ES2281099T3

ES2281099T3 - Construcciones para injertos a base de tejidos submucosos, dotados de perforaciones.

Info

Publication number: ES2281099T3
Application number: ES97917752T
Authority: ES
Inventors: Bryan Whitson; Boyle Cheng; Stephen F. Badylak
Original assignee: METHODIST HEALTH GROUP Inc; Purdue Research Foundation
Current assignee: METHODIST HEALTH GROUP Inc; Purdue Research Foundation
Priority date: 1996-04-05
Filing date: 1997-03-31
Publication date: 2007-09-16
Anticipated expiration: 2017-03-31
Also published as: ATE352266T1; US5997575A; JP4510939B2; EP0891165A4; AU2599997A; DE69737285D1; JP2007289734A; US5968096A; JP2000508202A; EP0891165B1; US5755791A; AU710788B2; DE69737285T2; AR006540A1; EP0891165A1; WO1997037614A1

Abstract

SE DESCRIBEN UNA CONSTRUCCION DE INJERTOS TISULARES MULTI LAMINARES, UNITARIOS Y PERFORADOS Y EL PROCEDIMIENTO PARA PREPARAR DICHA CONSTRUCCION. EL PROCEDIMIENTO COMPRENDE LA SUPERPOSICION DE TIRAS DE TEJIDO SUBMUCOSO CON OTRAS TIRAS DEL MISMO TEJIDO COMPRIMIENDO AL MENOS LAS PORCIONES SUPERPUESTAS DE LAS CITADAS TIRAS ENTRE DOS SUPERFICIES, EN CONDICIONES QUE PERMITAN O FOMENTEN LA DESHIDRATACION DE LAS LAMINAS SUBMUCOSAS COMPRIMIDAS, PERFORANDOSE LA CONSTRUCCION UNITARIA RESULTANTE DE INJERTO TISULAR. LAS COMPOSICIONES DE INJERTOS TISULARES PERFORADAS TIENEN PROPIEDADES MECANICAS Y DE REMODELADO SUPERIORES EN RELACION CON LOS INJERTOS TISULARES SUBMUCOSOS NO PERFORADOS.

Description

Construcciones para injertos a base de tejidos submucosos, dotados de perforaciones.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a construcciones para injertos a base de tejidos útiles para la estimulación de la regeneración y curación de estructuras de tejidos dañados o enfermos. De manera más particular, la presente invención se dirige a construcciones para injertos a base de tejidos submucosos, dotados de perforaciones, conformados a partir de tejido submucoso de vertebrados de sangre caliente y se refiere asimismo a un procedimiento para la obtención de dichas construcciones.

Antecedentes y características de la invención

Se sabe que las composiciones que comprenden la túnica submucosa delaminada a partir de la túnica muscular y como mínimo de la parte luminal de la túnica mucosa del intestino de los vertebrados de sangre caliente pueden ser utilizadas como materiales de injerto de tejido. Véanse, por ejemplo, las Patentes U.S.A. Nº 4.902.508 y 5.281.422. Las composiciones descritas en dichas Patentes se caracterizan por propiedades mecánicas excelentes, incluyendo alta adaptabilidad, un elevado punto de presión de reventamiento, y un índice de porosidad efectivo que permiten la utilización de dichas composiciones de forma beneficiosa para las construcciones para injertos vasculares y en aplicaciones de sustitución del tejido conectivo. Cuando son utilizadas en dichas aplicaciones, las construcciones para injertos submucosos parecen servir como una matriz para la regeneración de los tejidos sustituidos por las construcciones para injertos. También, de manera significativa, en 600 implantes cruzados entre especies, las composiciones de injerto de derivados de la submucosa no han mostrado en ningún caso que den lugar a reacciones de rechazo al injerto de tejido.

Las matrices derivadas de la submucosa adecuadas para la utilización de acuerdo con la presente invención son matrices biodegradables a base de colágeno que incluyen colágenos altamente conservados, glucoproteínas, proteoglucanos, y glucosaminoglucanos en sus configuraciones y concentraciones naturales. Una matriz de colágeno extracelular para la utilización en esta invención es el tejido submucoso de los vertebrados de sangre caliente. El tejido submucoso puede obtenerse a partir de diversas fuentes, por ejemplo, tejido intestinal cultivado a partir de animales criados para la producción de carne, tal como porcinos, ganado vacuno y ovejas u otros vertebrados de sangre caliente. El tejido submucoso de los vertebrados es un abundante subproducto de las operaciones de producción comercial de carnes, y resulta en consecuencia un material de injerto de tejidos de bajo coste.

Una limitación de las construcciones para injertos submucosos descritas en las patentes mencionadas anteriormente es que el tamaño del injerto está restringido por el tamaño del material de partida a partir del que se prepara el tejido submucoso. Por ejemplo, el tamaño de un injerto de tejido submucoso preparado a partir de tejidos intestinales está limitado por la longitud y perímetro de los segmentos originales del tejido intestinal. Sin embargo, varias aplicaciones de las construcciones para injertos a base de tejido submucoso, que comprenden la reparación de hernias, injertos de piel, cubiertas meníngeas, reparación de gastrosquisis (defectos estomacales congénitos) y sustitución de tejido de órganos, con frecuencia precisan láminas de material de injerto de grandes dimensiones que se pueden preparar directamente a partir de fuentes naturales.

Es posible preparar láminas de tejido submucoso de grandes dimensiones a partir de pequeños segmentos de tejido submucoso mediante técnicas convencionales, tales como tejido, tricotado o mediante la utilización de adhesivos. No obstante, la implementación comercial de dichas técnicas con frecuencia resulta poco práctica y costosa. Además, la utilización de adhesivos o tratamiento químico previo para promover la adhesión de las tiras de tejido puede comprometer las propiedades biotrópicas de los injertos submucosos. Por lo tanto, existe necesidad de una construcción para injertos a base de tejido submucoso de bajo coste, de fácil fabricación y área de superficie de gran tamaño que conserve sus propiedades biotrópicas.

Según una realización de la presente solicitud, las construcciones para injertos a base de tejido submucoso con áreas de superficie de gran tamaño se conforman a partir de múltiples fragmentos de matrices derivadas de la submucosa de vertebrados. Los elementos laminares unitarios (es decir, construcciones para injertos de un solo fragmento) de tejido submucoso se preparan según la presente invención, fusionando entre sí múltiples tiras de tejido submucoso hasta conformar una lámina de tejido con un área de superficie de mayores dimensiones que cualquiera de las tiras componentes del tejido submucoso. El proceso comprende las fases de superposición de una parte como mínimo de una tira de tejido submucoso con una parte como mínimo de otra tira de tejido submucoso, y la aplicación de una presión como mínimo a dichas partes superpuestas en condiciones que permitan la deshidratación del tejido submucoso y la perforación como mínimo de las partes superpuestas de tejido submucoso. En las condiciones mencionadas, las partes superpuestas se "fusionarán" para conformar un elemento laminar unitario de tejido de gran tamaño. Estas construcciones para injertos con áreas de superficie de gran tamaño consisten de manera esencial en tejido submucoso, libre de adhesivos y tratamientos químicos previos potencialmente comprometedores, y tienen un área de superficie de mayor tamaño y una resistencia mecánica mayor que las tiras individuales utilizadas para conformar la construcción para injertos.

Las tiras individuales de tejido submucoso preparadas a partir de los tejidos de vertebrados de sangre caliente presentan propiedades mecánicas que son direccionalmente específicas (es decir, las propiedades físicas varían a lo largo de los distintos ejes del tejido). Estas características direccionales vienen determinadas principalmente por la orientación del colágeno dentro del tejido. Las fibras de colágeno representan los constituyentes de soporte de carga del interior del tejido submucoso intestinal y se encuentran predominantemente orientados de forma paralela al eje del lumen intestinal. Esta distribución longitudinal de colágeno en el tejido submucoso intestinal contribuye a la variabilidad direccional de las propiedades físicas de las construcciones de tejido submucoso.

Se pueden preparar construcciones para injertos de láminas múltiples pseudoisotrópicas a partir de múltiples tiras de tejido submucoso. El término "pseudoisotrópico", según se utiliza en el presente documento, describe un material de injerto con propiedades físicas aproximadamente similares a lo largo de cada eje del material de injerto. Estas construcciones para injertos de láminas múltiples pseudoisotrópicas se preparan a partir de tiras individuales de tejido submucoso o láminas de tejido submucoso compuestas por tiras de tejido submucoso. El procedimiento de preparación de las construcciones para injertos pseudoisotrópicas consiste en superponer una parte de una primera tira (o lámina) con una segunda tira (o lámina), estando la segunda tira (o lámina) orientada en un plano paralelo a la primera tira (o lámina), pero girada de forma que el eje longitudinal de la primera tira (o lámina) forme un ángulo relativo al eje longitudinal de la segunda tira (o lámina). Se pueden añadir tiras (o láminas) adicionales de forma similar con el fin de crear una estructura de láminas múltiples con un número deseado de capas de láminas. A continuación, las tiras (o láminas) submucosas individuales se fusionan entre sí conformando una construcción pseudoisotrópica unitaria de láminas múltiples aplicando presión como mínimo sobre las partes superpuestas de tejido submucoso.

Características de la invención

La presente invención se dirige a una construcción para injertos a base de tejido submucoso y a un procedimiento para la preparación de dicha construcción del tipo expuesto en las reivindicaciones 1 y 14 adjuntas. La mejora consiste en practicar una pluralidad de perforaciones en las construcciones para injertos a base de tejido submucoso. Las perforaciones permiten que los fluidos extracelulares atraviesen el material de injerto de tejido, disminuyendo la retención de fluidos dentro del injerto y mejorando las propiedades de remodelado de los injertos de tejido. La perforación del tejido submucoso resulta beneficiosa de manera especial para las construcciones de láminas múltiples de injerto de tejidos, en las cuales las mencionadas perforaciones mejoran además la fuerza adhesiva entre las capas
adyacentes.

Breve descripción de las figuras

Las figuras 1a-c son una representación esquemática de una construcción para injertos homolaminar conformada a partir de múltiples tiras de tejido submucoso.

Las figuras 2a-c son una representación esquemática de una construcción para injertos heterolaminar pseudoisotrópica conformada a partir de cuatro tiras de tejido submucoso.

Las figuras 3a-c son una representación esquemática de una construcción para injertos heterolaminar pseudoisotrópica conformada a partir de tres láminas de tejido submucoso, en la que cada lámina está formada por múltiples tiras de tejido submucoso.

La figura 4 es una representación esquemática de un dispositivo adecuado para practicar perforaciones en los injertos de tejido submucoso según la presente invención.

Descripción detallada de las realizaciones preferentes

Se da a conocer, según esta invención, una construcción perfeccionada de injerto de tejido submucoso, comprendiendo la construcción perfeccionada un injerto de tejido submucoso con una pluralidad de perforaciones distribuidas a lo largo del injerto. En las realizaciones preferentes, las perforaciones poseen un tamaño uniforme y se encuentran distribuidas de manera uniforme a lo largo de toda la superficie del injerto. Además, la presente invención da a conocer un procedimiento para la preparación de construcciones para injertos a base de tejidos submucosales dotados de perforaciones.

El tejido submucoso adecuado para su utilización en la conformación de las presentes construcciones para injertos comprenden proteínas de matriz extracelular, glucoproteínas y otros factores asociados de forma natural. Una fuente de tejido submucoso es el tejido intestinal de los vertebrados de sangre caliente. El tejido del intestino delgado es una fuente preferente de tejido submucoso para la utilización en la presente invención.

El tejido submucoso intestinal adecuado comprende de manera típica la túnica submucosa delaminada a partir de la túnica muscular y como mínimo la parte luminal de la túnica mucosa. En una realización de la presente invención, el tejido intestinal submucoso comprende la túnica submucosa y las partes basilares de la túnica mucosa, incluyendo la mucosa muscular laminar y el stratum compactum, siendo sabido que dichas capas varían de espesor y en su definición dependiendo de la especie vertebrada fuente.

La preparación del tejido submucoso para la utilización de acuerdo con la presente invención se encuentra descrita en la Patente U.S.A. Nº 4.902.508.

Un segmento de intestino de vertebrado, de manera preferente cultivado a partir de especies porcina, ovina o bovina, pero sin excluir otras especies, se somete a abrasión utilizando un movimiento de limpieza longitudinal para eliminar las capas exteriores, que comprenden tejidos musculares lisos, y la capa más interior, es decir, la parte luminal de la túnica mucosa. El tejido submucoso se aclara con solución salina y de manera opcional se esteriliza.

Las construcciones para injertos a base de tejido submucoso de láminas múltiples de la presente invención pueden esterilizarse utilizando técnicas de esterilización de tipo convencional, incluyendo el curtido con glutaraldehído, el curtido con formaldehído en pH ácido, el tratamiento con óxido de propileno o con óxido de etileno, la esterilización con gas plasma, radiación gamma o haz de electrones, y la esterilización con ácido peracético. Resultan preferentes las técnicas de esterilización que no tienen un efecto adverso sobre la resistencia mecánica, la estructura y las propiedades biotrópicas del tejido submucoso. Por ejemplo, la radiación gamma fuerte puede producir la pérdida de resistencia de las láminas de tejido submucoso. Las técnicas de esterilización preferentes incluyen la exposición del injerto a ácido peracético, irradiación gamma de 1 - 4 Mrads (de manera más preferente 1 - 2,5 Mrads de irradiación gamma), tratamiento con óxido de etileno o esterilización con gas plasma; la esterilización con ácido peracético es el procedimiento de esterilización más preferente. De manera típica, el tejido submucoso se somete a dos o más procesos de esterilización. Después que el tejido submucoso es esterilizado, por ejemplo, mediante un tratamiento químico, el tejido puede ser envuelto en un plástico o funda laminar y esterilizado nuevamente utilizando técnicas de esterilización de irradiación con haz de electrones o radiación gamma.

El tejido submucoso puede almacenarse en un estado hidratado o deshidratado. El tejido submucoso liofilizado o secado por aire puede hidratarse nuevamente y utilizarse de acuerdo con la presente invención sin una pérdida significativa de sus propiedades biotrópicas y mecánicas.

Las láminas flexibles de tejido submucoso con áreas de superficie de gran tamaño están formadas por múltiples tiras de tejido submucoso. Las dimensiones de las tiras individuales de tejido submucoso utilizadas no resultan críticas y el término "tira de tejido submucoso" se define en el presente documento de modo que incluya el tejido submucoso procedente de una o más fuentes u órganos de vertebrados con una amplia diversidad de tamaños y formas. En una realización, las tiras se conforman a partir de un segmento delaminado de tejido intestinal que de forma opcional, pero preferentemente, se corta y se extiende para conseguir tiras alargadas de tejido submucoso con dos lados, generalmente paralelos, y extremos opuestos. El término "lámina de tejido submucoso" se define en el presente documento de forma que incluya construcciones de tejido que comprenden múltiples tiras de tejido submucoso, estando las tiras superpuestas de manera que conformen una construcción con un área de superficie mayor que cualquiera de las láminas individuales utilizadas para conformar dicha construcción. El término "capas de tejido submucoso" se refiere a la lámina individual de una construcción de tejido submucoso de láminas múltiples.

Las láminas unitarias de tejido submucoso con áreas de superficie de gran tamaño se conforman superponiendo tiras de tejido submucoso individuales y aplicando presión sobre las partes superpuestas para fusionar los tejidos entre sí. La presión se aplica sobre el tejido superpuesto en condiciones que permitan la deshidratación del tejido submucoso. Las láminas de tejido submucoso con áreas de superficie de gran tamaño pueden conformarse o bien como una lámina heterolaminar o bien como una lámina homolaminar. El término "heterolaminar", según se utiliza en el presente documento, se refiere a un tejido de láminas múltiples con un número variable de láminas de submucosa superpuestas (y fusionadas) en distintos puntos de la construcción para injertos unitaria. El término "homolaminar", según se utiliza en el presente documento, se refiere a una construcción de láminas múltiples de injerto de tejidos con un número uniforme de láminas de submucosa

\hbox{superpuestas en todos los puntos  de la
construcción para injertos unitaria.}

En una realización, el procedimiento de formación de láminas de tejido submucoso con áreas de superficie de gran tamaño comprende las fases de superposición de una parte como mínimo de una tira de tejido submucoso con una parte como mínimo de una segunda tira de tejido submucoso, y la aplicación de una presión como mínimo a dichas partes superpuestas en condiciones que permitan la deshidratación del tejido submucoso. La cantidad de superposición de tejido entre las tiras adyacentes de tejido submucoso se puede variar en función del uso previsto y de las propiedades deseadas de la construcción para injertos de área de superficie de gran tamaño, siempre que como mínimo una parte de cada tira de tejido submucoso se superponga con una parte de otra tira de tejido submucoso. La presión aplicada fusiona las tiras de tejido submucoso entre sí a lo largo de las partes superpuestas, dando lugar a una lámina de tejido submucoso unitaria, heterolaminar y flexible.

En otra realización, se puede preparar una lámina unitaria de tejido submucoso homolaminar a partir de tiras de tejido submucoso. El procedimiento de conformación de la construcción para injertos a base de tejidos homolaminar comprende los pasos de conformar una primera capa de tejido submucoso, en la que las tiras de tejido submucoso se sitúan lado a lado sobre una primera superficie. Las tiras de tejido submucoso de la primera capa se sitúan adyacentes entre sí, de modo que los bordes de las tiras individuales se encuentren en contacto entre sí sin superponerse sustancialmente. Seguidamente, la primera capa de tejido submucoso es superpuesta con una segunda capa de tejido submucoso. Las tiras de tejido submucoso de la segunda capa se sitúan adyacentes entre sí, de un modo similar a las tiras de tejido submucoso de la primera capa (es decir, adyacentes entre sí de modo que los bordes de las tiras individuales se encuentren en contacto entre sí sin superponerse sustancialmente). En una realización, las tiras de tejido submucoso de la segunda capa están orientadas en la misma dirección que las tiras de tejido submucoso de la primera capa, pero desplazadas en relación con las tiras submucosas de la primera capa, de modo que los bordes de contacto de las tiras individuales de tejido submucoso de la primera capa están conectadas mediante las tiras individuales de tejido submucoso de la segunda capa (ver las figuras 1a-c). A continuación, las partes superpuestas de las tiras de tejido submucoso se comprimen entre dos superficies, siendo como mínimo una de las dos superficies permeable al agua, en condiciones que permitan como mínimo la deshidratación parcial del tejido submucoso comprimido.

De forma ventajosa, tanto las láminas de tejido submucoso con áreas de superficie de gran tamaño heterolaminares como homolaminares comprenden esencialmente tejido submucoso, presentan una resistencia mecánica perfeccionada y poseen una mayor área de superficie que cualquiera de las tiras individuales utilizadas para conformar las láminas submucosas.

El tejido submucoso tiene de manera típica una superficie abluminal y una superficie luminal. La superficie luminal es la superficie submucosa que se encuentra enfrentada al lumen o cavidad del órgano fuente y de manera típica es adyacente a una capa mucosa interna in vivo, mientras que la superficie abluminal es la superficie submucosa que se encuentra orientada en la dirección contraria al lumen del órgano fuente y de manera típica se encuentra en contacto con tejido muscular liso in vivo. Las múltiples tiras de tejido submucoso pueden ser superpuestas por la superficie abluminal en contacto con la superficie luminal, por la superficie luminal en contacto con la superficie luminal, o por la superficie abluminal en contacto con la superficie abluminal de una tira de tejido submucoso adyacente. Todas estas combinaciones de tiras de tejido submucoso superpuestas procedentes de la misma o distintas fuentes u órganos de vertebrados darán lugar a una lámina de tejido submucoso con área de superficie de gran tamaño al comprimir como mínimo las partes superpuestas en condiciones que permitan la deshidratación del tejido.

Las tiras de tejido submucoso se pueden acondicionar, según se describe en la Patente U.S.A. Nº 5.275.826 de modo que se alteren las propiedades viscoelásticas del tejido submucoso. Según una realización, la submucosa delaminada de la túnica muscular y de la parte luminal de la túnica mucosa se acondiciona de forma que sufra una deformación no superior al 20%. El tejido submucoso se acondiciona mediante estiramiento, tratamiento químico, tratamiento enzimático o exposición del tejido a otros factores ambientales. En una realización, las tiras de tejido submucoso intestinal se acondicionan mediante estiramiento en una dirección longitudinal o lateral de forma que las tiras de tejido submucoso intestinal sufran una deformación no superior al 20%. Las tiras submucosas acondicionadas se pueden utilizar para conformar láminas con áreas de superficie de gran tamaño o estructuras de láminas múltiples según la presente invención. De manera alternativa, el material submucoso se puede acondicionar tras la conformación de láminas con áreas de superficie de gran tamaño o construcciones de láminas múltiples con áreas de superficie de gran tamaño para producir un material de tejido submucoso con una deformación no superior al 20%.

Durante la conformación de las láminas de tejido submucoso con áreas de superficie de gran tamaño, se aplica presión sobre las partes superpuestas comprimiendo el tejido submucoso entre dos superficies. Las dos superficies pueden estar hechas de diversos materiales y presentar cualquier forma, dependiendo de la forma y especificaciones deseadas de la construcción para injertos unitaria. De manera típica, las dos superficies están conformadas como placas planas, pero también pueden presentar otras formas tales como rejillas, cilindros o rodillos opuestos y superficies no planas complementarias. Cada una de estas superficies puede estar opcionalmente calentada o perforada. En las realizaciones preferentes, como mínimo una de las dos superficies es permeable al agua. El término superficie permeable al agua, según se utiliza en el presente documento, incluye superficies que son hidroabsorbentes, microporosas o macroporosas. Entre los materiales macroporosos se incluyen las placas perforadas o mallas hechas de plástico, metal, cerámica o madera.

El tejido submucoso se comprime, de acuerdo con una realización, colocando las partes superpuestas de las tiras de tejido submucoso sobre una primera superficie y colocando una segunda superficie sobre la superficie submucosa expuesta. A continuación se aplica una fuerza para obligar a dichas superficies una hacia la otra, comprimiendo el tejido submucoso entre las mismas. La fuerza de sesgo se puede generar mediante cualquier número de procedimientos conocidos por los expertos en la materia, incluyendo el paso del aparato a través de un par de rodillos de pinzado (siendo la distancia entre la superficie de los dos rodillos menor que la distancia original entre las dos placas), la aplicación de un peso sobre la placa superior, y el uso de una prensa hidráulica o la aplicación de presión atmosférica sobre las dos superficies.

En una realización preferente, las tiras de tejido submucoso se someten a condiciones que permiten la deshidratación del tejido submucoso concurrente con la compresión del tejido. El término "condiciones que permitan la deshidratación del tejido submucoso" se define de modo que incluya cualquier situación mecánica o ambiental que promueva o induzca la eliminación de agua del tejido submucoso como mínimo en los puntos de superposición. Para promover la deshidratación del tejido submucoso comprimido, como mínimo una de las dos superficies que comprimen el tejido es permeable al agua. Opcionalmente, la deshidratación del tejido se puede aumentar aún más aplicando un material secante, calentando el tejido o haciendo circular aire a lo largo del exterior de las dos superficies de compresión.

Las múltiples tiras de tejido submucoso se comprimen típicamente durante 12-48 horas a temperatura ambiente, aunque también se puede aplicar calor. Por ejemplo, se puede aplicar una manta calefactora al exterior de las superficies de compresión para aumentar la temperatura del tejido comprimido hasta entre aproximadamente 40ºC y aproximadamente 50ºC. Por lo general, las partes superpuestas se comprimen durante un tiempo determinado por el grado de deshidratación del tejido. La utilización de calor aumenta la tasa de deshidratación y, así pues, disminuye el tiempo que se deben comprimir las partes superpuestas de tejido. De manera típica, el tejido se comprime durante un tiempo suficiente para producir un material fuerte pero flexible. La deshidratación suficiente del tejido es también indicada por un incremento de la impedancia de la corriente eléctrica que fluye a través del tejido. Cuando la impedancia ha aumentado unos 100-200 ohmios, el tejido está suficientemente deshidratado y se puede liberar la presión.

El tejido submucoso comprimido se puede retirar de las dos superficies como una construcción unitaria flexible de tejido de área de superficie de gran tamaño. La construcción se puede manipular adicionalmente (es decir, cortarse, doblarse, suturarse, etc.) de forma que se adapte a diversas aplicaciones médicas en las que se requiere en material submucoso de la presente invención.

De manera opcional, se puede aplicar un vacío a un tejido submucoso durante el procedimiento de compresión. El vacío aplicado potencia la deshidratación del tejido y puede ayudar a la compresión del mismo. De manera alternativa, la aplicación de un vacío puede representar la única fuerza de compresión para comprimir las partes superpuestas de las múltiples tiras de tejido submucoso. Por ejemplo, el tejido submucoso superpuesto se extiende entre dos superficies, siendo preferentemente una de las mismas permeable al agua. El aparato se cubre con material secante, para absorber el agua, y una capa de ventilación para permitir que fluya en aire. A continuación, el aparato se coloca en una cámara de vacío y se aplica vacío, comprendido de manera general entre 14-70 pulgadas (36-179 cm) de Hg (0,48-2,41 bar) (7-35 psi). Preferentemente, se aplica un vacío de aproximadamente 51 pulgadas (131 cm) de Hg (1,72 bar) (25 psi). De manera opcional, se puede disponer una manta calefactora en la parte superior de la cámara para calentar el tejido submucoso durante la compresión del tejido. Los expertos en la materia están familiarizados con las cámaras adecuadas para la utilización de esta realización, y éstas incluyen cualquier dispositivo que esté equipado con una toma de vacío. La caída de presión atmosférica resultante actúa conjuntamente con las dos superficies para comprimir el tejido submucoso y deshidratarlo de manera simultánea.

De manera opcional, las construcciones de tejido con áreas de superficie de gran tamaño se pueden conformar en una serie de formas para aplicaciones de injerto de tejidos. Por ejemplo, en aplicaciones de reconstrucción de órganos, las láminas con áreas de superficie de gran tamaño se pueden conformar en forma de una esfera hueca o bolsa. Dicha construcción conformada resultará ventajosa en la sustitución de regiones de gran tamaño de la vejiga urinaria o del estómago. Estas construcciones conformadas de tejido submucoso se pueden conformar mediante técnicas convencionales, tales como corte y sutura del tejido para conseguir una forma deseada.

De manera alternativa, las tiras de tejido submucoso se pueden conformar como una lámina de tejido submucoso de gran tamaño con una forma no plana mediante un procedimiento de fabricación sencillo. El procedimiento consta de las etapas de disponer múltiples tiras de tejido submucoso entre dos superficies con formas no planas complementarias y comprimir entre las dos superficies las tiras superpuestas de tejido submucoso. Las superficies con formas complementarias se conforman de modo que las dos superficies se puedan comprimir entre sí de forma que las superficies alcancen un contacto total entre sí sin dejar prácticamente ninguna bolsa de aire entre las dos superficies. Preferentemente, como mínimo una de las dos superficies complementarias es permeable al agua.

Un procedimiento para la conformación de una construcción submucosa conformada consiste en disponer múltiples tiras de tejido submucoso sobre una superficie porosa conformada no plana de tal modo que el tejido submucoso se amolde a la forma de la superficie porosa. Preferentemente, el tejido submucoso se dispone sobre la superficie porosa sin estirar el material, no obstante, el tejido submucoso se puede estirar para facilitar el recubrimiento de la superficie porosa conformada. Cada una de las tiras de tejido submucoso se dispone sobre la superficie porosa de forma que se superponga sobre como mínimo una parte de una tira adyacente de tejido submucoso. A continuación, las partes superpuestas del tejido submucoso se cubren con una segunda superficie conformada que presenta una forma complementaria de la primera superficie porosa y se aplica presión para comprimir el tejido submucoso entre las dos superficies en condiciones que permitan la deshidratación del tejido submucoso.

De manera alternativa, las láminas con áreas de superficie de gran tamaño de la presente invención se pueden conformar con una forma no plana estirando la lámina con área de superficie de gran tamaño mediante la utilización de un procedimiento de prensa de matriz, en el que el tejido submucoso se prensa hasta conseguir una forma no plana mediante una matriz porosa en condiciones de deshidratación, de manera que el injerto de tejidos conformado mantenga su forma. Preferentemente, en tal procedimiento se utiliza un elemento laminar de láminas múltiples con áreas de superficie de gran tamaño.

Las construcciones de tejido submucoso de láminas múltiples se conforman, de acuerdo con la presente invención, superponiendo una parte de una tira de tejido submucoso con una parte de otra tira de tejido submucoso. De un modo similar, se pueden conformar construcciones para injertos a base de tejidos de láminas múltiples con áreas de superficie de gran tamaño, de acuerdo con la presente invención, superponiendo una lámina de tejido submucoso (conformada según se ha descrito anteriormente) sobre, como mínimo, una parte de una segunda lámina de tejido submucoso. El tamaño y las propiedades físicas de la construcción de tejido submucoso de láminas múltiples se puede regular mediante el número de tiras de tejido submucoso superpuestas y el porcentaje de parte superpuesta de cada
tira.

Las construcciones de tejido de láminas múltiples se conforman, de acuerdo con la presente invención, superponiendo sobre, como mínimo, una parte de una tira de tejido submucoso una parte de otra tira de tejido submucoso, para formar una primera lámina. Se disponen tiras adicionales de tejido submucoso sobre las partes superpuestas de la primera lámina para formar una segunda lámina, donde los bordes de las tiras de la segunda lámina se encuentran situadas, opcionalmente, formando un ángulo agudo con respecto a los bordes de las tiras de la primera lámina, y donde dicha segunda lámina conformada es coplanar con respecto a la primera lámina. Las tiras de tejido submucoso de la segunda lámina se pueden colocar de forma que como mínimo una parte de una tira de tejido submucoso de la segunda lámina se superponga sobre como mínimo una parte de otra tira de tejido submucoso de la segunda lámina. Se pueden disponen tiras adicionales de tejido submucoso sobre las partes superpuestas de la primera y segunda láminas para conseguir capas adicionales de tejido submucoso. Seguidamente, las múltiples capas de tejido submucoso se comprimen en condiciones de deshidratación para conformar una construcción de tejido submucoso heterolaminar de pliegues múltiples con una área de superficie mayor que cualquiera de las tiras individuales de tejido submucoso utilizadas para conformar dicha construcción de capas múltiples.

En una realización de la presente invención, el tejido submucoso se corta en forma de tiras, presentando cada tira, de manera general, lados paralelos, y se utilizan para conformar la construcción heterolaminar de capas múltiples de la presente invención. En esta realización, las tiras de tejido submucoso de la segunda lámina se disponen sobre las partes superpuestas de la primera lámina de tal forma que los bordes de las tiras submucosas de la primera lámina se encuentren formando un ángulo relativo a los bordes de las tiras submucosas de la segunda lámina. Las partes superpuestas de tejido submucoso se comprimen en condiciones de deshidratación para conformar la construcción heterolaminar de capas múltiples.

Se pueden conformar las construcciones para injertos a base de tejidos de láminas múltiples de manera que presenten propiedades pseudoisotrópicas. Estos injertos de tejidos pseudoisotrópicos se preparan a partir de como mínimo tres tiras de tejido submucoso intestinal delaminado, tanto de la túnica muscular como de la parte luminal de la túnica mucosa de un vertebrado de sangre caliente. Cada una de las tiras de tejido submucoso intestinal comprende un eje longitudinal correspondiente a la orientación predominante de las fibras de colágeno en las tiras de tejido submucoso. El procedimiento para la conformación de las construcciones para injertos pseudoisotrópicas consiste en disponer una primera tira de tejido submucoso sobre una primera superficie, superponer dicha primera tira sobre como mínimo dos tiras adicionales de tejido submucoso de forma que los ejes longitudinales de cada tira individual de tejido submucoso formen un ángulo de aproximadamente 180º/N con el eje longitudinal de como mínimo otras dos tiras de tejido submucoso que conformen el injerto heterolaminar, siendo N = el número total de tiras de tejido submucoso. (Ver las figuras 2a-c). Por ejemplo, una construcción para injertos pseudoisotrópicas conformada a partir de cuatro (4) tiras de tejido submucoso formará un ángulo de 45º (180º/4 = 45º) entre los ejes longitudinales centrales de cada tira con referencia a dos de las otras tres tiras que conforman la construcción para injertos. (Ver las figuras 2a-c). A continuación, el tejido submucoso (como mínimo las partes superpuestas) se comprime entre la primera superficie y una segunda superficie. En una realización, el tejido se comprime en condiciones que permitan, como mínimo, la deshidratación parcial del tejido submucoso comprimido y, en una realización preferente, como mínimo una de dichas superficies es permeable al agua. De forma ventajosa, los injertos de tejido submucoso se fusionan entre sí según la presente invención en ausencia de adhesivos o suturas.

Asimismo, se pueden preparar construcciones para injertos a base de tejidos con áreas de superficie de gran tamaño, con propiedades pseudoisotrópicas, a partir de láminas de tejido submucoso con áreas de superficie de gran tamaño. Estas construcciones para injertos a base de tejidos pseudoisotrópicas comprenden múltiples capas de láminas de tejido submucoso, en donde las láminas de tejido submucoso comprenden tiras superpuestas de tejido submucoso. Según lo descrito anteriormente, se pueden conformar láminas de tejido submucoso con áreas de superficie de gran tamaño a partir de tejido submucoso superpuesto para formar láminas de tejido submucoso heterolaminares u homolaminares. Tanto las láminas heterolaminares como las homolaminares resultan adecuadas para conformar construcciones para injertos a base de tejidos pseudoisotrópicas con áreas de superficie de gran tamaño según la presente invención (Ver las figuras 3a-c).

Un procedimiento para la preparación de una construcción para injertos a base de tejidos de láminas múltiples con áreas de superficie de gran tamaño, con propiedades pseudoisotrópicas, comprende la conformación de una primera lámina de tejido submucoso a partir de múltiples tiras de tejido submucoso y superponer la primera lámina sobre como mínimo dos láminas adicionales. Las tiras individuales de tejido submucoso que forman cada lámina presentan un eje longitudinal correspondiente a la orientación predominante de las fibras de colágeno en las tiras de tejido submucoso. La primera lámina se conforma sobre una primera superficie superponiendo las tiras individuales de tejido submucoso, de manera que cada tira esté alineada con las tiras adyacentes y el eje longitudinal de cada tira de tejido submucoso sea sustancialmente paralelo a los demás. De este modo, las fibras de colágeno de la primera lámina están alineadas de manera predominante con una única orientación, de forma que la lámina se puede caracterizar por tener un eje longitudinal correspondiente a la orientación predominante de las fibras de colágeno. La lámina posee una área de superficie mayor que cualquiera de las tiras individuales utilizadas para conformar la
lámina.

Después de conformar la primera lámina de tejido submucoso, se disponen láminas submucosas adicionales sobre la parte superior de la primera lámina de la misma manera que se conformó la primera lámina (es decir, cada lámina de tejido submucoso del elemento multilaminar comprende tiras superpuestas de tejido submucoso en las que los ejes longitudinales de las tiras de tejido submucoso, que comprende cada tira son sustancialmente paralelos entre sí). Cada lámina individual se superpone con otra lámina, de manera que los ejes longitudinales de las tiras de tejido submucoso de la lámina superpuesta forman un ángulo de aproximadamente 180º/S (S = el número total de láminas de tejido submucoso), con respecto a los ejes longitudinales de las tiras de tejido submucoso como mínimo de dos de las otras láminas que conforman la construcción de láminas múltiples. Una vez superpuesto el número total de láminas, las láminas de tejido submucoso se comprimen entre la primera superficie y una segunda superficie en condiciones que permitan como mínimo la deshidratación parcial del tejido submucoso comprimido. En las realizaciones preferentes, como mínimo una de dichas superficies es permeable al agua.

En una realización, tras superponer las múltiples tiras de tejido submucoso entre sí, las partes superpuestas son manipuladas para eliminar el aire atrapado y la mayor parte del agua antes de fusionar las tiras a fin de formar una única lámina de tejido submucoso. En general, las burbujas de aire atrapadas y la mayor parte del agua se expulsan utilizando una fuerza de compresión que se mueve a lo largo de la superficie de las partes superpuestas. La fuerza de compresión puede tomar la forma de un cilindro que se hace rodar por toda la superficie de las partes superpuestas, o, de manera alternativa, las partes superpuestas se pueden hacer pasar entre dos o más rodillos, siendo la distancia entre la superficie de los rodillos opuestos menor que el espesor de la lámina submucosa. Seguidamente, las partes superpuestas pueden ser comprimidas, si resulta necesario, durante un período de tiempo adicional en condiciones de deshidratación, con el fin de fusionar las múltiples tiras en una única lámina de tejido submucoso según la presente invención.

Las partes en exceso de los injertos pseudoisotrópicos de láminas múltiples (es decir, aquellas partes del injerto que tengan un número de lámina menor que N o S) se pueden retirar tras la conformación del elemento multilaminar. Además, las propiedades mecánicas del material submucoso de láminas múltiples se puede adaptar a las necesidades de la aplicación médica ajustando el porcentaje de superposición entre las tiras adyacentes de tejido submucoso, alterando el número de capas de tejido submucoso, variando el ángulo de las capas adyacentes entre sí, cambiando la permeabilidad al agua de las superficies de compresión y/o la composición de las superficies de compresión, seleccionando la forma de las superficies de compresión, y variando la carga aplicada para comprimir el tejido submucoso superpuesto.

La presente invención se dirige a una modificación que mejora la eficacia de las construcciones para injertos submucosos de láminas múltiples y con áreas de superficie de gran tamaño como materiales de injerto implantables. Recientes experimentos han demostrado que el proceso de remodelado resulta más lento con las construcciones para injertos a base de tejido submucoso, de láminas múltiples, implantadas que en el caso de los injertos de tejido submucoso de una o dos capas. Además, las construcciones para injertos a base de tejido submucoso de láminas múltiples tienden a acumular fluidos del tejido en bolsas en forma de quiste situadas entre las láminas adyacentes durante los primeros 14-28 días posteriores al implante en lugares de los tejidos blandos (tales como la pared muscular de las ratas). Las bolsas de fluido resultan perjudiciales para la curación de las heridas, dado que retrasan crecimiento interno del tejido conectivo, constituyen un entorno propicio para el crecimiento bacteriano, y evitan la coaptación de los tejidos corporales naturales (nativos), que promueve la curación y la resistencia a la
tracción.

La presente invención minimiza las desventajas asociadas con las construcciones para injertos a base de tejido submucoso de láminas múltiples practicando perforaciones en las construcciones para injertos. Se ha descubierto que la realización de perforaciones en las construcciones para injertos potencian las propiedades de remodelado in vivo del injerto y potencian la adhesión de las capas del injerto de tejidos entre sí. Se cree que las perforaciones promueven el contacto del tejido submucoso con los fluidos endógenos y las células (aumentando el área de superficie del injerto implantado) y las perforaciones también sirven como conducto que permite el paso de los fluidos extracelulares a través del injerto.

Según la presente invención, el término "perforación" designa a un agujero que se extiende a través de toda la construcción para injertos. No obstante, las construcciones para injertos a base de tejidos que tengan "orificios", definidos en el presente documento como una cavidad que penetra en el tejido pero que no se extiende a través de toda la construcción para injertos, también se encuentran dentro del alcance de la presente invención. La separación y el tamaño de las perforaciones, así como la profundidad hasta la que las perforaciones penetran en el tejido, serán variadas según la resistencia mecánica, porosidad, tamaño y espesor (número de capas) y otro factores deseados relacionados con la aplicación del injerto de tejidos. El tamaño de las perforaciones varía entre 0,5 y 3 mm, más preferentemente entre 0,6 y 2 mm. Las perforaciones están separadas entre sí por una distancia comprendida entre 2 y 20 mm, de manera más preferente entre 3 y 7 mm, y, en una realización, las perforaciones se encuentran separadas de manera uniforme entre sí.

Las perforaciones se practican en el tejido submucoso mientras el tejido permanece como mínimo parcialmente hidratado. En las construcciones de tejido submucoso de láminas o láminas múltiples con áreas de superficie de gran tamaño, compuestas por múltiples tiras de tejido submucoso fusionadas entre sí, las perforaciones se practican preferentemente tras la conformación de la construcción de láminas/láminas múltiples con áreas de superficie de gran tamaño, y cuando el tejido se ha secado hasta un contenido de agua de aproximadamente el 10-20% en peso de agua (10-20% hidratado). El secado suficiente del tejido se puede determinar pesando el tejido fresco y secando el tejido hasta el 10-20% del peso fresco, o se puede determinar el secado suficiente midiendo la impedancia, según se ha descrito anteriormente. Después de la perforación del tejido, el tejido submucoso se somete a una esterilización terminal y se almacena según se ha descrito anteriormente.

En una realización, se pueden practicar orificios (que se extienden sólo parcialmente a través del tejido) o perforaciones en ambos lados del injerto de tejidos. Además, el tejido puede ser modificado de manera que incluya perforaciones, así como orificios, que se extienden sólo parcialmente a través del tejido. Además, el tejido submucoso puede ser modificado de manera que incluya una pluralidad de orificios, donde los diversos subconjuntos de orificios se extienden hasta distintas profundidades en el tejido, en relación con los demás orificios practicados. Esto se puede conseguir, por ejemplo, perforando las capas individuales de tejido submucoso antes de superponer las capas para conformar la construcción de láminas múltiples. En caso de que alguna de las capas no sean perforadas o si las perforaciones de las capas individuales no están alineadas, la construcción de láminas múltiples conformada tendrá orificios que se extienden hasta distintas profundidades en el tejido. De manera preferente, el tejido se perfora siguiendo una distribución uniforme a lo largo de las superficies del injerto de tejidos, formando de este modo una serie de agujeros que permiten la comunicación de fluido desde una primera superficie plana hasta una segunda superficie plana opuesta del injerto de tejidos. En una realización preferente, la construcción para injertos se perfora, como mínimo, con 2,0 perforaciones por cm^{2}.

En una realización, las perforaciones se practican perpendiculares a la superficie de la construcción para injertos a base de tejidos, es decir, el eje longitudinal de la perforación/orificio forma un ángulo de 90º con el plano que define la superficie del injerto. De manera alternativa, las perforaciones se pueden practicar de forma que el eje de perforación no sea perpendicular a la superficie del injerto (es decir, de modo que un eje longitudinal paralelo a la pared que define la perforación/orificio forme un ángulo de 90º con el plano de la superficie del injerto). Según una realización, las perforaciones se practican con un ángulo comprendido entre 45º y 90º con respecto a la superficie del
injerto.

Se prevé que la perforación del tejido submucoso tenga su mayor impacto sobre las construcciones para injertos submucosos de láminas múltiples. Los injertos de tejidos de láminas múltiples pueden ser cortados sin disgregarse y no se delaminan al sumergirse en agua durante un período (superior a una hora) que corresponde con el tiempo necesario para implantar la lámina en un huésped. No obstante, las construcciones de tejido de láminas múltiples tienden a acumular fluidos del tejido en bolsas en forma de quiste situadas entre las láminas adyacentes durante los primeros 14-28 días posteriores al implante en lugares de los tejidos blandos (tales como la pared muscular de las ratas). Las perforaciones de la construcción para injertos de láminas múltiples aliviarán la acumulación de fluidos entre las capas de la construcción de láminas múltiples disponiendo un conducto a través de cual el fluido puede salir del tejido. Además, las perforaciones tendrán un efecto de "grapado" que aumentará la adhesión de las láminas entre sí.

Por consiguiente, la disposición de orificios en todo el espesor o en parte del espesor de los injertos de tejidos de láminas múltiples aporta las siguientes ventajas con respecto a los elementos laminares de láminas múltiples no perforadas:

1.: Un mayor paso de fluidos (incluidos los fluidos del tejido) a través del material; y

2.: Mayor fuerza adhesiva entre las capas adyacentes.

El tejido submucoso puede ser perforado utilizando una amplia gama de dispositivos conocidos por los expertos en la materia. El procedimiento utilizado para perforar el tejido submucoso no resulta crítico, siempre que se mantenga la integridad estructural agregada del tejido submucoso.

En las realizaciones preferentes, la perforación del tejido submucoso no tiene como resultado la eliminación de cantidades significativas de tejido. Por ejemplo, las perforaciones se practican clavando un objeto sólido puntiagudo a través del tejido, de forma que durante la inserción de un objeto sólido el tejido sea apartado a un lado, en contraposición con la eliminación del material como consecuencia de la horadación. Otros medios para la perforación del tejido incluyen el uso de proyectiles, instrumentos de corte, haces de láser o tratamientos enzimáticos o
químicos.

En una realización, el tejido submucoso se perfora clavando un alfiler o aguja sólida en el tejido o a través del mismo. De manera típica, se utiliza una aguja sólida del calibre 20-23 para practicar las perforaciones. De este modo, durante el proceso de realización de las perforaciones, no se elimina una cantidad significativa de tejido, sino que una parte de cada capa es desgarrada y presionada contra una capa adyacente, consiguiendo un efecto de grapado. Este efecto de "grapado" se puede potenciar adicionalmente practicando una parte de las perforaciones desde un lado del injerto y practicando las perforaciones restantes desde el lado opuesto del injerto.

La figura 4 representa una realización de un dispositivo para la perforación de las construcciones para injertos a base de tejido submucoso. El dispositivo comprende una base (1) y una pluralidad de alfileres de acero inoxidable (2) embebidos en una base (1) y sobresaliendo a través de la superficie de la base. La base está formada por partes de Epoxy (E) y Delrin® (D) y tiene una longitud de 3,2 pulgadas (8.2 cm), una anchura de 1,85 pulgadas (4,74 cm) y su espesor es de 0,5 pulgadas (1,3 cm). Las partes de Epoxy y Delrin® tienen, cada una de ellas, una longitud de 3,2 pulgadas (8.2 cm), una anchura de 1,85 pulgadas (4,74 cm) y su espesor es de 0,25 pulgadas (0,64 cm). Según esta realización, los alfileres (2) son sustancialmente paralelos entre sí y forman un ángulo de 90º con la superficie de la base. Los alfileres (2) tienen un diámetro de 0,040 pulgadas (0,1 cm), están separados por 0,264 pulgadas (0,67 cm) (distancia entre centros de alfileres adyacentes) dentro de una franja de 0,4 pulgadas (1 cm) desde el borde del dispositivo, y sobresalen 0,25 pulgadas (0,64 cm) desde la base. Por lo tanto, el dispositivo incluye un total de cincuenta alfileres.

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Ejemplo 1

Se preparó un tejido submucoso a partir de tejido intestinal de un vertebrado según el procedimiento descrito en la Patente U.S.A. Nº 4.902.508. Se conformaron tiras de tejido submucoso a partir de un segmento de tejido intestinal de un vertebrado de sangre caliente, comprendiendo dicho segmento la túnica submucosa delaminada tanto de la túnica muscular como de, como mínimo, la parte luminal de la túnica mucosa de dicho segmento de tejido intestinal. El segmento de tejido intestinal se cortó a lo largo del eje longitudinal del segmento y se extendió sobre una superficie plana. A continuación, el tejido se troceó adicionalmente en una serie de tiras, cada una de las cuales tenía lados, de manera general, paralelos.

Se organizaron múltiples tiras de tejido submucoso sobre una placa perforada de acero inoxidable de 12 por 12 pulgadas (31 por 31 cm), superponiendo una parte de una tira de tejido submucoso en una parte de la tira adyacente de tejido submucoso. A continuación se colocó sobre el tejido submucoso una segunda placa perforada de acero inoxidable de 12 por 12 pulgadas (31 por 31 cm). Las placas perforadas de acero inoxidable utilizadas en esta realización presentan perforaciones de 0,045 pulgadas (0,11 cm) dispuestas en un diseño de centros alineados y separadas por 0,066 pulgadas (0.17 cm) entre sí. Se colocó una pesa de 50(100 libras (22,7-45,4 kg) sobre la segunda placa de acero inoxidable y el tejido se comprimió durante 24 horas a temperatura ambiente.

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Ejemplo 2

Se prepararon tiras de tejido submucoso según lo descrito en el ejemplo 1. Se dispusieron múltiples tiras de tejido submucoso entre dos placas perforadas de acero inoxidable, de forma que una parte de una tira de tejido submucoso quedó superpuesta en una parte de la tira adyacente de tejido submucoso. El aparato "placa-submucosa-placa" se colocó sobre una superficie plana y se cubrió con material secante, para absorber el agua, y una capa de ventilación para permitir que fluya en aire. A continuación, el aparato se selló en una bolsa de nailon dotada de una toma de vacío. Se aplicó un vacío (mayor de 28 pulgadas (71,8 cm) de Hg) para extraer el aire del bolsa de vacío, y la caída de presión atmosférica resultante comprimió y deshidrató de forma simultánea el tejido submucoso. Después de 24 horas de aplicación del vacío, la lámina producida resultó estar húmeda y muy flexible. No se observaron líneas de unión como consecuencia de la disposición en capas del tejido submucoso, y la resistencia de una lámina prototipo con un espesor de 8, determinada mediante una prueba de reventamiento mediante bola (ball burst), resultó de 80 libras (36,3 kg).

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Ejemplo 3

Se prepararon tiras de tejido submucoso según lo descrito en el ejemplo 1. Las tiras de tejido submucoso se organizaron sobre una rejilla de forma que una parte de una tira de tejido submucoso quedó superpuesta en una parte de la tira adyacente de tejido submucoso. Una vez que la rejilla se cubrió con una capa de tejido submucoso, se aplicó una segunda capa de tejido submucoso sobre la primera capa, de manera que los bordes de las tiras submucosas de la segunda capa formasen un ángulo relativo a los bordes de las tiras submucosas de la primera
capa.

Después de colocar todas las tiras de tejido submucoso sobre la rejilla, se colocó otra rejilla sobre las capas de tejido submucoso y el sándwich "rejilla-tejido submucoso-rejilla" se comprimió con una carga y se secó. Este proceso produjo una lámina submucosa seca con áreas de superficie de gran tamaño que se despegó de la rejilla como una construcción para injertos unitaria.

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Ejemplo 4

Esterilización de tejido submucoso con ácido peracético

El tejido submucoso se sumerge en una solución de ácido peracético/etanol durante 2 horas a temperatura ambiente utilizando una relación de 20:1 (mL de solución peracética: gramos de tejido submucoso) o superior. La solución de ácido peracético/etanol está formada por un 4% de etanol, un 0,1% (volumen:volumen) de ácido peracético, y el resto es agua. El 0,1% del componente de ácido peracético es una dilución de una solución madre de ácido peracético al 35% disponible comercialmente y definida según se muestra en la tabla 1. Preferentemente, el tejido submucoso se agita en un rotor mientras se mantiene sumergido en la solución de ácido peracético. Transcurridas dos horas, la solución de ácido peracético se elimina y se sustituye con una cantidad equivalente de solución de Ringer lactada o solución salina con tampón fosfato (PBS) y se mantiene la inmersión (con agitación) durante 15 minutos. El tejido submucoso se somete a cuatro ciclos adicionales de lavado con Ringer lactada o PBS y a continuación se aclara con agua estéril durante 15 minutos más.

TABLA 1 Composición química de la solución de ácido peracético al 35%

Composición, % en peso

\hskip0,3cm Ácido peracético	35,5
\hskip0,3cm Peróxido de hidrógeno	6,8
\hskip0,3cm Ácido acético	39,3
\hskip0,3cm Ácido sulfúrico	1,0
\hskip0,3cm Agua	17,4
\hskip0,3cm Peróxido de acetilo	0,0
\hskip0,3cm Estabilizador	500 PPM

Análisis típico del oxígeno activo, % en peso

\hskip0,3cm Oxígeno activo como perácido	7,97
\hskip0,3cm Oxígeno activo como H_{2}O_{2}	2,40
\hskip0,3cm Oxígeno activo total	10,67

Esterilización de tejido submucoso con óxido de etileno

Después de la preparación de las construcciones de láminas múltiples en condiciones estériles, el material se envasa y se somete a una segunda ronda de esterilización (esterilización terminal). El tejido se puede envasar en un plástico que sea permeable al óxido de etileno y someterse a esterilización mediante etileno según los procedimientos conocidos por los expertos en la materia. De manera esencial, el material envasado se expone a óxido de etileno durante cuatro horas a 115ºF (46ºC). Durante la esterilización, el tejido también se mantiene con una humedad relativa del 65% durante al menos 75 minutos de las cuatro horas de tratamiento. La elevada humedad facilita la absorción del óxido de etileno por parte del tejido. Después de cuatro horas, el óxido de etileno, la etileno clorhidrina y el etilenglicol se expulsan con nitrógeno y aire.

Ejemplo 5 Prueba de resistencia a la ruptura (ball burst) por medio de una jaula de compresión y un analizador de tracción MTS

Se determina la resistencia de los injertos de tejido submucosos de láminas múltiples mediante la utilización de un analizador de tracción con sistema de evaluación de material (MTS). La construcción de tejido de láminas múltiples se fija dentro de un bastidor de tensado de cuatro lados (bastidor para muestras) para conseguir una distribución uniforme del esfuerzo por toda la construcción de tejido. El nivel inicial del dispositivo se establece de manera que la parte superior de la bola de acero se encuentre situada inmediatamente debajo de la muestra de ensayo a analizar. La manilla del bastidor para muestras se levanta hasta su posición más elevada, de manera que las mandíbulas de la mordaza puedan atrapar la muestra de ensayo. La construcción de tejido submucoso se corta de forma que quepa dentro del bastidor para muestras, teniendo la apertura de la mordaza un diámetro de una pulgada y tres cuartos (1,9 cm). Debe incluirse media pulgada (1,3 cm) de material en exceso alrededor del perímetro de la muestra de ensayo para garantizar una suficiente área de sujeción. El tejido submucoso se coloca en las mandíbulas de la mordaza, controlándose la fuerza de apriete por medio de una rueda de pulgar situada en la mordaza superior.

A continuación, el tejido submucoso sujeto se presiona sobre una bola metálica con una velocidad controlada utilizando una interfaz de software del analizador de tracción para controlar y medir la fuerza ejercida sobre la muestra de ensayo. La fuerza se incrementan hasta que se produce el fallo de la muestra. El fallo se define como la carga máxima que corresponde a la primera aparición de la bola a través de discontinuidades visibles no naturales en el plano de la muestra. En el caso de que se alcance la posición más elevada del dispositivo antes del fallo, los límites del software se accionarán y detendrán el ensayo. El valor de la carga máxima mostrado en el Microprofiler 458.01 queda registrado y se retira la muestra.

Ejemplo 6

Se preparó una construcción para injertos a base de tejidos de láminas múltiples del siguiente modo:

Se prepara una abundante cantidad de tejido submucoso a partir de intestino de vertebrado, se corta y se extiende, y se desinfecta con ácido peracético según lo descrito en el ejemplo 4 (se precisan aproximadamente 70 gramos de tejido submucoso para un dispositivo de 10 cm x 15 cm). Tras la esterilización del tejido con ácido peracético deben utilizarse guantes quirúrgicos, mascarilla facial y gorro para minimizar la contaminación por materia orgánica y partículas presentes en el aire.

Se colocan tiras de tejido submucoso sobre una primera placa perforada de acero inoxidable en la orientación deseada. Las placas de acero inoxidable utilizadas son placas de acero inoxidable perforadas con perforaciones redondas de 0,045 pulgadas (0,11 cm) dispuestas en un diseño de centros alineados y separadas por 0,066 pulgadas (0.17 cm) entre sí. Después de la formación de una capa de tejido submucoso, el tejido submucoso se alisa para eliminar las burbujas de aire. Pueden superponerse capas adicionales hasta que el dispositivo esté completo. El material en exceso se elimina de alrededor de la estructura de láminas múltiples con unas tijeras. Se registra el peso de la estructura submucosa de láminas múltiples. Se coloca una segunda placa de acero inoxidable (perforadas con perforaciones redondas de 0,045 pulgadas (0,11 cm) dispuestas en un diseño de centros alineados y separadas por 0,066 pulgadas (0.17 cm) entre sí) sobre la construcción de láminas múltiples.

De manera opcional, la construcción de láminas múltiples se puede hacer pasar a través de rodillos de presión para eliminar el aire atrapado y el agua. Para hacer pasar el material a través de rodillos de presión, las dos placas metálicas perforadas que rodean al tejido submucoso se colocan entre dos láminas de polipropileno (Kimberly Clark, clase 100 "Crew Wipe") y el aparato completo se coloca entre dos capas de película de bolsa de nailon (Zip Vac, Auburn WA) que sean mayores de 1º x 1º. Seguidamente, se hace rodar un cilindro con peso numerosas veces (como mínimo tres veces) a lo largo del aparato.

Para perforar la construcción para injertos a base de tejido submucoso de láminas múltiples, el aparato se desmonta parcialmente para exponer la superficie superior del injerto de tejidos y se coloca un trozo de película de bolsa de nailon directamente sobre la capa superior de tejido submucoso. A continuación, la construcción para injertos a base de tejido submucoso de láminas múltiples se coloca invertida sobre una superficie de trabajo de Styrofoam®, y se retira cuidadosamente la primera placa de acero inoxidable. A continuación, la superficie de submucosa expuesta se cubre con un trozo de película de bolsa de nailon. Seguidamente, la construcción para injertos a base de tejidos se perfora y, entonces, se retira la película superior de bolsa de nailon. Tras ello, la construcción para injertos a base de tejido submucoso de láminas múltiples se invierte de nuevo y se vuelve a colocar sobre la placa perforada de acero inoxidable. La película de bolsa de nailon se retira de la superficie superior de la submucosa y se coloca una segunda placa perforada de acero inoxidable sobre la construcción para injertos a base de tejido submucoso de láminas múltiples.

A continuación, la construcción para injertos a base de tejido submucoso de láminas múltiples se comprime en condiciones de deshidratación del siguiente modo:

Se coloca en una repisa (u otra superficie horizontal lisa) una capa de material secante (NuGauze) de mayores dimensiones que el tamaño de las placas perforadas. Las placas de acero inoxidable con la construcción para injertos a base de tejido submucoso de láminas múltiples entre las mismas se coloca sobre el material secante. Se dispone otra capa de material secante (del mismo tamaño aproximadamente que la primera lámina de material secante) encima de las placas de acero inoxidable. Se coloca una capa de ventilación (Zip Vac, Auburn, WA) sobre el material secante. Preferentemente, la capa de ventilación es ligeramente más grande que los objetos que cubre.

De manera opcional, se pueden poner electrodos en contacto con el tejido submucoso para permitir la medición de la impedancia a través del tejido. De manera típica, el tejido se comprime durante un tiempo suficiente para producir un material fuerte pero flexible. La deshidratación suficiente del tejido viene indicada por un incremento de la impedancia de la corriente eléctrica que fluye a través del tejido. Cuando la impedancia ha aumentado unos 100-200 ohms, el tejido está suficientemente deshidratado y se puede liberar la presión.

Se coloca sobre la repisa un borde de cinta cromada alrededor del aparato y del área que se va a prensar al vacío. Se despega la parte posterior de la cinta y se coloca un trozo de película de bolsa de nailon, que ya tiene unido el puerto de la tobera, sobre el área encerrada por la cinta cromada (ver las figuras 3a y 3b) y se adhiere a la cinta. Se enciende la manta calefactora, si se utiliza, y se pone en marcha la bomba de vacío. Debe comprobarse que la bolsa no presenta arrugas (y alisarlas si se encuentran) y que no exista un sellado incorrecto entre la cinta cromada y la película de bolsa de nailon (y corregirlo si se detecta). Se debe llevar el vacío hasta un nivel comprendido entre 25 y 30 psi_{vac} (entre 1,72 y 2,07 bar). Después de mantener el vacío hasta conseguir el nivel de deshidratación deseado (aproximadamente 24 horas), se rompe el cierre estanco de la bolsa en una región encintada, se apaga la bomba y se retira la construcción perforada unitaria de injerto de tejido submucoso de láminas múltiples. Se pueden utilizar unas tijeras para cortar cualquier parte de injerto de tejidos que no haya recibido la cantidad completa de
superposición.

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Ejemplo 7

La construcción para injertos a base de tejido submucoso también se puede perforar tras la formación de la construcción unitaria de láminas múltiples, del siguiente modo. La construcción de láminas múltiples se conforma según el ejemplo 3. El sándwich de rejilla/tejido submucoso se retiró del aparato de secado y se perforó el tejido. El injerto se perforó insertando un clavo entre la rejilla de alambre y empujando el clavo a través del tejido en múltiples puntos de la superficie del injerto. A continuación, el tejido submucoso perforado de láminas múltiples se cortó en forma de cuadrado (4 1/2 x 4 1/2 pulg.) (11,4 cm x 11,4 cm) y se marcó para su identificación.

Ejemplo 8

Se preparó una construcción pseudoisolaminar perforada del siguiente modo: Se dispusieron tiras de tejido submucoso en 4 capas sobre una rejilla de alambre. La primera capa se dispuso directamente sobre la rejilla y las tres capas restantes se superpusieron sobre la primera capa en ángulos de 45º, 90º y 135º relativos a la primera capa, respectivamente (ver las figuras 2a-c). Se colocó una segunda rejilla sobre el tejido submucoso, y el tejido se abrazó en sándwich entre la rejilla y se fijó en forma de C al estante de secado. Se colocó un ventilador delante del estante y se puso en marcha. Se practicaron orificios en el tejido siguiendo un diseño de damero, utilizando la rejilla como guía (es decir, cada espacio alternativo de la rejilla se utilizó para perforar el tejido). De acuerdo con ello, el diseño presentó el diseño siguiente:

100

La perforación del tejido se detuvo antes de su finalización debido a que el tejido submucoso se estaba desorganizando. Por consiguiente, el tejido submucoso se secó durante 25 minutos con el ventilador funcionando. A continuación, se practicaron el resto de perforaciones en el tejido de acuerdo con el diseño original.

La lámina se dejó secar toda la noche, se retiró, se cortó en forma de cuadrado y se etiquetó para su identificación.

Ejemplo 9 Comparación de la resistencia de estructuras perforadas y no perforadas Tejido submucoso

Se prepararon construcciones para injertos a base de tejidos de láminas múltiples pseudoisotrópicas de ocho capas según la presente invención. Las construcciones se perforaron (de manera uniforme) y se comparó la resistencia de estas construcciones con las construcciones no perforadas utilizando la prueba de resistencia a la ruptura descrita en el ejemplo 5. Se llevaron a cabo tres experimentos separados y se registró la fuerza aplicada en el momento del fallo (en libras).

a): La construcción perforada incluyó perforaciones de 1,0 mm separadas uniformemente por 6,71 mm. Se analizaron cuatro construcciones no perforadas y cuatro construcciones perforadas, y se determinaron los valores medios. La construcción no perforada falló a 94,11 \pm 7 libras (42,7 kg), mientras que la construcción perforada falló a 83,572 \pm 6 libras (37,9 kg).

b): La construcción perforada incluyó perforaciones de 1,0 mm separadas uniformemente por 6,71 mm. Se analizaron cuatro construcciones no perforadas y cuatro construcciones perforadas, y se determinaron los valores medios. La construcción no perforada falló a 73,71 \pm 9 libras (33,4 kg), mientras que la construcción perforada falló a 62,35 \pm 2 libras (28,3 kg).

c): En este experimento se compararon dos construcciones perforadas con el control no perforado: la primera construcción perforada tenía perforaciones de 1,0 mm separadas uniformemente por 6,71 mm y la segunda construcción perforada tenía perforaciones de 1,0 mm separadas uniformemente por 3,35 mm. Se analizaron dos construcciones no perforadas, dos de las primera construcción perforada y siete de la segunda construcción perforada, y se determinaron los valores medios. La construcción no perforada falló a 70,17 \pm 12 libras (31,8 kg), mientras que la primera construcción perforada falló a 79,94 \pm 8 libras (36,3 kg) y la segunda construcción a 62,39 \pm 7 libras (28,3 kg).

Comparación de tejidos submucosos dotados y no dotados de perforaciones como construcciones para injertos a base de tejidos

En el siguiente ejemplo se prepararon construcciones para injertos a base de tejidos de láminas múltiples que comprenden ocho capas, tanto en forma perforada como no perforada. Las construcciones perforadas se perforaron utilizando el dispositivo representado en la figura 4. Las construcciones perforadas de tejidos resultantes tenían agujeros de 0,40 pulgadas de diámetro separados en intervalos regulares (distanciados 6,7 mm entre sí).

El estudio realizado incluyó 24 ratas. Las ratas se dividieron en dos grupos de 12 cada uno. En el primer grupo, se implantó una lámina no perforada de tejido submucoso de láminas múltiples, de ocho capas. En el segundo grupo, se implantó una lámina perforada de láminas múltiples, de ocho capas. Las 12 ratas de cada grupo se subdividieron adicionalmente en grupos más reducidos, que se

\hbox{diferenciaron únicamente en el
procedimiento  de esterilización terminal.}

1.: El subgrupo nº 1 de cada grupo principal no se sometió a esterilización terminal en el dispositivo final.

2.: En el subgrupo nº 2, se aplicó una irradiación gamma de 2,5 Mrad sobre el dispositivo, como procedimiento de esterilización terminal.

3.: En el subgrupo nº 3, se aplicó una irradiación gamma de 1,5 Mrad sobre el dispositivo final, como procedimiento de esterilización terminal.

4.: En el subgrupo nº 4, se aplicó una irradiación con haz de electrones de 1,5 Mrad sobre el dispositivo final, como procedimiento de esterilización terminal.

5.: En el subgrupo nº 5, se aplicó 1,5 de óxido de etileno (realizado en la Universidad de Purdue) sobre el dispositivo final, como procedimiento de esterilización terminal.

6.: En el subgrupo nº 6, se aplicó 1,5 de óxido de etileno (realizado en Centurion Labs) sobre el dispositivo final, como procedimiento de esterilización terminal.

Los resultados de estos estudios (excluyendo la esterilización terminal como variable) mostraron que la perforación disminuyó significativamente la acumulación de líquidos entre los elementos laminares de láminas de láminas múltiples durante el período de remodelado. Se sacrificó un animal de cada subgrupo a los 14 días, sacrificándose un segundo animal de cada subgrupo a los 28 días. A los 14 días, en los animales que recibieron los injertos de tejidos sin perforaciones, se habían acumulado numerosos "quistes" de líquido serosanguíneo entre los elementos laminares de láminas múltiples y alrededor del injerto. En los animales que recibieron los injertos de tejidos dotados de perforaciones, la magnitud de la acumulación de fluidos fue significativamente menor, tanto en términos del número de quistes como de tamaño de los mismos.

A los 28 días, prácticamente no existió evidencia de acumulación de fluidos en el injerto del grupo que recibió los injertos de tejidos dotados de perforaciones, mientras que el grupo que recibió los injertos de tejidos no dotados de perforaciones aún presentaron pequeñas bolsas de fluido.

Por consiguiente, la perforación del tejido submucoso antes del implante en el huésped tiene un efecto significativo sobre la curación y la remodelación. Las perforaciones parecían servir como conducciones a través de las cuales los fluidos podrían discurrir por todo el injerto, en lugar de acumularse entre las láminas. Además, no se observó una separación visible de las capas de injertos de tejidos dotados de perforaciones de láminas múltiples, lo que se atribuyó, al menos en parte, a las perforaciones.

Ejemplo 10 Comparación del tejido submucoso, Dexon® y Marlex® como construcciones para injertos a base de tejidos para utilización en reparación de hernias

Se analizará la eficacia del tejido submucoso, Dexon® y Marlex® como construcciones para injertos a base de tejidos en dos estudios separados en animales. En estudio nº 1 utiliza un modelo de perro y el estudio nº 2 utiliza un modelo de rata.

Estudio Nº 1

Modelo de perro

Se dividieron de manera aleatoria treinta perros en tres grupos de diez perros cada uno. Se crea un defecto en la pared corporal de espesor completo en la pared abdominal lateral ventral de cada perro. El defecto mide 5 cm x 5 cm (A x L) y deja el peritoneo intacto. El defecto se creará en posición lateral a la línea central, en el lado izquierdo, e implica principalmente a la aponeurosis abdominal. La parte lateral del defecto alcanza la parte distal de las capas de músculo esquelético abdominal. El sitio del defecto se repara con uno de los tres dispositivos: submucosa del intestino delgado, Dexon® o rejilla Marlex ®. Se utilizan diez animales en cada grupo (es decir, cada uno de los tres dispositivos se implanta en diez animales). Se sacrifican dos animales de cada grupo en cada uno de los siguientes momentos: una semana, un mes, tres meses, seis meses y dos años después del implante. El criterio de valoración del estudio es la morfología (tanto macroscópica como microscópica) de los materiales de injerto y del tejido circundante en el momento del sacrificio.

Estudio Nº 2

Modelo de rata

El diseño experimental para el estudio en ratas es idéntico al descrito anteriormente para el estudio en perros, con una excepción: cada grupo incluye treinta animales, y en cada punto temporal se sacrifican seis ratas de cada grupo. El criterio de valoración del estudio será el mismo, es decir, el aspecto macroscópico y microscópico del material de injerto y del tejido circundante en el momento del sacrificio.

Preparación de la muestra

Los dispositivos de reparación de hernias se prepararán del siguiente modo:

1.: Tejido submucoso intestinal: las construcciones para injertos a base de tejido submucoso para implante se prepararán según lo descrito en el ejemplo 3. Se analizará la materia prima mediante una prueba de ruptura axial. En la fabricación sólo se utilizarán lotes con una fuerza de ruptura media de 3,0 libras (13,3 N) o superior. Los parámetros de configuración del dispositivo incluirán lo siguiente:

a): Las tiras de tejido submucoso se superpondrán (superposición del 50%) con las tiras adyacentes para formar una lámina de tejido submucoso con áreas de superficie de gran tamaño de dos capas.

b): Se conforma una segunda lámina de tejido submucoso y se dispone sobre la primera lámina con un ángulo de 45º relativo a la primera lámina de tejido submucoso.

c): Se conforma una tercera lámina de tejido submucoso y se dispone sobre la primera lámina con un ángulo de 45º relativo a la segunda lámina.

d): Se conforma una cuarta lámina de tejido submucoso y se dispone sobre la primera lámina de tejido submucoso con un ángulo de 45º relativo a la tercera lámina.

: Por lo tanto, se prepara una construcción homolaminar que comprende ocho capas de tejido submucoso intestinal (delaminado tanto de la túnica muscular como de la parte luminal de la túnica mucosa de una especie vertebrada). La construcción es de forma esencialmente rectangular con una longitud y anchura de 10 cm x 15 cm. La construcción para injertos se pasa a través de rodillos de presión para eliminar el aire y el agua atrapada entre las capas laminadas, y el tejido se perfora utilizando agujas sólidas del calibre 20. Las perforaciones se encuentran separadas entre sí uniformemente por 6-7 mm. La construcción se comprime en condiciones de deshidratación y se esteriliza con óxido de etileno.

2.: Dexon®: el material utilizado para la reparación de hernias será suministrado por Owens & Minor de Indianapolis.

3.: Marlex®: el material utilizado para la reparación de hernias será suministrado por Owens & Minor de Indianapolis.

Las propiedades físicas de los injertos de tejido submucoso se caracterizarán del siguiente modo: Se prepararán cinco construcciones multilaminares de injerto de tejido según lo descrito en este ejemplo. En primer lugar, las construcciones para injertos serán sometidas a análisis de esterilidad y pirógenos, respectivamente, por NAmSA (Northwood, OH). Una construcción para injertos de cada lote de dispositivos será sometida a una prueba de resistencia a la ruptura según lo descrito en el ejemplo 7. Una construcción se almacenará como muestra de reserva para el archivo. Se implementarán tres de las construcciones para injertos. Cada construcción para injertos se identificará mediante la fecha de fabricación y el número de construcción para injertos. En los casos de Dexon® y Marlex®, los dispositivos se caracterizarán mediante el número de lote y la fecha de fabricación, según lo indicado en la etiqueta del
dispositivo.

Los perros utilizados en este estudio se comprarán a LBL Kennels y las ratas utilizadas en este estudio se comprarán a Harlan Sprague Dawley, Inc.

Procedimiento quirúrgico

Perros: Cada animal pesa entre 18 y 25 kg. Cada animal será anestesiado con tiopental sódico intravenoso, será intubado y se mantendrá en anestesia por inhalación con isoflurano y oxígeno. Bajo un plano quirúrgico de anestesia, el sitio quirúrgico se marcará y se limpiará. El sitio quirúrgico estará localizado al menos 3 cm en dirección lateral (a la izquierda) con respecto a la línea media, y se encontrará en posición caudal de tal forma que el sitio sólo incluya fibras distales del músculo recto del abdomen.

Se practicará una incisión longitudinal en la piel, realizándose la disección del tejido subcutáneo para exponer un área con unas dimensiones de 5 cm x 5 cm. Se creará un defecto de espesor completo en la pared abdominal, retirando todos los tejidos excepto la piel, la hipodermis y el peritoneo. El peritoneo y la fascia transversalis de revestimiento permanecerán intactos.

El sitio del defecto se reparará con la construcción de tejido submucoso, con el dispositivo de reparación de hernias Dexon®, o con el dispositivo de rejilla de reparación de hernias Marlex®. El sitio del defecto se rellenará con una sección de cada uno de estos dispositivos que sea de igual tamaño que el defecto. Los dispositivos se suturarán a los tejidos normales adyacentes de la pared corporal con material de sutura 2-0 prolene. El tejido subcutáneo de revestimiento se cerrará tras colocar un tubo de drenaje de Penrose que saldrá de la piel adyacente a la línea de
sutura.

Ratas: cada animal será anestesiado con una inyección intraperitoneal de pentobarbital sódico (40 mg/kg) seguido de inhalación (mascarilla nasal) de metoxiflurano y oxígeno, según sea necesario, para mantener un plano quirúrgico de anestesia. El procedimiento quirúrgico será idéntico al descrito anteriormente para el perro, con la siguiente excepción: el sitio del defecto tendrá unas dimensiones de 1,5 cm x 1,5 cm. La ubicación del defecto será la misma ubicación relativa descrita para el estudio del perro: en la pared abdominal lateral ventral. La sutura utilizada para fijar los dispositivos de reparación será 2-0 prolene.

Claims

1. Construcción unitaria de láminas múltiples para injerto de tejidos, que comprende múltiples tiras de submucosa, en la que cada una de dichas múltiples tiras presenta una primera y segunda superficies planas, y cada tira comprende tejido submucoso de un vertebrado de sangre caliente, en la que dicha construcción para injertos presenta una superficie plana con un área de superficie de mayores dimensiones que el área de superficie de cualquiera de las superficies planas de las tiras individuales utilizadas para conformar dicha construcción, estando dotada además dicha construcción para injertos de una pluralidad de perforaciones que permiten el paso de fluidos a través de la construcción para injertos.

2. Construcción para injertos, según la reivindicación 1, en la que la submucosa es submucosa intestinal.

3. Construcción para injertos, según la reivindicación 1 ó 2, en la que las perforaciones definen un eje de perforación longitudinal, y cada perforación se practica de manera que el eje de perforación no sea perpendicular a la superficie plana.

4. Construcción para injertos, según la reivindicación 1 ó 2, en la que la construcción para injertos es una construcción para injertos heterolaminar.

5. Construcción para injertos, según la reivindicación 1 ó 2, en la que la construcción para injertos es una construcción unitaria para injertos homolaminar.

6. Construcción para injertos, según las reivindicaciones 1 ó 2, en la que las tiras submucosas se acondicionan de manera que presenten una deformación no mayor del 20%.

7. Construcción para injertos, según las reivindicaciones 1 ó 2, en la que las perforaciones se distribuyen de manera uniforme a lo largo de las superficies de la construcción para injertos.

8. Construcción para injertos, según las reivindicaciones 1 ó 2, en la que las perforaciones están separadas entre sí por una distancia comprendida entre 2 y 20 mm aproximadamente.

9. Construcción para injertos, según la reivindicación 8, en la que las perforaciones se distribuyen de manera uniforme a lo largo de las superficies de la construcción para injertos.

10. Construcción para injertos, según las reivindicaciones 1 ó 2, en la que las perforaciones presentan un tamaño sustancialmente uniforme y tienen un diámetro comprendido entre aproximadamente 0,5 y 3 mm.

11. Construcción para injertos a base de tejidos, según la reivindicación 1 ó 2, en la que las tiras de tejido submucoso constan esencialmente de la túnica submucosa, la túnica muscular y el stratum compactum de la túnica mucosa.

12. Construcción para injertos a base de tejidos, según las reivindicaciones 1 ó 2, en la que las tiras de tejido submucoso que conforman dicha construcción están orientadas de manera que la construcción presente propiedades pseudoisotrópicas.

13. Construcción para injertos a base de tejidos, según la reivindicación 4, en la que las láminas de tejido submucoso que conforman dicha construcción están orientadas de manera que la construcción presente propiedades pseudoisotrópicas.

14. Procedimiento para la preparación de una construcción unitaria de láminas múltiples perfeccionada de injerto de tejidos, consistiendo dicho procedimiento en:

: superponer como mínimo una parte de una tira de tejido submucoso con otra tira de tejido submucoso, estando delaminadas las tiras de tejido submucoso a partir de la túnica muscular y la parte luminal de la túnica mucosa de un vertebrado de sangre caliente;

: comprimir como mínimo las partes superpuestas de las tiras de tejido submucoso en condiciones que permitan, como mínimo, la deshidratación parcial del tejido submucoso comprimido, de manera que el área de superficie de la construcción para injertos sea mayor que el área de superficie de cualquiera de las tiras individuales utilizadas para conformar dicha construcción, y

: perforar, como mínimo, las partes superpuestas del tejido submucoso.

15. Procedimiento, según a reivindicación 14, caracterizado porque se distribuyen las perforaciones de manera uniforme sobre las superficies de la construcción para injertos.

16. Procedimiento, según a reivindicación 14, en el que las perforaciones en el tejido se practican clavando alfileres (2) en el tejido.

17. Procedimiento, según la reivindicación 16, en el que los alfileres (2) se clavan en el tejido con un ángulo distinto de 90º con respecto al plano de la superficie del injerto.

18. Procedimiento, según la reivindicación 14, en el que el tejido ha sido secado hasta conseguir un contenido de agua de aproximadamente 10%-20% en peso en el momento en el que se perfora el tejido.

19. Procedimiento, según la reivindicación 14, en la que las tiras de tejido submucoso que conforman dicha construcción están orientadas de manera que la construcción presente propiedades pseudoisotrópicas.

20. Procedimiento, según la reivindicación 14, en la que las tiras submucosas componentes se acondicionan de manera que presenten una deformación no mayor del 20%.

21. Procedimiento, según la reivindicación 14, que comprende además las etapas de conformar múltiples láminas de tejido submucoso a partir de dichas tiras superpuestas;

y superponer una primera lámina de tejido submucoso con una lámina adicional de tejido submucoso.

22. Procedimiento, según la reivindicación 21, en el que las láminas de tejido submucoso se conforman como láminas homolaminares.

23. Construcción para injertos a base de tejidos, según la reivindicación 1 ó 2, en la que la construcción para injertos es perforada con al menos 2,0 perforaciones por cm^{2}.