ES2253838T3 - Utilizacion de compuestos para proteger la piel de la inmunosupresion inducida por uv. - Google Patents

Abstract

Utilización de un compuesto seleccionado del grupo constituido por equol, deshidroequol y extracto de trébol, o una combinación de compuestos seleccionados del grupo constituido por genisteína y -(1, 3)(1, 6)- glucano, equol y -(1, 3)(1, 6)-glucano y extracto de trébol y -(1, 3)(1, 6)-glucano, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento, mejora, profilaxis y/o prevención de la inmunosupresión inducida en la piel por la radiación UV.

Description

Utilización de compuestos para proteger la piel de la inmunosupresión inducida por UV.

Esta invención hace referencia a la utilización de ciertos compuestos y composiciones de los mismos para la elaboración de un medicamento para el tratamiento, mejora, profilaxis y/o prevención de la inmunosupresión inducida en la piel por la radiación UV, tal como la provocada por la exposición al sol.

La exposición de la piel a la radiación ultravioleta provoca un daño grave al ADN epidérmico, que puede tener consecuencias irreversibles a largo plazo si permanece sin reparación, y puede dar lugar a un deterioro específico del sistema inmunitario de linfocitos T.

En la piel con una exposición crónica a la radiación UV, el daño causado al ADN culmina en carcinogénesis, siendo el tumor más frecuente en humanos el carcinoma de células basales (CCB), seguido del carcinoma de células escamosas (CCE) y más raramente melanoma maligno. Por ejemplo, aproximadamente dos tercios de la población australiana padecen cáncer de piel no-melanoma en algún momento de su vida, aumentando esta proporción al disminuir la latitud, ocupando el primer puesto mundial. Australia tiene también la incidencia más alta de melanoma del mundo.

La inmunosupresión provocada por la exposición a UV parece ser un requisito previo para la promoción del cáncer no-melanoma y melanoma. En ella participan diversos mecanismos, tal como la formación de ácido cis-urocánico epidérmico en la piel irradiada con UV, la persistencia de dímeros de pirimidina en el ADN epidérmico y la super-regulación de eicosanoides inflamatorios como el PGE2. Se comprende que la fotoinmunosupresión permite que la célula tumoral iniciada evada el reconocimiento y el rechazo por mecanismos inmunológicos normales, manteniéndose en estado latente durante períodos prolongados y proliferando finalmente para dar lugar a un tumor.

Los pacientes inmunocomprometidos, ya sea por razones genéticas (xeroderma pigmentoso) o farmacológicas (receptores de trasplante de órganos) [ver Boyle et al (1984) Lancet, 31 marzo, 702-705 y Kinlen et al (1994) Invest Dermatol, Br. J. Med. ii 1461-1466], tienen una incidencia mayor de cáncer de piel. Por otra parte, las zonas de piel expuestas al sol en humanos están inmunológicamente mermadas en comparación con la piel no expuesta [O'Dell et al (1980) Arch. Dermatol., 116, 559-561], y el nivel de capacidad de reacción inmunológica de los pacientes de cáncer de piel está reducido en comparación con pacientes con cáncer no de piel. [Yoshikawa et al, Invest. Dermatol., 95:530-536 (1990). Se sabe ahora que la deficiencia inmunitaria después de la exposición a UV se debe a una deficiencia de la actividad de las células Th1, mientras que las respuestas Th2 se mantienen activas [Ullrich, S.E. (1996) Photochem. Photobiol. 64, 254-258].

La exposición crónica de la piel a la radiación solar está bien documentada como la causa del fenómeno de fotoenvejecimiento, tal como el engrosamiento de la piel, el desecamiento de la piel, el aumento de la pigmentación de la piel, las manchas cutáneas y las lesiones cutáneas.

La exposición a la radiación UV, tal como la radiación UV solar crónica provoca los bien conocidos efectos de enrojecimiento de la piel con la inflamación consiguiente conocida como eritema. Esto se conoce a menudo como "quemaduras del sol" que son dolorosas, a menudo con picor y que generalmente dan lugar a que se pele la piel que ha sido sometida a irradiación solar crónica.

El eritema es especialmente frecuente en personas de piel clara y en niños. El eritema crónico puede predisponer a las personas a trastornos cutáneos tales como los cánceres de piel más adelante. Dependiendo de la coloración de la piel de un individuo, el eritema se puede producir en tan sólo 20 minutos de exposición al sol.

Con un mayor conocimiento de los peligros de la exposición de la piel a la radiación UV , se ha dispuesto durante varios años de los "bloqueadores solares" o filtros solares. Los productos con filtro solar se aplican a la piel antes de la exposición al sol. Habitualmente los filtros solares contienen en su composición agentes de filtro solar tipo UVA y/o agentes de filtro solar tipo UVB. Los agentes de filtro solar tipo UVA típicos incluyen algunas benzofenonas y dibenzilmetanos. Los agentes de filtro solar tipo UVB típicos incluyen para-aminobenzoatos sustituidos, ésteres alquílicos de para-metoxicinnamato y/o varios ésteres de ácido salicílico. Generalmente, los agentes de filtro solar se utilizan en cantidades eficaces para proporcionar el nivel deseado de protección del eritema causado por la radiación UVA y/o UVB. En WO 96/14826 se describen ejemplos de muchos agentes conocidos de filtro solar.

La composición de los filtros solares puede contener agentes físicos de filtro solar, tal como vaselina roja o dióxido de titanio, en cantidades tales como el 2-5% en peso de la composición total. También se pueden utilizar en dichas composiciones sílice precipitada, caolín, talco, creta y otros por el estilo.

Se ha propuesto una variada gama de compuestos como absorbentes de la radiación UV para emplear en composiciones de filtro solar. Entre estas muchas clases de agentes de filtro solar se han mencionado los compuestos flavonoides, incluidos los compuestos de isoflavona. Las investigaciones del solicitante indican que los compuestos de isoflavona muestran una escasa capacidad de absorción del UV, contribuyendo con tan sólo un factor de protección solar (FPS) de 1,5 unidades a las composiciones de filtro solar.

Ha surgido inquietud en cuanto a la estabilidad a la luz de varios absorbentes de UV, a posibles efectos tóxicos de compuestos con exposición a largo plazo, a la complejidad y el coste de las formulaciones y a la eficacia global de las composiciones de filtros solares. Las composiciones de filtros solares precisan una aplicación específica a la piel antes de la exposición a la radiación UV. Si no se aplica el filtro solar, se aplica a la piel en cantidad insuficiente y/o el filtro solar desaparece de la piel, todo ello puede conducir a que se produzcan daños en la piel por la
acción UV.

Los filtros solares existentes en la actualidad no son todos eficaces en cuanto a proteger la piel de la exposición a UV, de modo que la deficiencia inmunitaria de la piel y las consecuencias potencialmente graves que pueden seguirse siguen sin resolverse.

Varias composiciones empleadas anteriormente en este campo y, en particular, las basadas en isoflavonas, se utilizan para el tratamiento del daño cutáneo inducido por la radiación UV. Por ejemplo, en DE 4432947 A se describen composiciones que contienen isoflavonas y sus usos para el tratamiento de la piel, concretamente en los campos de la cosmética y la medicina, tales como acné, rosácea, melanoma, alopecia y despigmentación. WO 97/46208 se refiere a un método de inhibición de los efectos peligrosos de la exposición a UV para la piel humana que incluye la aplicación tópica de una cantidad terapéuticamente eficaz de genisteína a la piel en un momento suficientemente próximo al momento de exposición a UV para inhibir el daño cutáneo inducido por UV a la piel, en particular las fotolesiones y el cáncer de piel inducidos por UV. Dicho método inhibe el eritema cutáneo en seres humanos y la expresión del ARNm de los proto-oncogenes c-fos y c-jun en ratones después de la exposición a UV.

JP 60061513 A revela composiciones que contienen 5-hidroxi-isoflavonas, preferiblemente genisteína o genistina y su utilización en composiciones cosméticas como agentes contra las quemaduras solares y para promover efectos de suavización de la piel. JP 07017847 A revela preparaciones externas que contienen una sustancia activa denominada ácido kójico y/o sus derivados y uno ó más extractos de origen diverso, entre los que se menciona el extracto de trébol. También revela que dichas preparaciones se utilizan como cosméticos para la prevención de arrugas con la renovación de la piel.

EP 0201956 A hace referencia a composiciones antioxidantes preparadas por extracción de antioxidantes naturales de sustratos vegetales y a los métodos correspondientes para el uso de los mismos como cosméticos y para fines de conservación de alimentos o terapéuticos. Por ejemplo, se revela un método de mejorar cosméticamente la textura de la piel consistente en el uso de un antioxidante soluble derivado de tejidos vegetales que es capaz de ser absorbido por la piel de los mamíferos donde reduce el nivel de peróxidos. En particular, las composiciones de antioxidantes, según PE 0201956 A, se pueden utilizar para proteger la piel del daño inducido por la radiación UV o para inhibir el desarrollo de tumores y en particular el cáncer de piel tal como el melanoma.

WO 93/23069 revela composiciones enriquecidas con genisteína, daidzeína, formononetina y biochanina A para promover la curación en casos de cáncer, síndrome premenstrual, menopausia o hipercolesterol.

WO 98/08503 revela determinados compuestos de isoflavona y el uso de los mismos en el tratamiento, profilaxis y/o prevención del síndrome menopáusico, incluidos sofocos, ansiedad y depresión, cambios de humor, sudores nocturnos, cefaleas, incontinencia urinaria, osteoporosis, del síndrome premenstrual, incluida la retención de líquidos, mastalgia cíclica y dismenorrea; síndrome de Reynaud, fenómeno de Reynaud, enfermedad de Buergers, espasmo de arterias coronarias, cefaleas de migraña, hipertensión, hipertrofia prostática benigna, cáncer de mama, cáncer uterino, cáncer de ovarios, cáncer testicular, aterosclerosis, enfermedad de Alzheimer, enfermedades inflamatorias, incluida la enfermedad inflamatoria intestinal, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, enfermedades reumáticas, incluida la artritis reumatoide, acné, calvicie, incluida la calvicie de patrón masculino, psoriasis y enfermedades relacionadas con estrés oxidante incluido el cáncer, ataque de infarto de miocardio, artritis y daño cutáneo inducido por la luz solar o cataratas.

WO 96/28476 revela un procedimiento para la producción de \beta-(1,3)(1,6)-glucano a partir de una fuente celular que contiene glucano junto con los usos/métodos de tratamiento que utilizan glucano, incluido el uso en el tratamiento de la ulceración cutánea o de fracturas óseas.

Sorprendentemente el solicitante ha descubierto que determinados compuestos de isoflavona cuando se aplican a la piel después de una exposición a UV o se administran por vía oral antes o después de la exposición a UV, en forma de composición para después del sol, protegen la piel de la inmunosupresión inducida por UV. También se ha encontrado que algunos extractos de soja y trébol protegen la piel de la inmunosupresión inducida por UV.

La invención proporciona el uso de un compuesto seleccionado del grupo formado por equol, deshidroequol y extracto de trébol o una combinación de compuestos seleccionados del grupo formado por genisteína y \beta-(1,3)(1,6)-glucano, equol y \beta-(1,3)(1,6)-glucano y extracto de trébol y \beta-(1,3)(1,6)-glucano para la elaboración de un medicamento para el tratamiento, mejora, profilaxis y/o prevención de la piel frente a la inmunosupresión inducida
por UV.

Dicho medicamento puede ser un medicamento tópico u oral. Preferiblemente, el medicamento incluye un portador farmacéuticamente aceptable.

La invención proporciona también el uso de una composición que incluye un compuesto seleccionado del grupo que consta de equol, deshidroequol, y extracto de trébol o una combinación de compuestos seleccionados del grupo formado por genisteína y \beta-(1,3)(1,6)-glucano, equol y \beta-(1,3)(1,6)-glucano y extracto de trébol y \beta-(1,3)(1,6)-glucano para la elaboración de una composición para el tratamiento, mejora, profilaxis y/o prevención de la piel frente a la inmunosupresión inducida por UV.

Dicha composición puede incluir un portador farmacéuticamente aceptable y es, preferiblemente, una composición de uso tópico.

Las composiciones de la presente invención no incluyen un absorbente de UV ni una variedad de absorbentes de UV añadidos con la finalidad de proteger frente a la irradiación UV. Tampoco incluyen las composiciones de esta invención compuestos estabilizadores que proporcionen estabilidad ante UV ni otro tipo de estabilidad para los compuestos absorbentes de UV dada la ausencia de tales compuestos en las composiciones de la presente in-
vención.

Son portadores dermatológicamente aceptables aquellos que son compatibles con la piel y que se pueden aplicar a la piel fácilmente por medios normales. Los componentes de dichos portadores incluyen, aunque sin limitarse a ellos, uno o más de los siguientes productos: agua, glicerol, alcohol, propilenglicol, alcoholes grasos, triglicéridos, ésteres de ácidos grasos y aceites minerales. Los portadores dermatológicamente aceptables pueden presentarse en forma de lociones, cremas, geles, espumas, líquidos acuosos de viscosidad variable, barras con base de ceras, aerosoles, barras a base de alcohol y otros por el estilo. Se pueden encontrar ejemplos de formulaciones bien conocidas en este campo en Balsam, M.S. y Sagrin, E. (editores) Cosmetic Science and Technology, segunda edición, volumen 1 y 2, Wiley-Interscience, división de John Wiley & Sons Inc, Nueva York, 1972 y Flick, E.W. Cosmetic and Tolletry Formulations, Noyse Publications 1984.

Los portadores dermatológicamente aceptables pueden incluir uno o más emolientes, emulsionantes, tensoactivos, ceras, espesantes, formadores de película, conservantes y perfumes. Dichos agentes son bien conocidos en el campo y se describen en Cosmetic Science and Technology y Cosmetic and Tolletry Formulations antes mencionados. Por ejemplo, en WO96/14826 se ofrecen más ejemplos de tales compuestos aditivos.

Un ejemplo de loción normal para aplicación tópica a la piel contiene lo siguiente:

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aceite de parafina	cera de abejas	trietanolamina
aceite de oliva	gliceril monoestearato
lanolina anhidra	ácido oleico
ácido esteárico	agua

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Los componentes enumerados arriba, a excepción del agua, pueden estar presentes en una cantidad comprendida aproximadamente entre el 0,01% y el 10% p/p. El agua puede estar presente en una cantidad comprendida entre aproximadamente el 20% y el 90% p/p. Los compuestos empleados en la invención pueden estar presentes en una loción como esta en una cantidad comprendida entre el 0,05% y el 10% p/p.

Las composiciones empleadas de acuerdo con la presente invención se pueden preparar fácilmente siguiendo procedimientos normales conocidos en este ámbito para la preparación de composiciones para aplicación tópica a la piel, por ejemplo, como describen Balsam, M.S. y Sagrin, E. (editores) Cosmetic Science and Technology, segunda edición, volumen 1 y 2, Wiley-Interscience, división de John Wiley & Sons Inc, Nueva York, 1972 y Flick, E.W. Cosmetic and Tolletry Formulations, Noyse Publications 1984. A modo de ejemplo, las composiciones se pueden preparar mezclando los compuestos empleados en la invención (opcionalmente disueltos en un disolvente tal como DMSO, etanol, aceite de parafina, aceite de oliva u otros disolventes adecuados) y uno o más portadores dermatológicos aceptables por ejemplo disolviéndolo antes.

Los portadores farmacéuticamente aceptables y las formas de dosificación para administración oral son bien conocidas en este campo y se describen, por ejemplo, en Rémingtones Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Ed. Osol, 10ª edición. El portador puede ser un sólido o un líquido o ambos y está formulado preferiblemente con compuestos empleados en la invención como una dosis unitaria, por ejemplo, un comprimido, que puede contener desde un 0,5% hasta un 60% en peso del componente activo. Uno o más componentes activos se pueden formular con uno o más portadores mediante técnicas de farmacia bien conocidas. Las formulaciones se pueden preparar mezclando a fondo y uniformemente el compuesto activo con un portador líquido o sólido dividido en partículas muy finas o con ambos y luego, si es necesario, dándole forma a la mezcla resultante para formar una dosificación unitaria. Los comprimidos moldeados pueden, por ejemplo, hacerse moldeando juntos los componentes pulverizados humedecidos con un aglomerante líquido inerte. Las composiciones se pueden administrar ante y/o después de la exposición a UV. Las composiciones se administran cómodamente a diario, por ejemplo con una administración diaria de 0,05 mg a
500 mg al día de componentes activos.

Los compuestos empleados en la invención se pueden preparar según los procedimientos revelados en WO
98/08503. Los compuestos empleados en la invención se pueden purificar a partir de orina humana siguiendo el procedimiento de Jaonnou et al (1995) J. Steroid. Biochem. Molec. Biol., 54, 167-184.

Los extractos de soja o de trébol se pueden preparar según WO 93/23069. Como se describe en WO 93/23069 la soja o el trébol se pueden someter a extracción con una mezcla de disolvente orgánico (tal como etanol, cloroformo, acetona, acetato de etilo y otros por el estilo) y agua. La proporción de disolvente en agua puede ser desde el 0,1% hasta el 99,9%, preferiblemente entre el 40% y el 60%.

Los tréboles preferibles son el trébol rojo (T. pratense) y trébol subterráneo (T. subterranean).

La materia prima vegetal se puede desecar, desmenuzar o si no, fragmentar en trozos minúsculos y luego someterse a extracción. La capa de disolvente orgánico resultante después de la extracción se elimina por ejemplo por destilación y la capa acuosa y el material residual de la capa orgánica se concentra como se desee, por ejemplo por destilación. Con respecto a la soja, las habas se pueden tratar para eliminar la cáscara (usando por ejemplo un molino giratorio que separa las habas en dos cotiledones y un hipocótilo que se pueden separar entre sí). Los cotiledones y, opcionalmente los hipocótilos, se pueden fragmentar en trozos pequeños y luego someterse a extracción como se describió anteriormente. Los extractos pueden incluir uno o más compuestos empleados en la in-
vención.

Los extractos se formulan con un portador dermatológicamente aceptable como los aquí descritos para producir una composición para aplicación a la piel, o formularse para administración oral. Las composiciones pueden contener entre un 0,01% y un 10% p/p de extracto.

Cuando la composición de la presente invención incluya \beta-(1,3)(1,6)-glucano (tal como el preparado según WO 96/28476), puede estar presente en una cantidad comprendida entre el 0,1% y el 30% p/p. Si está en partículas, el glucano se puede disolver en DMSO al 0,1% u otro disolvente apropiado. Tales composiciones pueden presentar sinergismo entre los componentes respectivos dando lugar a una protección muy potente del daño cutáneo inducido por UV.

El daño cutáneo inducido por UV se refiere a cualquier daño que la luz solar u otra radiación UV produzca en la piel, ya sea de un ser humano o de un animal. Dicho daño incluye eritema (enrojecimiento e hinchazón de la piel, a menudo mencionado como quemadura solar), fotoenvejecimiento de la piel tal como la hiperqueratinización y elastosis y lesiones cutáneas tales como las lesiones precancerosas y cancerosas, por ejemplo, queratosis actínica y cánceres de piel pre-malignos y malignos.

El uso de los compuestos para proteger la piel frente a la inmunosupresión inducida por UV de acuerdo con la invención incluye la administración oral a un individuo, ya sea antes y/o después de la exposición a UV, de los compuestos empleados en la invención.

Las composiciones se aplican a la piel después de la exposición al sol y se aplican generalmente después de cada exposición de la piel o, si no, al final de un día después de una serie de exposiciones de la piel al sol.

Las composiciones se pueden aplicar a la piel por cualquier medio conveniente conocido en la materia, tal como frotando, haciendo pasadas con bola giratoria (roll-on), rociándolo, aplicándolo con un paño u otros por el estilo. El modo de aplicación dependerá generalmente de la naturaleza de la formulación, si es una crema, espuma, loción, barra de aplicación con bola giratoria (roll-on), líquido de viscosidades variables u otros por el estilo.

O’Dell et al (1980 Arch. Dermatol. 110, 559-561) demostraron que las áreas de piel expuestas al sol están inmunológicamente mermadas con respecto a la piel no expuesta. Un modelo estándar para comprobar la inmunosupresión, es decir, un modelo con respecto a la inmunosupresión humana es el ratón lampiño. Una prueba estándar en el modelo de ratón lampiño es la reacción de hipersensibilidad de contacto (HSC) a un irritante inmunitario tal como la oxazolona ((Asherson y Ptak, Immunology, (1968) 15:405-416). El compuesto oxazolona induce una enérgica respuesta inmunitaria en el ratón lampiño que se puede medir por la hinchazón de la oreja. La supresión inmunitaria por la luz UV u otros agentes se puede examinar fácilmente en el modelo. Véase, por ejemplo, Kondo, S., McKenzie, R.C., Sauder, D.N., J. Invest. Dermatol., 103:811-814; Reeve et al, Cancer Letts., 108:271-279 (1996); y Reeve et al, J. Invest. Dermatol., 103:801-806 (1994). Como se mostrará en los ejemplos no limitantes que siguen, las composiciones que incluyen compuestos empleados en la invención fueron activas en el tratamiento/prevención/mejora de la inmunosupresión inducida por UV en el modelo de ratón lampiño, que como se comentó antes es directamente referible a la situación en la piel humana, por ejemplo, Yoshikawa et al, J. Invest. Dermatol.,
95:530-536 (1990).

Las cepas de ratón lampiño como los ratones I IRA-Skin-1 son un modelo de ratón estándar utilizado para estudiar el daño solar provocado en la piel humana [Canfleld et al, Pathology, 17:613-616 (1985)]. La exposición del ratón lampiño a la luz UV imita la "quemadura solar" producida en seres humanos. Con un tratamiento de irradiación continuada este daño en curso queda reflejado en un engrosamiento progresivo de la piel que histológicamente simula la hiperqueratinización y la elastosis relacionadas con el fotoenvejecimiento y la piel expuesta al sol de modo crónico en humanos. Varias semanas después de finalizar el régimen de luz ultravioleta empiezan a aparecer tumores pre-malignos. A lo largo de un período de tiempo subsiguiente se produce un desarrollo progresivo de tumores pre-malignos y malignos cuya histología y comportamiento se parecen mucho a las queratosis actínicas y cánceres de piel pre-malignos y malignos que se desarrollan en los seres humanos como respuesta a la luz
solar.

Esta invención se describirá ahora con referencia a los siguientes ejemplos no limitantes que ilustran varias versiones de la invención.

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Ejemplo 1

Preparación de lociones que contienen composiciones empleadas en la invención

Se preparó una loción ("loción base o de prueba") mezclando los siguientes componentes:

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	ml		ml
aceite de parafina	80	gliceril monoestearato	60
aceite de oliva	60	ácido oleico	25
lanolina anhidra	60	agua	1.200
ácido esteárico	58	trietanolamina	27
cera de abejas	10

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Los compuestos empleados en la invención se disolvieron en dimetilsulfóxido (DMSO) al 0,1% y se añadieron a la loción base en una cantidad de entre el 0,01% y el 10% p/p.

Se preparó la loción de prueba "A" que contenía 20 \muM de varios compuestos empleados en la invención disueltos en DMSO al 0,1% (un disolvente primario para los compuestos). La loción de prueba "B" se preparó conteniendo
20 \muM de varios compuestos empleados en la invención disueltos en DMSO al 0,1% en combinación con una solución de \beta(1,3)(1,6)-glucano (10% p/p).

Se preparó un extracto de trébol rojo siguiendo el procedimiento de WO93/23069. El extracto acuoso o un extracto en partículas o desecado disuelto en DMSO al 0,1% se añade a la loción base en una cantidad del 0,5% p/p.

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Ejemplo 2

Inmunosupresión inducida por UV

La reacción de HSC en ratones es un modelo estándar de inmunosupresión y es un modelo representativo para la inmunosupresión humana (Yoshikawa et al, Invest. Dermatol., 95:530-536 (1990)).

La reacción de HSC se llevó a cabo según el protocolo de Reeve et al, Immunology, 78:99-104 (1993). Se dividieron en dos grupos de tratamiento ratones albinos lampiños Sh:HR-1. El primer grupo de tratamiento, denominado grupo 1, no se sometió a irradiación UV y recibió 0,2 ml de la loción de prueba "A" o bien de loción de prueba "B" pintada sobre la piel dorsal en cuatro días consecutivos (esto es, 4 \mumol/ratón o aproximadamente 0,1 \mumol/cm^{2}). El segundo grupo de tratamiento, grupo 2, fue irradiado con UV con una dosis de eritema mínimo de luz UV que simula el efecto tóxico de la luz del sol en la piel. Después de cada tratamiento diario con UV, se aplicaron 0,2 ml de solución de tratamiento a la piel dorsal como para el tratamiento del grupo 1. Se midió el espesor del pliegue cutáneo de la parte media dorsal cada veinticuatro horas para valorar el edema del eritema. Se indujo la HSC frente a oxazolona en la piel abdominal siete días después del primer tratamiento seguido de inducción en las orejas el día 15 y se determinó la hinchazón promedio de las orejas como medida de la respuesta
inmunitaria.

En este experimento, en la loción de prueba "A" se examinaron los compuestos genisteína, daidzeína, equol, tetrahidrodaidzeína, ODMA (O-desmetil-angolensina), deshidroequol y extracto de trébol. El equol, genisteína y extracto de trébol se probaron también en la loción de prueba "B". Los resultados expresados a continuación se presentan como porcentaje de supresión de la HSC, medida con respecto al grupo 1 de tratamiento no expuesto a UV, que es inducida por la exposición a UV. Los resultados son los siguientes:

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Horas de inducción en la oreja	% supresión de la HSC
	18	21
Loción base	24	37
Genisteína	14	13
Daidzeína	27	37
Equol	12	5
Tetrahidrodaidzeína	33	31
Deshidroequol	10	4
Extracto de trébol	8	9
Genisteína y glucano	11	9
Equol y glucano	8	3
Extracto de trébol y glucano	5	5

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Los anteriores resultados muestran claramente que la genisteína, el deshidroequol y el equol tienen una actividad importante en la prevención/mejora de la inmunosupresión inducida por UV, así como el extracto de trébol. En cambio, los compuestos daidzeína y tetrahidrodaidzeína no mejoran los efectos de la inmunosupresión inducida
por UV.

El eritema/edema se midió el día cuatro y el día siete de los grupos de tratamiento. Estos resultados demuestran que la genisteína y el equol suprimieron el eritema/edema. Por ejemplo, siete días después del tratamiento con la loción base "A", el promedio del espesor del pliegue cutáneo fue de seis unidades (es decir, 0,006 pulgadas), con la loción que contenía daidzeína el incremento promedio del pliegue cutáneo fue de siete unidades y con tetrahidrodaidzeína el promedio del espesor del pliegue cutáneo fue de cinco unidades. En cambio con equol, genisteína, deshidroequol y ODMA hubo un incremento promedio negativo del pliegue cutáneo de aproximadamente 0,2, lo que equivale a un incremento prácticamente nulo del espesor del pliegue cutáneo. Este resultado demuestra que las composiciones que contienen compuestos empleados en la invención son eficaces para proteger frente al daño cutáneo inducido por UV, especialmente el eritema, edema y engrosamiento de la piel.

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Ejemplo 3

Las pruebas se realizaron en el centro de pruebas de fotobiología australiano de la Universidad de Sydney. Se estudiaron seres humanos en un solario controlado. Se estableció una rejilla usando puntos de coordenadas de referencia en la espalda de cada individuo, proporcionando de ese modo una serie de puntos de tratamiento en la espalda de cada paciente donde se pudiera comprobar el potencial para reducir el eritema de las composiciones correspondientes a la invención.

Se disolvió equol en DMSO y se añadió a la loción base "A" de modo que contuviera 100 \muM de ingrediente activo y 0,5% de DMSO.

Se hicieron aplicaciones tópicas en la espalda del paciente dentro de la rejilla de tratamiento que se estableció para proporcionar una serie de puntos de irradiación UV y posterior aplicación de las composiciones. La aplicación tópica consistió en 2 mg/cm^{2} de loción aplicada con firmeza seguido de una segunda aplicación de 2 mg/cm^{2} pero sin frotar. Cada tratamiento tópico fue por lo tanto de 0,4 nmoles/cm^{2} de equol.

El procedimiento de tratamiento fue el siguiente. El primer día de tratamiento se estableció una dosis de UV de eritema mínimo (DEM) para cada individuo, correspondiente al grado mínimo de luz UV que produce un enrojecimiento de la piel por determinación visual. A partir de este dato, que es específico para cada paciente, se calculó un nivel de eritema mínimo de 0,75 (0,75 x DEM). El primer día de tratamiento fue un lunes. Los posteriores tratamientos fueron los siguientes:

\newpage

Martes

Exposición de 3 x 3 puntos de piel a 0,75 DEM UV

Inmediatamente, a las cuatro horas y a las seis horas después del UV,

1

aplicación nula en tres puntos

2

aplicación tópica de la loción base a tres puntos

3

aplicación tópica de la loción con equol a tres puntos

según la técnica anterior.

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Miércoles

Evaluación del eritema (ninguno visible como se esperaba)

Repetición de la misma exposición 3 x 3 puntos de piel a 0,75 DEM UV

Inmediatamente, a las cuatro horas y a las seis horas después del UV, aplicación tópica de lociones como antes.

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Jueves

Evaluación del eritema visualmente clasificando la intensidad de color de los 3 x 3 puntos de piel

Repetición de la misma exposición de 3 x 3 puntos de piel a una DEM UV.

Aplicaciones tópicas como anteriormente.

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Viernes

Evaluación del eritema

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Los resultados demostraron un desarrollo de eritema progresivamente más intenso, alcanzando un punto máximo a las cincuenta y cinco horas y media que fue desapareciendo gradualmente. No hubo diferencia estadística entre la intensidad del eritema en puntos triplicados que recibieron UV solo, en comparación con los puntos que recibieron UV más loción base. Hubo una reducción significativa en la intensidad del eritema en los puntos que recibieron UV más una loción que contenía equol, en comparación con UV solo o loción base más UV.

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Intensidad promedio del eritema (n = 3) +/- SEM
Tiempo, horas	UV solo	UV + vehículo	UV + equol	SEM UV solo	SEM + vehículo	SEM + equol
48	0,3	0,33	0,21	0,08	0,07	0,04
52	0,58	0,67	0,21	0,14	0,18	0,04
55,5	1,5	1,25	0,67	0,29	0,31	0,18
71	1	1,17	0,67	0	0,36	0,27
75	1	1,04	0,38	0	0,44	1
77	0,67	1,17	0,54	0,14	0,36	0,21

Los resultados anteriores fueron significativos cuando se examinaron por el test t de Student en tiempos de inspección individuales. Estos resultados demuestran que las composiciones que contienen equol se pueden utilizar en tratamiento terapéutico para evitar el daño producido por la radiación UV después de la exposición el sol en seres humanos.

Ejemplo 4

Se llevó a cabo la reacción de HSC como en el Ejemplo 2. Se dividieron en ocho grupos de tratamiento ratones albinos lampiños Sh:HR-1 de la manera siguiente:

1.

loción base + DEM (UVB) durante 3 días

2.

glucano (20%) en loción base + 1 DEM (UVB) durante 3 días

3.

Equol (2,5 \muM) en loción base + 1 DEM (UVB) durante 3 días

4.

Equol (2,5 \muM) + glucano (20%) en loción base + 1 DEM (UVB) durante 3 días

5.

loción base y sin irradiación durante tres días (control)

6.

glucano (20%) en loción base y sin irradiación durante tres días (control)

7.

Equol (2,5 \muM) en loción base y sin irradiación durante tres días (control)

8.

Equol (2,5 \muM) + glucano (20%) en loción base y sin irradiación durante tres días (control)

Los días 7 y 8 los ratones fueron sensibilizados con oxazolona en alcohol al 2% (100 \mul/ratón). El día 14, se practicó la inducción en las orejas con oxazolona al 2% (20 \mul/ratón). El día 15 se midió en las orejas el espesor del pliegue cutáneo y la supresión de la hipersensibilidad crónica. Los resultados indicaron que tanto el glucano como el equol fueron eficaces en cuanto a disminuir el porcentaje de supresión de hipersensibilidad crónica y el espesor del pliegue cutáneo y que en combinación proporcionaban una protección potenciada en comparación con los grupos de control.

\vskip1.000000\baselineskip

Loción	% de supresión de HSC	Diferencia en espesor del pliegue cutáneo con respecto al día 1 (mm)
Sólo loción base	41%	47,7
Sólo glucano	4,5%	25
Sólo equol	6%	29,8
Glucano + equol	2,5%	16,8

\vskip1.000000\baselineskip

En toda esta especificación, a no ser que el contexto exija otra cosa, la palabra "comprende" o variaciones tales como "comprenden" o "comprendiendo" o el término "incluye" o variaciones del mismo, se entenderá que supone la inclusión de un elemento o número entero señalado o de un grupo de elementos o números enteros, pero no la exclusión de ningún otro elemento o número entero ni grupo de elementos o números enteros. A este respecto, al interpretar el alcance de las reivindicaciones, una versión en la que se añadan una o más características a cualquiera de las reivindicaciones debe considerarse como dentro del ámbito de la invención dado que las características esenciales de la invención tal como se reivindican quedan incluidas en dicha versión.

Claims (7)

1. Utilización de un compuesto seleccionado del grupo constituido por equol, deshidroequol y extracto de trébol, o una combinación de compuestos seleccionados del grupo constituido por genisteína y \beta-(1,3)(1,6)-glucano, equol y \beta-(1,3)(1,6)-glucano y extracto de trébol y \beta-(1,3)(1,6)-glucano, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento, mejora, profilaxis y/o prevención de la inmunosupresión inducida en la piel por la radiación UV.

2. Una utilización según la reivindicación 1, en donde el medicamento es un medicamento tópico.

3. Una utilización según la reivindicación 1, en donde el medicamento es un medicamento oral.

4. Una utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el medicamento comprende un portador farmacéuticamente aceptable.

5. Utilización de una composición que comprende un compuesto seleccionado del grupo constituido por equol, deshidroequol y extracto de trébol, o una combinación de compuestos seleccionados del grupo constituido por genisteína y \beta-(1,3)(1,6)-glucano, equol y \beta-(1,3)(1,6)-glucano y extracto de trébol y \beta-(1,3)(1,6)-glucano, para la elaboración de una composición para el tratamiento, mejora, profilaxis y/o prevención de la inmunosupresión inducida en la piel por la radiación UV.

6. Una utilización según la reivindicación 5, en donde la composición comprende un portador dermatológicamente aceptable.

7. Una utilización según la reivindicación 6 en donde la composición es una composición tópica.