ES2265284B1 - Metodo de analisis de residuos de plaguicidas en muestras vegetales. - Google Patents
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Abstract
El objeto de la invención es un método de análisis de residuos de plaguicidas en vegetales. El método utiliza el dispositivo de interfase para el acoplamiento directo de cromatografía de líquidos y cromatografía de gases, denominado en la literatura científica interfase TOTAD (Through Oven Transfer Adsorption Desorption). El método sólo requiere una etapa de extracción previa al análisis cromatográfico. Los plaguicidas son extraídos de la muestra con un disolvente orgánico. Volúmenes de extracto muy superiores a los habituales se inyectan directamente en el cromatógrafo de gases no siendo necesaria ninguna etapa previa de limpieza ni de concentración del extracto. La interfase TOTAD permite la inyección de volúmenes de extracto muy superiores a los que normalmente se inyectan en el cromatógrafo de gases.
Description
Método de análisis de residuos de plaguicidas en
muestras vegetales.
Química Analítica. Tecnología de Alimentos.
El control de enfermedades y plagas en el
cultivo de vegetales hace necesario el empleo de fitosanitarios que
pueden provocar residuos en los mismos. Estos plaguicidas, sobre
todo en el caso de los liposolubles, pueden concentrarse en el
cuerpo humano por el consumo regular de vegetales. Es necesario por
tanto disponer de métodos rápidos, sensibles y fiables que permitan
controlar dichos residuos.
La cromatografía de gases (GC) ha sido la
técnica analítica más frecuentemente usada en la determinación de
residuos de plaguicidas en vegetales con diferentes detectores
selectivos (L.V. Podhorniak, J.F., Negron, F.D. Griffith Jr., J.
Assoc. Off Anal. Chem. Int. 2001, 84,
873-890; E.Ueno, H. Oshima, I. Salto, H. Matsumoto,
J. Assoc. Off Anal. Chem. Int. 2003, 86,
1241-1251) y más recientemente acoplada a la
espectrometría de masas (E. Ueno, H. Oshima, I. Saito, H.
Matsumoto, Y. Yoshimura, H. Nakazawa J. Assoc. Off Anal. Chem.
Int. 2004, 87, 1003-1015; J. L.
Martínez-Vidal, F.J. Arrebola, M.
Mateu-Sánchez, J. Chromatogr. A, 2002,
959, 203-213). El empleo de la GC requiere que el
analito sea suficientemente volátil. En la determinación de
plaguicidas menos volátiles o termolábiles, como los carbamatos, se
han utilizado métodos basados en la cromatografía de líquidos (LC)
(C. Sánchez- Brunete, B. Albero, J. L. Tadeo, J. Food Protec. 2004,
67, 2565-2569) y en el acoplamiento de
cromatografía de líquidos y espectrometría de masas
(LC-MS) (D. Ortelli, P. Edder, C. Corvi, Ana.
Chim. Acta, 2004, 520, 33-45; C. Jansson,
T. Pihlstróm, B.G. Österdahl, K.E. Markides, J. Chromatogr.
A, 2004, 1023, 93-104).
Habitualmente, el análisis de residuos de
plaguicidas se lleva a cabo según el método oficial (AOAC Official
Method 985.22) que implica la extracción con acetona, seguida de
partición con éter de petróleo y diclorometano, la posterior
concentración del extracto obtenido y su análisis mediante
cromatografía de gases con diferentes detectores
(GC-ECD, GC-NPD y
GC-MS) (Official Methods of Analysis,
2000 17th Ed., AOAC INTERNATIONAL, Gaithersburg, MD).
Para la extracción de los plaguicidas de la
matriz se han utilizado disolventes distintos a la acetona, como
acetonitrilo (S.M. Lee, M.L. Papathakis, C.F.
Hsiao-Ming, J.E. Carr, J. Anal. Chem.,
1991, 339, 376-383; W. Liao, T. Joe, W.G.
Cusick, J. Assoc. Off Anal. Chem. Int., 1991, 74,
554-565) o acetato de etilo (D.M. Holstege, D.L.
Scharberg, E.R. Tor, L.C. Hart, F.D. Galey, J. Assoc. Off Anal.
Chem. Int., 1994, 77, 1263-1274; A. R.
Fernández Alba, A. Valverde, A. Agüera, M. Contreras, J.
Chromatogr. A, 1994, 686, 263-274). El
empleo de disolventes parcialmente miscibles con el agua hace
necesario llevar a cabo una etapa de partición para eliminar el
contenido de agua procedente de la matriz vegetal del extracto. Se
han empleado diferentes disolventes como éter de petróleo o
diclorometano, así como mezclas de ellos como acetato de
etilo-ciclohexano (A. Sannino, M. Bandini, L.
Bonzoni, J. Assoc. Off Anal. Chem. Int. 2003,
86(1), 101-108; L.V. Podhorniak, J.F. Negron,
F.D. Griffith Jr., J. Assoc. Off Anal. Chem. Int.,
2001, 84(3), 873-890; W. Specht, S.
Pelz, W. Gilsbach, J. Anal. Chem., 1995, 353,
183-190) o diclorometano-éter de petróleo (M. Gamon,
C. Lleo, A. Ten, F. Mocholí, J. Assoc. Off Anal. Chem. Int.,
2001, 84(4), 1209-1216).
Frecuentemente es necesario realizar una limpieza del extracto
previo al análisis cromatográfico. La etapa de limpieza puede
llevarse a cabo por cromatografía de adsorción utilizando florisil,
alúmina o gel de sílice (A. Sannino, M. Bandini, L. Bolzoni, J.
Assoc. Off Anal. Chem. Int., 2003, 86,
101-108), cromatografía de permeación de gel (GPC)
(A. Sannino, M. Bandini, L. Bolzoni, J. Assoc. Off Anal. Chem.
Int., 1999, 82, 1229-1238) y extracción
en fase sólida (SPE) (L.V. Podhorniak, J.F. Negron, F.D. Griffith
Jr., J. Assoc. Off Anal. Chem. Int., 2001,
84(3), 873-890).
El análisis de los grupos de compuestos
considerados presenta una serie de inconvenientes que afectan
fundamentalmente a las etapas de extracción, partición y limpieza
del extracto. En primer lugar, el tiempo requerido para la
preparación de la muestra es alto, lo que constituye una desventaja
importante en determinados casos. Además, es necesario emplear
volúmenes relativamente elevados de disolventes orgánicos tóxicos,
con el consiguiente riesgo para la salud del analista y los efectos
nocivos que supone en relación con el impacto medioambiental. Por
otra parte, durante todo el proceso se pueden introducir impurezas,
procedentes del disolvente o de los materiales empleados, que se
concentran posteriormente junto a los analitos y dan lugar a
interferencias y errores analíticos y, en último término, a análisis
deficientes en cuanto a su selectividad y sensibilidad.
Existen varias alternativas al uso de grandes
cantidades de disolventes orgánicos, como la extracción con fluidos
supercríticos (SFE) en la que las condiciones de extracción pueden
ser seleccionadas para conseguir una extracción más selectiva que
no requiera realizar la etapa de limpieza antes del análisis
cromatográfico (S.J. Lehotay, J. Chromatogr. A, 1997,
785, 289-312; A. Valverde-García,
A.R. Fernández Alba, A. Agüera, M. Contreras, J. Assoc. Off
Anal. Chem. Int., 1995, 78, 867-873) o
como la extracción por dispersión de la matriz en fase sólida (E.
Viana, J.0 Molto, G. Font J. Chromatogr. A, 1996, 754,
437-444; M. Anastassiades, S.J. Lehotay, D.
Stajnbaher, F.J. Schenk, J. Assoc. Off Anal. Chem. Int.,
2003, 86(2), 412-431) ola extracción
con "stir bar sorptive" (P. Sandra; B. Tienpont, F. David.,
J. Cromatogr. A, 2003, 1000,
299-309).
El establecimiento de límites máximos de
residuos (LMRs) cada vez menores en la legislación Europea
(European Council Directives 76/895 EEC, 86/363/EEC y 90/642/EEC),
ha hecho necesario una mejora en los límites de detección de los
métodos multirresiduo utilizados. El empleo de la técnica de
inyección de grandes volúmenes es una alternativa para poder
alcanzar estos límites de detección cada vez más exigentes. Se han
desarrollado diversas técnicas que permiten la inyección de hasta
varios cientos de microlitros en cromatografía de gases al tiempo
que se mantienen unas buenas características cromatográficas (F.J.
López, J. Beltran, M. Forcada and F. Hernández., J. Chromatogr.
A, 1998, 823, 25-33). Utilizando un
inyector convencional con/sin división de flujo se han inyectado 10
\muL de muestra en el análisis de plaguicidas en vegetales (A.
Agüera, M. Contreras, J. Crespo, A.R.
Fernández-Alba, Analyst, 2002,
127(3), 347-354; A. Agüera, L. Piedra, M.D.
Hernando, A.R. Fernández Alba, M. Contreras, Analyst,
2000, 125(8), 1397- 1402). También se ha usado el
inyector de temperatura programada (PTV) rellenando el tubo de
vidrio del mismo con carbofrit (M. Gamón, C. Lleó, A. Ten, F.
Mocholí, J. Assoc. Off Anal. Chem. Int., 2001,
84(4), 1209-1216). En este caso, la
temperatura inicial del inyector debe mantenerse a la temperatura de
ebullición del disolvente mientras la división de flujo se
encuentre abierta. Al cabo de un tiempo, se cierra la división de
flujo y se calienta el inyector para que los analitos pasen a la
columna del cromatógrafo de gases. En esta técnica el disolvente se
elimina en forma evaporativa por la vía de división de flujo, por
lo que esta forma de actuar del PTV solamente es recomendada para la
determinación de solutos de alto punto de ebullición porque los
solutos más volátiles se pierden por evaporación junto con el
disolvente. Se ha descrito una modificación a este modo de operar
con el PTV, en la cual la columna de cromatografía de gases se
desconecta del cuerpo del inyector antes de introducir la muestra,
y el disolvente es eliminado, tanto en modo evaporativo como no
evaporativo por la parte posterior del inyector (J. Villén, F.J.
Señorans, M. Herraiz, G. Reglero, J. Tabera; J. Chromatogr.
Sci., 1992, 30, 261-266).
La interfase TOTAD (Through Oven Transfer
Adsorption Desorption) (patente española nº ES 2
152-153; patente en EEUU 6,402.947 B1) o bien el
sistema mejorado (patente española nº P200501284) se basa en un
inyector PTV, que ha sido ampliamente modificado, y una serie de
válvulas de apertura y cierre así como una válvula de seis vías.
Las modificaciones afectan al sistema neumático, la introducción de
la muestra, la eliminación del disolvente y el modo de operación
(M. Pérez, J. Alario, A. Vázquez, J. Villén, J. Microcol
Sep., 1999, 11(8), 582-589). La
interfase TOTAD ha demostrado ser eficaz para el acoplamiento
directo de cromatografía de líquidos y cromatografía de gases,
cuando se trabaja tanto en fase normal como en fase inversa en
cromatografía de líquidos. Así mismo puede ser utilizada para la
introducción de grandes volúmenes de muestra en cromatografía de
gases. La interfase TOTAD ha sido utilizada en el análisis de
residuos de plaguicidas por acoplamiento directo de cromatografía
de líquidos y cromatografía de gases, en agua (M. Pérez, J. Alario,
A. Vázquez, J. Villén, J. Microcol. Sep. 1999,
11(8), 582-589; M. Pérez, J. Alario, A.
Vázquez, J. Villén, Anal. Chem. 2000, 72,
846-852) y en aceite de oliva (R. Sánchez, A.
Vázquez, J. Villén, J. C. Andini, J. Chromatogr. A,
2004, 1029, 167-172; R. Sánchez, A. Vázquez,
D. Riquelme y J. Villén, J. Agric. Food Chem., 2003,
51, 6098-6102) y en el análisis de residuos de
plaguicidas en agua por introducción de grandes volúmenes de
muestra (J. Alario, M. Pérez, A. Vázquez, J. Villén, J.
Chromatogr. Sci., 2001, 39, 65-69).
El método emplea el dispositivo de interfase
para el acoplamiento directo de cromatografía de líquidos y
cromatografía de gases (patente española nº ES 2
152-153; patente en EEUU 6,402.947 B1, licenciada a
la empresa KONIK-Tech, Sant Cugat del Vallés,
Barcelona); o bien el sistema mejorado (patente española nº
P200501284), denominada interfase TOTAD (Through Oven Transfer
Adsorption Desorption) en la literatura científica, para la
inyección de grandes volúmenes en el cromatógrafo de gases. El
cromatógrafo de gases está equipado con la interfase TOTAD, que es
totalmente automática. La interfase TOTAD se une a la válvula de
inyección y permite introducir volúmenes variables de muestra
empujados por un disolvente mediante una bomba de cromatografía de
líquidos.
Los plaguicidas son extraídos de la muestra
vegetal, previamente triturada, empleando pequeñas cantidades de
disolvente orgánico. El extracto obtenido, una vez filtrado, se
introduce en la válvula de inyección que se conecta directamente a
la válvula de seis vías de la interfase TOTAD mediante un tubo. Una
bomba unida a la válvula de inyección transfiere automáticamente el
volumen de extracto desde la válvula de inyección, mediante la
interfase TOTAD, a la columna de cromatografía de gases. Los
disolventes utilizados pueden ser tanto disolventes polares como
apolares. El caudal al cual se produce la transferencia al
cromatógrafo de gases puede variar. El adsorbente colocado en el
tubo interior de la interfase retiene a los plaguicidas y el
disolvente es eliminado arrastrado por la corriente de gas a través
del tubo o capilar conectado al extremo opuesto de la interfase.
Durante la etapa de adsorción de los analitos se introducen flujos
de gas controlados por ambas entradas de gas de la interfase TOTAD.
Una vez eliminado el disolvente, los analitos se desorben
térmicamente. Durante la etapa de desorción de los analitos el
flujo controlado de gas entra exclusivamente por la entrada
convencional de gas en un inyector con temperatura programada (PTV)
que arrastra a los analitos desorbidos conduciéndoles a la columna
del cromatógrafo de gases donde tiene lugar el análisis
cromatográfico. El control de los tiempos de apertura y cierre de
las diferentes válvulas de abrir y cerrar y de la válvula de seis
vías, que forman parte de la interfase TOTAD, así como de los
flujos de gas por ambas entradas de gas de la interfase TOTAD, es
fundamental para el correcto funcionamiento del método de
análisis.
El método de análisis permite inyectar
diferentes volúmenes de extracto lo que modifica los tiempos de
apertura y cierre de las válvulas que componen la interfase.
El método de análisis objeto de la invención se
basa en la inyección de volúmenes de extracto superiores a los
habituales en cromatografía de gases, para lo que utiliza el
dispositivo de interfase para el acoplamiento directo de
cromatografía de líquidos y cromatografía de gases (patente española
nº ES 2 152-153; patente en EEUU 6,402.947 B1,
licenciada a la empresa KONIK-Tech, Sant Cugat del
Vallés, Barcelona) o bien el sistema mejorado (patente española nº
P200501284) denominada interfase TOTAD (Through Oven Transfer
Adsorption Desorption) en la literatura científica.
El método, exceptuando la etapa de extracción,
es totalmente automático. Las válvulas de apertura y cierre y la
válvula de seis vías de la interfase TOTAD son electroválvulas que
se controlan desde el software del ordenador.
El método consta de dos fases claramente
diferenciadas: Una primera fase en la cual se extraen los
plaguicidas de la muestra y una segunda fase que constituye el
análisis cromatográfico de los plaguicidas extraídos.
Primera
Fase
Una cantidad de muestra suficiente que permita
la homogeneidad de la misma es triturada. Se toma una pequeña
alícuota de la muestra triturada y homogenizada a la cual se añade
una pequeña cantidad de disolvente orgánico, pudiéndose añadir así
mismo cantidades variables de sales que favorezcan la extracción de
aquellos plaguicidas más polares. La mezcla se mantiene en
agitación durante el tiempo necesario para la extracción. A
continuación se permite la separación de las dos fases acuosa y
orgánica, recogiendo ésta última y filtrándola.
Segunda
Fase
En esta fase el tubo interior de la interfase
TOTAD se rellena de un material adsorbente, de una determinada
longitud, con un sistema que impida el desplazamiento del
adsorbente. El material adsorbente puede ser cualquier material que
retenga los plaguicidas y que permita el paso del gas portador y
del líquido que lo ha de atravesar.
La bomba que empuja al disolvente se conecta a
la válvula de inyección y ésta a la válvula de seis vías mediante
un tubo. La válvula de seis vías, a su vez, se conecta mediante
otro tubo insertado en el tubo interior de la interfase TOTAD, de
forma que se introduzca una longitud mayor que el extremo de la
columna capilar de cromatografía de gases que se ha introducido por
este mismo extremo.
Durante fase del análisis se distinguen cinco
etapas:
1) Estabilización: Antes de iniciar la
inyección, se estabiliza la interfase TOTAD a la temperatura a la
que se va a llevar a cabo la inyección, que debe ser la adecuada
para que los plaguicidas queden retenidos en el adsorbente que
rellena el tubo interior de la interfase y para conseguir la
eliminación del disolvente. El gas circula a través de dicho tubo
entrando por las dos entradas de gas de la interfase. La válvula
EV1 de la interfase se encuentra cerrada y la EV2 abierta (EV1 y EV2
corresponde a la nomenclatura utilizada en la patente española nº
ES 2 152-153).
2) Inyección: Se inyecta el extracto de
la muestra a analizar en la válvula de inyección. Se acciona la
válvula de inyección, con lo que el extracto inyectado es empujado
por el disolvente, impulsado por al bomba hacía la válvula de seis
vías.
3) Transferencia del extracto a GC: La
válvula de seis vías cambia su posición automáticamente. El flujo
de gas que atraviesa el adsorbente empuja al extracto a través del
mismo. Los plaguicidas son retenidos mientras que el disolvente es
eliminado, total o parcialmente evaporado, por el tubo de salida.
Con el fin de mejorar la retención de los plaguicidas en el
adsorbente el flujo del disolvente puede tomar diferentes
valores.
4) Eliminación de los restos del
disolvente: Una vez que la etapa de transferencia del extracto
a GC ha finalizado, la válvula de seis vías cambia automáticamente
su posición y se abren la válvula EV1. Al mismo tiempo se eliminan
los restos de disolvente que se encuentran en el tubo interior de la
interfase TOTAD, así como los que permanecen en el tubo capilar que
une la válvula de seis vías con el tubo interior de la interfase
TOTAD. Estas condiciones se mantienen el tiempo necesario para que
la eliminación del disolvente sea tal que el remanente no
interfiera en la cromatografía de gases.
5) Desorción térmica: Pasado el tiempo
necesario para la eliminación del disolvente, las electroválvulas
de apertura y cierre, que forman parte de la interfase TOTAD (EV1 y
EV2) se cierran. Se cierra también la entrada de flujo de helio por
la entrada que atraviesa el adsorbente, y se modifica, si es
necesario, el flujo o presión por la otra entrada al valor adecuado,
de modo que el gas que ahora entra solo por la entrada situada en
la parte externa de la interfase, atraviesa el adsorbente y sale
solo por la columna de cromatografía de gases. En este momento se
calienta rápidamente el inyector hasta la temperatura necesaria para
producir la desorción térmica de los plaguicidas, que son
arrastrados por la corriente de helio a la columna cromatográfica,
donde tiene lugar el análisis cromatográfico en las condiciones
previamente programadas.
Las ventajas que presenta el método objeto de
invención son las siguientes:
- El método objeto de la invención puede ser
utilizado para el análisis multirresiduo de plaguicidas en un único
análisis.
- El método objeto de invención permite el
análisis de residuos de plaguicidas en muestras de vegetales sin
más tratamiento previo de la muestra que la extracción.
- El método objeto de la invención no requiere
el empleo de cantidades elevadas de disolventes orgánicos
perjudiciales para la salud del analista y para el medio
ambiente.
- El método objeto de la invención solo necesita
manipulación de la muestra por parte del analista en la etapa de
extracción, por lo que reduce los errores y contaminaciones
causados en dicha manipulación.
- El método objeto de la invención, incluye una
etapa de extracción que es rápida y una etapa de análisis que es
totalmente automática, por lo que es especialmente adecuado para el
análisis de residuos de plaguicidas en controles de rutina.
- El método objeto de la invención permite la
inyección en el sistema cromatográfico de volúmenes de extracto
superiores a los habitualmente inyectados en cromatografía de
gases, que pueden ser variables, lo que permite eliminar la etapa
de concentración del extracto dando lugar a un aumento de la
sensibilidad y a una mejora de los límites de detección.
- El método objeto de la invención permite
utilizar numerosas veces el tubo interior de la interfase TOTAD
relleno del material adsorbente, sin que tenga que ser
sustituido.
- En el método objeto de la invención no se
produce deterioro del sistema de cromatografía de gases debido a la
introducción en el mismo de disolventes agresivos para el mismo ya
que éstos son previamente eliminados.
- El método objeto de la invención permite
utilizar diferentes sistemas de detección en cromatografía de
gases.
- El tiempo total del análisis del método objeto
de la invención es significativamente menor que el tiempo que se
requiere cuando se utiliza el método convencional.
Cromatograma correspondiente al análisis de una
muestra de tomate que fue fortificada a 0.05 mg/kg con cada uno de
los siguientes plaguicidas: dimetoato, diazinón, fenitrotión,
malatión, fentión, clorpirifos, clorfenvinfos, metidatión,
tetraclorvinfos. Las condiciones de extracción así como las
condiciones en las cuales se ha obtenido el cromatograma son las
indicadas en el ejemplo de realización de la invención. El volumen
de extracto inyectado fue de 50 \muL y el flujo del disolvente al
cual se realiza la transferencia de 0.1 mL/min. El tiempo indicado
en el cromatograma de gases corresponde solo al tiempo de análisis
del cromatógrafo de gases. La identificación de los picos es la
siguiente: 1) dimetoato 2) diazinón 3) fenitrotión 4) malatión 5)
fentión 6) clorpirifos 7) clorfenvinfos 8) metidatión y 9)
tetraclorvinfos.
Los análisis se han realizado utilizando una
bomba cuaternaria (HP modelo 1100), una válvula de inyección manual
(modelo 7125 Rehodyne, CA) con un lazo (loop) de 50 \muL y un
cromatógrafo de gases (Konik modelo HRGC 4000B) equipado con un
detector de Nitrógeno-Fósforo e interfase TOTAD.
La interfase TOTAD se coloca horizontalmente en
el lado izquierdo del cromatógrafo de gases. El software
_{[J1]}EZchrom (Konik, Sant Cugat del Vallés, Barcelona) permite
manejar la interfase desde el ordenador y obtener datos del
cromatógrafo de gases.
La columna de cromatografía de gases utilizada
es una columna capilar de sílice fundida de 30 m de longitud y 0.32
mm de diámetro interno rellena de 5% de fenilmetilsilicona con un
espesor de 0.25 \mum
Primera fase del
método
Una muestra de tomate comprada en el mercado se
trituró y homogeneizó. De esta muestra triturada se cogieron 2.5 g
y se fortificó, añadiendo 125 \muL de una disolución de
plaguicidas en metanol a 1 mg/L consiguiendo así una muestra
fortificada con 0.05 mg/Kg de tomate de cada uno de los siguientes
plaguicidas: dimetoato, diazinón, fenitrotión, malatión, fentión,
clorpirifos, clorfenvinfos, metidatión, tetraclorvinfos, obtenidos
de Chem. Service Inc. (West Chester PA,SA). Una vez fortificada la
muestra se añadieron 2g de sulfato de sodio anhidro y 5 mL de
acetato de etilo. Esta mezcla se agita durante un minuto y se deja
decantar, produciéndose la separación entre fase orgánica y acuosa.
La fase orgánica (fase superior) se extrae con una jeringa y se
filtra a través de un filtro de 0.22 \mum
(Millex-GN SLGN 013 NL).
Segunda fase del
método
El tubo interior de la interfase TOTAD de 2 mm
de diámetro interno y 10 cm de longitud se rellenó con 1 cm de
Tenax TA 80-100 mesh (Chrompack, Mieddelburg,
Holanda) sujeto, por ambos extremos, con lana de vidrio, para
evitar el desplazamiento del Tenax. Una vez relleno se acondicionó
con un flujo de helio de 500 mL/min atravesando el adsorbente y fue
calentado desde 50ºC hasta 350ºC a 50ºC/10 min y mantenido durante
60 min a la temperatura final. Durante las cinco etapas de la fase
de análisis, las condiciones usadas fueron las siguientes:
1) Estabilización: La interfase se
estabiliza a 100ºC. El flujo de helio es de 500 mL/min por ambas
entradas. La temperatura del horno del cromatógrafo de gases se
mantiene a 40ºC.
2) Inyección: Una alícuota del extracto
se introdujo en la válvula de inyección de cromatografía de
líquidos (válvula Rehodyne 7125) que tenía un lazo (loop) de 50
\muL. El flujo del disolvente se mantiene a 0.1 mL/min. El
disolvente utilizado fue acetato de etilo.
3) Transferencia del extracto al GC: La
válvula de seis vías conmuta y la solución es impulsada por la
bomba de cromatografía de líquidos al interior del tubo interior de
la interfase a un flujo de 0.1 mL/min. Los analitos son retenidos
en el adsorbente y el disolvente es eliminado arrastrado por el
helio.
4) Eliminación restos de disolvente: Al 1
min 40 s termina la etapa de transferencia. En este momento se
cambia la válvula de seis vías con lo que el disolvente impulsado
por la bomba de cromatografía de líquidos de la válvula se envía al
desecho. El disolvente que permanece en el tubo de transferencia es
también empujado al desecho por el flujo de helio. Estas condiciones
se mantienen durante 2 min para asegurar la eliminación de los
restos de disolvente del tubo interior de la interfase TOTAD y del
tubo de transferencia.
5) Desorción térmica: A los 3 min 40 s se
cierran las válvulas de apertura y cierre de la interfase. Se
interrumpe el flujo de helio que atraviesa el adsorbente y se
cambia la presión por la otra entrada de modo que circule por la
columna un caudal de 1.8 mL/min. Se calienta la interfase hasta
275ºC. Los plaguicidas son desorbidos y empujados por el flujo de
helio a la columna del cromatógrafo de gases. A los 4 min 10 s
comienza el análisis cromatográfico, de acuerdo con el programa que
se indica más adelante.
Las condiciones del análisis cromatográfico son
las siguientes: se mantiene la columna a 40ºC durante 1 min, a
continuación se aumenta la temperatura hasta 170ºC a 20ºC/min,
después a 3ºC/min hasta 210ºC y a 5ºC/min hasta 230ºC manteniendo
esta temperatura final durante 5 minutos. La temperatura del
detector de Nitrógeno-Fósforo se mantiene a 250ºC.
Durante las etapas de inyección y de eliminación del disolvente la
temperatura del horno del cromatógrafo de gases se mantiene a
40ºC.
Claims (11)
1. Método de análisis de residuos de plaguicidas
en vegetales, caracterizado por utilizar la interfase TOTAD
(Through Oven Transfer Adsorption Desorption).
2. Método de análisis de residuos de plaguicidas
en vegetales, según reivindicación 1, caracterizado por
incluir una etapa de extracción.
3. Método de análisis de residuos de plaguicidas
en vegetales, según reivindicaciones 1 y 2, caracterizado
por poder utilizar diferentes disolventes para obtener el
extracto.
4. Método de análisis de residuos de plaguicidas
en vegetales, según reivindicaciones 1, 2 y 3 caracterizado
por poder inyectar volúmenes variables de extracto.
5. Método de análisis de residuos de plaguicidas
en vegetales, según reivindicaciones 1 y 2, caracterizado
por poder utilizarse tanto para el análisis multirresiduo como
unirresiduo.
6. Método de análisis de residuos de plaguicidas
en vegetales, según reivindicaciones 1 y 4, caracterizado
por transferir el extracto automáticamente al cromatógrafo de
gases.
7. Método de análisis de residuos de plaguicidas
en vegetales, según reivindicaciones 1, 2, 3, 4 y 6
caracterizado por no requerir etapa de partición, ni de
limpieza ni concentración del extracto obtenido.
8. Método de análisis de residuos de plaguicidas
en vegetales, según reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5 y 6
caracterizado por poder utilizar diferentes sistemas de
detección en cromatografía de gases.
9. Método de análisis de residuos de plaguicidas
en vegetales, según reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5 y 6
caracterizado por poder utilizar el tubo del interior de la
interfase de diferentes materiales.
10. Método de análisis de residuos de
plaguicidas en vegetales, según reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5 y 6
caracterizado porque el tubo del interior de la interfase
puede estar relleno con un material inerte o vacío.
11. Método de análisis de residuos de
plaguicidas en vegetales, según reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5 y 6
caracterizado por poder utilizar, en su caso, diferentes
materiales adsorbentes para rellenar el tubo del interior de la
interfase.
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