ES2327198A1 - Procedimiento para analizar plaguicidas en frutos secos. - Google Patents
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Abstract
La invención define un procedimiento para analizar plaguicidas en frutos secos que comprende las etapas de: (a) extraer con disolventes los plaguicidas del fruto seco; (b) someter el extracto obtenido en la etapa (a) a cromatografía líquida de alta eficacia en fase inversa; y (c) someter el extracto eluido obtenido en la etapa (b) a cromatografía de gases; en el que el acoplamiento entre la cromatografía líquida y la cromatografía de gases se efectúa mediante la interfase TOTAD (Through Oven Transfer Adsorption Desorption). Este procedimiento permite analizar plaguicidas en frutos secos de un modo rápido, sencillo, reproducible, fiable y sin apenas manipulación de la muestra, con unos límites de detección muy inferiores a los niveles máximos de residuos (MRLs) establecidos por la legislación europea, y con una repetibilidad satisfactoria tanto del análisis como de todo el procedimiento (extracción y análisis).
Description
Procedimiento para analizar plaguicidas en
frutos secos.
La invención se refiere al campo de los métodos
de análisis aplicados a alimentos. En particular, la invención se
refiere a un procedimiento para analizar plaguicidas en frutos
secos.
Como es bien conocido en el estado de la
técnica, los frutos secos contienen una gran cantidad de
antioxidantes naturales. Así, por ejemplo, los pistachos se han
clasificado recientemente entre los 50 productos alimenticios con
mayor potencial antioxidante (Halvorsen B.L. et al.,
"Content of redox-active compounds (i.e.
antioxidant) in food comsumed in the United States", Am. J.
Clin. Nutr. 2006, 53, 5003-5009).
Los pistachos son una fuente rica en compuestos
bioactivos antioxidantes, especialmente fitoestrógenos, cuyo
consumo diario se asocia a una disminución de la incidencia de
enfermedades cardiovasculares y determinados tumores (Gentile C.
et al., "Antioxidant activiy of Silican Pistachio (Pistacia
ver L. Var. Bronte) nut extract and its bioactive components",
J. Agric. Food Chem. 2007, 55, 643-648).
Recientemente se han descrito los efectos positivos de los
pistachos sobre el estado oxidativo de individuos sanos (Kocyigit A.
et al, "Effects of pistachio nut comsumption on plasma
lipid profile and oxidative status in healthy volunteers",
Nutr. Metab. Cardiovasc. Dis. 2006, 16,
202-209). Los pistachos se usan principalmente como
aperitivo, crudos o tostados, como ingrediente de pastelería y en
la fabricación de carnes fermentadas, helados, pan, salsas y
pudings.
En el cultivo del pistacho es habitual el uso
extendido de plaguicidas y, por tanto, es necesario un control
estricto a fin de proteger al consumidor del impacto perjudicial de
sus residuos. La mayoría de los plaguicidas son hidrófobos y son
absorbidos en matrices lipídicas tales como los frutos secos (con un
contenido de grasa del 50-70%), pasando de este modo
al consumidor.
Habitualmente, el control de los residuos de
plaguicidas se lleva a cabo mediante métodos analíticos que incluyen
etapas de extracción con disolventes, limpieza y concentración,
seguidas de cromatografía de gases con diversos detectores. El
aislamiento de analitos del pistacho y de otros frutos secos es una
tarea complicada y laboriosa debido a la naturaleza grasa de su
matriz. La etapa crucial en el procedimiento analítico para su
determinación es la separación de los residuos de plaguicidas de la
masa de material lipídico, ya que incluso una pequeña cantidad de
lípidos puede deteriorar los inyectores, las columnas capilares y
los detectores del cromatógrafo de gases. Además, las
interferencias de la matriz lipídica pueden ocasionar problemas en
la señal analítica de los plaguicidas analizados. Por ello, tras la
extracción es necesaria una etapa posterior de limpieza. Para tal
fin, se han usado diversas técnicas, principalmente la cromatografía
de exclusión molecular (SEC), el reparto
líquido-líquido (LLP) y la extracción en fase sólida
(SPE). Estas técnicas hacen que el análisis sea muy costoso, y que
requiera mucho tiempo y grandes cantidades de disolventes orgánicos.
Además, durante estos procedimientos los analitos pueden
contaminarse y perderse durante la manipulación de la muestra. Se
ha propuesto la cromatografía de immunoafinidad (IA) como
procedimiento de limpieza para la determinación de tifluzamida en
muestras de cacahuete (Rejeb et al., "Development and
characterization of immunoaffinity columns for the selective
extraction of a new developmental pesticide: Thifluzamide, from
peanuts", Anal. Chim. Acta, 2001, 432,
193-200).
Métodos alternativos, tal como la extracción con
fluidos supercríticos (SFE), la extracción con líquidos presurizados
o la extracción asistida por microondas (MAE), apenas se usan dado
que los frutos secos son matrices complejas algunas de cuyas
características tales como el tamaño de partícula, el contenido de
humedad, etc., son decisivas en la eficacia de la extracción. La
extracción en fase sólida (SPE) no puede usarse con frutos secos ya
que la muestra debería estar en estado líquido homogéneo antes de
adicionarla a un dispositivo SPE de columnas o discos. La
dispersión de matriz en fase sólida (MSPD) fue introducida en 1989
por Barker et al. (Barker et al., J. Chromatrogr.,
1989, 475, 353) para la ruptura y extracción simultánea de muestras
sólidas y semisólidas. La MSPD supone la homogeneización y
dispersión de una pequeña cantidad de matriz con material inerte de
relleno (normalmente octadecil sílice, C_{18}), seguidas de la
elución de los analitos con una pequeña cantidad de disolvente. Los
extractos así obtenidos ya pueden ser analizados (Doréa and Lancas,
"Matrix solid phase extraction of organophosphorus and synthetic
pyrethroid pesticides in cashew nut and passion fruit", J.
Microcolumn. Sep., 1999, 11(5), 367-375)
o bien pueden ser sometidos a una etapa de limpieza antes de su
análisis. La MSPD se ha usado para extraer residuos de carbamatos de
muestras de almendras con una etapa posterior de limpieza mediante
SPE usando alúmina y C_{18} como material inerte de relleno de
limpieza, si bien se han obtenido resultados poco satisfactorios
debido a la gran cantidad
de grasa presente.
de grasa presente.
A fin de resolver este problema se ha desgrasado
previamente la muestra mediante hidrólisis alcalina con NaOH
(Garcinuño et al., "Optimization of matrix
solid-phase dispersion method with subsequent
clean-up for the determination of ethylene
bisdithiocarbamate residues in almond samples", J. Chromatogr.
A., 2004, 1041, 35-41). Husain y colaboradores
han analizado diazinón y etión en pistachos usando MSPD y
cromatografía de capa fina (TLC) para la separación de plaguicidas
del extracto de pistacho, seguidas de cromatografía de gases (GC)
con detección de nitrógeno-fósforo
(GC-NPD) (Husain et al., "Multiresidue
determination of diazinon and ethion in pistachio nuts by use of
matrix solid phase dispersion with a lanthanum silicate
co-column and gas chromatography", Acta
Chromatographica, 2003, 13, 208-214).
El grupo de investigación de los presentes
inventores ha desarrollado un método sencillo, rápido y sensible
para la determinación de plaguicidas organofosforados en vegetales
tales como tomates, por ejemplo (Cortes et al., "Large
Volume GC injection for the analysis of organophosphorus pesticides
in vegetables using the Through Oven Transfer Adsorption Desorption
(TOTAD) interface", J. Agric. Food Chem. 2006, 54,
1997-2002). Los residuos de plaguicida se
extrajeron de las muestras con una pequeña cantidad de acetato de
etilo y sulfato sódico anhidro, no siendo necesarias etapas
adicionales de concentración y limpieza. Los análisis se llevaron a
cabo mediante inyección de grandes volúmenes en un cromatógrafo de
gases empleando la interfase TOTAD (Through Oven Transfer
Adsorption Desorption). Este método, sin embargo, no podría
aplicarse para el análisis de plaguicidas en muestras de frutos
secos debido a la naturaleza grasa de la matriz.
Continúa existiendo en el estado de la técnica,
por tanto, la necesidad de un procedimiento sencillo, rápido y
sensible para la determinación de plaguicidas en frutos secos.
Los presentes inventores han desarrollado un
nuevo método para analizar plaguicidas en muestras de frutos secos
que comprende una etapa de extracción con un bajo consumo de
disolvente, una etapa de cromatografía líquida y una etapa de
cromatografía gaseosa, estando estas acopladas en línea mediante la
interfase TOTAD.
En la cromatografía
líquida-cromatografía gaseosa
(LC-GC) en línea de este método, la LC separa los
plaguicidas del material graso complejo y la fracción LC que
contiene el plaguicida se transfiere automáticamente al cromatógrafo
de gases mediante la interfase TOTAD, permitiendo así un análisis
rápido, sencillo y fiable y con muy poca manipulación de la
muestra.
La interfase TOTAD es un inyector con
temperatura programada (PTV) modificado que permite la inyección de
grandes volúmenes de disolventes, polares o apolares, en
cromatografía de gases capilar así como el acoplamiento en línea de
cromatografía de líquidos, tanto en fase normal como en fase
inversa, y cromatografía gaseosa (RPLC-GC). Así, se
ha utilizado en el análisis de residuos de plaguicidas en agua por
introducción de grandes volúmenes de muestra (J. Alario et
al., "Very Large Volume Sampling of Water in GC using the
TOTAD (Through Oven Transfer Adsorption Desorption) Interface for
Pesticide Residue Analysis", J. Chromatogr. Sci.,
2001, 39, 65-69) y en el análisis de residuos
de plaguicidas en agua por acoplamiento directo de cromatografía de
líquidos y cromatografía de gases, una vez sometida la muestra de
agua a extracción en fase sólida (M. Pérez et al., "TOTAD
(Through Oven Transfer Adsorption Desorption) Interface: Application
to Parathion Residue Analysis", Journal of Microcol. Sep.
1999, 11, 582-89; M. Pérez et al.,
"Pesticide Residue Analysis by Off-Line SPE and
On-Line Reversed Phase LC-GC using
the New TOTAD (Through Oven Transfer Adsorption Desorption)
Interface", Anal. Chem. 2000, 72,
846-852). Igualmente, se ha utilizado en el análisis
de residuos de plaguicidas en aceite de oliva donde la muestra se
introduce directamente en el cromatógrafo de líquidos tras una
simple etapa de filtración como pretratamiento (R. Sánchez et
al., "Automated Multiresidue analysis of pesticides in olive
oil by on-line reversed-phase liquid
chromatography-gas chromatography using the through
oven transfer adsorption-desorption interface",
J. Chromatogr. A., 2004, 1029,
167-172; R. Sánchez et al., "Determination
of organophosphorus and triazine pesticides in olive oil by
on-line coupling reversed-phase
liquid chromatograpy/gas chromatography with
nitrogen-phosphorus detection and an automated
through oven transfer adsorption-desorption
interface", J. AOAC Int. 2005, 88,
1255-1260; y Díaz et al., "Automated
determination of pesticide residues in olive oil by
on-line reversed-phase liquid
chromatography-gas chromatography using the through
oven transfer adsorption-desorption interface with
electron capture and nitrogen-phosphorus detectors
operating simultaneously", J. Chromatogr. A 2007,
1174, 145-150).
Así pues, los presentes autores proporcionan un
procedimiento alternativo para analizar plaguicidas en frutos secos
que es rápido, sencillo, reproducible, fiable y sin apenas
manipulación de la muestra, con unos límites de detección muy
inferiores a los niveles máximos de residuos (MRLs) establecidos por
la legislación europea, y con una repetibilidad satisfactoria tanto
del análisis como de todo el procedimiento (extracción y
análisis).
La presente invención, por tanto, tiene por
objeto proporcionar un procedimiento para analizar plaguicidas en
frutos secos.
La figura 1 muestra el cromatograma de gases
obtenido al analizar mediante el procedimiento de la invención una
muestra de pistachos fortificada con los siguientes plaguicidas
organoclorados: captan, lindano,
\alpha-endosulfan, oxifluorfen y
\beta-endosulfan.
La figura 2 muestra el cromatograma de gases
obtenido al analizar mediante el procedimiento de la invención una
muestra de pistachos fortificada con los siguientes plaguicidas
organoclorados: captan, lindano,
\alpha-endosulfan, oxifluorfen y
\beta-endosulfan.
\newpage
La figura 3 muestra el cromatograma de gases
obtenido al analizar mediante el procedimiento de la invención una
muestra de pistachos fortificada con los siguientes plaguicidas
organofosforados: diazinón, metilclorpirifos, fenitrotión, malatión,
clorpirifos, paratión, fentoato, clorfenvinfos, metidatión y
etión.
La presente invención proporciona un
procedimiento para analizar plaguicidas en frutos secos, en adelante
"procedimiento de la invención", que comprende las siguientes
etapas:
- (a)
- extraer con disolventes los plaguicidas del fruto seco;
- (b)
- someter el extracto obtenido en la etapa (a) a cromatografía líquida de alta eficacia en fase inversa; y
- (c)
- someter el extracto eluido obtenido en la etapa (b) a cromatografía de gases;
en el que el acoplamiento entre la cromatografía
líquida y la cromatografía de gases se efectúa mediante la interfase
TOTAD (Through Oven Transfer Adsorption Desorption).
En el contexto de la invención, el término
"plaguicida" se refiere a cualquier sustancia o mezcla de
sustancias destinadas a prevenir o combatir cualquier plaga o bien
a combatir los parásitos de los cultivos, del ganado, de los
animales domésticos y del hombre y su ambiente. Entre ellos destacan
por su toxicidad los plaguicidas organoclorados y los plaguicidas
organofosforados. El procedimiento de la invención permite realizar
tanto el análisis multirresiduo de distintos plaguicidas como el
análisis individual de cada uno de ellos.
Los frutos secos que pueden ser analizados
mediante el procedimiento de la invención con el fin de determinar
su contenido en plaguicidas pueden ser cualquier fruto seco
conocido. Así, en una realización particular del procedimiento de
la invención, los frutos secos se seleccionan de entre pistachos,
nueces, almendras, cacahuetes, avellanas, bellotas, castañas,
piñones, pipas y anacardos. En una realización preferida, los frutos
secos analizados son
pistachos.
pistachos.
En la primera etapa del procedimiento de la
invención, los plaguicidas son extraídos del fruto seco que ha sido
triturado previamente, empleando pequeñas cantidades de disolvente
orgánico.
El extracto obtenido, una vez filtrado, se
somete después a cromatografía líquida de alta eficacia en fase
inversa (RPLC). La etapa de cromatografía líquida trabaja en fase
inversa a fin de evitar los inconvenientes del empleo de la fase
normal en esta etapa, es decir, el deterioro de las columnas por el
solapamiento de la cola del pico de los componentes lipídicos del
fruto seco con la fracción que contiene los plaguicidas a analizar,
lo que causa la transferencia de pequeñas cantidades de lípidos que
terminan por deteriorar el sistema cromatográfico.
Así, el extracto filtrado se inyecta
directamente en el cromatógrafo de líquidos de modo que se separe la
fracción que contiene los plaguicidas del resto de los otros
componentes del fruto seco extraídos.
La fracción que contiene los plaguicidas se
transfiere entonces automáticamente mediante la interfase TOTAD al
cromatógrafo de gases (GC). Así, en una realización particular del
procedimiento de la invención, las etapas (b) y (c) de análisis son
totalmente automáticas.
El procedimiento de la invención emplea el
dispositivo de interfase denominada interfase TOTAD (Through Oven
Transfer Adsorption Desorption) para el acoplamiento directo de la
cromatografía de líquidos y la cromatografía de gases (patente
española ES 2 152 153; patente en EE.UU. 6,402,947 licenciada a la
empresa KONIK Tech, Sant Cugat del Vallés, Barcelona); o bien el
sistema mejorado (patente española ES 2 263 387). Dicha interfase
TOTAD es totalmente automática y se maneja desde el software del
ordenador.
Finalmente, el cromatógrafo de gases va acoplado
a un detector adecuado de modo que se obtiene un cromatograma de la
fracción de los plaguicidas que se ha transferido al mismo.
Previamente a la realización del procedimiento
de la invención, se procede a determinar la fracción de la
cromatografía de líquidos que hay que transferir al cromatógrafo de
gases. Igualmente, el experto determinará el tipo de columna de GC
y ajustará el programa de temperaturas para conseguir una buena
separación, así como otros parámetros habituales en el análisis
cromatográfico, en función del tipo de muestra a analizar. Dichos
ajustes, en cualquier caso, no será necesario efectuarlos en cada
análisis.
Así pues, para determinar la fracción de la
cromatografía de líquidos que hay que transferir al cromatógrafo de
gases, se procede a calcular el tiempo de elución de los plaguicidas
en la cromatografía de líquidos.
Para ello, se trabaja exclusivamente con
cromatografía de líquidos y se debe obtener un cromatograma de
líquidos que asegure una buena separación entre los plaguicidas y
los componentes lipídicos del fruto seco.
\newpage
Así, se inyecta en el cromatógrafo de líquidos
un extracto de la muestra del fruto seco a analizar previamente
filtrado y fortificado con el plaguicida o plaguicidas a analizar a
una concentración lo suficientemente alta como para ser detectada
en cromatografía de líquidos. Con este fin, se habrá seleccionado la
columna a utilizar y se habrán optimizado los parámetros de la
técnica (disolventes, temperatura, flujos, etc.) que permitan
obtener una buena separación cromatográfica entre los plaguicidas y
los componentes lipídicos del fruto seco.
Finalmente, se disminuye la polaridad del
eluyente, manteniéndolo durante un tiempo suficiente para asegurar
la eliminación total de los lípidos de la columna cromatográfica. A
partir del cromatograma obtenido se fija el tiempo de elución de los
plaguicidas y la fracción de líquidos a transferir al cromatógrafo
de gases.
Para llevar a cabo el análisis de plaguicidas en
frutos secos propiamente dicho, se procede a extraer con
disolventes los plaguicidas del fruto seco en cuestión. Con ese fin
se tritura una cantidad suficiente de muestra de fruto seco que
permita la representatividad de la misma. Se toma después una
pequeña alícuota de la muestra triturada y homogenizada a la cual
se añade una pequeña cantidad de disolvente orgánico, pudiéndose
añadir, asimismo, cantidades variables de sales que favorezcan la
extracción de aquellos plaguicidas más polares. También es
aconsejable añadir un material desecante que retenga el agua
contenida en los frutos secos. La mezcla se mantiene en agitación
durante el tiempo necesario para la extracción. A continuación se
permite la separación de las dos fases acuosa y orgánica, recogiendo
ésta última y filtrándola.
Así, en una realización particular del
procedimiento de la invención, el disolvente empleado en la etapa
(a) de extracción se selecciona de entre diclorometano, cloroformo,
acetato de etilo, éter, éter de petróleo, acetona, y acetonitrilo.
En una realización preferida, el disolvente empleado en la etapa (a)
es diclorometano.
Después, en la etapa (b) del procedimiento de la
invención se procede a inyectar el extracto obtenido en la etapa
(a) en la columna del cromatógrafo de líquidos, tal y como se ha
señalado. A continuación, dicho extracto se eluye de la columna de
modo que se transfiera a cromatografía de gases la fracción
determinada previamente que contiene los plaguicidas del fruto
seco. En una realización particular del procedimiento de la
invención, el eluyente empleado en la cromatografía líquida se
selecciona de entre acetonitrilo, metanol, agua, isopropanol,
n-propanol, dioxano,
terc-butilmetileter y mezclas de los mismos. En una
realización preferida, el eluyente empleado en la cromatografía
líquida de la etapa (b) es una mezcla de acetonitrilo y agua. El
experto en la materia determinará la proporción adecuada de cada
eluyente.
El caudal al cual se produce la transferencia
puede ser diferente al caudal de elución de la etapa de
cromatografía de líquidos.
Para proceder a dicha transferencia, la columna
del cromatógrafo de líquidos se conecta directamente a la válvula
de seis vías de la interfase TOTAD mediante un tubo y la válvula de
seis vías se conecta mediante otro tubo al interior del tubo de
vidrio de la interfase TOTAD, de forma que se introduzca una
longitud mayor que el extremo de la columna capilar que se ha
introducido por este mismo extremo.
El interior del tubo de la interfase,
normalmente un tubo de vidrio, está relleno con un material inerte
de una determinada longitud y sujeto por ambos extremos para
impedir su desplazamiento. Dicho material inerte puede ser
cualquier material inerte de relleno, adsorbente o absorbente, del
estado de la técnica que retenga los plaguicidas y que permita el
paso del gas portador utilizado en el cromatógrafo de gases y del
eluyente utilizado en el cromatógrafo de líquidos. De este modo, el
material de relleno retiene a los plaguicidas y el eluyente es
eliminado, tanto en estado líquido como en estado de vapor,
arrastrado por la corriente de gas a través del tubo o capilar
conectado al extremo opuesto del tubo de vidrio. Durante la etapa de
retención de los plaguicidas se introducen flujos de gas
controlados por ambas entradas de gas de la interfase TOTAD. Una
vez eliminado el disolvente, los plaguicidas se desborden
térmicamente. Durante esta etapa de desorción, el flujo controlado
de gas entra exclusivamente por la entrada convencional de gas en un
inyector con temperatura programada (PTV) y este flujo de gas
arrastra a los plaguicidas desorbidos conduciéndolos a la columna
del cromatógrafo de gases donde tiene lugar el análisis
cromatográfico. El control de los tiempos de apertura y cierre de
las diferentes válvulas de abrir y cerrar y de la válvula de seis
vías, que forman parte de la interfase TOTAD, así como de los
flujos de gas por ambas entradas de gas de la interfase TOTAD, es
fundamental para el correcto funcionamiento del procedimiento de
análisis.
En la etapa (b), por tanto, el extracto obtenido
en la etapa (a) se somete a cromatografía líquida de alta eficacia
en fase inversa, para lo cual se inyecta en el cromatógrafo de
líquidos y el flujo del eluyente se mantiene en el valor fijado con
anterioridad hasta que comienza la elución de los plaguicidas. En
ese momento, se puede cambiar el flujo con el fin de mejorar la
retención de los plaguicidas en el material inerte de relleno y se
mantiene dicho flujo hasta que termina la etapa de
transferencia.
Por último, en la etapa (c) el extracto eluido
de la cromatografía de líquidos de la etapa (b) se somete a
cromatografía de gases. Para ello, al cromatógrafo de gases se
acopla un detector adecuado de modo que se obtiene un cromatograma
de la fracción de los plaguicidas que se ha transferido al mismo. En
una realización particular del procedimiento de la invención, el
sistema de detección del cromatógrafo de gases es un detector
seleccionado entre un detector de nitrógeno-fósforo,
un detector de captura electrónica, un detector de ionización de
llama, un detector fotométrico de llama y un espectrómetro de
masas.
Como se ha indicado previamente, el
procedimiento de análisis de la invención permite realizar tanto el
análisis multirresiduo de distintos plaguicidas como el análisis
unirresiduo de cada uno de ellos. Dependiendo del tipo de análisis
que se quiera llevar a cabo, se modifica la fracción de líquidos que
hay que transferir, así como los tiempos de apertura y cierre de las
válvulas que componen la interfase.
Durante el análisis se distinguen cuatro etapas
en el funcionamiento de la interfase:
1) Estabilización: Antes de iniciar la
inyección, se estabiliza la interfase TOTAD a la temperatura a la
que se va a llevar a cabo la transferencia, que debe ser la adecuada
para que los plaguicidas queden retenidos en el material que
rellena el tubo interior de la interfase TOTAD. El gas circula a
través de dicho tubo en modo adsorción. El eluyente procedente del
cromatógrafo de líquidos es enviado al desecho.
2) Transferencia: Cuando el principio de
la fracción que contiene los plaguicidas alcanza la válvula de seis
vías, esta cambia su posición automáticamente. Al mismo tiempo, se
puede modificar el flujo de la cromatografía de líquidos. El flujo
de gas que atraviesa el material inerte de relleno empuja al
eluyente procedente del cromatógrafo de líquidos a través del mismo
en el que los plaguicidas son retenidos, mientras que el eluyente es
eliminado, total o parcialmente evaporado, por el tubo de
salida.
3) Eliminación de los restos del
disolvente: Una vez que la etapa de transferencia ha finalizado,
la válvula de seis vías cambia automáticamente su posición, con lo
que el eluyente procedente del cromatógrafo de líquidos se envía al
desecho. Al mismo tiempo se eliminan los restos de eluyente que se
encuentran en el interior del tubo de la interfase TOTAD y en el
capilar por el que ha circulado el eluyente desde la válvula de seis
vías hasta dicho tubo. Estas condiciones se mantienen el tiempo
necesario para que la eliminación del disolvente sea tal que el
remanente no interfiera en la cromatografía de gases.
4) Desorción térmica: Pasado el tiempo
necesario para la eliminación del eluyente, las electroválvulas de
apertura y cierre, que forman parte de la interfase TOTAD, se
cierran. Se cierra también la entrada de flujo de helio por la
entrada que atraviesa el material inerte de relleno, y se modifica
el flujo por la otra entrada al valor adecuado, de modo que la
interfase funciona en modo de desorción. En este momento se calienta
rápidamente el inyector hasta la temperatura necesaria para
producir la desorción térmica de los plaguicidas, que son
arrastrados por la corriente de helio a la columna cromatográfica de
gases, donde tiene lugar el análisis cromatográfico en las
condiciones previamente programadas.
Las ventajas que presenta el procedimiento de la
invención son las siguientes:
- -
- El procedimiento de la invención puede ser utilizado para el análisis multirresiduo de plaguicidas pertenecientes a distintos grupos en un único análisis.
- -
- El procedimiento de la invención puede ser utilizado para el análisis de un solo plaguicida cuando así se requiera.
- -
- El procedimiento de la invención permite el análisis de residuos de plaguicidas en muestras de frutos secos sin más tratamiento previo de la muestra que la extracción.
- -
- El procedimiento de la invención no requiere el empleo de cantidades elevadas de disolventes orgánicos perjudiciales para la salud del analista y para el medio ambiente.
- -
- El procedimiento de la invención solo necesita manipulación de la muestra por parte del analista en la etapa de extracción, por lo que reduce los errores y contaminaciones causados en dicha manipulación.
- -
- El procedimiento de la invención incluye una etapa de extracción que es rápida y una etapa de análisis que es totalmente automática, por lo que es especialmente adecuado para el análisis de residuos de plaguicidas en controles de rutina.
- -
- El procedimiento de la invención permite la inyección en el sistema cromatográfico de volúmenes de extracto superiores a los habitualmente inyectados en cromatografía de gases, que pueden ser variables, lo que permite eliminar la etapa de concentración del extracto dando lugar a un aumento de la sensibilidad y a una mejora de los límites de detección.
- -
- El procedimiento de la invención permite utilizar numerosas veces el tubo interior de la interfase TOTAD relleno del material inerte, sin que tenga que ser sustituido.
- -
- En el procedimiento de la invención no se produce el deterioro del sistema de cromatografía de gases causado por la transferencia de componentes lipídicos de la muestra.
- -
- En el procedimiento de la invención no se produce el deterioro del sistema de cromatografía de gases causado por la introducción en el mismo de disolventes agresivos para el mismo (principalmente agua) ya que éstos son previamente eliminados en la interfase.
- -
- El procedimiento de la invención permite utilizar diferentes sistemas de detección en cromatografía de gases.
- -
- El tiempo total del análisis por el procedimiento de la invención es significativamente menor que el tiempo que se requiere cuando se utiliza el método convencional, que consume mucho tiempo en las etapas de extracción-concentración de la muestra.
Los siguientes ejemplos ilustran la invención y
no deben ser considerados como limitativos del alcance de la
misma.
\global\parskip0.930000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El pistacho fue comprado en un supermercado.
Los patrones de los plaguicidas fueron obtenidos
de Chem. Service Inc. (West Chester PA, USA). Los plaguicidas
organoclorados usados para la experimentación fueron: captan,
lindano, \alpha-endosulfan, oxifluorfen y
\beta-endosulfan.
El acetonitrilo, n-propanol y
agua, usados como eluyentes, y el diclorometano, usado como
extractante, fueron de grado HPLC de Pestican (LabScan, Dublín,
Irlanda). El sulfato de sodio anhidro, usado como agente desecante,
fue obtenido de Merck (Darmastad, Alemania).
Como material adsorbente dentro de la camisa de
vidrio en la interfase se usó Tenax TA, 80-100 mesh
(Chrompack, Middelburg, Holanda). En la camisa de vidrio se colocó 1
cm de Tenax TA, sujeto a ambos lados por lana de vidrio, éste se
acondicionó bajo una corriente de helio, aumentando la temperatura
50ºC/10 min hasta 350ºC manteniendo esta temperatura final durante
una hora.
Se prepararon dos disoluciones patrón de los
plaguicidas en metanol. La primera (disolución stock) contenía cada
uno de los plaguicidas a 100 mg/l. Dicha disolución se almacenó a
4ºC hasta su uso. A partir de esta disolución, por dilución en
metanol, se preparó otra (disolución de trabajo) que contenía los
plaguicidas a 1 mg/l que fue utilizada para fortificar el
pistacho.
\vskip1.000000\baselineskip
Se trituraron aproximadamente 200 g de pistacho
sin cáscara para obtener muestra suficientemente representativa y
homogeneizada. Se añadieron diferentes volúmenes de la disolución de
trabajo a la muestra homogeneizada de pistacho para obtener muestras
de pistacho fortificadas entre 0,01 y 0,25 mg/kg. Para la extracción
de los plaguicidas se pesaron 1 g de las muestras fortificadas a las
que se les añadieron 2 ml de diclorometano y 1,6 g de sulfato de
sodio anhidro. Esta mezcla se agitó durante dos minutos,
obteniéndose dos fases, una acuosa y otra orgánica, se dejó decantar
y se recogió la fase orgánica, que se encontraba en la parte
superior, y se filtró a través de un filtro de 0,20 \mum
(Millex-GN SLGN 013 NL). Este extracto obtenido fue
el que se introdujo en el cromatógrafo de líquidos para realizar el
análisis por RPLC-GC.
\vskip1.000000\baselineskip
Los análisis se realizaron por acoplamiento
RPLC-GC.
El sistema HPLC (modelo Konik 550) estaba
compuesto por una válvula de inyección manual (modelo 7125,
Rheodyne) con un volumen de la lazo de 50 \mul, una bomba
cuaternaria, un horno de columna, y un detector
diodo-array ultravioleta (UV).
El cromatógrafo de gases fue Konik 4000B
(Konik-Tech, Sant Cugat del Vallés, Barcelona,
España) equipado con una interfase TOTAD (patentada, con derechos
exclusivos asignados a Konik-Tech) y un detector ECD
(detector de captura electrónica).
El software usado para obtener y procesar los
datos de LC y GC, así como para automatizar el proceso fue Konikrom
Plus (Konik-Tech, Sant Cugat del Vallés, Barcelona,
España).
La preparación en LC se llevó a cabo en una
columna C4 (Kromasil 100-10, Hichrom, Theale, U.K.)
de 50 x 4,6 mm de diámetro interno mantenida a 45ºC.
La columna utilizada en GC, fue 5% Fenil Metil
Silicona (30 m x 0,32 mm d.i., 0,25 \mum de espesor) (Quadrex,
Weybridge, Reino Unido), con helio como gas portador (flujo por
columna 1,8 ml/min).
\global\parskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Para determinar el tiempo de elución de los
plaguicidas que se iban a transferir al GC, se inyectaron 20 \mul
de una disolución en metanol a 50 mg/l de cada plaguicida. El
eluyente (acetonitrilo:agua; 80:20 (v/v)) a un flujo de 2 ml/min se
mantuvo durante 5 minutos. El detector UV se mantuvo a 205 nm. En el
análisis por RPLC-GC, la composición inicial del
eluyente, acetonitrilo:agua (80:20), se mantuvo constante. El flujo
inicial fue de 2 ml/min hasta que comenzó a eluir la fracción de
interés. Durante la etapa de transferencia, el flujo cambió a 0,1
ml/min y se mantuvo constante hasta que terminó la transferencia.
Después de la transferencia el flujo cambió en 1 minuto a 100% agua,
se mantuvo durante ocho minutos, después cambia en 1 minuto a 100%
acetonitrilo, manteniéndose 10 minutos y por último cambió en 1
minuto a 100% n-propanol y se mantuvo durante 10
minutos para asegurar la eliminación de los compuestos retenidos en
la columna.
\vskip1.000000\baselineskip
Durante las cuatro etapas de operación de la
interfase TOTAD, las condiciones usadas fueron las siguientes:
\lozengeEstabilización. La interfase y
el horno del cromatógrafo de gases se estabilizaron a 125ºC y 50ºC
respectivamente. El helio, utilizado como gas portador entraba en la
camisa de vidrio tanto por el lado del horno, como por el lado
opuesto a un flujo de 500 ml/min.
\lozengeTransferencia. El extracto se
introdujo en la válvula de inyección manual. Cuando los compuestos
de interés llegaron a la válvula de seis vías, ésta giró
automáticamente, transfiriéndose los compuestos de interés al GC. El
caudal de transferencia utilizado fue de 0,1 ml/min. El tiempo de
inyección fue de 14 minutos. El helio empujó el extracto a través
del adsorbente quedando los analitos retenidos y el disolvente
enviado al desecho.
\lozengeEliminación de los restos de
disolvente. Una vez que la fracción de interés fue transferida,
la válvula de seis vías volvió a girar automáticamente de manera que
la fase móvil que provenía del HPLC se envió de nuevo al desecho. El
disolvente que permanecía en el tubo de transferencia también fue
empujado al desecho por el helio. Estas condiciones se mantuvieron
durante un minuto para asegurar la completa eliminación de los
restos de disolvente de la interfase TOTAD y del tubo de
transferencia.
\lozengeDesorción térmica. Después de
la eliminación del disolvente, se cerraron las válvulas de apertura
y cierre de la interfase. Se interrumpió el flujo de helio que
atravesaba el adsorbente y se cambió el flujo por la otra entrada a
1,8 ml/min. El PTV se calentó rápidamente hasta 275ºC, manteniéndose
esta temperatura durante 5 minutos para asegurar la desorción de los
solutos retenidos, que son transferidos a la columna de
cromatografía de gases.
\vskip1.000000\baselineskip
Durante las etapas de transferencia y de
eliminación de disolvente la temperatura del horno fue de 50ºC.
Durante el análisis, la temperatura del horno se mantuvo a 50ºC
durante 1 minuto, se calentó a 10ºC/min hasta 160ºC, después a
2ºC/min hasta 170ºC, a 5ºC/min hasta 230ºC y a 10ºC/min hasta 300ºC.
La temperatura del detector ECD fue de 300ºC.
La Figura 1 muestra el cromatograma de gases
obtenido, en el que se identifican los picos indicados. Como puede
verse, los plaguicidas fueron eluidos rápidamente (entre 15 y 30
min).
\vskip1.000000\baselineskip
El pistacho fue comprado en un supermercado.
Los patrones de los plaguicidas fueron obtenidos
de Chem. Service Inc. (West Chester PA, USA). Los plaguicidas
organoclorados usados para la experimentación fueron: captan,
lindano, \alpha-endosulfan, oxifluorfen y
\beta-endosulfan.
El metanol, n-propanol y agua,
usados como eluyentes, y el acetato de etilo, usado como
extractante, fueron de grado HPLC de Pestican (LabScan, Dublín,
Irlanda). El sulfato de sodio anhidro, usado como agente desecante,
fue obtenido de Merck (Darmastad, Alemania).
Como material adsorbente dentro de la camisa de
vidrio en la interfase se usó Tenax TA, 80-100 mesh
(Chrompack, Middelburg, Holanda). En la camisa de vidrio se colocó 1
cm de Tenax TA, sujeto a ambos lados por lana de vidrio, éste se
acondicionó bajo una corriente de helio, aumentando la temperatura
50ºC/10 min hasta 350ºC manteniendo esta temperatura final durante
una hora.
Se prepararon dos disoluciones patrón de los
plaguicidas en metanol. La primera (disolución stock) contenía cada
uno de los plaguicidas a 100 mg/l. Dicha disolución se almacenó a
4ºC hasta su uso. A partir de esta disolución, por dilución en
metanol, se preparó otra (disolución de trabajo) que contenía los
plaguicidas a 1 mg/l que fue utilizada para fortificar el
pistacho.
\vskip1.000000\baselineskip
Se trituraron aproximadamente 200 g de pistacho
sin cáscara para obtener muestra suficientemente representativa y
homogeneizada. Se añadieron diferentes volúmenes de la disolución de
trabajo a la muestra homogeneizada de pistacho para obtener muestras
de pistacho fortificadas entre 0,01 y 0,25 mg/kg. Para la extracción
de los plaguicidas se pesaron 2,5 g de las muestras fortificadas a
las que se les añadieron 2 g de sulfato de sodio anhidro y 5 ml de
de acetato de etilo. Esta mezcla se agitó durante un minuto a
velocidad elevada, obteniéndose dos fases, una acuosa y otra
orgánica, se dejó decantar y se recogió la fase orgánica, que se
encontraba en la parte superior, y se filtró a través de un filtro
de 0,20 \mum (Millex-GN SLGN 013 NL). Este
extracto obtenido fue el que se introdujo en el cromatógrafo de
líquidos para realizar el análisis por RPLC-GC.
\vskip1.000000\baselineskip
Los análisis se realizaron por acoplamiento
RPLC-GC.
El sistema HPLC (modelo Konik 550) estaba
compuesto por una válvula de inyección manual (modelo 7125,
Rheodyne) con un volumen de la lazo de 50 \mul, una bomba
cuaternaria, un horno de columna, y un detector
diodo-array ultravioleta (UV).
El cromatógrafo de gases fue Konik 4000B
(Konik-Tech, Sant Cugat del Vallés, Barcelona,
España) equipado con una interfase TOTAD (patentada, con derechos
exclusivos asignados a Konik-Tech) y un detector ECD
(detector de captura electrónica).
El software usado para obtener y procesar los
datos de LC y GC, así como para automatizar el proceso fue Konikrom
Plus (Konik-Tech, Sant Cugat del Vallés, Barcelona,
España).
La preseparación en LC se llevó a cabo en una
columna C4 (Kromasil 100-10, Hichrom, Theale, U.K.)
de 50 x 4,6 mm de diámetro interno mantenida a 45ºC.
La columna utilizada en GC, fue 5% Fenil Metil
Silicona (30 m x 0,32 mm d.i., 0,25 \mum de espesor) (Quadrex,
Weybridge, Reino Unido), con helio como gas portador (flujo por
columna 1,8 ml/min).
\vskip1.000000\baselineskip
Para determinar el tiempo de elución de los
plaguicidas que se iban a transferir al GC, se inyectaron 20 \mul
de una disolución en metanol a 50 mg/l de cada plaguicida. El
eluyente (metanol:agua; 80:20 (v/v)) a un flujo de 2 ml/min se
mantuvo durante 5 minutos. El detector UV se mantuvo a 205 nm. En el
análisis por RPLC-GC, la composición inicial del
eluyente, metanol:agua (80:20), se mantuvo constante. El flujo
inicial fue de 2 ml/min hasta que comenzó a eluir la fracción de
interés. Durante la etapa de transferencia, el flujo cambió a 0,1
ml/min y se mantuvo constante hasta que terminó la transferencia.
Después de la transferencia el flujo cambió en 1 minuto a 100% agua,
se mantuvo durante ocho minutos, después cambió en 1 minuto a 100%
metanol, manteniéndose 10 minutos y por último cambió en 1 minuto a
100% n-propanol y se mantuvo durante 10 minutos para
asegurar la eliminación de los compuestos retenidos en la
columna.
\vskip1.000000\baselineskip
Durante las cuatro etapas de operación de la
interfase TOTAD, las condiciones usadas fueron las siguientes:
\lozengeEstabilización. La interfase y
el horno del cromatógrafo de gases se estabilizaron a 125ºC y 50ºC
respectivamente. El helio, utilizado como gas portador entraba en la
camisa de vidrio tanto por el lado del horno, como por el lado
opuesto a un flujo de 500 ml/min.
\lozengeTransferencia. El extracto se
introdujo en la válvula de inyección manual. Cuando los compuestos
de interés llegaron a la válvula de seis vías, ésta giró
automáticamente, transfiriéndose los compuestos de interés al GC. El
caudal de transferencia utilizado fue de 0,1 ml/min. El tiempo de
inyección fue de 14 minutos. El helio empujó el extracto a través
del adsorbente quedando los analitos retenidos y el disolvente
enviado al desecho.
\lozengeEliminación de los restos de
disolvente. Una vez que la fracción de interés fue transferida,
la válvula de seis vías volvió a girar automáticamente de manera que
la fase móvil que provenía del HPLC se envió de nuevo al desecho. El
disolvente que permanecía en el tubo de transferencia también fue
empujado al desecho por el helio. Estas condiciones se mantuvieron
durante un minuto para asegurar la completa eliminación de los
restos de disolvente de la interfase TOTAD y del tubo de
transferencia.
\lozengeDesorción térmica. Después de
la eliminación del disolvente, se cerraron las válvulas de apertura
y cierre de la interfase. Se interrumpió el flujo de helio que
atravesaba el adsorbente y se cambió el flujo por la otra entrada a
1,8 ml/min. El PTV se calentó rápidamente hasta 275ºC, manteniéndose
esta temperatura durante 5 minutos para asegurar la desorción de los
solutos retenidos, que son transferidos a la columna de
cromatografía de gases.
\vskip1.000000\baselineskip
Durante las etapas de transferencia y de
eliminación de disolvente la temperatura del horno fue de 50ºC.
Durante el análisis, la temperatura del horno se mantuvo a 50ºC
durante 1 minuto, se calentó a 10ºC/min hasta 160ºC, después a
2ºC/min hasta 170ºC, a 5ºC/min hasta 230ºC y a 10ºC/min hasta 300ºC.
La temperatura del detector ECD fue de 300ºC.
La Figura 2 muestra el cromatograma de gases
obtenido, en el que se identifican los picos indicados. Como puede
verse, los plaguicidas fueron eluidos rápidamente (entre 15 y 30
min).
\vskip1.000000\baselineskip
El pistacho fue comprado en un supermercado.
Los patrones de los plaguicidas fueron obtenidos
de Chem. Service Inc. (West Chester PA, USA). Los plaguicidas
organofosforados usados para la experimentación fueron: diazinón,
metilclorpirifos, fenitrotión, malatión, clorpirifos, paratión,
fentoato, clorfenvinfos, metidatión, etión.
El metanol, n-propanol y agua,
usados como eluyentes, y el acetato de etilo, usado como
extractante, fueron de grado HPLC de Pestican (LabScan, Dublín,
Irlanda). El sulfato de sodio anhidro, usado como agente desecante,
fue obtenido de Merck (Darmastad, Alemania).
Como material adsorbente dentro de la camisa de
vidrio en la interfase se usó Tenax TA, 80-100 mesh
(Chrompack, Middelburg, Holanda). En la camisa de vidrio se colocó 1
cm de Tenax TA, sujeto a ambos lados por lana de vidrio, éste se
acondicionó bajo una corriente de helio, aumentando la temperatura
50ºC/10 min hasta 350ºC manteniendo esta temperatura final durante
una hora.
Se prepararon dos disoluciones patrón de los
plaguicidas en metanol. La primera (disolución stock) contenía cada
uno de los plaguicidas a 100 mg/l. Dicha disolución se almacenó a
4ºC hasta su uso. A partir de esta disolución, por dilución en
metanol, se preparó otra (disolución de trabajo) que contenía los
plaguicidas a 1 mg/l que fue utilizada para fortificar el
pistacho.
\vskip1.000000\baselineskip
Se trituraron aproximadamente 200 g de pistacho
sin cáscara para obtener muestra suficientemente representativa y
homogeneizada. Se añadieron diferentes volúmenes de la disolución de
trabajo a la muestra homogeneizada de pistacho para obtener muestras
de pistacho fortificadas entre 0,01 y 0,25 mg/kg. Para la extracción
de los plaguicidas se pesaron 2,5 g de las muestras fortificadas a
las que se les añadieron 2 g de sulfato de sodio anhidro y 5 ml de
de acetato de etilo. Esta mezcla se agitó durante un minuto a
velocidad elevada, obteniéndose dos fases, una acuosa y otra
orgánica, se dejó decantar y se recogió la fase orgánica, que se
encontraba en la parte superior, y se filtró a través de un filtro
de 0,20 \mum (Millex-GN SLGN 013 NL). Este
extracto obtenido fue el que se introdujo en el cromatógrafo de
líquidos para realizar el análisis por RPLC-GC.
\vskip1.000000\baselineskip
Los análisis se realizaron por acoplamiento
RPLC-GC.
El sistema HPLC (modelo Konik 550) estaba
compuesto por una válvula de inyección manual (modelo 7125,
Rheodyne) con un volumen de la lazo de 50 \mul, una bomba
cuaternaria, un horno de columna, y un detector
diodo-array ultravioleta (UV).
El cromatógrafo de gases fue Konik 4000B
(Konik-Tech, Sant Cugat del Vallés, Barcelona,
España) equipado con una interfase TOTAD (patentada, con derechos
exclusivos asignados a Konik-Tech) y un detector NPD
(detector de nitrógeno fósforo).
El software usado para obtener y procesar los
datos de LC y GC, así como para automatizar el proceso fue Konikrom
Plus (Konik-Tech, Sant Cugat del Vallés, Barcelona,
España).
La preseparación en LC se llevó a cabo en una
columna C4 (Kromasil 100-10, Hichrom, Theale, U.K.)
de 50 x 4,6 mm de diámetro interno mantenida a 45ºC.
La columna utilizada en GC, fue 5% Fenil Metil
Silicona (30 m x 0,32 mm d.i., 0,25 \mum de espesor) (Quadrex,
Weybridge, Reino Unido), con helio como gas portador (flujo por
columna 1,8 ml/min).
\vskip1.000000\baselineskip
Para determinar el tiempo de elución de los
plaguicidas que se iban a transferir al GC, se inyectaron 20 \mul
de una disolución en metanol a 50 mg/l de cada plaguicida. El
eluyente (metanol:agua; 80:20 (v/v)) a un flujo de 2 ml/min se
mantuvo durante 5 minutos. El detector UV se mantuvo a 205 nm. En el
análisis por RPLC-GC, la composición inicial del
eluyente, metanol:agua (80:20), se mantuvo constante. El flujo
inicial fue de 2 ml/min hasta que comenzó a eluir la fracción de
interés. Durante la etapa de transferencia, el flujo cambió a 0,1
ml/min y se mantuvo constante hasta que terminó la transferencia.
Después de la transferencia el flujo cambió en 1 minuto a 100% agua,
se mantuvo durante ocho minutos, después cambia en 1 minuto a 100%
metanol, manteniéndose 10 minutos y por último cambió en 1 minuto a
100% n-propanol y se mantuvo durante 10 minutos para
asegurar la eliminación de los compuestos retenidos en la
columna.
\vskip1.000000\baselineskip
Durante las cuatro etapas de operación de la
interfase TOTAD, las condiciones usadas fueron las siguientes:
\lozengeEstabilización. La interfase y
el horno del cromatógrafo de gases se estabilizaron a 125ºC y 50ºC
respectivamente. El helio, utilizado como gas portador entraba en la
camisa de vidrio tanto por el lado del horno, como por el lado
opuesto a un flujo de 500 ml/min.
\lozengeTransferencia. El extracto se
introdujo en la válvula de inyección manual. Cuando los compuestos
de interés llegaron a la válvula de seis vías, ésta giró
automáticamente, transfiriéndose los compuestos de interés al GC. El
caudal de transferencia utilizado fue de 0,1 ml/min. El tiempo de
inyección fue de 7 minutos. El helio empujó el extracto a través del
adsorbente quedando los analitos retenidos y el disolvente enviado
al desecho.
\lozengeEliminación de los restos de
disolvente. Una vez que la fracción de interés fue transferida,
la válvula de seis vías volvió a girar automáticamente de manera que
la fase móvil que provenía del HPLC se envió de nuevo al desecho. El
disolvente que permanecía en el tubo de transferencia también fue
empujado al desecho por el helio. Estas condiciones se mantuvieron
durante un minuto para asegurar la completa eliminación de los
restos de disolvente de la interfase TOTAD y del tubo de
transferencia.
\lozengeDesorción térmica. Después de
la eliminación del disolvente, se cerraron las válvulas de apertura
y cierre de la interfase. Se interrumpió el flujo de helio que
atravesaba el adsorbente y se cambió el flujo por la otra entrada a
1,8 ml/min. El PTV se calentó rápidamente hasta 275ºC, manteniéndose
esta temperatura durante 5 minutos para asegurar la desorción de los
solutos retenidos, que son transferidos a la columna de
cromatografía de gases.
\vskip1.000000\baselineskip
Durante las etapas de transferencia y de
eliminación de disolvente la temperatura del horno fue de 50ºC.
Durante el análisis, la temperatura del horno se mantuvo a 50ºC
durante 1 minuto, se calentó a 10ºC/min hasta 160ºC, después a
2ºC/min hasta 170ºC, a 5ºC/min hasta 230ºC y a 10ºC/min hasta 300ºC.
La temperatura del detector NPD fue de 270ºC.
La Figura 3 muestra el cromatograma de gases
obtenido, en el que se identifican los picos indicados. Como puede
verse, los plaguicidas fueron eluidos rápidamente (entre 20 y 30
min).
Claims (9)
1. Un procedimiento para analizar plaguicidas en
frutos secos que comprende las etapas de:
- (a)
- extraer con disolventes los plaguicidas del fruto seco;
- (b)
- someter el extracto obtenido en la etapa (a) a cromatografía líquida de alta eficacia en fase inversa; y
- (c)
- someter el extracto eluido obtenido en la etapa (b) a cromatografía de gases;
caracterizado porque el acoplamiento
entre la cromatografía líquida y la cromatografía de gases se
efectúa mediante la interfase TOTAD (Through Oven Transfer
Adsorption Desorption).
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque los frutos secos se seleccionan de entre
pistachos, nueces, almendras, cacahuetes, avellanas, bellotas
castañas, piñones, pipas y anacardos.
3. Procedimiento según la reivindicación 2,
caracterizado porque los frutos secos son pistachos.
4. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque el disolvente de la etapa (a) se
selecciona de entre diclorometano, cloroformo, acetato de etilo,
éter, éter de petróleo, acetona y acetonitrilo.
5. Procedimiento según la reivindicación 4,
caracterizado porque el disolvente de la etapa (a) es
diclorometano.
6. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque el eluyente empleado en la cromatografía
líquida de la etapa (b) se selecciona de entre acetonitrilo,
metanol, agua, isopropanol, n-propanol, dioxano,
terc-butilmetileter y mezclas de los mismos.
7. Procedimiento según la reivindicación 6,
caracterizado porque el eluyente empleado en la cromatografía
líquida de la etapa (b) es una mezcla de acetonitrilo y agua.
8. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque las etapas (b) y (c) de análisis son
totalmente automáticas.
9. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque el sistema de detección del cromatógrafo
de gases es un detector seleccionado entre un detector de
nitrógeno-fósforo, un detector de captura
electrónica, un detector de ionización de llama, un detector
fotométrico de llama y un espectrómetro de masas.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200801171A ES2327198B1 (es) | 2008-04-23 | 2008-04-23 | Procedimiento para analizar plaguicidas en frutos secos. |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| ES200801171A ES2327198B1 (es) | 2008-04-23 | 2008-04-23 | Procedimiento para analizar plaguicidas en frutos secos. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2327198A1 true ES2327198A1 (es) | 2009-10-26 |
| ES2327198B1 ES2327198B1 (es) | 2010-08-10 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES200801171A Active ES2327198B1 (es) | 2008-04-23 | 2008-04-23 | Procedimiento para analizar plaguicidas en frutos secos. |
Country Status (1)
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|---|---|
| ES (1) | ES2327198B1 (es) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109030657A (zh) * | 2018-08-27 | 2018-12-18 | 广州风行乳业股份有限公司 | 一种动物奶中硫丹农药残留的检测方法 |
| CN110057928A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-07-26 | 中国热带农业科学院农产品加工研究所 | 一种检测番茄中克菌丹残留量的超高效液相色谱串联质谱法 |
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|---|---|---|---|---|
| ES2364565B1 (es) * | 2010-02-26 | 2012-09-19 | Universidad De Castilla-La Mancha | Procedimiento para analizar esteroles en aceites comestibles |
Citations (2)
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|---|---|---|---|---|
| ES2222795B1 (es) * | 2003-03-28 | 2005-12-01 | Universidad De Castilla-La Mancha | Metodo de analisis de residuos de plaguicidas en aceites vegetales. |
| ES2265284B1 (es) * | 2005-07-11 | 2008-02-01 | Universidad De Castilla-La Mancha | Metodo de analisis de residuos de plaguicidas en muestras vegetales. |
-
2008
- 2008-04-23 ES ES200801171A patent/ES2327198B1/es active Active
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|---|---|---|---|---|
| ES2222795B1 (es) * | 2003-03-28 | 2005-12-01 | Universidad De Castilla-La Mancha | Metodo de analisis de residuos de plaguicidas en aceites vegetales. |
| ES2265284B1 (es) * | 2005-07-11 | 2008-02-01 | Universidad De Castilla-La Mancha | Metodo de analisis de residuos de plaguicidas en muestras vegetales. |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109030657A (zh) * | 2018-08-27 | 2018-12-18 | 广州风行乳业股份有限公司 | 一种动物奶中硫丹农药残留的检测方法 |
| CN110057928A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-07-26 | 中国热带农业科学院农产品加工研究所 | 一种检测番茄中克菌丹残留量的超高效液相色谱串联质谱法 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2327198B1 (es) | 2010-08-10 |
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