ES2226960T3 - Extracto de ajuga turkestanica y sus usos en cosmetica. - Google Patents
Extracto de ajuga turkestanica y sus usos en cosmetica.Info
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Abstract
Extracto de la planta Ajuga turkestanica que contiene al menos un ecdisteroide y al menos un iridoide, caracterizado por contener una parte en peso de al menos un ecdisteroide y 2 a 4 partes en peso, preferiblemente 3 partes en peso, de al menos un iridoide.
Description
Extracto de Ajuga turkestanica y sus usos
en cosmética.
La presente invención se relaciona con un nuevo
extracto de la planta Ajuga turkestanica, así como con sus
aplicaciones en el campo cosmético.
Se describió en la patente francesa FR 2.696.075
la utilización de ecdisteroides para reforzar la barrera hídrica de
la piel gracias a su acción sobre la diferenciación de los
queratinocitos. Esta patente cita un gran número de fuentes de
ecdisteroides, tanto en el campo animal como en el vegetal. Entre
estas numerosas fuentes, se encuentran, en particular, dos plantas
de la familia de las Ajuga, a saber, Ajuga iva y
Ajuga decumbens.
La planta Ajuga turkestanica es una planta
de la familia de las Labiadas, del género Ajuga, especie
turkestanica, que crece en Asia central, en particular en
Uzbekistán. Su nombre uzbek tradicional es "sanobar", la
hechicera.
Esta planta era utilizada en medicina tradicional
en forma de tisana por sus propiedades tonificantes y
hepatoprotectoras.
Un estudio reciente titulado "Effect of a lipid
concentrate from the aboveground portion of Ajuga turkestanica on
the metabolic proccesses and dynamics of healing skin wounds
experimentally", Pharmaceutical Chemistry Journal, Vol. 28, Nº
11, 1994, 837-840, relacionó ensayos farmacológicos
realizados a partir de extractos clorofórmicos de las partes aéreas
de esta planta. Entre los resultados relacionados en esta
publicación, se vio que los extractos presentaban una cierta
actividad de hidratación de los tejidos.
Los inventores de la presente invención han
descubierto ahora que era posible, a condición de utilizar solventes
netamente más polares que los utilizados en el marco de este
estudio experimental, obtener extractos muy diferentes que
presentaban no sólo propiedades notablemente mejoradas de
hidratación de la epidermis ligadas, por una parte, al mejoramiento
de la diferenciación de los queratinocitos, que conduce al refuerzo
de la barrera hídrica de la piel, sino también a una hidratación
llamada "hidratación activa" de la epidermis por reabsorción
de agua y mejoramiento de los flujos hídricos en la epidermis.
Los extractos que constituyen en sí mismos
productos novedosos constituyen el primer objeto de la presente
invención, que se relaciona también, según otros objetos, con
composiciones cosméticas y utilizaciones de estos extractos en el
campo de la cosmética.
Además, continuando con sus investigaciones, los
inventores de la presente invención pusieron en evidencia que, entre
los extractos de la invención, algunos contenían asociaciones de
agentes activos bien determinadas en proporciones bien
determinadas, a continuación denominadas como "asociaciones" de
la invención, nunca utilizadas hasta la fecha en composiciones
cosméticas. Las composiciones cosméticas que contienen estas
asociaciones, así como las utilizaciones cosméticas de estas
asociaciones, constituyen, pues, otro objeto de la invención.
Los inventores de la presente invención dedujeron
de las propiedades de los extractos y asociaciones de la invención
que estos extractos y asociaciones eran particularmente activos
para regular y/o mejorar la funcionalidad de las acuaporinas
AQP3.
Las acuaporinas o canales hídricos son sistemas
proteicos de transmembrana transportadores de agua y de pequeñas
moléculas en solución, tales como el glicerol y la urea, por
ejemplo. El tamaño de estas acuaporinas es de aproximadamente 30
kDa, con 6 pasos de transmembrana en alfa-hélice
(Jung y col., "Molecular structure of the water channel through
aquaporin CHIP", en J. Biol. Chem. 1994, Vol. 269, pp.
14648-14654).
La presencia de acuaporinas de tipo 3 o AQP3 en
la epidermis humana y, más concretamente, en la membrana plasmática
de los queratinocitos de la piel humana fue descrita por R. SOUGRAT
y col. en el artículo "Functional expression of AQPO3 in human
epidermis and keratinocyte cell cultures", publicado en
Molecular Biology of the Cell, Nov. 1998, Vol. 9, página 499a. R.
SOUGRAT y col. describieron también en este artículo el importante
papel que juegan estas AQP3 en el transporte de agua en el seno de
la epidermis humana.
Así pues, la invención es el resultado del
descubrimiento de que, seleccionando medios solventes
particularmente polares, era posible obtener extractos de la planta
Ajuga turkestanica que presentan propiedades cosméticas
particularmente interesantes y de que, entre estos extractos,
algunos contienen asociaciones de agentes activos cuya utilización
cosmética conduce a las mismas propiedades cosméticas notables.
Estos extractos y asociaciones permiten, en particular, mejorar la
diferenciación de los queratinocitos, lo que permite mejorar la
hidratación de la piel y obtener una actividad antienvejecimiento
particularmente eficaz. Además, los inventores de la presente
invención pudieron observar que los extractos y asociaciones de la
invención tenían una eficacia particular para regular los flujos
hídricos en la epidermis, actividad que pudieron ligar a una notable
actividad de los extractos de la invención sobre la regulación y/o
la funcionalidad de las acuaporinas AQP3, permitiendo así una mejor
hidratación de las capas basales de la epidermis.
Así, según una de sus características esenciales,
la invención se relaciona con un extracto de la planta Ajuga
turkestanica, caracterizado por contener al menos un
ecdisteroide y al menos un iridoide y por ser susceptible de ser
obtenido por extracción de una parte al menos de dicha planta por
medio de un solvente o de una mezcla de solventes constituida por
de un 0 a un 60% en peso de agua, estando constituido el resto de
dicho solvente o mezcla de solventes por al menos un alcohol
C_{1} a C_{4} y/o acetona y/o butilenglicol y/o
propilenglicol.
El procedimiento de extracción utilizable para
preparar los extractos de la invención es ventajosamente llevado a
cabo en condiciones tales que dicha extracción sea realizada con
dicho solvente o mezcla de solventes durante 1 a 4 horas.
El procedimiento de extracción utilizable para
preparar los extractos de la invención es ventajosamente llevado a
cabo en condiciones tales que dicha extracción sea realizada a
reflujo de dicho solvente o mezcla de solventes durante 1 a 4
horas.
La extracción puede ser realizada sobre la planta
entera o sobre una parte de la planta. Sin embargo, se preferirá
utilizar, para la preparación de los extractos de la invención, las
raíces de la planta.
Las proporciones de agua y de alcohol o de agua y
de acetona en el solvente o mezcla de solventes utilizados para la
realización del procedimiento de extracción que permite preparar
los extractos de la invención pueden variar en grandes
proporciones. Sin embargo, se preferirá, para los solventes
alcohólicos o la acetona, una proporción de agua comprendida entre
el 0 y el 50% en peso.
Las proporciones de agua y de butilenglicol o
propilenglicol en el solvente o mezcla de solventes utilizados para
la realización del procedimiento de extracción que permite preparar
los extractos de la invención pueden variar en grandes
proporciones. Sin embargo, se preferirá, para el butilenglicol o el
propilenglicol, una proporción próxima al 50% de agua en peso.
La mezcla de solventes utilizada para la
realización del procedimiento de extracción que permite preparar los
extractos de la invención puede estar compuesta por una mezcla
cualquiera de alcoholes C1 a C4, agua y butilenglicol o
propilenglicol.
A modo de alcoholes preferidos para la
realización del procedimiento que permite preparar los extractos de
la invención, se citarán esencialmente el metanol y el etanol.
Para la preparación de los extractos según la
invención, se recurrirá ventajosamente a mezclas de
agua-etanol, agua-metanol,
agua-acetona, agua- propilenglicol o
agua-butilenglicol.
En el caso de las mezclas de
agua-etanol, se escogerá ventajosamente una mezcla
que contenga de un 70 a un 90% de etanol y de un 30 a un 10% de
agua, preferiblemente una mezcla que contenga un 80% de etanol para
un 20% de agua.
En el caso de las mezclas de
agua-metanol, se escogerá ventajosamente una mezcla
que contenga de un 70 a un 90% de metanol y de un 30 a un 10% de
agua, preferiblemente una mezcla que contenga un 80% de metanol para
un 20% de agua.
En el caso de las mezclas de
agua-acetona, se escogerá ventajosamente una mezcla
que contenga de un 70 a un 90% de acetona y de un 30 a un 10% de
agua, preferiblemente una mezcla que contenga un 80% de acetona para
un 20% de agua.
En el caso de las mezclas de
agua-propilenglicol, se escogerá ventajosamente una
mezcla que contenga de un 40 a un 60% de propilenglicol y de un 60
a un 40% de agua, preferiblemente un 50% de propilenglicol para un
50% de agua.
En el caso de las mezclas de
agua-butilenglicol, se escogerá ventajosamente una
mezcla que contenga de un 40 a un 60% de butilenglicol y de un 60 a
un 40% de agua, preferiblemente un 50% de butilenglicol para un 50%
de agua.
Se ve que los extractos de la invención contienen
ventajosamente asociaciones que contienen una parte en peso de al
menos un ecdisteroide y de 2 a 4 partes en peso, preferiblemente 3
partes en peso, de al menos un iridoide.
Estas asociaciones son a continuación nombradas
por simplificación como "asociaciones" según la invención.
Según una variante ventajosa, los ecdisteroides
contenidos en estas asociaciones son seleccionados entre el grupo
constituido por ecdisterona, 2,3-monoacetónido de
ecdisterona, turkesterona, ciasterona,
22-acetilciasterona y
alfa-ecdisona.
Según una variante ventajosa, los iridoides
contenidos en las asociaciones son seleccionados entre el grupo
constituido por la harpagida y su derivado
8-O-acetilado.
Según una variante ventajosa, los diferentes
ecdisteroides contenidos en estas asociaciones son compuestos,
expresados en peso, de un 30 a un 35% de ecdisterona, un 20 a un 25%
de turkesterona, un 20 a un 24% de
22-acetilciasterona, un 11 a un 15% de
2,3-monoacetónido de ecdisterona, un 6 a un 7% de
alfa-ecdisona y un 2 a un 4% de ciasterona.
Según otra variante ventajosa, los iridoides son
compuestos, expresados en peso, de un 60 a un 70% de
8-O-acetilharpagida y de un 30 a un
40% de harpagida.
Como se ha expuesto anteriormente, los extractos
de la invención presentan una actividad particular de diferenciación
de los queratinocitos, lo que les permite contribuir al refuerzo
del papel de barrera hídrica de la epidermis, mejorando así su
hidratación y desempeñando una función de antienvejecimiento,
mejorando el aspecto y la calidad de la piel, lo que permite así
obtener una piel bella, una piel suave.
Los ensayos realizados por los inventores de la
presente invención han mostrado que también se obtenían las notables
propiedades de los extractos de la invención con las asociaciones de
ecdisteroide e iridoide particulares tales como las definidas
anteriormente.
Así pues, según un segundo aspecto, la presente
invención se relaciona con la utilización de un extracto de la
planta Ajuga turkestanica o de una asociación de al menos un
ecdisteroide y de al menos un iridoide tal como se ha definido
anteriormente como agente cosmético mejorador de la diferenciación
de los queratinocitos. Esta actividad sobre la diferenciación de los
queratinocitos lleva a mejorar la función de la barrera hídrica de
la epidermis y, en consecuencia, a un efecto hidratante, a un
efecto de antienvejecimiento, y permite también mejorar el aspecto
y la calidad de la piel, para conseguir, en particular, una piel
bella, una piel más suave.
Como se ha expuesto anteriormente, los ensayos
realizados por los inventores han permitido poner en evidencia la
actividad de los extractos de la invención y de las asociaciones
antes definidas sobre el transporte de agua en la epidermis,
actividad ligada, al menos en parte, a una acción, también
evidenciada por los inventores de la invención, sobre la regulación
y/o la funcionalidad de las acuaporinas AQP3.
En efecto, es bien sabido que, al envejecer la
piel, ésta se vuelve más fina y más seca, dando este aspecto fino
con escamas que se encuentra, en particular, en las personas de
edad. En la piel, es bien sabido que existe un gradiente de agua de
la capa basal de la epidermis a las capas más superficiales del
estrato córneo. Es así que los inventores de la presente invención
han evidenciado, tras haber estudiado el transporte de agua sobre
cultivos procedentes de queratinocitos humanos normales tratados y
controles, mediante medidas de permeabilidad, que los extractos de
la invención permitían aumentar el flujo de agua en la epidermis y
especialmente los flujos de reabsorción del agua hacia la capa
basal de la epidermis, lo que lleva a una mejor hidratación de la
epidermis y de las capas basales de la epidermis en particular.
Otros estudios realizados por los inventores de
la presente invención han permitido también poner en evidencia el
efecto sobre las acuaporinas AQP3.
Así, según otro aspecto, la invención se
relaciona con la utilización de los extractos de la invención, así
como de las asociaciones definidas anteriormente, como agente
cosmético regulador, en la epidermis, de los flujos hídricos y de la
reabsorción de agua.
Según otro aspecto, la invención se relaciona con
la utilización de estos extractos o asociaciones como agente
cosmético destinado a hidratar la epidermis.
La invención se relaciona también, según un
quinto aspecto, con una composición cosmética, especialmente con
actividad de diferenciación de los queratinocitos, que mejora la
función de la barrera hídrica de la epidermis, con efecto
hidratante y con efecto de antienvejecimiento, cuya composición está
destinada a mejorar el aspecto y la calidad de la piel y a mejorar
su hidratación por regulación, en la epidermis, de los flujos
hídricos y de la reabsorción de agua, caracterizada por contener
una cantidad cosméticamente eficaz para el fin buscado de un
extracto de la planta Ajuga turkestanica tal como se ha
definido anteriormente o de una asociación tal como se ha
definido
anteriormente.
anteriormente.
El contenido en extracto de la planta Ajuga
turkestanica está preferiblemente comprendido entre el 0,005 y
el 10%, preferiblemente entre el 0,01 y el 2% en peso, con respecto
al peso total de la composición.
Además, el extracto de la planta Ajuga
turkestanica según la presente invención es ventajosamente
utilizado en las composiciones de la invención en combinación con
cualquier otro principio activo conocido por el experto en la
técnica, en particular con cualquier otro principio activo
seleccionado entre el grupo constituido por la vitamina A y sus
ésteres, en particular el palmitato y el acetato de vitamina A; la
vitamina E y sus ésteres, en particular el fosfato y el acetato de
vitamina E; la vitamina C y sus derivados, en particular el
ascorbilfosfato de magnesio; las xantinas, en particular la
cafeína; el ácido asiático; el ácido madecásico; los asiaticósidos;
los madecasósidos; los extractos de Centella asiatica; el
ácido elágico; las saponinas de soja; los extractos de
Bertholletia; los extractos de Panax ginseng; las
aguas de origen marino; el aspartato de magnesio; el cloruro de
manganeso; el AMP cíclico; la D- xilosa; el ácido hialurónico; el
gluconato de calcio; las isoflavonas; el glicirricinato de amonio;
los corticosteroides; los extractos de Phellodendron
amurense; el resveratrol, y los piceidos.
Las isoflavonas antes citadas son especialmente
las comercializadas bajo la denominación de "fujiflavonas" por
la sociedad japonesa FUJICCO.
De un modo general, las composiciones cosméticas
de la invención contienen excipientes o soportes cosméticamente
aceptables para una aplicación tópica sobre la piel. Son bien
conocidos por el experto en la técnica ejemplos de tales
excipientes o soportes cosméticamente aceptables.
Las composiciones de la invención pueden ser
formuladas en cualquier forma cosméticamente aceptable, en
particular en forma de crema, de gel o de loción.
La invención se relaciona también con un
procedimiento de tratamiento cosmético de la piel según el cual se
aplica a la piel una cantidad cosméticamente eficaz de extracto
según la invención o de una asociación tal como se ha definido
anteriormente.
Se entiende que la invención permite así utilizar
las propiedades particularmente inesperadas observadas para el
extracto de la planta Ajuga turkestanica.
Otros fines, características y ventajas de la
invención se harán claramente evidentes para el experto en la
técnica a partir de la descripción explicativa que sigue, hecha en
relación a una prueba de actividad de mejoramiento de la
diferenciación de los queratinocitos, así como a una prueba que
evidencia los transportes hídricos en la epidermis. Se dan también
diversos ejemplos de formulaciones de composiciones cosméticas
simplemente a título ilustrativo y que no podrían, pues, en modo
alguno limitar el alcance de la invención. En los ejemplos, se dan
todos los porcentajes en peso, salvo indicación en contrario.
Se realiza una extracción en caliente de raíces
de Ajuga turkestanica mediante un solvente compuesto por un
80% de etanol y por un 20% de agua.
Se tratan 10 kg de materia seca (raíces de
Ajuga turkestanica) con 160 kg de solvente (mezcla de
etanol-agua en proporciones respectivas de 80/20) a
50ºC durante 2 horas.
Se enfría el conjunto hasta la temperatura
ambiente (aproximadamente 21ºC).
Se filtra luego el conjunto enfriado sobre un
filtro de 5 \mum (con el fin de eliminar las materias en
suspensión y las materias que han precipitado).
Se evapora el conjunto filtrado a sequedad (para
eliminar el solvente de extracción).
Se recoge el conjunto que ha sido evaporado a
sequedad en 1 litro de agua.
El conjunto que ha sido recogido en 1 litro de
agua sufre una homogeneización fuerte (por agitación) más
ultrasonidos. Se continúa con este tratamiento (homogeneización +
ultrasonidos) hasta obtener una solución homo-
génea.
génea.
El conjunto homogeneizado sufre una congelación
rápida a -40ºC y se le mantiene a esta temperatura durante
aproximadamente 4 horas.
El conjunto congelado sufre una
liofilización.
Tras la liofilización, se obtiene un polvo que es
un extracto seco de Ajuga turkestanica según la invención, al
que denominaremos "extracto S".
Se analizó este extracto recurriendo a las
técnicas analíticas clásicas, especialmente:
- -
- utilización de reveladores específicos de la química de reacciones,
- -
- cromatografía líquida de alto rendimiento ("HPLC"),
- -
- cromatografía en capas finas de alto rendimiento ("TLHPC") y
- -
- cromatografía en fase gaseosa ("GPC"),
y responde a la composición que se da a
continuación en porcentaje en peso:
\newpage
ecdisterona
\dotl2,75%
turkesterona
\dotl2,00%
22-acetilciasterona
\dotl1,93%
2,3-monoacetónido de ecdisterona
\dotl1,18%
alfa-ecdisona
\dotl0,59%
ciasterona
\dotl0,27%
ajugasterona B
\dotl0,028%
ajugalactona
\dotl0,016%
8-O-acetilharpagida
\dotl16,70%
harpagida
\dotl9,20%
substancias pectínicas
\dotl24,30%
taninos
\dotl4,92%
agua
\dotl6,95%
monosacáridos (fructosa, glucosa)
\dotl19,98%
cenizas
\dotl6,97%
Este extracto puede ser incorporado en
composiciones cosméticas.
Es posible, se entiende, mejorar este extracto
haciéndole sufrir purificaciones con objeto, por ejemplo, de
eliminar las formas tánicas, las formas polisacáridas, las formas
polipeptídicas y los pigmentos clorofílicos. El experto en este
campo dispone de numerosas técnicas para realizar estas
purificaciones; citaremos, por ejemplo, la utilización de
absorbentes selectivos, tales como el carbón activo o los geles de
sílice, las técnicas de precipitación diferenciales, las técnicas de
solubilización diferenciales o las técnicas de reparto
líquido-líquido.
Para las necesidades de los ejemplos B, C y D
siguientes, se vuelve a poner este polvo ("extracto S") en
solución a razón de un 25% de polvo, un 25% de agua y un 50% de
etanol en peso total de la solución final. Denominaremos a la
solución obtenida como "extracto L".
Para realizar este ensayo, se utiliza el extracto
de raíz de la planta Ajuga turkestanica, "extracto L",
obtenido según el ejemplo A.
El presente ensayo utiliza este extracto para
medir la diferenciación de los queratinocitos humanos normales en
cultivo celular emergido.
En el marco de la invención, se entiende por
diferenciación de los queratinocitos el conjunto de los fenómenos
implicados en la maduración de los queratinocitos en
corneocitos.
Para ello, se compararon cultivos celulares
emergidos de queratinocitos humanos tratados con el extracto según
la invención y cultivos no tratados según criterios morfológicos por
técnicas de microscopía óptica o electrónica.
Las condiciones más particulares del ensayo son
ahora descritas a continuación:
Se obtuvieron queratinocitos humanos normales o
KHN a partir de piel de plastia mamaria de una persona de raza
blanca de 29 años, según el método descrito por Eisinger M. en un
artículo titulado "Cultivation of normal human epidermal
keratinocytes and melanocytes", en el libro " Methods in skin
research" publicado en las ediciones D. SKERROW y C.J. SKERROW,
1985, p. 191-212. Estos KHN, cultivados en medio
SFMc de Gibco, fueron utilizados para la realización de las
epidermis reconstruidas sobre las que se estudia el extracto según
la invención.
El cultivo emergido en inserto es una técnica
descrita en la literatura, en particular por M.S.
NOEL-HUDSON y col., en el artículo "Human
epidermis reconstructed on synthetic membrane: Influence of
experimental conditions on terminal differentiation", en la
revista In Vitro Cell. Dev. Biol., 1995, 31, p.
508-515.
Se realizan los cultivos en un sistema de dos
compartimentos (superior/inferior) con ayuda de placas COSTAR que
contienen 12 pocillos comercializadas por D. DUTSCHER, en cuyo
interior se depositan insertos Transwell-clear
COSTAR igualmente comercializados por DUTSCHER de 12 mm de
diámetro.
Se siembran los KHN sobre
Transwell-clear a razón de 115.000 KHN por inserto y
se cultivan en inmersión en medio SFMc hasta la confluencia,
añadiéndose el medio de cultivo en el compartimento superior.
Al confluir los KHN, se retira el medio SFMc del
compartimento superior y se añade entonces al medio de
diferenciación el extracto de la planta Ajuga turkestanica
según la presente invención y se añade luego al compartimento
inferior, para obtener un cultivo emergente en la interfase
aire/líquido.
El medio de diferenciación presenta la
composición esencial siguiente:
DMEM: HAM's F12, de Gibco, que contiene un 5% de
suero de ternera fetal, también de Gibco.
El extracto según la invención ("extracto L"
descrito en el Ejemplo A) fue acondicionado en solución madre a 25
mg/ml en DMSO (sulfóxido de dimetilo) y filtrado sobre filtros con
una porosidad de 0,22 \mum, filtro Millex FGS, con capacidad
esterilizante. Se puso luego el producto en contacto con cultivos
tras su emersión a 2,5, 10 y 25 \mug/ml en medio de
diferenciación durante 14 días, con renovación cada
48-72 h. Se realizaron tres ensayos para cada
concentración estudiada.
Los cultivos control recibieron la misma
proporción de DMSO que los cultivos tratados, o sea 0,1% v/v, y el
ritmo de cambio de medio, así como la duración del tratamiento son
idénticos a los de los cultivos tratados.
Después de 14 días de tratamiento con el extracto
según la invención ("extracto L"), las epidermis reconstruidas
son tratadas para realizar observaciones al microscopio electrónico
y óptico que permitan efectuar un estudio ultraestructural de la
diferenciación de los queratinocitos de estas epidermis
reconstruidas.
Para hacerlo, los cultivos celulares emergidos
sufren sucesivamente una fijación tisular con glutaraldehído, una
deshidratación con etanol y una inclusión en resina, por ejemplo,
según el método descrito por A.R. SPURR en J. Ultrastruct. Res.
USA, 1969, 26, pp. 31-43, que tiene por título "A
low-viscosity epoxy resin
embed-ding medium for electron microscopy".
Se hacen luego cortes semifinos para la
observación al microscopio óptico y cortes ultrafinos para una
observación al microscopio electrónico.
Los cortes semifinos coloreados con azul de
toluidina al microscopio óptico permitieron poner en evidencia que
el espesor de las capas de corneocitos constitutivos de la capa
córnea -o estrato córneo- de la epidermis aumentó muy
considerablemente en las epidermis reconstituidas tratadas mediante
el extracto según la invención con respecto a las epidermis
reconstituidas control. Este aumento es de aproximadamente un
factor de 3 a 4 según los cultivos.
En realidad, se pudo observar que el estrato
córneo de los cultivos celulares emergidos control era muy reducido,
mientras que, gracias al tratamiento por medio del extracto de la
planta Ajuga turkestanica según la invención, fue posible
restaurar una capa córnea de espesor normal.
Siendo igual el espesor total del cultivo en los
dos casos, se puede observar que existen más capas de queratinocitos
basales y suprabasales para el cultivo control. Hay aquí un efecto
del extracto de la invención sobre la diferenciación
queratinocitaria. Es el lugar preciso de la interfase entre la
última capa suprabasal de queratinocitos y la primera capa de
corneocitos del estrato córneo donde se realizan luego las
observaciones por microscopía electrónica de transmisión que se
darán después a continuación.
Por otra parte, para los cultivos celulares
emergidos tratados con el extracto según la invención a dosis de 10
\mug/ml y 25 \mug/ml, se observa el mismo tipo de perfil de
diferenciación queratinocitaria, lo que muestra una uniformidad
entre todos los cultivos tratados con respecto al cultivo control,
que es ciertamente muy diferente. Además, en lo que se refiere a
las observaciones por microscopía electrónica de transmisión a
nivel de la interfase entre las capas suprabasales (KH) y el
estrato córneo (CO), a partir de los cortes ultrafinos contrastados
con acetato de uranilo y citrato de plomo, se puede juzgar por
anticipado la diferenciación queratinocitaria de la forma
siguiente:
- a)
- Cultivo celular emergido control, con 30.000 aumentos:
- -
- desmosomas poco numerosos,
- -
- desmosomas débilmente diferenciados,
- -
- envuelta córnea poco visible,
- -
- corneocitos espesos,
- -
- red de queratina difusa y
- -
- sin corneodesmosomas visibles.
- b)
- Para los cultivos celulares emergidos tratados con el extracto según la invención, respectivamente, a dosis de 2,5, 10 y 25 \mug/ml, se pueden realizar las mismas observaciones siguientes:
- -
- desmosomas numerosos,
- -
- desmosomas muy bien diferenciados,
- -
- filamentos de queratina unidos a la placa desmosómica,
- -
- filamentos de queratina orientados paralelamente al corneocito,
- -
- envuelta córnea bien visible del lado KH,
- -
- corneocitos poco espesos,
- -
- red de queratina compacta,
- -
- presencia de corneodesmosomas y
- -
- espacio intercorneocitario observable (lípido).
Según la conclusión de estos ensayos, se ve que
los extractos según la invención aparecen extremadamente activos a
baja dosis. En los ensayos realizados, el extracto según la
invención actúa desde la concentración de 2,5 \mug/ml sobre la
cohesión intercelular específicamente a nivel de una de las capas
clave de la epidermis en la interfase entre la capa córnea y las
capas basales.
Por su carácter original, este extracto optimiza
la unión entre las capas vivas y la capa córnea, lo que no había
sido observado hasta ahora in vitro.
Con el extracto según la invención, los
filamentos de queratina se organizan mejor y se unen a las placas
desmosómicas. Esto hace pensar intensamente que la capa córnea
puede sufrir deformaciones locales ligadas a las restricciones
físicas que recibe sin sufrir daños gracias a una excelente
elasticidad local. Además, el efecto general del extracto de la
invención sobre la formación de una capa córnea de buena calidad,
gracias a la obtención de corneocitos poco espesos con una envuelta
córnea bien visible y una red de queratina compacta, permite
considerar una acción reguladora sobre la hidratación de las capas
superficiales de la epidermis.
Así, los extractos de la invención permitirán
reforzar el papel de la barrera hídrica de la epidermis, mejorar el
estado de la epidermis y, por lo tanto, el aspecto y la calidad de
la piel, que aparecerá así bella y suave. Gracias a su efecto de
diferenciación de los queratinocitos, la invención permite obtener
un efecto antienvejecimiento particularmente interesante.
Los cultivos de queratinocitos son realizados a
partir de queratinocitos de segundo pase obtenidos de una plastia
quirúrgica efectuada a una mujer de 21 años sobre una membrana
Costar Transwell de 3 \mum de porosidad en un medio de
diferenciación para queratinocitos, tal como el descrito por M.S.
NOEL-HUDSON y col. en el artículo "Human epidermis
reconstructed on synthetic membrane: Influence of experimental
conditions on terminal differentiation", en la revista In Vitro
Cell. Dev. Biol., 1995, 31, pp. 508-515.
Las células fueron tratadas con el extracto según
la invención ("Extracto L", tal como se ha descrito en el
Ejemplo A) a una concentración de 2,5 \mug/ml durante 6 y 17
días, con renovación del medio cada 2-3 días. El
extracto según la invención fue solubilizado en DMSO a 10 mg/ml y
diluido extemporáneamente a 1/4000. Las células control reciben la
misma cantidad de DMSO.
Por D0, se entiende el día en que los cultivos
que han alcanzado la confluencia son emergidos de su medio de
cultivo y expuestos al aire.
Se realizan las mediciones de permeabilidad a
D=0, D=6 y D=17 según un protocolo descrito por R.A. Dorr y col. en
"A new data-acquisition system for the
measurement of the net water flux across epithelia", Computer
Methods and Programs in Biomedicine, 1997, 53, pp
9-14.
Para realizar las mediciones de permeabilidad, se
dispone de filtros en una cámara de medición compuesta por dos
compartimentos llenos de medio de cultivo. El compartimento luminal
(parte superior del cultivo) está cerrado por un catéter unido a un
tubo capilar horizontal lleno de colorante. Cualquier movimiento de
líquido se traduce por un desplazamiento del colorante, que se
puede medir. El flujo de agua será medido en ausencia de gradiente
osmótico (isotonicidad en los dos medios). El flujo de agua medido
es la consecuencia de un flujo neto de disolución a través de la
preparación. La permeabilidad hídrica es medida en
\mul/min/cm^{2}.
A D=0, las células no presentan barrera
significativa al paso de agua, demostrado por una absorción masiva
de agua tras la aplicación de una presión hidrostática en el
compartimento luminal. A partir de D0, las células se diferencian
progresivamente en multicapas y, a partir de D4 ó D7, según las
cepas utilizadas, las células desarrollan una resistencia al paso
de agua.
La tabla siguiente da los flujos de agua en las
epidermis humanas de cultivos tratados con el extracto según la
invención ("Extracto L", tal como se ha descrito en el ejemplo
A) a una concentración de 2,5 \mug/ml. Los flujos son expresados
en \mul/min/cm^{2}.
| Tiempo de tratamiento en días | Epidermis control \mul/min/cm^{2} | Epidermis tratadas \mul/min/cm^{2} |
| D6 | -0,49 | 0,76 |
| D17 | -0,015 | 0,12 |
Un valor negativo indica una secreción y un valor
positivo un flujo de absorción. Contrariamente a las células
control, para las que se mide una secreción de agua, las células
tratadas con el extracto de Ajuga turkestanica según la
invención absorben el agua de forma importante. La importancia de
esta absorción decrece a D=17, pero sigue siendo muy significativa.
La razón de este descenso resulta del aumento de espesor de las
epidermis y de la formación del estrato córneo y de su
impermeabilidad al agua. Los flujos de agua son, pues, menores. Esto
es igualmente cierto para los cultivos control, pero en menor
medida.
El presente estudio demuestra que el producto
descrito en el ejemplo A ("Extracto L"), utilizado a una
concentración de 2,5 \mug/ml en las condiciones antes citadas,
favorece fuertemente un fenómeno de reabsorción de agua. El flujo
va hacia las capas germinativas queratinocitarias y favorece su
hidratación. Esta reabsorción de agua permite aumentar o mantener la
hidratación de las capas "vivas" (queratinocitos) de la
epidermis localizadas en la capa córnea de la epidermis.
R. SOUGRAT y col., en el artículo "Functional
expression of AQP3 in human epidermis and keratinocyte cell
cultures", publicado en Molecular Biology of The Cell, Nov.
1998, Vol. 9, página 499a, describieron la presencia de acuaporinas
3 (AQP3) en la membrana plasmática de los queratinocitos de la piel
humana. Describieron igualmente su importante papel en el transporte
de agua en el seno de la epidermis humana.
Se ha mostrado en el ejemplo C que el extracto
según la invención aumenta mucho los flujos de reabsorción de agua
en la epidermis humana. Teniendo en cuenta la importancia de los
flujos de agua medidos, éstos no pueden explicarse más que por un
transporte de agua controlado por las AQP3. Un paso transcelular a
través de la bicapa fosfolipídica de la membrana plasmática de los
queratinocitos sería de una amplitud mucho más débil. Un control
permitió descartar la posibilidad de un paso pericelular de agua.
En efecto, cuando se hace variar la presión hidrostática aplicada
sobre la epidermis, el flujo de agua no resulta afectado.
Es por lo que los inventores de la presente
invención han deducido que estos extractos eran particularmente
activos para regular y/o mejorar la funcionalidad de las acuaporinas
3 (AQP3).
En las composiciones cosméticas descritas a
continuación, los extractos de Ajuga turkestanica son
extractos secos, salvo indicación en contrario.
| Extracto de Ajuga turkestanica (extracto S) | 0,025 g |
| Acetato de vitamina E | 0,100 g |
| Palmitato de vitamina A | 0,010 g |
| Ascorbilfosfato de magnesio | 0,200 g |
| Ceramidas de trigo | 0,200 g |
| Proteínas de trigo | 1,000 g |
| Filtro UVA-UVB | 5,000 g |
| Excipiente con conservantes y perfumes | csp. 100 g |
El extracto de Ajuga turkestanica
(extracto S) utilizado en esta Emulsión es el extracto antes
descrito en el Ejemplo A.
Esta emulsión nutritiva mejora la hidratación
cutánea, en particular de la epidermis, la finura y el grano de la
piel y atenúa las arrugas. Se aplica cotidianamente sobre la
cara.
| Extracto de Ajuga turkestanica (extracto S) | 0,040 g |
| Aspartato de magnesio | 0,100 g |
| Extracto de Centella asiatica | 0,100 g |
| Saponinas de soja | 0,050 g |
| Excipiente con conservantes y perfumes | csp. 100 g |
El extracto de Ajuga turkestanica
(extracto S) utilizado en este gel es el extracto descrito
anteriormente en el ejemplo A.
Este gel hidratante ejerce un efecto tensor sobre
la piel y mejora la flexibilidad y la firmeza. Se aplica
cotidianamente sobre la cara, el cuello y el busto.
| Extracto de Ajuga turkestanica (extracto S) | 0,020 g |
| Lecitina de soja | 2,000 g |
| Acetato de vitamina A | 0,010 g |
| Vitamina E | 0,010 g |
| Excipiente con conservantes y perfumes | csp. 100 g |
El extracto de Ajuga turkestanica
(extracto S) utilizado en este gel es el extracto descrito
anteriormente en el ejemplo A.
Este gel liposomal es utilizado en aplicación
cotidiana, preferiblemente por la noche y sobre la cara. Mejora la
flexibilidad de la piel y su hidratación. Favorece su
regeneración.
| Extracto de Ajuga turkestanica (extracto S) | 0,030 g |
| Agua de origen marino concentrada en oligoelementos | 10,000 g |
| Extracto de Panax ginseng | 0,200 g |
| AMP cíclico | 0,010 g |
| Cafeína | 0,100 g |
| Excipiente con conservantes y perfumes | csp. 100 g |
El extracto de Ajuga turkestanica
(extracto S) utilizado en esta loción es el extracto descrito
anteriormente en el ejemplo A.
Esta loción hidratante es utilizada en aplicación
cotidiana sobre la cara, preferiblemente por la mañana, para obtener
una piel más bella y más brillante.
| Extracto de Ajuga turkestanica | 0,04 g |
| Cloruro de manganeso | 0,10 g |
| D-xilosa | 0,10 g |
| Ceramidas de trigo | 0,20 g |
| Extracto de regaliz | 0,10 g |
| Acetato de vitamina E | 0,20 g |
| Excipiente con conservantes y perfumes | csp. 100 g |
El extracto de Ajuga turkestanica
utilizado en este fluido es un extracto obtenido con un solvente
compuesto por un 80% de metanol y un 20% de agua. El procedimiento
de extracción es similar al descrito en el ejemplo A, a excepción
de la naturaleza de la mezcla de solventes.
Este fluido es utilizado en aplicación tópica
cotidiana sobre la cara y el cuerpo.
| Extracto de Ajuga turkestanica | 0,025 g |
| Ácido hialurónico | 0,500 g |
| D-xilosa | 0,200 g |
| Pigmentos coloreados | 10,000 g |
| Ceras | 30,000 g |
| Excipiente con conservantes y perfumes | csp. 100 g |
El extracto de Ajuga turkestanica
utilizado en esta máscara es un extracto obtenido con un solvente
compuesto por un 80% de acetona y un 20% de agua. El procedimiento
de extracción es similar al descrito en el ejemplo A, a excepción
de la naturaleza de la mezcla de solventes.
| Extracto de Ajuga turkestanica | 0,5 g |
| Glicirricinato de amonio | 0,5 g |
| Sulfato de dextrano | 0,2 g |
| Excipiente para parche | csp 100 g |
El extracto de Ajuga turkestanica
utilizado en este parche es un extracto obtenido con un solvente
compuesto por un 50% de propilenglicol y un 50% de agua. El
procedimiento de extracción es similar al descrito en el ejemplo A,
a excepción de la naturaleza de la mezcla de solventes.
| Extracto de Ajuga turkestanica | 0,4 g |
| Extracto de Phellodendron amurense | 0,1 g |
| Ácido fusídico | 2,0 g |
| Excipiente | csp 100 g |
El extracto de Ajuga turkestanica
utilizado en esta crema es un extracto obtenido con un solvente
compuesto por un 50% de butilenglicol y un 50% de agua. El
procedimiento de extracción es similar al descrito en el ejemplo A,
a excepción de la naturaleza de la mezcla de solventes.
| Ecdisterona | 0,007 g |
| Turkesterona | 0,005 g |
| 22-Acetilciasterona | 0,005 g |
| 2,3-Monoacetónico de ecdisterona | 0,003 g |
| Alfa-ecdisona | 0,0015 g |
| Ciasterona | 0,0007 g |
| 8-O-Acetilharpagida | 0,04 g |
(Continuación)
| Harpagida | 0,02 g |
| Acetato de vitamina E | 0,100 g |
| Palmitato de vitamina A | 0,010 g |
| Ascorbilfosfato de magnesio | 0,200 g |
| Ceramidas de trigo | 0,200 g |
| Proteínas de trigo | 1,000 g |
| Filtro UVA-UVB | 5,000 g |
| Excipiente con conservantes y perfumes | csp 100 g |
Claims (32)
1. Extracto de la planta Ajuga
turkestanica que contiene al menos un ecdisteroide y al menos un
iridoide, caracterizado por contener una parte en peso de al
menos un ecdisteroide y 2 a 4 partes en peso, preferiblemente 3
partes en peso, de al menos un iridoide.
2. Extracto según la reivindicación 1,
caracterizado por seleccionar dicho ecdisteroide entre el
grupo constituido por ecdisterona, 2,3-monoacetónido
de ecdisterona, turkesterona, ciasterona,
22-acetilciasterona y
alfa-ecdisona.
3. Extracto según la reivindicación 1 ó 2,
caracterizado por seleccionar dicho iridoide entre el grupo
constituido por la harpagida y su derivado
8-O-acetilado.
4. Extracto según una de las reivindicaciones 1 a
3, caracterizado por el hecho de que dichos ecdisteroides
contenidos en dicho extracto están compuestos, expresado en peso,
por un 30 a un 35% de ecdisterona, un 20 a un 25% de turkesterona,
un 20 a un 24% de 22-acetilciasterona, un 11 a un
15% de 2,3- monoacetónido de ecdisterona, un 6 a un 7% de
alfa-ecdisona y un 2 a un 4% de ciasterona.
5. Extracto según una de las reivindicaciones 1 a
4, caracterizado por el hecho de que dichos iridoides
contenidos en dicho extracto están compuestos, expresado en peso,
por un 60 a un 70% de
8-O-acetilharpagida y un 30 a un 40%
de harpagida.
6. Extracto según una de las reivindicaciones 1 a
5, caracterizado por ser susceptible de ser obtenido por
extracción de una parte al menos de dicha planta por medio de un
solvente o de una mezcla de solventes constituida por un 0 a un 60%
en peso de agua, estando constituido el resto de dicho solvente o
mezcla de solventes por al menos un alcohol C_{1} a C_{4} y/o
acetona y/o butilenglicol y/o propilenglicol.
7. Extracto según la reivindicación 6,
caracterizado por ser realizada dicha extracción con dicho
solvente o mezcla de solventes durante 1 a 4 horas.
8. Extracto según la reivindicación 6,
caracterizado por realizar dicha extracción a reflujo de
dicho solvente o mezcla de solventes durante 1 a 4 horas.
9. Extracto según una de las reivindicaciones 6 a
8, caracterizado por realizar dicha extracción a partir de
dicha planta entera.
10. Extracto según una de las reivindicaciones 6
a 8, caracterizado por realizar dicha extracción a partir de
las raíces de dicha planta.
11. Extracto según una de las reivindicaciones 6
a 10, caracterizado por el hecho de que dicho solvente o
mezcla de solventes es una mezcla de agua y de etanol.
12. Extracto según la reivindicación 11,
caracterizado por el hecho de que la mezcla de agua y de
etanol es una mezcla que contiene de un 70 a un 90% de etanol y de
un 30 a un 10% de agua, preferiblemente un 80% de etanol para un
20% de agua.
13. Extracto según una de las reivindicaciones 6
a 10, caracterizado por el hecho de que dicho solvente o
mezcla de solventes es una mezcla de agua y de metanol.
14. Extracto según la reivindicación 13,
caracterizado por el hecho de que dicha mezcla de agua y de
metanol es una mezcla que contiene de un 70 a un 90% de metanol y
de un 30 a un 10% de agua, preferiblemente un 80% de metanol para
un 20% de agua.
15. Extracto según una de las reivindicaciones 6
a 10, caracterizado por el hecho de que dicho solvente o
mezcla de solventes es una mezcla de agua y de acetona.
16. Extracto según la reivindicación 15,
caracterizado por el hecho de que la mezcla de agua y de
acetona es una mezcla que contiene de un 70 a un 90% de acetona y
de un 30 a un 10% de agua, preferiblemente un 80% de acetona para
un 20% de agua.
17. Extracto según una de las reivindicaciones 6
a 10, caracterizado por el hecho de que dicho solvente o
mezcla de solventes es una mezcla de agua y de propilenglicol.
18. Extracto según la reivindicación 17,
caracterizado por el hecho de que la mezcla de agua y de
propilenglicol es una mezcla que contiene de un 40 a un 60% de
propilenglicol y de un 60 a un 40% de agua, preferiblemente un 50%
de propilenglicol para un 50% de agua.
19. Extracto según una de las reivindicaciones 6
a 10, caracterizado por el hecho de que dicho solvente o
mezcla de solventes es una mezcla de agua y de butilenglicol.
20. Extracto según la reivindicación 19,
caracterizado por el hecho de que la mezcla de agua y de
butilenglicol es una mezcla que contiene de un 40 a un 60% de
butilenglicol y de un 60 a un 40% de agua, preferiblemente un 50% de
butilenglicol para un 50% de agua.
21. Composición cosmética, especialmente con
actividad de diferenciación de los queratinocitos, que mejora la
función de la barrera hídrica de la epidermis, con efecto
hidratante y con efecto antienvejecimiento, estando dicha
composición destinada a mejorar el aspecto y la calidad de la piel y
a mejorar su hidratación por regulación en la epidermis de los
flujos hídricos y de la reabsorción de agua, caracterizada
por contener una cantidad cosméticamente eficaz para el fin buscado
de un extracto de la planta Ajuga turkestanica tal como se ha
definido en una de las reivindicaciones 1 a 20.
22. Composición cosmética, especialmente con
actividad de diferenciación de los queratinocitos, que mejora la
función de la barrera hídrica de la epidermis, con efecto
hidratante y con efecto antienvejecimiento, estando dicha
composición destinada a mejorar el aspecto y la calidad de la piel y
a mejorar su hidratación por regulación en la epidermis de los
flujos hídricos y de la reabsorción de agua, caracterizada
por contener una cantidad cosméticamente eficaz para el fin buscado
de una asociación consistente en una parte en peso de al menos un
ecdisteroide y en 2 a 4 partes en peso, preferiblemente 3 partes en
peso, de al menos un iridoide.
23. Composición según la reivindicación 22,
caracterizada por seleccionar dicho ecdisteroide entre el
grupo constituido por ecdisterona, 2,3- monoacetónido de
ecdisterona, turkesterona, ciasterona,
22-acetilciastero-na y
alfa-ecdisona.
24. Composición según la reivindicación 22 ó 23,
caracterizada por seleccionar dicho iridoide entre el grupo
constituido por la harpagida y su derivado
8-O-acetilado.
25. Composición según una de las reivindicaciones
22 a 24, caracterizada por el hecho de que los ecdisteroides
presentes en dicha asociación están compuestos, expresado en peso,
por un 30 a un 35% de ecdisterona, un 20 a un 25% de turkesterona,
un 20 a un 24% de 22-acetilciasterona, un 11 a un
15% de 2,3-monoacetónido de ecdisterona, un 6 a un
7% de alfa-ecdisona y un 2 a un 4% de
ciasterona.
26. Composición según una de las reivindicaciones
22 a 25, caracterizada por el hecho de que los iridoides
presentes en dicha asociación están compuestos, expresado en peso,
por un 60 a un 70% de
8-O-acetilhar-pagida
y un 30 a un 40% de harpagida.
27. Composición según una de las reivindicaciones
21 a 26, caracterizada por contener de un 0,005 a un 10%,
preferiblemente de un 0,01 a un 2%, en peso, con respecto al peso
total de dicha composición, de un extracto tal como se ha definido
en una de las reivindicaciones 1 a 20 o de una asociación tal como
se ha definido en una de las reivindicaciones 22 a 26.
28. Composición según una de las reivindicaciones
21 a 27, caracterizada por contener además al menos una
substancia seleccionada entre el grupo constituido por la vitamina
A y sus ésteres, en particular el palmitato y el acetato de
vitamina A; la vitamina E y sus ésteres, en particular el fosfato y
el acetato de vitamina E; la vitamina C y sus derivados, en
particular el ascorbilfosfato de magnesio; las xantinas, en
particular la cafeína; el ácido asiático; el ácido madecásico; los
asiaticósidos; los madecasósidos; los extractos de Centella
asiatica; el ácido elágico; las saponinas de soja; los
extractos de Bertholletia; los extractos de Panax
ginseng; las aguas de origen marino; el aspartato de magnesio;
el cloruro de manganeso; el AMP cíclico; la
D-xilosa; el ácido hialurónico; el gluconato de
calcio; las isoflavonas; el glicirricinato de amonio; los
corticosteroides; los extractos de Phellodendron amurense;
el resveratrol, y los piceidos.
29. Utilización no terapéutica de un extracto
según una de las reivindicaciones 1 a 20 o de una asociación tal
como se ha definido en una de las reivindicaciones 22 a 26 como
agente cosmético destinado a mejorar la diferenciación de los
queratinocitos.
30. Utilización no terapéutica de un extracto
según una de las reivindicaciones 1 a 20 o de una asociación tal
como se ha definido en una de las reivindicaciones 22 a 26 como
agente cosmético regulador, en la epidermis, de los flujos hídricos
y de la reabsorción de agua.
31. Utilización no terapéutica de un extracto
según una de las reivindicaciones 1 a 20 o de una asociación tal
como se ha definido en una de las reivindicaciones 22 a 26 como
agente cosmético destinado a hidratar la epidermis.
32. Procedimiento de tratamiento cosmético de la
piel caracterizado por aplicar sobre la piel una cantidad
cosméticamente eficaz de un extracto según una de las
reivindicaciones 1 a 20 o de una asociación tal como se ha definido
en una de las reivindicaciones 22 a 26.
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