ES2228629T3

ES2228629T3 - Derivados de imidazol y su uso como inhibidores de raf-quinasa.

Info

Publication number: ES2228629T3
Application number: ES00977660T
Authority: ES
Inventors: David Kenneth Smithkline Beecham Pharmaceutic Dean; Peter John Smithkline Beecham Pharmaceutica Lovell; Andrew Kenneth Smithkline Beecham Pharmaceut Takle
Original assignee: SmithKline Beecham Ltd
Current assignee: SmithKline Beecham Ltd
Priority date: 1999-11-22
Filing date: 2000-11-20
Publication date: 2005-04-16
Anticipated expiration: 2020-11-20
Also published as: PL355912A1; NO20022318L; ATE382044T1; ATE281451T1; NO20022318D0; BR0015532A; US20070010534A1; DE60037597D1; CZ20021746A3; NZ518032A; DE60015594T2; WO2001038324A2; HUP0203403A3; DE60037597T2; HUP0203403A2; AU1623601A; IL149150A; EP1232153A2; CN1543346A; WO2001038324A3

Abstract

Un compuesto de fórmula (I): **(Fórmula)** en la cual X es O, CH2, S o NH, o el resto X-R1 es hidrógeno; V es CH o N; R1 es hidrógeno, alquilo C1-6, arilo, arilo(alquilo C1-6), heterociclilo, heterociclilo(alquilo C1-6), heteroarilo o heteroarilo(alquilo C1-6), cualquiera de los cuales puede estar opcionalmente sustituido; R2 y R3 representan independientemente metilo; R4 es hidrógeno, X-R1, halógeno, alquilsulfinilo C1-6 opcionalmente sustituido, CH2OR5, dialquilamino C1-6, N (R6)C(O)R7, N(R6)S(O)2R8, o un anillo N-heterociclilo de 5 a 7 eslabones que opcionalmente contiene otro heteroátomo seleccionado entre O, S y NR9; Y es NR10R11, NR10C(Z)NR10R11, NR10COOR11 o NR10SO2R11; Ar es fenilo o un anillo heteroarilo de 5 ó 6 eslabones, cualquiera de los cuales puede estar no sustituido o sustituido con halógeno, hidroxi, hidroxi(aquilo C1-6) o alcoxi C1-6; n es 0; R5 es hidrógeno, -C(Z)R12 o alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, arilo(alquilo C1-6) opcionalmente sustituido, o S(O)2R8; R6 es hidrógeno o alquilo C1-6; R7 es hidrógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-7, arilo, arilo(alquilo C1-6), heteroarilo, heteroarilo(alquilo C1-6), heterociclilo o heterociclilo(alquilo C1-6); R8 es alquilo C1-6, cicloalquilo C3-7, arilo, arilo(alquilo C1-6), heteroarilo, heteroarilo(alquilo C1-6), heterociclilo o heterociclilo(alquilo C1-6); R9 es hidrógeno, ciano, alquilo C1-4, cicloalquilo C3-7 o arilo; R10, R11 y R12 se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-7, heterociclilo, heterociclilo(alquilo C1-6), heterociclilo(alquenilo C2-6), arilo, arilo(alquilo C1-6), arilo(alquenilo C2-6), heteroarilo, heteroarilo(alquilo C1-6), y heteroarilo(alquenilo C2-6), cualquiera de los cuales puede estar opcionalmente sustituido; o NR10R11 pueden representar un anillo heterociclilo de 5 a 7 eslabones que opcionalmente contiene otro heteroátomo seleccionado entre O, N y S; y Z es oxígeno o azufre; arilo es fenilo o naftilo; heterociclilo se selecciona de pirrolidina, piperidina, piperazina, morfolina, imidazolidina y pirazolidina; heteroarilo se selecciona de pirrol, quinolina, isoquinolina, piridina, pirimidina, furano, tiofeno, oxazol, tiazol, tiadiazol, triazol, imidazol y bencimidazol; cuando R1, R4, R5, R10, R11 y R12 son grupos alquilo y alquenilo sustituidos, los sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en arilo, heteroarilo, heterociclilo, alcoxi C1-6, halo(alcoxi C1-6), (alquil C1-6)tio, ariloxi, aril.

Description

Derivados de imidazol y su uso como inhibidores de Raf-quinasa.

Esta invención trata de nuevos compuestos y su uso como productos farmacéuticos, en particular como inhibidores de la Raf-quinasa, para el tratamiento de enfermedades neurotraumáticas.

Las Raf-proteína-quinasas son compuestos clave de las vías de transducción de señales, mediante las cuales unos estímulos extracelulares específicos producen respuestas celulares precisas en células de mamífero. Los receptores de la superficie celular activados activan las proteínas ras/rap en el aspecto interno de la transmembrana, que a su vez reclutan y activan las proteínas Raf. Las proteínas Raf activadas fosforilan y activan las proteína-quinasas intracelulares MEK1 y MEK2. A su vez, las MEK activadas catalizan la fosforilación y la activación de la proteína-quinasa activada por mitógenos p42/p44 (MAPK). Se conocen una diversidad de sustratos citoplásmicos y nucleares de MAPK activada, que contribuyen directa o indirectamente a la respuesta celular a un cambio en el entorno. Se han identificado tres genes distintos en mamíferos, que codifican las proteínas Raf: A-Raf, B-Raf y C-Raf (también conocido como Raf-1), y también se conocen las isoformas variantes que se producen como resultado de una rotura diferencial del mRNA.

Se ha sugerido el uso de inhibidores de las Raf-quinasas para su uso en la interrupción del crecimiento de células tumorales, y por tanto en el tratamiento de cánceres, por ejemplo linfoma histiocítico, adenocarcinoma de pulmón, cáncer de pulmón de células pequeñas, y carcinoma pancreático y de mama; y también en el tratamiento y/o profilaxis de trastornos asociados con la degeneración neuronal resultado de acontecimientos isquémicos, incluyendo isquemia cerebral tras una parada cardíaca, accidentes cerebrovasculares y demencia tras múltiples infartos, y también después de acontecimientos isquémicos cerebrales como los que se producen como resultado de lesiones en la cabeza, cirugía y/o durante el parto.

El documento PCT/EP00/03730 describe el uso de inhibidores de la Raf-quinasa en el tratamiento de enfermedades neurotraumáticas.

El documento WO 00/26209 describe 4-fenil-5-pirimidinilimidazoles antiinflamatorios e inmunosupresores, que incluyen:

éster fenilmetílico del ácido [1-[4-(4-fluorofenil)-5-[2-(metiltio) -4-pirimidinil]-1H-imidazol-2-il]ciclohexil]carbámico;

éster fenilmetílico del ácido [1-[4-(4-fluorofenil)-5-[2-(metilsulfinil) -4-pirimidinil]-1H-imidazol-2-il]ciclohexil]carbámico;

éster fenilmetílico del ácido [1-[4-(4-fluorofenil)-5-[2-[[(1R) -1-feniletil]amino]-4-pirimidinil]-1H-imidazol-2-il]ciclohexil]carbámico;

4-[2-(1-aminociclohexil)-5-(4-fluorofenil)-1H-imidazol-4-il]-N-[(1R) -1-feniletil]-2-pirimidinamina;

4-[2-(1-aminociclohexil)-5-(4-fluorofenil)-1H-imidazol-4-il]-N-[(1S) -1-feniletil]-2-pirimidinamina;

4-[2-(1-aminociclohexil)-5-(4-fluorofenil)-1H-imidazol-4-il] -N-(3-metilfenil)-2-pirimidinamina;

4-[2-(1-amino-1-metiletil)-5-(4-fluorofenil)-1H-imidazol-4-il]-N-[(1R) -1-feniletil]-2-pirimidinamina; y

4-[2-(1-amino-1-metiletil)-5-(4-fluorofenil)-1H-imidazol-4-il]-N-[(1S) -1-feniletil]-2-pirimidinamina.

El documento WO 99/01449 describe 4,5-diarilimidazoles 2-sustituidos antiinflamatorios e inmunosupresores, que incluyen:

éster fenilmetílico del ácido [1-[4-(4-fluorofenil)-5-(4-piridinil) -1H-imidazol-2-il]ciclohexil]carbámico; y

[1-[4-(4-fluorofenil)-5-(4-piridinil)-1H-imidazol-2-il]ciclohexanamida.

Los inventores han descubierto un grupo de compuestos nuevos que son inhibidores de las Raf-quinasas, y en concreto son inhibidores de la B-Raf-quinasa.

Según la invención, se proporciona un compuesto de fórmula (I):

1

en la cual

X es O, CH_{2}, S o NH, o el resto X-R^{1} es hidrógeno;

V es CH o N;

R^{1} es hidrógeno, alquilo C_{1-6}, arilo, arilo(alquilo C_{1-6}), heterociclilo, heterociclilo(alquilo C_{1-6}), heteroarilo o heteroarilo(alquilo C_{1-6}), cualquiera de los cuales puede estar opcionalmente sustituido;

R^{2} y R^{3} representan independientemente metilo;

R^{4} es hidrógeno, X-R^{1}, halógeno, alquilsulfinilo C_{1-6} opcionalmente sustituido, CH_{2}OR^{5}, dialquilamino C_{1-6}, N(R^{6})C(O)R^{7}, N(R^{6})S(O)_{2}R^{8}, o un anillo N-heterociclilo de 5 a 7 eslabones que opcionalmente contiene otro heteroátomo seleccionado entre O, S y NR^{9};

Y es NR^{10}R^{11}, NR^{10}C(Z)NR^{10}R^{11}, NR^{10}COOR^{11} o NR^{10}SO_{2}R^{11};

Ar es fenilo o un anillo heteroarilo de 5 ó 6 eslabones, cualquiera de los cuales puede estar no sustituido o sustituido con halógeno, hidroxi, hidroxi(alquilo C_{1-6}) o alcoxi C_{1-6};

n es 0;

R^{5} es hidrógeno, -C(Z)R^{12} o alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, arilo(alquilo C_{1-6}) opcionalmente sustituido, o S(O)_{2}R^{8};

R^{6} es hidrógeno o alquilo C_{1-6};

R^{7} es hidrógeno, alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7}, arilo, arilo(alquilo C_{1-6}), heteroarilo, heteroarilo(alquilo C_{1-6}), heterociclilo o heterociclilo(alquilo C_{1-6});

R^{8} es alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7}, arilo, arilo(alquilo C_{1-6}), heteroarilo, heteroarilo(alquilo C_{1-6}), heterociclilo o heterociclilo(alquilo C_{1-6});

R^{9} es hidrógeno, ciano, alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-7} o arilo;

R^{10}, R^{11} y R^{12} se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7}, heterociclilo, heterociclilo(alquilo C_{1-6}), heterociclilo(alquenilo C_{2-6}), arilo, arilo(alquilo C_{1-6}), arilo(alquenilo C_{2-6}), heteroarilo, heteroarilo(alquilo C_{1-6}), y heteroarilo(alquenilo C_{2-6}), cualquiera de los cuales puede estar opcionalmente sustituido; o NR^{10}R^{11} pueden representar un anillo heterociclilo de 5 a 7 eslabones que opcionalmente contiene otro heteroátomo seleccionado entre O, N y S; y

Z es oxígeno o azufre;

arilo es fenilo o naftilo; heterociclilo se selecciona de pirrolidina, piperidina, piperazina, morfolina, imidazolidina y pirazolidina; heteroarilo se selecciona de pirrol, quinolina, isoquinolina, piridina, pirimidina, furano, tiofeno, oxazol, tiazol, tiadiazol, triazol, imidazol y bencimidazol;

cuando R^{1}, R^{4}, R^{5}, R^{10}, R^{11} y R^{12} son grupos alquilo y alquenilo sustituidos, los sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en arilo, heteroarilo, heterociclilo, alcoxi C_{1-6}, halo(alcoxi C_{1-6}), (alquil C_{1-6})tio, ariloxi, aril(alcoxi C_{1-6}), aril(alquil C_{1-6})tio, amino, mono- o di(alquil C_{1-6})amino, cicloalquilo, cicloalquenilo, carboxi y sus ésteres, amida, ureido, guanidino, (alquil C_{1-6})guanidino, amidino, (alquil C_{1-6})amidino, (acil C_{1-6})oxi, azido, hidroxi y halógeno, y sus combinaciones;

cuando R^{1}, R^{5}, R^{10}, R^{11} y R^{12} son grupos arilo, heterociclilo y heteroarilo sustituidos, los sustituyentes pueden seleccionarse de halógeno, alquilo C_{1-6}, arilo, aril(alquilo C_{1-6}), alcoxi C_{1-6}, (alcoxi C_{1-6})alquilo C_{1-6}, halo(alquilo C_{1-6}), halo(alcoxi C_{1-6}), ariloxi, aril(alcoxi C_{1-6}), hidroxi, nitro, ciano, azido, amino, mono- o di-N-(alquil C_{1-6})amino, acilamino, arilcarbonilamino, aciloxi, carboxi, sales de carboxi, ésteres de carboxi, carbamoílo, mono- o di-N-(alquil C_{1-6})carbamoílo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo, ariloxicarbonilo, ureido, guanidino, (alquil C_{1-6})guanidino, amidino, (alquil C_{1-6})amidino, sulfonilamino, aminosulfonilo, (alquil C_{1-6})tio, (alquil C_{1-6})sulfinilo, (alquil C_{1-6})sulfonilo, heterociclilo, heteroarilo, heterociclil(alquilo C_{1-6}) y (heteroaril C_{1-6})alquilo, y sus combinaciones;

o su sal farmacéuticamente aceptable;

con la condición de que el compuesto de fórmula (I) no es:

vii) 4-[2-(1-amino-1-metiletil)-5-(4-fluorofenil)-1H-imidazol-4-il] -N-[(1R)-1-feniletil]-2-pirimidinamina; o

viii) 4-[2-(1-amino-1-metiletil)-5-(4-fluorofenil)-1H-imidazol-4-il] -N-[(1S)-1-feniletil]-2-pirimidinamina.

Los grupos alquilo y alquenilo indicados en la presente, de modo individual o como parte de grupos mayores, por ejemplo alcoxi, pueden ser grupos lineales o ramificados que contienen hasta seis átomos de carbono, y están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos seleccionados entre el grupo formado por arilo, heteroarilo, heterociclilo, alcoxi C_{1-6}, haloalcoxi C_{1-6}, alquiltio C_{1-6}, ariloxi, arilo(alcoxi C_{1-6}), arilo(alquiltio C_{1-6}), amino, mono- o dialquilamino C_{1-6}, cicloalquilo, cicloalquenilo, carboxi y sus ésteres, amida, ureido, guanidino, alquilguanidino C_{1-6}, amidino, alquilamidino C_{1-6}, aciloxi C_{1-6}, azido, hidroxi y halógeno, y sus combinaciones.

Los grupos cicloalquilo y cicloalquenilo indicados en la presente, a menos que se indique lo contrario, incluyen grupos que presentan de tres a ocho átomos de carbono en el anillo, y están opcionalmente sustituidos como se ha descrito con anterioridad en la presente para los grupos alquilo y alquenilo.

Cuando se utiliza en la presente, la expresión "arilo" significa anillos sencillos y condensados que contienen de forma adecuada desde 4 a 7, preferiblemente 5 ó 6, átomos del anillo en cada anillo, y estos anillos pueden estar cada uno no sustituidos o sustituidos con, por ejemplo, hasta tres sustituyentes. Un sistema de anillos condensados puede incluir anillos alifáticos, y sólo necesita incluir un anillo aromático. Los grupos arilo adecuados incluyen fenilo y naftilo, como 1-naftilo o 2-naftilo.

Cuando se utiliza en la presente, la expresión "heterociclilo" incluye, a menos que se indique lo contrario, anillos no aromáticos, sencillos y condensados, que contienen de forma adecuada hasta cuatro heteroátomos en cada anillo, cada uno de los cuales se selecciona entre O, N y S, y estos anillos pueden estar no sustituidos o sustituidos con, por ejemplo, hasta tres sustituyentes. Cada anillo heterocíclico de forma adecuada tiene de 4 a 7, preferiblemente 5 ó 6 átomos del anillo. Un sistema de anillos heterocíclicos condensados puede incluir anillos carbocíclicos, y sólo necesita incluir un anillo heterocíclico. Los ejemplos de los grupos heterociclilo incluyen pirrolidina, piperidina, piperazina, morfolina, imidazolidina y pirazolidina.

Cuando se utiliza en la presente, la expresión "heteroarilo" incluye de forma adecuada, a menos que se indique lo contrario, sistemas de anillos heteroaromáticos mono- y bicíclicos, que comprenden hasta cuatro, preferiblemente 1 ó 2 heteroátomos seleccionados entre O, N y S. Cada anillo puede tener desde 4 a 7, preferiblemente 5 ó 6 átomos del anillo. Un sistema de anillos heteroaromáticos bicíclico puede incluir un anillo carbocíclico. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen pirrol, quinoleína, isoquinoleína, piridina, pirimidina, furano, tiofeno, oxazol, tiazol, tiadiazol, triazol, imidazol y benzimidazol.

De forma adecuada, los grupos arilo, heterociclilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con preferiblemente hasta tres sustituyentes. Los sustituyentes adecuados incluyen halógeno, alquilo C_{1-6}, arilo, arilo(alquilo C_{1-6}), alcoxi C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}(alquilo C_{1-6}), haloalquilo C_{1-6}, haloalcoxi C_{1-6}, ariloxi, arilo(alcoxi C_{1-6}), hidroxi, nitro, ciano, azido, amino, mono- y di-N-alquilamino C_{1-6}, acilamino, arilcarbonilamino, aciloxi, carboxi, sales de carboxi, ésteres de carboxi, carbamoílo, mono- y di-N-(alquilo C_{1-6})carbamoílo, (alcoxi C_{1-6})carbonilo, ariloxicarbonilo, ureido, guanidino, alquilguanidino C_{1-6}, amidino, alquilamidino C_{1-6}, sulfonilamino, aminosulfonilo, alquiltio C_{1-6}, alquilsulfinilo C_{1-6}, alquilsulfonilo C_{1-6}, heterociclilo, heteroarilo, heterociclilo(alquilo C_{1-6}) y heteroarilo(alquilo C_{1-6}), y sus combinaciones. Además, dos átomos de carbono adyacentes en un anillo pueden estar enlazados para formar un sistema bicíclico.

En los compuestos de fórmula (I):

X es preferiblemente NH, o X-R^{1} es hidrógeno, y cuando X es NH, R^{1} es preferiblemente hidrógeno.

Cuando V es CH, X-R^{1} es preferiblemente hidrógeno.

Cuando V es N, X-R^{1} es preferiblemente NH_{2}.

R^{4} es preferiblemente hidrógeno.

Ar es preferiblemente fenilo opcionalmente sustituido.

Los sustituyentes preferidos para el grupo Ar incluyen halógeno, hidroxi, hidroxialquilo C_{1-6}, por ejemplo metilo, y alcoxi C_{1-6}, por ejemplo metoxi, y los más preferidos son halógeno e hidroxi. Cuando Ar es fenilo, los sustituyentes están preferiblemente presentes en la posición 3 o en las posiciones 3,4. Cuando Ar es fenilo, preferiblemente tiene un sustituyente 3-hidroxi. Los patrones de sustitución particulares para Ar cuando es fenilo son 3-hidroxi, 3-hidroxi-4-halógeno, por ejemplo 3-hidroxi-4-cloro o 3-hidroxi-4-bromo, 3-hidroxi-4-metilo y 3-hidroxi-4-metoxi, más concretamente 3-hidroxi-4-cloro.

Y es preferiblemente NR^{10}R^{11}.

R^{10} es preferiblemente hidrógeno.

R^{11} es preferiblemente alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-7}, heterociclilo, heterociclilo(alquilo C_{1-6}), heterociclilo(alquenilo C_{2-6}), arilo, arilo(alquilo C_{1-6}), arilo(alquenilo C_{2-6}), heteroarilo, heteroarilo(alquilo C_{1-6}), o heteroarilo(alquenilo C_{2-6}), cualquiera de los cuales puede estar opcionalmente sustituido.

Los compuestos de fórmula (I) preferiblemente presentan un peso molecular menor que 800.

Los compuestos particulares según la invención incluyen los mencionados en los ejemplos y sus sales farmacéuticamente aceptables.

Se apreciará que para su uso en medicina, las sales de los compuestos de fórmula (I) deben ser farmacéuticamente aceptable. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas serán evidentes para los expertos en la técnica, e incluyen las descritas en J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19, como las sales de adición de ácidos formadas con sales inorgánicas, por ejemplo con el ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico o fosfórico; y con ácidos orgánicos, por ejemplo el ácido succínico, maleico, acético, fumárico, cítrico, tartárico, benzoico, p-toluensulfónico, metansulfónico o naftalensulfónico. Pueden utilizarse otras sales, como oxalatos, por ejemplo en el aislamiento de los compuestos de fórmula (I), y éstas están incluidas en el alcance de esta invención.

Los compuestos de esta invención pueden estar en forma cristalina o no cristalina, y si están en forma cristalina pueden estar opcionalmente hidratados o solvatados. Esta invención incluye dentro de su alcance los hidratos estequiométricos, así como los compuestos que contengan cantidades variables de agua.

La invención se extiende a todas las formas isómeras, incluyendo los estereoisómeros y los isómeros geométricos de los compuestos de fórmula (I), incluyendo los enantiómeros y sus mezclas, por ejemplo los racematos. Las diferentes formas isómeras pueden separarse o resolverse entre sí mediante métodos convencionales, o cualquier isómero dado puede obtenerse mediante métodos sintéticos convencionales o mediante síntesis estereoespecíficas o asimétricas.

Puesto que se pretende utilizar los compuestos de fórmula (I) en composiciones farmaceúticas, se comprenderá que cada uno de ellos se suministra en forma sustancialmente pura, por ejemplo al menos 60% pura, de modo más adecuado al menos 75% pura, y preferiblemente al menos 85% pura, en especial al menos 95% pura (los porcentajes se encuentran en base de peso en peso). Las preparaciones impuras de los compuestos pueden utilizarse para preparar las formas más puras utilizadas en las composiciones farmacéuticas.

Los compuestos de fórmula (I) son derivados de imidazol que pueden prepararse con facilidad utilizando procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica, y se describen, por ejemplo, en Comprehensive Heterocyclic Chemistry, Katritzky y Rees (eds.), Pergamon Press, 1984, 5, 457-497, a partir de materiales de partida que están disponibles en el mercado, o que pueden prepararse a partir de éstos mediante procesos muy conocidos. Una etapa en muchas de estas síntesis es la formación del núcleo central de imidazol, para producir compuestos de fórmula (I). Los procedimientos adecuados se describen, entre otros, en los documentos US 3.707.475 y US 3.940.486. Estas patentes describen la síntesis de \alpha-dicetonas y \alpha-hidroxicetonas (benzoínas), y su posterior uso en la preparación de imidazoles y N-hidroxilimidazoles.

2

Los métodos preferidos para preparar los compuestos de esta invención son como se indica en el anterior esquema. Las \alpha-dicetonas se preparan mediante condensación del anión de, por ejemplo, un derivado de piridina 4-sustituido (V = CH, R^{1}-X = H y R^{4} = H), con la amida de Weinreb de un arilácido o un arilaldehído, seguido de la oxidación del producto intermedio. El calentamiento de la dicetona con un aldehído y acetato de amonio en ácido acético permite acceder al núcleo de imidazol. Después de esto, el grupo Y_{1} puede convertirse en un grupo Y utilizando procedimientos convencionales de interconversión de grupos funcionales. Las transformaciones de grupos funcionales son muy conocidas en la técnica y se describen, por ejemplo, en Comprehensive Organic Functional Group Transformations, A.R. Katritzky, O. Meth-Cohn y C.W. Reeds (eds.), Elsevier Science Ltd., Oxford, 1995; Comprehensive Organic Chemistry, D. Barton y W.D. Ollis (eds.), Pergamon Press, Oxford, 1979; y Comprehensive Organic Transformations, R.C. Larock, VCH Publishers Inc., Nueva York, 1989. El grupo Y_{1} es preferiblemente (CH_{2})_{n}NH_{2}, o su forma protegida, por ejemplo (CH_{2})_{n}NHBoc.

Durante la síntesis de los compuestos de fórmula (I) pueden protegerse los grupos funcionales lábiles en los compuestos intermedios, por ejemplo los grupos hidroxi, carboxi y amino. Un análisis exhaustivo del modo en que diversos grupos funcionales lábiles pueden protegerse, y los métodos para romper los derivados protegidos resultantes, se presenta, por ejemplo, en Protective Groups in Organic Chemistry, T.W. Greene y P.G.M Wuts, Wiley-Interscience, Nueva York, 2ª edición, 1991.

Los compuestos de fórmula (I) pueden prepararse de modo individual, o como bancos de compuestos que comprenden al menos 2, por ejemplo de 5 a 1.000 compuestos, y más preferiblemente de 10 a 100 compuestos de fórmula (I). Los bancos de compuestos de fórmula (I) pueden prepararse mediante un enfoque de "rotura y mezcla" combinado, o mediante múltiples síntesis paralelas utilizando la química de la fase en disolución o de la fase sólida, mediante procedimientos conocidos por los expertos en la técnica.

Por tanto, según otro aspecto de la invención, se proporciona un banco de compuestos que comprende al menos 2 compuestos de fórmula (I), o sus sales farmacéuticamente aceptables.

Las sales farmacéuticamente aceptables pueden prepararse de modo convencional mediante reacción con el ácido o derivado de ácido apropiado.

Tal como se ha indicado anteriormente, los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables resultan útiles en el tratamiento y/o la profilaxis de trastornos en los cuales están implicadas las Raf-quinasas, en concreto la B-Raf-quinasa.

Según otro aspecto de la invención, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) o su sal farmacéuticamente aceptable, pero sin las condiciones i) a x), como inhibidor de la B-Raf-quinasa.

Como se ha indicado anteriormente, los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables resultan útiles para el tratamiento y/o la profilaxis de trastornos asociados con la degeneración neuronal resultante de acontecimientos isquémicos.

Según otro aspecto de la invención, se proporciona un método de tratamiento o profilaxis de una enfermedad neurotraumática, en un mamífero que lo necesite, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) o su sal farmacéuticamente aceptable, pero sin las condiciones i) a x).

Según otro aspecto de la invención, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) o su sal farmacéuticamente aceptable, pero sin las condiciones i) a x), en la preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico o terapéutico de cualquier estado de enfermedad en un ser humano, u otro mamífero, que está exacerbado o provocado por un acontecimiento neurotraumático.

Las enfermedades/acontecimientos neurotraumáticos como se definen en la presente incluyen traumatismos en la cabeza abiertos o penetrantes, como los provocados por cirugía, o una lesión traumática cerrada de la cabeza, como las provocadas por una lesión en la región de la cabeza. También se incluyen dentro de esta definición los accidentes cerebrovasculares isquémicos, en particular en el área del cerebro, los ataques isquémicos transitorios después de un by-pass coronario y la disminución cognitiva que aparece tras otros trastornos isquémicos transitorios.

Los accidentes cerebrovasculares isquémicos pueden definirse como un trastorno neurológico focal que aparece como resultado de un suministro de sangre insuficiente a un área concreta del cerebro, normalmente como consecuencia de un émbolo, trombo o cierre ateromatoso local del vaso sanguíneo. En este área, están surgiendo los papeles que pueden desempeñar en los estímulos frente al estrés (como la anoxia), las lesiones redox, una excesiva estimulación excitativa neuronal, y las citocinas inflamatorias, y la presente invención proporciona un medio para el tratamiento potencial de estas lesiones. Está disponible un tratamiento relativamente pequeño para una lesión aguda como éstas.

Los compuestos de esta invención también pueden utilizarse en el tratamiento o la profilaxis de cánceres.

Los compuestos de la invención también pueden utilizarse para el tratamiento o la profilaxis de enfermedades mediadas por CSBP/p38, como se describe en los documentos WO 99/01131 y WO 99/01130.

Con el fin de utilizar los compuestos de fórmula (I) en terapia, normalmente se formularán en una composición farmacéutica según la práctica farmacéutica convencional.

Según otro aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o su sal farmacéuticamente aceptable, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Los compuestos de fórmula (I) pueden administrarse de modo conveniente mediante cualquiera de las vías que se utilizan de forma convencional para la administración de fármacos, por ejemplo por vía parenteral, oral, tópica o mediante inhalación. Los compuestos de fórmula (I) pueden administrarse en formas de dosificación convencionales preparadas combinándolos con vehículos farmacéuticos convencionales, según procedimientos convencionales. Los compuestos de fórmula (I) también pueden administrarse en dosificaciones convencionales combinados con un segundo compuesto terapéuticamente activo conocido. Estos procedimientos pueden implicar la mezcla, granulación y compresión o disolución de los ingredientes como resulte apropiado para la preparación deseada. Se apreciará que la forma y el carácter del vehículo farmacéuticamente aceptable vienen dictados por la cantidad de compuesto de fórmula (I) con el que va a combinarse, la vía de administración y otras variables muy conocidas. El(los) vehículo(s) debe ser aceptable, en el sentido de que debe ser compatible con los otros ingredientes de la formulación, y no debe ser perjudicial para el receptor de la misma.

El vehículo farmacéutico empleado puede ser, por ejemplo, un sólido o un líquido. Los ejemplos de vehículos sólidos son lactosa, arcilla blanca, sacarosa, talco, gelatina, agar, pectina, goma arábiga, estearato de magnesio, ácido esteárico y similares. Los ejemplos de vehículos líquidos son jarabe, aceite de cacahuete, aceite de oliva, agua y similares. De forma similar, el vehículo o diluyente puede incluir un material retardante de tiempo muy conocido en la técnica, como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo por sí solo o con una cera.

Pueden emplearse una amplia variedad de formas farmacéuticas. Así, si se utiliza un vehículo sólido, la preparación puede presentarse en forma de comprimidos, colocarse en polvo o en gránulos en una cápsula de gelatina dura, o en forma de un trocisco o pastilla. La cantidad de vehículo sólido variará mucho, pero preferiblemente será desde aproximadamente 25 mg a aproximadamente 1 g. Cuando se utiliza un vehículo líquido, la preparación se encontrará en forma de un jarabe, emulsión, cápsula de gelatina blanda, líquido inyectable estéril, como una ampolla o una suspensión líquida no acuosa.

Los compuestos de fórmula (I) se administran preferiblemente por vía parenteral, es decir mediante administración intravenosa, intramuscular, subcutánea, intranasal, intrarrectal, intravaginal o intraperitoneal. En general se prefiere la forma intravenosa de administración parenteral. Los compuestos pueden administrarse como una infusión en embolada o continua, por ejemplo durante 3 días. Las formas de dosificación apropiadas para esta administración pueden prepararse mediante técnicas convencionales.

Los compuestos de fórmula (I) también pueden administrarse por vía oral. Las formas de dosificación apropiadas para esta administración pueden prepararse mediante técnicas convencionales.

Los compuestos de fórmula (I) también pueden administrarse mediante inhalación, es decir mediante administración intranasal y de inhalación oral. Las formas de dosificación apropiadas para esta administración, como las formulaciones en aerosol, pueden prepararse mediante técnicas convencionales.

Los compuestos de fórmula (I) también pueden administrarse por vía tópica, es decir mediante administración no sistémica. Esto incluye la aplicación de inhibidores de modo externo a la epidermis o la cavidad bucal, y la instilación de dicho compuesto en la oreja, ojo y nariz, de forma que el compuesto no se introduzca significativamente en la corriente sanguínea.

Para todos los métodos de uso descritos en la presente, el régimen de dosificación oral diario será preferiblemente desde aproximadamente 0,1 a aproximadamente 80 mg/kg de peso corporal total, preferiblemente desde aproximadamente 0,2 a 30 mg/kg, más preferiblemente desde aproximadamente 0,5 mg a 15 mg. El régimen de dosificación parenteral diario será desde aproximadamente 0,1 a aproximadamente 80 mg/kg de peso corporal total, preferiblemente desde aproximadamente 0,2 a aproximadamente 30 mg/kg, y más preferiblemente desde aproximadamente 0,5 mg a 15 mg/kg. El régimen de dosificación tópico diario será preferiblemente desde 0,1 mg a 150 mg, administrados de una a cuatro, preferiblemente dos o tres veces diarias. El régimen de dosificación por inhalación diario será preferiblemente desde aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 1 mg/kg diarios. Un experto en la técnica también comprenderá que la cantidad y espaciamiento óptimos de las dosificaciones individuales de los inhibidores serán determinados por la naturaleza y grado del trastorno que se está tratando, la forma, vía y sitio de administración, y el paciente concreto que se está tratando, y que dichos óptimos pueden determinarse mediante técnicas convencionales. Un experto en la técnica también puede apreciar que el curso óptimo del tratamiento, es decir el número de dosis de inhibidores administradas por día durante un número definido de días, puede ser determinado por los expertos en la técnica, utilizando ensayos de determinación del curso del tratamiento convencionales. En el caso de sales farmacéuticamente aceptables, los números anteriores se calculan como el compuesto parental de fórmula (I).

No se indican/esperan efectos toxicológicos cuando se administra un compuesto de fórmula (I) en el intervalo de dosificación mencionado anteriormente.

Todas las publicaciones, incluyendo pero sin limitarse a las patentes y las solicitudes de patentes citadas en esta memoria descriptiva, se incorporan como referencia, como si cada publicación individual fuera indicada de forma específica e individual para ser incorporada como referencia en la presente.

Los siguientes ejemplos ilustran la preparación de los compuestos farmacológicamente activos de la invención.

Ejemplo de referencia 1

Éster terc-butílico del ácido (2-(4-(4-cloro-3-metoxifenil) -5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il)-2-metilpropil)carbámico

3

Etapa 1

4-cloro-3,N-dimetoxi-N-metilbenzamida

Una suspensión del ácido 4-cloro-3-metoxibenzoico (F. Claudi et al., J. Med. Chem., 1992, 35, 4408) (37,2 g, 0,2 mol) en diclorometano (500 ml) que contiene cloruro de oxalilo (26 ml), se trató con N,N-dimetilformamida (10 gotas). Después de agitar a temperatura ambiente durante 6 horas, la disolución se concentró a presión reducida, se añadió más diclorometano al residuo y el disolvente se volvió a evaporar. El residuo entonces se disolvió en acetonitrilo (600 ml), y se añadió clorhidrato de metoximetilamina (20,5 g, 0,21 mol). La mezcla se enfrió en un baño de hielo, se añadió gota a gota una disolución de piridina (80 ml) en acetonitrilo (150 ml), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La disolución entonces se concentró y el residuo se repartió entre acetato de etilo y una disolución de carbonato de potasio saturada. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida, y después el residuo se volvió a evaporar con tolueno para producir el compuesto del título (40,0 g, 87%) como un aceite incoloro; MS(ES+) m/e 230/232 [M+H]^{+}.

Etapa 2

1-(4-cloro-3-metoxifenil)-2-piridin-4-iletanona

Se añadió gota a gota 4-picolina (16,9 ml, 0,174 mol) a una disolución agitada de diisopropilamida de litio (110 ml, 0,22 mol, disolución 2 M en heptano, etilbenceno, tetrahidrofurano) en tetrahidrofurano seco (150 ml) a -78ºC. Después de agitar a -78ºC durante 15 minutos, se añadió gota a gota una disolución del producto de la etapa 1 (40,0 g, 0,174 mol) en tetrahidrofurano (100 ml), y se dejó que la reacción se calentase hasta la temperatura ambiente durante 3 horas. La disolución entonces se enfrió en hielo, se añadió una disolución de cloruro de amonio saturada, y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. La goma resultante se trituró con éter dietílico frío/hexano (1:1, 300 ml), y se recogió el sólido para producir el compuesto del título como un sólido de color amarillo pálido (29 g, 64%); MS(ES+) m/e 262/264 [M+H]^{+}.

Etapa 3

1-(4-cloro-3-metoxifenil)-2-piridin-4-iletan-1,2-diona

Una disolución de 1-(4-cloro-3-metoxifenil)-2-piridin-4-iletanona (22,5 g, 86 mmol) en dimetilsulfóxido (150 ml) se agitó a 55ºC. Se añadió gota a gota bromuro de hidrógeno (48% acuoso, 21 ml), y la disolución se calentó a 55ºC durante 1 hora. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, la disolución se vertió en una disolución de acetato de sodio (21 g) en agua helada (1000 ml), y la suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se extrajo con acetato de etilo, y las capas orgánicas se reunieron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se trituró con éter dietílico/hexano (1:4), y el sólido se recogió para producir el compuesto del título como un sólido de color amarillo; MS(EI) m/e 275/277 [M]^{+}.

Etapa 4

Se disolvieron 1-(4-cloro-3-metoxifenil)-2-piridin-4-iletan-1,2-diona (275 mg, 1 mmol), éster terc-butílico del ácido (2,2-dimetil-3-oxopropil)carbámico (Y. Guindon et al., J. Am. Chem. Soc., 1997, 119, 9289) (250 mg, 1,25 mmol) y acetato de amonio (770 mg, 10 mmol) se disolvieron en ácido acético (5 ml) y se calentaron a reflujo durante 1 hora, y después se dejaron enfriar hasta alcanzar la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió en una mezcla de hidróxido de amonio (10 ml) y hielo. La mezcla se extrajo con acetato de etilo, las capas orgánicas se reunieron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo para producir el compuesto del título como un sólido de color amarillo pálido (172 mg, 38%); MS(ES+) m/e 457/459 [M+H]^{+}.

Ejemplo de referencia 2

2-(4-(4-cloro-3-metoxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il) -2-metilpropilamina

4

Una disolución del ejemplo de referencia 1 (112 mg, 0,245 mmol) en diclorometano (2 ml) que contenía ácido trifluoroacético (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La disolución se concentró a presión reducida y el residuo se repartió entre una disolución de bicarbonato de sodio saturado y acetato de etilo. Las capas orgánicas entonces se reunieron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida, para producir el compuesto del título (59 mg, 68%) como un sólido; MS(ES+) m/e 357/359 [M+H]^{+}.

Ejemplo de referencia 3

5-(2-(2-amino-1,1-dimetiletil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il) -2-clorofenol

5

Una disolución del ejemplo de referencia 2 (356 mg, 1 mmol) en diclorometano (20 ml) enfriada hasta 5ºC se trató con bromuro de boro (1 M en diclorometano, 5 ml) seguido de más diclorometano (10 ml). La disolución se agitó a 5ºC durante 2 horas, y después a temperatura ambiente durante dos horas más. Entonces se añadió ácido clorhídrico 2 M (1 ml) y agua (5 ml), y la reacción se calentó hasta 50ºC durante 15 minutos. Después de enfriar, la mezcla se neutralizó con una disolución de hidróxido de sodio al 15%, y el precipitado resultante se recogió mediante filtración, para producir el compuesto del título como un sólido de color amarillo (206 mg, 60%); MS(ES+) m/e 343/345
[M+H]^{+}.

Ejemplo de referencia 4

N-(2-(4-(4-cloro-3-metoxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il) -2-metilpropil)-metansulfonamida

6

Una disolución del ejemplo de referencia 2 (178 mg, 0,5 mmol) en diclorometano (10 ml) que contenía piridina (0,12 ml, 1,5 mmol) a 0ºC, se trató con una disolución de cloruro de metansulfonilo (57,3 mg, 0,5 mmol) en diclorometano (1 ml). La disolución se agitó a 0ºC durante 1 hora, seguido de 30 minutos a temperatura ambiente antes de ser diluida con diclorometano y una disolución saturada de bicarbonato de sodio. La capa acuosa entonces se separó y se extrajo con más diclorometano. Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con diclorometano/metanol/disolución de amoniaco 0,880 (8:1:0,1) para producir el compuesto del título (85 mg, 40%) como un sólido de color amarillo pálido; MS(ES+) m/e 435/437 [M+H]^{+}.

Ejemplo 1 5-[2-(1-amino-1-metiletil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il]-2-clorofenol

7

El compuesto del título se preparó a partir del producto del ejemplo de referencia 1, etapa 3, y 2-terc-butoxicarboni-
lamino-2-metilpropanal (T. Seki et al., Chem. Pharm. Bull., 1996, 44, 2061), utilizando los métodos descritos en el ejemplo de referencia 1, etapa 4, seguidos de los utilizados en el ejemplo de referencia 2 y ejemplo de referencia 3; MS(ES+) m/e 329/331 [M+H]^{+}.

Ejemplo 2 N-{1-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -1-metiletil}metansulfonamida

8

El compuesto del título se preparó a partir del producto del ejemplo 1, utilizando los métodos descritos en el ejemplo de referencia 4, seguido del ejemplo de referencia 3. El producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice; MS(ES+) m/e 407/409 [M+H]^{+}.

Ejemplos 3-16

9

Los ejemplos 3-16 se prepararon mediante el siguiente método general.

Una mezcla del producto del ejemplo 1 (100 mg, 0,29 mmol), el aldehído especificado (0,32 mmol) y cianoborohidruro de trimetilamonio unido a un polímero (125 mg, 0,5 mmol, 4 mmol/g) en metanol (3 ml) que contenía ácido acético glacial (0,05 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 24 horas. La reacción entonces se filtró, el filtrado se concentró al vacío y el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice.

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Ejemplos 17-20

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Los ejemplos 17-20 se prepararon mediante el siguiente método general.

La amina especificada (0,24 mmol) y trifosgeno (33 mg, 0,11 mmol) se añadieron a una suspensión de diisopropiletilamina unida a un polímero (200 mg) en diclorometano (3 ml). Después de agitar durante 30 minutos a temperatura ambiente, la mezcla se trató con el producto del ejemplo 1 (100 mg, 0,30 mmol). La reacción entonces se agitó durante 3 horas, se filtró, el filtrado se concentró al vacío y el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice.

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Reactivos

Reactivo A

1-(2-metoxietil)-piperidin-4-carbaldehído

17

Etapa 1

Éster etílico del ácido 1-(2-metoxietil)-piperidin-4-carboxílico

Una disolución de isonipecotato de etilo (26 g, 166 mmol) en etanol (150 ml) se trató con carbonato de potasio (41 g, 297 mmol) y 2-bromoetil metil éter (25 g, 179 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 24 horas, se enfrió y después se filtró. El filtrado se concentró al vacío para producir el compuesto del título (32,76 g, 92%); MS(ES+) m/e 216 [M+H]^{+}.

Etapa 2

1-(2-metoxietil)-piperidin-4-carbaldehído

Se añadió hidruro de diisobutilaluminio (10,2 ml, disolución 1 M en THF) a una disolución del éster etílico del ácido 1-(2-metoxietil)-piperidin-4-carboxílico (2,0 g, 9,3 mmol) en tolueno (40 ml) durante un periodo de 1 hora a -78ºC. La reacción se agitó a -78ºC durante 1 hora, y después se extinguió con metanol (5 ml) y una disolución de acetato de amonio acuosa (5 ml). La mezcla se agitó durante 1 hora y después se filtró a través de celite. El filtrado se concentró al vacío para producir el compuesto del título (1,1 g, 69%); MS(ES+) m/e 172 [M+H]^{+}.

Reactivo B

3-metoxi-4-(2-morfolin-4-iletoxi)fenilamina

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Etapa 1

4-[2-(2-metoxi-4-nitrofenoxi)etil]morfolina

A una disolución de (1-(2-hidroxietil)morfolina) (1,94 ml, 16 mmol) en dimetilformamida, se le añadió hidruro de sodio (dispersión al 60% en aceite) (544 mg, 16 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 10 minutos, se añadió gota a gota una disolución de (1-cloro-2-metoxi-4-nitrobenceno) (3 g, 16 mmol) en dimetilformamida (10 ml). La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 16 horas, se concentró, después el residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con agua. La fase orgánica se secó con sulfato de magnesio, se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, para producir el compuesto del título; MS(ES+) m/e 283 [M+H]^{+}.

Etapa 2

3-metoxi-4-(2-morfolin-4-iletoxi)fenilamina

A una disolución del producto de la etapa 1 (2,3 g, 8,6 mmol) en etanol (100 ml) se le añadió paladió al 10% sobre carbón (50 mg). La mezcla entonces se agitó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de hidrógeno durante 16 horas, se filtró a través de celite y se concentró para dar el compuesto del título; MS(ES+) m/e 252 [M+H]^{+}.

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Reactivo C

(3,4-difluorofenoxi)acetaldehído

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Etapa 1

4-(2,2-dimetoxietoxi)-1,2-difluorobenceno

Se añadieron bromoacetaldehído dimetil acetal (3,3 ml, 27,9 mmol) y carbonato de potasio (6,5 g, 47,1 mmol) a una disolución de 3,4-difluorofenol (3,0 g, 23,4 mmol) en DMF (65 ml). La mezcla se calentó hasta 120ºC durante 4 horas, se enfrió hasta la temperatura ambiente y después se extinguió con una disolución de cloruro de amonio acuoso. El producto se extrajo en acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró al vacío para producir el compuesto del título (5,1 g, 97%); RMN de ^{1}H (CDCl_{3}): 3,45 (6H, s), 3,93 (2H, d, J=5,1 Hz), 4,67 (1H, t, J=5,1 Hz), 6,60 (1H, m), 6,74 (1H, m) y 7,03 (1H, m).

Etapa 2

(3,4-difluorofenoxi)acetaldehído

Una disolución que contenía el producto de la etapa 1 (5,1 g, 23,4 mmol), ácido acético glacial (4,5 ml) y ácido sulfúrico concentrado (2,7 ml) en agua (50 ml) se calentó a 100ºC durante 5 horas. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, el producto se extrajo en éter dietílico. El extracto orgánico se lavó con una disolución de bicarbonato de sodio acuoso, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró al vacío. El producto se purificó mediante una cromatografía en gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo:hexano (30:70), para producir el compuesto del título (2,74 g, 68%): RMN de ^{1}H (CDCl_{3}): 4,52 (2H, s), 6,59 (1H, m), 6,83 (1H, m), 7,08 (1H, m) y 9,82 (1H, s).

Ejemplos biológicos

La actividad de los compuestos de fórmula (I) como inhibidores de la B-Raf puede determinarse mediante los siguientes ensayos in vitro:

Ensayo de unión de quinasas de anisotropía de fluorescencia

La enzima quinasa, el ligando fluorescente y una concentración variable de compuesto de ensayo se incubaron juntos para alcanzar el equilibrio termodinámico, bajo condiciones según las cuales en ausencia del compuesto de ensayo, el ligando fluorescente se encuentra significativamente (>50%) unido a la enzima, y en presencia de una concentración suficiente (>10 x K_{i}) de un inhibidor potente, la anisotropía del ligando fluorescente sin unir es mensurablemente diferente del valor en unión.

La concentración de la enzima quinasa debe ser preferiblemente \geq1 x K_{f}. La concentración del ligando fluorescente requerida dependerá del instrumental utilizado, y de las propiedades fluorescentes y fisicoquímicas. La concentración utilizada debe ser menor que la concentración de la enzima quinasa, y preferiblemente menor que la mitad de la concentración de la enzima quinasa. Un protocolo típico es:

Todos los componentes se disuelven en un tampón con composición HEPES 50 mM, pH 7,5, CHAPS 1 mM, MgCl_{2} 10 mM.

Concentración de la enzima B-Raf: 1 nM

Concentración del ligando fluorescente: 0,5 nM

Concentración del compuesto de ensayo: 0,1 nM-100 uM

Los componentes se incuban en un volumen final de 10 ul en placas de microvaloración LJL HE 384 de tipo B negras, hasta que se alcanza el equilibrio (más de 3 horas, hasta 30 horas).

La lectura de la anisotropía de fluorescencia se realiza en LJL Acquest.

Definiciones:

K_{i} = constante de disociación para la unión del inhibidor

K_{f} = constante de disociación para la unión del ligando fluorescente

El ligando fluorescente es el siguiente compuesto:

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que se deriva de 5-[2-(4-aminometilfenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il] -2-clorofenil y un tinte fluorescente.

Ensayo de la Raf-quinasa

Se ensayó in vitro la actividad de la proteína B-Raf recombinante humana, mediante el ensayo de la incorporación de fosfato marcado de forma radiactiva a la MAP-quinasa recombinante (MEK), un sustrato fisiológico conocido de la B-Raf. Se obtuvo proteína B-Raf recombinante humana catalíticamente activa mediante purificación a partir de células de insecto sf9, infectadas con un vector de expresión de baculovirus recombinante B-Raf humano. Para asegurar que toda la fosforilación del sustrato es el resultado de la actividad B-Raf, se utilizó una forma de MEK catalíticamente inactiva. Esta proteína se purificó a partir de células bacterianas que eran mutantes de expresión de la MEK inactiva, como una proteína de fusión con glutatión-S-transferasa (GST-kdMEK).

Método

Las condiciones de ensayo convencionales de la actividad B-Raf utilizaban 3 ug de GST-kdMEK, ATP 10 uM y ^{33}P-ATP 2 uCi, MOPS 50 mM, EDTA 0,1 mM, sacarosa 0,1 M, MgCl_{2} 10 mM más dimetilsulfóxido al 0,1% (que contenía el compuesto cuando resultaba apropiado), en un volumen total de 30 ul. Las reacciones se incubaron a 25ºC durante 90 minutos y se terminaron mediante la adición de EDTA hasta una concentración final de 50 uM. Se roció 10 ul de la reacción sobre papel de fosfocelulosa P30 y se secó al aire. Después de cuatro lavados en ácido tricloroacético al 10% enfriado en hielo, ácido fosfórico al 0,5%, los papeles se secaron al aire antes de la adición de líquido de centelleo y de la medida de la radiactividad en un contador de centelleo.

Resultados

Se demostró que los compuestos de los ejemplos resultaban eficaces para inhibir la fosforilación mediada por B-Raf del sustrato GST-kdMEK, en uno o ambos ensayos mencionados anteriormente, y presentan unas CI_{50}<3 \muM.

La actividad de los compuestos como inhibidores de Raf también puede determinarse mediante los ensayos descritos en el documento WO 99/10325; McDonald, O.B., Chen, W.J., Ellis, B., Hoffman, C., Overton, L., Rink, M., Smith, A., Marshall, C.J. y Wood, E.R. (1999), A scintillation proximity assay for the Raf/MEK/ERK kinase cascade: high throughput screening and identification of selective enzyme inhibitors, Anal. Biochem., 268:318-329 y reunión AACR en Nueva Orleans, 1998, póster 3793.

Las propiedades neuroprotectoras de los inhibidores de B-Raf pueden ser determinadas por el siguiente ensayo in vitro:

Propiedades neuroprotectoras de los inhibidores de B-Raf en cultivos de cortes de hipocampo de rata

Los cultivos organotípicos proporcionan un intermedio entre los cultivos celulares neuronales disociados y los modelos in vivo de privación de oxígeno y glucosa (OGD). La mayoría de las interacciones gliales-neuronales y el circuito neuronal se mantiene en cortes de hipocampo cultivados, con lo que se facilita la investigación de los patrones de muerte entre diferentes tipos celulares en un modelo que se asemeja a la situación in vivo. Estos cultivos permiten el estudio de lesiones celulares retrasadas y muerte en 24 horas, o más, después de la exposición, y permiten la evaluación de las consecuencias de alteraciones a largo plazo en condiciones de cultivo. Una serie de laboratorios han indicado lesiones neuronales retrasadas en respuesta a OGD en cultivos organotípicos de hipocampo (Vornov et al., Stroke, 1994, 25, 57-465; Newell et al., Brain Res., 1995, 676, 38-44). En este modelo, se ha demostrado que varias clases de compuestos son protectores, incluyendo los antagonistas de EAA (Strasser et al., Brain Res., 1995, 687, 167-174), los bloqueantes del canal de Na (Tasker et al., J. Neurosci., 1992, 12, 98-4308) y los bloqueantes del canal de Ca (Pringle et al., Stroke, 1996, 7, 2124-2130). Hasta la fecha, se sabe relativamente poco acerca del papel de las vías de señalización mediadas por quinasas intracelulares en la muerte de células neuronales en este modelo.

Método

Se prepararon cultivos de cortes de hipocampo organotípicos utilizando el método de Stoppini et al., J. Neurosci. Methods, 1995, 37, 173-182. Brevemente, se cultivaron secciones de 400 micras preparadas a partir de hipocampos de ratas Sprague Dawley postnatales de 7-8 días, sobre membranas semiporosas durante 9-12 días. Entonces se induce la OGD mediante incubación en suero y medio exento de glucosa en una cámara anaerobia durante 45 minutos. Los cultivos después se volvieron a colocar en un incubador de aire/CO_{2} durante 23 horas antes de su análisis. Se utilizó yoduro de propidio (PI) como indicador de la muerte celular. El PI no es tóxico para las neuronas y se ha utilizado en muchos estudios para evaluar la viabilidad celular. En las neuronas dañadas, el PI entra y se une a los ácidos nucleicos. El PI unido muestra una mayor emisión a 635 nm cuando se excita a 540 nm. Se toma una imagen de fluorescencia de PI y una imagen en luz blanca, y se analiza la proporción de muerte celular. El área de la región CA1 se define a partir de la imagen en luz blanca, y se superpone sobre la imagen de PI. Se establece el umbral de la señal PI y se expresa el área de lesión de PI como porcentaje del área CA1. La correlación entre fluorescencia de PI y muerte celular histológicamente confirmada se ha validado previamente mediante tinción Nissl utilizando violeta rápido de cresilo (Newell et al., J. Neurosci., 1995, 15, 7702-7711).

Ejemplo 41 4-aminometil-N-{2-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil) -5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il]-2-metilpropil}-bencensulfonamida

21

Una disolución del producto del ejemplo 39 (70 mg, 0,14 mmol) y complejo de borano-sulfuro de metilo (0,080 ml, 0,84 mmol) en tetrahidrofurano (5 ml) se calentó a reflujo durante 4 horas. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, se añadió metanol (1 ml) y la mezcla se calentó a reflujo durante 30 minutos más. Entonces se añadió ácido clorhídrico 2 M (1 ml) y la mezcla de nuevo se calentó a reflujo durante 1 hora. La mezcla de reacción luego se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente, el pH se ajustó a pH 9 con una disolución de carbonato de potasio saturada, y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. Los extractos reunidos se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron, el disolvente se eliminó bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con diclorometano/metanol/disolución de amoniaco 0,880 (5:1:0,1) para dar el compuesto del título (35 mg, 49%); MS(AP+) m/e 512/514 [M+H]^{+}.

Ejemplo 42 {2-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -2-metilpropil}amida del ácido 2-(4-metilpiperazin-1-il)etansulfónico

22

Etapa 1

{2-[4-(4-cloro-3-metoxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -2-metilpropil}amida del ácido etansulfónico

Una disolución de cloruro de etenosulfonilo (J. Marchand-Brynaert et al., Tetrahedron, 1996, 52, 5591) (230 mg, 1,8 mmol) en diclorometano (10 ml) se enfrió hasta -78ºC y se trató con una disolución del producto del ejemplo 2 y trietilamina (0,41 ml, 3 mmol) en diclorometano (10 ml). Después de 1 hora, la mezcla de reacción se calentó hasta la temperatura ambiente y la disolución se lavó con una disolución de bicarbonato de sodio saturada. La capa orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y el disolvente se evaporó para dar el compuesto del título (254 mg, 38%); MS(ES+) m/e 447/449 [M+H]^{+}.

Etapa 2

{2-[4-(4-cloro-3-metoxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -2-metilpropil}amida del ácido 2-(4-metilpiperazin-1-il)etansulfónico

Una disolución del producto de la etapa 1 (110 mg, 0,25 mmol) y N-metilpiperazina (50 mg, 0,5 mmol) en diclorometano (5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. El disolvente se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice, para producir el compuesto del título (98 mg, 72%); MS(ES+) m/e 547/549 [M+H]^{+}.

Etapa 3

{2-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -2-metilpropil}amida del ácido 2-(4-metilpiperazin-1-il)etansulfónico

El compuesto del título se preparó a partir del producto de la etapa 2, utilizando el método descrito en el ejemplo 3, y el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice; MS(ES+) m/e 533/535 [M+H]^{+}.

Ejemplo 43 {2-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -2-metilpropil}amida del ácido 2-morfolin-4-iletansulfónico

23

El compuesto del título se preparó a partir de morfolina y del producto del ejemplo 42, etapa 1, utilizando el método descrito en el ejemplo 42, etapas 2 y 3; MS(ES+) m/e 520/522 [M+H]^{+}.

Ejemplos 44-48

24

Los ejemplos 44-48 se prepararon mediante el siguiente procedimiento general.

La amina especificada (0,24 mmol) y trifosgeno (33 mg, 0,11 mmol) se añadieron a una suspensión de diisopropiletilamina unida a un polímero (200 mg) en diclorometano (3 ml). Después de agitar durante 30 minutos a temperatura ambiente, la mezcla se trató con el producto del ejemplo 3 (100 mg, 0,30 mmol). La reacción entonces se agitó durante 3 horas, se filtró, el filtrado se concentró al vacío y el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice.

25

26

Ejemplo 49 {2-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -2-metilpropil}amida del ácido 4-(2-metoxietil)-piperazin-1-carboxílico

27

Etapa 1

Cloruro de 4-(2-metoxietil)-piperazin-1-carbonilo

Una disolución de 1-(2-metoxietil)-piperazina (100 mg, 0,69 mmol) y trietilamina (0,1 ml, 0,71 mmol) en diclorometano (5 ml) se enfrió hasta 0ºC y se trató con una disolución de cloroformiato de triclorometilo (0,05 ml, 0,41 mmol) en diclorometano (5 ml). Se dejó que la mezcla se calentase hasta alcanzar la temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora más y después se concentró al vacío. El producto bruto se utilizó sin purificación en la siguiente etapa.

Etapa 2

{2-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -2-metilpropil}amida del ácido 4-(2-metoxietil)-piperazin-1-carboxílico

A una disolución del producto del ejemplo 3 (240 mg, 0,70 mmol), trietilamina (0,2 ml, 1,43 mmol) y DMAP (5 mg) en diclorometano (3 ml) se añadió una disolución del producto de la etapa 1 en diclorometano (5 ml). La reacción se calentó hasta 80ºC durante 16 horas, se concentró al vacío y el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con cloroformo/metanol/disolución de amoniaco 0,880 (9:1:0,1) para producir el compuesto del título (188 mg, 53%); MS(ES+) m/e 513/515 [M+H]^{+}.

Ejemplo 50 5-[2-(2-amino-1,1-dimetiletil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il] -2-bromofenol

28

El compuesto del título se preparó a partir del ácido 4-bromo-3-metoxibenzoico (G.M. Iskander, J. Chem. Soc. Perkin Trans 1., 1973, 2202) utilizando los métodos descritos en el ejemplo 1, etapas 1-4, seguido del ejemplo 2 y el ejemplo 3; MS(ES+) m/e 387/389 [M+H]^{+}.

Ejemplo 51 N-{2-[4-(4-bromo-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -2-metilpropil}metansulfonamida

29

El compuesto del título se preparó a partir del producto del ejemplo 50, utilizando el método descrito en el ejemplo 11; MS(ES+) m/e 465/467 [M+H]^{+}.

Ejemplo 52 2-cloro-5-[2-(1,1-dimetil-2-metilaminoetil) -5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il]fenol

30

Etapa 1

Éster terc-butílico del ácido (3-hidroxi-2,2-dimetilpropil)metilcarbámico

Una disolución de 2,2-dimetil-3-metilaminopropan-1-ol (A.G. Anderson, J. Org. Chem., 1968, 33, 2123) (880 mg, 7,5 mmol) en tetrahidrofurano (30 ml) enfriada en un baño de hielo, se trató con una disolución de dicarbonato de di-terc-butilo (1,64 g, 7,5 mmol) en tetrahidrofurano (5 ml). Después de agitar a la temperatura ambiente durante 18 horas, el disolvente se eliminó bajo presión reducida, dando el compuesto del título; MS(ES+) m/e 218 [M+H]^{+}.

Etapa 2

Éster terc-butílico del ácido (2,2-dimetil-3-oxopropil)metilcarbámico

Una mezcla del producto de la etapa 1 (1,62 g, 7,5 mmol), clorocromato de piridinio (3,23 g, 15 mmol) y tamices moleculares 4A (10 g) en diclorometano (50 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 5 horas. La mezcla de reacción entonces se vertió sobre una columna de gel de sílice, que se eluyó con diclorometano, para dar el compuesto del título, como un aceite, que se utilizó directamente en la siguiente reacción; RMN de ^{1}H (CDCl_{3}): 9,6 (1H, s ancho), 3,35 (2H, s), 2,85 (3H, s ancho), 1,44 (9H, s) y 1,07 (6H, s).

Etapa 3

Éster terc-butílico del ácido {2-[4-(4-cloro-3-metoxifenil) -5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il]-2-metilpropil}metil- carbámico

El compuesto del título se preparó a partir del producto de la etapa 2 y del producto del ejemplo 1, etapa 3, utilizando el método descrito en el ejemplo 1, etapa 4; MS(ES+) m/e 471/473 [M+H]^{+}.

Etapa 4

2-cloro-5-[2-(1,1-dimetil-2-metilaminoetil) -5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il]fenol

El compuesto del título se preparó a partir del producto de la etapa 3, utilizando los métodos descritos en el ejemplo 2, seguido del ejemplo 3; MS(AP+) m/e 357/359 [M+H]^{+}.

Ejemplos 53-58

31

Los ejemplos 53-58 se prepararon mediante el siguiente método general.

Una mezcla del producto del ejemplo 52 (100 mg, 0,29 mmol), el aldehído especificado (0,32 mmol) y cianoborohidruro de trimetilamonio unido a un polímero (125 mg, 0,5 mmol, 4 mmol/g) en metanol (3 ml) que contenía ácido acético glacial (0,05 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 24 horas. La reacción entonces se filtró, el filtrado se concentró al vacío y el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice.

32

33

Ejemplo 59 trihidrocloruro de 2-cloro-5-({[(2-hidroxietil)metilamino] dimetiletil}-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il)fenol

34

Etapa 1

2-cloro-5-[({[2-(terc-butildimetilsilaniloxi) -etil]metilamino}dimetiletil)-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il]fenol

El compuesto del título (190 mg, 66%) se preparó a partir del producto del ejemplo 52 y terc-butildimetilsililoxiace-
taldehído, utilizando el método de alquilación reductora general descrito para los ejemplos 53-58; MS(ES+) m/e 515/517 [M+H]^{+}.

Etapa 2

Trihidrocloruro de 2-cloro-5-({[(2-hidroxietil)metilamino] dimetiletil}-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il)fenol

Una disolución del producto de la etapa 1 (185 mg, 0,36 mmol) en metanol (3 ml) se trató con una disolución 1 M de HCl en éter dietílico (2 ml) y la mezcla se agitó durante 2 horas. La reacción se concentró al vacío y el producto se trituró con diclorometano y acetato de etilo para producir el compuesto del título (155 mg, 85%); MS(ES+) m/e 401/403 [M+H]^{+}.

Ejemplo 60 {2-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -2-metilpropil}metilamida del ácido 4-(2-metoxietil)-piperazin-1-carboxílico

35

El compuesto del título (170 mg, 41%) se preparó a partir del producto del ejemplo 52 y del producto del ejemplo 49, etapa 1, utilizando el método descrito en el ejemplo 49, etapa 2; MS(ES+) m/e 527/529 [M+H]^{+}.

Ejemplo 61 5-[2-(1-aminometilciclohexil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il] -2-clorofenol

36

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Etapa 1

Éster terc-butílico del ácido {1-[4-(4-cloro-3-metoxifenil) -5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il]ciclohexilmetil} carbámico

El compuesto del título (1,08 g, 23%) se preparó a partir del producto del ejemplo 1, etapa 3, y el éster terc-butílico del ácido (1- formilciclohexilmetil)carbámico (D.L. Varie et al., Bioorg. and Med. Chem. Lett., 1999, 9, 369), utilizando el método descrito en el ejemplo 1, etapa 4; MS(ES+) m/e 497/499 [M+H]^{+}.

Etapa 2

{1-[4-(4-cloro-3-metoxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] ciclohexil}metilamina

El compuesto del título se preparó a partir del producto de la etapa 1, utilizando el método descrito en el ejemplo 1; MS(ES+) m/e 397/399 [M+H]^{+}.

Etapa 3

5-[2-(1-aminometilciclohexil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il] -2-clorofenol

El compuesto del título se preparó a partir del producto de la etapa 2, utilizando el método descrito en el ejemplo 3; MS(ES+) m/e 383/385 [M+H]^{+}.

Ejemplo 62 2-cloro-5-(2-{1-[4-clorobencilamino)-metil] ciclohexil}-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il]fenol

37

El compuesto del título se preparó a partir del producto del ejemplo 62 y 4-clorobenzaldehído, utilizando el método de alquilación reductora general, descrito para los ejemplos 12-34; MS(ES+) m/e 507/509 [M+H]^{+}.

Ejemplo 63 5-[2-(1-amino-1-metiletil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il] -2-clorofenol

38

El compuesto del título se preparó a partir del producto del ejemplo 1, etapa 3, y 2-terc-butoxicarbonilamino-2-metilpropanal (T. Seki et al., Chem. Pharm. Bull., 1996, 44, 2061), utilizando los métodos descritos en el ejemplo 1, etapa 4, seguidos de los utilizados en el ejemplo 2 y ejemplo 3; MS(ES+) m/e 329/331 [M+H]^{+}.

Ejemplo 64 N-{1-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -1-metiletil}metanosulfonamida

39

El compuesto del título se preparó a partir del producto del ejemplo 63, utilizando los métodos descritos en el ejemplo 4, seguido del ejemplo 3. El producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice; MS(ES+) m/e 407/409 [M+H]^{+}.

Ejemplos 65-78

40

Los ejemplos 65-78 se prepararon mediante el siguiente método general.

Una mezcla del producto del ejemplo 63 (100 mg, 0,29 mmol), el aldehído especificado (0,32 mmol) y cianoborohidruro de trimetilamonio unido a un polímero (125 mg, 0,5 mmol, 4 mmol/g) en metanol (3 ml) que contenía ácido acético glacial (0,05 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 24 horas. La reacción entonces se filtró, el filtrado se concentró al vacío y el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice.

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(Tabla pasa a página siguiente)

41

42

43

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Ejemplos 79-82

44

Los ejemplos 79-82 se prepararon mediante el siguiente método general.

La amina especificada (0,24 mmol) y trifosgeno (33 mg, 0,11 mmol) se añadieron a una suspensión de diisopropiletilamina unida a un polímero (200 mg) en diclorometano (3 ml). Después de agitar durante 30 minutos a temperatura ambiente, la mezcla se trató con el producto del ejemplo 63 (100 mg, 0,30 mmol). La reacción entonces se agitó durante 3 horas, se filtró, el filtrado se concentró al vacío y el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice.

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(Tabla pasa a página siguiente)

45

Ejemplo 83 5-[2-(2-amino-1,1-dimetiletil)-5-(2-aminopirimidin-4-il) -1H-imidazol-4-il]-2-clorofenol

46

Etapa 1

1-(4-cloro-3-metoxifenil)-2-(2-metilsulfanil-pirimidin-4-il)etanona

El compuesto del título (0,650 g, 48%) se preparó a partir del ejemplo 1, etapa 1, y de 4-metil-2-metilsulfanilpirimidina, utilizando el método descrito en el ejemplo 1, etapa 2; MS(AP+) m/e 309/311 [M+H]^{+}.

Etapa 2

2-oxima de la 1-(4-cloro-3-metoxifenil)-2-(2-metilsulfanilpirimidin-4-il) etan-1,2-diona

Se añadió nitrito de sodio (0,290 g, 4,2 mmol) de modo discontino a una suspensión del producto de la etapa 1 (0,650 g, 2,1 mmol) en HCl 3 M (10 ml) a 0ºC. Después de 30 minutos, la suspensión se calentó hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. La suspensión entonces se ajustó a pH 8 con una disolución de hidróxido de sodio acuosa 2 M, y el sólido se separó mediante filtración y se secó al vacío para producir el compuesto del título (0,650 g, 92%) como un sólido de color amarillo pálido; MS(AP-) m/e 336/338 [M-H]^{-}.

Etapa 3

Éster terc-butílico del ácido {2-[4-(4-cloro-3-metoxifenil) -1-hidroxi-5-(2-metilsulfanilpirimidin-4-il)-1H-imida- zol-2-il] -2-metilpropil}carbámico

El producto de la etapa 2 (0,6 g, 1,78 mmol), el éster terc-butílico del ácido (2,2-dimetil-3-oxopropil)carbámico (0,715 g, 3,56 mmol) y acetato de amonio (1,37 g, 17,8 mmol) se disolvieron en ácido acético (10 ml) y se calentaron a reflujo durante 3 horas. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, la reacción se vertió en una suspensión de hidróxido de amonio y hielo, y después se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos entonces se lavaron con agua, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo entonces se purificó mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo/hexano (1:1), para dar el compuesto del título como un sólido de color amarillo; MS(AP+) m/e 520/522 [M+H]^{+}.

Etapa 4

Éster terc-butílico del ácido {2-[4-(4-cloro-3-metoxifenil) -5-(2-metilsulfanilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-il]-2-metilpropil}carbámico

Una disolución agitada del producto de la etapa 3 (0,420 g, 0,81 mmol) en DMF (10 ml) a 100ºC, se trató con trietilfosfito (2,68 g, 16,2 mmol). Después de agitar durante 1 hora la mezcla entonces se enfrió, se concentró al vacío y el residuo se cromatografió en gel de sílice, eluyendo con diclorometano/éter dietílico (9:1), para producir el compuesto del título como una goma incolora (0,40 g, 97%); MS(AP+) m/e 504/506 [M+H]^{+}.

Etapa 5

Éster terc-butílico del ácido {2-[4-(4-cloro-3-metoxifenil) -5-(2-metansulfonilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-il]-2-metilpropil}carbámico

Una suspensión del producto de la etapa 4 (0,3 g, 0,6 mmol) en metanol (10 ml) se trató con oxona (0,735 g, 1,2 mmol) en agua (10 ml) y después de 3 horas, se añadió más oxona (0,367 g, 0,6 mmol) en agua (5 ml). Después de dos horas más, la mezcla se filtró y el filtrado se diluyó con acetato de etilo. La capa orgánica entonces se separó, se secó (sulfato de magnesio), se concentró y el producto bruto se utilizó directamente en la siguiente etapa; MS(AP+) m/e 536/538 [M+H]^{+}.

\newpage

Etapa 6

Éster terc-butílico del ácido {2-[5-(2-aminopirimidin-4-il)-4-(4-cloro-3-metoxifenil)-1H-imidazol-2-il]-2-metilpropil}carbámico

El producto bruto de la etapa 5 se disolvió en tetrahidrofurano (5 ml), se trató con una disolución de amoniaco 0,880 (20 ml) y después se calentó a 100ºC en un autoclave. Después de 4 horas, la reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, se concentró al vacío y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con diclorometano/metanol/disolución de amoniaco 0,880 (19:1:0,1) para dar el compuesto del título (0,2 g, 70%, 2 etapas) como un sólido de color amarillo; MS(AP+) m/e 573/575 [M+H]^{+}.

Etapa 7

4-[2-(2-amino-1,1-dimetiletil)-5-(4-cloro-3-metoxifenil)-3H-imidazol-4-il]pirimidin-2-ilamina

Una disolución del producto de la etapa 6 (0,200 g, 0,42 mmol) en diclorometano (5 ml) que contenía ácido trifluoroacético (2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La disolución se concentró a presión reducida y el residuo se repartió entre una disolución de bicarbonato de sodio saturada y acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera y después con agua, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo entonces se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con cloroformo/metanol/disolución de amoniaco 0,880 (9:1:0,1) para producir el compuesto del título (0,100 g, 64%) como un sólido de color amarillo pálido; MS(ES+) m/e 373/375 [M+H]^{+}.

Etapa 8

5-[2-(2-amino-1,1-dimetiletil)-5-(2-amino-pirimidin-4-il)-1H-imidazol-4-il]-2-clorofenol

Una disolución del producto de la etapa 7 (0,100 g, 0,27 mmol) en diclorometano (5 ml) se enfrió hasta 5ºC, y se trató con tribromuro de boro (1,3 ml, 1,3 mmol, 1 M en diclorometano). La disolución entonces se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora antes de añadir más tribromuro de boro (0,6 ml, 0,6 mmol). Después de otra hora, se añadió agua (5 ml) y la reacción entonces se calentó hasta 50ºC durante 1 hora. La mezcla entonces se enfrió y el disolvente se eliminó al vacío, y el residuo se volvió a disolver en etanol y se trató con una disolución de amoniaco 0,880 antes de concentrarse al vacío. El residuo entonces se purificó mediante una cromatografía de intercambio catiónico, eluyendo con metanol, y después con metanol/amoniaco 0,880 (9:1) para producir el compuesto del título (0,035 g, 36%) como un sólido de color amarillo; MS(ES+) m/e 359/361 [M+H]^{+}.

Ejemplos 84-95

47

Los ejemplos 84-95 se prepararon mediante el siguiente método general.

Una mezcla del producto del ejemplo 83 (100 mg, 0,28 mmol), el aldehído especificado (0,31 mmol) y cianoborohidruro de trimetilamonio unido a un polímero (125 mg, 0,5 mmol, 4 mmol/g) en metanol (3 ml) que contenía ácido acético glacial (0,05 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 24 horas. La reacción entonces se filtró, el filtrado se concentró al vacío y el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice.

48

49

50

Reactivos

Reactivo A

1-(2-metoxietil)-piperidin-4-carbaldehído

51

Etapa 1

Éster etílico del ácido 1-(2-metoxietil)-piperidin-4-carboxílico

Etapa 2

1-(2-metoxietil)-piperidin-4-carbaldehído

Se añadió hidruro de diisobutilaluminio (10,2 ml, disolución 1 M en THF) a una disolución del éster etílico del producto de la etapa 1 (2,0 g, 9,3 mmol) en tolueno (40 ml) durante un periodo de 1 hora a -78ºC. La reacción se agitó a -78ºC durante 1 hora, y después se extinguió con metanol (5 ml) y una disolución de acetato de amonio acuosa (5 ml). La mezcla se agitó durante 1 hora y después se filtró a través de celite. El filtrado se concentró al vacío para producir el compuesto del título (1,1 g, 69%); MS(ES+) m/e 172 [M+H]^{+}.

Reactivo B

3-metoxi-4-(2-morfolin-4-iletoxi)fenilamina

52

Etapa 1

4-[2-(2-metoxi-4-nitrofenoxi)etil]morfolina

Etapa 2

3-metoxi-4-(2-morfolin-4-iletoxi)fenilamina

\newpage

Reactivo C

(3,4-difluorofenoxi)acetaldehído

53

Etapa 1

4-(2,2-dimetoxietoxi)-1,2-difluorobenceno

Etapa 2

(3,4-difluorofenoxi)acetaldehído

Ejemplos biológicos

Ensayo de unión de quinasas de anisotropía de fluorescencia

Concentración de la enzima B-Raf: 1 nM

Concentración del ligando fluorescente: 0,5 nM

Concentración del compuesto de ensayo: 0,1 nM-100 uM

La lectura de la anisotropía de fluorescencia se realiza en LJL Acquest.

Definiciones:

K_{i} = constante de disociación para la unión del inhibidor

K_{f} = constante de disociación para la unión del ligando fluorescente

El ligando fluorescente es el siguiente compuesto:

54

que se deriva de 5-[2-(4-aminometilfenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il] -2-clorofenil y verde de rodamina.

Ensayo de la Raf-quinasa

Método

Resultados

Método

Claims

1. Un compuesto de fórmula (I):

55

en la cual

X es O, CH_{2}, S o NH, o el resto X-R^{1} es hidrógeno;

V es CH o N;

R^{2} y R^{3} representan independientemente metilo;

Ar es fenilo o un anillo heteroarilo de 5 ó 6 eslabones, cualquiera de los cuales puede estar no sustituido o sustituido con halógeno, hidroxi, hidroxi(aquilo C_{1-6}) o alcoxi C_{1-6};

n es 0;

R^{6} es hidrógeno o alquilo C_{1-6};

R^{9} es hidrógeno, ciano, alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-7} o arilo;

Z es oxígeno o azufre;

o su sal farmacéuticamente aceptable;

con la condición de que el compuesto de fórmula (I) no es:

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el cual R^{4} es hidrógeno.

3. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el cual Ar es fenilo opcionalmente sustituido.

4. Un compuesto según la reivindicación 3, en el cual Ar está sustituido con hasta 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, hidroxi, hidroxi(alquilo C_{1-6}) y alcoxi C_{1-6}.

5. Un compuesto según la reivindicaión 4, en el cual Ar es 3-hidroxi-4-halofenilo.

6. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el cual Y es NR^{10}R^{11}.

7. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el cual R^{10} es hidrógeno.

8. Un compuesto seleccionado de:

5-[2-(1-amino-1-metiletil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il]-2-clorofenol;

N-{1-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -1-metiletil}metansulfonamida;

2-cloro-5-{2-[1-(4-metoxibencilamino)-1-metiletil] -5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il}fenol;

2-cloro-5-{2-[1-(3-metoxibencilamino)-1-metiletil] -5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il}fenol;

2-cloro-5-{2-[1-(3,4-diclorobencilamino)-1-metiletil] -5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il}fenol;

2-cloro-5-{2-[1-(4-metansulfonilbencilamino)-1-metiletil] -5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il}fenol;

2-cloro-5-{2-[1-(4-trifluorometilbencilamino)-1-metiletil] -5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il}fenol;

2-cloro-5-{2-[1-metil-1-(4-pirrolidin-1-ilbencilamino)-1-metiletil] -5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il}fenol;

N-[4-({1-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -1-metiletilamino}metil)fenil]acetamida;

2-cloro-5-(2-{1-[(furan-3-ilmetil)amino] -1-metiletil}-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il)fenol;

2-cloro-5-(2-{1-metil-1-[(piridin-3-ilmetil)amino] -etil}-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il)fenol;

2-cloro-5-(2-{1-[(1H-imidazol-2-ilmetil)amino] -1-metiletil}-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il)fenol;

2-cloro-5-(2-{1-metil-1-[(tiazol-2-ilmetil)amino] -etil}-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il)fenol;

2-cloro-5-(2-{1-metil-1-[(tiofen-2-ilmetil)amino] -etil}-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il)fenol;

2-cloro-5-{2-[1-metil-1-(4-trifluorometoxibencil-amino)etil] -5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il}fenol;

2-cloro-5-[2-(1-{[1-(2-metoxietil)piperidin-4-ilmetil] amino}-1-metiletil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-4-il]fenol;

1-{1-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -1-metiletil}-3-fenilurea;

1-{1-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -1-metiletil}-3-[4-(2-dimetilaminoetoxi)-fenil]
urea;

1-{1-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -1-metiletil}-3-[4-metoxi-3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil]urea; o

1-{1-[4-(4-cloro-3-hidroxifenil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il] -1-metiletil}-3-[3-metoxi-4-(2-morfolin-4-iletoxi)fenil]urea.

9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o su sal farmacéuticamente aceptable, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. El uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o su sal farmacéuticamente aceptable, pero sin las condiciones vii) y viii), en la preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico o terapéutico de cualquier estado de enfermedad en un ser humano, u otro mamífero, que está exacerbado o provocado por un acontecimiento neurotraumático.

11. El uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o su sal farmacéuticamente aceptable, pero sin las condiciones vii) y viii), en la preparación de un medicamento para el tratamiento profiláctico o terapéutico del cáncer.