ES2255294T3 - Derivados de isoxazol sustituidos como moduladores del receptor de estrogenos. - Google Patents

Derivados de isoxazol sustituidos como moduladores del receptor de estrogenos.

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ES2255294T3
ES2255294T3 ES99940916T ES99940916T ES2255294T3 ES 2255294 T3 ES2255294 T3 ES 2255294T3 ES 99940916 T ES99940916 T ES 99940916T ES 99940916 T ES99940916 T ES 99940916T ES 2255294 T3 ES2255294 T3 ES 2255294T3
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Xiaodong Lin
Ian James
Liya Chen
Manoj Desai
Jennifer C. Moore
Beata Krywult
Thayalan Navaratnam
Rajinder Singh
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Liang Wang
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Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula: o sus sales aceptables farmacéuticamente, en el que: X1 y X2 se seleccionan independientemente del grupo constituido por nitrógeno y oxígeno de tal modo que si uno de los X1 y X2 es nitrógeno, el otro de los X1 y X2 es oxígeno para formar por ello una estructura de anillo isoxazol. R1 es fenilo sustituido con un grupo 4-hidroxi y opcionalmente sustituido adicionalmente con un grupo seleccionado entre halógeno, nitro, ciano, alquilo inferior, halo(alquilo inferior), alquiloxi inferior, haloalquiloxi inferior, carboxi, (alquiloxi inferior)carbonilo, ariloxicarbonilo, (cicloalquilo inferior)oxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, heteroaralquiloxicarbonilo, (heterocicloalquilo inferior)oxicarbonilo, (alquilo inferior)sulfinilo, (alquilo inferior)sulfonilo, (alquilo inferior)tio, ariltio, (alquilo inferior)carboniloxi, arilcarboniloxi, aralquilcarboniloxi, heteroarilcarboniloxi, heteroaralquilcarboniloxi, (cicloalquilo inferior)carboniloxi,alquilsulfonilamino, (heterocicloalquilo inferior)carboniloxi, aminocarbonilo, (alquilo inferior)aminocarbonilo, arilaminocarbonilo, aralquilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo y heteroaralquilaminocarbonilo. R3 es arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, (monoaril)alquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo o (cicloheteroalquil)alquilo, no sustituido o sustituido con un grupo seleccionado entre hidroxilo, nitro, amino, imino, ciano, halo, tio, tioamido, amidino, oxo, oxamidino, metoxamidino, imidino, guanidino, sulfonamido, carboxilo, formilo, alquilo inferior, haloalquilo inferior, alcoxi inferior, haloalcoxi inferior, (alcoxi inferior)alquilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, aralquilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroaralquilcarbonilo, alquiltio, aminoalquilo y cianoalquilo y, cuando R3 es arilo o (monoaril)alquilo, pueden seleccionarse adicionalmente sustituyentes entre ariloxi y ariltio, en donde cualquiera de estos sustituyentes puede sustituirse adicionalmente con carboxilo, halo, nitro, amino, ciano, hidroxilo, alquilo inferior, alcoxi inferior, aminocarbonilo, -SR, , tioamido, S-SO3H, -SO2R o cicloalquilo, en el que R es hidrógeno, hidroxilo o alquilo inferior.

Description

Derivados de isoxazol sustituidos como moduladores del receptor de estrógenos.
1 Fundamento de la invención 1.1 Campo de la invención
La presente invención se refiere a compuestos que tienen actividad biológica con respecto a receptores de estrógeno y al uso de tales compuestos para tratar enfermedades y trastornos relacionados con la actividad de receptores de estrógeno. Más particularmente, la presente invención proporciona moduladores de receptores de estrógeno selectivos ("SERMs"). La presente invención se refiere por tanto a los campos de la medicina, la química medicinal, la bioquímica y la endocrinología.
1.2 Fundamento
El estrógeno es una hormona crítica para el desarrollo y la función humanos normales. Aunque el estrógeno es la "hormona del sexo" predominante en mujeres, en las que el estrógeno controla el desarrollo de las características del sexo femenino y el desarrollo y función del sistema reproductivo (Berkow, Beers et al., 1997), también se encuentra en los hombres (Gustafsson 1998). Las mujeres producen estrógeno principalmente en los ovarios; sin embargo, el estrógeno afecta a una variedad de funciones fisiológicas en las mujeres, incluyendo regulación de la temperatura corporal, mantenimiento del revestimiento vaginal y preservación de la densidad de huesos (Jordan 1998). Además, el estrógeno proporciona efectos adicionales que están relacionados con su capacidad para modular la producción de colesterol en el hígado, como se demuestra por la aparición reducida de aterosclerosis en las mujeres comparadas con los hombres debido en parte a la reducción de lipoproteína de baja densidad ("LDL") (Jordan 1998). También se ha implicado al estrógeno en el retraso y/o reducción de la gravedad de la enfermedad de Alzheimer (Jordan 1998).
El fallo en la producción de estrógeno tiene consecuencias fisiológicas profundas en las hembras. El fallo en la producción de estrógeno resultante de desarrollo incompleto o ausente de ovarios (síndrome de Turner) causa deficiencias en la piel, huesos (por ejemplo, osteoporosis grave) y otros órganos que afectan gravemente a la vida del individuo afligido (Dodge 1995). En las mujeres normales, la producción de estrógeno cae bruscamente al comienzo de la menopausia, habitualmente a los 50 años de edad aproximadamente. Los efectos de la caída de producción de estrógeno incluyen depósitos ateroscleróticos aumentados (que conduce a un gran aumento de la incidencia de enfermedad de corazón), densidad de huesos disminuida (osteoporosis) y fluctuaciones en la temperatura corporal entre otros (Jordan 1998). A menudo, los efectos de la producción de estrógeno reducida se tratan por terapia de sustitución de hormonas (Dodge 1995; Berkow, Beers et al. 1997; Jordan 1998).
Sin embargo, el estrógeno también tiene efectos indeseables. En mujeres menopáusicas, la suplementación de estrógeno está asociada con alivio de los efectos indeseados descritos antes. Pero la administración de estrógeno también está asociada con riesgos aumentados de cáncer de pecho y endometrial, así como coágilos sanguíneos (Jordan 1998). El riesgo aumentado de cáncer endometrial puede tratarse por administración de progesterona (o su análogo sintético progestina) para reiniciar la menstruación y deshacerse por ello de células potencialmente malognas, pero muchas mujeres mayores encuentran esto indeseable (Jordan 1998). No obstante, el cáncer de pecho es con mucho el mayor riesgo de la terapia de sustitución de estrógeno, que afecta a una mujer de cada 15 entre las edades de 60 y 79 (Jordan 1998).
Así, durante mucho tiempo, las opciones de tratamiento para los problemas serios de salud causados por un fallo para producir estrógeno estaban limitadas y suponían riesgos graves. Sin embargo, el descubrimiento de que algunos agentes actuaban como agonistas de estrógeno en algunos tejidos (por ejemplo, huesos) y como antagonistas en otros tejidos (por ejemplo, pecho) proporcionó la esperanza de que pudieran encontrarse tratamientos más eficaces para la pérdida de estrógeno (Gradishar y Jordan 1997; Gustafsson 1998; Jordan 1998; MacGregor y Jordan 1998). Se ha demostrado que el mejor conocido de estos denominados Moduladores de Receptores de Estrógeno Selectivos ("SERMs"), tamoxifeno, tiene utilidad terapéutica para tratar y prevenir cáncer de pecho y disminuir las concentraciones de LDL; aunque sin una reducción significativa de la densidad de huesos (Jordan 1998; MacGregor y Jordan 1998). No obstante, se ha asociado al tamoxifeno con cáncer endometrial y coágulos de sangre venosa (Jordan 1998; MacGre-
gor y Jordan 1998). Además, puede tener lugar resistencia de tumores a tamoxifeno (MacGragor y Jordan 1998).
Al tamoxifeno se ha seguido recientemente por SERMs más nuevos, en particular raloxifeno, que prometen proporcionar muchos de los beneficios del tamoxifeno con menores riesgos (Howell, Dowmey et al. 1996; Gradishar y Jordan 1997; Gustafsson 1998; Jordan 1998; Purdie 1999; Sato, Gresse et al. 1999). Estos SERMs más nuevos, incluyendo idoxifeno (Nuttall, Bradbeer et al. 1998), CP-336,156 (Ke, Paralkar et al. 1998), GW5638 (Willson, Norris et al. 1997), LY353581 (Sato, Turner et al. 1998) son parte de la segunda y tercera generación de agonistas/antagonistas de estrógeno parciales. Además, se ha informado de una nueva generación de antiestrógenos puros tales como RU 58,688 (Van de Velde, Nique et al. 1994). Se ha informado recientemente de un gran número de compuestos agonistas/antagonistas de estrógeno parciales y puros adicionales y de modalidades de tratamiento (Bryant y Dodge 1995; Bryant y Dodge 1995; Cullinan 1995; Dodge 1995; Grese 1995; Labrie y Merand 1995; Labrie y Merand 1995; Thompson 1995; Audia y Neubauer 1996; Black, Bryant et al. 1996; Thompson 1996; Cullinan 1997; Wilson 1997; Miller, Collini et al. 1999; Palkowitz 1999; Wilson 1999).
El documento EP-A-0026928 describe compuestos de ácido 3,4-diarilisoxazol-5-acético, un procedimiento para prepararlos y productos farmacéuticos que los contienen. El documento indica que los compuestos tienen actividades anti-inflamatoria, analgésica y antipirética, así como un bajo rango de toxicidad.
Kasturi, T.R. et al. "Reaction of Spironaphthalenones with Hydroxilamine Hydrochloride: Part IV" Tetrahedron, Vol. 51, nº 10, págs. 3051-3060 enseñan la preparación de derivados de naft[2,1-c]isoxazol y derivados de naft[1,2-c]isoxazol de espironaftalenonas.
Zbigniew Wrobel et al.: "Conversion of 1-(o-niroaryl)alkyl p-tolylsulfones into oxazoles" Heterocycles, vol. 40, nº 1, 1995, págs. 187-190 indican que la reducción parcial de o-nitrobencil p-tolilsulfonas en medio alcalino produce la formación de los carbaniones de nitrosobencilsulfona que se ciclan a isoxazoles.
El documento WO-A-9625405 describe una clase de compuestos de isoxazolilo sustituido de uso en el tratamiento de la inflamación y trastornos relacionados con inflamación.
El documento DE-A-3119727 describe 4-(arilalifático)isoxazoles que tienen actividad antivírica, que se preparan haciendo reaccionar con hidroxilamina una dicetona de fórmula Ar-Y-CH(CO-R)_{2}, en la que Ar es fenilo sustituido, Y es (CH_{2})_{n} o O(CH_{2})_{n} y R es alquilo inferior.
Jakob Meisenheimer et al.: "Über Triaryl-isoxazole" Chemische Berichte, 1921, págs. 3195-3206, discuten la preparación de triarilisoxazoles.
Sin embargo, no ha aparecido ningún fármaco candidato que llene las necesidades de las mujeres que requieren los beneficios de la sustitución de estrógeno para tener vidas productivas y/o tratamientos para cánceres dependientes de estrógeno. Los esfuerzos por desarrollar mejores agonistas y antagonistas de estrógeno parciales y puros han sido ayudados por varios desarrollos recientes, incluyendo el descubrimiento de que el receptor de estrógeno humano tiene al menos dos isoformas ("ER\alpha" y "ER\beta") y la estructura de cristal de ER\alpha, que han permitido estudios de relación estructura-actividad de alta resolución (Sadler, Chao et al. 1998). Recientemente, se ha informado de un estudio de la aplicación de métodos sintéticos combinatorios combinados con análisis de estructura tridimensional-actividad para desarrollar SERMs que tienen perfiles terapéuticos óptimos (Fink, Mortensen et al. 1999). Ese estudio examinaba varios motivos heterocíclicos (imidazoles, tiazoles, pirazoles, oxazoles e isoxazoles) e identificaba ciertos motivos de pirazol como bien adaptados para desarrollo combinatorio de SERMs. La eficacia de unión relativa de los pirazoles frente a los otros motivos se basaba en su capacidad para llevar cuatro sustituyentes además de la consideración de polaridad (véase pág. 215). En particular, el estudio se refería a que la capacidad del motivo pirazol para llevar cuatro sustituyentes explicaba la eficacia de unión de pirazoles en comparación con los malos resultados de unión encontrados para los motivos oxazol, tiazol e isoxazol.
Sin embargo, a pesar de estos avances recientes, no ha aparecido ningún fármaco candidato que llene las necesidades de las mujeres que requieren los beneficios de la sustitución de estrógeno para tener vidas productivas y/o tratamientos para cánceres dependientes de estrógeno. La presente invención se dirige a éstas y otras necesidades.
2. Sumario de la invención
La presente invención proporciona compuestos agonistas y antagonistas de receptores de estrógeno de isoxazol además de usos de los compuestos y composiciones farmacéuticas para tratar o prevenir trastornos mediados por receptores de estrógeno. Se ha encontrado que los compuestos descritos aquí tienen una actividad inesperada y sorprendente para modular la actividad de receptores de estrógeno. Así, los compuestos de la presente invención tienen utilidad para prevenir o tratar trastornos mediados por receptores de estrógeno tales como osteoporosis, cánceres de pecho y endometrial, aterosclerosis y enfermedad de Alzheimer.
En un primer aspecto, la presente invención proporciona compuestos que tienen la estructura mostrada a continuación:
1
y sus sales aceptables farmacéuticamente. X_{1} y X_{2} se seleccionan independientemente del grupo constituido por nitrógeno y oxígeno de tal modo que si uno de los X_{1} y X_{2} es nitrógeno, el otro de los X_{1} y X_{2} es oxígeno para formar por ello una estructura de anillo isoxazol.
R_{1} es fenilo sustituido con un grupo 4-hidroxi y opcionalmente sustituido adicionalmente con un grupo seleccionado entre halógeno, nitro, ciano, alquilo inferior, halo(alquilo inferior), alquiloxi inferior, haloalquiloxi inferior, carboxi, (alquiloxi inferior)carbonilo, ariloxicarbonilo, (cicloalquilo inferior)oxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, heteroaralquiloxicarbonilo, (heterocicloalquilo inferior)oxicarbonilo, (alquilo inferior)sulfinilo, (alquilo inferior)sulfonilo, (alquilo inferior)tio, ariltio, (alquilo inferior)carboniloxi, arilcarboniloxi, aralquilcarboniloxi, heteroarilcarboniloxi, heteroaralquilcarboniloxi, (cicloalquilo inferior)carboniloxi, alquilsulfonilamino, (heterocicloalquilo inferior)carboniloxi, aminocarbonilo, (alquilo inferior)aminocarbonilo, arilaminocarbonilo, aralquilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo y heteroaralquilaminocarbonilo.
R_{3} es arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, (monoaril)alquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo o (cicloheteroalquil)alquilo, no sustituido o sustituido con un grupo seleccionado entre hidroxilo, nitro, amino, imino, ciano, halo, tio, tioamido, amidino, oxo, oxamidino, metoxamidino, imidino, guanidino, sulfonamido, carboxilo, formilo, alquilo inferior, haloalquilo inferior, alcoxi inferior, haloalcoxi inferior, (alcoxi inferior)alquilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, aralquilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroaralquilcarbonilo, alquiltio, aminoalquilo y cianoalquilo y, cuando R_{3} es arilo o (monoaril)alquilo, pueden seleccionarse adicionalmente sustituyentes entre ariloxi y ariltio, en donde cualquiera de estos sustituyentes puede sustituirse adicionalmente con carboxilo, halo, nitro, amino, ciano, hidroxilo, alquilo inferior, alcoxi inferior, aminocarbonilo, -SR, tioamido, -SO_{3}H,
-SO_{2}R o cicloalquilo, en el que R es hidrógeno, hidroxilo o alquilo inferior; y
R_{2} se selecciona del grupo constituido por halo, ciano, nitro, tio, amino, carboxilo, formilo, arilo sustituido y aralquilo no sustituido o sustituido, heteroarilo, heteroaralquilo, alquenilo, alquilo inferior, (alquilo inferior)carboniloxi, arilcarboniloxi, heteroarilcarboniloxi, cicloalquilcarboniloxi, cicloheteroalquilcarboniloxi, aralquilcarboniloxi, heteroaralquilcarboniloxi, (cicloalquil)alquilcarboniloxi, (cicloheteroalquil)alquilcaboniloxi, (alquilo inferior)carbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, cicloalquilcarbonilo, cicloheteroalquilcarbonilo, aralquilcarbonilo, heteroaralquilcarbonilo, (cicloalquil)alquilcarbonilo, (cicloheteroalquil)alquilcarbonilo, (alquilo inferior)aminocarbonilo, arilaminocarbonilo, aralquilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo, heteroaralquilaminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, (cicloalquil)alquilaminocarbonilo, cicloheteroalquilaminocarbonilo, (cicloheteroalquil)alquilaminocarbonilo, (alquilo inferior)carbonilamino, arilcarbonilamino, heteroarilcarbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, cicloheteroalquilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, (cicloalquil)alquilcarbonilamino, (cicloheteroalquil)alquilcarbonilamino, (alquilo inferior)amino, arilamino, aralquilamino, heteroarilamino, heteroaralquilamino, (alquilo inferior)sulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, cicloalquilsulfonilo, cicloheteroalquilsulfonilo, aralquilsulfonilo, heteroaralquilsulfonilo, (cicloalquil)alquilsulfonilo, (cicloheteroalquil)alquilsulfonilo, (alquilo inferior)sulfinilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, cicloalquilsulfinilo, cicloheteroalquilsulfinilo, aralquilsulfinilo, heteroaralquilsulfinilo, (cicloalquil)alquilsulfinilo, (cicloheteroalquil)alquilsulfinilo, (alquilo inferior)oxi, ariloxi, heteroariloxi, cicloalquiloxi, cicloheteroalquiloxi, aralquiloxi, heteroaralquiloxi, (cicloalquil)alquiloxi, (cicloheteroalquil)alquiloxi, (alquilo inferior)tio, ariltio, heteroariltio, cicloalquiltio, cicloheteroalquiltio, aralquiltio, heteroaralquiltio, (cicloalquil)alquiltio, (cicloheteroalquil)alquiltio, (alquilo inferior)tiocarbonilo, ariltiocarbonilo, heteroariltiocarbonilo, cicloalquiltiocarbonilo, cicloheteroalquiltiocarbonilo, aralquiltiocarboniloxitiocarbonilo, heteroaralquiltiocarbonilo, (cicloalquil)alquiltiocarbonilo, (cicloheteroalquil)alquiltiocarbonilo, heteroarilcarboniltio, cicloalquilcarboniltio, cicloheteroalquilcarboniltio, aralquilcarboniltiooxicarboniltio, heteroaralquilcarboniltio, (cicloalquil)alquilcarboniltio, (cicloheteroalquil)alquilcarboniltio, (alquilo inferior)oxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, cicloalquiloxicarbonilo, cicloheteroalquiloxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo, heteroaralquiloxicarbonilo, (cicloalquil)alquiloxicarbonilo, (cicloheteroalquil)alquiloxicarbonilo, imino(alquilo inferior), iminociclaalquilo, iminocicloheteroalquilo, iminoaralquilo, iminoheteroaralquilo, (cicloalquil)iminoalquilo, (cicloheteroalquil)iminoalquilo, (cicloiminoalquil)alquilo, (cicloiminoheteroalquil)alquilo, oximino(alquilo inferior), oximinocicloalquilo, oximinocicloheteroalquilo, oximinoaralquilo, oximonoheteroaralquilo, (cicloalquil)oximinoalquilo, (ciclooximinoalquil)alquilo, (cicloximinoheteroalquil)alquilo, (cicloheteroalquil)oximinoalquilo, (alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilo, di(alquilo inferior)amino(alquilo inferior)oxifenilo, (cicloamino(alquilo inferior))(alquilo inferior)oxifenilo, (heterocicloalquilo)(alquilo inferior)oxifenilo, (heterocicloalquilo)(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo y halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo, en los que, cuando dicho grupo está sustituido, los sustituyentes se seleccionan entre hidroxilo, nitro, amino, imino, ciano, halo, tio, tioamido, amidino, oxo, oxamidino, metoxamidino, imidino, guanidino, sulfonamido, carboxilo, formilo, alquilo inferior, halo(alquilo inferior), alcoxi inferior, halo(alcoxi inferior), (alcoxi inferior)alquilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, aralquilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroaralquilcarbonilo, alquiltio, aminoalquilo y cianoalquilo, en los que estos sustituyentes pueden sustituirse adicionalmente con carboxilo, halo, nitro, amino, ciano, hidroxilo, alquilo inferior, alcoxi inferior, aminocarbonilo, -SR, tioamido, -SO_{3}H, -SO_{2}R o cicloalquilo, en los que R es hidrógeno, hidroxilo o alquilo inferior;
en los que, para cada uno de los R_{1}, R_{2} y R_{3}, arilo se refiere a grupos aromáticos monocíclicos y policíclicos, o sistemas de anillos condensados que tienen al menos un anillo aromático, y de 3 a 14 átomos de carbono de la cadena principal; y heteroarilo se refiere a grupo aromáticos monocíclicos y policíclicos, o sistemas de anillos condensados que tienen al menos un anillo aromático, de 3 a 14 átomos de carbono de la cadena principal y de uno a cuatro heteroátomos como átomos del anillo en un anillo aromático;
y en los que dichos grupos alquilo inferior comprenden de 1 a 10 átomos de carbono.
En una realización más específica de la invención, R_{2} se selecciona del grupo constituido por (alquilo inferior)oxi, ariloxi, heteroariloxi, cicloalquiloxi, cicloheteroalquiloxi, aralquiloxi, heteroaralquiloxi, (cicloalquil)alquiloxi y (cicloheteroalquil)alquiloxi opcionalmente sustituidos, (alquilo inferior)tio, ariltio, heteroariltio, cicloalquiltio, cicloheteroalquiltio, aralquiltio, heteroaralquiltio, (cicloalquil)alquiltio, (cicloheteroalquil)alquiltio, aralquilo, halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilo, di(alquilo inferior)amino(alquilo inferior)oxifenilo, (cicloamino(alquilo inferior))(alquilo inferior)oxifenilo y (heterocicloalquil)(alquilo inferior)oxifenilo, fenilcarbonilo, (heterocicloalquil)(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo, hidroxifenilcarbonilo, halofenilcarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, di(alquilo inferior)aminocarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, hidroxifenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, (alquilo inferior)fenilcarbonilo, halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo y nitrofenilcarbonilo. Son realizaciones más particulares aquellas para las que R_{2} se selecciona del grupo constituido por fenilcarbonilo, (heterociclolquil)(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo, hidroxifenilcarbonilo, halofenilcarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, di(alquilo inferior)aminocarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, hidroxifenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, (alquilo inferior)fenilcarbonilo, halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo y nitrofenilcarbonilo opcionalmente sustituidos. Los ejemplos de sustituyentes de R_{2} que tienen propiedades útiles incluyen, aunque sin limitarse a ellos, 4-(2-piperidin-1-iletiloxi)fenilcarbonilo, 4-hidroxifenilcarbonilo, (fenilmetil)aminocarbonilo, 3-(2-oxopirrolidin-1-il)propilaminocarbonilo, di-n-butilaminocarbonilo, (4-hidroxifenilmetil)aminocarbonilo, (piridin-3-ilmetil)aminocarbonilo, (piridin-2-ilmetil)aminocarbonilo, dimetilaminocarbonilo, etilaminocarbonilo, 4-(2-morfolinoetiloxi)fenilcarbonilo, ciclopropilaminocarbonilo, ciclobutilaminocarbonilo, 4-(1-metilpiperidin-3-ilmetiloxi)fenilcarbonilo, 4-[2-(1-metilpirrolidin-2-il)etiloxi]fenilcarbonilo, 4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etiloxi]fenilcarbonilo, 4-(1-metilpiperidin-4-ilmetiloxi)fenilcarbonilo, 2-clorofenilcarbonilo, 3-clorofenilcarbonilo, 4-clorofenilcarbonilo, 3-nitrofenilcarbonilo, 4-nitrofenilcarbonilo, 3,4-diclorofenilcarbonilo, 4-n-butilfenilcarbonilo, 3-hidroxifenilcarbonilo, 2-hidroxifenilcarbonilo, 4-metoxifenilcarbonilo, 3-(2-piperidin-1-iletiloxi)fenilcarbonilo, 3-[2-(pirrolidin-1-il)etiloxi]fenilcarbonilo y 3-(1-metilpiperidin-3-ilmetiloxi)fenilcarbonilo.
En otras realizaciones de la invención, R_{2} se selecciona del grupo constituido por fenilcarbonilo, (heterocicloalquil)(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo, hidroxifenilcarbonilo, halofenilcarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, di(alquilo inferior)aminocarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, hidroxifenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, (alquilo inferior)fenilcarbonilo, halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo y nitrofenilcarbonilo opcionalmente sustituidos.
Los ejemplos de grupos útiles específicos para R_{2} incluyen, sin limitación, 2-metil-4-hidroxifenilo, 2-aminocarbonil-4-hidroxifenilo, 4-metilsulfonilaminofenilo, 3-aminocarbonil-4-hidroxifenilo, 3-aminocarbonil-4-metoxifenilo, 3-cloro-4-hidroxifenilo, 4-metilcarboniloxifenilo, 3-n-hexil-4-hidroxifenilo, 4-n-propilcarboniloxifenilo, 3-etil-4-hidroxifenilo, 2-metilsulfinil-4-hidroxifenilo, 2-etil-4-hidroxifenilo, 2-carboxi-4-hidroxifenilo, 3-fluoro-4-hidroxifenilo, 2-yodo-4-hidroxifenilo, 2-n-butil-4-hidroxifenilo, 2-trifluorometoxifenilo y 4-fluorofenilo.
En otro aspecto todavía, la presente invención proporciona el uso de un compuesto en la fabricación de un medicamento de uso en un método para tratar o prevenir un trastorno mediado por receptor de estrógeno en un ser humano o animal sujeto. Los trastornos mediados por receptor de estrógeno representativos incluyen, por ejemplo, osteoporosis, ateroesclerosis, cánceres mediados por estrógeno (por ejemplo, cáncer de pecho y endometrial) y enfermedad de Alzheimer.
Estos y otros aspectos y ventajas se evidenciarán al leer la siguiente Descripción conjuntamente con los Ejemplos que se acompañan.
3 Descripción de algunas realizaciones de la invención 3.1 Definiciones 3.1.1 Receptor de estrógeno
"Receptor de estrógeno" según se define aquí se refire a cualquier proteína de la familia de genes de receptores nucleares que se une a estrógeno, incluyendo, aunque sin limitarse a ellas, cualesquiera isoformas o mutaciones de supresión que tengan las características recién descritas. Más particularmente, la presente invención se refiere a receptor(es) de estrógeno para mamíferos humanos y no humanos (por ejemplo, animales de interés veterinario tales como caballos, vacas, ovejas y cerdos, así como animales domésticos tales como gatos y perros). Los receptores de estrógeno humanos incluidos en la presente invención incluyen las isoformas \alpha y \beta (a las que se hace referencia aquí como "ER\alpha" y "ER\beta") además de cualesquiera isoformas adicionales como se reconoce por los expertos en las técnicas bioquímicas.
3.1.2 Modulador de receptor de estrógeno
"Modulador de receptor de estrógeno" se refiere aquí a un compuesto que puede actuar como un agonista de receptor de estrógeno o antagonista de receptor de estrógeno que tiene una IC_{50} o EC_{50} con respecto a ER\alpha y/o ER\beta de no más de aproximadamente 10 \muM, determinadas usando el ensayo de transactivación de ER\alpha y/o ER\beta descrito posteriormente (Sección 4.2.2.3). Más típicamente, los moduladores de receptores de estrógeno de la invención tienen valores IC_{50} o EC_{50} (como agonistas o antagonistas) de no más de aproximadamente 5 \muM. Se ha descubierto que compuestos representativos de la presente invención presentan actividad antagonista o agonista frente a receptor de estrógeno. Los compuestos de la presente invención presentan preferiblmente una IC_{50} o EC_{50} antagonista o agonista con respecto a ER\alpha y/o ER\beta de no más de aproximadamente 5 \muM, más preferiblemente no más de aproximadamente 500 nM, aún más preferiblemente no más de aproximadamente 1 nM, y todavía más preferiblemente no más de aproximadamente 500 pM, medidas en los ensayos de transactivación de ER\alpha y/o ER\beta. "IC_{50}" es la concentración de inhibidor que reduce la actividad de un objetivo (por ejemplo, ER\alpha o ER\beta) hasta un nivel semi-máximo. "EC_{50}" es la concentración de modulador que produce efecto semi-máximo.
3.1.3 Modulador de receptor de estrógeno selectivo
Un "Modulador de receptor de estrógeno selectivo" (o "SERM") es un compuesto que presenta actividad como agonista o antagonista de un receptor de estrógeno (por ejemplo, ER\alpha o ER\beta) de una manera dependiente del tejido. Así, como será evidente para los expertos en las técnicas bioquímica y endocrinológica, los compuestos de la invención que funcionan como SERMs pueden actuar como agonistas de receptores de estrógeno en algunos tejidos (por ejemplo, huesos, cerebro y/o corazón) y como antagonistas en otros tipos de tejidos, tales como pecho y/o revestimiento
uterino.
3.1.4 Opcionalmente sustituido
"Opcionalmente sustituido" se refiere a la sustitución de hidrógeno con un radical monovalente o divalente. Los grupos de sustitución adecuados incluyen, por ejemplo, hidroxilo, nitro, amino, imino, ciano, halo, tio, tioamido, amidino, oxo, oxamidino, metoxamidino, imidino, guanidino, sulfonamido, carboxilo, formilo, alquilo infeior, halo(alquilo inferior), alcoxi inferior, halo(alcoxi inferior), (alcoxi inferior)alquilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, aralquilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroaralquilcarbonilo, alquiltio, aminoalquilo, cianoalquilo y similares. El propio grupo de sustitución puede estar sustituido. El grupo sustituido en el grupo de sustitución puede ser, por ejemplo, carboxilo, halo, nitro, amino, ciano, hidroxilo, alquilo inferior, alcoxi inferior, aminocarbonilo, -SR, tioamido, -SO_{3}H, -SO_{2}R o cicloalquilo, en los que R es típicamente hidrógeno, hidroxilo o alquilo inferior. Cuando el sustituyente sustituido incluye un grupo de cadena recta, la sustitución puede tener lugar dentro de la cadena (por ejemplo, 2-hidroxipropilo, 2-aminobutilo y similares) o en el término de la cadena (por ejemplo, 2-hidroxietilo, 3-cianopropilo y similares). Los sustituyentes sustituidos pueden ser de cadena recta, ramificados o disposiciones cíclicas de carbono o heteroátomos unidos covalentemente.
3.1.5 Alquilo inferior y términos relacionados
"Alquilo inferior" según se usa aquí se refiere a grupos alquilo de cadena ramificada o recta que comprenden de uno a diez átomos de carbono que están independientemente no sustituidos o sustituidos, por ejemplo, con uno o más grupos halógeno, hidroxilo u otros. Los ejemplos de grupos alquilo inferior incluyen, aunque sin limitarse a ellos, metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, n-hexilo, neopentilo, trifluorometilo, pentafluoroetilo y similares.
"Alquilenilo" se refiere a un radical alifático saturado de cadena recta o de cadena ramificada divalente que tiene de 1 a 20 átomos de carbono. Son grupos alquilenilo típicos empleados en compuestos de la presente invención grupos alquilenilo inferior que tiene de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono en su cadena principal. "Alquenilo" se refiere aquí a radicales de cadena recta, ramificados o cíclicos que tienen uno o más dobles enlaces y de 2 a 20 átomos de carbono. "Alquinilo" se refiere aquí a radicales de cadena recta, ramificados o cíclicos que tienen uno o más triples enlaces y de 2 a 20 átomos de carbono.
La expresión "halo(alquilo inferior)" se refiere a un radical alquilo inferior sustituido con uno o más átomos de halógenos.
"Alcoxi inferior" según se usa aquí se refiere se refiere a RO-, en el que R es alquilo inferior. Los ejemplos representativos de grupos alcoxi inferior incluyen metoxi, etoxi, t-butoxi, trifluorometoxi y similares.
"(Alquilo inferior)tio" según se usa aquí se refiere se refiere a RS-, en el que R es alquilo inferior.
El término "alcoxialquilo" se refiere al grupo -alq_{1}-O-alq_{2}, en el que alq_{1} es alquilenilo o alquenilo y alq_{2} es alquilo o alquenilo. La expresión "(alcoxi inferior)alquilo" se refiere a un alcoxialquilo en el que alq_{1} es alquilenilo inferior o alquenilo inferior, y alq_{2} es alquilo inferior o alquenilo inferior. El término "ariloxialquilo" se refiere al grupo
-alquilenilo-O-arilo. El término "aralcoxialquilo" se refiere al grupo -alquilenilo-O-aralquilo, en el que aralquilo es aralquilo inferior.
"Cicloalquilo" se refiere a un sustituyente alquilo inferior, mono o policíclico. Los sustituyentes cicloalquilo típicos tienen de 3 a 8 átomos en la cadena principal (es decir, anillo) en los que cada átomo de la cadena principal es carbono opcionalmente sustituido. Cuando se usa en un contexto con sustituyentes cicloalquilo, el término "policíclico" se refiere aquí a estructuras de carbonos condensadas, cíclicas no condensadas y espirociclos. Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen, aunque sin limitarse a ellos, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, adamantilo, bornilo, norbornilo y similares.
El término "cicloheteroalquilo" se refiere aquí a sustituyentes cicloalquilo que tienen de 1 a 5, y más típicamente de 1 a 4 heteroátomos (es decir, átomos no de carbono tales como nitrógeno, azufre y oxígeno) en la estructura de anillo, siendo el resto de átomos del anillo carbono opcionalmente sustituido. Los restos heterocicloalquilo representativos incluyen, por ejemplo, morfolino, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, metilpriolidinilo, pirrolidinona-ilo y similares.
Los términos "(cicloalquil)alquilo" y "(cicloheteroalquil)alquilo" se refieren a cadenas alquilo sustituidas con grupos cicloalquilo y cicloheteroalquilo respectivamente.
El término "haloalcoxi" se refiere a un radical alcoxi sustituido con uno o más átomos de halógeno. La expresión "halo(alcoxi inferior)" se refiere a un radical alcoxi inferior sustituido con uno o más átomos de halógeno.
3.1.6 Halo
"Halo" se refiere aquí a un radical halógeno, tal como flúor, cloro, bromo o yodo.
3.1.7 Arilo y términos relacionados
"Arilo" se refiere a grupos aromáticos monocíclicos y policíclicos, o sistemas de anillos condensados que tienen al menos un anillo aromático, que tiene de 3 a 14 átomos de carbono en la cadena principal. Los ejemplos de grupos arilo incluyen sin limitación fenilo, naftilo, dihidronaftilo, tetrahidronaftilo y similares.
"Aralquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido con un grupo arilo. Típicamente, los grupos aralquilo empleados en compuestos de la presente invención tienen de 1 a 6 átomos de carbono incorporados dentro de la porción alquilo del grupo aralquilo. Los grupos aralquilo adecuados empleados en compuestos de la presente invención incluyen, por ejemplo, bencilo, picolilo y similares.
3.1.8 Heteroarilo y términos relacionados
El término "heteroarilo" se refiere aquí a grupos arilo que tienen de uno a cuatro heteroátomos como átomos del anillo en un anillo aromático, siendo el resto de los átomos del anillo átomos de carbono aromáticos o no aromáticos. Cuando se usa en relación con sustituyentes arilo, el término "policíclico" se refiere aquí a estructuras cíclicas condensadas y no condensadas en las que al menos una estructura cíclica es aromática, tales como, por ejemplo, benzodioxozolo, naftilo y similares. Los ejemplos de restos heteroarilo empleados como sustituyentes en compuestos de la presente invención incluyen piridilo, pirimidinilo, tiazolilo, indolilo, imidazolilo, oxadiazolilo, tetrazolilo, pirazinilo, triazolilo, tiofenilo, furanilo, quinolinilo, purinilo, benzotiazolilo, benzopiridilo y bencimidazolilo, y similares.
3.1.9 Amino y términos relacionados
"Amino" se refiere aquí al grupo -NH_{2}. La expresión "(alquilo inferior)amino" se refiere aquí al grupo -NRR' en el que R y R' se seleccionan cada uno independientemente entre hidrógeno o alquilo inferior. El término "arilamino" se refiere aquí al grupo -NRR' en el que R es arilo y R' es hidrógeno, alquilo inferior, arilo o aralquilo. El término "aralquilamino" se refiere aquí al grupo -NRR' en el que R es aralquilo y R' es hidrógeno, alquilo inferior, arilo, o aralquilo. Los términos "heteroarilamino" y "heteroaralquilamino" se definen análogamente a arilamino y aralquilamino.
El término "aminocarbonilo" se refiere aquí al grupo -C(O)-NH_{2}. Las expresiones "(alquilo inferior)aminocarbonilo", "arilaminocarbonilo", "aralquilaminocarbonilo", "heteroarilaminocarbonilo" y "heteroaralquilaminocarbonilo" se refieren a -C(O)NRR' en el que R y R' son independientemente hidrógeno y alquilo inferior opcionalmente sustituido, arilo, aralquilo, heteroarilo y heteroaralquilo respectivamente por analogía con los anteriores términos correspondientes.
3.1.10 Tio, sulfonilo, sulfinilo y términos relacionados
El término "tio" se refiere a -SH. Las expresiones "(alquilo inferior)tio", "ariltio", "heteroariltio", "cicloalquiltio", "cicloheteroalquiltio", "aralquiltio", "heteroaralquiltio", "(cicloalquil)alquiltio" y "(cicloheteroalquil)alquiltio" se refieren a -SR, en el que R es alquilo inferior, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, aralquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo y (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos, respectivamente.
El término sulfonilo se refiere aquí al grupo -SO_{2}-. Las expresiones "(alquilo inferior)sulfonilo", "arilsulfonilo", "heteroarilsulfonilo", "cicloalquilsulfonilo", "cicloheteroalquilsulfonilo", "aralquilsulfonilo", "heteroaralquilsulfonilo", "(cicloalquil)alquilsulfonilo" y "(cicloheteroalquil)alquilsulfonilo" se refieren a -SO_{2}R, en el que R es alquilo inferior, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, aralquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo y (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos, respectivamente.
El término "sulfinilo" se refiere aquí al grupo -SO-. Las expresiones "(alquilo inferior)sulfinilo", "arilsulfinilo", "heteroarilsulfinilo", "cicloalquilsulfinilo", "cicloheteroalquilsulfinilo", "aralquilsulfinilo", "heteroaralquilsulfinilo", "(cicloalquil)alquilsulfinilo" y "(cicloheteroalquil)alquilsulfinilo" se refieren a -SOR, en el que R es alquilo inferior, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, aralquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo y (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos, respectivamente.
\newpage
3.1.11 Formilo, carboxilo, tiocarbonilo y términos relacionados
"Formilo" se refiere a -C(O)H.
"Carboxilo" se refiere a -C(O)OH.
"Carbonilo" se refiere al grupo divalente -C(O)-. Las expresiones "(alquilo inferior)carbonilo", "arilcarbonilo", "heteroarilcarbonilo", "cicloalquilcarbonilo", "cicloheteroalquilcarbonilo", "aralquilcarbonilo", "heteroaralquilcarbonilo", "(cicloalquil)alquilcarbonilo" y "(cicloheteroalquil)alquilcarbonilo" se refieren a -C(O)R, en el que R es alquilo inferior, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, aralquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo y (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos, respectivamente.
"Tiocarbonilo" se refiere al grupo -C(S)-. Las expresiones "(alquilo inferior)tiocarbonilo", "ariltiocarbonilo", "heteroariltiocarbonilo", "cicloalquiltiocarbonilo", "cicloheteroalquiltiocarbonilo", "aralquiltiocarboniloxitiocarbonilo", "heteroaralquiltiocarbonilo", "(cicloalquil)alquiltiocarbonilo" y "(cicloheteroalquil)alquiltiocarbonilo" se refieren a -C(S)R, en el que R es alquilo inferior, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, aralquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo y (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos, respectivamente.
"Carboniloxi" se refiere en general al grupo -C(O)-O-. Las expresiones "(alquilo inferior)carboniloxi", "arilcarboniloxi", "heteroarilcarboniloxi", "cicloalquilcarboniloxi", "cicloheteroalquilcarboniloxi", "aralquilcarboniloxi", "heteroaralquilcarboniloxi", "(cicloalquil)alquilcarboniloxi" y "(cicloheteroalquil)alquilcarboniloxi" se refieren a -C(O)OR, en el que R es alquilo inferior, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, aralquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo y (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos, respectivamente.
"Oxicarbonilo" se refiere al grupo -O-C(O)-. Las expresiones "(alquilo inferior)oxicarbonilo", "ariloxicarbonilo", "heteroariloxicarbonilo", "cicloalquiloxicarbonilo", "cicloheteroalquiloxicarbonilo", "aralquiloxicarboniloxicarbonilo", "heteroaralquiloxicarbonilo", "(cicloalquil)alquiloxicarbonilo" y "(cicloheteroalquil)alquiloxicarbonilo" se refieren a -O-C(O)R, en el que R es alquilo inferior, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, aralquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo y (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos, respectivamente.
"Carbonilamino" se refiere al grupo -NH-C(O)-. Las expresiones "(alquilo inferior)carbonilamino", "arilcarbonilamino", "heteroarilcarbonilamino", "cicloalquilcarbonilamino", "cicloheteroalquilcarbonilamino", "aralquilcarbonilamino", "heteroaralquilcarbonilamino", "(cicloalquil)alquilcarbonilamino" y "(cicloheteroalquil)alquilcarbonilamino" se refieren a -NH-C(O)R, en el que R es alquilo inferior, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, aralquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo o (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos, respectivamente. Además, la presente invención incluye carbonilamino N-sustituido (-NR'C(O)R), en el que R' es alquilo inferior, arilo, heteroarilo, aralquilo o heteroaralquilo opcionalmente sustituidos y R conserva la definición previa.
"Carboniltio" se refiere al grupo -C(O)S-. Las expresiones "(alquilo inferior)carboniltio", "arilcarboniltio", "heteroarilcarboniltio", "cicloalquilcarboniltio", "cicloheteroalquilcarboniltio", "aralquilcarboniltio", "heteroaralquilcarboniltio", "(cicloalquil)alquilcarboniltio" y "(cicloheteroalquil)alquilcarboniltio" se refieren a -C(O)SR, en el que R es alquilo inferior, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, aralquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo y (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos, respectivamente.
3.1.12 Guanidino o guanidilo
Según se usan aquí, los términos "guanidino" o "guanidilo" se refieren a restos derivados de guanidina, H_{2}N-C(=NH)-NH_{2}. Tales restos incluyen los unidos en el átomo de nitrógeno que lleva el doble enlace formal (la posición "2" de la guanidina, por ejemplo, diaminometilenamino, (H_{2}N)_{2}C=NH-, y los unidos en alguno de los átomos de nitrógeno que llevan un enlace simple formal (las posiciones "1" y/o "3" de la guanidina, por ejemplo, H_{2}N-C(=NH)-NH-. Los átomos de hidrógeno en cualquier nitrógeno pueden sustituirse con un sustituyente adecuado, tal como alquilo inferior, arilo o aralquilo inferior.
3.1.13 Amidino
Según se usa aquí, el término "amidino" se refiere a los restos R-C(=N)-NR'- (estando el radical en el nitrógeno "N^{1}") y R(NR')C=N- (estando el radical en el nitrógeno "N^{2}"), en los que R y R' pueden ser hidrógeno, alquilo inferior, arilo o aralquilo inferior.
3.1.14 Imino y oximino
El término "imino" se refiere al grupo -C(=NR)-, en el que R puede ser hidrógeno o alquilo inferior, arilo, heteroarilo o heteroaralquilo opcionalmente sustituidos, respectivamente. Las expresiones "imino(alquilo inferior)", "iminocicloalquilo", "iminocicloheteroalquilo", "iminoaralquilo", "iminoheteroaralquilo", "(cicloalquil)iminoalquilo", "(cicloiminoalquil)alquilo", "(cicloiminoheteroalquil)alquilo" y "(cicloheteroalquil)iminoalquilo" se refieren a grupos alquilo inferior, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, aralquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo y (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos que incluyen un grupo imino, respectivamente.
El término "oximino" se refiere al grupo -C(=NOR)-, en el que R puede ser hidrógeno ("hidroximino") o alquilo inferior, arilo, heteroarilo o heteroaralquilo opcionalmente sustituidos, respectivamente. Las expresiones "oximino(alquilo inferior)", "oximinocicloalquilo", "oximinocicloheteroalquilo", "oximinoaralquilo", "oximinoheteroaralquilo", "(cicloalquil)oximinoalquilo", "(ciclooximinoalquil)alquilo", "(ciclooximinoheteroalquil)alquilo" y "(cicloheteroalquil)oximinoalquilo" se refieren a grupos alquilo inferior, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, aralquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo y (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos que incluyen un grupo oximino, respectivamente.
3.1.15 Metileno y metino
El término "metileno" según se usa aquí se refiere a un átomo de carbono no sustituido, monosustituido o disustituido que tienen una hibridación sp^{3} formal (es decir,
-CRR'-, en el que R y R' son hidrógeno o sustituyentes independientes).
El término "metino" según se usa aquí se refiere a un átomo de carbono no sustituido que tiene una hibridación sp^{3} formal (es decir, -CR= o =CR-, en el que R es hidrógeno o un sustituyente).
3.2 Compuestos de la invención
La presente invención proporciona compuestos que tienen actividad agonista y/o antagonista útil con respecto a receptores de estrógeno de mamíferos además de compuestos y composiciones farmacéuticas útiles para tratar trastornos mediados por receptores de estrógeno en mamíferos. Más particularmente, se ha encontrado que los compuestos de la presente invención poseen un grado sorprendente de actividad con respecto a las isoformas \alpha y \beta de receptor de estrógeno humano. Así, los compuestos y composiciones farmacéuticas descritos aquí tienen utilidad para prevenir y/o tratar una amplia variedad de trastornos mediados por receptores de estrógeno, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, osteoporosis, cáncer de pecho, cáncer uterino y enfermedad cardíaca congestiva.
En un primer aspecto, la presente invención proporciona compuestos que tienen la estructura (Compuesto 1):
Compuesto 1
2
y sus sales aceptables farmacéuticamente. X_{1} y X_{2} se seleccionan independientemente del grupo constituido por nitrógeno y oxígeno, de tal modo que si uno de los X_{1} y X_{2} es nitrógeno, el otro de los X_{1} y X_{2} es oxígeno, para formar por ello una estructura de anillo isoxazol. Así, la estructura genérica mosdtrada antes abarca los siguientes regioisómeros:
3
dependiendo de las identidades de X_{1} y X_{2}.
R_{1} es fenilo sustituido con un grupo 4-hidroxi y opcionalmente sustituido adicionalmente con un grupo seleccionado entre halógeno, nitro, ciano, alquilo inferior, halo(alquilo inferior), alquiloxi inferior, haloalquiloxi inferior, carboxi, (alquiloxi inferior)carbonilo, ariloxicarbonilo, (cicloalquilo inferior)oxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, heteroaralquiloxicarbonilo, (heterocicloalquilo inferior)oxicarbonilo, (alquilo inferior)sulfinilo, (alquilo inferior)suulfonilo, (alquilo inferior)tio, ariltio, (alquilo inferior)carboniloxi, arilcarboniloxi, aralquilcarboniloxi, heteroarilcarboniloxi, heteroaralquilcarboniloxi, (cicloalquilo inferior)carboniloxi, alquilsulfonilamino, (heterocicloalquilo inferior)carboniloxi, aminocarbonilo, (alquilo inferior)aminocarbonilo, arilaminocarbonilo, aralquilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo y heteroaralquilaminocarbonilo.
R_{3} es arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, (monoaril)alquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo o (cicloheteroalquil)alquilo, no sustituido o sustituido con un grupo seleccionado entre hidroxilo, nitro, amino, imino, ciano, halo, tio, tioamido, amidino, oxo, oxamidino, metoxamidino, imidino, guanidino, sulfonamido, carboxilo, formilo, alquilo inferior, haloalquilo inferior, alcoxi inferior, haloalcoxi inferior, (alcoxi inferior)alquilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, aralquilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroaralquilcarbonilo, alquiltio, aminoalquilo y cianoalquilo y, cuando R_{3} es arilo o (monoaril)alquilo, pueden seleccionarse adicionalmente sustituyentes entre ariloxi y ariltio, en donde cualquiera de estos sustituyentes puede sustituirse adicionalmente con carboxilo, halo, nitro, amino, ciano, hidroxilo, alquilo inferior, alcoxi inferior, aminocarbonilo, -SR, tioamido, -SO_{3}H,
-SO_{2}R o cicloalquilo, en el que R es hidrógeno, hidroxilo o alquilo inferior; y
R_{2} se selecciona del grupo constituido por halo, ciano, nitro, tio, amino, carboxilo, formilo, arilo sustituido y aralquilo no sustituido o sustituido, heteroarilo, heteroaralquilo, alquenilo, alquilo inferior, (alquilo inferior)carboniloxi, arilcarboniloxi, heteroarilcarboniloxi, cicloalquilcarboniloxi, cicloheteroalquilcarboniloxi, arilcarboniloxi, heteroaralquilcarboniloxi, (cicloalquil)alquilcarboniloxi, (cicloheteroalquil)alquilcaboniloxi, (alquilo inferior)carbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, cicloalquilcarbonilo, cicloheteroalquilcarbonilo, aralquilcarbonilo, heteroaralquilcarbonilo, (cicloalquil)alquilcarbonilo, (cicloheteroalquil)alquilcarbonilo, (alquilo inferior)aminocarbonilo, arilaminocarbonilo, aralquilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo, heteroaralquilaminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, (cicloalquil)alquilaminocarbonilo, cicloheteroalquilaminocarbonilo, (cicloheteroalquil)alquilaminocarbonilo, (alquilo inferior)carbonilamino, arilcarbonilamino, heteroarilcarbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, cicloheteroalquilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, (cicloalquil)alquilcarbonilamino, (cicloheteroalquil)alquilcarbonilamino, (alquilo inferior)amino, arilamino, atralquilamino, heteroarilamino, heteroaralquilamino, (alquilo inferior)sulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, cicloalquilsulfonilo, cicloheteroalquilsulfonilo, aralquilsulfonilo, heteroaralquilsulfonilo, (cicloalquil)alquilsulfonilo, (cicloheteroalquil)alquilsulfonilo, (alquilo inferior)sulfinilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, cicloalquilsulfinilo, cicloheteroalquilsulfinilo, aralquilsulfinilo, heteroaralquilsulfinilo, (cicloalquil)alquilsulfinilo, (cicloheteroalquil)alquilsulfinilo, (alquilo inferior)oxi, ariloxi, heteroariloxi, cicloalquiloxi, cicloheteroalquiloxi, aralquiloxi, heteroaralquiloxi, (cicloalquil)alquiloxi, (cicloheteroalquil)alquiloxi, (alquilo inferior)tio, ariltio, heteroariltio, cicloalquiltio, cicloheteroalquiltio, aralquiltio, heteroaralquiltio, (cicloalquil)alquiltio, (cicloheteroalquil)alquiltio, (alquilo inferior)tiocarbonilo, ariltiocarbonilo, heteroariltiocarbonilo, cicloalquiltiocarbonilo, cicloheteroalquiltiocarbonilo, aralquiltiocarboniloxitiocarbonilo, heteroalquiltiocarbonilo, (cicloalquil)alquiltiocarbonilo, (cicloheteroalquil)alquiltiocarbonilo, heteroarilcarboniltio, cicloalquilcarboniltio, cicloheteroalquilcarboniltio, aralquilcarboniltiooxicarboniltio, heteroaralquilcarboniltio, (cicloalquil)alquilcarboniltio, (cicloheteroalquil)alquilcarboniltio, (alquilo inferior)oxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroriloxicarbonilo, cicloalquiloxicarbonilo, cicloheteroalquiloxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo, heteroaralquiloxicarbonilo, (cicloalquil)alquiloxicarbonilo, (cicloheteroalquil)alquiloxicarbonilo, imino(alquilo inferior), iminociclaalquilo, iminocicloheteroalquilo, iminoaralquilo, iminoheteroaralquilo, (cicloalquil)iminoalquilo, (cicloheteroalquil)iminoalquilo, (cicloiminoalquil)alquilo, (cicloiminoheteroalquil)alquilo, oximino(alquilo inferior), oximinocicloalquilo, oximinocicloheteroalquilo, oximinoaralquilo, oximonoheteroaralquilo, (cicloalquil)oximinoalquilo, (ciclooximinoalquil)alquilo, (cicloximinoheteroalquil)alquilo, (cicloheteroalquil)oximinoalquilo, (alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilo, di(alquilo inferior)amino(alquilo inferior)oxifenilo, (cicloamino(alquilo inferior))(alquilo inferior)oxifenilo, (heterocicloalquilo)(alquilo inferior)oxifenilo, (heterocicloalquilo)(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo y halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo, en los que, cuando dicho grupo está sustituido, los sustituyentes se seleccionan entre hidroxilo, nitro, amino, imino, ciano, halo, tio, tioamido, amidino, oxo, oxamidino, metoxamidino, imidino, guanidino, sulfonamido, carboxilo, formilo, alquilo inferior, halo(alquilo inferior), alcoxi inferior, halo(alcoxi inferior), (alcoxi inferior)alquilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, aralquilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroaralquilcarbonilo, alquiltio, aminoalquilo y cianoalquilo, en los que estos sustituyentes pueden sustituirse adicionalmente con carboxilo, halo, nitro, amino, ciano, hidroxilo, alquilo inferior, alcoxi inferior, aminocarbonilo, -SR, tioamido, -SO_{3}H, -SO_{2}R o cicloalquilo, en los que R es hidrógeno, hidroxilo o alquilo inferior;
en los que, para cada uno de los R_{1}, R_{2} y R_{3}, arilo se refiere a grupos aromáticos monocíclicos y policíclicos, o sistemas de anillos condensados que tienen al menos un anillo aromático, y de 3 a 14 átomos de carbono de la cadena principal; y heteroarilo se refiere a grupo aromáticos monocíclicos y policíclicos, o sistemas de anillos condensados que tienen al menos un anillo aromático, de 3 a 14 átomos de carbono de la cadena principal y de uno a cuatro heteroátomos como átomos del anillo en un anillo aromático;
y en los que dichos grupos alquilo inferior comprenden de 1 a 10 átomos de carbono.
En una realización, R_{3} se selecciona del grupo constituido por cicloalquilo, cicloheteroalquilo, (cicloalquil)alquilo y (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos. Los ejemplos de tales grupos incluyen sin limitación ciclohexilo, piperidinilo, adamantilo y quinuclidilo, cada uno opcionalmente sustituido. Otros ejemplos incluyen ciclohexilmetilo, 2-ciclohexiletilo y adamantilmetilo, de nuevo cada uno opcionalmente sustituido. En otra realización, R_{3} se selecciona del grupo constituido por arilo, heteroarilo, (monoaril)alquilo y heteroaralquilo opcionalmente sustituidos. Más particularmente, son realizaciones de la invención aquellas para las que R_{3} se selecciona del grupo constituido por heteroarilo y heteroaralquilo opcionalmente sustituidos, tales como piridinilo, hidroxipiridilo, metoxipiridilo, piridilmetilo y similares.
Alternativamente, R_{3} se selecciona del grupo constituido por arilo y (monoaril)alquilo opcionalmente sustituidos. En realizaciones más específicas, R_{3} se selecciona del grupo constituido por arilo y (monoaril)alquilo opcionalmente sustituidos y está sustituido con al menos un grupo hidroxilo, alquiloxi, ariloxi, tio, alquiltio o ariltio. Son realizaciones aún más específicas aquellas para las que R_{3} se selecciona del grupo constituido por arilo y (monoaril)alquilo opcionalmente sustituidos y está sustituido con al menos un grupo hidroxilo, alquiloxi, ariloxi, tio, alquiltio o ariltio, en las que R_{3} se selecciona del grupo constituido por fenilo y fenil(alquilo inferior) e incluye las sustituciones recién listadas. Los ejemplos de grupos R_{3} útiles incluyen sin limitación 4-hidroxifenilo, fenilmetilo, 4-hidroxifenilmetilo, 3-hidroxifenilmetilo, 2-tio-4-hidroxifenilmetilo, 2-(4-hidroxifenil)etilo, 4-metoxifenilo, 2-hidroxifenilo y 3-(feniltio)-4-hidroxifenilo. En una realización aún más específica, la presente invención incluye compuestos de la estructura mostrada para el Compuesto 1, para la que R_{3} se se selecciona del grupo constituido por arilo y (monoaril)alquilo opcionalmente sustituidos y R_{1} es fenilo, sustituido con un grupo 4-hidroxi, y sustituido de manera opcional adicionalmente con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por halógeno, nitro, ciano, alquilo inferior, halo(alquilo inferior), alquiloxi inferior, haloalquiloxi inferior, carboxi, (alquiloxi inferior)carbonilo, ariloxicarbonilo, (cicloalquilo inferior)oxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, heteroaralquiloxicarbonilo, (heterocicloalquilo inferior)oxicarbonilo, (alquilo inferior)sulfinilo, (alquilo inferior)sulfonilo, (alquilo inferior)tio, ariltio, (alquilo inferior)carboniloxi, arilcarboniloxi, aralquilcarboniloxi, heteroarilcarboniloxi, heteroaralquilcarboniloxi, (cicloalquilo inferior)carboniloxi, alquilsulfonilamino, (heterocicloalquilo inferior)carboniloxi, aminocarbonilo, (alquilo inferior)aminocarbonilo, arilaminocarbonilo, aralquilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo y heteroaralquilaminocarbonilo. Realizaciones aún más específicas incluyen las recién referidas para las que R_{1} está sustituido de manera opcional adicionalmente con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por halógeno, nitro, ciano, alquilo inferior, halo(alquilo inferior), alquiloxi inferior, haloalquiloxi inferior, carboxi, (alquilo inferior)tio, aminocarbonilo y (alquilo inferior)sulfinilo. Los ejemplos de grupos R_{1} útiles de esta realización incluyen sin limitación 4-hidroxifenilo, 2-metil-4-hidroxifenilo, 2-aminocarbonil-4-hidroxifenilo, 3-aminocarbonil-4-hidroxifenilo, 3-cloro-4-hidroxifenilo, 3-n-hexil-4-hidroxifenilo, 3-etil-4-hidroxifenilo, 2-metilsulfinil-4-hidroxifenilo, 2-etil-4-hidroxifenilo, 2-carboxi-4-hidroxifenilo, 3-fluoro-4-hidroxifenilo, 2-yodo-4-hidroxifenilo y 2-n-butil-4-hidroxifenilo. En otras realizaciones de la presente invención, El Compuesto 1 anterior incluye compuestos en R_{2} se selecciona del grupo constituido por arilo sustituido, halo y alquilo inferior, haloalquilo inferior, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, (alquilo inferior)carbonilo, aminocarbonilo, arilaminocarbonilo, (alquilo inferior)aminocarbonilo, aralquilaminocarbonilo, (heterocicloalquilo inferior)alquilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo, heteroaralquilaminocarbonilo, (cicloalquilo inferior)aminocarbonilo, formilo, amino, (alquilo inferior)amino y alquenilo opcionalmente sustituidos. Ejemplos particulares de estas realizaciones incluyen aquellos para los que R_{2} es halo. Otros ejemplos particulares de estas realizaciones son aquellos en los que R_{2} se selecciona del grupo constituido por fenilo sustituido, fenil(alquilo inferior), hidroxifenilo, (alquilo inferior)oxifenilo, halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilo, di(alquilo inferior)mino(alquilo inferior)oxifenilo, (cicloamino(alquilo inferior))(alquilo inferior)oxifenilo y (heterocicloalquil)(alquilo inferior)oxifenilo opcionalmente sustituidos. Los ejemplos específicos de tales grupos incluyen fenilmetilo, 4-hidroxifenilo y 2-(piperidin-1-il)etiloxifenilo. Otras realizaciones particulares todavía son aquellas para las que R_{2} se selecciona del grupo constituido por alquilo inferior, haloalquilo infeior, hidroxialquilo e hidroxifenil(alquilo inferior) opcionalmente sustituidos.
En otras realizaciones todavía del Compuesto 1 anterior, R_{2} se selecciona del grupo constituidp por fenilcarbonilo, (heterocicloalquil)(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo, hidroxifenilcarbonilo, halofenilcarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, di(alquilo inferior)aminocarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, hidroxifenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, (alquilo inferior)fenilcarbonilo, halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo y nitrofenilcarbonilo, opcionalmente sustituidos. Los ejemplos de sustituyentes de R_{2} dentro de esta realización que tienen propiedades útiles incluyen, aunque sin limitarse a ellos, 4-(2-piperidin-1-iletoxi)fenilcarbonilo, 4-hidroxifenilcarbonilo, (fenilmetil)aminocarbonilo, 3-(2-oxopirrolidin-1-il)propilaminocarbonilo, di-n-butilaminocarbonilo, (4-hidroxifenilmetil)aminocarbonilo, (piridin-3-ilmetil)aminocarbonilo, (piridin-2-ilmetil)aminocarbonilo, dimetilaminocarbonilo, etilaminocarbonilo, 4-(2-morfolinoetiloxi)fenilcarbonilo, ciclopropilaminocarbonilo, ciclobutilaminocarbonilo, 4-(1-metilpiperidin-3-ilmetiloxi)fenilcarbonilo, 4-[2-(1-metilpirrolidin-2-il)etiloxi]fenilcarbonilo, 4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etiloxi]fenilcarbonilo, 4-(1-metilpiperidin-4-ilmetiloxi)fenilcarbonilo, 2-clorofenilcarbonilo, 3-clorofenilcarbonilo, 4-clorofenilcarbonilo, 3-nitrofenilcarbonilo, 4-nitrofenilcarbonilo, 3,4-diclorofenilcarbonilo, 4-n-butilfenilcarbonilo, 3-hidroxifenilcarbonilo, 2-hidroxifenilcarbonilo, 4-metoxifenilcarbonilo, 3-(2-piperidin-1-iletiloxi)fenilcarbonilo, 3-[2-(pirrolidin-1-il)etiloxi]fenilcarbonilo y 3-(1-metilpiperidin-3-ilmetiloxi)fenilcarbonilo.
En otras realizaciones, los compuestos, las composiciones farmacéuticas y los usos proporcionados por la presente invención incluyen los compuestos que tienen la estructura del Compuesto 1 anterior para la que R_{2} se selecciona del grupo constituido por fenilcarbonilo, (heterocicloalquil)(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo, hidroxifenilcarbonilo, halofenilcarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, di(alquilo inferior)aminocarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, hidroxifenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, (alquilo inferior)fenilcarbonilo, halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo y nitrofenilcarbonilo opcionalmente sustituidos, y R_{3} se selecciona del grupo constituido por cicloalquilo, cicloheteroalquilo, (cicloalquil)alquilo y (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos. Otras realizaciones todavía incluyen aquellas para las que R_{2} se selecciona del grupo constituido por fenilcarbonilo, (heterociclolquil)(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo, hidroxifenilcarbonilo, halofenilcarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, di(alquilo inferior)aminocarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, hidroxifenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, (alquilo inferior)fenilcarbonilo, halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo y nitrofenilcarbonilo opcionalmente sustituidos, y R_{3} se selecciona del grupo constituido por arilo, heteroarilo, (monoaril)alquilo y heteroalquilo opcionalmente sustituidos. Son realizaciones aún más específicas aquellas para las que R_{2} se selecciona sel grupo constituido por fenilcarbonilo, (heterocicloalquil)(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo, hidroxifenilcarbonilo, halofenilcarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, di(alquilo inferior)aminocarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, hidroxifenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, (alquilo inferior)fenilcarbonilo, halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo y nitrofenilcarbonilo opcionalmente sustituidos, R_{3} se selecciona del grupo constituido por arilo y (monoaril)alquilo opcionalmente sustituidos, R_{1} es fenilo sustituido con un grupo 4-hidroxi, opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por halógeno, alquilo inferior, halo(alquilo inferior), (alquilo inferior)oxi, halo(alquilo inferior)oxi, carboxi, (alquilo inferior)oxicarbonilo, ariloxicarbonilo, (cicloalquilo inferior)oxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, heteroaralquiloxicarbonilo, (heterocicloalquilo inferior)oxicarbonilo, (alquilo inferior)sulfinilo, (alquilo inferior)sulfonilo, (alquilo inferior)tio, ariltio, (alquilo inferior)carboniloxi, arilcarboniloxi, aralquilcarboniloxi, heteroarilcarboniloxi, heteroaralquilcarboniloxi, (cicloalquilo inferior)carboniloxi, (heterocicloalquilo inferior)carboniloxi, aminocarbonilo, (alquilo inferior)aminocarbonilo, arilaminocarbonilo, aralquilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo y heteroaralquilaminocarbonilo. Se proporcionan antes ejemplos de sustituyentes particularmente útiles.
3.3 Síntesis de los compuestos de la invención
Los compuestos de la presente invención pueden sintetizarse usando técnicas y materiales conocidos por los expertos en la técnica (Carey y Sundberg 1983; Carey y Sundberg 1983; Greene y Wuts 1991; March 1992). Pueden obtenerse materiales de partida para los compuestos de la invención usando técnicas estándares y materiales precursores disponibles comercialmente, tales como los disponibles de Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wis.), Sigma Chemical Co. (St. Louis, Mo.), Lancaster Synthesis (Windham, N.H.), Apin Chmicals, Ltd. (New Brunswick, N.J.), Ryan Scientific (Columbia, S.C.), Maybridge (Cornwall, Inglaterra), Arcos (Pittsburgh, Pa.) y Trans World Chemicals (Rockville, Md.).
Los procedimientos descritos aquí para sintetizar los compuestos de la invención pueden incluir una o más etapas de protección y desprotección (por ejemplo, la formación y separación de grupos acetal) (Greene y Wuts 1991). Además, los procedimientos de síntesis descritos después pueden incluir diversas purificaciones, tales como cromatografía de columna, cromatografía rápida, cromatografía de capa fina ("TLC"), recristalización, destilación, cromatografía líquida a alta presión ("HPLC") y similares. Así mismo, pueden usarse también para identificación, cuantificación y purificación diversas técnicas muy conocidas en las técnicas químicas para la identificación y cuantificación de productos de reacción química, tales como resonancia magnética nuclear de protón y carbono-13 (^{1}H y ^{13}C NMR), espectroscopía infrarroja y ultravioleta ("IR" y "UV"), cristalografía de rayos X, análisis elemental ("EA"), HPLC y espectroscopía de masas ("MS").
El Esquema 1 es un esquema general para síntesis de isoxazoles.
Esquema 1
4
La Etapa A es una condensación de tipo Claisen, en la que X es un grupo lábil tal como -OR (R = alquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo o heteroaralquilo) o halógeno. Cundo X es -OR y R es alquilo (por ejemplo, X es metoxi o etoxi), la reacción de 1a y 1b para producir 1c puede hacerse usando procedimientos conocidos por los expertos en las técnicas de química orgánica (Tietze y Eicher 1989). Cuando X es halógeno, por ejemplo Cl, un procedimiento típico implica desprotonación de la cetona 1a con una base tal como litio bis(trimetilsilil)amida (LiHMDS) seguida por adición de 1b. Los disolventes adecuados para realizar tales reacciones serán conocidos por los expertos en las técnicas de química orgánica. Los ejemplos de disolventes adecuados incluyen disolventes de tipo éter tales como tetrahidrofurano ("THF"), dietiléter (H_{3}CH_{2}COCH_{2}CH_{2}) o disolventes hidrocarbonados alifáticos y aromáticos tales como ciclohexano (C_{6}H_{12}) y tolueno (C_{7}H_{8}). Las temperaturas de reacción típicas varían de
-78ºC a +25ºC y los tiempos de reacción de 6 horas ("h") a 20 h. La Etapa B es una reacción de cicloadición para formar el isoxazol deseado. En un procedimiento típico, una mezcla de 1c, dos equivalentes de hidrocloruro de hidroxiamina y tres equivalentes de piridina en etanol se calientan a reflujo durante la noche. La separación del disolvente seguida por extracción produce un material crudo que puede purificarse para proporcionar el compuesto 1d sustancialmente puro. Si R_{1} y R_{2} no son idénticos, se forma una mezcla de regioisómeros. En algunos casos, han de separarse grupos protectores para obtener el compuesto objetivo 1e, como se ilustra por la Etapa c. La protección y desprotección depende en gran medida de las propiedades químicas de la molécula y sus grupos funcionales; los métodos apropiados para protección y desprotección son muy conocidos en las técnicas de química orgánica (Greene y Wuts 1991).
El Esquema 2 describe un método alternativo para sintetizar el compuesto 1e del Esquema 1.
Esquema 2
5
La Etapa A anterior puede realizarse usando diversos métodos conocidos por los expertos en las técnicas de química orgánica. Por ejemplo, pueden usarse al menos tres métodos muy conocidos para convertir 2a en 1c: 1) desprotonación de 2a con una base tal como hidruro sódico (NaH) en un disolvente aprótico tal como dimetilformamida ("DMF") o THF, seguida por reacción del anión resultante con un R_{3}X electrófilo, en el que X es un grupo lábil tal como halógeno o MsO; o 2) se hace reaccionar 2a con R_{3}X, carbonato potásico y bromuro de tetrabutilamonio en DMF mientras se agita a ta-100ºC durante 6 a 24 h. Si R_{3} es paraalquiloxifenilo, puede aplicarse un método de plumbato (Craig, Holder et al. 1979; Pinhey, Holder et al. 1979).
La síntesis regioespecífica de los isoxazoles de la invención puede realizarse usando métodos conocidos. Un ejemplo de tal método se muestra en el siguiente Esquema 3 (Perkins, Beam et al.):
Esquema 3
6
El Esquema 4 describe un método alternativo para sintetizar el compuesto 1d del Esquema 1.
Esquema 4
7
La formación de isoxazoles 4a a partir de la 1,3-dicetona 2a (Etapa A) puede realizarse ysando la Etapa B del Esquema 1. La bromación del isoxazol 4A (Etapa B) puede conseguirse por adición de bromo en solución de cloroformo a una solución de 4A bajo temperaturas de ta-55ºC durante un período entre 0,5 y 2 h para formar el 4-bromoisoxazol 4b. Puede introducirse una variedad de sustituyentes en el R_{3} en el 4-bromoisoxazol 4b para formar el producto deseado 1d (Etapa C) como será evidente para los expertos en las técnicas de química orgánica. Por ejemplo, puede usarse un intercambio metal-halógeno seguido por captura del anión de isoxazol resultante con un electrófilo para incorporar R_{3}. Esto puede hacerse, por ejemplo, por reacción del bromoisoxazol 4b en solución de THF a -78ºC con n-BuLi. La mezcla se agita a -78ºC durante 1 h. Se añade después el electrófilo deseado correspondiente a R_{3} y se calienta la reacción a 0ºC-ta durante un período entre 2 y 16 h. Los electrófilos adecuados incluyen, aunque sin limitarse a ellos, los siguientes: haluros de alquilo, disulfuros, yodo, N-clorosuccinimida, tosil nitrilo, cloroformiato de etilo, cloruros de ácido, dióxido de carbono, dimetilformamida, aldehídos, amidas de Weinreb y cloruros de sulfonilo.
Alternativamente, puede obtenerse un 4-carboxiisoxazol (es decir, R_{3} = -CO_{2}^{-}) si se usa dióxido de carbono como electrófilo. El ácido carboxílico puede transformarse adicionalmente en diversos ésteres, amidas y cetonas. Para formar una amida en R_{3}, puede aplicarse una condición de formación de enlace amida típica. Por ejemplo, el ácido carboxílico correspondiente puede activarse con sal de HCl de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida ("EDC"), 1-hidroxibenzotriazol ("HOBt") y base de Hünig, y mezclarse con una amina primaria o secundaria en THF o DMF. La reacción se completa en 6 a 16 horas a ta. Puede usarse también acoplamiento de Suzuki para introducir restos arilo y alquenilo en R_{3} (Miyaura, Author et al. 1979; Miyaura y Suzuki 1979). Puede usarse la reacción de Ullmann para introducir grupos ariloxi en R_{3} (Knight; Semmelhack, Author et al.). Pueden conseguirse restos que tienen enlaces C-N y C-O en posición 4 del isoxazol 4b aplicando reacciones de acoplamiento catalizadas por paladio (Palucki, Wolfe et al. 1996; Wolfe y Buchwald 1996; Wolfe, Wagaw et al. 1996).
El Esquema 5 ilustra modificaciones más específicas en posición 4 del isoxazol.
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Esquema 5
8
El material de partida 5a puede sintetizarse por métodos descritos antes. El enlazador Z puede ser -CH_{2}-, -O-, -S-, -SO_{2}-, -NR'R''-, -(C=O)-, -(C=NOR)-, o el grupo arilo puede incorporarse directamente al núcleo de isoxazol. En el Esquema anterior, R_{3} es un grupo protector de fenol que puede separarse selectivamente (Greene y Wuts 1991) como se muestra en la Etapa A. El grupo hidroxilo libre puede derivarse usando métodos y materiales conocidos (Etapa B). No obstante, pueden sintetizarse otros grupos adecuados tales como, aunque sin limitarse a ellos, tioles, tioles protegidos, aminas y similares, usando metodologías análogas. Se describe una metodología específica con respecto al Esquema 6 posterior en el que Z es -SO_{2}- o -(C=O)- e Y es O, S o N. El índice puede ser 1, 2 o 3, y R_{4} es -NR'R'' o -N(R')(C=O)R''. En un ejemplo, se mezcla hidruro sódico con HY(CH_{2})_{n}R_{4} para generar el nucleófilo y se añade a 6a en solución de THF o DMF a una temperaura entre ta y 60ºC y se completa en 2 a 8 h.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema 6
9 
\newpage
Pueden realizarse modificaciones específicas en posición 5 del isoxazol usando las metodologías descritas con el siguiente Esquema 7:
Esquema 7
10
en el que E es alquilo, arilo, aralquilo, halo, ciano, amido, carboxi, sulfuro y sulfóxido. El material de partida 7a puede sintetizarse según métodos descritos antes. El grupo funcional E se introduce usando los métodos descritos en la Etapa C del Esquema 4 anterior. Pueden hacerse modificaciones en la posición 4 del isoxazol, por ejmplo, usando los métodos descritos con respecto al Esquema 8.
Esquema 8
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El material de partida 8a se sintetizó según métodos descritos en el Esquema 1. La bromación en la posición de metilo se realizó usando N-bromosuccinimida en tetracloruro de carbono. La alquilación para formar derivados de 8c en los que R_{4} es -OR, -SR o -NRR' puede efectuarse con un nucleófilo apropiado en un disolvente adecuado (por ejemplo, DMF o THF) a temperaturas variables entre ta y 100ºC.
Los procedimientos descritos antes pueden aplicarse también a metodologías en fase sólida. La implementación real depende, por supuesto, de los detalles de los productos deseados y los materiales de partida. Un ejemplo de una metodología adecuada, en la que R_{1} es hidroxifenilo, se muestra en el Esquema 9.
Esquema 9
12
En la Etapa A, se hizo reaccionar resina Rink hidroxilada disponible comercialmente (Calbiochem, La Jolla, CA) con cloruro de mesilo y base de Hünig en cloruro de metileno (CH_{2}Cl_{2}) a 0ºC con calentamiento a temperatura ambiente durante un período de dos horas. A continuación, se hacen reaccionar 4-hidroxiacetofenona y base de Hünig con el producto de resina en cloruro de metileno a temperatura ambiente durante la noche y proporciona cetona 9a unida a resina. La reacción de la cetona unida con un éster que lleve el sustituyente R_{3} (R_{3}CO_{2}R) y base (por ejemplo, ter-butóxido potásico, t-BuOK, y dibenzo-18-corona-6) en un disolvente adecuado (por ejemplo THF) a 70ºC durante seis horas (Etapa B) proporciona la dicetona 9b. La desprotonación de 9b usando, por ejemplo, yoduro de ter-butilamonio ("TBAI") en condiciones suaves (70ºC durante la noche) y el sustituyente R_{2} que lleva un grupo lábil adecuado (por ejemplo, halógeno, tosilato, mesilato) proporciona 9c. La ciclación de 9c para formar el isoxazol deseado (regioisómeros 9d y 9e unidos a resina) puede realizarse por reacción de la dicetona unida con H_{3}NOH-HCl y base de Hünig en un disolvente adecuado (por ejemplo, sulfóxido de dimetilo, ("DMSO")) a 70ºC durante quince horas. La división de la resina puede realizarse en condiciones suaves (por ejemplo, reacción con ácido trifluoroacético ("TFA") al 5% en cloruro de metileno) proporciona los productos finales 9d y 9e.
3.4 Actividad biológica
Las actividades de los compuestos de la invención para funcionar como agonistas o antagonistas de receptores de estrógeno puede determinarse usando una amplia variedad de ensayos conocidos por los expertos en las técnicas de bioquímica, química medicinal y endocrinología. Se describen en general varios ensayos útiles en esta Sección 3.4. Se describen ejemplos específicos en la posterior Sección 4.2.
3.4.1 Ensayos de actividad de modulación de receptores de estrógeno in vivo y ex vivo 3.4.1.1 Ensayo de estrogenicidad de Allen-Doisy
Este ensayo (descrito con mayor detalle en la siguiente Sección 4.2.1.1) se usa para evaluar la actividad estrogénica de un compuesto de ensayo y, más específicamente, la capacidad de un compuesto de ensayo para inducir una cornificación estrogénica de epitelio vaginal (Allen y Doisy 1923; Mülbock 1940; Terenius 1971). Se formulan compuestos de ensayo y se administran subcutáneamente a ratas hembras ovariectomizadas maduras en grupos de ensayo. En la tercera semana tras ovariectomía bilateral, se preparan las ratas con una dosis subcutánea simple de estradiol para asegurar mantenimiento de sensibilidad y mayor uniformidad de respuesta. En la cuarta semana, 7 días después de la preparación, se administran los compuestos de ensayo. Los compuestos se dan en tres dosis iguales durante dos días (tarde del primer día y mañana y tarde del segundo día). Se preparan después frotes vaginales dos veces al día durante los siguientes tres días. Se evaluán para cada uno de los frotes la extensión de células epiteliales cornificadas y nucleadas, así como de leucocitos.
3.4.1.2 Ensayo de anti-estrogenicidad anti-Allen-Doisy
Este ensayo (descrito con mayor detalle en la siguiente Sección 4.2.1.2) se usa para evaluar la actividad anti-estrogénica de un compuesto de ensayo por observación de cornificación del epitelio vaginal de ratas ovariectomizadas tras administración de un compuesto de ensayo (Allen y Doisy 1923; Mülbock 1940; Terenius 1971). La evaluación de la actividad anti-estrogénica se realiza usando ratas hembras maduras que, dos semanas después de ovariectomía bilateral, se tratan con estradiol para inducir una cornificación del epitelio vaginal. Se sigue a esto por administración del compuedsto de ensayo en una formulación adecuada diariamente durante 10 días. Se preparan diariamente frotes vaginales, partiendo del primer día de administración del compuesto de ensayo y procediendo hasta un día después de la última administración de compuesto de ensayo. Se evalúa para cada uno de los frotes como antes la extensión de células epiteliales cornificadas y nucleadas y leucocitos.
3.4.1.3 Bioensayo uterotrópico de ratas inmaduras de estrogenicidad y anti-estrogenicidad
Pueden usarse cambios de peso uterino en respuesta a estimulación estrogénica para evaluar las características estrogénicas de compuestos de ensayo en tejidos uterinos (Reel, Lamb et al. 1996; Ashby, Odum et al. 1997). En un ejemplo, descrito en la siguiente Sección 4.2.1.3, se dosifican con compuesto de ensayo (subcutáneamente) ratas hembras inmaduras que tenían bajos niveles endógenos de estrógeno durante 3 días. Se formulan compuestos como es apropiado para inyección subcutánea. Como testigo, se administra 17-beta-estradiol solo a un grupo de dosis. Se incluyen también en el estudio grupos de dosis testigo vehículo. Venticuatro horas después del último tratamiento, se necropsian los animales y se quitan, cortan, secan y pesan sus úteros. Cualesquiera aumentos significativos estadísticamente del peso uterino en un grupo de dosis particular, en comparación con el grupo testigo vehículo, demuestran evidencia de estrogenicidad.
3.4.1.4 Eficacia antagonista de receptor de estrógeno en modelo de xenoinjerto de MCF-7
Este ensayo (descrito con detalle en la siguiente Sección 4.2.1.4) se usa para evaluar la capacidad de un compuesto para antagonizar el crecimiento de un tumor MCF-7 de pecho dependiente de estrógeno in vivo. Se implanta subcutáneamente a ratones Ncr-nu hembras un tumor mamario MCF-7 de una vía in vivo existente. Se implanta un glóbulo de 17-\beta-estradiol en el lado opuesto al implante de tumor el mismo día. El tratamiento con compuesto de ensayo comienza cuando los tumores han alcanzado un cierto tamaño mínimo (por ejemplo, 75-200 mg). El compuesto de ensayo se administra subcutáneamente en base diaria y los animales se someten a comprobaciones de mortalidad diarias. Se determinan dos veces por semana los pesos corporales y volumen de tumor partiendo del primer día de tratamiento. La dosificación continúa hasta que los tumores alcanzan 1.000 mm^{3}. Los ratones con tumores mayores de 4.000 mg o con tumores ulcerados se sacrifican antes del día de la determinación del estudio. Los pesos de tumores de animales en el grupo de tratamiento se comparan con los del grupo testigo sin tratar así como con los dados glóbulo de estradiol solo.
3.4.1.5 Modelo de ratas OVX
Este modelo evalúa la capacidad de un compuesto para invertir la disminución de la densidad de huesos y el aumento de los niveles de colesterol resultante de ovariectomía. Un ejemplo de tal modelo se describe en la Sección 4.2.1.5. Se ovariectomizaron ratas hembras de tres meses y se administraron compuestos de ensayo diariamente por vía subcutánea comenzando un día post-cirugía. Se usaron como grupos testigo animales operados simuladamente y animales ovariectomizados como vehículo testigo administrado. Después de 28 días de tratamiento, se pesaron las ratas, se obtuvieron las ganancias de peso corporal totales y se sometieron los animales a eutanasia. Se miden, además del peso uterino, características indicativas de la actividad estrogénica, tales como marcadores óseos de sangre (por ejemplo, osteocalcina, fosfatasa alcalina específica para huesos), colesterol total y marcadores de orina (por ejemplo, desoxipiridinolina, creatinina). Se separan de los animales de ensayo tibias y fémures para análisis, tales como la medición de la densidad mineral de huesos. Una comparación de los animales ovariectomizados y vehículo de ensayo con los animales testigo simulados y ovariectomizados permite una determinación de los efectos estrogénicos/anti-estrogénicos específicos para tejidos de los compuestos de ensayo.
3.4.2 Ensayos de la actividad moduladora de receptores de estrógeno in vitro 3.4.2.1 Ensayos de unión de ER\alpha/ER\beta
Para evaluar la afinidad de unión de receptores ER\alpha/ER\beta, se usa un ensayo de proximidad de escintilación homogéneo (descrito en las siguientes Secciones 4.2.2.1 y 4.2.2.2). Se revisten placas de 96 pocillos con una solución de ER\alpha o ER\beta. Después de revestir, se lavan las placas con PBS. Se añade la solución de receptor a las placas revestidas, y se incuban las placas. Para examen de genoteca, se combina [^{3}H]estradiol con los compuestos de ensayo en los pocillos de la placa de 96 pocillos. Se determina la unión no específica del radioligando añadiendo estradiol a uno de los pocillos como competidor. Las placas se sacuden suavemente para mezclar los reactivos y se transfiere después una muestra de cada uno de los pocillos a las placas de ER\alpha o ER\beta pre-revestidas. Las placas se cierran e incuban, y se lee directamente el estradiol unido a receptor después de incubar usando un contador de escintilación para determinar la actividad del compuesto de ensayo. Si se desean estimaciones de ligando unido y libre, puede separarse sobrenadante y contarse separadamente en un contador de escintilación de líquido.
3.4.2.2 Ensayos de transactivación de ER\alpha/ER\beta
Puede evaluarse la estrogenicidad de los compuestos de la invención en un bioensayo in vitro usando células de ovario de hámster chino ("CHO") que se han co-transfectado establemente con el receptor de estrógeno humano ("hER"), el promotor de oxitocina de rata ("RO") y el gen informador de luciferasa ("LUC") como se describe en la siguiente Sección 4.2.2.3. Se compara la actividad de transactivación de estrógeno (relación de eficacia) de un compuesto de ensayo para inhibir la transactivación de la enzima luciferasa mediada por el receptor de estrógeno con un antagonista estándar y el estrógeno puro.
3.4.2.3 Ensayos de proliferación de células MCF-7
Las células MCF-7 son un linaje común de células de cáncer de pecho usadas para determinar actividad agonista/antagonista de receptor de estrógeno in vitro (McGregor y Jordan 1998). Puede usarse el efecto de un compuesto de ensayo sobre la proliferación de células MCF-7, medida por la incorporación de 5-bromo-2'-desoxiuridina ("BrdU") en un formato de ensayo quimioluminiscente, para determinar la actividad agonista/antagonista relativa del compuesto de ensayo. Se mantienen células MCF-7 (ATCC HTB-22) en un cultivo de fase log. Se ponen las células en placa y se incuban en medio exento de fenol para evitar fuentes externas de estímulos estrogénicos (MacGregor y Jordan 1998). Se añade el compuesto de ensayo en concentraciones variables para determinar una IC_{50} para el compuesto. Para determinar la actividad agonista, se mantiene el sistema de ensayo exento de estrógeno o fuentes de actuación de estrógeno. Para determinar la actividad antagonista, se añaden cantidades controladas de estrógeno.
3.5 Composiciones farmacéuticas
Los compuestos de la presente invención pueden usarse en forma de sales derivadas de ácidos inorgánicos u orgánicos. Estas sales incluyen, aunque sin limitarse a ellas, las siguientes: acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, ciclopentanopropionato, dodecilsulfato, etanosulfonato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, hidrocloruro, hidrobromuro, hidroyoduro, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, nicotinato, 2-naftalenosulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, sulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato y undecanoato. También, pueden cuaternizarse cualesquiera grupos que contengan nitrógeno básicos con agentes tales como haluros de alquilo inferior, tales como cloruro, bromuros e yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dialquilo como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo, haluros de cadena larga tales como cloruros, bromuros e yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo, haluros de aralquilo como bromuros de bencilo y fenetilo, y otros. Se obtienen por ello agua o productos solubles en aceite o dispersables.
Los ejemplos de ácidos que pueden emplearse para formar sales de adición de ácido aceptables farmacéuticamente incluyen ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico y ácido fosfórico, y ácidos orgánicos tales como ácido oxálico, ácido maleico, ácido succínico y ácido cítrico. Pueden prepararse in situ sales de adición básicas durante el aislamiento y purificación finales de los compuestos de la invención, o separadamente haciendo reaccionar restos ácido carboxílico con una base adecuada tal como el hidróxido, carbonato o bicarbonato de un catión de metal aceptable farmacéuticamente o con amoníaco, o una amina orgánica primaria, secundaria o terciaria. Las sales aceptables farmacéuticamente incluyen, aunque sin limitarse a ellas, cationes basados en metales alcalinos y alcalinotérreos, tales como sales de sodio, litio, potasio, calcio, magnesio, aluminio y similares, así como cationes amonio, amonio cuaternario y amina no tóxicos, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina y similares. Otras aminas orgánicas representativas útiles para la formación de sales de adición de base incluyen dietilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina y similares.
Los compuestos de la presente invención pueden administrarse en una variedad de formas que incluyen vías de administración enteral, parenteral y tópica. Por ejemplo, modos adecuados de adminitración incluyen oral, subcutáneo, transdérmico, transmucósico, iontoforético, intravenoso, intramuscular, intraperitoneal, intranasal, subdural, rectal, vaginal y similares.
Según otras realizaciones de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto modulador de receptores de estrógeno de la presente invención, junto con un vehículo o excipiente aceptable farmacéuticamente.
Los excipientes aceptables farmacéuticamente adecuados incluyen agentes de elaboración y modificadores y au-
mentadores de la entrega de fármaco tales como, por ejemplo, fosfato cálcico, estearato magnésico, talco, monosacáridos, disacáridos, almidón, gelatina, celulosa, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, dextrosa, hidroxipropil-\beta-ciclodextrina, polivinilpirrolidinona, ceras de bajo punto de fusión, resinas de intercambio iónico y similares, así como combinaciones de cualesquiera dos o más de ellos. Otros excipientes aceptables farmacéuticamente adecuados se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Pub. Co., New Jersey (1991), que se incorpora aquí como referencia.
Las composiciones farmacéuticas que contienen compuestos moduladores de receptores de estrógeno de la presente invención pueden estar en cualquier forma adecuada para el método de administración propuesto, incluyendo, por ejemplo, una solución, una suspensión o una emulsión. Se usan típicamente vehículos líquidos para preparar soluciones, suspensiones y emulsiones. Los vehículos líquidos considerados para su uso en la práctica de la presente invención incluyen, por ejemplo, agua, solución salina, disolvente(s) orgánico(s) aceptable(s) farmacéuticamente, aceites o grasas aceptables farmacéuticamente y similares, así como mezclas de dos o más de ellos. El vehículo líquido puede contener otros aditivos aceptables farmacéuticamente adecuados tales como solubilizantes, emulsionantes, nutrientes, tampones, agentes de conservación, agentes de suspensión, agentes espesantes, reguladores de viscosidad, estabilizantes y similares. Los disolventes orgánicos adecuados incluyen, por ejemplo, alcoholes monovalentes, tales como etanol, y alcoholes polivalentes, tales como glicoles. Los aceites adecuados incluyen, por ejemplo, aceite de soja, aceite de coco, aceite de oliva, aceite de cártamo, aceite de semilla de algodón y similares. Para administración parenteral, el vehículo también puede ser un éster aceitoso tal como oleato de etilo, miristato de isopropilo y similares. Las composiciones de la presente invención también pueden estar en forma de micropartículas, microcápsulas, encapsulados liposómicos y similares, así como combinaciones de cualesquiera dos o más de ellos.
Los compuestos de la presente invención pueden administrarse oralmente, parenteralmente, sublingualmente, mediante pulverización de inhalación, rectalmente, vaginalmente o tópicamente en formulaciones unitarias de dosificación que contengan según se desee excipientes, coadyuvantes y vehículos aceptables farmacéuticamente no tóxicos convencionales. La administración tópica puede implicar también el uso de administración transdérmica tal como parches transdérmicos o dispositivos de ionoforesis. El término parenteral según se usa aquí incluye inyecciones subcutáneas, inyección intravenosa, intramuscular, intrasternal o técnicas de infusión.
Las preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables estériles, pueden formularse según la técnica conocida usando agentes de dispersión o humectación adecuados y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril puede er también una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente aceptable parenteralmente no tóxico, por ejemplo, como una solución en 1,3-propanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse están agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro sódico. Además, se emplean convencionalmente como disolvente o medio de suspensión aceites fijos, estériles. Con este fin, puede emplearse cualquier aceite fijo insípido, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, pueden ser útiles en la preparación de inyectables ácidos grasos tales como ácido oleico.
Pueden prepararse supositorios para administración rectal o vaginal del fármaco mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado tal como manteca de cacao y polietilenglicoles que son sólidos a temperatura ordinaria pero líquidos a la temperatura rectal y se funden por tanto en el recto y liberan el fármaco.
Las formas de dosificación sólida para administración oral pueden incluir cápsulas, pastillas, píldoras, polvos y gránulos. En tales formas de dosificación sólida, el compuesto activo puede mezclarse con al menos un diluyente inerte tal como sacarosa, lactosa o almidón. Tales formas de dosificación pueden comprender también, como práctica normal, sustancias adicionales distintas de diluyentes inertes, por ejemplo, agentes lubricantes tales como estearato magnésico. En el caso de cápsulas, pastillas y píldoras, las formas de dosificación pueden comprender también agentes de tamponación. Las pastillas y píldoras pueden prepararse adicionalmente con revestimientos entéricos.
Las formas de dosificación líquida para administración oral pueden incluir emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires aceptables farmacéuticamente que contengan diluyentes inertes usados comúnmente en la técnica, tales como agua. Tales composiciones pueden comprender también coadyuvantes, tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, ciclodextrinas y agentes edulcorantes, saporíferos y perfumantes.
Los compuestos de la presente invención pueden administrarse también en forma de liposomas. Como es sabido en la técnica, los liposomas se derivan generalmente de fosfolípidos u otras sustancias lípidas. Los liposomas se forman por cristales líquidos hidratados mono o multilaminares que están dispersos en un medio acuoso. Puede usarse cualquier lípido aceptable fisiológicamente y metabolizable, no tóxico, capaz de formar liposomas. Las presentes composiciones en forma de liposoma pueden contener, además de un compuesto de la presente invención, estabilizantes, agentes de conservción, excipientes y similares. Los lípidos preferidos son los fosfolípidos y fosfatidilcolinas (lecitinas), naturales y sintéticos. Se conocen en la técnica métodos para formar liposomas (Prescott 1976).
Aunque los compuestos de la invención pueden administrarse como el único agente farmacéutico activo, pueden usarse en combinación con uno o más compuestos distintos como se describe aquí, y/o en combinación con otros agentes usados en el tratamiento y/o prevención de trastornos mediados por receptores de estrógeno. Alternativamente, los compuestos de la presente invención pueden administrarse secuencialmente con uno o más de tales agentes para proporcionar efectos terapéuticos y profilácticos sostenidos. Los agentes adecuados incluyen, aunque sin limitarse a ellos, otros SERMs así como agonistas y antagonistas de estrógeno tradicionales. Los agentes representativos útiles en combinación con los compuestos de la invención para el tratamiento de trastornos mediados por receptores de estrógeno incluyen, por ejemplo, tamoxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, raloxifeno, toremifeno, droloxifeno, TAT-59, idoxifeno, RU 58,688, EM 139, ICI 164,384, ICI 182,780, clomifeno, MER-25, DES, nafoxideno, CP-336,156, GW5638, LY139481, LY353581, zuclomifeno, enclomifeno, etamoxitrifetol, acetato de delmadinona, bifosfonato y similares. Otros agentes que pueden combinarse con uno o más de los compuestos de la invención incluyen inhibidores de aromatasa tales como, pero sin limitarse a ellos, 4-hidroxiandrostenodiona, plomestano, exemestano, aminogluetimida, rogletimida, fadrozol, vorozol, letrozol y anastrozol.
Otros agentes todavía útiles para combinación con los compuestos de la invención incluyen, aunque sin limitarse a ellos, agentes antineoplásticos, tales como agentes de alquilación. Los ejemplos de agentes de alquilación útiles incluyen sulfonatos de alquilo tales como busulfan, improsulfan y piposulfan; aziridinas tales como una benzodizepa, carboquona, meturedepa y uredepa; etileniminas y metilmelaminas tales como altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilolmelamina; nitrógeno mostazas tales como clorambucilo, clornafazina, ciclofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloroetamina, hidrocloruro de óxido de mecloroetamina, melfalan, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trifosfamida y uracil mostaza; nitrosoureas tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina, decarbazina, manomustina, mitobronitol, mitolactol y pipobromano. Más de tales agentes serán conocidos por los expertos en las técnicas de química medicinal y oncología.
Los agentes adicionales adecuados para combinación con los compuestos de la presente invención incluyen inhibidores de la síntesis de proteínas tales como abrina, ácido aurintricarboxílico, cloranfenicol, colicina E3, cicloheximida, toxina de la difteria, edeina A, emetina, eritromicina, etionina, fluoruro, 5-fluorotriptófano, ácido fusídico, difosfonato de guanililmetileno e imidodifosfato de guanililo, kanamicina, kasugamicina, kirromicina y O-metiltreonina, modeccina, neomicina, norvalina, pactamicina, paromomcina, puromicina, ricina, \alpha-sarcina, toxina de shiga, showdomicina, esparsomicina, espectinomicina, estreptomicina, tetraciclina, tiostrepton y trimetoprim. Pueden combinarse también con compuestos de la presente invención en composiciones farmacéuticas inhibidores de la síntesis de ADN, incluyendo agentes de alquilación tales como sulfato de dimetilo, miromicina C, nitrógeno y azufre mostazas, MNNG y NMS; agentes intercalantes tales como colorantes de acridina, actinomicinas, adriamicina, antracenos, benzopireno, bromuro de etidio, entrelazante de diyoduro de propidio, y agentes tales como distamicina y netropsina. Pueden usarse también en terapias de combinación con los compuestos de la invención análogos de bases de ADN tales como aciclovir, adenina, \beta-1-D-arabinósido, ametopterina, amnopterina, 2-aminopurina, afidicolina, 8-azaguanina, azaserina, 6-azauracilo, 2'-azido-2'-desoxinucleósidos, 5-bromodesoxicitidina, citosina, \beta-1-D-arabinósido, diazooxinorleucina, didesoxinucleósidos, 5-fluorodesoxicitidina, 5-fluorodesoxiuridina, 5-fluorouracilo, hidroxiurea y 6-mercaptopurina. También pueden combinarse con los compuestos de la invención para proporcionar composiciones farmacéuticas inhibidores de topoisomerasa, tales como coumermicina, ácido nalidíxico, novobiocina y ácido oxolínico, inhibidores de división celular, incluyendo colcemida, conquicina, vinblastina y vincristina; e inhibidores de la síntesis de ADN incluyendo actinomicina D, \alpha-amanitina y otras amatoxinas fúngicas, cordicepina (3'-desoxiadenosina), diclororibofuranosil bencimidazol, rifampicina, estreptovaricina y estreptolidigina. Todavía más agentes tales serán conocidos por los expertos en las técnicas de química medicinal y oncología.
Además, los compuestos de la presente invención pueden usarse, en forma simple o en combinación como se ha descrito antes, en combinación con otras modalidades para prevenir o tratar enfermedades o trastornos mediados por receptores de estrógeno. Tales otras modalidades de tratamiento incluyen, sin limtación, cirugía, radiación, suplemento de hormonas y regulación de dieta. Éstas pueden realizarse secuencialmente (por ejemplo, tratamiento con un compuesto de la invención tras cirugía o radiación) o en combinación (por ejemplo, además de un régimen de dieta).
En otra realización, la presente invención incluye compuestos y composiciones en las que un compuesto de la invención se combina con, o se une covalentemente a, un agente citotóxico unido a un agente de fijación de objetivo, tal como un anticuerpo monoclonal (por ejemplo, un anticuerpo monoclonal de ratón o humanizado). Se apreciará que la última combinación puede permitir la introducción de agentes citotóxicos en células cancerosas con mayor especificidad. Así, la forma activa del agente citotóxico (es decir, la forma libre) estará presente sólo en células fijadas como objetivo por el anticuerpo. Por supuesto, los compuestos de la invención pueden combinarse también con anticuerpos monoclonales que tengan actividad terapéutica contra el cáncer.
Pueden emplearse en general los agentes activos adicionales en cantidades terapéuticas como se indica en la PHYSICIANS' DESK REFERENCE (PDR) 53ª Edición (1999), que se incorpora aquí como referencia, o cantidades útiles terapéuticamente tales como se conocerían por un experto ordinario en la técnica. Los compuestos de la invención y los otros agentes activos terapéuticamente pueden administrarse en la dosificación clínica máxima recomendada o en dosis menores. Los niveles de dosificación de los compuestos activos en las composiciones de la invención pueden variarse para obtener un respuesta terapéutica deseada dependiendo de la vía de administración, gravedad de la enfermedad y respuesta del paciente. La combinación puede administrarse como composiciones separadas o como una forma de dosificación simple que contenga ambos agentes. Cuando se administran como una combinación, los agentes terapéuticos pueden formularse como composiciones separadas que se dan al mismo tiempo o en momentos diferentes, o pueden darse los agentes terapéuticos como una composición simple.
3.6 Tratamiento de trastornos mediados por receptores de estrógeno
Según otras realizaciones todavía, la presente invención proporciona el uso de un compuesto en la fabricación de un medicamento de uso en un método para tratar o prevenir un trastorno mediado por receptores de estrógedno en un ser humano o animal sujeto. Preferiblemente, el sujeto será un ser humano o animal no humano sujeto. La modulación de la supresión detectable de la actividad de receptores de estrógeno o la sobre-regulación de actividad de receptores de estrógeno en comparación con un testigo o en comparación con la actividad de receptores de estrógeno esperada.
Las cantidades eficaces de los compuestos de la invención incluyen generalmente cualquier cantidad suficiente para modular detectablemente la actividad de receptores de estrógeno por cualquiera de los ensayos descritos aquí, por otros ensayos de actividad conocidos por los de experiencia ordinaria en la técnica o detectando prevención o mitigación de síntomas en un sujeto que sufre un trastorno mediado por receptores de estrógeno.
Los trastornos mediados por receptores de estrógeno que pueden tratarse según la invención incluyen cualquier trastorno biológico o médico en el que está implicada la actividad de receptores de estrógeno o en el que la inhibición de receptor de estrógeno potencia o retarda la señalización a través de una vía que es defectuosa característicamente en la enfermedad a tratar. El estado o trastorno puede ser causado o caracterizado por actividad de receptor de estrógeno anormal. Los trastornos mediados por receptores de estrógeno representativos incluyen por ejemplo, osteoporosis, ateroesclerosis, cánceres mediados por estrógeno (por ejemplo, cáncer de pecho y endometrial), síndrome de Turner, hiperplasia de próstata benigna (es decir, hipertrofia de próstata), cáncer de próstata, colesterol elevado, restenosis, endometriosis, enfermedad fibroide uterina, atrofia de piel y/o vagina y enfermedad de Alzheimer. El tratamiento con éxito de un sujeto según la invención puede producir la prevención, inducir una reducción o aliviar síntomas en un sujeto que padezca un trastorno médico o biológico mediado por receptores de estrógeno. Así, por ejemplo, el tratamiento puede producir una reducción de tumores de pecho y endometriales y/o diversos marcadores clínicos asociados con tales cánceres. De modo similar, el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer puede producir una reducción de la proporción de progreso de la enfermedad, detectada, por ejemplo, midiendo una reducción de la proporción de aumento de demencia.
La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con los materiales excipientes para producir una forma de dosificación simple variará dependiendo del hospedante tratado y del modo particular de administración. Se entenderá, no obstante, que el nivel de dosis específico para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo de administración, vía de administración, proporción de excreción, combinación de fármacos y la gravedad de la enfermedad particular que experimenta terapia. La cantidad eficaz profiláctica o terapéuticamente para una situación dada puede determinarse fácimente por experimentación rutinaria y está dentro de la experiencia y juicio del clínico ordinariamente.
Con fines de ejemplo de la presente invención, una dosis eficaz profiláctica o terapéuticamente será generalmente de alrededor de 0,1 mg/kg/día a aproximadamente 100 mg/kg/día, preferiblemente de alrededor de 1 mg/kg/día a aproximadamente 20 mg/kg/día, y más preferiblemente de alrededor de 2 mg/kg/día a aproximadamente 10 mg/kg/día de un compuesto modulador de receptor de estrógeno de la presente invención, que puede administrarse en una o múltiples dosis.
4 Ejemplos
Los siguientes Ejemplos se proporcionan para ilustrar ciertos aspectos de la presente invención y para ayudar a los expertos en la técnica en la práctica de la invención. Estos Ejemplos no han de considerarse en absoluto que limiten el alcance de la invención de ninguna manera.
4.1 Preparación de compuestos de la invención 4.1.1 Procedimientos generales
Todas las reacciones se realizaron bajo atmósfera de nitrógeno o argón. Todos los reactivos obtenidos de fuentes comerciales se usaron sin purificación adicional. Se obtuvieron disolventes anhidros de fuentes comerciales y se usaron sin secado adicional. La separación y purificación de los productos se realizó usando alguno o una combinación de los siguientes métodos. La cromatografía de columna rápida se realizó con gel de sílice, 74-37 \mum, 60 Å (Aldrich Chemical Company, Inc., Milwaukee, WI) o un sistema de cromatografía Flash 40 y KP-Sil, 60 Å (Biotage, Charlottesville, Virginia). Los disolventes típicos empleados fueron diclorometano (DCM), metanol (MeOH), acetato de etilo (EtOAc) y hexano (Hex). La TLC preparativa se realizó usando placas de 20 x 20 cm revestidas con gel de sílice GF-254 Merch-EM Type-60. La HPLC preparativa se realizó con Dynamax System usando una columna de fase inversa C-18 (Ranin).
Los compuestos de la presente invención se caracterizaron por LC/MS usando el sistema Waters Micromass Platform LCZ (modo de ionización: pulverización electrónica positiva; columna: HP-Eclipse XDB-C18, 2 x 50 mm, tampón A: H_{2}O con 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA), tampón B: acetonitrilo (MeCN) con 0,1% de TFA, gradiente de elución: 5-95% de tampón durante un período de 5 min, caudal: 0,8 ml/min) o el sistema HP 1100 Series LC/MSD (modo de ionización: pulverización electrónica positiva; columna: HP-Eclipse XDB-C18, 2 x 50 mm, tampón A: H_{2}O con 0,1% de TFA, tampón B: MeCN con 0,1% de TFA, gradiente de elución: 5-95% de tampón durante un período de 3,5 a 6 min, caudal: 0,8 a 0,4 ml/min). Se evaluó también la pureza de los compuestos por HPLC usando un sistema de cromatografía Waters Millennium con un 2690 Separation Module (Milford, Massachusetts). Las columnas analíticas fueron fase inversa Alltima C-18, 4,6 x 250 mm de Alltech (Deerfield, Illinois). Se usó una elución de gradiente, partiendo típicamente con 5% de MeCN/95% de agua y progresando hasta el 100% de MeCN durante un período de 40 minutos. Todos los disolventes contenían 0,1% de TFA. Los compuestos se detectaron por absorción con luz ultravioleta (UV) a 214 nm. Algunos de los análisis espectrométricos de masas se realizaron en un Fisons Electrospray Mass Spectrometer. Todas las masas se indicaron como las de los iones progenitores protonados salvo indicación en contrario. Los análisis de resonancia magnética nuclear (NMR) se realizaron con un Varian 300 MHz NMR (Palo Alto, California). La referencia espectral fue TMS o el desplazamiento químico conocido del disolvente. Los datos de NMR protónica (^{1}H NMR) se indican como sigue: desplazamiento químico (\delta) en ppm, multiplicidad ( s = singulete, d = doblete, t = triplete, q = cuartete, p = pentete, m = multiplete, dd = doblete de doblete, a = ancho), constante de acoplamiento (Hz), integración y asignación. Los puntos de fusión se determinaron en un aparato Laboratory Devices MEL-TEMP (Holliston, Massachusetts) y se indican sin corregir.
Los nombres de los compuestos se generaron usando NOMENCLATOR (ChemInnovation Software, Inc., San Diego, CA).
4.1.2 Síntesis de isoxazoles moduladores de receptores de estrógeno 4.1.2.1 Síntesis de 4-{5-[2-(4-hidroxifenil)etil]-4-bencilisoxazol-3-il}fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo el Esquema 1 y el Esquema 3 usando 4'-metoxiacetofenona y 3-(4-metoxifenil)propanoato de metilo para la condensación de Claisen y bromuro de bencilo para la alquilación. La desmetilación se realizó usando el Método 3 descrito en la Etapa C del Esquema 1. ESMS m/z 372 (MH^{+}), C_{24}H_{21}NO_{3} = 371 g/mol; pureza por HPLC = 70%.
4.1.2.2 Síntesis de 4-[4-etil-5-(fenoximetil)isoxazol-3-1l]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los métodos descritos antes para el Esquema 1 usando como materiales de partida 1-(4-metoxifenil)butan-1-ona y cloruro de 2-fenoxiacetilo. La desmetilación se realizó usando el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquema 1. ESMS m/z 296 (MH^{+}), C_{18}H_{17}NO_{3} = 295 g/mol; pureza por HPLC = 60%.
4.1.2.3 Síntesis de 4-[5-(4-hidroxifenil)-4-fenilisoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los métodos descritos antes para el Esquema 1 usando como materiales de partida 1-(4-metoxifenil)-2-feniletan-1-ona y cloruro de 4-metoxibenzoilo. La desmetilación se realizó usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 7,60-7,36 (m, 9H), 7,00-6,90 (m, 4H); MS m/z 330 (MH+), C_{21}H_{15}NO_{3} = 329 g/mol; pureza por HPLC = 80%.
4.1.2.4 Síntesis de 4-[4-etil-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los métodos descritos antes para el Esquema 1 usando como materiales de partida 1-(4-metoxifenil)butano-1-ona y cloruro de 4-metoxibenzoilo. La desmetilación se realizó usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
\newpage
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 7,70 (d, J = 8,24 Hz, 2H), 7,00 (dd, J = 8,24, 2,2 Hz, 4H), 2,80 (q, J = 6,75 Hz, 2H), 1,20 (t, J = 6,75 Hz, 3H); GCMS m/z 281 (MH+), C_{17}H_{15}NO_{3} = 281 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.5 Síntesis de 4-{5-[2-(4-hidroxifenil)etil]-4-fenilisoxazol-3-il}fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los métodos descritos antes para el Esquema 1 usando como materiales de partida 1-(4-metoxifenil)-2-feniletan-1-ona y 3-(4-metoxifenil)propanoato de 4-nitrofenilo. La desmetilación se realizó usando el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/z 358 (MH^{+}), C_{23}H_{19}NO_{3} = 357 g/mol; pureza por HPLC = 70%.
4.1.2.6 Síntesis de 4-[5-(4-hidroxifenil)-4-bencilisoxazol-3-il}fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los métodos descritos antes para el Esquema 1 usando como materiales de partida 1-(4-metoxifenil)-3-fenilpropan-1-ona y cloruro de p-anisoilo. La desmetilación se realizó usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{4}-MeOH) \delta 7,60-7,20 (m, 9H), 7,01-6,80 (m, 4H), 4,20 (s, 2H); MS m/z 344 (MH+), C_{22}H_{17}NO_{3} = 343 g/mol; pureza por HPLC = 80%.
4.1.2.7 Síntesis de 4-[3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo el Esquema 1 y el Esquema 3.
Etapa 1: A una solución de 4'-metoxiacetofenona en THF a -78ºC se añadieron gota a gota 1,5 eq. de [(CH_{3})_{2}Si]_{2}
NLi. La solución se agitó durante 1 h a -78ºC, seguido por adición de 1,2 eq. de cloruro de p-anisoilo. La mezcla de reacción se agitó durante 10 min a -78ºC y después durante 22 h a ta, se acidificó con ácido cítrico del 10% y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La separación del disolvente bajo vacío proporcionó un sólido crudo que se purificó por cromatografía rápida (CH_{2}Cl_{2}) para dar 1,3-dicetona como un sólido blanco.
Etapa 2: Síntesis de triacetato de p-metoxifenilplomo. Se añadió anisol (1,0 equiv.) a una solución de tetraacetato de plomo (0,73 equiv.) en cloroformo y ácido dicloroacético. Se dejó agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 90 min. Después de este período, se lavó la solución con agua y se trató la capa orgánica con hexano. El producto precipitó y se recogió por filtración. El sólido se absorbió en cloroformo y ácido acético. La solución resultante se agitó durante 1 h y se lavó después con agua. Las últimas 2 etapas se repitieron y la capa de cloroformo se trató con hexano. La mezcla se enfrió a 2ºC durante 24 h. El material que precipitó se recogió por filtración y se secó bajo vacío para proporcionar triacetato de p-metoxifenilplomo.
Etapa 3: Una mezcla de la 1,3-dicetona (1,0 equiv., obtenida de la etapa 1), triacetato de p-metoxifenilplomo (1,1 equiv. obtenido de la etapa 2) y piridina (3,3 equiv.) en cloroformo se agitó a temperatura ambiente durante 48 h. Después de transcurrir este tiempo, la reacción se diluyó con cloroformo, y se lavó con agua y ácido sulfúrico 4 M. Los lavados acuosos se extrajeron de vuelta con cloroformo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, se secaron sobre sulfato magnésico, se filtraron y se concentraron bajo vacío. El producto crudo se purificó por cromatografía de columna rápida (acetato de etilo/hexano, 1:3) para proporcionar un sólido blanquecino como 1,2,3-tris(4-metoxifenil)propano-1,3-diona.
Etapa 4: Se calentó a reflujo durante la noche una mezcla de la 1,3-dicetona obtenida en la etapa 3 (1,0 equiv.), hidrocloruro de hidroxilamina (1,5 equiv.), piridina (2,0 equiv.) y etanol. Se enfrió a ta y se separó el disolvente bajo vacío. Se añadieron agua y acetato de etilo. Se separó la capa orgánica, se lavó con HCl dil. y salmuera, se secó, se filtró y se separó el disolvente bajo vacío. El producto 1-[4,5-bis(4-metoxifenil)isoxazol-3-il]-4-metoxibenceno se obtuvo como un sólido blanquecino.
Etapa 5: Se realizó la desmetilación usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1 para proporcionar el producto 4-[3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]fenol.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 7,30 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,20 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,10 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,80 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,76 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,74 (d, J = 9,0 Hz, 2H); MS m/z 346 (MH+), C_{21}H_{15}NO_{4} = 345 g/mol; pureza por HPLC = 97%.
4.1.2.8 Síntesis de 4-[5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los metodos descritos antes para el Esquema 1 usando como materiales de partida 4'-acetofenona y cloruro de p-anisoilo. La desmetilación se realizó usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 7,80-7,75 (m, 4H), 7,5 (s, 1H), 6,99-6,90 (m, 4H); MS m/z 254 (MH+), C_{15}H_{11}NO_{3} = 253 g/mol; pureza por HPLC = 96%.
4.1.2.9 Síntesis de 4-{5-(4-hidroxifenil)-4-[4-(2-piperidiletoxi)fenil]isoxazol-3-il}fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo el Esquema 1, el Esquema 3 y el Esquema 5.
Etapa 1: La síntesis de la 1,3-dicetona es la misma de la Etapa 1 del Ejemplo en la Sección 4.1.2.7.
Etapa 2: Síntesis de triacetato de p-aliloxifenilplomo. Similar a la Etapa 2 en la Sección 4.1.2.7, excepto que se usó alilfeniléter como material de partida en lugar de p-anisol.
Etapa 3: Similar a la Etapa 3 de la Sección 4.1.2.7 usando triacetato de p-aliloxifenilplomo en lugar de triacetato de p-metoxifenilplomo.
Etapa 4. La formación del esqueleto de isoxazol es la misma que en la Etapa 4 de la Sección 4.1.2.7. El producto obtenido de esta etapa es 1-[3,5-bis(4-metoxifenil)isoxazol-4-il]-4-prop-2-eniloxibenceno.
Etapa 5: Separación selectiva del grupo protector de alilo. Una mezcla del isoxazol anterior (1,0 equiv.), pirrolidina (20 equiv.), trifenilfosfina (0,05 equiv.) y tetraquis(trifenilfosfina) paladio(0) (0,05 equiv.) en THF se calentó a reflujo durante la noche. La solución se concentró bajo vacío y el material crudo se purificó por cromatografía de columna rápida (acetato de etilo/hexano 1:3). Se obtuvo el producto 4-[3,5-bis(4-metoxifenil)isoxazol-4-il]fenol como un sólido blanco.
Etapa 6: Una mezcla del fenol (1,0 equiv., obtenido en la Etapa 5), monohidrocloruro de 1-(2-cloroetil)piperidina (1,2 equiv.) y carbonato de cesio (2,5 equiv.) en DMF (30 ml) se calentó a 100ºC durante la noche. Los sólidos se separaron por filtración, el filtrado se concentró bajo vacío y el residuo se absorbió en acetato de etilo. La solución se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró bajo vacío para dar 1-[3,5-bis(4-metoxifenil)isoxazol-4-il]-4-(2-piperidiletoxi)benceno.
Etapa 7: La desmetilación se realizó usando el Método 2 descrito para la Etapa C del Esquema 1. Se añadió cloruro de aluminio (5,0 equiv.) y etanotiol (5,0 equiv.) a una solución del isoxazol obtenido en la Etapa 6 (1,0 equiv.) en dicloroetano. La mezcla resultante se agitó durante 40 min a temperatura ambiente y se apagó con THF, HCl del 20% y agua. Se formó un precipitado y éste se recogió por filtración. Después de secar el producto, el material se absorbió en metanol, se trató con carbón vegetal activado, se filtró a través de sulfato sódico y se concentró bajo vacío. La purificación con cromatografía rápida seguida por adición de HCl ac. y liofilización, proporcionó el producto 4-{5-(4-hidroxifenil)-4-[4-(2-piperidiletoxi)fenil]isoxazol-3-il}fenol como la sal hidrocloruro.
^{1}H NMR (d_{4}-MeOH) \delta 7,43 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,20 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,03 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,77 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,75 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,20 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,90 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,60-2,70 (m, 4H), 1,63-1,75 (m, 4H), 1,50-1,60 (m, 2H); MS m/z 457 (MH^{+}, 100%), C_{28}H_{28}N_{2}O_{4} = 456 g/mol; pureza por HPLC = 98%.
4.1.2.10 Síntesis de 4-{4-(4-hidroxifenil)-3-[4-(2-pipridiletoxi)fenil]isoxazol-5-il}fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos antes en el Esquema 1, el Esquema 3 y el Esquema 7.
Etapa 1: La síntesis de la 1,3-dicetona es similar a la descrita en la Etapa 1 de la Sección 4.1.2.7. Se añadió gota a gota litio bis(trimetilsilil)amida (1,2 equiv.) a una solución de desoxianisoina (1,0 equiv.) en THF a -78ºC. Se dejó agitar la solución resultante durante 40 min a -78ºC y se añadió gota a gota una solución de cloruro de p-aliloxibenzolilo (1,1 equiv.) en THF. Se dejó calentarse lentamente la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante la noche para producir una solución de color naranja. La mezcla se diluyó con HCl 0,5 N, se extrajo con acetato de etilo, se lavó con HCl 0,5 N, agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró bajo vacío. El producto crudo se purificó por recristalización. Esto proporcionó parte del compuesto deseado y el residuo restante se purificó por cromatografía de columna rápida (acetato de etilo:hexanos 1:3) para proporcionar la 1,3-dicetona.
Etapa 2: La formación de isoxazol es la misma que la Etapa 4 de la Sección 4.1.2.7. El producto proporcionado en esta etapa es 4-metoxi-1-[4-(4-metoxifenil)-5-(4-prop-2-eniloxifenil)isoxazol-3-il]benceno.
Etapa 3: Separación selectiva del grupo protector de alilo. La misma que la Etapa 5 de la Sección 4.1.2.9. El producto proporcionado en esta etapa es 4-[3,4-bis(4-metoxifenil)isoxazol-5-il]fenol.
Etapa 4: Alquilación. Igual que la Etapa 6 de la Sección 4.1.2.9. El producto proporcionado en esta etapa es 4-metoxi-1-{4-(4-metoxifenil)-5-[4-(2-piperidiletoxi)fenil]isoxazol-3-il}benceno.
Etapa 5: La desmetilación se realizó usando el Método 2 descrito para la Etapa C del Esquema 1 (véase la Etapa 7 de la Sección 4.1.2.9). El producto fue 4-{4-(4-hidroxifenil)-3-[4-(2-piperidiletoxi)fenil]isoxazol-5-il}fenol.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 6,70-7,50 (m, 2H), 4,35-4,42 (m, 2H), 3,30-3,50 (m, 2H), 2,90-3,25 (m, 4H), 1,60-1,80 (m, 4H), 1,30-1,45 (m, 2H); MS m/z 457 (MH^{+}, 100%), C_{28}H_{28}N_{2}O_{4} = 456 g/mol; pureza por HPLC = 98%.
4.1.2.11 Síntesis de 3-[4,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo el Esquema 1. Se usaron como materiales de partida desoxianisoina y cloruro de m-anisoilo. La desmetilación se realizó usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1. El producto obtenido fue un sólido blanquecino.
MS m/z 346 (MH+), C_{21}H_{15}NO_{4} = 345 g/mol; pureza por HPLC = 95%.
4.1.2.12 Síntesis de 2-[4,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo el Esquema 1. Se usaron como materiales de partida desoxianisoina y cloruro de o-anisoilo. La desmetilación se realizó usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1. El producto obtenido fue un sólido blanquecino.
MS m/z 346 (MH+), C_{21}H_{15}NO_{4} = 345 g/mol; pureza por HPLC = 96%.
4.1.2.13 Síntesis de 4-[3-(4-hidroxifenil)-4-metilisoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo el Esquema 1. Se usaron como materiales de partida 1-(4-metoxifenil)propan-1-ona y cloruro de p-anisoilo. La desmetilación se realizó usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/z 268 (MH^{+}), C_{16}H_{13}NO_{3} = 267 g/mol; pureza por HPLC = 85%.
4.1.2.14 Síntesis de 4-[3-(4-hidroxifenil)-5-fenilisoxazol-4-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo el Esquema 1. Se usaron como materiales de partida desoxianisoina y cloruro de benzoilo. La desmetilación se realizó usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/z 330 (MH^{+}), C_{21}H_{15}NO_{3} = 329 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.15 Síntesis de 4-[5-(4-fluorofenil)-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo el Esquema 1. Se usaron como materiales de partida desoxianisoina y cloruro de p-fluorobenzoilo. La desmetilación se realizó usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/z 348 (MH^{+}), C_{21}H_{14}FNO_{3} = 347 g/mol; pureza por HPLC = 85%.
4.1.2.16 Síntesis de 4-{4-(4-hidroxifenil)-5-[3-(trifluorometoxi)fenil]isoxazol-3-il}fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo el Esquema 1. Se usaron como materiales de partida desoxianisoina y cloruro de m-trifluorometilbenzoilo. La desmetilación se realizó usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/z 414 (MH^{+}), C_{22}H_{14}F_{3}NO_{4} = 413 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.17 Síntesis de 4-{4-(4-hidroxifenil)-5-[4-(trifluorometoxi)fenil]isoxazol-3-il}fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo el Esquema 1. Se usaron como materiales de partida desoxianisoina y cloruro de p-trifluorometilbenzoilo. La desmetilación se realizó usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/z 414 (MH^{+}), C_{22}H_{14}F_{3}NO_{4} = 413 g/mol; pureza por HPLC = 90%
4.1.2.18 Síntesis de 4-[5-(4-hidroxifenil)-4-(fenoximetil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos para el Esquema 1 y el Esquema 8.
Etapa 1: Formación de la 1,3-dicetona. Igual que la Etapa 1 de la Sección 4.1.2.7, excepto que se usó como material de partida 1-(4-metoxifenil)propan-1-ona.
Etapa 2: Formación del esqueleto de isoxazol. Igual que la Etapa 4 de la Sección 4.1.2.7. El producto obtenido en esta etapa fue 4-metoxi-1-[5-(4-metoxifenil)-4-metilisoxazol-3-il]benceno.
Etapa 3: Bromación de 4-metilisoxazol. Una suspensión del 4-metilisoxazol anterior (1,0 eq.), N-bromosuccinimida (NBS) (1,1 eq.) y PhCO_{3}H (cantidad catalítica) en CCl_{4} se calentó a reflujo bajo argón durante 2 h, se enfrió a ta y se filtró. El filtrado se diluyó con DCM, se lavó con Na_{2}S_{2}O_{3} del 10% y NaHCO_{3} del 10%, se secó y se concentró bajo vacío. El material crudo resultante se purificó con cromatografía de columna rápida para dar el producto 1-[4-(bromometil)-5-(4-metoxifenil)isoxazol-3-il]-4-metoxibenceno.
Etapa 4: Alquilación. Se añadió NaH en polvo (1,1 eq.) bajo argón a una solución de fenol (1,1 eq.) en THF seco a 0ºC. Cuando la solución dejó de burbujear, se añadió el bromuro anterior a la solución, y la mezcla se agitó durante la noche a ta. La solución resultante se acidificó con NH_{4}Cl saturado y se extrajo con etiléter. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se evaporaron con rotación para dar un sólido blanco.
Etapa 5: Desmetilación. El sólido blanco anterior se convirtió en el producto 4-[5-(4-hidroxifenil)-4-(fenoximetil)isoxazol-3-il)fenol usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/e 360 (MH^{+}), C_{22}H_{17}NO_{4} = 359 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.19 Síntesis de 4-[5-(4-hidroxifenil)-4-(feniltiometil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos para el Esquema 1 y el Esquema 8.
Las Etapas 1-3 son las mismas descritas para las Etapas 1-3 de la Sección 4.1.2.18, respectivamente.
Etapa 4: Alquilación. Igual que la Etapa 4 de la Sección 4.1.2.18, excepto que se usó tiofenol en lugar de fenol.
Etapa 5: Desmetilación. Igual que la Etapa 5 de la Sección 4.1.2.18. El producto obtenido fue 4-[5-(4-hidroxifenil)-4-(feniltiometil)isoxazol-3-il]fenol.
ESMS m/e 376 (MH^{+}), C_{22}H_{17}NO_{3}S = 375 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.20 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos antes para el Esquema 5.
Etapa 1: Igual que la Etapa 1 descrita en la Sección 4.1.2.7.
Etapa 2: Formación de heterociclo de isoxazol. Igual que la Etapa 4 de la Sección 4.1.2.7. El producto obtenido en esta etapa fue 4-metoxi-1-[5-(4-metoxifenil)isoxazol-3-1l]benceno.
Etapa 3: Bromación. Se añadió gota a gota bromo (1,01 eq.) en solución de CHCl_{3} anhidro a una solución del isoxazol anterior (1,0 eq.) en CHCl_{3} anhidro a reflujo (70ºC) bajo argón. La mezcla se agitó durante 50 min a reflujo, seguido por adición de Na_{2}S_{2}O_{3} al 10% en solución acuosa de NaHCO_{3} saturado. Se separó la solución acuoso-orgánica y la capa acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se evaporaron rotativamente para dar un sólido amarillo que se lavó con acetato de etilo ("EtOAc") para proporcionar un sólido amarillo pálido como 1-[4-bromo-5-(4-metoxifenil)isoxazol-3-il]-4-metoxibenceno con un rendimiento del 92,5%.
Etapa 4: Acilación. A una solución del 4-bromoisoxazol anterior (1,0 eq.) en THF anhidro a -98ºC bajo argón se añadió n-BuLi (1,2 eq., 1,6 M en hexano). La solución resultante se agitó durante 1 h a -98ºC y se transfirió después gota a gota a una solución de cloruro de 4-aliloxibencilo (1,2 eq.) en THF a -78ºC a través de una aguja de doble punta. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a -78ºC, se diluyó con agua y se acidificó después con ácido cítrico acuoso al 10%. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se purificó con cromatografía rápida (CH_{2}Cl_{2}) para dar el producto acilado 3,5-bis(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 4-prop-2-eniloxifenil cetona como un sólido amarillo pálido con un rendimiento del 64%.
Etapa 5: Separación selectiva del grupo protector de alilo. Igual que en la Etapa 5 de la Sección 4.1.2.9.
Etapa 6: Alquilación. Igual que en la Etapa 6 de la Sección 4.1.2.9.
Etapa 7: La desmetilación fue siguiendo el Método 2 descrito para la Etapa C del Esquema 1. A una solución del compuesto obtenido en la etapa 6 anterior en CH_{2}Cl_{2} seco se añadieron 5,0 equivalentes de AlCl_{3} y 5,0 equivalentes de etanotiol ("EtSH"). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 1,2 h y la solución resultante se vertió después en agua helada. La capa orgánica se separó. La capa acuosa se extrajo con EtOAc tres veces. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se evaporaron rotativamente bajo vacío. La mezcla de reacción obtenida contenía producto deseado y producto secundario como compuesto mono-desmetilado. La mezcla se separó por HPLC para dar producto 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona con un rendimiento del 22% después de purificar por HPLC.
El producto obtenido de purificación por HPLC se disolvió en EtOAc/solución sat. de NaHCO_{3} (1:1). La solución bicapa se sacudió vigorosamente y se separó. La capa acuosa se extrajo con EtOAc varias veces. La capa orgánica combinada se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó rotativamente para dar un sólido amarillo. El sólido se disolvió después en acetona/HCl conc. fríos (2:1) y la solución se evaporó rotativamente bajo vacío para producir la sal de HCl de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona como un polvo blanquecino. La recristalización con metanol/agua dio la sal como cristales escamosos finos.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 10,2 (s, 1H, OH), 9,93 (s, 1H, OH), 7,8-6,72 (m, 12H, 3Ph), 4,4 (t ancho, 2H, OCH_{2-}), 3,49 (m, 4H, N(CH_{3})_{2}), 2,98 (t ancho, 2H, -CH_{2}-N), 1,79-1,39 (m, 6H, -(CH_{2})_{3}); ESMS m/e 485 (MH^{+}), C_{29}H_{28}N_{2}O_{5} = 484 g/mol; pureza por HPLC = 99%. P.f. 255ºC, descompuesto.
4.1.2.21 Síntesis de 5-(4-hidroxifenil)-3-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona.
Este compuesto se sintetizó siguiendo el Esquema 5.
Las Etapas 1-6 son exactamente las mismas que las correspondientes Etapas de la Sección 4.1.2.20.
Etapa 7: Igual que la Etapa 7 de la Sección 4.1.2.20. La desmetilación parcial dio el compuesto del título 5-(4-hidroxifenil)-3-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona., que se aisló por HPLC.
ESMS m/e 499 (MH^{+}), C_{30}H_{30}N_{2}O_{5} = 498 g/mol; pureza por HPLC = 97%.
4.1.2.22 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-[2-(hidroxipiperidil)etoxi]fenil cetona
Este compuesto se obtuvo como un producto secundario de las reacciones descritas en la Sección 4.1.2.20. El material crudo obtenido de la Etapa 7 de la Sección 4.1.2.20 se disolvió en DMSO y se dejó a ta durante la noche. El análisis de HPLC de este mezcla mostró la formación de un nuevo compuesto que era 16 unidades de masa mayor que cualquiera de los productos encontrados en la reacción de la Etapa 7 de la Sección 4.1.2.20. El aislamiento por HPLC proporcionó así N-óxido 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-[2-(hidroxipiperidil)etoxi]fenil cetona.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 10,22 (s, 1H), 9,94 (s, 1H), 7,82-7,79 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,46-7,43 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,34-7,32 (d, J = 8,30 Hz, 2H), 7,04-7,01 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,83-6,80 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,78-6,75 (d, J = 8,30 Hz, 2H), 4,55 (ancho, 2H), 4,05 (ancho, 2H), 3,67 (ancho, 4H), 2,00-1,35 (m, 6H); LCMS m/z 501 (MH^{+}), C_{29}H_{28}N_{2}O_{6} = 500 g/mol; pureza por HPLC = 99%.
4.1.2.23 Síntesis de 3-(4-hidroxifenil)-5-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 4-[2-(hidroxipiperidil)etoxi]fenil cetona
Este compuesto se obtuvo como un producto secundario de la síntesis descrita en la Sección 4.1.2.21. El material crudo obtenido de la Etapa 7 se disolvió en DMSO y se dejó a ta durante la noche. El análisis de HPLC de este mezcla mostró la formación de un nuevo compuesto que era 16 unidades de masa mayor que cualquiera de los productos caracterizados previamente. El aislamiento por HPLC proporcionó 3-(4-hidroxifenil)-5-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 4-[2-(hidroxipiperidil)etoxi]fenil cetona.
ESMS m/e 515 (MH^{+}), C_{30}H_{30}N_{2}O_{6} = 514 g/mol; pureza por HPLC = 88%.
4.1.2.24 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-hidroxifenil cetona
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos para el Esquema 5.
Las Etapas 1-4 se realizaron exactamente igual que las correspondientes Etapas de la Sección 4.1.2.20.
Etapa 5: La desprotección se realizó siguiendo el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquema 1. Esta etapa dio el producto deseado 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-hidroxifenil cetona.
ESMS m/e 374 (MH^{+}), C_{22}H_{15}NO_{5} = 373 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.25 Síntesis de 4-[4-bromo-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos para el Esquema 4.
Las Etapas 1-3 son exactamente las mismas que las correspondientes Etapas de la Sección 4.1.2.20.
Etapa 4: La desmetilación se realizó usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/e 332/334 (MH^{+}), C_{15}H_{10}BrNO_{3} = 331/333 g/mol (1Br); pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.26 Síntesis de 4-[4-(bromometil)-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos antes para el Esquema 1 y el Esquema 8.
Las Etapas 1-3 son las mismas que las correspondientes Etapas de la Sección 4.1.2.20.
Etapa 4: La desmetilación fue siguiendo el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquema 1. Se añadieron gota a gota 5 eq. de tribromuro de boro (1 M en solución de DCM) a una solución del isoxazol anterior en DCM a -78ºC. La mezcla se calentó lentamente a ta y se agitó bajo argón durante 1,5 h. Se apagó la reacción añadiendo agua y se neutralizó a pH 5. Se extrajo con EtOAc, se secó con Na_{2}SO_{4} y se concentró bajo vacío para dar un material crudo. La purificación por HPLC proporcionó 10% de producto deseado.
ESMS m/e 346/348 (MH^{+}, 100%), C_{16}H_{12}BrNO_{3} = 345/347 g/mol (1Br); pureza por HPLC = 80%.
4.1.2.27 Síntesis de 4-{5-(4-hidroxifenil)-4-[(4-hidroxifenoxi)metil]isoxazol-3-il}fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos antes para el Esquema 1 y el Esquema 8.
Las Etapas 1, 2 y 3 son las mismas que las correspondientes Etapas de la Sección 4.1.2.18.
Etapa 4: Alquilación. Igual que la Etapa 4 de la Sección 4.1.2.18 excepto que se usó en el procedimiento 4-(benciloxi)fenol. El producto obtenido en esta etapa es 1-{[3,5-bis(4-metoxifenil)isoxazol-4-il]metoxi-4-(fenilmetoxi)benceno.
Etapa 5: La desmetilación fue siguiendo el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquema 1. El producto obtenido fue 4-{5-(4-hidroxifenil)-4-[(4-hidroxifenoxi)metil]isoxazol-3-il}fenol.
ESMS m/e 376 (MH^{+}), C_{22}H_{17}NO_{5} = 375 g/mol; pureza por HPLC = 80%.
4.1.2.28 Síntesis de 4-[4-(hidroximetil)-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se obtuvo como un producto secundario en la síntesis del producto de la Sección 4.1.2.27; el aislamiento se consiguió con HPLC.
ESMS m/z 284 (MH^{+}), C_{16}H_{13}NO_{4} = 283 g/mol; pureza por HPLC = 99%.
4.1.2.29 Síntesis de 3-(4-hidroxifenil)-4,5-dihidronafto[1,2-c]isoxazol-7-ol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los métodos descritos en el Esquema 1, usando como materiales de partida 6-metoxi-1-tetralona y cloruro de p-anisoilo. La desmetilación se realizó siguiendo el Método 1 de la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/e 280 (MH^{+}), C_{17}H_{13}NO_{3} = 279 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.30 Síntesis de 4-(7-metoxi-4,5-dihidronafto[1,2-c]isoxazol-3-il)fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.29. La desmetilación parcial proporcionó producto mono-metilado 4-(7-metoxi-4,5-dihidronafto[1,2-c]isoxazol-3-il)fenol, que se aisló por HPLC para proporcionar el producto deseado.
ESMS m/e 294 (MH^{+}), C_{18}H_{15}NO_{3} = 293 g/mol; pureza por HPLC = 89%.
4.1.2.31 Síntesis de 3-[3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.8, excepto que se usaron como materiales de partida 4'-metoxiacetofenona y cloruro de m-anisoilo.
ESMS m/e 254 (MH^{+}), C_{15}H_{11}NO_{3} = 253 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.32 Síntesis de 3-(4-hidroxifenil)nafto[1,2-c]isoxazol-7-ol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los métodos descritos en el Esquema 1.
Etapa 1: Formación de 1,3-dicetona. Igual que la Etapa 1 de la Sección 4.1.2.7, excepto que se usaron como materiales de partida 6-metoxi-1-tetralona y cloruro de p-anisoilo.
Etapa 2: Formación de heterociclo de isoxazol. Igual que la Etapa 4 de la Sección 4.1.2.7. El producto obtenido en esta etapa fue 7-metoxi-3-(4-metoxifenil)-4,5-dihidronafto[1,2-c]isoxazol.
Etapa 3: Oxidación con 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona ("DDQ"). Se añadió DDQ (1,1 eq.) al producto de la Etapa 2 en tolueno seco. La solución se tuvo a reflujo durante la noche, se apagó con NaHCO_{3} sat. y K_{2}CO_{3}, y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Mg_{2}SO_{4} y se evaporaron bajo vacío para dar un residuo sólido. La purificación con cromatografía de columna rápida produjo el producto 7-metoxi-3-(4-metoxifenil)nafto[1,2-c]isoxazol.
Etapa 4: La desmetilación fue según el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/e 278 (MH^{+}), C_{17}H_{11}NO_{3} = 277 g/mol; pureza por HPLC = 95%.
4.1.2.33 Síntesis de 3-(3-hidroxifenil)-4,5-dihidronafto[1,2-c]isoxazol-7-ol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.29, excepto que se usó como uno de los materiales de partida cloruro de m-anisoilo.
ESMS m/e 280 (MH^{+}), C_{17}H_{13}NO_{3} = 279 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.34 Síntesis de 3-(2-hidroxifenil)-4,5-dihidronafto[1,2-c]isoxazol-7-ol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.29, excepto que se usó como uno de los materiales de partida cloruro de o-anisoilo.
ESMS m/e 280 (MH^{+}), C_{17}H_{13}NO_{3} = 279 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.35 Síntesis de 3-[5-(3-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.8, excepto que se usaron como materiales de partida metoxiacetofenona y cloruro de m-anisoilo.
ESMS m/e 254 (MH^{+}), C_{15}H_{11}NO_{3} = 253 g/mol; pureza por HPLC = 97%.
4.1.2.36 Síntesis de 2-[3-(3-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.8, excepto que se usaron como materiales de partida 3'-metoxiacetofenona y cloruro de o-anisoilo.
ESMS m/e 254 (MH^{+}), C_{15}H_{11}NO_{3} = 253 g/mol; pureza por HPLC = 96%.
4.1.2.37 Síntesis de 2-[5-(2-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.8, excepto que se usaron como materiales de partida 2'-metoxiacetofenona y cloruro de o-anisoilo.
ESMS m/e 254 (MH^{+}), C_{15}H_{11}NO_{3} = 253 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.38 Síntesis de 3-[3-(3-hidroxifenil)-4-metilisoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos para el Esquema 1 y el Esquema 3.
Etapa 1: La formación de la 1,3-dicetona es la misma que la Etapa 1 como se ha descrito en la Sección 4.1.2.7 usando como materiales de partida 3'-metoxiacetofenona y cloruro de m-anisoilo.
Etapa 2: Alquilación. Una solución en THF de la 1,3-dicetona anterior (1,0 eq.) se añadió gota a gota a una suspensión de hidruro sódico (1,1 eq.) en THF a 0ºC. La mezcla se agitó a ta durante 30 min, seguido por adición de yodometano (1,1 eq.). La mezcla de reacción se agitó a ta durante la noche, se vertió en NH_{4}Cl ac. saturado y se extrajo con éter y DCM. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo vacío para dar el producto 1,3-bis(3-metoxifenil)-2-metilpropano-1,3-diona.
Etapa 3: Formación de heterociclo de isoxazol. Igual que la Etapa 4 como se ha descrito en la Sección 4.1.2.7. El producto obtenido en esta etapa es 3-metoxi-1-[5-(3-metoxifenil)-4-metilisoxazol-3-il]benceno.
Etapa 4: La desmetilación se realizó siguiendo el Método 1 de la Etapa C del Esquema 1 para dar el producto deseado.
ESMS m/e 268 (MH^{+}), C_{16}H_{13}NO_{3} = 267 g/mol; pureza por HPLC = 94%.
4.1.2.39 Síntesis de 2-[3-(3-hidroxifenil)-4-metilisoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.38, excepto que se usaron como materiales de partida 3'-metoxiacetofenona y cloruro de o-anisoilo.
ESMS m/e 268 (MH^{+}), C_{16}H_{13}NO_{3} = 267 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
\newpage
4.1.2.40 Síntesis de 2-[3-(2-hidroxifenil)-4-metilisoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.38, excepto que se usaron como materiales de partida 2'-metoxiacetofenona y cloruro de o-anisoilo.
ESMS m/e 268 (MH^{+}), C_{16}H_{13}NO_{3} = 267 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.41 Síntesis de 3-[4-etil-3-(3-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos para el Esquema 1 y el Esquema 3.
La Etapa 1 se realizó como la Etapa correspondiente descrita en la Sección 4.1.2.38.
El procedimiento de alquilación de la Etapa 2 se realizó como la Etapa 2 de la Sección 4.1.2.38, usando como agente de alquilación yodoetano.
Las Etapas 3 y 4 son exactamente las mismas que las Etapas correspondientes descritas en la Sección 4.1.2.38. El producto obtenido fue 3-[4-etil-3-(3-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol.
ESMS m/e 282 (MH^{+}), C_{17}H_{15}NO_{3} = 281 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.42 Síntesis de 2-[4-etil-3-(3-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.41, excepto que se usaron como materiales de partida 3'-metoxiacetofenona y cloruro de o-anisoilo.
ESMS m/e 282 (MH^{+}), C_{17}H_{15}NO_{3} = 281 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.43 Síntesis de 2-[4-etil-3-(2-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.41, excepto que se usaron como materiales de partida 2'-metoxiacetofenona y cloruro de o-anisoilo.
ESMS m/e 282 (MH^{+}), C_{17}H_{15}NO_{3} = 281 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.44 Síntesis de 3-[4-(4-hidroxifenil)-5-(3-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.7, excepto que se usaron como materiales de partida 3'-metoxiacetofenona y cloruro de m-anisoilo.
ESMS m/z 346 (MH^{+}), C_{21}H_{15}NO_{4} = 345 g/mol; pureza por HPLC = 94%.
4.1.2.45 Síntesis de 2-[3-(3-hidroxifenil)-4-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.7, excepto que se usaron como materiales de partida 3'-metoxiacetofenona y cloruro de o-anisoilo.
ESMS m/z 346 (MH^{+}), C_{21}H_{15}NO_{4} = 345 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.46 Síntesis de 2-[4-(4-hidroxifenil)-5-(2-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.2, excepto que se usaron como materiales de partida 2'-metoxiacetofenona y cloruro de o-anisoilo.
ESMS m/z 346 (MH^{+}), C_{21}H_{15}NO_{4} = 345 g/mol; pureza por HPLC = 94%.
4.1.2.47 Síntesis de 3-(2-hidroxifenil)-4,5-dihidronafto[2,1-d]isoxazol-7-ol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.29, excepto que se usaron como materiales de partida 6-metoxi-1-tetralona y cloruro de o-anisoilo. La desmetilación se realizó siguiendo el Método 1 descrito en la Etapa C del Esquema 1 para proporcionar el producto deseado.
ESMS m/e 280 (MH^{+}), C_{17}H_{13}NO_{3} = 279 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.48 Síntesis de 2-(7-metoxi-4,5-dihidronafto[1,2-c]isoxazol-3-il)fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que la descrita en la Sección 4.1.2.47. La desmetilación parcial proporcionó producto mono-metilado 2-(7-metoxi-4,5-dihidronafto[1,2-c]isoxazol-3-il)fenol.
ESMS m/e 294 (MH^{+}), C_{18}H_{15}NO_{3} = 293 g/mol; pureza por HPLC = 95%.
4.1.2.49 Síntesis de 2-[5-(3-hidroxifenil)-4-metilisoxazol-3-il]fenol
Este compuesto es el regioisómero del compuesto descrito en la Sección 4.1.2.39. Ambos regioisómeros se obtuvieron usando los métodos descritos en esa Sección, y los dos regioisómeros se separaron por HPLC usando una columna C_{18} (Reliasil-BDXC18, 10 x 50 mm, Ranin Dynamax), haciendo pasar un primer tampón de H_{2}O/0,1% de TFA y un segundo tampón de HCN/0,1% de TFA a través de un gradiente de 5-95% del segundo tampón durante un período de nueve minutos con un caudal de diez ml/min.
ESMS m/e 268 (MH^{+}), C_{16}H_{13}NO_{3} = 267 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.50 Síntesis de 2-[4-etil-5-(3-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto es el regioisómero del compuesto descrito en la Sección 4.1.2.42. Ambos regioisómeros se obtuvieron usando los métodos descritos en esa Sección, y los dos regioisómeros se separaron por HPLC usando una columna C_{18} (Reliasil-BDXC18, 10 x 50 mm, Ranin Dynamax), haciendo pasar un primer tampón de H_{2}O/0,1% de TFA y un segundo tampón de HCN/0,1% de TFA a través de un gradiente de 5-95% del segundo tampón durante un período de nueve minutos con un caudal de diez ml/min.
ESMS m/e 282 (MH^{+}), C_{17}H_{15}NO_{3} = 281 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.51 Síntesis de 2-[4-(4-hidroxifenil)-5-(3-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto es el regioisómero del compuesto descrito en la Sección 4.1.2.45. Ambos regioisómeros se obtuvieron usando los métodos descritos en esa Sección, y los dos regioisómeros se separaron por HPLC usando una columna C_{18} (Reliasil-BDXC18, 10 x 50 mm, Ranin Dynamax), haciendo pasar un primer tampón de H_{2}O/0,1% de TFA y un segundo tampón de HCN/0,1% de TFA a través de un gradiente de 5-95% del segundo tampón durante un período de nueve minutos con un caudal de diez ml/min.
ESMS m/z 346 (MH+), C_{21}H_{15}NO_{4} = 345 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.52 Síntesis de 3-(5-(3-hidroxifenil)-4-{[4-(2-piperidiletoxi)fenil]metil}isoxazol-3-il)fenol
Este compuesto se sintetiza como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20. Los materiales de partida usados fueron 3'-metoxiacetofenona, cloruro de m-anisoilo y bromuro de 4-aliloxibencilo.
ESMS m/z 471 (MH+), C_{29}H_{30}N_{2}O_{4} = 470 g/mol; pureza por HPLC = 88,3%.
4.1.2.53 Síntesis de 3-(3-hidroxifenil)-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que se usó como uno de los materiales de partida cloruro de m-anisoilo. El producto se obtuvo como sal de ácido clorhídrico en forma de un polvo blanquecino.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 7,84 (d, J = 8,76 Hz, 2H, ArH, regioisómero 1), 7,82 (d, J = 8,76 Hz, 2H, ArH, regioisómero 2), 7,44 (d, J = 8,76 Hz, 2H, ArH, regioisómero 2), 7,36 (d, J = 8,76 Hz, 2H, ArH, regioisómero 1), 7,30-7,09 (m, 2H, ArH), 7,04-7,02 (m, 2H, ArH), 6,94-6,79 (m, 4H, ArH), 4,41 (t ancho, 2H, OCH2), 3,46 (m ancho, 4H, NCH2), 2,79 (m ancho, 2H, NCH2), 1,80-1,32 (m, 6H, CH2); ESMS m/e 485 (MH^{+}), C_{29}H_{28}N_{2}O_{5} = 484 g/mol; pureza por HPLC = 100%.
4.1.2.54 Síntesis de 2-[3-(4-hidroxifenil)-4-fenilisoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.3, excepto que se usó como uno de los materiales de partida cloruro de o-anisoilo.
MS m/z 330 (MH^{+}), C_{21}H_{15}NO_{3} = 329 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.55 Síntesis de 3-[3-(4-hidroxifenil)-4-fenilisoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.54, excepto que se usó como uno de los materiales de partida cloruro de m-anisoilo.
MS m/z 330 (MH+), C_{21}H_{15}NO_{3} = 329 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
\newpage
4.1.2.56 Síntesis de 2-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.54, excepto que se usó como uno de los materiales de partida cloruro de o-anisoilo.
ESMS m/z 282 (MH+), C_{17}H_{15}NO_{3} = 281 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.57 Síntesis de 3-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.54, excepto que se usó como uno de los materiales de partida cloruro de m-anisoilo.
ESMS m/z 282 (MH+), C_{17}H_{15}NO_{3} = 281 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.58 Síntesis de 2-[3-(4-hidroxifenil)-4-metilisoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.13, excepto que se usó como uno de los materiales de partida cloruro de o-anisoilo.
ESMS m/z 268 (MH+), C_{16}H_{13}NO_{3} = 267 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.59 Síntesis de 3-[3-(4-hidroxifenil)-4-metilisoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.13, excepto que se usó como uno de los materiales de partida cloruro de m-anisoilo.
ESMS m/z 268 (MH+), C_{16}H_{13}NO_{3} = 267 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.60 Síntesis de 2-[3-(4-hidroxifenil)-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.8, excepto que se usó como uno de los materiales de partida cloruro de o-anisoilo.
ESMS m/z 254 (MH^{+}), C_{15}H_{11}NO_{3} = 253 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.61 Síntesis de 4-{5-(4-hidroxifenil)-4-{[4-(2-piperidiletoxi)fenil]metil}isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20. Los materiales de partida usados son 4'-metoxiacetofenona, cloruro de p-anisoilo y bromuro de 4-aliloxibencilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO & CDCl_{3}) \delta 1,8-2,05 (2H, m), 2,62-2,75 (4H, m), 2,78-2,85 (2H, m), 3,32-3,38 (2H, m), 3,51 (2H, d, J = 11,9 Hz), 3,88 (2H, s), 4,35 (4H, t, J = 4,5 Hz), 6,71 (2H, d, J = 8,6 Hz), 6,74 (2H, d, J = 8,6 Hz), 6,76 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,96 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,22 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,35 (2H, d, J = 8,8 Hz); ESMS m/z 471 (MH+), C_{29}H_{30}N_{2}O_{4} = 470 g/mol; pureza por HPLC = 85,4%.
4.1.2.62 Síntesis de 2-[5-(4-hidroxifenil)-4-metilisoxazol-3-il]fenol
Este compuesto es el regioisómero del compuesto sintetizado como se ha descrito en la Sección 4.1.2.58. Ambos regioisómeros se obtuvieron usando los métodos descritos en esa Sección, y los dos regioisómeros se separaron por HPLC usando una columna C_{18} (Reliasil-BDXC18, 10 x 50 mm, Ranin Dynamax), haciendo pasar un primer tampón de H_{2}O/0,1% de TFA y un segundo tampón de HCN/0,1% de TFA a través de un gradiente de 5-95% del segundo tampón durante un período de nueve minutos con un caudal de diez ml/min.
ESMS m/z 268 (MH+), C_{16}H_{13}NO_{3} = 267 g/mol; pureza por HPLC = 99%.
4.1.2.63 Síntesis de 1-(4-hidroxifenil)-4,5-dihidronafto[1,2-d]isoxazol-8-ol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos en el Esquema 1 usando como materiales de partida 7-metoxi-2-tetralona y 4'-alquiloxibenzoato de fenilo. La desmetilación se realizó siguiendo el Método 1 de la Etapa C.
ESMS m/e 280 (MH^{+}), C_{17}H_{13}NO_{3} = 279 g/mol; pureza por HPLC = 92%.
4.1.2.64 Síntesis de 3-(4-hidroxifenil)-4,5-dihidronafto[1,2-c]isoxazol-8-ol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.29, excepto que se usaron como materiales de partida 7-metoxi-1-tetralona y cloruro de p-anisoilo.
ESMS m/e 280 (MH^{+}), C_{17}H_{13}NO_{3} = 279 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.65 Síntesis de 3-(4-hidroxifenil)-4,5-dihidronafto[1,2-c]isoxazol-6-ol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.29, excepto que se usaron como materiales de partida 5-metoxi-1-tetralona y cloruro de p-anisoilo.
ESMS m/e 280 (MH^{+}), C_{17}H_{13}NO_{3} = 279 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.66 Síntesis de 4-[5-(4-hidroxifenil)-4-yodoisoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo el Esquema 4.
Las Etapas 1-3 se realizaron como se ha descrito para las etapas correspondientes descritas en la Sección 4.1.2.20 para proporcionar 1-[4-bromo-5-(4-metoxifenil)isoxazol-3-il]-4-metoxibenceno.
Etapa 4: Se añadieron gota a gota 1,1 eq. de solución de n-BuLi (1,6 M en hexano) al 4-bromoisoxazol anterior en THF a -78ºC. Se mantuvo la reacción a -78ºC durante 1 h seguido por adición de 1,1 eq. de I_{2} en solución de THF. Se calentó la reacción a ta y se agitó durante la noche, se vertió en NH_{4}Cl ac. saturado y se extrajo con DCM. Los extractos orgánicos se lavaron con Na_{2}SO4 ac. y salmuera, se secaron con MgSO_{4} y se concentraron bajo vacío para dar 1-[4-yodo-5-(3-metoxifenil)isoxazol-3-il]-3-metoxibenceno.
Etapa 5: La desmetilación fue según el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR [(CD_{3})_{2}CO]: \delta 7,08 (m, 4H), 7,72 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,01 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 8,86 (s, 1H), 9,10 (s, 1H); ESMS m/z 380 (MH+), C_{15}H_{10}INO_{3} = 379 g/mol; pureza por HPLC = 85,8%.
4.1.2.67 Síntesis de 4-[4-cloro-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.66, excepto que, en la Etapa 4, se usó N-clorosuccinimida (NCS) como electrófilo para capturar el anión de isoxazol.
^{1}H NMR [(CD_{3})_{2}CO]: \delta 7,09 (m, 4H), 7,82 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,98 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 9,70 (s ancho, 1H); ESMS m/z 288 (MH+), C_{15}H_{10}ClNO_{3} = 287 g/mol; pureza por HPLC = 96,0%.
4.1.2.68 Síntesis de 3-(4-hidroxifenil)nafto[1,2-c]isoxazol-8-ol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.32, excepto que se usaron como materiales de partida 7-metoxi-1-tetralona y cloruro de p-anisoilo.
ESMS m/e 278 (MH^{+}), C_{17}H_{11}NO_{3} = 277 g/mol; pureza por HPLC = 80%.
4.1.2.69 Síntesis de [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-bencilcarboxamida
Este compuesto se sintetizó siguiendo el procedimiento descrito en el Esquema 4.
Las Etapas 1-3 se realizaron como las correspondientes Etapas de la Sección 4.1.2.20 para proporcionar 1-[4-bromo-5-(4-metoxifenil)isoxazol-3-il]-4-metoxibenceno.
Etapa 4: Se añadieron gota a gota 1,1 eq. de solución de n-BuLi (1,6 M en hexano) al 4-bromoisoxazol anterior en THF a -78ºC. Se mantuvo la reacción a -78ºC durante 1 h seguido por burbujeo de dióxido de carbono gaseoso desde un cilindro controlado por manómetro durante aprox. 20 min. La reacción se calentó a ta cuidadosamente, se vertió en NH_{4}Cl ac. saturado y se extrajo con DCM. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO_{4} y se concentraron bajo vacío para dar ácido 3,5-bis(3-metoxifenil)isoxazol-4-carboxílico.
Etapa 5: Formación de enlace amida. Se disolvió 4-carboxiisoxazol (obtenido en la Etapa 4) en THF y se activo con sal de HCl de EDC/HOBt/DIEA (1,5:1,5:1,5) y se dejó permanecer a ta durante 5 min. Se añadió después bencilamina (1,5 equiv.). Se dejó permanecer la reacción a ta durante la noche, tras lo que se diluyó con EtOAc y se lavó con ácido cítrico del 10%, NaHCO_{3} del 10% y salmuera, y se separó el disolvente. El residuo se liofilizó en MeCN del 90%/H_{2}O y se muestreó. Los productos se purificaron por cromatografía rápida (EtOAc/éter de petróleo) para dar [3,5-bis(4-metoxifenil)isoxazol-4-il]-N-benzamida pura.
Etapa 6: El procedimiento de desmetilación se ha descrito en el Método 3 para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 4,39 (2H, d, J = 5,86 Hz), 6,79 (2H, d, J = 8,79 Hz), 6,83 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,22-7,24 (1H, m), 7,26-7,32 (2H, m), 7,50 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,56 (2H, d, J = 8,79 Hz), 9,20 (1H, t, J = 5,95 Hz), 9,87 (1H, s), 10,10 (1H, s); ESMS m/z 387 (MH+), C_{23}H_{18}N_{2}O_{4} = 386 g/mol; pureza por HPLC = 96,4%.
4.1.2.70 Síntesis de [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N,N-dibutilcarboxamida
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.69, excepto que, en la Etapa 5, se usó para formación de enlace amida N,N-di-n-butil amina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 0,48 (3H, t, J = 7,33 Hz), 0,85 (2H, q, J = 7,33 Hz), 0,90 (3H, t, J = 7,33 Hz), 1,00 (2H, t, J = 7,42 Hz), 1,23-1,31 (3H, m), 1,51 (2H, t, J = 7,24 Hz), 3,43-3,50 (1H, m), 6,86 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,96 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,22 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,35 (2H, d, J = 8,61 Hz), 6,90 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,51 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,58 (2H, d, J = 8,61 Hz), 9,93 (1H, s), 10,13 (1H, s); ESMS m/z 409 (M+H), C_{24}H_{28}N_{2}O_{4} = 408 g/mol; pureza por HPLC = 96,7%.
4.1.2.71 Síntesis de [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-[3-(2-oxopirrolidinil)propil]carboxamida
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.69, excepto que, en la Etapa 5, se usó para formación de enlace amida 1-(3-aminopropil)pirrolidin-2-ona.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 1,60 (2H, t, J = 7,05 Hz), 1,90 (2H, d, J = 7,60 Hz), 2,19 (2H, d, J = 8,06 Hz), 3,10 (2H, t, J = 7,14 Hz), 3,16 (2H, q, J = 6,59 Hz), 3,25 (2H, t, J = 6,96 Hz), 3,87 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,62 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,79 Hz), 8,64 (1H, t, J = 5,58 Hz), 9,88 (1H, s), 10,11 (1H, s); ESMS m/z 422 (M+H), C_{23}H_{23}N_{3}O_{5} = 421 g/mol; pureza por HPLC = 92,8%.
4.1.2.72 Síntesis de [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-(2-feniletil]carboxamida
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.69, excepto que, en la Etapa 5, se usó para formación de enlace amida bencetil amina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 2,75 (2H, d, J = 7,23 Hz), 7,46 (2H, d, J = 6,72 Hz), 6,84 (2H, d, J = 8,61 Hz), 6,88 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,12-7,20 (3H, m), 7,23-7,26 (2H, m), 7,49 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,56 (2H, d, J = 8,79 Hz), 8,76 (1H, t, J = 5,49 Hz), 9,86 (1H, s), 10,10 (1H, s); ESMS m/z 401 (M+H), C_{24}H_{20}N_{2}O_{4} = 400 g/mol; pureza por HPLC = 82,0%.
4.1.2.73 Síntesis de [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-[(4-hidroxifenil)metil]carboxamida
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.69, excepto que, en la Etapa 5, se usó para formación de enlace amida p-metoxibencil amina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 4,28 (2H, d, J = 5,86 Hz), 6,68 (2H, d, J = 8,43 Hz), 6,79 (2H, d, J = 8,79 Hz), 6,82 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,03 (2H, d, J = 8,24 Hz), 7,49 (2H, d, J = 8,97 Hz), 7,55 (2H, d, J = 8,79 Hz), 9,08 (1H, t, J = 5,86 Hz), 9,87 (1H, s), 10,10 (1H, s); ESMS m/z 403 (M+H), C_{23}H_{18}N_{2}O_{5} = 402 g/mol; pureza por HPLC = 93,0%.
4.1.2.74 Síntesis de [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-(3-piridilmetil)carboxamida
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.69, excepto que, en la Etapa 5, se usó para formación de enlace amida 3-piridilmetilamina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 4,42 (2H, d, J = 5,86 Hz), 6,79 (2H, d, J = 8,79 Hz), 6,84 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,34 (2H, dd, J = 7,69 Hz, 4,76 Hz), 7,46 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,53 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,62 (2H, d, J = 7,69 Hz), 9,28 (1H, t, J = 5,86 Hz), 9,95 (1H, s), 10,20 (1H, s); ESMS m/z 388 (M+H), C_{23}H_{17}N_{3}O_{4} = 387 g/mol; pureza por HPLC = 92,7%.
4.1.2.75 Síntesis de [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-(2-piridilmetil)carboxamida
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.69, excepto que, en la Etapa 5, se usó para formación de enlace amida 2-piridilmetilamina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 4,49 (2H, d, J = 6,04 Hz), 6,82 (2H, d, J = 8,61 Hz), 6,86 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,21 (1H, d, J = 7,88 Hz), 7,29 (1H, dd, J = 6,8 Hz, 5,0 Hz), 7,55 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,63 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,71 (1H, td, J = 7,5 Hz, 1,65 Hz), 8,51 (1H, d, J = 4,03 Hz), 9,29 (1H, t, J = 5,86 Hz), 9,86 (1H, s), 10,10 (1H, s); ESMS m/z 388 (M+H), C_{22}H_{17}N_{3}O_{4} = 387 g/mol; pureza por HPLC = 91,9%.
4.1.2.76 Síntesis de [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N,N-dimetilcarboxamida Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.69, excepto que, en la Etapa 5, se usó para formación de enlace amida N,N-dilmetilamina
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 2,72 (3H, s), 6,90 (2H, d, J = 8,79 Hz), 6,94 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,46 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,79 Hz), 10,04 (1H, s), 10,28 (1H, s); ESMS m/z 325 (M+H), C_{18}H_{16}N_{2}O_{4} = 324 g/mol; pureza por HPLC = 95,6%.
4.1.2.77 Síntesis de [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-etilcarboxamida
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.69, excepto que, en la Etapa 5, se usó para formación de enlace amida etilamina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 2,49 (3H, t, J = 1,83 Hz), 3,18-3,25 (2H, m), 6,86 (2H, d, J = 8,61 Hz), 6,91 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,55 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,62 (2H, d, J = 8,79 Hz), 8,64 (1H, t, J = 5,49 Hz), 9,87 (1H, s), 10,10 (1H, s); ESMS m/z 325 (M+H), C_{18}H_{16}N_{2}O_{4} = 324 g/mol; pureza por HPLC = 95,1%.
4.1.2.78 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-pirrolidiniletoxi)fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 6, se usó para alquilación (2-cloroetil)pirrolidina.
LCMS m/z 471 (MH^{+}), C_{28}H_{26}N_{2}O_{5} = 470 g/mol; pureza = 90%.
4.1.2.79 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-morfolin-4-iletoxi)fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 6, se usó para alquilación 4-(2-cloroetil)morfolina.
LCMS m/z 487 (MH^{+}), C_{28}H_{26}N_{2}O_{6} = 486 g/mol; pureza = 90%.
4.1.2.80 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(3-dimetilamino)propil]fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 6, se usó para alquilación (3-cloropropil)dimetilamina.
LCMS m/z 459 (MH+), C_{27}H_{26}N_{2}O_{5} = 458 g/mol; pureza = 90%.
4.1.2.81 Síntesis de 4-[3-(dietilamino)propoxi]fenil 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 6, se usó para alquilación (3-cloropropil)dietilamina.
LCMS m/z 487 (MH+), C_{29}H_{30}N_{2}O_{5} = 486 g/mol; pureza = 90%.
4.1.2.82 Síntesis de [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-ciclopropilcarboxamida
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.69, excepto que, en la Etapa 5, se usó para formación de enlace amida ciclopropilamina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 0,04-0,08 (2H, m), 0,34-0,37 (2H, m), 2,48-2,51 (1H, m), 6,57 (2H, d, J = 8,6 Hz), 6,62 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,23 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,30 (2H, d, J = 8,79 Hz), 8,40-8,41 (1H, m), 9,64 (1H, s), 9,87 (1H, s); ESMS m/z 337 (M+H), C_{19}H_{16}N_{2}O_{4} = 336 g/mol; pureza por HPLC = 81,1%.
4.1.2.83 Síntesis de [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-ciclobutilcarboxamida
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.69, excepto que, en la Etapa 5, se usó para formación de enlace amida ciclobutilamina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 1,59-1,67 (2H, m), 1,78-1,88 (2H, m), 2,15-2,22 (2H, m), 4,31-4,37 (1H, m), 6,85 (2H, d, J = 8,59 Hz), 6,90 (2H, d, J = 8,77 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,59 Hz), 7,60 (2H, d, J = 8,77 Hz), 8,88 (1H, d, J = 7,59 Hz), 9,87 (1H, s), 10,11 (1H, s); ESMS m/z 351 (M+H), C_{20}H_{18}N_{2}O_{4} = 350 g/mol; pureza por HPLC = 98,0%.
4.1.2.84 Síntesis de 4-[2-(dietilamino)etoxi]fenil 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 6, se usó para alquilación (2-cloroetil)dietilamina.
LCMS m/z 473 (MH+), C_{28}H_{28}N_{2}O_{5} = 472 g/mol; pureza = 90%.
4.1.2.85 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-[2-(dimetilamino)etoxi]fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 6, se usó para alquilación (2-cloroetil)dimetilamina.
LCMS m/z 445 (MH+), C_{26}H_{24}N_{2}O_{5} = 444 g/mol; pureza = 90%.
4.1.2.86 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-{2-(metilbencilamino)etoxi}fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 6, se usó para alquilación (2-cloroetil)metilbencilamina.
LCMS m/z 521 (MH+), C_{32}H_{28}N_{2}O_{5} = 520 g/mol; pureza = 90%.
4.1.2.87 Síntesis de 2-(4-{[3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]carbonil}fenoxi)-N,N-dimetilacetamida
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 6, se usó para alquilación 2-cloro-N,N-dimetilacetamida.
LCMS m/z 459 (MH+), C_{26}H_{22}N_{2}O_{6} = 458 g/mol; pureza = 90%.
4.1.2.88 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-[2-(1-metilpirrolidin-2-il)etoxi]fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 6, se usó para alquilación 2-(2-cloroetil)-1-metilpirrolidina.
LCMS m/z 485 (MH+), C_{29}H_{28}N_{2}O_{5} = 484 g/mol; pureza = 90%.
4.1.2.89 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-[(1-metil(3-piperidil)metoxi]fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 6, se usó para alquilación 2-(clorometil)-1-metilpiperidina.
LCMS m/z 485 (MH+), C_{29}H_{28}N_{2}O_{5} = 484 g/mol; pureza = 90%.
4.1.2.90 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-[3-(4-metilpiperazinil)propoxi]fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 6, se usó para alquilación 1-(2-cloroetil)-4-metilpiperazina.
LCMS m/z 514 (MH+), C_{30}H_{31}N_{3}O_{5} = 513 g/mol; pureza = 90%.
4.1.2.91 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(1-metil(4-piperidiloxi))fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 6, se usó para alquilación 4-cloro-1-metilpiperidina.
LCMS m/z 471 (MH+), C_{28}H_{26}N_{2}O_{5} = 470 g/mol; pureza = 90%.
4.1.2.92 Sintesis de 3-etil-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
La síntesis de este compuesto se realizó usando los métodos descritos en el Esquema 7.
Etapa 1: La síntesis de la 1,3-dicetona fue siguiendo el mismo procedimiento de la Etapa 1 de la Sección 4.1.2.7, usando como materiales de partida cloruro de p-anisoilo y 1-(2-bromo-4-metoxifenil)butan-1-ona.
Etapa: La formación de isoxazol fue siguiendo el mismo procedimiento de la Etapa 4 de la Sección 4.1.2.7 para proporcionar 1-[5-(2-bromo-4-metoxifenil)-4-etilisoxazol-3-il]-4-metoxibenceno.
Etapa 3: Se añadió n-BuLi (1,1 eq., 1,6 M en hexano) a una solución de fenilbromoisoxazol (1 eq., obtenido en la etapa anterior) en THF a -78ºC. Se agitó después la solución a -78ºC durante 1,5 h, y se añadió gota a gota a una solución del bromoetano (1,2 eq.) en THF a -78ºC. Después de 15 min, se permitió calentarse la solución a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Después de apagar la reacción con HCl 1 M, se separaron las capas y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO_{3} saturado (x 1) y salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, filtraron y concentraron para proporcionar una mezcla de producto crudo. La cromatografía rápida produjo el producto alquilado.
Etapa 4: La desmetilación fue usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,61 (dd, J = 1,8, 8,8 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 1,8 8,8 Hz, 2H), 6,90 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,83 (dd, J = 2,3, 8,3 Hz, 1H), 2,55 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,54 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,13 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 310 (MH+), C_{19}H_{19}NO_{3} = 309 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.93 Síntesis de 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-3-metilfenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92. En la Etapa 3, se usó como electrófilo yodometano.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,22 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 8,8 Hz, 2H), 6,87 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,82 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 2,55 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,22 (s, 3H), 0,95 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 296 (MH+), C_{18}H_{17}NO_{3} = 295 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.94 Síntesis de 3-bromo-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos para el Esquema 1 usando como materiales de partida cloruro de p-anisoilo y 1-(2-bromo-4-metoxifenil)butan-1-ona. La desmetilación fue usando el Método 1 descrito para la Etapa C en el Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,37 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 2,3 Hz), 7,02-6,99 (m, 3H), 2,56 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 360 (MH+), C_{17}H_{14}BrNO_{3} = 359 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.95 Síntesis de 3-butil-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92. En la etapa 3, se usó como electrófilo 1-bromobutano.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 8,8 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,83 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 2,56 (2q, J = 7,4 Hz, 4H), 1,53-1,45 (m, 2H), 1,30-1,22 (m, 2H), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,84 (t, J = 7,4 Hz, 3H), LC/MS m/z 338 (MH+), C_{21}H_{23}NO_{3} = 337 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.96 Síntesis de 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-3-hexilfenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92. En la etapa 3, se usó como electrófilo 1-bromohexano.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,90 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,82 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 2,56 (2q, J = 7,4 Hz, 4H), 1,52-1,46 (m, 2H), 1,29-1,22 (m, 6H), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,83 (t, J = 6,4 Hz, 3H), LC/MS m/z 366 (MH+), C_{23}H_{27}NO_{3} = 365 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.97 Síntesis de 3-(2-bromopropil)-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92. En la etapa 3, se usó como electrófilo 3-bromo-1-propeno.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,61 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,02-6,99 (m, 3H), 6,92 (dd, J = 8,3, 2,7 Hz, 1H), 4,31-4,27 (m, 1H), 3,14 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 2,58 (q, J = 7,8 Hz, 2H), 1,62 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,98 (t, J = 7,8 Hz, 3H); LC/MS m/z 402 (MH+), C_{20}H_{20}BrNO_{3} = 401 g/mol; pureza = 96%.
4.1.2.98 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-carbaldehído
Este compuesto se sintetizó en base al Esquema 7.
Etapas 1-4: Igual que las etapas correspondientes de la Sección 4.1.2.20.
Etapa 5: Formación de amida de Weinreb. Se disolvió 4-carboxi isoxazol (obtenido en las Etapas 1-4 anteriores) en THF y se activó con EDC:HOBt:DIEA (1,5:1,5:1,5) y dejó permanecer a ta durante 5 min. Se añadió después N-metoximetilamina (1,5 equiv.). La mezcla de reacción se dejó permanecer a ta durante la noche, tras lo que se diluyó con EtOAc y se lavó con ácido cítrico del 10%, NaHCO_{3} del 10% y salmuera. Se separó el disolvente y el residuo se purificó por cromatografía rápida (EtOAc/petróleo) y se liofilizó en MeCN al 90%/H_{2}O para dar el producto deseado como un polvo blanco.
Etapa 6: Reducción de la amida a aldehído. La amida de Weinreb (obtenida en la etapa 5) se disolvió en THF y se añadió a una suspensión de LiAlH_{4} (4 equiv.) en THF a
-78ºC. Se dejó agitar la reacción a -78ºC durante 2,5 h y se apagó después por adición gota a gota de HCl 1 M. La mezcla de reacción se diluyó después con EtOAc y se lavó con NaHCO_{3} del 10% y salmuera. Después de secar sobre Na_{2}SO_{4}, se separó el disolvente y se liofilizó el residuo en MeCN al 90%/H_{2}O.
Etapa 7: La desmetilación se realizó en base al Método 3 descrito para la Etapa C en el Esquema 1. El aldehído anterior se disolvió en DCM y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió BBr_{3} (10 equiv.) y se dejó agitar la reacción a ta durante 5 h. Se enfrió después la reacción en un baño de hielo y se apagó con agua. Se añadió EtOAc y se lavó la reacción con agua y salmuera. Después de secar sobre Na_{2}SO_{4}, se separó el disolvente y se purificó el residuo por cromatografía rápida (EtOAc/petróleo) para producir producto puro.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 6,85 (2H, d, J = 8,42 Hz), 6,93 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,42 Hz), 7,88 (2H, d, J = 8,61 Hz), 9,81 (1H, s); ESMS m/z 282 (M+H), C_{16}H_{11}NO_{4} = 281 g/mol; pureza por HPLC = 97,1%.
4.1.2.99 Síntesis de 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-3-yodofenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92. En la etapa 3, se usó como electrófilo yodo.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,61 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,54 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,05 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,54 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 0,98 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 408 (MH+), C_{17}H_{14}INO_{3} = 407 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.100 Síntesis de 3-cloro-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92. En la etapa 3, se usó como electrófilo NCS.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,05-6,98 (m, 3H), 2,57 (q, J = 7,8 Hz, 2H), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 316 (MH+), C_{17}H_{14}ClNO_{3} = 315 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.101 Síntesis de 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-fluorofenol
El compuesto se sintetizó según el Esquema 1 usando como materiales de partida cloruro de p-anisoilo y 1-(3-fluoro-4-metoxifenil)butan-1-ona. La desmetilación fue usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta; LC/MS m/z 300 (MH+), C_{17}H_{14}FNO_{3} = 299 g/mol; pureza = 95%.
4.1.2.102 Síntesis de ácido 2-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-5-hidroxibenzoico
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92. En la Etapa 3, se usó como electrófilo cloroformiato de etilo.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,60-7,54 (m, 3H), 7,38 (s, 1H), 7,20 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,56 (q, J = 7,8 Hz, 2H), 0,97 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 326 (MH+), C_{18}H_{15}NO_{5} = 325 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.103 Síntesis de 2-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-5-hidroxibenzoato de etilo
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92. En la Etapa 3, se usó como electrófilo cloroformiato de etilo. La desmetilación fue siguiendo el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,64 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,49 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,12 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,54 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,08 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,98 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 354 (MH+), C_{20}H_{19}NO_{5} = 353 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.104 Síntesis de 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-3-(metilsulfinil)fenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92. En la Etapa 3, se usó como electrófilo disulfuro de metilo.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,66 (d,J = 2,3 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,50 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,15 (dd, J = 8,3 2,3 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,83 (s, 3H), 2,64 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,00 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 344 (MH+), C_{18}H_{17}NO_{4}S = 343 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.105 Síntesis de 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-3-sulfanilfenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92. En la Etapa 3, se usó como electrófilo disulfuro de metilo. La desmetilación fue siguiendo el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,68 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,50 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,15 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,65 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,00 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 314 (MH+), C_{17}H_{15}NO_{3}S = 313 g/mol; pureza = 87%.
\newpage
4.1.2.106 Síntesis de 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-metilfenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92. En la Etapa 1, se usaron como materiales de partida cloruro de p-anisoilo y 1-(3-bromo-4-metoxifenil)butan-1-ona. En la Etapa 3, se usó como electrófilo yodometano.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,63 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,54 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,04-6,96 (m, 3H), 2,74 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,29-2,28 (2s, 3H), 1,11 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 296 (MH+), C_{18}H_{17}NO_{3} = 295 g/mol; pureza = 98%.
4.1.2.107 Síntesis de 2-butil-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.106. En la Etapa 3, se usó como electrófilo 1-bromobutano.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,64 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,43 (s, 1H), 7,04-6,98 (m, 3H), 2,74 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,72 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,69-1,61 (m, 2H), 1,45-1,38 (m, 2H), 1,12 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,95 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 338 (MH+), C_{21}H_{23}NO_{3} = 337 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.108 Síntesis de 2-etil-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.106. En la Etapa 3, se usó como electrófilo bromoetano.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,64 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,01-6,97 (m, 3H), 2,75 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,73 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,24 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 1,13 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 310 (MH+), C_{19}H_{19}NO_{3} = 309 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.109 Síntesis de 2-bromo-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó según el Esquema 1 usando como materiales de partida cloruro de p-anisoilo y 1-(3-bromo-4-metoxifenil)butan-1-ona. La desmetilación se realizó usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,89 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,20 (dd, J = 1,4 8,3 Hz, 1H), 7,02 (dd, J = 0,9 8,8 Hz, 2H), 2,75 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,12 (t, J = 7,9 Hz, 3H); LC/MS m/z 360 (MH+), C_{17}H_{14}BrNO_{3} = 359 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.110 Síntesis de butanoato de 4-[3-(4-butanoiloxifenil)-4-etilisoxazol-5-il]fenilo
Este compuesto se fabricó como derivado del compuesto preparado según la Sección 4.1.2.4. Se añadieron cloruro de butirilo (3,0 eq.) y piridina (3,0 eq.) a una solución en THF de 4-[4-etil-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol. La mezcla se agitó a ta durante 24 h, se vertió en NaHCO_{3} frío y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron con Na_{2}SO_{4} y se concentraron bajo vacío para dar el producto como un polvo blanco.
LC/MS m/z 422 (MH+), C_{25}H_{27}NO_{5} = 421 g/mol; pureza = 98%.
4.1.2.111 Síntesis de acetato de 4-[3-(4-acetiloxifenil)-4-etilisoxazol-5-il]fenilo
Este compuesto se fabricó como derivado del compuesto preparado según la Sección 4.1.2.4. Se añadieron cloruro de acetilo (3,0 eq.) y piridina (3,0 eq.) a una solución en THF de 4-[4-etil-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol. La mezcla se agitó a ta durante 24 h, se vertió en NaHCO_{3} frío y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron con Na_{2}SO_{4} y se concentraron bajo vacío para dar el producto como un polvo blanco.
LC/MS m/z 366 (MH+), C_{21}H_{19}NO_{5} = 365 g/mol; pureza = 98%.
4.1.2.112 Síntesis de butanoato de 3-(4-butanoiloxifenil)nafto[1,2-c]isoxazol-7-ilo
Este compuesto se fabricó como derivado del compuesto preparado como se ha descrito en la Sección 4.1.2.32. Se añadieron cloruro de butirilo (3,0 eq.) y piridina (3,0 eq.) a una solución en THF de 3-(4-hidroxifenil)nafto[1,2-c]isoxazol-7-ol. La mezcla se agitó a ta durante 24 h, se vertió en NaHCO_{3} frío y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron con Na_{2}SO_{4} y se concentraron bajo vacío para dar el producto como un polvo blanco.
LC/MS m/z 418 (MH+), C_{25}H_{23}NO_{5} = 417 g/mol; pureza = 98%.
4.1.2.113 Síntesis de acetato de 3-(4-acetiloxifenil)nafto[1,2-c]isoxazol-7-ilo
Este compuesto se fabricó como derivado del compuesto preparado como se ha descrito en la Sección 4.1.2.32. Se añadieron cloruro de acetilo (3,0 eq.) y piridina (3,0 eq.) a una solución en THF de 3-(4-hidroxifenil)nafto[1,2-c]isoxazol-7-ol. La mezcla se agitó a ta durante 24 h, se vertió en NaHCO_{3} frío y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron con Na_{2}SO_{4} y se concentraron bajo vacío para dar el producto como un polvo blanco.
LC/MS m/z 362 (MH+), C_{21}H_{15}NO_{3} = 361 g/mol; pureza = 98%.
4.1.2.114 Síntesis de cloruro de 3,5-bis(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona
Este compuesto se sintetizó siguiendo los métodos indicados en el Esquema 5.
Las etapas 1-6 se realizaron como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20.
Etapa 7: Formación de sal de HCl. El producto puro obtenido en la Etapa 6 se disolvió en acetona. Se añadieron a esta solución al menos 5 eq. de HCl ac. conc. y una solución de acetonitrilo/H_{2}O (1:1). Se liofilizó después la mezcla durante la noche para dar el producto como un polvo blanquecino.
LC/MS m/z 360 (MH+), C_{17}H_{14}BrNO_{3} = 359 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.115 Síntesis de 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-hexilfenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.106. En la Etapa 3, se usó como electrófilo 1-bromohexano.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,63 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,53 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,04-7,97 (m, 3H), 2,76-2,68 (m, 4H), 1,74-1,62 (m, 2H), 1,36-1,33 (m, 6H), 1,12 (t, J = 7,8 Hz, 3H), 0,91 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 366 (MH+), C_{23}H_{27}NO_{3} = 365 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.116 Síntesis de 2-cloro-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.106. En la Etapa 3, se usó como electrófilo NCS.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,67-7,50 (m, 4H), 7,20 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,76 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,13 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 315 (MH+), C_{17}H_{14}ClNO_{3} = 314 g/mol; pureza = 95%.
4.1.2.117 Síntesis de 5-[4-etil-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]piridin-2-ol
Este compuesto se sintetizó según el Esquema 1 usando como materiales de partida cloruro de p-anisoilo y 6-metoxipiridina-3-carboxilato de metilo. La desmetilación fue usando el Método 1 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 10,04 (un isómero: s, 1H), 9,87 (otro isómero: s, 1H), 7,78-6,47 (m, 7H), 2,64 (q, J = 7,50 Hz, 2H), 1,08 (un isómero: t, J = 7,50 Hz, 3H), 1,02 (otro isómero: t, J = 7,50 Hz, 3H); LC/MS m/z 283 (MH+), C_{16}H_{14}N_{2}O_{3} = 282 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.118 Síntesis de 5-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-hidroxibenzoato de etilo
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.106. En la Etapa 3, se usó como electrófilo cloroformiato de etilo. La desmetilación fue siguiendo el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,89 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,55 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,48 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 2,76 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,44 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 1,16 (t, J = 7,6 Hz, 3H); LC/MS m/z 354 (MH+), C_{20}H_{18}NO_{5} = 353 g/mol; pureza = 91%.
4.1.2.119 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-metilfenil cetona
Este compuesto se sintetizó siguiendo el procedimiento descrito en el Esquema 7.
Las Etapas 1-3 se realizaron como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20.
Etapa 4: Nuevamente, esta etapa se realizó como se ha descrito en la Etapa 4 de la Sección 4.1.2.20, excepto que se usó para acilación cloruro de p-toluoilo.
Etapa 5: La desmetilación fue siguiendo el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 2,26 (3H, s), 6,70 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,76 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,19 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,26 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,39 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,63 (2H, d, J = 8,2 Hz), 9,92 (1H, s, ancho); ESMS m/z 372 (M+H), C_{23}H_{17}NO_{4} = 371 g/mol; pureza por HPLC = 98%.
4.1.2.120 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 2-clorofenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.119. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de o-clorobenzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 6,67 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,75 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,18 (1H, ddd, J = 7,8, 7,2, 1,3 Hz), 7,24-7,27 (1H, m), 7,24 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,31 (1H, ddd, J = 7,8, 7,2, 1,8 Hz), 7,46 (1H, dd, J = 7,8, 1,3 Hz), 7,51 (2H, d, J = 9,0 Hz) 9,77 (1H, s, ancho); ESMS m/z 392 (M+H), C_{22}H_{14}ClNO_{4} = 391 g/mol; pureza por HPLC = 97%.
4.1.2.121 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 3-clorofenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.119. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de m-clorobenzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 6,71 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,77 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,25 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,35 (1H, t, J = 7,8 Hz), 7,43 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,57 (1H, ddd, J = 8,0, 2,2, 1,0 Hz), 7,61 (1H, dt, J = 7,8, 1,2 Hz), 7,70 (1H, t, J = 1,8 Hz), 9,81 (1H, s), 10,14 (1H, s); ESMS m/z 392 (M+H), C_{22}H_{14}ClNO_{4} = 391 g/mol; pureza por HPLC = 86%.
4.1.2.122 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-clorofenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.119. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de p-clorobenzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 6,71 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,77 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,25 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,41 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,42 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,72 (2H, d, J = 8,8 Hz), 9,82 (1H, s), 10,14 (1H, s); ESMS m/z 392 (M+H), C_{22}H_{14}ClNO_{4} = 391 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.123 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 2-fluorofenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.119. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de o-fluorobenzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 6,68 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,77 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,01 (1H, dd, J = 11,1, 8,2 Hz), 7,13 (1H, td, J = 7,8, 1,0 Hz), 7,25 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,42-7,48 (1H, m), 7,51 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,59 (1H, td, J = 6,8, 1,8 Hz), 9,89 (1H, s, ancho); ESMS m/z 376 (M+H), C_{22}H_{14}FNO_{4} = 375 g/mol; pureza por HPLC = 98%.
4.1.2.124 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 3-nitrofenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.119. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de m-nitrobenzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 6,68 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,75 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,26 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,47 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,59 (1H, t, J = 8,0 Hz), 8,06 (1H, dd, J = 7,8, 1,2 Hz), 8,29 (1H, dd, J = 8,2, 2,3 Hz), 8,36 (1H, t, J = 2,0 Hz), 9,89 (1H, s, ancho); ESMS m/z 403 (M+H), C_{22}H_{14}N_{2}O_{6} = 402 g/mol; pureza por HPLC = 95%.
4.1.2.125 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-nitrofenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.119. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de p-nitrobenzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 6,70 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,76 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,25 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,44 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,93 (2H, d, J = 9,0 Hz), 8,11 (2H, d, J = 8,8), 9,90 (1H, s, ancho); ESMS m/z 403 (M+H), C_{22}H_{14}N_{2}O_{6} = 402 g/mol; pureza por HPLC = 93%.
4.1.2.126 Síntesis de 3,4-diclorofenil 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.119. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de 3,4-diclorobenzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 6,71 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,78 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,25 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,44 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,58 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,62 (1H, dd, J = 8,4, 2,0 Hz), 7,88 (1H, dd, J = 2,0 Hz), 9,82 (1H, s), 10,16 (1H, s); ESMS m/z 426 (M+H), C_{22}H_{13}Cl_{2}NO_{4} = 425 g/mol; pureza por HPLC = 96%.
4.1.2.127 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-butilfenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.119. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de p-n-butilbenzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 0,80 (3H, t, J = 7,4 Hz), 1,16-1,24 (2H, m), 1,40-1,50 (2H, m), 2,53 (2H, t, J = 7,6 Hz), 6,70 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,75 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,19 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,26 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,39 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,63 (2H, d, J = 8,4 Hz); ESMS m/z 414 (M+H), C_{26}H_{23}NO_{4} = 413 g/mol; pureza por HPLC = 92%.
4.1.2.128 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(ter-butil)fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.119. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de p-t-butilbenzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 1,18 (9H, s), 6,71 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,76 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,28 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,39 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,40 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,66 (2H, d, J = 8,6 Hz), 9,81 (1H, s), 10,10 (1H, s); ESMS m/z 414 (M+H), C_{26}H_{23}NO_{4} = 413 g/mol; pureza por HPLC = 98%.
4.1.2.129 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 3-hidroxifenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.119. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de m-anisoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 6,68-6,72 (1H, m), 6,71 (1H, d, J = 8,8 Hz), 6,77 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,83 (1H, dd, J = 8,2, 0,6 Hz), 7,27 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,34-7,40 (2H, m), 7,43 (2H, d, J = 8,8 Hz), 9,80 (1H, s), 10,11 (1H, s), 11,00 (1H, s); ESMS m/z 374 (M+H), C_{23}H_{15}NO_{5} = 373 g/mol; pureza por HPLC = 95%.
4.1.2.130 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 2-hidroxifenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.119. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de o-anisoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 6,71 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,77 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,93 (1H, ddd, J = 7,6, 2,6, 1,6 Hz), 7,11-7,19 (3H, m), 7,27 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,39 (2H, d, J = 8,8 Hz), 9,75 (1H, s), 9,83 (1H, s), 10,13 (1H, s); ESMS m/z 374 (M+H), C_{22}H_{15}NO_{5} = 373 g/mol; pureza por HPLC = 96%.
4.1.2.131 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.119. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de benzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 6,69 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,75 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,26 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,40 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,53 (1H, t, J = 7,5 Hz), 7,72 (2H, dd, J = 8,3, 1,2 Hz), 9,80 (1H, s), 10,11 (1H, s); ESMS m/z 358 (M+H), C_{22}H_{15}NO_{4} = 357 g/mol; pureza por HPLC = 93%.
4.1.2.132 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-metoxifenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.119. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de p-anisoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 3,77 (3H, s), 6,71 (2H, d, J = 9,0 Hz), 6,77 (2H, d, J = 9,0 Hz), 6,91 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,28 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,39 (2H, d, J =9,0 Hz), 7,72 (2H, d, J =9,0 Hz), 9,80 (1H, s), 10,12 (1H, s); ESMS m/z 388 (M+H), C_{23}H_{17}NO_{5} = 387 g/mol; pureza por HPLC = 97%.
4.1.2.133 Síntesis de 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-3-feniltiofenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92. En la Etapa 3, se usó como electrófilo disulfuro de fenilo.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,58 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,42-7,38 (m, 5H), 7,32 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,87 (dd, J = 2,8, 8,5 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 2,56 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 0,97 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 390 (MH+), C_{23}H_{19}NO_{3}S = 389 g/mol; pureza = 95%.
4.1.2.134 Síntesis de 5-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-hidroxibenzamida
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.106. En la Etapa 3, se usó como electrófilo tosil nitrilo.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,71 (dd, J = 2,3, 8,3 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,54 (d, J =2,3 Hz, 1H), 7,07-6,99 (m, 3H), 2,76 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,09 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 325 (MH+), C_{18}H_{16}N_{2}O_{4} = 324 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.135 Síntesis de 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-feniltiofenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.106. En la Etapa 3, se usó como electrófilo disulfuro de fenilo.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,59-7,36 (m, 9H), 7,14 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,63 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,02 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 390 (MH+), C_{23}H_{19}NO_{3}S = 389 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.136 Síntesis de 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-metiltiofenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.106. En la Etapa 3, se usó como electrófilo disulfuro de metilo.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,64 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,37 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,07-6,99 (m, 3H), 2,76 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,50, 2,47 (2s, 3H), 1,14 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 328 (MH+), C_{18}H_{17}NO_{3}S = 327 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.137 Síntesis de 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-3-fenilfenol
El compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92.
Las Etapas 1 y 2 se realizaron como se ha descrito en la Sección 4.1.2.92.
Etapa 3: Se usó acoplamiento de Suzuki para introducir el anillo fenilo. El isoxazol obtenido en la Eapa 2 se disolvió en tolueno y se desgasificó con argón durante 10 min. Se añadió a esta solución Pd(PPh_{3})_{4} (4,0% en moles). Después de 10 min más, se añadió Na_{2}CO_{3} (5 eq.) seguido por una solución de ácido fenil borónico (1,1 eq.) en etanol. Se calentó la reacción a reflujo y se agitó durante 16 h. Se vertió después la mezcla de reacción en un embudo separador y se extrajo dos veces la capa acuosa con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con una solución de salmuera y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La purificación por cromatografía rápida (40% de acetato de etilo/hexanos) produjo el producto.
Etapa 4: La desmetilación del producto de la Etapa 3 se realizó como se ha descrito en el Método 3 de la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,45-7,40 (m, 3H), 7,32-7,25 (m, 5H), 7,03-7,01 (m, 2H), 6,93 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 2,15 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 0,63 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 358 (MH+), C_{23}H_{19}NO_{3} = 357 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.138 Síntesis de {4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenil}(metilsulfonil)amina
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos aquí.
Etapa 1: Síntesis de 1,3-dicetona. Ésta se realizó como se ha descrito en la Etapa 1 de la Sección 4.1.2.7, excepto que se usaron como materiales de partida 4'-metoxibutirilfenona y cloruro de metil 4-nitrobenzoilo.
Etapa 2: La formación de isoxazol usando la dicetona anterior se realizó como se ha descrito en la Etapa 4 de la Sección 4.1.2.7.
Etapa 3: La reducción del grupo nitro a anilina se consiguió mediante hidrogenación catalizada con Pd. A una solución del producto obtenido en la Etapa 2 en etanol se añadió una cantidad catalítica de Pd al 10% en carbón vegetal. Esta mezcla se agitó bajo hidrógeno (matraz) durante la noche, se filtró a través de celite y se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró bajo vacío. El residuo se purificó por cromatografía de columna rápida para proporcionar el producto 4-[4-etil-3-(4-metoxifenil)isoxazol-5-il]fenilamina.
Etapa 4: A una solución en DCM de la anilina anterior se añadió cloruro de metanosulfonilo (2,0 eq.) y piridina (3,0 eq.). La mezcla se agitó a ta durante 4 h, se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La purificación por cromatografía rápida produjo el producto {4-[4-etil-3-(4-metoxifenil)isoxazol-5-il]fenil}(metilsulfonil)amina.
Etapa 5: La desmetilación fue siguiendo el Método 2 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 7,74-7,50 (m, 4H), 7,32-7,15 (m, 2H), 6,95-6,88 (m, 2H), 3,06 (m, 3H), 2,68 (m, 2H), 1,14 (m, 3H); LC/MS m/z 359 (MH+), C_{18}H_{18}N_{2}O_{4}S = 358 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.139 Síntesis de 5-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-metoxibenzamida
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.134. La desmetilación parcial del producto proporcionó 5-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-metoxibenzamida siguiendo el progreso de la reacción usando cromatografía de capa fina.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 8,42 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,84 (dd, J = 8,8, 2,9 Hz), 7,65 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,36 (d, J =8,8 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,12, 4,11 (2s, 3H), 2,77 (q, J = 7,4 Hz, 3H), 1,15 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 339 (MH+), C_{19}H_{18}N_{2}O_{4} = 338 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.140 Síntesis de 5-[4-etil-3-(4-metoxifenil)isoxazol-5-il]2-hidroxibenzamida
Este compuesto es el regioisómero del compuesto preparado como se ha descrito en la Sección 4.1.2.139. Ambos regioisómeros se obtuvieron usando los métodos descritos en esa Sección, y los dos regioisómeros se separaron por HPLC usando una columna C_{18} (Reliasil-BDXC18, 10 x 50 mm, Ranin Dynamax), haciendo pasar un primer tampón de H_{2}O/0,1% de TFA y un segundo tampón de HCN/0,1% de TFA a través de un gradiente de 5-95% del segundo tampón durante un período de nueve minutos con un caudal de diez ml/min.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 8,06 (s, 1H), 7,65 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,55 (dd, J = 8,8, Hz, 2H), 7,45 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,08, 4,07 (2s, 3H), 2,78 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,12 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 339 (MH+), C_{19}H_{18}N_{2}O_{4} = 338 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.141 Síntesis de cloruro de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 3-(2-piperidiletoxi)fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20. En la Etapa 4, se usó para acilación cloruro de 3-aliloxibenzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 10,28 (s, 1H), 9,96 (s, 1H), 7,46 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,36-7,30 (m, 5H), 7,24-7,20 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,78 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,40-4,30 (ancho, 2H), 3,50-3,40 (m, 4H), 3,00-2,90 (m, 2H), 1,85-1,65 (m, 6H); LC/MS m/z 485 (MH+), C_{29}H_{28}N_{2}O_{5} = 484 g/mol; pureza = 95%.
4.1.2.142 Síntesis de cloruro de 5-(4-hidroxifenil)-3-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 3-(2-piperidiletoxi)fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.142. La desmetilación parcial proporcionó el producto mono-desmetilado comprobando el progreso de la reacción por cromatografía de capa fina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 7,58 (un isómero: d, J = 8,76 Hz, 2H), 1H), 7,48-7,42 (otro isómero: m, 2H), 7,40-7,28 (m, 5H), 7,28-7,18 (m, 1H), 7,03 (un isómero: d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,97 (otro isómero: d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,83 (un isómero: d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,78 (otro isómero: d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,40-4,30 (ancho, 2H), 3,78 (un isómero: s, 2H), 3,75 (otro isómero: s, 1H), 3,50-3,40 (ancho, 4H), 3,00-2,90 (m, 2H), 1,83-1,65 (m, 6H); LC/MS m/z 499 (MH+), C_{30}H_{30}N_{2}O_{5} = 498 g/mol; pureza = 95%.
4.1.2.143 Síntesis de cloruro de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 3-(2-pirrolidiniletoxi)fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.141. En la Etapa 6, se usó para alquilación N-(2-cloroetil)pirrolidina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 10,29 (s, 1H), 9,97 (s, 1H), 7,46 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,36-7,30 (m, 5H), 7,25-7,20 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,78 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,31 (ancho, 2H), 3,60-3,45 (m, 4H), 3,15-3,00 (m, 2H), 2,10-1,80 (m, 4H); LC/MS m/z 471 (MH+), C_{28}H_{26}N_{2}O_{5} = 470 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.144 Síntesis de cloruro de 3-[2-(dietilamino)etoxi]fenil-3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.141. En la Etapa 6, se usó para alquilación N-(2-cloroetil)dietilamina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 10,31 (s, 1H), 9,98 (s, 1H), 7,46 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,36-7,30 (m, 5H), 7,24-7,20 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,78 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,33 (t ancho, 2H), 3,4 (m, 2H), 3,19-3,14 (m, 4H), 1,25-1,20 (t, J = 7,14 Hz, 6H); LC/MS m/z 473 (MH+), C_{28}H_{28}N_{2}O_{5} = 472 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.145 Síntesis de cloruro de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 3-[(1-metil(3-piperidil))metoxi]fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.141. En la Etapa 6, se usó para alquilación 2-(clorometil)-1-metil-piperidina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 10,31 (s, 1H), 9,98 (s, 1H), 7,45 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,33-7,29 (m, 5H), 7,20-7,12 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,78 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 3,93-3,74 (m, 2H), 3,50-3,40 (d ancho, 2H), 2,90-2,70 (m, 5H), 2,40-2,25 (m, 1H), 1,90-1,7 (m, 4H); LC/MS m/z 485 (MH+), C_{29}H_{28}N_{2}O_{5} = 484 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.146 Síntesis de cloruro de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 3-[2-(dimetilamino)etoxi]fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.141. En la Etapa 6, se usó para alquilación N-(2-cloroetil)-dimetilamina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 10,35 (s, 1H), 10,02 (s, 1H), 7,45 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,37-7,29 (m, 5H), 7,26-7,20 (m, 1H), 6,86-6,83 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,85 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,79 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,33 (t, J = 4,61 Hz, 2H), 3,47 (t, J = 4,61 Hz, 2H), 2,80 (s, 6H); LC/MS m/z 445 (MH+), C_{26}H_{24}N_{2}O_{5} = 444 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.147 Síntesis de cloruro de 3-(4-hidroxifenil)-5-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 3-[(1-metil(3-piperidil)metoxi]fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.145. La desmetilación parcial proporcionó el producto mono-desmetilado comprobando el progreso de la reacción por cromatografía de capa fina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 10,32 (un isómero: s, 1H), 9,98 (otro isómero: s, 1H), 7,57 (un isómero: d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,44 (otro isómero: d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,34-7,29 (m, 2H), 7,19-7,17 (m, 1H), 7,03 (un isómero: d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,97 (otro isómero: d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,84 (un isómero: d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,80-6,76 (otro isómero: d, J = 8,76 Hz, 2H), 3,94-3,75 (m, 5H), 3,48-3,43 (d ancho, 2H), 2,90-2,70 (m, 5H), 2,40-2,25 (m, 1H), 1,84 (m, 4H); LC/MS m/z 499 (MH+), C_{30}H_{30}N_{2}O_{5} = 498 g/mol; pureza = 93%.
4.1.2.148 Síntesis de cloruro de 3-[2-(dimetilamino)etoxi]fenil) 3-(4-hidroxifenil)-5-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.146. La desmetilación parcial proporcionó el producto mono-desmetilado comprobando el progreso de la reacción por cromatografía de capa fina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 7,59-6,75 (m, 12H), 7,44 (otro isómero: d, 2H, J = 8,76 Hz), 4,31 (ancho, 2H), 3,78 (un isómero: s, 2H), 3,75 (otro isómero: s, 3H), 3,47 (ancho, 2H), 2,82 (s, 6H); LC/MS m/z 459 (MH+), C_{27}H_{26}N_{2}O_{5} = 458 g/mol; pureza = 98%.
4.1.2.149 Síntesis de 4-[4-etil-3-(4-hidroxi-2-metilfenil)isoxazol-5-il]-3-metilfenol
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos en el Esquema 1 usando como materiales de partida 2'-metil-4'-metoxiacetofenona y cloruro de 2-metil-4-metoxibenzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,24 (d, J = 8,29 Hz, 1H, ArH), 7,19 (d, J = 8,29, Hz, 1H, ArH), 6,87-6,79 (m, 4H, ArH), 2,31 (q, J = 7,38 Hz, 2H, CH2), 2,24 (s, 3H, CH3), 2,22 (s, 3H, CH3), 0,82 (t, J = 7,38 Hz, 3H, CH2CH3); LC/MS m/z 310 (MH+), C_{19}H_{19}NO_{3} = 309 g/mol; pureza = 95%.
4.1.2.150 Síntesis de 4-[3-(4-hidroxifenil)-4-propilisoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó en base al Esquema 4.
Etapas 1-3: Igual que las correspondientes etapas de la Sección 4.1.2.20.
Etapa 4: Alquilación. Se añadió nBuLi (1,1 eq., 1,6 M en hexano) a una solución de 4-bromoisoxazol (1 eq., obtenido en la Etapa 3) en THF a -78ºC. Después de agitar la solución a -78ºC durante 1,5 horas, se añadió gota a gota a una solución del bromopropano (1,2 eq.) en THF a -78ºC. Después de 15 min, se dejó calentarse la solución a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Después de apagar la reacción con HCl 1M, se separaron las capas y se extrajo la capa acuosa con EtOAc (x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO_{3} (x 1) y salmuera, se xsecaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron para proporcionar una mezcla de producto crudo. La cromatografía rápida produjo el producto alquilado.
Etapa 5: La desmetilación se realizó usando el Método 3 para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (CDCl_{3}/DMSO, 6:1) \delta 7,29 (d, J = 8,60 Hz, 2H), 7,18 (d, J = 8,60 Hz, 2H), 6,70 (d, J = 8,40 Hz, 2H), 6,68 (d, J = 8,40 Hz, 2H), 2,34-2,39 (m, 2H), 1,21-1,24 (m, 2H), 0,58 (t, J = 7,23 Hz, 3H); ESMS m/z 296 (MH+), C_{18}H_{17}NO_{3} = 295 g/mol; pureza por HPLC = 87,3%.
4.1.2.151 Síntesis de 4-[3-(4-hidroxifenil)-4-prop-2-enilisoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que en la Sección 4.1.2.150, excepto que, en la etapa 4, se usó como agente de alquilación bromuro de alilo.
^{1}H NMR (CDCl_{3}/DMSO, 6:1) \delta 9,10 (s, 1H), 8,93 (s, 1H), 7,23 (d, J = 8,79 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 8,79 Hz, 2H), 6,59 (d, J = 8,79 Hz, 2H), 6,57 (d, J = 8,79 Hz, 2H), 5,69-5,78 (m, 1H), 4,87 (d, J = 10,36 Hz, 1H), 4,71 (d, J = 17,19 Hz, 1H), 3,01-3,02 (m, 2H); ESMS m/z 294 (MH+), C_{18}H_{15}NO_{3} = 293 g/mol; pureza por HPLC = 80,8%.
4.1.2.152 Síntesis de 4-[2-(dietilamino)etiltio]fenil 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il cetona
Este compuesto se sintetizó siguiendo los procedimientos descritos en el Esquema 6.
Las Etapas 1-3 se realizaron como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20.
Etapa 4: Realizada como se ha descrito en la Etapa 4 de la Sección 4.1.2.20, excepto que se usó para acilación cloruro de 4-fluorobenzoilo.
Etapa 5: Se añadió 2-dietilamino-etano tiol a una suspensión en THF de hidruro sódico (1,1 eq.). La mezcla se agitó a ta durante 30 min, seguido por adición del compuesto obtenido en la Etapa 4. La mezcla de reacción se agitó a ta durante 2 h, se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron con Na_{2}SO_{4} y se concentraron bajo vacío. La purificación por cromatografía de columna rápida produjo el producto 4-[2-(dietilamino)etiltio]fenil 3,5-bis (4-metoxifenil)isoxazol-4-il cetona.
Etapa 6: La desmetilación se realizó usando el Método 2 de la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,75 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,57 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,45 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 7,84 Hz, 2H), 6,90 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,83 (d, J = 8,30 Hz, 2H), 3,10 (d, J = 7,83 Hz, 2H), 2,52 (t, J = 7,07 Hz, 2H), 0,96 (t, J = 7,14 Hz, 2H); LC/MS m/z 489 (MH+), C_{28}H_{28}N_{2}O_{4}S = 488 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.153 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-[2-(dimetilamino)etiltio]fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.152. En la Etapa 5, se usó 2-dimetilamino-etano tiol.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,74 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,57 (d, J = 9,22 Hz, 2H), 7,45 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 9,22 Hz, 2H), 6,82 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 3,00 (t, J = 7,14 Hz, 2H), 2,54 (t, J = 7,14 Hz, 2H), 2,14 (s, 6H); LC/MS m/z 461 (MH+), C_{26}H_{24}N_{2}O_{4}S = 460 g/mol; pureza = 95%.
4.1.2.154 Síntesis de 4-(2-azaperhidroepiniletoxi)fenil 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.152. En la Etapa 5, se usó 2-azaperhidroepiniletan-1-ol.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,82 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,57 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,47 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,93-6,88 (m, 4H), 6,84 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,10 (t, J = 5,99 Hz, 2H), 2,89 (t, J = 5,99 Hz, 2H), 2,72 (t, J = 5,53 Hz, 2H), 1,65-1,52 (m, 6H); LC/MS m/z 499 (MH^{+}), C_{30}H_{30}N_{2}O_{5} = 498 g/mol; pureza = 95%.
4.1.2.155 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)-2-(trifluorometil)fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.152. En la etapa 4, se usó cloruro de 2-trifluorometil-4-metoxibenzoilo. En la etapa 5, se usó N-(2-hidroxietil)-piperidina.
^{1}H NMR (d_{6}-DMSO) \delta 7,56 (d, J = 8,76 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 8,30 Hz, 1H), 6,86 (dd, J = 8,76 Hz y 2,31 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,73 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,12 (t, J = 5,76 Hz, 2H), 3,31 (s ancho, 2H), 2,59 (s ancho, 2H), 2,38 (m ancho, 4H), 1,46 (m ancho, 4H), 1,37 (m ancho, 2H); LC/MS m/z 553 (MH+), C_{30}H_{27}F_{3}N_{2}O_{5} = 552 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.156 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-{2-[(2-etiltioetil)amino]etoxi}fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.152. En la etapa 5, se usó N-(2-hidroxietil)-aziridina.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,83 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,57 (d, J = 9,22 Hz, 2H), 7,46 (d, J = 9,22 Hz, 2H), 6,94 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,83 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,11 (t, J = 5,53 Hz, 2H), 2,98 (t, J = 5,53 Hz, 2H), 2,82 (t, J = 6,50 Hz, 2H), 2,63 (t, J = 6,50 Hz, 2H), 2,51 (q, J = 7,38 Hz, 2H), 1,17 (t, J = 7,38 Hz, 2H); LC/MS m/z 505 (MH^{+}), C_{28}H_{28}N_{2}O_{5}S = 504 g/mol; pureza = 95%.
4.1.2.157 Síntesis de 3-(4-hidroxi-2-metilfenil)-4,5-dihidronafto[1,2-c]isoxazol-7-ol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.29 usando como materiales de partida 6-metoxi-1-tetralona y cloruro de 2-metil-4-metoxibenzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,75 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,86-6,80 (m, 4H), 2,91-2,72 (m, 4H), 2,34 (s, 3H); LC/MS m/z 294 (MH+), C_{18}H_{15}NO_{3} = 293 g/mol; pureza = 90%.
4.1.2.158 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-carbonitrilo
Este compuesto se sintetizó en base a la metodología descrita en el Esquema 4.
Las Etapas 1-3 se realizaron como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20.
Etapa 4: Realizada también como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que se usó como electrófilo tosil nitrilo.
Etapa 5: La desmetilación se basó en el Método 3 para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 8,04 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,8 Hz, 1H); LC/MS m/z 279 (MH+), C_{16}H_{10}N_{2}O_{3} = 278 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.159 Síntesis de 4-[4-etil-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]-3-metilfenol
Este compuesto se sintetizó regioespecíficamente siguiendo los procedimientos descritos en el Esquema 3.
Etapa 1: Síntesis de oxima. Se añadió NH_{2}OH:HCl (1,2 eq.) y piridina (1,2 eq.) a una suspensión de 2'-metil-4'-metoxi-acetofenona (1,0 eq.) en etanol. La mezcla se calentó a reflujo y se agitó durante la noche. Se separó el disolvente bajo presión reducida y el residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró para proporcionar una mezcla de producto crudo. La cromatografía rápida produjo la oxima como dos regioisómeros con un rendimiento del 85%.
Etapa 2: Síntesis de isoxazol. A una solución de la oxima obtenida en la etapa 1 (2 eq.) en THF a 0ºC se añadió n-BuLi (4,2 eq.). Después de 30 min, se añadió 4-metoxibenzoato de metilo (1,0 eq.) como una solución en THF. Después de agitar durante 30 min a 0ºC, se calentó la mezcla a temperatura ambiente. Se añadió HCl (10 ml, 5 N) y la mezcla de reacción bifásica se calentó a reflujo y se agitó durante la noche. Por enfriamiento a a 0ºC, precipitó isoxazol y se recogió mediante filtración. El filtrado se lavó con agua y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (x 3). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con NaHCO_{3} saturado y salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y concentraron para proporcionar una mrzcla de reacción cruda. La cromatografía rápida (THF/hexanos) y recristalización (THF/EtOH) produjeron el isoxazol.
Etapa 3: La desmetilación se realizó como se ha descrito en el Método 3 de la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 7,67 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,85 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,80 (dd, J = 8,2, 2,5 Hz, 1H), 2,52 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,18 (s, 3H), 0,98 (t, J = 7,6 Hz, 3H); LC/MS m/z 296 (MH=^{+}), C_{18}H_{17}NO_{3} = 295 g/mol; pureza = 99%.
4.1.2.160 Síntesis de 3-(4-hidroxi-2-metilfenil)nafto[1,2-c]isoxazol-7-ol
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.32 usando como materiales de partida 6-metoxi-1-tetralona y cloruro de 2-metil-4-metoxibenzoilo.
^{1}H NMR (d_{6}-acetona) \delta 8,31 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,47-7,38 (m, 3H), 6,94-6,88 (m, 2H), 2,42-2,38 (2s, 3H); LC/MS m/z 292 (MH^{+}), C_{18}H_{13}NO_{3} = 291 g/mol; pureza = 85%.
4.1.2.161 Síntesis de 3-(4-hidroxifenil)-4,5,6-trihidrobenzo[a]isoxazolo[3,4-c][7]anulen-8-ol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que en la Sección 4.1.2.29, excepto que, en la Etapa 1, se usó 7-metoxi-1-benzosuberona para formar la 1,3-dicetona.
ESMS m/z 294 (MH+), C_{18}H_{15}NO_{3} = 293 g/mol; pureza = 80,6%.
4.1.2.162 Síntesis de 4-[3-(4-hidroxifenil)-4-(2-metoxifenil)isoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó en base al Esquema 4.
Etapas 1-3: Igual que las correspondientes etapas de la Sección 4.1.2.20.
Etapa 4: Acoplamiento de Suzuki de 4-bromoisoxazol con ácido arilborónico. La reacción se efectuó bajo atmósfera de nitrógeno y los disolventes se desgasificaron burbujeando nitrógeno durante 2 h antes de la reacción. Se añadió Pd(PPh_{3})_{4} (0,04 eq.) en DMF al 4-bromoisoxazol (obtenido en la etapa 3) y ácido 2-metoxifenilborónico (o viniltributilestaño) (1,1 eq.). Se añadió después carbonato sódico (0,4 ml, 2 M). Se cerró la reacción y se dejó permanecer durante la noche a 90ºC. Se añadió después acetato de etilo (20 ml) y se lavó la reacción con agua y salmuera. Las fracciones orgánicas se filtraron y concentraron bajo presión reducida. Los residuos se liofilizaron en MeCN al 90%/H_{2}O. La purificación del compuesto se consiguió por trituración con MeCN al 90%/H_{2}O y purificación por HPLC.
Etapa 5: La desmetilación fue siguiendo el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
^{1}H NMR (CDCl_{3} & DMSO-d_{6}) \delta 3,04 (3H, s), 6,16(2H, d, J = 8,5 Hz), 6,20 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,44 (1H, t, J = 7,5 Hz), 6,47 (1H, d, J = 8,4 Hz), 6,58 (1H, dd, J = 7,1 Hz, 1,6 Hz), 6,67 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,78 (2H, d, J = 8,6 Hz), 6,87 (3H, t, J = 8,3 Hz), 8,69 (1H, s), 8,91 (1H, s); ESMS m/z 360 (MH+), C_{22}H_{17}NO_{4} = 359 g/mol; pureza por HPLC = 98,2%.
4.1.2.163 Síntesis de 4-{4-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il}fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que el producto de la Sección 4.1.2.162, excepto que, en la Etapa 4, se usó para acoplamiento ácido 3,5-di-trifluorometilfenilborónico.
^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 6,71 (1H, d, J = 8,7 Hz), 6,73 (1H, d, J = 10,8 Hz), 7,04 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,20 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,60 (2H, s), 7,76 (1H, s), 9,25 (1H, s), 9,50 (1H, s); ESMS m/z 466 (MH+), C_{23}H_{13}F_{6}NO_{3} = 465 g/mol; pureza por HPLC = 86,4%.
4.1.2.164 Síntesis de 3-[3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que el producto de la Sección 4.1.2.162, excepto que, en la Etapa 4, se usó para acoplamiento ácido 3-metoxifenilborónico.
^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 6,30 (4H, d, J = 6,4 Hz), 6,33 (1H, s), 6,35 (1H, d, J = 7,7 Hz), 6,44 (1H, d, J = 8,1 Hz), 6,80 (1H, t, J = 7,8 Hz), 6,85 (2H, d, J = 7,6 Hz), 6,95 (2H, d, J = 7,8 Hz), 8,64 (1H, s), 8,81 (1H, s), 8,98 (1H, s); ESMS m/z 346 (MH+), C_{21}H_{15}NO_{4} = 345 g/mol; pureza por HPLC = 91%.
4.1.2.165 Síntesis de 4-{3-(4-hidroxifenil)-4-[3-(trifluorometil)fenil]isoxazol-5-il}fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que el producto de la Sección 4.1.2.162, excepto que, en la Etapa 4, se usó para acoplamiento ácido 3-trifluorometilfenilborónico.
^{1}H NMR (CDCl_{3}): \delta 6,13 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,17 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,67 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,87 (1H, s), 6,88 (1H, d, J = 6,9 Hz), 6,97 (1H, t, J = 7,9 Hz), 7,06 (1H, d, J = 8,5 Hz), 8,79 (1H, s), 9,02 (1H, s); ESMS m/z 398 (MH+), C_{22}H_{14}F_{3}NO_{3} = 397 g/mol; pureza por HPLC = 99,3%.
4.1.2.166 Síntesis de 4-{3-(4-hidroxifenil)-4-[4-(trifluorometil)fenil]isoxazol-5-il}fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que el producto de la Sección 4.1.2.162, excepto que, en la Etapa 4, se usó para acoplamiento ácido 4-trifluorometilfenilborónico.
^{1}H NMR (CDCl_{3} & DMSO-d_{6}): \delta 6,34 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,38 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,75 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,88 (2H, d, J = 8,2 Hz), 6,98 (2H, d, J = 8,1 Hz), 7,22 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,87 (1H, s), 9,09 (1H, s); ESMS m/z 398 (MH+), C_{22}H_{14}F_{3}NO_{3} = 397 g/mol; pureza por HPLC = 98,8%.
4.1.2.167 Síntesis de 4-[3-(4-hidroxifenil)-4-(2-tienil)isoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que el producto de la Sección 4.1.2.162, excepto que, en la Etapa 4, se usó para acoplamiento ácido 2-tiofenilborónico.
^{1}H NMR (CDCl_{3} & DMSO-d_{6}): \delta 6,45 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,48 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,69 (1H, dt, J = 3,8, 1,2 Hz), 6,79 (1H, dd, J = 3,8, 1,2 Hz), 7,00 (2H, d, J = 8,2 Hz), 7,11 (2H, d, J = 8,2 Hz), 7,12-7,15 (1H, m), 8,90 (1H, s), 9,46 (1H, s); ESMS m/z 336 (MH+), C_{19}H_{13}NO_{3}S = 335 g/mol; pureza por HPLC = 87,9%.
4.1.2.168 Síntesis de 4-[3-(4-hidroxifenil)-4-(3-tienil)isoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que el producto de la Sección 4.1.2.162, excepto que, en la Etapa 4, se usó para acoplamiento ácido 3-tiofenilborónico.
^{1}H NMR (CDCl_{3} & DMSO-d_{6}): \delta 6,32 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,36 (2H, d, J = 8,6 Hz), 6,54 (1H, d, J = 4,8 Hz), 6,76 (1H, s), 6,82 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,94 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,01-7,03 (1H, m), 8,83 (1H, s), 9,03 (1H, s); ESMS m/z 336 (MH+), C_{19}H_{13}NO_{3}S = 335 g/mol; pureza por HPLC = 94,0%.
4.1.2.169 Síntesis de 4-[3-(4-hidroxifenil)-4-vinilisoxazol-5-il]fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que el producto de la Sección 4.1.2.162, excepto que, en la Etapa 4, se usó para acoplamiento ácido vinilborónico.
^{1}H NMR (CDCl_{3} & DMSO-d_{6}): \delta 5,03 (1H, dd, J = 11,4, 1,6 Hz), 5,06 (1H, dd, J = 17,8, 1,6 Hz), 6,32 (1H, dd, J = 17,8, 11,4 Hz), 6,65 (2H, d, J = 9,0 Hz), 6,67 (2H, d, J = 9,2 Hz), 7,19 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,19 (2H, d, J = 8,8 Hz), 8,95 (1H, s), 9,17 (1H, s); ESMS m/z 280 (MH+), C_{17}H_{13}NO_{3} = 279 g/mol; pureza por HPLC = 93,2%.
4.1.2.170 Síntesis de 3-(4-hidroxi-2-metilfenil)-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 1, se usaron como materiales de partida 4'-metoxi-2'-metilacetofenona y cloruro de p-anisoilo. Se obtiene una mezcla de regioisómeros.
ESMS m/e 499 (MH^{+}), C_{30}H_{30}N_{2}O_{5} = 498 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.171 Síntesis de 3-(2-etil-4-hidroxifenil)-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 1, se usaron como materiales de partida 4'-metoxi-2'-etilacetofenona y cloruro de p-anisoilo. Se obtiene una mezcla de regioisómeros.
ESMS m/e 513 (MH^{+}), C_{31}H_{32}N_{2}O_{5} = 512 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.172 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxi-2-metilfenil)isoxazol--4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona
Este compuesto se sintetizó como se ha descrito en la Sección 4.1.2.20, excepto que, en la Etapa 1, se usaron como materiales de partida 4'-metoxi-2'-metilacetofenona y cloruro de 4-metoxi-2-metilbenzoilo.
ESMS m/e 513 (MH^{+}), C_{31}H_{32}N_{2}O_{5} = 512 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.173 Síntesis de 4-(4-{(hidroxiimino)[4-(2-piperidiletoxi)fenil]metil}-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il)fenol
Este compuesto se sintetizó en base al Esquema 7.
Etapas 1-7: Igual que las etapas correspondientes de la Sección 4.1.2.20.
Etapa 8: Síntesis de oxima. Se añaden NH_{2}OH·HCl (1,2 eq.) y piridina (1,2 eq.) a una suspensión de la cetona obtenida en la Etapa 7 (1,0 eq.) en etanol. La mezcla se calienta a reflujo y se agita durante la noche. El disolvente se separa bajo presión reducida y el residuo se disuelve en EtOAc, se lava con agua y salmuera, se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra para proporcionar una mezcla de producto crudo. La cromatografía rápida produjo la oxima como una mezcla de dos regioisómeros.
ESMS m/e 500 (MH^{+}), C_{29}H_{29}N_{3}O_{5} = 499 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.174 Síntesis de 4-(4-{(1E)-2-aza-2-metoxi-1-[4-(2-piperidiletoxi)fenil]vinil}-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il)fenol
Este compuesto se sintetizó de igual manera que el compuesto anterior excepto que, en la Etapa 8, se usó para formar la oxima metoxiamina.
ESMS m/e 514 (MH^{+}), C_{30}H_{31}N_{3}O_{5} = 513 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.175 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-[2-(ter-butoxi)etoxi]fenil cetona
Este compuesto se sintetizó de igual manera que en la Sección 4.1.2.152. En la etapa 5, se usa como nucleófilo 2-(ter-butoxi)etan-1-ol.
ESMS m/e 474 (MH^{+}), C_{28}H_{27}NO_{6} = 473 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.176 Síntesis de 3-(4-hidroxifenil)-5-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona
Este compuesto se sintetiza en base al Esquema 3 y el Esquema 6.
Etapas 1 y 2: Igual que las correspondientes etapas de la Sección 4.1.2.152, excepto que se usa 4'-benciloxiacetofenona para formar oxima en la Etapa 1.
Etapas 3-5: Igual que las correspondientes etapas de la Sección 4.1.2.152, excepto que se usa 2-piperidiletan-1-ol en la Etapa 5 como nucleófilo.
Etapa 6: Separación selectiva del grupo protrector de bencilo. Al compuesto obtenido antes en solución de MeOH se añadió Pd al 10%/C (cantidad catalítica). La mezcla se agita bajo atmósfera de hidrógeno (matraz) a ta durante la noche, y se filtra a través de una almohadilla de celite. Se usa acetato de etilo para lavar el residuo. El filtrado se concentra y somete a purificación para producir el compuesto del título.
ESMS m/e 499 (MH^{+}), C_{30}H_{30}N_{2}O_{5} = 498 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.177 Síntesis de 3,5-bis(4-hidroxifenil)-4-{[4-(2-piperidiletoxi)fenil]sulfonil}isoxazol
Este compuesto se sintetiza en base al Esquema 6.
Etapas 1-3: Igual que las correspondientes etapas del Esquema 4.1.2.20.
Etapa 4: Igual que la Etapa 4 del Esquema 4.1.2.20, excepto que se usa como electrófilo cloruro de 4-fluorofenilsulfonilo para apagar el anión isoxazol.
Etapa 5: Igual que la Etapa 5 del ejemplo anterior.
Etapa 6: La desmetilación se realizó usando el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/e 521 (MH^{+}), C_{28}H_{28}N_{2}O_{6}S = 520 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.178 Síntesis de 3-(4-hidroxifenil)isoxazolo[4,3-c]quinolin-7-ol
Etapa 1: Formación de 1,3-dicetona. Igual que la Etapa 1 de la Sección 4.1.2.7, excepto que se usaron como materiales de partida 2-fluoro-4-metoxiacetofenona y cloruro de p-anisoilo.
Etapa 2: Se añadió dimetilformamidadimetilacetal (4 eq.) a una solución en THF de la 1,3-dicetona anterior. La mezcla se calentó a reflujo durante 16 h y se concentró bajo vacío para dar un residuo oscuro. La purificación con cromatografía de columna proporcionó 2-[(dimetilamino)metilen]-3-(2-fluoro-4-metoxifenil)-1-(4-metoxifenil)propano-1,3-diona.
Etapa 3: El compuesto intermedio anterior se mezcla con amoníaco bajo presión (un equipo de bomba calorimétrica) y se calienta a 60ºC durante la noche. Se enfría la reacción a -78ºC y se deja evaporar el amoníaco. Se añade agua y EtOAc al residuo. La extracción rutinaria seguida por concentración da después el producto crudo, que se purifica para dar quinolona producto.
Etapa 4: Formación de heterociclo de isoxazol. Igual que la Etapa 4 de la Sección 4.1.2.7, excepto usando el compuesto obtenido antes como material de partida. Esta etapa da 7-metoxi-3-(4-metoxifenil)isoxazolo[4,3-c]quinolina como producto.
Etapa 5: La desmetilación se realizó usando el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/e 279 (MH^{+}), C_{16}H_{10}N_{2}O_{3} = 278 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.179 Síntesis de ácido (2E)-3-(4-{[3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]carbonil}fenil)prop-2-enoico
Etapas 1-3: Igual que las correspondientes etapas de la Sección 4.1.2.20.
Etapa 4: Se usó acoplamiento de Suzuki para introducir el anillo fenilo. El isoxazol obtenido en la Etapa 3 se disolvió en tolueno y se desgasificó con argón durante 10 min. Se añadió a esta solución Pd(PPh_{3})_{4} (4,0% en moles). Después de 10 min más, se añadió Na_{2}CO_{3} (5 eq.) seguido por una solución de ácido 4-formilfenil borónico (1,1 eq.) en etanol. Se calentó la reacción a reflujo y se agitó durante 16 h. Se vertió después la mezcla de reacción en un embudo separador y se extrajo dos veces la capa acuosa con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con una solución de salmuera y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La purificación por cromatografía rápida (40% de acetato de etilo/hexanos) dio después el producto.
Etapa 5: Reacción de Honor-Emmons para formar éster \alpha,\beta-insaturado. El producto anterior se somete a condición de reacción de Honor-Emmons usando fosfonoacetato de trimetilo para proporcionar (2E)-3-{4-[3,5-bis(4-metoxifenil)isoxazol-4-il]fenil}prop-2-enoato de trimetilo.
Etapa 6: La saponificación (NaOH en agua/THF) del compuesto anterior da después ácido (2E)-3-{4-[3,5-bis(4-metoxifenil)isoxazol-4-il]fenil}prop-2-enoico.
Etapa 7: La desmetilación se realiza usando el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquma 1.
ESMS m/e 400 (MH^{+}), C_{24}H_{17}NO_{5} = 399 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.180 Síntesis de 7-hidroxi-3-(4-hidroxifenil)(4,5-dihidroisoxazolo[4,3-c]quinolin-5-il) 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona
Etapas 1-3: Igual que la Sección 4.1.2.178.
Etapa 4: Reducción. A una solución en metanol del compuesto obtenido en la etapa 3 se añade Pd al 10%/C. La mezcla se agita bajo atmósfera de hidrógeno (matraz) a ta durante la noche, y se filtra a través de una almohadilla de celite. Se usa acetato de etilo para lavar el residuo. El filtrado se concentra y somete a purificación para producir producto como 7-metoxi-3-[(4-metoxifenil)carbonil]-1,2,3-trihidroquinolin-4-ona.
Etapa 5: Formación de heterociclo de isoxazol. Igual que la Etapa 4 de la Sección 4.1.2.7, excepto usando el compuesto obtenido antes como material de partida. Esta etapa da 7-metoxi-3-(4-metoxifenil)-4,5-dihidroisoxazolo[4,3-c]quinolina como producto.
Etapa 6: Acilación. A una suspensión de hidruro sódico (1,1 eq.) en THF se añade el compuesto anterior (1,0 eq.) a 0ºC. La mezcla se agita a ta durante 1 h o hasta que se detiene el burbujeo. Se añade a esto cloruro de 4-(2-piperidiletoxi)benzoilo en solución en THF. Esta mezcla se agita a ta durante la noche, se vierte en agua y se sigue por un procedimiento de extracción rutinaria para dar un producto crudo que se purifica para producir 7-metoxi-3-(4-metoxifenil)(4,5-dihidroisoxazolo[4,3-c]quinolin-5-il) 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona.
Etapa 7: Se realiza la desmetilación usando el Método 3 descrito para la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/e 512 (MH^{+}), C_{30}H_{29}N_{3}O_{5} = 511 g/mol; pureza por HPLC = 90%.
4.1.2.181 Síntesis de 2-[4-etil-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]-5-hidroxibencenocarbonitrilo
El mismo procedimiento que en la Sección 4.1.2.92 excepto que, en la etapa 3, se usó como electrófilo tosil nitrilo y, en la etapa 4, la desmetilación fue usando el Método 3 para la Etapa C del Esquema 1.
ESMS m/z 307 (MH+), C_{18}H_{14}N_{2}O_{3} = 306 g/mol; pureza por HPLC = 99%.
4.1.2.182 Síntesis de 2-[4-etil-5-(4-metoxifenil)isoxazol-3-il]-5-hidrobencenocarbonitrilo
La desmetilación parcial del compuesto sintetizado como se ha descrito en la Sección 4.1.2.181 proporcionó el compuesto del título.
ESMS m/z 321 (MH+), C_{19}H_{16}N_{2}O_{3} = 320 g/mol; pureza por HPLC = 99%.
4.2 Actividad biológica de compuestos de la invención 4.2.1 Ensayos in vivo 4.2.1.1 Ensayo de estrogenicidad de Allen-Doisy
Este ensayo se usa para evaluar la actividad estrogénica de un compuesto de ensayo por observación de la cornificación del epitelio vaginal en ratas ovariectomizadas después de la administración de un compuesto de ensayo (Allen y Doisy 1923; Mühlbock 1940; Terenius 1971).
Se obtuvieron de un suministrador comercial (Harlan-PCB, Horst, Países Bajos) ratas Hsd/Cpb hembras maduras, que tenían pesos iniciales entre aproximadamente 150 y 200 g. Las ratas se alojaron en jaulas de aluminio en una habitación de luz y temperatura controladas (14 horas de luz/10 horas de oscuridad a 19ºC-23ºC). Se alojaron cuatro ratas por jaula. Se proporcionó a las ratas acceso libre a alimento globulizado estándar y agua de grifo. Después de un período de aclimatación (unos pocos días), se ovariectomizaron bilateralmente las ratas bajo anestesia con éter. Se tomaron durante un período de 4-5 días frotes vaginales. Se desecharon las ratas que mostraban frotes positivos.
Las ratas de cada grupo de tratamiento se alojaron en dos jaulas yuxtapuestas. Cada experimento consistía en 2 + n grupos de ocho ratas por grupo. Dos grupos de referencia recibieron el compuesto de referencia (estradiol, 1,3, 5 (10)-estratrieno-3, 17-\beta-diol para administración subcutánea ("sc"); etinilestradiol para administración oral); n grupos recibieron el compuesto de ensayo. Para administración subcutánea, se usaron entre 0,1 \mug y 0,2 \mug de dosis total/rata (aprox. 0,4-0,8 \mug/kg de dosis total). Para administración oral, se usaron entre 0,008 \mug y 0,016 mg de dosis total/rata (aprox. 0,032-0,064 mg/kg de dosis total). Los vehículos usados para administración sc fueron (en orden preferencial): aceite de araquis, aceite de araquis con 100 ml/l de alcohol bencílico; gelatina (5,0 g/l) y manitol (50 g/l) en agua; metilcelulosa (2,0 g/l) y NaCl, (9,0 g/l) en agua; o cualquier otro vehículo adecuado. Para administración oral, los vehículos usados fueron (en orden preferencial): gelatina (5,0 g/l) y manitol (5,0 g/l) en agua; metilcelulosa (2,0 g/l) y NaCl (9,0 g/l) en agua; mulgofeno (50 g/l) (vendido con el nombre comercial ELF 719, GAF) y NaCl (9,0 g/l) en agua; o cualquier otro vehículo adecuado.
Tres semanas después de la ovariectomía, se prepararon las ratas con una dosis sc simple de 1 \mug de estradiol (en 0,1 ml de aceite de araquis) para asegurar el mantenimiento de la sensibilidad y mayor uniformidad de respuesta. En la cuarta semana, 7 días después de la preparación (preferiblemente un lunes), se administró el compuesto de referencia o ensayo en 3 dosis iguales, una por la tarde del primer día de tratamiento y dos (una por la mañana y una por la tarde) del segundo día de tratamiento. Las dosis de compuesto se escogieron en base a extrapolaciones de datos in vitro obtenidos en la transactivación de COH (Sección ) y/o ensayos de unión para receptor de estrógeno usando agonistas y antagonistas de estrógeno conocidos. Para administración sc, el compuesto de referencia (estradiol) se administró en dosis totales de 0,1-0,2 \mug/rata. Los compuestos de ensayo se administraron habitualmente en dosis totales de 0,01-1,0 mg/rata. Cada dosis sc total se dividió por igual en tres administraciones, cada una en un volumen de dosis de 0,25 ml. Para administración oral, el compuesto de referencia (etinilestradiol) se administró en dosis totales de 0,008-0,016 mg/rata. Los compuestos de ensayo se administran habitualmente en dosis totales de 0,01-1,0 mg/rata. Cada dosis oral total se dividió por igual en 3 administraciones, cada una con un volumen de dosis de 0,25 ml. Para expresión de dosis por kg, se supuso un peso corporal medio de 250 g. Se tomaron frotes vaginales por la tarde del tercer día, por la mañana y por la tarde del cuarto día y por la mañana del quinto día de la semana de tratamiento. Se tomaron frotes vaginales adicionales los días sucesivos (por la mañana) hasta que fue completa la respuesta estrogénica. Los frotes vaginales se hicieron en platinas de microscopio. Las platinas se secaron y fijaron con etanol del 96%, y se colorearon durante aproximadamente veinte minutos con solución de Giemsa (Merck, Darmstadt, Alemania), que se había diluido 1:10 con agua de grifo, lavado a fondo bajo agua de grifo y después secado. Se evaluó bajo observación microscópica (60x) el porcentaje de células epiteliales cornificadas y nucleadas estimado para cada frote. Se dejó descansar a las ratas durante una semana (semana cinco del experimento). Se repitió después el experimento, con preparación a la sexta semana y administración y observación durante la séptima semana, como se ha descrito. Se sometieron después las ratas a eutanasia bajo anestesia profunda o con gas CO_{2}/O_{2}.
La fase de desarrollo del epitelio vaginal para cada rata se evaluó usando una escala de "a" a "g" determinada como sigue (Tabla 1). La secuencia vaginal de ratas no ovariectomizadas normales con un ciclo estroso de 4 días es: diestro \rightarrow diestro \rightarrow proestro \rightarrow estro. Las fases usuales observadas en las mañanas del ciclo estroso de 4 días usando la escala de la Tabla 1 son por tanto a, a, e y g, respectivamente. Las fases b, c, d y f son intermedias.
TABLA 1
Porcentaje de Porcentaje de células Porcentaje de células Fase de desarrollo
leucocitos epiteliales nucleadas epiteliales cornificadas
> 67% - - - - a. diestro
5-50% > 50% - - b. diestro tardío
< 5% > 50% - - e. proestro
< 5% - - > 50% f. estro
< 5% < 5% > 90% g. estro
5-33% - - > 50% d. metestro
33-67% - - < 50% c. metestro tardío
El número de ratas con una respuesta positiva es una medida de la actividad estrogénica del compuesto de ensayo. La interpretación de los resultados se hizo como se muestra en la Tabla 2.
TABLA 2
Porcentaje de ratas que muestran una respuesta positiva Conclusión
0% inactivo
1%-50% débilmente activo
> 50% activo
4.2.1.2 Ensayo de anti-estrogenicidad anti-Allen-Doisy
Este ensayo se usa para evaluar la actividad anti-estrogénica de un compuesto de ensayo cuando se administra en presencia de estrógeno (Allen y Doisy 1923; Jongh y Laqueur 1938; Mühlbock 1940; Emmens, Cox et al. 1959). Más específicamente, se determina la capacidad del compuesto de ensayo para contrarrestar la cornificación estrogénica del epitelio vaginal.
Se obtuvieron de un suministrador comercial (CPB-TNO, Zeist, Países Bajos) ratas Cpb hembras maduras, que tenían pesos iniciales entre aproximadamente 150 y 200 g. Las ratas se alojaron en jaulas de aluminio en una habitación de luz y temperatura controladas (14 horas de luz/10 horas de oscuridad a 21ºC-23ºC). Se alojaron cuatro ratas por jaula. Se proporcionó a las ratas acceso libre a alimento globulizado estándar y agua de grifo. Después de un período de aclimatación (unos pocos días), se ovariectomizaron bilateralmente las ratas bajo anestesia con éter. Se tomaron durante un período de 4-5 días frotes vaginales. Se desecharon las ratas que mostraban frotes positivos.
Las ratas de cada grupo de tratamiento se alojaron en dos jaulas yuxtapuestas. Cada experimento consistía en 1 + n grupos de ocho ratas por grupo. Un grupo de referencia recibió el compuesto de referencia (nafoxidina HCl); n grupos recibieron el compuesto de ensayo. Para administración oral, se usaron entre 0,25 mg/rata/día (aprox. 1,44 mg/kg/día). Los vehículos usados para administración subcutánea ("sc") fueron (en orden preferencial): aceite de araquis, aceite de araquis con 10% de alcohol bencílico; gelatina (0,5%) y manitol (5%) en agua; y metilcelulosa (0,2%) y NaCl, (9,0%) en agua. Para administración oral, los vehículos usados fueron (en orden preferencial): gelatina (0,5%) y manitol (5%) en agua; metilcelulosa (0,2%) y NaCl (9,0%) en agua; y mulgofeno (5%) (vendido con el nombre comercial ELF 719, GAF) y NaCl (0,9%) en agua.
Dos semanas después de la ovariectomía, se prepararon las ratas con una dosis sc simple de 0,2 \mug de estradiol (en 0,1 ml de aceite de araquis) administrados diariamente durante diez días para asegurar el mantenimiento de la sensibilidad y mayor uniformidad de respuesta. La administración de estradiol fue seguida inmediatamente por administración de compuesto de ensayo o vehículo. Los compuestos de ensayo se administraron a razón de 1,0 mg/rata. Para administración sc, el volumen de dosis fue 0,25 ml. Se tomaron diariamente frotes vaginales durante todo el período de administración. Los frotes vaginales se hicieron en platinas de microscopio. Las platinas se secaron y fijaron con etanol del 96%, y se colorearon durante aproximadamente veinte minutos con solución de Giemsa (Merck, Darmstadt, Alemania), que se había diluido 1:10 con agua de grifo, lavado a fondo bajo agua de grifo y después secado. Se evaluó bajo observación microscópica (60x) el porcentaje de células epiteliales cornificadas y nucleadas estimado para cada frote. Tras el experimento, se sometieron las ratas a eutanasia bajo anestesia profunda o con gas CO_{2}/O_{2}.
La fase de desarrollo del epitelio vaginal para cada rata se evaluó usando una escala de "a" a "g" determinada como sigue (Tabla 3). La secuencia vaginal de ratas no ovariectomizadas normales con un ciclo estroso de 4 días es: diestro \rightarrow diestro \rightarrow proestro \rightarrow estro. Las fases usuales observadas en las mañanas del ciclo estroso de 4 días usando la escala de la Tabla 3 son por tanto a, a, e y g, respectivamente. Las fases b, c, d y f son intermedias.
TABLA 3
Porcentaje de leucocitos Porcentaje de células Porcentaje de células Fase de desarrollo
epiteliales nucleadas epiteliales cornificadas
> 67% - - - - a. diestro
5-50% > 50% - - b. diestro tardío
< 5% > 50% - - e. proestro
< 5% - - > 50% f. estro
< 5% < 5% > 90% g. estro
5-33% - - > 50% d. metestro
33-67% - - < 50% c. metestro tardío
Los frotes que muestran cualquiera de las fases e, f o g se consideraron estrogénicos (es decir, el epitelio vaginal mostraba cornificación). El resultado final se expresó como la relación del número de frotes que muestran respuesta estrogénica al número total de frotes recogidos desde el tercer día hasta el día final del estudio. El número de ratas con una respuesta positiva es una medida de la actividad anti-estrogénica del compuesto de ensayo. La interpretación de los resultados se hizo como se muestra en la Tabla 4.
TABLA 4
Porcentaje de ratas que muestran una respuesta positiva Conclusión
>70% inactivo
35%-70% débilmente activo
< 35% activo
4.1.2.3 Bioensayo de estrogenicidad y anti-estrogenicidad uterotrófico de rata inmadura
La actividad antiestrogénica se determina por la capacidad de un compuesto de ensayo (3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona) para suprimir el aumento del peso húmedo uterino resultante de la administración de 0,2 \mug de 17-\beta-estradiol ("E_{2}") por día. Cualquier disminución significativa estadísticamente del peso uterino en un grupo de dosis particular en comparación con el grupo testigo de E_{2} es indicativa de anti-estrogenicidad.
Se recibieron a los 12 días de edad ciento sesenta (160) cachorros hembras (10 por madre de cría). Se seleccionaron para el estudio ciento cuarenta (140) cachorros hembras (de 19 días de edad) en el intervalo de peso corporal de 35-50 g. El día 19 de edad, cuando los cachorros pesaban aproximadamente 35-50 g, se aleatorizaron por oden de peso corporal en grupos de tratamiento. Se hicieron dos veces diariamente observaciones de mortalidad, morbidez, disponibilidad de alimento y agua, apariencia general y signos de toxicidad. Los cachorros no utilizados en el estudio se sometieron a eutanasia junto con las madres de cría. Se tomaron los pesos corporales iniciales inmediatamente antes del comienzo del tratamiento el día 19 de edad. Los pesos corporales finales se tomaron en la necropsia el día 22 de edad.
El tratamiento comenzó el día 19 de edad y continuó hasta los días 20 y 21 de edad. Se dio a cada animal tres inyecciones subcutáneas ("sc") diariamente durante 3 días consecutivos. Tres ratas en cada uno de los grupos testigo y de ensayo de dosis de nivel medio a alto se anestesiaron con una mezcla de cetamina/xilazina. Se recogió su sangre por desangración usando una aguja de medida 22 y una jeringa de 5 ml lavada con 10 unidades USP de heparina sódica/ml a través de la vena cava descendente; y se transfirió después a un tubo de plasma superior crudo de 5 ml (heparina sódica (liofilizada), 72 unidades USP). Se recogieron muestras de plasma por centrifugación, se congelaron a -70ºC y se analizaron usando espectrografía de masas para determinar la presencia y cantidad de compuesto de ensayo en el suero. Se analizó también la química de la sangre para determinar otros parámetros sanguíneos. Se cortaron y pesaron los úteros de las ratas. Las ratas restantes se sacrificaron por asfixia bajo CO_{2}. Los úteros de estas ratas se cortaron, mellaron, secaron para separar fluido y pesaron con una aproximación de 0,1 mg.
Con el fin de determinar si el compuesto de ensayo afectaba significativamente al peso corporal final, se realizó un análisis de varianza (ANOVA) unidireccional paramétrico (SIGMASTAT versión 2.0, disponible comercialmente de Jandel Scientific, San Rafael, CA). La actividad agonista y antagonista de estrógeno se valoró comparando el peso húmedo uterino a través de los grupos de tratamiento usando un ANOVA paramétrico sobre datos transformados loglo. Los datos se transformaron para cumplir presunciones de normalidad y homogeneidad de varianza del ANOVA paramétrico. Se determinó que era significativo el valor F (p < 0,05) y se realizó un ensayo de intervalo múltiple de Student-Newman-Kuels para determinar la presencia de diferencias significativas entre los grupos de tratamiento. Puesto que los pesos corporales finales no eran significativamente diferentes a través de grupos de tratamiento (p = 0,999), no se compararon las relaciones peso uterino:peso corporal.
Se determinó que el compuesto de ensayo actúa como un aonista/antagonista de estrógeno mezclado. La respuesta uterotrófica era submáxima en comparación con la vista con el estrógeno de referencia, 17\beta-estradiol. La respuesta uterotrófica submáxima, incluso con niveles de dosis elevados, es característica de agonistas de estrógeno parciales. Cuando se ensayó el compuesto de ensayo en combinación con 17\beta-estradiol, se observó una inhibición parcial de la respuesta uterotrófica en los tres niveles de dosis; por ello, el compuesto de ensayo poseía actividad antagonista de estrógeno. Sin embargo, el compuesto de ensayo no inhibió completamente la respuesta uterotrófica estimulada por 17\beta-estradiol; implicando que es un agonista/antagonista de estrógeno mezclado en este bioensayo.
4.2.1.4 Eficacia antagonista de receptor de estrógeno en modelo de xenoinjerto MCF-7
Se implantan subcutáneamente tumores mamarios humanos MCF-7 de episodioss in vivo existentes en 95 ratones Ncr-nu hembras. Se implanta un glóbulo de 17-\beta-estradiol (Innovative Research of America) en el lado opuesto al tumor. Ambos implantes se realizan el mismo día.
Se inicia el tratamiento cuando los tamaños de tumores están entre 75 mg y 200 mg. Se calcula el peso de tumor según la fórmula del volumen de un elipsoide,
\frac{l \ x \ w^{2}}{2}
en la que l y w son las dimensiones mayor y menor del tumor y se supone una densidad de tumor unitaria. Los compuestos de ensayo se administran BID: q7h x 2, con una preparación de fármaco por semana. Los compuestos de ensayo se guardan a +4ºC entre inyecciones. La dosis de compuesto de ensayo se determina según el peso corporal del animal individual en cada día de tratamiento. Los pesos corporales brutos se determinan dos veces por semana, partiendo del primer día de tratamiento. Se realizan diariamente comprobaciones de mortalidad. Los ratones que tienen tumores mayores de 4.000 mg, los ratones que tienen tumores ulcerados y los ratones moribundos se sacrifican antes del día de terminación del estudio. La duración del estudio está limitada a 60 días desde el día de implantación del tumor, pero la terminación puede tener lugar antes según se determine necesario. Se realiza una hemorragia terminal de todos los ratones supervivientes el último día del experimento. Se realiza un análisis estadístico de los datos recogidos, incluyendo mortalidad, pesos corporales individuales brutos y medios de grupo en cada pesada, pesos de tumores individuales y peso de tumor de grupo mediano en cada medición, la incidencia de regresiones parciales y completas y supervivientes exentos de tumor y el retraso calculado del crecimiento del tumor mediano para cada grupo.
4.2.1.5 Modelo de rata OVX
Este modelo evalúa la capacidad de un compuesto para invertir la disminución de la densidad de huesos y el aumento de los niveles de colesterol resultantes de ovariectomía (Black, Author et al. 1994; Willson, Author et al. 1997). Se ovariectomizan ("ovx") ratas hembras de tres meses de edad, y se administran diariamente compuestos de ensayo por vía subcutánea comenzando un día post-cirugía. Se usan como grupos testigo animales operados simuladamente y animales ovx con vehículo testigo administrado. Después de 28 días de tratamiento, se pesan las ratas, se obtienen las ganancias de peso corporal totales y se someten los animales a eutanasia. Se miden marcadores de huesos sanguíneos (por ejemplo, osteocalcina y fosfatasa alcalina específica para huesos), colesterol total y marcadores de orina (por ejemplo, desoxipiridinolina y creatinina). Se obtienen también los pesos húmedos uterinos. Se separan tibias y fémures de los animales de ensayo para exploración por tomografía computerizada periférica cuantitativa u otra medición de la densidad mineral de huesos. Se comparan los datos de los animales ovx y con vehículo de ensayo con los animales testigo simulado y ovx para determinar efectos estrogénicos/antiestrogénicos específicos para tejidos de los compuestos de ensayo.
4.2.2 Ensayos in vitro 4.2.2.1 Ensayos de unión de ER\alpha
Se diluyó receptor ER\alpha (\sim0,2 mg/ml, Affinity Bioreagents) hasta aproximadamente 2 x 10^{-3} mg/ml en solución salina tamponada con fosfato ("PBS") a un pH de 7,4. Se añadieron después cincuenta microlitros de la solución de ER\alpha-PBS a cada uno de los pocillos de una placa rápida (Wallac SCINTISCTRIPS). Las placas se cerraron y guardaron en la oscuridad a 4ºC durante 16-18 horas. Se separa la solución de receptor tamponada inmediatamente antes de usar, y se lavan las placas 3 veces con 200 microlitros por pocillo de PBS. El lavado se realiza típicamente usando una distribución lenta de reactivo en los pocillos para evitar quitar el receptor de la superficie del pocillo.
Para examen de genoteca, se mezclaron 150 microlitros de ^{3}H-estradiol 1 nM (New England Nuclear, Boston, MA) en Tris-HCl 20 mM, EDTA 1 mM, 10% de glicerol, monotioglicerol 6 mM, KCl 5 mM, pH 7,8 con 50 microlitros del compuesto de ensayo (en el mismo tampón) en una placa de microtitulación de 96 pocillos (Costar 3794), produciendo una concentración final de estradiol de 0,6 nM. Además, se añadieron también varias diluciones de estradiol, centradas en la IC_{50} de 1-2 nM a pocillos individuales para generar una curva estándar. Se sacudieron suavemente las placas para mezclar los reactivos. Se añadió un total de 150 microlitros de cada uno de los pocillos a los pocillos correspondientes de las placas de ER\alpha prerrevestidas. Se cerraron las placas (Packard 6005185) y se incubaron los componentes de los pocillos a temperatura ambiente durante 4 horas o a 4ºC durante la noche. Se leyó directamente el ligando unido a receptor después de incubar usando un contador de escintilación (TRILUX, Wallac). La cantidad de ligando unido a receptor se determinó directamente, es decir, sin separación de ligando unido del libre. Si se requerían estimaciones de ligando unido y libre, se separó el sobrenadante de los pocillos, se añadió escintilante líquido y se contaron separadamente los pocillos en un contador de escintilación líquida.
4.2.2 Ensayos de unión de ER\beta
Se diluyó receptor ER\beta (\sim0,2 mg/ml, Affinity Bioreagents) hasta aproximadamente 2 x 10^{-3} mg/ml en solución salina tamponada con fosfato ("PBS") a un pH de 7,4. Se añadieron después cincuenta microlitros de la solución de ER\beta-PBS a cada uno de los pocillos de una placa rápida (Wallac SCINTISCTRIPS). Las placas se cerraron y guardaron en la oscuridad a 4ºC durante 16-18 horas. Se separa la solución de receptor tamponada inmediatamente antes de usar, y se lavan las placas 3 veces con 200 ml por pocillo de PBS. El lavado se realiza típicamente usando una distribución lenta de reactivo en los pocillos para evitar quitar el receptor de la superficie del pocillo.
Para examen de genoteca, se mezclaron 150 microlitros de ^{3}H-estradiol 1 nM (New England Nuclear, Boston, MA) en Tris-HCl 20 mM, EDTA 1 mM, 10% de glicerol, monotioglicerol 6 mM, KCl 5 mM, pH 7,8 con 50 microlitros del compuesto de ensayo (en el mismo tampón) en una placa de microtitulación de 96 pocillos (Costar 3794), produciendo una concentración final de estradiol de 0,6 nM. Además, se añadieron también varias diluciones de estradiol, centradas en la IC_{50} de 1-2 nM a pocillos individuales para generar una curva estándar. Se sacudieron suavemente las placas para mezclar los reactivos. Se añadió un total de 150 microlitros de cada uno de los pocillos a los pocillos correspondientes de las placas de ER\beta prerrevestidas. Se cerraron las placas (Packard 6005185) y se incubaron los componentes de los pocillos a temperatura ambiente durante 4 horas o a 4ºC durante la noche. Se leyó directamente el ligando unido a receptor después de incubar usando un contador de escintilación (TRILUX, Wallac). La cantidad de ligando unido a receptor se determinó directamente, es decir, sin separación de ligando unido del libre. Si se requerían estimaciones de ligando unido y libre, se separó el sobrenadante de los pocillos, se añadió escintilante líquido y se contaron separadamente los pocillos en un contador de escintilación líquida.
4.2.2.3 Ensayos de transactivación de ER\alpha/ER\beta 4.2.2.3.1 Construcción de células CHO transfectadas
Las células CHO transfectadas mencionadas antes se derivaron de células CHO KI de la American Type Culture Collection ("ATCC", Rockville, MD). Las células transfectadas se modificaron para contener los siguientes vectores plásmidos: (1) pKCRE con ADN para el receptor de estrógeno humano, (2) pAG-60-neo con ADN para la proteína que conduce a resistencia a neomicina, (3) pRO-LUC con ADN para el promotor de oxitocina de rata y para proteína de luciferasa de luciérnaga, y (4) pDR2 con ADN para la resistencia que conduce a resistencia a higromicina. Todas las transformaciones con estas células CHO modificadas genéticamente se realizaron bajo contención de rec-VMT según las líneas guía de la COGEM (Commissie Genetische Modificatie). El examen se realizó en ausencia de estradiol (estrogenicidad) o en presencia de estradiol (anti-estrogenicidad).
Reactivos
Se prepararon los siguientes reactivos usando agua ultrapura (calidad mili-Q):
1. Medio de cultivo
Se disolvió en agua polvo MEM/HAM F12 de Dulbecco (12,5 g/l; Gibco, Paisley, R.U.). Se añadieron bicarbonato sódico (2,5 gramos/litro ("g/l")), L-glutamina (0,36 g/l) y piruvato sódico (5,5 x 10^{-2} g/l). Este medio se suplementó con una mezcla acuosa (0,50 ml/l de medio) de etanolamina (2,44 ml/l), selenita sódica (0,9 mg/ml) y 2-mercaptoetanol (4,2 ml/l). Se ajustó el pH del medio en 7,0 ± 0,1 con NaOH o HCl (1 mol/l), y se esterilizó el medio mediante filtración con membrana usando un filtro que tenía poros de 0,2 \mum. El medio de cultivo libre de suero resultante se guardó a 4ºC.
2. Solución de antibióticos
Se disolvieron sulfato de estreptomicina (25 g; Mycofarm, Delft, Países Bajos) y penicilina sódica G (25 g; Mycofarm) en 1 l de agua y se esterilizaron por filtración con membrana usando un filtro que tenía poros de 0,2 \mum.
3. Suero de becerro bovino definido suplementado ("DBCSS")
DBCSS (Hyclone, Utah), esterilizado por el fabricante, se inactivó por calentamiento durante 30 min a 56ºC con mezclado cada 5 min. Se guardaron a -20ºC partes alícuotas de 50 ml y 100 ml.
4. DBCSS tratado con carbón vegetal ("cDBCSS")
Se lavó carbón vegetal (0,5 g; Norit A) con 20 ml de agua (3 veces) y se suspendió después en 200 ml de tampón Tris. Para revestir, se disolvieron 0,05 g de dextrano (T70; Pharmacia, Suecia) en una suspensión que se agitó continuamente durante 3 horas a temperatura ambiente. La suspensión de carbón vegetal revestida con dextrano resultante se centrifugó durante 10 min a 8.000 N/kg. Se separó el sobrenadante y se añadieron al residuo 100 ml de DBCSS. Se agitó la suspensión durante 30 min a 45ºC bajo condiciones asépticas. Tras agitar, se separó el carbón vegetal por centrifugación durante 10 min a 8.000 N/Kg. El sobrenadante se esterilizó por filtración con membrana usando un primer filtro que tenía un tamaño de poros de 0,8 \mum, seguida por filtración con un segundo filtro que tenía un tamaño de poros de 0,2 \mum. El cDBCSS inactivado por calor, esterilizado, se guardó a -20ºC.
5. Tampón Tris
Se disolvió trometamina ("Tris", 1,21 g; 10 mmoles) en aproximadamente 950 ml de agua. El pH de la solución se ajustó en 7,4 usando HCl (0,2 moles/l) y se elevó el volumen a 1 l con agua adicional. Este tampón se preparó reciente antes de usar.
6. Solución de sustrato de luclite
Se obtuvo de una fuente comercial (Packard, Meriden, CT) un juego de luminiscencia de luclite, desarrollado para mediciones de actividad de luciferasa de luciérnaga en placas de microtitulación. Se añadieron a cada matraz de sustrato diez mililitros de la solución de tampón descrita antes.
Preparación de células transfectadas
En condiciones asépticas, el medio de cultivo descrito antes se suplementó con solución de antibióticos (2,5 ml/l) y cDBCSS inactivado por calor (50 ml/l) para dar medio completo. Un vial de las células CHO recombinantes descritas antes se tomó de la cepa de semillas en nitrógeno líquido y se le dejó descongelarse en agua a aproximadamente 37ºC. Se inoculó un matraz Roux (80 cm^{3}) con aproximadamente 5 x 10^{5} células viables/ml en medio completo. El matraz se inundó con CO_{2} al 5% en aire hasta resultar un pH de 7,2-7,4. Las células se incubaron seguidamente a 37ºC. Durante este período, el medio completo se renovó dos veces.
Tras la incubación, el cultivo de células se tripsinizó e inoculó con una dilución 1:10 en un nuevo matraz (cultivo de células de 180 cm^{3}) y con 5 x 10^{3} células con 100 \mul de medio completo por pocillo en una placa de cultivo blanca de 96 pocillos para ensayos de transactivación. Las placas de 96 pocillos se incubaron durante dos días. Se desarrollaron las células como una monocapa en los fondos de los pocillos y alcanzaron confluencia después de dos días. Después de un período de cultivo de células de 20 pasadas, se tomaron nuevas células de la cepa de semillas en nitrógeno líquido.
4.2.2.3.2 Ensayo de compuestos Ensayo de estrogenicidad
Se realizaron experimentos en grupos de tres bloques, cada bloque en una placa de microtitulación separada. Cada bloque incluía los siguientes cuatro grupos
\newpage
Grupo Contenido
1 \begin{minipage}[t]{140mm} Un grupo de transactivación de cuatro pocillos, conteniendo cada uno etanol y células transfectadas. Este grupo se usó para estimar la transactivación total.\end{minipage}
2 \begin{minipage}[t]{140mm} Un grupo de transactivación total de cuatro pocillos que contenían beta-estradiol (1 x 10^{-7} M) y células transfectadas. Este grupo se usó para estimar la transactivación total de células.\end{minipage}
3 \begin{minipage}[t]{140mm} Tres grupos estándares de cinco pocillos cada uno, conteniendo cinco concentraciones diferentes de células no transfectadas y transfectadas.\end{minipage}
4 \begin{minipage}[t]{140mm} Grupos de compuestos de ensayo o referencia (n grupos, n \leq 21) de tres pocillos cada uno, conteniendo tres concentraciones diferentes de compuesto de ensayo o referencia y células transfectadas.\end{minipage} 
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadieron mediante pipeta partes alícuotas de diez \mul de compuestos testigo, estándar, de ensayo y referencia a pocillos de los grupos relevantes como se ha definido antes. Cada uno de los pocillos incluía 190 \mul de medio completo.
\vskip1.000000\baselineskip
Grupo Contenido
1 Etanol
2 Solución estándar en etanol (10^{-9} M, para elevar a una concentración final de 10^{-4} M).
3 \begin{minipage}[t]{140mm} Soluciones estándares en etanol (0,47 x 10^{-11} M, 0,95 x 10^{-11} M, 1,95 x 10^{-11} M, 3,9 x 10^{-11} M y 7,8 x 10^{-11} M, para ser elevadas a 0,47 x 10^{-8} M, 0,95 x 10^{-8} M, 1,95 x 10^{-8} M, 3,9 x 10^{-8} M y 7,8 x 10^{-8} M respectivamente).\end{minipage}
4 \begin{minipage}[t]{140mm} Compuesto de ensayo o referencia en seis concentraciones diferentes 1 x 10^{-5} M, 3,16 x 10^{-6} M, 1 x 10^{-6} M, 3,16 x 10^{-7} M, 1 x 10^{-7} M, 3,16 x 10^{-8} M, respectivamente\end{minipage} 
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo de anti-estrogenicidad
Se realizaron experimentos en grupos de tres bloques, cada bloque en una placa de microtitulación separada. Cada bloque incluía los siguientes cuatro grupos, conteniendo cada grupo estradiol, 1, 3, 5 (10)-estratrieno-3, 17-\beta-diol (10^{-10} M) en la mezcla de reacción final.
\vskip1.000000\baselineskip
Grupo Contenido
1 \begin{minipage}[t]{140mm} Un grupo de transactivación de cuatro pocillos, conteniendo cada uno etanol y células transfectadas. Este grupo se usó para estimar la transactivación total.\end{minipage}
2 \begin{minipage}[t]{140mm} Un grupo de grupo de transactivación completamente inhibido de cuatro pocillos que contenían ICO 164,384 (10^{-6} M) y células transfectadas. Este grupo se usó para estimar la inhibición completa de la transactivación.\end{minipage}
3 \begin{minipage}[t]{140mm} Tres grupos estándares de cinco pocillos cada uno, conteniendo cinco concentraciones diferentes de células no transfectadas y transfectadas.\end{minipage}
4 \begin{minipage}[t]{140mm} Grupos de compuestos de ensayo o referencia (n grupos, n \leq 21) de tres pocillos cada uno, conteniendo tres concentraciones diferentes de compuestos ensayo o referencia referencia y células transfectadas.\end{minipage}
Se añadieron mediante pipeta partes alícuotas de diez \mul de compuestos testigo, estándar, de ensayo y referencia a pocillos de los grupos relevantes como se ha definido antes. Cada uno de los pocillos incluía 190 \mul de medio completo.
\newpage
Grupo Contenido
1 Etanol
2 Solución estándar en etanol (10^{-9} M, para elevar a una concentración final de 10^{-4} M).
3 \begin{minipage}[t]{140mm} Soluciones estándares en etanol (0,47 x 10^{-11} M, 0,95 x 10^{-11} M, 1,95 x 10^{-11} M, 3,9 x 10^{-11} M y 7,8 x 10^{-11} M, para ser elevadas a 0,47 x 10^{-8} M, 0,95 x 10^{-8} M, 1,95 x 10^{-8} M, 3,9 x 10^{-8} M y 7,8 x 10^{-8} M respectivamente).\end{minipage}
4 \begin{minipage}[t]{140mm} Compuesto de ensayo o referencia en seis concentraciones diferentes 1 x 10^{-5} M, 3,16 x 10^{-6} M, 1 x 10^{-6} M, 3,16 x 10^{-7} M, 1 x 10^{-7} M, 3,16 x 10^{-8} M, respectivamente\end{minipage}
Las placas de microtitulación se sacudieron durante al menos 15 minutos para asegurar la disolución de todos los compuestos. Simultáneamente, se añadieron a 40 ml de medio completo 100 \mul de estradiol, 1, 3, 5 (10)-estratrieno-3, 17-\beta-diol (10^{-7} M), se sacudieron y se equilibró a 37ºC. Se añadieron aproximadamente 100 \mul de esta solución a placas de cultivo blancas de microtitulación sembradas el día precedente con 10^{4} células transfectadas en 100 \mul de medio completo. Las placas de cultivo blancas de microtitulación se saqcudieron suavemente durante al menos 15 minutos y se incubaron durante 16 h a 37ºC en la oscuridad bajo una atmósfera humidificada inundada con 5% de CO_{2} en aire.
Finalmente, se separaron 200 \mul de medio completo de las placas de cultivo de microtitulación, mientras que se añadieron 50 \mul de solución de sustrato de LUCLITE a los 50 \mul restantes de medio y células. Después de diez minutos, la lisis de células era sustancialmente completa. Después de cerrar la parte superior de la placa, se midió la actividad de luciferasa con un contador de luminiscencia. Cada muestra se contó una vez durante 2,5 s usando un contador de escintilación (luminiscencia). Todas las mediciones de luminiscencia se registraron en una teleimpresora.
4.2.2.3.3 Evaluación de respuestas
Los valores de recuento se corrigen a una placa estandarizada y se convierten en número de destellos de luz por segundo ("cps"). Para cada bloque (placa de microtitulación), se calcularon los valores de cps medios para los grupos de transactivación totales y no específicos. Para cada concentración de compuesto estándar (separado para cada pocillo), de ensayo y de referencia, se calculó el porcentaje de actividad de transactivación con relación a la actividad de transactivación de estradiol, 1, 3, 5 (10)-estratrieno-3, 17-\beta-diol específica máxima usando la fórmula:
\frac{\text{cps (compuesto estándar/ensayo) - cps medios (transactivación no específica)}}{\text{cps (transactivación total) - cps medios (transactivación no específica)}} x 100
El porcentaje en los tres bloques se evaluó estadísticamente usando el análisis de un ensayo de líneas paralelas de 3 puntos en bloques. Con el fin de cumplir mejor los requisitos para este análisis, los porcentajes se sustituyeron por sus valores logit. Se ensayó la linealidad de las curvas log concentración-respuesta para los compuestos estándar, de ensayo y de referencia; y también el paralelismo de estas últimas curvas con la curva para el compuesto estándar. Si no se encontraron una curvatura significativa ni desviación significativa del paralelismo en niveles de 0,01, se calculó la activación de transactivación relatica del compuesto de ensayo con respecto a estradiol, 1, 3, 5 (10)-estratrieno-3, 17-\beta-diol (relación de eficacia), junto con el intervalo de confianza del 95%. Para ensayos de antagonistas, se calculó la eficacia inhibidora relativa de la actividad de transactivación del compuesto de ensayo con respecto al antagonista estándar, ICI 164,384. Para compuestos que muestran una actividad agonista o antagonista significativa en estos exámenes iniciales, se determinaron valores EC_{50} más precisos generando curvas de doce puntos con diluciones de 3 veces de los compuestos. En este caso, el intervalo de concentraciones se seleccionó em base a la actividad del compuesto en los exámenes iniciales.
Se determinó que los siguientes compuestos de la invención eran activos (es decir, que tienen valores agonistas o antagonistas de EC_{50} \leq 4 x 10^{-6} M (ER\alpha) y/o EC_{50} \leq 4 x 10^{-6} M (ER\beta) frente a alguno o ambos ER\alpha y ER\beta: 4-{5-[2-(4-hidroxifenil)etil]-4-bencilisoxazol-3-il}fenol, 4-[4-etil-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol, 4-[5-(4-hidroxifenil)-4-bencilisoxazol-3-il]fenol, 4-[3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]fenol, 4-{5-(4-hidroxifenil)-4-[4-(2-piperidiletoxi)fenil]isoxazol-3-il}fenol, 3-[4,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol, 2-[4,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol, 4-[3-(4-hidroxifenil)-4-metilisoxazol-5-il]fenol, 4-[3-(4-hidroxifenil)-5-fenilisoxazol-4-il]fenol, 4-[5-(4-fluorofenil)-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]fenol, 4-{4-(4-hidroxifenil)-5-[3-(trifluorometoxi)fenil]isoxazol-3-il}fenol, 4-{4-(4-hidroxifenil)-5-[4-(trifluorometoxi)fenil]isoxazol-3-il}fenol, 4-[5-(4-hidroxifenil)-4-(feniltiometil)isoxazol-3-il]fenol, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona, 5-(4-hidroxifenil)-3-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-[2-(hidroxipiperidil)etoxi]fenil cetona, 3-(4-hidroxifenil)-5-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 4-[2-(hidroxipiperidil)etoxi]fenil cetona, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-hidroxifenil cetona, 4-hidroxifenil 3-(4-hidroxifenil)-5-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il cetona, 4-[4-bromo-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol, 4-[(4-bromometil)-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol, 4-[4-(hidroximetil)-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol, 2-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol, 3-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol, 2-[3-(4-hidroxifenil)-4-metilisoxazol-5-il]fenol, 3-[3-(4-hidroxifenil)-4-metilisoxazol-5-il]fenol, 4-(5-(4-hidroxifenil)-4-{[4-(2-piperidiletoxi)fenil]metil}isoxazol-3-il)fenol, 2-[5-(4-hidroxifenil)-4-metilisoxazol-3-il]fenol, 4-[4-cloro-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-3-il]fenol, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-bencilcarboxamida, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N,N-dibutilcarboxamida, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-[3-(2-oxopirrolidinil)propil]carboxamida, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-(2-feniletil)carboxamida, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-[(4-hidroxifenil)metil]carboxamida, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-(3-piridilmetil)carboxamida,
[3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-(2-piridilmetil)carboxamida, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N,N-di-
metilcarboxamida, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-etilcarboxamida, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il] 4-(2-pirrolidiniletoxi)fenil cetona, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il] 4-(2-morfolin-4-iletoxi)fenil cetona, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-ciclopropilcarboxamida, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-ciclobutilcarboxamida, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il] 4-[2-(1-metilpirrolidin-2-il)etoxi]fenil cetona, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il] 4-[(1-metil(3-piperidil)metoxi]fenil cetona, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il] 4-[3-(4-metilpiperazinil)propoxi]fenil cetona, 3-etil-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol, 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-3-metilfenol, 3-bromo-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol, 3-butil-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol, 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-3-hexilfenol, 3-(2-bromopropil)-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-carbaldehído, 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-3-yodofenol, 3-cloro-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol, 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-fluorofenol, ácido 2-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-5-hidroxibenzoico, 2-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-5-hidroxibenzoato de etilo, 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-3-(metilsulfinil)fenol, 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-3-sulfanilfenol, 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-metilfenol, 2-butil-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol, 2-etil-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol, 2-bromo-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol, 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-hexilfenol, 2-cloro-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol, 5-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-hidroxibenzoato de etilo, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-metilfenil cetona, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 2-clorofenil cetona, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 3-clorofenil cetona, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-clorofenil cetona, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 2-fluorofenil cetona, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 3-nitrofenil cetona, 3,4-diclorofenil 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il cetona, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-butilfenil cetona, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(ter-butil)fenil cetona, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 2-hidroxifenil cetona, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-metoxifenil cetona, 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-3-feniltiofenol, 5-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-feniltiofenol, 4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-metiltiofenol, {4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenil} (metilsulfonil)amina, 5-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]-2-metoxibenzamida, 5-[4-etil-3-(4-metoxifenil)isoxazol-5-il]-2-hidroxibenzamida, 2-[4-etil-3-(4-metoxifenil)isoxazol-5-il]-5-hidroxibenzamida, cloruro de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 3-(2-piperidiletoxi)fenil cetona, cloruro de 5-(4-hidroxifenil)-3-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 3-(2-piperidiletoxi)fenil cetona, cloruro de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 3-(2-pirrolidiniletoxi)fenil cetona, cloruro de 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 3-[(1-metil(3-piperidil)metoxi]fenil cetona, cloruro de 3-(4-hidroxifenil)-5-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 3-[(1-metil(3-piperidil)metoxi]fenil cetona, 4-[4-etil-3-(4-hidroxi-2-metilfenil)isoxazol-5-il]-3-metilfenol, 4-[3-(4-hidroxifenil)-4-propilisoxazol-5-il]fenol y 4-[3-(4-hidroxifenil)-4-prop-2-enilisoxazol-5-il]fenol.
Ensayos de proliferación de células MCF-7
Este ensayo determina la actividad agonista/antagonista de estrógeno de un compuesto de ensayo por el efecto del compuesto de ensayo en la proliferación de células MCF-7 medido por la incorporación de 5-bromo-2'-desoxiuridina ("BrdU") en un formato de ensayo quimioluminiscente.
Se mantuvieron células MCF-7 (ATCC HTB-22) en cultivo de fase log usando medio DMEM/HamF12 (1/1 v/v) que se había suplementado con 10% de suero de bovino fetal ("FBS"), a 37ºC, y bajo una atmósfera del 5% de CO_{2}. Se pusieron las células en placas de 96 pocillos con una densidad de 7.000 células por pocillo. Después de 24 horas, se incubaron adicionalmente las células en medio DMEM/HamF12 exento de rojo fenol suplementado con 10% de FBS, que se había filtrado con carbón vegetal revestido de dextrano para empobrecer estrógeno endógeno (DCC-FBS). Las células se incubaron en este medio durante 24 horas más, en cuyo momento cualquier compuesto de ensayo en concentraciones variables para determinar la IC_{50} del compuesto. Se incubó cada compuesto de ensayo con las células en ausencia de estradiol (detección de actividad agonista de estrógeno) o en presencia de estradiol 1 nM (detección de actividad antagonista de estrógeno).
Las células se cultivaron en presencia de compuestos de ensayo durante 24 horas a 37ºC y bajo atmósfera del 5% de CO_{2}. La proliferación de células se detectó midiendo el nivel de incorporación de BrdU a ADN. Esto se consiguió usando un juego de reactivos disponible comercialmente (Boeringer Mannheim/Roche). El ensayo se realizó según la indicación de los fabricantes. Diez microlitros de reactivo de marcado BrdU, diluido según las indicaciones de los fabricantes, se añadieron directamente a cada pocillo, y se continuó la incubación durante cuatro horas. Se aspiraron después de los pocillos los medios de cultivo, y se añadieron 100 \mul del agente de fijación/desnaturalización del juego. Se fijaron las células durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se aspiraron de nuevo las placas, y se añadieron a cada pocillo 100 \mul de anticuerpo anti-BrdU marcado con peroxidasa del juego. Después de una hora, se lavaron seis veces las placas con solución salina tamponada con fosfato ("PBS"), y se añadieron 100 \mul de SUPERSIGNAL (un sustrato de peroxidasa quimioluminiscente, Pierce Chemical). Las placas se sacudieron durante diez minutos a temperatura ambiente, y se contaron las señales quimioluminiscentes resultantes usando un contador de escintilación TRILUX. Se determinó que dos compuestos de la invención, 4-{5-(4-hidroxifenil)-4-[4-(2-piperidiletoxi)fenil]isoxazol-3-il}fenol y 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona, ensayados usando el método descrito antes, tenían valores IC_{50} inferiores a 600 nM en presencia de estradiol 1 nM.
Así, se verá que la presente invención proporciona nuevos compuestos que tienen fuerte acción moduladora de receptores de estrógeno. Estos compuestos pueden emplearse en composiciones y métodos para tratar trastornos mediados por receptores de estrógeno, tales como osteoporosis, cáncer de pecho y endometrial, enfermedad de Alzheimer y aterosclerosis.
La descripción anterior es con fines de ilustración y no limitación. Los expertos en las técnicas relevantes de la presente invención (por ejemplo, la química orgánica, química medicinal, endocrinología y técnicas médicas) apreciarán de lo anterior que la presente invención abarca muchas realizaciones adicionales de la invención que no se han descrito explicitamente, pero que se proporcionan no obstante por las enseñanzas de la presente invención. Tales realizaciones adicionales incluyen, aunque sin limitarse a ellas, enfermedades mediadas por receptores de estrógeno distintas de osteoporosis, cáncer de pecho y endometrial, enfermedad de Alzheimer y aterosclerosis, que son prevenibles o tratables usando los compuestos, composiciones y métodos de la invención. Otros aspectos incluyen todavía compuestos que pueden diseñarse, sintetizarse y ensayar su efecto terapéutico o profiláctico usando las enseñanzas de la descripción anterior.
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Claims (20)

1. Un compuesto que tiene la fórmula:
13
o sus sales aceptables farmacéuticamente, en el que:
X_{1} y X_{2} se seleccionan independientemente del grupo constituido por nitrógeno y oxígeno de tal modo que si uno de los X_{1} y X_{2} es nitrógeno, el otro de los X_{1} y X_{2} es oxígeno para formar por ello una estructura de anillo isoxazol.
R_{1} es fenilo sustituido con un grupo 4-hidroxi y opcionalmente sustituido adicionalmente con un grupo seleccionado entre halógeno, nitro, ciano, alquilo inferior, halo(alquilo inferior), alquiloxi inferior, haloalquiloxi inferior, carboxi, (alquiloxi inferior)carbonilo, ariloxicarbonilo, (cicloalquilo inferior)oxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, heteroaralquiloxicarbonilo, (heterocicloalquilo inferior)oxicarbonilo, (alquilo inferior)sulfinilo, (alquilo inferior)sulfonilo, (alquilo inferior)tio, ariltio, (alquilo inferior)carboniloxi, arilcarboniloxi, aralquilcarboniloxi, heteroarilcarboniloxi, heteroaralquilcarboniloxi, (cicloalquilo inferior)carboniloxi, alquilsulfonilamino, (heterocicloalquilo inferior)carboniloxi, aminocarbonilo, (alquilo inferior)aminocarbonilo, arilaminocarbonilo, aralquilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo y heteroaralquilaminocarbonilo.
R_{3} es arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, (monoaril)alquilo, heteroaralquilo, (cicloalquil)alquilo o (cicloheteroalquil)alquilo, no sustituido o sustituido con un grupo seleccionado entre hidroxilo, nitro, amino, imino, ciano, halo, tio, tioamido, amidino, oxo, oxamidino, metoxamidino, imidino, guanidino, sulfonamido, carboxilo, formilo, alquilo inferior, haloalquilo inferior, alcoxi inferior, haloalcoxi inferior, (alcoxi inferior)alquilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, aralquilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroaralquilcarbonilo, alquiltio, aminoalquilo y cianoalquilo y, cuando R_{3} es arilo o (monoaril)alquilo, pueden seleccionarse adicionalmente sustituyentes entre ariloxi y ariltio, en donde cualquiera de estos sustituyentes puede sustituirse adicionalmente con carboxilo, halo, nitro, amino, ciano, hidroxilo, alquilo inferior, alcoxi inferior, aminocarbonilo, -SR, tioamido, -SO_{3}H,
-SO_{2}R o cicloalquilo, en el que R es hidrógeno, hidroxilo o alquilo inferior; y
R_{2} se selecciona del grupo constituido por halo, ciano, nitro, tio, amino, carboxilo, formilo, arilo sustituido y aralquilo no sustituido o sustituido, heteroarilo, heteroaralquilo, alquenilo, alquilo inferior, (alquilo inferior)carboniloxi, arilcarboniloxi, heteroarilcarboniloxi, cicloalquilcarboniloxi, cicloheteroalquilcarboniloxi, arilcarboniloxi, heteroaralquilcarboniloxi, (cicloalquil)alquilcarboniloxi, (cicloheteroalquil)alquilcaboniloxi, (alquilo inferior)carbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, cicloalquilcarbonilo, cicloheteroalquilcarbonilo, aralquilcarbonilo, heteroaralquilcarbonilo, (cicloalquil)alquilcarbonilo, (cicloheteroalquil)alquilcarbonilo, (alquilo inferior)aminocarbonilo, arilaminocarbonilo, aralquilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo, heteroaralquilaminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, (cicloalquil)alquilaminocarbonilo, cicloheteroalquilaminocarbonilo, (cicloheteroalquil)alquilaminocarbonilo, (alquilo inferior)carbonilamino, arilcarbonilamino, heteroarilcarbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, cicloheteroalquilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, (cicloalquil)alquilcarbonilamino, (cicloheteroalquil)alquilcarbonilamino, (alquilo inferior)amino, arilamino, atralquilamino, heteroarilamino, heteroaralquilamino, (alquilo inferior)sulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, cicloalquilsulfonilo, cicloheteroalquilsulfonilo, aralquilsulfonilo, heteroaralquilsulfonilo, (cicloalquil)alquilsulfonilo, (cicloheteroalquil)alquilsulfonilo, (alquilo inferior)sulfinilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, cicloalquilsulfinilo, cicloheteroalquilsulfinilo, aralquilsulfinilo, heteroaralquilsulfinilo, (cicloalquil)alquilsulfinilo, (cicloheteroalquil)alquilsulfinilo, (alquilo inferior)oxi, ariloxi, heteroariloxi, cicloalquiloxi, cicloheteroalquiloxi, aralquiloxi, heteroaralquiloxi, (cicloalquil)alquiloxi, (cicloheteroalquil)alquiloxi, (alquilo inferior)tio, ariltio, heteroariltio, cicloalquiltio, cicloheteroalquiltio, aralquiltio, heteroaralquiltio, (cicloalquil)alquiltio, (cicloheteroalquil)alquiltio, (alquilo inferior)tiocarbonilo, ariltiocarbonilo, heteroariltiocarbonilo, cicloalquiltiocarbonilo, cicloheteroalquiltiocarbonilo, aralquiltiocarboniloxitiocarbonilo, heteroalquiltiocarbonilo, (cicloalquil)alquiltiocarbonilo, (cicloheteroalquil)alquiltiocarbonilo, heteroarilcarboniltio, cicloalquilcarboniltio, cicloheteroalquilcarboniltio, aralquilcarboniltiooxicarboniltio, heteroaralquilcarboniltio, (cicloalquil)alquilcarboniltio, (cicloheteroalquil)alquilcarboniltio, (alquilo inferior)oxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroriloxicarbonilo, cicloalquiloxicarbonilo, cicloheteroalquiloxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo, heteroaralquiloxicarbonilo, (cicloalquil)alquiloxicarbonilo, (cicloheteroalquil)alquiloxicarbonilo, imino(alquilo inferior), iminociclaalquilo, iminocicloheteroalquilo, iminoaralquilo, iminoheteroaralquilo, (cicloalquil)iminoalquilo, (cicloheteroalquil)iminoalquilo, (cicloiminoalquil)alquilo, (cicloiminoheteroalquil)alquilo, oximino(alquilo inferior), oximinocicloalquilo, oximinocicloheteroalquilo, oximinoaralquilo, oximonoheteroaralquilo, (cicloalquil)oximinoalquilo, (ciclooximinoalquil)alquilo, (cicloximinoheteroalquil)alquilo, (cicloheteroalquil)oximinoalquilo, (alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilo, di(alquilo inferior)amino(alquilo inferior)oxifenilo, (cicloamino(alquilo inferior))(alquilo inferior)oxifenilo, (heterocicloalquilo)(alquilo inferior)oxifenilo, (heterocicloalquilo)(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo y halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo, en los que, cuando dicho grupo está sustituido, los sustituyentes se seleccionan entre hidroxilo, nitro, amino, imino, ciano, halo, tio, tioamido, amidino, oxo, oxamidino, metoxamidino, imidino, guanidino, sulfonamido, carboxilo, formilo, alquilo inferior, halo(alquilo inferior), alcoxi inferior, halo(alcoxi inferior), (alcoxi inferior)alquilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, aralquilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroaralquilcarbonilo, alquiltio, aminoalquilo y cianoalquilo, en los que estos sustituyentes pueden sustituirse adicionalmente con carboxilo, halo, nitro, amino, ciano, hidroxilo, alquilo inferior, alcoxi inferior, aminocarbonilo, -SR, tioamido, -SO_{3}H, -SO_{2}R o cicloalquilo, en los que R es hidrógeno, hidroxilo o alquilo inferior;
en los que, para cada uno de los R_{1}, R_{2} y R_{3}, arilo se refiere a grupos aromáticos monocíclicos y policíclicos, o sistemas de anillos condensados que tienen al menos un anillo aromático, y de 3 a 14 átomos de carbono de la cadena principal; y heteroarilo se refiere a grupo aromáticos monocíclicos y policéclicos, o sistemas de anillos condensados que tienen al menos un anillo aromático, de 3 a 14 átomos de carbono de la cadena principal y de uno a cuatro heteroátomos como átomos del anillo en un anillo aromático;
y en los que dichos grupos alquilo inferior comprenden de 1 a 10 átomos de carbono.
2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{2} se selecciona del grupo constituido por (alquilo inferior)oxi, ariloxi, heteroariloxi, cicloalquiloxi, cicloheteroalquiloxi, aralquiloxi, heteroaralquiloxi, (cicloalquil)alquiloxi y (cicloheteroalquil)alquiloxi opcionalmente sustituidos, (alquilo inferior)tio, ariltio, heteroariltio, cicloalquiltio, cicloheteroalquiltio, aralquiltio, heteroaralquiltio, (cicloalquil)alquiltio, (cicloheteroalquil)alquiltio, aralquilo, halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilo, di(alquilo inferior)amino(alquilo inferior)oxifenilo, (cicloamino(alquilo inferior))(alquilo inferior)oxifenilo y (heterocicloalquil)(alquilo inferior)oxifenilo, fenilcarbonilo, (heterocicloalquil)(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo, hidroxifenilcarbonilo, halofenilcarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, di(alquilo inferior)aminocarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, hidroxifenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, (alquilo inferior)fenilcarbonilo, halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo y nitrofenilcarbonilo.
3. El compuesto de las reivindicaciones 1 o 2, en el que R_{1} se selecciona entre: 4-hidroxifenilo, 2-metil-4-hidroxifenilo, 2-aminocarbonil-4-hidroxifenilo, 3-aminocarbonil-4-hidroxifenilo, 3-cloro-4-hidroxifenilo, 3-n-hexil-4-hidroxifenilo, 3-etil-4-hidroxifenilo, 2-metilsulfinil-4-hidroxifenilo, 2-etil-4-hidroxifenilo, 2-carboxi-4-hidroxifenilo, 3-fluoro-4-hidroxifenilo, 2-yodo-4-hidroxifenilo y 2-n-butil-4-hidroxifenilo.
4. El compuesto de las reivindicaviones 1 o 2, en el que R_{1} es 4-hidroxifenilo.
5. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{3} es cicloalquilo, cicloheteroalquilo, (cicloalquil)alquilo o (cicloheteroalquil)alquilo opcionalmente sustituidos.
6. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R_{3} es arilo, heteroarilo, (monoaril)alquilo o heteroaralquilo opcionalmente sustituidos.
7. El compuesto de la reivindicación 6, en el que R_{3} es heteroarilo o heteroaralquilo opcionalmente sustituidos.
8. El compuesto de la reivindicación 6, en el que R_{3} es arilo o (monoaril)alquilo opcionalmente sustituidos.
9. El compuesto de la reivindicación 8, en el que R_{3} está sustituido con al menos un grupo hidroxilo, alquiloxi, ariloxi, tio, alquiltio o ariltio.
10. El compuesto de la reivindicación 9, en el que R_{3} es fenilo, feniloxi(alquilo inferior) o fenil(alquilo inferior).
11. El compuesto de la reivindicación 10, en el que R_{3} está sustituido adicionalmente con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por halógeno, nitro, ciano, alquilo inferior, halo(alquilo inferior), alquiloxi inferior, haloalquiloxi inferior, carboxi, (alquiloxi inferior)carbonilo, ariloxicarbonilo, (cicloalquilo inferior)oxicarbonilo, aralquiloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, heteroaralquiloxicarbonilo, (heterocicloalquilo inferior)oxicarbonilo, (alquilo inferior)sulfinilo, (alquilo inferior)sulfonilo, (alquilo inferior)tio, ariltio, (alquilo inferior)carboniloxi, arilcarboniloxi, aralquilcarboniloxi, heteroarilcarboniloxi, heteroaralquilcarboniloxi, (cicloalquilo inferior)carboniloxi, alquilsulfonilamino, (heterocicloalquilo inferior)carboniloxi, aminocarbonilo, (alquilo inferior)aminocarbonilo, arilaminocarbonilo, aralquilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo y heteroaralquilaminocarbonilo.
12. El compuesto de la reivindicación 11, en el que R_{3} está sustituido adicionalmente con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por halógeno, nitro, ciano, alquilo inferior, halo(alquilo inferior), alquiloxi inferior, haloalquiloxi inferior, carboxi, (alquilo inferior)tio, aminocarbonilo y (alquilo inferior)sulfinilo.
13. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que R_{2} se selecciona del grupo constituido por halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilo, di(alquilo inferior)amino(alquilo inferior)oxifenilo y (heterocicloalquil)(alquilo inferior)oxifenilo opcionalmente sustituidos.
14. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que R_{2} se selecciona del grupo constituido por fenilcarbonilo, (heterocicloalquil)(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo, hidroxifenilcarbonilo, halofenilcarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, di(alquilo inferior)aminocarbonilo, fenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, hidroxifenil(alquilo inferior)aminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, (alquilo inferior)fenilcarbonilo, halo(alquilo inferior)sulfonil(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo y nitrofenilcarbonilo opcionalmente sustituidos.
15. El compuesto de las reivindicaciones 13 o 14, en el que R_{2} es (heterocicloalquil)(alquilo inferior)oxifenilo o (heterocicloalquil)(alquilo inferior)oxifenilcarbonilo.
16. Un compuesto según la reivindicación 1, que es 4-[3-(4-hidroxifenil)-5-fenilisoxazol-4-il]fenol, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona, 5-(4-hidroxifenil)-3-(4-metoxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-[3-(2-oxopirrolidinil)propil]carboxamida, [3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il]-N-ciclobutilcarboxamida, 3-bromo-4-[4-etil-3-(4-hidroxifenil)isoxazol-5-il]fenol, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-metoxifenil cetona, 3,5-bis(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 2-clorofenil cetona o 3-(4-hidroxi-2-metilfenil)-5-(4-hidroxifenil)isoxazol-4-il 4-(2-piperidiletoxi)fenil cetona.
17. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, de uso en el tratamiento de un trastorno mediado por un receptor de estrógeno en un mamífero.
18. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz terapéuticamente de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 en un excipiente eficaz farmacéuticamente.
19. El uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 en la fabricación de un medicamento de uso en un método para tratar o prevenir un trastorno mediado por un receptor de estrógeno en un mamífero.
20. Un uso según la reivindicación 19, en el que dicho trastorno es osteoporosis, cáncer dependiente de estrógeno, enfermedad de Alzheimer o enfermedad dependiente de estrógeno.
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