQ ID NO:24);
도 15E 인간화된 MAb8(a)의 V_H 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:75);
도 15F는 인간화된 MAb8(a)의 V_L 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다 (SEQ ID NO:76);
도 15G는 인간화된 MAb8(b)의 V_H 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다 (SEQ ID NO:77);
도 15H는 인간화된 MAb8(b)의 V_L 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다 (SEQ ID NO:78);
도 15I은 인간화된 MAb8(c)의 V_H 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다 (SEQ ID NO:79);
도 15J는 인간화된 MAb8(c)의 V_L 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:76);
도 15K는 인간화된 MAb13(a)의 V_H 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:80);
도 15L은 인간화된 MAb13(a)의 V_L 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다 (SEQ ID NO:81);
도 15M은 인간화된 MAb13(b)의 V_H 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:82);
도 15N은 인간화된 MAb13(b)의 V_L 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:83);
도 150는 인간화된 MAb16(a)의 V_H 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:84);
도 15P는 인간화된 MAb16(a)의 V_L 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO: 85);
도 15Q는 인간화된 MAb16(b)의 V_H 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO: 86);
도 15R은 인간화된 MAb16(b)의 V_L 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:87);
도 15S는 인간화된 MAb16(c)의 V_H 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO: 88);
도 15T는 인간화된 MAb16(c)의 V_L 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다 (SEQ ID NO:89);
도 15U는 인간화된 MAb19(a)의 V_H 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:90);
도 15V는 인간화된 MAb19(a)의 V_L 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:91 );
도 15W는 인간화된 MAb19(b)의 V_H 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:92);
도 15X는 인간화된 MAb19(b)의 V_L 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:93);
도 15Y는 인간화된 MAb19(c)의 V_H 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:94); 및
도 15Z는 인간화된 MAb19(c)의 V_L 사슬의 예상된 아미노산 서열을 제공한다(SEQ ID NO:95).

7. 상세한 설명

7.1. 유방암

여성 유방의 대부분의 암은 우유를 생산하는 샘 또는 소엽으로부터 우유를 운반하는 역할을 하는 관(duct)을 가득 채우는 세포에서 시작된다. 그러한 유방암은 관암으로도 불리운다. 다른 유방암은 소엽을 가득 채우는 세포에서 시작되고 소엽암이라고 불리운다. 유방암의 소수는 지방, 관 및 소엽을 둘러싸는 연결 조직, 림프 혈관 및 혈관인 스트로마를 포함하고 유방을 포함하는 다른 조직에서 시작된다.

거의 모든 유방암은 관 또는 소엽을 가득 채우는 상피세포에서 시작되는 암이다. 그러한 암은 각각 관 암종 및 소엽 암종로 알려져 있다. 유방암은 또한 근육, 지방 또는 혈관을 포함하는 유방의 연결 조직에서 형성되는 육종으로 시작할 수 있다

유방암의 특정 유형은 그 자리의 관 암종, 그 자리의 소엽 암종, 침범하는(침윤하는) 관 암종, 침범하는(침윤하는) 소엽 암종을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 덜 일반적인 유방암의 유형은 염증성 유방암, 삼중음성 유방암, 혼합 종양, 수양암, 화생성 암종, 점액암, 유두의 파제트 병, 미세 유방암, 유두암, 선모낭포암(선양낭포암), 엽상종양 및 혈관육종을 포함한다.

7.2. 유방암 전이

전이는 암이 퍼져나가는 과정을 말한다. 간단히 말해, 종양 세포가 일차 종양을 떠나 혈액 순환 또는 림프계를 통하여 새로운 조직 위치로 이동하고 이차 종양을 형성한다. 새로운 조직 위치의 종양은 전이성 종양으로 불리우고, 일차적으로 일차 종양의 근원과 동일하다. 예를 들어, 다른 조직으로 퍼져나간 유방암은 이차, 전이성 종양의 조직 위치에도 불구하고 “전이성 유방암”으로 불리운다. 유방암이 전이되는 가장 일반적인 기관은 뼈, 폐, 간, 또는 뇌이지만, 유방암은 또한 다른 기관으로도 퍼져나갈 수 있다.

암 세포는 종종 일차 종양 근처의 림프절로 퍼져 나가고, 이를 림프절 병발 또는 국부의 질병으로 부른다.

외과 수술의 어떠한 특정 이론에 제한되려는 의도함 없이, 전이는 많은 특정 단계로 구성되는 것으로 여겨진다: 침입 및 이동, 혈관 속 침입(intravasation), 순환, 분출(extravasation) 및 군체 형성(colonization), 증식 및 신생 혈관형성(angiogenesis). 침입 및 이동 동안에, 개개의 세포는 일차 종양으로부터 분리되고 주변의 건강한 조직을 침입한다. 이것을 수행하기 위하여, 암 세포는 운동성을 가져야하고, 이것을 용이하게 하는 상피에서 중간엽으로 전이(epithelial to mesenchymal transition)로 불리는 표현형의 변형을 거치게 되는 것으로 가설된다([Kalluri, R., et al., J. Clin. Invest., 1 19(6) (2009), 1420-28]). 그러한 세포는 세포외 기질을 분해하는 효소를 생산하고 이에 따라 일차 종양 밖으로 이동하고 건강한 조직을 둘러싸는 것이 가능하게 된다. 암 세포가 혈관 또는 림프관을 만나면, 그것은 혈관을 가득 채우는 상피 세포 사이로 들어가고 혈류 또는 림프계를 관통한다. 비정상적인 세포는 순환계 또는 림프계를 통해 새로운 기관 또는 림프절로 이동한다. 암 세포는 모세혈관 또는 간, 폐와 같은 기관의 림프, 또는 다른 조직이나 기관에 머무르고, 그 다음 조직 공간으로 내피를 관통시킴으로써 분출한다. 마지막으로, 군체 형성, 증식 및 신생혈관형성 동안에, 신생 세포는 그들의 새로운 숙주 조직에서 거주지를 형성하고 성장하기 시작한다. 새로운 전이성 종양이 충분한 크기에 도달하면, 그것은 새로운 혈관의 종양 속으로의 성장을 촉진하고, 빠르게 성장하는 종양에 산소 및 양분을 공급하기 위하여 VEGF와 같은 성장 인자를 분비한다.

7.3. 유방암 재발

유방암 재발은 유방암이 명백히 사라지도록 한 치료를 한 후에 유방암이 다시 나타나는 것을 의미한다. 만일, 다시 나타난 유방암이 원래의 암과 동일한 위치에 있거나 원래의 암과 매우 가까이에 있으면(예를 들어, 동일한 유방 또는 유방절제술 상처 근처), 그것은 국소 재발(local recurrence)로 알려져있다. 반대 편 유방에서 발견된 암은 재발이 아니고 새로운 암으로 여겨진다. 재발 유방암이 림프절 또는 원래의 암의 위치 근처 조직에서 성장할 경우, 그것은 국부 재발(regional recurrence)이다. 재발 유방암이 원래의 암 위치로부터 떨어진 조직 또는 기관으로 전이된 경우, 그것은 떨어져 있는 재발(distant recurrence)이다.

7.4. 암 줄기세포 및 유방암

고형 종양은 필수적인 동질의 조직이 아니다. 그보다는, 몇몇 종양은 구별되는 표현형 및 기능적 특성을 가지는 다수의 비정상적인 세포 유형을 포함한다. 이 점에서, 그러한 종양은 비정상적인 기관과 유사하다. 고형 종양을 포함하는 세포 가운데 한 가지 중요한 차이점은 동일한 숙주 내에 새로운 위치로 이주하거나, 또는 동일하거나 다른 종의 새로운 숙주로 이주하였을 때 새로운 종양의 형성을 시작할 수 있는지 정도이다. 이러한 특성을 가지는 세포는 종양 또는 암 시작 세포, 또는 다르게는 종양 또는 암 줄기세포로 알려져 있다. 반면에, 종양을 포함하는 다른 세포들은 훨씬 더 많은 세포들이 사용되는 경우에도 이식 이후에 새로운 종양을 시작하기 하여 훨씬 감소된 잠재력을 가진다. 한 가지 비제한적인 예로, 암 줄기세포 표현형을 가지는 유방암 세포주로부터 유래한 100배 적은 세포들은 줄기세포 표현형이 부족한 동일한 세포주로부터의 세포와 비교하여 마우스에서 새로운 종양을 형성할 수 있었다(Gupta, P.B., et al., "Identification of selective inhibitors of cancer stem cell by high-throughput screening," Cell, 13864-659 (2009)). [Filmore, CM. 및 C. Kuperwasser, "Human breast cell lines contain stem-like cells that self-renew, give rise to phenotypically diverse progeny 및 survive chemotherapy," Br. Cancer Res., 10:R25 (2008) 참조].

많은 종양에서, 암 줄기세포는 종양 안에 존재하는 독자 생존이 가능한 세포의 상대적으로 적은 부분을 포함한다. 반면에, 종양의 대부분을 포함하는 주요 종양 세포는 이주하였을 때 새로운 종양을 시작할 수 없다. 그러나 몇몇 종양에서, 암 줄기세포는 주요부 또는 심지어 종양을 포함하는 세포의 모두를 구성할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 대다수의 종양 세포는 많은 숫자의 그러한 세포가 사용되지 않는 한, 이식에 대하여 새로운 종양을 시작할 수 없다. 또한, 암 줄기세포는 자가-갱신, 상대적으로 적은 숫자의 암 줄기세포의 이식에 대하여 새로운 종양을 형성하는 능력을 포함하는 대다수의 종양 세포와 구별되는 표현형 특징을 갖고, 또한 암 줄기세포는 FACS 또는 다른 검출법에 의해 관측되는 다른 마커들의 발현을 갖는다. 또한, 암 줄기세포와 대다수의 종양 세포 간의 다른 차이점이 있을 수 있다.

외과 수술의 어떠한 특정 이론에 구속되려는 의도함 없이, 암 줄기세포는 종양을 발생시키는 능력에 공헌한다는 점에서 일반적인 줄기세포와 특정의 특성을 공유하는 것으로 알려져 있다. 특히, 암 줄기세포는 두 가지 형태의 딸 세포를 생산하기 위하여 비대칭의 세포 분열을 한다. 첫 번째는 미분화 상태로 남아있고 무기한으로 스스로 갱신할 수 있는 부모의 줄기세포의 특징을 보유하고 있다. 전구세포라고 불리는 다른 딸 세포는 비록 비정상적이라도 많은 고형 종양에서 발견되는 보다 분화된 세포의 스펙트럼을 발생시키기 위하여 분열 및 분화를 할 수 있다. 전구세포는 줄기세포보다 더 빠른 속도로 증식하고 따라서 종양의 물리적 성장에 공헌한다. 반면에, 줄기세포는 종양이 새로운 전구세포를 생산함으로써 무기한으로 성장할 수 있는 능력에 책임이 있다.

이러한 특징은 암 줄기세포가 결국 성장하는 종양을 포함하는 많은 수의 세포를 생산하도록 한다. 따라서, 새로운 동물에 이식되었을 때, 암 줄기세포는 심지어 몇 차례 연속된 이식 이후에도 불구하고, 그들이 유래한 종양의 유형을 재구성할 수 있다. 그러나, 일반 줄기세포와 달리 암 줄기세포는 종양의 부피를 구성할 수 있는 비정상적 세포의 축적을 유발하는 비정상적인 분화뿐만 아니라, 바뀐 증식 패턴 및/또는 낮은 속도의 세포 유도사의 결과가 나타나는 유전적 변이 및/또는 후성적 변화를 갖는다.

암 줄기세포는 대다수의 종양 세포와 그들을 구별짓는 많은 표현형의 특징에 따라 확인될 수 있다. 첫째로, 상기 언급한 바와 같이, 암 줄기세포는 새로운 숙주로 이식되었을 때 새로운 종양을 시작할 수 있는 능력을 갖는다. 반면에, 대다수의 종양 세포는 새로운 종양을 시작할 수 없거나 새로운 종양을 얻기 위하여 암 줄기세포 보다 더 많은 세포를 요구한다. 암 줄기세포는 특정 마커의 발현 또는 비발현에 의해 확인될 수 있다. 반면, 동일한 종양으로부터의 대다수의 종양 세포는 상이한 마커 발현 패턴을 가진다. 암 줄기세포는 또한 대다수의 종양 세포와 비교하여 무혈청의 낮은-부착 배양 조건에서 성장하고 소위 구상체를 형성하는 데 우선적인 능력을 갖는다. 암 줄기세포와 대다수의 종양 세포를 구별할 수 있는 다른 표현형의 차이점이 가능하다.

상기 언급한 바와 같이, 암 줄기세포는 특정 마커 자체 또는 다른 것들과 조합으로 발현되는 패턴에 따라 확인될 수 있다. 그러나, 다른 종양으로부터의 암 줄기세포는 상이한 마커 표현형을 나타낼 수 있다. 그러한 마커는 세포 내 또는 세포 표면에서 발현되는 단백질을 포함하고, 이에 제한되지는 않으나 면역조직화학, 면역형광법 및 FACS 분석을 포함하는 다양한 기술을 이용하여 관측할 수 있다. 마커를 검출하기 위한 다른 기술은 또한 기술 분야의 통상의 기술자의 지식에 따라 이용이 가능하다. 마커는 암 줄기세포에서 기능적으로 분석될 수 있는 활성을 가지는 단백질을 포함한다. 마커의 비제한적인 예시 유형으로 세포로부터 물질을 밖으로 전달하거나 세포 내로 흡수하는 수송 단백질, 해독 효소와 같은 효소를 포함한다.

이에 한정되지는 않으나 CD44, CD24 및 ESA 를 포함하는 예시적인 마커는 유방암 줄기세포를 확인하는 데 이용될 수 있다. 암 줄기세포를 확인하는 데 유용한 다른 마커들이 또한 가능하다. 일부 구체예에서, 마커의 발현 부재는 암 줄기세포 표현형을 나타낸다. 본 내용의 일부 구체예에서, 유방암 줄기세포는 FACS 또는 기술 분야의 통상의 기술자에게 익숙한 다른 기술을 이용하여, 다음의 마커 표현형에 의해 확인된다: CD44(+)/CD24(-), CD44(+)/CD24(낮음) 및 CD44(+)/CD24(-)/ESA(+). 다른 마커의 발현 및 그 조합 및 패턴은 이들 암에서 암의 다른 유형 뿐만 아니라 암 줄기세포를 확인하는 데 이용될 수 있다. 본 명세서의 다른 구체예에서, 유방암 줄기세포는 특정 염료를 배제하는 우선적 능력에 따라서 그 세포들을 소위 외락군(side population)으로 분류함으로써 FACS 분석을 이용하여 확인된다. 그러한 염료의 한 가지 비한정적인 예시는 헤치스트 염료(Hoechst dye) 33342이다.

상기 언급한 바와 같이, 암 줄기세포는 새로운 숙주로의 이식 이후에 새로운 종양 성장을 시작하는 증가된 능력에 의해 대다수의 종양 세포와 구별될 수 있다. 따라서, 암 줄기세포로 의심되는 세포 군의 정체성을 확인하는 한 가지 방안은 비인간 수령 동물로 이식 이후에 종양 성장을 시작하는 그들의 능력을 평가하는 것이다.

종양 또는 세포주가 암 줄기세포를 함유하는지를 평가하는 데 유용한 이식 방법은 기술 분야의 당업자에게 익숙하다. 비한정적인 예시로, 암 줄기세포를 함유하고 있는 것으로 의심되는 종양 또는 그 부분을 외과 수술적 절제에 의해 분리한다. 종양을 분해하고 그 구성 세포를 배출하기 위하여, 종양 조직은 잘게 갈아서 효소를 처리하거나 또는 다른 처리를 한다. 또한, 세포주가 분석될 때, 세포를 효소적 또는 화학적 처리로 분리하는 것이 단지 필요할 수 있다.

세포 현탁액이 준비된 후, 세포는 원심분리에 의해 수거되고 암 줄기세포에 상응하는 것으로 알려진 소집단은 기술분야에서 알려진 방법에 따라 분리되었다. 상기 언급된 바와 같이, 하나의 비한정적인 예시로, 그러한 세포는 특정 항체 및 FACS를 이용하여 관측되는 암 줄기세포를 나타내는 마커의 특정 패턴을 발현한다. 다른 구체예에서, 암 줄기세포를 함유하는 것으로 의심되는 소집단은 특정 염료를 배제하는 능력과 같은 다른 표현형 특성에 따라 분리될 수 있다.

적합한 세포의 소집단을 분리한 다음, 그러한 미리 결정된 세포 수는 수령 동물의 하나 또는 그 이상의 표적 조직 또는 기관으로 이식된다. 일부 구체예에서, 수령 동물은 누드마우스, SCID(severe combined immunodeficiency) 마우스 및 NOD-SCID(nonobese-diabetic SCID) 마우스를 포함하나 이에 한정되지는 않는 면역결핍 마우스이다. 다른 종들도 기술분야의 통상의 기술자의 지식에 따라 이용될 수 있다.

세포는 지방대(마우스의 유방의 지방대와 같은), 뇌, 췌장 또는 간, 또는 신장 속으로(신장 피막과 같은) 피하로 이식될 수 있다. 세포는 또한 다른 조직 및 기관으로 이식될 수 있다. 일부 구체예에서, 표적 조직 또는 기관은 분석 중인 종양의 근원의 조직 또는 기관을 복제하기 위해 선택된다. 그러나 다른 구체예에서, 개별적인 조직 또는 기관은 이식된 세포를 숙주화시키기 위해 선택된다. 비한정적인 예시로, 대장암 줄기세포는 새로운 종양을 시작하는 그들의 능력을 평가하기 위하여 NOD-SCID 마우스의 신장 피막으로 이식될 수 있다.

통상의 기술자에게 익숙한 기술을 이용하여 초래된 이식시킨 후에, 세포는 이식 위치에서 새로운 종양이 성장하는지를 결정하기 위해 손대지 않은 상태로 남겨져 있다. 피하로 이식된 세포에 대하여, 종양 성장은 외관시험 및 이식 위치의 촉진에 의해 평가될 수 있다. 종양이 성장하면, 그 크기는 캘리퍼스를 이용하여 시간에 따라 측정될 수 있다. 장기 속으로 이식된 세포에 대하여, 동물은 종양이 존재하는지 및 만일 종양이 존재하면 그 크기를 판단하기 위하여 이식 후 미리 결정된 시간에 희생된다. 또한, 통상의 기술자의 지식에 따라 비침습적인 기술이 종양 크기를 평가하기 위해 이용될 수 있다.

대다수의 종양 세포가 무혈청의 낮은 부착 배양 조건에서 구상체로 성장할 수 있는 가능성이 낮은 반면, 암 줄기세포 표현형은 무혈청의 낮은 부착 배양 조건에서 구상체로 성장하는 선호되는 능력에 의해 특징지어진다. 구상체는 분해된 현탁액으로 심어진 이후에 배양에서 특정 세포가 성장하면서 형성된 세포의 조밀한 구이다. 그러한 구상체의 형성은 세포가 일반적으로 특정 성장인자(이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 표피생장인자(EGF) 및 염기성 섬유모세포생장인자(bFGF))가 있는 무혈청(예를 들어, MammoCult?, StemCell Technologies, Inc., Vancouver, Canada)의 배지 및 포유류의 세포가 좋지 않게 부착하는 표면을 가지는 조직 배양접시에서 성장할 때 촉진된다. 일반 조직으로부터의 줄기세포와 유사하게, 그것은 암 줄기세포가 적절한 배양 조건에서 구상체로 선호되며 성장한다는 것이 밝혀져 왔다. 예를 들어, [Rappa, G., et al., Exp. Cell Res., 314:21 10 (2008); Singh, S. ., et al., Cancer Res., 63:5821 (2003); 및 Fang, D., et al., Cancer Res., 65:9328 (2005)]를 참조하라. 반면에, 훨씬 더 분화되는 경향이 있는 대다수의 종양 세포는 동일한 배양 조건에서 구상체를 덜 형성하게 된다. 대다수의 종양 세포가 구상체를 형성할 수 있을 때, 그들은 비슷한 숫자의 암 줄기세포에 의해 형성되는 것과 비교하여 더 작고/또는 더 작거나 더 적은 경향이 있다.

7.5. 암 줄기세포 및 유방암 재발

암 줄기세포의 특성을 갖는 종양 세포는 방사능 및/또는 화학 요법제에 대한 향상된 저항성을 나타내는 것으로 밝혀져 왔다. 상이한 분자 메커니즘이 암 줄기세포의 방사능 또는 화학 요법제에 대한 저항성을 설명하기 위해 제안되어 왔다. 예를 들어, 다른 암 줄기세포는 높은 항-세포유도사 단백질 수준 또는 그러한 세포를 시작하게 하는 화학 요법제를 제거하기에 효과적인 분자 펌프의 높은 수준을 나타내는 반면, 특정 암 줄기세포는 유전 독성 물질의 상해 이후에 보다 쉽게 그 유전자를 수선할 수 있다고 보고되어 왔다(Eyler, C.E., 및 J.N. Rich, J. Clin. Oncol, 26:2839-2CDR5 (2008)). 암 줄기세포가 전구세포보다 더 천천히 증식하는 것은 줄기세포의 대다수의 종양세포를 죽이는 방사능 및 화학 요법제의 노출에 살아남는 상대적인 능력을 또한 설명한다.

외과 수술의 어떠한 특정 이론에 구속되려고 의도하지 않고, 암 줄기세포가 방사능 및 화학 요법에 저항성을 가진다는 관찰은 그러한 치료를 한 암 환자에서 재발 현상을 설명해줄 수 있다(Eyler, supra). 그러한 환자에서, 치료는 진단 스캔에서 종양을 위축시키거나 사라지게 하면서 처음에는 효과적이지만, 종양은 치료가 중단된 이후에 약간의 시간이 지나면 다시 나타난다.

재발 과정에서 암 줄기세포의 역할에 관하여, 대부분 또는 심지어 모든 대다수의 종양 세포는 치료에 의해 죽을 수 있고, 많은 독자 생존 가능한 암 줄기세포는 방사능 또는 화학치료의 효과에 향상된 저항 능력 때문에 살아남게 된다는 가설이 있다. 치료를 마친 후에, 이들 살아있는 세포는 원래의 종양을 재형성하게 하거나 새로운 종양을 형성하게 하면서 계속해서 성장한다.

이 이론과 일관되게, 화학 요법제로 처리한 인간 유방암 세포주를 이식하여 마우스를 치료한 경우, 암 줄기세포의 특징을 갖는 종양으로부터 일부의 세포를 선택하고 증가시키는 데 효과적이었다고 보고되어 왔다(Yu, F., et al., 2007,"let-7 Regulates self renewal and tumorigenicity of breast cancer cell," Cell 131 : 1 109-23).

유방암 줄기세포가 방사능 및 화학 요법제 모두에 저항성이 있다는 관찰은 그러한 세포가 유방암의 재발에 책임이 있다는 것을 제안한다(Phillips, T.M., et al, "The response of CD24"/low/CD44+ breast cancer-initiating cells to radiation," J. Natl. Cane. Inst., 98(24): 1777-1항-hPG 중화 항체5 (2006), Gupta, P.B., et al, and Filmore, CM. and C. Kuperwasser, supra).

7.6. 유방암에서 프로가스트린의 역할 이해의 발전

실시예에서 더 자세히 기재된 바와 같이, 본 출원인은 세 가지 상이한 인간 전이성 유방암 세포주, MCF-7 세포, MDA-MB231 세포 및 T47D 세포에서 가스트린 유전자(GAST)가 대조군 세포주와 비교하여 다양한 수준으로 발현되는 것을 놀랍게도 발견하였다. 시험관 내 실험으로부터의 MAb와 관련하여, 출원인은 인간 유방암 환자로부터 수득한 MAb개 일차 유방암 중에서 27개, 25개 전이성 유방암 중에서 7개에서 가스트린 유전자가 다양한 수준으로 발현되는 것을 놀랍게도 발견하였다.

프로가스트린은 가스트린 유전자의 산물이기 때문에(동일한 유전자 산물로부터 번역 후 과정을 거친 다른 펩타이드와 함께), 시험관 내 및 생체 내 가스트린 유전자 발현 연구로부터의 MAb는 일차 및 전이성 유방암 모두가 아니라 일부가 프로가스트린 단백질을 분비한다는 것을 의미한다. 전이성 유방암과 관련된 확인은 일차 종양이 제거된 전이성 유방암 진단을 받은 환자 가운데 PG의 중간 혈중 정도가 건강한 대조군의 혈중의 것과 비교하여 높다는 출원인에 의한 관측으로부터 나온다. 따라서, 전이성 유방암은 혈액에서 관측될 수 있는 PG를 분비한다. 정상 PG 수준보다 높은 수준은 일차 유방암 진단을 받은 특정 환자의 혈액에서도 관측되었다. 따라서 진단 시험은 유방암이 의심되는 환자의 혈중 PG 수준과 암이 없는 정상 환자의 혈중 PG 수준을 비교함으로써 환자에서 유방암의 존재를 관측하는 것이 가능하다. 혈액 혈장 및/또는 혈청의 PG 수준은 이에 한정되지는 않으나 RIA 또는 ELISA와 같은 기술을 사용하여 현재 명세서의 중화 또는 비-중화 항체를 이용하여 검출될 수 있다. 정상 혈중 PG 수준보다 높은 것에 기초한 유방암의 임시적 진단은 의학 영상 진단, 예를 들어 CT 또는 MRI과 같은 다른 시험으로 확인될 수 있다.

출원인은 또한 특정 인간 전이성 유방암 세포주, 예를 들어 MCF-7 세포 및 MDA-MB-231 세포의 배양에서 성장이 hPG를 특이적으로 인식하는 다중클론항체 및/또는 단일클론항체로 처리함으로써 억제된다는 것을 놀랍게도 발견하였다. MDA-MB-231 세포를 이용한 실험은 항-hPG 단일클론항체를 이용한 억제 효과가 용량에 반응적이고, 억제 효과는 프로가스트린의 N-말단 및 C-말단 모두를 인식하는 항체에 의해 중재될 수 있음을 증명하였다. 반면에, hPG에 대한 단일클론항체로 T47D 인간 전이성 유방암 세포주를 처리하는 것은 그러한 세포의 성장에 크게 영향을 미치지 않았다. 이러한 놀라운 발견은 인간 전이성 유방암 세포의 전부는 아니지만 일부가 PG에 대하여 민감하고 그러한 세포의 성장은 항-hPG 중화 항체로 처리함으로써 억제될 수 있다는 것을 의미하는 것으로 해석된다.

PG-민감성 유방암 세포는 그의 생존 및/또는 성장에, 직접적으로 또는 간접적으로 프로가스트린에 적어도 부분적으로 의존하는 것이다. 외과 수술의 어떠한 특정 이론에 구속되려고 하지 않고 , 중화 항- hPG 항체는 PG에 결합하고 PG-의존적 신호를 막음으로써 그러한 세포의 생존 및/또는 성장을 억제하는 데 효과적이라는 가설이 있다. 따라서 프로가스트린은 그것의 생존 및/또는 성장-촉진 효과를 중재하는 것을 방지한다. 항-PG 항체가 유방암 세포의 생존 및/또는 성장을 억제하는 다른 메커니즘이 존재할 수 있다. 하지만, 반응의 특정 메커니즘은 본 명세서의 범위에 한정되는 것은 아니다.

hPG에 대한 중화 항체는 특정 인간 전이성 유방암 세포의 성장을 억제할 수 있다는 관찰에 기초하여, PG-민감성 전이성 유방암을 치료하는 방법은 항-hPG 중화 항체를 전이성 유방암의 치료가 필요한 환자에게 치료학적으로 유효량을 투여함으로써 가능하다.

출원인에 의해 수행된 다른 실험은 전이성 유방암은 PG-민감성 유방암 줄기세포를 함유하고, 그 성장은 항-hPG 중화 항체를 처리함으로써 억제될 수 있음을 놀랍게도 증명하였다. 특히, 출원인은 MDA-MB-231 세포의 약 95%가 표현형 마커, CD44+/CD24-를 발현하고, 그들은 유방암 줄기세포로 확인됨을 발견하였다(실험 나타내지 않음). MDA-MB-231 세포는 PG-민감성이고 거의 모든 이 세포들은 유방암 줄기세포 마커를 발현하기 때문에, 줄기세포는 PG-민감성일 확률이 크다. 이것과 일관되게, PG-민감성이 아닌 것으로 밝혀진 T47D 세포는 CD44+/CD24-를 발현하는 세포를 함유하지 않는다. 반면, 약 1.6%의 CD44+/CD24-(Phillips, et al., supra) 세포를 함유하는 것으로 보고된 MCF-7 세포는 또한 항-hPG 항체의 성장 억제 효과에 민감한 것으로 밝혀졌다.

특정 유방암 줄기세포가 PG-민감성이라는 결론을 지지하는 것은 세포가 암 줄기세포의 성장을 우호적이게 하는 낮은 부착 배양 조건에서 자랄 때 MDA-MB-231 세포에서 가스트린 유전자 발현이 증가한다는 관찰이었다. 그러나, 그러한 세포로부터 PG 분비에 대한 영향이 아직 알려지지 않았다고 할지라도 가스트린 유전자 발현은 낮은 부착 조건에서 자랄 때 MCF-7 세포에서 감소하였다.

비록 MCF-7 세포의 상대적으로 적은 부분이 CD44+/CD24-를 발현한다고 할지라도, 출원인은 낮은 부착 배양 조건에서 MCF-7 세포를 성장시키고 구상체 형성에 대한 특정 항체 치료의 효과를 결정함으로써 유방암 줄기세포가 PG-민감성이라는 사실에 대한 증거를 더 발견하였다. 실시예에서 설명한 바와 같이, 항-hPG 단일클론항체의 처리는 대조군과 비교하여 구상체의 숫자를 감소시켰다. 낮은 부착 배양 조건에서 구상체의 형성은 암 줄기세포와 관련된 특성이기 때문에, 이러한 결과는 MDA-MB-231 세포와 같이, MCF-7 세포가 그 성장이 중화 항체에 의해 억제되는 PG-민감성 유방암 줄기세포를 함유하는 것을 나타낸다.

본 연구를 함에 있어서, 출원인은 또한 MCF-7 세포들을 상이한 항-hPG 단일클론항체로 미리 처리한 효과를 테스트하였다. 이 때, 세포는 항체가 제거되고 세포가 낮은 부착 조건에서 계속 성장할 수 있도록 된 후 일반적인 배양 조건에서 성장하였고, 그것은 암 줄기세포의 성장을 선택하게 한다. 출원인은 항체가 실험의 낮은 부착 성장 단계 동안에 존재하지 않았음에도 불구하고, 항-hPG 단일클론항체로 미리 처리된 MCF-7 세포가 대조군과 비교하여 적은 구상체를 형성하는 것을 놀랍게도 발견하였다. 이러한 결과는 MCF-7 세포가 항-hPG 중화 항체에 의해 억제되는 유방암 줄기세포를 함유하고, 그러한 줄기세포의 성장에 대한 억제 효과는 항체의 계속적인 존재를 요구하지 않는다는 두 가지 사실을 의미하는 것으로 해석된다.

특정 유방암은 PG-민감성 암 줄기세포를 함유하고, 암 줄기세포는 암 재발 현상에 책임이 있다고 알려져 있는 관찰에 기초하여, 유방암의 재발을 예방하는 방법은 유방암 재발을 예방할 필요가 있는 환자에게 유방암의 재발을 예방하기 위하여 유효량의 항-hPG 중화 항체를 처리함으로써 가능하고, 이 때 유방암은 PG-민감성이다. 출원인의 놀라운 발견은 또한, 그러한 세포의 성장을 억제하는 데 효과적인 항-hPG 중화 항체를 유효량으로 세포에 처리함으로써 PG-민감성 유방암 줄기세포의 성장을 예방하는 방법에 기초한다.

7.7. 항체

본 명세서에 기재된 본 방법 및 키트에 사용되는 항체는 가스트린 유전자의 다른 산물에 대한 인간 프로가스트린에 특이적으로 결합하는 것들이다. 도 13에 나타난 바와 같이, 가스트린 유전자는 프리-프로가스트린이라고 불리우는 101개 아미노산 폴리펩타이드로 번역되고, 폴리펩타이드는 80개 아미노산 폴리펩타이드인 프로가스트린을 생산하면서 절단되는 신호 서열(밑줄)을 함유한다. 프로가스트린은 차례로 프로가스트린의 38 내지 71번 잔기 서열에 상응하는 34개 아미노산 산물을 생산하기 위해 절단되고, 그 후 글라이신-연장된 G34 ("G34-Gly")를 생산하면서 그 카복시말단에서 글라이신 잔기로 연장되었다. 이 절단의 부산물은 C-말단 측면 펩타이드(flanking peptide)라 불리우는 프로가스트린의 75 내지 80번 잔기 서열에 상응하는 6개 아미노산 펩타이드이다. G34-Gly은 그 후 프로가스트린의 55 내지 71번 잔기 서열에 상응하는 17개 잔기 폴리펩타이드를 생산하기 위해 절단되고 G17-Gly로 불리운다. G34-Gly 및 G17-Gly의 C-말단의 글라이신의 제거는 C-말단 아미드화에 의해 이루어지고 C-말단이 아미드화되면서 각각 G34 및 G17를 생산한다.

본 명세서에서 사용된 항체는 hPG에 대하여 "매우 특이적"이거나, 항체가 전체 길이의 프로가스트린에 결합하지만 CTFP, 아미드화된 가스트린 또는 글라이신-확장된 가스트린 모두에는 결합하지 않으면 hPG에 “매우 특이적으로 결합한다". 또한 항체가 표준 결합 검출법으로 측정하였을 때, CTFP 및 가스트린 유전자의 다른 산물보다 hPG에 적어도 약 5배 더 결합하면 hPG에 “특이적으로 결합한다". 특정 항-hPG 항체의 특이성을 평가하기 위해 사용될 수 있는 특정 ELISA 검출법은 실시예 12에서 제공된다.

그러한 매우 특이적인 및/또는 특이적인 항-hPG 항체(본 명세서에서 "항-hPG 항체"로 불리운다)는 비록 치료적 용도, 예를 들어 진단 또는 다른 시험관 내 용도를 위해서는 단일클론항체가 선호되지만, 다중클론성("항-hPG PAbs") 이거나 단일클론성("항-hPG MAbs")일 수 있다.

항-hPG 항체에 의해 결합되는 에피토프는 중요하지 않다. 유용한 항-hPG 항체는 hPG의 N-말단 영역, hPG의 C-말단영역, 또는 hPG의 다른 영역에 결합할 수 있다. 최근, 적어도 단일클론 항-hPG 항체에 대하여 항-hPG 항체를 증가시키기 위해 사용되는 항원의 선택이 중요하다는 사실이 밝혀져 왔다(2010. 10. 15.에 출원된 국제출원 PCT/EP2010/006329, 2010. 10. 15에 출원된 미국출원 12/906,041의 내용 참고. 특히 참고문헌에 의해 포함되는 항-hPG 항체 내용. 이후 각각 '329 및 '041 출원이라고 부른다). '329 및 '041 출원에 개시된 바와 같이, hPG로부터 유래한 항원들 모두가 생리적인 조건 하에서 hPG에 특이적으로 결합하는 단일클론항체의 생산을 촉진하는 것은 아니다. 사실, 전체 길이 재조합 hPG(예를 들어, WO 08/076454, Singh 참조) 및 hPG C-말단의 마지막 10개 아미노산에 상응하는 펩타이드 (WO 07/135542, Hollande et al. 참조)와 같은 다중클론의 항-hPG 항체를 성공적으로 증가시키는 데 사용되어온 특정 항원은 단일클론항체를 생산하는 것을 실패하였다. '329 및 '041 출원에 나타난 바와 같이, hPG 서열 내의 항원의 N-말단 및 C-말단 서열은 hPG에 특이적으로 결합하는 단일클론항체를 생산하는 데 사용될 수 있음을 밝혀 왔다. 흥미롭게도, 항원 서열은 그것에 고유한 hPG 서열의 영역에 한정될 필요가 없다. 가스트린 유전자의 다른 산물, 예를 들어 G17, G34 및 CTFP과 공통되는 서열 영역을 가지는 펩타이드 항원은 hPG에만 결합하는 것은 아니나, 그러나 그것에 특이적으로 결합하는 단일클론항체를 생산한다.

hPG의 N-말단 영역에 상응하고/또는 hPG의 N-말단 영역에 결합하는 서열을 가지는 펩타이드 항원을 이용하여 얻어지는 항-hPG 항체는 본 명세서에서 "N-말단 항-PG 항체"로 불리운다. hPG에 특이적인 다중클론항체 및 단일클론항체 모두를 얻기 위하여 적합한 면역원을 구성하기 위하여 사용될 수 있는 hPG의 특정 예시적인 항원 영역은 hPG의 1-14 잔기에 상응한다: SWKPRSQQPDAPLG(SEQ ID NO:25). 이들 예시적인 면역원으로 얻어지는 N-말단 항-hPG 단일클론항체의 CDR, V_H 및 V_L 서열뿐만 아니라, N-말단 항-hPG 항체를 얻기 위해 이용되는 예시적인 면역원은 하기 표 1A 및 실시예 부분에서 제공된다:

[표 1A]

표 1A에서, 모든 아미노산 서열은 일반적인 N→C 방향으로 표시되었다. 각 면역원에 대하여, 프로가스트린 펩타이드는 시스테인(Cys) 잔기에 잇달은 하나의 아미노헥사노익 에시드(Ahx)의 C-말단 링커로 합성되었다. 그 후, Cys 링커 잔기를 통하여 소혈청알부민(BSA) 또는 키홀-림펫 헤모사이아닌(“keyhole limpet hemocyanin: KLH") 캐리어와 결합되었다.

hPG의 C-말단 영역에 상응하고/또는 hPG의 C-말단 영역에 결합하는 서열을 가지는 펩타이드 항원을 이용하여 얻어지는 항-hPG 항체는 본 명세서에서 "C-말단 항-PG 항체"로 불리운다. 다중클론 및 단일클론 C-말단 항-hPG 항체 모두를 얻기 위하여 사용되는 면역원을 구성하기 위하여 사용될 수 있는 특정 예시적인 항원 영역은 hPG의 55 내지 80번 잔기에 상응한다: QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN (SEQ ID NO:27). 이들 예시적인 면역원으로 얻어지는 C-말단 항- hPG 단일클론항체의 CDR, V_H 및 V_L 서열뿐만 아니라 C-말단 항-hPG 항체를 얻기 위해 이용되는 이 항원을 포함하는 예시적인 면역원은 하기 표 1B 및 실시예 부분에서 제공된다

[표 1B]

표 1B에서, 모든 아미노산 서열은 일반적인 N→C 방향으로 표시되었다. 각 면역원에 대하여, 프로가스트린 펩타이드는 N-말단 Ahx-Ahx-Cys 링커로 합성되었다. 그 후, Cys 링커 잔기를 통하여 키홀-림펫 헤모사이아닌(“keyhole limpet hemocyanin: KLH") 또는 디프테리아 독소(“diphtheria toxin: DT") 캐리어와 결합되었다.

표 1A 및 1B에 있는 예시적인 항-hPG 단일클론항체 MAbl-MAb23에 의해 결합되는 특정 에피토프는 각각, Laune et al, 2002, J. Immunol. Methods 267:53-70 및 Laune, 1997, J. Biol. Chem. 272:30937-30944 에 기재된, SPOT 기술 및 알라닌 스캐닝을 이용하여 지도화하였다(또한, '329 출원의 실시예 6을 참조하라).

SPOT 기술에 있어서, 추정되는 에피토프를 걸치는 15개 아미노산 펩타이드 서열이 생성되고 니트로셀룰로오스 막위에 나타내었다. 그 후, 항체에 의해 인식되는 최소한의 에피토프 서열을 결정하기 위하여 시험 항체로 탐검하였다. 알라닌 스캐닝은 항체 결합에 중요한 에피토프 내의 잔기들을 결정하기 위하여 사용되었다. 추정되는 에피토프 내의 각 잔기는 하나씩 알라닌으로 돌연변이화되고, 알라닌을 포함하는 펩타이드는 그 후 시험 항체로 탐검하였다.

N-말단의 항-hPG 단일클론항체 MAb1번 내지 4번 및 15번 내지 20번에 대하여, 에피토프는 적어도 다음의 서열을 포함한다: 아래 표 2A에 나와있는 바와 같이, DAPLG (SEQ ID NO:28), PDAPLG (SEQ ID NO:29), PRSQQPD (SEQ ID NO:30), WKPRSQQPD (SEQ ID NO:31), 또는 WKPRSQQPDAPLG (SEQ ID NO:32).

[표 2A]

C-말단의 항-hPG 단일클론항체 MAb5번 내지 7번, 9번 내지 12번, 14 및 21번 내지 23번에 대하여, 에피토프는 적어도 다음의 서열을 포함한다: 아래 표 2B에 나와있는 바와 같이, FGRR (SEQ ID NO:33), MDFGR (SEQ ID NO:34), AEDEN (SEQ ID NO:35), 및 GWMDFGRR (SEQ ID NO:36).

[표 2A]

에피토프 지도화 실험은 항-hPG MAb2 및 MAb4은 동일한 에피토프에 결합하고; 항-hPG MAb1 및 MAb3은 거의 동일한 에피토프에 결합하고; MAb17, MAb18, MAb19, 및 MAb20은 거의 동일한 에피토프에 결합하고; MAb15 및 MAb16은 거의 동일한 에피토프에 결합하고; 항-hPG MAb5, MAb6, MAb7, MAb9, 및 MAb12는 항-hPG MAb10으로써 동일한 에피토프 및 거의 동일한 에피토프에 결합하고; 그리고 항-hPG MAb11 및 MAb14는 거의 동일한 에피토프에 결합하는 것을 나타낸다.

본 명세서에서 기재된 방법 및 키트에 사용되는 N-말단 항-PG 항체의 특정 구체예는 hPG의 10-14 잔기(SEQ ID NO:28), hPG의 9-14 잔기(SEQ ID NO:29), hPG의 4-10 잔기(SEQ ID NO:30), hPG의 2-10 잔기(SEQ ID NO:31 ), 또는 hPG의 2-14 잔기(SEQ ID NO:32)를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다.

본 명세서에서 기재된 방법 및 키트에 사용되는 C-말단 항-PG 항체의 특정 구체예는 hPG의 71-74 잔기(SEQ ID NO:33), hPG의 69-73 잔기(SEQ ID NO:34), hPG의 76-80 잔기(SEQ ID NO:35), 또는 hPG의 67-74 잔기(SEQ ID NO:36)를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다.

표 1A 및 표 1B에 기재된 것들에 부가하여 본 명세서에서 기재된 방법 및 키트에 사용되는 N-말단 및 C-말단 항-hPG 항체는 예시적인 MAb1번 내지 23번, 또는 다음 부분에서 더 자세히 설명할 N-말단 또는 C-말단 에피토프에 결합하는 다른 기준 항체로 경합결합측정법으로 확인될 수 있다.

'329 및 '041 출원에서 기재되어 있는 바와 같이, 비록 hPG에 대한 높은 특이성 및 친화성을 나타내지만 모든 항-hPG 항체가 hPG의 생물학적 활성을 중화시키는 것은 아니다. 예를 들어, 비록 항-hPG MAb14가 hPG에 약 6 pM의 K_D로 결합하지만, 적어도 농도 시험에 있어서 그것은 시험관 내 검출법에서 특정 대장암 세포의 성장을 억제하지 않았다. 반면에, 다른 항-hPG 단일클론항체, 예를 들어 MAb1번 내지 MAb13번 및 MAb15번 내지 MAb23번은 다양한 정도로 억제 활성을 나타내었다. hPG에 특이적으로 결합하는 비-중화 항체 및 중화 항체 모두가 본 명세서의 진단 방법에 이용될 수 있는 반면, 치료 방법에 이용되는 항-hPG 항체는 중화 활성을 나타내어야 한다. 실시예에 기재된 바와 같이, MAb3 및 MAb8은 배양에서 MDA-MB-231 및 MCF7 유방암 세포의 성장을 억제하는 능력을 시험하였을 때, 중화 활성을 갖는 것으로 증명되었다. 본 명세서의 다른 항체가 중화시키는지는 실험에 의거하여 결정된다.

본 명세서에서 사용되는 "항-hPG 중화 항체”는 비특이적인 항체로 처리된 대조군 시료와 비교할 때, 항-hPG 항체로 처리된 시험 시료에서 살아있는 유방암 세포의 숫자의 통계학적인 상당한 감소를 나타내는 항-hPG 항체를 말한다. 중화되는 어떠한 특정 항-hPG 항체의 능력을 평가하기 위한 특정 분석은 실시예 13에 기재되어 있다. 비록 이 분석에서 중화 활성의 낮은 수준, 예를 들어, 살아있는 유방암 세포 숫자에 있어서 40%, 30%, 20%, 15%, 또는 심지어 10%의 통계학적인 상당한 감소를 나타내는 항-hPG 항체가 치료적 이점을 제공하는 것으로 예상된다고 할지라도, 이 분석에서 살아있는 유방암 세포 숫자의 적어도 약 50% 감소를 나타내는 항-hPG 항체는 유방암을 치료하는 데 특히 유용한 것으로 알려져 있다. 이러한 분석에서 사용되는 예시적인 세포는 이에 한정되는 것은 아니나 본 명세서에서 기재된 PG-민감성 유방암 세포주를 포함한다.

따라서 일부 구체예, 예를 들어 치료적 구체예에서, 유용한 항-hPG 항체는 중화된다. '329 및 '041 출원 및 본 명세서에 기재된 바와 같이, 중화되는 항-hPG 단일클론항체의 능력은 N-말단(예를 들어, MAb3) 및 C-말단(예를 들어, MAb8) 항-hPG 단일클론항체 모두가 유방암 세포의 분석에서 중화 활성을 나타낸 것과 같이, 에피토프-의존적이지 않다. 따라서, 일부 특정 구체예에서, 항-hPG 중화 항체는 N-말단 항-hPG 중화 항체이다. 다른 구체예에서, 항-hPG 중화 항체는 C-말단 항-hPG 중화 항체이다.

어떠한 특정 항-hPG 항체의 친화도는 중요하지 않다. 그러나, 일부 용도를 위해서, 적어도 약 1 μΜ의 친화성을 나타내는 항체가 선호된다. 치료적 용도를 위하여, 적어도 약 90 nM, 80 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 15 nM, 10 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.1 nM, 0.01 nM, 0.001 nM 또는 심지어 그 이상의 친화도가 바람직하다. 표 1A 및 1B에서 확인된 항-hPG 단일클론항체의 측정된 친화도는 아래 표 3에 나타난 바와 같이, 10^{- 6} 에서 10^-12 M 범위이다.

[표 3]

특정의 요망되는 출원에 특히 적합한 친화도를 가지는 항-PG 단일클론항체는 이들 또는 다양한 면역원을 이용하여 발생하거나 설계된 본 명세서에 기재된 항-hPG 항체의 CDR 서열, 가변 중사슬(V_H) 및 가변 경사슬(V_L) 서열 중에서 즉시 선택될 수 있다. 어떠한 특정 항-PG 단일클론항체의 친화도는 예를 들어, ELISA, ITC(isothermal titration calorimetry), BIAcore, 또는 형광편형검출법(fluoresent polarization assays)과 같은 기술분야에서 알려지거나 본 명세서에 기재된 기술을 이용하여 결정될 수 있다. 특정 검출법은 실시예 14에서 제공된다.

표 1A 및 표 1B에 나타난 바와 같이, hPG에 특이적인 많은 N-말단 및 C-말단 단일클론항체는 확인되어 왔고, '329 및 '041 출원에 기재된 바와 같이, MAb 14를 제외한 모든 항체는 특정 대장암 세포에 대하여 중화 활성을 나타낸다. 추가적으로, 실시예에서 기재된 바와 같이, MAb3, MAb8, MAb13, MAb16 및 MAb19는 MDA-MB-231 유방암 세포에 대하여 중화 활성을 나타내고 MAb3은 MCF7 유방암 세포에 대하여 중화 활성을 나타내었다.

항체를 얻기 위해 사용된 몇몇 하이브리도마는 2010년 10월 6일에 부다페스트 조약에 따라 Collection Nationale de Cultures de Microorganismes(CNCM)에 기탁되었다. 항-hPG MAb1번 내지 23번을 생산하는 하이브리도마의 지정된 이름 및 기탁된 그 하이브리도마의 기탁 등록 번호는 표 1A 및 1B에서 제공된다. 추가로, 몇몇 항체에 대하여, 그것들의 가변 중사슬(V_H), 가변 경사슬(V_L), V_L CDR 및 V_H CDR의 아미노산 서열이 결정되었다. 본 명세서를 통하여 그것들을 표시하기 위해 사용된 이들 아미노산 서열 및 그 약칭 명명법은 표 1A 및 표 1B에서 또한 제공된다. 간단히, 본 명세서에서 mV_H 및 mV_L로 언급되는 쥐 중사슬 가변 도메인 및 경사슬 가변 도메인은 상응하는 단일클론항체의 숫자가 잇따른다. 예를 들어, mV_H.3 및 mV_L.3은 각각 항-hPG MAb3의 가변 경사슬 및 가변 중사슬에 해당한다. 비슷하게, 본 명세서에서 hV_H 및 hV_L로 언급되는 인간 중사슬 가변 도메인 및 경사슬 가변 도메인은 상응하는 단일클론항체의 숫자가 잇따른다. 세 가지 중사슬 CDR 및 세 가지 경사슬 CDR는 각각 특정 항-hPG 단일클론항체의 숫자가 잇따르는 V_H CDR 1, 2, 또는 3, 그리고 V_L CDR 1, 2, 또는 3으로 나타내어진다. 예를 들어, MAb3의 V_H CDR 1은 V_H CDR 1.3로 나타내고, MAb3의 V_L CDR 1은 V_L CDR 1.3으로 나타낸다. MAb3의 V_H CDR 2은 V_H CDR 2.3으로 나타내고 MAb3의 V_L CDR은 V_L CDR 2.3으로 나타낸다.

거의 동일한 에피토프에 결합하는 항-hPG 단일클론항체의 상응하는 CDR 및/또는 V_H 및 V_L은 본 명세서에 기재된 방법 및 키트에 사용되는 새로운 항-hPG 단일클론항체를 생산하기 위해 교환될 수 있을 것으로 예상된다. 예를 들어, 상기 언급한 바와 같이, 예시적인 항-hPG 단일클론항체 MAb5 및 MAb6는 동일한 에피토프에 결합한다. 항-hPG 단일클론항체는 그것의 V_L 사슬에서 이들 두 항체의 V_L CDR의 다양한 조합을 포함하고, 및/또는 그것의 V_H 사슬에서 이들 두 항체의 V_H CDR의 다양한 조합을 포함하도록 설계될 수 있다. 가능한 다양한 조합을 설명하기 위한 특정의 비한정적인 예시로서, 그러한 항체는 V_L 사슬에서 MAb5의 CDR 1 및 2(각각 V_L CDR 1.5 및 V_L CDR 2.5) 및 MAb6의 CDR 3(V_L CDR 3.6)을 포함할 수 있고, 또한, V_H 사슬에서 MAb6의 CDR 1(V_H CDR 1.6) 및 MAb5의 CDR 2 및 3(각각 V_H CDR 2.5 및 V_H CDR 3.5)를 포함할 수 있다. 기탁된 하이브리도마에 의해 생산되는 항체의 CDR 아미노산 서열은 통상의 수단을 이용하여 얻어질 수 있다.

기탁된 하이브리도마에 의해 생산되는 항체의 CDR 아미노산 서열은 통상의 수단을 이용하여 얻어질 수 있다. 예를 들어, 하이브리도마 6B5B1 1C10 및 20D2C3G2에 의해 생산된 항체의 관련 서열은 다음과 같이 결정되었다. 간단히, AMSBio 카탈로그 번호 CS-104B의 RNABee 시약을 이용하여 제조사의 설명에 따라 전체 RNA를 냉동된 세포 펠렛(pellet)으로부터 분리하였다. V-영역에 대한 cDNA를 RT-PCR을 이용하여 mRNA로부터 준비하였고, 다음으로 5' RACE(5' rapid amplification of cDNA ends)가 이루어졌다. cDNA 분석은 첫 번째 가닥이 정제되고 말단 디옥시뉴클레오티드 전이효소가 cDNA의 3'말단에 호모폴리머 꼬리를 붙이기 위해 사용된 이후에, 불변 영역-특이적 프라이머를 이용하여 수행되었다. 그 다음 "꼬리화된" cDNA 서열은 각각 호모폴리머 꼬리에 대한 것과, V_H 또는 V_L 영역에 대한 것인 프라이머 쌍을 이용하여 PCR로 증폭되었다. 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역 PCR 산물은 "TA" 클로닝 벡터(p-GEM-T easy, Promega cat. no A 1360)에 클로닝되고, 표준의 절차를 이용하여 시퀀싱되었다. 도 14A-B (MAb 3), 도 14C-D (MAb 4)를 참조.

비슷하게, 하이브리도마 1C10D3B9, 2C6C3C7, 1B3B4F1, 및 1E9D9B61에 의해 생산된 항체의 관련 서열은 다음과 같이 결정되었다. 전체 RNA는 제조사의 설명에 따라 사용된 NAqueous?-4PCR 키트(Ambion cat. No. AMI 914)를 이용하여 냉동된 세포 펠렛으로부터 분리되었다. 중사슬 V-영역 mRNA는 6개의 디제너레이트 프라이머 풀(HA 내지 HF) 세트를 이용하여 증폭되었고, 경사슬 V-영역 mRNA는 κ 클러스터 (KA 내지 KG)에 대하여 7개, λ 클러스터(LA)에 대하여 1개로, 8 개의 디제너레이트 프라이머 풀 세트를 이용하여 증폭되었다. 가변 영역에 대한 cDNA는 RT-PCR을 이용하여 mRNA로부터 준비되었다. cDNA 합성은 불변영역-특이적 프라이머를 이용하여 수행되었고, 뒤이에 5' 마우스 신호 서열에 대한 디제너레이트 프라이머 풀 및 IgGVH, IgκVL 및 IgλVL 각각의 3' 불변 영역에 대한 프라이머 풀을 이용하여 PCR이 수행되었다(Jones et al., 1991 , Rapid PCR cloning of full-length mouse immunoglobulin variable regions, Bio/Technology 9:88-89). 중사슬 및 경사슬 가변 영역 PCR 산물은 그 다음 "TA" 클로닝 벡터(p-GEM-T easy, Promega cat. no A 1360)에 클로닝되고, 표준 절차를 이용하여 시퀀스화되었다. 도 14E-F(MAb 8), 도 14G-H(MAb 13), 도 14I-J(MAb 16), 및 도 14K-L(MAb 19)를 참조하라.

표 1A과 관련하여, 본 명세서에 기재된 방법 및 키트에 사용되는 N-말단 항-hPG 항체의 특정 구체예는 이에 한정되지는 않으나 다음을 포함한다:

(a) MAb1 , MAb2, MAb3, MAb4, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19 또는 MAb20의 V_L CDR 서열에 상응하는 V_L CDR, 및 MAb1, MAb2, MAb3, MAb4, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19 또는 MAb20의 V_H CDR 서열에 상응하는 V_H CDR를 가지는 항체;

(b) MAb1 , MAb2, MAb3, MAb4, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19 또는 MAb20의 V_L 및 V_H CDR 서열에 상응하는 V_L CDR 및 V_H CDR를 가지는 항체;

(c) (i) QSIVHSNGNTY ("V_L CDR 1.3"; SEQ ID NO:4), QSLVHSSGVTY ("V_L CDR 1.4"; SEQ ID NO: 10), QSLLDSDGKTY (“'V_L CDR 1.16"; SEQ ID NO:50), 및 SQHRTYT ("V_L CDR 1.19"; SEQ ID NO:51) 에서 선택되는 V_L CDR 1;

(ii) KVS ("V_L CDR 2.3" 및 ("V_L CDR 2.4"; SEQ ID NO:5), LVS ("V_L CDR 2.16"; SEQ ID NO:53), 및 VKKDGSH ("V_L CDR 2.19"; SEQ ID NO:54)에서 선택되는 V_L CDR2 ;

(iii) FQGSHVPFT ("V_L CDR＼3.3"; SEQ ID NO:6), SQSTHVPPT ("V_L CDR 3.4"; SEQ ID NO: l 1), WQGTHSPYT ("V_L CDR 3.16"; SEQ ID NO:57), 및 GVGDAIKGQSVFV ("V_L CDR 3.19"; SEQ ID NO:58)에서 선택되는 V_L CDR3;

(iv) GYIFTSYW ("V_H CDR 1.3"; SEQ ID NO: l), GYTFSSSW ("V_H CDR 1.4"; SEQ ID NO:7), GYTFTSYY ("V_H CDR 1.16"; SEQ ID NO:39), 및 GYSITSDYA ("V_H CDR 1.19"; SEQ ID NO:40)에서 선택되는 V_H CDR1;

(v) FYPGNSDS ("V_H CDR 2.3"; SEQ ID NO:2), FLPGSGST ("V_H CDR 2.4"; SEQ ID NO:8), INPSNGGT ("V_H CDR 2.16"; SEQ ID NO:43), 및 ISFSGYT ("V_H CDR 2.19"; SEQ ID NO:44)에서 선택되는 V_H CDR2; 및

(vi) TRRDSPQY ("V_H CDR 3.3"; SEQ ID NO:3), ATDGNYDWFAY ("V_H CDR 3.4" SEQ ID NO:9), TRGGYYPFDY ("V_H CDR 3.16"; SEQ ID NO:47), 및 AREVNYGDSYHFDY ("V_H CDR 3.19"; SEQ ID NO:48)에서 선택되는 V_H CDR3의 항체;

(d) MAb1, MAb2, MAb3, MAb4, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19 또는 MAb20의 V_L 서열에 상응하는 V_L, 및 MAb1, MAb2, MA;b3, MAb4, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19 또는 MAb20의 V_H 서열에 상응하는 V_H 를 가지는 항체; 및

(e) MAb1, MAb2, MAb3, MAb4, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19 또는 MAb20의 V_L 및 V_H 서열에 상응하는 V_L 및 V_H를 가지는 항체.

표 1B과 관련하여, 본 명세서에 기재된 방법 및 키트에 사용되는 C-말단 항-hPG 항체의 특정 구체예는 이에 한정되지는 않으나 다음을 포함한다:

(a) MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAb10, MAb11, MAb12, MAb13, MAb14, MAb21, MAb22 또는 MAb23의 V_L CDRS 서열에 상응하는 V_L CDRS, 및 MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAb10, MAb11 , MAb12, MAb13, MAb14, MAb21, MAb22 또는 MAb23의 V_H CDR 서열에 상응하는 V_H CDR를 가지는 항체;

(b) MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAb10, MAb11, MAb12, MAb13, MAb14, MAb21, MAb22 또는 MAb23의 V_L 및 V_H CDR 서열에 상응하는 V_L 및 V_{H CDR}를 가지는 항체;

(c) (i) KSLRHTKGITF ("V_L CDR 1.8"; SEQ ID NO:49) 및 QSLLDSDGKTY ("V_L CDR 1.13"; SEQ ID NO:50)에서 선택되는 V_L CDR1;

(ii) QMS ("V_L CDR 2.8"; SEQ ID NO:52) 및 LVS ("V_L CDR 2.13"; SEQ ID NO:53)에서 선택되는 V_L CDR2;

(iii) AQNLELPLT ("V_L CDR 3.8"; SEQ ID NO:55) 및 WQGTHFPQT ("V_L CDR 3.13"; SEQ ID NO:56)에서 선택되는 V_L CDR3;

(iv) GFTFTTYA ("V_H CDR 1 .8"; SEQ ID NO:37) 및 GFIFSSYG ("V_H CDR 1.13"; SEQ ID NO:38)에서 선택되는 V_H CDR1;

(v) ISSGGTYT ("V_H CDR 2.8"; SEQ ID NO:41 ) 및 LNTFGDRT ("V_H CDR 2.13"; SEQ ID NO:42)에서 선택되는 V_H CDR2; 및

(vi) ATQGNYSLDF ("V_H CDR 3.8"; SEQ ID NO:45) 및 ARGTGTY ("V_H CDR 3.13"; SEQ ID NO:46)에서 선택되는 V_H CDR3의 항체;

(d) MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAb10, MAb11, MAb12, MAb13, MAb14, MAb21, MAb22 또는 MAb23의 V_L 서열에 상응하는 V_L, 및 MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAb10, MAb11, MAb12, MAb13, MAb14, MAb21, MAb22 또는 MAb23의 V_H 서열에 상응하는 V_H를 가지는 항체; 및

(e) MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAb10, MAb11, MAb12, MAb13, MAb14, MAb21, MAb22 또는 MAb23의 V_L 및 V_H 서열에 상응하는 V_L 및 V_H 서열에 상응하는 V_L 및 V_H를 가지는 항체.

통상의 기술자에 의해 이해될 수 있는 바와 같이, 진단 방법에 사용되는 항-hPG 항체는 예를 들어 포유류(예를 들어, 인간, 영장류, 설치류, 염소, 토끼), 비-포유류 또는 자연계의 키메릭(하나 이상의 종의 근원에서 유래한 것)을 포함하는 어떠한 근원의 것 일 수 있다. 인간을 포함하는 동물에서 치료 용도에 적합한 항체는 치료하려고 하는 것과 동일한 종으로부터 유래하는 것이 선호된다. 또는 치료되는 동물에서 면역원성을 감소시키거나 비면역원성으로 변형하거나 설계되어 왔다. 인간에서 치료 용도에 사용되는 항-hPG 항체의 특정 클래스는 아래에서 더욱 자세히 설명될 인간화된 항체 클래스이다. 본 명세서에 기재된 방법 및 키트에서 사용되는 항-hPG 항체는 예를 들어, IgA (예를 들어, IgA1 또는 IgA2), IgD, IgE, IgG (예를 들어, IgGl , IgG2, IgG3 또는 IgG4) 또는 IgM를 포함하는 어떠한 아이소타입이거나 이로부터 유래할 수 있다. 치료 용도로 설계된 항-hPG 항체는 IgG 아이소타입이 선호된다.

일부 구체예에서, 본 명세서에 기재된 치료 방법에 사용되는 항-hPG 항체는 인간화되어 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 적어도 하나, 전형적으로 두 개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함하고, CDR 영역의 실질적인 모두는 비-인간화된 면역글로불린의 것과 상응하고, 뼈대 영역의 실질적인 모두는 인간 면역글로불린 공통 서열의 것이며, "CDR-이식된"으로 불리울 수 있다. 인간화된 항체는 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부분, 전형적으로 인간 면역글로불린 공통 서열의 것을 포함할 수 있다. 인간화된 항체를 설계하는 방법을 포함하는 인간화 항체에 대한 방법은 기술분야에서 잘 알려져 있다. 예를 들어, [Lefranc et al, 2003, Dev. Comp. Immunol. 27:55-77; Lefranc et al, 2009, Nucl. Acids Res. 37:D1006-1012; Lefranc, 2008, Mol. Biotechnol. 40: 101-1 1 1 ; Riechmann et al, 1988, Nature 332:323-7; U.S. Patent Nos. 5,530,101 , 5,585,089, 5,693,761 , 5,693,762 및 6,180,370 to Queen et al. ; EP239400; PCT publication WO 91/09967; U.S. Patent No. 5,225,539; EP592106; EP519596; Padlan, 1991 , Mol. Immunol. 28:489-498; Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7:805-814; Roguska et al, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91 :969-973; 및 U.S. Patent No. 5,565,332]를 참고하고 상기문헌은 본 명세서에서 전체에서 참고문헌으로써 통합된다.

한정되지는 않으나 실시예 형태를 포함하는 비-인간 항-hPG 항체의 CDR에 상응하는 CDR 서열을 가지는 항체의 인간화 버전, 표 1A에 있는 다양한 N-말단 항-hPG 단일클론항체 및 표 1B에 있는 다양한 C-말단 항-hPG 단일클론항체는 잘 알려진 방법을 이용하여 얻어질 수 있다. 선택된 항-hPG 항체의 인간화된 V_L 및 V_H 사슬의 예상된 서열은 표 1A 및 표 1B에서 제공된다. 인간화된 항체의 특정 예시는 다음을 포함하는 항체를 포함한다:

(a) 본 명세서에서 개시된 어떤 세 개의 V_L CDRS 및 어떤 세 개의 V_H CDR;

(b) SEQ ID NO:21에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 영역 및 SEQ ID NO:22에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 영역;

(c) SEQ ID NO:23에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 영역 및 SEQ ID NO:24 에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 영역;

(d) SEQ ID NO:75, 77, 및 79로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 영역 및 SEQ ID NO:76 및 78 로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 영역;

(e) SEQ ID NO:80 및 82로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 영역 및 SEQ ID NO: 81 및 83로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 영역;

(f) SEQ ID NO:84, 86, 및 88로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 영역 및 SEQ ID NO:85, 87, 및 89로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 영역; 및

(g) SEQ ID NO:90, 92, 및 94로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 영역 및 SEQ ID NO:91, 93, 및 95로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 영역.

통상의 기술자에 의해 인식될 수 있는 바와 같이, 관심 대상인 특정 에피토프에 결합하는 능력과 같은 특정 결합 특성을 가지는 항-hPG 항체는 본 명세서에서 기재된 다양한 항원 및 면역원을 이용하고 관심 대상인 기준 항체와 hPG 결합에 경쟁하는 그들의 능력을 평가하여 즉각적으로 수득할 수 있다. 본 명세서에서 기재된 어떠한 항-hPG 항체든지 그러한 경합 측정에서 기준 항체로 이용될 수 있다. 관심 대상인 바이오틴 결합의 기준 항-hPG 항체와 hPG 결합에 대한 항체의 경쟁 능력을 평가하기 위해 사용되는 특정 검출법은 실시예 15에서 제공된다.

기준 항-hPG 항체와 어떠한 시험 항체(종 또는 아이소타입에 상관없이) 간의 항체 경쟁 연구를 수행함에 있어서, 하나는 예를 들어, 방사성 동위원소, 형광단과 같은 직접적으로 관찰가능한 표지로 상기 기준 항체를 우선 표지화하고, 또는 그 다음의 확인을 가능하도록 예를 들어, 바이오틴(형광성으로 표시된 스트렙티아비딘과의 결합을 통해 관찰가능한), 효소(효소 반응을 통해 관찰가능한)와 같은 간접적으로 관찰가능한 표지로 표지화한다. 이 경우에, 표지된 기준 항-hPG 항체(고정되거나 증가하는 농도)는 hPG:표지화된 항-hPG 항체 복합체를 형성하기 위하여, 알려진 hPG 양으로 인큐베이션한다. 표지화되지 않은 시험 항체는 그 다음 상기 복합체에 추가된다. 결합된 표지의 강도를 측정한다. 시험 항체가 중첩된 에피토프에 결합함으로써 hPG에 대한 표지화된 기준 항-hPG 항체와 경쟁하면, 상기 결합된 표지의 강도는 시험 항체가 없는 상태에서 수행된 대조군 실험과 비교하여 감소하게 될 것이다.

결합 경합 측정법을 수행하기 위한 많은 방법이 알려져 있고, 상기 및 실시예 15에서 기재된 분석과 비교할 만한 결과를 내기 위하여 적용될 수 있다.

항체는 기준 항-hPG 항체와 hPG 결합에 대해 경쟁하는 것으로 간주되고, 따라서 경합결합측정법 및 특히 비록 높은 수준의 감소, 예를 들어, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 심지어 100%가 바람직하지만, 적어도 50%, 0.01 -100 μg/mL (예를 들어, 0.01 μg/mL, 0.08 μg/mL, 0.4 μg/mL, 2 μg/mL, 10 μg/mL, 50 μg/mL 또는 100 μg/mL 또는 상기 언급된 범위 내의 다른 농도) 범위에서 시험 항체 농도에 의한, 실시예 15의 경합결합측정법에 있어서, 만일 그것이 hPG에 대한 기준 항-hPG 항체의 결합을 감소시키면, 기준 항-hPG 항체로서 거의 동일한 또는 hPG의 중첩된 에피토프에 결합하는 것으로 간주된다.

본 명세서의 항체는 그것의 성질을 바꾸거나 기능을 향상시키기 위하여 유도체 합성이 되고, 공유결합으로 변형되거나 다른 물질과 결합될 수 있다. 예를 들어, 이에 한정되지 않으나, 유도체 합성된 항체는 예를 들어, 글리코실화, 퓨코실화, 아세틸화, 페길레이션, 인산화, 아미드화, 포르밀화, 알려진 보호기/블로킹 그룹에 의한 유도체화, 세포 리간드 또는 다른 단백질에 대한 연결 등으로 변형된 항체를 포함한다. 또는, 가변 영역 또는 불변 영역에 특정 아미노산은 기능을 바꾸거나 향상시키기 위하여 변경될 수 있다. 비한정적인 하나의 예시로, 항체의 Fc 영역에 아미노산 잔기는 FcRn에 대한 결합을 증가시킴으로써 항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위하여 변경되기도 한다.

항-hPG 단일클론항체는 관측 가능한 모이어티로 표지화된 항체를 포함한다. 그러한 표지는 본 명세서의 항-hPG 단일클론항체에 직접적으로 또는 간접적으로 결합될 수 있다. 상기 표지는 스스로 관찰될 수 있고(예를 들어, 방사성 동위원소 표지, 동위원소 표지 또는 형광 표지), 또는 효소 표지의 경우에는 관찰 가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변경을 촉진할 수 있다. 관찰 가능한 물질의 예시는 다양한 효소, 보결분자단, 형광 재료, 발광 재료, 생물 발광 재료, 방사성 재료, 다양한 양전자 분출 단층촬영을 이용한 양전자 분출 금속 및 비방사성 상자성 금속 이온을 포함한다.

비록 본 명세서에서 사용된 다양한 항-hPG 항체는 전체 길이 항체로 예를 들었지만, 통상의 기술자는 결합 단편 또는 전체 길이 항체 또는 결합 단편으로부터 설계되거나 유래한 대리의 항체(surrogate antibody) 역시 사용될 수 있음을 이해할 수 있다. 적절한 단편, 대리는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, Fab', F(ab')2, Fab, Fv, vIgG, scFv 단편 및 서로바디(surrobodies), rIgG, 이황화물-안정화된 Fv 항체 (dsFv), 디아바디(diabodies), 트리어바디(triabodies), 및 카멜화된 항체 또는 나노바디(nanobody)와 같은 단일 도메인 항체를 포함한다.

본 명세서의 항체는 기술분야의 통상의 기술자에게 알려진 어떠한 방법에 의해서든 생산될 수 있다. 비한정적인 하나의 예시로, 항체는 인간, 원숭이, 닭, 염소, 토끼 및 설치류(예를 들어, 쥐, 생쥐 및 햄스터)로부터 유래한 항체와 같은, 항체를 생산할 수 있는 어떠한 종으로부터의 것을 포함하는 자연 근원으로부터 얻을 수 있다. 다른 종 역시 가능하다. 항체는 제한되지는 않으나 효모 세포, 박테리아 세포, 및 CHO 세포와 같은 배양되는 포유류 세포에서 재조합 항체의 발현과 같은 유전적 공학 또는 재조합 DNA 기술을 이용하는 시스템으로부터 생산되고 분리될 수 있다. 항체는 또는 전체적으로 또는 부분적으로 합성될 수 있다.

본 명세서의 단일클론항체(MAb)는 하이브리도마 기술을 통해 생산된 항체에 제한되지 않는다. 단일클론항체는 기술분야에서 이용 가능하거나 알려진 어떠한 방법에 의해서든 어떤 진핵 세포, 원핵 세포 또는 파아지 클론을 포함하는 하나의 단일 클론으로부터 유래된다. 단일클론항체는 하이브리도마, 재조합 및 파아지 디스플레이 기술 또는 그들의 조합의 이용을 포함하는 기술분야에서 알려진 다양한 기술을 이용하여 준비될 수 있다.

7.8. 유방암에 대한 치료

여러개의 카테고리로 나뉜 유방암 치료

외과 수술은 유방암이 유방, 또는 유방 및 겨드랑이 림프절에 한정되는 경우에 고려된다. 유방암을 치료하는 데 효과적인 외과 수술적 기술은 필수적으로 한정되지는 않으나 유방보존술, 4분의 1의 유방암 절제, 단순 유방절제술, 근치유방절제술, 및 변형된 근치유방절제술을 포함한다.

방사선 치료는 외과 수술 이후에 남아있는 유방암 세포를 죽이는 데 사용될 수 있다. 방사선은 인체 외부의 기계에 의해 생산될 수 있고(외부-빔 방사선 치료), 또는, 암 세포 주변의 인체 내부에 위치한 방사성 재료에 의해 생산될 수 있다(내부 방사선 치료, 또는 근접치료).

화학 요법, 호르몬 치료 및 표적 치료는 외과 수술 또는 외과 수술 및 방사선 이후에 보조 치료로 이용되거나 또는 유방을 넘어서 다른 기관으로 퍼져나가는 전이성 유방암에 대한 기본적인 치료로 이용될 수 있는 시스테믹 치료(systemic therapy)의 비한정적인 예시이다. 그러한 치료법은 단독으로 또는 다른 것과 조합으로 이용될 수 있다. 보조 치료는 외과 수술 또는 방사선 치료를 극복해낸 암 세포를 죽이기 위하여 투여된다.

방사선 치료 및/또는 외과 수술은 특정 지역에서 적은 수의 전이를 치료하기 위한 것과 같이 전이성 유방암을 치료하기 위하여, 뼈 골절 또는 간에서의 방해물을 예방하기 위하여, 또는 고통 또는 다른 증상을 완화하기 위하여 이용될 수 있다. 뼈로 퍼져 나간 유방암 전이는 외부-빔 방사선 치료 및/또는 뼈를 강화시키기 위해 칼슘 및 비타민 D와 함께 파미드로네이트(Aredia) 또는 졸레드론산(Zometa)와 같은 비스포스포네이트로 치료된다.

화학 요법은 유방암 세포의 성장을 죽이거나 늦추거나 중단시키기 위해 약물에 의존한다. 상이한 메커니즘을 통해 기능하는 다양한 화학 요법제는 유방암을 치료하는 데 이용 가능하다. 화학 요법은 온 몸에 투여될 때 전이성 유방암에 대하여 효과적이다. 그러나, 뇌를 둘러싼 용액 속으로 투여되는 것과 같이, 더 지역적인 형태로 투여될 수도 있다.

유방암에 대하여 효과적인 예시적인 화학 요법제는 메토트렉세이트 및 페미트렉스를 포함하는 폴레이트 안타고니스트; 클라드리빈, 클로파라빈, 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 넬라빈, 펜토스타틴을 포함하는 퓨린 안타고니스트; 카페시타빈, 사이타라빈, 5-플루오로우라실, 젬시타빈, 수산화요소를 포함하는 피리미딘 안타고니스트; 인터페론-알파를 포함하는 생물학적 반응 조절제; 블레오마이신; 니트로수레아스, 카르무스틴, 로무스틴을 포함하는 DNA 알킬화제; 벤다무스틴, 클로람부실, 시클로포스파미드, 이포스파마이드, 메클로레타민(질소 머스타드), 멜파란, 디카르바진, 테모졸로마이드, 프로카바진을 포함하는 DNA 가교 약물(DNA cross-linking drugs) 및 알킬화제; 아스파라기나제; 미토마이신을 포함하는 항생제; 카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴을 포함하는 백금 착제; 보르테조밉을 포함하는 프로테오좀 억제제; 탁산(도세탁셀, 파클리탁셀을 포함하는) 및 빈카스 (빈블라스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈을 포함하는)와 같은 방추독소(spindle poisons); 안트라사이클린 (다우노루비신, 다우노마이신, 독소루비신, 에피루비신을 포함하는), 캄프토테신(이리노테칸, 토포테칸을 포함하는), 포도필로톡신(에토포시드, 테니포시드 및 미토산트론을 포함하는); 타이로신키나아제 저해제(엘로티닙(Tarceva), 게피티닙, 이마티닙, 라파티닙, 소라페닙, 수니티닙을 포함하는)와 같은 토포이소머라제 저해제를 포함한다. 다른 화학 요법제들도 또한 알려져 있다.

유방암에 대하여 효과적인 것으로 알려져 있는 특정 화학 요법제 및 그들의 조합은 한정되는 것은 아니나 시클로포스파미드, 메토트렉세이트 및 5- 플루오로우라실의 조합인 CMF; 시클로포스파미드, 도로루비신 및 5-플루오로우라실의 조합인 CAF(FAC); 도로루비신 및 시클로포스파미드의 조합인 AC; 에피루비신 및 시클로포스파미드의 조합인 EC; 도세탁스(docetaxe), 독소루비신 및 시클로포스파미드의 조합인 TAC; 파클리탁셀 또는 도세탁셀에 잇따르는 독소루비신 및 시클로포스파미드의 조합인 AC→ T(허셉틴은 HER2/neu 양성 종양에 대하여 파클리탁셀 또는 도세탁셀을 제공한다); CMF에 잇따르는 독소루비신의 조합인 A→ CMF; 시클로포스파미드, 에피루비신 및 5-플루오로우라실의 조합인 CEF (FEC)(도세탁셀에 의해 잇따르기도 함); 도세탁셀 및 시클로포스파미드의 조합인 TC; 도세탁셀, 카르보플라틴 및 HER2/neu 양성 종양에 대한 허셉틴의 조합인 TCH를 포함한다.

유방암에 대하여 효과적인 다른 화학 요법제는 시스플라틴, 비노렐빈, 카페시타빈, 페길레이션된 리포솜의 독소루비신, 겜시티빈, 미토산트론, 익사베필론, 및 알부민-결합된 파클리탁셀, 및 다른 것들을 포함한다.

에스트로겐은 예를 들어, 에스트로겐 수용체(ER-양성 암) 및/또는 프로게스테론 수용체(PR-양성 암)을 함유하는 유방암의 약 3분의 2의 성장을 촉진한다. 따라서, ER-양성 및 PR-양성 유방암을 지니는 환자에서, 호르몬 치료는 에스트로겐의 효과를 차단하거나 에스트로겐 수준을 낮추는 것을 추구한다. 따라서, 호르몬 치료는 합성 호르몬, 또는 호르몬-민감성 유방암 세포의 성장을 지지하거나 촉진시킬 수 있는 인체의 자연 호르몬의 생산 및/또는 활성을 차단하는 데 효과적인 다른 약물의 투여를 수반한다.

타목시펜, 토레미펜 및 라록시펜은 유방암 세포에서 에스트로겐 수용체를 방해하는 선택적 에스트로겐 수용체 조절자(SERMs) 및 항-에스트로겐의 예시이다. 에스트로겐 수용체를 제거하는 역할을 하는 펄베스트란트는 유방암이 더 이상 타목시펜에 반응하지 않는다고 할지라도 효과적일 수 있다. 방향화효소 억제제는 에스트로겐 산물을 중단시킴으로써 기능하고 레트로졸, 아나스트로졸, 및 이그제메스탄 약물을 포함한다. 폐경 전의 여성에서 에스트로겐의 주요 근원을 제거하기 위하여 난소 절제가 또한 이용될 수 있다. 영구적인 난소 절제는 외과 수술적으로 난소를 제거함으로써 수행될 수 있다. 폐경 전의 여성에서 호르몬 치료로서 단독으로 또는 타목시펜과 함께 사용되는 고세렐린 또는 루프롤라이드와 같은 황체 형성 호르몬 방출 호르몬 유사체(LHRH)로 알려진 약물에 영향을 받기도 한다. 메게스트롤 아세테이트는 다른 호르몬 치료에 반응하지 않는 암을 가지는 여성에서 이용될 수 있다. 안드로겐의 이용 역시 고려될 수 있다. 비칼루타마이드 및 플루타마이드와 같은 다른 호르몬 치료제 또한 가능하다.

표적 치료는 유방암에 수반되는 것으로 알려진 특정 유전자 또는 유전자 산물에 대한 것이다. 표적 치료의 특정 유형은 유방암 세포의 성장을 직접적으로 또는 간접적으로 죽이거나 늦추거나 중단시키기는 단일클론항체로서, 항체를 투여하는 것을 수반하는 항체 치료이다. 그러한 항체는 다양한 별개의 메커니즘을 통해 기능할 수 있다. 예를 들어, 특정 항체는 항체의존적 세포매개세포독성(ADCC) 또는 다른 메커니즘을 통한 환자의 면역 체계에 의해 공격에 대한 암 세포를 표시할 수 있다. 다른 항체는 결합하여 암 세포가 생존 또는 성장을 위해 요구하는 항원의 기능을 바꾸거나 억제시킨다. 다른 메커니즘 역시 가능하다. 항체는 또한 항체는 암 세포에 발현된 상응하는 항원에 결합한 후 암 세포를 죽일 수 있는 방사성의 또는 화학독성 모이어티에 결합될 수 있다.

유방암에 대한 표적 항체 치료의 예시는 단일클론항체 트라스트쥬맵(trastuzumab) 및 베바시쥬맵(bevacizumab)이다. 트라스트쥬맵 및 유사 항체는 HER2 유전자 산물을 표적으로 한다. 반면에, 베바시쥬맵 및 유사 항체는 VEGF를 표적으로 한다. 트라스트쥬맵은 HER2-양성 암에 단독으로 또는 다른 치료뿐만 아니라 화학 요법과 함께 여성에게 투여될 수 있다. 베바시쥬맵은 다른 것들뿐만 아니라 화학 요법 약물 파클리탁셀과 조합될 수 있다.

표적 치료의 다른 유형은 라파티닙과 같은 작은 분자 약물을 포함한다. 트라스트쥬맵에 더 이상 반응하지 않는 HER2-양성 암은 다른 것들뿐만 아니라 화학 요법 약물 카페시타빈과 함께 제공되는 라파티닙에 반응할 수 있다.

7.9. 항-PG 항체를 이용한 치료 방법

본 명세서는 전이성 유방암을 치료 및 예방하고, 유방암의 재발을 예방하고, 유방암 줄기세포의 성장을 예방하는 목적으로 조성물 내의 항-PG 항체를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법을 제공한다. 특정 구체예에서, 항체는 인간 프로가스트린 ("hPG")에 특이적이고, 다른 구체예에서, 그러한 항체는 단일클론항체이다.

특정 이들 구체예에 따르면, 본 명세서에서 기재된 항-PG 항체는 단독 요법(monotherapy) 또는 병용요법(combination therapy)로서 치료학적으로 유효량으로 전이성 유방암의 치료가 필요한 대상체에게 조성물 내로 투여된다. 그러한 대상체는 이에 한정되는 것은 아니나 전이성 유방암으로 진단받은 대상체를 포함한다. 이 방법의 특정 구체예에 있어서, 상기 항체는 항-hPG 단일클론항체이다.

다른 구체예에 따르면, 본 명세서에서 기재된 항-PG 항체는 단독 요법 또는 병용요법으로서 치료학적으로 유효량으로 전이성 유방암의 예방이 필요한 대상체에게 조성물 내로 투여된다. 그러한 대상체는 이에 한정되는 것은 아니나, 암이 떨어진 조직 또는 기관으로 퍼져나간 것으로 알려지지 않은 일차 유방암을 지닌 것으로 결정된 대상체를 포함한다. 이 방법의 특정 구체예에 있어서, 상기 항체는 항-hPG 단일클론항체이다.

또 다른 구체예에 따르면, 본 명세서에서 기재된 항-PG 항체는 단독 요법 또는 병용요법으로서 치료학적으로 유효량으로 전이성 유방암의 재발을 예방할 필요한 대상체에게 조성물 내로 투여된다. 그러한 대상체는 이에 한정되는 것은 아니나, 일차 또는 전이성 유방암에 대하여 이전에 치료를 받았고, 치료 후에 그러한 암이 명백히 사라진 대상체를 포함한다. 이 방법의 특정 구체예에 있어서, 상기 항체는 항-hPG 단일클론항체이다.

다른 구체예에 따르면, 본 명세서에서 기재된 항-PG 항체는 단독 요법 또는 병용요법으로서 치료학적으로 유효량으로 유방암 줄기세포의 성장을 억제할 필요가 있는 대상체에게 조성물 내로 투여된다. 그러한 대상체는 이에 한정되는 것은 아니나, 암 줄기세포 내 존재에 적어도 부분적으로 원인이 되는 유방암 성장 또는 전이를 지니는 대상체를 포함한다. 다른 구체예는 그러한 세포의 성장을 예방하거나 억제하기에 유효량으로 항-PG 항체 조성물을 줄기세포와 접촉시킴으로써 유방암 줄기세포의 성장을 예방하거나 억제하는 방법을 제공한다. 그러한 방법은 시험관 내 또는 생체 내에서 수행될 수 있다. 이 방법의 특정 구체예에 있어서, 상기 항체는 항-hPG 단일클론항체이다.

만일 비중화 항-PG 항체의 존재가 중화 항체의 치료 효과를 충분히 억제하지 않는다면, 비록 비중화 항-PG 항체가 존재할 수 있다고 할지라도, 중화 항-PG 항체는 치료 항체 조성물에서 주요한 활성 물질이 될 수 있다.

항-PG 항체 조성물이 투여될 수 있는 대상체는 비영장류(예를 들어, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 쥐 등) 또는 영장류(예를 들어, 원숭이, 침팬지, 유인원 또는 인간)과 같은 포유류일 수 있다. 상기 대상체는 어른 환자 또는 소아 환자와 같은 인간일 수 있다.

전이성 유방암을 치료하거나 예방하고, 또는 유방암 재발을 예방하는 목적을 위하여, 항-PG 항체 조성물은 단독 요법으로서 대상체에 단독으로 투여될 수 있고, 또는 전이성 유방암을 치료하거나 예방하고, 또는 유방암 재발을 예방하기 위해 효과적인 하나 또는 그 이상의 일차 치료에 대한 부가물(adjunct)로 대상체에 투여될 수 있다.

따라서, 본 명세서의 특정 구체예에 있어서, 항-hPG 항체 조성물은 전이성 유방암의 치료 또는 예방을 위해, 화학 요법에 대한 부가물, 방사선 치료에 대한 부가물, 생물학적 치료생물학적 치료물, 호르몬 치료에 대한 부가물, 외과 수술적 치료에 대한 부가물, 또는 항체 치료에 대한 부가물로써, 전이성 유방암을 치료하거나 예방할 필요가 있는 대상체에 투여될 수 있다. 또 다른 구체예에서 , 항-hPG 항체 조성물은 유방암의 재발을 예방하는 데 효과적인 다른 치료에 대한 부가물로서 유방암의 재발을 예방할 필요가 있는 대상체에 투여될 수 있다.

부가 치료로서, 항-hPG 항체 조성물은 일차 치료와 동시에, 연속적으로 또는 별개로 투여될 수 있다..

항-hPG 항체 조성물 및 일차 치료는 각 투여가 중첩되는 곳에서 동일한 시간에 동시에 투여되지만 다른 시간에 시작되거나 끝난다. 동시 투여의 비한정적인 예시는 전이성 유방암에 대한 화학 요법을 받고 있거나 일차 유방암의 외과 수술적 절제를 하고 있는 대상체에게 동시에 항-hPG 항체 조성물을 투여하는 것이다.

항-hPG 항체 조성물 및 일차 치료는 동일한 날에, 동시에 투여되는 것은 아니지만 예를 들어 동일한 병원 방문 동안에 대상체에게 연속적으로 투여된다. 연속적인 투여는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 그 이상 시간 간격으로 발생할 수 있다. 일차 치료가 먼저 투여되고 항-hPG 항체 조성물의 투여가 잇따를 수 있다. 대안적인 구체예로, 항-hPG 항체 조성물이 먼저 투여되고 일차 치료가 잇따를 수도 있다.

항-hPG 항체 조성물 및 일차 치료는 그들이 상이한 날에 대상체에게 투여될 때 분리되어 투여된다. 특정 구체예에 있어서, 항-hPG 항체 조성물 및 일차 치료는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주일, 2주일, 3주일 또는 한 달 또는 그 이상의 간격으로 투여될 수 있다. 연속 투여와 함께 항-hPG 항체 조성물의 투여는 일차 치료의 독립된 투여를 앞서거나 잇따를 수 있다.

본 명세서의 다른 특정 구체예에서, 항-hPG 항체 조성물 및 일차 치료는 연속적으로 투여되거나 또는 분리되어 투여되는, 변경된 패턴으로 반복적으로 투여될 수 있다.

특정 구체예에서, 일차 치료에 대한 부가물로써 항-hPG 항체 조성물의 투여는 치료가 받아들일 수 없는 부작용을 나타냄 없이 치료학적으로 유효량으로 단독으로 투여될 때의 치료적 이점을 나타내면서, 첨가물보다 더 많이 또는 시너지의 효과를 나타낸다. 이러한 상황에서, 항-hPG 항체 조성물 및/또는 일차 치료는 적은 양으로 투여될 수 있고, 따라서 부정적인 효과의 가능성 또는 심각성을 감소시키게 된다. 그러나, 치료학적으로 효과적인 항-hPG 항체 조성물과 함께 부가 치료에 대하여 시너지의 효과는 요구되지 않는다.

7.10. 전이성 유방암의 효과를 모니터링하는 방법

치료

상기 언급한 바와 같이, 건강한 객체의 PG 기준치 수준은 무시해도 될 정도인 반면, 일차 및/또는 전이성 유방암 진단을 받은 환자는 PG의 혈장 및/또는 혈청 수준을 증가시켜왔다. 일차 및/또는 전이성 유방암을 지닌 대상체에서 PG 혈장 및/또는 혈청 수준은 측정되어, 전이성 유방암에 대하여 약 25 pM 또는 그 이상이었다. 이러한 관찰에 기초하여, 무엇보다도 PG의 혈장 및/또는 혈청 수준은 일차 또는 전이성 유방암에 대한 치료의 효과를 모니터링하고, 일차 또는 전이성 유방암의 존재를 관측 및 진단하고, 항-PG 항체로의 치료로부터 이득을 볼 수 있는 대상체를 선택하는 데 사용될 수 있다.

따라서, 본 명세서는 전이성 유방암에 대한 치료의 이전 단계의 효과를 결정하기 위하여, 유방 전이성 암을 치료하는 대상체를 모니터링하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 전이성 유방암에 대한 어떠한 유형의 치료를 위하여 단독으로 이용되거나, 이에 한정되는 것은 아니나 항-hPG 항체 조성물의 투여, 다른 유형의 항체 치료, 화학 요법, 방사선 치료, 호르몬 치료, 생물학적 요법 및 다른 것들을 포함하는 다른 것들과의 조합으로 이용될 수 있다. 치료의 단계가 완성된 후, 대상체의 보호에 책임이 있는 치료 팀은 새로운 치료 단계를 투여하거나 다른 임상 진단을 내려야 하는지를 결정하기에 그것이 효과적이었는지를 알아낼 필요가 있다.

모니터링 방법의 일부 구체예에 있어서, 혈액, 혈장, 혈청 또는 다른 것들과 같은 하나 또는 그 이상의 체액에서 PG의 농도는 전이성 유방암 치료가 시작되기 이전에 측정될 수 있고, 그 다음 치료가 완성되고 약간의 시간 이후에 동일한 유형의 체액에서 측정되는 PG의 수준과 비교될 수 있다. 다른 구체예에서, 유방암의 생체 검사와 같은 관심 대상인 조직에서의 PG 수준이 측정되었다.

PG 농도의 감소는 효과를 나타낸다. 전형적으로, 치료 이후 PG 처리에서 감소의 정도가 클수록 치료과 더 효과적이었다. 외과 수술의 어떠한 특정 이론에 구속되려고 하지 않고 , 효과적인 치료의 결과로서 환자에서 전이의 개수 및/또는 크기가 감소하면, 전이에 의해 생산되는 PG의 전체 양 또한 감소하는 것으로 여겨진다. 반면에, 치료가 완성된 이후 PG 수준에서 감소가 적거나 상승하는 것은 치료가 효과적이지 않음을 나타낸다. 이러한 정보에 기초하여, 치료 팀은 치료의 새로운 단계를 시작할지를 결정할 수 있다.

치료의 단계가 완성되고 시료가 모니터링을 위해 수거되는 시간 전의 적절한 간격은 기술분야의 통상의 기술자에 의해 즉각적으로 결정되고, 고려되는 치료의 유형, 대상체의 성별 및 나이 등과 같은 다양성에 의존한다. 예시적인 간격은 치료의 단계가 완성되고 본 명세서의 모니터링 방법에 사용하기 위한 시료가 수거되기 전, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11 주 및 3, 4, 5 또는 6 개월을 포함한다. 다른 간격도 또한 가능하다. 다른 구체예에서, 치료의 완성 이후에 상이한 간격에서의 여러 측정이 이루어지고, 그 후 경향이 존재하는지를 결정하기 위해 그래프화된다. 비한정적인 예시로, 치료의 단계가 끝난 후 첫 번째 6개월 동안 매주 또는 매달 PG 수준이 결정될 수 있다. 다른 간격 또한 가능하다.

체액에서의 PG 농도 수준은 이에 한정되는 것은 아니나 RIA 및 ELISA 같은 기술분야의 통상의 기술자에게 친숙한 분석 기술을 이용하여 측정될 수 있다. 이와 같은 hPG에 특이적인 항체에 의존하는 검출법 방법은 기술분야의 통상의 기술자의 지식에 따라 본 명세서에서 기재된 것과 같은 비-중화 또는 중화 항체를 이용하여 수행될 수 있다.

특정 구체예에 있어서, PG 수준은 프로가스트린 N-말단을 표적화하는 하나의 항-PG 항체 및 프로가스트린의 C-말단을 표적화하는 제 2의 항-PG 항체로 샌드위치 ELISA를 이용하여 측정될 수 있다. 그러한 샌드위치 검출법에 유용한 예시적인 N-말단 및 C-말단 항-PG 항체은 다음 부분에서 기재된다. 그러한 검출법에서, 96-웰 플레이트 내의 웰과 같이, 표면은 첫 번째, "포획" N-말단 또는 C-말단 항-PG 항체가 결합되도록 준비된다. 시험 시료가 그 후 표면에 도말되고, 배양 기간이 잇따른다. 표면은 그 후 미결합된 항원을 제거하기 위해 세척되고, 두 번째, "검출" 항-PG 항체를 포함하는 용액이 발라진다. 이 때, 검출 항체는 PG의 다른 에피토프에 결합한다(예를 들어, 포획 항체가 C-말단 항-PG 항체이면, 반대로, N-말단 항-PG 항체가 항체의 탐지에 사용된다). PG 수준은 직접적으로(예를 들어, 만일 검출 항체가 검출될 수 있는 표지에 결합된다) 또는 간접적으로(탐지 항-PG 항체에 결합하는 표지화된 이차 항체를 통해) 측정된다. 혈장 및/또는 혈청 PG 수준을 측정하기 위한 특정 샌드위치 검출법은 실시예 11에서 제공된다.

본 명세서의 방법의 대안의 구체예에서, 관심 대상인 체액 내 감소하는 PG 수준에 있어서 기질에 대한 항-hPG 항체 조성물의 투여의 효과는 모니터링될 수 있다. 이 방법에서, 시료들은 시간에 따라 수거되고 PG 농도는 경향을 평가하기 위해 그래프화된다. 남아 있는 항-hPG 항체가 존재하면 데이터는 항체에 의한 PG의 격리때문에 PG 수준에서 감소를 나타내고, 이 효과가 약해지면서 상승이 뒤따르고, 치료가 전이성 유방암을 치료하는 데 효과적이면 그 다음에 감소가 뒤따른다.

본 명세서의 방법의 다른 구체예에 따르면, 아래 약 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 10 pM, 5 pM, 2 pM, 1 pM 또는 그 이하 값의 미만의 미리 결정된 혈액, 혈청 또는 혈장 PG 농도 한계는 전이성 유방암을 치료하는 데 효과적임을 나타낸다. 효과를 나타내는 다른 PG 농도 한계도 역시 가능하고, 기술분야의 통상의 기술자에 의해 즉각적으로 결정될 수 있다.

7.11. 유방암의 존재를 결정하는 방법

본 명세서는 치료 이후에 유방암의 존재 또는 유방암의 재발을 관찰하는 목적을 위하여 적절한 기준치와 비교하여 혈액, 혈장, 혈청 또는 다른 것들과 같은 체액에서 PG 수준을 증가시켰는지를 결정하기 위하여 대상체가 시험되는 것에 관한 특정 구체예를 제공한다.

본 명세서의 특정 방법에 있어서, 대상체는 일차 또는 전이성, 유방암이 대상체에 존재하는지를 결정하기를 바라는 대상체일 수 있다. 그러한 대상체에서, 기준치에 대하여 상승된 PG 수준은 유방암이 존재하는 것을 나타낸다. 외과 수술의 어떠한 특정 이론에 구속되려고 하지 않고, 대상체 내 유방암의 크기 및/또는 정도가 증가함에 따라, 대상체 내에서 온 몸 및/또는 지역적인 PG 수준 역시 증가하는 것으로 알려져 있다.

다른 구체예에서, 대상체는 유방암이 떨어져 있는 조직 또는 기관으로 전이되었는지가 결정되기를 바라는, 일차 유방암에 대해 이전에 치료된 대상체일 수 있다. 그러한 대상체에서, 기준치에 대하여 상승된 PG 수준은 전이성 유방암이 존재하는 것을 나타낸다. 또한 그러한 대상체에 대하여, 본 명세서의 방법은 무엇보다도 전이성 유방암을 예방하려는 치료가 효과적인지 아닌지를 결정하는 데 유용하다. 외과 수술의 어떠한 특정 이론에 구속되려고 하지 않고 , 대상체 내 전이의 수 및/또는 크기가 증가함에 따라, 대상체 내에서 온 몸 및/또는 지역적인 PG 수준 역시 증가하는 것으로 알려져 있다.

또 다른 구체예에 따르면, 대상체는 암이 명백히 사라지고 유방암이 재발하거나 돌아왔는지가 결정되기를 바라는, 일차 또는 전이성 유방암에 대해 이전에 치료된 대상체일 수 있다. 그러한 대상체에서, 기준치에 대하여 상승된 PG 수준은 전이성 유방암이 재발하는 것을 나타낸다. 외과 수술의 어떠한 특정 이론에 구속되려고 하지 않고 , 대상체 내 재발 유방암의 크기 및/또는 정도가 증가함에 따라, 대상체 내에서 온 몸 및/또는 지역적인 PG 수준 역시 증가하는 것으로 알려져 있다.

특정 일차, 전이성 유방암은 PG를 분비하고 특정 유방암 세포는 PG-민감성이라는 본 명세서에서 기재된 발견의 관점에서, 본 명세서는 또한 항-PG 항체를 투여함으로써 치료로부터 이득을 얻을 수 있는 대상체를 선택하는 방법을 제공한다. 따라서, 대상체는 그들이 기준치에 대한 혈액 PG 수준을 상승시키는지를 관측하기 위해 의료인에 의해 스크리닝된다. 그러한 대상체가 확인되면, 의료인은 대상체 내 유방암의 존재를 확인하기 위하여 유방조영술과 같은 추가적인 시험을 명령할 수 있다. 유방암이 확인되면, 항-hPG 항체의 투여와 같은 치료가 시작될 수 있다.

대상체를 선택하는 방법의 특정 구체예에 있어서, 대상체를 선택하기 위하여, 스크리닝은 대상체의 일차 의료인에 의해 일상적인 확인의 일부로 수행되고, 또는 대상체의 더 큰 군락를 표적으로 하는 공중 보건 조약으로 수행될 수 있다. 다른 구체예에서, 스크리닝되는 대상체는 유방암 발병의 높은, 그 다음으로 평균의 위험을 가지는 특정 부분 모집단원이다. 그러한 그룹은 이에 한정되는 것은 아니나 BRCAl, BRCA2 유전자 또는 유방암의 증가하는 위험과 연관된 다른 유전자의 돌연변이를 가지는 대상체를 포함한다. 다른 그룹은 유관 상내피암종(ductal carcinoma in situ: DCIS) 또는 상피내 소엽성 암종(lobular carcinoma in situ:LCIS)와 같은 비악성의 유방 이상을 가지는 대상체, 유방암 진단을 받은 혈족(언니, 엄마, 딸)이 있는 대상체, 가슴 방사에 노출된 대상체, 이른 초경, 늦은 폐경을 경험하거나 첫 출산 시의 늦은 나이였던 대상체, 피임약을 사용했던 대상체, 높은 체질량지수를 가지는 대상체, 또는 고지방식을 하거나 알콜을 마시는 대상체를 포함한다. 또 다른 그룹은 이전에 유방암 진단을 받았고 성공적으로 치료된 대상체를 포함한다.

대상체를 선택하는 또 다른 구체예에서, 스크리닝되는 대상체는 유방암의 존재를 명백하게 가능성에 넣거나 배제하지 않은 유방암에 대한 진단 시험의 결과를 받은 대상체이다. 상승된 PG 수준에 대한 스크리닝은 진단의 정확성을 개선하기 위해 의료인에 의해 사용되는 추가적인 정보를 제공할 수 있다. 그러한 대상체의 한 가지 비한정적인 예시는 결론에 이르지 못한, 애매한 또는 매머그램(mammogram)을 읽기 어려운 결과를 받은 대상체일 수 있다.

PG 농도는 이에 한정되지는 않으나 RIA 및 ELISA와 같은 통상의 기술자에게 친숙한 기술을 이용하여 측정될 수 있다. 이와 같은 hPG에 특이적인 항체에 의존하는 검출법 방법은 기술분야의 통상의 기술자의 지식에 따라 본 명세서에서 기재된 것과 같은 비-중화 또는 중화 항체를 이용하여 수행될 수 있다.

본 명세서의 방법을 이용한 상승된 PG 수준의 관측에 기초하여, 치료팀은 그 다음 유방암의 존재 또는 치료 이후 유방암의 재발을 확인하기 위한 추가적인 시험을 수행하거나 대상체의 치료에 대해 직접적으로 진행하여야 하는지를 결정할 수 있다.

대상체에서 측정된 PG 수준을 비교하기 위해 상이한 기준치가 이용될 수 있다. 본 명세서의 방법의 일부 구체예에서, 기준치는 이전에 동일한 대상체로부터 얻은 관심 대상인 체액 내 PG 수준을 측정함으로써 설립되었다. 그러한 시료는 미리 결정된 간격으로 수거되고 PG 수준은 측정되었다. 비한정적인 예시로, 치료가 끝난 후 첫 번째 6개월 동안 매주 또는 매달 PG 수준이 측정되고, 그 후 치료가 끝난 두 번째 주년까지 매 3개월 마다, 그 후 매 6개월 마다 또는 그 후로는 매 년 측정된다. 다른 미리 결정된 간격 또한 가능하다.

본 명세서의 방법의 다른 구체예에서, 기준치는 유방암 또는 유방암 재발의 관측을 위한 샘프링을 수행한 대상체의 것과 유사한 특징을 가지는 개개의 군락에서 평균 PG 수준으로부터 설립될 수 있다. 그러한 특징은 필수적으로 한정되는 것은 아니나, 성별, 나이, 일차 유방 종양의 상태, 특정 치료에 대한 이전의 노출, 또는 이들 또는 다른 인자들의 조합을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 군락-유래 기준치(population-derived baseline)뿐만 아니라 대상체-특이적 기준치 모두 대상체의 상태를 평가하는 데 사용될 수 있다.

기술분야의 통상의 기술자의 지식에 따라서, 기준치에 대한 특정 분계점을 초과한 대상체로부의 시료 내 PG 수준은 유방암, 치료 이후에 재발된 유방암 또는 항-hPG 항체 치료로부터 치료 이득을 얻은 대상체로 결론내려진다. 치료 팀은 그 후 유방암의 존재 또는 유방암의 재발을 확인하기 위해 확인 시험을 착수할 수 있다. 그러한 시험의 비한정적인 예시는 예비 외과 수술, 유방조영술과 같은 영상 기술, 혈액 또는 다른 조직 내 유방암에 의해 생산된 생물학적 인자의 존재에 대한 시험과 같은 것을 포함한다.

식사는 보통 가스트린의 합성 및 분비를 증가시키기 때문에, 식사는 혈중 PG 수준의 일시적인 상승 결과를 가져올 수 있고, 이는 유방암 전이 또는 유방암 재발에 의해 생산되는 PG의 정확한 측정을 방해하게 된다. 이러한 영향을 피하기 위하여, 기술분야에서 통상의 기술자에 의해 즉각적으로 결정될 수 있는 바와 같이, 혈장 및/또는 혈청 내 PG 수준이 결정될 때 시료는 충분한 시간 동안 금식한 후에 대상체로부터 수득될 수 있다.

7.12. 약학 조성물

본 명세서의 방법에 사용된 항-hPG 항체는 조성물로 만들어질 수 있다. 선택적으로, 상기 조성물은 전이성 유방암 또는 유방암 재발에 대해 치료적 효과를 가지는 화학 요법제 또는 다른 항체와 같은 하나 또는 그 이상의 추가적인 치료제를 포함할 수 있다. 조성물은 대게 살균한 것의 일부분으로 공급되고, 약학 조성물은 대게 약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 것이다. 이 조성물은 환자에게 투여하기 위해 바람직한 방법에 의존하여 어떠한 적절한 형태일 수 있다.

항-PG 항체는 다양한 경로로, 전형적으로 비경구적으로, 예를 들어, 피하 주사, 정맥 주사, 복강 주사 또는 근육 주사로 대상체에 투여될 수 있다. 투여는 일회 또는 그 이상의 일 회 분의 주사, 또는 일회 또는 그 이상의 투입으로 효과가 있을 수 있다. 기술분야의 통상의 기술자의 지식에 따라 다른 투여 경로가 또한 가능하다. 어떠한 주어진 경우에 있어서 투여에 대한 가장 적절한 경로는 투여되는 특정 조성물 및 나이 또는 성별과 같은 대상체의 특성에 의존한다.

약학 조성물은 투여량 당 본 명세서의 항-hPG 항체의 미리 결정된 양을 포함하는 단위 용량 형태로 알맞게 존재할 수 있다. 그러한 단위는 이에 한정되는 것은 아니나 예를 들어, 5 mg 내지 5 g, 예를 들어, 10 mg 내지 1 g, 또는 20 내지 50 mg을 함유할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 약학적으로 허용가능한 담체는 예를 들어, 투여 경로에 의존하는 다양한 형태이다.

본 명세서의 약학 조성물은 바람직한 정도의 순도를 가지는 항체와 약학적으로 허용 가능한, 기술분야에서 전형적으로 사용되는 선택적 담체, 부형제 또는 안정화제(본 명세서에서 모두 "담체"라고 불리운다), 예를 들어, 완충화제, 안정화제, 방부제, 등장화제, 비이온성 세제, 항산화제, 및 다른 여러가지 첨가물을 혼합하여 감압 하에 동결 건조된 형태 또는 수용액 형태로 보관되도록 준비될 수 있다. 문헌 [Remington 's Pharmaceutical Sciences, 16th edition (Osol, ed. 1980]를 참고하라. 그러한 첨가물은 사용되는 용량 및 농도에서 수령인에게 비독성이어야 한다.

완충화제는 대략의 생리적 상태의 pH 범위를 유지하는 데에 도움을 준다. 완충제는 약 2mM 내지 약 50 mM의 범위 농도에서 존재할 수 있다. 본 명세서에서 사용하기에 적합한 완충화제는 시트르산염 완충액 (예컨대, 모노소듐 시트르산염-디소듐 시트르산염 혼합물, 시트르산-트리소듐 시트르산염 혼합물, 시트르산-모노소듐 시트르산염 혼합물, 등) 석신산염 완충액 (예컨대, 석신산-모노소듐 석신산염 완충액, 석신산-소듐 하이드록사이드 혼합물, 석신산-디소듐 석신산염 혼합물, 등), 타르타르산염 완충액 (예컨대, 타르타르산-소듐 타르타르산염 혼합물, 타르타르산-포타슘 타르타르산염 혼합물, 타르타르산-소듐 하이드록사이드 혼합물, 등), 푸마르산염 완충액 (예컨대, 푸마르산-모노소듐 푸마르산염 혼합물, 푸마르산-디소듐 푸마르산염 혼합물, 모노소듐 푸마르산염-디 소듐 푸마르산염 혼합물, 등), 글루콘산염 완충액 (예컨대, 글루콘산-소듐 글리코네이트 혼합물, 글루콘산-소듐 하이드록사이드 혼합물, 글루콘산-포타슘 글리코네이트 혼합물, 등), 옥살산염 완충액 (예컨대, 옥살산-소듐 옥살산염 혼합물, 옥살산-소듐 하이드록사이드 혼합물, 옥살산-포타슘 옥살산염 혼합물, 등), 락트산염 완충액 (예컨대, 락트산-소듐 락트산염 혼합물, 락트산-소듐 하이드록사이드 혼합물, 락트산-포타슘 락트산염 혼합물, 등) 및 아세트산염 완충액 (예컨대, 아세트산-소듐 아세트산염 혼합물, 아세트산-소듐 하이드록사이드 혼합물, 등)과 같은 유기 및 무기 산 및 그들의 염 모두를 포함한다. 추가적으로, 인산염 완충액, 히스티딘 완충액 및 트리스와 같은 트리메틸아민 염이 사용될 수 있다.

방부제는 미생물 생장을 저해시키기 위해 첨가될 수 있고, 0.2%- 1 % (w/v) 범위로 첨가될 수 있다. 본 명세서에서 사용되기에 적합한 방부제는 페놀, 벤질 알코올, 메타-크레솔, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 벤잘코늄 할라이드 (예를 들어, 클로라이드, 브로마이드, 및 아이오다이드), 헥사메토늄 클로라이드, 및 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레조시놀, 사이클로헥사놀, 및 3-펜타놀 같은 알킬 파라벤을 포함한다. 때때로 "안정제"로 알려진 등장화제는 본 명세서의 액체 조성물의 등장성을 확실히 하기 위해 첨가될 수 있고, 폴리하이드릭 당 알코올, 예를 들어 트리하이드릭 또는 글리세린, 에리스리톨, 아라비톨, 자일리톨, 솔비톨 및 마니톨 같은 고 당 알코올을 포함한다. 안정제는 기능적으로 팽화제부터 치료제를 가용성으로 하거나 변성 또는 용기 벽에 부착되는 것을 막는 것을 돕는 첨가물까지 범위에 걸쳐있을 수 있는 부형제의 넓은 범주로 언급된다. 전형적인 안정제는 폴리하이드릭 당 알코올 (상기에 열거됨); 알지닌, 라이신, 글라이신, 글루타민, 아스파라진, 히스티딘, 알라닌, 오르니틴, L-류신, 2-페닐알라닌, 글루탐산, 트레오닌 등과 같은 아미노산, 락토오스, 트레할로오스, 스타키오스, 마니톨, 솔비톨, 자일리톨, 리비톨, 마이오이니시톨, 갈락티톨, 글리세롤 등과 같은 유기 당 또는 당 알코올, 이노시톨과 같은 시클리톨; 폴리에틸렌 글리콜; 아미노산 폴리머; 요소, 글루타치온, 티옥산, 소듐 치오글라이콜레이트, 치오글리세롤, α-모노치오글리세롤 및 소듐 치오 설페이트와 같은 황 함유 환원제; 저분자량의 폴리펩타이드 (예를 들어, 10 또는 더 적은 잔기의 펩타이드); 인간 혈청 알부민, 소 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 폴리머; 자일로오스, 만노오스, 프룩토오스, 글루코오스와 같은 단당류; 락토오스, 말토오스, 수크로오스와 같은 이당류 및 라피노오스와 같은 삼당류; 및 덱스트란과 같은 다당류일 수 있다. 안정제는 활성 단백질 질량 부분 당 0.1 내지 10,000 질량의 범위로 존재할 수 있다.

비-이온성 계면활성제 또는 세제 (또한 "습윤제"로 알려짐)는 치료용 단백질을 불안으로 인한 침전으로부터 보호할 뿐만 아니라 치료제를 가용성으로 하는데 도움을 주기 위해서 첨가될 수 있고, 또한 단백질의 변성을 유발하지 않고 전단면이 압력에 노출되도록 하기 위한 제제가 허락된다. 적합한 비이온성의 계면활성제는 폴리소르베이트(20, 80 등), 폴리옥사머(184, 188 등), 플루로닉 폴리올, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노에테르(TWEEN?-20, TWEEN?-80 등)을 포함한다. 비이온성의 계면활성제는 약 0.05 mg/ml 내지 약 1.0 mg/ml, 예를 들어 약 0.07 mg/ml 내지 약 0.2 mg/ml의 범위로 존재할 수 있다. 그러나, 계면활성제는 항체에 결합하는 경향이 있고, 그들의 구조를 손상할 수 있다. 따라서, 사용될 때 안정화 농도는 낮아야 하고 실험적으로 인식되어야 한다.

추가적인 다양한 부형제는 킬레이트제(예를 들어, EDTA), 항산화제 (예를 들어, 아스코르브산, 메티오닌, 비타민 E), 및 보조용매를 포함할 수 있다.

항-hPG 항체는 단독으로, 또는 하나 또는 그 이상의 항-hPG 항체와의 혼합 자체로, 또는 이에 한정되지는 않으나 화학 요법제, 호르몬 치료제, 생물학적 요법제, 및 항체 치료제(예를 들어, 베바시쥬맵)를 포함하는 유방암 전이 또는 재발을 예방하는 데 이용하는 다른 물질과 혼합 또는 조합으로 투여될 수 있다.

7.13. 약학 키트

특정 구체예에 있어서, 본 발명은 의료인 또는 다른 사람에 의해 사용되는 약학 키트를 제공한다. 약학 키트는 본 명세서의 항-hPG 항체(예를 들어, 감압 하에 동결 건조된 형태 또는 수용액 형태) 및 하나 또는 그 이상의 다음의 것을 포함하는 패키지이다: 본 명세서의 다른 곳에서 기재된 제 2의 치료제; 항-hPG 항체를 투여하기 위한 기구, 예를 들어, 바늘 및/또는 주사; 및 약학 그레이드 워터 또는 만일 항체가 감압 하에 동결 건조되거나 농축된 형태이면 항체를 재현탁하거나 희석시키는 완충액. 키트는 또한 항체 조성물을 준비하고/또는 조성물을 환자에게 투여하기 위한 설명을 포함할 수 있다.

항-hPG 항체 조성물의 각 단위 용량이 각각 포장될 수 있고, 키트는 하나 또는 그 이상의 용량을 함유할 수 있다(예를 들어, 2 단위 용량, 3 단위 용량, 4 단위 용량, 5 단위 용량, 7 단위 용량, 8 단위 용량, 10 단위 용량 또는 그 이상). 한 가지 구체예에서, 하나 또는 그 이상의 단위 용량은 각각 주사에 보관되고, 다른 구체예에서, 하나 또는 그 이상의 단위 용량은 각각 백 또는 정맥 내 라인으로 연결되기에 적합한 비슷한 용기에 보관된다.

7.14. 효과적인 복용량

본 명세서의 항-hPG 중화 항체를 포함하는 조성물은 일반적으로, 적어도 부분적으로라도 의도하는 결과를 얻기 위하여 유효량으로 유방암 전이를 치료 또는 예방하거나 유방암 재발을 예방할 필요가 있는 대상체에 투여된다.

유방암 전이 치료에 관하여, 무엇보다도 치료적 이득은 전이성 유방아의 어떠한 개선, 유방암 전이의 성장의 중단 또는 늦춤, 대상체 내에서 전이의 숫자 및/또는 크기의 감소, 유방암 전이에 대한 혈액 흐름 감소, 유바암 전이의 신진대사 감소, 유방암 전이성 암의 심각성 감소, 전이성 유방암 세포의 증식 또는 세포유도사의 감소, 대상체에서 전이성 유방암과 관련된 증상 또는 신호의 심각성의 중단 또는 지연, 치료 이전에는 불가능하였던 유방암 전이의 외과 수술적 절제, 전이성 유방암을 지니는 대상체의 기대 수명, 편안함 또는 삶의 질 향상, 또는 대상체에서 고통의 감소를 의미한다. 바람직하기는 하지만, 전이성 유방암의 완전한 치료는 존재하는 치료 이득으로 요구되지 않는다.

전이성 유방암의 종양 크기, 숫자 및 신진대사는 이에 한정되지는 않으나 기술분야의 통상의 기술자에게 알려진 다른 방법뿐만아니라 CT, MRI, 기능적 MRI, SPECT 및 PET를 포함하는 다양한 스캐닝 기술을 이용하여 측정될 수 있다.

치료 이득은 또한 하나 또는 그 이상의 대리 종결점(surrogate end points)과 연관될 수 있다. 예시를 통하여, 한정되지는 않으나, 프로가스트린 또는 암태아 항원(carcinoembryonic antigen)과 같은 전이성 유방암에 의한 특정 단백질 또는 다른 인자들의 생산은 시간이 흐르면서 치료 이득을 나타내는 인자의 수준이 감소되는 대상체에서 측정될 수 있다.

유방암 전이의 예방에 관하여, 효과적인 복용량은 무엇보다도 유방암 전이의 부재, 유방암 전이의 성장의 지연, 중단 또는 늦춤, 궁극적으로 발생할 수도 있는 어떤 유방 전이의 숫자 및/또는 크기의 감소, 및 전이성 유방암 세포가 일차 종양으로부터 퍼져나갈 수 있는 어떤 기계적 단계의 억제 또는 방해에 의해 증명되는 것처럼, 유방암을 적어도 부분적으로 예방하는 데 효과적인 것이다. 바람직하기는 하지만, 유방암 전이의 완전한 예방은 존재하는 효과로 요구되지 않는다.

유방암 재발의 예방에 관하여, 효과적인 복용량은 무엇보다도 유방암의 재발, 유방암 차도의 유지, 또는 치료 이후에 최초의 유방암이 관측되지 않거나 명백히 사라진 대상체에서 유방암의 재현 또는 재성장, 또는 새로운 유방 종양의 성장의 지연, 중단 또는 늦춤에 의해 증명되는 것처럼, 유방암의 재발을 적어도 부분적으로 예방하는 데 효과적인 것이다. 유방암 재발의 예방에 대한 효과는 또한 무엇보다도 유방암 줄기세포의 사망, 유방암 줄기세포의 증식의 지연, 중단, 억제 또는 늦춤, 유방암 줄기세포 세포유도사의 증가, 또는 유방암 줄기세포를 유방암의 형성 또는 성장에 원인이 될 수 없는 세포로 분화되도록 유발하는 것에 의해 증명된다. 또한, 본 명세서에서 기재된 바와 같이, 유방암 줄기세포는 이에 한정되지는 않으나 특정 세포 마커의 발현, 낮은 부착 배양 조건에서 구상체로 성장하는 능력 및 이식 이후 새로운 종양 성장을 시작하는 능력을 포함하는 그러한 세포의 특징적인 하나 또는 그 이상의 표현형의 속성을 가지는 것으로 인식된다. 바람직하기는 하지만, 유방암 재발의 완전한 예방은 존재하는 효과로 요구되지 않는다.

모든 프로가스트린의 결합이 치료 효과를 얻기 위하여 필수적으로 요구되지 않는다. 또는, 복수 유체(ascites fluid), 흉막삼출액(pleural effusions)으로부터의 유체, 뇌척수액(cerebrospinal fluid), 림프, 혈액, 혈장, 혈청과 같은 특정 체액 또는 다른 곳에서, 온몸의, 종양에서 프로가스트린의 농도 감소는 또한 효과적이다.

기술분야의 통상의 기술자의 지식에 따르면, 항-hPG 항체 조성물의 용량은 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90, 또는 100%, 또는 약 5%-10%, 약 10%-15%, 약 15%-20%, 약 20%-25%, 약 25%-30%, 약 30%-35%, 약 35%-40%, 약 40%-45%, 약 45%-50%, 약 50%-55%, 약 55%-60%, 약 60%-65%, 약 65%-70%, 약 70%-75%, 약 75%-80%, 약 80%-85%, 약 85%-90%, 또는 약 90%-95%로 투여된 이후의 미리 결정된 시간에 관심 대상인 조직 또는 체액에서 자유 hPG 농도를 감소시키기 위하여 환자에서 적정될 수 있다. 또는 앞의 수치의 어떠한 범위에 걸친 자유 hPG 농도에 있어서의 퍼센트 감소를 위하여 적정될 수 있다.

투여되는 항-hPG 항체의 양은 치료되는 대상체의 크기 및 무게, 투여의 형태, 경로 및 위치, 치료 식이 요법(예를 들어, 제 2의 치료제가 사용되는지 여부) 치료되는 특정 대상체의 나이 및 상태, 치료에 앞서 상기 대상체의 혈액에서 관측되는 PG 수준, 치료되는 대상체의 항-PG 항체에 대한 민감성을 포함하는 다양한 인자에 의존할 것이다. 적절한 복용량은 기술분야의 통상의 기술자에 의해 즉시 결정될 수 있다. 궁극적으로, 임상의가 사용되는 적절한 복용량을 결정할 것이다. 이 복용량은 적절하게 자주 반복될 수 있다. 만일 부작용이 발생하면, 복용량의 양 및/또는 빈도는 일반적인 임상적 관례에 따라 변경 또는 감소될 수 있다. 적절한 복용량 및 치료 식이요법은 본 명세서의 방법 또는 기술분야의 통상의 기술자에게 알려진 다른 방법을 이용하여 치료의 과정을 모니터링함으로써 구축될 수 있다.

효과적인 복용량은 처음에 시험관 내 검출법으로부터 구축될 수 있다. 예를 들어, 동물에서 사용되는 시작 용량은 시험관 내에서 측정되는 프로가스트린에 대한 항체의 결합 친화도에서 또는 그 이상에서 항-hPG 항체의 순환하는 혈액 또는 혈청 농도를 얻기 위하여 만들어진다. 특정 항체의 생물학적 이용 가능성을 고려하여 그러한 순환하는 혈액 또는 혈청 농도를 얻기 위한 복용량의 계산은 통상의 기술자의 능력 안에서 잘 이루어진다. 참고적으로, 독자는 파트 1에 언급된다: [Goodman 및 Gilman 's The Pharmacological Basis of Therapeutics," 1 1th Ed., Hardman, J.G., et al., Eds., McGraw-Hill Professional]의 통칙, 및 본 명세서에서 언급된 참조 문헌. 시작 복용량은 또한 동물 모델과 같은 시험관 내 데이터로부터 계산될 수 있다. 통상의 기술자는 인간 투여에 적합한 복용량을 결정하기 위하여 그러한 정보를 관례대로 채택할 수 있다.

특정 구체예에서, 치료에 앞서 몇 번, 몇 일, 몇 주에 걸쳐 개개인의 혈청 또는 혈장 PG 농도를 측정하고, 포화되는, 예를 들어 PG 모두에 결합하기에 충분한 양의 항-PG 항체 양을 계산함으로써 각 대상체에 대한 정맥으로 들어가는 용량이 결정될 수 있다. 통상의 기술자에 의해 이해될 수 있는 바와 같이, 주어진 혈청 또는 혈장 PG 농도에 대한 포화를 얻기 위해 필요한 어떤 특정 항체의 양은 부분적으로, 특정 항체의 친화상수에 의존할 것이다. 관심 대상인 특정 항-PG 항체에 대한 포화량을 계산하는 방법은 잘 알려져 있다.

포화를 보장하기 위해서, 계산된 포화량보다 더 많은 양이 투여된다. 예를 들어, 적어도 계산된 포화량 보다 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 심지어 10배 이상 많은 양이 투여된다. 정맥으로 투여되는 것 이외의 투여 형태로, 기술분야에서 잘 알려진 바와 같이 상기 양은 약물동태학(pharmacokinetic) 및 생물학적 가용능(bioavailability)에 기초하여 조절될 수 있다.

항-hPG 항체 조성물의 효과적인 용량은 약 0.001 mg kg to 약 250 mg kg 단독 투여(예를 들어, 볼루스(bolus)), 다중 투여 또는 계속 투여(예를 들어, ㅈ주입(fusion)) 당 약 0.001 내지 250 mg/kg로 범위이고, 또는 예방되어야 할 암 재발의 유형, 투여 경로, 및 대상체의 나이, 무게 및 상태에 의존하는 어떤 효과적인 범위 또는 수치이다. 특정 구체예에 있어서, 각 용량은 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.5 mg/kg; 약 0.25 mg/kg 내지 약 0.75 mg/kg; 약 0.5 mg/kg 내지 약 1 mg/kg; 약 2 mg/kg; 약 1.5 mg/kg 내지 약 2.5 mg/kg; 약 2 mg/kg 내지 약 3 mg/kg; 약 2.5 mg/kg 내지 약 3.5 mg/kg; 약 3 mg/kg 내지 약 4 mg/kg; 약 3.5 mg/kg 내지 약 4.5 mg/kg; 약 4 mg/kg 내지 약 5 mg/kg; 약 5 mg/kg 내지 약 7 mg/kg; 약 6 mg/kg 내지 약 8 mg/kg; 약 7 mg/kg 내지 약 9 mg/kg; 약 8 mg/kg 내지 약 10 mg/kg; 약 10 mg/kg 내지 약 15 mg/kg; 약 12.5 mg/kg 내지 약 17.5 mg/kg; 약 15 mg/kg 내지 약 20 mg/kg; 약 17.5 mg/kg 내지 약 22.5 mg/kg; 약 20 mg/kg 내지 약 25 mg/kg; 약 22.5 mg/kg 내지 약 27.5 mg/kg; 약 25 mg/kg 내지 약 30 mg/kg; 약 30 mg/kg 내지 약 40 mg/kg; 약 35 mg/kg 내지 약 45 mg/kg; 약 40 mg/kg 내지 약 50 mg/kg; 약 45 mg/kg 내지 약 55 mg/kg; 약 50 mg/kg 내지 약 60 mg/kg; 약 55 mg/kg 내지 약 65 mg/kg; 약 60 mg/kg 내지 약 70 mg/kg; 약 65 mg/kg 내지 약 75 mg/kg; 약 70 mg/kg 내지 약 80 mg/kg; 약 75 mg/kg 내지 약 85 mg/kg; 약 80 mg/kg 내지 약 90 mg/kg; 약 85 mg/kg 내지 약 95 mg/kg; 약 90 mg/kg 내지 약 100 mg/kg; 약 95 mg/kg 내지 약 105 mg/kg; 약 100 mg/kg 내지 약 150 mg/kg; 약 125 mg/kg 내지 약 175 mg/kg; 약 150 mg/kg 내지 약 200 mg/kg; 약 175 mg/kg 내지 약 225 mg/kg; 약 200 mg/kg 내지 약 250 mg/kg의 범위일 수 있다. 다른 복용량 또한 가능하다.

투여의 양, 빈도 및 지속은 환자의 나이, 무게 및 질병 상태와 같은 다양한 인자에 의존할 것이다. 따라서, 비한정적인 예시로, 투여를 위한 치료 식이요법은 1일 또는 그 이상, 2일 또는 그 이상, 3일 또는 그 이상, 4일 또는 그 이상, 5일 또는 그 이상, 6일 또는 그 이상, 1주 또는 그 이상, 2주 내지 무기한으로, 2주 내지 6개월 동안, 3개월 내지 5년, 6개월 내지 1년 또는 2년, 8개월 내지 18 개월, 또는 비슷하게 지속될 수 있다. 선택적으로, 치료 식이요법은 예를 들어, 하루에 한번, 하루에 두번, 이틀마다, 3일 마다, 5일 마다, 1주일 마다, 2주일 마다 또는 한 달 마다 반복 투여를 위해 제공한다. 상기 반복 투여는 동일한 용량 또는 상이한 용량일 수 있다. 투여는 한 번, 두 번, 세 번, 네 번, 다섯 번, 여섯 번, 일곱 번, 여덟 번, 아홉 번, 열 번, 또는 그 이상 반복될 수 있다. 항-hPG 항체의 치료적으로 유효량은 일회량으로 또는 치료 식이요법 동안, 예를 들어, 1 주일, 2 주일, 3 주일, 1 개월, 3 개월, 6 개월, 1년 또는 그 이상 동안에 투여될 수 있다.

8. 실시예

실시예 1: 전이성 유방암 세포주에서 가스트린 유전자 발현

본 실시예는 전이성 유방암 세포주에서 가스트린(GAST) 유전자 발현을 기술한다.

A. 방법

GAST mRNA 발현을 MCF-7, MDA-MB-231 및 T47D 세포주의 RNA 제조로부터 정량적 RT-PCR를 이용하여 양을 정량화하였다. 데이터는 SW480 세포주에서 발견되는 mRNA 발현 수준과의 비교에 의해 나타냈으며, SW480 세포주는 높은 수준의 가스트린 mRNA를 발현한다고 알려진 일차 대장암 세포주이다.

MCF-7 세포는 인간 전이성 유방암 세포주이다. 이는 원래 유방의 샘암종(adenocarcinoma) 진단을 받은 환자의 흉막삼출(pleural effusion)로부터 유래되었다. MDA-MB-231 세포는 인간 전이성 유방암 세포주이다. 이는 원래 유방의 샘암종 진단을 받은 환자의 흉막삼출로부터 유래되었다. T47D 세포는 인간 전이성 유방암 세포주이다. 이는 원래 유방의 침윤성 유관암(infiltrating ductal carcinoma) 진단을 받은 환자의 흉막삼출로부터 유래되었다.

B. 결과

정량적 RT-PCR에 의해 측정된 가스트린 유전자 발현 수준은 도 1에 나타나있다. 모든 세 개의 전이성 유방암 세포주는 SW480 세포에서의 발현과 비교하여 약 동일 수준 또는 적은 수준에서 가스트린 유전자의 발현을 검사하였다. 번역 후 과정을 통하여, 상기 가스트린 유전자 산물은 프로가스트린으로 전환될 수 있다.

실시예 2: 환자로부터 외과적으로 제거된 일차 및 전이성 유방암에서 가스트린 유전자의 발현

본 실시예는 환자로부터 외과적으로 제거된 일차 및 전이성 유방암에서 가스트린(GAST) 유전자의 발현에 대하여 기술한다.

A. 방법

일차 및 전이성 유방암을 적용가능한 윤리적 지침에 따라 다른 환자로부터 외과적으로 절제하였다. RNA는 암 샘플에 의하여 제조되었으며, 가스트린 mRNA는 정량적 RT-PCR에 의하여 측정하였다. 임상 샘플에서 가스트린 mRNA의 발현은 MCF-7 세포에서의 발현 수준에 상대적으로 표준화하였다.

B. 결과

전체 105개 일차 유방암 및 25개 전이성 유방암의 가스트린 유전자의 발현을 시험하였다. 프로가스트린 mRNA은 시험한 일차 종양의 27개(도 2) 및 시험한 전이성 종양의 7개(도 3)에서 발견할 수 있었다. 따라서, 상기 가스트린 유전자는 일차 및 전이성 유방암 모두의 부분집합에서 발현되고, 발현 수준은 가스트린 유전자의 발현이 관측되는 암 중에서 달라진다.

실시예 3: 유방암 환자에서 혈액 혈장 프로가스트린 농도

본 실시예는 일차 및 전이성 유방암을 지닌 환자에서 프로가스트린의 혈액 혈장 수준의 정량을 기술한다.

A. 방법

혈액 혈장 프로가스트린 농도는 대조군으로서 건강한 사람에서 측정하고, 일차 종양이 외과적으로 제거된 전이성 유방암을 지닌 42명의 환자 및 일차 유방암을 지닌 3명의 환자에서 측정하였다. 전체 104명의 건강한 대조군 샘플은 혈액 은행에서 수득하였다.

혈장 또는 혈청 프로가스트린 수준의 정량은 하기에서 예측하여 기술된 것과 유사한 면역 치료-특이적 샌드위치 ELISA 기술을 이용하여 수행하였다.

Nunc MaxiSORP 96-웰 플레이트(well plate)의 웰은 하기와 같이 최초 면역 치료-특이적 항체로 코팅되어 있다. 프로가스트린의 카르복시-말단 부위에 특이적인 항-면역 치료 다클론 항체를 MilliQ 물 내에 pH 9.6 탄산나트륨/중탄산염 완충액인 50mM 용액에서 농도 3 ㎍/ml로 희석한다. 전체 100㎕ 항체 용액을 그 후 96-웰 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 하룻밤 동안 4℃에서 배양되었다. 결합 후, 상기 항체 용액을 웰에서 제거하고, 그 후 100㎕ 세척 완충액 (1 X PBS / 0.1% Tween-20) 으로 세 번 세척한다. 전체 100㎕ 반응정지 완충액 (1 X PBS / 0.1 % Tween-20 / 0.1% BSA)을 그 후 각 웰에 첨가하고, 2 시간 동안 22℃에서 배양한다. 반응정지 완충액을 그 후 제거하고, 웰은 세척 완충액으로 세 번 세척한다. 환자로부터 분리된 혈장 또는 혈청 샘플을 연속적 희석으로, 일반적으로 1 : 1, 1 :2, 1 :5 및 1 : 10 희석, 100 ㎕ 부피의 웰에 첨가하고, 그 후 2 시간 동안 22℃에서 배양한다. 혈장 또는 혈청 샘플은 중복하여 분석한다.

검출법은 또한 두 개의 표준 곡선을 포함한다. 첫 번째 표준 곡선은 재조합 프로가스트린의 희석을 이용하여 제조하고, 희석은 웰 당 최종 양 1 ng, 0.5 ng, 0.25 ng, 0.1 ng, 0.05 ng, 0.01 ng, 및 0 ng 이다. 음성 대조군으로 작용하는 두 번째 표준 곡선은 면역 치료-음성 인간 혈청으로부터 제조하고, 면역 치료-음성 인간 혈청은 시험 샘플과 같은 희석에서, 예를 들어 1 : 1 , 1 :2, 1 :5 및 1 : 10, 반응정지 완충액에서 희석한다. 또는 혈장 샘플이 분석될 때는, 음성 대조군으로 작용하는 두 번째 표준 곡선은 면역 치료-음성 인간 혈장으로부터 제조하고, 면역 치료-음성 인간 혈장은 시험 샘플과 같은 희석에서, 예를 들어 1 : 1 , 1 :2, 1 :5 및 1 : 10, 반응정지 완충액에서 희석한다.

혈장 또는 혈청 샘플로 배양이 완료된 후, 웰 내용물을 제거하고, 면역 치료에 특이적인 제 2의 항체를 이용하여 프로가스트린이 일차 항체에 결합한 것이 검출된 후에 하기와 같이 웰을 100㎕/웰, 세척 완충액으로 세 번 세척한다.

프로가스트린의 아미노-말단 부위에 특이적인 바이오틴-연결 항-면역 치료 다클론항체 또는 단일클론항체는 항체에 의존하여 농도 0.1에서 10㎍/ml로 반응정지 완충액에서 희석한다. 전체 100㎕ 항체 용액을 그 후 각 웰에 첨가하고, 1 시간 동안 22℃ 에서 배양한다.

이차 항체 결합이 완료된 후, 플레이트를 100㎕/웰 세척 완충액으로 세 번 세척하고, 스트렙타아비딘-HRP (반응정지 완충액 내에 25ng/ml) 100㎕ 용액을 각 웰에 첨가한 후, 1 시간 동안 22℃에서 배양한다. 스트렙타아비딘-HRP 용액과 배양이 완료된 후, 플레이트를 100㎕/웰 세척 완충액으로 세 번 세척한다. 그 뒤로, Pierce SuperSignal ELISA Femto Maximum Sensitivity Chemiluminescent Substrate 키트를 이용하여 제조된 100㎕의 화학 발광의 기질을 웰 당 첨가하고, 5분 동안 상온 어두운 곳에서 배양하고, 그 후 루미노미터(luminometer)에서 기록된다.

루미노미터 기록에 기초하여, 선형 회귀 분석은 상기 표준 곡선 데이터에 대응하는 선의 방정식을 유도하기 위해 사용된다. 상기 방정식을 이용하여, 다양한 환자 샘플 내의 프로가스트린 농도를 그 후 계산한다.

B. 결과

도 4에 박스플롯은 건강한 대조군과 비교하여 전이성 유방암을 지닌 유방암 환자 내의 혈액 혈장 프로가스트린 농도의 25^th 백분위, 중앙값, 및 75^th 백분위 값을 보여준다. 휘스커(whisker)는 혈액 혈장 프로가스트린 농도의 5^th 및 95^th 백분위를 나타낸다. 상기 데이터는 일차 유방암 종양이 제거된 전이성 유방암을 지닌 환자가 건강한 사람에 비하여 높은 중앙값 혈액 혈장 프로가스트린 농도임을 증명한다. 데이터의 통계적 분석은 표 4에 포함되어 있다.

전이가 없는 일차 유방암으로 진단된 세 환자에서, 프로가스트린 수준 은 45.7 pM, 97.3 pM 및 667.7 pM 로 결정되었으며, 이는 프로가스트린 수준은 또한 일차 유방암을 지닌 특정 환자에서도 상승함을 증명한다.

[표 4]

실시예 4: 배양에서 MDA-MB-231 전이성 유방암 세포의 성장에 항-면역 치료 다클론 항체의 효과

본 실시예는 배양에서 MDA-MB-231 세포의 성장에 항-면역 치료 다클론 항체의 효과를 기술한다.

A. 방법

MDA-MB-231 세포를 RPMI 배지 플러스 10% FBS 내의 6-웰 플레이트 (50,000 세포/웰)에 접종하고, 하루 동안 배양하고, 그 후 하룻밤 동안 혈청-결핍시켰다. 상기 배지를 그 후 2㎍/ml 대조군 항체 또는 세 배의 항-프로가스트린 다클론 항체를 포함하는 0.5% Pannexin H 로 보충된 RPMI 배지로 48 시간 동안 하루 두 번씩 교체했다. 대조군 항체는 다클론 토끼 항-인간 IgG, Affinity BioReagents Ref #SAl -600, 2 ㎍/ml 이었다. 실험을 중복하여 실행하고, 기술자는 취급 용액의 내용에 대하여 알지 못하였다. 실험 마지막에 있어서, 각 웰의 세포를 세 번 계수하였다.

B. 결과

도 5 에 나타난 결과는 실험 마지막에 있어서 실험 처음에 접종된 세포의 숫자를 빼고 웰 당 세포의 평균 숫자를 계산하여 나온 것이다. 데이터의 통계적 분석은 표 5 에 포함되어 있다. 본 실험의 결과는 면역 치료 다중클론항체가 대조군 다중클론항체에 비하여 시험관 내에서 MDA-MB-231 전이성 유방암 세포의 성장을 저해하는 효과가 있음을 증명한다.

[표 5]

실시예 5: 배양에서 MDA-MB-231 전이성 유방암 세포의 성장에 면역 치료 단일클론항체의 효과

본 실시예는 배양에서 MDA-MB-231 세포의 성장에 면역 치료 단일클론항체의 효과를 기술한다.

A. 방법

MAb3 및 MAb8를 이용한 첫번째 실험에서 MDA-MB-231 세포를 10% FBS가 첨가된 RPMI 배지 내의 6-웰 플레이트 (50,000 - 150,000 세포/웰)에 접종하고, 8 시간 동안 배양하고, 및 그 후 하룻밤 동안 혈청-결핍시켰다. 접종 후(시간 "TO") 24시간을 시작하여, 상기 배지를 하루 두 번 48 시간 동안 1-10 ㎍/ml 항-hPG 단일클론항체 또는 대조군 단일클론항체(마우스 항-인간 IgGl)를 포함하는 0.5% Pannexin H 가 보충된 RPMI 배지로 교환하였다. TO에서, 세포의 수를 각 실험 동안 세 개 웰에서 계수하였다. 48시간 후, 각 웰의 살아남은 세포의 수를 내용을 모르는 상황에서 네 번 계수하였다. TO 에서 세포 숫자를 48 시간에서 세포 수에서 빼고, 데이터를 대조군 항체로 처리한 후 살아남은 세포의 수에 비하여 백분율로서 표준화하였다.

두 번째 실험에서, MDA-MB-231 세포를 6-웰 플레이트 (100,000 세포/웰) 내에 접종하고, 상기와 같이 MAb8, MAM3, MAb16 및 MAb19 (10 ㎍/ml)로 처리하였다.

B. 결과

도 6 및 도 7에 나타난 실험의 결과는, 5개의 다른 항-hPG 항체, MAb3, MAb8, MAb13, MAb16 및 MAb19는 대조군 단일클론항체에 비하여 시험관 내 MD A-MB-231 전이성 유방암 세포의 성장을 방해하는데 효과가 있음을 증명한다. MAb8의 저해 효과는 용량 반응적이었다. MAb8 및 MAb13은 hPG의 C-말단 에피토프를 인식하고, 반면 MAb3, MAb16 및 MAb19는 각 N-말단 에피토프를 인식하고, 이는 항체 중화 활동은 프로가스트린 단백질의 N-말단 또는 C-말단에 위치한 목표 에피토프인지 여부에 의존하지 않는다는 사실을 증명한다.

실시예 6: 배양에서 MCF-7 전이성 유방암 세포의 성장에 항-프로가스트린 단일클론항체의 효과

본 실시예에서 배양에서 MCF-7 세포의 성장에 항-프로가스트린 단일클론항체의 효과를 기술한다.

A. 방법

MCF-7 세포를 6-웰 플레이트 (100,000 세포/웰) 내에 ,접종하고, 10% 소 태아 혈청을 포함하는 DMEM 내에 8 시간 동안 성장시켰다. 세포를 하룻밤 동안 혈청-결핍시키고, 접종 후 (시간 TO) 24시간에 시작하여, 세포를 매 12 시간 48 시간 동안 지시된 것처럼 0.5 % PanexinH 의 존재 하에서 1 ㎍/ml 대조군 단일클론항체(마우스 항-인간 IgGl, Calbiochem Ref #41 1451) 또는 1 ㎍/ml 항-hPG MAb3 로 처리하였다. 대조군 MAb 및 항-hPG MAb로 처리된 세포 내의 살아있는 세포의 숫자를 48 시간에 계수하였다. 처리 시작시 (TO) 세포 수를 48 시간에 측정한 시험 및 대조군 세포 수에서 빼었다. 기술자는 처리 용액의 내용물을 알지 못하였다.

B. 결과

도 8에 나타난 결과는 실험 마지막에 있어서 실험 시작시에 접종된 세포의 수를 빼고 웰 당 세포의 평균 수로 계산되었다. 데이터의 통계적 분석은 표 6에 포함되어 있다. 본 실험의 결과는 항-프로가스트린 단일클론항체가 대조군 항체에 비하여 시험관 내에서 MCF-7 전이성 유방암 세포의 성장을 줄이는데 효과적임을 증명한다.

[표 6]

실시예 7: 배양에서 T47D 전이성 유방암 세포의 성장에 항-프로가스트린 단일클론항체의 효과

본 실시예는 배양에서 T47D 세포의 성장에 항-PG 단일클론항체의 효과를 기술한다.

A. 방법

T47D 세포를 6-웰 플레이트 (50,000 세포/웰)에 접종하고, 8 시간 동안 10% 소 태아 혈청을 포함하는 RPMI 에서 성장시켰다. 세포를 하룻밤 동안 혈청-결핍시키고, 접종 후(시간 TO) 24시간에 시작하여, 세포를 매 12 시간 48 시간 동안 지시된 것처럼 0.5 % PanexinH의 존재 하에서 1 ㎍/ml 대조군 단일클론항체(마우스 항-인간 IgGl, Calbiochem Ref #41 1451) 또는 1 ㎍/ml 항-hPG MAb3 로 처리하였다. 대조군 MAb 및 항-hPG MAb 처리된 세포 내의 살아있는 세포의 숫자를 48 시간에 계수하였다. 처리 시작시 (TO) 세포 수를 48 시간에 측정한 시험 및 대조군 세포 수에서 빼었다. 기술자는 처리 용액의 내용물에 대하여 알지 못하였다.

B. 결과

도 9에 나타난 결과는 실험 마지막에 있어서 실험 시작시에 접종된 세포의 수를 빼고 웰 당 세포의 평균 수로 계산되었다. 데이터의 통계적 분석은 표 7에 포함되어 있다. 본 실험에서, 대조군 항체에 비하여 항-프로가스트린 단일클론항체 MAb3로 처리함에 의한 시험관 내에서 T47D 세포 성장에의 효과는 통계상으로 특이한 차이점은 발견되지 않았다.

[표 7]

실시예 8: 전이성 유방암 세포주 내 가스트린 유전자의 발현에서 낮은 부착 배양 조건의 효과

본 실시예는 전통적인 조직 배양 조건 및 낮은 부착 배양 조건 하의 MDA-MB-231 및 MCF7 세포주 성장에서 가스트린 유전자 발현의 효과를 비교한다.

A. 방법

MDA-MB-231 및 MCF-7 세포를 전통적인 및 낮은 부착 배양 조건 하에 성장시켰다. 실험 시작시에, 30,000개의 세포를 마모콜트 증식 보충물(StemCell # 05622), 5 ㎍/ml 인슐린, 0.5 ㎍/ml 히드로코르티손, lOOU/ml 페니실린, 및 lOOU/ml 스트렙토마이신를 지닌 마모콜트 배지(StemCell #05621)내의 전통적인 및 매우 낮은 부착 75 cm² 플라스크 (Corning)에서 성장시켰다. 수집 후, 세포를 RNA 추출에 앞서 37 ℃ 에서 45분 동안 아쿠맥스(Accumax, Sigma)에서 분리시키고, 그 후 전체 RNA 를 표준 기술에 따라 분리시켰다. 가스트린 mRNA 를 정량적 RT-PCR를 이용하여 정량화 하였다. 데이터는 검출 분계점 바로 위의 가스트린 유전자 수준을 나타내는 MDA-MB-435 세포에서 결정된 가스트린 mRNA 수준을 비교하여 나타낸다.

B. 결과

결과를 도 10에서 보여준다. MDA-MB-231 세포에서 낮은 부착 배양 조건 하의 성장은 상기 세포에서 전통적인 조직 배양 조건 하의 성장에 비하여 가스트린 mRNA의 양이 증가시킨다. MCF7 세포에서, 가스트린 유전자 발현이 전통적인 조건에서 성장한 동일 유형의 세포에 비하여 낮은 배양 조건에서 성장한 세포에서 감소하였다.

실시예 9: 낮은 부착 배양 조건 하의 구상체(spheroid) 로서 전이성 유방암 세포의 성장에의 항-hPG 단일클론항체의 효과

본 실시예는 MCF-7 전이성 유방암 세포가 낮은 부착 배양 조건 하에 성장하였을 때, MCF-7 전이성 유방암 세포주의 구상체로서 성장에의 항-프로가스트린 단일클론항체의 효과를 기술한다.

A. 방법

MCF-7 세포를 500 ㎕혈청-없는 마모콜트 배지 내의 낮은-부착 배양 플레이트 (500 세포/웰) 내에 접종하였다. 평판 배양 후 10일 동안 각 날에, 항-hPG 단일클론항체(MAb8) 또는 대조군 단일클론항체를 배양 배지에 하루 두 번 (3 ㎍/ml) 첨가했다. 실험 마지막에 있어서, 항-hPG 항체 및 대조군 항체의 존재에서 형성된 구상체의 수를 계수하였다. 실험은 내용물을 알지 못하는 상황에서 수행하였다.

B. 결과

결과를 도 11에서 보여주며, 낮은 부착 배양에서 구상체로서 MCF-7 전이성 유방암 세포의 성장은 비-특이적 대조군 항체로 처리한 것에 비하여 항-hPG 단일클론항체 MAb8로 처리함에 의해 감소하였음을 기술한다.

실시예 10: 낮은 부착 배양 조건하의 구상체로서 전이성 유방암 세포의 성장에 있어 항-프로가스트린 단일클론항체로 전 처리의 효과

본 실시예는 낮은 부착 배양 조건 하에서 성장시 MCF-7 전이성 유방암 세포주의 구상체로서 성장에 있어서 항-프로가스트린 단일클론항체를 이용하는 전처리의 효과를 기술한다.

A. 방법

세포를 항-hPG 단일클론항체(MAb3) 또는 대조군 단일클론항체 존재 하에 전통적인 낮은 부착 배양에서 48 시간 동안 우선 성장시켰다. 처리 끝에 500 세포/웰을 500㎕ 의 무혈청 마모콜트 배지에서 낮은 부착 24-웰 플레이트에 심고 11일 동안 더 항체 처리 없이 성장시켰다. 실험 마지막에 있어서, 웰 당 구상체의 수를 계수하였다.

B. 결과

결과를 도 12에서 보여주며, 항-hPG 단일클론항체 MAb3으로 MCF-7 전이성 유방암 세포의 전처리는 추가의 항체 처리 없이 낮은 배양 조건에서 배양된 이후 그러한 세포에 의해 형성된 구상체의 수를 감소시키는 데 효과적임을 증명한다. 왜냐하면 낮은 부착 조건 하의 배양은 유방암 줄기세포의 성장을 선택하고, 이러한 결과는 PG에 대한 중화항체가 유방암 세포의 군락에서 그러한 줄기세포의 숫자를 감소시키는 데 효과적임을 나타내기 때문이다. 더욱이, 특정 항체로의 전처리가 유방암 줄기세포의 숫자를 효과적으로 감소시킨다는 관측은 항-hPG 중화 항체에 대한 노출된 유방 종양이 항체가 더 이상 존재하지 않은 이후에도 줄기세포의 감소하는 종양형성성에 지속적인 효과를 가진다는 것을 시사한다.

실시예 11: 혈장 또는 혈청 PG 수준의 정량화

PG의 혈장 및/또는 혈청 수준은 다음의 검출법을 이용하여 전형적으로 결정될 수 있다. 96-웰 마이크로타이터 플레이트를 C-말단 항-hPG 항체, 예를 들어, 본 명세서에서 기술된 토끼 C-말단 항-hPG 다클론 항체, 또는 C-말단 항-hPG 항체의 0.5와 10 ㎍/ml 사이로 코팅하고, 그 후 하룻밤 동안 배양한다. 플레이트를 그 후 PBS-Tween (0.05%)에서 세 번 세척하고 PBS-Tween (0.05%) 내 2% (w/v) 탈지 분유로 반응정지시킨다. 단독으로, 시험 시료, 대조 시료 (공백 또는 PG-음성 혈장 또는 혈청 시료), 및 약 5 pM (0.5 x 10^-11 M) 및 약 0.1 nM (lxl0^-10 M) 사이의 hPG 표준 시료 (PG-음성 혈장 또는 혈청에 희석된 감압 하에 동결 건조된 hPG)를 적절한 희석제 (예를 들어, PBS-Tween 0.05%)에서 준비한다. 시료들은 코팅된 플레이트에서 37℃에서 2 내지 4시간 동안, 또는 다르게는 21℃에서 12 내지 16시간 동안 배양한다. 배양 후, 플레이트를 PBS-Tween (0.05%)로 3회 세척하고, 0.001 및 0.1 μg/mL 사이의 N-말단 항-hPG 단일클론 항체, 예를 들어, 고추냉이과산화효소 (HRP)(Nakane et al., 1974, J. Histochem. Cytochem. 22(12): 1084-1091)와 연결된 본 명세서에서 기술된 바와 같은 다중클론 N-말단 항-hPG 항체 또는 N-말단 단일클론 항-hPG 항체로 21℃에서 30분간 배양한다. 상기 반응은 0.5M 황산 100㎕를 첨가하여 중단시키고, 흡광도 측정을 405nm에서 수행한다. 시험 시료 hPG 양은 hPG 표준 시료로부터 유래된 측정값으로부터 생성된 표준 곡선과 비교함으로써 결정된다. 플레이트를 그 후 PBS-Tween (0.05%)에서 세 번 세척하고, HRP 기질을 21℃에서 15분 동안 추가한다. 반응은 0.5M의 황산 100㎕ 추가에 의해 중단되고, 흡광도 측정은 405nm에서 측정한다. 시험 시료 hPG 수준은 hPG 표준시료 유래의 측정으로부터 구성된 표준곡선과 비교함으로써 결정된다.

실시예 12: 항-hPG 항체의 특이성을 평가하기 위한 ELISA 검출법

항-hPG 항체의 특이성은 아래와 같이 ELISA를 사용하여 용이하게 결정될 수 있다. 96-웰 플레이트를 PBS에서 하룻밤 동안 4℃에서 적절한 농도의 시험 폴리펩타이드 (예를 들어, 25 및 50 ng 재조합 인간 PG, 및 50 및 250 ng CTFP 또는 다른 가스트린-유래 유전자 산물)와 함께 배양하고, 그 후 상기 웰을 세척 용액 (PBS 및 0.1 % Tween-20)으로 3회 세척하고, 그 후 2시간 동안 22℃에서 웰당 100㎕ 억제 용액 (PBS, 0.1 % Tween-20, 0.1 % 소 혈청 알부민 또는 카제인 가수분해물)과 함께 배양하였다. 억제 후, 상기 웰들을 3회 세척하고 분석될 항체 (시험 항체)를 첨가한다. PBS 및 0.1 % Tween-20에 있는 100㎕의 시험 항체 (0.3 내지 1 ng/ml)를 각 웰에 첨가한다. 플레이트를 그 후 2 시간 동안 22℃에서 배양하고, 그 후 세척 단계 후에(상기와 같이, 3X 100㎕의 세척 용액) 시험 항체 용액을 버리고 고추냉이과산화효소에 연결된 2차 항체, 염소 항-마우스 IgG (Fc) 항체를 포함하는 억제 용액으로 대체한다. 2차 항체로 1 시간 동안 배양한 후에, 100㎕의 기질 용액 (예를 들어, 시그마-알드리치 사에서 이용가능한 고속 OPD 또는 O-페닐렌다이아민 다이하이드로클로라이드는 생산자의 지시에 따라 준비됨)을 각 웰에 첨가하고, 22℃에서 20분 동안 어둠 속에서 배양한다. 반응은 50㎕의 4N 황산의 추가에 의해 중단되고 촉진된 기질의 양은 492nm에서 흡광도(O.D.)를 측정함으로써 결정한다. 기질 전환은 항원에 결합한 일차(시험) 항체의 양에 비례한다. 실험을 2회 반복하고, OD 측정은 항원 농도의 함수로써 그려진다. 시험항체는 만약 측정된 O.D. 값이 hPG에 대하여 0.2 및 1.5 사이 값이라면, PG에 대해 특이적인 것으로 기록되고, CTFP 또는 어떤 다른 가스트린-유전자 유래 펩타이드의 배경 위의 통계학적으로 중요한 신호는 없고, 배경은 PBS만 함유하는 대조군 웰로부터의 평균 신호이다.

실시예 13: 항-hPG 항체의 중화 활성을 평가하기 위한 분석

특이적 항-hPG 항체가 중화되는지를 평가하기 위한 특정 시험은 아래와 같이 수행될 수 있다. 유방암 세포를 약 웰 당 50,000 내지 100,000개의 세포로 6-웰 플레이트에 접종한다. 세포는 그 후 항체 농도 약 10 ㎍/ml의 항-hPG 항체 또는 대조군 항체로 12 시간 간격으로 48 시간 동안 처리된다. 양방적 검증 Mann- Whitney test를 이용하여(차이가 p<0.05 일 때 중요한 것으로 인식됨), 비특이적 항체인 대조군으로 처리한 세포의 수와 비교하여, 만일 시험 항체로 처리된 세포의 수가 생존 세포의 숫자에 있어서 적어도 10%의 통계상으로 중요한 감소를 나타내면 시험 항체는 중화된 것으로 정의한다. 전체 세포 수는 T0에 따라 처리 기간의 시작 시의 세포 숫자로 정정된다. 이 분석에 이용되는 예시적인 유방암 세포는 이에 한정되는 것은 아니나 MDA-MB-231 세포 및 MCF7 세포를 포함한다.

실시예 14: 항-hPG 항체의 친화도를 평가하기 위한 분석

항-hPG 항체의 친화 상수는 프로테온 테크니크 (Proteon Technique (BioRad))를 이용하여 [Nahshol et al. (2008) Analytical Biochemistry 383 :52-60]에 따라 측정될 수 있고, 본 명세서에서 전체에서 참고문헌으로써 통합된다. 간단히, 쥐 항-PG 항체에 있어서, 항-마우스 IgG 항체 (50㎍/ml)는 센서 칩에 첫 번째로 코팅되고, 항체의 주입 후에 칩에 의해 검출된 신호가 10,000 및 11,500 응답 단위(RU) 사이로 확실히 떨어지게 한다. 관심 대상인 쥐 항-hPG 항체 (시험 항체)는 그 후 (30 μg/mL의 통상적인 농도로) 주입된다. 만약 시험 항체가 충분히 결합하면 적어도 500 RU의 추가적인 신호가 관찰될 것이다. 시험 항체 및 hPG 사이에 결합하는 시간-코스가 그 후 예를 들어 200 nM, 100 nM, 50 nM, 25 nM, 및 12.5 nM와 같은 다양한 농도의 hPG를 투여하고 결합 양을 검출함으로써 얻어진다. 전형적으로, 몇 가지 채널이 단일 실험에서 동시에 다수의 항체를 시험하기 위하여 이용 가능하고, 동시에 다른 농도의 hPG에서 단일 시험 항체의 결합 분석을 가능하게 한다. 하나의 채널은 비-특이적 결합에 대한 대조군으로써 hPG에 특이적이지 않은 쥐 단일클론항체가 주입되어야 하고, 다른 채널은 배경 신호를 위하여 기준치로써 희석 완충액이 주입되어야 한다. 일반적으로, 어떠한 결합도 비-특이적 쥐 항체가 주입된 채널에서 관측되지 않는다. 이 설정에서 높은 결합을 나타내는, hPG에 의해 붙잡힌 단일클론항체의 포화 결과를 나타낼, 항체는 더 낮은 hPG 농도 (50 nM, 25 nM, 12.5 nM, 6.25 nM 및 3.125 nM)에 대하여 시험될 수 있고, 더 세밀한 측정을 할 수 있다.

친화 상수 (K_D)는 해리 상수 (k_d) 및 결합 상수 (k_a) 간의 비율로써 계산된다. 실험 값은 결합 측정에 기초한 실험적인 곡선 및 이론적 프로파일 간에 통계적으로 관련 있는 유사성을 분석함으로써 입증될 수 있다.

비-쥐 항-hPG 항체의 친화 상수는 항-hPG 시험 항체의 근원의 종에 대해 특이적인 IgG를 사용하여 유사한 방식으로 평가될 수 있다.

실시예 15: 기준 항-hPG 항체와 경쟁적 결합을 평가하기 위한 분석

관심 대상인 항체(시험 항체)가 바이오틴화된 기준 항-hPG 항체와 hPG에 결합하는 것에 대하여 경쟁하는지 여부를 평가하기 위한 특이성 분석은 하기와 같이 수행될 수 있다. 96-웰 플레이트가 1-10 μg/mL 범위에서 선택되는 농도에서 하룻밤 동안 4℃에서(0.1 내지 1㎍/웰) 포획 항-hPG 항체 (바이오틴화된 기준 항-hPG 항체에 의해 인식되는 에피토프와 상이한 hPG의 N- 또는 C-말단 영역을 인식하는 다중클론 또는 단일클론항체)로 코팅된다. 억제 완충액(0.1 % Tween-20, 0.1 % BSA in PBS)으로 2시간 동안 22℃에서 억제시킨 후에, 재조합 hPG가 10 pM 내지 1 nM (10 내지 1000 pg/웰) 농도에서 첨가되고 2시간 동안 22℃에서 배양된다. 그 후, 바이오틴화된 기준 항-hPG 항체(또는 바이오틴화된 기준 항 항-hPG 항체를 포함하는 혼합물)가, 표지되지 않은 시험 항체의 증가하는 농도와 마찬가지로, 첨가되고, 1시간 동안 22℃에서 배양된다. 결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 세척한 후에, 결합된 표지된 기준 항-hPG 항체의 검출은 50 ng/mL 스텝타비딘-HRP와 함께 혼합물을 1시간 동안 22℃에서 배양하고, 이어서 고추냉이과산화효소에 대한 형광 발광 기질과 함께 배양하고 광도계에서 상대적 광 유닛 (RLU)을 정량함으로써 수행된다. 분석은 2회 반복으로 수행된다.

기준 항-hPG 항체와 경쟁하는 항체는 hPG에 기준 항체가 결합하는 것을 막는다. 기준 항체로써, 실질적으로 동일한 에피토프 또는 겹치는 에피토프에 결합하는 항체는 결합하는 기준 항-hPG 항체의 양을 의미있게 감소시키고(예를들어, 적어도 50%), 관찰된 RLU의 감소에 의해 확인된다.

높은 제어량은 표지된 기준 항체를 재조합 hPG와 함께, 시험 항체 없이 배양함으로써 수행된 대조군 실험으로부터 얻어진다. 낮은 제어량은 표지된 기준 항체를 초과 농도의 표지되지 않은 기준 항체(따라서 표지되지 않은 기준 항체는 표지된 항체와 hPG에 결합하는 것에 경쟁함)의 존재 하에 재조합 hPG와 배양함으로써 수행된 대조군 실험으로부터 얻어진다. 시험 항체의 기준 항-hPG 항체와 경쟁할 수 있는 능력은 그 후, 표지된 기준 항체와 재조합 hPG를 증가하는 농도의 표지되지 않은 시험 항체의 존재 하에 배양함으로써 결정된다.

시험 분석에서, 시험 항체의 존재 하에 관찰된 RLU에서의 중대한 감소는 시험 항체가 기준 항-hPG 항체와 실질적으로 동일한 에피토프를 인식한다는 사실을 나타낸다.

결합의 저해는 저해 상수, 즉 K _i ,로써 표현될 수 있으며, 저해 상수는 하기의 식에 따라 계산된다:

K _i = IC₅₀ / (1 + ([기준 항-hPG Ab 농도]/K_D ^{기준 항- hPG Ab}))

"IC₅₀"은 기준 항체의 결합이 50% 감소하는 시험 항체의 농도이고 K_D ^{기준 항- hPG Ab}는 hPG에 대한 친화도의 측정인 기준 항-hPG 항체의 해리 상수이다. 기준 항-hPG 항체 (예를 들어, 본 명세서에서 기술된 항-hPG 항체 중 하나)와 경쟁하는 유용한 시험 항체는 통상적으로 본 명세서에서 기술된 분석 조건 하에서 10 pM 내지 100 nM 범위의 K _{i S}를 가질 것이다.

본 명세서에서 인용된 모든 출판물, 특허, 특허 출원 및 다른 문서는 각각의 출판물, 특허, 특허 출원 또는 다른 문서가 각각 모든 목적을 위하여 참조로써 통합되는 것으로 나타낸 것과 같이, 동일한 범위의 모든 목적을 위해 그 전체로 참조로써 본 명세서에 통합된다.

다앙한 특정 구체예가 묘사되고 기술되었으나, 다양한 변화가 본 발명의 사상 및 범위로부터 벗어남 없이 이루어질 수 있다.

SEQUENCE LISTING <110> Biorealites Cailler, Fran?ise Floch, Jean-Francois Hollande, Fr??ic Houhou, Le?a Joubert, Dominique <120> METHODS FOR TREATING BREAST CANCER <130> 382657-006WO (105306) <150> 61/293,612 <151> 2010-01-08 <160> 106 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 1 Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr Trp 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 2 Phe Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Ser 1 5 <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 3 Thr Arg Arg Asp Ser Pro Gln Tyr 1 5 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 4 Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 5 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 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aag ctg gaa ata aaa 336 Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 18 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <221> CDS <222> (1)..(354) <400> 18 cag gtt cag ttg cag cag tct gga gct gag ctg atg aag cca ggg gcc 48 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 tca gtg aag ata tcc tgc aag gct act ggc tac aca ttc agt agc tcc 96 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Ser 20 25 30 tgg ata gag tgg tta aaa cag agg cct gga cat ggc ctt gag tgg att 144 Trp Ile Glu Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 gga gag ttt tta cct gga agt ggt agt aca gac tac aat gag aag ttc 192 Gly Glu Phe Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 aag ggc aag gcc aca ttc act gca gac aca tcc tcc gac aca gcc tac 240 Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 atg cta ctc agc agc ctg 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Sequence: Synthetic peptide <400> 49 Lys Ser Leu Arg His Thr Lys Gly Ile Thr Phe 1 5 10 <210> 50 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 50 Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr 1 5 10 <210> 51 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 51 Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr 1 5 <210> 52 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 52 Gln Met Ser 1 <210> 53 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 53 Leu Val Ser 1 <210> 54 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 54 Val Lys Lys Asp Gly Ser His 1 5 <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 55 Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 56 Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Gln Thr 1 5 <210> 57 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 57 Trp Gln Gly Thr His Ser Pro Tyr Thr 1 5 <210> 58 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 58 Gly Val Gly Asp Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val 1 5 10 <210> 59 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 59 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 60 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 60 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Asp Arg Arg Leu Glu Leu Val 35 40 45 Ala Ser Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val 100 105 110 Ser Ser <210> 61 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 61 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 62 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 62 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Arg Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Ile Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 63 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 63 Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Ser Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr 20 25 30 Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 <210> 64 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 64 Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 65 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 65 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly 1 5 10 15 Arg Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Glu Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Ile Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 66 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 66 Gln Leu Ala Leu Thr Gln Ser Ser Ser Ala Ser Phe Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 Ser Ala Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr 20 25 30 Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Ser Leu Lys Pro Pro Lys Tyr Val Met 35 40 45 Glu Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Thr Gly His Gly Ile Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Asp Arg Tyr Leu Ser Ile Ser 65 70 75 80 Asn Ile Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Ile Cys Gly Val Gly Asp 85 90 95 Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 100 105 110 Thr Val Leu 115 <210> 67 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <221> CDS <222> (1)..(351) <400> 67 gaa gtg cag ctg gtg gag tct ggg gga ggc tta gtg aag cct gga ggg 48 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 tcc ctg aaa ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc act ttc act acc tat 96 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 gcc atg tct tgg gtt cgc cag act ccg gag aag agg ctg gag tgg gtc 144 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 gca acc att agt agt ggt ggt act tac acc tac tat cca gac agt gtg 192 Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 aag ggt cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac gcc cta tac 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr 65 70 75 80 ctg caa atg agc agt ctg agg tct gag gac acg gcc atg tat tac tgt 288 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 gca aca cag ggg aat tac tct ttg gac ttc tgg ggc caa ggc acc tct 336 Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 ctc aca gtc tcc tca 351 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 68 <211> 342 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <221> CDS <222> (1)..(342) <400> 68 gag gtg cag ctg gtg gag tct ggg gga ggc ttg gtg cag cct gga ggg 48 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 tcc ctg aaa ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc att ttc agt agc tat 96 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 ggc atg tct tgg gtt cgc cag tct cca gac agg agg ctg gag ttg gtc 144 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Asp Arg Arg Leu Glu Leu Val 35 40 45 gca agt att aat act ttt ggt gat aga acc tat tat cca gac agt gtg 192 Ala Ser Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac acc ctg tac 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ctg caa atg acc agt ctg aag tct gag gac aca gcc att tat tac tgt 288 Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 gca aga ggg acc gga acc tac tgg ggc caa ggc acc act ctc aca gtc 336 Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val 100 105 110 tcc tca 342 Ser Ser <210> 69 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <221> CDS <222> (1)..(351) <400> 69 cag gtc caa ctg cag cag tct ggg gct gaa ctg gtg aag cct ggg gct 48 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 tca gtg aag ttg tcc tgc aag gct tct ggc tac acc ttc acc agc tac 96 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 tat atg tac tgg gtg aag cag agg cct gga caa ggc ctt gag tgg att 144 Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 gga gag att aat cct agc aat ggt ggt act aac ttc aat gag aag ttc 192 Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 aag agc aag gcc aca ctg act gta gac aaa tcc tcc agc aca gca tac 240 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 atg caa ctc agc agc ctg aca tct gag gac tct gcg gtc tat tac tgt 288 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 aca aga ggc ggt tac tac ccc ttt gac tac tgg ggc caa ggc acc act 336 Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 ctc aca gtc tcc tca 351 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 70 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <221> CDS <222> (1)..(363) <400> 70 gat gtg cag ctt cag gag tcg gga cct ggc ctg gtg aaa cct tct cag 48 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 tct ctg tcc ctc aca tgc act gtc act ggc tac tca atc acc agt gat 96 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 tat gcc tgg aat tgg atc cgg cag ttt cca gga aac aaa ctg gag tgg 144 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 atg ggc tac ata agc ttc agt ggt tac act agt tac aac cca tct ctc 192 Met Gly Tyr Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 aaa agt cga atc tct gtc act cgg gac aca tcc agg aac caa ttc ttc 240 Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Arg Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 ctc cag ttg act tct gtg act act gag gac aca gcc aca tat tac tgt 288 Leu Gln Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 gca aga gag gtc aac tat ggg gac tcc tac cac ttt gac tac tgg ggc 336 Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 caa ggc acc att gtc aca gtc tcc tca 363 Gln Gly Thr Ile Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 71 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <221> CDS <222> (1)..(336) <400> 71 gac att gtg atg acg cag gct gca tcc tct aat cca gtc act ctt gga 48 Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Ser Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 aca tcc gct tcc atc tcc tgc agg tct agt aag agt ctc cga cat act 96 Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr 20 25 30 aaa ggc atc act ttt ttg tat tgg tat ctg cag aag cca ggc cag tct 144 Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 cct cag ctc ctg att tat cag atg tcc aac ctt gcc tca gga gtc cca 192 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 gac agg ttc agt agc agt ggg tca gga act gat ttc aca ctg aga atc 240 Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 agc aga gtg gag gct gag gat ttg ggt gtt tat tac tgt gct caa aat 288 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 cta gaa ctt ccg ctc acg ttc ggt gct ggg acc aag ctg gag ctg aaa 336 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 <210> 72 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <221> CDS <222> (1)..(336) <400> 72 gat gtt gtg ctg acc cag act cca ctc act ttg tcg gtt acc att gga 48 Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly 1 5 10 15 caa cca gcc tcc atc tcc tgc aag tca agt cag agc ctc tta gat agt 96 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 gat gga aag aca tat ttg aat tgg ttg tta cag agg cca ggc cag tct 144 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 cca aag cgc cta atc tat ctg gtg tct aaa ctg gac tct gga gtc cct 192 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 gac agg ttc act ggc agt gga tca ggg aca gat ttc aca ctg aaa atc 240 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 agc aga gtg gag gct gag gat ttg gga gtt tat tat tgc tgg caa ggt 288 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 aca cat ttt cct cag acg ttc ggt gga ggc acc aag ctg gaa atc aaa 336 Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 73 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <221> CDS <222> (1)..(336) <400> 73 gat gtt gtg atg acc cag act cca ctc act ttg tcg gtt acc att ggg 48 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly 1 5 10 15 cgc cca gcc tcc atc tct tgc aag tca agt cag agc ctc tta gac agt 96 Arg Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 gat gga aag aca tat ttg tat tgg ttg tta cag agg cca ggc cag tct 144 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 cca aag cgc cta atc tat ctg gtg tct gag ctg gac tct gga gtc cct 192 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Glu Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 gac agg atc act ggc agt ggg tcg ggg aca gat ttc aca ctg aag atc 240 Asp Arg Ile Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 agc aga gtg gag gct gag gat ttg gga gtt tat tat tgc tgg caa gga 288 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 aca cat tct ccg tac acg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa 336 Thr His Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 74 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <221> CDS <222> (1)..(345) <400> 74 caa ctt gcg ctc act cag tca tct tca gcc tct ttc tcc ctg gga gcc 48 Gln Leu Ala Leu Thr Gln Ser Ser Ser Ala Ser Phe Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 tca gca aaa cta acg tgc act ttg agt agt caa cac aga acg tac acc 96 Ser Ala Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr 20 25 30 att gaa tgg tat cag caa cag tca ctc aag cct cct aag tat gtg atg 144 Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Ser Leu Lys Pro Pro Lys Tyr Val Met 35 40 45 gag gtt aag aaa gat gga agc cac agc aca ggt cat ggg att cct gat 192 Glu Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Thr Gly His Gly Ile Pro Asp 50 55 60 cgc ttc tct gga tcc agt tct ggt gct gat cgc tac ctc agc att tcc 240 Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Asp Arg Tyr Leu Ser Ile Ser 65 70 75 80 aac atc cag cct gaa gat gaa gca ata tac atc tgt ggt gtg ggt gat 288 Asn Ile Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Ile Cys Gly Val Gly Asp 85 90 95 gca att aag gga caa tct gtg ttt gtt ttc ggc ggt ggc acc aag gtc 336 Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 100 105 110 act gtc cta 345 Thr Val Leu 115 <210> 75 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 75 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 76 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 76 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr 20 25 30 Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 77 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 77 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 78 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 78 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr 20 25 30 Lys Gly Ile Thr Phe Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 79 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 79 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 80 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 80 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ser <210> 81 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 81 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 82 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 82 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ser <210> 83 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 83 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 84 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 84 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 85 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 85 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 86 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 86 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 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Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 88 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 88 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 89 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 89 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Glu Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 90 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 90 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 91 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 91 Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr 20 25 30 Ile Glu Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met 35 40 45 Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp 85 90 95 Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 100 105 110 Glu Ile Lys 115 <210> 92 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 92 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 93 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 93 Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr 20 25 30 Ile Ala Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met 35 40 45 Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp 85 90 95 Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 100 105 110 Glu Ile Lys 115 <210> 94 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 94 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 95 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 95 Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr 20 25 30 Ile Glu Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met 35 40 45 Glu Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp 85 90 95 Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 100 105 110 Glu Ile Lys 115 <210> 96 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(3) <223> Ahx <400> 96 Cys Xaa Xaa Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly 1 5 10 15 Trp Met Asp Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn 20 25 <210> 97 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(3) <223> Ahx <400> 97 Cys Xaa Xaa Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn 1 5 10 <210> 98 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(12) <223> Ahx <400> 98 Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn Xaa Xaa Cys 1 5 10 <210> 99 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 99 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 100 <211> 101 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 100 Met Gln Arg Leu Cys Val Tyr Val Leu Ile Phe Ala Leu Ala Leu Ala 1 5 10 15 Ala Phe Ser Glu Ala Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala 20 25 30 Pro Leu Gly Thr Gly Ala Asn Arg Asp Leu Glu Leu Pro Trp Leu Glu 35 40 45 Gln Gln Gly Pro Ala Ser His His Arg Arg Gln Leu Gly Pro Gln Gly 50 55 60 Pro Pro His Leu Val Ala Asp Pro Ser Lys Lys Gln Gly Pro Trp Leu 65 70 75 80 Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp Phe Gly Arg Arg Ser 85 90 95 Ala Glu Asp Glu Asn 100 <210> 101 <211> 80 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 101 Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly Thr Gly 1 5 10 15 Ala Asn Arg Asp Leu Glu Leu Pro Trp Leu Glu Gln Gln Gly Pro Ala 20 25 30 Ser His His Arg Arg Gln Leu Gly Pro Gln Gly Pro Pro His Leu Val 35 40 45 Ala Asp Pro Ser Lys Lys Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu 50 55 60 Ala Tyr Gly Trp Met Asp Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn 65 70 75 80 <210> 102 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 102 Gln Leu Gly Pro Gln Gly Pro Pro His Leu Val Ala Asp Pro Ser Lys 1 5 10 15 Lys Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met 20 25 30 Asp Phe <210> 103 <211> 35 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 103 Gln Leu Gly Pro Gln Gly Pro Pro His Leu Val Ala Asp Pro Ser Lys 1 5 10 15 Lys Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met 20 25 30 Asp Phe Gly 35 <210> 104 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104 Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp 1 5 10 15 Phe <210> 105 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 105 Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp 1 5 10 15 Phe Gly <210> 106 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 106 Ser Ala Glu Asp Glu Asn 1 5

Claims (145)

1. 유방암의 치료를 필요로 하는 환자에게 프로가스트린에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 유방암을 치료하는 방법.
   
2. 제 1항에 있어서,
   상기 유방암은 일차 유방암인 방법.
   
3. 제 1항에 있어서,
   상기 유방암은 전이성 유방암인 방법.
   
4. 제 1항에 있어서,
   상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 유방 종양의 외과적 절제 이전에 이루어지는 방법.
   
5. 제 1항에 있어서,
   상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 유방 종양의 외과적 절제 이후에 이루어지는 방법.
   
6. 제 1항에 있어서,
   상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 유방암에 대한 방사선 치료 선량의 투여 이전에 이루어지는 방법.
   
   
7. 제 1항에 있어서,
   상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 유방암에 대한 방사선 치료 선량의 투여 이후에 이루어지는 방법.
   
8. 제 1항에 있어서,
   상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 유방암을 치료하기 위한 화학 요법제의 투여 이전에 이루어지는 방법.
   
9. 제 1항에 있어서,
   상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 유방암을 치료하기 위한 화학 요법제의 투여와 동시에 이루어지는 방법.
   
10. 제 1항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 유방암을 치료하기 위한 화학 요법제의 투여 이후에 이루어지는 방법.
    
11. 제 8항 내지 제 10항의 어느 한 항에 있어서,
    상기 화학 요법제는 폴레이트 안타고니스트, 퓨린 안타고니스트, 피리미딘 안타고니스트, DNA 알킬화제, DNA 가교 약물, 항생제, 백금 착제, 프로테오좀 억제제, 유사분열 방추독소, 토포이소머라제 저해제, 및 타이로신키나아제 저해제로 구성된 화학 요법제의 군에서 선택되는 방법.
    
12. 제 1항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 유방암을 치료하기 위한 호르몬 치료제의 투여 이전에 이루어지는 방법.
    
13. 제 1항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 유방암을 치료하기 위한 호르몬 치료제의 투여와 동시에 이루어지는 것인 방법.
    
14. 제 1항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 유방암을 치료하기 위한 호르몬 치료제의 투여 이후에 이루어지는 방법.
    
15. 제 12항 내지 제 14항의 어느 한 항에 있어서,
    상기 호르몬 치료제는 비칼루타마이드, 플루타마이드, 펄베스트란트, 루프롤라이드 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 타목시펜, 라록시펜, 아나스트로졸, 이그제메스탄 및 레트로졸로 구성된 군에서 선택되는 방법.
    
16. 제 1항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 프로가스트린에 대한 것과 상이한 특이성을 가지는 제 2의 치료 항체의 투여 이전에 이루어지는 방법.
    
17. 제 1항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 프로가스트린에 대한 것과 상이한 특이성을 가지는 제 2의 치료 항체의 투여와 동시에 이루어지는 방법.
    
18. 제 1항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 프로가스트린에 대한 것과 상이한 특이성을 가지는 제 2의 치료 항체의 투여 이후에 이루어지는 방법.
    
19. 제 16항 내지 제 18항의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 2의 항체는 페니투무맵, 베바시쥬맵, 세툭시맵 및 트라스트쥬맵으로 구성된 단일클론항체의 군에서 선택되는 방법.
    
20. 제 16항 내지 제 18항의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 2의 항체는 EGFR, VEGF 및 HER2로 구성된 군에서 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
    
21. 제 1항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체는 다중클론항체, 단일클론항체, 인간화 단일클론항체, 키메라항체, 단일사슬항체, 카멜화 항체, IgAl 항체, IgA2 항체, IgD 항체, IgE 항체, IgGl 항체, IgG2 항체, IgG3 항체, IgG4 항체, 및 IgM 항체로 구성된 군에서 선택되는 방법.
    
22. 제 1항에 있어서,
    상기 항체는 모이어티(moiety)에 결합된 것인 방법.
    
23. 제 22항에 있어서,
    상기 모이어티는 비단백질성인 방법.
    
24. 제 22항에 있어서,
    상기 모이어티는 상기 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 데 효과적인 것인 방법.
    
25. 제 1항에 있어서, 상기 항체는 FcRn에 대한 결합을 증가시키도록 변경된 것인 방법.
    
26. 제 1항에 있어서,
    상기 항체는 적어도 약 0.001 nM 내지 적어도 약 5000 nM의 프로가스트린 결합 친화도를 가지는 방법.
    
27. 제 1항에 있어서,
    상기 조성물은 프로가스트린의 별개의 에피토프에 대한 특이성을 가지는 다수의 항체를 포함하는 방법.
    
28. 제 1항에 있어서,
    상기 프로가스트린 특이적인 항체는 MAbl, MAb2, MAb3, MAb4, MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAblO, MAb11 , MAb12, MAb13, MAb14, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19, MAb20, MAb21, MAb22 및 MAb23로 구성된 군에서 선택되는 단일클론항체인 방법.
    
29. 제 28항에 있어서,
    상기 단일클론항체는 인간화된 것인 방법.
    
30. 제 1항에 있어서,
    상기 프로가스트린 특이적인 항체는 CDR1은 V_H CDR 1.3, V_H CDR 1.4, V_H CDR 1.8, V_H CDR 1.13, V_H CDR 1.16, V_H CDR 1.19로부터 선택되고, CDR2는 V_H CDR 2.3, V_H CDR 2.4, V_H CDR 2.8, V_H CDR 2.13, V_H CDR 2.16, V_H CDR 2.19로부터 선택되며, CDR3는 V_H CDR 3.3, V_H CDR 3.4, V_H CDR 3.8, V_H CDR 3.13, V_H CDR 3.16, V_H CDR 3.19로부터 선택되는 중사슬 가변 영역(V_H)을 포함하는 단일클론항체인 방법.
    
31. 제 1항에 있어서,
    상기 프로가스트린 특이적인 항체는 CDR 1은 V_L CDR 1.3, V_L CDR 1.4, V_L CDR 1.8, V_L CDR 1.13, V_L CDR 1.16, V_L CDR 1.19로부터 선택되고, CDR2는 V_L CDR 2.3, V_L CDR 2.4, V_L CDR 2.8, V_L CDR 2.13, V_L CDR 2.16, V_L CDR 2.19로부터 선택되며, CDR3은 V_L CDR 3.3, V_L CDR 3.4, V_L CDR 3.8, V_L CDR 3.13, V_L CDR 3.16, V_L CDR 3.19로부터 선택되는 경사슬 가변 영역(V_L)을 포함하는 단일클론항체인 방법.
    
32. 제 1항에 있어서,
    상기 항체는 프로가스트린 민감성 유방암 세포의 증식을 감소시킬 수 있는 방법.
    
33. 제 1항에 있어서,
    상기 항체는 프로가스트린 민감성 유방암 세포의 세포사 속도를 증가시킬 수 있는 방법.
    
34. 제 1항에 있어서,
    상기 치료는 치료 대상체에서 유방암 전이의 평균 개수를 감소시키는 데 효과적인 방법.
    
35. 제 1항에 있어서,
    상기 치료는 치료 대상체에서 유방암 전이의 평균 크기를 감소시키는 데 효과적인 방법.
    
36. 제 1항에 있어서,
    상기 치료는 치료 대상체에서 프로가스트린의 혈중 농도를 감소시키는 데 효과적인 방법.
    
37. 제 1항에 있어서,
    상기 항체 조성물은 비경구적 투여, 척추 강내 투여, 정맥 내 투여, 피하 투여, 근육 내 투여, 복강 내 투여, 주입 투여 및 볼루스 투여로 구성되는 군에서 선택되는 투여 형태에 의해 투여되는 방법.
    
38. 제 1항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체는 약 0.001 mg/kg 내지 약 250 mg/kg의 용량으로 투여되는 방법.
    
39. 제 38항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체의 용량은 다수의 시간 간격을 둔 투여로 투여되는 방법.
    
40. 항-프로가스트린 항체의 단위 용량 및 희석액을 포함하는 유방암 치료용 키트.
    
41. 제 40항에 있어서,
    유방암의 치료를 필요로 하는 환자에게 상기 항-프로가스트린 항체를 투여하기 위한 설명서를 추가로 포함하는 키트.
    
42. 유방암의 예방을 필요로 하는 환자에게 프로가스트린에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 유방암을 예방하기 위한 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 유방암을 예방하는 방법.
    
43. 제 42항에 있어서,
    상기 예방되는 유방암은 일차 유방암인 방법.
    
44. 제 42항에 있어서,
    상기 예방되는 유방암은 전이성 유방암인 방법.
    
45. 제 42항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 유방암의 예방에 효과적인 이차 물질의 투여와 동시에 또는 이후에 이루어지는 방법.
    
46. 제 45항에 있어서,
    상기 이차 물질은 유방암의 예방에 효과적인 화학 요법제인 방법.
    
47. 제 46항에 있어서,
    상기 화학 요법제는 폴레이트 안타고니스트, 퓨린 안타고니스트, 피리미딘 안타고니스트, DNA 알킬화제, DNA 가교 약물, 항생제, 백금 착제, 프로테오좀 억제제, 유사분열 방추독소, 토포이소머라제 저해제, 및 타이로신키나아제 저해제로 구성된 화학 요법제의 군에서 선택되는 방법.
    
48. 제 45항에 있어서,
    상기 이차 물질은 유방암의 예방에 효과적인 호르몬 치료제인 방법.
    
49. 제 48항에 있어서,
    상기 호르몬 치료제는 타목시펜, 토레미펜, 라록시펜, 아나스트로졸, 이그제메스탄 및 레트로졸로 구성된 군에서 선택되는 방법.
    
50. 제 42항에 있어서,
    상기 환자는 유방암의 증가된 위험과 연관된 BRCA1 또는 BRCA2 유전자에서 돌연변이를 가지는 방법.
    
51. 제 42항에 있어서,
    상기 이차 물질은 프로가스트린에 대한 것과 상이한 특이성을 가지는 치료 항체인 방법.
    
52. 제 51항에 있어서,
    상기 치료 항체는 트라스트쥬맵인 방법.
    
53. 제 51항에 있어서,
    상기 치료 항체는 HER2에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
    
54. 제 42항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체는 다중클론항체, 단일클론항체, 인간화 단일클론항체, 키메라항체, 단일사슬항체, 카멜화 항체, IgAl 항체, IgA2 항체, IgD 항체, IgE 항체, IgGl 항체, IgG2 항체, IgG3 항체, IgG4 항체, 및 IgM 항체로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.
    
55. 제 42항에 있어서,
    상기 항체는 모이어티에 결합된 것인 방법.
    
56. 제 55항에 있어서,
    상기 모이어티는 비단백질성인 방법.
    
57. 제 55항에 있어서,
    상기 모이어티는 상기 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 데 효과적인 방법.
    
58. 제 42항에 있어서,
    상기 항체는 FcRn에 대한 결합을 증가시키도록 변경된 방법.
    
59. 제 42항에 있어서,
    상기 항체는 적어도 약 0.001 nM 내지 적어도 약 5000 nM의 프로가스트린 결합 친화도를 가지는 방법.
    
60. 제 42항에 있어서,
    상기 조성물은 프로가스트린의 별개의 에피토프에 대한 특이성을 가지는 다수의 항체를 포함하는 방법.
    
61. 제 42항에 있어서,
    상기 프로가스트린 특이적인 항체는 MAbl, MAb2, MAb3, MAb4, MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAblO, MAb11, MAb12, MAb13, MAb14, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19, MAb20, MAb21, MAb22 및 MAb23로 구성된 군에서 선택되는 단일클론항체인 방법.
    
62. 제 61항에 있어서,
    상기 단일클론항체는 인간화된 것인 방법.
    
63. 제 42항에 있어서,
    상기 프로가스트린 특이적인 항체는 CDR1은 V_H CDR 1.3, V_H CDR 1.4, V_H CDR 1.8, V_H CDR 1.13, V_H CDR 1.16, V_H CDR 1.19로부터 선택되고, CDR2는 V_H CDR 2.3, V_H CDR 2.4, V_H CDR 2.8, V_H CDR 2.13, V_H CDR 2.16, V_H CDR 2.19로부터 선택되며, CDR3는 V_H CDR 3.3, V_H CDR 3.4, V_H CDR 3.8, V_H CDR 3.13, V_H CDR 3.16, V_H CDR 3.19로부터 선택되는 중사슬 가변 영역(V_H)을 포함하는 단일클론항체인 방법.
    
64. 제 42항에 있어서,
    상기 프로가스트린 특이적인 항체는 CDR 1은 V_L CDR 1.3, V_L CDR 1.4, V_L CDR 1.8, V_L CDR 1.13, V_L CDR 1.16, V_L CDR 1.19로부터 선택되고, CDR2는 V_L CDR 2.3, V_L CDR 2.4, V_L CDR 2.8, V_L CDR 2.13, V_L CDR 2.16, V_L CDR 2.19로부터 선택되며, CDR3은 V_L CDR 3.3, V_L CDR 3.4, V_L CDR 3.8, V_L CDR 3.13, V_L CDR 3.16, V_L CDR 3.19로부터 선택되는 경사슬 가변 영역(V_L)을 포함하는 단일클론항체인 방법.
    
65. 제 42항에 있어서,
    상기 항체는 프로가스트린 민감성 유방암 세포의 증식을 억제시킬 수 있는 방법.
    
66. 제 42항에 있어서,
    상기 항체는 프로가스트린 민감성 유방암 세포의 세포사 속도를 증가시킬 수 있는 방법.
    
67. 제 42항에 있어서,
    상기 항체의 투여는 치료 대상체에서 프로가스트린의 혈중 농도를 감소시키는 데 효과적인 방법.
    
68. 제 42항에 있어서,
    상기 항체 조성물은 비경구적 투여, 척추 강내 투여, 정맥 내 투여, 피하 투여, 근육 내 투여, 복강 내 투여, 주입 투여 및 볼루스 투여로 구성되는 군에서 선택되는 투여 형태에 의해 투여되는 방법.
    
69. 제 42항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체는 약 0.001 mg/kg 내지 약 250 mg/kg의 용량으로 투여되는 방법.
    
70. 제 69항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체의 용량은 다수의 시간 간격을 둔 투여로 투여되는 것인 방법.
    
71. 유방암 재발의 예방을 필요로 하는 환자에게 프로가스트린에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 유방암 재발을 예방하기 위한 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는, 상기 유방암은 프로가스트린 민감성인 유방암 재발을 예방하는 방법.
    
72. 제 71항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 유방암 재발의 예방에 효과적인 이차 물질의 투여와 동시에 또는 이후에 이루어지는 방법.
    
73. 제 72항에 있어서,
    상기 이차 물질은 프로가스트린에 대한 것과 상이한 특이성을 가지는 치료 항체인 방법.
    
74. 제 71항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체는 다중클론항체, 단일클론항체, 인간화 단일클론항체, 키메라항체, 단일사슬항체, 카멜화 항체, IgAl 항체, IgA2 항체, IgD 항체, IgE 항체, IgGl 항체, IgG2 항체, IgG3 항체, IgG4 항체, 및 IgM 항체로 구성된 군에서 선택되는 방법.
    
75. 제 71항에 있어서,
    상기 항체는 모이어티에 결합된 것인 방법.
    
76. 제 75항에 있어서,
    상기 모이어티는 비단백질성인 방법.
    
77. 제 5항에 있어서,
    상기 모이어티는 상기 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 데 효과적인 방법.
    
78. 제 71항에 있어서,
    상기 항체는 FcRn에 대한 결합을 증가시키도록 변경된 방법.
    
79. 제 71항에 있어서,
    상기 항체는 적어도 약 0.001 nM 내지 적어도 약 5000 nM의 프로가스트린 결합 친화도를 가지는 방법.
    
80. 제 71항에 있어서,
    상기 조성물은 프로가스트린의 별개의 에피토프에 대한 특이성을 가지는 다수의 항체를 포함하는 방법.
    
81. 제 71항에 있어서,
    상기 프로가스트린 특이적인 항체는 MAbl , MAb2, MAb3, MAb4, MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAblO, MAb11, MAb12, MAb13, MAb14, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19, MAb20, MAb21, MAb22 및 MAb23로 구성된 군에서 선택되는 단일클론항체인 방법.
    
82. 제 81항에 있어서,
    상기 단일클론항체는 인간화된 것인 방법.
    
83. 제 71항에 있어서,
    상기 프로가스트린 특이적인 항체는 CDR1은 V_H CDR 1.3, V_H CDR 1.4, V_H CDR 1.8, V_H CDR 1.13, V_H CDR 1.16, V_H CDR 1.19로부터 선택되고, CDR2는 V_H CDR 2.3, V_H CDR 2.4, V_H CDR 2.8, V_H CDR 2.13, V_H CDR 2.16, V_H CDR 2.19로부터 선택되며, CDR3는 V_H CDR 3.3, V_H CDR 3.4, V_H CDR 3.8, V_H CDR 3.13, V_H CDR 3.16, V_H CDR 3.19로부터 선택되는 중사슬 가변 영역(V_H)을 포함하는 단일클론항체인 방법.
    
84. 제 71항에 있어서,
    상기 프로가스트린 특이적인 항체는 CDR 1은 V_L CDR 1.3, V_L CDR 1.4, V_L CDR 1.8, V_L CDR 1.13, V_L CDR 1.16, V_L CDR 1.19로부터 선택되고, CDR2는 V_L CDR 2.3, V_L CDR 2.4, V_L CDR 2.8, V_L CDR 2.13, V_L CDR 2.16, V_L CDR 2.19로부터 선택되며, CDR3은 V_L CDR 3.3, V_L CDR 3.4, V_L CDR 3.8, V_L CDR 3.13, V_L CDR 3.16, V_L CDR 3.19로부터 선택되는 경사슬 가변 영역(V_L)을 포함하는 단일클론항체인 방법.
    
85. 제 71항에 있어서,
    상기 항체는 프로가스트린 민감성 유방암 세포의 증식을 억제시킬 수 있는 방법.
    
86. 제 71항에 있어서,
    상기 항체는 프로가스트린 민감성 유방암 세포의 세포사 속도를 증가시킬 수 있는 방법.
    
87. 제 71항에 있어서,
    상기 항체의 투여는 치료 대상체에서 프로가스트린의 혈중 농도를 감소시키는 데 효과적인 방법.
    
88. 제 71항에 있어서,
    상기 항체 조성물은 비경구적 투여, 척추 강내 투여, 정맥 내 투여, 피하 투여, 근육 내 투여, 복강 내 투여, 주입 투여 및 볼루스 투여로 구성되는 군에서 선택되는 투여 형태에 의해 투여되는 방법.
    
89. 제 71항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체는 약 0.001 mg/kg 내지 약 250 mg/kg의 용량으로 투여되는 방법.
    
90. 제 89항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체의 용량은 다수의 시간 간격을 둔 투여로 투여되는 것인 방법.
    
91. 제 71항에 있어서,
    상기 환자는 이전에 유방암 치료를 받았고, 상기 치료 이후에 상기 유방암이 명시적으로 사라진 것인 방법.
    
92. 제 91항에 있어서,
    상기 치료는 외과 수술, 방사선 치료, 생물학적 치료, 면역 치료, 호르몬 치료 및 화학 치료로 구성된 군에서 선택되는 방법.
    
93. 유방암 줄기세포의 성장의 억제를 필요로 하는 환자에게 프로가스트린에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 유방암 줄기세포를 억제하기 위한 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는, 상기 유방암 줄기세포는 프로가스트린 민감성인 환자에서 유방암 줄기세포의 성장을 억제하는 방법.
    
94. 제 93항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체 조성물을 투여하는 단계는 유방암 줄기세포의 성장의 억제에 효과적인 이차 물질의 투여와 동시에 또는 이후에 이루어지는 방법.
    
95. 제 94항에 있어서,
    상기 이차 물질은 프로가스트린에 대한 것과 상이한 특이성을 가지는 치료 항체인 방법.
    
96. 제 93항에 있어서,
    상기 항-프로가스트린 항체는 다중클론항체, 단일클론항체, 인간화 단일클론항체, 키메라항체, 단일사슬항체, 카멜화 항체, IgAl 항체, IgA2 항체, IgD 항체, IgE 항체, IgGl 항체, IgG2 항체, IgG3 항체, IgG4 항체, 및 IgM 항체로 구성된 군에서 선택되는 방법.
    
97. 제 93항에 있어서,
    상기 항체는 모이어티에 결합된 것인 방법.
    
98. 제 97항에 있어서,
    상기 모이어티는 비단백질성인 방법.
    
99. 제 97항에 있어서
    상기 모이어티는 상기 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 데 효과적인 방법.
    
100. 제 93항에 있어서,
     상기 항체는 FcRn에 대한 결합을 증가시키도록 변경된 방법.
     
101. 제 93항에 있어서,
     상기 항체는 적어도 약 0.001 nM 내지 적어도 약 5000 nM의 프로가스트린 결합 친화도를 가지는 방법.
     
102. 제 93항에 있어서,
     상기 조성물은 프로가스트린의 별개의 에피토프에 대한 특이성을 가지는 다수의 항체를 포함하는 방법.
     
103. 제 93항에 있어서,
     상기 프로가스트린 특이적인 항체는 MAbl, MAb2, MAb3, MAb4, MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAblO, MAb11, MAb12, MAb13, MAb14, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19, MAb20, MAb21, MAb22 및 MAb23로 구성된 군에서 선택되는 단일클론항체인 방법.
     
104. 제 103항에 있어서,
     상기 단일클론항체는 인간화된 것인 방법.
     
105. 제 93항에 있어서,
     상기 프로가스트린 특이적인 항체는 CDR1은 V_H CDR 1.3, V_H CDR 1.4, V_H CDR 1.8, V_H CDR 1.13, V_H CDR 1.16, V_H CDR 1.19로부터 선택되고, CDR2는 V_H CDR 2.3, V_H CDR 2.4, V_H CDR 2.8, V_H CDR 2.13, V_H CDR 2.16, V_H CDR 2.19로부터 선택되며, CDR3는 V_H CDR 3.3, V_H CDR 3.4, V_H CDR 3.8, V_H CDR 3.13, V_H CDR 3.16, V_H CDR 3.19로부터 선택되는 중사슬 가변 영역(V_H)을 포함하는 단일클론항체인 방법.
     
106. 제 93항에 있어서,
     상기 프로가스트린 특이적인 항체는 CDR 1은 V_L CDR 1.3, V_L CDR 1.4, V_L CDR 1.8, V_L CDR 1.13, V_L CDR 1.16, V_L CDR 1.19로부터 선택되고, CDR2는 V_L CDR 2.3, V_L CDR 2.4, V_L CDR 2.8, V_L CDR 2.13, V_L CDR 2.16, V_L CDR 2.19로부터 선택되며, CDR3은 V_L CDR 3.3, V_L CDR 3.4, V_L CDR 3.8, V_L CDR 3.13, V_L CDR 3.16, V_L CDR 3.19로부터 선택되는 경사슬 가변 영역(V_L)을 포함하는 단일클론항체인 방법.
     
107. 제 93항에 있어서,
     상기 항체의 투여는 치료 대상체에서 프로가스트린의 혈중 농도를 감소시키는 데 효과적인 방법.
     
108. 제 93항에 있어서,
     상기 항체 조성물은 비경구적 투여, 척추 강내 투여, 정맥 내 투여, 피하 투여, 근육 내 투여, 복강 내 투여, 주입 투여 및 볼루스 투여로 구성되는 군에서 선택되는 투여 형태에 의해 투여되는 방법.
     
109. 제 71항에 있어서,
     상기 항-프로가스트린 항체는 약 0.001 mg/kg 내지 약 250 mg/kg의 용량으로 투여되는 방법.
     
110. 제 109항에 있어서,
     상기 항-프로가스트린 항체의 용량은 다수의 시간 간격을 둔 투여로 투여되는 방법.
     
111. (i) 유방암 치료 이전에 환자로부터 수득한 제 1 시료에서 프로가스트린의 농도를 결정하는 단계; 및
     (ii) 제 1 시료 내 프로가스트린의 농도를 유방암 치료 이후에 동일한 환자로부터 수득한 제 2 시료 내 프로가스트린의 농도와 비교하는 단계를 포함하고, 상기 제 1 시료와 비교하여 제 2 시료 내 프로가스트린의 농도의 감소는 상기 치료가 효과적임을 나타내는 것인 환자에서 유방암 치료의 효과를 모니터링하는 방법.
     
112. 제 111항에 있어서,
     상기 시료는 체액으로부터 수득한 것인 방법.
     
113. 제 112항에 있어서,
     상기 체액은 혈액, 혈청 및 혈장으로 구성된 군에서 선택되는 방법.
     
114. 제 111항에 있어서,
     상기 시료는 유방 종양의 생검으로부터 수득된 것인 방법,
     
115. 제 111항에 있어서,
     상기 유방암 치료는 외과 수술, 방사선 치료, 생물학적 치료, 면역 치료, 호르몬 치료 및 항체 치료로 구성된 군에서 선택되는 방법.
     
116. 제 111항에 있어서,
     상기 제 1 시료에서 프로가스트린의 농도를 결정하는 단계는 프로가스트린에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하는 검출법을 이용하는 데 효과적인 방법.
     
117. 제 116항에 있어서,
     상기 항체는 비-중화인 방법.
     
118. 제 116항에 있어서,
     상기 항체는 다중클론항체, 단일클론항체, 인간화 단일클론항체, 키메라항체, 단일사슬항체, 카멜화 항체, IgAl 항체, IgA2 항체, IgD 항체, IgE 항체, IgGl 항체, IgG2 항체, IgG3 항체, IgG4 항체, 및 IgM 항체로 구성된 군에서 선택되는 방법.
     
119. 제 116항에 있어서,
     상기 항체는 적어도 약 0.001 nM 내지 적어도 약 5000 nM의 프로가스트린 결합 친화도를 가지는 방법.
     
120. 제 116항에 있어서,
     상기 조성물은 프로가스트린의 별개의 에피토프에 대한 특이성을 가지는 다수의 항체를 포함하는 방법.
     
121. 제 116항에 있어서,
     상기 프로가스트린 특이적인 항체는 MAbl, MAb2, MAb3, MAb4, MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAblO, MAb11, MAb12, MAb13, MAb14, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19, MAb20, MAb21, MAb22 및 MAb23로 구성된 군에서 선택되는 단일클론항체인 방법.
     
122. 제 116항에 있어서,
     상기 프로가스트린 특이적인 항체는 CDR1은 V_H CDR 1.3, V_H CDR 1.4, V_H CDR 1.8, V_H CDR 1.13, V_H CDR 1.16, V_H CDR 1.19로부터 선택되고, CDR2는 V_H CDR 2.3, V_H CDR 2.4, V_H CDR 2.8, V_H CDR 2.13, V_H CDR 2.16, V_H CDR 2.19로부터 선택되며, CDR3는 V_H CDR 3.3, V_H CDR 3.4, V_H CDR 3.8, V_H CDR 3.13, V_H CDR 3.16, V_H CDR 3.19로부터 선택되는 중사슬 가변 영역(V_H)을 포함하는 단일클론항체인 방법.
     
123. 제 116항에 있어서,
     상기 프로가스트린 특이적인 항체는 CDR 1은 V_L CDR 1.3, V_L CDR 1.4, V_L CDR 1.8, V_L CDR 1.13, V_L CDR 1.16, V_L CDR 1.19로부터 선택되고, CDR2는 V_L CDR 2.3, V_L CDR 2.4, V_L CDR 2.8, V_L CDR 2.13, V_L CDR 2.16, V_L CDR 2.19로부터 선택되며, CDR3은 V_L CDR 3.3, V_L CDR 3.4, V_L CDR 3.8, V_L CDR 3.13, V_L CDR 3.16, V_L CDR 3.19로부터 선택되는 경사슬 가변 영역(V_L)을 포함하는 단일클론항체인 방법.
     
124. 제 116항에 있어서,
     상기 검출법은 방사선면역검정법(RIA) 또는 효소결합면역흡착법(ELISA)인 방법.
     
125. (i) 유방암을 가지는 것으로 의심되는 환자로부터 수득한 시료에서 프로가스트린의 농도를 결정하는 단계; 및
     (ii) 상기 시료 내 프로가스트린의 농도를 미리 결정된 수치와 비교하는 단계를 포함하고, 미리 결정된 수치와 비교하여 시료 내 프로가스트린의 상승된 수준은 상기 환자에서 유방암의 존재를 나타내는 것인 환자에서 유방암의 존재를 진단하는 방법.
     
126. 제 125항에 있어서,
     상기 시료는 체액으로부터 수득한 것인 방법.
     
127. 제 126항에 있어서,
     상기 체액은 혈액, 혈청 및 혈장으로 구성된 군에서 선택되는 방법.
     
128. 제 125항에 있어서,
     상기 제 1 시료에서 프로가스트린의 농도를 결정하는 단계는 프로가스트린에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하는 검출법을 이용하는 데 효과적인 방법.
     
129. 제 128항에 있어서,
     상기 항체는 비-중화인 방법.
     
130. 제 128항에 있어서,
     상기 항체는 다중클론항체, 단일클론항체, 인간화 단일클론항체, 키메라항체, 단일사슬항체, 카멜화 항체, IgAl 항체, IgA2 항체, IgD 항체, IgE 항체, IgGl 항체, IgG2 항체, IgG3 항체, IgG4 항체, 및 IgM 항체로 구성된 군에서 선택되는 방법.
     
131. 제 128항에 있어서,
     상기 항체는 적어도 약 0.001 nM 내지 적어도 약 5000 nM의 프로가스트린 결합 친화도를 가지는 방법.
     
132. 제 128항에 있어서,
     상기 조성물은 프로가스트린의 별개의 에피토프에 대한 특이성을 가지는 다수의 항체를 포함하는 방법.
     
133. 제 128항에 있어서,
     상기 프로가스트린 특이적인 항체는 MAbl, MAb2, MAb3, MAb4, MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAblO, MAb11, MAb12, MAb13, MAb14, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19, MAb20, MAb21, MAb22 및 MAb23로 구성된 군에서 선택되는 단일클론항체인 방법.
     
134. 제 128항에 있어서,
     상기 프로가스트린 특이적인 항체는 CDR1은 V_H CDR 1.3, V_H CDR 1.4, V_H CDR 1.8, V_H CDR 1.13, V_H CDR 1.16, V_H CDR 1.19로부터 선택되고, CDR2는 V_H CDR 2.3, V_H CDR 2.4, V_H CDR 2.8, V_H CDR 2.13, V_H CDR 2.16, V_H CDR 2.19로부터 선택되며, CDR3는 V_H CDR 3.3, V_H CDR 3.4, V_H CDR 3.8, V_H CDR 3.13, V_H CDR 3.16, V_H CDR 3.19로부터 선택되는 중사슬 가변 영역(V_H)을 포함하는 단일클론항체인 방법.
     
135. 제 128항에 있어서,
     상기 프로가스트린 특이적인 항체는 CDR 1은 V_L CDR 1.3, V_L CDR 1.4, V_L CDR 1.8, V_L CDR 1.13, V_L CDR 1.16, V_L CDR 1.19로부터 선택되고, CDR2는 V_L CDR 2.3, V_L CDR 2.4, V_L CDR 2.8, V_L CDR 2.13, V_L CDR 2.16, V_L CDR 2.19로부터 선택되며, CDR3은 V_L CDR 3.3, V_L CDR 3.4, V_L CDR 3.8, V_L CDR 3.13, V_L CDR 3.16, V_L CDR 3.19로부터 선택되는 경사슬 가변 영역(V_L)을 포함하는 단일클론항체인 방법.
     
136. 제 128항에 있어서,
     상기 검출법은 방사선면역검정법(RIA) 또는 효소결합면역흡착법(ELISA)인 방법.
     
137. 제 125항에 있어서,
     상기 방법은 유방암의 존재를 확인하기 위하여 상기 대상체에 대한 진단 시험을 수행하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
     
138. 제 137항에 있어서,
     상기 진단 시험은 유방암을 발견하기 위한 예비 수술, 유방암을 발견하기 위한 의학 영상 테스트, 상기 환자로부터 수득한 샘플 내에서 유방암의 존재를 나타내는 인자의 존재에 대한 테스트 및 유방암 발병성을 검출하기 위한 유전자 테스트로 구성된 군에서 선택되는 방법.
     
139. 제 138항에 있어서,
     상기 의학 영상 테스트는 유방조영상인 방법.
     
140. 제 138항에 있어서,
     상기 유방암 발병성을 검출하기 위한 유전자 테스트는 BRCAl 또는 BRCA2 유전자 내의 돌연변이 검출용 유전자 테스트인 방법.
     
141. 제 125항에 있어서,
     상기 환자는 유방암 이전에 치료를 받았고 상기 시료가 수득되는 당시에 차도가 있는 것인 방법.
     
142. 제 141항에 있어서,
     상기 암은 이전에 치료를 받았던 동일한 유방에서 재발한 것인 방법.
     
143. 제 141항에 있어서,
     상기 암은 이전에 치료를 받았던 유방과 반대의 유방에서 재발한 것인 방법.
     
144. 제 125항에 있어서,
     상기 미리 결정된 수치는 유방암이 없는 인간 구성원으로부터 수득한 동일 유형의 시료 내의 평균 프로가스트린 농도에 기초하는 방법.
     
145. 제 125항에 있어서,
     상기 미리 결정된 수치는 상기 환자가 유방암이 없었을 때 상기 환자로부터 수득한 동일 유형의 시료 내의 과거의 평균 프로가스트린 농도에 기초하는 방법.

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